JP5953459B2 - Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation - Google Patents

Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation Download PDF

Info

Publication number
JP5953459B2
JP5953459B2 JP2012071638A JP2012071638A JP5953459B2 JP 5953459 B2 JP5953459 B2 JP 5953459B2 JP 2012071638 A JP2012071638 A JP 2012071638A JP 2012071638 A JP2012071638 A JP 2012071638A JP 5953459 B2 JP5953459 B2 JP 5953459B2
Authority
JP
Grant status
Grant
Patent type
Prior art keywords
peg
solution
ch
poly
ml
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2012071638A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP2012158759A (en )
Inventor
ベントリー,マイケル・デイヴィッド
ハリス,ジェイ・ミルトン
コズロウスキー,アントーニ
Original Assignee
ネクター セラピューティクス
ネクター セラピューティクス
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Grant date

Links

Description

本発明は、ヘテロ二官能性ポリ(エチレングリコール)誘導体およびその調整方法に関する。 The present invention, heterobifunctional poly (ethylene glycol) derivatives and their adjusting method.

ポリ(エチレンオキシド)略称(PEO)としても知られる、親水性ポリマーポリ(エチレングリコール)略称(PEG)の、分子および表面への共有結合的付着は、バイオテクノロジーおよび医学における重要な適用を有する。 Also known as poly (ethylene oxide) abbreviation (PEO), the hydrophilic polymer poly (ethylene glycol) abbreviation (PEG), covalent attachment to molecules and surfaces has important applications in biotechnology and medicine. その最も一般的な形では、PEGは、各末端にヒドロキシル基を有する線形ポリマーである。 In its most common form, PEG is a linear polymer having hydroxyl groups at each end.
HO−CH 2 −CH 2 O(CH 2 CH 2 O)nCH 2 CH 2 −OH この式は、HO−PEG−O HO-CH 2 -CH 2 O ( CH 2 CH 2 O) nCH 2 CH 2 -OH This formula, HO-PEG-O
Hとして簡潔に示すことができ、−PEG−は、末端基を有さないポリマー骨格を示すと理解される。 Can briefly shown as H, -PEG- is understood to denote a polymer backbone without the terminal groups.
−PEG−=−CH 2 CH 2 O(CH 2 CH 2 O)nCH 2 CH 2 − PEGは、メトキシ−PE -PEG - = - CH 2 CH 2 O (CH 2 CH 2 O) nCH 2 CH 2 - PEG is methoxy -PE
G−OH、すなわち簡潔にはmPEGして一般的に使用され、ここでは、一方の末端が、 G-OH, i.e. Briefly used commonly by mPEG, where, on one end,
比較的不活性のメトキシ基であり、一方、他方の末端は、化学修飾を受けることのできるヒドロキシル基である。 A methoxy group relatively inert, while the other terminus is a hydroxyl group which can undergo chemical modification.
CH 3 O−(CH 2 CH 2 O)n−CH 2 CH 2 −OH CH 3 O- (CH 2 CH 2 O) n-CH 2 CH 2 -OH

ポリ(エチレングリコール)すなわちPEGなる語は、上記の全ての形およびさらには他の形も示すまたは含むと当業者により理解される。 Poly (ethylene glycol) or PEG The term, all forms and further the above is understood by those skilled in the art to include or also indicates otherwise.

エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマーは、その化学においてPEGに密接に関連し、それらは、その多くの適用においてPEGの代替が可能である。 Copolymers of ethylene oxide and propylene oxide are closely related to PEG in their chemistry, they can be PEG Alternative in its many applications.
HO−CH 2 CHRO(CH 2 CHRO)nCH 2 CHR−OH R=HおよびCH 3 HO-CH 2 CHRO (CH 2 CHRO) nCH 2 CHR-OH R = H and CH 3

PEGは、水溶性、並びに、多くの有機溶媒への溶解性の特性を有する有用なポリマーである。 PEG is water soluble, and is a useful polymer having the solubility properties to many organic solvents. PEGはまた、無毒性で非免疫原性である。 PEG is also a non-immunogenic in a non-toxic. PEGを水不溶性化合物に化学的に付着すると、得られたコンジュゲートは一般に、水溶性、並びに、多くの有機溶媒に溶解性である。 When the PEG is chemically attached to a water-insoluble compound, the resulting conjugate generally water soluble, and is soluble in many organic solvents. PEGが付着した分子が、薬物のように生物学的に活性である場合、この活性は、PEGの付着後も一般的に保持され、コンジュゲートは薬物動態の変化を示し得る。 Molecules PEG is attached is, if it is biologically active as a drug, the activity after PEG attachment also commonly held, the conjugate may exhibit a change in pharmacokinetics.
例えば、Bentleyら、PolymerPreprints、38(1)、584( For example, Bentley et al., PolymerPreprints, 38 (1), 584 (
1997)は、PEGに結合すると、水不溶性アンテミシニン(antemisinin 1997), when bound to a PEG, water-insoluble Antemishinin (Antemisinin
)は水溶性となり、抗マラリア活性の増加を示すことを実証した。 ) Becomes water-soluble, it has demonstrated to exhibit increased anti-malarial activity. Davisらは、米国特許第4,179,337号で、PEGに結合したタンパク質は、腎クリアランスの減少および免疫原性の減少から、血液循環寿命の増強を示すことを示した。 Davis et al., In U.S. Pat. No. 4,179,337, proteins bound to the PEG is from loss and reduced immunogenicity of renal clearance showed that show enhanced blood circulation lifetime. PEGに毒性がないこと、および、生体からのその迅速なクリアランスは、医薬適用において有利である。 It is not toxic to the PEG, and its rapid clearance from the body are advantageous in pharmaceutical applications.

PEG化学の適用はより洗練されてきたので、ヘテロ二官能性PEG、すなわち、異なる末端基を有するPEG:X−PEG−Y(ここでのXおよびYは異なる基である)の需要は増加している。 Since the application of PEG chemistry have been more sophisticated, heterobifunctional PEG, i.e., PEG with different end groups: Demand for X-PEG-Y (wherein X and Y in are different groups) increased ing. 骨格エステル基および末端基XおよびYを有するPEG:X−PEG PEG has a backbone ester groups and terminal groups X and Y: X-PEG
−CO 2 −PEG−Yは、骨格内の各PEG単位が非対称に置換されているので、XおよびYが同じであってもヘテロ二官能性であると考えることができる。 -CO 2-PEG-Y, since each PEG unit of the backbone is asymmetrically substituted, can be considered as X and Y are heterobifunctional be the same.

適切な官能基を有する前記へテロ二官能性PEGを使用して、PEGを、表面または他のポリマー、例えば多糖またはタンパク質に連結し得、他の末端は、例えば、薬物、リポソーム、別のタンパク質、またはバイオセンサーに付着している。 Using said hetero bifunctional PEG to having a suitable functional group, PEG to the surface or other polymers, for example, linked obtained polysaccharide or protein, the other end, for example, a drug, a liposome, another protein or attached to the biosensor. 一方の末端がポリマーに結合し、他方の末端が適切な官能基に結合している場合、架橋による有用なヒドロゲルの形成が生じ得る。 One end is attached to the polymer, if the other end is attached to a suitable functional group, the formation of hydrogels useful due to crosslinking may occur.

しかし、既存の方法を使用して、ヘテロ二官能性PEGを高純度で調製することは困難または不可能であることが多い。 However, using the existing method, be prepared heterobifunctional PEG with high purity is often difficult or impossible. 例えば、以下の反応を、等モル量の各試薬を使用して、 For example, the following reaction, using reagents equimolar amounts,
示したヘテロ二官能性PEGアセタール生成物を調製することを目標に実施できる: H Preparing a heterobifunctional PEG acetal product shown can be implemented with the goal: H
O−PEG−OH+ClCH 2 CH(OC 252 +NaOH→ →HO−PEG−OCH 2 O-PEG-OH + ClCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 + NaOH → → HO-PEG-OCH 2
CH(OC 252 +NaCl+H 2 O しかし、実践的には、いくつかの二置換PEGジエチルアセタール(C 25 O) 2 CH 2 O−PEG−OCH 2 CH(OC 252も必然的に形成され、いくらかの未反応PEGも残るだろう。 CH (OC 2 H 5) 2 + NaCl + H 2 O However, the practical, some disubstituted PEG diethyl acetal (C 2 H 5 O) 2 CH 2 O-PEG-OCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 also inevitably formed, it will also remain some unreacted PEG. 面倒なクロマトグラフィーがこの混合物の分離に必要である。 Tedious chromatography is needed for the separation of the mixture.

クロマトグラフィーアプローチをZalipsky(Bioconjugate Ch Chromatography approach Zalipsky (Bioconjugate Ch
emistry、4:296〜299、1993)が使用し、以下のヘテロ二官能性PE emistry, 4: 296~299,1993) is used, following heterobifunctional PE
G誘導体:HO−PEG−CONHCH 2 CO 2 Hを、未反応PEGおよび二置換カルボン酸誘導体も含む反応生成物の混合物から精製した。 G Derivatives: a HO-PEG-CONHCH 2 CO 2 H, was purified from a mixture of reaction products including unreacted PEG and di-substituted carboxylic acid derivatives.

特定の適用において、最小量のHO−PEG−OHが、モノ官能性活性化PEGの調製に使用するモノアルキルPEGに存在することが必須である。 In certain applications, the minimum amount of HO-PEG-OH is, it is essential that exists monoalkyl PEG used to prepare the monofunctional activated PEG. なぜなら、HO−PEG− This is because, HO-PEG-
OHの存在により、架橋生成物をもたらす、二重に活性化されたPEG誘導体が得られるか、または他の望ましくない効果を有するからである。 The presence of OH, resulting in a crosslinked product, because with an activated PEG or derivative is obtained, or other undesirable effects, in duplicate. 事実、HO−PEG−OHは、モノアルキルPEGにおける一般的な混入物質である。 In fact, HO-PEG-OH is a common contaminant in monoalkyl PEG. トリチル(Ph 3 C−誘導体)を形成し、誘導体をクロマトグラフィーにより分離し、そしてCH 3 O−PEG−OCPh 3からトリチル基を除去することにより、CH 3 O−PEG−OHをHO−PEG−OHから分離する、クロマトグラフィーアプローチが、米国特許第5,298,410号に開示されている。 Forming a trityl (Ph 3 C-derivatives), derivatives were separated by chromatography, and by removing the trityl group from CH 3 O-PEG-OCPh 3 , a CH 3 O-PEG-OH HO -PEG- separated from OH, chromatographic approach is disclosed in U.S. Patent No. 5,298,410. 近年の特許出願、Suzawaら(WO第96/35451号)は、ベンジルPEG(C 65 −CH 2 −OPEG−OH)を、一方の末端に標的細胞に親和性を有する基を有し、他方の末端に毒素を有する、ヘテロ二官能性PEGの調製における中間体として開示している。 Recent patent applications, Suzawa et al (WO No. 96/35451), the benzyl PEG (C 6 H 5 -CH 2 -OPEG-OH), having a group having affinity to the target cells at one end, having a toxin at the other end, it is disclosed as intermediates in the preparation of heterobifunctional PEG. しかし、ベンジルPEGは、PEGのベンジル化、次いで骨の折れる徹底的な勾配クロマトグラフィーによりベンジルPEGをジベンジルPEGおよび未反応P However, benzyl PEG is benzylation of PEG, then dibenzyl PEG benzyl PEG by exhaustive gradient chromatography laborious and unreacted P
EGから分離することにより調製した。 It was prepared by separating from EG. 手順は、小規模で実施し、収率は僅か7.8%であった。 Procedure was performed on a small scale, the yield was only 7.8%. 従って、この方法は、商業的な製造にはほとんど有用ではない。 Therefore, this method is of little utility in commercial production.

二官能性PEGを調製するための、第二の戦略である重合化アプローチは、エチレンオキシドのアニオンX-へのアニオン性重合を含み、このX-は最終的にポリマーの末端基となる。 For preparing a bifunctional PEG, the second polymerization approach is strategy includes anionic polymerization to ethylene oxide anions X-, the X- is the terminal group of the final polymer.

この方法は、Yokoyamaら(BioconjugateChemistry。3: This method, Yokoyama et al. (BioconjugateChemistry.3:
275〜276、1992)により、一方の末端にヒドロキシル基を有し、他方にアミノ基を有するPEGの調製に使用されている。 The 275~276,1992) has one end in a hydroxyl group, it is used in the preparation of PEG having an amino group in the other. Cammasら(Bioconjugate Cammas et al. (Bioconjugate
Chemistry、6:226〜230、1995)は、この方法を使用して、一方の末端にアミノ基を有し、他方にヒドロキシルまたはメトキシ基を有するPEGを調製した。 Chemistry, 6: 226~230,1995) uses this method, have an amino group at one end, was prepared PEG having a hydroxyl or methoxy group in the other. それは、Nagasakiら(BioconjugateChemistry、6:2 It is, Nagasaki et al. (BioconjugateChemistry, 6: 2
31〜233、1995)により、一方の末端にホルミル基を有し、他方にヒドロキシル基を有するPEGの調製に使用されている。 The 31~233,1995) has one end to a formyl group, it is used in the other in the preparation of the PEG having a hydroxyl group. この方法は、一般に、Xが重合を開始するのに適切で望ましい基である場合にのみ有用であり;そうではない場合が多い。 The method generally, X is only useful if it is appropriate and desirable group to initiate polymerization; if not often the case. また、この方法の成功裡の適用には、HO−PEG−OHの形成を防ぐために厳密な水の除外が必要であり、この問題は、分子量が増加するにつれより深刻となる。 In addition, the application of the successful of this method requires the exclusion of strict water to prevent the formation of HO-PEG-OH, this problem becomes more serious as the molecular weight increases. また、所望の分子量のP In addition, of the desired molecular weight P
EG誘導体を得るためには重合度を注意深く制御することが必要である。 To obtain EG derivative, it is necessary to carefully control the degree of polymerization. この方法は、エチレンオキシド重合を直接薬物分子上に実施する場合には、過酷な重合条件下における多くのタイプの薬物分子の分解により制限される。 This method, when carried out directly on the drug molecules of ethylene oxide polymerization is limited by the decomposition of many types of drug molecules under severe polymerization conditions. この方法はまた、重合が起こり得る、2 The method also polymerization can occur, 2
つ以上の官能基が存在する場合には、選択性の欠如により制限される。 In a case where more than three functional groups are present, it is limited by the lack of selectivity.

以前の方法の少なくともいくつかの問題および欠点を実質的に排除する、ヘテロ二官能性PEGを調製するための追加の方法を提供することが望ましい。 Substantially eliminating at least some of the problems and disadvantages of the previous methods, it is desirable to provide additional methods for preparing heterobifunctional PEG.

本発明は、一方の末端に除去可能な基を有するPEG中間体を介して、ヘテロ二官能性ポリ(エチレングリコール)誘導体を調製する方法を提供する。 The present invention, through the PEG intermediate having a removable group at one end, provides a method for preparing a heterobifunctional poly (ethylene glycol) derivative. W−PEG−OH(ここで、Wは、温和な化学的方法により除去可能な基である)のクラスのPEG誘導体が提供され、最初に、OH基を所望の基Xに修飾し、ついでWを除去して第二のヒドロキシル基を作成することにより変化させる。 W-PEG-OH (wherein, W is mild chemical methods is a group removable by) PEG derivatives of classes are provided for, first, by modifying the OH group to the desired group X, then W It varied by creating a second hydroxyl group to remove. 次いで、後者のヒドロキシル基を、さらに第二の官能基Yに変化させ得、よって、所望の二官能性PEGが提供される: Then, the latter hydroxyl group, obtained by further changing to a second functional group Y, thus, the desired bifunctional PEG is provided:
W−PEG−OH → W−PEG−X → HO−PEG−X → Y−PEG−X W-PEG-OH → W-PEG-X → HO-PEG-X → Y-PEG-X

好ましい除去可能な基は、ベンジルオキシ基(C 65 CH 2 −O−)であるが、4−メチルベンジル、3−メチルベンジル、4−クロロベンジル、4−メトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、または1−ナフチルメチルを含むがこれに限定されない、他のアリールメチル基も使用し得る。 Preferred removable group is the benzyloxy group (C 6 H 5 CH 2 -O- ), 4- methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-chlorobenzyl, 4-methoxybenzyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl methyl or including 1-naphthylmethyl but not limited to, it may also be used other arylmethyl group. ジアリールメチルおよびトリアリールメチル基でもよい。 It may be diarylmethyl and triarylmethyl group. ベンジルオキシ−PEG−OH(BzO−PEG−PH)は、例えば、高純度で、エチレンオキシドの、ベンジルオキシドイオンBzO-への重合により調製し得る。 Benzyloxy -PEG-OH (BzO-PEG-PH), for example, in high purity, the ethylene oxide can be prepared by polymerization of the benzyloxide ion BzO-. 注意深く制御した無水条件下で反応を実施することにより、ヘテロ二官能性誘導体生成物は、最少量のHO−PEG−OHでもって調製し得る。 By carrying out the reaction at carefully controlled anhydrous conditions, heterobifunctional derivatives products may be prepared with a minimum amount of HO-PEG-OH. ベンジルおよび他のアリールメチル基の利点は、それらが、比較的温和な条件下で触媒的水素化分解により、または酸触媒加水分解により除去し得るということである。 The advantage of benzyl and other aryl methyl groups, they, by catalytic hydrogenolysis under relatively mild conditions, or that it may be removed by acid catalyzed hydrolysis.
BzO−PEG−X+H 2 (cat)→C 65 −CH 3 +HO−PEG−X BzO−PE BzO-PEG-X + H 2 (cat) → C 6 H 5 -CH 3 + HO-PEG-X BzO-PE
G−X+H 2 O(H+)→C 65 CH 2 OH+HO−PEG−X 上記の反応において、ca G-X + H 2 O ( H +) → C 6 H 5 CH 2 OH + in HO-PEG-X the above reaction, ca
tは炭素パラジウムなどの触媒である。 t is a catalyst such as palladium on carbon.

本発明の1つの実施形態において、この方法は、PEGまたは関連ポリマーを、タンパク質、脂質、多糖または他のポリマーなどの巨大分子または表面にコンジュゲートするのに使用する。 In one embodiment of the present invention, the method using PEG or related polymers, proteins, lipids, for conjugation to macromolecules or surface, such as a polysaccharide or other polymer. 最初に、即座のBzO−PEG−OHのヒドロキシル基を、第一の反応性官能基に変換する。 First, immediate hydroxyl groups of BzO-PEG-OH, into a first reactive functional group. この反応性官能基により、BzO−PEG−の巨大分子への付着が可能となる。 The reactive functional groups, it is possible to adhere to BzO-PEG-macromolecules. 次いで、ベンジル基を、巨大分子に化学的に影響を及ぼすことなく、水素化分解または加水分解により除去し、従って、PEG誘導体上に新しい末端ヒドロキシル基が利用可能となる。 Then, a benzyl group, macromolecules chemically without affecting, are removed by hydrogenolysis or hydrolysis, thus, new terminal hydroxyl groups are available on the PEG derivative. この新しいヒドロキシル基を直接使用して、PEG誘導体の末端を、同じまたは別の巨大分子に付着し得る。 The new hydroxyl groups directly using the end of the PEG derivative may be attached to the same or another macromolecule. 別法として、ヒドロキシル基は、さらに、第二の反応性官能基に変換し得、次いでこれを使用してPEG誘導体を巨大分子に連結する。 Alternatively, the hydroxyl group is further obtained into a second reactive functional group and then linked to the macromolecule the PEG derivative using this. 第二の反応性官能基が別のポリマーに連結されると、ヒドロゲルとして有用な架橋ポリマーを作成し得る。 When the second reactive functional group is linked to another polymer, it may create a useful cross-linked polymer as a hydrogel. 反応スキームは、以下のように一般的な形で説明され得る: Reaction scheme can be described in general form as follows:
(1)BzO−PEG−OH → BzO−PEG−X(X=反応性官能基) (1) BzO-PEG-OH → BzO-PEG-X (X = reactive functional group)
(2)BzO−PEG−X → BzO−PEG−M1(M1=巨大分子、例えば表面、薬物、タンパク質、またはポリマー) (2) BzO-PEG-X → BzO-PEG-M1 (M1 = macromolecules, such as surface, drug, protein or polymer)
(3)BzO−PEG−M1+H2(Pd/C)→ BzH+HO−PEG−M1またはBz (3) BzO-PEG-M1 + H2 (Pd / C) → BzH + HO-PEG-M1 or Bz
O−PEG−M1+H2O/H+ → BzOH+HO−PEG−M1(4)HO−PEG−M O-PEG-M1 + H2O / H + → BzOH + HO-PEG-M1 (4) HO-PEG-M
1 → M2−PEG−M1(M2=巨大分子、例えば表面、薬物、タンパク質、またはポリマー、またはM1上の異なる部位) 1 → M2-PEG-M1 (M2 = macromolecules, such as surface, drug, protein, or polymer, or M1 different sites on,)

所望であれば、反応の配列順序を、水素化または加水分解に感受性の化学基の破壊を回避するように操作できる。 If desired, the order of arrangement of the reaction, can be manipulated to avoid the destruction of chemical groups sensitive to hydrogenation or hydrolysis.
(1)Bz−PEG−OH → Bz−PEG−X(2)BzO−PEG−X → BzO− (1) Bz-PEG-OH → Bz-PEG-X (2) BzO-PEG-X → BzO-
PEG−M2(M2=薬物、表面、ポリマー、または、水素化または加水分解に感受性でない他の基) PEG-M2 (M2 = drug, surface, polymer, or other groups which are not susceptible to hydrogenation or hydrolysis)
(3)BzO−PEG−M2+H2(Pd/C)→ BzH(またはBzOH)+HO−P (3) BzO-PEG-M2 + H2 (Pd / C) → BzH (or BzOH) + HO-P
EG−M2BzO−PEG−M2+H2O/H+ → BzH(またはBzOH)+HO−P EG-M2BzO-PEG-M2 + H2O / H + → BzH (or BzOH) + HO-P
EG−M2(4)HO−PEG−M2 → M1−PEG−M2(M1=薬物、表面、ポリマー、または、水素化または加水分解に感受性である他の基) EG-M2 (4) HO-PEG-M2 → M1-PEG-M2 (M1 = drug, surface, polymer, or other groups sensitive to hydrogenation or hydrolysis)

本発明の別の実施形態において、W−O−PEG−OHとHO−PEG−OHの混合物中のHO−PEG−OHの反応性を阻害する方法が開示される。 In another embodiment of the present invention, a method of inhibiting the reactivity of W-O-PEG-OH and HO-PEG-OH HO-PEG-OH in a mixture of it is disclosed. このアプローチでは、H In this approach, H
O−PEG−OHを含むW−O−PEG−OHのアルキル化は、W−O−PEG−ORとRO−PEG−ORの混合物を生じ、ここでのRはアルキル基である。 O-PEG-OH alkylation of W-O-PEG-OH containing results in W-O-PEG-OR and RO-PEG-OR mixtures, R here is an alkyl group.
BzO−PEG−OH+HO−PEG−OH+R−X → BzO−PEG−OR+RO− BzO-PEG-OH + HO-PEG-OH + R-X → BzO-PEG-OR + RO-
PEG−OR+HXXは、メシレートまたはトシレートなどの脱離基である。 PEG-OR + HXX is a leaving group such as mesylate or tosylate.
触媒的水素化により、BzO−PEG−ORはRO−PEG−OHに変換される。 By catalytic hydrogenation, BzO-PEG-OR is converted to RO-PEG-OH.
BzO−PEG−OR+RO−PEG−OR+H2(Pd/C) → RO−PEG−OH BzO-PEG-OR + RO-PEG-OR + H2 (Pd / C) → RO-PEG-OH
+RO−PEG−OR+BzH 従って、RO−PEG−OHとRO−PEG−ORの混合物が生じる。 + RO-PEG-OR + BzH Thus, a mixture of RO-PEG-OH and RO-PEG-OR is generated.
HO−PEG−OHとは異なり、RO−PEG−ORは不活性で非反応性である。 Unlike HO-PEG-OH, RO-PEG-OR is a non-reactive inert. 従って、この混合物は、大半の化学反応でRO−PEG−OHの純粋な生成物に等価である。 Therefore, the mixture is equivalent to a pure product of the RO-PEG-OH in most chemical reactions.

前記および本発明の他の目的、利点および特徴、並びにそれを行なう方法は、以下の本発明の詳細な説明を考慮すれば、より容易に明らかとなろう。 Other objects of the invention and, advantages and features, as well as a method for performing it, considering the following detailed description of the present invention will become more readily apparent.

本発明は、高純度で高収率のポリ(エチレングリコール)または関連ポリマーのヘテロ二官能性誘導体を提供する。 The present invention provides a hetero-bifunctional derivatives of high yields of poly (ethylene glycol) or related polymers in high purity. 本方法ではクロマトグラフィーでの精製工程は必要ない。 Not necessary purification step by chromatography in this method. 本発明の方法によれば、一方に除去可能な基Wを保有するW−ポリ−OHを有する中間体ポリマーが得られる。 According to the method of the present invention, the intermediate polymer is obtained having a W- poly -OH carrying removable group W at one. 中間体ポリマーW−ポリ−OHは、最初にOH基の第1の官能基Xへの改変後、Wが除去されて第2の水酸基が得られる。 Intermediate polymer W- poly -OH after first modification to the first functional group X of the OH group, W is a second hydroxyl group is removed can be obtained. 後者の水酸基を、第2の官能基Yにさらに変換することができるので、所望のヘテロ二官能性誘導体が得られる。 The latter hydroxyl group, it is possible to further convert the second functional group Y, the desired heterobifunctional derivative.
W−Poly−OH → W−Poly−X → HO−Poly−X → Y−Poly−X W-Poly-OH → W-Poly-X → HO-Poly-X → Y-Poly-X

以下の考察では、Polyは、しばしば便宜上PEGまたはポリ(エチレングリコール)という。 In the following discussion, Poly is often conveniently referred PEG or poly (ethylene glycol). しかし、他の関連ポリマーもまた本発明の実施に有用であり、用語PEGまたはポリ(エチレングリコール)に含まれるが、この点では含まれないと理解すべきである。 However, other related polymers are also useful in the practice of the present invention, but are included in the term PEG or poly (ethylene glycol), in this regard it should be understood that included.

ポリ(エチレングリコール)またはPEGは、非常に望ましい性質を有し、一般に生物学または生物工学への適用が一般に承認されているために生物学への適用に有用である。 Poly (ethylene glycol) or PEG has very desirable properties, generally useful for application to biology to biological or application to biotechnology is generally approved.
PEGは典型的には、無色透明、水溶性、熱安定性、多数の化学薬品に不活性で、加水分解または変質せず、無毒である。 PEG is typically clear, colorless, water-soluble, thermally stable, a number of chemicals inert, does not hydrolyze or alteration, is non-toxic. ポリ(エチレングリコール)は、生体適合性を示す(すなわちPEGは生きている組織または器官と害を与えることなく共存できる)と考えられている。 Poly (ethylene glycol) is considered to exhibit biocompatible (i.e. PEG can coexist without exerting tissue or organ and harm living). より詳細には、PEGは免疫原性を示さない(すなわち、PEGは体内で免疫応答を起こす傾向がない)。 More specifically, PEG does not show immunogenicity (ie, PEG does not tend to cause an immune response in the body). 体内でいくつかの所望の機能を有する部分と結合した場合、P When bound to moiety having some desirable function in the body, P
EGはその部分をマスクする傾向があり、器官がその部分の存在に耐性を示すように任意の免疫応答を減少または消滅させることができる。 EG tends to mask the portion thereof, can be reduced or eliminate any immune response so resistant to the presence of organ parts thereof. したがって、本発明のヘテロ二官能性誘導体は、実質的に無毒であり、免疫応答も凝固または他の望ましくない効果も実質的に起こさないはずである。 Accordingly, hetero-bifunctional derivatives of the present invention are substantially non-toxic, should not be even substantially eliminate clotting or other undesirable effects immune response.

式−CH2CH 2 −(CH 2 CH 2 O)n−CH 2 CH 2 −(式中、nは約8〜4000である)を有するPEGは、本発明の実施における有用なポリマーの1つである。 Formula -CH2CH 2 - (CH 2 CH 2 O) n-CH 2 CH 2 - PEG having a (wherein, n is about 8 to 4000) is one useful polymer in the practice of the present invention . PEG以外の他の二官能価で水溶性の非ペプチドポリマーもまた本発明に有用である。 Non-peptidic polymer soluble in other difunctional than PEG are also useful in the present invention. これらの他のポリマーには、ポリ(ビニルアルコール)(「PVA」);他のポリ(アルキレンオキシド(ポリ(プロピレングリコール)(「PPG」)など);およびポリ(オキシエチル化ポリオール(ポリ(オキシエチル化グリセロール)、ポリ(オキシエチル化ソルビトール)、およびポリ(オキシエチル化グルコース)など)が含まれる。ポリマーは、ホモポリマーまたは無作為もしくはブロックコポリマーおよび上記ポリマーのモノマーを基本単位とする直鎖もしくは分岐ターポリマーであり得る。 These other polymers include poly (vinyl alcohol) ( "PVA"); and other poly (alkylene oxides (poly (propylene glycol) ( "PPG")); and poly (oxyethylated polyol (poly (oxyethylated glycerol), poly (oxyethylated sorbitol), and poly (oxyethylated glucose), etc.) are included. polymers, linear or branched terpolymers monomer homopolymers or random or block copolymers and the polymers and basic unit It can be in.

適切なさらなるポリマーの特定の例には、ポリ(オキサゾリン)、二官能価ポリ(アクリロイルモルホリン)(「PAcM」)、およびポリ(ビニルピロリドン)(「PVP」 Specific examples of suitable additional polymers include poly (oxazoline), difunctional poly (acryloylmorpholine) ( "PAcM"), and poly (vinyl pyrrolidone) ( "PVP"
)が含まれる。 ) Are included. PVPおよびポリ(オキサゾリン)は当該分野で周知のポリマーであり、 PVP and poly (oxazoline) are well known polymers in the art,
その調製は当業者に容易であるはずである。 Their preparation should be readily to those skilled in the art. PAcMおよびその合成ならびに使用は米国特許第5,629,384号および同第5,631,322号(その内容全体が本明細書中で参考として援用される)に記載されている。 PAcM and its synthesis and use are described in and U.S. Patent No. 5,629,384 the No. 5,631,322 (the entire contents of which are incorporated by reference herein).

用語「基」、「官能基」、「部分」、「活性部分」、および「活性部位」は全て化学分野で幾らか同義語であり、当該分野で使用されており、本明細書中では分子の識別および定義可能な部分および幾らかの機能または活性を示す単位をいい、他の分子または分子の一部と反応性を示す。 The term "group", "functional group", "portion", "active moiety", and "active site" are somewhat synonymous in all chemical arts are used in the art, molecules herein refers to a unit indicating the identity and definable portions and some function or activity, shows reactivity with part of another molecule or molecules.

用語「結合」は、通常化学反応の結果として形成される基をいうために使用し、典型的には共有結合である。 The term "binding" is usually used to refer to groups formed as a result of a chemical reaction and typically are covalent bonds.

「薬物」は、ヒトおよび他の動物の実感の診断、治癒、緩和、治療、または予防を意図するか身体または精神の健康を向上させる任意の物質と理解すべきである。 "Drug", the diagnosis of feeling of humans and other animals, cure, mitigation, treatment, or it should be understood that any material to improve the health of the intended either physical or mental prophylaxis.

用語「高分子」を、脂質、多糖類、タンパク質、ヌクレオチド配列、薬物、ポリマーなどを含むがこれらに限定されない巨大分子を意味するために使用する。 Term "polymer", lipids, polysaccharides, proteins, nucleotide sequences, drugs, including such polymers used to mean a macromolecule without limitation. しばしば上記ポリマーとこのような高分子とを抱合することが望ましい。 It is often desirable to conjugate the such a polymer with the polymer.

本発明によれば、除去可能な基Wを、穏やかな化学反応によってポリマーW−Poly According to the present invention, the removable group W, the polymer W-Poly by gentle chemical reactions
−Xから除去することができる。 It can be removed from the -X. ポリマーW−Poly−Xの他の部分(特に、第1の官能基X)望ましくない改変を起こさない条件下でこのような化学反応を行うことができる。 Other portions of the polymer W-Poly-X can be carried out such a chemical reaction under conditions which do not cause (in particular, the first functional group X) undesirably modified. 好ましくは、Wは式Ar−C(R1)(R2)−O−(式中、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択される部分を示し、R1およびR2はH、アルキル、 Preferably, W is wherein Ar-C (R1) (R2) -O- (wherein, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryls, substituted polycyclic aryl, and heterocyclic indicates a moiety selected from the group consisting of aryl, R1 and R2 H, alkyl,
または上記定義のArである)を有する。 Or having an a) defined above Ar. したがって、除去可能な基Wの例には、ベンジルオキシ基(C 65 CH 2 O)および他のアリールメチルオキシ基(4−メチルベンジルオキシ、3−メチルベンジルオキシ、4−クロロベンジルオキシ、4−メトキシベンジルオキシ、ジフェニルメチルオキシ、トリフェニルメチルオキシ、および1−ナフチルメチルオキシが含まれるこれらに限定されない)が含まれるが、これらに限定されない。 Accordingly, examples of the removable group W, benzyloxy (C 6 H 5 CH 2 O ) , and other arylmethyl group (4-methyl-benzyloxy, 3-methyl-benzyloxy, 4-chloro-benzyloxy, 4-methoxy-benzyloxy, diphenylmethyloxy, triphenylmethyl oxy, and 1-naphthyl methyloxy include but are not limited to) include, but are not limited to. アリールメチルオキシ基を、触媒による水素化分解または酸触媒加水分解によって比較的穏やかな条件下でポリマーから除去することができる。 Arylmethyl group, under relatively mild conditions by hydrogenolysis or acid-catalyzed hydrolysis catalyst can be removed from the polymer.

本発明によれば、W−ポリ−OHを例えば、適切なポリマーのモノマーのアリールメチルオキシドへの重合に異よって合成することが好ましい。 According to the present invention, W- poly -OH example, it is preferable to different Thus synthesized polymer to arylmethyl oxide monomers suitable polymer. 例えば、ベンジルオキシ−PE For example, benzyloxy -PE
G−OH(BzO−PEG−OH)を、エチレンオキシドのベンジルオキシイオンBzO G-OH (BzO-PEG-OH) and ethylene oxide benzyloxy ion BzO
−への重合によって高純度および高収率で調製することができる。 - it can be prepared in high purity and high yield by polymerization to. 好ましくは、無水条件下で重合反応を行う。 Preferably, conduct the polymerization reaction under anhydrous conditions. 本発明のこの態様によれば、HO−PEG−OHの生成は最小である。 According to this aspect of the present invention, generation of HO-PEG-OH is minimal. 広範な勾配クロマトグラフィー精製は必要ではなく、BzO−PEG−OHの収率は高い。 Extensive gradient chromatography purification is not required, the yield of BzO-PEG-OH is high. これは、PEGのベンジル化後の骨の折れる広範囲勾配のクロマトグラフィーを行うコスト高および低収率を回避不可能な量産価値のほとんどない方法である先行技術とは対照的である。 This is in contrast to the prior art is almost no way costly and incapable mass value avoid low yields which is chromatographed extensive gradient laborious after benzylation of PEG.

本発明によれば、ポリ(エチレングリコール)または関連ポリマーのヘテロ二官能性誘導体の最終生成物は式Y−Poly−Xを有する。 According to the present invention, poly (ethylene glycol) or the final product of hetero-bifunctional derivatives of related polymers have the formula Y-Poly-X. 第1の官能基Xおよび第2の官能基Y First functional group X and the second functional group Y
はPEG誘導体が例えば他の高分子(タンパク質、脂質、他党、および他のポリマーが含まれるが、これらに限定されない)と抱合することが望ましい他の分子と反応することができる反応部分である。 (Although include proteins, lipids, other parties and other polymers, but not limited to these) PEG derivatives, for example other polymers are reactive moiety capable of reacting with other molecules may be desirable to conjugate the . 第1の官能基Xの例には、メシレート;トシレート;トレシレート、O(CH2)nCO2H(式中、n=1〜6)、O(CH2)nCO2R3(式中、n=1 Examples of the first functional group X, mesylate; tosylate; tresylate, O (CH2) nCO2H (where, n = 1~6), O (CH2) nCO2R3 (wherein, n = 1
〜6であり、R3はアルキル基である)、NHR4(式中、R4はHまたはアルキルまたはt−BocおよびFmocなどのアミン保護基);O(CH2)nCH(ZR5)2(式中、 A to 6, R3 is an alkyl group), NHR4 (where, R4 is H or an amine protecting group such as an alkyl or t-Boc and Fmoc); in O (CH2) nCH (ZR5) 2 (wherein,
nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R5はHまたはアルキル基である); n is a number of 1 to 6, Z is O or S, R5 is H or an alkyl group);
Ar−CH=CH−CH=CH−CO2(式中、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択される部分を示す);−O−(CH2)n−CHOおよび−O2C During Ar-CH = CH-CH = CH-CO2 (wherein, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryl is selected from the group consisting of substituted polycyclic aryl, and heterocyclic aryl that shows a portion); - O- (CH2) n-CHO and -O2C
CH2CH2CO2R6(式中、R6はHまたはNスクシニミジルを示すNHSである)が含まれるが、これらに限定されない。 CH2CH2CO2R6 (wherein, R6 is a NHS showing the H or N-succinimidyl) include, but are not limited to.

第2の官能基Yの例には、水酸基;メシレート;トシレート;トレシレート、O(CH Examples of the second functional group Y, a hydroxyl group; mesylate; tosylate; tresylate, O (CH
2)nCO2H(式中、n=1〜6)、O(CH2)nCO2R3(式中、n=1〜6であり、 2) nCO2H (where, n = 1~6), O (CH2) nCO2R3 (wherein, a n = 1 to 6,
R3はアルキル基である)、NHR4(式中、R4はHまたはアルキルまたはt−BocおよびFmocなどのアミン保護基);O(CH 2 )nCH(ZR 52 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R 5はHまたはアルキル基である);Ar−CH= R3 is an alkyl group), NHR4 (where, R4 is an amine protecting group such as H or alkyl, or t-Boc and Fmoc); O (CH 2) nCH (ZR 5) 2 ( wherein, n 1 6 is a numeric, Z is O or S, R 5 is H or an alkyl group); Ar-CH =
CH−CH=CH−CO 2 (式中、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択される部分を示す);−O−(CH 2 )n−CHOおよび−O 2 CCH 2 CH 2 During CH-CH = CH-CO 2 ( wherein, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryls, substituted polycyclic aryl and a moiety selected from the group consisting of heterocyclic aryl shown); - O- (CH 2) n-CHO and -O 2 CCH 2 CH 2 C
26 (式中、R 6はHまたはNスクシニミジルを示すNHSである);およびCH 2 =C O 2 R 6 (wherein, R 6 is NHS represents H or N-succinimidyl); and CH 2 = C
H−CO 2 −が含まれるが、これらに限定されない。 H-CO 2 - but it is not limited thereto. 式Y−Poly−Xのポリ(エチレングリコール)誘導体では、第1の官能基Xおよび第2の官能基Yは互いに異なることが好ましいので、ヘテロ二官能価であることが裏付けられている。 The poly (ethylene glycol) derivative of the formula Y-Poly-X, since the first functional group X and the second functional group Y are preferably different from each other, it has been confirmed is heterobifunctional.

XがAr−CH=CHCH=CH−CO 2 (Arは上記のように定義)であり、Yが− X is Ar-CH = CHCH = CH- CO 2 (Ar is as defined above), Y is -
O−(CH 2 )n−CHOまたはO(CH 2 )nCH(ZR 52 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R 5はHまたはアルキル基である)であることが好ましい。 O- (CH 2) n-CHO or O (CH 2) nCH (ZR 5) 2 ( wherein, n is a number from 1 to 6, Z is O or S, R 5 is H or an alkyl group is preferably in a). XがO(CH 2 )nCH(ZR 52 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R 5はHまたはアルキル基である)である場合、Yは−O 2 CCH 2 CH 2 CO 26 X is O (CH 2) nCH (ZR 5) 2 ( wherein, n is a number from 1 to 6, Z is O or S, R 5 is H or an alkyl group) when it is, Y -O 2 CCH 2 CH 2 CO 2 R 6 is (
式中、R 6はHまたはNHSである)であることが好ましい。 Wherein it is preferred that R 6 is a is) H or NHS. XがOCH 2 CO 2 CH(C X is OCH 2 CO 2 CH (C
3 )CH 2 CONHSである場合、第2の官能基YはCH 2 =CHCO 2であることが好ましい。 If H 3) a CH 2 CONHS, it is preferred second functional group Y is CH 2 = CHCO 2.

本方法の反応スキームは上記で式: W−Poly−OH → W−Poly−X → H Reaction scheme of the present method is the formula above: W-Poly-OH → W-Poly-X → H
O−Poly−X → Y−Poly−Xと示しているにもかかわらず、式中の任意の2つの生成物の間に1つを超える化学反応工程が存在し得ると理解すべきである。 O-Poly-X → Y-Poly-X and despite shows, it is to be understood that the chemical reaction process more than one between any two of the product in the formula may be present. 例えば、W For example, W
−Poly−OHの末端の水酸基を第1の官能基Xに変換するためにいくつかの連続反応が起こり得る。 Several successive reacting a terminal hydroxyl group of -poly-OH to convert the first functional group X may occur. 同様に、いくつかの反応工程を行って、HO−Poly−Xの新規の水酸基を改変して第2の官能基Yを得ることができる。 Similarly, by performing a number of reaction steps, it is possible to obtain the second functional group Y to modify the new hydroxyl group of HO-Poly-X.

さらに、本発明の1つの実施形態では、除去可能な基Wの除去工程前に、ポリマーY− Further, in one embodiment of the present invention, prior to the step of removing the removable group W, the polymer Y-
Poly−Xを高分子表面上で第1の反応性官能基Xと適切な部分との間で形成された結合によって高分子または表面に結合することができる(しがって、ポリマーのW−Pol The Poly-X can bind to a polymer or surface by a bond formed between the first reactive functional group X with a suitable portion on a polymer surface (I Shiga, polymer W- Pol
y−部分と高分子との抱合:W−Poly−M 1 (M 1は、タンパク質、ペプチド、脂質、 y- part and the conjugation of the polymer: W-Poly-M 1 ( M 1 is, proteins, peptides, lipids,
薬物、多糖類、もしくは他のポリマー、または物質(例えば、微生物)の表面などの高分子))。 Drugs, polysaccharides or other polymers or materials, (e.g., microorganisms) polymers such as surface)). 抱合体W−Poly−M 1中の除去可能な基Wは、その後穏やかな化学反応(例えば、触媒による水素化分解または酸触媒加水分解など)によって除去される。 Removable group W in the conjugate W-Poly-M 1 is then removed by mild chemical reaction (e.g., catalysts by hydrogenolysis or acid-catalyzed hydrolysis, etc.). 得られた−OHは、例えば、別の高分子M 2 (など、タンパク質、ペプチド、脂質、薬物、多糖類、もしくは他のポリマー、または物質(例えば、微生物)の表面など))と直接反応して、M 2 −Poly−M 1を形成することができる。 The resulting -OH, for example, another polymer M 2 (such as a protein, peptide, lipid, drug, polysaccharide, or other polymers or materials, (e.g., such as the surface of a microorganism))) and reacted directly Te, it is possible to form the M 2 -Poly-M 1. 別の高分子への抱合が好ましい場合、− If conjugation to another polymer is preferred, -
OH基は任意選択的に例えばアルキル化によってキャップされた不活性の非反応性基に変換することができる。 OH group can be converted to non-reactive groups of the capped inactive by optionally example alkylation. あるいは、得られたOH基を上記の反応性官能基Yに変換することができる:Y−Poly−M 1 Alternatively, the resulting OH group can be converted to the reactive functional group Y: Y-Poly-M 1 . 次いで、官能基YをM 2と反応させてM 2 −Poly−M 1 Then, the functional group Y is reacted with M 2 M 2 -Poly-M 1
を形成することができる。 It can be formed.
(1)WPolyOH −−→ WPolyX (X=反応性官能基) (1) WPolyOH - → WPolyX (X = reactive functional group)
(2)WPolyX −−→ WPolyM 1 (M 1 = 例えば、表面、薬物タンパク質、またはポリマーなどの高分子) (2) WPolyX - → WPolyM 1 (M 1 = example, surface, drug protein or polymer such as polymer)
(3)WPolyM 1 + H 2 (Pd/C)→ WH + HOPolyM 1または WPol (3) WPolyM 1 + H 2 (Pd / C) → WH + HOPolyM 1 or WPol
yM 1 + H 2 O/H+ → WOH + HOPolyM 1 yM 1 + H 2 O / H + → WOH + HOPolyM 1
(4)HOPolyM 1 → Y 2 PolyM 1 (4) HOPolyM 1 → Y 2 PolyM 1
(5)YPolyM 1 + M 2 → M 2 PolyM 1 (M 2 = 例えば、表面、薬物、タンパク質、もしくはポリマーなどの高分子またはM 1上の異なる部位) (5) YPolyM 1 + M 2 → M 2 PolyM 1 (M 2 = example, surface, drug, protein or a different site on the polymer or M 1, such as a polymer)

本方法において、PEG関連ポリマーPolyによる複数の異なる高分子の架橋によってヒドロゲルを作製することができる。 In the present method, it is possible to produce a hydrogel by different cross-linking of the polymer with PEG related polymers Poly. しかし、本発明により、2つの官能基XおよびY However, the present invention, two functional groups X and Y
を同一の高分子に結合させることができ、これにより高分子上でのPEG関連ポリマーの抱合により高分子上にポリマーの殻を形成することができると理解すべきである。 The can be attached to the same polymer, thereby it is to be understood that it is possible to form a shell polymer on the polymer by conjugation of PEG related polymers on polymeric.

本発明の別の実施形態では、上記のように作製されたPEGまたは関連ポリマーのヘテロ路二官能価誘導体Y−Poly−Xは、高分子または他の物質上での官能基XおよびY In another embodiment of the present invention, hetero-path bifunctional derivatives Y-Poly-X of the produced PEG or related polymers as described above, the functional groups X and Y on the polymer or other material
ならびに反応部分を介して高分子または他の分子と反応することができる。 And through a reactive moiety capable of reacting with a polymer or other molecule. 例えば、XおよびYを、異なる型の高分子または他の物質がそれぞれXおよびYに結合するように選択することができる。 For example, X and Y, can be different types of polymers or other substance is selected to bind to the X and Y, respectively. 同一の型の高分子と反応するようにXおよびYを選択することも可能である。 It is also possible to select the X and Y to react with the same type of polymer.

本発明の別の態様によれば、ポリ(エチレングリコール)または関連ポリマーのヘテロ二官能性誘導体が得られる。 According to another aspect of the present invention, poly heterobifunctional derivatives of (ethylene glycol) or related polymers are obtained. このようなポリマーを、式Y−Poly−X(式中、Pol Such polymers, wherein Y-Poly-X (wherein, Pol
yは、上記定義のポリ(エチレングリコール)または関連化合物を示す)と示す。 y represents the above defined poly showing a (ethylene glycol) or related compounds). XおよびYは、メシレート;トシレート;トレシレート、O(CH 2 )nCO 2 H(式中、n=1 X and Y, mesylate; tosylate; tresylate, O (CH 2) nCO 2 H ( wherein, n = 1
〜6)、O(CH 2 )nCO 23 (式中、n=1〜6であり、R 3はアルキル基である)、 ~6), O (CH 2) nCO 2 R 3 ( wherein, a n = 1 to 6, R 3 is an alkyl group),
NHR 4 (式中、R 4はHまたはアルキルまたはt−BocおよびFmocなどのアミン保護基);O(CH 2 )nCH(ZR 52 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはS NHR 4 (where, R 4 is H or an amine protecting group such as an alkyl or t-Boc and Fmoc); in O (CH 2) nCH (ZR 5) 2 ( wherein, n is a number from 1 to 6, Z is O or S
であり、R 5はHまたはアルキル基である);Ar−CH=CH−CH=CH−CO 2 (式中、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、 In and, R 5 is H or an alkyl group); in Ar-CH = CH-CH = CH-CO 2 ( wherein, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryl,
置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択される部分を示す) Substituted polycyclic aryl, and shows a moiety selected from the group consisting of heterocyclic aryl)
;−O−(CH 2 )n−CHOおよび−O 2 CCH 2 CH 2 CO 26 (式中、R 6はHまたはN ; -O- (CH 2) n- CHO and -O 2 CCH 2 CH 2 CO 2 R 6 ( wherein, R 6 is H or N
HSであり、nは1〜6である)からなる群から選択される反応性官能基である。 A HS, n is a reactive functional group selected from the group consisting of 1 to 6). 好ましくは、XとYは異なる。 Preferably, X and Y are different.

いくつかの実施形態では、XがAr−CH=CHCH=CH−CO 2 (Arは上記のように定義)である場合、Yは−O−(CH 2 )n−CHOまたはO(CH 2 )nCH(ZR 5 In some embodiments, when X is Ar-CH = CHCH = CH- CO 2 (Ar is as defined above), Y is -O- (CH 2) n-CHO or O (CH 2) nCH (ZR 5
2 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R 5はHまたはアルキル基である)であることが好ましく、XがO(CH 2 )nCH(ZR 52 (式中、nは1〜6の数字であり、ZはOまたはSであり、R 5はHまたはアルキル基である)である場合、Y ) 2 (where, n is a number from 1 to 6, Z is O or S, preferably R 5 is a is) H or an alkyl group, X is O (CH 2) nCH (ZR 5) 2 (wherein, n is a number from 1 to 6, Z is O or S, if R 5 is a is) H or an alkyl group, Y
は−O 2 CCH 2 CH 2 CO 26 (式中、R 6はHまたはNHSである)であることが好ましく、XがOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CONHSである場合、第2の官能基YはCH If (wherein, R 6 is H or NHS a is) -O 2 CCH 2 CH 2 CO 2 R 6 is preferably, X is OCH 2 CO 2 CH (CH 3 ) a CH 2 CONHS, the 2 functional group Y CH
2 =CHCO 2であることが好ましい。 It is preferably 2 = CHCO 2.

さらに別の態様では、式XPolyaOCHR 5 (CH 2 )nCO 2 PolybX(式中、P In yet another embodiment, Formula XPolyaOCHR 5 (CH 2) nCO 2 PolybX ( wherein, P
olyaおよびPolybは、上記のPolyによって示される同一の型のポリマーを示し、nは0−6であり、R 5はHまたはアルキルであり、Xは反応性官能基である)を有するポリ(エチレングリコール)または関連ポリマーの調製法を提供する。 olya and Polyb show the same type of polymers represented by the above Poly, n is 0-6, R 5 is H or alkyl, a poly X is a reactive functional group) (ethylene providing glycol) or related polymers preparation. ヘテロ二官能性誘導体の実質的に純粋な形態を、クロマトグラフィー精製工程に依存することなく高純度且つ高収率で作製することができる。 The substantially pure form of heterobifunctional derivatives, high purity and to produce in high yield without depending on the chromatographic purification step.

本方法では、式ArC(R 1 )(R 2 )OPolybUの第1のポリマーおよび式ArC In this method, the formula ArC (R 1) (R 2 ) a first polymer and the formula ArC of OPolybU
(R 1 )(R 2 )OPolya−CHR 5 (CH 2 )nCO−Vの第2のポリマー(式中、R 1 (R 1) (R 2) OPolya-CHR 5 (CH 2) a second polymer nCO-V (In the formula, R 1
およびR 2はH、アルキル、またはAr(Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールである)であり、UおよびVは第1のポリマーが第2のポリマーと反応してArC(R 1 And R 2 is H, alkyl or Ar, (Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryls, substituted polycyclic aryl, and a heterocyclic aryl) and, U and V are the first polymer is reacted with a second polymer ArC (R 1)
(R 2 )OPolyaOCHR 5 (CH 2 )nCO 2 PolybOC(R 1 )(R 2 )−Arのポリマーを形成するように選択した部分である)が得られる。 (R 2) OPolyaOCHR 5 (CH 2) nCO 2 PolybOC (R 1) (R 2) is selected portion to form a polymer -Ar) are obtained. 上記のように、第1のポリマーおよび第2のポリマーを、アリルメチルオキシドイオンArC(R 1 )(R 2 )O-から生成物ArC(R 1 )(R 2 )O-Polya−OHまたはArC(R 1 )(R 2 )O-Pol As described above, the first and second polymers, allyl methyl oxide ion ArC (R 1) (R 2 ) product ArC (R 1) from O- (R 2) O-Polya -OH or ArC (R 1) (R 2) O-Pol
yb−OHとPolybおよびPolyaとの個別の反応、および任意選択的に2つのポリマーが例えばエステル結合によって結合するようなその後の末端水酸基の部分UおよびV yb-OH and Polyb and individual reactions with Polya, and optionally portions U and V of the subsequent terminal hydroxyl groups, such as two polymers for example linked by an ester bond
への個別の改変によって作製することができる。 It can be produced by individual modifications to. 次いで、結合したポリマーを、触媒による水素化分解または酸触媒加水分解によるArC(R 1 )(R 2 )O−部分の除去により改変することができる。 Then, bound polymer, ArC by hydrogenolysis or acid-catalyzed hydrolysis catalyst (R 1) (R 2) can be modified by O- portion of the removal. 得られたOH基を、任意選択的に他の反応性官能基に変換することができる。 The resulting OH group, optionally can be converted into other reactive functional groups. 反応性官能基Xの例には、−OH;CH 2 =CR 5 CO 2 (式中、R 5はHまたはアルキルである);O(CH 2 )nCH(ZR) 2 (式中、R 5はHまたはアルキルであり、 Examples of reactive functional groups X, -OH; CH 2 = CR 5 CO 2 ( wherein, R 5 is H or alkyl); O (CH 2) nCH (ZR) 2 ( wherein, R 5 is H or alkyl,
ZはOまたはSであり、nは1〜6である);NHS−O 2 CO−(式中、NHSはN− Z is O or S, n is 1~6); NHS-O 2 CO- ( wherein, NHS is N-
スクシニミジルを示す)が含まれるが、これらに限定されない。 Shows the succinimidyl) include, but are not limited to. 好ましい実施形態では、 In a preferred embodiment,
Uは−OHであり、Vは−Clなどのハロゲン基である。 U is -OH, V is a halogen group such as -Cl.

本発明のさらに別の態様では、式R 8 OPolyaOCHR 5 (CH 2 )nCO 2 Polyb In yet another aspect of the present invention, wherein R 8 OPolyaOCHR 5 (CH 2) nCO 2 Polyb
Y(式中、Polya、Polyb、n、R 5は、上記定義の通りであり、R 8はHまたはアルキル基である)を有するポリ(エチレングリコール)または関連ポリマーの調製法を提供する。 Y (wherein, Polya, Polyb, n, R 5 are as defined above, R 8 is H or an alkyl group) to provide a process for the preparation of poly (ethylene glycol) or related polymers having. Yは反応性官能基である。 Y is a reactive functional group. 本方法は、クロマトグラフィー工程が必要ない。 The method does not need chromatography step. 本方法では、上記のようにArC(R 1 )(R 2 )OPolybUの第1のポリマーが得られる。 In this way, ArC as above (R 1) (R 2) a first polymer OPolybU is obtained. 8 OPolya−CHR 5 (CH 2 )nCO−V(R 8はHまたはアルキル基であるか、A Or R 8 OPolya-CHR 5 (CH 2) nCO-V (R 8 is H or an alkyl group, A
r(式中、Arは上記定義の通り))の第2のポリマーも得られる。 r (wherein, Ar is as above defined) a second polymer) is also obtained. 第1のポリマーが第2のポリマーと結合してR 8 OPolyaOCHR 5 (CH 2 )nCO 2 PolybOC(R 1 The first polymer is bonded to the second polymer R 8 OPolyaOCHR 5 (CH 2) nCO 2 PolybOC (R 1)
(R 2 )−Arのポリマーを形成するように、部分UおよびVは互いに反応して、例えば、エステル結合を形成することができる。 (R 2) so as to form a polymer of -Ar, portions U and V are reacted with each other, for example, it is possible to form an ester bond. 次いで、ArC(R 1 )(R 2 )O−部分を、所望の官能基に変換することができる。 Then, ArC (R 1) a (R 2) O-moiety, can be converted into the desired functional groups. 好ましくは、Uは−OHであり、Vは−Clなどのハロゲン基である。 Preferably, U is a -OH, V is a halogen group such as -Cl. Yは、−OH;CH 2 =CR 5 CO 2 (式中、R 5はHまたはアルキルである);O(CH 2 )nCH(ZR) 2 (式中、RはHまたはアルキルであり、ZはOまたはSであり、nは1〜6である);および−O−(CH 2 )n−CO 2 H(式中、nは1〜 Y is, -OH; CH 2 = CR 5 CO 2 ( wherein, R 5 is H or alkyl); O (CH 2) nCH (ZR) 2 ( wherein, R is H or alkyl, Z is O or S, n represents 1 to 6); and -O- (CH 2) n-CO 2 H ( wherein, n 1
6である)などの官能基であり得る。 6 is a) may be a functional group such as.

本発明のさらに別の態様によれば、HO−Poly−OHの反応性を有するポリマーの汚染のないR 9 O−Poly−OHのポリマーの作製法を提供する。 According to yet another aspect of the present invention to provide a method for the preparation of a polymer of HO-Poly-OH without contamination of the polymer with a reactive R 9 O-Poly-OH. Polyは上記に定義した通りであり、R 9アルキル基またはアリール基である。 Poly are as defined above, is R 9 alkyl group or an aryl group. は当該分野で開示のように、PEG誘導体の調製由来のHO−PEG−OHなどのHO−Poly−OHの除去には、通常、例えばクロマトグラフィーを使用した広範で骨の折れる精製工程が必要である。 , As disclosed in the art, the removal of HO-Poly-OH, such as HO-PEG-OH from the preparation of PEG derivatives, usually, for example, extensive purification steps laborious using chromatography is required is there.
本発明の方法は、その必要がない。 The method of the present invention, there is no need thereof. 本方法では、ArCR 12 OPolyOHを、最初にアリールメチルオキシイオンArCR 12 O-上へのポリマーPolyの形成によって合成する。 In this way, the ArCR 1 R 2 OPolyOH, first synthesizing the formation of polymer Poly to arylmethyloxy ion ArCR 1 R 2 O- above. 次いで、ArCR 12 OPolyOHをアルキル化してポリマーAr−CR 12 Then, ArCR 1 R 2 OPolyOH alkylated polymer ARCR 1 R 2
−OPEGOR 9に変換する。 To convert to -OPEGOR 9. HO−Poly−OHの任意の不純物を、アルキル化の際にR 9 OPEGOR 9に変換する。 Any impurities HO-Poly-OH, is converted to R 9 OPEGOR 9 during alkylation. 次の工程は、酸触媒加水分解または水素化分解によってArCR 12 O部分を−OHに変換し、R 9 O−PEG−OHとR 9 O−PEG−OR 9との新規の混合物を形成することである。 The next step is the ArCR 1 R 2 O moiety by acid-catalyzed hydrolysis or hydrogenolysis into a -OH, forming a new mixture of R 9 O-PEG-OH and R 9 O-PEG-OR 9 It is to be. 9 O−PEG−OR 9はほとんどの化学反応に不活性であるので、混合物は、純粋なR 9 O−PEG−OHと化学的に等価である。 Since R 9 O-PEG-OR 9 is a most chemical reaction-inert mixture is pure R 9 O-PEG-OH and chemically equivalent. 任意選択的に、R 9 O−PEG−OHをR 9 O−PEG−CHOにさらに変換することができる。 Optionally, it is possible further to convert the R 9 O-PEG-OH in R 9 O-PEG-CHO.

以下の実施例は本発明を例示するために記載するが、本発明の限定と解釈すべきではない。 The following examples are provided to illustrate the present invention but should not be construed as limiting the present invention.
実施例1. Example 1. HOPEGNH 3+ Cl-の合成実施例2. HOPEGNH 3+ Cl- Synthesis Example 2. HOPEG OCH 2 CO 2 Hの合成実施例3. HOPEG OCH 2 CO 2 H Synthesis Example 3. Cl-H 3 N+PEGOCH 2 CO 2 Hの合成実施例4. Cl-H 3 N + PEGOCH 2 CO 2 H Synthesis Example 4. Cl-H 3 N+PEGOCH 2 CH 2 CO 2 Hの合成実施例5. Cl-H 3 N + PEGOCH 2 CH 2 CO 2 H Synthesis Example 5. 65 CH=CHCH=CHCO 2 PEGOCH 2 CH(OC 252の合成実施例6. C 6 H 5 CH = CHCH = CHCO 2 PEGOCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 of Example 6. NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHS(NHS=Nsucc NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHS (NHS = Nsucc
inimidyl)の合成実施例7. Synthesis Example 7 of inimidyl). CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGO 2 CCH=CH 2の合成実施例8. CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGO 2 CCH = Synthesis Example of CH 2 8. CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOHの合成実施例9. CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 Synthesis Example of PEGOH 9. NHSO 2 CCH 2 CH 2 COOPEGOCH 2 CH 2 CH(OC 252の合成実施例10. NHSO 2 CCH 2 CH 2 COOPEGOCH 2 CH 2 CH (OC 2 H 5) 2 Synthesis Example 10. CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGOCH(CH 3 )CH 2 CO 2 CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGOCH (CH 3) CH 2 CO 2 N
HSの合成実施例11. Synthesis Example 11 of HS. BzOPEGOHとHOPEGOHとの混合物からHOPEGOHを含まないCH 3 OPEGOHを調製するためのアルキル化の適用 Application of alkylation for preparing a CH 3 OPEGOH from a mixture of BzOPEGOH and HOPEGOH not include HOPEGOH

実施例1 HOPEGNH 3+ Cl-の調製反応: Example 1 HOPEGNH 3+ Cl- Preparation Reaction:

a)BzOPEGOMの調製:BzOPEGOH(MW=3400,34g、10mmo a) BzOPEGOM preparation of: BzOPEGOH (MW = 3400,34g, 10mmo
le)の150mlのトルエン溶液を、窒素下で2時間共沸し、溶液を室温に冷却した。 The toluene solution of 150ml of le), and azeotroping two hours under nitrogen, the solution was cooled to room temperature.
この溶液に40mlの乾燥塩化メチレンおよび2.1mlの乾燥トリエチルアミン(15 Of dry triethylamine this dry methylene chloride solution 40ml and 2.1 ml (15
mmole)を添加した。 mmole) was added. 溶液を氷浴中で冷却し、1.2mlの乾燥メシルクロリド(1 The solution was cooled in an ice bath, 1.2 ml of dry mesyl chloride (1
5mmole)を滴下した。 5mmole) was added dropwise. 溶液を窒素下、室温で一晩撹拌し、2mlの無水エタノールの添加によって反応を停止させた。 The solution was stirred under nitrogen at room temperature overnight, the reaction was quenched by addition of absolute ethanol 2 ml. 混合物を減圧蒸発させて特にトルエン以外の溶媒を除去し、濾過し、再び減圧濃縮し、100mlのエチルエーテル中で沈殿させた。 The mixture was evaporated under reduced pressure, particularly removing the solvent other than toluene, filtered, and concentrated again under reduced pressure, and precipitated in ethyl ether 100 ml. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 収量は34g(100%)であった。 The yield was 34g (100%). 1H nmr( 1H nmr (
DMSOd6):( 3.5(br m,PEG),4.31(t,OCH 2 CH 2 OMs), DMSOd6) :( 3.5 (br m, PEG), 4.31 (t, OCH 2 CH 2 OMs),
? 4.49(s,C 65 CH 2 OPEG),7.33(s+complex mult., 4.49 (s, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + complex mult.,
65 CH 2 OPEG)。 C 6 H 5 CH 2 OPEG) .

b) BzOPEGNH 2の調製:BzOPEGOMs(25g、7.35mmole)を、5gの塩化アンモニウムを含む500mlのアンモニア水に溶解し、溶液を室温で72 b) the BzOPEGNH 2 Preparation: BzOPEGOMs a (25g, 7.35mmole), dissolved in aqueous ammonia 500ml containing ammonium chloride 5g, the solution at room temperature 72
時間撹拌した。 And the mixture was stirred time. 次いで、溶液を塩化メチレンで3回抽出した。 The solution was then extracted 3 times with methylene chloride. 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮し、生成物を100mlのエチルエーテルで沈殿させた。 The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure, the product was precipitated with ethyl ether 100 ml. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 収量:23g(92%)。 Yield: 23g (92%). 1H nmr(DMS 1H nmr (DMS
Od6):( 3.5(br m,PEG),2.9(t,CH 2 NH 2 ),4.49(s,C Od6) :( 3.5 (br m, PEG), 2.9 (t, CH 2 NH 2), 4.49 (s, C
65 CH 2 OPEG),7.33(s+complex mult.,C 65 CH 2 OPE 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + complex mult., C 6 H 5 CH 2 OPE
G)。 G).

c) HOPEGNH 3+ Cl-の調製:BzOPEGNH 2 (46g、14mmoles) c) HOPEGNH 3+ Cl- of preparation: BzOPEGNH 2 (46g, 14mmoles)
の200ml濃HCl(12M)溶液を、室温で44時間撹拌した。 Of 200ml of concentrated HCl (12M) solution and stirred at room temperature for 44 hours. 次いで、これを水で1200mlに希釈し、NaClを添加して15%溶液とした。 It was then diluted to 1200ml with water and 15% solution was added to NaCl. 水溶液を塩化メチレンで3回抽出し、合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥した。 The aqueous solution was extracted 3 times with methylene chloride, the combined extracts were dried over sodium sulfate. 塩化メチレンを減圧濃縮し、 Methylene chloride was concentrated under reduced pressure,
エーテルの添加によって生成物を沈殿させた。 The product was precipitated by addition of ether. 生成物を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥した。 The product was collected by filtration and dried under vacuum at room temperature. 収量:42g(95%)。 Yield: 42g (95%). 1H nmr(DMSOd6):( 2.96(t,C 1H nmr (DMSOd6) :( 2.96 (t, C
2 N),3.5(br m,PEG),4.6(br,OH),7.9(br,NH 3+ H 2 N), 3.5 (br m, PEG), 4.6 (br, OH), 7.9 (br, NH 3+)
.

実施例2 HOPEGOCH 2 CO 2 Hの調製反応 Preparation reactions of Examples 2 HOPEGOCH 2 CO 2 H

a) BzOPEGOCH 2 CO 2 C(CH 33の調製:BzOPEGOH(MW=340 a) BzOPEGOCH 2 CO 2 C ( CH 3) 3 of Preparation: BzOPEGOH (MW = 340
0,40g、11.7mmole)を、N 2下で250mlのトルエンと共沸した。 0,40g, 11.7mmole) were azeotroped with toluene 250ml under N 2. 2時間後、溶液を室温に冷却した。 After 2 hours, the solution was cooled to room temperature. 上記PEG溶液に90mlのtert−ブタノールおよび90mlのトルエンに溶解したカリウムtert−ブトキシド(2.8g、23.5mm Potassium was dissolved in toluene tert- butanol and 90ml of 90ml in the PEG solution tert- butoxide (2.8 g, 23.5 mm
ole)を添加した。 ole) was added. 混合物を室温で2時間撹拌した。 The mixture was stirred for 2 hours at room temperature. tert−ブチルブロモ酢酸(4 tert- butyl bromoacetate (4
ml,26.3mmole)を添加し、溶液をN 2下の室温で一晩撹拌した。 ml, was added 26.3mmole), the solution was stirred overnight at room temperature under N 2. 溶液を濾過し、減圧濃縮し、300mlのエーテル中で沈殿させた。 The solution was filtered, concentrated under reduced pressure, precipitated in ether 300 ml. 生成物を濾過によって回収し、 The product was collected by filtration,
減圧乾燥した。 And dried under reduced pressure. 1H nmr(DMSOd6):( 1.5(s,tBu),3.51(m, 1H nmr (DMSOd6) :( 1.5 (s, tBu), 3.51 (m,
PEG),3.98(s,OCH 2 CO 2 ),4.49(s,C 65 CH 2 O),7.33 PEG), 3.98 (s, OCH 2 CO 2), 4.49 (s, C 6 H 5 CH 2 O), 7.33
(s + comp.mult.,C 65 CH 2 O−)。 (S + comp.mult., C 6 H 5 CH 2 O-).

b) HOPEG OCH 2 CO 2 Hの調製:BzOPEGOCH 2 CO 2 C(CH 33 (10 b) HOPEG OCH 2 CO 2 H Preparation of: BzOPEGOCH 2 CO 2 C (CH 3) 3 (10
g)を、100mlの塩酸(37%)に溶解し、溶液を室温で48時間撹拌した。 The g), was dissolved in 100ml of hydrochloric acid (37%) and the solution was stirred for 48 hours at room temperature. 溶液を1リットルの蒸留水で希釈し、1Nの水酸化ナトリウムでpHを2に調整した。 The solution was diluted with 1 liter of distilled water and the pH was adjusted to 2 with sodium hydroxide 1N. 次いで、 Then,
溶液を塩化メチレンで3回抽出した。 The solution was extracted 3 times with methylene chloride. 有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して塩を除去し、減圧濃縮し、エーテルで沈殿させた。 The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered to remove salts, and concentrated under reduced pressure and precipitated with ether. 生成物を濾過によって回収し、減圧乾燥した。 The product was collected by filtration and dried under vacuum. 収量:8.5 g(85%)。 Yield: 8.5 g (85%). 1H nmr(DMSOd6):( 3.51(br m 1H nmr (DMSOd6) :( 3.51 (br m
,PEG),4.01(s,−PEGOCH 2 COOH)。 , PEG), 4.01 (s, -PEGOCH 2 COOH).

実施例3 ClH 3 N+PEGOCH 2 CO 2 Hの調製 Preparation Example 3 ClH 3 N + PEGOCH 2 CO 2 H

a) HOPEG 3400 OCH 2 CO 2 CH 3の調製:実施例2で調製したHOPEGOCH 2 a) Preparation of HOPEG 3400 OCH 2 CO 2 CH 3 : HOPEGOCH 2 prepared in Example 2
CO 2 H(15 g)を75mlのメタノールに溶解し、得られた溶液に3mlの濃H 2 CO 2 H and (15 g) was dissolved in methanol 75 ml, concentrated in 3ml obtained solution H 2 S
4を添加した。 The O 4 was added. 溶液を室温で1.5時間撹拌し、180mlの5%NaHCO 3水溶液を慎重に添加した。 The solution was stirred for 1.5 hours at room temperature, it was added carefully 5% NaHCO 3 aqueous solution 180 ml. 次いで、塩化ナトリウム(25g)を添加し、得られた溶液のpHを5 Then, sodium chloride was added (25 g), the pH of the resulting solution 5
%Na 2 HPO 4で7に調整した。 It was adjusted to% Na 2 HPO 4 at 7. 溶液を塩化メチレンで抽出し、合わせた有機層をNa 2 The solution was extracted with methylene chloride, the combined organic layers Na 2
SO 4で乾燥した。 And dried over SO 4. 次いで、塩化メチレン溶液を20mlに蒸発させ、生成物を300m Then evaporated methylene chloride solution to 20 ml, the product 300m
lの冷エチルエーテルで沈殿させた。 It was precipitated with cold ethyl ether l. 生成物を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥して13.5gの生成物を獲得し、これはGPCによって純度100%であることが示された。 The product was collected by filtration, won product of 13.5g was dried under reduced pressure at room temperature, which was shown to be 100% pure by GPC.

b) MsOPEGOCH 2 CO 2 CH 3の調製:HOPEG 3400 OCH 2 CO 2 CH 3 (13 b) Preparation of MsOPEGOCH 2 CO 2 CH 3: HOPEG 3400 OCH 2 CO 2 CH 3 (13
. 5 g)を、400mlのCHCl 3に溶解し、約200mlの溶媒を蒸留した。 The 5 g), was dissolved in CHCl 3 of 400 ml, the solvent was distilled to about 200 ml. 残りの溶液を室温に冷却し、トリエチルアミン(0.72ml)を添加後、0.38mlのMs The remaining solution was cooled to room temperature, triethylamine was added (0.72 ml), 0.38 ml of Ms
Clを添加した。 The Cl was added. 反応混合物をN 2下の室温で一晩撹拌し、2mlのエタノールを添加し、得られた混合物を15分間撹拌した。 The reaction mixture was stirred overnight at room temperature under N 2, was added ethanol 2 ml, and the resulting mixture was stirred for 15 min. 減圧下(55℃の浴)での溶媒の蒸発後、得られた沈殿を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥した。 After evaporation of the solvent under reduced pressure (bath 55 ° C.), the resulting precipitate was collected by filtration and dried under vacuum at room temperature. 収量は14gであり、1H nmrスペクトルにより、100%メシル化が示された。 The yield was 14 g, the IH nmr spectrum, 100% mesylation showed.

c) H 2 NPEG 3400 CO 2 - NH 4+の調製:MsO−PEG−OCH 2 CO 2 CH 3 (13 c) H 2 NPEG 3400 CO 2 - Preparation of NH 4+: MsO-PEG-OCH 2 CO 2 CH 3 (13
g)を、70mlのH 2 Oに溶解し、pHを12に調整した。 The g), was dissolved in H 2 O in 70 ml, the pH was adjusted to 12. pH12を維持しながら1 While maintaining the pH12 1
. 5時間撹拌後、5%NH 4 Clを含む250mlのNH 4 OH溶液を添加した。 After 5 hours stirring, NH 4 OH was added to a solution of 250ml containing 5% NH 4 Cl. 次いで、 Then,
反応混合物を約40時間撹拌し、NaClを添加して濃度を約8%にした。 The reaction mixture was stirred for about 40 hours to about 8% concentration by addition of NaCl. 得られた溶液をCH 2 Cl 2で抽出し、Na 2 SO 4で乾燥した。 The resulting solution was extracted with CH 2 Cl 2, dried over Na 2 SO 4. CH 2 Cl 2層を約20mlに蒸発させ、 The CH 2 Cl 2 layer was evaporated to approximately 20 ml,
約300mlの冷エチルエーテルで沈殿させた。 It was precipitated with cold ethyl ether to about 300 ml. 沈殿した生成物を濾過によって回収し、 The precipitated product was collected by filtration,
室温で減圧乾燥した。 And dried under reduced pressure at room temperature. 収量は12.5gであった。 The yield was 12.5g. 純度は1H nmrでは97%であり、 Purity was 97% in IH nmr,
GPCでは95%であった。 The GPC was 95%.

d)Cl――H 3+ −PEG 3400 OCH 2 CO 2 Hの調製:H 2 NPEGCO 2 - NH 4 + (1 d) Cl - H 3 N + -PEG 3400 OCH 2 CO 2 H Preparation of: H 2 NPEGCO 2 - NH 4 + (1
2g)を15%NaClを含むH 2 O(50ml)に溶解した。 The 2g) was dissolved in H 2 O (50ml) containing 15% NaCl. 1N HClでpHを3. 3 the pH with 1N HCl.
0に調整し、得られた溶液をCH 2 Cl 2で抽出した。 Was adjusted to 0, the resulting solution was extracted with CH 2 Cl 2. CH 2 Cl 2抽出物をNa 2 SO 4で乾燥し、約20mlに蒸発させ、約300mlのエチルエーテルで生成物を沈殿させ、室温で減圧乾燥した。 The CH 2 Cl 2 extract was dried over Na 2 SO 4, evaporated to approximately 20 ml, the product was precipitated with ethyl ether to about 300 ml, and dried under reduced pressure at room temperature. 1H nmrでの純度は95%であった。 Purity at IH nmr was 95%.

実施例4 Cl-H 3 N+PEGOCH 2 CH 2 CO 2 Hの調製 Preparation Example 4 Cl-H 3 N + PEGOCH 2 CH 2 CO 2 H

a) HOPEG 3400 OCH 2 CH 2 CO 2 Hの調製:BzOPEGOH(100 g)を、 a) HOPEG 3400 OCH 2 CH 2 CO 2 H Preparation of: BzOPEGOH a (100 g),
100mlのH 2 Oに溶解し、得られた溶液に5mlの40%のKOH水溶液を添加し、 Were dissolved in 100ml of H 2 O, it was added 40% aqueous KOH solution 5ml To the resulting solution,
混合物を1時間撹拌した。 The mixture was stirred for 1 hour. 次いで、溶液を0℃に冷却し、アルゴン下で50mlのアクリロニトリルを添加した。 The solution was then cooled to 0 ℃ was added acrylonitrile 50ml under argon. 3時間の撹拌後、20%NaCl水溶液を添加し、10%NaH After stirring for 3 hours, it was added 20% NaCl aqueous solution, 10% NaH
2 PO 4でpHを7.0に調整した。 The pH was adjusted to 7.0 with 2 PO 4. ついで、溶液をCH 2 Cl 2で抽出し、抽出物をNa 2 The solution was then extracted with CH 2 Cl 2, the extract Na 2
SO 4で乾燥した。 And dried over SO 4. 溶媒の減圧蒸発後、残渣を500mlの濃HClに溶解し、室温で6 After vacuum evaporation of the solvent, the residue was dissolved in concentrated HCl 500 ml, 6 at room temperature
0時間撹拌した。 0 hours and the mixture was stirred. 次いで、240gのNaOHの1.2l水溶液に溶液を添加し、NaC The solution was added to 1.2l aqueous solution of NaOH of 240 g, NaC
lを添加して8%溶液を作製し、pHを7.0に調整した。 By adding l to prepare a 8% solution, the pH was adjusted to 7.0. 溶液をCH 2 Cl 2で抽出し、 The solution was extracted with CH 2 Cl 2,
抽出物をNa 2 SO 4で乾燥し、減圧蒸発によって乾燥した。 The extract was dried over Na 2 SO 4, and dried by vacuum evaporation. 残渣を1.5lの8%KOH 8% KOH in 1.5l residue
中で20時間撹拌し、180mlの濃HClおよびNaCl(8%)を添加した。 Stirred for 20 hours at medium was added concentrated HCl and NaCl in 180ml (8%). pHを3.0に調整し、生成物を塩化メチレンで抽出した。 pH was adjusted to 3.0, and the product was extracted with methylene chloride. 抽出物をNa 2 SO 4で乾燥し、蒸発させ、生成物をエチルエーテルで沈殿させた。 The extract was dried over Na 2 SO 4, evaporated and the product was precipitated with ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、減圧乾燥して、GPCによって収率91%のHOPEGOCH 2 CH 2 CO 2 Hを含む90gの生成物が得られた。 The product was collected by filtration, and dried under reduced pressure, the product of 90g containing HOPEGOCH 2 CH 2 CO 2 H in 91% yield by GPC were obtained.

b) Cl- +H 3 NPEGOCH 2 CH 2 CO 2 Hの調製:実施例3のHOPEGOCH 2 b) Cl- + H 3 NPEGOCH 2 CH 2 CO 2 H Preparation of: Example 3 HOPEGOCH 2 C
2 HのCl- H 3 N+PEG 3400 OCH 2 CO 2 Hへの変換と同一の手順によって、HOP The O 2 H of Cl- H 3 N + PEG 3400 OCH 2 CO 2 same procedure conversion and to H, HOP
EGOCH 2 CH 2 CO 2 HをCl- +H 3 NPEGOCH 2 CH 2 CO 2 Hに変換した。 The EGOCH 2 CH 2 CO 2 H was converted to the Cl- + H 3 NPEGOCH 2 CH 2 CO 2 H.

実施例5 C 65 CH=CHCH=CHCO 2 PEGOCH 2 CH(OC 252の調製反応: Preparation reaction of Example 5 C 6 H 5 CH = CHCH = CHCO 2 PEGOCH 2 CH (OC 2 H 5) 2:

a) BzOPEGOCH 2 CH(OC 252の調製:500mlの丸底三つ口フラスコに300mlのジオキサンおよび14gのBzOPEGOH(MW=3400,0.00 a) BzOPEGOCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 Preparation: BzOPEGOH of dioxane and 14g round bottom three-necked flask 300ml of 500ml (MW = 3400,0.00
40 moles)を入れた。 40 moles) was placed. ついで、得られた溶液を130mlの溶媒とN 2下で共沸させた。 Then azeotroped resultant solution with a solvent and under N 2 for 130 ml. 溶液の冷却後、微粉末NaOH(0.8g、0.02 moles)およびClC After cooling the solution, fine powder NaOH (0.8g, 0.02 moles) and ClC
2 CH(OC 252 (3 ml,0.02 moles)をN 2下で添加し、得られた懸濁液を24時間還流しながら急速に撹拌した。 H 2 CH (OC 2 H 5 ) 2 (3 ml, 0.02 moles) was added under N 2 and the resulting suspension was rapidly stirred at reflux for 24 hours. 次いで、30mlのジオキサンを蒸留によって除去し、急速に撹拌した溶液をN 2下でさらに24時間還流した。 Then removed by distillation dioxane 30 ml, rapidly stirred solution was refluxed for a further 24 hours under N 2. 次いで、懸濁液を冷却し、Celite(商品名)の添加によって濾過した。 The suspension was then cooled and filtered by the addition of Celite (trade name). 濾過物を減圧蒸発し、残渣のオイルに200mlのエチルエーテルを添加した。 The filtrate was evaporated under reduced pressure, ethyl ether was added to 200ml of residual oil. 得られた沈殿を濾過によって回収し、 The resulting precipitate was collected by filtration,
室温で減圧乾燥して黄褐色粉末(13.6g)を得た。 To give a tan powder (13.6 g) and dried under reduced pressure at room temperature. 粉末をCH 2 Cl 2 (35 ml) Powder CH 2 Cl 2 (35 ml)
に溶解し、500mlの冷エチルエーテルの添加によって再沈殿させた。 It was dissolved in, and reprecipitated by addition of cold ethyl ether 500 ml. 沈殿物を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥して白色粉末として13.0gのBzOPEGOCH 2 The precipitate was collected by filtration, BzOPEGOCH 2 C of 13.0g as a white powder was dried under reduced pressure at room temperature
H(OC 252を得た(1H nmrによれば純度9498%)。 H (OC 2 H 5) to give 2 (according to IH nmr purity 9498%). 1H nmr(DMSO IH nmr (DMSO
d6):( 1.11(t,OCH 2 CH 3 );3.51(br m,O−CH 2 CH 2 O),4 d6) :( 1.11 (t, OCH 2 CH 3); 3.51 (br m, OCH 2 CH 2 O), 4
. 48(s,C 65 CH 2 O);4.55(t,CH(OC 252 ),7.32(s,C 48 (s, C 6 H 5 CH 2 O); 4.55 (t, CH (OC 2 H 5) 2), 7.32 (s, C
65 )。 6 H 5).

b) HOPEGO CH 2 CH(OC 252の調製:BzOPEGOCH 2 CH(OC 2 b) HOPEGO CH 2 CH (OC 2 H 5) 2 Preparation: BzOPEGOCH 2 CH (OC 2 H
52 (13 g)を150mlの95%エタノールに溶解し、N 2下で6.5gの10%炭素担持Pd触媒を添加した。 5) 2 (dissolving 13 g) in 95% ethanol 150 ml, it was added 10% Pd on carbon catalyst 6.5g under N 2. 懸濁液をH 2下(40psi)で70時間震盪し、懸濁液を濾過した。 The suspension was shaken 70 h under H 2 (40 psi), the suspension was filtered. 残りの触媒を2×25mlのボイルクロロホルムで洗浄し、洗浄物をエタノールと合わせ、濾過し、減圧濃縮して、無色透明のオイルを得た。 The remaining catalyst was washed with boiling chloroform 2 × 25 ml, the washings combined with ethanol, filtered, and concentrated in vacuo to yield a clear colorless oil. オイルに400mlの冷エチルエーテルを添加し、得られた沈殿物を濾過によって回収し、室温での減圧乾燥後に白色粉末として11.3gのHOPEGOCH 2 CH(OC 252を得た(1H nmrによれば純度92%)。 Oil was added to cold ethyl ether 400 ml, the resulting precipitate was collected by filtration and dried under reduced pressure to obtain after white powder as 11.3g of HOPEGOCH 2 CH (OC 2 H 5 ) 2 at room temperature (1H According to nmr purity 92%). 1H nmr(DMSOd6):( 1.10,(t,OCH 2 CH 3 1H nmr (DMSOd6) :( 1.10, (t, OCH 2 CH 3)
,3.51(br m,OCH 2 CH 2 O),4.55,(m,HO + CH(OCH 2 CH , 3.51 (br m, OCH 2 CH 2 O), 4.55, (m, HO + CH (OCH 2 CH
32 )。 3) 2).

c) C 65 CH=CHCH=CHCO 2 PEGOCH 2 CH(OC 252の調製:シンナミリデン酢酸(1.7g、0.01 moles)および塩化チオニル(3 ml,0.0 c) C 6 H 5 CH = CHCH = CHCO 2 PEGOCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 Preparation: cinnamylidene acetic acid (1.7g, 0.01 moles) and thionyl chloride (3 ml, 0.0
4 moles)の50mlヘキサン溶液を、N 2下で4時間還流し、濾過して少量の暗色固体を除去し、濾過物を減圧蒸発させた。 The 50ml hexane 4 moles) was refluxed for 4 hours under N 2, to remove a small amount of dark solid was filtered and the filtrate evaporated in vacuo. 残渣を室温で一晩減圧乾燥して、黄色固体として1.5gのシンナミリデンアセチルクロリド(融点51−52℃)を得た。 The residue was dried overnight under reduced pressure at room temperature to obtain a cinnamylideneacetyl of 1.5g as a yellow solid chloride (melting point 51-52 ° C.).

HOPEG−OCH 2 CH(OC 252 (3.4g、1.0mmole)のトルエン溶液(50ml)を、窒素下で2時間共沸して微量の水を除去し、室温に冷却した。 HOPEG-OCH 2 CH (OC 2 H 5) 2 (3.4g, 1.0mmole) in toluene (50ml) for 2 hours co under nitrogen boiling to remove traces of water, and cooled to room temperature. 窒素下でKOHからトリエチルアミンを蒸留し、窒素下でHOPEGO CH 2 CH(OC 252 Distilled triethylamine from KOH under nitrogen, under nitrogen HOPEGO CH 2 CH (OC 2 H 5) 2
のトルエン溶液に0.28ml(2mmole)の新鮮な蒸留物を注入した。 They were injected fresh distillate 0.28 ml (2 mmole) in toluene solution. 室温および窒素下で得られた溶液を急速に撹拌しながらシンナミリデンアセチルクロリド(C 65 With rapid stirring a solution obtained at room temperature and nitrogen cinnamylideneacetyl chloride (C 6 H 5 C
H=CHCH=CHCOCl)を滴下した。 H = CHCH = CHCOCl) was added dropwise. 同一の条件下で撹拌を3日間継続し、白色沈殿を濾過によって取り出した。 Stirring under the same conditions was continued for 3 days, was taken out of a white precipitate by filtration. 濾過物を減圧下で20mlに蒸発させ、300mlの冷エーテルを添加した。 The filtrate was evaporated to 20ml under reduced pressure, it was added cold ether of 300 ml. 淡黄色沈殿を濾過によって回収し、減圧乾燥して、3.4gの淡黄色粉末を得た。 The pale yellow precipitate was collected by filtration, and dried under reduced pressure to give a pale yellow powder 3.4 g. 粉末を塩化メチレンに溶解し、50mlの飽和塩化ナトリウム水溶液で1回抽出し、水で1回抽出した。 The powder was dissolved in methylene chloride, and extracted once with saturated aqueous sodium chloride solution 50 ml, and extracted once with water. 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、25mlに蒸発させ、3 The organic layer was dried over sodium sulfate, evaporated to 25 ml, 3
00mlの冷エーテルを撹拌しながら添加した。 Cold ether 00ml were added with stirring. 得られた沈殿物を濾過によって回収し、 The resulting precipitate was collected by filtration,
室温で減圧乾燥して淡黄色粉末として3.05g(86%)のC 65 CH=CHCH=C C 6 H 5 CH = CHCH = C of 3.05 g (86%) as a pale yellow powder was dried under reduced pressure at room temperature
HCO 2 PEG−OCH 2 CH(OC 252を得た。 HCO 2 PEG-OCH 2 CH ( OC 2 H 5) to give 2. 1H nmr(DMSOd6):δ 1 1H nmr (DMSOd6): δ 1
. 11ppm(t,C 3 CH 2 O−,3.51ppm(m,PEGOC 2 2 O + C 11ppm (t, C H 3 CH 2 O-, 3.51ppm (m, PEGOC H 2 C H 2 O + C
3 2 O);4.20ppm(t,―C 22 C―),4.52ppm(t,―CH( H 3 C H 2 O); 4.20ppm (t, -C H 2 O 2 C -), 4.52ppm (t, -CH (
OC 252 ),6.11(d,=C ),7.57―7.12(comp.mult. OC 2 H 5) 2), 6.11 (d, = C H), 7.57-7.12 (comp.mult.
,C 6 5 + =C )nmrによる純度:89―96%。 Pure by C 6 H 5 + = C H ) nmr: 89-96%.

実施例6 NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHS(NHS=Nスクシニミジル)の調製反応: Preparation reactions of Examples 6 NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHS (NHS = N -succinimidyl):

a) BzOPEGOCH 2 CO 2 Hの調製:BzOPEGOCH 2 CO 2 C(CH 33 (2 a) BzOPEGOCH 2 CO 2 H Preparation of: BzOPEGOCH 2 CO 2 C (CH 3) 3 (2
0g)を蒸留水に溶解し、1NNaOH溶液でpHを12.0に調整した。 Was dissolved 0 g) in distilled water, the pH was adjusted to 12.0 with 1NNaOH solution. NaOHの継続的添加により溶液をpH12.0に2時間維持し、溶液を一晩撹拌した。 The solution by continuous addition of NaOH and maintained for 2 hours to pH 12.0, the solution was stirred overnight. 1NNaOH 1NNaOH
溶液の添加により溶液のpHを2.5に調整し、溶液を塩化メチレンで3回抽出した。 The addition of the solution to adjust the pH of the solution to 2.5, the solution was extracted 3 times with methylene chloride. 合わせた有機塩化メチレン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾過物を減圧濃縮し、エチルエーテルで生成物を沈殿させた。 The combined organic methylene chloride layer was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure, the product was precipitated with ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥した。 The product was collected by filtration and dried under vacuum at room temperature. 収量は18g(90%)であった。 The yield was 18g (90%). 1H nmr(DMSOd6):( 3.5(br 1H nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br
m,PEG),4.01(s,PEGOCH 2 COOH),4.49(s,C 65 CH 2 m, PEG), 4.01 (s , PEGOCH 2 COOH), 4.49 (s, C 6 H 5 CH 2 O
PEG),7.33(s+com,C 65 CH 2 OPEG)。 PEG), 7.33 (s + com , C 6 H 5 CH 2 OPEG).

b) BzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOBzの調製:100mlの丸底フラスコに、B b) BzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOBz Preparation of: To a round bottom flask 100 ml, B
zOPEGOCH 2 CO 2 H(MW=3400,3.4g、1mmol)のトルエン溶液を共沸によって乾燥した。 zOPEGOCH 2 CO 2 H (MW = 3400,3.4g, 1mmol) was dried by azeotropic toluene solution. 塩化チオニル(2M,4 ml,8mmole)の塩化メチレン溶液を注入し、混合物をN 2下で一晩撹拌した。 Thionyl chloride (2M, 4 ml, 8mmole) methylene chloride solution was injected and the mixture was stirred overnight under N 2. 溶媒を回転式蒸発器で濃縮し、P 25粉末と共にシロップを約4時間真空乾燥した。 The solvent was concentrated on a rotary evaporator, syrup and about 4 hours in a vacuum drying with P 2 O 5 powder. 残渣に5mlの無水塩化メチレンを添加し、 To the residue was added anhydrous methylene chloride 5 ml,
トルエン中(20ml)でBzOPEGOH(MW=3400,2.55g、0.75 In toluene (20ml) BzOPEGOH (MW = 3400,2.55g, 0.75
mmol)を共沸により乾燥させた。 The mmol) was dried by azeotropic distillation. BzOPEGOCH 2 COClの溶解後、新たに蒸留したトリエチルアミン(0.6ml)を添加し、混合物を一晩撹拌した。 BzOPEGOCH 2 COCl After dissolution of, was added freshly distilled triethylamine (0.6 ml), and the mixture was stirred overnight. トリエチルアミン塩を濾過によって取り出し、生成物をエチルエーテルでの沈殿によって回収した。 The triethylamine salt was taken out by filtration, the product was recovered by precipitation with ethyl ether. これを水への溶解および塩化メチレンでの抽出によってさらに精製した。 Which was further purified by extraction with dissolution and methylene chloride in water. 生成物のゲル浸透クロマトグラフィーにより、100%のBzOPEGOHがエステルに変換されたことが示された。 Gel permeation chromatography of the product showed that 100% of the BzOPEGOH has been converted to an ester. 次いで、混合物をイオン交換カラム(DEAEセファロースfastflow Then, an ion-exchange column and the mixture (DEAE Sepharose fastflow
、Pharmacia)でクロマトグラフィーを行ってBzOPEGOCH 2 CO 2 Hを取り出し、純粋なBzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOBzを得た。 , Removed BzOPEGOCH 2 CO 2 H was chromatographed by Pharmacia), to give pure BzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOBz. 収量:4.1グラム(8 Yield: 4.1 grams (8
0%)。 0%). 1H nmr(DMSO−d6):( 3.5(br m,PEG),4.14(s, 1H nmr (DMSO-d6) :( 3.5 (br m, PEG), 4.14 (s,
PEGOCH 2 COOPEG),4.18(t,PEGO−CH 2 COOCH 2 CH 2 OPE PEGOCH 2 COOPEG), 4.18 (t , PEGOCH 2 COOCH 2 CH 2 OPE
G),),4.48(s,ArCH 2 O)7.32(s,C 65 )。 G),), 4.48 (s , ArCH 2 O) 7.32 (s, C 6 H 5).

c) HOPEGOCH 2 CO 2 PEGOHの調製:BzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOB c) HOPEGOCH 2 CO 2 PEGOH Preparation of: BzOPEGOCH 2 CO 2 PEGOB
z(MW=6800,2g、0.59mmole)の1,4−ジオキサン溶液(20ml z (MW = 6800,2g, 0.59mmole) in 1,4-dioxane (20ml
)をH 2 (2 atm)および1グラムのPd/C(10%)で一晩水素化分解した。 ) Was decomposed hydrogenated overnight with H 2 (2 atm) and 1 gram Pd / C (10%). 濾過によって触媒を除去し、回転式蒸発器でほとんどの溶媒を沈殿させた後に生成物をエチルエーテルに沈殿させた。 The catalyst was removed by filtration, the product was precipitated into ethyl ether after precipitation of most of the solvent on a rotary evaporator. 濾過によって純粋なHOPEGOCH 2 CO 2 PEG−OHを回収し、室温で減圧乾燥して1.5g(75%)のHOPEGOCH 2 CO 2 PEGOHを得た。 To recover pure HOPEGOCH 2 CO 2 PEGOH by filtration to give the HOPEGOCH 2 CO 2 PEGOH of 1.5 g (75%) and dried under reduced pressure at room temperature. 1H nmr(DMSOd6):( 3.5(br m,PEG),4.14(s,PEGO 1H nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br m, PEG), 4.14 (s, PEGO
CH 2 COOPEG),4.18(t,PEGOCH 2 COOCH 2 CH 2 OPEG)。 CH 2 COOPEG), 4.18 (t , PEGOCH 2 COOCH 2 CH 2 OPEG).

d) NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHSの調製:HOPEGOCH 2 d) NHSO 2 COPEGOCH 2 CO 2 PEGOCO 2 NHS Preparation: HOPEGOCH 2
CO 2 PEGOH(2g、0.29mmole)を100mlのアセトニトリルと共沸し、ゆっくりと室温に冷却した。 CO 2 PEGOH (2g, 0.29mmole) was azeotroped with acetonitrile 100 ml, cooled slowly to room temperature. 得られた溶液にジスクシニミジルカーボネート(621m The resulting solution was added disuccinimidyl carbonate (621m
g,1.17mmole)およびピリジン(0.3ml)を添加し、溶液を室温で一晩撹拌した。 g, was added 1.17Mmole) and pyridine (0.3 ml), the solution was stirred overnight at room temperature. 減圧下で溶媒を除去し、残渣に35mlの乾燥塩化メチレンを添加した。 The solvent was removed under reduced pressure, it was added dry methylene chloride 35ml residue. 不溶性固体を濾過によって取り出し、濾過物をpH4.5の塩化ナトリウム飽和酢酸緩衝液で洗浄した。 Insoluble solid was removed by filtration, the filtrate was washed with saturated sodium chloride acetate buffer pH 4.5. 有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を除去した。 The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the solvent was removed under reduced pressure. エチルエーテルを添加し、沈殿を濾過によって回収し、減圧乾燥した。 Ethyl ether was added, the precipitate was collected by filtration and dried under vacuum. 収量:1.8g(90%)。 Yield: 1.8g (90%). 1 1
H nmr(DMSOd6):( 3.5(br m,PEG),4.14(s,PEGOC H nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br m, PEG), 4.14 (s, PEGOC
2 COOPEG),4.18(t,PEGOCH 2 COOCH 2 CH 2 OPEG),4.4 H 2 COOPEG), 4.18 (t , PEGOCH 2 COOCH 2 CH 2 OPEG), 4.4
5(t,PEGOCH 2 CH 2 OCONHS),2.81(s,NHS)。 5 (t, PEGOCH 2 CH 2 OCONHS), 2.81 (s, NHS).

実施例7 CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGO 2 CCH=CH 2の調製反応: Preparation reaction of Example 7 CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGO 2 CCH = CH 2:

CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 PEGO 2 CCH=CH 2の調製:HOPEGOCH CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 Preparation of PEGO 2 CCH = CH 2: HOPEGOCH
2 CO 2 PEGOH(M.W.=6800,1.5g、0.44mmole 末端基)を、 2 CO 2 PEGOH (M.W. = 6800,1.5g , 0.44mmole end groups) and,
100mlのトルエンで2時間共沸乾燥した。 2 hours co and boiling drying in 100ml of toluene. 溶液をN 2下で室温に冷却し、25mlの塩化メチレンおよびトリエチルアミン(TEA,0.56mmole)を添加した。 The solution was cooled to room temperature under N 2, was added methylene chloride and triethylamine 25ml (TEA, 0.56mmole). 溶液を氷浴中で冷却し、溶液にアクリロイルクロリド(1.5mmole)のCH 2 Cl 2溶液を滴下した。 The solution was cooled in an ice bath, it was added dropwise a CH 2 Cl 2 solution of the acryloyl chloride (1.5 mmole) to the solution. アクリロイルクロリドの添加後、氷浴を取り除き、溶液を室温で一晩撹拌した。 After addition of acryloyl chloride, the ice bath was removed and the solution was stirred overnight at room temperature. 1mlのエタノールを添加して過剰量のアクリロイルクロリドを消費し、塩化メチレンを減圧濃縮した。 Was added to 1ml of ethanol consumed acryloyl chloride excess, and the methylene chloride was concentrated under reduced pressure. 濾過によって塩を除去し、残りの溶液を100mlのエーテルで沈殿させた。 Filtration was removed by salt was precipitated remaining solution of ether 100 ml. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 生成物を50mlのクロロホルムに溶解し、炭酸ナトリウム(1.3g)を添加した。 The product was dissolved in chloroform 50 ml, was added sodium carbonate (1.3 g). 混合物を室温で一晩激しく撹拌した。 The mixture was stirred vigorously overnight at room temperature. 塩を濾過によって除去し、溶媒を減圧下で除去した。 The salts were removed by filtration, the solvent was removed under reduced pressure. 残渣を5mlの塩化メチレンに溶解し、100mlエチルエーテルに溶液を添加した。 The residue was dissolved in 5ml of methylene chloride, the solution was added to 100ml of ethyl ether. 得られた沈殿を濾過によって回収し、20mlの2−プロパノールで洗浄し、40mlのエーテルで洗浄した。 The resulting precipitate was collected by filtration, washed with 20ml of 2-propanol, washed with ether 40 ml. 最後に、生成物を真空乾燥した。 Finally, the product was dried under vacuum. 収量1.35g(90%)。 Yield 1.35g (90%). 1 H nmr(DMSO―d 6 ):δ3. 1 H nmr (DMSO-d 6 ): δ3.
5(br m,PEG),4.14(t,PEGOC 2 COOPEG),4.18(t 5 (br m, PEG), 4.14 (t, PEGOC H 2 COOPEG), 4.18 (t
,PEGOCH 2 COOC 2 CH 2 OPEG),4.21(t,CH 2 =CHCOOC 2 , PEGOCH 2 COOC H 2 CH 2 OPEG), 4.21 (t, CH 2 = CHCOOC H 2
CH 2 OPEG,4H),5.85−6.45(m,C 2 =C COOPEG)。 CH 2 OPEG, 4H), 5.85-6.45 (m, C H 2 = C H COOPEG).

実施例8 CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOHの調製反応: EXAMPLE 8 CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOH Preparation Reaction:

a) CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOBzの調製:100mlの丸底フラスコ中で、CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 H(MW=2000,2g、lmmole)溶液をトルエンに溶解し、2時間共沸乾燥した。 a) CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOBz Preparation of: In a round bottom flask 100ml, CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 H (MW = 2000,2g, lmmole) solution was dissolved in toluene, 2 hours co It was boiling dry. ゆっくりと室温に冷却後、チオニルクロリド(3 ml,6mmole)の塩化メチレン溶液にこの溶液を添加し、N 2下で一晩撹拌した。 After slowly cooling to room temperature, this solution was added thionyl chloride (3 ml, 6 mmole) in methylene chloride was stirred overnight under N 2. 次いで、回転式蒸発器によって溶媒を除去し、残ったシロップをP 25粉末と共に約4時間真空乾燥した。 The solvent was then removed by rotary evaporator, the remaining syrup was about 4 hours in a vacuum drying with P 2 O 5 powder. 固体に5mlの無水塩化メチレンおよび共沸乾燥BzOPEGOH Anhydrous methylene chloride 5ml solid and azeotropic drying BzOPEGOH
(MW=3400,2.04g、0.60mmol)のトルエン溶液(20ml)を添加した。 (MW = 3400,2.04g, 0.60mmol) was added a toluene solution (20ml) of. 得られた溶液に0.6mlの新たに蒸留したトリエチルアミンを添加し、溶液を一晩撹拌した。 The resulting solution was added freshly distilled triethylamine 0.6 ml, the solution was stirred overnight. トリエチルアミン塩を濾過によって除去し、粗生成物をエチルエーテルで沈殿させ、濾過によって回収した。 The triethylamine salt was removed by filtration, the crude product was precipitated with ethyl ether and collected by filtration. 次いで、混合物をイオン交換クロマトグラフィー(DE The mixture was then ion-exchange chromatography (DE
AEセファロースfast flowカラム、Pharmacia)によって精製した。 AE Sepharose fast flow column and purified by Pharmacia).
純粋なCH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOBzが得られた。 Pure CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOBz was obtained. 収量:2.6g(80 Yield: 2.6g (80
%)。 %). lH nmr(DMSOd6):( 3.5(br.mult.,PEG),3.24 lH nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br.mult., PEG), 3.24
(s,CH 3 OPEG),4.48(s,−PEGOCH 265 ),7.33(s + c (S, CH 3 OPEG), 4.48 (s, -PEGOCH 2 C 6 H 5), 7.33 (s + c
omp. omp. mult. mult. ,PEGOCH 265 ),2.55(t,OCH 2 CH 2 CO 2 PEG , PEGOCH 2 C 6 H 5) , 2.55 (t, OCH 2 CH 2 CO 2 PEG
),4.13(t,PEGCO 2 CH 2 CH 2 OPEG)。 ), 4.13 (t, PEGCO 2 CH 2 CH 2 OPEG).

b) CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOHの調製:2gのCH 3 OPEGOCH 2 b) CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOH Preparation of: 2 g of CH 3 OPEGOCH 2
CH 2 CO 2 PEGOBzの1,4−ジオキサン溶液を1グラムのPd/C(10%)上でH 2 (2atm)で一晩水素化分解した。 CH decomposed hydrogenated overnight at 2 CO 2 PEGOBz 1,4 dioxane 1 gram of Pd / C (10%) on at H 2 (2atm). 濾過によって触媒を除去し、溶媒を減圧濃縮し、エチルエーテルに溶液を添加した。 The catalyst was removed by filtration, the solvent was concentrated under reduced pressure, the solution was added to ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、室温で減圧乾燥して、1.5g(75%)のCH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOHを得た。 The product was collected by filtration and dried under vacuum at room temperature to obtain CH 3 OPEGOCH 2 CH 2 CO 2 PEGOH of 1.5g (75%). 1H nmr 1H nmr
(DMSOd6):( 3.5(br.mult.PEG),3.24(s,CH 3 OPEG (DMSOd6) :( 3.5 (br.mult.PEG) , 3.24 (s, CH 3 OPEG
),2.55(t,OCH 2 CH 2 CO 2 PEG),4.13(t,PEGCO 2 CH 2 CH 2 ), 2.55 (t, OCH 2 CH 2 CO 2 PEG), 4.13 (t, PEGCO 2 CH 2 CH 2
OPEG)。 OPEG).

実施例9 NHSO 2 CCH 2 CH 2 COOPEGOCH 2 CH 2 CH(OC 252の調製反応: Preparation reactions of Examples 9 NHSO 2 CCH 2 CH 2 COOPEGOCH 2 CH 2 CH (OC 2 H 5) 2:

a) BzOPEGOMsの調製:BzOPEGOH(MW=3400,25g、7.3 a) BzOPEGOMs preparation of: BzOPEGOH (MW = 3400,25g, 7.3
5mmol)の150mlトルエン溶液を、窒素下で1時間共沸し、溶液を室温に冷却した。 The 150ml toluene solution of 5 mmol), and 1 hour azeotroped under nitrogen, the solution was cooled to room temperature. 溶液に20mlの乾燥塩化メチレン、1.14mlの乾燥トリエチルアミン(8.1 Solution 20ml of dry methylene chloride, 1.14 ml of dry triethylamine (8.1
6mmol)、および0.61mlの乾燥メシルクロリド(7.86mmol)を滴下した。 6 mmol), and 0.61ml of dry mesyl chloride and (7.86 mmol) was added dropwise. 溶液を窒素下、室温で一晩撹拌し、5mlの無水エタノールの添加により反応を停止させた。 The solution was stirred under nitrogen at room temperature overnight, the reaction was quenched by the addition of absolute ethanol 5 ml. 混合物を減圧濃縮し、濾過し、再度減圧濃縮し、エチルエーテル中で沈殿させた。 The mixture was concentrated in vacuo, filtered, and concentrated in vacuo again and precipitated into ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 収量:23g(100%)。 Yield: 23g (100%). 1H nmr 1H nmr
(DMSOd6):( 3.5(br m,PEG),4.31(t,OCH 2 CH 2 OMs) (DMSOd6) :( 3.5 (br m , PEG), 4.31 (t, OCH 2 CH 2 OMs)
,4.49(s,C 65 CH 2 OPEG),7.33(s + comp m.,C 65 CH , 4.49 (s, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + comp m., C 6 H 5 CH
2 OPEG)。 2 OPEG).

b) BzOPEGOCH 2 CH 2 CH(OC 252の調製:3,3−ジエトキシプロパノール(9.806g、66.2mmol)を窒素下の90mlのトルエン中で1時間共沸した。 b) BzOPEGOCH 2 CH 2 CH ( OC 2 H 5) 2 Preparation: 3,3-diethoxy-propanol (9.806g, 66.2mmol) was azeotroped for 1 hour in toluene 90ml under nitrogen. 室温に冷却後、水素化ナトリウム(60%鉱物油液、2.75g、68.7mmo After cooling to room temperature, sodium hydride (60% mineral oil solution, 2.75 g, 68.7Mmo
l)の50ml無水トルエン分散物に溶液を添加した。 The solution was added to 50ml of anhydrous toluene dispersion l). 35℃に穏やかに加熱しながら溶液を2時間混合し、濾過した。 The solution was mixed for 2 hours with gentle heating to 35 ° C., and filtered. BzOPEGOMs(23g、6.76mmol)の15 BzOPEGOMs 15 of (23g, 6.76mmol)
0mlトルエン共沸溶液に、濾過物を添加した。 The 0ml toluene azeotroped solution was added the filtrate. 混合物を125℃の窒素雰囲気下で20 The mixture under nitrogen atmosphere at 125 ° C. 20
時間濃縮し、残渣を80mlの塩化メチレンに溶解した。 And time concentrated, the residue was dissolved in 80ml of methylene chloride. 溶液を濾過し、生成物を1リットルの冷イソプロピルアルコールで沈殿させた。 The solution was filtered and the product was precipitated with 1 liter of cold isopropyl alcohol. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 粉末を100mlの脱イオン水に溶解し、200mlの塩化メチレンで3回抽出した。 The powder was dissolved in deionized water 100 ml, and extracted 3 times with 200ml of methylene chloride. 混合物を減圧濃縮し、濾過し、エチルエーテルで沈殿させた。 The mixture was concentrated under reduced pressure, filtered and precipitated with ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo. 収量19g(100%)。 The yield 19g (100%). 1H nmr(DMSOd6):( 1. 1H nmr (DMSOd6) :( 1.
10(t,−CH(OCH 2 CH 32 ,1.73(q,OCH 2 CH 2 CH),3.5(b 10 (t, -CH (OCH 2 CH 3) 2, 1.73 (q, OCH 2 CH 2 CH), 3.5 (b
r m,PEG),4.49(s,C 65 CH 2 OPEG),4.56(m,CH(OCH r m, PEG), 4.49 ( s, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 4.56 (m, CH (OCH
2 CH 32 ),7.33(s + comp m,C 65 CH 2 OPEG)。 2 CH 3) 2), 7.33 (s + comp m, C 6 H 5 CH 2 OPEG).

c) HOPEGOCH 2 CH 2 CH(OC 252の調製:BzOPEGOCH 2 CH 2 CH c) HOPEGOCH 2 CH 2 CH ( OC 2 H 5) 2 Preparation: BzOPEGOCH 2 CH 2 CH
(OC 252 (10g、2.94 mmol)を100mlの96%エタノールに溶解し、窒素下で5.0gの10%炭素担持Pd触媒を添加した。 (OC 2 H 5) 2 ( 10g, 2.94 mmol) was dissolved in 96% ethanol 100 ml, was added 10% Pd on carbon catalyst 5.0g under nitrogen. 懸濁液をH 2 (40psi) Suspension H 2 (40 psi)
下で48時間震盪し、懸濁液を濾過した。 Shaken for 48 hours under the suspension was filtered. 残渣を塩化メチレンで洗浄した。 The residue was washed with methylene chloride. 塩化メチレンとエタノールとの合わせた濾過物中の生成物を減圧濃縮し、濾過した。 The product in the filtrate was combined with the methylene chloride and ethanol was concentrated under reduced pressure, and filtered. 粘性溶液を冷エチルエーテルで沈殿させ、生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The viscous solution was precipitated with cold ethyl ether, the product was collected by filtration and dried in vacuo. 収量:15g。 Yield: 15g. 1 1
H nmr(DMSOd6):( 1.10(t,CH(OCH 2 CH 32 ,1.72(q, H nmr (DMSOd6) :( 1.10 ( t, CH (OCH 2 CH 3) 2, 1.72 (q,
−OCH 2 CH 2 CH). -OCH 2 CH 2 CH). 3.5(br m,PEG),4.55(m,CH(OCH 2 CH 3.5 (br m, PEG), 4.55 (m, CH (OCH 2 CH
32 )。 3) 2).

d)HO 2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH(OCH 2 CH 32の調製:HOP d) HO 2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH (OCH 2 CH 3) 2 of Preparation: HOP
EGOCH 2 CH 2 CH(OC 252 (3g,0.88mmol)およびBHT(5mg EGOCH 2 CH 2 CH (OC 2 H 5) 2 (3g, 0.88mmol) and BHT (5 mg
)を、20mlの無水トルエンに溶解し、窒素下、120℃で1時間共沸した。 ) Was dissolved in anhydrous toluene 20 ml, under nitrogen, it was azeotroped for 1 hour at 120 ° C.. 溶液を7 The solution 7
5℃に冷却後、ピリジン(0.36ml)および無水コハク酸(0.353g)を添加し、75℃で24時間撹拌した。 After cooling to 5 ° C., was added pyridine (0.36 ml) and succinic anhydride (0.353 g), and stirred at 75 ° C. 24 hours. 溶液を減圧濃縮し、濾過し、冷エチルエーテルに沈殿させた。 The solution was concentrated under reduced pressure, filtered and precipitated into cold ethyl ether. 沈殿物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The precipitate was collected by filtration and dried in vacuo. 粉末を50mlの脱イオン水中で再構成し、1Mの水酸化ナトリウムを滴下してpHを7.2に1時間維持した。 The powder was reconstituted in deionized water 50 ml, was maintained for 1 hour the pH at 7.2 by dropwise addition of sodium hydroxide 1M. 1NHClを即座に滴下して、pH3.0とし、その後すぐに100mlの塩化メチレンで3回抽出した。 1NHCl immediately dropwise, and pH 3.0, then extracted 3 times quickly in 100ml of methylene chloride. 有機層中の生成物を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、冷エチルエーテルで沈殿させ、濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product in the organic layer was dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure, precipitated with cold ethyl ether, collected by filtration and dried in vacuo. 収量:2.0g(88%)。 Yield: 2.0g (88%). 1H nmr(D IH nmr (D
MSOd6):( 1.10(t,CH(OCH 2 CH 32 ,1.72(q,OCH 2 CH 2 MSOd6) :( 1.10 (t, CH (OCH 2 CH 3) 2, 1.72 (q, OCH 2 CH 2 C
H),3.5(br m,PEG),4.12(t,CO 2 CH 2 ),4.55(t,CH H), 3.5 (br m, PEG), 4.12 (t, CO 2 CH 2), 4.55 (t, CH
(OCH 2 CH 32 )。 (OCH 2 CH 3) 2) .

e) NHSO 2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH(OCH 2 CH 32の調製:H e) NHSO 2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH (OCH 2 CH 3) 2 of Preparation: H
2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH(OCH 2 CH 32 (2.0g、0.56 O 2 CCH 2 CH 2 CO 2 PEGOCH 2 CH 2 CH (OCH 2 CH 3) 2 (2.0g, 0.56
mmol)を窒素雰囲気下で20mlの無水塩化メチレンに溶解した。 The mmol) was dissolved in anhydrous methylene chloride 20ml under nitrogen atmosphere. N−ヒドロキシスクシンイミド(105 mg,0.91mmol)を、最初に溶液に添加し、その後ジシクロヘキシルカルボジイミド(174 mg,0.84mmol)を添加した。 N- hydroxysuccinimide (105 mg, 0.91 mmol) were first added to the solution, followed by the addition of dicyclohexylcarbodiimide (174 mg, 0.84mmol). 溶液を窒素雰囲気下の室温で一晩撹拌した。 The solution was stirred overnight at room temperature under a nitrogen atmosphere. 生成物を減圧濃縮し、濾過し、冷エチルエーテルに沈殿させ、濾過によって回収し、真空乾燥した。 The product was concentrated under reduced pressure, filtered and precipitated into cold ethyl ether, collected by filtration and dried in vacuo. 収量:1.5g:(99%)。 Yield: 1.5g: (99%). 1H nmr 1H nmr
(DMSOd6):( 1.10(t,CH(OCH 2 CH 32 ,1.72(q,OCH 2 (DMSOd6) :( 1.10 (t, CH (OCH 2 CH 3) 2, 1.72 (q, OCH 2 C
2 CH),2.80(s,NHS),3.5(br m,PEG),4.12(t,CO H 2 CH), 2.80 (s , NHS), 3.5 (br m, PEG), 4.12 (t, CO
2 CH 2 ),4.55(t,CH(OCH 2 CH 32 )。 2 CH 2), 4.55 (t , CH (OCH 2 CH 3) 2).

実施例10 CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 NHSの調製反応: Example 10 CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 NHS Preparation Reaction:

a) BzOPEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 Hの調製:BzOPEGOCH a) BzOPEGOCH 2 CO 2 CH ( CH 3) CH 2 CO 2 H Preparation of: BzOPEGOCH
2 CO 2 H(MW=3400,15g、4.4mmole)を、N 2下で60mlのトルエンと共沸した。 2 CO 2 H (MW = 3400,15g , 4.4mmole) were azeotroped with toluene 60ml under N 2. 2時間後、溶液をゆっくりと室温に冷却した。 After 2 hours, the solution was slowly cooled to room temperature. この溶液に、チオニルクロリド(18 ml,36mmole)を添加した。 To this solution was added thionyl chloride (18 ml, 36mmole). 得られた溶液を一晩撹拌し、溶媒を回転式蒸発器で濃縮し、シロップをP 25粉末と共に約4時間真空乾燥した。 The resulting solution was stirred overnight, the solvent was concentrated on a rotary evaporator, the syrup was about 4 hours in a vacuum drying with P 2 O 5 powder. 3−ヒドロキシ酪酸(1.45g、13.5mmole)を70mlの1,4−ジオキサンと共沸乾燥し、乾燥BzOPEGOCH 2 COClに添加した。 3-hydroxybutyric acid (1.45g, 13.5mmole) was 1,4-dioxane and azeotropic drying of 70 ml, it was added to the dry BzOPEGOCH 2 COCl. PEGアクリルクロリドを溶解後、 After dissolving the PEG acrylic chloride,
4.5mlの乾燥トリエチルアミンをこの系に注入し、溶液を一晩撹拌した。 Injecting dry triethylamine 4.5ml into the system and the solution was stirred overnight. 濾過によって塩を除去し、濾過物を55℃の回転式蒸発器で濃縮し、真空乾燥した。 Filtered through to remove salts and the filtrate was concentrated on a rotary evaporator 55 ° C., and vacuum dried. 次いで、粗生成物を100mlの蒸留水に溶解し、溶液のpHを3.0に調整した。 The crude product was then dissolved in distilled water of 100 ml, the pH of the solution was adjusted to 3.0. 水層を全部で80m 80m The aqueous layer in total
lの塩化メチレンで3回抽出した。 And extracted three times with l of methylene chloride. 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、回転式蒸発器で濃縮し、100mlのエチルエーテルで沈殿させた。 The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated on a rotary evaporator and precipitated with ethyl ether 100 ml. 生成物を濾過によって回収し、室温で真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo at room temperature. 収量:14g(93%)。 Yield: 14g (93%). 1H nmr(DMSOd6):( 3. 1H nmr (DMSOd6) :( 3.
5(br m,PEG),2.58(d,PEGCOOCH(CH 3 )CH 2 COOH), 5 (br m, PEG), 2.58 (d, PEGCOOCH (CH 3) CH 2 COOH),
5.14(h,PEGCOOCH(CH 3 )CH 2 COOH),1.21(d,PEGCO 5.14 (h, PEGCOOCH (CH 3 ) CH 2 COOH), 1.21 (d, PEGCO
OCH(CH 3 )CH 2 COOH),4.055(s,PEGOCH 2 COO),4.49 OCH (CH 3) CH 2 COOH ), 4.055 (s, PEGOCH 2 COO), 4.49
(s,C 65 CH 2 OPEG),7.33(s+comp.mult.,C 65 CH 2 OP (S, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + comp.mult., C 6 H 5 CH 2 OP
EG)。 EG).

b)HOPEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 Hの調製:BzOPEGOCH 2 b) HOPEGOCH 2 CO 2 CH ( CH 3) CH 2 CO 2 H Preparation of: BzOPEGOCH 2 C
2 OCH(CH 3 )CH 2 CO 2 H(8 g)のベンゼン(50ml)溶液を室温で48時間4グラムのPd/C(10%)上でH 2 (2atm)で水素化分解した。 O 2 OCH (CH 3) and hydrocracking in CH 2 CO 2 H (8 g ) in benzene (50ml) solution 48 hours at 4 grams of Pd / C (10%) at room temperature over at H 2 (2atm). 濾過によって触媒を除去し、溶媒を濃縮し、溶液をエチルエーテルで沈殿させた。 The catalyst was removed by filtration, the solvent was concentrated and precipitated solution with ethyl ether. 生成物を濾過によって回収し、室温で真空乾燥した。 The product was collected by filtration and dried in vacuo at room temperature. 収量:6.6グラム(83%)。 Yield: 4.1 grams (83%). 1H nmr(DMSO IH nmr (DMSO
d6):( 3.5(br m,PEG),2.51(d,PEGCO 2 CH(CH 3 )CH 2 d6) :( 3.5 (br m, PEG), 2.51 (d, PEGCO 2 CH (CH 3) CH 2
CO 2 H),5.16(h,PEGCO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 H),1.22(ds CO 2 H), 5.16 (h , PEGCO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 H), 1.22 (ds
PEGCO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 H),4.06(s,PEGOCHCO 2 CH(C PEGCO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 H), 4.06 (s, PEGOCHCO 2 CH (C
3 )−。 H 3) -.

c) CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 Hの調製:HOPE c) CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 H Preparation of: HOPE
GOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 H(3g,0.88mmole)を、約15m GOCH 2 CO 2 CH (CH 3 ) CH 2 CO 2 H (3g, 0.88mmole) to about 15m
lの溶液となるまでN 2下で40mlのトルエンと共沸した。 It was azeotroped with toluene 40ml under N 2 until l solution. 次いで、溶液をN 2下で室温に冷却し、25mlの塩化メチレンおよびトリエチルアミン(1.5mmole)を添加した。 The solution was then cooled to room temperature under N 2, was added 25ml of methylene chloride and triethylamine (1.5 mmole). 溶液を氷浴中で冷却し、アクリロイルクロリド(2mmole)を滴下した。 The solution was cooled in an ice bath, it was added dropwise acryloyl chloride (2 mmole). アクリロイルクロリドの添加後、氷浴を取り除き、溶液を室温で一晩撹拌した。 After addition of acryloyl chloride, the ice bath was removed and the solution was stirred overnight at room temperature. 次いで、塩化メチレンを減圧下で部分的に除去し、塩を濾過によって除去し、100mlのエーテルに濾過物を添加した。 Then, the methylene chloride was partially removed under reduced pressure, salt was removed by filtration, it was added the filtrate of ether 100 ml. 沈殿した生成物を濾過によって回収し、真空乾燥した。 The precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo. 次いで、生成物を酢酸ナトリウム緩衝液(0.1M,pH5.5)に溶解し、30分間撹拌し、塩化メチレンで3回抽出した。 The product was then dissolved in sodium acetate buffer (0.1 M, pH 5.5), stirred for 30 minutes, and extracted three times with methylene chloride. 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、100ml The organic layer was dried over sodium sulfate, filtered, concentrated, 100 ml
のエチルエーテル中で沈殿させた。 Was precipitated with ethyl ether. 沈殿物を濾過によって回収し、室温で真空乾燥した。 The precipitate was collected by filtration and dried in vacuo at room temperature.
収量:2.4g(80%)。 Yield: 2.4g (80%). 1H nmr(DMSOd6):( 3.5(br m,PEG) 1H nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br m, PEG)
,2.51(d,CH 2 CO 2 H),5.16(h,CH(CH 3 ),1.22(d,CH , 2.51 (d, CH 2 CO 2 H), 5.16 (h, CH (CH 3), 1.22 (d, CH
(CH 3 )),4.06(s,PEGOCH 2 CO 2 PEG),4.21(t,CO 2 CH 2 (CH 3)), 4.06 ( s, PEGOCH 2 CO 2 PEG), 4.21 (t, CO 2 CH 2
CH 2 O),5.856.45(m,CH 2 =CH)。 CH 2 O), 5.856.45 (m , CH 2 = CH).

d) CH 2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 NHSの調製:CH d) CH 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 NHS Preparation: CH
2 =CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH(CH 3 )CH 2 CO 2 H(1.4g、約0.4mm 2 = CHCO 2 PEGOCH 2 CO 2 CH (CH 3) CH 2 CO 2 H (1.4g, approximately 0.4mm
ole)およびN−ヒドロキシスクシンイミド(51mg,0.43mmole)を、3 ole) and N- hydroxysuccinimide (51 mg, with 0.43mmole), 3
0mlの乾燥塩化メチレンに溶解した。 It was dissolved in dry methylene chloride 0 ml. この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド( To this solution, dicyclohexylcarbodiimide (
95mg,0.45mmole)の5mlの乾燥塩化メチレン溶液を添加した。 95 mg, was added dry methylene chloride solution of 5ml of 0.45mmole). 溶液を窒素下で一晩撹拌し、溶媒を回転式蒸発器によって除去した。 The solution was stirred overnight under nitrogen, the solvent was removed by rotary evaporator. 得られたシロップを、10m The resulting syrup, 10m
lの乾燥トルエンに溶解し、不溶性固体を濾過によって除去した。 It was dissolved in l of dry toluene, to remove insoluble solids by filtration. 100mlの乾燥エチルエーテルに濾過物を添加し、沈殿した生成物を濾過によって回収し、室温で真空乾燥した。 Was added to the filtrate to dry ethyl ether 100 ml, the precipitated product was collected by filtration and dried in vacuo at room temperature. 収量0.94g(94%)。 Yield 0.94g (94%). 1H nmr(DMSOd6):( 3.5(br m,PE 1H nmr (DMSOd6) :( 3.5 (br m, PE
G),3.03.2(m,PEGCOOCH(CH 3 )CH 2 COONHS),5.26( G), 3.03.2 (m, PEGCOOCH (CH 3) CH 2 COONHS), 5.26 (
h,PEGCOOCH(CH 3 )CH 2 COONHS),1.3(d,PEGCOOCH( h, PEGCOOCH (CH 3) CH 2 COONHS), 1.3 (d, PEGCOOCH (
CH 3 )CH 2 COONHS),4.10(s,PEGOCH 2 COO(CM)),2.8 CH 3) CH 2 COONHS), 4.10 (s, PEGOCH 2 COO (CM)), 2.8
1(s,NHS),4.21(t,CH 2 =CHCOOCH 2 CH 2 OPEG,4H),5 1 (s, NHS), 4.21 (t, CH 2 = CHCOOCH 2 CH 2 OPEG, 4H), 5
. 856.45(m,CH 2 =CHCOOPEG)。 856.45 (m, CH 2 = CHCOOPEG ).

実施例11 BzOPEGOHとHOPEGOHとの混合物由来のHOPEGOHを含まないCH 3 OPEGOHの調製法反応: Example 11 CH 3 OPEGOH preparation of the reaction mixture does not contain HOPEGOH from the BzOPEGOH and HOPEGOH:
BzOPEGOCH 3 +CH 3 OPEGOCH 3の別の合成 Another synthesis of BzOPEGOCH 3 + CH 3 OPEGOCH 3

いずれかの経路由来の生成物が水素化分解される。 The product from either path can be hydrocracked.

a) BzOPEGOMsの調製:6重量%のHOPEGOHを含むBzOPEGOH( a) BzOPEGOMs Preparation of 6 wt% of BzOPEGOH including HOPEGOH (
MW=5000,50g、10mmoles)をトルエンに溶解し、溶液を窒素下で2時間共沸乾燥し、室温に冷却した。 MW = 5000,50g, 10mmoles) was dissolved in toluene, the solution was 2 hours azeotropically dried under nitrogen and cooled to room temperature. この溶液に50mlの無水塩化メチレンおよび2.1m Anhydrous methylene chloride 50ml the solution and 2.1m
lの無水トリエチルアミン(15mmoles)を添加した。 l anhydrous triethylamine in a (15mmoles) was added. 得られた溶液を氷浴中で冷却し、1.2mlのメシルクロリド(15mmoles)を滴下した。 The resulting solution was cooled in an ice bath, it was added dropwise mesyl chloride (15mmoles) of 1.2 ml. 次いで、溶液を室温で一晩撹拌し、2mlの無水エタノールの添加によって反応を停止させた。 The solution was then stirred at room temperature overnight, the reaction was quenched by the addition of absolute ethanol 2 ml. 混合物を減圧濃縮して100mlの溶媒を除去し、濾過し、800mlの冷エーテルに添加した。 The mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent 100 ml, filtered and added to a cold ether 800 ml. 沈殿した生成物を濾過によって回収し、減圧乾燥した。 The precipitated product was collected by filtration and dried under vacuum. 収量48.3g(96.6%)。 The yield 48.3g (96.6%). 1 1
H nmr(DMSOd6):( 3.5(br m,PEG),4.31(t,OCH 2 CH H nmr (DMSOd6) :( 3.5 ( br m, PEG), 4.31 (t, OCH 2 CH
2 OMs),4.49(s,C 65 CH 2 OPEG),7.33(s+complex m 2 OMs), 4.49 (s, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + complex m
ult. ult. ,C 65 CH 2 OPEG)。 , C 6 H 5 CH 2 OPEG ).

b) MsOPEGOCH 3の調製:6重量%のMsOPEGOMs(MW=5078,4 b) MsOPEGOCH 3 Preparation: 6 wt% of MsOPEGOMs (MW = 5078,4
5g、8.86mmoles)を含むBzOPEGOMsの250mlのトルエン溶液を2時間共沸乾燥した。 5g, 8.86mmoles) was 2 hours azeotropically dried toluene solution of 250ml of BzOPEGOMs including. 得られた溶液に25重量%のナトリウムメトキシド(11.5g、 The resulting solution to 25 wt% sodium methoxide (11.5 g,
53.2mmoles,6倍過剰)のメタノール溶液を添加し、得られた溶液を窒素下、 53.2Mmoles, was added a methanol solution of 6-fold excess) under nitrogen the resulting solution,
120〜122℃で20時間加熱した。 It was heated for 20 hours at 120 to 122 ° C.. 次いで、得られた溶液を室温に冷却し、2mlの水を添加し、混合物を15分間撹拌した。 The resulting solution was then cooled to room temperature, water was added 2 ml, and the mixture was stirred for 15 min. 次いで、混合物を減圧濃縮して100mlの溶媒を除去し、濾過し、700mlの冷エーテルに濾過物を添加した。 The mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent 100 ml, filtered and added the filtrate into cold ether 700 ml. 沈殿した生成物を濾過によって回収し、減圧乾燥した。 The precipitated product was collected by filtration and dried under vacuum. 収量:42.8g。 Yield: 42.8g. 1H nmr(DMSOd6):( 1H nmr (DMSOd6) :(
3.24(s,PEG),3.51(br.mult.,PEG),4.49(s,C 6 3.24 (s, PEG), 3.51 (br.mult., PEG), 4.49 (s, C 6
5 CH 2 OPEG),7.33(s+comp.mult.,C 65 CH 2 OPEG)。 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + comp.mult., C 6 H 5 CH 2 OPEG).

c) BzOPEGOHからのBzOPEGOCH 3の調製:6重量%のHOPEGOH( c) Preparation of BzOPEGOCH 3 from BzOPEGOH: 6 wt% of HOPEGOH (
MW=10,000,50g、5.0moles)を含むBzOPEGOHの250ml MW = 10,000,50g, 250ml of BzOPEGOH, including 5.0moles)
のトルエン溶液を窒素下で2時間共沸し、溶液を室温に冷却した。 Of a toluene solution for 2 hours azeotropically distilled under nitrogen, the solution was cooled to room temperature. カリウムtert−ブトキシド(1.0Mのtert−ブタノール溶液、25ml、25mmole)を添加し、混合物を15分間撹拌した。 It was added (tert- butanol solution of 1.0M, 25ml, 25mmole) of potassium tert- butoxide and the mixture was stirred for 15 min. 次いで、ヨウ化メチル(7.1g、50mmole)を添加し、混合物を暗所で室温の窒素下で20時間撹拌した。 Then added methyl iodide (7.1 g, 50 mmole), the mixture was stirred for 20 hours at room temperature under nitrogen in the dark. 溶媒を減圧下で除去し、残渣を100mlの塩化メチレンに溶解し、800mlの冷エーテルに添加した。 The solvent was removed under reduced pressure and the residue was dissolved in 100ml of methylene chloride was added to a cold ether 800 ml. 沈殿した生成物を濾過によって回収し、減圧乾燥した。 The precipitated product was collected by filtration and dried under vacuum. 収量:46.8g。 Yield: 46.8g. 1H nmr(DMSOd6 1H nmr (DMSOd6
):( 3.24(s,CH 3 OPEG),3.51(br.mult.,PEG),4. ) :( 3.24 (s, CH 3 OPEG), 3.51 (br.mult., PEG), 4.
49(s,C 65 CH 2 OPEG),7.33(s+comp.mult.,C 65 CH 2 49 (s, C 6 H 5 CH 2 OPEG), 7.33 (s + comp.mult., C 6 H 5 CH 2
OPEG)。 OPEG).

d) HOPEGOHを含まないCH 3 OPEGOHの調製:6重量%のCH 3 OPEGO CH 3 OPEGOH preparation containing no d) HOPEGOH: 6 wt% of CH 3 OPEGO
CH 3 (40g、MW=10,000,mmoles)を含むBzOPEGOCH 3を40 CH 3 (40g, MW = 10,000 , mmoles) of BzOPEGOCH 3 containing 40
0mlのエタノールに溶解し、4gの活性炭担持Pd触媒(10%Pd)を添加した。 Was dissolved in ethanol 0 ml, was added 4g of activated carbon supported Pd catalyst (10% Pd). 混合物を室温で水素化分解した(800psi)。 The mixture was hydrogenolyzed at room temperature (800 psi). 次いで、混合物を濾過し、減圧下で溶媒を除去した。 The mixture was then filtered, and the solvent was removed under reduced pressure. 収量:37.1g。 Yield: 37.1g. 1H nmr(DMSOd6):((s,CH 3 OPEG) 1H nmr (DMSOd6): (( s, CH 3 OPEG)
,3.51(br.mult.,PEG),4.58(t,OH)。 , 3.51 (br.mult., PEG), 4.58 (t, OH).

本発明を特定の実施形態に記載している。 It is described in particular embodiments of the present invention. しかし、上記は本発明を例示の実施形態に限定することを意図せず、上記の明細書中に記載の本発明の範囲および目的の範囲内で変形形態を行うことができることが当業者に認識されるはずである。 However, the above is not intended to be limited to the exemplary embodiments of the present invention, recognized by those skilled in the art that it is possible to perform a variation within the scope and object of the present invention described in the specification above it should be. それに対して、本発明は、すべての変更形態、修正形態、および等価物を含み、これは、特許請求の範囲によって定義される本発明の目的および範囲内に含めることができる。 In contrast, the present invention includes all changes, modifications, and includes equivalents, which may be included within the purpose and scope of the invention as defined by the appended claims.

Claims (3)

  1. Ar−C(R 1 )(R 2 )O−PEG−OHとHO−PEG−OHの混合物中のHO−PEG−OHの反応性を阻害する方法であって、ここでPEGは、−CH 2 CH 2 O(CH 2 CH 2 O) n' −CH 2 CH 2 −であり、ここでのn'は8から4000であり、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択された部分を示し、ここでのR 1およびR 2は、H、アルキルまたは上記に定義したArであり、 A Ar-C (R 1) ( R 2) O-PEG-OH and HO-PEG-OH method of inhibiting the reactivity of HO-PEG-OH in a mixture of, where PEG is, -CH 2 CH 2 O (CH 2 CH 2 O) n '-CH 2 CH 2 - and is, where the n' is 4000 from 8, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, polycyclic aryl , substituted polycyclic aryl, and shows the selected portion from the group consisting of heterocyclic aryl, R 1 and R 2 here is the Ar defined H, alkyl or above,
    前記混合物中のAr−C(R 1 )(R 2 )O−PEG−OHおよびHO−PEG−OHをアルキル化またはアリール化して、Ar−C(R 1 )(R 2 )O−PEG−OR 9およびR 9 O−PEG−OR 9をそれぞれ形成する工程と、 The mixed of products Ar-C (R 1) ( R 2) a O-PEG-OH and HO-PEG-OH with an alkylating or arylating, Ar-C (R 1) (R 2) O-PEG-OR 9 and R 9 O-PEG-oR 9 and forming respectively,
    Ar−C(R 1 )(R 2 )O−部分を、−OHに、酸触媒加水分解または水素化分解により変換する工程と、 The Ar-C (R 1) ( R 2) O- moiety, a -OH, a step of converting the acid-catalyzed hydrolysis or hydrogenolysis,
    9 O―PEG−OHと不活性であるR 9 O−PEG−OR 9の新しい混合物(R 9は、それぞれアルキル基またはArを表し、Arは、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、多環式アリール、置換多環式アリール、およびヘテロ環式アリールからなる群から選択される)を形成する工程とを含むことを特徴とする方法。 R 9 O-PEG-OH and the new mixture of R 9 O-PEG-OR 9 which is inert (R 9 each represent an alkyl group or Ar, Ar is phenyl, substituted phenyl, biphenyl, substituted biphenyl, multi bicyclic aryl, a method which comprises a step of forming a substituted polycyclic aryl and is selected from the group consisting of heterocyclic aryl).
  2. 前記新しい混合物中のR 9 O−PEG−OHをR 9 O−PEG−CHOに変換することをさらに含む、請求項1に記載の方法。 Further comprising the method of claim 1, to convert the R 9 O-PEG-OH of the new mixture to R 9 O-PEG-CHO.
  3. 9 の各々が、メチル基である請求項1に記載の方法。 Each R 9 A method according to claim 1 is a methyl group.
JP2012071638A 2012-03-27 2012-03-27 Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation Active JP5953459B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012071638A JP5953459B2 (en) 2012-03-27 2012-03-27 Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012071638A JP5953459B2 (en) 2012-03-27 2012-03-27 Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008033703 Division 2008-02-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2012158759A true JP2012158759A (en) 2012-08-23
JP5953459B2 true JP5953459B2 (en) 2016-07-20

Family

ID=46839541

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2012071638A Active JP5953459B2 (en) 2012-03-27 2012-03-27 Heterobifunctional polyethylene glycol derivatives and methods for their preparation

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP5953459B2 (en)

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6337818B2 (en) * 1981-09-21 1988-07-27 Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Kk
JPS6337819B2 (en) * 1981-09-24 1988-07-27 Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Kk
JPS6362525B2 (en) * 1983-07-26 1988-12-02
JPH0468023A (en) * 1990-07-09 1992-03-03 Sanyo Chem Ind Ltd Polyalkylene glycol ether composition and its production
JP3465307B2 (en) * 1993-08-05 2003-11-10 日本油脂株式会社 Polyalkylene oxide derivatives and a method for producing
JP3508207B2 (en) * 1994-05-30 2004-03-22 日本油脂株式会社 Method for producing a polyoxyalkylene derivative
JP3508234B2 (en) * 1994-09-22 2004-03-22 日本油脂株式会社 Method for producing a polyoxyalkylene derivative
US20020064546A1 (en) * 1996-09-13 2002-05-30 J. Milton Harris Degradable poly(ethylene glycol) hydrogels with controlled half-life and precursors therefor
JP3855344B2 (en) * 1997-02-19 2006-12-06 日本油脂株式会社 Method for producing a polyoxyalkylene carboxylic acid
JP3131572B2 (en) * 1997-03-17 2001-02-05 旭電化工業株式会社 Organic gas absorbent
JP3143076B2 (en) * 1997-05-06 2001-03-07 日本ペイント株式会社 Aluminum material brazing flux composition
US6046305A (en) * 1997-12-12 2000-04-04 Macromed, Inc. Heterofunctionalized star-shaped poly(ethylene gycols) for protein modification
US6187335B1 (en) * 1997-12-31 2001-02-13 Orasomal Technologies, Inc. Polymerizable fatty acids, phospholipids and polymerized liposomes therefrom
WO1999034833A9 (en) * 1998-01-07 2005-03-17 Shearwater Polymers Inc Degradable heterobifunctional poly(ethylene glycol) acrylates and gels and conjugates derived therefrom
JP2000300994A (en) * 1999-04-16 2000-10-31 Nippon Shokubai Co Ltd Catalyst for manufacturing alkylene glycol monoalkyl ether and its method of use

Also Published As

Publication number Publication date Type
JP2012158759A (en) 2012-08-23 application

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5965566A (en) High molecular weight polymer-based prodrugs
Jaeger et al. Branched and linear poly (ethylene imine)-based conjugates: synthetic modification, characterization, and application
US5919455A (en) Non-antigenic branched polymer conjugates
US5681567A (en) Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
US20020182172A1 (en) Water-soluble polymer conjugates of triazine derivatives
US6348558B1 (en) Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
US7405266B2 (en) Sterically hindered poly(ethylene glycol) alkanoic acids and derivatives thereof
US6774180B2 (en) Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
US7259224B2 (en) Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
Yang et al. Penicillin V-conjugated PEG-PAMAM star polymers
US20050085619A1 (en) Polymer derivatives
Schiavon et al. PEG–Ara-C conjugates for controlled release
US8454946B2 (en) N-maleimidyl polymer derivatives
US6461603B2 (en) Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid
WO1998007713A1 (en) High molecular weight polymer-based prodrugs
WO1996023794A1 (en) High molecular weight polymer-based prodrugs
WO2007003054A1 (en) Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
US5990237A (en) Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
WO2004022603A1 (en) Hyaluronic acid derivatives and processes for preparing the same
WO1995011924A1 (en) Non-antigenic branched polymer conjugates
US7048925B2 (en) Acid-sensitive polyacetals and methods
WO2003049699A2 (en) Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes
US6624246B2 (en) Method for the preparation of 1-benzotriazolyl carbonate esters of poly(ethylene glycol)
US6492560B2 (en) Discrete-length polyethylene glycols
JPH06206815A (en) Pharmaceutical preparation consisting of complex of block copolymer and antitumor agent

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20130130

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20130618

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20130806

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20130806

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20130906

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20131206

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20131211

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20140106

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20140109

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20140203

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20140206

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20140305

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20140425

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20140722

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20140725

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20150428

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20150727

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20151028

A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20151218

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20151228

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20160115

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160427

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5953459

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20160630

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20160704

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20160630

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D04