JP5626854B2 - エタノールの生産方法 - Google Patents
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Description
本発明において、藻類とは、酸素発生型光合成を行う下等な生物をいう。本発明で用いる藻類は特に限定されない。藻類としては、例えば、真正細菌である藍藻(シアノバクテリア)、真核生物で単細胞生物である珪藻、黄緑藻、渦鞭毛藻など、多細胞生物である紅藻、褐藻、緑藻などが挙げられる。好ましくは、藍藻が用いられる。
本発明において、グルコアミラーゼとは、デンプンの非還元末端からグルコース単位を切り離していくエキソ型の加水分解酵素をいう。このような活性を有していれば、その起源は限定されないが、リゾプス属(Rhizopus)およびアスペルギルス属(Aspergillus)などのカビ由来のグルコアミラーゼが好ましい。例えば、リゾプス・オリザエ(Rhizopus oryzae)由来のグルコアミラーゼが好適に用いられる。
本発明のエタノールの生産方法は、藻類を含む培地を用い、グルコアミラーゼおよびα−アミラーゼを発現する形質転換酵母を培養する工程を含む。培地は、藻類を含む限り、特に限定されない。好ましくは、藻類を実質的に唯一の炭素源として含む培地を用いる。ここで、「藻類を実質的に唯一の炭素源として含む培地」とは、培地中に藻類が存在しない条件下では酵母が増殖できない程度に藻類以外の炭素源が存在しない培地をいう。藻類は窒素源ともなり得る。培地中の藻類の初期濃度は、通常40〜150乾燥重量/L、好ましくは50〜100乾燥重量/Lである。培地のpHは、好ましくは約4〜約6、最も好ましくは約5である。他の培養条件は、当業者により適宜決定され得る。好気的培養時の培地中の溶存酸素濃度は、好ましくは約0.5〜約6ppm、より好ましくは約1〜約4ppm、最も好ましくは約2ppmである。培養温度は、約20〜約45℃、好ましくは約25〜約35℃、最も好ましくは約30℃である。酵母菌体量が10g(湿潤量)/L以上、好ましくは25g(湿潤量)/L以上、より好ましくは37.5g(湿潤量)/L以上になるまで培養することが好ましく、培養時間は約20〜約50時間程度である。形質転換酵母は、発酵に供する前に好気的条件下で培養することにより、その菌体量を増加させ得る。
スピルリナ錠剤(井藤漢方製薬株式会社製スピルリナ100)を、粉砕機(大阪ケミカル株式会社製ワンダーブレンダー)を用いて粉末化した。
注入口:230℃、スプリット比:1/10
注入量:1μL
カラム:DB−FFAP(Agilent technologies社製;内径0.25mm、長さ60m、膜厚0.50μm)
キャリアガス:ヘリウムガス
流速:1mL/分
オーブン:40℃(1分間)→(9分間)→170℃→(40分間)→230℃
インターフェース:230℃
イオン源:250℃
検出器電圧:0.95kv
検出範囲:m/z20−150
スピルリナ・プラテンシス(Spirulina platensis;独立行政法人国立環境研究所より入手)をSOT培地(T. OgawaおよびG. Terui、J. Ferment. Technol.、1970年、第48巻、pp.361-367)8Lに、20g/Lの濃度で接種し、25℃にて5L/分の通気速度および50μmol・photon・m−2s−1の光強度の明期16時間と暗期8時間との明暗周期で10日間培養した。培養開始10日目の培養液をナイロンフィルター(Millipore社製:孔径30μm)で濾過し、スピルリナを回収した。回収したスピルリナを2Lのイオン交換水で洗浄した後、液体窒素で凍結させ、次いで凍結乾燥機(LABCONCO社製Freezone2.5plus)による処理に36時間供した。得られた凍結乾燥物を乳鉢により磨砕し、培養スピルリナ破砕物を得た。
粉末化スピルリナ錠剤の代わりに実施例2で得られた培養スピルリナ破砕物を用い、酵母およびスピルリナの最終濃度がそれぞれ50g乾燥重量/Lおよび48g乾燥重量/Lになるように調整した以外は、実施例1と同様にして、発酵を開始し、培地中に生産されたエタノールを経時的に定量した。結果を図2に示す。
Claims (6)
- エタノールの生産方法であって、
グルコアミラーゼおよびα−アミラーゼを発現するように形質転換された酵母を、実質的に唯一の炭素源として藍藻を含む培地中で培養する工程
を含む、方法。 - エタノールの生産方法であって、
グルコアミラーゼおよびα−アミラーゼを発現するように形質転換された酵母を、藍藻乾燥物を添加した培地中で培養する工程
を含む、方法。 - 前記藍藻乾燥物が、実質的に唯一の炭素源である、請求項2に記載の方法。
- 前記グルコアミラーゼが前記酵母の細胞表層に提示され、かつ前記α−アミラーゼが前記酵母から分泌される、請求項1から3のいずれかの項に記載の方法。
- 前記藍藻がスピルリナ属に属する、請求項1から4のいずれかの項に記載の方法。
- 前記藍藻が破砕物の形態である、請求項1から5のいずれかの項に記載の方法。
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