JP5229854B2 - 動脈硬化症の予防または改善剤 - Google Patents

Description

本発明は、動脈硬化症の予防、改善剤に関する。

１，５−Ｄ−アンヒドロフルクトース（以下、１，５−ＡＦという）は、ある種の子嚢菌や紅藻由来の酵素であるα−１，４−グルカンリアーゼを澱粉などのα−１,４−グルカンに作用させることで酵素的に生合成することができる。
１,５−Ｄ−アンヒドログルシトール（以下、１，５−ＡＧという）は１，５−ＡＦが還元された構造であり、生体内では大腸菌や哺乳類に存在するＮＡＤＰＨ依存の還元酵素が１，５−ＡＦを還元し生じること、また、１，５−ＡＦをマウスに経口摂取させると生体内で還元されて１，５−ＡＧが生成することや、さらに１，５−ＡＦ誘導体であるオリゴ糖化１，５−ＡＦをマウスに経口摂取させることでも消化管内でオリゴ糖が分解されて１，５−ＡＦが生じ、それが消化管より吸収されて１，５−ＡＧが生成することも報告されている（ブランド・ニッポン加工食品供給促進等技術開発事業における公開成果発表会 Ｈ１７／３／１１）。これらのことから１，５−ＡＦや１，５−ＡＦ誘導体を経口投与することで、生体内で１，５−ＡＧを生合成させることができる。１，５−ＡＧは化学的には１，５−ＡＦに金属触媒存在下で水素添加し還元することで合成できることが報告されている（非特許文献１）。１，５−ＡＧの生理機能性についての報告は少ないが、
膵臓ランゲルハンス島β細胞からのインシュリン分泌量を増強させる作用を有することが報告されている（非特許文献２）。

脂肪組織から分泌される生理活性物質はアディポサイトカインと総称され、肥満、特に内臓脂肪型肥満におけるアディポサイトカインの機能と産生調節の破綻がメタボリックシンドロームの発症・進展に大きく関与すると考えられている。アディポサイトカインの中でもアディポネクチンは、血管内で動脈硬化を引き起こす炎症など、さまざまな細胞現象を抑える働きがあることが明らかになってきている。アディポネクチンは糖尿病とのかかわりも確認されており、糖尿病になるとアディポネクチンの血中濃度が下がり、アディポネクチンの濃度が上がると血糖値を下げる。これはインシュリン感受性が高まるためと推測されている。このようにアディポネクチンの濃度が高まることで動脈硬化の予防や糖尿病の予防・改善効果あるいは抗肥満効果が期待できるため、近年アディポネクチンの産生量を増やす物質の探索が盛んに行われており、発酵茶抽出物を有効成分とする組成剤（特許文献１）、大豆サポニン（特許文献２）、米糠抽出物（特許文献３）などがアディポネクチンの産生増強剤として提案されている。
特開２００４−３１５３７９ 特開２００６−１４３６０９ 特開２００５−６８１３２ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３７（２００２）８７３−８９０ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １６２３（２００３）８２−８７

本発明の目的は、血中のアディポネクチン濃度の上昇により、動脈硬化症の予防または改善効果が期待できしかも哺乳動物に対する副作用のない安全で且つ優れたアディポネクチン産生増強作用を利用した動脈硬化症の予防、改善剤を提供することにある。

本発明のさらに他の目的および利点は以下の説明から明らかになろう。

本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、１，５−ＡＦおよび／または１，５−ＡＧ、好ましくはＰＰＡＲ−γアゴニストまたはＰＰＡＲ−γ内因性リガンドをさらに含有することにより、アディポネクチン産生が増強され、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症が予防または改善されることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は以下の内容を要旨とするものである。
１，５−ＡＦおよび／または１，５−ＡＧを有効成分として含有する、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症の予防または改善剤。

本発明の有効成分である１，５−ＡＦおよび／または１，５−ＡＧは安全であり、自らもしくはＰＰＡＲ−γアゴニストまたはＰＰＡＲ−γ内因性リガンドをさらに含有することにより、アディポネクチンの産生を増強し、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症を予防または改善する。

本発明の予防または改善剤は、動脈硬化の予防もしくは改善を目的として使用することが可能である。
本発明の予防または改善剤は、それ自体公知の種々の方法でその剤型に応じて投与することが可能であり、投与量、投与部位、投与する間隔、期間等は、患者の年齢や体重、病状あるいは他の薬剤や治療法と併用した場合などを考慮して決定することができる。投与方法としては、例えば、経口投与、あるいは注射や点滴などの方法によって静脈内や皮下、腹腔内など直接体内に投与する方法や外用とすることができ、特別に制限されない。

本発明における剤の投与量は、その剤型、投与方法、あるいは予防もしくは治療しようとする症状により異なるが、例えば、体重１ｋｇ当りの投与量として１，５−ＡＦおよび／または１，５−ＡＧで０．１μｇ〜１，０００ｍｇ、好ましくは、１ｍｇ〜１，０００ｍｇとすることができ、１日１回あるいは数回、あるいは数日毎に１回というような、適当な投与頻度によって投与することが可能である。
本発明の予防または改善剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、注射剤等が挙げられるが、特に制限されない。また、製剤を調製するうえで必要な成分、例えば、製剤担体や賦形剤、安定剤等を含有することもできる。

さらに、本発明の効果を奏する限り、他の抗動脈硬化剤、抗糖尿病薬あるいはその他の薬理成分あるいはブドウ糖などの栄養成分を含むことも可能である。
また、本発明の予防または改善剤の利用は医薬品用途に限られるものではなく、医薬部外品、食品、飲料等に配合することも可能である。例えば、１，５−ＡＦおよび／または１，５−ＡＧを食品に添加して、動脈硬化症の治療を目的とした機能性食品のような形態をとることもできる。
本発明の予防または改善剤は、人間以外の哺乳動物にも投与することができる。すなわち、その場合、哺乳動物に対し、予防または改善剤を適量投与することによって、動脈硬化の予防や治療を行うことができる。

以下、実施例により本発明をさらに詳述する。本発明はかかる実施例により何ら制限されるものではない。

実施例１
インスリンの標的とされる脂肪細胞前駆細胞として、１０Ｔ１／２および３Ｔ３−Ｌ１を用いた。既知の脂肪細胞分化誘導能評価系を用い、ｏｉｌ−ｒｅｄ−０染色法、培養上清へのアディポネクチン分泌能について検討した。具体的な方法を下記に示す。
３Ｔ３−Ｌ１もしくは１０Ｔ１／２細胞を２４ｗｅｌｌ１のプレートに播種し（１×１０^４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）し、コンフルエント（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）になるまで３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した｛培地：胎児血清（以後ＦＢＳという）１０％とペニシリン・ストレプトマイシン２％を含むＤ-ＭＥＭ（Ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ）｝。細胞がコンフルエントになった時点で、上澄を除去し脂肪細胞分化誘導媒地（Ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａ） ｛ＩＢＭＸ ０．５ｍＭ、Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ １μＭ、 ＦＢＳ１０％とペニシリン・ストレプトマイシン２％を含むＤ-ＭＥＭ（Ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ）培地｝を５００μｌ加え、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で４８時間以上培養した。培養後、上澄を除去し、１，５−ＡＧならびにチアゾリチン誘導体（薬名：ピオグリタゾン）を所定の量含む脂肪細胞分化促進媒地（Ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ Ｍｅｄｉａ）｛インスリン１０μｇ／ｍｌ、ＦＢＳ１０％とペニシリン・ストレプトマイシン２％を含むＤ-ＭＥＭ（Ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ）培地｝に置換し、５日間３７℃、５％ＣＯ_２ の条件下で培養し、上澄をアディポネクチン分泌能、プレートに接着した細胞をｏｉｌ−ｒｅｄ−０染色に供した。なお、細胞培養上澄中のアディポネクチン含量の測定はマウス／ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬（株）製）を用いた。

脂肪細胞分化誘導およびインスリン・グルコース刺激に応答した脂肪細胞の成熟化に対して、１，５−ＡＧは、やや促進的に作用した（図１のＡ）。さらに、本実験系において、脂肪細胞由来の抗動脈硬化性の分泌蛋白アディポネクチンを測定したところ、１，５−ＡＧには、ピオグリタゾンにより誘導される脂肪細胞からのアディポネクチン分泌を増強させる作用があることが判明した（図１のＢ）。これらの結果より、１，５−ＡＧには,それぞれ生化学的な機構・経路は未だ不明ではあるが、種々の細胞のインスリン感受性を上昇させ、エネルギー消費を増加させることに基づく抗糖尿病作用、抗動脈硬化作用を間接的に発現させ、生活習慣病に対し、予防的効果あるいは治療効果があることが明らかとなった。

実施例２
カニクイザルに１，５−ＡＦを毎日１回２週間反復経口投与したときの血清中１，５−ＡＧとアディポネクチン含量を測定した。具体的な手法を下記に示す。
馴化（投与開始前2週間）終了後のカニクイザル（年齢：３才、体重：約３ｋｇ、雄５匹）に１日１回２週間、１，５−ＡＦ溶液｛注射用水（大塚製薬（株）製）を用いて６０ｍｇ／ｋｇとした｝を５ｍｌ経鼻胃内ゾンデを用いて、胃内に強制投与した｛投与量：３００ｍｇ／ｋｇ／日｝。採血は馴化期間中の投与４日前と投与後６日目の２回行い、得られた血清を１，５−ＡＧとアディポネクチン含量の測定に供した。なお、１，５−ＡＧとアディポネクチンの測定はそれぞれ動物用１，５−ＡＧキット（日本化薬（株）製）とヒトアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬（株）製）を用いた。
血清中の１，５−ＡＧ含量は、投与前が１．１４±０．８ μｇ／ｍｌ、投与後は２９．５２±１６．２μｇ／ｍｌであり、１，５−ＡＦによって有意に増加していることがわかる（図２のＡ）。すなわち、１，５−ＡＦは生体内で速やかに１，５−ＡＧに代謝されたことを示している。一方、血清中のアディポネクチンの値は、１，５−ＡＦ投与により一例を除いて増加した（図２のＢ）。これらのことから、１，５−ＡＦは生体内で１，５−ＡＧを介してアディポネクチン産生を促進することが示唆された。

脂肪細胞分化誘導における１，５−ＡＧのアディポネクチン産生増強効果 １，５−ＡＦ投与前後の血清中の１，５−ＡＧ含量（Ａ）とアディポネクチン含量（Ｂ）との関係

Claims (1)

1. １，５−Ｄ−アンヒドロフルクトースおよび／または１，５−Ｄ−アンヒドログルシトールを有効成分として含有することを特徴とする、アディポネクチン分泌不全に起因する動脈硬化症の予防または改善剤。

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