JP5207290B2 - クロマトストリップの作製方法、及びラテラルフロー型のクロマトストリップ - Google Patents
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Description
制御ラインの形成による効果を確認するための予備実験として、金コロイド溶液を用いて制御ラインが金コロイドの固相化に及ぼす影響を調べた。実験に際しては、メンブレン(クロマトストリップ)に2%カゼイン溶液を塗布して制御ラインを形成し、平均粒径20nmの金コロイドを含む金コロイド溶液1μLを滴下し、経時変化を観察した。結果を図5に示す。
本実験では、イムノクロマトアッセイを行い、制御ラインの有無による生体材料(抗原)の局在化の相違が発色バンドに及ぼす影響について調べた。図6は、本実験におけるイムノクロマトアッセイの概念図である。本実験では、メンブレン31に抗原32を固相化しておき、金コロイド33で抗体34を標識した金コロイド標識抗体35を泳動させた。そして、抗原が固相化された部分における発色のバンドの吸光度を測定した。
制御材料として10%ウシ血清アルブミン溶液、エタノールを用い、これら溶液を塗布することにより制御ラインを形成した後、抗原溶液を滴下し、メンブレンに固相化してストリップを得た。これらのストリップを用い、金コロイド標識抗体の濃度を変えた時の吸光度ピークの高さを測定した。なお、比較のため、従来法で作製したストリップについても同様の測定を行った。結果を図8に示す。
アルドステロンのイムノクロマトアッセイにおいて、カゼインによる制御ラインの有無による相違を調べた。制御ライン有りのメンブレンの作製は、次のようにして行った。先ず、メンブレンに2%カゼイン溶液をライン状に塗布し、乾燥した。次に、抗原であるアルドステロンを1mg/mLの濃度で前記メンブレンに塗布し、乾燥した。0.5%カゼイン溶液でブロッキング、洗浄後、乾燥した。制御ライン無しのメンブレンの作製は、2%カゼイン溶液をライン状に塗布することを行わず、他は同様の方法で行った。
Claims (5)
- 標識抗体で標識された被検物質を捕捉する抗原または抗体としての生体材料が所定の位置に固相化されているクロマトストリップの作製方法であって、制御材料が含有された制御材料含有溶液を前記クロマトストリップ上に塗布することによって前記生体材料含有溶液の毛管現象による拡散を防ぐための制御ラインを形成し、そして、前記生体材料含有溶液を前記制御ラインの近傍に滴下することによって前記生体材料を前記制御ラインに沿って局在化させて、固相化させ、固相化させた後、前記制御材料を洗い流すか揮発させることを特徴とするクロマトストリップの作製方法。
- 前記制御材料として、カゼイン、ウシ血清アルブミン、エタノールのうちいずれか1種を用いることを特徴とする請求項1記載のクロマトストリップの作製方法。
- 前記制御材料含有溶液として、濃度が5〜10質量/質量%のウシ血清アルブミン溶液を用いることを特徴とする請求項1または2記載のクロマトストリップの作製方法。
- 前記制御材料含有溶液として、濃度が1〜2質量/質量%のカゼイン溶液を用いることを特徴とする請求項1または2記載のクロマトストリップの作製方法。
- 請求項1から4のいずれか一項記載のクロマトストリップの作製方法によって作製されたラテラルフロー型のクロマトストリップ。
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