JP4392065B2

JP4392065B2 - 腫瘍および炎症性疾患治療用の新規プロドラッグ

Info

Publication number: JP4392065B2
Application number: JP05598397A
Authority: JP
Inventors: クラウス・ボスレツト; イエルク・チエツク; マンフレート・ゲルケン; ライナー・シユトラウプ; クロード・モネレ; ジヤン−クロード・フロラン; フレデリツク・シユミツト
Original assignee: サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング
Priority date: 1996-03-12
Filing date: 1997-03-11
Publication date: 2009-12-24
Anticipated expiration: 2017-03-11
Also published as: ES2257756T3; TR199700178A2; AU708202B2; SI0795334T1; KR970065550A; RU2191021C2; CA2199664A1; EP0795334B1; PL318878A1; EP0795334A3; CA2199664C; BRPI9701248B1; NO320322B1; ATE316799T1; DK0795334T3; CZ74297A3; MX9701832A; US5935995A; HUP9700579A2; BG61900B1

Description

【０００１】
薬物（ドラッグ）の作用は、ある種の疾患において病理学的に過発現される酵素、サイトカインまたは他のファクターの疾患促進活性を抑制することにあることが極めて多い。しかし、ドラッグのこの抑制作用は患部組織中の薬理学的標的構造（酵素、サイトカイン、ファクター）に達するのみならず、さらにまた健康組織に存在する活性をも抑制する。これにより、多くのドラッグについて観察される望ましくない副作用が生起する。ドラッグの副作用を軽減するために、患部組織中にドラッグをより選択的に放出しうる実験系が開発された。このタイプの系を以下に簡単に述べる。
【０００２】
ＡＤＥＰＴ系（抗体指向性酵素プロドラッグ治療、Begshawe 1987, Br. J. Cancer 56：531〜532)は２段階系であり、第１段階では抗体−酵素複合体（ＡＥＣ）が静脈内注射される。ＡＥＣはその腫瘍選択性のために腫瘍内に保持されるが、しかし健康な組織からは２〜７日中に排出される。第２段階で静脈内注射されたプロドラッグ（無毒性ドラッグプレカーサ）が腫瘍内でＡＥＣの酵素活性により活性化されると有毒なドラッグになる。この腫瘍特異性プロドラッグ活性化の結果として、標準的治療と比べた場合に増加したドラッグ濃度（５〜５０倍）が腫瘍内に、そして低下したドラッグ濃度が健康な組織内に観察される。このことはヒト腫瘍異種移植片モデル（Sharma, S. K. et al. 1991, Disease Markers 9：225〜231)においてより優れた許容性およびより優れた治療効果をもたらす。
【０００３】
ＦＭＰＡ概念（融合タンパク質媒介プロドラッグ活性化）はＡＤＥＰＴ系と同様に作用し、そこでは異種間のかつそれ故に免疫原性ＡＥＣの代りに非免疫原性ヒト融合タンパク質が腫瘍選択性プロドラッグ活性化に用いられる（Bosslet et al. 1994, Cancer Res. 54：2151〜2159）。
【０００４】
ＶＤＥＰＴ系（ベクター依存性酵素プロドラッグ治療、Trinh et al. Cancer Res. 55：4808〜4812)では、２段階組み換えＤＮＡ混合物のプロドラッグもまた、ベクターを注入しそして酵素をコードする構造遺伝子を発現させた後に腫瘍選択的手法で活性化される。
【０００５】
強力な抗腫瘍および抗炎症性の薬理効果に関連した壊死性腫瘍および炎症性作用におけるプロドラッグ（グルクロニル−スペーサー−アントラサイクリン、Jacquessy et al. 1991, WO 92/19639）の内因性活性化は、初めてＰＭＴ（プロドラッグ単一治療）としてBosslet et al. 1994, Cancer Res. 54：2151〜2159および1995, Tumor Targeting 1, 45〜50に記載された。このＰＭＴ系の薬理作用においては、自己排除性スペーサーの化学的性質とドラッグ成分の親水性およびモル細胞障害性との両者が生体内効能に非常に重要であるということが分かっている。ＰＭＴでのさらに進んだ効能増加は壊死を惹起させる物質との併用で観察された（ＥＰ０６９６４５６Ａ２参照）。特に、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体複合体に対する特異性を有しかつ凝固性タンパク質例えば切形の組織ファクターと共有結合した抗体複合体の使用は、薬理学的な生体内モデルにおいて適当なプロドラッグと併用した場合に特に良好な活性を示す。
【０００６】
意外なことに、本発明者等は今や、適当な内因性酵素活性化の後に、ＥＰ０５１１９１７Ａ１およびＥＰ０５９５１３３Ａ２に記載されたプロドラッグよりも遥かに有意に高い生体内活性を有するプロドラッグの合成に成功した。この優れた活性は一方ではスペーサーの新規かつ有利な化学的性質により決定されるが、しかし他方ではまた使用するドラッグ成分の高いモル細胞障害性によっても決定される。このスペーサーの新規で有利な化学的性質は、１個のヒドロキシル基を介してスペーサーに結合している活性化合物に関して特に、酵素によるグリコシル開裂後の活性化合物の放出がスペーサーの環化および排除によってなされる点に特徴がある。このことは同時に酵素による良好な開裂性も兼ね備えたプロドラッグの改善された安定性が獲得されることを意味する。本発明によるプロドラッグは活性化合物をさほど迅速に放出しないので、生理学的条件の下では知られたプロドラッグよりもさらに安定性が高い。
【０００７】
本発明は式Ｉ
グリコシル-Y〔-C(=Y)-X-〕_p-W(R)_n-Z-C(=Y)−活性化合物 (Ｉ)
〔式中、
グリコシルは酵素により開裂されうる多糖、オリゴ糖または単糖であり、
Ｗは1) ５−〜１４−員芳香族基、
2) ナフチル、
3) インデニル、
4) アンスリル、
5) フェナンスリル、
6) 酸素、窒素および硫黄からなる群より選択される１、２、３または４個のヘテロ原子を有する５−〜１４−員複素環式基、
7) (Ｃ₁〜Ｃ₆)−アルキル、
8) (Ｃ₂〜Ｃ₆)−アルケニル、
9) (Ｃ₃〜Ｃ₆)−シクロアルキルまたは
10) フェニルであり、
Ｒは1) 水素原子、
2) (Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキル、
3) フェニル、
4) メトキシ、
5) カルボキシル、
6) メチルオキシカルボニル、
7) −ＣＮ、
8) −ＯＨ、
9) −ＮＯ₂、
10) ハロゲン例えばフッ素、塩素または臭素、
11) スルホニル、
12) スルホンアミドまたは
13) スルホン−(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミドであり、
ｐは０または１であり、
ｎは０、１、２または３であり、
Ｘは1) 酸素原子、
2) −ＮＨ−、
3) メチレンオキシ、
4) メチレンアミノ、
5) メチレン−(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノ、
6) (Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノまたは
7) (Ｃ₃〜Ｃ₆)−シクロアルキルアミノであり、
Ｙは酸素原子または−ＮＨ−であり、
Ｚは1) (Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノ、
2) −Ｎ(ＣＨ₃)−、
3) −Ｃ(ＣＨ₃)₂−ＮＨ−、
4) −ＣＨ(ＣＨ₃)−ＮＨ−、
5) −Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｎ(Ｒ²)−（ここでＲ²は（Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルである）または
6) −ＮＨ−（但しＷが（Ｃ₁〜Ｃ₆）−アルキルである場合）であり、そして
活性化合物は酸素基、第１級もしくは第２級アミノ基またはイミノ基を介して結合された生物学的作用を有する化合物である〕で表される化合物および／またはその生理学的に許容されうる塩に関する。
【０００８】
ｎが２または３の整数である場合、基Ｒは互いに独立していて前記Ｒ1)〜Ｒ13)に記載の意味を有する。アルキルまたはアルケニルの用語は、その炭素原子が直鎖状、分枝鎖状または環状であることができ、その二重結合は数回存在することもできる基を意味するものと解される。環状アルキル基は例えば３〜６員の単環例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。「酸素、窒素および硫黄からなる群より選択される１、２、３または４個のヘテロ原子を有する５−〜１４−員複素環式基」の用語は例えばピロール、アゼピン、ピロリン、ピリジン、イミダゾール、ピリミジン、トリアジン、フラン、１,２−ジアゼピン、オキサゾール、ピラジン、イソオキサゾール、イソオキサゾリン、チアゾール、イソチアゾール、イソチアゾリン、インドール、キノリン、イソキノリン、ベンズイミダゾール、インダゾール、プリン、プテリジン、チオピランまたはチオフェンから誘導される基を意味する。
【０００９】
式Ｉの化合物の生理学的に許容しうる適当な塩は例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩例えば有機アンモニウム塩基の塩である。
【００１０】
単糖の用語はＤ−グルクロニル、Ｌ−イズロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシルまたはＬ−フコピラノシルのような基を意味するものとして解される。オリゴ糖または多糖類は前記単糖２〜２０個からなり、それらは互いにα−またはβ−Ｏ−グリコシド結合で結合している。単糖と基Ｙとの間の結合はα−またはβ−グリコシド結合である。基Ｙからのグリコシル基開裂を行う適当な酵素はイズロニダーゼ、グルコシダーゼ、ガラクシトシダーゼ、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニダーゼ、マンノシダーゼ、フコシダーゼまたはグルクロニダーゼ、好ましくはβ−グルクロニダーゼである。
【００１１】
適当な活性化合物は例えばアントラサイクリン好ましくはドキソルビシン、４′−エピドキソルビシン、４−または４′−デオキシドキソルビシンまたは好ましくは下記化合物：
エトポシド、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、テルフェナジン、テルブタリン、フェノテロール、サルブタモール、ムカンリン、オキシフェンブタゾン、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジン、メトトレキセート、ジクロフェナック、フルフェナム酸、４−メチルアミノフェナゾン、テオフィリン、ニフェジピン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、カンプトテシン、ｍ−ＡＭＳＡ、タキソール、ノコダゾール、コルヒチン、シクロホスファミド、ラケルマイシン、シスプラチン、メルファラン、ベロマイシン、ナイトロジエンマスタードガス、ホスホルアミドマスタードガス、ケルセチン、ゲニステイン、エルブスタチン、チルホスチン、ロヒツキン（rohitukin）誘導体((−)−シス−５,７−ジヒドロキシ−２−（２−クロロフェニル）−８−〔４−（３−ヒドロキシ−１−メチル）ピペリジニル〕−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；ＥＰ０３６６０６１）、レチノリック酸(retinolic acid)、酪酸、ホルボルエステル(phorbol ester)、アクラシノマイシン、プロゲステロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリストン、オナプリストン、Ｎ−（４−アミノブチル）−５−クロロ−２−ナフタレン−スルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−オン、キノリルオキサゾロン−２−オン、イソキノリルオキサゾロン−２−オン、スタウロスポリン、ベラパミル、ホルスコリン、１,９−ジデオキシホルスコリン、キニン、キニジン、レセルピン、１８−Ｏ−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンゾイル）レセルペート、ロニダミン、ブチオニンスルホキシミン、ジエチルジチオカルバメート、シクロスポリンＡ、アザチオプリン、クロラムブシル、Ｎ−（４−トリフルオロメチル）−フェニル−２−シアノ−３−ヒドロキシクロトンアミド（ＷＯ９１１７７４８）、１５−デオキシスペルグアリン、ＦＫ５０６、イソプロフェン、インドメタシン、アスピリン、スルファサラジン、ペニシリナミン、クロロキン、デキサメタソン、プレドニソロン、リドカイン、プロパフェノン、プロカイン、メフェナム酸、パラセタモール、４−アミノフェナゾン、ムスコシン、オルシプレナリン、イソプレナリン、アミロリド、ｐ−ニトロフェニルグアニジンベンゾエートまたはさらにヒドロキシル基、アミノ基またはイミノ基の１個またはそれ以上で置換されたその誘導体
からなる群より選択される化合物のような化合物である。
【００１２】
プロドラッグはそこでの活性化合物が細胞増殖抑制剤であり、抗代謝物質であるものが好ましい。すなわち活性化合物が５−フルオロウラシル、５−フルオロシチジン、５−フルオロウリジン、シトシンアラビノシドまたはメトトレキセートであるもの；活性化合物が、ＤＮＡ中に挿入する物質であるもの；活性化合物がドキソルビシン、ダウノマイシン、イダルビシン、エピルビシンまたはミトキサントロンであるもの；活性化合物がトポイソメラーゼＩおよびIIを阻害するもの；活性化合物がカンプトテシン、エトポシドまたはｍ−ＡＭＳＡであるもの；活性化合物がチューブリン阻害剤であるもの、活性化合物がビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、タキソール、ノコダゾールまたはコルヒチンであるもの；活性化合物がアルキル化剤であるもの；活性化合物がシクロホスファミド、マイトマイシンＣ、ラケルマイシン、シスプラチン、ホスホルアミドマスタードガス、メルファラン、ブレオマイシン、ナイトロジエンマスタードガスまたはＮ−ビス（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリンであるもの；活性化合物がネオカルシノスタチン、カリケアミシン、ディネミシンまたはエスペラミシンＡであるもの；活性化合物がリボソームを不活化する化合物であるもの；活性化合物がベルルカリンＡであるもの；活性化合物がチロシンホスキナーゼ阻害剤であるもの；活性化合物がケルセチン、ゲミステイン、エルブスタチン、チルホスチンまたはロヒツキン誘導体であるもの；活性化合物が分化誘導剤であるもの；活性化合物がレチノリック酸、酪酸、ホルボルエステルまたはアクラシノマイシンであるもの；活性化合物はホルモン、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストであるもの；活性化合物がプロゲステロン、ブセレリン、タモキシフェン、ミフェプリストンまたはオナプリストンであるもの；活性化合物が細胞増殖抑制剤への多面的耐性を変える物質であるもの；活性化合物がカルモデュリン阻害剤であるもの；活性化合物がタンパク質キナーゼＣ阻害剤であるもの；活性化合物がＰ−糖タンパク質阻害剤であるもの；活性化合物がミトコンドリア結合されたヘキソキナーゼのモジュレーターであるもの；活性化合物がγ−グルタミルシステインシンセターゼまたはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼの阻害剤であるもの；活性化合物が過酸化物ジスムターゼの阻害剤であるもの；活性化合物が分裂細胞の細胞核中のＭＡｂＫｉ６７により定義される増殖関連タンパク質の阻害剤であるもの；活性化合物が免疫抑制効果を奏する物質であるもの；活性化合物が標準的な免疫抑制剤であるもの；活性化合物がマクロライドであるもの；活性化合物がシクロスポリンＡ、ラパマイシン、ＦＫ５０６であるもの；活性化合物がアゾチオプリン、メトトキセート、シクロホスファミドまたはクロラムブシルであるもの；活性化合物が、抗炎症作用を有する物質であるもの；活性化合物が非ステロイド性抗炎症性物質であるもの；活性化合物が“遅作用抗リウマチ性薬”であるもの；活性化合物がステロイドであるもの；活性化合物が抗炎症性、鎮痛性または解熱性の作用を有する物質であるもの；活性化合物が有機酸の誘導体であるもの；活性化合物が非酸性鎮痛／抗炎症剤であるもの；活性化合物がオキシフェンブタゾンであるもの；活性化合物が局所麻酔剤であるもの；活性化合物が抗不整脈剤であるもの；活性化合物がＣａ⁺⁺アンタゴニストであるもの；活性化合物が抗ヒスタミン剤であるもの；活性化合物が交換神経興奮剤であるもの；または活性化合物がヒトウロキナーゼに抑制作用を有する物質であるもの、および活性化合物が前記活性化合物の誘導体であるものが好ましい。ここで活性化合物は１個の酸素基、−ＮＨ基またはイミノ基を介して式Ｉの化合物の基Ｙに結合している。
【００１３】
活性化合物はまた実施例に記載されるナイトロジエンマスタードガス化合物、キニンまたはジピリダモルであるのが好ましい。
好ましいプロドラッグは式Ｉにおいて
グリコシルが酵素により開裂されうるグルクロン酸であり、
Ｗがフェニルであり、
Ｒが水素原子、ＣＮ、ニトロ、フッ素、塩素、臭素であり、
ｐが０であり、
ｎが０、１または２の整数であり、
Ｙが酸素原子であり、
Ｚが−Ｎ(ＣＨ₃)−、−Ｃ(ＣＨ₃)₂−ＮＨ−、−ＣＨ(ＣＨ₃)−ＮＨ−、−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｎ((Ｃ₁〜Ｃ₄)アルキル）−、−ＣＨ(ＣＨ₃)−Ｎ((Ｃ₁〜Ｃ₄)アルキル）−でありそして
活性化合物が１個のヒドロキシル基、アミノ基またはイミノ基を介して結合した。生物学的作用を有する化合物である、
プロドラッグである。
【００１４】
特に好ましい化合物は下記のとおりである。
２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕−アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸、
２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−ヨードエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸。
【化２】

【００１５】
本発明はまた式Ｉのプロドラッグの製造方法にも関する。その方法は式II
グリコシル−Ｙ〔−Ｃ(＝Ｙ)−Ｘ−〕_p−Ｗ(Ｒ)_n−Ｚ (II)
（式中、グリコシル、Ｙ、Ｘ、ｐ、Ｗ、Ｒ、ｎおよびＺは式Ｉで定義した意味を有する）の化合物をアセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドおよびアセトンからなる群より選択される溶媒の存在下で、活性化カルボキシル基、アミノ基またはイミノ基を有する活性化合物と反応させ次いで保護基を加水分解的に除去することからなる。
【００１６】
活性化合物の活性化は例えばH. J. Marley, Chem. Soc. Chem. Communication(1987) pages 112〜113またはH. Hagemann Angew. Chem., 93(1981) pages 813〜814に従って実施される。保護基の除去は例えばアルカリ金属水酸化物溶液、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属シアン化物、酸化バリウム、ピペリジンまたはモルホリンをメタノール、エタノールまたは水の存在下で用いて実施される。
【００１７】
本発明はまた有効量の少なくとも１種の式Ｉ（ここでグリコシル、Ｙ、Ｘ、ｐ、Ｗ、Ｒ、ｎ、Ｚおよび活性化合物は前述の定義を有する）の化合物および／またはその生理学的に許容しうる塩を製薬的に適当でありかつ生理学的に許容しうる賦形剤、添加剤および／または他の活性化合物および補助剤とともに含有する医薬に関する。
【００１８】
薬理学的性質のために本発明化合物は、疾患の進行中に、グリコシル基を開裂させうる細胞内酵素が過発現されそして／または放出されまたは細胞破壊により利用されうるようになるような疾患全ての予防および治療に極めて適している。これらは特に癌、自己免疫疾患または炎症性、免疫学的または代謝的関連のある急性および慢性の関節炎および関節症、特に癌性疾患および慢性関節リウマチのような疾患である。
【００１９】
本発明はさらに癌性疾患、自己免疫疾患および慢性炎症性疾患例えば慢性関節リウマチの予防および治療用医薬の製造のための式Ｉの化合物の使用に関する。本発明はまた少なくとも１種の式Ｉの化合物を、製薬的に適当でありかつ生理学的に許容しうる賦形剤および適切な場合には、さらに適当な活性化合物、添加剤または補助剤を用いて適当な投与形態にすることからなる医薬の製造方法に関する。
【００２０】
適当な製剤としては例えば、その製剤中に慣用の補助剤例えば賦形剤、結合剤、膨潤剤または潤滑剤および溶解剤が使用される注射液がある。よく用いられる補助剤の例としては炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖、タルク、ラクトプロテイン、ゼラチン、デンプン、セルロースおよびその誘導体、動物性および植物性の油例えばタラ肝油、ヒマワリ油、落花生油またはゴマ油、ポリエチレングリコールおよび溶剤例えば滅菌水および１価アルコールまたは多価アルコール例えばグリセロールを挙げることができる。リポソームまたはヒトタンパク質もまた賦形剤として用いることができる。
【００２１】
医薬製剤は各投与量単位がある一定投与量の本発明による式Ｉの化合物を活性成分として含有する投与量単位で調製しかつ投与するのが好ましい。注射液の場合、約７０kg体重の成人患者に対するこの投与量は約１０ｇまでであることができ、約３ｇ〜５ｇであるのが好ましい。しかし、ある状況下ではより多いかまたはより少ない１日当たりの投与量が適切であることがある。１日当たりの投与量の投与は、個々の投与量単位あるいはまたいくつかのより少ない投与量単位の形態での単一投与並びに細分した投与量の一定間隔での多数回投与の両方により実施できる。
【００２２】
また本発明によるプロドラッグはマクロファージ、顆粒球および血小板が特に活性化状態で生ずるような非腫瘍学的疾患の全てに用いることもできる。この活性化状態において前記細胞は原則的に細胞内酵素を分泌し、それにより本発明によるプロドラッグの部位特異的活性化が可能になる。
【００２３】
腫瘍学的適応では、本発明によるプロドラッグの活性化は死にかかっている腫瘍細胞から放出される細胞内酵素により行なわれる。この現象は特により大きな腫瘍（直径０.３cm以上）の場合に起こるが、しかしまたイムノトキシン、細胞増殖抑制剤、放射線、融合タンパク質または抗体−酵素複合体により腫瘍を損傷させた後にも起こる。本発明によるプロドラッグのグリコシル部分は、それが異常病態生理学的条件下で局所的に放出される酵素からのみ除去されうるように選択されるので、脂肪親和性ドラッグは同様に標的組織中でのみ放出され、そこでその細胞障害性作用を示す。
【００２４】
１つの細胞障害性ドラッグ成分を有する本発明プロドラッグのより優れた作用は、それを別の細胞障害性ドラッグ成分を有する本発明プロドラッグと組合せることにより増加されうる。プロドラッグの組合せは相異なる作用機序を有する各細胞障害性成分を用いる本発明において有利であり、多化学療法に相当する。ＤＮＡ中に非常に有効な一本鎖および二本鎖の切断をもたらす活性化合物、例えばカリケアミシンの使用は特に適しているように思われる。しかし、特に有利なのは、一方のドラッグが細胞毒性ポテンシャルを有するが、しかし他方は多剤耐性を遮断するような本発明によるプロドラッグの組合せである。
【００２５】
本発明はさらに式Ｉの化合物および抗体−酵素複合体を含有する医薬に関する。抗体−酵素複合体は抗体断片を介して腫瘍組織または炎症組織に特異的に結合しそして式Ｉの化合物のグリコシル基を開裂させうる酵素断片を有する化合物を意味するものと解される。このような化合物の例はＥＰ０５０１２１５号、ＥＰ０３９０５３０号またはＥＰ０６２３３５２号に記載されている。
【００２６】
実施例１
ナイトロジエンマスタードガス誘導体プロドラッグ(Ｆ３７３；化合物１１）
【化３】

上記化合物は以下のようにして合成された。
この合成のための出発物質は２−アミノ−４−ニトロフェノール（化合物１）であった。化合物１を最初にヨウ化メチルでモノメチル化し（化合物２）次いでアミノ官能をＢＯＣ誘導体として保護した（化合物３）。化合物３に保護されたグルクロン酸を、その臭化物（化合物４）と化合物３とを酸化銀を用いて結合させることにより導入して化合物５を得た。ＢＯＣ保護基をＨＣｌで除去した後にアミン（化合物６）を得た。化合物７を反応させてクロロホルメート（化合物８）を得、これを化合物６と縮合させて化合物９を得た。化合物３のグルクロン酸部分をエステルを２段階（ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨ、次にＮａＯＨ水溶液）で開裂させた後にプロドラッグ（化合物１１）が化合物１０を経て得られた。
【００２７】
【化４】

【００２８】
化合物２
２−（Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェノール(２)
メタノール（１０ml）中に溶解した２−アミノ−４−ニトロフェノール(１)（１.５４ｇ、１０mmol）およびヨウ化メチル（１ml、１６mmol）の溶液にトリエチルアミン（２ml、１４.４mmol）を加えた。４０℃で１時間経過後に、さらにヨウ化メチル（１ml）およびトリエチルアミン（１ml）を加え、その混合物を４０℃でさらに２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮乾固し、残留物を２Ｎ酢酸ナトリウム水溶液に加えそして混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルでクロマトグラフィー処理した（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール９５／５）。収量８８０mg（５２％）。
Ｃ₇Ｈ₈Ｎ₂Ｏ₃：
計算値Ｃ：５０.０２Ｈ：４.７６Ｎ：１６.７３
実測値Ｃ：５０.００Ｈ：４.８０Ｎ：１６.６６
融点：１４８℃（トルエン）
¹H NMR（250 MHz, DMSO)：δ7.44(dd, J_ortho＝9 Hz, J _meta＝3.0 Hz, 1H), 7.13(d, J=3 Hz, 1H), 6.77(d, J=9 Hz, 1H), 2.76(s, 3H)
IR(KBr)：ν（cm^-1) 3363(OH), 1538, 1338(NO₂)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋H〕⁺：169
【００２９】
化合物３
２−（Ｎ−ＢＯＣ，Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェノール(３)
テトラヒドロフラン（５０ml）中に溶解した２−Ｎ−メチル−アミノ−４−ニトロフェノール(２)（４.１８ｇ、２４.９mmol）の溶液にジ−tert−ブチルジカルボネート（１４ｇ、６４.１５mmol）、炭酸カリウム（１７ｇ、１２３mmol）および水（５０ml）を加え、その混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で酸性化し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し次いで真空中で濃縮した。粗生成物をメタノール（１００ml）中で２時間炭酸カリウム（１７ｇ、１２３mmol）とともに撹拌し、その混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で酸性化し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥しそして真空中で濃縮した。生成物をシリカゲルでクロマトグラフィー処理した（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール９７.５／２.５）。収量６.２ｇ（９３％）。
Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₅：
計算値Ｃ：５３.７２Ｈ：６.０１Ｎ：１０.４４
実測値Ｃ：５３.６４Ｈ：６.２０Ｎ：１０.３６
融点：１９７℃（トルエン／石油エーテル）
¹H NMR（250 MHz, DMSO)：δ8.10〜8.00(2H), 7.03(d, J=8.5 Hz, 1H), 3.04(s, 3H), 1.40〜1.30(9H)
IR(KBr)：ν（cm^-1) 3129(OH), 1672(CO), 1529, 1339(NO₂)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋H〕⁺：269, 〔M＋H−C₄H₈〕⁺：213, 〔M＋H−C₄H₈OCO〕⁺：169
【００３０】
化合物５
メチル２−（Ｎ−ＢＯＣ，Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(５)
アセトニトリル（５ml）中に溶解したメチル２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルクロネートブロミド(４)（１２６mg、０.３１７mmol）の溶液に酸化銀（０.２３ｇ、０.９９２mmol）および２−（Ｎ−ＢＯＣ，Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェノール(３)を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、セライトを通して濾過し次いで真空中で濃縮した。生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィー処理した（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール９７.５／２.５）。収量１６５mg（８９％）。
Ｃ₂₅Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₁₄：
計算値Ｃ：５１.３７Ｈ：５.５２Ｎ：４.７９
実測値Ｃ：５１.７９Ｈ：５.７２Ｎ：４.６６
融点：８０℃（トルエン／石油エーテル）
〔α〕_D ²⁰＝−３９°（ｃ＝１.０２，ＣＨＣｌ₃中）
¹H NMR（250 MHz, CDCl₃)：δ8.14(dd, J_ortho=9 Hz, J_meta=2.5 Hz, 1H), 8.15〜8.05(1H), 7.30〜7.20(1H), 5.45〜5.30(4H), 4.25(d, J=9 Hz, 1H), 3.73(s, 3H), 3.13(s, 3H), 2.15〜2.05(9H), 1.65〜1.40(9H)
IR(CDCl₃)：ν（cm^-1) 1760(CO, エステル), 1699(CO, カルバメート),1529, 1349(NO₂)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋NH₄〕⁺：602
【００３１】
化合物６
メチル２−（Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(６)
酢酸エチル（６０ml）中の２.１２Ｍ塩酸に溶解したメチル２−（Ｎ−ＢＯＣ，Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(５)（３ｇ、５.１３mmol）の溶液を室温で１時間撹拌した。この溶液を過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に加え、その混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し次いで濃縮した。生成物をシリカゲルでクロマトグラフィー処理した（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール９７.５／２.５）。収量２.１４mg（８６％）、黄色固形物。
Ｃ₂₀Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₁₂：
計算値Ｃ：４５.５９Ｈ：４.９９Ｎ：５.７８
実測値Ｃ：４９.８１Ｈ：５.１２Ｎ：４.８０
融点：１２０℃（トルエン）
〔α〕_D ²⁰＝−５８°（ｃ＝１.０４，ＣＨＣｌ₃中）
¹H NMR（300 MHz, CDCl₃)：δ7.53(dd, J_ortho=8.5 Hz, J_meta=2.5 Hz, 1H), 7.37(d, J=2.5 Hz, 1H), 6.91(d, J=8.5 Hz, 1H), 5.45〜5.30(1H), 5.16(d, J=7 Hz, b, 1H), 4.50(d, J=5 Hz, 1H), 4.24(d, J=9 Hz, 1H), 3.75(s, 3H), 2.90(d, J=5 Hz, 1H), 2.10〜2.05(9H)
IR(CDCl₃)：ν（cm^-1) 3443(NH), 1758(CO), 1553, 1346(NO₂)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋H〕⁺：485
【００３２】
化合物８
４−〔Ｎ,Ｎ−ビス(２−クロロエチル)アミノ〕フェニルクロロホルメート(８)テトラヒドロフラン（３０ml）中に懸濁した４−〔Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ〕フェノール塩酸塩(７)（１.８５mmol）の懸濁液にトルエン中のホスゲン（１.９３Ｍ)(８ml、１５.４mmol）を加え、その混合物を０℃で３０分間撹拌した。トリエチルアミン（１ml、７.１７mmol）の添加後に混合物を０℃でさらに１時間撹拌した。次にその懸濁液を濾過し、真空中で室温において濃縮した。溶離剤としてジクロロメタンを用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより生成物を無色液体として得、それを直ちに次の反応に用いた。収率７０％。
¹H NMR（250 MHz, CDCl₃)：δ7.10(d, J=9 Hz, 2H), 6.66(d, J=9 Hz, 2H), 3.73(t, J=6.5 Hz, 4H), 3.63(t, J=6.5 Hz, 4H)
IR(CDCl₃)：ν（cm^-1) 1779(CO), 1514(芳香族)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋H〕⁺：296, 〔M＋2＋H〕⁺：298
【００３３】
化合物９
メチル２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(９)
テトラヒドロフラン（１５ml）およびジイソプロピルエチルアミン（０.２５ml、１.４４mmol）中に溶解した４−〔Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ〕フェニルクロロホルメート(８)（０.３１ｇ、１.０４mmol）の溶液にメチル２−（Ｎ−メチルアミノ）−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(６)（０.５０ｇ、１.０３mmol）を加え、その混合物を２時間還流した。室温に冷却後それを濃縮した。生成物をシリカゲルでクロマトグラフィー処理した（（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール９７.５／２.５）。収量４８７mg（６４％）。
Ｃ₃₁Ｈ₃₅Ｎ₃Ｏ₁₄Ｃｌ₂：
計算値Ｃ：５０.００Ｈ：４.７４Ｎ：５.６４Ｃｌ：９.５２
実測値Ｃ：４９.９０Ｈ：４.８２Ｎ：５.６２Ｃｌ：９.７８
融点：１０１℃（メタノール）
〔α〕_D ²⁰＝−４７°（ｃ＝１.１０，ＣＨＣｌ₃中）
¹H NMR（300 MHz, CDCl₃)：δ8.25〜8.15(2H), 7.45〜7.35(1H), 7.25〜7.05(1H), 6.95〜6.85(1H), 6.70〜6.55(2H), 5.45〜5.25(4H), 4.28(d, J=9 Hz, 1H), 3.80〜3.55(11H), 3.38(s, 2ジアステレオマーのカルバメート(40／60) 3H), 3.27(s), 2.20〜2.00(9H)
IR(CDCl₃)：ν（cm^-1) 1760(CO, エステル), 1722(CO, カルバメート), 1530, 1350(NO₂)
MS(DCl, NH₃)：m／z〔M＋H〕⁺：744,〔M＋2＋H〕⁺：746,〔M＋Na〕⁺：766,〔M＋2＋Na〕⁺：768
【００３４】
化合物１０
メチル２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロネート(１０)
メタノール（５ml）中に懸濁したメチル２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルクロネート(９)（６８mg、０.０９１５mmol）の懸濁液にナトリウムメトキシド（２mg、０.０３７mmol）を−１５℃で加え、その混合物を−１５℃で６時間撹拌した。イオン交換体（Amberlite ＩＲＣ−５０Ｓ)で中和し、濾過した後に溶液を濃縮し次いで溶離剤として酢酸エチルを用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。収量５０mg（８９％）。
Ｃ₂₅Ｈ₂₉Ｎ₃Ｏ₁₁Ｃｌ₂：〔欠文〕
¹H NMR（300 MHz, CDCl₃)：δ8.22(sl, 1H), 8.16(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.25(d, 1H), 7.15〜6.90(2H), 6.80〜6.45(2H), 5.06(1H), 4.09(1H), 4.20〜3.15(17H)
IR(CDCl₃)：ν（cm^-1) 3601, 3448(OH), 1714(CO), 1528, 1349(NO₂)
MS(ES)：m／z〔M＋Na〕⁺：640,〔M＋2＋Na〕⁺：642
【００３５】
化合物１１
２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕−アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸(１１)
アセトン（４ml）中に溶解した化合物１０（５０mg、０.０８０９mmol）の溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液０.３mlを−１５℃で加えた。混合物を−１５℃で２時間撹拌し、１Ｎ塩酸水溶液で中和し次いで真空中（Ｔ＜４０°）で濃縮した。生成物をアセトニトリル／水（９／１）を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。収量は４５mg（８９％）であった。
Ｃ₂₄Ｈ₂₇Ｎ₃Ｏ₁₁Ｃｌ₂：〔欠文〕
¹H NMR（250 MHz, CD₃OD)：δ8.30(sl, 1H), 8.24(dd, J_ortho=9 Hz, J_meta=2.5 Hz, 1H), 7.25(d, J=9 Hz, 1H), 6.99(d, J=9 Hz, 2H), 6.69(d, J=9 Hz, 2H), 5.23(1H), 3.89(d, J=9 Hz, 1H), 3.80〜3.33(1H)
IR(KR)：ν（cm^-1) 3418(OH), 1705(CO), 1516, 1349(NO₂)
MS(ES)：m／z〔M＋H〕⁺：603, 〔M＋2−H〕⁺：605
【００３６】
実施例２
２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−ヨードエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸(１２)
化合物１２
【化５】

合成は実施例１と類似の方法で実施した。
【００３７】
実施例３
化合物１３：キニンプロドラッグ（Ｆ３９１）
【化６】

合成は実施例１と類似の方法で実施した。
【００３８】
実施例４
化合物１４：ジピリダモルプロドラッグ（Ｆ３９２）
【化７】

合成は実施例１と類似の方法で実施した。
【００３９】
実施例５
酵素によるＦ３７３の開裂
β−グルコニダーゼとともにインキュベーションすると、プロドラッグ３７３（化合物１１）は酵素により開裂して芳香族のナイトロジエンマスタードガス誘導体（４−〔Ｎ,Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ〕フェノール）（化合物７）、グルクロン酸およびスペーサーになった。
【化８】

プロドラッグＦ３７３は無水ＤＭＳＯ中において溶液状態で安定である。開裂能力を調査するためにＦ３７３溶液（５mg／ml、ＤＭＳＯ中）を０.０２ＭホスフェートバッファーpH７.２、１８０μｌおよびE. Coli β−グルクロニダーゼ（Sigma社製)(３３０μｇ／ml）１０μｌで処理し、その混合物を３７℃でインキュベートした。各バッチ２５μｌを０.１Ｍホスフェートバッファー、pH３.０（８５％）２２５μｌおよびアセトニトリル（１５％）で希釈し次いで直ちに以下のＨＰＬＣ系を用いて分析した。
ＨＰＬＣ系
使用するＨＰＬＣ系は勾配ポンプ(Gynkotek, Model 480)、オートサンプラー(Abimed, Model 231／401）、UV検出器（Beckman, Model 166, 検出波長212 nm）および分析ユニット（Beckman, System Gold）からなった。分離はＲＰカラム（Zorbak SB-C 18, ５μｍ, 125×4.6mm)で実施した。移動相は以下のスキーム：
Ａ−アセトニトリル
Ｂ−０.０２ＭホスフェートバッファーpH３.０
０分：１５％Ａ，８５％Ｂ
１５分：７５％Ａ，２５％Ｂ
２５分：７５％Ａ，２５％Ｂ
２７分：１５％Ａ，８５％Ｂ
３５分：１５％Ａ，８５％Ｂ
による２成分から得られた。
検出されたピーク面積は下記のとおりであった。
【００４０】
【表１】

【００４１】
実施例６
β−グルクロニダーゼの存在下および不在下での腫瘍細胞におけるＦ３７３、３９１および３９２の細胞毒性
９６ウエルマイクロタイタープレート中の１００μｌのＭＥＭ＋１０％ＦＣＳの中にウエル当たり２×１０³個のＬｏＶｏ細胞を接種した。２４時間後に各供試物質を培地１００μｌ中に所望の濃度で加え、次いで場合によりさらにβ−グルクロニダーゼ（５０μｇ／ml、最終濃度；Sigma Ｇ７８９６）を加えた。各グループは４個のウエルからなり、対照物は培地とともにインキュベートしただけであった。６５時間後にＭＴＴ（２.５mg／ml、ＰＢＳ中）５０μｌを加え、その上澄み液を３時間後に除去した。生細胞により生成された色素を、ウエル当たりＤＭＳＯ１００μｌを加えることにより溶解した。マルチスキャン光度計３４０ CC(Flow社製）を用いて４９２nmで各ウエルについて吸光度を測定した。グループ当たり４個のウエルの各値を平均し、これにより投与量−応答曲線およびＩＣ₅₀をＧｒａＦｉｔ３.０ソフトウエアを用いて計算した。
【００４２】
【表２】

プロドラッグＦ３７３における有毒化合物は化合物７（実施例５、第２５頁）であり、単独で試験した場合には５μmolのＩＣ₅₀を示す。プロドラッグＦ３９１における有毒化合物はキニンであり、単独で試験した場合には１０３μmolのＩＣ₅₀を示す。プロドラッグＦ３９２における有毒化合物はジピリダモルであり、単独で試験した場合には４３μmolのＩＣ₅₀を示す。

Claims

式Ｉ
グリコシル-Y-W(R)_n-Z-C(=Y)−活性化合物 (Ｉ)
〔式中、
グリコシルは、酵素により開裂されうる、Ｙとα−またはβ−グリコシド結合により結合するＤ−グルクロニル、Ｌ−イズロニル、Ｄ−グルコピラノシル、Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニル、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミニル、Ｄ−マンノピラノシルまたはＬ−フコピラノシルであり、
Ｗは、ナフチル、インデニル、アンスリル、フェナンスリル、(Ｃ₃〜Ｃ₆)−シクロアルキルまたはフェニルであり、
Ｒは、水素原子、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＯ₂、またはハロゲンであり、
ｎは、０、１、２または３であり、
Ｙは、酸素原子であり、
Ｚは、(Ｃ₁〜Ｃ₄)−アルキルアミノ、−Ｃ(ＣＨ₃)₂−ＮＨ−、−ＣＨ(ＣＨ₃)−ＮＨ−、−ＣＨ(ＣＨ₃)−Ｎ((Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル）または−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｎ(Ｒ²)−（ここでＲ²は（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルキルである）であり、ＹとＺは、互いにＷ上でオルト位に結合しており、そして
活性化合物は酸素基を介して結合されたキニン、ジピリダモルまたはＮ−ビス（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシアニリンである〕で表される化合物および／またはその生理学的に許容されうる塩、または２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−ヨードエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸を含有する癌性疾患、自己免疫疾患、または慢性炎症性疾患の予防および治療用医薬製剤。
式中、グリコシルが、酵素により開裂されうる、Ｙとα−またはβ−グリコシド結合により結合するＤ−グルクロニルであり、
Ｗが、フェニルであり、
Ｒが、水素原子、ＣＮ、ニトロ、フッ素、塩素、または臭素であり、
ｎが、０、１または２の整数であり、
Ｙが、酸素原子であり、
Ｚが、−Ｎ(ＣＨ₃)−、−Ｃ(ＣＨ₃)₂−ＮＨ−、−ＣＨ(ＣＨ₃)−ＮＨ−、−Ｃ(ＣＨ₃)₂−Ｎ((Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル）−、または−ＣＨ(ＣＨ₃)−Ｎ((Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル）−である、請求項１記載の式Ｉの化合物、または２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−ヨードエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸を含有する医薬製剤。
式Ｉの化合物が、２−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔４−（Ｎ,Ｎ′−ビス（２−クロロエチル）アミノ）フェニルオキシカルボニル〕−アミノ〕−４−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロン酸、

である請求項１または２記載の式Ｉの化合物を含有する医薬製剤。
さらに製薬的に適当でありかつ生理学的に許容しうる賦形剤、添加剤および／または他の活性化合物および補助剤を含有する請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
さらに式Ｉ中のグリコシル基を酵素により開裂させることができる抗体−酵素複合体を含有する請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬製剤。