JP4342007B2

JP4342007B2 - Quinazoline derivatives

Info

Publication number: JP4342007B2
Application number: JP22574998A
Authority: JP
Inventors: 富士雄安徳; 清高岩井; 浩士田中; 一司藤田; 肇川上
Original assignee: Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd; Sumitomo Chemical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd; Sumitomo Pharma Co Ltd
Priority date: 1998-08-10
Filing date: 1998-08-10
Publication date: 2009-10-14
Anticipated expiration: 2018-08-10
Also published as: JP2000053653A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はキナゾリン誘導体に関する。詳しくいえば、本発明はタイプ２ヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈ２と略す。）側の免疫応答を抑制し、タイプ１ヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈ１と略す。）側の免疫応答を増強し、生体全体においてＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを変化させるキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする免疫調節剤に関する。具体的にはＴｈ２側の免疫応答が異常に亢進したアレルギー性疾患の治療剤に関する。さらに詳しくは、本発明はＴｈ２側の免疫応答を抑制し、Ｔｈ１側の免疫応答を増強することにより、Ｔｈ２側の免疫応答の異常亢進に起因する疾患、すなわち喘息、アレルギー性皮膚炎又はアレルギー性鼻炎等のアレルギー性疾患、あるいは全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、さらには後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等の治療または予防に有効であるキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする免疫調節剤に関する。さらに、本発明のＴｈ１側の免疫応答を増強する作用に起因するところのウイルスあるいはバクテリア感染症、悪性腫瘍等の治療または予防するキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする免疫調節剤に関する。Ｔｈ１側の免疫応答を増強する選択的免疫調節作用による、Ｔｈ１側の免疫応答を増強することが治療あるいは予防につながる種々の疾患、例えばバクテリア感染症、悪性腫瘍等を治療または予防するキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とする免疫調節剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
免疫応答において中心的な役割を担っているヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈと略す）と呼ばれるリンパ球が、異なる二つのサブセットに分類されることを初めて提唱したのはMosmannらである。彼らはマウスのヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）を、産生するサイトカインの種類によりＴｈ１とＴｈ２のサブセットに分類した（J. Immunol. (1986) 136 : 2348-2357）。Ｔｈ１タイプサイトカインとしては、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）等が挙げられる。Ｔｈ２タイプサイトカインとしては、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）等が挙げられる。
【０００３】
今日では、このＴｈ１／Ｔｈ２の分類の考え方は、単にヘルパーＴ細胞のサブセットの分類にとどまらず、生体における種々の免疫応答に関してどちらのヘルパーＴ細胞のサブセットが主に関与しているかという観点から、それぞれを「Ｔｈ１側の免疫応答」、「Ｔｈ２側の免疫応答」と解釈するようになった。Ｔｈ１側の免疫応答の主体をなすものとしては、Ｔｈ１の活性化に伴って産生されるインターフェロンγ（IFN-γ）、インターロイキン２（IL-2）等のサイトカインである。これらＴｈ１型サイトカインは、マクロファージやナチュラルキラー細胞等の活性化を誘導したり、活性化マクロファージから産生されるIL-12等によるＴｈ１の活性化の増強等を行うことにより、主にウイルス、バクテリア等に対する感染防御などの細胞性免疫に関与することが知られている。一方、Ｔｈ２側の免疫応答の主体をなすものとしては、Ｔｈ２の活性化に伴って産生されるIL-4、IL-5等のサイトカインである。これらＴｈ２型サイトカインは、Ｂ細胞からの抗体産生（IgEクラスを含む）などの液性免疫に関与することが知られている。
【０００４】
Ｔｈ２は、以下に述べるようにIL-4やIL-5といったアレルギー反応に関与するサイトカインを産生することから、アレルギー反応の制御細胞として重要視されている。例えば、Ｔｈ２型サイトカインの代表であるIL-4は、Ｂ細胞に対してIgE抗体の産生を誘導する。また好酸球が血管内皮細胞に接着し、組織浸潤する際に機能する重要な分子であるVCAM-1の遺伝子発現も誘導する（ファルマシア（1993）29：1123-1128）。最近ではIL-4は、Ｔｈ２自身の分化増殖因子としても注目されている。またIL-4と同じくＴｈ２型サイトカインであるIL-5は、好酸球の分化増殖、遊走あるいは活性化を誘導する。アレルギー性炎症は、例えば喘息における慢性の気道炎症に代表されるように、好酸球の浸潤、活性化及び脱顆粒を引金とすることが特徴である。このことからIL-5は、アレルギー性炎症反応の惹起因子であると考えられている。
【０００５】
以上のようなＴｈ２型サイトカインの特性から、Ｔｈ２は、IgE抗体や肥満細胞が関与するアレルギーの「即時型反応」、及び好酸球が関与する「遅発型反応」という二つのアレルギー反応のいずれをも制御し、アレルギー性炎症反応における中心的な細胞であると認識されている。従ってアレルギー性疾患は、Ｔｈ２側の免疫応答の異常亢進に起因した疾患であると考えられている。このような考えは、アレルギー性疾患の病変部である気道や皮膚において、IL-4やIL-5等のＴｈ２型サイトカインの産生、あるいはＴｈ２の存在が確かめられていることにも裏付けられている。
【０００６】
以上のことより、即時型及び遅発型の両方のアレルギー反応を抑制し、あるいは好酸球の著明な浸潤、及び活性化を特徴とするアレルギー性炎症反応をその根本的な原因の段階で抑制し、アレルギー性疾患全般を治療、予防する為には、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制することが重要であると考えられる。言い換えればＴｈ２側の免疫応答を抑制することのできる薬剤が開発されれば、アレルギー性疾患の有効な治療薬あるいは予防薬になるものと考えられる。
【０００７】
アレルギー性疾患のうち、特に重症の慢性化した喘息やアトピー性皮膚炎等においては、遅発型のアレルギー反応が重要な役割を果たしていると考えられている。しかし、現在使用されている抗アレルギー薬は、抗ヒスタミン作用等を中心にした主に即時型のアレルギー反応のみを抑制するものであり、その臨床効果は十分なものではない。このような観点からも、前述の如き遅発型、即時型両方のアレルギー反応を抑制し、アレルギー性疾患全般を治療又は予防するような、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制する薬剤の開発が望まれているのである。
【０００８】
また、喘息治療においては長年使用されてきたキサンチン誘導体あるいはβ−刺激薬等に代表される気管支拡張薬は、種々の刺激による気管支平滑筋の収縮を抑える作用を有することが知られている。しかしながら、喘息の根本的病因である慢性の気道炎症に対しては無効である。それに加えて、キサンチン誘導体あるいはβ−刺激薬ともに循環器系の副作用が問題となる。今日の喘息治療においては、ＷＨＯのガイドラインにも明確に示されているように、喘息を気道の慢性的炎症と捉え、この慢性気道炎症を取り除くことを治療の第一義的な目標とするようになった。喘息における慢性の気道炎症は好酸球の浸潤、活性化及び脱顆粒を引金とし、炎症の慢性化に伴い気道上皮の肥厚・繊維化にいたる病理像を特徴とする。ガイドラインでは、現在この慢性気道炎症に有効である唯一の薬剤である吸入ステロイド剤が中等度以上の喘息に関して、第一選択薬として位置づけられている。
【０００９】
結局、これら重症の喘息やアトピー性皮膚炎に対しては、ステロイド剤のみが有効であるとして、現在該ステロイド剤が頻繁に使用されている状況にある。しかし、該ステロイドは長期投与により種々の副作用（ステロイド皮膚症、誘発感染症、副腎皮質機能不全等）の生じることが問題となっている。
これらの観点からも、Ｔｈ２側の免疫応答を選択的に抑制することにより、即時型及び遅発型の両方のアレルギー反応を抑制し、あるいは好酸球の著明な浸潤、及び活性化を特徴とするアレルギー性炎症反応をその根本的な原因の段階で抑制し、アレルギー性疾患全般を治療、予防することが可能な薬剤の開発が望まれているのである。
【００１０】
さらに、より副作用の少ない治療薬あるいは予防薬の開発をも念頭に置いた場合、前述の如きＴｈ２側の免疫応答を抑制する薬剤がＴｈ１側の免疫応答を増強するものであれば、医薬としてより好都合であると思われる。すなわち先にも述べたようにＴｈ１は、主としてIFN-γを産生することによりウイルス、バクテリア等に対する感染防御を行うという生体にとって重要な役割を担っているため、前記Ｔｈ２側の免疫応答の抑制を目的に開発された薬剤がＴｈ１の作用を増強するものであれば、それは副作用の面から非常に望ましいことと言える。例えば免疫抑制剤であるシクロスポリンやFK506は、Ｔｈ２の活性化を強く抑制することが知られている。しかし、これらシクロスポリンやFK506は、Ｔｈ２の活性化を抑制するのと同様に、あるいはそれよりもさらに強く、Ｔｈ１の活性化をも抑制するという非特異的な免疫抑制作用を有するがために、このような非特異的な免疫抑制作用に起因する日和見感染、あるいは発癌率の上昇等の重篤な副作用が問題となっているのである。その他の非特異的な免疫抑制剤に関しても同様の問題点が考えられる。
【００１１】
以上のことから、IFN-γの産生で代表されるＴｈ１側の免疫応答を増強し、IL-4、IL-5の産生で代表されるＴｈ２側の免疫応答を抑制する薬剤が開発されれば、前述の如きアレルギー性疾患の有効かつ副作用の少ない治療薬あるいは予防薬になるものと考えられる。
また、全身性エリテマトーデス等の、抗体産生あるいは液性免疫が異常に亢進した状態にある自己免疫疾患も、やはりＴｈ２側の免疫応答が異常亢進した状態にあると推定されている(Medical Immunology (1988) 15 : 401)。従って上記の如きＴｈ１側の免疫応答を増強し、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制する薬剤は、自己免疫疾患に対する治療薬ともなることが期待される。
【００１２】
WO 93/07124には、フォスフォジエステラーゼ阻害剤としての活性を示すキナゾリン誘導体が開示されている。また、フォスフォジエステラーゼ阻害剤としての活性に基づく抗アレルギー剤としての可能性に関して開示されている。しかしながら、既存のフォスフォジエステラーゼ阻害剤としての活性に基づく抗アレルギー剤の代表であるテオフィリンの場合、その主な抗アレルギー作用は喘息における気管支拡張作用である。前述したようにキサンチン誘導体あるいはβ−刺激薬等に代表される気管支拡張薬は、種々の刺激による気管支平滑筋の収縮を抑える作用を有することが知られているが、症状を抑える作用にとどまり、喘息の根本的病因である慢性の気道炎症に対しては無効である。さらには、フォスフォジエステラーゼのisoenzymeを考えた場合、アレルギー性炎症に主に関与しているisoenzymeはｃＡＭＰフォスフォジエステラーゼ(PDE-IIIまたはIV)であり、ｃＡＭＰフォスフォジエステラーゼを阻害することにより、細胞内のｃＡＭＰ濃度が上昇し、抗炎症作用が発現すると考えられる。一方、WO 93/07124で開示されている阻害剤はisoenzymeとしてcGMPフォスフォジエステラーゼ(PDE-V)に対するもの及びカルモジュリン依存型フォスフォジエステラーゼ(PDE-I) に対するものであり、これらｃＧＭＰフォスフォジエステラーゼを阻害した場合は細胞内ｃＧＭＰ濃度が上昇し血管拡張、気管支拡張作用が発現するが、炎症性細胞に対する抑制作用は持たないことから抗炎症作用は期待できない。むしろ、今日の多くの研究者は副作用の軽減及び抗アレルギー作用の増強を目的として、PDE-IV特異的阻害剤を目指して検討を行っている。
WO 93/07124には、Ｔｈ１側の免疫応答を増強し、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制するような本発明のキナゾリン誘導体についての具体的記載はない。また本発明のキナゾリン誘導体はフォスフォジエステラーゼ阻害活性を示さない。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、Ｔｈ１側の免疫応答を増強し、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制することにより、その結果、全体としてＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを変化させ、免疫応答を調節する化合物の提供である。具体的には、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）等のＴｈ１タイプサイトカインの産生を増強し、逆にインターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）等のＴｈ２タイプサイトカインの産生を抑制する化合物の提供である。より具体的には例えば、アレルギー性疾患、寄生虫感染症、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、ウイルスあるいはバクテリア感染症、悪性腫瘍あるいは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等の治療剤または予防剤の提供である。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、キナゾリン誘導体およびその塩がＴｈ１側の免疫応答を増強し、Ｔｈ２側の免疫応答を抑制すること見いだし、さらに、全体としてＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを変化させ、免疫応答を調節することを見いだし本発明を完成させるに至った。
【００１５】
本願発明は、
１．式（１）
【化２】

（式中、Ｒ^１は、炭素数２から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基、炭素数２から６の低級アルケニル基、炭素数３から６の低級アルキニル基、水酸基、ハロゲン原子あるいは炭素数１から４のアルコキシ基で置換された炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基、フェニル基、炭素数３から８のシクロアルキル基またはヘテロ原子として酸素原子を１から２個含む５から７員環の飽和複素環を表し、
Ｒ^２は、水素原子、炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基、カルバモイル基またはヒドロキシメチル基を表し、
Ｒ^３は、水素原子または炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基を表し、
Ｒ^４は、水素原子、水酸基、炭素数１から６のアルコキシ基またはハロゲン原子を表し、Ｒ^５は、水素原子、水酸基、炭素数１から６のアルコキシ基またはハロゲン原子を表し、Ｒ^６は、水素原子、水酸基、炭素数１から６のアルコキシ基またはハロゲン原子を表し、Ｒ^７は、水素原子、水酸基、炭素数１から６のアルコキシ基またはハロゲン原子を表す。）で表されるキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩；
２．Ｒ^１が、炭素数２から５の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基である１．記載のキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩；
３．１．または２．記載のキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とするタイプ２ヘルパーＴ細胞側の免疫応答を抑制し、タイプ１ヘルパーＴ細胞側の免疫応答を増強する免疫調節剤；
４．１．または２．記載のキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とするタイプ２ヘルパーＴ細胞側の免疫応答が異常亢進した疾患の治療剤または予防剤；
５．タイプ２ヘルパーＴ細胞側の免疫応答が異常亢進した疾患がアレルギー性疾患、寄生虫感染症、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患である４．記載の治療剤または予防剤；
６．タイプ２ヘルパーＴ細胞側の免疫応答が異常亢進した疾患がアレルギー性疾患である４．記載の治療剤または予防剤；
７．タイプ２ヘルパーＴ細胞側の免疫応答が異常亢進したアレルギー性疾患が喘息、アレルギー性鼻炎またはアトピー性皮膚炎である６．記載の治療剤または予防剤；または
８．１．または２．記載のキナゾリン誘導体またはその薬学的に許容される塩を有効成分とするウイルスあるいはバクテリア感染症、悪性腫瘍あるいは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療剤または予防剤；
に関する。
【００１６】
【発明の実施形態】
【００１７】
本発明における置換基を具体的に以下に説明する。
Ｒ^１における炭素数２から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基としては例えば、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル基、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１−エチルプロピル、２−エチルプロピル、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１−プロピルプロピル等が挙げられる。
Ｒ^１における炭素数２から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の好ましい範囲としてはとしては炭素数２から５の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基が挙げられ、具体的には例えば、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル基、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１−エチルプロピル、２−エチルプロピル等が挙げられる。
【００１８】
Ｒ^１における炭素数２から６の低級アルケニル基としては例えば、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル等が挙げられる。
Ｒ^１における炭素数３から６の低級アルキニル基としては例えば、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル等が挙げられる。
【００１９】
Ｒ^１における水酸基、ハロゲン原子あるいは炭素数１から４のアルコキシ基で置換された炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基における低級アルキル基としては、例えばメチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル基、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１−エチルプロピル、２−エチルプロピル、ヘキシル等が挙げられる。
【００２０】
Ｒ^１における炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の置換基のハロゲン原子としては、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。Ｒ^１における炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の置換基の炭素数１から４のアルコキシ基としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ブトキシ等が挙げられる。
Ｒ^１における炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の置換基が水酸基である場合の置換位置は該アルキル基の末端でない方が好ましい。
Ｒ^１における炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の置換基における置換基数としては１または２個以上が挙げられる。
Ｒ^１における炭素数１から６の直鎖あるいは分枝状の低級アルキル基の置換基で好ましいものとしては、水酸基、ヒドロキシメチル基が挙げられ、置換位置としては１または２位（キナゾリン環の４位のアミノ基から見て２または３位）が好ましい。
【００２１】
Ｒ^１における炭素数３から８のシクロアルキル基としては、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられる。
Ｒ^１におけるヘテロ原子として酸素原子を１から２個含む５から７員環の飽和複素環としては、例えば、テトラヒドロフラン、オキサン、１，４−ジオキサン、オキセパン等が挙げられる。
【００２２】
Ｒ^２及びＲ^３における直鎖または分枝状の炭素数１から６のアルキル基としては例えば、メチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル基、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１−エチルプロピル、２−エチルプロピル、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、１−エチルブチル、２−エチルブチル、１−プロピルプロピル等が挙げられる。
【００２３】
Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７における炭素数１から６のアルコキシ基としては、例えば直鎖または分枝した炭素数１から６の低級アルコキシ基が挙げられ、具体的には例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、１，１−ジメチルエトキシ、ペントキシ、ヘキソキシ等が挙げられる。
【００２４】
Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７におけるハロゲン原子としては、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。
【００２５】
本発明の医薬の有効成分である複素環化合物は薬学上許容される塩にすることができる。薬学上許容される塩としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、りんご酸塩、酒石酸塩、フマール酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩が挙げられ、塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カルシウム塩等の無機塩基塩、メグルミン塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタン塩等の有機塩基塩が挙げられる。また、本発明には、キナゾリン誘導体またはその薬学上許容される塩の水和物等の溶媒和物も含む。
【００２６】
本発明の式（１）で表される化合物は以下の方法およびそれに準じた方法で製造することができる。
【化３】

式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及び、Ｒ^７は、式（１）と同じ意味を表わす。
製造法１
化合物（２１）をオキシ塩化リンと反応させることにより化合物（２２）を得ることができる（特開平２−５０２４６２、特開平３−１７０６８、ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー(J. Chem. Soc. 775, (1947))、ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー(J. Chem. Soc.1766, (1948))）。反応は、必要に応じて溶媒を加えてもよい。溶媒としては、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素系溶媒などが挙げられる。反応には、場合によりＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンなどの反応助剤を用いてもよい。反応温度は、例えば室温から溶媒の沸点付近の温度範囲から選択される。
【００２７】
化合物（２２）は、化合物（２３）と反応させ、本発明化合物（１）を得ることができる。反応溶媒としては、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン（以下ＴＨＦと略す。）、ジオキサンなどのエーテル系溶媒、エタノール、イソプロピルアルコール（以下ＩＰＡと略す。）、ブタノールなどのアルコール系溶媒、ジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦと略す。）、アセトニトリルなどの不活性溶媒などが挙げられる。反応は、必要に応じてトリエチルアミンなどの有機塩基、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどの無機塩基を添加してもよい。反応温度は、例えば室温から溶媒の沸点付近の温度範囲から選択される。
【００２８】
製造法２
化合物（２４）と化合物（２３）を反応させて化合物（２５）を得ることができる。反応溶媒としては、例えば、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素系溶媒、ＴＨＦ、ジオキサンなどのエーテル系溶媒、エタノール、ＩＰＡ、ブタノールなどのアルコール系溶媒、ＤＭＦ、アセトニトリルなどの不活性溶媒などが挙げられる。反応は、必要に応じてトリエチルアミンなどの有機塩基、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどの無機塩基を添加してもよい。反応温度は、例えば室温から溶媒の沸点付近の温度範囲から選択される。
【００２９】
化合物（２５）は、有機溶媒中アンモニアと反応させることにより本発明化合物（１）を得ることができる。有機溶媒としては、メタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル系溶媒などが挙げられる。反応は、オートクレーブ中、約室温から約２００℃までの温度範囲で行う。
また、化合物（２５）は、アジ化ナトリウムと反応後、トリフェニルホスフィンで還元することによっても本発明化合物（１）を得ることができる。アジ化ナトリウムとの反応は、ＤＭＦなどの不活性溶媒中行う。反応温度は、約室温から溶媒の沸点付近範囲から選択される。トリフェニルホスフィンによる還元は、ＴＨＦなどのエーテル系溶媒中で行う。反応温度は、約室温から溶媒の沸点付近の温度範囲から選択される。
【００３０】
原料は、既知の反応あるいは既知の反応に準じて合成を行った。
式（１）で表される本発明に含まれる化合物またはそれを製造するための中間体は通常の方法で精製することができる。例えばカラムクロマトグラフィー、再結晶等で精製することができる。再結晶溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトン等のケトン系溶媒、ヘキサン等の炭化水素系溶媒等またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００３１】
また上述の反応を実行する際、必要ならば、保護、脱保護の技術を用いることができる。保護、脱保護の技術については、（T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protecting Groups in Organic Synthesis", 1991, JOHN WILEY & SONS, INC.）に詳しく記されている。
【００３２】
本発明のキナゾリン誘導体またはその薬学上許容される塩は水和物等の溶媒和物を形成することがあり本発明はこれらも含む。
【００３３】
本発明に含まれる化合物は、不斉が生じる場合または不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものを含む。そのような光学異性体を純粋に得る方法としては、例えば光学分割が挙げられる。
【００３４】
光学分割法としては、本発明化合物またはその中間体を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトニトリル等およびこれらの混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ−ベンジルオキシアラニン、乳酸などのモノカルボン酸類、酒石酸、ｏ−ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸などのジカルボン酸類、カンファースルフォン酸、ブロモカンファースルフォン酸などのスルフォン酸類）と塩を形成させることもできる。
また本発明化合物またはその中間体がカルボキシル基等の酸性置換基を有する場合は光学活性なアミン（例えばα−フェネチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネ等の有機アミン類）と塩を形成させることもできる。
【００３５】
塩を形成させる温度としては、室温から溶媒の沸点の範囲が挙げられる。光学純度を向上させるためには、一旦、溶媒の沸点付近まで温度を上げることが望ましい。析出した塩を濾取するまえに必要に応じて冷却し、収率を向上させることができる。光学活性な酸またはアミンの使用量は、基質に対し約０．５から約２．０当量の範囲、好ましくは１当量前後の範囲が適当である。必要に応じ結晶を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトニトリル等およびこれらの混合溶媒）で再結晶し、高純度の光学活性な塩を得ることもできる。必要に応じ、得られた塩を通常の方法で酸または塩基と処理しフリー体を得ることもできる。
【００３６】
本発明のキナゾリン誘導体は経口的または非経口的に投与することができる。経口的に投与する場合、通常用いられる投与形態で投与することができる。非経口的には、局所投与剤、注射剤、経皮剤、経鼻剤等の形で投与することができる。経口剤または直腸投与剤としては、例えば、カプセル、錠剤、ピル、散剤、カシェ剤、座剤、液剤等が挙げられる。注射剤としては、例えば、無菌の溶液又は懸濁液等が挙げられる。局所投与剤としては、例えば、クリーム、軟膏、ローション、経皮剤（通常のパッチ剤、マトリクス剤）等が挙げられる。
上記の剤形は通常の方法で、薬学的に許容される賦形剤、添加剤とともに製剤される。薬学的に許容される賦形剤、添加剤としては、担体、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。
【００３７】
薬学的に許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバター等が挙げられる。カプセルは、本発明化合物を薬学的に許容される担体と共に中に入れることにより製剤できる。本発明化合物は薬学的に許容される賦形剤と共に混合し、または賦形剤なしにカプセルの中に入れることができる。カシェ剤も同様の方法で製造できる。
注射用液剤としては、溶液、懸濁液、乳剤等が挙げられる。例えば、水溶液、水−プロピレングリコール溶液等が挙げられる。液剤は、水を含んでも良い、ポリエチレングリコールまたは／及びプロピレングリコールの溶液の形で製造することもできる。経口投与に適切な液剤は、本発明化合物を水に加え、着色剤、香料、安定化剤、甘味剤、溶解剤、増粘剤等を必要に応じて加え製造することができる。また経口投与に適切な液剤は、本発明化合物を分散剤とともに水に加え、粘重にすることによっても製造できる。増粘剤としては、例えば、薬学的に許容される天然または合成ガム、レジン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたは公知の懸濁化剤等が挙げられる。
【００３８】
局所投与剤としては、上記の液剤及び、クリーム、エアロゾル、スプレー、粉剤、ローション、軟膏等が挙げられる。上記の局所投与剤は、本発明化合物と通常に使用される薬学的に許容される希釈剤及び担体と混合し製造できる。軟膏及びクリームは、例えば、水性または油性の基剤に増粘剤及び／またはゲル化剤を加えて製剤化して得られる。該基剤としては、例えば、水、液体パラフィン、植物油（ピーナッツ油、ひまし油等）等が挙げられる。増粘剤としては、例えばソフトパラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ラノリン、水素添加ラノリン、蜜蝋等が挙げられる。
【００３９】
ローションは、水性又は油性の基剤に、一種類またはそれ以上の薬学的に許容される安定剤、懸濁化剤、乳化剤、拡散剤、増粘剤、着色剤、香料等を加えることができる。
散剤は、薬学的に許容される散剤の基剤と共に製剤化される。基剤としては、タルク、ラクトース、澱粉等が挙げられる。ドロップは水性又は非水性の基剤と一種またはそれ以上の薬学的に許容される拡散剤、懸濁化剤、溶解剤等と共に製剤化できる。
局所投与剤は、必要に応じて、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、クロロクレゾール、ベンズアルコニウムクロリド等の防腐剤、細菌増殖防止剤を含んでも良い。
【００４０】
本発明化合物を有効成分とする、液剤スプレー、散剤またはドロップにした製剤を経鼻的に投与できる。
投与量、投与回数は症状、年齢、体重、投与形態等によって異なるが、経口投与する場合には、通常は成人に対し１日あたり約１から約５００mgの範囲、好ましくは約５から約１００mgの範囲を１回または数回に分けて投与することができる。注射剤として投与する場合には約０．１から約３００mgの範囲、好ましくは約１から約１００mgの範囲を１回または数回に分けて投与することができる。
【００４１】
本発明のキナゾリン誘導体は、抗原特異的刺激によるマウスリンパ節細胞からのIL-4産生及びIL-5産生を抑制し、逆にIFN-γ産生を増強する。この評価に用いられたサイトカイン産生調節活性試験は以下の方法で実行される。
【００４２】
サイトカイン産生調節活性試験
Keyhole Lympet Hemocyanin（以下KLHと訳す。）０．２mgを水酸化アルミニウム・アジュバント(Alu-Gel-S；Serva Feinbiochemica GmbH & Co., Code No.12261）あるいはフロイント完全アジュバント（Difco Lab., Detroit, Michigan, Code No.3113-60-5）とともにマウス足蹠皮下に注射する（0.1ml）。8から10日後に膝窩リンパ節を摘出し、動物細胞培養用培地を用いて、細胞浮遊液を調製する。
リンパ節細胞浮遊液（1から5 x10⁶ cells/ml）にKLH（1から100μg/ml）および薬剤を添加し、３７℃、５％ＣＯ₂存在下で4日間培養（Corning 25850, 0.15ml/well）後、上清中に産生されるサイトカインを特異的なELISA法により定量する。
代表的なＴｈ２タイプサイトカインとしてインターロイキン４（IL-4）及びインターロイキン５(IL-5)を、代表的なＴｈ１タイプサイトカインとしてインターフェロンγ（IFN-γ）を定量する。
【実施例】
【００４３】
参考例１２−アミノ−４−クロロキナゾリンの合成
【化４】

２−アミノ−４−ヒドロキシキナゾリン塩酸塩 (16 g)とオキシ塩化リン(100 ml)の混合液を４．５時間還流した。反応終了後、過剰のオキシ塩化リンを留去し、残渣にトルエンを加え再留去した。残渣へ氷水および水酸化ナトリウムを加え、終夜攪拌し、固形物をろ取し、表記化合物(9.04 g, 38.6 %)を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ; 8.05(1H, d, J=7.8 Hz), 7.75(1H, t, J=8.1 Hz), 7.59(1H, d, J=8.1 Hz), 7.35 (1H, t, J=7.8 Hz), 5.32 (2H, brs)
【００４４】
実施例１
Ｎ―（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−シクロヘキシルメチルアミン
【化５】

２−アミノ−４−クロルキナゾリン(370.1 mg, 2.06 mmol)、シクロヘキシルメチルアミン(466 mg, 4.21 mmol)およびジメチルホルムアミド(2 ml)の混合液を内温９０℃で２時間保温した。反応液を冷却し、反応液へ水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（3% MeOH/CHCl3）で精製し、標題化合物(68 mg, 12.9 %)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃) δ; 1.01 (2H, m), 1.22 (3H, m), 1.76 (6H, m), 3.43 (2H, m), 5.16 (2H, bs), 6.06 (1H, bs), 7.10 (1H, t, J=8.3Hz), 7.42 ( 1H, d, J=8.1Hz), 7.51 (1H, t, J=8.1Hz), 7.61 (1H, d, J=8.3Hz)
【００４５】
実施例２
実施例１の方法に準じて反応を行い、以下に示す化合物を得た。
１−（（２−アミノキナゾリン−４−イル）アミノ）ペンタン−２−オール
【化６】

¹H-NMR (CDCl₃) δ; 0.96(3H, t, J=6.8Hz), 1.51(4H, m), 3.50 (1H, m), 3.79 (1H, m), 3.90 (1H, m), 4.92 (2H, bs), 6.28 (1H, bs), 7.10 (1H, t, J=7.6Hz), 7.41 ( 1H, d, J=7.8Hz), 7.54 (2H, m).
【００４６】
実施例３
Ｎ―（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン
【化７】

２−アミノ−４−クロルキナゾリン(449 mg, 2.50 mmol)、トリエチルアミン(1.27 g, 12.5 mmol)およびエタノール(5 ml)の混合液へペンチルアミン(262 mg, 3.00 mmol)を室温で加えた。反応液を内温８０℃で１時間保温し、冷却後反応液へ水を加えた。クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液の溶媒を減圧下溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（3% メタノール/CHCl₃）で精製し、標題化合物(69 mg, 12.0 %)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃) δ; 0.90 (3H, m), 1.37 (4H, m), 1.68 (2H, m), 3.56 (2H, m), 5.32 (2H, bs), 6.25 (1H, bs), 7.11 (1H, t, J=8.0Hz), 7.41 ( 1H, d, J=8.1Hz), 7.52 (1H, t, J=8.1Hz), 7.67 (1H, d, J=8.0Hz).
【００４７】
実施例４
実施例３の方法に準じて反応を行い、以下に示す化合物を得た。
Ｎ―（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ブチルアミン
【化８】

¹H-NMR (CDCl₃) δ; 0.95 (3H, t, J=7.3Hz), 1.42 (2H, m), 1.67 (2H, m), 3.57 (2H, m), 5.23 (2H, bs), 6.19 (1H, bs), 7.11 (1H, t, J=8.1Hz), 7.41 ( 1H, d, J=7.6Hz), 7.52 (1H, t, J=7.6Hz), 7.65 (1H, d, J=8.1Hz).
【００４８】
実施例５
実施例３の方法に準じて反応を行い、以下に示す化合物を得た。
Ｎ―（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−プロピルアミン
【化９】

¹H-NMR (CDCl₃) δ; 1.00 (3H, t, J=7.6Hz), 1.71 (2H, m), 3.55 (2H, m), 5.12 (2H, bs), 5.97 (1H, bs), 7.12 (1H, m), 7.42 ( 1H, d, J=7.6Hz), 7.52 (1H, m), 7.58 (1H, m).
【００４９】
実施例６
実施例３の方法に準じて反応を行い、以下に示した化合物を得た。
Ｎ―（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−（２−エトキシエチル）アミン
【化１０】

¹H-NMR (CDCl₃) δ; 1.24 (3H, t, J=7.0Hz), 3.56 (2H, q, J=7.0Hz), 3.68 (2H, m), 3.80 (2H, m), 5.21 (2H, bs), 6.49 (1H, bs), 7.10 (1H, t, J=8.1Hz), 7.42 ( 1H, d, J=8.6Hz), 7.51 (1H, t, J=8.6Hz), 7.56 (1H, d, J=8.1Hz).
【００５０】
実施例７
実施例３の方法に準じて反応を行い、以下に示した化合物を得た。
Ｎ−（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−（テトラヒドロフラン−２−イルメチル）アミン
【化１１】

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ; 7.62 (1H, dd, J=8.3, 0.8 Hz), 7.51 (1H, dt, J=6.9, 1.3 Hz), 7.40 (1H, dd, J=8.6, 0.8 Hz), 7.05-7.11 (1H, m), 6.62 (1H, brm), 5.32 (1H, brm), 3.76-3.96 (4H, m), 2.66-2.83 (1H, m), 1.84-2.11 (4H, m)
【００５１】
実施例８
実施例３の方法に準じて反応を行い、以下に示した化合物を得た。
２−〔（２−アミノキナゾリン−４−イル）アミノ〕ヘキサン−１−オール
【化１２】

¹H NMR (CDCl₃:CD₃OD = 5 : 1) δ; 8.02 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.56 (1H, ddd J = 7.1, 7.1, 1.1 Hz), 7.31 (1H, d, J = 8.0 HZ), 7.21 (1H, ddd, J = 7.1, 7.1, 0.9 Hz), 4.46-4.41 (1H, m), 3.68 (2H, d, J = 5.1 Hz), 1.70-1.55 (2H, m), 1.35-1.20 (4H, m), 0.85-0.75 (3H, m).
¹³C NMR (CDCl₃:CD₃OD = 5:1)δ; 160.7, 155.3, 140.6, 134.3, 123.9, 123.0, 118.1, 109.9, 63.4, 53.2, 30.1, 28.0, 22.3, 13.5.
【００５２】
実施例９
Ｎ−（２−アミノ−６−メトキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン９−１）Ｎ−（２−クロル−６−メトキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン
【化１３】

ペンチルアミン(2.85 g, 32.7 mmol)のテトラヒドロフラン(20 ml)溶液中へ２，４−ジクロ−６−メトキシルキナゾリン(2.50 g, 10.9 mmol)を室温攪拌下加えた。１時間攪拌後、飽和塩化アンモニウム水へ反応液を空け酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ろ液の溶媒を減圧下留去した。残渣へクロロホルムを加え、不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ｎヘキサン１：３から１：２）で精製し、標題化合物(1.36 g, 42.0 %)を得た。
¹H NMR (DMSO-d₆) δ; 8.54 (1H, brt, J = 6.8 Hz), 7.68 (1H, brs), 7.56 (1H, dd, J = 6.4, 6.4 Hz), 7.45-7.39 (1H, 1H), 3.88 (3H, d, J = 1.5 Hz), 3.50 (2H, dt, J = 6.8, 6.8 Hz), 1.72-1.60 (4H, m), 1.40-1.30 (4H, m), 0.95-0.85 (3H, m).
【００５３】
９−２）Ｎ−（２−アミノ−６−メトキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン
【化１４】

Ｎ−（２−クロル−６−メトキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン(1.36 g, 4.86 mmol)と5Mアンモニア／エタノール(160 ml)をオートクレーブ中、浴温１７０℃で16時間保温した。冷却後、減圧下溶媒を留去し、残渣に飽和塩化アンモニウム水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液の溶媒を減圧下留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（２０％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物(345 mg, 27.0 %)を得た。
¹H NMR (DMSO-d₆) δ; 9.32 (1H, brs), 7.86 (1H, brs), 7.55 (2H, brs), 7.38 (2H, brs), 3.87 (3H, s), 3.60-3.53 (2H, m), 1.75-1.60 (2H, m), 1.30-1.27 (4H, m), 0.95-0.85 (3H, m).
【００５４】
実施例１０
２−〔（２−アミノキナゾリン−４−イル）アミノ〕ヘキサンアミド
【化１５】

メチル２−〔（２−クロルキナゾリン−４−イル）アミノ〕ヘキサノエート(200 mg, 0.649 mmol)と5Mアンモニア／エタノール(60 ml)をオートクレーブ中、浴温１７０℃で１１．５時間保温した。冷却後、減圧下溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（２０％メタノール／クロロホルムから４０％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物(94 mg, 52.0 %)を得た。
¹H NMR (DMSO-d₆) δ; 8.81 (1H, d, J = 7.9 HZ), 8.40 (1H, d, J = 7.3, 7.3, 1.1 Hz), 7.51 (1H, brs), 7.45-7.35 (2H, m), 7.39 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.31 (1H, dd, J = 7.1, 7.1 Hz), 7.16 (1H, brs), 4.76-4.68 (1H, m), 2.05-1.80 (2H, m), 1.40-1.25 (4H, m), 0.89-0.85 (3H, m).
【００５５】
実施例１１
実施例９の方法に準じ、Ｎ−（２−クロルキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ベンジルアミンを出発原料に用いて反応を行い、下記化合物を得た。
Ｎ−（２−アミノキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ベンジルアミン
【化１６】

¹H NMR (DMSO-d₆) δ; 9.30 (1H, brt, J = 5.8 Hz), 8.32 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.82 (1H, ddd, J = 7.0, 7.0 Hz), 7.64 (1H, dd, J = 7.5, 0.9 Hz), 7.55 (1H, ddd, J = 8.2, 8.2, 1.3 Hz), 7.40-7.24 (5H, m), 4.77 (2H, d, J = 5.8 Hz).
【００５６】
実施例１２
Ｎ−（２−アミノ−６−ヒドロキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン
【化１７】

Ｎ−（２−アミノ−６−メトキシキナゾリン−４−イル）−Ｎ−ペンチルアミン(50 mg, 0.192 mmol)をジクロルメタン(10 ml)に溶かし、冷却した。−７８℃で１Ｍ三臭化ホウ素／ジクロルメタン溶液(0.5 ml)を加え、同温度で４５分間攪拌した。反応液を室温に戻し、１Ｍ三臭化ホウ素／ジクロルメタン溶液(0.25 ml)を追加し１時間攪拌した。反応液を水に空け、クロロホルム抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、ろ液の溶媒を減圧下留去した。残渣をプレパラティブＴＬＣ（ＰＴＬＣ）（25% メタノール/CHCl₃）で精製し、標題化合物(5.5 mg, 11.0 %)を得た。
¹H NMR (DMSO-d₆) δ; 7.34 (1H, brs), 7.28 (1H, d, J = 8.7 Hz), 7.23 (1H, d, J = 8.7 Hz), 3.60 (2H, t, J = 7.7 Hz), 1.77-1.65 (2H, m), 1.45-1.30 (4H, m), 0.96-0.87 (3H, m).
【００５７】
実施例１３
実施例
マウスリンパ節細胞からのサイトカイン産生に対する実施例３の化合物の作用＜実験方法＞
1.動物
BALB/cマウスは日本チャールスリバー（横浜）より購入し、８週令の雌を使用した。
2.培地
D-MEM (High Glucose)培地（日研生物医学研究所（京都）, Code No. CM4402）に56℃、30分にて非働化した牛胎児血清（Fetal Bovine Serum, Characterized, Code No.A-1115-L, HyClone Lab., Logan, Utah）を20％、２-メルカプトエタノール（Sigma, St Louis, MO, Code No.M-6250）を５０μM、ペニシリンを１００単位／ml、ストレプトマイシンを100μg/ml (Penicilin-Streptomycin; Gibco-BRL, Code No. 15140-122)となるように添加して使用した。
3.薬剤
化合物はジメチルスルホキシド（ナカライテスク（京都）Code No. 11J）にて、100mMとなるように溶解し、培地により最終濃度まで希釈した。
４.感作およびリンパ節細胞調製
KLH ０．２mgをフロイント完全アジュバント（Difco Lab., Detroit, Michigan, Code No.3113-60-5）とともにマウス足蹠皮下に注射した（0.1ml）。８日後に膝窩リンパ節を摘出し、細胞浮遊液を調製した。
５.抗原刺激によるサイトカイン産生
リンパ節細胞浮遊液（2.5 x10⁶ cells/ml）にKLH（0.1mg/ml）および薬剤を添加し、３７℃、５％CO₂存在下で4日間培養（Corning 25850, 0.15ml/well）後、上清中に産生されるサイトカインを特異的なELISA法により定量した。
代表的なＴｈ２タイプサイトカインとしてインターロイキン４（IL-4）及びインターロイキン５(IL-5)を、代表的なＴｈ１タイプサイトカインとしてインターフェロンγ（IFN-γ）を定量した。
６.ELISA法
IL-4の定量は、以下に示すELISA法にて行った。１次抗体として、ラット抗マウスIL-4抗体（Pharmingen, San Diego, CA, Code No.18031D, 0.5mg/ml）を炭酸緩衝液にて２５０倍希釈し、５０μ/wellずつ９６ウェルプレート（Falcon 3912, Becton Dickinson and company, Franklin Lakes, NJ）にまき、一晩４℃にてコートした。その後、プレートは、３％BSAを含むPBS(-)にてブロッキングした（200μl/well）。プレートを０．０５％のポリオキシエチレン・ソルビタン・モノラウレート（Tween 20（登録商標）ナカライテスク（京都） Code No. 281-51）を含むＰＢＳ（−）（PBST）を用いて３回洗浄し、培養上清を５０μl/wellずつまき、室温にて４時間インキュベートした。検量線作成のため、リコンビナントマウスIL-4 (Pharmingen, Code No.19231W）を使用した。プレートをPBSTを用いて３回洗浄し、二次抗体としてビオチン標識ラット抗マウスIL-4抗体（Pharmingen, Code No.18042D, 0.5mg/ml）を0.1％BSAを含むPBS(-)にて５００倍希釈したものを加え（100μl/well）、室温にて1時間インキュベートした。結合した二次抗体は、ストレプトアビジンアルカリフォスファターゼ（Kirkegaard & Perry Lab., Gaithersburg, MD, Code No.15-30-00）（0.25μg/ml, 100μl/well）により検出した。３７℃、１時間インキュベートした後、プレートをPBSTにより３回洗浄し、PNPP基質（p-ニトロフェニルリン酸ニナトリウム、ナカライテスク）（1mg/ml, 100μl/well）を加えて発色させた。測定にはマイクロプレートリーダー（MTP-120 Microplatereader, Corona Electric）を用いた（波長415nm）。
IFN-γの定量には、１次抗体としてラット抗マウスIFN-γ抗体（Pharmingen, San Diego, CA, Code No.18181D, 0.5mg/ml）、二次抗体としてビオチン標識ラット抗マウスIFN-γ抗体（Pharmingen, Code No.18112D, 0.5mg/ml）を用いて同様の方法で行った。検量線作成のため、リコンビナントマウスIFN-γ(Pharmingen, Code No.19301U）を使用した。
IL-5の定量には、１次抗体としてラット抗マウスIL-5抗体（Pharmingen, San Diego, CA, Code No.18051D, 0.5mg/ml）、二次抗体としてビオチン標識ラット抗マウスIL-5抗体（Pharmingen, Code No.18062D, 0.5mg/ml）を用いて同様の方法で行った。検量線作成のため、リコンビナントマウスIL-5 (Pharmingen, Code No.19241W）を使用した。実験は、triplicateで行い、平均値を求めた。
＜結果＞
実施例３の化合物はIL-4及びIL-5の産生を抑制した。一方、IFN-γの産生に対しては顕著な増強作用を示した。
【００５８】
実施例１４
マウスリンパ節細胞からのサイトカイン産生に対する類縁体化合物の作用
＜実験方法＞
１.薬剤
実施例１３と同様に、種々の類縁体化合物はジメチルスルホキシド（ナカライテスク（京都）Code No. 11J）にて、10-100mMとなるように溶解し、培地により最終濃度まで希釈した。
２.抗原感作リンパ節細胞調製法、抗原刺激によるサイトカイン産生法及びはサイトカイン定量法は実施例１３で示したとおりの方法で行った。
代表的なTh2タイプサイトカインとしてIL-4を定量した。それぞれの類縁体化合物に関して、種々の濃度でのIL-4産生抑制率を計算して、化合物濃度と抑制率とのグラフより各類縁体化合物の50%抑制濃度(IC₅₀)値を求めた。
＜結果＞
代表的な化合物に関する結果を表１に示す。
【表１】

【００５９】
実施例１５
マウス生体内におけるIgE産生に対する実施例化合物の作用
＜実験方法＞
１）動物
BALB/cは日本チャールズ・リバー(横浜)より購入し、７週令の雌を使用した。
２）卵白アルブミン感作
卵白アルブミン（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO）(4μg/ml)の生理食塩水溶液に4.5mg/mlの塩化ナトリウム（ナカライテスク（京都））を溶解した液と水酸化アルミニューム・アジュバント(Alu-Gel-S；Serva Feinbiochemica GmbH & Co., Code No.12261）とを等量混合してマウス腹腔内に0.5ml/頭を投与した。
３）薬剤投与方法
被検化合物はメチルセルロースに懸濁して、卵白アルブミン感作日から１２日間、３mg/kg/day経口で連続投与した（１群８匹）。コントロール群にはメチルセルロースのみを投与した。
４）採血及び血清調製
感作後１２日目に麻酔下で眼窩血管叢または心臓より採血し、血漿または血清を調製した。
５）血中総IgE量の測定
血中総IgE量の測定はELISA法を用いて行った。１次抗体としてラット抗マウスIgEモノクローナル抗体（コード番号7627,ヤマサ醤油株式会社、千葉）、２次抗体としてビオチン標識ラット抗マウスIgEモノクローナル抗体（コード番号7617,ヤマサ醤油株式会社、千葉）を用いて、実施例１３と同様な方法で測定した。血清または血漿は４００から８００倍希釈して測定し、血中総IgE量は、マウスIgE（品番７６２６ヤマサ醤油、千葉）を用いた標準曲線から算出した。
６）統計処理法
Bartlettの等分散性検定を行い分散を確認後、Steelの多重比較検定で比較を行った。危険率を５％に設定して有意差の有無を判定した。
【００６０】
＜結果＞
表２に示すように、実施例化合物は卵白アルブミン／水酸化アルミニューム・アジュバント腹腔内感作により誘導される血中総IgEの上昇を有意差をもって抑制した。この実験系における血中総IgEの上昇は、生体内でのIL-4産生に依存していることがすでに確認されている。この結果は、実施例化合物がマウス生体内において、IL-4産生を抑制することにより、血中総IgEの上昇を抑制したことを示す。
【表２】

[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to quinazoline derivatives. Specifically, the present invention suppresses an immune response on the side of a type 2 helper T cell (hereinafter abbreviated as Th2), enhances an immune response on the side of a type 1 helper T cell (hereinafter abbreviated as Th1), and The present invention relates to an immunomodulator comprising, as an active ingredient, a quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof that changes the Th1 / Th2 balance as a whole. Specifically, the present invention relates to a therapeutic agent for allergic diseases in which the Th2 side immune response is abnormally enhanced. More specifically, the present invention suppresses the Th2 side immune response and enhances the Th1 side immune response, thereby causing a disease caused by abnormally enhanced Th2 side immune response, ie, asthma, allergic dermatitis or allergic A quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof that is effective for the treatment or prevention of allergic diseases such as rhinitis, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, and acquired immune deficiency syndrome (AIDS) To an immunomodulator. Further, immunization comprising, as an active ingredient, a quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof for treating or preventing a virus, bacterial infection, malignant tumor or the like resulting from the action of enhancing the immune response on the Th1 side of the present invention. It relates to a regulator. A quinazoline derivative that treats or prevents various diseases such as bacterial infections, malignant tumors, etc., by enhancing Th1 immune response by selective immunomodulatory action that enhances Th1 immune response, or treatment or prevention The present invention relates to an immunomodulator comprising a pharmaceutically acceptable salt as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
Mosmann et al. Proposed for the first time that lymphocytes called helper T cells (hereinafter abbreviated as Th), which play a central role in the immune response, are classified into two different subsets. They classified mouse helper T cells (Th) into a subset of Th1 and Th2 according to the type of cytokine produced (J. Immunol. (1986) 136: 2348-2357). Examples of the Th1-type cytokine include interleukin 2 (IL-2) and interferon γ (IFN-γ). Examples of the Th2-type cytokine include interleukin 4 (IL-4), interleukin 5 (IL-5), interleukin 10 (IL-10), and interleukin 13 (IL-13).
[0003]
Today, this Th1 / Th2 classification concept is not limited to the classification of helper T cell subsets, but from the perspective of which helper T cell subsets are primarily involved in various immune responses in the body. Each was interpreted as “Th1 side immune response” and “Th2 side immune response”. The main components of the immune response on the Th1 side are cytokines such as interferon γ (IFN-γ) and interleukin 2 (IL-2) produced in association with the activation of Th1. These Th1-type cytokines mainly induce viruses, bacteria, etc. by inducing the activation of macrophages, natural killer cells, etc., or by enhancing the activation of Th1 by IL-12 produced from activated macrophages. It is known to be involved in cellular immunity such as defense against infection. On the other hand, cytokines such as IL-4 and IL-5 produced by Th2 activation are the main components of the immune response on the Th2 side. These Th2-type cytokines are known to be involved in humoral immunity such as antibody production from B cells (including IgE class).
[0004]
Since Th2 produces cytokines involved in allergic reactions such as IL-4 and IL-5 as described below, Th2 is regarded as important as a control cell for allergic reactions. For example, IL-4, which is representative of a Th2-type cytokine, induces IgE antibody production against B cells. It also induces gene expression of VCAM-1, an important molecule that functions when eosinophils adhere to vascular endothelial cells and infiltrate tissues (Pharmacia (1993) 29 : 1123-1128). Recently, IL-4 has attracted attention as a differentiation and growth factor of Th2 itself. In addition, IL-5, which is a Th2-type cytokine like IL-4, induces eosinophil differentiation, migration or activation. Allergic inflammation is characterized by triggering eosinophil infiltration, activation and degranulation, as represented by chronic airway inflammation in asthma, for example. Thus, IL-5 is considered to be an inducer of allergic inflammatory reaction.
[0005]
From the above characteristics of Th2-type cytokines, Th2 is one of the two allergic reactions, “immediate type reaction” involving IgE antibodies and mast cells, and “late type reaction” involving eosinophils. Is also recognized as a central cell in allergic inflammatory reactions. Therefore, it is considered that the allergic disease is a disease caused by abnormally enhanced immune response on the Th2 side. This idea is supported by the production of Th2-type cytokines such as IL-4 and IL-5 or the presence of Th2 in airways and skin, which are lesions of allergic diseases. .
[0006]
Based on the above, allergic inflammatory reactions characterized by suppression of both immediate and delayed allergic reactions, or marked infiltration and activation of eosinophils, are at the root cause stage. In order to suppress and treat and prevent allergic diseases in general, it is considered important to suppress the immune response on the Th2 side. In other words, if a drug capable of suppressing the immune response on the Th2 side is developed, it is considered to be an effective therapeutic or preventive drug for allergic diseases.
[0007]
Among allergic diseases, late-onset allergic reaction is considered to play an important role, particularly in severe chronic asthma and atopic dermatitis. However, currently used antiallergic drugs mainly suppress only an immediate allergic reaction centering on antihistamine action and the like, and their clinical effects are not sufficient. From this point of view, it is desirable to develop a drug that suppresses the Th2 side immune response that suppresses both late-onset and immediate allergic reactions as described above, and treats or prevents allergic diseases in general. -ing
[0008]
In addition, bronchodilators represented by xanthine derivatives or β-stimulants that have been used for many years in the treatment of asthma are known to have an action of suppressing the contraction of bronchial smooth muscle caused by various stimuli. However, it is ineffective against chronic airway inflammation, the underlying etiology of asthma. In addition, side effects of the circulatory system become a problem with both xanthine derivatives and β-stimulants. In today's asthma treatment, as clearly shown in the WHO guidelines, treat asthma as chronic inflammation of the airways and make the primary goal of treatment to eliminate this chronic airway inflammation Became. Chronic airway inflammation in asthma is triggered by infiltration, activation and degranulation of eosinophils, and is characterized by pathological features that lead to thickening and fibrosis of the airway epithelium with chronic inflammation. The guidelines currently position inhaled steroids, the only drug effective for this chronic airway inflammation, as the first-line drug for moderate and higher asthma.
[0009]
Eventually, only steroids are effective against these severe asthma and atopic dermatitis, and the steroids are currently used frequently. However, there is a problem that various side effects (steroid dermatosis, induced infection, adrenal cortex dysfunction, etc.) are caused by long-term administration of the steroid.
Also from these viewpoints, by suppressing the immune response on the Th2 side selectively, both immediate and late-type allergic reactions are suppressed, or marked infiltration and activation of eosinophils are characterized. Therefore, there is a demand for the development of a drug capable of suppressing the allergic inflammatory reaction at the stage of its root cause and treating and preventing allergic diseases in general.
[0010]
Furthermore, in the case of developing therapeutic or preventive drugs with fewer side effects, if a drug that suppresses the immune response on the Th2 side as described above enhances the immune response on the Th1 side, it is more useful as a medicine. It seems convenient. That is, as described above, Th1 plays an important role for the living body to protect against viruses, bacteria, etc. by mainly producing IFN-γ, and thus suppresses the immune response on the Th2 side. If a drug developed for the purpose enhances the action of Th1, it can be said that it is highly desirable in terms of side effects. For example, it is known that cyclosporine and FK506, which are immunosuppressants, strongly suppress the activation of Th2. However, these cyclosporine and FK506 have a non-specific immunosuppressive effect that suppresses Th1 activation in the same manner as or even stronger than Th2 activation. Serious side effects such as opportunistic infections due to such nonspecific immunosuppressive effects or an increase in the carcinogenic rate are problematic. Similar problems can be considered for other non-specific immunosuppressive agents.
[0011]
Based on the above, if a drug that enhances the immune response on the Th1 side represented by the production of IFN-γ and suppresses the immune response on the Th2 side represented by the production of IL-4 and IL-5 is developed. Therefore, it is considered to be an effective therapeutic agent or preventive agent for allergic diseases as described above.
In addition, autoimmune diseases in which antibody production or humoral immunity is abnormally enhanced, such as systemic lupus erythematosus, is also presumed to have an abnormally enhanced immune response on the Th2 side (Medical Immunology (1988) 15: 401). Accordingly, a drug that enhances the Th1 side immune response and suppresses the Th2 side immune response as described above is expected to be a therapeutic agent for autoimmune diseases.
[0012]
WO 93/07124 discloses quinazoline derivatives that exhibit activity as phosphodiesterase inhibitors. Moreover, it discloses about the possibility as an antiallergic agent based on the activity as a phosphodiesterase inhibitor. However, in the case of theophylline, which is a representative antiallergic agent based on the activity as an existing phosphodiesterase inhibitor, the main antiallergic action is bronchodilation in asthma. As described above, bronchodilators represented by xanthine derivatives or β-stimulants are known to have an action of suppressing the contraction of bronchial smooth muscle caused by various stimuli, but only an action of suppressing symptoms, It is ineffective against chronic airway inflammation, the underlying etiology of asthma. Furthermore, when considering the phosphodiesterase isoenzyme, the isoenzyme that is mainly involved in allergic inflammation is cAMP phosphodiesterase (PDE-III or IV) and inhibits cAMP phosphodiesterase. As a result, the intracellular cAMP concentration is increased, and an anti-inflammatory effect is considered to be expressed. On the other hand, the inhibitors disclosed in WO 93/07124 are those against cGMP phosphodiesterase (PDE-V) and calmodulin-dependent phosphodiesterase (PDE-I) as isoenzymes, and these cGMP phosphodiesterases. Inhibition of diesterase increases intracellular cGMP concentration and exhibits vasodilation and bronchodilation, but no anti-inflammatory effect can be expected because it has no inhibitory action on inflammatory cells. Rather, many researchers today are investigating PDE-IV specific inhibitors for the purpose of reducing side effects and enhancing antiallergic effects.
WO 93/07124 does not specifically describe the quinazoline derivative of the present invention that enhances the Th1 immune response and suppresses the Th2 immune response. Further, the quinazoline derivative of the present invention does not exhibit phosphodiesterase inhibitory activity.
[0013]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a compound that modulates the immune response by enhancing the Th1 side immune response and suppressing the Th2 side immune response, thereby changing the overall Th1 / Th2 balance. . Specifically, production of Th1-type cytokines such as interferon γ (IFN-γ) is enhanced, and conversely production of Th2-type cytokines such as interleukin 4 (IL-4) and interleukin 5 (IL-5). It is the provision of compounds that inhibit. More specifically, for example, therapeutic or preventive agents for allergic diseases, parasitic infections, autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, viral or bacterial infections, malignant tumors or acquired immune deficiency syndrome (AIDS), etc. Is an offer.
[0014]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that quinazoline derivatives and salts thereof enhance the Th1 side immune response and suppress the Th2 side immune response. It has been found that the Th1 / Th2 balance is changed and the immune response is regulated, and the present invention has been completed.
[0015]
The present invention is
1. Formula (1)
[Chemical formula 2]

(Wherein R ¹ represents a linear or branched lower alkyl group having 2 to 6 carbon atoms, a lower alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, a lower alkynyl group having 3 to 6 carbon atoms, a hydroxyl group, a halogen atom, or A straight or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms substituted by an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms, a phenyl group, a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms, or an oxygen atom from 1 as a hetero atom Represents a 5- to 7-membered saturated heterocyclic ring containing 2
R ² represents a hydrogen atom, a linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a carbamoyl group or a hydroxymethyl group,
R ³ represents a hydrogen atom or a linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms,
R ⁴ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a halogen atom, R ⁵ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a halogen atom, and R ⁶ represents A hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a halogen atom is represented, and R ⁷ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a halogen atom. ) Or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
2. 1. R ¹ is a linear or branched lower alkyl group having 2 to 5 carbon atoms. The described quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
3.1. Or 2. An immunomodulator that suppresses an immune response on the side of a type 2 helper T cell and enhances an immune response on the side of a type 1 helper T cell, comprising the described quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient;
4.1. Or 2. A therapeutic or prophylactic agent for a disease in which the immune response on the type 2 helper T cell side is abnormally enhanced, comprising the described quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient;
5. 3. Diseases with an abnormally enhanced immune response on the type 2 helper T cell side are autoimmune diseases such as allergic diseases, parasitic infections, and systemic lupus erythematosus. The therapeutic or prophylactic agent as described;
6). 3. A disease in which the immune response on the type 2 helper T cell side is abnormally increased is an allergic disease. The therapeutic or prophylactic agent as described;
7). 5. The allergic disease with an abnormally enhanced immune response on the type 2 helper T cell side is asthma, allergic rhinitis or atopic dermatitis. The therapeutic or prophylactic agent as described; or 8.1. Or 2. A therapeutic or prophylactic agent for a virus or bacterial infection, malignant tumor or acquired immune deficiency syndrome (AIDS) comprising the described quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient;
About.
[0016]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
[0017]
The substituents in the present invention are specifically described below.
Examples of the linear or branched lower alkyl group having 2 to 6 carbon atoms in R ¹ include ethyl, propyl, 1-methylethyl, butyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, pentyl group, and 1-methylbutyl. 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 2-ethylpropyl, 1-methylpentyl group, 2-methylpentyl group, 3-methylpentyl group, 4-methylpentyl group, 1-ethylbutyl, 2-ethylbutyl , 1-propylpropyl and the like.
Preferred examples of the linear or branched lower alkyl group having 2 to 6 carbon atoms for R ¹ include a linear or branched lower alkyl group having 2 to 5 carbon atoms, specifically, For example, ethyl, propyl, 1-methylethyl, butyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, pentyl group, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 2-ethylpropyl and the like can be mentioned. It is done.
[0018]
Examples of the lower alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms in R ¹ include vinyl, allyl, butenyl, pentenyl and the like.
Examples of the lower alkynyl group having 3 to 6 carbon atoms in R ¹ include propargyl, butynyl, pentynyl and the like.
[0019]
Examples of the lower alkyl group in the straight chain or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms substituted with a hydroxyl group, a halogen atom or an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms in R ¹ include, for example, methyl, ethyl, propyl, Examples include 1-methylethyl, butyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, pentyl group, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 2-ethylpropyl, hexyl and the like.
[0020]
Examples of the halogen atom for the substituent of the linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ¹ include fluorine, chlorine, bromine, iodine and the like. Examples of the alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms of the substituent of the linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ¹ include methoxy, ethoxy, propyloxy, butoxy and the like.
When the substituent of the linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ¹ is a hydroxyl group, the substitution position is preferably not the terminal of the alkyl group.
Examples of the number of substituents in the substituent of the linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ¹ include 1 or 2 or more.
Preferred examples of the substituent of the straight or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ¹ include a hydroxyl group and a hydroxymethyl group, and the substitution position is 1 or 2 position (4 of the quinazoline ring). 2 or 3 position as viewed from the amino group at the position) is preferred.
[0021]
Examples of the cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms in R ¹ include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl and the like.
Examples of the 5- to 7-membered saturated heterocyclic ring containing 1 to 2 oxygen atoms as a hetero atom in R ¹ include tetrahydrofuran, oxane, 1,4-dioxane, oxepane and the like.
[0022]
Examples of the linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms in R ² and R ³ include, for example, methyl, ethyl, propyl, 1-methylethyl, butyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, pentyl group 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 2-ethylpropyl, 1-methylpentyl group, 2-methylpentyl group, 3-methylpentyl group, 4-methylpentyl group, 1-ethylbutyl , 2-ethylbutyl, 1-propylpropyl and the like.
[0023]
Examples of the alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms in R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ and R ⁷ include a linear or branched lower alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, specifically, for example, methoxy, Examples include ethoxy, propoxy, 2-propoxy, butoxy, 1,1-dimethylethoxy, pentoxy, hexoxy and the like.
[0024]
Examples of the halogen atom in R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ and R ⁷ include fluorine, chlorine, bromine and iodine.
[0025]
The heterocyclic compound which is an active ingredient of the medicament of the present invention can be converted into a pharmaceutically acceptable salt. Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts and base addition salts. Examples of acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloride, hydrobromide, and sulfate, organic acids such as citrate, oxalate, malate, tartrate, fumarate, and maleate. Examples of the base addition salt include inorganic base salts such as sodium salt and calcium salt, and organic base salts such as meglumine salt and trishydroxymethylaminomethane salt. The present invention also includes solvates such as hydrates of quinazoline derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof.
[0026]
The compound represented by Formula (1) of this invention can be manufactured with the following method and the method according to it.
[Chemical 3]

In the formula, R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ and R ⁷ represent the same meaning as in formula (1).
Manufacturing method 1
Compound (22) can be obtained by reacting compound (21) with phosphorus oxychloride (JP-A-2-502462, JP-A-3-17068, Journal of Chemical Society (J. Chem. Soc. 775)). (1947)), Journal of Chemical Society (J. Chem. Soc. 1766, (1948))). In the reaction, a solvent may be added as necessary. Examples of the solvent include aromatic hydrocarbon solvents such as toluene and xylene. In the reaction, a reaction aid such as N, N-dimethylaminopyridine may be used in some cases. The reaction temperature is selected, for example, from a temperature range from room temperature to around the boiling point of the solvent.
[0027]
Compound (22) can be reacted with compound (23) to give compound (1) of the present invention. Examples of the reaction solvent include aromatic hydrocarbon solvents such as toluene and xylene, ether solvents such as tetrahydrofuran (hereinafter abbreviated as THF), dioxane, ethanol, isopropyl alcohol (hereinafter abbreviated as IPA), butanol and the like. Examples include alcohol solvents, dimethylformamide (hereinafter abbreviated as DMF), and inert solvents such as acetonitrile. In the reaction, an organic base such as triethylamine or an inorganic base such as sodium carbonate or potassium carbonate may be added as necessary. The reaction temperature is selected, for example, from a temperature range from room temperature to around the boiling point of the solvent.
[0028]
Manufacturing method 2
Compound (25) can be obtained by reacting compound (24) with compound (23). Examples of the reaction solvent include aromatic hydrocarbon solvents such as toluene and xylene, ether solvents such as THF and dioxane, alcohol solvents such as ethanol, IPA and butanol, and inert solvents such as DMF and acetonitrile. It is done. In the reaction, an organic base such as triethylamine or an inorganic base such as sodium carbonate or potassium carbonate may be added as necessary. The reaction temperature is selected, for example, from a temperature range from room temperature to around the boiling point of the solvent.
[0029]
Compound (1) can be obtained by reacting compound (25) with ammonia in an organic solvent. Examples of the organic solvent include alcohol solvents such as methanol and ethanol, and ether solvents such as dioxane and ethylene glycol dimethyl ether. The reaction is carried out in an autoclave at a temperature range from about room temperature to about 200 ° C.
Moreover, this invention compound (1) can also be obtained by reducing a compound (25) with triphenylphosphine after reacting with sodium azide. The reaction with sodium azide is carried out in an inert solvent such as DMF. The reaction temperature is selected from the range of about room temperature to around the boiling point of the solvent. The reduction with triphenylphosphine is carried out in an ether solvent such as THF. The reaction temperature is selected from a temperature range from about room temperature to around the boiling point of the solvent.
[0030]
The raw materials were synthesized according to known reactions or known reactions.
The compound included in the present invention represented by the formula (1) or an intermediate for producing the compound can be purified by a usual method. For example, it can be purified by column chromatography, recrystallization or the like. Examples of the recrystallization solvent include alcohol solvents such as methanol, ethanol and 2-propanol, ether solvents such as diethyl ether, ester solvents such as ethyl acetate, aromatic hydrocarbon solvents such as toluene, and ketones such as acetone. And solvent solvents, hydrocarbon solvents such as hexane, and mixed solvents thereof.
[0031]
Moreover, when performing the above-mentioned reaction, if necessary, protection and deprotection techniques can be used. The technology of protection and deprotection is described in detail in (TW Greene and PGM Wuts, “Protecting Groups in Organic Synthesis”, 1991, JOHN WILEY & SONS, INC.).
[0032]
The quinazoline derivative of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof may form a solvate such as a hydrate, and the present invention includes these.
[0033]
The compounds included in the present invention may have asymmetry or may have a substituent having an asymmetric carbon, and such compounds have optical isomers. The compounds of the present invention include mixtures of these isomers and isolated ones. Examples of a method for obtaining such an optical isomer purely include optical resolution.
[0034]
As an optical resolution method, the compound of the present invention or an intermediate thereof in an inert solvent (for example, alcohol solvents such as methanol, ethanol and 2-propanol, ether solvents such as diethyl ether, ester solvents such as ethyl acetate, toluene, etc. Aromatic hydrocarbon solvents such as acetonitrile, and mixed solvents thereof), optically active acids (for example, monocarboxylic acids such as mandelic acid, N-benzyloxyalanine, lactic acid, tartaric acid, o-diisopropylidene tartaric acid, It is also possible to form salts with dicarboxylic acids such as malic acid, sulfonic acids such as camphor sulfonic acid and bromocamphor sulfonic acid).
When the compound of the present invention or an intermediate thereof has an acidic substituent such as a carboxyl group, a salt is formed with an optically active amine (for example, organic amines such as α-phenethylamine, quinine, quinidine, cinchonidine, cinchonine, strychnine). You can also.
[0035]
Examples of the temperature at which the salt is formed include a range from room temperature to the boiling point of the solvent. In order to improve the optical purity, it is desirable to raise the temperature once to near the boiling point of the solvent. Before the collected salt is collected by filtration, it can be cooled as necessary to improve the yield. The amount of the optically active acid or amine used is suitably in the range of about 0.5 to about 2.0 equivalents, preferably in the range of about 1 equivalent, relative to the substrate. Crystals in an inert solvent as necessary (for example, alcohol solvents such as methanol, ethanol, 2-propanol, ether solvents such as diethyl ether, ester solvents such as ethyl acetate, aromatic hydrocarbon solvents such as toluene, It can also be recrystallized with acetonitrile or a mixed solvent thereof to obtain a highly pure optically active salt. If necessary, the obtained salt can be treated with an acid or a base by a conventional method to obtain a free form.
[0036]
The quinazoline derivative of the present invention can be administered orally or parenterally. When administered orally, it can be administered in a commonly used dosage form. Parenterally, it can be administered in the form of topical administration, injection, transdermal preparation, nasal preparation and the like. Examples of the oral or rectal administration agent include capsules, tablets, pills, powders, cachets, suppositories, and liquids. Examples of injections include sterile solutions or suspensions. Examples of the topical administration agent include creams, ointments, lotions, transdermal agents (ordinary patches, matrix agents) and the like.
The above-mentioned dosage form is formulated by a usual method together with pharmaceutically acceptable excipients and additives. Examples of pharmaceutically acceptable excipients and additives include carriers, binders, fragrances, buffers, thickeners, colorants, stabilizers, emulsifiers, dispersants, suspending agents, preservatives, and the like. It is done.
[0037]
Examples of the pharmaceutically acceptable carrier include magnesium carbonate, magnesium stearate, talc, sugar, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, a low melting wax, cocoa butter and the like. It is done. Capsules can be formulated by placing the compound of the present invention in a pharmaceutically acceptable carrier. The compounds of the present invention can be mixed with pharmaceutically acceptable excipients or placed in capsules without excipients. Cachets can be produced in the same manner.
Examples of the liquid for injection include solutions, suspensions, emulsions and the like. Examples thereof include an aqueous solution and a water-propylene glycol solution. The solution can also be produced in the form of a solution of polyethylene glycol and / or propylene glycol, which may contain water. A solution suitable for oral administration can be produced by adding the compound of the present invention to water and adding a colorant, a fragrance, a stabilizer, a sweetener, a solubilizer, a thickener and the like as necessary. A solution suitable for oral administration can also be produced by adding the compound of the present invention together with a dispersant to water to make it viscous. Examples of the thickener include pharmaceutically acceptable natural or synthetic gum, resin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, or a known suspending agent.
[0038]
Examples of the topical administration agent include the above liquid preparations, creams, aerosols, sprays, powders, lotions, ointments and the like. The above-mentioned topical preparation can be produced by mixing the compound of the present invention with pharmaceutically acceptable diluents and carriers that are usually used. Ointments and creams are obtained, for example, by adding a thickener and / or a gelling agent to an aqueous or oily base. Examples of the base include water, liquid paraffin, vegetable oil (peanut oil, castor oil, etc.) and the like. Examples of the thickener include soft paraffin, aluminum stearate, cetostearyl alcohol, propylene glycol, polyethylene glycol, lanolin, hydrogenated lanolin, beeswax and the like.
[0039]
Lotions can add one or more pharmaceutically acceptable stabilizers, suspending agents, emulsifiers, diffusing agents, thickeners, colorants, fragrances, etc. to an aqueous or oily base. .
Powders are formulated with a pharmaceutically acceptable powder base. Examples of the base include talc, lactose, starch and the like. Drops can be formulated with an aqueous or non-aqueous base and one or more pharmaceutically acceptable diffusing agents, suspending agents, solubilizing agents, and the like.
The topical administration agent may contain a preservative such as methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, chlorocresol, or benzalkonium chloride, and a bacterial growth inhibitor, if necessary.
[0040]
Formulations in the form of liquid sprays, powders or drops containing the compound of the present invention as an active ingredient can be administered nasally.
The dose and frequency of administration vary depending on symptoms, age, body weight, dosage form, etc., but when administered orally, it is usually in the range of about 1 to about 500 mg per day, preferably about 5 to about 100 mg per day for adults. The range can be administered once or divided into several doses. When administered as an injection, it can be administered in the range of about 0.1 to about 300 mg, preferably in the range of about 1 to about 100 mg, in one or several divided doses.
[0041]
The quinazoline derivative of the present invention suppresses IL-4 production and IL-5 production from mouse lymph node cells by antigen-specific stimulation, and conversely enhances IFN-γ production. The cytokine production regulatory activity test used for this evaluation is carried out by the following method.
[0042]
Cytokine production regulatory activity test
0.2 mg of Keyhole Lympet Hemocyanin (hereinafter referred to as KLH) is supplemented with aluminum hydroxide adjuvant (Alu-Gel-S; Serva Feinbiochemica GmbH & Co., Code No. 12261) or Freund's complete adjuvant (Difco Lab., Detroit, Michigan) , Code No.3113-60-5) and injected subcutaneously into the mouse footpad (0.1 ml). After 8 to 10 days, popliteal lymph nodes are removed, and a cell suspension is prepared using animal cell culture medium.
KLH (1 to 100 μg / ml) and drug are added to lymph node cell suspension (1 to 5 x 10 ⁶ cells / ml) and cultured for 4 days at 37 ° C in the presence of 5% CO ₂ (Corning 25850, 0.15 ml / ml). well), and then the cytokine produced in the supernatant is quantified by a specific ELISA method.
Interleukin 4 (IL-4) and interleukin 5 (IL-5) are quantified as representative Th2-type cytokines, and interferon γ (IFN-γ) is quantified as representative Th1-type cytokines.
【Example】
[0043]
Reference Example 1 Synthesis of 2-amino-4-chloroquinazoline

A mixture of 2-amino-4-hydroxyquinazoline hydrochloride (16 g) and phosphorus oxychloride (100 ml) was refluxed for 4.5 hours. After completion of the reaction, excess phosphorus oxychloride was distilled off, and toluene was added to the residue and distilled off again. Ice water and sodium hydroxide were added to the residue, and the mixture was stirred overnight, and the solid was collected by filtration to obtain the title compound (9.04 g, 38.6%).
¹ H NMR (CDCl ₃ ) δ; 8.05 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.75 (1H, t, J = 8.1 Hz), 7.59 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.35 (1H, t , J = 7.8 Hz), 5.32 (2H, brs)
[0044]
Example 1
N- (2-Aminoquinazolin-4-yl) -N-cyclohexylmethylamine

A mixture of 2-amino-4-chloroquinazoline (370.1 mg, 2.06 mmol), cyclohexylmethylamine (466 mg, 4.21 mmol) and dimethylformamide (2 ml) was kept at 90 ° C. for 2 hours. The reaction solution was cooled, water was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with chloroform. The organic layer was washed with saturated brine. The organic layer was dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (3% MeOH / CHCl3) to obtain the title compound (68 mg, 12.9%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 1.01 (2H, m), 1.22 (3H, m), 1.76 (6H, m), 3.43 (2H, m), 5.16 (2H, bs), 6.06 (1H, bs ), 7.10 (1H, t, J = 8.3Hz), 7.42 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.51 (1H, t, J = 8.1Hz), 7.61 (1H, d, J = 8.3Hz)
[0045]
Example 2
Reaction was performed according to the method of Example 1 to obtain the following compounds.
1-((2-Aminoquinazolin-4-yl) amino) pentan-2-ol

¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 0.96 (3H, t, J = 6.8Hz), 1.51 (4H, m), 3.50 (1H, m), 3.79 (1H, m), 3.90 (1H, m), 4.92 (2H, bs), 6.28 (1H, bs), 7.10 (1H, t, J = 7.6Hz), 7.41 (1H, d, J = 7.8Hz), 7.54 (2H, m).
[0046]
Example 3
N- (2-aminoquinazolin-4-yl) -N-pentylamine

Pentylamine (262 mg, 3.00 mmol) was added to a mixture of 2-amino-4-chloroquinazoline (449 mg, 2.50 mmol), triethylamine (1.27 g, 12.5 mmol) and ethanol (5 ml) at room temperature. The reaction solution was kept at an internal temperature of 80 ° C. for 1 hour, and after cooling, water was added to the reaction solution. Extraction was performed with chloroform, and the organic layer was washed with saturated brine. The organic layer was dried over sodium sulfate and filtered, and the solvent of the filtrate was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (3% methanol / CHCl ₃ ) to obtain the title compound (69 mg, 12.0%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 0.90 (3H, m), 1.37 (4H, m), 1.68 (2H, m), 3.56 (2H, m), 5.32 (2H, bs), 6.25 (1H, bs ), 7.11 (1H, t, J = 8.0Hz), 7.41 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.52 (1H, t, J = 8.1Hz), 7.67 (1H, d, J = 8.0Hz).
[0047]
Example 4
Reaction was performed according to the method of Example 3 to obtain the following compounds.
N- (2-Aminoquinazolin-4-yl) -N-butylamine

¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 0.95 (3H, t, J = 7.3Hz), 1.42 (2H, m), 1.67 (2H, m), 3.57 (2H, m), 5.23 (2H, bs), 6.19 (1H, bs), 7.11 (1H, t, J = 8.1Hz), 7.41 (1H, d, J = 7.6Hz), 7.52 (1H, t, J = 7.6Hz), 7.65 (1H, d, J = 8.1Hz).
[0048]
Example 5
Reaction was performed according to the method of Example 3 to obtain the following compounds.
N- (2-Aminoquinazolin-4-yl) -N-propylamine

¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 1.00 (3H, t, J = 7.6Hz), 1.71 (2H, m), 3.55 (2H, m), 5.12 (2H, bs), 5.97 (1H, bs), 7.12 (1H, m), 7.42 (1H, d, J = 7.6Hz), 7.52 (1H, m), 7.58 (1H, m).
[0049]
Example 6
Reaction was performed according to the method of Example 3 to obtain the compounds shown below.
N- (2-Aminoquinazolin-4-yl) -N- (2-ethoxyethyl) amine

¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ; 1.24 (3H, t, J = 7.0Hz), 3.56 (2H, q, J = 7.0Hz), 3.68 (2H, m), 3.80 (2H, m), 5.21 ( 2H, bs), 6.49 (1H, bs), 7.10 (1H, t, J = 8.1Hz), 7.42 (1H, d, J = 8.6Hz), 7.51 (1H, t, J = 8.6Hz), 7.56 ( (1H, d, J = 8.1Hz).
[0050]
Example 7
Reaction was performed according to the method of Example 3 to obtain the compounds shown below.
N- (2-Aminoquinazolin-4-yl) -N- (tetrahydrofuran-2-ylmethyl) amine

¹ H NMR (300 MHz, CDCl ₃ ) δ; 7.62 (1H, dd, J = 8.3, 0.8 Hz), 7.51 (1H, dt, J = 6.9, 1.3 Hz), 7.40 (1H, dd, J = 8.6, 0.8 Hz), 7.05-7.11 (1H, m), 6.62 (1H, brm), 5.32 (1H, brm), 3.76-3.96 (4H, m), 2.66-2.83 (1H, m), 1.84-2.11 (4H , m)
[0051]
Example 8
Reaction was performed according to the method of Example 3 to obtain the compounds shown below.
2-[(2-Aminoquinazolin-4-yl) amino] hexan-1-ol

¹ H NMR (CDCl ₃ : CD ₃ OD = 5: 1) δ; 8.02 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.56 (1H, ddd J = 7.1, 7.1, 1.1 Hz), 7.31 (1H, d, J = 8.0 HZ), 7.21 (1H, ddd, J = 7.1, 7.1, 0.9 Hz), 4.46-4.41 (1H, m), 3.68 (2H, d, J = 5.1 Hz), 1.70-1.55 (2H, m ), 1.35-1.20 (4H, m), 0.85-0.75 (3H, m).
¹³ C NMR (CDCl ₃ : CD ₃ OD = 5: 1) δ; 160.7, 155.3, 140.6, 134.3, 123.9, 123.0, 118.1, 109.9, 63.4, 53.2, 30.1, 28.0, 22.3, 13.5.
[0052]
Example 9
N- (2-Amino-6-methoxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine 9-1) N- (2-chloro-6-methoxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine

2,4-Dichloro-6-methoxylquinazoline (2.50 g, 10.9 mmol) was added to a solution of pentylamine (2.85 g, 32.7 mmol) in tetrahydrofuran (20 ml) with stirring at room temperature. After stirring for 1 hour, the reaction solution was poured into saturated aqueous ammonium chloride and extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate and filtered, and the solvent of the filtrate was evaporated under reduced pressure. Chloroform was added to the residue, the insoluble material was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (ethyl acetate: n-hexane 1: 3 to 1: 2) to give the title compound (1.36 g, 42.0%).
¹ H NMR (DMSO-d ₆ ) δ; 8.54 (1H, brt, J = 6.8 Hz), 7.68 (1H, brs), 7.56 (1H, dd, J = 6.4, 6.4 Hz), 7.45-7.39 (1H, 1H), 3.88 (3H, d, J = 1.5 Hz), 3.50 (2H, dt, J = 6.8, 6.8 Hz), 1.72-1.60 (4H, m), 1.40-1.30 (4H, m), 0.95-0.85 (3H, m).
[0053]
9-2) N- (2-Amino-6-methoxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine

N- (2-Chloro-6-methoxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine (1.36 g, 4.86 mmol) and 5M ammonia / ethanol (160 ml) were kept in an autoclave at a bath temperature of 170 ° C. for 16 hours. . After cooling, the solvent was distilled off under reduced pressure, saturated aqueous ammonium chloride was added to the residue, and the mixture was extracted with chloroform. The organic layer was washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered, and the solvent of the filtrate was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (20% methanol / chloroform) to obtain the title compound (345 mg, 27.0%).
¹ H NMR (DMSO-d ₆ ) δ; 9.32 (1H, brs), 7.86 (1H, brs), 7.55 (2H, brs), 7.38 (2H, brs), 3.87 (3H, s), 3.60-3.53 ( 2H, m), 1.75-1.60 (2H, m), 1.30-1.27 (4H, m), 0.95-0.85 (3H, m).
[0054]
Example 10
2-[(2-Aminoquinazolin-4-yl) amino] hexanamide

Methyl 2-[(2-chloroquinazolin-4-yl) amino] hexanoate (200 mg, 0.649 mmol) and 5M ammonia / ethanol (60 ml) were kept in an autoclave at a bath temperature of 170 ° C. for 11.5 hours. After cooling, the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (20% methanol / chloroform to 40% methanol / chloroform) to give the title compound (94 mg, 52.0%).
¹ H NMR (DMSO-d ₆ ) δ; 8.81 (1H, d, J = 7.9 HZ), 8.40 (1H, d, J = 7.3, 7.3, 1.1 Hz), 7.51 (1H, brs), 7.45-7.35 ( 2H, m), 7.39 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.31 (1H, dd, J = 7.1, 7.1 Hz), 7.16 (1H, brs), 4.76-4.68 (1H, m), 2.05-1.80 (2H, m), 1.40-1.25 (4H, m), 0.89-0.85 (3H, m).
[0055]
Example 11
According to the method of Example 9, the reaction was carried out using N- (2-chloroquinazolin-4-yl) -N-benzylamine as a starting material, and the following compound was obtained.
N- (2-aminoquinazolin-4-yl) -N-benzylamine

¹ H NMR (DMSO-d ₆ ) δ; 9.30 (1H, brt, J = 5.8 Hz), 8.32 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.82 (1H, ddd, J = 7.0, 7.0 Hz), 7.64 (1H, dd, J = 7.5, 0.9 Hz), 7.55 (1H, ddd, J = 8.2, 8.2, 1.3 Hz), 7.40-7.24 (5H, m), 4.77 (2H, d, J = 5.8 Hz).
[0056]
Example 12
N- (2-amino-6-hydroxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine

N- (2-amino-6-methoxyquinazolin-4-yl) -N-pentylamine (50 mg, 0.192 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 ml) and cooled. A 1M boron tribromide / dichloromethane solution (0.5 ml) was added at −78 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 45 minutes. The reaction solution was returned to room temperature, 1M boron tribromide / dichloromethane solution (0.25 ml) was added, and the mixture was stirred for 1 hour. The reaction solution was poured into water and extracted with chloroform. The organic layer was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, filtered, and the filtrate's solvent was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by preparative TLC (PTLC) (25% methanol / CHCl ₃ ) to obtain the title compound (5.5 mg, 11.0%).
¹ H NMR (DMSO-d ₆ ) δ; 7.34 (1H, brs), 7.28 (1H, d, J = 8.7 Hz), 7.23 (1H, d, J = 8.7 Hz), 3.60 (2H, t, J = 7.7 Hz), 1.77-1.65 (2H, m), 1.45-1.30 (4H, m), 0.96-0.87 (3H, m).
[0057]
Example 13
Example Effect of the compound of Example 3 on cytokine production from mouse lymph node cells <Method of Experiment>
1.Animals
BALB / c mice were purchased from Japan Charles River (Yokohama) and 8 week old females were used.
2. Medium
Fetal Bovine Serum, Characterized, Code No. A- inactivated in D-MEM (High Glucose) medium (Niken Biomedical Research Institute (Kyoto), Code No. CM4402) at 56 ° C for 30 minutes 1115-L, HyClone Lab., Logan, Utah) 20%, 2-mercaptoethanol (Sigma, St Louis, MO, Code No. M-6250) 50 μM, penicillin 100 units / ml, streptomycin 100 μg / ml (Penicilin-Streptomycin; Gibco-BRL, Code No. 15140-122) was added and used.
3. The drug compound was dissolved in dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque (Kyoto) Code No. 11J) to a concentration of 100 mM and diluted to the final concentration with a medium.
4. Sensitization and lymph node cell preparation
0.2 mg of KLH was injected subcutaneously into the footpad of mice (0.1 ml) together with Freund's complete adjuvant (Difco Lab., Detroit, Michigan, Code No. 3113-60-5). Eight days later, popliteal lymph nodes were removed and a cell suspension was prepared.
5. KLH (0.1 mg / ml) and drug are added to the suspension of cytokine-producing lymph node cells by antigen stimulation (2.5 x 10 ⁶ cells / ml) and cultured for 4 days in the presence of 37 ° C and 5% CO ₂ (Corning 25850 0.15 ml / well), the cytokine produced in the supernatant was quantified by a specific ELISA method.
Interleukin 4 (IL-4) and interleukin 5 (IL-5) were quantified as representative Th2-type cytokines, and interferon γ (IFN-γ) was quantified as representative Th1-type cytokines.
6.ELISA method
IL-4 was quantified by the ELISA method shown below. As a primary antibody, rat anti-mouse IL-4 antibody (Pharmingen, San Diego, CA, Code No. 18031D, 0.5 mg / ml) was diluted 250-fold with carbonate buffer, and 50 μ / well each in a 96-well plate (Falcon 3912, Becton Dickinson and company, Franklin Lakes, NJ) and coated overnight at 4 ° C. Thereafter, the plate was blocked with PBS (−) containing 3% BSA (200 μl / well). Wash the plate 3 times with PBS (-) (PBST) containing 0.05% polyoxyethylene sorbitan monolaurate (Tween 20 (registered trademark) Nacalai Tesque (Kyoto) Code No. 281-51) The culture supernatant was seeded at 50 μl / well and incubated at room temperature for 4 hours. Recombinant mouse IL-4 (Pharmingen, Code No. 19231W) was used for preparing a calibration curve. The plate was washed 3 times with PBST, and a biotin-labeled rat anti-mouse IL-4 antibody (Pharmingen, Code No. 18042D, 0.5 mg / ml) as a secondary antibody was added to PBS (-) containing 0.1% BSA in 500 (-). Double dilution was added (100 μl / well) and incubated at room temperature for 1 hour. The bound secondary antibody was detected by streptavidin alkaline phosphatase (Kirkegaard & Perry Lab., Gaithersburg, MD, Code No. 15-30-00) (0.25 μg / ml, 100 μl / well). After incubating at 37 ° C. for 1 hour, the plate was washed three times with PBST, and developed by adding PNPP substrate (disodium p-nitrophenyl phosphate, Nacalai Tesque) (1 mg / ml, 100 μl / well). A microplate reader (MTP-120 Microplatereader, Corona Electric) was used for the measurement (wavelength 415 nm).
For quantification of IFN-γ, rat anti-mouse IFN-γ antibody (Pharmingen, San Diego, CA, Code No. 18181D, 0.5 mg / ml) was used as the primary antibody, and biotin-labeled rat anti-mouse IFN-γ was used as the secondary antibody. An antibody (Pharmingen, Code No. 18112D, 0.5 mg / ml) was used in the same manner. Recombinant mouse IFN-γ (Pharmingen, Code No. 19301U) was used to create a calibration curve.
For quantification of IL-5, rat anti-mouse IL-5 antibody (Pharmingen, San Diego, CA, Code No. 18051D, 0.5 mg / ml) was used as the primary antibody, and biotin-labeled rat anti-mouse IL-5 was used as the secondary antibody. An antibody (Pharmingen, Code No. 18062D, 0.5 mg / ml) was used in the same manner. Recombinant mouse IL-5 (Pharmingen, Code No. 19241W) was used for preparing a calibration curve. The experiment was performed by triplicate, and the average value was obtained.
<Result>
The compound of Example 3 suppressed the production of IL-4 and IL-5. On the other hand, it showed a marked enhancement effect on IFN-γ production.
[0058]
Example 14
Effects of analog compounds on cytokine production from mouse lymph node cells <Method of experiment>
1. Similar to Drug Example 13, various analog compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque (Kyoto) Code No. 11J) to a concentration of 10-100 mM and diluted to a final concentration with a medium.
2. Antigen-sensitized lymph node cell preparation method, antigen-stimulated cytokine production method, and cytokine quantification method were performed as described in Example 13.
IL-4 was quantified as a representative Th2-type cytokine. With respect to each analog compound, the IL-4 production inhibition rate at various concentrations was calculated, and the 50% inhibition concentration (IC ₅₀ ) value of each analog compound was determined from the graph of the compound concentration and the inhibition rate.
<Result>
The results for representative compounds are shown in Table 1.
[Table 1]

[0059]
Example 15
Effect of Example Compounds on IgE Production in Mice in vivo <Experimental Method>
1) Animals
BALB / c was purchased from Charles River Japan (Yokohama) and used 7-week-old females.
2) A solution of ovalbumin-sensitized ovalbumin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) (4 μg / ml) in a physiological saline solution and 4.5 mg / ml sodium chloride (Nacalai Tesque, Kyoto) and water An equal volume of aluminum oxide adjuvant (Alu-Gel-S; Serva Feinbiochemica GmbH & Co., Code No. 12261) was mixed and 0.5 ml / head was administered intraperitoneally to mice.
3) Method of drug administration The test compound was suspended in methylcellulose and continuously administered orally at 3 mg / kg / day for 12 days from the day of sensitization of ovalbumin (8 per group). Only methylcellulose was administered to the control group.
4) Blood collection and serum preparation On day 12 after sensitization, blood was collected from the orbital plexus or heart under anesthesia to prepare plasma or serum.
5) Measurement of total blood IgE level The total blood IgE level was measured by ELISA. Using a rat anti-mouse IgE monoclonal antibody (code number 7627, Yamasa Shoyu Co., Ltd., Chiba) as the primary antibody, and a biotin-labeled rat anti-mouse IgE monoclonal antibody (code number 7617, Yamasa Shoyu Co., Ltd., Chiba) as the secondary antibody. The measurement was performed in the same manner as in Example 13. Serum or plasma was diluted 400 to 800-fold and measured, and the total blood IgE amount was calculated from a standard curve using mouse IgE (Product No. 7626 Yamasa Soy Sauce, Chiba).
6) Statistical processing method
After confirming the variance by performing Bartlett's equivariance test, comparison was made by Steel's multiple comparison test. The risk rate was set to 5% to determine whether there was a significant difference.
[0060]
<Result>
As shown in Table 2, the compounds of Examples suppressed significantly the increase in blood total IgE induced by ovalbumin / aluminum hydroxide adjuvant intraperitoneal sensitization. It has already been confirmed that the increase in blood total IgE in this experimental system is dependent on IL-4 production in vivo. This result shows that the Example compound suppressed the increase of blood total IgE by suppressing IL-4 production in the mouse body.
[Table 2]

Claims

Formula (1)

(Wherein R ¹ represents a straight or branched lower alkyl group having 2 to 6 carbon atoms, a lower alkenyl group having 2 to 6 carbon atoms, a lower alkynyl group having 3 to 6 carbon atoms, a hydroxyl group, a halogen atom, or linear or branched lower alkyl group having from 1 carbon atoms which is substituted with an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms 6, comprising two oxygen atoms from 1 cycloalkyl group or a hetero atom from carbon number 3 8 Represents a 5- to 7-membered saturated heterocyclic ring, R ² represents a hydrogen atom, a linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a carbamoyl group or a hydroxymethyl group, and R ³ represents hydrogen Represents an atom or a straight or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, R ⁴ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a halogen atom, and R ⁵ represents a hydrogen atom ,water Group, an alkoxy group or a halogen atom of a carbon number of 1 6, R ⁶ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group or a halogen atom of a carbon number of 1 6, R ⁷ is a hydrogen atom, a hydroxyl group, the number of carbon atoms A quinazoline derivative represented by 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

R ^１1 Is a linear or branched lower alkyl group having 2 to 6 carbon atoms, a linear or branched lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms substituted with a hydroxyl group or an alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms, The quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1, which is a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms or a 5- to 7-membered saturated heterocyclic ring containing 1 to 2 oxygen atoms as a hetero atom.

The quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim ¹ , wherein R ¹ is a linear or branched lower alkyl group having 2 to 5 carbon atoms.

An immune response on the type 2 helper T cell side containing the quinazoline derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient is suppressed, and an immune response on the type 1 helper T cell side is suppressed. An immunomodulator that enhances.

A therapeutic or prophylactic agent for a disease in which the immune response on the type 2 helper T cell side is abnormally enhanced, comprising the quinazoline derivative according to any one of claims 1 to 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

The therapeutic or prophylactic agent according to claim 5 , wherein the disease in which the immune response on the type 2 helper T cell side is abnormally enhanced is an allergic disease.

The therapeutic or prophylactic agent according to claim 5 , wherein the allergic disease in which the immune response on the type 2 helper T cell side is abnormally increased is asthma, allergic rhinitis or atopic dermatitis.