JP4185996B2

JP4185996B2 - Anti-influenza virus agent

Info

Publication number: JP4185996B2
Application number: JP2003098397A
Authority: JP
Inventors: 恭持田; 拓矢勝部; 陽子鶴永
Original assignee: Shimane Prefecture
Current assignee: Shimane Prefecture
Priority date: 2002-04-02
Filing date: 2003-04-01
Publication date: 2008-11-26
Anticipated expiration: 2023-04-01
Also published as: JP2004002361A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗インフルエンザウイルス剤に関する。より詳細には、本発明はインフルエンザウイルスの感染を抑制し、また感染したウイルスの増殖を抑制する作用を有することによってインフルエンザの予防及び改善（治療）に有用な抗インフルエンザウイルス剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
インフルエンザはインフルエンザウイルスの感染によって生じるウイルス感染性疾患の一つである。特にＡ型インフルエンザウイルスは、亜型がいくつもあるうえにこれらは遺伝子交雑や点変異等による抗原性の変化に伴って種々変化するという特徴を有するため、有効な予防・治療薬がなく、世界的規模で周期的に大流行を繰り返しているのが実情である。
【０００３】
従来、インフルエンザの治療には、塩酸アマンタジン、塩酸リマンタジン、インターフェロン、またはリバビリンなどの化学療法剤が使用されている。しかし、これらの化学療法剤については、副作用、耐性ウイルスの出現の危険性、血清型相違による効果の喪失といった問題が指摘されている（例えば、非特許文献１等参照のこと）。
【０００４】
このため、副作用がなく人体に安全でしかも効果の高い抗インフルエンザウイルス剤の開発が求められている。
【０００５】
このような観点から今まで検討提案されている抗インフルエンザウイルス剤としては、茶ポリフェノールを有効成分とするもの（例えば、特許文献１等参照のこと）、茶サポニンを有効成分とするもの（例えば、特許文献２等参照のこと）、桂枝二越婢一湯などの特定の生薬を有効成分とするもの（例えば、特許文献３等参照のこと）を挙げることができる。
【０００６】
【特許文献１】
特開平3-101623号公報
【０００７】
【特許文献２】
特開平11-193242号公報
【０００８】
【特許文献３】
特開平6-199680号公報
【０００９】
【非特許文献１】
三淵一二編、微生物学、改訂第２版、151-175頁、南江堂、1993
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
蕎麦には、果実（内皮）に含まれるルチンの効果に基づいて血圧調整作用、毛細血管の強化作用、出血防止作用、酸化防止作用、老化防止作用等の各種の薬理作用があることが知られており、麺蕎麦やその他の蕎麦粉を利用した各種の食品が生理機能活性食品として注目されている。その一方で、蕎麦殻（果皮、外皮）や蕎麦植物体（葉や茎）などは、農業廃棄物として多量に排出されており、その有効利用の途を検討し開発する必要性が指摘されている。
【００１１】
本発明は、このような通常廃棄されてしまう蕎麦殻や蕎麦植物体（葉）の有効利用方法（用途）を提供することを目的とするものである。より具体的には、本発明の目的は、かかる蕎麦殻（以下、本発明において蕎麦の「果皮」という）や葉の溶媒抽出物について抗インフルエンザウイルス剤としての新規用途を提供することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、日夜鋭意研究を重ねていたところ、蕎麦の果皮及び葉の溶媒抽出物に高い抗インフルエンザウイルス作用があることを見いだし、さらにその効果は、数ある蕎麦種の中でも特に出雲地方で採取される出雲在来種の蕎麦の抽出物に顕著であることを見いだした。本発明は、かかる知見に基づいて完成したものである。
【００１３】
すなわち、本発明は下記に掲げる抗インフルエンザウイルス剤である：
項１．出雲在来種の蕎麦の抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗インフルエンザウイルス剤。
項２．蕎麦の抽出物が、蕎麦の葉の抽出物または果皮の抽出物の少なくとも一方を含むものである項１記載の抗インフルエンザウイルス剤。
項３．蕎麦の抽出物が、蕎麦植物体を水、アルコールまたはそれらの混合物で抽出して得られるものである項１または２に記載の抗インフルエンザウイルス剤。
項４．Ａ型インフルエンザウイルス及びＢ型インフルエンザウイルスの両方に対して、感染抑制作用と増殖抑制作用を発揮することを特徴とする項１乃至３のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス剤。
項５．Ａ型インフルエンザウイルスが、ＡＨ１Ｎ１型またはＡＨ３Ｎ２型である項４に記載の抗インフルエンザウイルス剤。
項６．インフルエンザウイルス感染の抑制またはインフルエンザ発症の予防に用いられる項１乃至５のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス剤。
項７．項１乃至６のいずれかに記載する抗インフルエンザウイルス剤を含有する食品、飼料、医薬品、医薬部外品または日用品。
項８．項２に記載する抗インフルエンザウイルス剤を含有する食品、飼料、医薬品、医薬部外品または日用品。
項９．インフルエンザウイルス感染の抑制またはインフルエンザ発症の予防に用いられるものである項７または８に記載の食品、飼料、医薬品、医薬部外品または日用品。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明の抗インフルエンザウイルス剤は、出雲在来種の蕎麦の抽出物を有効成分とするものである。
【００１５】
ここで「出雲在来種」とは、島根県の出雲地方で古くから作られてきた蕎麦の品種である。なお、蕎麦はヘテロスタイリー（異型花柱性）に起因する自家不和合性現象のため、現在まで組織的な育種、つまり新品種の改良や育成が少しも進展していない植物である。このため蕎麦については、特別な品種名のついたものは少ない。また、日本で現存する蕎麦の品種はその地方に古くから作られてきた「在来種」で、土地の名を冠して、通常十勝在来（北海道十勝地方）とか鹿屋在来（鹿児島県鹿屋地方）などと呼んだり、山形在来や島根在来などと、地方名や県名をそのまま頭につけて呼ぶのが通例となっている。これは蕎麦植物体が生育環境条件に極めて鋭敏であり、たとえ当初は遺伝的に不純なものであっても、同一環境で代を重ねることによってそれぞれの地方に適応したいわゆる「生態型」を生じやすいという特徴を有するためと思われる（「ソバの科学」著者永友大、新潮社、昭和59年発行、第302-303頁）。
【００１６】
なお、本発明の「出雲在来種」の蕎麦植物体または種子は、島根県出雲地方の蕎麦生産業者や蕎麦栽培農家が所有しており、また島根県立保健環境科学研究所（島根県松江市西浜佐陀町582-1）において保存されているため、必要に応じてこれらの業者や機関等から入手することが可能である。
【００１７】
本発明の抗インフルエンザウイルス剤の有効成分には、上記出雲在来種の蕎麦植物体の溶媒抽出物、具体的には出雲在来種蕎麦の果皮（外皮・そば殻）または葉の溶媒抽出物が用いられる。なお、蕎麦植物体の溶媒抽出物は、上記果皮または葉の溶媒抽出物のいずれか少なくとも一方を含むものであればよく、その限りにおいて蕎麦全植物体（全草）や蕎麦の実（内皮と外皮を含む）の溶媒抽出物等のように外皮又は葉を一部に含む植物部位の溶媒抽出物であってもよい。好ましくは果皮単独若しくは葉単独の溶媒抽出物またはこれらの混合物、または果皮と葉の混合物の溶媒抽出物である。
【００１８】
当該蕎麦植物体はそのまま（生）若しくは破砕物として抽出操作に付してもよいし、また乾燥後、必要に応じて粉砕して粉体状として抽出操作に付してもよい。
【００１９】
上記抽出に用いられる溶媒としては、特に制限されず、低級アルコール、多価アルコール、非極性溶媒および極性溶媒を広く用いることができる。より具体的には低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜６、好ましくは炭素数１〜４のアルコール；多価アルコールとしては、グリセリン、ポリエチレングリコール等；非極性溶媒としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン等の飽和炭化水素あるいはヘキセン、ヘプテン等の不飽和炭化水素等；極性溶媒としては、水、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル等が使用される。これら溶媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて使用することもできる。例えば脂肪分の多い原料などの場合は、非極性溶媒で脱脂抽出処理した後、各種任意の溶媒で抽出処理してもよいし、また含水有機溶媒を用いて抽出処理することもできる。好ましくは水性溶媒または極性溶媒であり、より好ましくはエタノールなどの低級アルコール、水またはこれらの混合物（含水アルコール）を挙げることができる。なお、低級アルコールと水との混合物（例えば含水エタノール）を使用する場合のアルコールの含有割合としては５０〜８０容量％の範囲を例示することができる。
【００２０】
抽出方法としては、一般に用いられる方法を採用することができる。制限はされないが、例えば溶媒中に上記植物体（そのまま若しくは粗末、細切物）、又はそれらの乾燥破砕物（粉末など）を冷浸、温浸等によって浸漬する方法、加温し攪拌しながら抽出を行い、濾過して抽出液を得る方法、またはパーコレーション法等を挙げることができる。
【００２１】
得られた抽出物（抽出液）は、必要に応じてろ過または遠心分離によって固形物を除去した後、使用の態様に応じて、そのまま用いるか、または溶媒を留去して一部濃縮若しくは乾燥して用いてもよい。また濃縮乃至は乾燥後、該濃縮乃至は乾燥物を非溶解性溶媒で洗浄して精製して用いても、またこれを更に適当な溶剤に溶解もしくは懸濁して用いることもできる。また、抽出物を、慣用されている精製法、例えば向流分配法や液体クロマトグラフィー等を用いて、抗インフルエンザウイルス活性を有する画分を取得、精製して使用することも可能である。更に、本発明においては、例えば、上記のようにして得られた溶媒抽出物を、減圧乾燥、凍結乾燥等の通常の手段により植物エキス乾燥物として使用することもできる。
【００２２】
上記の溶媒抽出物は、後記の実施例に示すようにインフルエンザウイルスに対して優れた増殖抑制作用並びに感染抑制作用を発揮する。また当該溶媒抽出物は古来より食されている蕎麦の植物部位であることから動物や人に対する安全性が高い。これらのことから、上記出雲在来種蕎麦の果皮抽出物または葉抽出物は、抗インフルエンザウイルス剤として、食品、飼料、医薬部外品又は医薬品などの成分として配合して用いることができ、これによりインフルエンザウイルス感染を抑制したり、該感染によって生じるインフルエンザの発症を予防したり、またその症状の改善に有効に使用することができる。
【００２３】
また上記の溶媒抽出物は、後記の実施例に示すようにＡ型インフルエンザウイルス及びＢ型インフルエンザウイルスのいずれに対しても優れた増殖抑制作用並びに感染抑制作用を発揮する。さらに、大規模な流行を繰り返すＡ型インフルエンザウイルスの亜型（ロシア型[AH1N1型]、香港型[AH3N2型]）のいずれに対しても優れた増殖抑制作用並びに感染抑制作用を発揮する。このことから、上記出雲在来種蕎麦の果皮抽出物または葉抽出物は、インフルエンザウイルスの型に関わらず広くインフルエンザウイルスの感染抑制や該感染によって生じるインフルエンザの発症を予防しまたその症状を改善することができ、抗インフルエンザウイルス剤の有効成分として、また上記効果を有する食品、飼料、医薬部外品、医薬品、その他の製品（日用品）の成分として有用である。
【００２４】
これらの食品、飼料、医薬部外品、医薬品、その他の製品（日用品）に配合される上記蕎麦溶媒抽出物の割合は、抗インフルエンザウイルス作用を有することを限度として特に制限されない。例えば食品、飼料、医薬部外品または医薬品の場合、通常、その単位投与（単位摂取）あたりに蕎麦溶媒抽出物が原料固形乾燥物に換算して（原料として使用する蕎麦の果皮や葉の乾燥重量）、少なくとも０.０１ｇ含まれるような割合を目安として適宜調整配合することができる。
【００２５】
特に蕎麦溶媒抽出物を有効成分とする医薬品は、抗インフルエンザウイルス剤（インフルエンザの予防剤及び／または治療剤）として、インフルエンザウイルス感染の予防またはインフルエンザ発症の予防、並びに発症後はインフルエンザの症状の改善や治療に使用される。その投与量は、投与目的、患者の年齢や症状に応じて適宜選択されるが、例えば成人１日あたりの投与量として、原料固形乾燥物０.０１〜１０ｇから抽出される蕎麦溶媒抽出物を挙げることができ、これを１〜数回に分けて投与することができる。また、鼻や喉に直接噴霧する場合は、原料固形乾燥物０.１〜１０ｇから抽出される蕎麦溶媒抽出物１ｍｌの１／１００〜１／１０００の希釈液を数回噴霧することによって使用することができる。
【００２６】
食品または飼料は、食品または飼料の通常の製造過程において本発明の蕎麦の溶媒抽出物を一成分として添加配合することによって製造することができる。また、医薬品または医薬部外品は、本発明の蕎麦の溶媒抽出物を有効成分として用い、必要に応じて薬学的に許容される担体や添加剤を配合して、常法に従って錠剤、粉末剤、カプセル剤、シロップ剤、舌下錠、トローチ、点鼻薬、うがい薬または噴霧剤などの各種の形態に製剤化することができる。
【００２７】
食品、飼料、医薬部外品又は医薬品等の形態または種類としては、特に制限されず、任意の形態または種類をとることができるが、口や鼻孔から侵入してくるインフルエンザウイルスによる感染を抑制する目的で使用する場合は、有効成分として使用する蕎麦抽出物が口内や喉粘膜に接触するような態様で使用されることが好ましい。かかる観点から、食品としてはドリンクなどの飲料形態、キャンディー、トローチまたはチューインガムなどのように口腔内で長く留まる態様の食品が好ましく、また医薬品または医薬部外品等としてはシロップ剤、舌下錠、トローチ、洗口液、口内清涼剤、うがい液、うがい薬、点鼻薬、喉噴霧剤、歯磨剤等といった形態のものが好ましい。
【００２８】
また、本発明の蕎麦の溶媒抽出物は、上記食品、飼料、医薬部外品又は医薬品以外にも、抗インフルエンザウイルス効果を期待して、特にインフルエンザウイルス感染の抑制またはインフルエンザ発症の予防を目的として、日用品の成分に用いることもできる。例えば、加湿器の水への添加液として使用しても、またマスク、ガーゼ、包帯、タオル、ハンカチ、おしぼり、ティッシュ、ウエットティッシュ、手袋、下着、白衣、手術着、オムツ、寝装用品（布団、枕、シーツ、枕カバー、寝間着）に含浸または練り込んで使用することもできる。また、居間やトイレなどの生活空間に消臭や抗菌等を目的として噴霧されるスプレーに配合して使用することも可能である。
【００２９】
これら各種製品中における蕎麦の溶媒抽出物の含有量も、これらの製品が抗インフルエンザウイルス作用を有することを限度として特に制限されず、前述する医薬品への配合割合を基準にして調整することができる。
【００３０】
【実施例】
以下、本発明を実施例によって更に詳細に説明するが、本発明は当該実施例によって何ら制限されるものではない。
実施例１蕎麦果皮抽出物のインフルエンザウイルスに対する増殖抑制作用
出雲在来種、横田産（信濃１号）、信州産及び北海道産の蕎麦の果皮（殻）を用いて、インフルエンザウイルスに対する増殖抑制作用を調べた。なお、インフルエンザウイルスとして、Ａ型のAH1N1型（ロシア型、A/USSR/92/77株）及びAH3N2型（香港型、A/島根/10/78株）、並びにＢ型（B/島根/1/94株）を用いた（「臨床とウイルス」7(1),89-92（昭和54年）；「日本医事新報」3730,45-50（平成7年））。
【００３１】
具体的には、上記各種の蕎麦の果皮（殻）の乾燥物２ｇをそれぞれ７０容量％エタノール４０ｍｌ（25±5℃）に一晩浸漬静置して、得られたエタノール抽出液を遠心分離（2,000rpm、10分間）した後、上清を濾紙で濾過し、蕎麦果皮抽出物を取得し、当該抽出物を被験試料として下記の実験に使用した。
【００３２】
＜インフルエンザウイルス増殖抑制作用＞
１２穴の組織培養プレートの穴に、MDCK細胞（Madin-Darby Canine Kidney）を単層培養し、これを５％炭酸ガス孵卵器で３７℃、７２時間培養した後、各種のインフルエンザウイルスをそれぞれ20PFU／穴の割合で接種し、３５℃で６０分間培養して、MDCK細胞にインフルエンザウイルスを吸着させた。その後、穴の該MDCK細胞をリン酸緩衝食塩水（pH7.4）で２回洗浄し、洗浄後、インフルエンザウイルス維持培地１.５ｍｌを添加した。なお、当該インフルエンザウイルス維持培地として、インフルエンザウイルスＡ型（AH1N1型、AH3N2型）に関しては、７％炭酸水素ナトリウム５ｍｌ、５％牛血清アルブミン８ｍｌ、トリプシン(2000単位)１ｍｌ及び３０％グルコース２ｍｌをＭＥＭダルベッコ培地に配合して２００ｍｌに調製した培地（維持培地１）を、またインフルエンザウイルスＢ型に関しては、トリプシン(2000単位)１ｍｌを配合しない以外は上記維持培地１と同様にして調製した培地（維持培地２）を使用した。
【００３３】
これに、上記で調製した各種の蕎麦果皮抽出物（被験試料）をそれぞれ１０μｌ／穴の割合で添加し、５％炭酸ガス孵卵器で３５℃、７２時間培養した。次いで、凍結融解を２回行い、得られたプレートの各穴の試料に含まれるインフルエンザウイルスの力価をプラーク法を用いて計測した。
【００３４】
また、比較対照実験として、上記蕎麦果皮抽出物１０μｌ／穴に代えて７０容量％エタノール液（対照液）１０μｌ／穴を用いて培養した試料（最終エタノール濃度0.45％）についても同様にしてインフルエンザウイルス力価をプラーク法を用いて計測した（コントロール）。
【００３５】
被験試料の添加によるインフルエンザウイルスの増殖抑制率（％）を下式より求め、各種の蕎麦果皮抽出物のインフルエンザウイルスに対する増殖抑制活性を評価した。
【００３６】
【数１】

【００３７】
出雲在来種、横田産（信濃１号）、信州産及び北海道産の蕎麦の果皮抽出物についての結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】

【００３９】
この結果からわかるように、蕎麦の果皮抽出物にはインフルエンザウイルスに対する増殖抑制作用があることが示された。またこれから蕎麦の果皮抽出物にはインフルエンザウイルスの活性を低減・抑制する作用があることが示唆された。さらに上記の結果から、蕎麦の果皮抽出物にはインフルエンザウイルスのＡ型及びその亜型（ロシア型[AH1N1型]、香港型[AH3N2型]）並びにＢ型の別を問わず、広範囲に亘ってインフルエンザウイルスの増殖を抑制する作用があることがわかった。そして、上記に示すようにその作用は出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物に特に顕著であった。これらのことから、出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物はインフルエンザウイルスの型を問わず、広くインフルエンザウイルスの感染または感染による発症を予防しまたは治療する抗インフルエンザウイルス剤の有効成分として有用であると思われる。
【００４０】
実施例２蕎麦葉抽出物のインフルエンザウイルスに対する増殖抑制作用
出雲在来種の蕎麦の葉抽出物について、実施例１と同様にして、インフルエンザウイルス（Ａ型：ロシア型[A/USSR/92/77株]、香港型[A/島根/10/78株]、Ｂ型：B/島根/1/94株）に対する増殖抑制作用を調べた。なお、被験試料として使用する蕎麦の葉抽出物は、実施例１の果皮抽出物と同様に、出雲在来種の蕎麦の葉（乾燥物）２ｇをそれぞれ７０容量％エタノール４０ｍｌ（25±5℃）に一晩浸漬静置して、得られたエタノール抽出液を遠心分離（2,000rpm、10分間）した後、上清を濾紙で濾過して調製した。結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】

【００４２】
表２に示すように、出雲在来種の蕎麦の葉の抽出物にも果皮抽出物と同様に、強いインフルエンザウイルス（Ａ型、Ｂ型）に対する増殖抑制作用があることがわかった。また、比較のために横田産（信濃１号）及び北海道産の蕎麦の葉抽出物について同様にしてインフルエンザウイルスに対する増殖抑制作用を調べたところ、その作用は果皮抽出物の結果（実施例１）と同様に、出雲在来種の蕎麦葉抽出物の作用よりも格段に劣っていた。
【００４３】
これらのことから、出雲在来種蕎麦の果皮や葉の抽出物は、インフルエンザウイルスの型を問わず、広くインフルエンザを予防しまたは治療・改善するための抗インフルエンザウイルス剤の有効成分として極めて有用であるといえる。
【００４４】
実施例３蕎麦の果皮及び葉の抽出物のインフルエンザウイルスに対する感染抑制作用
実施例１及び２で調製した出雲在来種蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物をそれぞれＭＥＭダルベッコ液体培地（MEMダルベッコ液体培地200mlに７％炭酸水素ナトリウム5mlを含む）で100倍及び300倍に希釈し、該蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物について、インフルエンザウイルス（Ａ型：ロシア型[A/USSR/92/77株]、香港型[A/島根/10/78株]、Ｂ型：B/島根/1/94株）の感染抑制作用を調べた。具体的には、各インフルエンザウイルス（40PFU/ml）と果皮抽出物又は葉抽出物とを等量混合して３７℃で６０分間反応させ、その後これをインフルエンザウイルス試料として、１２穴組織培養用プレートの穴に単層培養したＭＤＣＫ細胞に０.２ml／穴の割合で接種し、３５℃で６０分間培養して該細胞に吸着させた。次いで、リン酸緩衝食塩水(pH7.4)で洗浄し、洗浄後、実施例１と同様に調製したインフルエンザ維持培地（維持培地１又は維持培地２）を２ml／穴の割合で添加し、５％炭酸ガス孵卵器で３５℃で培養した。そして、細胞変性（ＣＰＥ）の出現状況を観察し、当該ＣＰＥの出現を指標としてインフルエンザウイルスの感染性を評価した。なお、比較対照試験として、ＭＤＣＫ細胞に接種するインフルエンザウイルス試料として上記のインフルエンザウイルス試料に代えて各インフルエンザウイルス（40PFU/ml）とＭＥＭダルベッコ液体培地（MEMダルベッコ液体培地200mlに７％炭酸水素ナトリウム5mlを含む）との等量混合物を用いて、同様にしてインフルエンザウイルスの感染性を評価した。
【００４５】
その結果、蕎麦の果皮抽出物または葉抽出物を配合しないインフルエンザウイルス試料を用いた場合は、５％炭酸ガス孵卵器（３５℃）での培養３日目にはＣＰＥが出現したのに対し、蕎麦の果皮抽出物（100〜300倍希釈物）または葉抽出物（100〜300倍希釈物）を配合したインフルエンザウイルス試料を用いた場合は、いずれものケースも培養３日目でもＣＰＥの出現は観察されなかった。このことから、出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物には、インフルエンザウイルスの型（Ａ型：AH1N1型、AH3N2型、及びＢ型）の別にかかわらず、広範囲にわたってインフルエンザウイルスの感染を抑制すること、すなわち出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物は広範囲の型にわたりインフルエンザウイルスの感染を予防する作用があることがわかった。
【００４６】
実施例４最近の流行株に対する増殖抑制作用
実施例１及び２でそれぞれ調製した出雲在来種蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物について、最近（2001/2002年シーズン）流行したインフルエンザウイルス株（Ａ型：ロシア型［A/島根/48/2002株］、香港型［A/島根/122/2002株］、Ｂ型［B/島根/2/2002株］）に対する増殖抑制作用を、実施例１及び２と同様にして調べた。結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】

【００４８】
上記の結果からわかるように、出雲在来種蕎麦の果皮（殻）や葉の抽出物には、最近の流行株に対しても高い増殖抑制作用があることがわかった。
【００４９】
実施例５最近の流行株に対する感染抑制作用
実施例１及び２でそれぞれ調製した出雲在来種蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物について、上記インフルエンザウイルス株（Ａ型：ロシア型［A/島根/48/2002株］、香港型［A/島根/122/2002株］、Ｂ型［B/島根/2/2002株］）に対する感染性を実施例３に準じて実験した。その結果、上記インフルエンザウイルスに対して果皮抽出物（100〜300倍希釈物）および葉抽出物（100〜300倍希釈物）を配合した試料を用いた場合は、いずれの場合も培養3日目でもＣＰＥの出現は観察されなかった。このことから、出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物には、最近の流行株に対してもインフルエンザウイルスの感染を抑制する作用があることがわかった。
【００５０】
インフルエンザウイルスはシーズン毎にＨＡ抗原構造に変異が見られることが多い。このため、ワクチンと同じ型でもＨＡ抗原構造が異なる場合は、爆発な流行を生じる場合があり、ワクチンによる予防効果が危惧されているのは周知の事実である。上記の本発明の実施例１〜５の結果から、出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物は、インフルエンザウイルスの型や亜型の別に関わらず（インフルエンザウイルスのＨＡ抗原の変異に関わらず）、広くインフルエンザウイルスの感染を抑制する作用（感染予防作用）を有しており、さらに感染した場合でもウイルスの増殖を抑制する作用があることが判明した。これは出雲在来種の蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物がインフルエンザウイルスの感染抑制（感染予防）または発症予防に有効に用いることができることを示すものである。
【００５１】
参考例１
実施例１で調製した出雲在来種蕎麦の果皮抽出物及び実施例２で調製した出雲在来種蕎麦の葉抽出物に含まれるルチンの含有量を下記の条件の高速液体クロマトグラフィーにて定量した。
【００５２】
＜ＨＰＬＣ条件＞
固定相：逆相カラム（STR ODS2:島津製作所製）
移動相：０.２％トリフルオロ酢酸水溶液／メタノール＝１／１
検出器：吸光度測定計（測定波長：370nm）。
【００５３】
その結果、実施例１で調製した出雲在来種蕎麦の果皮抽出物中のルチンの含有量は０μｇ／ｍｌ、実施例２で調製した出雲在来種蕎麦の葉抽出物中のルチンの含有量は０.０３μｇ／ｍｌであった。このことから、出雲在来種蕎麦の果皮抽出物及び葉抽出物が奏する抗インフルエンザウイルス活性は、ルチンに起因するものではなく、ルチン以外の成分に起因するものであること、すなわち本発明の抗インフルエンザウイルス剤はルチンを有効成分とするものでないことが確認された。
【００５４】
【発明の効果】
本発明によれば、出雲在来種の蕎麦の果皮（外皮・そば殻）または葉の溶媒抽出物を、抗インフルエンザウイルス剤として有効利用することができる。当該抗インフルエンザウイルス剤は、古来より飲食されている蕎麦の植物体抽出物であるため動物や人体に対して安全性が高く、副作用の心配なく使用できる。このため、本発明の抗インフルエンザウイルス剤はインフルエンザの感染及び発症の予防または治療・改善を目的として、広く食品、飼料、医薬品、医薬部外品、日用品（雑品）等の製品に利用することができる。また、抗インフルエンザウイルス剤及び該抗インフルエンザウイルス剤を含有する上記各種製品は、Ａ型およびその亜型（ロシア型や香港型等のＨＡ抗原変異株）、並びにＢ型といったインフルエンザウイルスの型の別を問わず、広く抗インフルエンザウイルス活性を有するため、インフルエンザの感染予防及び発症予防により有効に利用することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an anti-influenza virus agent. More specifically, the present invention relates to an anti-influenza virus agent useful for the prevention and improvement (treatment) of influenza by suppressing the infection of influenza virus and suppressing the growth of the infected virus.
[0002]
[Prior art]
Influenza is one of the viral infectious diseases caused by influenza virus infection. In particular, influenza A virus has a number of subtypes, and these are characterized by various changes accompanying antigenic changes due to genetic crossing or point mutations. The fact is that the epidemic is repeated periodically on a regular scale.
[0003]
Conventionally, chemotherapeutic agents such as amantadine hydrochloride, rimantadine hydrochloride, interferon, or ribavirin have been used for the treatment of influenza. However, problems with these chemotherapeutic agents such as side effects, risk of appearance of resistant viruses, and loss of effects due to serotype differences have been pointed out (see, for example, Non-Patent Document 1).
[0004]
For this reason, development of an anti-influenza virus agent that has no side effects and is safe and effective for the human body is required.
[0005]
From this point of view, anti-influenza virus agents that have been studied and proposed so far include tea polyphenols as active ingredients (for example, see Patent Document 1), tea saponins as active ingredients (for example, And the like (see, for example, Patent Document 3).
[0006]
[Patent Document 1]
Japanese Patent Laid-Open No. 3-101623
[0007]
[Patent Document 2]
Japanese Patent Laid-Open No. 11-193242
[0008]
[Patent Document 3]
JP-A-6-199680
[0009]
[Non-Patent Document 1]
Volume 12: Mitsuhiro, Microbiology, 2nd revised edition, 151-175, Nanedo, 1993
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
Buckwheat is known to have various pharmacological actions based on the effect of rutin contained in the fruit (endothelium), such as blood pressure regulating action, capillary strengthening action, bleeding prevention action, antioxidant action, and anti-aging action. Various foods using noodle soba and other buckwheat flour have attracted attention as physiologically active foods. On the other hand, buckwheat husks (fruits and husks) and buckwheat plants (leaves and stems) are discharged in large quantities as agricultural waste, and it is pointed out that there is a need to study and develop their effective use. Yes.
[0011]
The object of the present invention is to provide an effective utilization method (use) of such normally discarded oat shells and oat plants (leaves). More specifically, an object of the present invention is to provide a novel use as an anti-influenza virus agent for such buckwheat husks (hereinafter referred to as “fruit peel” of buckwheat in the present invention) and leaf solvent extract.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the present inventors have conducted extensive research day and night, and found that the solvent extract of buckwheat pericarp and leaves has a high anti-influenza virus action, and the effects are numerous. Among the buckwheat seeds, we found that they are particularly prominent in Izumo native soba extracts collected in the Izumo region. The present invention has been completed based on such findings.
[0013]
That is, the present invention is an anti-influenza virus agent listed below:
Item 1. An anti-influenza virus agent comprising an extract of Izumo native soba noodles as an active ingredient.
Item 2. Item 2. The anti-influenza virus agent according to Item 1, wherein the extract of buckwheat contains at least one of an extract of buckwheat leaf or an extract of fruit peel.
Item 3. Item 3. The anti-influenza virus agent according to Item 1 or 2, wherein the buckwheat extract is obtained by extracting a buckwheat plant with water, alcohol or a mixture thereof.
Item 4. Item 4. The anti-influenza virus agent according to any one of Items 1 to 3, which exhibits an infection-suppressing action and a growth-suppressing action against both influenza A virus and influenza B virus.
Item 5. Item 5. The anti-influenza virus agent according to Item 4, wherein the influenza A virus is AH1N1 type or AH3N2 type.
Item 6. Item 6. The anti-influenza virus agent according to any one of Items 1 to 5, which is used for suppression of influenza virus infection or prevention of influenza onset.
Item 7. Item 7. A food, feed, pharmaceutical, quasi-drug, or daily product containing the anti-influenza virus agent according to any one of Items 1 to 6.
Item 8. A food, feed, medicine, quasi-drug or daily necessities containing the anti-influenza virus agent according to Item 2.
Item 9. Item 9. The food, feed, medicine, quasi-drug or daily necessities according to Item 7 or 8, which is used for suppression of influenza virus infection or prevention of influenza onset.
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The anti-influenza virus agent of the present invention comprises an extract of Izumo native soba noodles as an active ingredient.
[0015]
Here, “Izumo native species” is a variety of soba varieties that has been produced for a long time in the Izumo region of Shimane Prefecture. Note that buckwheat is a plant that has not been improved in systematic breeding, that is, improvement or breeding of new varieties, due to self-incompatibility due to heterostyries (atypical style). For this reason, there are few soba noodles with special varieties. In addition, the varieties of buckwheat that exist in Japan are “local species” that have been made in the region for a long time, usually named Tokachi (Hokkaido Tokachi region) or Kanoya (Kagoshima prefecture) It is customary to call the local name or prefecture name directly in the head, such as Yamagata or Shimane. This is because soba plants are extremely sensitive to the environmental conditions of growth, and even if they are genetically impure at first, they generate so-called “ecological types” adapted to each region by repeating generations in the same environment. It seems to be because it has the feature of being easy ("Soba Science" author Nagatomo Dai, Shinchosha, published in 1984, pp. 302-303).
[0016]
The “Izumo native species” soba plant body or seed of the present invention is owned by a soba producer or a soba grower in Izumo, Shimane Prefecture, and is also the Shimane Prefectural Institute for Health and Environmental Science (Matsue City, Shimane Prefecture). Since it is stored in 582-1 Nishihama Sagamachi, it can be obtained from these vendors and institutions as necessary.
[0017]
The active ingredient of the anti-influenza virus agent of the present invention includes a solvent extract of the Izumo native soba plant body, specifically, an Izumo native soba pericarp (husk / buckwheat) or leaf solvent extract. Is used. In addition, the solvent extract of a buckwheat plant should just contain at least one of either the said fruit peel or the solvent extract of a leaf, As long as it is, the buckwheat whole plant (whole grass) and the buckwheat berry (endothelium and) It may be a solvent extract of a plant part partially containing a hull or leaf, such as a solvent extract of hull containing). Preferably, it is a solvent extract of pericarp or leaf alone or a mixture thereof, or a solvent extract of pericarp and leaf mixture.
[0018]
The buckwheat plant body may be subjected to the extraction operation as it is (raw) or as a crushed material, or may be pulverized as necessary after drying and subjected to the extraction operation as a powder.
[0019]
The solvent used for the extraction is not particularly limited, and a wide range of lower alcohols, polyhydric alcohols, nonpolar solvents and polar solvents can be used. More specifically, examples of lower alcohols include alcohols having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, propanol, isopropyl alcohol, and butanol; examples of polyhydric alcohols include glycerin and polyethylene glycol; Nonpolar solvents include saturated hydrocarbons such as pentane, hexane, heptane, octane, nonane, decane, etc. or unsaturated hydrocarbons such as hexene and heptene; polar solvents include water, acetone, ethyl acetate, methyl acetate, etc. used. These solvents may be used alone or in combination of two or more. For example, in the case of a raw material containing a large amount of fat, after performing a degreasing extraction treatment with a nonpolar solvent, the extraction treatment may be performed with any arbitrary solvent, or the extraction treatment may be performed using a water-containing organic solvent. An aqueous solvent or a polar solvent is preferable, and a lower alcohol such as ethanol, water, or a mixture thereof (hydrous alcohol) can be more preferable. In addition, the range of 50-80 volume% can be illustrated as a content rate of alcohol in the case of using the mixture (for example, water-containing ethanol) of a lower alcohol and water.
[0020]
As the extraction method, a generally used method can be employed. Although it is not limited, for example, a method of immersing the above-mentioned plant body (as it is, crude powder, shredded product) or a dried crushed material thereof (powder etc.) in a solvent by cold immersion, digestion, etc., while heating and stirring Examples thereof include a method of performing extraction and filtering to obtain an extract, or a percolation method.
[0021]
The obtained extract (extract) is filtered or centrifuged as necessary to remove solids, and then used as is, or partially concentrated or dried by distilling off the solvent, depending on the mode of use. May be used. Further, after concentration or drying, the concentrated or dried product may be used after being purified by washing with an insoluble solvent, or may be further dissolved or suspended in an appropriate solvent. In addition, the extract can be used after obtaining and purifying a fraction having anti-influenza virus activity using a conventional purification method such as a counter-current distribution method or liquid chromatography. Furthermore, in the present invention, for example, the solvent extract obtained as described above can also be used as a dried plant extract by ordinary means such as drying under reduced pressure or freeze drying.
[0022]
The solvent extract exhibits an excellent growth inhibitory action and an infection inhibitory action against influenza viruses as shown in the examples described later. Further, since the solvent extract is a plant part of buckwheat that has been eaten since ancient times, it is highly safe for animals and humans. For these reasons, the Izumo native soba pericarp extract or leaf extract can be used as an anti-influenza virus agent by blending it as a component of food, feed, quasi-drug, or pharmaceutical product. Can be used effectively to suppress influenza virus infection, prevent the onset of influenza caused by the infection, and improve the symptoms.
[0023]
Moreover, said solvent extract exhibits the proliferation inhibitory effect and infection inhibitory effect which were excellent with respect to both the influenza A virus and the influenza B virus, as shown in the below-mentioned Example. Furthermore, it exhibits an excellent antiproliferative action and infection suppressive action against any of the subtypes of influenza A virus (Russian type [AH1N1 type], Hong Kong type [AH3N2 type]) that repeat large-scale epidemics. Therefore, the Izumo native soba pericarp extract or leaf extract broadly suppresses influenza virus infection and prevents and improves the symptoms of influenza caused by the infection regardless of the type of influenza virus. It is useful as an active ingredient of an anti-influenza virus agent and as an ingredient of foods, feeds, quasi drugs, pharmaceuticals, and other products (daily necessities) having the above effects.
[0024]
The ratio of the soba solvent extract blended in these foods, feeds, quasi drugs, pharmaceuticals, and other products (daily necessities) is not particularly limited as long as it has an anti-influenza virus action. For example, in the case of foods, feeds, quasi-drugs or pharmaceuticals, normally, the soba solvent extract is converted into a raw material solid dried product per unit administration (unit intake) (drying of persimmon skin and leaves used as raw materials) Weight), and a proportion such that at least 0.01 g is contained as a guide, can be appropriately adjusted and blended.
[0025]
In particular, pharmaceuticals containing soba solvent extract as an active ingredient are used as anti-influenza virus agents (preventive agents and / or therapeutic agents for influenza) to prevent influenza virus infection or prevent the onset of influenza, and to improve influenza symptoms after onset Used for treatment. The dose is appropriately selected according to the purpose of administration and the age and symptoms of the patient. For example, as a dose per day for an adult, an oat solvent extract extracted from 0.01 to 10 g of a raw material solid dried product is used. Which can be divided into one to several doses. Moreover, when spraying directly on the nose and throat, it is used by spraying several times a 1/100 to 1/1000 dilution of 1 ml of the soba solvent extract extracted from 0.1 to 10 g of the raw material solid dried product. be able to.
[0026]
Food or feed can be produced by adding and blending the solvent extract of the present invention as a component in the normal production process of food or feed. In addition, for pharmaceuticals or quasi-drugs, the soba solvent extract of the present invention is used as an active ingredient, and if necessary, pharmaceutically acceptable carriers and additives are blended. , Capsules, syrups, sublingual tablets, troches, nasal sprays, mouthwashes or sprays.
[0027]
The form or type of food, feed, quasi-drug or pharmaceutical is not particularly limited and can take any form or type, but suppresses infection by influenza viruses that enter through the mouth and nostrils. When used for the purpose, it is preferably used in such a manner that the soba extract used as an active ingredient contacts the mouth or throat mucosa. From this point of view, the food is preferably a beverage form such as a drink, a food in a form that stays in the mouth for a long time, such as candy, troche or chewing gum, and the pharmaceutical or quasi-drug is a syrup, sublingual tablet, A troche, mouthwash, mouth freshener, gargle, mouthwash, nasal spray, throat spray, dentifrice and the like are preferred.
[0028]
In addition to the food, feed, quasi-drug, or pharmaceutical product, the soba solvent extract of the present invention is expected to have an anti-influenza virus effect, particularly for the purpose of suppressing influenza virus infection or preventing the development of influenza. It can also be used as a component of daily necessities. For example, it can be used as an additive to water in a humidifier, and it can also be used as a mask, gauze, bandage, towel, handkerchief, towel, tissue, wet tissue, gloves, underwear, lab coat, surgical gown, diaper, bedding , Pillows, sheets, pillow covers, sleepwear) can be impregnated or kneaded. Moreover, it is also possible to mix | blend and use for the spray sprayed for the purpose of deodorizing, antibacterial, etc. in living spaces, such as a living room and a toilet.
[0029]
The content of the solvent extract of buckwheat in these various products is not particularly limited as long as these products have anti-influenza virus action, and can be adjusted on the basis of the blending ratio in the aforementioned pharmaceutical products. .
[0030]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention still in detail, this invention is not restrict | limited at all by the said Example.
Example 1 Proliferation inhibitory effect of buckwheat peel extract against influenza virus
Using Izumo native species, Yokota (Shinano No. 1), Shinshu and Hokkaido soba noodles (shells), the growth inhibitory action against influenza virus was examined. As influenza viruses, A type AH1N1 (Russian type, A / USSR / 92/77 strain) and AH3N2 type (Hong Kong type, A / Shimane / 10/78 strain), and B type (B / Shimane / 1 / 94 strain) ("Clinical and virus" 7 (1), 89-92 (Showa 54); "Japan medical newsletter" 3730, 45-50 (1995)).
[0031]
Specifically, 2 g of each dried soba peel (shell) was immersed in 70 ml ethanol (40 ml, 25 ± 5 ° C.) overnight, and the resulting ethanol extract was centrifuged ( After 2,000 rpm for 10 minutes, the supernatant was filtered with a filter paper to obtain a buckwheat peel extract, which was used as a test sample in the following experiment.
[0032]
<Influenza virus growth inhibitory action>
MDCK cells (Madin-Darby Canine Kidney) were cultured in a single layer in a 12-well tissue culture plate and cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C for 72 hours. Inoculated at a rate of / well and incubated at 35 ° C. for 60 minutes to adsorb influenza virus to MDCK cells. Thereafter, the MDCK cells in the wells were washed twice with phosphate buffered saline (pH 7.4), and after washing, 1.5 ml of influenza virus maintenance medium was added. As the influenza virus maintenance medium, 7% sodium bicarbonate 5 ml, 5% bovine serum albumin 8 ml, trypsin (2000 units) 1 ml and 30% glucose 2 ml for flu virus type A (AH1N1 type, AH3N2 type) Medium prepared in Dulbecco's medium (maintenance medium 1) prepared in 200 ml, and for influenza virus B, medium prepared in the same manner as maintenance medium 1 except that 1 ml of trypsin (2000 units) was not added (maintenance medium) Medium 2) was used.
[0033]
To this, each of the various buckwheat pericarp extracts (test samples) prepared above was added at a rate of 10 μl / hole and cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 35 ° C. for 72 hours. Subsequently, freeze-thaw was performed twice, and the titer of influenza virus contained in the sample of each hole of the obtained plate was measured using the plaque method.
[0034]
In addition, as a comparative control experiment, the influenza virus was similarly applied to a sample (final ethanol concentration 0.45%) that was cultured using 10 μl / well of a 70 vol% ethanol solution (control solution) instead of 10 μl / well of the above buckwheat peel extract. Titers were measured using the plaque method (control).
[0035]
The growth inhibition rate (%) of influenza virus due to the addition of the test sample was determined from the following formula, and the growth inhibition activity against influenza virus of various buckwheat peel extracts was evaluated.
[0036]
[Expression 1]

[0037]
Table 1 shows the results of the Izumo native species, Yokota (Shinano No. 1), Shinshu and Hokkaido soba noodles.
[0038]
[Table 1]

[0039]
As can be seen from this result, it was shown that the extract of buckwheat peel has an inhibitory effect on the growth of influenza virus. In addition, it was suggested that the extract of buckwheat peel has an action to reduce or suppress the activity of influenza virus. Furthermore, from the above results, the extract of buckwheat pericarp covers a wide range regardless of whether it is influenza A type A and its subtypes (Russian type [AH1N1 type], Hong Kong type [AH3N2 type]) or B type. It was found that it has the effect of suppressing the growth of influenza virus. And as shown above, the action was particularly remarkable in the Izumo native variety of buckwheat peel extract. Therefore, Izumo native soba pericarp extract is useful as an active ingredient of anti-influenza virus agent for preventing or treating influenza virus infection or onset due to infection, regardless of the type of influenza virus I think that the.
[0040]
Example 2 Inhibitory effect of buckwheat leaf extract on influenza virus
About the Izumo native soba leaf extract, in the same manner as in Example 1, influenza virus (A type: Russian type [A / USSR / 92/77 strain], Hong Kong type [A / Shimane / 10/78 strain] ], B type: B / Shimane / 1/94 strain) was examined for its growth inhibitory action. In addition, the buckwheat leaf extract used as a test sample was the same as the peel extract of Example 1 with 2 g of Izumo native species of buckwheat leaf (dried product), each with 40 ml of 70% by volume ethanol (25 ± 5 ° C). ), And the resulting ethanol extract was centrifuged (2,000 rpm, 10 minutes), and then the supernatant was filtered through a filter paper. The results are shown in Table 2.
[0041]
[Table 2]

[0042]
As shown in Table 2, it was found that the extract of Izumo native species of buckwheat leaves also had a growth inhibitory action against strong influenza viruses (types A and B), similar to the peel extract. For comparison, Yokota-produced (Shinano 1) and Hokkaido-produced buckwheat leaf extracts were examined in the same manner for their anti-proliferative effects against influenza virus. In the same way, the action of Izumo native species of buckwheat leaf extract was much inferior.
[0043]
For these reasons, Izumo native soba pericarp and leaf extracts are extremely useful as active ingredients for anti-influenza virus agents to prevent, treat, or improve influenza widely, regardless of the type of influenza virus. It can be said that there is.
[0044]
Example 3 Inhibition of influenza virus infection by buckwheat peel and leaf extract
The Izumo native soba pericarp extract and leaf extract prepared in Examples 1 and 2 were respectively 100-fold and 300-fold with MEM Dulbecco liquid medium (200 ml of MEM Dulbecco liquid medium containing 5 ml of 7% sodium bicarbonate). After dilution, the buckwheat skin extract and leaf extract are influenza virus (A type: Russian type [A / USSR / 92/77 strain], Hong Kong type [A / Shimane / 10/78 strain], B type: B / Shimane / 1/94 strain) was investigated. Specifically, each influenza virus (40 PFU / ml) and pericarp extract or leaf extract are mixed in equal amounts and reacted at 37 ° C. for 60 minutes, and then used as an influenza virus sample as a 12-well tissue culture plate. MDCK cells were monolayer-cultured in the wells at a rate of 0.2 ml / well, cultured at 35 ° C. for 60 minutes, and adsorbed on the cells. Subsequently, it was washed with phosphate buffered saline (pH 7.4). After washing, influenza maintenance medium (Maintenance Medium 1 or Maintenance Medium 2) prepared in the same manner as in Example 1 was added at a rate of 2 ml / well. The cells were cultured at 35 ° C. in a% carbon dioxide incubator. Then, the appearance of cytopathic (CPE) was observed, and the infectivity of influenza virus was evaluated using the appearance of the CPE as an index. As a comparative test, each influenza virus (40 PFU / ml) and MEM Dulbecco's liquid medium (200 ml of MEM Dulbecco's liquid medium and 5 ml of 7% sodium bicarbonate as an influenza virus sample inoculated into MDCK cells instead of the above influenza virus samples) Infectiousness of influenza virus was evaluated in the same manner using an equal amount mixture.
[0045]
As a result, when the influenza virus sample not containing the buckwheat pericarp extract or leaf extract was used, CPE appeared on the third day of culture in a 5% carbon dioxide incubator (35 ° C), When using an influenza virus sample containing a buckwheat peel extract (diluted 100 to 300 times) or a leaf extract (diluted 100 to 300 times), the appearance of CPE was observed in either case or on the third day of culture. Not observed. Therefore, Izumo native soba pericarp extract and leaf extract are widely infected with influenza virus regardless of influenza virus type (A type: AH1N1, AH3N2, and B). In other words, the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract were found to have the effect of preventing influenza virus infection over a wide range of types.
[0046]
Example 4 Growth inhibitory action against recent epidemic strains
About the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract prepared in Examples 1 and 2, respectively, the influenza virus strain (A type: Russian type [A / Shimane / 48 / 2002], Hong Kong type [A / Shimane / 122/2002 strain], and B type [B / Shimane / 2/2002 strain]) were examined in the same manner as in Examples 1 and 2. The results are shown in Table 3.
[0047]
[Table 3]

[0048]
As can be seen from the above results, it was found that the Izumo native soba pericarp (husk) and leaf extract have a high growth inhibitory effect even on recent epidemic strains.
[0049]
Example 5 Infection control against recent epidemic strains
For the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract prepared in Examples 1 and 2, respectively, the influenza virus strains (A type: Russian type [A / Shimane / 48/2002 strain], Hong Kong type [A / Shimane / 122/2002 strain] and B type [B / Shimane / 2/2002 strain]) were tested according to Example 3. As a result, in the case of using a sample in which a peel extract (100-300 times dilution) and a leaf extract (100-300 times dilution) were blended with the above influenza virus, in either case, the third day of culture However, the appearance of CPE was not observed. From this, it was found that the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract have an action of suppressing influenza virus infection even against recent epidemic strains.
[0050]
Influenza viruses often have mutations in the HA antigen structure from season to season. For this reason, if the HA antigen structure is different even in the same type as the vaccine, an explosive epidemic may occur, and it is a well-known fact that the preventive effect of the vaccine is a concern. From the above results of Examples 1 to 5 of the present invention, the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract were not affected by the type or subtype of influenza virus. Regardless of this, it has been found that it has a broad inhibitory effect on influenza virus infection (infection prevention effect), and also has an inhibitory effect on virus growth even when infected. This indicates that the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract can be used effectively for influenza virus infection suppression (infection prevention) or onset prevention.
[0051]
Reference example 1
The content of rutin contained in the Izumo native soba peel extract prepared in Example 1 and the Izumo native soba leaf extract prepared in Example 2 was determined by high performance liquid chromatography under the following conditions. did.
[0052]
<HPLC conditions>
Stationary phase: Reversed phase column (STR ODS2: Shimadzu)
Mobile phase: 0.2% aqueous trifluoroacetic acid / methanol = 1/1
Detector: Absorbance meter (measurement wavelength: 370 nm).
[0053]
As a result, the content of rutin in the peel extract of Izumo native soba prepared in Example 1 was 0 μg / ml, and the content of rutin in the leaf extract of Izumo native soba prepared in Example 2 Was 0.03 μg / ml. Therefore, the anti-influenza virus activity exhibited by the Izumo native soba pericarp extract and leaf extract is not attributed to rutin but to components other than rutin, that is, the anti-influenza activity of the present invention. It was confirmed that the influenza virus agent does not contain rutin as an active ingredient.
[0054]
【The invention's effect】
According to the present invention, the Izumo native soba pericarp (hull and buckwheat) or leaf solvent extract can be effectively used as an anti-influenza virus agent. Since the anti-influenza virus agent is a plant extract of buckwheat that has been eaten and eaten since ancient times, it is highly safe for animals and human bodies and can be used without worrying about side effects. Therefore, the anti-influenza virus agent of the present invention can be widely used for products such as food, feed, pharmaceuticals, quasi-drugs, daily necessities (miscellaneous goods) for the purpose of preventing or treating or improving influenza infection and development. it can. In addition, the anti-influenza virus agent and the various products containing the anti-influenza virus agent are classified into types A and its subtypes (HA antigen mutants such as Russian and Hong Kong types) and influenza virus types such as B type. Regardless of the widespread anti-influenza virus activity, it can be effectively used for prevention of influenza infection and onset.

Claims

An anti-influenza virus agent comprising an extract of Izumo native soba noodles as an active ingredient.

The anti-influenza virus agent according to claim 1, wherein the extract of buckwheat contains at least one of an extract of buckwheat leaf or an extract of pericarp.

The anti-influenza virus agent according to claim 1 or 2, which has an infection-suppressing action and a growth-suppressing action against both influenza A virus and influenza B virus.

The anti-influenza virus agent according to claim 3, wherein the influenza A virus is AH1N1 or AH3N2.