JP4122441B2 - 新規ｃｘｃｒ４拮抗剤及びその用途 - Google Patents

Description

本発明は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有する化合物、及びその用途に関する。

ケモカインレセプターＣＸＣＲ４は、７回膜貫通型のＧ蛋白共役型レセプターであり、ＣＸＣＬ１２／ストローマ細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）のシグナルを変換することが知られている。

また、ＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４枢軸は、ＨＩＶ感染症、癌細胞の転移／進行、及び、慢性関節リウマチ（ＲＡ）を含む種々の疾患に関係することが知られている（非特許文献２〜４）。

ＨＩＶ感染症および後天性免疫不全症候群（エイズ）については、いまだに完全な治療法が確立されておらず、新規な作用機序を有する有用な薬剤の創出が待ち望まれている。ＣＸＣＲ４はＴ細胞指向性ウイルスが細胞に進入するときのコレセプターであることが知られている（非特許文献２）。

癌の転移は患者の余命を左右する重要な要素である。ＣＸＣＲ４は乳癌細胞などにおいてその発現が亢進し、転移先の臓器（リンパ節、肺、肝臓および骨）においてそのリガンドであるＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１の発現が亢進していることが報告されている（非特許文献３）。

また、ＣＸＣＲ４は、膵臓癌細胞、メラノーマ細胞、前立腺癌細胞、腎臓癌細胞、神経芽細胞腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細胞、卵巣癌細胞、多発性骨髄腫細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）Ｂ細胞、ｐｒｅ−Ｂ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞および悪性脳腫瘍細胞を含む、少なくとも２３の異なるタイプの癌における悪性細胞上で発現されていることが知られている（非特許文献５）。

慢性関節リウマチは主として、炎症を起こした関節滑膜中におけるＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞の蓄積によって引き起こされる疾患である。慢性関節リューマチ患者の関節腔液内のＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子発現が亢進し、関節滑膜組織においてＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１遺伝子発現が亢進していること、ＣＸＣＬ１２がメモリＴ細胞の移動を刺激し、Ｔ細胞のアポトーシスを阻害すること、ＲＡ関節滑膜におけるＴ細胞の蓄積にＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４枢軸が重大な役割を果たすことが報告されている（非特許文献４）。

このように、ＣＸＣＲ４は上記の疾患を克服するための重要な治療ターゲットであると考えられ、今日までに様々なＣＸＣＲ４拮抗剤が開発されている。

Ｔ１４０は、アミノ酸１４残基のペプチド性ＣＸＣＲ４拮抗剤であり、ＣＸＣＲ４に特異的に結合し、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ−１（Ｘ４−ＨＩＶ−１）の細胞への侵入を特異的にブロックする。Ｔ１４０の生体内安定型誘導体である４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３及び４Ｆ−ベンゾイル−ＴＥ１４０１１については、ある種の癌細胞の転移と慢性関節リウマチの動物モデル実験において有意な抑制作用を示し、in vivoで顕著な活性を発揮することが報告されている（非特許文献6）。

ＦＣ１３１は、Ｔ１４０のファルマコフォアである、Arg², Nal³, Tyr⁵, Arg¹⁴を含む環状ペンタペプチドライブラリーから見出された低分子リード化合物であり、Ｔ１４０に匹敵する活性を有する。

しかしながら、Ｔ１４０及びＦＣ１３１はペプチド性化合物であるため、そのままでは経口投与が困難であり、製剤化についての工夫を要する。そのため、非ペプチド化、低分子化及び高活性化されたＣＸＣＲ４拮抗剤の開発が望まれている。

非ペプチド性低分子量化合物であるＣＸＣＲ４拮抗剤としては、ＫＲＨ−１６３６が知られており、ＣＸＣＲ４阻害活性、抗ＨＩＶ−１活性を有することが報告されている（非特許文献７）。

しかしながら、ＫＲＨ−１６３６は半減期が長く、体内への蓄積等、安全性についての問題を有していることも知られている。

一方、浜地らはジピコリルアミン−亜鉛錯体を有する芳香族化合物がタンパク質、ペプチド中のチロシン残基を認識するプローブとして有効であることを見出した（非特許文献８及び特許文献１）。
特開2003-246788号公報 Journal of Biological Chemistry、第273巻、第4754頁（1998年） Science、第272巻、872-877頁（1996年） Nature、第410巻、50-56頁（2001年） Journal of Immunology、第165巻、6590-6598頁（2000年） Seminars in Cancer Biology、第14巻、171-179頁（2004年） Expert Opinion on Therapeutic Targets、第9巻、1267-1282頁（2005年） Proceedings of the National Academy of Sciences、第100巻、4185-4190頁（2003年） Journal of American Chemical Society、第124巻、6256-6258頁（2002年）

本発明は、低分子量の非ペプチド性化合物を用いた、新規なＣＸＣＲ４拮抗剤を提供することを目的とする。また、本発明は、上記ＣＸＣＲ４拮抗剤を用いた、ＨＩＶ感染症およびエイズ、癌ならびに慢性関節リウマチの、新規な予防及び／または治療手段を提供することを目的とする。

本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、これまでタンパク質、ペプチド中のチロシン残基を認識するプローブとして有効であると考えられてきたジピコリルアミン−亜鉛錯体を有する種々の芳香族性化合物が、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有し、ＨＩＶ感染症及びエイズ、転移を含む癌並びに慢性関節リウマチの予防及び／又は治療に有効であることを見出し、さらに研究を行った結果、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、下記の各項に示す発明に関する。

項１．一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、一般式（２）で表される基を示す。

Ｘは、置換または非置換の含窒素へテロ環基を示す。ｐは、同一または異なって、１〜２を示す。］
または、
一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
で表される化合物もしくはその塩を有効成分とする、抗ＨＩＶ剤。

項２．一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、一般式（２）で表される基を示す。

式中、Ｘは、置換または非置換の含窒素へテロ環基を示す。ｐは、同一または異なって、１〜２を示す。］
または、
一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
で表される化合物もしくはその塩を有効成分とする、悪性腫瘍の転移抑制剤。

項３．一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、一般式（２）で表される基を示す。

Ｘは、置換または非置換の含窒素へテロ環基を示す。ｐは、同一または異なって、１〜２を示す。］
または、
一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
で表される化合物もしくはその塩を有効成分とする、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤。

項４．一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、一般式（２）で表される基を示す。

Ｘは、置換または非置換の含窒素へテロ環基を示す。ｐは、同一または異なって、１〜２を示す。］
または、
一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
で表される化合物もしくはその塩を有効成分とする、ＣＸＣＲ４拮抗剤。

一般式（１ａ）で表される化合物
一般式（１ａ）において、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ａが置換アリーレンまたは置換へテロアリーレン基の場合には、Ａは通常１〜３個、好ましくは１個の置換基を有するが、これより多くの置換基を有していてもよい。

上記アリーレンまたはヘテロアリーレン基の置換基としては、例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基等が挙げられる。

ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。

Ｃ_１−６アルキル基としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル基等が挙げられる。

Ｃ_１−６アルコキシ基としては、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ、３−メチルペントキシ基等が挙げられる。

置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基におけるアリーレン基またはヘテロアリーレン基として好ましくは、例えばフェニレン、ビフェニレン、２，２’−ビピリジニレン、ナフチレン、及びアントラセニレン基等が挙げられ、特に好ましくはフェニレン基が挙げられる。

一般式（１ａ）において、Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、一般式（２）で示される基である。一般式（２）において、Ｘは、置換または非置換の含窒素ヘテロ環基である。Ｘが置換基を有する含窒素ヘテロ環基の場合には、Ｘは通常１〜３個、好ましくは１個の置換基を有するが、これより多くの置換基を有していてもよい。

１つの実施形態において、本発明の置換または非置換の含窒素ヘテロ環基としては、置換または非置換の、環が平面構造を有する含窒素ヘテロ環基が好ましい。

また、他の実施形態において、本発明の置換または非置換の含窒素ヘテロ環基としては、置換または非置換の、芳香族含窒素ヘテロ環基が好ましい。

本発明の置換または非置換の含窒素ヘテロ環基における含窒素へテロ環基としては、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、ピリダジニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、イソインドリル基等が挙げられる。

また、本発明の置換または非置換の含窒素ヘテロ環基における含窒素へテロ環基として好ましくは、ピリジル、ピロリル基等の５〜６員の含窒素ヘテロ環基、特に好ましくはピリジル基等の６員の含窒素へテロ環基が挙げられる。

さらに、本発明の置換または非置換の含窒素ヘテロ環基における含窒素へテロ環基としては、２位に窒素原子を有する含窒素ヘテロ環基が好ましく、具体例としては、２−ピリジル、２−ピロリル基等が挙げられる。

含窒素へテロ環基の置換基としては、例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基等が挙げられる。

一般式（２）において、ｐは、同一または異なって、１または２であり、好ましくは、１である。なお、Ｂにおけるｐと、Ｂ’におけるｐとは同一でも、異なっていてもよい。

一般式（１ａ）において、Ａに結合するＢ’とＢ’’との位置関係は、特に制限されないが、互いに１８０°の方向に位置することが好ましい。具体的には、例えば、Ａがフェニレン、ビフェニレン、２，２’−ビピリジニレン基等である場合、Ｂ’−ＣＨ_２−及びＢ’’−ＣＨ_２−はパラ位でＡに結合しているのが好ましく、Ａがナフチレン基である場合、Ｂ’−ＣＨ_２−及びＢ’’−ＣＨ_２−はそれぞれナフチレン基の１位及び４位に結合しているのが好ましく、Ａがアントラセニレン基の場合、Ｂ’−ＣＨ_２−及びＢ’’−ＣＨ_２−はそれぞれアントラセニレン基の９位及び１０位に結合しているのが好ましい。

化合物（１ｂ）で表される化合物
一般式（１ｂ）において、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のへテロアリール基を示す。

上記アリールまたはヘテロアリール基の置換基としては、例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基等が挙げられる。

一般式（１ｂ）におけるＡ’の好ましい例としては、アントラセニル基等が挙げられる。

一般式（１ｂ）において、Ｂ’は、一般式（１ａ）におけるＢ’と同様である。

本発明の化合物の塩
本発明の化合物の塩は、薬学的に許容される塩であればよく、特に制限されないが、具体例としては、塩酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩等が挙げられる。

本発明の化合物の製造方法
一般式（１ａ）及び（１ｂ）で示される本発明の化合物は、公知化合物であり、公知の方法またはそれに準じる方法により製造することができる。

上記本発明の化合物は、例えば、特許文献１や非特許文献８等に開示されている方法、本願の製造例１に記載の方法、またはそれらに準じる方法等により製造することができる。

本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤
本発明の化合物は、強力なＣＸＣＲ４拮抗作用を有しており、ＣＸＣＲ４拮抗剤として有用である。

本発明の抗ＨＩＶ剤
本発明の化合物は、そのＣＸＣＲ４拮抗作用に基づき、抗ＨＩＶ剤として使用することができる。

ＨＩＶは、ＣＤ４を（一次）受容体として、それを発現しているヘルパーＴ細胞やマクロファージに感染し、細胞性免疫機構を破綻に至らせる。ＨＩＶの感染には、ＣＤ４の他にＣＤ４と協同してウイルスの細胞内侵入を促進する補助因子（コレセプター）が必要であり、ＣＸＣＲ４は、ＨＩＶ−１が細胞に侵入する際のコレセプターとして知られている（非特許文献２）。本発明の化合物は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有するため、ＨＩＶ−１の細胞への侵入を阻害することにより、抗ＨＩＶ活性を示す。

本発明の悪性腫瘍の転移抑制剤
本発明の化合物は、そのＣＸＣＲ４拮抗作用に基づき、悪性腫瘍の転移抑制剤として使用することができる。

ＣＸＣＲ４とその内因性のリガンドであるＳＤＦ−１との相互作用については、いくつかの癌転移に関与していることが知られている。また、数種の癌細胞の表面にＣＸＣＲ４が多く発現しており、転移先の臓器ではＳＤＦ−１が多く発現していることが知られている。さらに、白血病細胞の表面にはＣＸＣＲ４が多く存在し、ＳＤＦ−１がこの細胞を活性化することが知られている（非特許文献３及び５）。これらの知見より、本発明の悪性腫瘍の転移抑制剤は、そのＣＸＣＲ４拮抗作用に基づき、癌転移抑制作用及び白血病の進行抑制作用を有すると考えられる。

本発明の転移抑制剤の治療対象となる悪性腫瘍は、固形悪性腫瘍であっても血液悪性腫瘍であってもよく、具体的には、例えば、膵臓癌、メラノーマ、前立腺癌、腎臓癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、卵巣癌、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ｐｒｅ−Ｂ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及び悪性脳腫瘍等が挙げられる。

本発明の慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤
本発明の化合物は、そのＣＸＣＲ４拮抗作用に基づき、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤として使用することができる。

慢性関節リウマチ（ＲＡ）は主として、炎症を起こした関節滑膜中におけるＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞の蓄積によって引き起こされる疾患である。慢性関節リューマチ患者の関節腔液内のＣＤ４陽性記憶Ｔ細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子発現が亢進し、関節滑膜組織においてＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１遺伝子発現が亢進していること、ＣＸＣＬ１２がメモリＴ細胞の移動を刺激し、Ｔ細胞のアポトーシスを阻害すること、ＲＡ関節滑膜におけるＴ細胞の蓄積にＣＸＣＬ１２−ＣＸＣＲ４枢軸が重大な役割を果たすことが知られている（非特許文献４）。本発明の慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤は、ＣＸＣＲ４拮抗作用を有するため、ＲＡ関節滑膜におけるＴ細胞の蓄積を抑制することができ、慢性関節リウマチに対して治療及び／または予防効果を示すと考えられる。

本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤、抗ＨＩＶ剤、癌転移抑制剤、並びに、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤は、治療の目的等に応じて、各種製剤形態で使用し得る。そのような製剤形態としては、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤など）、噴霧剤、エアゾール剤、吸入剤、徐放性製剤、腸溶性コーティング剤などを例示できる。これらは更に投与経路に応じて経口剤、非経口剤、経鼻剤、経膣剤、坐剤、舌下剤、軟膏剤などに分類され、それぞれ通常の方法に従い、調合、成形乃至調製することができる。

また、本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤、抗ＨＩＶ剤、癌転移抑制剤、並びに、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤は、製剤の使用形態に応じて通常使用される、賦形剤、希釈剤、充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、吸収促進剤、保湿剤、吸着剤、界面活性剤、滑沢剤、緩衝剤、等張化剤、乳化剤、懸濁剤、湿潤剤、保存剤及び分散剤などと共に使用し得る。

尚、本発明の製剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品などを含有させることもできる。

本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤、抗ＨＩＶ剤、癌転移抑制剤、並びに、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤の投与方法は、特に制限がなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与され、注射剤は単独で又はブドウ糖やアミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じ単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与され、坐剤は直腸内投与され、経膣剤は膣内投与され、経鼻剤は鼻腔内投与され、舌下剤は口腔内投与される。

本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤、抗ＨＩＶ剤、癌転移抑制剤、並びに、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤の投与量は特に制限されず、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の種類、疾患の程度等により適宜選択することができる。

本発明のＣＸＣＲ４拮抗剤、抗ＨＩＶ剤、癌転移抑制剤、並びに、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤は、その活性の発現に亜鉛を必須とする。従って、ＥＤＴＡ等のキレート剤、キレート作用を有するチオール系化合物等を投与して亜鉛を除去することにより、本発明の化合物は容易にその活性を失わせることができる。また、ピロリン酸やＡＴＰなどのポリリン酸種により亜鉛錯体をマスクすることによって、本発明の化合物を失活させることもできる。

本発明の非ペプチド性化合物は強力なＣＸＣＲ４拮抗作用を有する。

本発明の抗ＨＩＶ剤は、ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を阻害することにより、ＨＩＶ感染症及びエイズに対して治療効果を示す。

本発明の悪性腫瘍の転移抑制剤は、ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を阻害することにより、悪性腫瘍の転移を抑制する。

本発明の慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤は、ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１との結合を阻害することにより、慢性関節リウマチに対して治療・予防効果を示す。

また、本発明ＣＸＣＲ４拮抗剤は、上記の疾患に限らず、ＣＸＣＲ４が関与していると考えられる他の疾患（例えば、火傷、褥瘡等）の治療に応用することができると考えられる。

本発明の化合物は公知の方法により、極めて短い工程で簡便かつ安価に製造することができるため、抗ＨＩＶ剤、悪性腫瘍の転移抑制剤、慢性関節リウマチの治療及び／または治療剤並びにＣＸＣＲ４拮抗剤を安価に提供することを可能とする。

本発明の化合物から、錯体を形成している亜鉛原子を除去することにより、ＣＸＣＲ４拮抗活性は失われる。従って、例えば、本発明の化合物を継続投与中の対象において、副作用等の問題が生じた場合、キレート剤等を投与することにより、速やかにその活性を失わせ、解毒することが可能である。

＜化合物の製造＞
具体的な化合物の合成法として、例えば、以下の方法が挙げられる。

＜製造例１：ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレン・亜鉛錯体の製造＞
１．ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレンの合成
p-キシレンジアミン（１ｅｑ）とピリジン−２−カルバルデヒド（１０ｅｑ）をＣｌＣＨにＣＨ_２Ｃｌ／ジメチルホルムアミド（９：１）中、室温で加え、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３を０℃で加え、室温で5時間反応した。縮合反応の進行の程度は、分析用ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ ＡＲ−IIカラム：アセトニトリル−水）とイオンスプレーマススペクトル解析により調べた。得られた溶液を蒸留水で希釈後、本水溶液を大量分取型ＨＰＬＣ（コスモジール５Ｃ１８ ＡＲ−IIカラム：アセトニトリル−水）により精製し、単一ピークを得、凍結乾燥した。残渣に４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサンを加えて、減圧蒸留し、残渣にエーテルを加えて−２０℃で５時間放置した。析出した結晶（塩酸塩）を濾取することにより、ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレンを得た。純度は、ＨＰＬＣにより確認した。

２．ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレン・亜鉛錯体の合成
ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレンの塩酸塩に４Ｍ ＮａＯＨ水溶液と酢酸エチルを０℃で加え、分液し、酢酸エチル層を水洗後、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた塩酸塩フリーのビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレンをメタノール／テトラヒドロフラン（８：１）に溶解し、該溶液に、室温で０．５Ｍ Ｚｎ（ＮＯ_３）_２水溶液（２．１ｅｑ）を滴下し、一晩撹拌した。得られた溶液を減圧濃縮及び凍結乾燥した後、残渣を水洗し、メタノール−酢酸エチルで再結晶することにより、ビス（２，２’−ジピコリルアミノ）−ｐ−キシレン・亜鉛錯体（化合物（１ｃ））を得た。亜鉛錯体は、イオンスプレーマススペクトルにより確認した。

＜製造例２：９，１０−ビス［（２，２’−ジピコリルアミノ）メチル］アントラセン・Ｚｎ錯体の製造＞
［非特許文献８］の記載に従って、９，１０−ビス［（２，２’−ジピコリルアミノ）メチル］アントラセン・亜鉛錯体を製造した。

試験例１：ＣＸＣＲ４拮抗活性
ジピコリルアミン−亜鉛錯体を有する種々の芳香族性化合物を調製し、以下の方法により、これらの化合物のＣＸＣＲ４拮抗作用を調べた。

ＣＸＣＲ４トランスフェクトチャイニーズハムスター卵巣(Chinese hamster ovary:CHO)細胞系（３×１０^４ｃｅｌｌ／１００μＬ／ｗｅｌｌ）を、平底マイクロタイタートレーのウェルに播いた。ＣＯ_２インキュベーター中で、３７℃で１日インキュベートした後、細胞を、ＨａｍのＦ−１２バッファー（８０μＬ／ｗｅｌｌ）中で、３７℃で１時間、５μＭのＦｕｒａ２−ＡＭ（同仁、熊本、日本）、２．５ｍＭのプロベネシッド（Ｓｉｇｍａ）及び２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）と共にローディングした。

その後、Ｈａｎｋの平衡塩類溶液（１００μＬ×２）で２回洗浄し、分光蛍光計（96well Fluorescence Drug Screening System、浜松フォトニクス、日本）に挿入した。測定開始から３０秒後、細胞を種々の濃度の被験化合物と共にＨａｎｋの平衡塩類溶液中でインキュベートし、３分後、組換え型ＳＤＦ−１ａ（ＰｒｅｐｒｏＴｅｃｈ、３０ｎＭ／４０ｍＬ／ｗｅｌｌ）を添加した。

Ｆｕｒａ２−ＡＭをローディングしたＣＸＣＲ４トランスフェクトＣＨＯ細胞系における［Ｃａ^２＋］_ｉの変化のリアルタイム記録は、Ｆｕｒａ−２法を改良した手順により行った。ＣＸＣＲ４拮抗作用を、ＣＸＣＲ４を介したＳＤＦ−１ａの刺激によって誘発されるＣａ^２＋移動の阻害に基づいて測定した（ＩＣ_５０）。

被験物質の構造及びＣＸＣＲ４拮抗活性を表１〜３に示す。

ポジティブコントロールである参考例化合物Ｉ（Ｔ１４０）、参考例化合物II（ＦＣ１３１）及び参考例化合物III（ＫＲＨ−１６３６）は強いＣＸＣＲ４拮抗活性を示した。

２組の２，２’−ジピコリルアミン−亜鉛錯体ユニット（以下、Dpa・Znユニットと称する）をベンゼン環のパラ位に有する実施例化合物１は、強いＣＸＣＲ４拮抗活性を示した。２組のDpa・Znユニットをベンゼン環のメタ位に有する実施例化合物２は、実施例化合物１よりも弱い活性を示した。

２組のDpa・Znユニットを３，３’位及び４，４’位に有するビフェニル化合物（実施例化合物３及び４）は、それぞれ有意に高いＣＸＣＲ４拮抗活性を示したが、実施例化合物３よりも実施例化合物４のほうが強い活性を示した。

また、実施例化合物３及び４のビフェニルユニットを［２，２’］ビピリジルに置き換えた実施例化合物５及び６についても、ＣＸＣＲ４拮抗活性に著しい違いはみられなかった。２組のDpa・Znユニットを１，４位及び９，１０位にそれぞれ有するナフタレン化合物（実施例化合物７）及びアントラセン化合物(実施例化合物９)は、高い活性を示した。Dpa・Znユニットを１組しか有しない実施例化合物８及び、２組のDpa・Znユニットを１，８位に有するアントラセン化合物(実施例化合物１０)は、それほど高くはないが、有意なＣＸＣＲ４拮抗活性を示した。

これに対し、実施例化合物１、４、６及び９から亜鉛を除いた化合物である、比較例化合物Ａ〜Ｄは、１０μＭまでにいかなる有意な活性も示さなかった。

試験例２：ＣＸＣＲ４結合活性
試験例１において強いＣＸＣＲ４拮抗活性を示した実施例化合物１、４、６、及び７について、ＣＸＣＲ４に対する結合活性を以下の方法により調べた。

ＨａｍのＦ−１２バッファー（０．５％ウシ血清アルブミン、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファー）に懸濁したＣＸＣＲ４トランスフェクトＣＨＯ細胞系を、シリコンコーティングされた試験管中に置いた（５×１０^５ｃｅｌｌｓ／１２０μＬ／ｗｅｌｌ）。冷ＳＤＦ−１α（最終濃度０．１μＭ、１５μＬ／ｗｅｌｌ）及び種々の濃度の被験化合物（１５μＬ／ｗｅｌｌ）を上記試験管に添加し、その後、^１２５Ｉ−ＳＤＦ−１α（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ、最終濃度０．１ｎＭ、１５μＬ／ｗｅｌｌ）を添加した。０℃で１時間インキュベートした後、オイル（ジブチルフタレート：オリーブオイル＝４：１（ｖ／ｖ）、５００μＬ／ｗｅｌｌ）を添加し、その後、１４０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。水層及び有機層を除去した後、底部を試験管から切り離し、該底部をラジオイムノアッセイ用カウンティングチューブ内におき、その後カウント毎分（ＣＰＭ）をγ−カウンターで測定した。^１２５Ｉ−ＳＤＦ−１αの結合に対する被験化合物の阻害率を、下記の方程式により計算した。ＩＣ_５０は、阻害率５０％を示す被験化合物の濃度である。

阻害率（％）＝（Ｅｔ−Ｅａ）／（Ｅｔ−Ｅｃ）×１００
Ｅｔ：被験化合物を添加しなかった場合の放射線量
Ｅｃ：冷ＳＤＦ−１αを被験化合物として添加した場合の放射線量
Ｅａ：被験化合物を添加した場合の放射線量
結果を表４に示す。これらの化合物は、いずれもＣＸＣＲ４に対する結合活性を示したが、特に、化合物２のＣＸＣＲ４結合活性は、参考例化合物III（ＫＲＨ−１６３６）に匹敵するものであった。

試験例３：抗ＨＩＶ活性
実施例化合物中最も好ましく、シンプルである実施例化合物１について、抗ＨＩＶ−１活性を評価した。抗ＨＩＶ−１活性は、下記の方法により、ＭＴ−４細胞においてＨＩＶ−１により誘発される細胞変性に対する阻害効果に基づいて測定した。

（１）細胞培養
ヒトＴ細胞系であるＭＴ−４及びＭＯＬＴ−４細胞を、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン及び１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地において培養した。

（２）ウイルス
ウイルスとして、Ｘ４−ＨＩＶ−１株であるＨＩＶ−１_IIIBを使用した。該ウィルスは、ＨＩＶ−１持続感染ＭＯＬＴ−４／ＨＩＶ−１_IIIB細胞の培養液上清から得られ、使用されるまで−８０°Ｃで保存された。

（３）アッセイ
種々の濃度の被験化合物をＨＩＶ−１感染ＭＴ−４細胞（ウイルス数／細胞数＝０．０１）に添加し、平底マイクロタイタートレイのウェルに播いた（１．５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）。ＣＯ_２インキュベーターで５日間、３７℃でインキュベートした後、ＭＴＴ法を用いて生存細胞数を測定した（ＥＣ_５０）。

実施例化合物１は、ＭＴ−４細胞においてＸ４−ＨＩＶ−１により誘発される細胞変性に対する有意な阻害活性を示した（ＥＣ_５０＝７．１μＭ）。

Claims (5)

1. 一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
   ［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、下記式（２）で表される基を示す。
   

   

   ]で表される化合物もしくはその塩、ならびに
   一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
   ［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
   で表される化合物もしくはその塩からなる群より選択される少なくともいずれか１種を有効成分とする、抗ＨＩＶ剤。
2. 一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
   ［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、下記式（２）で表される基を示す。
   

   

   ]で表される化合物もしくはその塩、ならびに
   一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
   ［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
   で表される化合物もしくはその塩からなる群より選択される少なくともいずれか１種を有効成分とする、悪性腫瘍の転移抑制剤。
3. 一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
   ［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、下記式（２）で表される基を示す。
   

   

   ]で表される化合物もしくはその塩、ならびに
   一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
   ［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
   で表される化合物もしくはその塩からなる群より選択される少なくともいずれか１種を有効成分とする、慢性関節リウマチの治療及び／または予防剤。
4. 一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ−ＣＨ_２−Ｂ’’
   ［式中、Ａは、置換または非置換のアリーレンもしくは置換または非置換のヘテロアリーレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は、同一または異なって、下記式（２）で表される基を示す。
   

   

   ]で表される化合物もしくはその塩、ならびに
   一般式（１ｂ）：Ｂ’−ＣＨ_２−Ａ’
   ［式中、Ａ’は、置換または非置換のアリールもしくは置換または非置換のヘテロアリール基を示す。Ｂ’は、上記一般式（１ａ）におけるそれと同様である。］
   で表される化合物もしくはその塩からなる群より選択される少なくともいずれか１種を有効成分とする、ＣＸＣＲ４拮抗剤。
5. 一般式（１ａ）：Ｂ’−ＣＨ _２ −Ａ−ＣＨ _２ −Ｂ’’
   ［式中、Ａは、フェニレン基、ビフェニレン基、２，２’−ビピリジニレン基又はナフチレン基を示す。Ｂ’及びＢ’’は下記式（２）で表される基を示す。
   

   

   ]で表される化合物もしくはその塩からなる群より選択される少なくともいずれか１種を有効成分とする、請求項１に記載の抗ＨＩＶ剤。