JP3808938B2 - Nucleic acid carrier - Google Patents

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【0001】 [0001]
本発明は、細胞に核酸を導入するための新規核酸運搬体に関する。 The present invention relates to novel nucleic acid carrier for introducing the nucleic acid into a cell. より詳しくは、本発明は核酸を細胞内に効率良く安全に導入するための核酸結合性領域を有する核酸運搬体に関するものである。 More particularly, the present invention relates to nucleic acid carrier having a nucleic acid binding region for introducing efficiently secure the nucleic acid into a cell.
【0002】 [0002]
本発明はまた、当該核酸運搬体および核酸を含む、核酸の細胞内への導入を促進するための調節剤に関する。 The present invention also relates to the nucleic acid carrier and comprising a nucleic acid relates to regulators for promoting the introduction into cells of nucleic acids.
【0003】 [0003]
遺伝子治療とは、薬剤として作用する外来遺伝子(以下、「薬物遺伝子」という)を体内に導入し発現させることで疾患の治療を行おうとする全く新しい治療方法である。 Gene therapy, a foreign gene (hereinafter, referred to as "therapeutic gene") which acts as a drug is a completely new treatment method of attempting to treat a disease by causing introducing into the body expression. 遺伝子治療によって治療効果が期待できる疾患は先天性、後天性を問わず遺伝子の異常が原因で発症する疾患すべてが含まれるが、特に、致死的であり、かつ治療法が確立されていない癌やAIDSに対しては非常に有用性の高い治療方法であると考えられている。 Disease therapeutic effects can be expected by gene therapy congenital, although genetic abnormalities irrespective of acquired includes all diseases caused due, in particular, fatal, and treatment has not been established cancer Ya it is considered to be very highly useful method of treatment against AIDS.
【0004】 [0004]
遺伝子治療は、異常(原因)遺伝子をそのままにして、新しい(正常)遺伝子を付け加える付加遺伝子療法(Augumentation Gene Therapy)と、異常遺伝子を正常遺伝子で置き換える置換遺伝子療法(Replacement Gene Therapy)に大別される。 Gene therapy, abnormal (cause) in the intact gene, a new (normal) and the additional gene therapy to add a gene (Augumentation Gene Therapy), is divided into replacement gene therapy for replacing an abnormal gene by a normal gene (Replacement Gene Therapy) that.
【0005】 [0005]
遺伝子治療の臨床応用としては、1989年米国において初めて遺伝子治療の臨床試験が行われて以来、すでにイタリア、オランダ、フランス、イギリス、中国においても臨床試験が開始されている。 The clinical application of gene therapy, for the first time since being conducted clinical trials of gene therapy in the United States in 1989, already Italy, Netherlands, France, United Kingdom, clinical trials have been initiated in China. しかしながら、遺伝子治療の臨床応用において、薬物遺伝子を効率良く安全に標的細胞へ導入するための最適な遺伝子の形態や方法の開発が大きな技術的課題の1つとなっている。 However, the clinical application of gene therapy, the development of optimal gene forms and methods for introducing a therapeutic gene into efficiently and safely target cells has become one of the major technical problems.
【0006】 [0006]
1980年代初期には、マイクロインジェクション等物理的手法の応用が試みられたが、疾患治療のために必要な薬物遺伝子を安定かつ効率良く導入することができず、臨床応用には至らなかった。 The early 1980s, although applications of microinjection physical approaches have been tried, can not be introduced stably and efficiently therapeutic gene required for disease treatment, did not lead to clinical applications. その後、外来遺伝子を効率良く細胞に導入するための担体となる組み換えウイルス(ウイルスベクター)が開発され、初めて遺伝子治療の臨床応用が可能となった(Miller,AD,Hum. Gene Ther., 1:5-14、1990)。 .. Then be developed recombinant virus as a carrier for introducing foreign genes efficiently cells (viral vectors) is first clinical application of gene therapy has become possible (Miller, AD, Hum Gene Ther, 1: 5-14,1990).
【0007】 [0007]
現在最も注目されているウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス(Molony Murine Leukemia Virus:以下、MoMLV)由来のレトロウイルスベクタ一であり、本ウイルスの生活環の利点を利用したものである。 Viral vectors are currently the most attention, murine leukemia virus (Molony Murine Leukemia Virus: less, MoMLV) are retrovirus vector one derived, is to utilize the advantages of the life cycle of the virus. レトロウイルスは宿主に感染後、白己の遺伝情報をゲノムDNAに組み込ませるという性質を持つ(Miller DG,et al.,Mol.Cell.Biol.,10,8,4239,1990)ことから、薬物遺伝子を持続的に発現させるためには都合が良い。 After retrovirus infection in a host, white oneself of genetic information has the property of causing integrated into the genomic DNA (Miller DG, et al., Mol.Cell.Biol., 10,8,4239,1990) since the drug convenience is good in order to continuously express the gene. また、種々の細胞種に感染可能であることから、これら多くの種類の細胞がMoMLVべクターを用いた治療の対象となりうる。 Further, since it is capable of infecting a variety of cell types, many types of cells it can be a treatment of a subject with a restrictor base MoMLV. 一方、この性質はウイルスベクターの生体への投与を不可能にしている。 On the other hand, this property is it impossible to administration to a living body of a viral vector. 宿主範囲が広いということは、言い換えれば生体に投与した際に標的細胞への集積性が乏しいということであり、治療効果や副作用の点から静脈内投与法などの全身性の投与法は行なうことができない。 Host range that wide is that poor accumulation property to target cells when administered to a living body other words, be carried systemic administration, such as intravenous administration in terms of therapeutic effects and side effects can not. 従って、現在の治療法は標的細胞を生体から一度分離し、試験管内で遺伝子導入を行なった後、再び生体に戻す治療法(米国特許第5,399,346号)が行われている(ex vivo遺伝子導入法)。 Thus, current therapies separates once target cells from a living body after performing gene transfer in vitro, it has been made therapies back into the living body (U.S. Pat. No. 5,399,346) (ex vivo gene transfer method). この方法は標的細胞に対して確実に薬物遺伝子を導入でき、治療効果も期待できるが、ウイルスベクターを取り扱うための特殊な設備や、細胞を大量に培養する設備を必要とすることからこのような治療を実施できる施設は限定されてしまう。 This method can be introduced reliably therapeutic gene to the target cells, although the therapeutic effect can be expected, special equipment and for handling the viral vector, such since it requires the facilities of culturing cells in large amounts facilities capable of carrying out the treatment is limited. 以上のような理由から、in vivoでも遺伝子導入が可能なウイルスベクターの開発が望まれている。 For the above reasons, gene transfer even in vivo development of possible viral vectors is desired.
【0008】 [0008]
また、ウイルスベクターを生産するために種々のウイルスベクター産生細胞が開発されている(Miller ADand Buttlmore C., Mol.Cell.Biol., 6, 2895, 1986)が、治療に必要な量のウイルスベクターを生産するためには大量の細胞を培養する必要があり、一般的な薬物の生産コストに比べて非常に高価になってしまうという欠点もある。 Further, various viral vectors producing cells to produce viral vectors have been developed (Miller ADand Buttlmore C., Mol.Cell.Biol., 6, 2895, 1986) is a viral vector of the amount required for treatment in order to produce, it is necessary to culture a large number of cells, there is also a disadvantage that becomes very expensive compared to the cost of producing common drugs.
【0009】 [0009]
このようなウイルベクターにかわる遺伝子導入のための担体として、核醗が負電荷を有していることを利用し、これを正電荷を有する合成ポリアミノ酸へ結合させ、生成された複合体(以下、ボリアミノ酸/遺伝子複合体)を目的の細胞もしくは細胞内へ送達しようとする試みがなされている。 As carriers for gene transfer to replace such a viral vector, by utilizing the fact that nuclear 醗 has a negative charge, which is bound to a synthetic polyamino acid having a positive charge, the generated complex (hereinafter , it attempts to deliver to Boriamino acid / gene complex) target cell or the cells have been made. Wuらは、ポリリジンを遺伝子の担体としてポリアミノ酸/遺伝子複合体を調製し、これを細胞に作用させることで遺伝子を導入して発現させることに成功している(GYWu and CHWu, Advanced Drug Delivery Revlews,12,159,1993)。 Wu et al., Polylysine polyamino acid / gene complex were prepared as carriers for gene and which was successfully expressed by introducing gene by the action of the cell (GYWu and CHWu, Advanced Drug Delivery Revlews , 12,159,1993).
【0010】 [0010]
しかしながら、この複合体は濃度が増加と共に沈殿を生じることが知られている。 However, this complex is known to cause precipitation concentration with increasing. このような性質は、実際に疾患の治療を行なう際に大きな問題となる。 Such property is a major problem when actually performing the treatment of the disease. 特に、静脈内へポリアミノ酸/遺伝子複合体を投与することは血管の塞栓や血栓等を引き起こす原因となりうるため不可能である。 In particular, the administration of polyamino acid / gene complex intravenously is not possible for that can be the cause of blockage or thrombi, etc. in blood vessels. また、局所的に投与される場合でも、注射針の詰まりの問題や、標的細胞に対して治療をするために必要な量の遺伝子を導入できない等の問題があり、実際に治療で用いるためにはこれらの問題を解決しなければならない。 Moreover, even when administered topically, problems and clogging of the needle, there are problems such that can not introduce the amount of genes required for the treatment to the target cells, for use in actual treatment We must solve these problems.
【0011】 [0011]
一方、生体に投与された薬物遺伝子は、標的細胞に特異的に作用し、その他の細胞には影響を及ぼさないことが必須である。 On the other hand, therapeutic gene administered to a living body, specifically act on target cells, it is essential that no effect on other cells. これは特に副作用の点から極めて重要な問題である。 This is a particularly crucial issue in terms of side effects. 従来の薬物療法においても、薬物等の体内挙動を厳密に制御し、標的器官の細胞に望ましいパターンで薬効を発現させることで薬物投与の最適化を計ろうとする薬物送達システム(Drug Delivery System:DDS)が盛んに検討されている。 Also in conventional drug therapies, strictly control the body behavior of such a drug, a drug delivery system to be Hakaro optimization of drug administration by the expression of drug efficacy in a desired pattern on the cells of the target organ (Drug Delivery System: DDS ) has been extensively studied.
【0012】 [0012]
標的部位の細胞にのみ薬物等を集積させるための手段としては、従来より標的細胞の表面に存在する各種受容体によるエンドサイトーシス(ReceptorMediated Endocytosls:RME〉機構が多く用いられている。RMEは低濃度の高分子ぺブチドやタンパク質等のリガンドを濃縮的に細胞内に取り込むことが可能であり、肝臓、腎臓、小腸、肺、筋肉、脂肪、胎盤などの組織細胞または上皮細胞の他、各種分泌細胞、種々の組織の毛細血管内皮細胞、更には赤血球、白血球、肥満細胞、貪食細胞、繊維芽細胞などといった非常に多くの細胞に存在することが知られている。 The means for accumulating only drug and the like into cells of the target site, endocytosis by various receptor present on the surface of the conventionally target cells (ReceptorMediated Endocytosls: .RME the RME> mechanism is often used is low it is possible to incorporate ligands such polymers Bae Buchido and protein concentrations to the concentrated manner in cells, liver, kidney, small intestine, lung, muscle, fat, other tissue cells or epithelial cells, such as placenta, various secretion cells, capillary endothelial cells of various tissues, more red blood cells, white blood cells, mast cells, phagocytes, are known to exist in numerous cells such as fibroblasts.
【0013】 [0013]
取り込むリガンドは細胞によって異なるが、栄養物質輸送タンパク質、ペプチド ホルモン、成長因子、免疫グロブリン、血漿中タンパク質、リソソーム酵素、細胞毒素など多数の高分子ペブチドやタンパク質がRME機構によって取り込まれることが報告されている。 While ligands to capture depends cells, nutrients transport protein, peptide hormones, growth factors, immunoglobulins, plasma proteins, lysosomal enzymes, a number of polymer Pebuchido and proteins such as cytotoxin been reported to be taken up by RME mechanism there. なかでも、糖鎖末端にガラクトース残基(Gal)やN−アセチルガラクトサミン残基(GalNAc)を持つ物質を取り込む機構は肝実質細胞に特異的であり、高分子キャリアーとしてのアシアロ糖タンパク質の利用のみならず、既に知られている生理活性ペプチドに適切な糖鎖を結合したり、逆に糖鎖を切り離したりすることによって(ただし生理活性が低下しない場合)、肝指向性を持たせたり持たせなかったりすることができる、このような糖鎖によるターゲティングは現在活発に研究されている(M.Monslgny,et al., Advanced Drug Delivery Revlews,14,1,1994)。 Among them, a mechanism for capturing a substance having a galactose residue (Gal) or N- acetylgalactosamine residue (GalNAc) in the sugar chain terminal is specific to the hepatocytes, only the use of asialoglycoprotein as the polymer carrier Narazu, or combine the appropriate sugar to bioactive peptides already known (if the proviso bioactive not reduced) by or disconnect sugar Conversely, to have or to have a hepatotropic it is possible to not or, such targeting sugar chain is currently being actively researched (M.Monslgny, et al., Advanced Drug Delivery Revlews, 14,1,1994).
【0014】 [0014]
また、RME機構の中には、細胞が必要とする栄養素を血漿中タンパク質と結合したまま受容体介在的に取り込む場合がある。 Further, in the RME mechanism may incorporate nutrients cells require leave the receptor-mediated manner bound to plasma proteins. このようなタンパク質は特に輸送タンパク質またはキャリアータンパク質と呼ばれ、その受容体は輸送受容体(Transport Receptor)と呼ばれることがある。 Such proteins are called particular transport protein or carrier protein, the receptor may be referred to as a transport receptor (Transport Receptor). 輸送タンパク質は細胞内で分解される場合と、分解されずに再利用される場合とがある。 Transport protein and a case and if it is degraded in the cell, which is reused without being decomposed. これに対し、内在化された受容体は多くの場合速やかに細胞膜表面にリサイクルして再利用されるため、標的組織が比較的高濃度のリガンドにさらされても表面受容体数が負に制御されにくく、リガンドの取り込みが持続的で、DDSへの応用に好適である。 In contrast, internalized receptors many for the case as quickly reused by recycling to the cell surface, the target tissue is relatively high concentrations ligand exposed negatively controlled even surface receptor number is the hardly, ligand uptake persistent and it is suitable for application to DDS. 低密度リポタンバク質(LDL)、ビタミンB12の輸送タンパク質であるトランスコバラミン11、鉄の輸送タンパク質であるトランスフェリン、ブロテアーゼの輸送タンパク質であるα2−マクログロブリンも受容体とともに内在化され、細胞内で結合リガンドを遊離することによって必須栄養物質の細胞内取り込みを担っていることが知られている。 Low Density Ripotanbaku protein (LDL), transcobalamin 11 is a transport protein for vitamin B12, transferrin iron transport proteins, also α2- macroglobulin, which is a transport protein of Buroteaze internalized with receptor binding ligand in cells it is known, which is responsible for cellular uptake of essential nutrients by liberating. このような生体機能をDDSに利用することができれば、特異性および効率性が高まるのみならず、異物として認識されないために細網内皮系の細胞群に捕捉されることがないなどの、生体適合性の面からも極めて優れたシステムを構築することが可能となる。 The ability to utilize such biological functions DDS, not only increases specificity and efficiency, such as it will not be trapped in the cell group of the reticuloendothelial system because they are not recognized as foreign, biocompatible also it is possible to construct an extremely excellent system from the sexual plane. このシステムを用いれば、単に標的細胞に結合してゆっくりと薬物を放出するのではなく、RMEを利用して細胞内に薬物キャリアー複合体を速やかに取り込んだ後にリソソーム内におけるキャリアータンバク質の分解によって薬物を遊離し効果を現わすため、受容体を持つ細胞に対して徴量で治療効果を期待でき、同時に副作用を抑えることも可能となる。 Using this system, rather than simply release slowly the drug bound to the target cells, by the decomposition of the carrier Tan Bak protein in the lysosome after it is quickly incorporated the drug carrier complex into the cell by using RME since the drug to liberate reveal the effect can be expected therapeutic effects in symptoms amount to the cells with receptors, it is possible to simultaneously reduce the side effects.
【0015】 [0015]
以上述べたようなDDSの手法を遺伝子治療の分野に応用しようとする試みもなされるようになってきた。 The DDS techniques such as described above has come to be also made attempts to apply to the field of gene therapy. Wuらは、肝実質細胞に存在するアシアロ糖蛋白レセブターに着目し、アシアロオロソムコイドを結合させたポリ−L−リジンとプラスミドDNAの複合体を調製し、これを肝実質細胞に作用させることでプラスミドDNA由来の遺伝子を発現させることに成功している(GYWu and CHWu,Advanced Drug Delivery Revlews,12,159,1993)。 Wu et al., Focuses on the asialoglycoprotein Resebuta present in hepatocytes, the complex was prepared of poly -L- lysine and plasmid DNA obtained by binding asialoorosomucoid, which is allowed to act on hepatocytes have succeeded in expressing gene from plasmid DNA (GYWu and CHWu, Advanced Drug Delivery Revlews, 12,159,1993).
【0016】 [0016]
しかしながら、前述したようにポリ−L−リジンとDNAの複合体は沈殿物を生じやすく、沈殿を生じないように複合体を形成させるための諸条件には制限がある。 However, there are restrictions on the conditions for forming a complex so that the complex of poly -L- lysine and DNA, as described above prone to precipitate, no precipitation. 一方、沈殿を生じないように複合体を形成させると、複合体における運搬体と核酸との比は遺伝子導入効率に人きく影響するため(GYWu and CHWu,Biochem.,2 7,887,1988)、この比率が必ずしも遺伝子治療をするための最適な比率にならない、という矛盾した問題があった。 On the other hand, if to form a complex so as not to cause precipitation, because the ratio of the carrier and the nucleic acid in the complex which affects hear human gene transfer efficiency (GYWu and CHWu, Biochem., 2 7,887,1988), this ratio had not necessarily be the optimal ratio for a gene therapy, problems contradiction.
【0017】 [0017]
よって、遺伝子治療において薬物遺伝子を標的細胞に導入するための特異的、且つ効率が高い運搬体が必要とされていた。 Therefore, specific for introducing a therapeutic gene into target cells in gene therapy, have been and are the efficiency requires a high carrier.
【0018】 [0018]
【発明が解決しようとする課題】 [Problems that the Invention is to Solve
本発明は、細胞に核酸を導入するための新規核酸運搬体を提供することを目的とする。 The present invention aims at providing a novel nucleic acid carrier for introducing the nucleic acid into a cell. 本発明の核酸運搬体は、核酸を細胞内に効率良く安全に導入するための核酸結合性領域を有することを特徴とする。 Nucleic acid carrier of the present invention is characterized by having a nucleic acid binding region for introducing efficiently secure the nucleic acid into a cell.
【0019】 [0019]
本発明はまた、当該核酸運搬体および核酸を含む、核酸の細胞内への導入を促進するための調節剤を提供することを目的とする。 The present invention also the nucleic acid carrier and comprising a nucleic acid, and to provide a modifier to accelerate the introduction into cells of nucleic acids.
【0020】 [0020]
【課題を解決するための手段】 In order to solve the problems]
本発明者は、上記課題解決のため鋭意研究に努めた結果、遺伝子を運搬するための核酸運搬体中の核酸結合領域として、1つまたは複数の塩基性アミノ酸残基、及び分子内に水酸基を有する1つまたは複数のアミノ酸残基を含むぺブチドを用いれば、核酸を細胞内に効率良く安全に導入できることを見いだし、本願発明を完成した。 The present inventor has endeavored to intensive research for the problem solution, as the nucleic acid binding region of the nucleic acid carrier in order to carry genes, one or more basic amino acid residues, and a hydroxyl group in the molecule with the pair Buchido comprising one or more amino acid residues we have, found that nucleic acids can efficiently and safely introduced into the cell, thereby completing the present invention. 即ち、本発明の核酸運搬体は核酸結合領域として上記構成を採用することにより核酸と可溶性の複合体を形成するため、ポリ−L−リジンを用いた場合のように沈殿を生じるという問題を生じることなく、核酸を効率よく細胞内に導入することを初めて可能にしたものである。 That is, nucleic acid carrier of the present invention results in order to form a complex of nucleic acid and soluble by adopting the above configuration as a nucleic acid binding region, a problem that results in precipitation as in the case of using poly -L- lysine it rather is obtained by the first time possible to introduce the nucleic acid efficiently in cells.
【0021】 [0021]
さらに、本発明の核酸運搬体は、核酸を標的細胞または細胞内の標的部位に特異的に運ぶための標的指向性付与領域を有する。 Furthermore, nucleic acid carrier of the present invention have a targeting application region for carrying the nucleic acid specifically to a target site of the target cell or cells. 核酸と複合体を形成した本発明の核酸運搬体は、この標的指向性領域の存在により、生体に投与後分解されることなく核酸を標的細胞または標的部位に特異的に送達する。 Nucleic acid carrier of the present invention the formation of the nucleic acid complexes, the presence of the targeting region, a nucleic acid without being degraded after administration to a living body to deliver specifically to the target cell or target site.
【0022】 [0022]
以下、この発明の構成および好ましい態様について詳説する。 Hereinafter, the detailed configuration and preferred embodiments of the invention.
【0023】 [0023]
核酸運搬体 Nucleic acid carrier
本発明の核酸運搬体は、核酸結合領域、標的指向性付与領域およびポリエチレングリコール領域を含む。 Nucleic acid carrier of the invention comprises a nucleic acid binding region, the targeting application region and polyethylene glycol area.
【0024】 [0024]
「核酸結合領域」とは核酸と親和性を有する領域である。 By "nucleic acid binding region" is a region having a nucleic acid affinity. この領域の存在により核酸運搬体は所望の核酸と複合体を形成することが可能となる。 Nucleic acid carrier by the presence of this region it is possible to form a complex with the desired nucleic acid. 本発明の核酸結合領域は、1つまたは複数の塩基性アミノ酸残基、及び分子内に水酸基を有する1つまたは複数のアミノ酸残基を含むぺブチドであることを特徴とする。 Nucleic acid binding domain of the present invention is characterized by a pair Buchido comprising one or more amino acid residues having a hydroxyl group at one or more basic amino acid residues, and the molecule. 限定するわけではないが、前記塩基性アミノ酸は、L−リジン、D−リジン、L−アルギニン、D−アルギニン、L−オルニチン、D−オルニチン、L−ヒスチジンおよびD−ヒスチジンからなるグループから選択され、一つの分子内に水酸基を有するアミノ酸はL−セリン、D−セリン、L一トレオニン、D−トレオニン、L−チロシンおよびD−チロシンからなるグループから選択されるのが好ましい。 But are not limited to, the basic amino acid, L- lysine, D- lysine, L- arginine, D- arginine, L- ornithine, D- ornithine, selected from the group consisting of L- histidine and D- histidine , an amino acid having a hydroxyl group in one molecule L- serine, D- serine, L one-threonine, D- threonine, being selected from the group consisting of L- tyrosine and D- tyrosine are preferred. 塩基性アミノ酸残基と水酸基を有するアミノ酸残基の組成比はモル比で50:1から1:50、好ましくは20:1から1:20であり、より好ましくは10:1から1:10である。 The composition ratio of amino acid residues having basic amino acid residue and the hydroxyl group in a molar ratio of 50: 1 to 1:50, preferably 20: 1 to 1:20, more preferably from 10: 1 to 1:10 is there.
【0025】 [0025]
好ましい核酸結合領域は、限定するけではないが、例えば、ポリ−L−リジン−L−セリン コポリマー、ポリ−Dーリジン−L−セリン コポリマー、ポリ−L−リジン−D−セリン コポリマー、ポリ−D−リジン−D−セリン コポリマー、ポリ−L−オルニチン−L−セリン コポリマー、ボリ−D−オルニチン−L−セリン コポリマー、ポリ−L−オルニチン−D−セリン コポリマー、ポリ−D−オルニチン−D−セリン コポリマー、ポリ−L−ヒスチジン−L−セリン コポリマー、ポリ−D−ヒスチジン−L−セリン コポリマー、ポリ−L−ヒスチジン−D−セリン コポリマー、ポリ−D−ヒスチジン−D−セリン コポリマー、ポリ−L−リジン−L−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−D−リジン−L−セリン PEGブ Preferred nucleic acid binding region, but only not limited to, for example, poly -L- lysine -L- serine copolymers, poly -D Rijin -L- serine copolymers, poly -L- lysine -D- serine copolymers, poly -D - lysine -D- serine copolymers, poly -L- ornithine -L- serine copolymers, polyethylene -D- ornithine -L- serine copolymers, poly -L- ornithine -D- serine copolymers, poly -D- ornithine -D- serine copolymer, poly -L- histidine -L- serine copolymers, poly -D- histidine -L- serine copolymers, poly -L- histidine -D- serine copolymers, poly -D- histidine -D- serine copolymers, poly -L- lysine -L- serine PEG block Kobori-mer, poly -D- lysine -L- serine PEG Breakfast ックコポリマー、ポリ−L−リジン−D−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−D−リジン−D−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−L−オルニチン−L−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−D−オルニチン−L−セリン PEGブロックコポリマー、ポリ−L−オルニチン−D−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−D−オルニチン−D−セリン PEGブロックコボリマー、ポリ−L−ヒスチジン−L−セリン PEGブロックコポリマー、ポリ−D−ヒスチジン−L−セリン PEGブロックコポリマー、ポリ−L−ヒスチジン−D−セリン PEGブロックコポリマー、ポリ−D−ヒスチジン−D−セリン PEGブロックコポリマー等である。 Kkukoporima, poly -L- lysine -D- serine PEG block Kobori mer poly -D- lysine -D- serine PEG block Kobori mer, poly -L- ornithine -L- serine PEG block Kobori mer, poly -D- ornithine - L- serine PEG block copolymers, poly -L- ornithine -D- serine PEG block Kobori mer, poly -D- ornithine -D- serine PEG block Kobori mer, poly -L- histidine -L- serine PEG block copolymers, poly - D- histidine -L- serine PEG block copolymers, poly -L- histidine -D- serine PEG block copolymers, poly -D- histidine -D- serine PEG block copolymer and the like. 特に好ましい核酸結合領域は、ポリ−L−リジン−L−セリン コポリマーである。 Particularly preferred nucleic acid-binding domain is a poly -L- lysine -L- serine copolymer.
【0026】 [0026]
これらの核酸結合領域の分子量は、約200から約500,000であり、好ましくは1000以上500,000以下であり、より好ましくは2,000以上100,000以下である。 The molecular weight of these nucleic acid binding region of about 200 about 500,000, preferably 1,000 to 500,000, more preferably 100,000 or less than 2,000.
【0027】 [0027]
「標的指向性付与領域」は、遺伝子治療の対象となる標的細胞の表面若しくは標的細胞内部位に存在する各種受容体に対するリガンド、細胞が必要とする栄養素を取り込むための輸送タンパク質に対するリガンド等、特に制限なく用いることができる。 "Targeting imparting region" ligand such as for a transport protein for taking nutrients ligands for various receptors present on the surface or target cell sites of a target cell of interest for gene therapy, cell requires, in particular it can be used without restriction. 当業者は、核酸を標的となる細胞等に特異的に運搬するのに必要なそのような領域を容易に選択することができるであろう。 Those skilled in the art will such regions required for carrying specifically in cells or the like to be a nucleic acid target can be easily selected. 例えば、ペブチドホルモン、成長因子、免疫グロブリン、リソゾーム酵素、細胞毒素を用いることが可能である。 For example, Pebuchidohorumon, growth factors, immunoglobulins, lysosomal enzymes, it is possible to use cytotoxin. または、末端にガラクトース残基(Gal)、N−アセチルガラクトサミン残基(GalNac)を用いることにより、肝指向性を持たせることもせることもできる。 Or, terminal galactose residue (Gal), by using N- acetylgalactosamine residues (GalNac), may also cause it to have a hepatotropic. あるいは、細胞膜との融合性を高めるために、例えば、インフルエンザ由来の膜融合性タンパク質やアデノウイルス由来膜融合性タンパク質を遺伝子担体に付加することも可能である。 Alternatively, in order to enhance fusion with the cell membrane, for example, can be a membrane fusion protein and adenovirus-derived membrane fusogenic protein from influenza be added to the gene carrier.
【0028】 [0028]
ポリエチレングリコール(PEG)の分子量は200から250,000以上まで用いることが可能であるが、1,000以上100,000以下であることが好ましく、1,000以上50,000以下であることがより好ましい。 The molecular weight of the polyethylene glycol (PEG) It is possible to use up to 200 250,000 or more, more it is preferably 1,000 to 100,000, of 1,000 to 50,000 preferable.
【0029】 [0029]
調節剤 Modifiers
本発明はさらに、前記核酸運搬体および核酸を含む調節剤を提供する。 The present invention further provides a modifier comprising the nucleic acid carrier and nucleic acid. 本発明の核酸運搬体は核酸と複合体を形成し、所望の核酸を標的細胞または細胞部位に送達する。 Nucleic acid carrier of the present invention to form a nucleic acid complexes to deliver a desired nucleic acid into a target cell or cell site.
【0030】 [0030]
本発明の運搬体によって細胞内に導入できる核酸の大きさ、種類等は特に限定されない。 The size of the nucleic acid can be introduced into the cell by carrier of the present invention, the type or the like are not particularly limited. 核酸の種類としては、例えば、線状二本鎖DNA、環状二本鎖DNA、オリゴヌクレオチド、RNA等がある。 The type of nucleic acid, for example, linear double-stranded DNA, circular double-stranded DNA, oligonucleotide, a RNA, and the like. 例えば、本発明の運搬体の利用により、細胞に有用なタンパク質をコードする構造遺伝子を導入して、該遺伝子を発現させることができる。 For example, by the use of the vehicle of the present invention, by introducing a structural gene encoding a protein useful cells can express the gene. 構造遺伝子が導入された場合、後述の実施例5に示すように非常に高い遺伝子発現を示す。 If the structural gene has been introduced, a very high gene expression as it is shown in Example 5 below. また、アンチセンスを導入して特定の遺伝子の発現の制御を行うことができる。 Further, by introducing the antisense can control the expression of a particular gene. このほか、リボザイム、トリプレックス、アプタマー等の運搬体としても利用できる。 In addition, ribozyme, triplex, can also be used as carriers of the aptamer and the like. さらに、核酸には、ホスフェート結合をホスフォチオエート結合に置換した、ホスフォチオエートヌクレオチド等の誘導体も含む。 Furthermore, the nucleic acid to replace the phosphate bond to a phosphodiester thio benzoate binding, including derivatives such as phosphonium thio benzoate nucleotides.
【0031】 [0031]
また、限定されるわけではないが、核酸1μgに対して約0.1−1000μg、好ましくは1−200μgの運搬体を使用する。 Also, but not limited to, about the nucleic acid 1 [mu] g 0.1-1000Myug, preferably used carrier of 1-200Myug.
【0032】 [0032]
一例として、構造遺伝子及び当該遺伝子を細胞内で発現させるための発現カセットを含む遺伝子発現ベクターを、本発明の核酸運搬体を用いて細胞に導入することができる。 As an example, it is possible to introduce a structural gene and the gene gene expression vector containing an expression cassette for expression in such cells, to cells using the nucleic acid carrier of the present invention.
【0033】 [0033]
遺伝子は例えば、疾患に対応する薬剤遺伝子、即ち、疾患に対して拮抗的に作用する遺伝子が用いられる。 Gene, for example, a drug genes corresponding to disorders, namely genes that act antagonistically against disease is used. 薬剤遺伝子には、例えば、酵素欠損症に対しては止常な酵素をコードする遺伝子、ウイルス感染症に対してはウイルス感染細胞を殺傷するためのチミジンキナーゼ、ジフテリアトキシン等の毒素をコードする遺伝子やウイルスの複製等を阻害するアンチセンス、トリブルヘリックス、リボザイム、デコイ、トランスドミナントミュータント等をコードする遺伝子、癌に対しては癌細胞を殺傷するためのチミジンキナーゼ、ジフテリアトキシン等の毒素をコードする遺伝子や癌遺伝子を不活性化するためのアンチセンス、リボザイム、トリブルヘリックス等をコードする遺伝子や、癌細胞を正常化するためのp53等の癌抑制遺伝子、抗癌剤に対する多剤耐性に関与する遺伝子を不活性化するためのアンチセンス、トリブルヘリックス、リボザ The drug gene, for example, encoding genes encoding Tometsune enzymes for enzyme deficiency, thymidine kinase for killing virus-infected cells against viral infection, toxins such as diphtheria toxin gene antisense that inhibit or replication of a virus such as, encoding avian Bull helix, ribozyme, decoy, genes encoding transdominant mutants, etc., thymidine kinase for against cancer to kill cancer cells, toxins such as diphtheria toxin antisense to inactivate genes and oncogenes, ribozymes, genes or encoding avian Bull helix etc., tumor suppressor genes p53 like for normalizing cancer cells, the genes involved in multidrug resistance to anticancer drugs antisense, tri Bull helix to inactivate, Riboza ム等をコードする遺伝子、家族性高コレステロール血症に対してはLDLレセブターをコードする遺伝子が含まれる。 Gene encoding beam, etc., for familial hypercholesterolemia include genes encoding LDL Resebuta.
【0034】 [0034]
発現カセットは、標的細胞内で遺伝子を発現させることができるものであれば、特に制限されることなく何でも用いることができる。 The expression cassette, as long as it can express the gene in target cells, can be used whatever without being particularly limited. 当業者はそのような発現カセットを容易に選択することができる。 Those skilled in the art can select such expression cassettes easily. 好ましくは、動物由来の細胞内で遺伝子発現が可能な発現カセットであり、より好ましくは、哺乳類由来の細胞内で遺伝子発現が可能な発現カセットであり、特に好ましくは、ヒト由来の細胞内で遺伝子発現が可能な発現カセットである。 Preferably, an expression cassette capable of gene expression in the cells derived from an animal, more preferably expression cassettes capable of gene expression in cells of mammalian origin, particularly preferably a gene in cells of human origin expression is an expression cassette that can be. 発現カセットに用いられる遣伝子プロモーターは、例えばアデノウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、シミアンウイルス40、ラウス肉腫ウイルス、単純ヘルペスウイルス、マウス白血病ウイルス、シンビスウイルス、センダイウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、バピローマウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルス、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、JCウイルス、バルボウイルスBI9、ポリオウイルス等のウイルス由来のプロモーター、アルブミンや熱ショック蛋白等の哺乳類由来のプロモーター、CAGプロモーター等のキメラ型プロモーター等を含む。 Yadenko promoter used in expression cassettes, such as adenovirus, cytomegalovirus, human immunodeficiency virus, simian virus 40, Rous sarcoma virus, herpes simplex virus, murine leukemia virus, sindbis virus, Sendai virus, A Hepatitis virus, B type hepatitis virus, C type hepatitis virus, Ba pillow Ma virus, human T cell leukemia virus, influenza virus, Japanese encephalitis virus, JC virus, Valvo virus BI9, promoters derived from viruses such as poliovirus, albumin and a heat shock promoter derived from mammalian proteins and the like, including a chimeric promoters such as CAG promoter.
【0035】 [0035]
本発明の調節剤は、まず患者から標的細胞を体外に取り出し、目的とする遺伝子を導入した後に再びその細胞を患者の体内に戻すという自家移植による遺伝子治療(ex vivo 遺伝子治療)にも、遺伝子を直接患者に投与する遺伝子治療(in vivo 遺伝子治療)にも使用できる。 Regulator of the present invention, first the target cells are removed from the body of the patient, also in gene therapy by autologous transplantation (ex vivo gene therapy) that the cells again after introducing the gene of interest back into the patient, the gene It can also be used to direct gene therapy of administering to a patient (in vivo gene therapy). また、遺伝子治療は、異常(原因)遺伝子をそのままにして、新しい(正常)遺伝子を付け加える方法(Augmentation Gene Therapy)と、異常遺伝子を正常遺伝子で置き換える方法(Replacement Gene Therapy)に大別できるが、どちらにも使用できる。 Moreover, gene therapy, abnormal (cause) in the intact gene, and the new (normal) method to add a gene (Augmentation Gene Therapy), abnormalities genes can be roughly classified into a method of replacing the normal gene (Replacement Gene Therapy), either can be used.
【0036】 [0036]
本発明の調製剤の投与は、限定するわけではないが、一般に非経口的に行われ、例えば注射投与することにより好ましく実施できる。 Administration of preparations of the present invention include, but are not limited, generally carried out parenterally, can preferably carried out by, for example, it is administered by injection. 本発明の調節剤の使用量は、その使用方法、使用目的等により異なるが、例えば、注射投与して用いる場合には、1日量約0.1μg/kg−1000mg/kgを投与するのが好ましく、より好ましくは、1日量約1μg/kg−100mg/kgである。 The amount of the modifier of the present invention, the method used may vary depending on the intended use or the like, for example, when used in injection administration, to administer about 0.1μg / kg-1000mg / kg daily dose preferably, more preferably of 1 day to about 1μg / kg-100mg / kg.
【0037】 [0037]
さらに、本発明を利用することにより、温度刺激により各種マーカー遺伝子および治療用遺伝子が発現されるように設計されたベクターを導入した後、例えば温熱療法等の温度刺激を与えることにより、遺伝子刺激における部位特異的遺伝子発現が可能となる。 Furthermore, by utilizing the present invention, by providing after the introduction of the designed vectors as various marker genes and therapeutic genes by temperature stimulation is expressed, for example, a thermal stimulation such as hyperthermia, in the gene stimulation site-specific gene expression can be achieved.
【0038】 [0038]
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例によって制限されるものではない。 The present invention will be described below by way of examples more specifically, the present invention should not be construed by these examples limit.
【0039】 [0039]
【実施例】 【Example】
実施例1:ガラクトース修飾ポリーLーリジン−Lーセリン PEGブロックコポリマー(Gal−PLSP)の調製 Example 1: Preparation of galactose-modified poly L Rijin -L Serin PEG block copolymer (Gal-PLSP)
ε−カルボベンゾキシ−L−リジン−N−カルボン酸無水物1.0g(シグマ社)及びペンジル−L−セリン−N−カルボン酸無水物1.0g(シグマ社〉を、DMF(和光純薬)30mlに溶解し、クロロホルム(和光純薬)15mlを添加した。片末端メトキシ片末端アミノ基のポリエチレンオキシド日本油脂)4.0gをクロロホルム15mlに溶解した液を添加した。 ε- carbobenzoxy -L- lysine -N- carboxylic anhydride 1.0g (Sigma) and Penjiru -L- serine -N- carboxylic anhydride 1.0g (Sigma>, DMF (Wako Pure Chemical ) was dissolved in 30 ml, and the polyethylene oxide NOF) 4.0 g of chloroform (Wako pure Chemical) 15 ml was added. piece methoxy-terminated one-terminal amino group was added a solution prepared by dissolving in chloroform 15 ml.
【0040】 [0040]
26時間後、反応混合液を330mlのジエチルエーテル(和光純薬)に滴下することで生成したポリマーを沈殿させ、ろ過により回収した。 After 26 h, the polymer formed by dropping the reaction mixture into diethyl ether 330 ml (Wako Pure Chemical) was precipitated was collected by filtration. さらにジエチルエーテルで洗浄後、減圧乾燥し、臭化水素酢酸液(和光純薬)で脱保護を行ないポリ−L−リジン−L−セリン PEGブロックコポリマー(PLSP)4.6gを得た。 After further washed with diethyl ether and dried under reduced pressure to give hydrobromic acid solution (Wako Pure Chemical) in subjected to deprotection poly -L- lysine -L- serine PEG block copolymer (PLSP) 4.6 g. PLSPのガラクトース修飾はMonslgnyらの方法(Monsigny M. et. al., Biol. Cell, 51,187,1984)に従った。 Galactose modification of PLSP is Monslgny et al's method (Monsigny M. et. Al., Biol. Cell, 51,187,1984) in accordance with the.
【0041】 [0041]
実施例2:ブラスミドpCAGGSLucの構築 Example 2: Construction of Burasumido pCAGGSLuc
図1に示したように、CMV−IEエンハンサー、ニワトリ3−アクチンブロモーター配列の下流にルシフェフーゼをコードする遺伝子配列を挿入したプラスミドを遺伝子組み換え法(J.Sambrook,et al., Molecular C1oning)により構築した。 As shown in FIG. 1, CMV-IE enhancer, plasmid recombinant methods by inserting the gene sequence encoding the Rushifefuze downstream of chicken 3-actin Bro motor sequences (J.Sambrook, et al., Molecular C1oning) by It was constructed.
【0042】 [0042]
実施例3:Gal Example 3: Gal −PLSP/pCAGGSLuc複合体及びポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体の調製 Preparation of -PLSP / pCAGGSLuc complex and poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex
実施例1で得られたGal−PLSPあるいはポリ−L−リジン(Sigma社)、及び実施例2の操作により得られたブラスミドpCAGGSLucを各々0.15MのNaClを含む20mMHEPES緩衝液、pH7.3(以下、HBS)に溶解した。 Obtained in Example 1 Gal-PLSP or poly -L- lysine (Sigma), and 20mMHEPES buffer respectively Burasumido pCAGGSLuc obtained by the procedure of Example 2 containing 0.15M NaCl, pH 7.3 ( below, it was dissolved in HBS). ブラスミドpCAGGSLucは3μgを175μlのHBSに溶解した。 Burasumido pCAGGSLuc was dissolved 3μg to HBS of 175μl. Gal−PLSP及びポリ−L−リジンはブラスミドpCAGGSLucに対して様々な重量比になるように秤量し、75μlのHBSに溶解した。 Gal-PLSP and poly -L- lysine were weighed so as to various weight ratios relative Burasumido PCAGGSLuc, dissolved in HBS of 75 [mu] l. 各々の溶液を混合後、室温で30分放置してGal−PLSP/pCAGGSLuc複合体、あるいはポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体を調製した。 After mixing, each solution was prepared Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex was left for 30 minutes at room temperature, or a poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex.
【0043】 [0043]
実施例4:Gal Example 4: Gal −PLSP/pCAGGSLuc複合体及びポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体のフィルターによるろ過 Filtration through filter -PLSP / pCAGGSLuc complex and poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex
実施例3により調製したGal−PLSP/pCAGGSLuc複合体及びポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体を膜孔径0.22μmのフィルター(ミリポア社)で濾過した。 Was filtered Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex and poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex prepared according to Example 3 with membrane pore size 0.22μm filter (Millipore). ろ液を回収し、分光光度計(ベックマン社 DU640型)により波長260nmでの吸光度を測定した。 The filtrate was collected and the absorbance was measured at a wavelength of 260nm by a spectrophotometer (Beckman DU640 model).
【0044】 [0044]
結果を図2に示す。 The results are shown in Figure 2. ポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体では、ろ液中へのブラスミド遺伝子の回収率が20%以下であったのに対し、Gal−PLSP/pCAGGSLuc複合体では78%以上であった。 The poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex, recovery of Burasumido gene into filtrate during whereas 20% or less, the Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex was 78% or more. この結果は、ポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体が不溶性の粒子状物質を形成しているのに対し、Gal−PLSP/pCAGGSLuc複合体では、膜孔径0.22μmのフィルターを通過することが可能な、より小さなサイズの複合体が形成されていることを示すものである。 This result, while poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex forms a particulate material insoluble in the Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex, allowed to pass through the membrane pore size 0.22μm filter Do, is an indication that the complex of a smaller size are formed.
【0045】 [0045]
実施例5:Gal−PLSP/pCAGGSLuc複合体によるHepG2細胞への遺伝子導入 Example 5: Gene transfer into Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex by HepG2 cells
HepG2細胞を10%のウシ胎児血清(FCS、BIO WHITTAKER社)を含むDMEM(GIBCO BRL社)中で50%コンフレントの状態になるまで培養(12ウェルの細胞培養プレートを使用)した。 HepG2 cells with 10% fetal calf serum (FCS, BIO WHITTAKER, Inc.) was DMEM (using cell culture plate 12 well) cultured in (GIBCO BRL Co.) until the state of 50% confluent including. 培養液を1%のFCSを含むDMEMに交換した後、実施例3により調製したGal−PLSP/pCAGGSLuc複合体、あるいは、ポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体の全量(250μl)を添加した。 After replacing the culture solution DMEM containing 1% FCS, Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex prepared according to Example 3, or poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex of the whole amount (250 [mu] l) was added. 37℃のC0 2インキュベーター内に4時間放置し、培養液を10%のFCSを含むDMEMに交換した後、さらに72時間、37℃のC0 2インキュベーター内で培養した。 It was left for 4 hours to 37 ° C. in C0 2 incubator, after replacing the culture medium of DMEM containing 10% FCS, an additional 72 hours, and cultured in a C0 2 incubator at 37 ° C..
【0046】 [0046]
実施例6:HepG2細胞におけるルシフェフーゼ活性の測定 Example 6: Determination of Rushifefuze activity in HepG2 cells
実施例5の操作後、各ウェル内の培養液を取り除き、PBSで2回洗浄した。 After the procedure of Example 5, remove the culture solution in each well was washed twice with PBS. 100μlのピッカジーン培養細胞溶解剤LUC/PGC−50(東洋インキ社)を加え室温で15分間放置後、溶解させた細胞をエッペンチューブに入れ、12000rpmで2分間遠心分離して上清(細胞抽出液)を回収した。 After standing 100μl of PicaGene cultured cell lysing agents LUC / PGC-50 (Toyo Ink) was added for 15 minutes at room temperature to dissolve the cells were placed in Eppendorf tube and centrifuged for 2 min at 12000rpm supernatant (cell extract ) was recovered. 上記細胞抽出液10μlとLUC 混合液(東洋インキ社)400μlを混合し、ルミノメーター(Lumat LB95601,Berthold社)でルシフェフーゼ活性を測定した。 The cell extract 10μl and LUC mixture was mixed (Toyo Ink) 400 [mu] l, were measured Rushifefuze activity in a luminometer (Lumat LB95601, Berthold Co.). 基質溶液として100μlのlmMルシフェリンを用いた。 With lmM luciferin 100μl as substrate solution.
【0047】 [0047]
結果を図3に示す。 The results are shown in Figure 3. 遺伝子発現の指標となるルシフェフーゼ活性は、Gal −PLSPの比が大きくなるほど増加した。 Rushifefuze activity as an index of gene expression was increased as the ratio of Gal -PLSP increases. これと比較して、ポリ−L−リジン/pCAGGSLuc複合体では、ポリ−L−リジンの比に関係なくルシフェフーゼ活性はGal−PLSP/pCAGGSLuc複合体よりも低かった。 In comparison, the poly -L- lysine / PCAGGSLuc complex, Rushifefuze activity regardless of the ratio of poly -L- lysine was lower than Gal-PLSP / pCAGGSLuc complex. これらの結果はGal−PLSPが遺伝子治療用の遺伝子担体として非常に有用性が高いことを示すものである。 These results are indicative of an increased very useful as a gene carrier for Gal-PLSP gene therapy.
【図1】 図1は、ブラスミドpCAGGSLucの模式図を示す。 FIG. 1 shows a schematic diagram of Burasumido PCAGGSLuc.
【図2】 図2は、本発明の核酸運搬体Gal−PLSP及び対照のポリ−L−リジンを用いた場合のブラスミドpCAGGSLucの回収率を示す。 Figure 2 shows the recovery of Burasumido pCAGGSLuc in the case of using the nucleic acid carrier Gal-PLSP and control of poly -L- lysine present invention.
【図3】 図3は、本発明の核酸運搬体Gal−PLSP及び対照のポリ−L−リジンを用いた場合のルシフェラーゼ活性を示す。 Figure 3 shows the luciferase activity in the case of using the nucleic acid carrier Gal-PLSP and control of poly -L- lysine present invention.

Claims (8)

  1. 核酸結合領域、標的指向性付与領域およびポリエチレングリコール領域を含む核酸運搬体であって、前記核酸結合領域が、 ポリ−L−リジン−L−セリンである 、前記核酸運搬体。 Nucleic acid binding domain, a nucleic acid carrier comprising a targeting application region and polyethylene glycol regions, the nucleic acid binding region is poly -L- lysine -L- serine, the nucleic acid carrier.
  2. 核酸結合領域に含まれるL−リジンとL−セリンの組成比がモル比で、50:1から1:50であり、核酸結合領域の分子量が200から500,000であり、そしてポリエチレングリコール領域の分子量が200から250,000である、 請求項1に記載の核酸運搬体。 A nucleic acid binding domain composition ratio molar ratio that L- lysine and L- serine contained, 50: 1 to 1:50, a 500,000 molecular weight nucleic acid binding region 200, and polyethylene glycol area molecular weight of 250,000 to 200, nucleic acid carrier according to claim 1.
  3. 標的指向性付与領域が、細胞膜若しくは細胞内に存在する受容体、または物質輸送タンパク質に対応するリガンドである、 請求項1または2に記載の核酸運搬体。 Targeting imparting region, receptors present on cell membranes or the cell, or a ligand that corresponds to the material transport protein, nucleic acid carrier according to claim 1 or 2.
  4. 標的指向性付与領域が、少なくとも1残基以上のガラクトース残基を含む、 請求項3に記載の核酸運搬体。 Targeting application region comprises at least one residue or more galactose residues, nucleic acid carrier according to claim 3.
  5. 請求項1ないし4のいずれか1項に記載の核酸運搬体および核酸を含む、核酸の細胞内への導入を促進するための調節剤。 Regulators for nucleic acid carrier and comprising a nucleic acid, to facilitate the introduction into cells of a nucleic acid according to any one of claims 1 to 4.
  6. 前記核酸が、細胞内で発現させる遺伝子配列を含む遺伝子発現ベクターである、 請求項5に記載の調節剤。 It said nucleic acid is a gene expression vector comprising a gene sequence to be expressed in a cell, modulating agent according to claim 5.
  7. 遺伝子発現ベクターが哺乳動物由来の細胞内で発現させるための遺伝子配列を含む、 請求項6に記載の調節剤。 Gene expression vector comprises a gene sequence for expression in cells of mammalian origin, modulating agent according to claim 6.
  8. 遺伝子発現ベクターが遺伝子治療用の薬物遺伝子を含む、 請求項6または7に記載の調節剤。 Gene expression vector comprises a therapeutic gene for gene therapy, regulation agent according to claim 6 or 7.
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