JP3775518B2 - PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition - Google Patents
PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition Download PDFInfo
- Publication number
- JP3775518B2 JP3775518B2 JP30433195A JP30433195A JP3775518B2 JP 3775518 B2 JP3775518 B2 JP 3775518B2 JP 30433195 A JP30433195 A JP 30433195A JP 30433195 A JP30433195 A JP 30433195A JP 3775518 B2 JP3775518 B2 JP 3775518B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pqq
- calcium
- composition
- glucose dehydrogenase
- glucose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は安定化されたＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物および該組成物を使用するグルコース測定用試薬組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
血清、尿などの検体中のグルコース測定法としては、従来から化学法と酵素法が存在するが、一般的に特異性、安全性の面で酵素法が優れているとされている。酵素法としては、グルコースオキシダーゼ・ペルオキシダーゼ系、ヘキソキナーゼ・グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ系が主に使用されているが、両測定系とも、複数の酵素を用いるため簡便な反応系ではない。更に前者（グルコースオキシダーゼ・ペルオキシダーゼ系）は、過酸化水素が共存物質の影響を受けやすく、溶存酸素が律速のときには使用するのが困難になる。後者（ヘキソキナーゼ・グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ系）では補酵素としてＮＡＤ+ が必要であり、更に平衡反応が含まれているため、微量のグルコースを測定しにくい欠点が存在する。
【０００３】
補酵素として、ＰＱＱを必要とするＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼをグルコース測定系に使用することは、上記他の酵素を使用する問題点を解決する一つの方法である。特にグルコースを電気センサーを使用して測定することを考えた場合、グルコースオキシダーゼを用いる系では、酸素濃度の影響を受けるが、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼでは影響を受けない利点を有する。何故なら、該酵素は下記の反応を触媒し、グルコースより得た電子を電子受容体に受け渡す反応を触媒する酵素であるから。
【０００４】
グルコース ＋ 電子受容体 → グルコノラクトン ＋ 還元型電子受容体
【０００５】
ここで、電子受容体としては、フェリシアニド、電子キャリアと２，６−ジクロロフェノールインドフェノールの組み合わせ、電子キャリアとテトラゾリウム塩の組み合わせなどが挙げられる。
【０００６】
本発明に使用するＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを必要とする酵素であり、例えばアシネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩＢ１１５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス(Acinetobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、ＩＦＯ１３００６などから生産される。
【０００７】
該酵素を利用するグルコースの定量は、たとえば Methods in Enzymology, Vol.89 (1982) p20(Academic Press,Inc) などに記載されている。
検体中のグルコースに電子受容体の存在下にＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼを作用させ、生成する還元型電子受容体を測定する方法である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
このようなＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼの有する問題点は、グルコースオキシダーゼやヘキソキナーゼと比較すると、その安定性にあり、精製した酵素標品を臨床検査薬に添加しても、酵素の失活が著しく、試薬の劣化が激しいため保存が困難であると同時に測定値への影響も大きく実用上問題となっていた。
また該酵素の安定化剤としては、ＰＱＱを添加することが効果があるとされている（Arch. Biochem. Biophys., 218, 623-625 (1982)) が、ＰＱＱは非常に高価であり、産業上、その添加は難しい。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者等はＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼの安定化剤について、種々鋭意検討したところ、カルシウムイオンと特定のアミノ酸を併用すると安定化効果が高いことを見いだし、本発明に達した。
【００１０】
すなわち、本発明は（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、および（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されたアミノ酸を含有するＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物である。
【００１１】
また本発明は、（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されたアミノ酸、（３）ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ、（４）電子受容体、および、（５）緩衝液を含有するグルコース測定用試薬組成物である。
【００１２】
【発明の実施態様】
本発明において、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを必要とする酵素であり、例えばアシネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩＢ１１５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス(Acinetobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、ＩＦＯ１３００６などから生産される。
【００１３】
この酵素の１つとして、理化学的性質が、例えば分子量：約５５，０００（ゲル濾過法）、Ｋｍ値：７．９×１０-2Ｍ（Ｄ−グルコース）、至適ｐＨ：ｐＨ６〜７、至適温度：３７℃、ｐＨ安定性：ｐＨ６〜７、熱安定性：３０℃以下であるものが例示される。
【００１４】
本発明では、上記酵素に（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、および（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されたアミノ酸を含有させる。本発明の酵素組成物は、これらの安定化剤を含有するものであれば、水性組成物、凍結乾燥物を問わない。
【００１５】
カルシウムイオンの供給形態としては、塩化カルシウム、酢酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の無機酸または有機酸のカルシウム塩を挙げることができる。
また、水性組成物において、カルシウムイオンの含有量は、１×１０-4〜１×１０-2Ｍであることが好ましい。
【００１６】
グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されるアミノ酸は、１種または２種以上であってもよい。前記の水性組成物において、グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されたアミノ酸の含有量は、０．０１〜０．２重量％であることが好ましい。
また前記の水性組成物に血清アルブミンを添加する場合、その含有量は０．０５〜０．５重量％であることが好ましい。
【００１７】
本発明ではカルシウムイオンまたはカルシウム塩のみを含有させた場合、安定性にわずかな効果が見られるが、上記アミノ酸を含有させることにより、グルコースデヒドロゲナーゼの安定性が２倍以上に上昇する。
【００１８】
緩衝剤としては、通常のものが使用され、通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いられるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液はすべて使用できる。
【００１９】
前記の水性組成物には、必要により他の成分、例えば界面活性剤、安定化剤、賦形剤などを添加しても良い。
【００２０】
水性組成物を調製する場合、緩衝液への各安定剤の添加順序は、特に制限されない。本発明の凍結乾燥物は、通常の方法に従い、前記水性組成物を凍結乾燥して得る。
【００２１】
なお、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ活性の測定は、次の方法に従った。
５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．５ ２５．５ｍｌ、３．０ｍＭ ＰＭＳ ２．０ｍｌ、６．６ｍＭ ＮＴＢ １．０ｍｌおよび１Ｍ グルコースを含む６．３％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．９ｍｌを混合する。この混合液を３７℃で５分間インキュベートした後、酵素液を０．１ｍｌ添加し、混和後、水を対照に３７℃に制御された分光光度計で５７０ｎｍの吸光度変化を４〜５分間記録し、その初期直線部分から１分間当たりの吸光度変化を求める。１分間に１マイクロモルのグルコースを酸化する酵素量を１単位（Ｕ）とする。
【００２２】
本発明のグルコース測定用試薬とは、（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択されたアミノ酸、（３）ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ、（４）電子受容体、および、（５）緩衝液を含有するものである。電子受容体としては、フェリシアニド、電子キャリアと２，６−ジクロロフェノールインドフェノールの組み合わせ、電子キャリアとテトラゾリウム塩の組み合わせなどが挙げられる。また、緩衝液としては、通常のものが使用され、通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いられるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液はすべて使用できる。
【００２３】
本発明のグルコース測定用試薬を用いて、検体中のグルコースを測定する方法としては、検体を本発明のグルコース測定用試薬と接触させ、生成した還元型電子受容体を比色法、電気センサー等で検出する方法などがある。
【００２４】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に示す。
実施例１
下記成分を水道水６Ｌに溶解し、ｐＨを７．０に調整した後、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌して、培地を得た。
グルコース ６０ｇ
ポリペプトン １８０ｇ
酵母エキス ３０ｇ
ＮａＣｌ ６０ｇ
上記培地の入った１０Ｌジャーファーメンターに、アシネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩＢ１１５１７（National Collection of Industrial Bacteria, Abadeen Scotland) を接種し、３０℃で２０時間通気攪拌培養後、遠心分離して菌体を取得した。
得られた菌体をダイノミルにより破砕し、ＰＥＩ処理、硫安分画、フェニルセファロースクロマトグラフィーおよびＤＥＡＥ−セファロースクロマトグラフィーにより精製し、６００ＵのＰＱＱ−グルコースデヒドロゲナーゼを得た。
【００２５】
得られた酵素を下記化合物を含む５０ｍＭ トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中に保存して、３０℃、４日間保存し、その残存活性を調べた。得られた結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
１ｍＭ ＣａＣｌ2 の存在下、リジン、グルタミンまたはグルタミン酸の添加により、本発明の安定性が著しく向上した。しかしながら、ＭｇＣｌ2 の共存下では、これらのアミノ酸の安定化効果は小さかった。
【００２８】
実施例２
実施例１で得た酵素組成物を下記添加物を含む５０ｍＭ トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中で３０℃、４日間保存し、残存活性を測定した。実施例１で効果があったアミノ酸を組み合わせて添加すると、それぞれ単独で使用するより、更に安定化効果があった。特に１ｍＭ ＣａＣｌ2 共存下、グルタミン酸、グルタミンまたはリジンを組み合わせて使用すると、高価なＰＱＱの使用で得られる安定化効果とほぼ同等な効果が得られることが判明した。その結果を表２に示す。
【００２９】
【表２】
実施例３
ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼを(1) ５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５ (2) １０ｍＭ ＣａＣｌ2 および０．２％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、(3) １０ｍＭ ＣａＣｌ2 、０．０５％ グルタミン、０．０５％ グルタミン酸、０．０５％ リジン、０．２％およびＢＳＡを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液中、ｐＨ７．５で保存して、その熱安定性を比較した。その結果は図１に示す通りであり、(3) の条件、すなわちＣａＣｌ2 共存下、グルタミン、グルタミン酸、リジンにＢＳＡを組み合わせた緩衝液中で、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼは最も安定であった。
【００３１】
実施例４
実施例１のＰＱＱグルコースデヒドロゲナーゼ５Ｕ／ｍｌ、１−メトキシ−５−フェナゾリウムメチルサルフェート２９．５ｍＭ、ＭＴＴ０．６ｍＭ、ＮａＮ3 ０．２ｍＭ、１０ｍＭ ＣａＣｌ2 、０．０５％グルタミン、０．０５％グルタミン酸、０．０５％リジン、０．２％ＢＳＡ、５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５を混合して、グルコース測定用試薬組成物とした。該試薬組成物を使用して、血清中のグルコースを測定した。その結果は、図２に示す通りである。グルコース濃度の従って、吸光度が直線的に上昇した。
【００３２】
【発明の効果】
本発明ではより安価で、安定性に優れたＰＱＱグルコースデヒドロゲナーゼ組成物を得ることができる。また、この組成物を使用して、グルコース測定を溶存酸素の制約を受けずに、正確に測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼの熱安定性を示すグラフである。
【図２】グルコースの検量線を示すグラフである。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a stabilized PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and a glucose measurement reagent composition using the composition.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, there are chemical methods and enzymatic methods for measuring glucose in samples such as serum and urine, but in general, enzymatic methods are considered to be superior in terms of specificity and safety. As the enzyme method, glucose oxidase / peroxidase system and hexokinase / glucose-6-phosphate dehydrogenase system are mainly used, but both measurement systems are not simple reaction systems because they use a plurality of enzymes. Furthermore, the former (glucose oxidase / peroxidase system) is susceptible to the influence of coexisting substances, and is difficult to use when dissolved oxygen is rate-limiting. The latter (the hexokinase / glucose-6-phosphate dehydrogenase system) requires NAD + as a coenzyme and further includes an equilibrium reaction, so that there is a drawback that it is difficult to measure a trace amount of glucose.
[0003]
Using a PQQ-dependent glucose dehydrogenase that requires PQQ as a coenzyme in the glucose measurement system is one method for solving the problems of using the other enzymes. In particular, when measuring glucose using an electric sensor, the system using glucose oxidase is influenced by the oxygen concentration, but has the advantage of not being affected by PQQ-dependent glucose dehydrogenase. This is because the enzyme catalyzes the following reaction and catalyzes the reaction of transferring the electron obtained from glucose to the electron acceptor.
[0004]
Glucose + electron acceptor → gluconolactone + reduced electron acceptor
Examples of the electron acceptor include ferricyanide, a combination of an electron carrier and 2,6-dichlorophenolindophenol, and a combination of an electron carrier and a tetrazolium salt.
[0006]
The PQQ-dependent glucose dehydrogenase used in the present invention is an enzyme that requires PQQ as a coenzyme. , Produced from IFO 13006 and the like.
[0007]
The quantification of glucose using the enzyme is described in, for example, Methods in Enzymology, Vol. 89 (1982) p20 (Academic Press, Inc).
In this method, PQQ-dependent glucose dehydrogenase is allowed to act on glucose in a specimen in the presence of an electron acceptor to measure the reduced electron acceptor produced.
[0008]
[Problems to be solved by the invention]
The problem with such a PQQ-dependent glucose dehydrogenase is its stability compared to glucose oxidase and hexokinase, and even when a purified enzyme preparation is added to a clinical test drug, the inactivation of the enzyme is significant. Since the reagent is severely deteriorated, it is difficult to store, and at the same time, the influence on the measured value is large, which is a practical problem.
In addition, it is said that PQQ is effective as a stabilizer for the enzyme (Arch. Biochem. Biophys., 218, 623-625 (1982)), but PQQ is very expensive, Addition is difficult industrially.
[0009]
[Means for Solving the Problems]
As a result of diligent studies on the stabilizer for PQQ-dependent glucose dehydrogenase, the present inventors have found that when calcium ions and a specific amino acid are used in combination, the stabilization effect is high, and the present invention has been achieved.
[0010]
That is, the present invention is a PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition containing (1) a calcium ion or calcium salt, and (2) an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine .
[0011]
The present invention also provides (1) calcium ions or calcium salts, (2) amino acids selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine, (3) PQQ-dependent glucose dehydrogenase, (4) electron acceptor, and ( 5) A reagent composition for glucose measurement containing a buffer solution .
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the present invention, PQQ-dependent glucose dehydrogenase is an enzyme that requires PQQ as a coenzyme, such as Acinetobacter calcoaceticus NCIB11517, Acinetobacter calcoaceticus IFO12552 Produced from IFO 13006 and the like.
[0013]
As one of the enzymes, physicochemical properties are, for example, molecular weight: about 55,000 (gel filtration method), Km value: 7.9 × 10 −2 M (D-glucose), optimum pH: pH 6-7, Optimum temperature: 37 degreeC, pH stability: pH 6-7, thermal stability: What is 30 degrees C or less is illustrated.
[0014]
In the present invention, the enzyme contains (1) a calcium ion or calcium salt, and (2) an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine. The enzyme composition of the present invention may be an aqueous composition or a lyophilized product as long as it contains these stabilizers.
[0015]
Examples of the supply form of calcium ions include calcium salts of inorganic acids or organic acids such as calcium chloride, calcium acetate and calcium citrate.
In the aqueous composition, the content of calcium ions is preferably 1 × 10 −4 to 1 × 10 −2 M.
[0016]
One or more amino acids selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine may be used. In the aqueous composition, the content of an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine is preferably 0.01 to 0.2% by weight.
Moreover, when adding serum albumin to the said aqueous composition, it is preferable that the content is 0.05 to 0.5 weight%.
[0017]
In the present invention, when only calcium ions or calcium salts are contained, a slight effect is observed on the stability. However, the inclusion of the above amino acid increases the stability of glucose dehydrogenase more than twice.
[0018]
As a buffering agent, a normal thing is used, and what makes pH of a composition 5-10 normally is preferable. Specifically, Tris-HCl, boric acid, and Good's buffer are used, but any buffer that does not form an insoluble salt with calcium can be used.
[0019]
If necessary, other components such as surfactants, stabilizers and excipients may be added to the aqueous composition.
[0020]
When preparing an aqueous composition, the order of adding each stabilizer to the buffer is not particularly limited. The lyophilized product of the present invention is obtained by lyophilizing the aqueous composition according to a usual method.
[0021]
The PQQ-dependent glucose dehydrogenase activity was measured according to the following method.
Mix 0.9 ml of 50 mM PIPES buffer, pH 6.5 25.5 ml, 3.0 mM PMS 2.0 ml, 6.6 mM NTB 1.0 ml and 1% glucose 6.3% Triton X-100. After incubating this mixed solution at 37 ° C. for 5 minutes, 0.1 ml of enzyme solution was added, and after mixing, the absorbance change at 570 nm was recorded for 4 to 5 minutes using a spectrophotometer controlled at 37 ° C. with water as a control. The change in absorbance per minute is determined from the initial linear portion. The amount of enzyme that oxidizes 1 micromole of glucose per minute is defined as 1 unit (U).
[0022]
The reagent for measuring glucose of the present invention includes (1) calcium ion or calcium salt, (2) amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, glutamine and lysine, (3) PQQ-dependent glucose dehydrogenase, (4) electron accepting Body and (5) a buffer solution . Examples of the electron acceptor include ferricyanide, a combination of an electron carrier and 2,6-dichlorophenolindophenol, and a combination of an electron carrier and a tetrazolium salt. Moreover, as a buffer solution, a normal thing is used and the thing which makes pH of a composition 5-10 normally is preferable. Specifically, Tris-HCl, boric acid, and Good's buffer are used, but any buffer that does not form an insoluble salt with calcium can be used.
[0023]
As a method for measuring glucose in a sample using the glucose measurement reagent of the present invention, the sample is brought into contact with the glucose measurement reagent of the present invention, and the generated reduced electron acceptor is used for a colorimetric method, an electric sensor or the like. There is a method to detect by.
[0024]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples.
Example 1
The following components were dissolved in 6 L of tap water and the pH was adjusted to 7.0, and then sterilized with an autoclave at 121 ° C. for 20 minutes to obtain a medium.
60g glucose
Polypeptone 180g
30 g yeast extract
NaCl 60g
A 10-liter jar fermenter containing the above medium is inoculated with Acinetobacter calcoaceticus NCIB11517 (National Collection of Industrial Bacteria, Abadeen Scotland), and after aeration and agitation culture at 30 ° C. for 20 hours, it is centrifuged. Bacteria were obtained.
The obtained cells were disrupted with dynomill and purified by PEI treatment, ammonium sulfate fractionation, phenyl sepharose chromatography and DEAE-sepharose chromatography to obtain 600 U of PQQ-glucose dehydrogenase.
[0025]
The obtained enzyme was stored in 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5 containing the following compounds, stored at 30 ° C. for 4 days, and the residual activity was examined. The obtained results are shown in Table 1.
[0026]
[Table 1]
The addition of lysine, glutamine or glutamic acid in the presence of 1 mM CaCl 2 significantly improved the stability of the present invention. However, the stabilizing effect of these amino acids was small in the presence of MgCl 2 .
[0028]
Example 2
The enzyme composition obtained in Example 1 was stored in a 50 mM Tris-HCl buffer solution containing the following additives at pH 7.5 at 30 ° C. for 4 days, and the residual activity was measured. When amino acids that were effective in Example 1 were added in combination, there was a further stabilizing effect than when they were used alone. In particular, it has been found that when glutamic acid, glutamine or lysine is used in combination in the presence of 1 mM CaCl 2 , an effect almost equivalent to the stabilizing effect obtained by using expensive PQQ can be obtained. The results are shown in Table 2.
[0029]
[Table 2]
Example 3
PQQ-dependent glucose dehydrogenase (1) 50 mM PIPES buffer, pH 7.5 (2) 50 mM PIPES buffer containing 10 mM CaCl 2 and 0.2% BSA, pH 7.5, (3) 10 mM CaCl 2 , 0.05 The thermal stability was compared in 50 mM PIPES buffer containing% glutamine, 0.05% glutamic acid, 0.05% lysine, 0.2% and BSA at pH 7.5. The results are as shown in FIG. 1. The PQQ-dependent glucose dehydrogenase was most stable in the condition (3), that is, in a buffer solution in which BSA was combined with glutamine, glutamic acid, and lysine in the presence of CaCl 2 .
[0031]
Example 4
PQQ glucose dehydrogenase of Example 1 5 U / ml, 1-methoxy-5-phenazolium methyl sulfate 29.5 mM, MTT 0.6 mM, NaN 3 0.2 mM, 10 mM CaCl 2 , 0.05% glutamine, 0.05% Glutamic acid, 0.05% lysine, 0.2% BSA, 50 mM PIPES buffer, and pH 7.5 were mixed to obtain a glucose measurement reagent composition. The reagent composition was used to measure glucose in serum. The result is as shown in FIG. The absorbance increased linearly with the glucose concentration.
[0032]
【The invention's effect】
In the present invention, a cheaper PQQ glucose dehydrogenase composition having excellent stability can be obtained. Also, this composition can be used to accurately measure glucose without being limited by dissolved oxygen.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the thermal stability of PQQ-dependent glucose dehydrogenase.
FIG. 2 is a graph showing a calibration curve of glucose.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30433195A JP3775518B2 (en) | 1995-11-22 | 1995-11-22 | PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30433195A JP3775518B2 (en) | 1995-11-22 | 1995-11-22 | PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004096226A Division JP2004236665A (en) | 2004-03-29 | 2004-03-29 | Pqq-dependent glucose dehydrogenase composition and reagent composition for glucose measurement |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09140378A JPH09140378A (en) | 1997-06-03 |
| JP3775518B2 true JP3775518B2 (en) | 2006-05-17 |
Family
ID=17931726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30433195A Expired - Lifetime JP3775518B2 (en) | 1995-11-22 | 1995-11-22 | PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3775518B2 (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3694424B2 (en) * | 1998-09-29 | 2005-09-14 | 松下電器産業株式会社 | Glucose sensor |
| WO2001025776A1 (en) | 1999-10-05 | 2001-04-12 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Glucose sensor |
| JP3775561B2 (en) | 2000-02-17 | 2006-05-17 | 東洋紡績株式会社 | Stable PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition |
| EP1859048B1 (en) * | 2005-03-04 | 2014-06-18 | Bayer HealthCare LLC | Stabilizing the activity of pqq-dependent glucose dehydrogenase in electrochemical biosensors |
| JP6553894B2 (en) * | 2014-03-31 | 2019-07-31 | キユーピー株式会社 | Cosmetics and aging odor inhibitor containing aldehyde dehydrogenase containing acetic acid bacteria |
-
1995
- 1995-11-22 JP JP30433195A patent/JP3775518B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09140378A (en) | 1997-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11220674B2 (en) | Stabilization of dehydrogenases with stable coenzymes | |
| Di Paolantonio et al. | Induced bacterial electrode for the potentiometric measurement of tyrosine | |
| JP3775518B2 (en) | PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and glucose measurement reagent composition | |
| Hirasawa et al. | Oxidation–reduction properties of the regulatory site of spinach phosphoribulokinase | |
| US7479383B2 (en) | Modified pyrroloquinoline quinone (PQQ) dependent glucose dehydrogenase excellent in substrate specificity | |
| JP2004236665A (en) | Pqq-dependent glucose dehydrogenase composition and reagent composition for glucose measurement | |
| Compagnone et al. | An amperometric NADH biosensor based on NADH oxidase from Thermus aquaticus | |
| Carrillo et al. | Essential histidyl residues of ferredoxin-NADP+ oxidoreductase revealed by diethyl pyrocarbonate inactivation | |
| Huang et al. | Role of lysine-54 in determining cofactor specificity and binding in human dihydrofolate reductase | |
| JP4140929B2 (en) | Method for measuring 1,5AG or ADP | |
| US6884416B2 (en) | Stable PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition | |
| JP2872983B2 (en) | Method for quantifying 1,5-anhydroglucitol and reagent for quantification | |
| WO2022172343A1 (en) | Uricase activator and uric acid measurement reagent | |
| JP3852991B2 (en) | 1,5-Anhydroglucitol-6-phosphate dehydrogenase, process for producing the same and use thereof | |
| JP3819094B2 (en) | 1,5-Anhydroglucitol dehydrogenase, method for producing the same, and method for quantifying 1,5-anhydroglucitol using the same | |
| JP3929576B2 (en) | Microorganism producing enzyme acting on phosphorylated 1,5-anhydroglucitol, enzyme produced by the microorganism, and method for quantifying phosphorylated 1,5-anhydroglucitol using the same | |
| JP2004313172A (en) | Modified product of pyrrolo-quinoline quinone (ppq)-dependent glucose dehyrogenase excellent in substrate specificity or stability | |
| AU2012203453B2 (en) | Stabilization of dehydrogenases using stable coenzymes | |
| JP3424939B2 (en) | Substantially pure microorganisms producing monoglyceride lipase | |
| JP4455164B2 (en) | Stabilized PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition and reagent composition for glucose measurement | |
| JP2886846B2 (en) | 1,5-anhydroglucitol dehydrogenase and method for producing the same | |
| JP2006034165A (en) | Method for producing pqqgdh | |
| NZ587397A (en) | Stabilization of dehydrogenases using stable chemically modified coenzymes | |
| WO1998016625A1 (en) | Microorganism which produces enzyme acting on phosphorylated 1,5-anhydroglycitol, enzyme produced by said microorganism, and method for quantitatively determining phosphorylated 1,5-anhydroglycitol using the same | |
| JPS63283598A (en) | Pyruvate oxidase analyzing composition and analyzing method thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050929 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051107 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060202 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060215 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100303 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100303 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110303 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110303 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120303 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120303 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130303 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140303 Year of fee payment: 8 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |