JP3305291B2 - ペプチドの製造法 - Google Patents
ペプチドの製造法Info
- Publication number
- JP3305291B2 JP3305291B2 JP32892899A JP32892899A JP3305291B2 JP 3305291 B2 JP3305291 B2 JP 3305291B2 JP 32892899 A JP32892899 A JP 32892899A JP 32892899 A JP32892899 A JP 32892899A JP 3305291 B2 JP3305291 B2 JP 3305291B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- tyr
- leu
- pro
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Proなる構造を有するペプチドの製造法に関するもの
である。
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンI(Asp−Arg−Val−Tyr−Ile−
His−Pro−Phe−His−Leu)に作用し
て、アンギオテンシンIのC末端よりジペプチド(Hi
s9−Leu10)を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有
するアンギオテンシンIIを生成させる酵素である。ま
た、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破
壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与して
いる。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻
害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治
療に有効であると考えられている。
ルが合成され、降圧活性が確認されて以来、種々のアン
ギオテンシン変換酵素阻害物質の合成研究が盛んであ
り、又天然物からの取得も試みられているところであ
る。天然物由来のアンギオテンシン変換酵素阻害剤は食
品あるいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の
高い降圧剤となることが期待されるからである。
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド(ノナペプチド,SQ20881)等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物IS
83(特開昭58−177920号公報)が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプトシンにより分解して得たペプチド類等が知
られている(特開昭58−109425号、同59−4
4323号、同59−44324号、同61−3622
6号、同61−36227号)が、新規な阻害物質の開
発が望まれているところである。
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン変換酵素阻害物質を鋭意探索した結果、カツオブシ
をサーモライシンで加水分解することによりLeu−T
yr−Proなるアンギオテンシン変換酵素阻害活性を
有するペプチドが製造されることをつきとめ、本発明を
完成した。
する。Leu−Tyr−Proなるペプチドは、カツオ
ブシをサーモライシンで加水分解して取得する。その場
合には熱水にカツオブシを混合し強力な攪拌でホモジナ
イズし、所定量のサーモライシンを加え温度10〜85
℃程度で0.1〜4.8時間加水分解を行う。上記でい
うLeuはロイシン、Tyrはチロシン、Proはプロ
リンを意味し、かかるアミノ酸はいずれもL−体であ
る。
なるペプチドが存在し、該ペプチド以外に、他のペプチ
ドが存在しているが、これらは混合物のままで各種の用
途に用いられても良く、又該ペプチドのみを単離して用
いても差し支えない。単離する場合は加水分解液を遠心
分離等の公知の操作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾
固などを適用した後、あるいはせずしてそのまま、種々
の吸着剤に対する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する
溶解性あるいは溶解度の差、2種の混ざり合わない液相
間における分配の差、分子の大きさに基づく溶出速度の
差、溶液からの析出性あるいは析出速度の差などを利用
する手段を適用して目的物を単離するのが好ましい。こ
れらの方法は必要に応じて単独で用いられ、あるいは任
意の順序に組合せ、また反復して適用される。
ンシン変換酵素作用を有し、血圧降下作用、ブラジキニ
ン不活化抑制作用を示し、本態性高血圧、腎性高血圧、
副腎性高血圧などの高血圧症の予防、治療剤、これらの
疾患の診断剤や各種の病態において用いられる血圧降下
剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞の減少、うっ血性
心不全における病態の改善剤として有用であり、かかる
ペプチドの投与経路としては、経口投与、非経口投与、
直腸内投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。
かかるペプチドの投与量は化合物の種類、投与方法、患
者の症状・年令等により異なるが、通常1回0.001
〜1000mg、好ましくは0.01〜10mgを1日
当たり1〜3回である。かかるペプチドは通常、製剤用
担体と混合して調製した製剤の形で投与される。製剤用
担体としては、製剤分野において常用され、かつペプチ
ドと反応しない物質が用いられる。
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明の方法で製造したペプチドを水に溶解させて調製され
るが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に
溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよ
い。
ドを0.01重量%以上、好ましくは0.5〜70重量%
の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、
治療上価値ある他の成分を含有していてもよい。
する。 実施例1 (A)カツオブシ5gに水40mlを加え充分ホモジナ
イズし、サ−モライシンを20mg加え37℃、pH7
で3時間加水分解反応を行った。100℃で10分間煮
沸し、冷却後遠心分離して濃縮し、高速液体クロマトグ
ラフィー(ODS−,PH−及びCN−カラム)により
精製し、ペプチドを得た。かかるペプチドを気相プロテ
インシーケンサー(アブライド バイオシステムズ社製
477 A型)を用いる自動エドマン分解法を適用し
てアミノ酸配列を分析したところ、H−Leu−Tyr
−Pro−OHなる構造を有するものであり、該ペプチ
ドの物性値はつぎの通りであった。 TLC[n−ブタノール:酢酸:ピリジン:水=15:
3:10:12] (シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色) Rf:0.670 m.p:158℃ 元素分析 C20H29N3O5・0.7H2Oとして 比旋光度[α]D;(25℃、C=0.5 水);−2
0.0°
ンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定を行った。該測
定は、CheungとCushmanの方法〔Bioc
hemicalPharamacology 20,1
637(1971)〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質;Bz(ベンジル)−Gly−His−Leu (86mgを水8mlとリン酸緩衝液8mlに溶解した
溶液) 酵 素;うさぎの肺のアセトンパウダー(シグマ社製) (1gを50mMのリン酸緩衝液10ml中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液) 上記の酵素基質を100μl、酵素溶液を12μl及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を25
0μlとした後、37℃で30分間反応を行った。
終了させた。反応終了液に酢酸エチル1.5mlを入れ
Vortexで15秒撹拌し、それを遠心分離した。酢
酸エチル層から1.0mlをとり出して、酢酸エチルを留
去し、それに1mlの蒸留水を入れて残査を溶解し、抽
出された馬尿酸の紫外吸収228nmの値(OD228)
を測定した。阻害率は阻害剤なしで反応したときのOD
228を100%とし、反応時間0分のときのOD228を0
%として求め阻害率50%の時の阻害剤(本発明の製造
法で得られたペプチド)の濃度IC50(μM)で活性を
表示した。結果を表1に示す。又、参考例として本発明
の製造法で得られたペプチド以外のペプチドについても
阻害活性の測定を行ったので、表1に合わせて示す。
変換酵素阻害剤として有用なペプチドが得られる。
Claims (1)
- 【請求項1】 カツオブシをサ−モライシンで加水分解
してLeu−Tyr−Proなるペプチドを製造するこ
とを特徴とするペプチドの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP32892899A JP3305291B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | ペプチドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP32892899A JP3305291B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | ペプチドの製造法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2264640A Division JP3031692B2 (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2001145500A JP2001145500A (ja) | 2001-05-29 |
JP3305291B2 true JP3305291B2 (ja) | 2002-07-22 |
Family
ID=18215671
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP32892899A Expired - Lifetime JP3305291B2 (ja) | 1999-11-19 | 1999-11-19 | ペプチドの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3305291B2 (ja) |
-
1999
- 1999-11-19 JP JP32892899A patent/JP3305291B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2001145500A (ja) | 2001-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3119674B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP3009718B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP3305291B2 (ja) | ペプチドの製造法 | |
JP3040389B2 (ja) | ペプチドの製造法 | |
JP3465923B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3009719B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP3112695B2 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
JP3129523B2 (ja) | 新規ペプチド及びその製造方法 | |
JP3483212B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3112694B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3012291B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造方法及び用途 | |
JP3031693B2 (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成物の製造方法 | |
JP3465921B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3009720B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP2965683B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP2953634B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP3465922B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP2965682B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP2951428B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP3465920B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3031692B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
JP3012292B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
JP2922247B2 (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤 | |
JP3086235B2 (ja) | 新規ペプチド及び用途 | |
JP3474610B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090510 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100510 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100510 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110510 Year of fee payment: 9 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110510 Year of fee payment: 9 |