JP3214876U - Culture substrate - Google Patents
Culture substrate Download PDFInfo
- Publication number
- JP3214876U JP3214876U JP2017005431U JP2017005431U JP3214876U JP 3214876 U JP3214876 U JP 3214876U JP 2017005431 U JP2017005431 U JP 2017005431U JP 2017005431 U JP2017005431 U JP 2017005431U JP 3214876 U JP3214876 U JP 3214876U
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- well
- microwell
- culture substrate
- shape
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 39
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 8
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 4
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 229920001903 high density polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004700 high-density polyethylene Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ZSZRUEAFVQITHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000000071 blow moulding Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 235000012489 doughnuts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229920002050 silicone resin Polymers 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
【課題】１つの培養基材でウェルごとに異なる大きさのスフェロイドを形成可能な培養基材を提供する。【解決手段】培養基材は、複数のウェル２を有し、ウェル２内にマイクロウェル３を有し、少なくとも１つ以上のウェル２内のマイクロウェル３が他のウェル２内のマイクロウェル３と、開口径、開口形状、高さ、のいずれか１つ以上が異なっている。【選択図】図１A culture substrate capable of forming spheroids of different sizes for each well with a single culture substrate is provided. A culture substrate has a plurality of wells, and has a microwell in each of the wells. And one or more of the opening diameter, the opening shape, and the height are different. [Selection] Figure 1
Description
本考案は、細胞培養に用いる培養基材に関する考案である。 The present invention relates to a culture substrate used for cell culture.
ヒトや動物など由来の細胞を培養容器などで人工的に培養して三次元的に凝集させるスフェロイド培養がよく知られている。スフェロイド培養では、細胞集団が立体的な構造を形成し、細胞同士が相互作用しているため、生体内での三次元構造により近い状態で培養または維持できると考えられており、それが通常の平面接着培養と比べ優れた特性を示すことが知られている。実際に、がん細胞を用いた抗がん剤スクリーニングや、多能性幹細胞などの増殖や分化などにスフェロイド培養がよく利用されている。 Spheroid culture in which cells derived from humans or animals are artificially cultured in a culture vessel or the like to aggregate three-dimensionally is well known. In spheroid culture, the cell population forms a three-dimensional structure, and the cells interact with each other, so it is thought that it can be cultured or maintained in a state that is closer to the three-dimensional structure in vivo. It is known to show superior properties compared to planar adhesion culture. Actually, spheroid culture is often used for anticancer drug screening using cancer cells and proliferation and differentiation of pluripotent stem cells.
また、容器本体の底部に、細胞及び培養液を収容するための凹部（以下、ウェルともいう）を備え、この凹部の底部には、細胞を重力によって集合させるための複数のマイクロウェルを設けた細胞培養容器において、この凹部の開口端へ近付くにつれて開口面積が広がるように凹部の側面を傾斜面で構成したものも知られている（特許文献１参照）。 In addition, the bottom of the container body is provided with a recess (hereinafter also referred to as a well) for containing cells and culture solution, and a plurality of microwells for collecting cells by gravity are provided at the bottom of the recess. In a cell culture container, there is also known one in which a side surface of a concave portion is formed by an inclined surface so that an opening area is widened as it approaches the opening end of the concave portion (see Patent Document 1).
同じ環境下で細胞培養の様子を比較したい場合、１つの容器内で行うことが適切であるが、例えば、所望のスフェロイドの大きさや形状に合わせて適切なサイズのマイクロウェルを選択したい場合は、別の容器を準備する必要があった。そうなると、複数のマイクロプレートを使用する必要があり、培養試験に場所をとってしまったり、容器内でも使わないウェルが出てきたり、例えばシャーレのような１ウェルしかない容器では均一なスフェロイドを作るために必要量以上の細胞を播種しないといけなかったりするなどして効率が悪いという問題があった。 If you want to compare the state of cell culture in the same environment, it is appropriate to do it in one container, but for example, if you want to select a microwell of an appropriate size according to the size and shape of the desired spheroid, There was a need to prepare another container. In that case, it is necessary to use a plurality of microplates, and it takes up space for the culture test, a well that is not used in the container comes out, or a uniform spheroid is produced in a container having only one well such as a petri dish. For this reason, there is a problem that the efficiency is poor, for example, it is necessary to seed more cells than necessary.
また、マイクロウェルを用いてスフェロイドを形成する場合、スフェロイドはマイクロウェルの大きさや形状に依存した大きさとなる。所望の大きさや形状のスフェロイドを作るためには、それに合わせて、マイクロウェルの開口径、開口形状、高さのいずれかの因子を調整する必要があった。 Moreover, when forming a spheroid using a microwell, a spheroid becomes a magnitude | size depending on the magnitude | size and shape of a microwell. In order to produce a spheroid having a desired size and shape, it was necessary to adjust any factor of the opening diameter, opening shape, and height of the microwell accordingly.
本考案の課題は、１つの培養基材でウェルごとに異なる大きさや形状のスフェロイドを形成可能な培養基材を提供することである。 An object of the present invention is to provide a culture substrate that can form spheroids of different sizes and shapes for each well with a single culture substrate.
本考案の培養基材は、内部に培養面が配置された複数のウェルを有し、前記培養面はマイクロウェルを有し、少なくとも１つ以上のウェルが他のウェルと、開口径、開口形状、高さのいずれか１つ以上が異なるマイクロウェルを備えていることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention has a plurality of wells having a culture surface arranged therein, the culture surface has a microwell, and at least one or more wells have an opening diameter and an opening shape. , Characterized in that it has microwells that differ in any one or more of their heights.
本考案の培養基材は、前記培養面が、ウェルの底面に配置されていることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the culture surface is disposed on the bottom surface of the well.
本考案の培養基材は、前記マイクロウェルが、ウェルとは別部材からなり、ウェル内に配置されていることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the microwell is made of a member different from the well and is arranged in the well.
本考案の培養基材は、前記別部材が、インサート形状であることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the separate member has an insert shape.
本考案の培養基材は、前記別部材は、ウェルの底面に貼り付け又は載置されていることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the separate member is attached or placed on the bottom surface of the well.
本考案の培養基材は、前記ウェルが側面と底面が異なる材質であることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the well is made of a material having a different side surface and bottom surface.
本考案の培養基材は、前記マイクロウェルが、細胞低接着処理面であることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the microwell is a cell low adhesion treatment surface.
本考案の培養基材は、前記マイクロウェルが、非平坦面からなることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the microwell has a non-flat surface.
本考案の培養基材は、前記マイクロウェルが、培養面に稠密に配置されていることを特徴とする。 The culture substrate of the present invention is characterized in that the microwells are densely arranged on the culture surface.
本考案の培養基材によれば、１つの培養基材中で異なる条件のウェルでの細胞培養ができるので、条件ごとの培養状態の比較がしやすく、且つ通常の培養に比べて場所をとることなく培養が可能である。 According to the culture substrate of the present invention, since cells can be cultured in wells with different conditions in one culture substrate, it is easy to compare the culture state for each condition, and takes up more space than normal culture. Culturing is possible without any problems.
本考案の培養基材１の形状は例えば、シャーレ、フラスコ、多層フラスコ、マイクロプレート、シート、インサート等があげられるが培養基材１上で複数の条件で培養ができるよう仕切られており（本明細書では仕切り部材等で仕切られている区画もウェルと定義する）、且つウェル内に培養面が配置されているものであれば、特に限定しない。本明細書及び図面においては、複数の平底のウェル２を有し、そのウェル２の底面を培養面２１としたマイクロプレートを例に説明する。 Examples of the shape of the culture substrate 1 of the present invention include petri dishes, flasks, multilayer flasks, microplates, sheets, inserts, etc., but the culture substrate 1 is partitioned on the culture substrate 1 so that it can be cultured under a plurality of conditions. In the specification, a section partitioned by a partition member or the like is also defined as a well), and there is no particular limitation as long as the culture surface is arranged in the well. In the present specification and drawings, a microplate having a plurality of flat-bottomed wells 2 and having the bottom surface of the well 2 as a culture surface 21 will be described as an example.
本考案の培養基材１は、複数のウェル２を有する。例えば、通常のマイクロプレートの場合、ウェル２の数は６穴、１２穴、２４穴、４８穴、９６穴、３８４穴、１５３６穴等の規格化されたものを用いられるが、本考案においてはこれに限定されない。シャーレやフラスコのような培養面積の広い培養基材１を用いる場合は、仕切り等を用いて区画分けしてもよい。ウェル２の数は、培養基材１のサイズや、所望のウェル２の大きさ等により適宜調整可能である。１つの培養基材１に配置するウェル２の数は２〜１６００個程度が好ましい。 The culture substrate 1 of the present invention has a plurality of wells 2. For example, in the case of a normal microplate, the number of wells 2 is a standardized one such as 6 holes, 12 holes, 24 holes, 48 holes, 96 holes, 384 holes, 1536 holes, etc. It is not limited to this. When using a culture substrate 1 having a large culture area such as a petri dish or a flask, the culture substrate 1 may be partitioned using a partition or the like. The number of wells 2 can be appropriately adjusted depending on the size of the culture substrate 1, the desired size of the well 2, and the like. The number of wells 2 arranged on one culture substrate 1 is preferably about 2 to 1600.
本考案の培養基材１は、少なくとも１つ以上のウェル２内のマイクロウェル３が他のウェル２内のマイクロウェル３と、開口径ｄ１、開口形状、高さｈ１のいずれか１つ以上が異なっている。比較を行うためには、同基材内で異なる条件（開口径ｄ１、開口形状、高さｈ１のいずれか１つ以上が異なる）のマイクロウェル３が形成されたウェル２を有する必要がある。 In the culture substrate 1 of the present invention, at least one of the microwells 3 in the at least one well 2 has at least one of the opening diameter d1, the opening shape, and the height h1. Is different. In order to perform the comparison, it is necessary to have the well 2 in which the microwells 3 having different conditions (one or more of the opening diameter d1, the opening shape, and the height h1 are different) are formed in the same base material.
マイクロウェル３の開口径ｄ１が異なる場合、１つのマイクロウェル３内の容積が変わるため、培地量及び１つのマイクロウェル３内に播種できる細胞の量が変わり、開口径ｄ１が大きいものほど大きいスフェロイドの形成が可能となる。ここでマイクロウェル３の開口径ｄ１とは、図１にも示すように、マイクロウェル３の開口部を上面から見た場合に、開口部の内径のうち最も幅の広い部分を指す。マイクロウェル３の開口径ｄ１は特に限定されないが、培養基材１の大きさや、ウェル２の開口径ｄ２、配置するマイクロウェル３の数等に合わせ適宜選択可能である。マイクロウェル３の開口径ｄ１は０．０５ｍｍ〜３．０ｍｍ程度とすることが好ましい。０．０５ｍｍ未満であると、スフェロイド３が取り出しにくくなるおそれがある。また３．０ｍｍ超であると、スフェロイドがマイクロウェル３から飛び出しやすくなるおそれがある。マイクロウェル３の開口径ｄ１は０．１ｍｍ〜２．５ｍｍであることがより好ましく、０．１５ｍｍ〜２．０ｍｍであることがより一層好ましい。 When the opening diameter d1 of the microwell 3 is different, the volume in one microwell 3 changes, so the amount of medium and the amount of cells that can be seeded in one microwell 3 change, and the larger the opening diameter d1, the larger the spheroid Can be formed. Here, the opening diameter d1 of the microwell 3 indicates the widest portion of the inner diameter of the opening when the opening of the microwell 3 is viewed from above, as shown in FIG. The opening diameter d1 of the microwell 3 is not particularly limited, but can be appropriately selected according to the size of the culture substrate 1, the opening diameter d2 of the well 2, the number of microwells 3 to be arranged, and the like. The opening diameter d1 of the microwell 3 is preferably about 0.05 mm to 3.0 mm. If it is less than 0.05 mm, the spheroid 3 may be difficult to take out. If it exceeds 3.0 mm, the spheroids may easily jump out of the microwell 3. The opening diameter d1 of the microwell 3 is more preferably 0.1 mm to 2.5 mm, and still more preferably 0.15 mm to 2.0 mm.
マイクロウェル３の開口形状が異なる場合、１つのマイクロウェル３内の容積が変わったり、マイクロウェル３内の形状が変わったりするため、異なる形状のスフェロイドの形成が可能となる。マイクロウェル３の開口形状は、特に限定されないが、図１および図２に示すような丸形、ドーナツ形のほかに、格子形、楕円形、ハニカム形などから適宜選択可能である。マイクロウェル３の開口形状は所望のスフェロイドの形状に合わせて適宜調整可能である。 When the opening shapes of the microwells 3 are different, since the volume in one microwell 3 is changed or the shape in the microwell 3 is changed, spheroids having different shapes can be formed. The opening shape of the microwell 3 is not particularly limited, but can be appropriately selected from a lattice shape, an elliptical shape, a honeycomb shape, and the like in addition to the round shape and the donut shape as shown in FIGS. The opening shape of the microwell 3 can be appropriately adjusted in accordance with a desired spheroid shape.
マイクロウェル３の高さｈ１は、特に限定されないが、播種する細胞や条件に適するものを選択してよい。高さｈ１を変えることで、１ウェルあたりの容量が変わるため、形成されるスフェロイドのサイズがウェル２ごとに異なるので、所望のスフェロイドを形成できるマイクロウェル３のサイズの選択が可能となる。また、マイクロウェル３のサイズごとにスフェロイド形成条件や結果の比較が可能となる。マイクロウェル３の高さｈ１は５０μｍ〜１２００μｍ程度とすることが好ましい。また、マイクロウェル３の高さｈ１はマイクロウェル３の開口径ｄ１の０．１〜２．０倍であることが好ましい。マイクロウェル３の高さｈ１がウェル２の開口径ｄ１の０．１倍未満であるとスフェロイドがこぼれやすくなることが問題となる。また、マイクロウェル３の高さｈ１がマイクロウェル３の開口径ｄ１の２．０倍超であるとスフェロイドが取り出しづらくなること、培養面２１の強度が低くなることなどが問題となる。マイクロウェル３の高さｈ１はマイクロウェル３の開口径ｄ１の０．２〜１．８倍であることがより好ましく、０．３〜１．７倍であることがより一層好ましい。なお、マイクロウェル３の高さｈ１は図１および図２に示すように、マイクロウェル３の開口部から底面の長さのうち、最も長い箇所の値を指す。 The height h1 of the microwell 3 is not particularly limited, but may be selected as appropriate for the cells to be seeded and the conditions. Since the capacity per well is changed by changing the height h1, the size of the spheroid to be formed is different for each well 2, so that the size of the microwell 3 capable of forming a desired spheroid can be selected. In addition, spheroid formation conditions and results can be compared for each size of the microwell 3. The height h1 of the microwell 3 is preferably about 50 μm to 1200 μm. The height h1 of the microwell 3 is preferably 0.1 to 2.0 times the opening diameter d1 of the microwell 3. If the height h1 of the microwell 3 is less than 0.1 times the opening diameter d1 of the well 2, there is a problem that spheroids are easily spilled. Further, when the height h1 of the microwell 3 is more than 2.0 times the opening diameter d1 of the microwell 3, it becomes difficult to take out spheroids and the strength of the culture surface 21 is lowered. The height h1 of the microwell 3 is more preferably 0.2 to 1.8 times the opening diameter d1 of the microwell 3, and still more preferably 0.3 to 1.7 times. The height h1 of the microwell 3 indicates the value of the longest portion of the length from the opening to the bottom of the microwell 3 as shown in FIGS.
本考案の培養基材１の培養面２１はウェル２内に配置されている。培養面２１はウェル２内で細胞が落ち込める場所に有していればよく、ウェル２の底面に直接形成されていてもよく、ウェル２内に取り付けた別部材４に形成されていてもよい。なお、本明細書においては培養面２１がウェル２に別部材４で取り付けられていた場合でも、「ウェル内に配置されている」と定義する。 The culture surface 21 of the culture substrate 1 of the present invention is disposed in the well 2. The culture surface 21 may be provided in a place where cells can fall in the well 2, may be directly formed on the bottom surface of the well 2, or may be formed on another member 4 attached in the well 2. . In this specification, even when the culture surface 21 is attached to the well 2 with the separate member 4, it is defined as “arranged in the well”.
培養面２１をウェル２の底面に配置する場合、ウェル２の底面は平坦面であることが好ましい。平坦面とすることで、マイクロウェル３を形成できる面積が増える、培養面２１全体に均一なウェル２を形成しやすいというメリットがある。また、必要なマイクロウェル３の数が少ない場合は、Ｕ底、Ｖ底の方が細胞が落ち込みやすいため好ましい。 When the culture surface 21 is disposed on the bottom surface of the well 2, the bottom surface of the well 2 is preferably a flat surface. The flat surface is advantageous in that the area where the microwell 3 can be formed increases, and the uniform well 2 can be easily formed on the entire culture surface 21. Further, when the number of necessary microwells 3 is small, the U bottom and the V bottom are preferable because the cells easily fall.
培養面２１を図３に示すようにウェル２とは別部材４で形成し、ウェル２内に配置してもよい。その形状は図３（ａ）のようにインサート形状でもよく、図３（ｂ）のように培養面２１に貼り付け又は載置する形状の部材でもよい。別部材４であれば、例えば通常使用されるマイクロプレートのウェル２に取り付け可能なものを用意しておけば、必要に応じて使いやすい位置や数、培養面積等を有するマイクロウェル３を配置可能となる。ウェル２の周壁に保持部４１を使って固定するインサート形状であれば、培養後に容易に取り外しが可能であるため、培養したスフェロイドの移動が容易となる。また、別部材４をウェル２内に貼り付け又は載置する場合、ウェル２とは異なる材質でマイクロウェル３を形成することが可能となったり、別部材４の厚みを調整することで深いマイクロウェル３を形成したとしても培養面２１の強度を低下させることがなかったりする等のメリットがある。別部材４を貼り付ける手段として、接着剤、超音波溶着、両面接着テープ等、材質に合わせて適宜選択できる。また、別部材４を載置する際、培地を入れた際に別部材４が浮いてしまう場合は、材質及び形状を調整する必要がある。必要に応じてはめ込むための窪み等を形成してもよい。 As shown in FIG. 3, the culture surface 21 may be formed by a member 4 different from the well 2 and disposed in the well 2. The shape may be an insert shape as shown in FIG. 3 (a), or may be a member having a shape that is attached or placed on the culture surface 21 as shown in FIG. 3 (b). If the separate member 4 is prepared, for example, a member that can be attached to a well 2 of a commonly used microplate, a microwell 3 having an easy-to-use position, number, culture area, etc. can be arranged as required. It becomes. If it is the insert shape fixed to the surrounding wall of the well 2 using the holding | maintenance part 41, since it can remove easily after culture | cultivation, the movement of the cultured spheroid becomes easy. Further, when the separate member 4 is attached or placed in the well 2, the microwell 3 can be formed of a material different from the well 2, or the depth of the separate member 4 can be adjusted by adjusting the thickness of the separate member 4. Even if the well 3 is formed, there is a merit that the strength of the culture surface 21 is not lowered. The means for attaching the separate member 4 can be appropriately selected according to the material such as adhesive, ultrasonic welding, double-sided adhesive tape, and the like. Moreover, when mounting the separate member 4, when the separate member 4 floats when a culture medium is put, it is necessary to adjust a material and a shape. You may form the hollow etc. for fitting as needed.
マイクロウェル３が配置される培養面２１の材質は、ウェル２の培養面２１にマイクロウェル３を直接形成する場合は、ウェル２の培養面２１と同じ材質となる（培養面２１の材質が、マイクロウェル３の形成手段によって変質する材質の場合はこの限りではない）が、別部材４で形成してウェル２内に配置する場合、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ガラス、塩化ビニル、高密度ポリエチレン、ポリエーテルサルファン、ポリエチレンテレフタレート共重合体、ポリプロピレン、パーマノックス（商標）、金属、セラミックス等から適宜選択可能である。また、部分的に材質が違っていてもよい。例えば底面と側面で別材質から形成し、接着してもよい。例えば、ウェル２の底面を培養面２１とした培養基材１において、底面をガラスとした場合、顕微鏡観察がしやすくなるというメリットがある。 When the microwell 3 is directly formed on the culture surface 21 of the well 2, the material of the culture surface 21 on which the microwell 3 is disposed is the same material as the culture surface 21 of the well 2 (the material of the culture surface 21 is This is not the case when the material is altered by the forming means of the microwell 3), but when formed in the separate member 4 and placed in the well 2, polystyrene, polycarbonate, polyethylene terephthalate, glass, vinyl chloride, high density polyethylene , Polyethersulfane, polyethylene terephthalate copolymer, polypropylene, Permanox (trademark), metal, ceramics, and the like. Further, the material may be partially different. For example, the bottom and side surfaces may be formed from different materials and bonded. For example, in the culture substrate 1 in which the bottom surface of the well 2 is the culture surface 21, when the bottom surface is made of glass, there is an advantage that it is easy to perform microscopic observation.
培養面２１は、細胞低接着の特性を有していてもよい。なお細胞低接着とは、培養面２１に細胞が接着しない又は接着しづらいことを指す。これらの特性を付与するための処理方法としては一般的に、細胞低接着となる物質をコートすることや、物理処理を行うことがあげられる。細胞低接着処理としては例えば、リン脂質ポリマー（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等）、ポリヒドロキシエチルメタアクリレート、フッ素含有化合物、あるいはポリエチレングリコール等を用いたコートを行ったり、プラズマ処理、コロナ放電、ＵＶオゾン処理等の表面処理を行ったりしてもよい。また、コートや物理処理以外の手段として、培養基材１自体を細胞低接着の効果を有する材料で形成してもよい。細胞低接着の場合は、例えば、シリコーン樹脂や、上記した細胞低接着となる物質様の成分を混ぜ込んだ樹脂等を用いること、および細胞が接着しないように培養面２１に微細な加工をして接着を抑制することなどがあげられる。なお、上記処理は、少なくとも培養面２１に施されていることが好ましいが、培養面２１に限らず、培養面２１の周壁部２２等にも同等の処理を施してもよい。 The culture surface 21 may have the characteristics of low cell adhesion. The low cell adhesion means that cells do not adhere to the culture surface 21 or are difficult to adhere. As a treatment method for imparting these characteristics, generally, a substance that causes low cell adhesion is coated or a physical treatment is performed. Examples of the low cell adhesion treatment include coating with phospholipid polymer (2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine, etc.), polyhydroxyethyl methacrylate, fluorine-containing compound, polyethylene glycol, etc., plasma treatment, corona discharge, UV Surface treatment such as ozone treatment may be performed. Further, as a means other than coating and physical treatment, the culture substrate 1 itself may be formed of a material having an effect of low cell adhesion. In the case of low cell adhesion, for example, a silicone resin or a resin mixed with the above-described substance-like components that cause low cell adhesion is used, and the culture surface 21 is finely processed so that the cells do not adhere. To suppress adhesion. In addition, although it is preferable that the said process is performed at least to the culture surface 21, you may perform the equivalent process not only to the culture surface 21, but the surrounding wall part 22 grade | etc., Of the culture surface 21. FIG.
本考案の培養基材１は、前記ウェル２内に図１のようにマイクロウェル３が培養面２１に稠密に配置されている。マイクロウェル３同士の間には平坦面がない（非平坦面とする）ことが好ましい。例えば、マイクロウェル３同士の間を非平坦面とすることで、播種した細胞がマイクロウェル３内に必ず落ち込むため、マイクロウェル３外に細胞が留まることを防止できる。これにより、細胞がスフェロイドにならないことを抑制することが可能となる。ここで、本明細書における「非平坦」とは、培養面２１の底面（培養基材の底面）に対して水平ではないことを指す。また、「細胞がスフェロイドにならない」とは、単層培養や単細胞浮遊培養、球状とならない積層培養、細胞が培養面２１に接着して培養される、スフェロイドに取り込まれずに単細胞の状態で死んでしまうもの等を含む。 In the culture substrate 1 of the present invention, the microwells 3 are densely arranged on the culture surface 21 in the well 2 as shown in FIG. There is preferably no flat surface between the microwells 3 (non-flat surface). For example, by setting a non-flat surface between the microwells 3, the seeded cells always fall into the microwell 3, so that the cells can be prevented from staying outside the microwell 3. Thereby, it becomes possible to suppress that a cell does not become a spheroid. Here, “non-flat” in the present specification refers to not being horizontal with respect to the bottom surface of the culture surface 21 (the bottom surface of the culture substrate). In addition, “cells do not become spheroids” means single-layer culture, single-cell suspension culture, non-spherical layered culture, cells that are attached to the culture surface 21 and cultured and die in the state of single cells without being taken up by spheroids. Including things.
なお、本考案のマイクロウェル３において、必須ではないが、以下の構成を選択、組み合わせてもよい。 In the microwell 3 of the present invention, although not essential, the following configurations may be selected and combined.
マイクロウェル３の底面は、播種する細胞がスフェロイドを形成しやすいように滑らかなＵ底（半球状）であることが好ましい。尖った部分等があると、細胞が刺さってスフェロイドを形成せずに死んでしまったり、死んだ細胞がスフェロイドに取り込まれてしまったりするおそれがある。また、Ｕ底のように、丸みを帯びた形状としておくことで、きれいな球体のスフェロイドを形成しやすくなる。 The bottom surface of the microwell 3 is preferably a smooth U-bottom (hemisphere) so that cells to be seeded can easily form spheroids. If there is a pointed portion or the like, the cell may pierce and die without forming a spheroid, or the dead cell may be taken up by the spheroid. Moreover, it becomes easy to form a beautiful spherical spheroid by making it round like the U bottom.
マイクロウェル３の容積は、特に限定されないが、培養する細胞や条件に適するものを選択してよい。マイクロウェル３の１つあたりの容積が大きいほど、細胞に対して培地量を増やしたり、より大きなスフェロイド形成をしたりすることが出来る。マイクロウェル３の１つあたりの容積は、０．０００１ｍｍ３〜２ｍｍ３程度とすることが好ましい。 The volume of the microwell 3 is not particularly limited, but may be selected as appropriate for the cells to be cultured and the conditions. The larger the volume per microwell 3, the greater the amount of medium for the cells and the greater the formation of spheroids. One per volume microwell 3 is preferable to be 0.0001 mm 3 to 2 mm 3 mm.
マイクロウェル３は、培養面２１の単位面積当たり、１０個／ｃｍ２〜１００００個／ｃｍ２、形成することが好ましい。より好ましくは、１５個／ｃｍ２〜５０００個／ｃｍ２、さらに好ましくは、２０個／ｃｍ２〜１０００個／ｃｍ２である。マイクロウェル３の数は、使用する培養基材１の大きさ、所望のスフェロイドの大きさ及び数によって適宜調整可能である。 Microwell 3, per unit area of the culture surface 21, 10 / cm 2 to 10000 pieces / cm 2, is preferably formed. More preferably, 15 / cm 2 ~ 5000 pieces / cm 2, more preferably, is 20 / cm 2 to 1000 pieces / cm 2. The number of microwells 3 can be appropriately adjusted depending on the size of the culture substrate 1 to be used and the size and number of desired spheroids.
マイクロウェル３は得られるスフェロイドの大きさや形状を均一にするために、１つのウェル２内ではマイクロウェル３の条件を均一にすることが好ましい。スフェロイドの大きさはや形状はウェル２の大きさや形状に依存するため、ウェル２の大きさや形状が異なると形成されるスフェロイドの大きさや形状が均一でなくなってしまうため、好ましくない。 In order to make the microwell 3 uniform in size and shape of the obtained spheroid, it is preferable to make the conditions of the microwell 3 uniform in one well 2. Since the size and shape of the spheroid depend on the size and shape of the well 2, the size and shape of the spheroid formed are not uniform if the size and shape of the well 2 are different.
本考案のマイクロウェル３の形成方法としては、金型（基材本体製造時に一緒に成形）、レーザ（ＣＯ２レーザ、ＹＡＧレーザ、エキシマレーザ等）、ナノインプリント、プレス、型焼き付け等があげられる。樹脂製の基材にＣＯ２レーザでマイクロウェル３を形成すると、樹脂が溶解及び気化することにより表面が滑らかな面となるため、きれいな球体のスフェロイドが形成しやすくなる。 Examples of the method for forming the microwell 3 of the present invention include a mold (molded together when the base body is manufactured), laser (CO 2 laser, YAG laser, excimer laser, etc.), nanoimprint, press, mold baking, and the like. When the microwell 3 is formed on a resin base material using a CO 2 laser, the resin is dissolved and vaporized, resulting in a smooth surface. Therefore, a beautiful spherical spheroid is easily formed.
ＣＯ２レーザでマイクロウェル３を形成する場合、そのレーザ光の強度は５〜５００Ｗであることが好ましい。強度を高くすればするほど、マイクロウェル３を深く、且つ開口部の径を広く形成することができる。つまり、強度が高いほど、大きなスフェロイドを培養するのに好適なマイクロウェル３を形成することが可能となる。照射スポットは円形であることが好ましいが、細胞を凝集できる形状のウェル２が形成できれば特に形は問わない。照射スポットの直径は、２０μｍ〜１５００μｍが適当である。なお、レーザの照射位置に関しても、所望のウェル２の形状に応じて適宜調整可能である。また、培養基材１の材質によっても適宜強度を調整してもよい。例えば、ポリスチレンの場合は５〜３０Ｗ、ガラスの場合は８０〜２００Ｗが好ましい。 When the microwell 3 is formed with a CO 2 laser, the intensity of the laser light is preferably 5 to 500 W. The higher the strength, the deeper the microwell 3 and the wider the diameter of the opening. That is, it becomes possible to form a microwell 3 suitable for culturing large spheroids as the strength increases. The irradiation spot is preferably circular, but the shape is not particularly limited as long as the well 2 having a shape capable of aggregating cells can be formed. The diameter of the irradiation spot is suitably 20 μm to 1500 μm. The laser irradiation position can also be adjusted as appropriate according to the desired shape of the well 2. Further, the strength may be appropriately adjusted depending on the material of the culture substrate 1. For example, 5 to 30 W is preferable for polystyrene, and 80 to 200 W is preferable for glass.
なお、本考案の培養基材１において、必須ではないが、以下の構成を選択、組み合わせてもよい。 In the culture substrate 1 of the present invention, although not essential, the following configurations may be selected and combined.
ウェル２の開口径ｄ２は特に限定されないが、培養基材１の大きさや配置するウェル２の数等に合わせて適宜選択可能である。ここでウェル２の開口径ｄ２とは図４にも示すように、ウェル２の開口部を上面から見た場合に、開口部の内径のうち最も幅の広い部分を指す。開口径ｄ２が異なるウェル２を使って培養を行うと、１ウェルあたりの容量が変わるため、適切な培地量の判別や、培養面２１の面積、形成できるマイクロウェル３の数の調整が可能となる。ウェル２の開口径ｄ２は１〜１５０ｍｍ程度とすることが好ましい。 The opening diameter d2 of the well 2 is not particularly limited, but can be appropriately selected according to the size of the culture substrate 1, the number of wells 2 to be arranged, and the like. Here, the opening diameter d2 of the well 2 indicates the widest portion of the inner diameter of the opening when the opening of the well 2 is viewed from above, as shown in FIG. When culturing is performed using wells 2 having different opening diameters d2, the volume per well changes, so that it is possible to determine an appropriate medium amount, adjust the area of the culture surface 21, and the number of microwells 3 that can be formed. Become. The opening diameter d2 of the well 2 is preferably about 1 to 150 mm.
ウェル２の開口形状は特に限定されないが、図４（ａ）〜（ｃ）に示すような丸型、四角型、ハニカム型などから適宜選択可能である。ここでウェル２の開口形状とは、ウェル２の開口部を上面から見た場合の形状を指す。ウェル２の開口形状を変えることで、培養面積を変えたり、ウェル２の容積が変わることで培地量を変えたりすることも可能である。また、蒸発防止用の水を入れるために一部のウェル２を活用してもよい。その場合、培養面２１を有するウェル２とは別に、培養基材１の外周を囲むような環状（ロの字状）のウェルを形成してもよい。 The opening shape of the well 2 is not particularly limited, but can be appropriately selected from a round shape, a square shape, a honeycomb shape, and the like as shown in FIGS. Here, the opening shape of the well 2 refers to a shape when the opening of the well 2 is viewed from the upper surface. It is also possible to change the culture area by changing the opening shape of the well 2 or to change the amount of medium by changing the volume of the well 2. In addition, a part of the wells 2 may be used to put water for preventing evaporation. In that case, apart from the well 2 having the culture surface 21, an annular (B-shaped) well surrounding the outer periphery of the culture substrate 1 may be formed.
ウェル２の底面形状は、特に限定されないが、図５（ａ）〜（ｃ）に示すようなＶ底、Ｕ底、平底などから適宜選択可能である。ここでウェル２の底面形状とは、ウェル２の断面から見た底の形状を指す。Ｖ底、Ｕ底であればマイクロウェル３に細胞を凝集しやすくなる。また、平底であれば、Ｖ底やＵ底に比べて底面が広い培養面２１となるため、マイクロウェル３を多く、稠密に形成しやすくなる。 The shape of the bottom surface of the well 2 is not particularly limited, but can be appropriately selected from a V bottom, a U bottom, a flat bottom, and the like as shown in FIGS. Here, the bottom shape of the well 2 refers to the shape of the bottom viewed from the cross section of the well 2. If it is V bottom and U bottom, it will become easy to aggregate a cell in the microwell 3. FIG. In addition, a flat bottom provides a culture surface 21 having a wider bottom surface compared to the V and U bottoms, and therefore, the number of microwells 3 is increased and it is easy to form densely.
ウェル２の側面は、特に限定されないが、図５（ａ）〜（ｃ）のように垂直でもよく、図５（ｄ）、（ｅ）のようにウェル２の底面に対して傾斜していてもよい。傾斜させる場合は、細胞が傾斜の途中で止まって培養面２１に落ちないことを防止するために、細胞低接着処理を行う、傾斜角度を鋭角にするなどして細胞が落ちやすい状態にしてもよい。 The side surface of the well 2 is not particularly limited, but may be vertical as shown in FIGS. 5A to 5C, and is inclined with respect to the bottom surface of the well 2 as shown in FIGS. 5D and 5E. Also good. In the case of inclining, in order to prevent the cells from stopping and falling on the culture surface 21 in the middle of the inclining, the cells are made to fall easily by performing a low cell adhesion treatment or by making the inclination angle an acute angle. Good.
ウェル２の底面積は、特に限定されないが、培養基材１の大きさや配置するウェル２の数等に合わせて適宜選択可能である。底面積が異なるウェル２を使って培養を行うと、培養面２１の大きさが異なることで適切な培地量の判別や、播種する細胞数の調整が可能となる。例えば、平底のウェル２の底面を培養面２１として使用する場合、ウェル２の底面積は１〜２０００ｍｍ２（０．０１〜２０ｃｍ２）程度とすることが好ましい。 The bottom area of the well 2 is not particularly limited, but can be appropriately selected according to the size of the culture substrate 1, the number of wells 2 to be arranged, and the like. When culturing is performed using the wells 2 having different bottom areas, it is possible to determine an appropriate amount of medium and adjust the number of cells to be seeded because the size of the culture surface 21 is different. For example, when the bottom surface of the flat bottom well 2 is used as the culture surface 21, the bottom area of the well 2 is preferably about 1 to 2000 mm 2 (0.01 to 20 cm 2 ).
ウェル２の高さｈ２は、特に限定されないが、培養する細胞や条件に適するものを選択してよい。高さｈ２を変えることで、１つのウェル２あたりの容量が変わるため、適切な培地量の判別や、播種する細胞数の調整が可能となる。ウェル２の高さｈ２は５〜３０ｍｍ程度とすることが好ましい。 The height h2 of the well 2 is not particularly limited, but a well suitable for the cells to be cultured and conditions may be selected. By changing the height h2, the volume per well 2 changes, so that an appropriate medium amount can be discriminated and the number of cells to be seeded can be adjusted. The height h2 of the well 2 is preferably about 5 to 30 mm.
培養基材１の材質は、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、ガラス、塩化ビニル、高密度ポリエチレン、ポリエーテルサルファン、ポリエチレンテレフタレート共重合体、ポリプロピレン、パーマノックス（商標）、金属、セラミックス等から適宜選択可能である。また、部分的に素材が違っていてもよい。例えばウェル２の底面と側面で別の材質で形成し、接着してもよい。例えば、底面をガラスとした場合、顕微鏡観察がしやすくなるというメリットがある。 The material of the culture substrate 1 is appropriately selected from polystyrene, polycarbonate, polyethylene terephthalate, glass, vinyl chloride, high density polyethylene, polyethersulfane, polyethylene terephthalate copolymer, polypropylene, Permanox (trademark), metal, ceramics, and the like. Is possible. The material may be partially different. For example, the bottom and side surfaces of the well 2 may be formed of different materials and bonded. For example, when the bottom surface is made of glass, there is a merit that observation with a microscope becomes easy.
培養基材１は着色してもいい。ウェル２を形成する材質に黒色に呈色する色素（例えば、カーボンなど）や白色に呈色する色素（例えば酸化チタンなど）を入れることで、まわりのウェル２からの蛍光・発光を遮断できるので、蛍光・発光観察に適している。その他にもウェル２の条件（ウェル２の大きさやコートの処理状況など）が一目で判断できるように目印となる着色を行ってもよい。また、着色はウェル２全面でもよく、ウェル２の側面のみ、開口部のみ、底面のみ、培養面２１のみ及びこれらの組合せから適宜選択できる。 The culture substrate 1 may be colored. Fluorescence and light emission from the surrounding well 2 can be blocked by adding a black colorant (for example, carbon) or a white colorant (for example, titanium oxide) to the material forming the well 2. Suitable for fluorescence and luminescence observation. In addition, coloring that serves as a mark may be performed so that the conditions of the well 2 (such as the size of the well 2 and the coating processing status) can be determined at a glance. Further, the coloring may be performed on the entire surface of the well 2 and can be appropriately selected from only the side surface of the well 2, only the opening, only the bottom surface, only the culture surface 21, and a combination thereof.
本考案の培養基材１は、基材の材質や大きさによって適した方法で製造すればよい。培養基材１の成形は例えば、射出成形、プレス成型、真空成型、ブロー成形等から適宜選択できる。 The culture substrate 1 of the present invention may be manufactured by a method suitable for the material and size of the substrate. The culture substrate 1 can be molded as appropriate from, for example, injection molding, press molding, vacuum molding, blow molding and the like.
培養基材１の形状により、例えば周壁部２２近くに、他のマイクロウェル３と同じ大きさのマイクロウェル３を形成できない広さの面が残ってしまう場合がある。この場合、マイクロウェル３を形成できない面を平坦面のまま残しておくと細胞が落ち込む可能性があり、細胞がスフェロイドにならない可能性がある。そのため、マイクロウェル３を形成できない面が残る場合は、その面を非平坦面にすることが好ましい。例えば、傾斜壁を形成する、周壁部２２を厚くする、非平坦面を形成する部品を置く、仕切りをつける等の対応をしてもよい。また、以上の対応は、均一な大きさのマイクロウェル３を形成できない場合に用いることに限られず、例えばマイクロウェル３を培養面２１の一部のみに形成したい場合及びマイクロウェル３の数を規格化したい場合等にも用いることが可能である。 Depending on the shape of the culture substrate 1, for example, a surface having a size that cannot form the microwell 3 having the same size as the other microwells 3 may remain near the peripheral wall portion 22. In this case, if the surface on which the microwell 3 cannot be formed is left as a flat surface, the cells may fall, and the cells may not become spheroids. Therefore, when the surface where the microwell 3 cannot be formed remains, it is preferable to make the surface non-flat. For example, an inclined wall may be formed, the peripheral wall portion 22 may be thickened, a part that forms a non-flat surface may be placed, or a partition may be attached. In addition, the above correspondence is not limited to the case where the microwell 3 having a uniform size cannot be formed. For example, when the microwell 3 is formed only on a part of the culture surface 21 and the number of microwells 3 is specified. It is also possible to use it when desired.
マイクロウェル３内から別のマイクロウェル３にスフェロイドの移動をより抑制するために、仕切りを設けてもよい。仕切りは培養面２１に接合したものでもよく、載置したものでもよく、また培養面２１に接触しないもの（例えば落し蓋形状等）を用いてもよい。また仕切りの材質は特に限定されないが、培養基材と同じ材質でもよく、異なる材質でもよく、また細胞を通さず培地のみを通すメンブレン状の素材からなっていてもよい。 In order to further suppress the movement of the spheroid from inside the microwell 3 to another microwell 3, a partition may be provided. The partition may be joined to the culture surface 21, may be placed, or may be one that does not contact the culture surface 21 (for example, a drop lid shape). The material of the partition is not particularly limited, but may be the same material as the culture substrate, may be a different material, or may be made of a membrane-like material that passes only the medium without passing through the cells.
本考案の培養基材１の実施形態について図６〜図８を基に説明する。なお、本考案の培養基材１はこれに限られるものではなく、前記した構成の範囲内で適宜調整可能である。 An embodiment of the culture substrate 1 of the present invention will be described with reference to FIGS. The culture substrate 1 of the present invention is not limited to this, and can be adjusted as appropriate within the above-described configuration.
図６に示した実施形態１（平面図）においては、培養基材１であるマイクロプレートのウェル２ａ、２ｂ、２ｃに異なる開口径ｄ１ａ、ｄ１ｂ、ｄ１ｃのマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃを形成している。本実施形態においては開口径ｄ１ａ、ｄ１ｂ、ｄ１ｃの関係はｄ１ａ＞ｄ１ｂ＞ｄ１ｃとなっている。マイクロウェルの開口径ｄ１が異なることにより、１つのウェルに落ち込む細胞量が変わり、形成できるスフェロイドの大きさが変わる。よって、本実施形態のように高さｈ１と開口形状を変えず開口径ｄ１のみを変えた場合、形成されるスフェロイドの大きさをマイクロウェル３ごとに比較すると３ａ＞３ｂ＞３ｃとなる。なお、同じ培養面積を有するウェル２にマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃを形成した場合、ウェル２ａ、２ｂ、２ｃのマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃの数を比較すると２ｃ＞２ｂ＞２ａとなる。 In Embodiment 1 (plan view) shown in FIG. 6, microwells 3a, 3b, and 3c having different opening diameters d1a, d1b, and d1c are formed in the wells 2a, 2b, and 2c of the microplate that is the culture substrate 1. ing. In the present embodiment, the relationship between the opening diameters d1a, d1b, and d1c is d1a> d1b> d1c. By changing the opening diameter d1 of the microwell, the amount of cells falling into one well is changed, and the size of the spheroid that can be formed is changed. Therefore, when only the opening diameter d1 is changed without changing the height h1 and the opening shape as in the present embodiment, the size of the formed spheroids is 3a> 3b> 3c. When the microwells 3a, 3b, and 3c are formed in the well 2 having the same culture area, the number of the microwells 3a, 3b, and 3c in the wells 2a, 2b, and 2c is compared, and 2c> 2b> 2a.
図７に示した実施形態２（平面図）においては、培養基材１であるマイクロプレートのウェル２ａ、２ｂ、２ｃに異なる開口形状のマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃを形成している。マイクロウェル３ａは格子形、マイクロウェル３ｂはハニカム形、マイクロウェル３ｃは楕円形とした。開口形状を変えると、マイクロウェル３の配置数やウェル内の容積が変わる。よって、高さｈ１と開口径ｄ１を変えずに開口形状を変えた場合、形成されるスフェロイドの大きさと数が変わる。 In Embodiment 2 (plan view) shown in FIG. 7, microwells 3 a, 3 b, and 3 c having different opening shapes are formed in wells 2 a, 2 b, and 2 c of a microplate that is a culture substrate 1. The microwell 3a has a lattice shape, the microwell 3b has a honeycomb shape, and the microwell 3c has an elliptical shape. When the opening shape is changed, the number of arranged microwells 3 and the volume in the well are changed. Therefore, when the opening shape is changed without changing the height h1 and the opening diameter d1, the size and number of spheroids to be formed are changed.
図８に示した実施形態３（断面図）においては、培養基材１であるマイクロプレートのウェル２ａ、２ｂ、２ｃに異なる高さｈ１ａ、ｈ１ｂ、ｈ１ｃのマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃを形成している。本実施形態においては高さｈ１ａ、ｈ１ｂ、ｈ１ｃの関係はｈ１ａ＞ｈ１ｂ＞ｈ１ｃとなっている。マイクロウェル３の高さｈ１が異なることにより、１つのウェル２に落ち込む細胞量が変わり、形成できるスフェロイドの大きさが変わる。よって、本実施形態のように開口径ｄ１と開口形状を変えず高さｈ１のみを変えた場合、形成されるスフェロイドの大きさをマイクロウェルごとに比較すると３ａ＞３ｂ＞３ｃとなる。なお、同じ培養面積を有するウェル２ａ、２ｂ、２ｃにマイクロウェル３ａ、３ｂ、３ｃを形成した場合、ウェル２ごとに形成されるスフェロイドの大きさを比較すると２ａ＞２ｂ＞２ｃとなる。 In Embodiment 3 (cross-sectional view) shown in FIG. 8, microwells 3a, 3b, and 3c having different heights h1a, h1b, and h1c are formed in the wells 2a, 2b, and 2c of the microplate that is the culture substrate 1. ing. In the present embodiment, the relationship between the heights h1a, h1b, and h1c is h1a> h1b> h1c. When the height h1 of the microwell 3 is different, the amount of cells falling into one well 2 is changed, and the size of the spheroid that can be formed is changed. Therefore, when only the height h1 is changed without changing the opening diameter d1 and the opening shape as in this embodiment, the size of the formed spheroids is 3a> 3b> 3c when compared for each microwell. When the microwells 3a, 3b, and 3c are formed in the wells 2a, 2b, and 2c having the same culture area, the size of the spheroid formed for each well 2 is 2a> 2b> 2c.
本考案の培養基材１によれば、１つの培養基材１内で異なる大きさ及び形状のスフェロイドを培養することが可能となる。これにより、同一環境下での培養における培養状況の比較や細胞ごとに適切なスフェロイドサイズ及びスフェロイド形状を選択することが可能となるため、創薬スクリーニングや、培養における最適条件の検討などにおいて有効に利用可能である。 According to the culture substrate 1 of the present invention, spheroids having different sizes and shapes can be cultured in one culture substrate 1. This makes it possible to compare culture conditions in culture under the same environment and to select an appropriate spheroid size and spheroid shape for each cell, which is effective for drug discovery screening and examination of optimal conditions for culture. Is available.
１．培養基材、２．ウェル、２１．培養面、２２．周壁部、３．マイクロウェル、４．別部材、４１．保持部、ｄ１．マイクロウェルの開口径、ｈ１．マイクロウェルの高さ、ｄ２．ウェルの開口径、ｈ２．ウェルの高さ 1. Culture substrate, 2. Well, 21. Culture surface, 22. 2. peripheral wall, 3. microwell, Another member, 41. Holding part, d1. Opening diameter of microwell, h1. Microwell height, d2. Well opening diameter, h2. Well height
Claims (9)
内部に培養面が配置された複数のウェルを有し、前記培養面はマイクロウェルを有し、少なくとも１つ以上のウェルが他のウェルと、開口径、開口形状、高さのいずれか１つ以上が異なるマイクロウェルを備えていることを特徴とする培養基材。
It has a plurality of wells having culture surfaces arranged therein, the culture surface has microwells, and at least one or more wells are any one of the other diameters, opening diameter, opening shape, and height. A culture substrate comprising a microwell as described above.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017005431U JP3214876U (en) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Culture substrate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017005431U JP3214876U (en) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Culture substrate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP3214876U true JP3214876U (en) | 2018-02-08 |
Family
ID=61159770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017005431U Active JP3214876U (en) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Culture substrate |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3214876U (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020149246A1 (en) * | 2019-01-18 | 2020-07-23 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Culture container, culture method and culture device |
| CN111793563A (en) * | 2020-08-12 | 2020-10-20 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | High-oxygen air vent plate device for organoid sphere culture |
| WO2021132480A1 (en) * | 2019-12-27 | 2021-07-01 | Ａｇｃ株式会社 | Culture substrate and culture dish |
-
2017
- 2017-11-30 JP JP2017005431U patent/JP3214876U/en active Active
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020149246A1 (en) * | 2019-01-18 | 2020-07-23 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Culture container, culture method and culture device |
| JP2020114191A (en) * | 2019-01-18 | 2020-07-30 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Culture container, culture method and culture device |
| JP7348586B2 (en) | 2019-01-18 | 2023-09-21 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | Culture container, culture method, and culture device |
| WO2021132480A1 (en) * | 2019-12-27 | 2021-07-01 | Ａｇｃ株式会社 | Culture substrate and culture dish |
| CN111793563A (en) * | 2020-08-12 | 2020-10-20 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | High-oxygen air vent plate device for organoid sphere culture |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6767375B2 (en) | Cell culture vessel | |
| JP5921437B2 (en) | Culture substrate | |
| JP7219303B2 (en) | Culture method | |
| JP3214876U (en) | Culture substrate | |
| WO2018123663A1 (en) | Cell culture substrate and method for producing same | |
| JP6313043B2 (en) | Method for culturing adherent cells | |
| US20200181552A1 (en) | Handling features for microcavity cell culture vessel | |
| JP2018108032A (en) | Culture vessel | |
| JP5954422B2 (en) | Microwell plate | |
| JP5578779B2 (en) | Spheroid culture method and spheroid culture vessel | |
| KR20170074242A (en) | Devices and Methods For Generation and Culture of 3D Cell Aggregates | |
| KR20140113139A (en) | Cell spheroid culture plate | |
| CN209989412U (en) | 3D high flux organ microchip | |
| US20200399571A1 (en) | Cell culturing device and method | |
| JPWO2008130025A1 (en) | Hepatocyte culture vessel and hepatocyte culture method | |
| US9290735B2 (en) | Mammary gland epithelial cell culture | |
| KR20150051199A (en) | Cell spheroid culture plate | |
| US20240091778A1 (en) | Cell culture vessel | |
| CN111748470A (en) | 3D high-flux organ microchip and preparation method and application thereof | |
| JP3215918U (en) | Culture substrate | |
| JP2014204671A (en) | Cell culture carrier | |
| US20210301237A1 (en) | Well for cultivating biological material | |
| JP2022067072A (en) | Culture vessel | |
| JP2022071581A (en) | Microplate | |
| JP2022095001A (en) | Microplate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 3214876 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |