JP3009235B2 - 木本植物の組織培養物の培養方法 - Google Patents

木本植物の組織培養物の培養方法

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    • G11B11/10595—Control of operating function

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品、食品およびそ
の他の工業材料の原料となりうる木本植物の新規組織培
養法、および該方法により得られる組織培養物に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】木本植物由来の組織培養物を大量に製造
する場合には、通常、ジャーファーメンターやフラスコ
による液体培養法が採用される。しかし、木本植物由来
のカルスまたは分化組織を液体培養すると、これらの組
織培養物は褐変化しやすく、培養細胞が死滅することが
しばしばある。細胞が死滅しないまでも、培養物が増殖
しにくくなり、かつ、該培養物が本来産生すべき二次代
謝産物が生産されなかったりその生産量が低下すること
が多い。従って、従来の培養法によっては、木本植物由
来の組織培養物を安定して供給すること；および医薬品
などの原料となり得る二次代謝産物の製造が安定して行
われ得ない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記従来の問
題点を解決するものであり、その目的とするところは、
木本植物由来のカルスまたは分化組織のような組織培養
物を安定して培養する方法を提供することにある。本発
明の他の目的は、培養中において褐変化せず、しかも二
次代謝産物が充分に産生される、木本植物由来の組織培
養物の培養方法を提供することにある。本発明のさらに
他の目的は、上記方法により得られ褐変化しておらず、
かつ二次代謝産物を充分に産生し得る、組織培養物を提
供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、褐変化が
起こらず、品質の安定した木本植物由来の組織培養物を
得るため鋭意研究を進めた。その結果、木本植物由来の
カルスまたは分化組織を液体培地で培養する際に、用い
る液体培地の粘度を高くすることにより、褐変化が起こ
らず、品質の安定した組織培養物を得ることが可能であ
ることを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００５】本発明の組織培養物の培養方法は、木本植
物の組織片より誘導したカルスまたは分化組織を高粘度
の液体培地を用いて培養することを包含し、そのことに
より上記目的が達成される。
【０００６】本発明の組織培養物は上記方法により得ら
れ、そのことにより上記目的が達成される。
【０００７】本発明の方法に使用される液体培地は、そ
の粘度が、２５℃において０．５〜１０，０００ｐ（ｐ
はポイズを示す）であり、好ましくは１０〜３００ｐで
ある。粘度が０．５ｐを下まわると通常の液体培地によ
る培養と同様になるため、培養物が褐変化したり、その
生育状態が悪くなる。１０，０００ｐを上まわると、撹
拌、振盪などが困難となり、通常の液体培養が困難とな
る。
【０００８】上記のような粘度の液体培地を得るため、
通常の液体培地にゾル化物質が添加される。ゾル化物質
としては、ジェランガム、寒天、カルボキシメチルセル
ロース（ＣＭセルロース）などの天然または合成の高分
子化合物が用いられる。上記以外の化合物であっても液
体培地の濃度を上げることの可能な化合物のいずれもが
用いられる。
【０００９】このようにして得られる培地を用い、木本
植物由来のカルス、分化組織などの組織培養が行われ
る。培養は、通常の液体培養と同様、通気、撹拌、振盪
などを行って、なされる。木本植物の種類は特に限定さ
れない。例えば，Acanthopanax属に属するエゾウコギを
本方法により培養することにより、褐変化が起こらず、
安定してエレウテロサイド、クロロゲン酸などを産生す
るカルスが大量に生産される。
【００１０】
【実施例】次に本発明を以下の実施例および比較例によ
り説明する。本発明は以下の実施例により限定されな
い。
【００１１】（実施例１）Ｂ５（ＧａｍｂｏｒｇＢ−
５）培地にしょ糖を３％、そして植物ホルモンとしてＩ
ＢＡ（インドール酪酸）を１ｐｐｍ、およびカイネチン
を１ｐｐｍの割合で添加した液体培地に、寒天を少しず
つ溶解させ培地の粘度を１０ｐとなるように調整した。
この培地１００ｍｌを３００ｍｌ容マイヤーフラスコに
分注して、オートクレーブで滅菌した。これにエゾウコ
ギのカルスを培地全体の６％（ｗ／ｖ）となるように移
植して、２５℃、暗所において２８日間往復振盪培養し
た。上記粘度は落球法により求めた。
【００１２】培養終了後、収穫し、カルスの湿重量を測
定した。その結果を表１に示す。
【００１３】得られたカルスを乾燥させ、コーヒーミル
で粉砕後メタノールを用いて抽出し、抽出液中のエレウ
テロサイドＢ、エレウテロサイドＥ、イソフラキシジ
ン、およびクロロゲン酸をＨＰＬＣにより定量分析し
た。その定量値を表１に示す。
【００１４】カルスの褐変度は、分光光度計を用い、４
２０ｎｍにおける抽出液の吸光度を測定することにより
求めた。これらの測定値をあわせて表１に示す。実施例
２〜６および比較例１で得られたカルス湿重量および測
定結果をあわせて表１に示す。
【００１５】（実施例２）寒天の量を増して培地の粘度
を３００ｐとしたこと以外は実施例と同様である。
【００１６】（実施例３）寒天の代わりにジェランガム
を用いたこと以外は実施例１と同様である。
【００１７】（実施例４）寒天の代わりにジェランガム
を用い、かつ培地の粘度を３００ｐとしたことは以外は
実施例１と同様である。
【００１８】（実施例５）寒天の代わりにＣＭセルロー
スを用いたこと以外は実施例１と同様である。
【００１９】（実施例６）寒天の代わりにＣＭセルロー
スを用い、かつ培地の粘度を３００ｐとしたこと以外は
実施例１と同様である。
【００２０】（比較例）寒天を加えなかったこと以外は
実施例１と同様である。
【００２１】
【表１】
【００２２】表１から明らかなように従来公知の液体培
地による培養方法に比べて、高粘度の液体培地を使用す
ることによりカルスの収量が上がり、二次代謝産物の生
産量も高い。カルスの褐変化の度合も低い。
【００２３】
【発明の効果】本発明によれば、このように、木本植物
由来の植物組織培養物が安定した高収量で供給され得
る。この培養物は、有用な二次代謝産物を高収率で生産
することが可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 大場 利治 大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号 日 東電工株式会社内 (72)発明者 佐藤 進 大阪府茨木市下穂積１丁目１番２号 日 東電工株式会社内 (56)参考文献 特開 昭61−238727（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−198334（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 5/04 C12P 17/06 C12P 19/44 C12P 17/06 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】有用二次代謝産物を産生する木本植物の組
    織片より誘導したカルスまたは分化組織を0.5〜10,000
    ポイズの粘度を有する液体培地を用いて培養することを
    包含する木本植物組織の培養方法。
  2. 【請求項２】前記有用二次代謝産物が、エテウロサイド
    Ｂ、エテウロサイドＥ、イソフラキシン、およびクロロ
    ゲン酸からなる群から選択される、請求項１に記載の方
    法。
  3. 【請求項３】前記液体培地がゾル化物質を含有する、請
    求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】前記有用二次代謝産物を産生する木本植物
    がエゾウコギ（Acanthopanax senticosus）である請求
    項１に記載の方法。
  5. 【請求項５】前記木本植物組織が褐色変化しない、請求
    項１に記載の方法。
  6. 【請求項６】請求項１から５のいずれかに記載の方法に
    より得られる木本植物組織。
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