JP2866818B2 - 牛の卵胞卵子採取方法 - Google Patents

牛の卵胞卵子採取方法

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はつえ 板倉
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Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は経膣法により牛の卵胞卵
子を採取する方法に関する。さらに言えば、雌牛の体内
にインヒビンに対する能動免疫を行い、卵巣内に高位安
定的に2mm以上の卵胞を出現せしめ、卵胞卵子を効率
的に採取する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】牛の繁殖技術の一手法として受精卵
(胚)移植技術がある。近年、体外受精技術と培養技術
の進歩により、屠体由来未受精卵子から体外受精卵を効
率的に製造できるようになり、牛の増殖の目的に普及し
始めている。一方、超音波画像診断装置を用いて、膣壁
を通して生体の卵巣に針を穿刺して卵胞卵子を採取する
ことが可能となり、これら2つの技術を組み合わせるこ
とによって、生体由来の体外受精卵(胚)を製造できる
ようになった。この技術を用いると、繰り返し何回でも
卵胞卵子が採取できること、また遺伝的に優れた素質を
もちながら、排卵障害あるいは卵管や子宮の疾患による
不妊雌、性成熟に達していない雌からも体外受精卵
(胚)の調製が可能になる。さらには、屠体由来の未受
精卵子からの体外受精卵と違い、血統を明確にすること
が出来るため、育種改良を目的とした繁殖技術として使
えるようになった。
【0003】現在の体外培養技術では、卵子は2mm以
上の卵胞から採取することが望ましい。一方、超音波画
像を使って卵巣を観察した場合、確認することができる
のは2mm以上の卵胞であることから、生体由来の体外
受精卵(胚)の製造効率を高めるには採取回数を多くす
るか、2mm以上の卵胞を卵巣に多く出現させなければ
ならない。そのため、週に1回から2回の採取を連続し
て行う(Gibbons et al.,Theriogenology, 41, 206, 19
94) か、従来の一般的な牛の過剰排卵処置に使われる外
生的なホルモン剤(卵胞刺激ホルモン、妊馬血清性性腺
刺激ホルモン)投与によって卵胞の発育を促進してから
採取する方法が報告されている(Pierterse et al.,The
riogenology, 30, 751-762, 1988. およびLooney et a
l., Theriogenology, 41, 67-72, 1994) 。
【0004】一方、牛において下垂体からの卵胞刺激ホ
ルモンの分泌を抑制しているインヒビンを免疫的に抑制
すると、下垂体からの卵胞刺激ホルモンの分泌が亢進
し、それに伴う卵胞の発育および複数排卵を誘起できる
ことが報告されている(Glencross et al., Journal of
Endocrinology, 134, 11-18, 1992 および Scanlon e
t al., Journal of Reproduction and Fertility, 97,
213-222, 1993)。
【0005】ところで、インヒビンは雄の精巣または雌
の卵胞より分泌され、下垂体にてFSHの生成、分泌を
抑制する蛋白質のホルモンである。1980年代に、そ
れまでその存在および構造が明らかにされていなかった
インヒビンが、遺伝子工学の急激な進歩により次第にそ
の全容と作用が明らかになり、成熟雌牛においては下垂
体からの卵胞刺激ホルモン分泌を特異的に抑制すること
が明らかにされつつある。もし、雌牛においてインヒビ
ンを抑制的に制御できれば内因性の卵胞刺激ホルモン分
泌が亢進され、それに伴って卵胞の発育を促進できる可
能性が予想される。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】外生的なホルモンを投
与して卵胞の発育を促進する方法は、ホルモンに反応し
うる卵胞の数が個体毎に、またはその時々でバラツキが
大きく、かつこの方法では毎週のように連続して採取す
ることは困難である。そこで、本発明者は卵巣内に高位
安定的に卵胞を発育させることにより、生体由来の体外
受精卵(胚)の製造効率を高めうることに着眼した。
【0007】卵胞は発育とともにインヒビンの分泌が活
発となること(T.L.Martin, R.L. Fogwell and J.J. I
reland, Biology of Reproduction, 44, 693-700, 199
1) が報告されている。このような卵胞は首席卵胞と呼
ばれ、1性周期のなかで2〜3回出現する。これら卵胞
から分泌されるインヒビンは下垂体からの内因性卵胞刺
激ホルモンの分泌を抑制することにより、卵巣の他の卵
胞の発育を抑制し、1回の性周期に1個の排卵(単胎動
物)となるように調節されていると考えられている。最
近、本発明者らはインヒビンを能動免疫することによ
り、中小卵胞が増加する知見を得た。
【0008】そこで、本発明は新しい観点から、インヒ
ビンの免疫処置を施し、2mm以上の卵胞の出現を多く
した雌牛から経膣法によって卵胞卵子を採取すると、採
取卵子数が有意に増加することを見出した。この手法を
用いると、内因性の卵胞刺激ホルモンの分泌を亢進する
ため、卵胞刺激ホルモンに対する抗体の産生はなく、し
かも連続して採取することが可能になる。
【0009】以下に、本発明を実施例により詳細に説明
する。
【0010】
【実施例1】牛において、インヒビン免疫した状態で経
膣法によって卵胞卵子を採取した場合の採取卵数を見る
ために、以下の実験を行った。まず11頭の黒毛和種牛
を用い、インヒビン能動免疫による経膣法採卵成績への
影響を調べた。6頭の黒毛和種経産牛にインヒビンの能
動免疫を施した後、経膣法による卵胞卵子の採取を7日
間隔で、連続8回行った。一方、対照区として、5頭の
黒毛和種経産牛にインヒビン免疫を行わず、同様に経膣
法による卵胞卵子採取を8回実施し、抗体価と採卵時の
中・小卵胞の推移および採卵成績を比較検討した。抗原
は豚インヒビンα鎖のN末端から1〜26番目のアミノ
酸配列を模写した合成ペプチドに家兎血清アルブミンを
接合したものである。免疫の方法は能動免疫で行った。
初期投与はペプチド(インヒビンの断片を示す)として
1mgをフロイドの完全アジュバントと混合し、供試動
物の3〜4ケ所の皮下に投与した。初期投与の6、10
および14週目にブ−スタ−投与としてそれぞれ0.5
mgペプチドを初回と同様に投与した。経膣法による卵
胞卵子採取は10週目のブ−スタ−投与後7日間隔で連
続8回実施した。上記の試験の結果、インヒビンに対す
る能動免疫の手法で実施した供試牛6頭全てにおいて、
インヒビンに対する抗体価の上昇を誘起し、かつ維持す
ることができた。すなわち、初期投与に加え一定間隔で
ブースター投与を行うことにより、効果的に抗体を高い
レベルで維持することができるのである。抗体価が上昇
した状態では中・小卵胞(2〜9mm)数の増加が観察
できた。このようにインヒビンに対する抗体が上昇し、
中・小卵胞の数が多い状態で雌牛から経膣法による採卵
を行うと採卵卵子数の増加が見られた。
【0011】インヒビン能動免疫による採卵時の中・小
卵胞数の推移は下表のとおりである。免疫区と対照区に
おける採卵時(1〜8回目)に確認した中卵胞数(表
1)と小卵胞数(表2)の推移について個体別数値およ
び各区の平均値を経時的に示した。1〜8回目の全ての
採卵時において、免疫区が対照区に比べて高い値を示し
た。
【表1】
【表2】
【0012】インヒビン能動免疫による採卵時に出現す
る中・小卵胞数は下表に示すように、向上した。
【表3】 同一項目内で有意差あり(P<0.01,t検定) 上記の結果から、インヒビン免疫区の方が対照区に比較
し、中卵胞および小卵胞とも有意に増加した。
【0013】インヒビン能動免疫による採卵卵子数の向
上を示す。
【表4】 同一項目内で有意差あり(P<0.01,t検定) 上記の結果から、インヒビン免疫区の方が対照区に比較
し、採卵卵子数および培養可能卵子数ともに有意に増加
した。
【図面の簡単な説明】
【図1】インヒビン能動免疫をした牛におけるインヒビ
ンに対する抗体価の推移を示す。
【図2】インヒビン能動免疫をしない牛におけるインヒ
ビン抗体価の推移を示す。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6,DB名) A61D 19/00 A01K 67/02

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 雌牛の体内にインヒビンに対する能動免
    疫を行い、牛体内に抗体を生成させることによって卵巣
    内の卵胞の発育を促進し、ついで経膣法によって卵胞卵
    子を採取することを特徴とする、牛の卵胞卵子の採取方
    法。
  2. 【請求項2】 雌牛は乳用牛および肉用牛である、請求
    項1記載の方法。
  3. 【請求項3】 能動免疫に使用するインヒビンは牛また
    は豚の抽出インヒビン、合成インヒビン断片および複写
    インヒビンからなる群から選ばれる、請求項1または2
    記載の方法。
  4. 【請求項4】 インヒビンの能動免疫は、豚および牛イ
    ンヒビンのα鎖のN末端より1から26番目のアミノ酸
    配列を模写して合成したペプチドにアルブミンを接合し
    たものを抗原として用い、アジュバントに混合した状態
    で雌牛の皮下に複数回投与して行う、請求項1記載の方
    法。
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