JP2698730B2 - Labeled dye and its precursor, method for synthesizing the same, and method for detecting methamphetamine using labeled dye - Google Patents
Labeled dye and its precursor, method for synthesizing the same, and method for detecting methamphetamine using labeled dyeInfo
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Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、覚醒剤の有効成分であ
るメタンフェタミン(以下MAと略称する。)の免疫的
検出に有用な標識色素、すなわちペンタメチンシアニン
誘導体(以下ABMA−IC5と略称する。)とその合
成方法、その合成上必要不可欠な前駆体(中間体)、す
なわちトリメチルインドレニウム塩(以下ABMA−T
MIと略称する。)ならびにアミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体(以下XAcABMA
と略称する。)、およびABMA−IC5を用いたMA
の検出方法に関するものである。The present invention relates to a labeling dye useful for immunodetection of methamphetamine (hereinafter abbreviated as MA) as an active ingredient of a stimulant, that is, a pentamethine cyanine derivative (abbreviated as ABMA-IC5). ) And its synthesis method, a precursor (intermediate) indispensable for its synthesis, that is, a trimethylindolenium salt (hereinafter referred to as ABMA-T
Abbreviated as MI. ) And acetyl halide derivatives of aminobutylmethamphetamine (hereinafter referred to as XAcABMA).
Abbreviated. ), And MA using ABMA-IC5
The detection method of
【0002】[0002]
【従来の技術】MAと蛍光物質とを化学的に結合した標
識色素として、特開平3−223673号公報に記載さ
れているように、MAにダンシル基を結合した化合物が
提案されている。2. Description of the Related Art As a labeling dye in which MA and a fluorescent substance are chemically bonded, a compound in which a dansyl group is bonded to MA has been proposed as described in JP-A-3-223673.
【0003】ダンシル化したMA(以下DNS−MAと
略称する。)は330nm の励起で525nm の蛍光を発し、抗
MA抗体と結合することにより、その蛍光強度が変化す
ることが知られている。It is known that dansylated MA (hereinafter abbreviated as DNS-MA) emits 525 nm fluorescence when excited at 330 nm, and its fluorescence intensity changes when bound to an anti-MA antibody.
【0004】あらかじめ抗MA抗体にDNS−MAを結
合させておき、そこにMAを加えると、MAが抗体と結
合するのにともなってDNS−MAが抗体から脱離し、
525nm の蛍光強度が変化する。[0004] DNS-MA is bound to an anti-MA antibody in advance, and when MA is added thereto, DNS-MA is detached from the antibody as MA binds to the antibody.
The fluorescence intensity at 525 nm changes.
【0005】その強度変化を測定することによって、M
Aを検出することができる。[0005] By measuring the change in intensity, M
A can be detected.
【0006】[0006]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、525nm
付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存在するため、これ
らの不純物が混入した場合、上述のDNS−MAを用い
た測定方法では、MAの検出が困難であった。However, 525 nm
Since there are many naturally occurring substances having fluorescence in the vicinity, when these impurities are mixed, it is difficult to detect MA by the above-described measurement method using DNS-MA.
【0007】したがって、混合物中のMAを高感度で検
出するには、不純物の影響を受けにくい長波長領域に蛍
光を持つ標識色素を用いる事が好ましい。本発明は、測
定対象物質中に含まれているMAを高感度で検出でき、
長波長領域に蛍光を持つペンタメチンシアニン誘導体か
らなる標識色素ならびにその合成方法を提供すること、
また、前記ペンタメチンシアニン誘導体の合成に用いる
前駆体として、MA分子と結合したトリメチルインドレ
ニウム塩、更には、前記トリメチルインドレニウム塩の
合成に用いる前駆体として、アミノブチルメタンフェタ
ミンのハロゲン化アセチル誘導体を提供すること、およ
び、前記ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素
を用いた高感度のMAの検出方法を提供することを目的
とする。[0007] Therefore, in order to detect MA in a mixture with high sensitivity, it is preferable to use a labeling dye having fluorescence in a long wavelength region which is hardly affected by impurities. The present invention can detect MA contained in a substance to be measured with high sensitivity,
To provide a labeling dye comprising a pentamethine cyanine derivative having fluorescence in a long wavelength region and a method for synthesizing the same,
Further, as a precursor used in the synthesis of the pentamethine cyanine derivative, a trimethylindolenium salt bonded to an MA molecule, and further, as a precursor used in the synthesis of the trimethylindolenium salt, an acetyl halide derivative of aminobutylmethamphetamine is used. It is another object of the present invention to provide a highly sensitive method for detecting MA using a labeled dye comprising the pentamethine cyanine derivative.
【0008】[0008]
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は次の構成を有する。 (1)下記式(化4)で示されるペンタメチンシアニン
誘導体からなる標識色素。To solve the above-mentioned problems, the present invention has the following arrangement. (1) A labeled dye comprising a pentamethine cyanine derivative represented by the following formula (Formula 4).
【0009】[0009]
【化4】 Embedded image
【0010】但し、XはCl、Br、IまたはCH3 C
OOのいずれかを示す。 (2)下記式(化5)で示されるトリメチルインドレニ
ウム塩。Wherein X is Cl, Br, I or CH 3 C
OO. (2) A trimethylindolenium salt represented by the following formula (Formula 5).
【0011】[0011]
【化5】 Embedded image
【0012】但し、XはCl、BrまたはIのいずれか
を示す。 (3)下記式(化6)で示されるアミノブチルメタンフ
ェタミンのハロゲン化アセチル誘導体。X represents any of Cl, Br and I. (3) A halogenated acetyl derivative of aminobutylmethamphetamine represented by the following formula (Formula 6).
【0013】[0013]
【化6】 Embedded image
【0014】但し、XはCl、BrまたはIのいずれか
を示す。 (4)前記(2)項に記載のトリメチルインドレニウム
塩と、テトラメトキシプロパンとを有機溶媒に溶解し、
加熱、濃縮した後、酢酸を加えて再び加熱、濃縮するこ
とを特徴とする前記(1)項に記載のペンタメチンシア
ニン誘導体の合成方法。X represents Cl, Br or I. (4) dissolving the trimethylindolenium salt according to the above (2) and tetramethoxypropane in an organic solvent,
The method for synthesizing a pentamethine cyanine derivative according to the above (1), wherein after heating and concentration, acetic acid is added and the mixture is heated and concentrated again.
【0015】(5)前記(1)項に記載のペンタメチン
シアニン誘導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝
溶液の蛍光強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加え
た時の蛍光強度との強度変化を測定することを特徴とす
る測定対象物質中に含まれるメタンフェタミンの検出方
法。(5) Intensity change between the fluorescence intensity of the buffer solution containing the pentamethine cyanine derivative and the anti-methamphetamine antibody described in the above item (1), and the fluorescence intensity when the substance to be measured is added to the buffer solution A method for detecting methamphetamine contained in a substance to be measured, characterized in that:
【0016】(6)蛍光強度が、波長が600nm から700n
m の蛍光の蛍光強度である前記(5)項に記載のメタン
フェタミンの検出方法。(6) The fluorescence intensity is from 600 nm to 700 n
m. The method for detecting methamphetamine according to the above item (5), which is the fluorescence intensity of the fluorescence of m.
【0017】[0017]
【作用】本発明の前記(1)の化学式(化4)で示され
るペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ABM
A−IC5は、長波長領域(600nm 〜700nm )に蛍光を
持つ。そして、ABMA−IC5は2個のMA分子と結
合しているため、抗MA抗体に対してアフィニティーを
有するが、その値はMAの場合ほど高くない。The labeling dye ABM of the present invention comprising a pentamethinecyanine derivative represented by the chemical formula (1) of the above (1)
The A-IC 5 has fluorescence in a long wavelength region (600 nm to 700 nm). Since ABMA-IC5 binds to two MA molecules, it has affinity for the anti-MA antibody, but its value is not as high as that of MA.
【0018】したがって、MAが存在しない場合には、
ABMA−IC5は抗MA抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにMAが加わると、抗体と結合していた
ABMA−IC5がアフィニティーの高いMAと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってMAを
検出できるが、本発明のABMA−IC5からなる標識
色素は、長波長領域(600 〜700nm)に蛍光を持つ標識色
素であるので、不純物の影響を受けにくく高感度でMA
を検出することが容易な標識色素を提供できる。Therefore, when MA does not exist,
ABMA-IC5 binds to an anti-MA antibody and changes its fluorescence intensity. When MA is added thereto, ABMA-IC5 bound to the antibody displaces MA having high affinity and the amount of fluorescence is changed according to the amount of the substitution. The intensity approaches the initial fluorescence intensity. MA can be detected by measuring this change in fluorescence intensity. However, since the labeling dye composed of ABMA-IC5 of the present invention is a labeling dye having fluorescence in a long wavelength region (600 to 700 nm), it is affected by impurities. Highly sensitive and MA
Can be provided.
【0019】また、前記化学式(化5)で示されるトリ
メチルインドレニウム塩(ABMA−TMI)は、活性
メチル基をもった4級インモニウム塩であるので、本発
明の標識色素であるABMA−IC5を合成するのに有
用な前駆体(中間体)を提供できる。また、ABMA−
IC5の様なペンタメチンシアニン誘導体のみならず、
トリメチンシアニン誘導体やメロシアニン誘導体等、種
々の蛍光波長を持つ化合物を作製することが可能とな
る。Further, since the trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the chemical formula (Formula 5) is a quaternary immonium salt having an active methyl group, the labeling dye of the present invention, ABMA-IC5 Can be provided as useful precursors (intermediates) for synthesizing ABMA-
Not only pentamethine cyanine derivatives such as IC5,
Compounds having various fluorescence wavelengths, such as a trimethine cyanine derivative and a merocyanine derivative, can be produced.
【0020】また、前記化学式(化6)で示されるアミ
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
(XAcABMA)は、脱離基として有用なハロゲンを
有しているため、反応性に富んでいる。すなわちトリメ
チルインドレニンと結合可能な官能基を有しており、ト
リメチルインドレニンと容易に反応し、4級インモニウ
ム塩を高収率で得ることができる。よって、前記化学式
(化5)で示されるトリメチルインドレニウム塩(AB
MA−TMI)を合成するのに有用な前駆体(中間体)
を提供できる。また、XAcABMAはトリメチルイン
ドレニンのみならず、オキサゾ−ルあるいはチアゾ−ル
と反応して、ABMA−TMIの類似物の合成にも適用
できる。Further, the acetyl halide derivative of aminobutyl methamphetamine (XAcABMA) represented by the chemical formula (Formula 6) has a high reactivity because it has a halogen useful as a leaving group. That is, it has a functional group capable of binding to trimethylindolenin, easily reacts with trimethylindolenin, and can obtain a quaternary immonium salt in high yield. Therefore, the trimethylindolenium salt (AB) represented by the chemical formula (Formula 5)
MA-TMI) useful precursor (intermediate)
Can be provided. XAcABMA can be applied to the synthesis of analogs of ABMA-TMI by reacting not only with trimethylindolenine but also with oxazole or thiazole.
【0021】また、本発明の標識色素であるABMA−
IC5は、前記化学式(化5)で示されるトリメチルイ
ンドレニウム塩(ABMA−TMI)と、テトラメトキ
シプロパンとを有機溶媒に溶解し、加熱、濃縮した後、
酢酸を加えて再び加熱、濃縮することにより容易に合成
することができ、ABMA−IC5の新規な合成方法を
提供できる。The labeling dye of the present invention, ABMA-
IC5 is obtained by dissolving a trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the chemical formula (Chemical Formula 5) and tetramethoxypropane in an organic solvent, heating and concentrating,
It can be easily synthesized by adding acetic acid, heating and concentrating again, and can provide a novel synthesis method of ABMA-IC5.
【0022】また、本発明のメタンフェタミンの検出方
法は、標識色素であるABMA−IC5と抗メタンフェ
タミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光強度と、その緩衝溶
液に測定対象物質を加えた時の蛍光強度との強度変化を
測定することを特徴とする。前述の如く標識色素ABM
A−IC5は、長波長領域に蛍光を持つ。そして、AB
MA−IC5は2個のMA分子と結合しているため、抗
MA抗体に対してアフィニティーを有するが、その値は
MAの場合ほど高くない。The method for detecting methamphetamine according to the present invention is characterized in that the fluorescence intensity of a buffer solution containing ABMA-IC5 as a labeling dye and an anti-methamphetamine antibody and the fluorescence intensity when a substance to be measured is added to the buffer solution are determined. Is characterized by measuring a change in intensity. Labeled dye ABM as described above
A-IC5 has fluorescence in a long wavelength region. And AB
MA-IC5 has affinity for anti-MA antibodies because it binds to two MA molecules, but its value is not as high as for MA.
【0023】したがって、MAが存在しない場合には、
ABMA−IC5は抗MA抗体と結合して蛍光強度が変
化するが、そこにMAが加わると、抗体と結合していた
ABMA−IC5がアフィニティーの高いMAと置換
し、置換した量に応じて蛍光強度が初期の蛍光強度に近
づく。この蛍光強度変化を測定することによってMAを
検出できるが、本発明のABMA−IC5からなる標識
色素は、長波長領域に蛍光を持つ標識色素であるので、
不純物の影響を受けにくく高感度でMAを検出すること
が可能なメタンフェタミンの検出方法を提供できる。Therefore, when MA does not exist,
ABMA-IC5 binds to an anti-MA antibody and changes its fluorescence intensity. When MA is added thereto, ABMA-IC5 bound to the antibody displaces MA having high affinity and the amount of fluorescence is changed according to the amount of the substitution. The intensity approaches the initial fluorescence intensity. MA can be detected by measuring this change in fluorescence intensity. However, since the labeled dye composed of ABMA-IC5 of the present invention is a labeled dye having fluorescence in a long wavelength region,
A method for detecting methamphetamine which is hardly affected by impurities and can detect MA with high sensitivity can be provided.
【0024】また、前記検出方法として、蛍光強度が、
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、525nm 付近の蛍光を持つ物質は天然に多く存
在するが、これらの不純物が混入した場合でも、不純物
の影響を受けにくく、またこの波長範囲は比較的蛍光強
度が強く、高感度のMAの検出方法を提供することがで
きる。Further, as the detection method, the fluorescence intensity is
By measuring the fluorescence intensity of the fluorescence at wavelengths from 600 nm to 700 nm, there are naturally many substances with fluorescence around 525 nm, but even if these impurities are mixed, they are hardly affected by the impurities. The range has a relatively high fluorescence intensity and can provide a highly sensitive method for detecting MA.
【0025】[0025]
【実施例】本発明の標識色素は、高感度でMAの免疫的
測定を行うため、MAの類似体であるアミノブチルメタ
ンフェタミン(以下ABMAと略称する。)と蛍光物質
とを結合させた標識色素、すなわちABMA−IC5か
らなる。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The labeled dye of the present invention is a labeled dye in which aminobutylmethamphetamine (abbreviated as ABMA hereinafter), which is an analog of MA, is bound to a fluorescent substance in order to perform MA immunoassay with high sensitivity. , Ie, ABMA-IC5.
【0026】本発明に供される蛍光物質は、長波長領域
に蛍光を持つペンタメチンシアニンが好ましく用いられ
る。また、本発明のABMA−TMIは、トリメチルイ
ンドレニンとXAcABMAとを反応させて合成したイ
ンモニウム塩で、ABMA−IC5を合成する際の前駆
体である。As the fluorescent substance used in the present invention, pentamethinecyanine having fluorescence in a long wavelength region is preferably used. ABMA-TMI of the present invention is an immonium salt synthesized by reacting trimethylindolenine with XAcABMA, and is a precursor for synthesizing ABMA-IC5.
【0027】トリメチルインドレニンは、他の含窒素ヘ
テロ環化合物よりもハロゲン化物との反応性がよいため
XAcABMAとを反応させる場合の好ましい原料とな
る。さらに、本発明のXAcABMAは、ABMA−T
MI等のような、MAの分子構造を含む4級インモニウ
ム塩を合成するために、ABMAにハロゲン化アセチル
基を導入した化合物である。Trimethylindolenine is a preferable raw material when reacting with XAcABMA because it has higher reactivity with halides than other nitrogen-containing heterocyclic compounds. Further, the XAcABMA of the present invention is ABMA-T
It is a compound in which a halogenated acetyl group is introduced into ABMA in order to synthesize a quaternary immonium salt having a molecular structure of MA, such as MI.
【0028】ハロゲン化アセチル基は、カルボニル基の
α位にハロゲンがあるため、プロピオニル基やブチリル
基よりもトリメチルインドレニンとの反応性がよいの
で、XAcABMAは前記化学式(化5)で示されるト
リメチルインドレニウム塩(ABMA−TMI)を合成
するのに有用な前駆体となる。Since the halogenated acetyl group has a halogen at the α-position of the carbonyl group, it has a higher reactivity with trimethylindolenine than the propionyl group and the butyryl group. Therefore, XAcABMA is represented by the trimethyl group represented by the chemical formula (5). It is a useful precursor for synthesizing indolenium salt (ABMA-TMI).
【0029】ハロゲンは、良好な脱離基である塩素、臭
素、ヨウ素であるのが好ましい。前記(化6)で示され
るXAcABMAは、例えば、0.01〜3mol/l
のABMAの有機溶媒、例えばベンゼン溶液中に、約
0.5〜1等量の塩化ブロモアセチルを加え、およそ0
〜5℃で約30〜60分撹拌した後、生じた沈殿を瀘過
して除き、ベンゼン層は濃縮した後精製し、沈殿はその
アルカリ溶液をクロロホルムなどで抽出した後精製する
ことによって得ることができる。Halogen is preferably chlorine, bromine or iodine which is a good leaving group. XAcABMA represented by the above (Formula 6) is, for example, 0.01 to 3 mol / l
About 0.5 to 1 equivalent of bromoacetyl chloride in an organic solvent of ABMA,
After stirring at 55 ° C. for about 30 to 60 minutes, the formed precipitate is removed by filtration, the benzene layer is concentrated and purified, and the precipitate is obtained by extracting the alkaline solution with chloroform or the like and then purifying. Can be.
【0030】また、前記化学式(化5)で示されるトリ
メチルインドレニウム塩(ABMA−TMI)を合成す
るには、例えば、XAcABMAと、約0.5〜2等量
モルのトリメチルインドレニンとを混合し、およそ10
0〜160℃で約1〜5時間加熱することによって得る
ことができる。In order to synthesize the trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the chemical formula (Formula 5), for example, XAcABMA is mixed with about 0.5 to 2 equimolar amounts of trimethylindolenine. And about 10
It can be obtained by heating at 0 to 160 ° C. for about 1 to 5 hours.
【0031】また、本発明の標識色素であるABMA−
IC5を合成するには、例えば、約0.01〜1mol
/lの前記化学式(化5)で示されるトリメチルインド
レニウム塩(ABMA−TMI)の塩基性の有機溶媒溶
液、例えば、ピリジン溶液に、前記トリメチルインドレ
ニウム塩(ABMA−TMI)の約0.5〜2等量モル
に相当するテトラメトキシプロパンを加え、通常は常圧
でおよそ110〜150℃に加熱、濃縮し、反応溶液の
体積がおよそ1/5〜1/20程度になったところで、
最初の濃度(約0.01〜1mol/l)と同じになる
ように酢酸を加え、再び例えば常圧で約110〜150
℃に加熱、濃縮することによって得ることができる。Further, the labeling dye of the present invention, ABMA-
To synthesize IC5, for example, about 0.01 to 1 mol
/ L of a trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the chemical formula (Chemical Formula 5) in a basic organic solvent solution, for example, a pyridine solution, is added with about 0.5 of the trimethylindolenium salt (ABMA-TMI). ~ 2 equivalent moles of tetramethoxypropane is added, usually heated to about 110 to 150 ° C under normal pressure, concentrated, and when the volume of the reaction solution becomes about 1/5 to 1/20,
Acetic acid is added so as to have the same initial concentration (about 0.01 to 1 mol / l), and again, for example, about 110 to 150 at normal pressure.
It can be obtained by heating and concentrating to ° C.
【0032】本発明の標識色素であるABMA−IC5
を用いた、測定対象物質中に含まれるメタンフェタミン
の検出方法はABMA−IC5の蛍光強度変化を測定す
るものであるため、測定する蛍光の波長は強度の強い60
0nm から700nm で行うのが好ましく、なかでも、660nm
の蛍光は最も強いので好ましい。また、この様な長波長
を用いて測定を行うことは、前述したように、不純物が
混入されていても、その影響が少なく、高感度でメタン
フェタミンの検出ができるので好ましい。The labeling dye of the present invention, ABMA-IC5
The method of detecting methamphetamine contained in the substance to be measured using the method of measuring the change in the fluorescence intensity of ABMA-IC5, the wavelength of the measured fluorescence is strong.
It is preferably performed at 0 nm to 700 nm, especially 660 nm
Is preferred because it has the strongest fluorescence. Further, as described above, it is preferable to perform measurement using such a long wavelength because even if impurities are mixed, the influence is small and methamphetamine can be detected with high sensitivity.
【0033】以下具体的実施例を挙げて、本発明をさら
に詳しく説明する。なお、ハロゲンは臭素の例、蛍光の
測定波長は660nm の例である。 実施例1 BrAcABMAの合成 化6(但し、XはBr)の構造を持つBrAcABMA
を以下に示す方法で合成した。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific examples. The halogen is an example of bromine, and the measurement wavelength of the fluorescence is an example of 660 nm. Example 1 Synthesis of BrAcABMA Synthesis 6 (where X is Br) BrAcABMA
Was synthesized by the following method.
【0034】9g(40.91mmol)のABMAを40mlの乾燥ベ
ンゼンに溶解し、5℃で撹拌しながら3.22g(20.45mmol)
の塩化ブロモアセチルを滴下した。5℃で1時間撹拌し
た後、生じた白色沈澱を濾過して除き、沈澱はベンゼン
でよく洗浄した。9 g (40.91 mmol) of ABMA are dissolved in 40 ml of dry benzene and, while stirring at 5 ° C., 3.22 g (20.45 mmol)
Of bromoacetyl chloride was added dropwise. After stirring at 5 ° C. for 1 hour, the resulting white precipitate was removed by filtration, and the precipitate was thoroughly washed with benzene.
【0035】濾液は、減圧下で濃縮した後、シリカゲル
薄層クロマトグラフィー(以下TLCと略す、展開溶
媒:メタノ−ル)を用いて精製し、564mg のブロモアセ
チルABMAを得た。The filtrate was concentrated under reduced pressure, and then purified using silica gel thin layer chromatography (hereinafter abbreviated as TLC, developing solvent: methanol) to obtain 564 mg of bromoacetyl ABMA.
【0036】一方、沈澱は100ml の1N塩酸に溶解し、
撹拌しながら10Nの水酸化ナトリウム水溶液を加えて、
アルカリ性にした。クロロホルムで3回抽出した後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。On the other hand, the precipitate was dissolved in 100 ml of 1N hydrochloric acid,
Add a 10N aqueous sodium hydroxide solution while stirring,
Made alkaline. After extracting three times with chloroform, the extract was dried over anhydrous sodium sulfate.
【0037】減圧下でクロロホルムを留去した後、TL
C(展開溶媒:メタノ−ル)を用いて精製し、500mg の
BrAcABMAを得た。以下に得られたBrAcAB
MAの1 H- NMRの特徴的なピークのケミカルシフト
を示す。After distilling off chloroform under reduced pressure, TL
Purification was performed using C (developing solvent: methanol) to obtain 500 mg of BrAcABMA. BrAcAB obtained below
The chemical shift of the characteristic peak of 1 H-NMR of MA is shown.
【0038】1 H- NMR( CDCl3 ) :δ(ppm) =
0.93(3H,d,C−CH3 )、2.30(3H,
S,N−CH3 )、4.02(2H、S,CO−CH2
−Br)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ (ppm) =
0.93 (3H, d, C- CH 3), 2.30 (3H,
S, N-CH 3), 4.02 (2H, S, CO-CH 2
-Br).
【0039】また、TLCを用いた精製の際に、6.18g
の原料(ABMA)を回収した。なお、本実施例ではハ
ロゲンは臭素であったが、塩素、ヨウ素の場合でも同様
であった。In the purification using TLC, 6.18 g
(ABMA) was recovered. In this example, the halogen was bromine, but the same was true for chlorine and iodine.
【0040】実施例2 ABMA−TMIの合成 化5(但し、XはBr)の構造を持つABMA−TMI
を以下に示す方法で合成した。Example 2 Synthesis of ABMA-TMI ABMA-TMI having the structure of Formula 5 (where X is Br)
Was synthesized by the following method.
【0041】500mg(1.47mmol) のBrAcABMAと28
0mg(1.76mmol) のトリメチルインドレニンとを窒素気流
下、130 ℃で3時間撹拌した。反応混合物を約1mlのメ
タノ−ルに溶解し、これを400ml のジエチルエ−テル中
に滴下した。500 mg (1.47 mmol) of BrAcABMA and 28
0 mg (1.76 mmol) of trimethylindolenine was stirred at 130 ° C. for 3 hours under a nitrogen stream. The reaction mixture was dissolved in about 1 ml of methanol and added dropwise to 400 ml of diethyl ether.
【0042】生じた沈澱を濾別し、ジエチルエ−テルで
よく洗浄して、443mg のABMA−TMIを得た。以下
に得られたABMA−TMIの1 H- NMRの特徴的な
ピークのケミカルシフトを示す。The resulting precipitate was filtered off and washed well with diethyl ether to obtain 443 mg of ABMA-TMI. The chemical shift of the characteristic peak of 1 H-NMR of the obtained ABMA-TMI is shown below.
【0043】1 H- NMR( CDCl3 ) :δ(ppm) =
1.50(3H,S,N=C−CH 3 )、1.55(3
H,d,C−CH3 )、1.61(6H,S,CM
e2 )、2.93(3H,S,N−CH3 )、3.20
(2H、S,CO−CH2 −N+)。[0043]1H-NMR (CDClThree): Δ (ppm) =
1.50 (3H, S, N = C-CH Three), 1.55 (3
H, d, C-CHThree), 1.61 (6H, S, CM
eTwo), 2.93 (3H, S, N-CH)Three), 3.20
(2H, S, CO-CHTwo-N+).
【0044】実施例3 ABMA−IC5の合成 化4(但し、XはBr)の構造を持つABMA−IC5
を以下に示す方法で合成した。Example 3 Synthesis of ABMA-IC5 ABMA-IC5 having the structure of Formula 4 (where X is Br)
Was synthesized by the following method.
【0045】300mg(0.60mmol) のABMA−TMIと99
mg(0.60mmol) のテトラメトキシプロパンとを5mlの乾
燥ピリジンに溶解し、50mlの二口フラスコに入れ、冷却
管を付けないで、バス温130 ℃で30分間にわたって加熱
濃縮した。300 mg (0.60 mmol) of ABMA-TMI and 99
mg (0.60 mmol) of tetramethoxypropane was dissolved in 5 ml of dry pyridine, placed in a 50 ml two-necked flask, and concentrated by heating at a bath temperature of 130 ° C. for 30 minutes without a condenser.
【0046】ピリジンが0.5ml 程度になったところで5
mlの酢酸を加え、再び30分間にわたって加熱濃縮した。
反応溶液が0.5ml 程度になり、青く呈色したところで室
温に戻し、5mlのベンゼンに溶解した。When the amount of pyridine becomes about 0.5 ml, 5
ml of acetic acid was added, and the mixture was again concentrated by heating for 30 minutes.
When the reaction solution became about 0.5 ml and turned blue, it was returned to room temperature and dissolved in 5 ml of benzene.
【0047】ベンゼン溶液を250ml のジエチルエ−テル
中に滴下し、生じた固体を濾別した。これを中圧液体ク
ロマトグラフィー(ローバーカラムNH2 タイプ、展開
溶媒:メタノ−ル/アセトニトリル=1/5)を用いて
精製し、20mgのABMA−IC5を得た。以下に得られ
たABMA−IC5の1 H- NMRの特徴的なピークの
ケミカルシフトを示す。The benzene solution was dropped into 250 ml of diethyl ether, and the resulting solid was separated by filtration. This was purified using medium pressure liquid chromatography (row bar column NH 2 type, developing solvent: methanol / acetonitrile = 1/5) to obtain 20 mg of ABMA-IC5. The chemical shift of the characteristic peak of 1 H-NMR of the obtained ABMA-IC5 is shown below.
【0048】1 H- NMR( CDCl3 ) :δ(ppm) =
1.25(6H,d,2C−CH3)、1.65(12
H,S,2CMe2 )、2.95(6H,S,2N−M
e)、3.12(4H,S,2CO−CH2 −N)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ (ppm) =
1.25 (6H, d, 2C- CH 3), 1.65 (12
H, S, 2CMe 2), 2.95 (6H, S, 2N-M
e), 3.12 (4H, S , 2CO-CH 2 -N).
【0049】 実施例4 ABMA−IC5の蛍光強度変化の測定 ABMA−IC5(2.95×10-7M)と抗MA抗体(4.97
×10-7M)との混合PBS溶液(燐酸緩衝液)を調整
し、この溶液1740μl をとり、25℃で1分間撹拌した
後、励起波長600nm で660nm の蛍光強度を測定した。そ
の蛍光強度は57.74であった。Example 4 Measurement of change in fluorescence intensity of ABMA-IC5 ABMA-IC5 (2.95 × 10 −7 M) and anti-MA antibody (4.97)
× 10 −7 M), a PBS solution (phosphate buffer) was prepared, 1740 μl of this solution was taken, stirred at 25 ° C. for 1 minute, and the fluorescence intensity at 660 nm was measured at an excitation wavelength of 600 nm. Its fluorescence intensity was 57.74.
【0050】次に、この溶液に最終濃度10-2.6MのMA
/PBS溶液140 μl を加え、励起波長600nm で660nm
の蛍光強度を測定した。蛍光強度は39.62 であった。蛍
光強度の変化率は、次のように計算した。Next, a MA having a final concentration of 10 -2.6 M was added to this solution.
/ 140 μl of PBS solution and add 660 nm at an excitation wavelength of 600 nm.
Was measured for fluorescence intensity. The fluorescence intensity was 39.62. The rate of change of the fluorescence intensity was calculated as follows.
【0051】(1−39.62 /57.54 )×100 = 31.1 % MAの最終濃度が10-3.6M、10-4.5M、10-5.2M、10
-6.2M、10-6.9M、10-7 .3Mの場合についてもそれぞれ
上記と同様の方法で蛍光強度を測定し、変化率を計算し
た。(1-39.62 / 57.54) × 100 = 31.1% The final concentration of MA is 10 −3.6 M, 10 −4.5 M, 10 −5.2 M, 10
-6.2 M, respectively 10 -6.9 M, 10 -7 .3 for the case of M also measuring the fluorescence intensity in the same manner as above to calculate the change rate.
【0052】変化率はそれぞれ31.0%( 10-3.6M) 、3
0.1%( 10-4.5M) 、24.6%( 10-5.2M) 、10.9%( 10
-6.2M) 、5.2 %( 10-6.9M) 、3.1 %( 10-7.3M) で
あった。The rates of change were 31.0% ( 10-3.6 M) and 3
0.1% ( 10-4.5M ), 24.6% ( 10-5.2M ), 10.9% (10
-6.2M ), 5.2% ( 10-6.9M ) and 3.1% ( 10-7.3M ).
【0053】[0053]
【発明の効果】本発明の前記化学式(化4)で示される
ペンタメチンシアニン誘導体からなる標識色素ABMA
−IC5は、不純物の影響を受けにくく、高感度でMA
を検出することができる標識色素を提供できる。According to the present invention, a labeled dye ABMA comprising a pentamethinecyanine derivative represented by the above chemical formula (Formula 4) is used.
-IC5 is less sensitive to impurities, has high sensitivity,
Can be provided.
【0054】また、前記化学式(化5)で示されるトリ
メチルインドレニウム塩(ABMA−TMI)は、本発
明の標識色素であるABMA−IC5を合成するのに有
用な前駆体である。The trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the above chemical formula (Formula 5) is a useful precursor for synthesizing the labeling dye of the present invention, ABMA-IC5.
【0055】また、前記化学式(化6)で示されるアミ
ノブチルメタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体
(XAcABMA)は、トリメチルインドレニンと容易
に反応し、4級インモニウム塩を高収率で得ることがで
き、前記化学式(化5)で示されるトリメチルインドレ
ニウム塩(ABMA−TMI)を合成するのに有用な前
駆体となる。Further, the acetyl halide derivative of aminobutylmethamphetamine (XAcABMA) represented by the chemical formula (Formula 6) can easily react with trimethylindolenine to obtain a quaternary immonium salt in high yield. And a precursor useful for synthesizing the trimethylindolenium salt (ABMA-TMI) represented by the above chemical formula (Formula 5).
【0056】更に、本発明のABMA−IC5の新規な
合成方法により、ABMA−IC5の製造が可能となっ
た。また、本発明の合成方法によれば、ABMA−IC
5を容易に合成できる方法が提供できる。Further, the novel synthesis method of ABMA-IC5 of the present invention makes it possible to produce ABMA-IC5. Further, according to the synthesis method of the present invention, ABMA-IC
5 can be easily synthesized.
【0057】また、本発明のメタンフェタミンの検出方
法は、不純物の影響を受けにくく、高感度でMAを検出
することが可能なメタンフェタミンの検出方法を提供で
きる。The method of detecting methamphetamine of the present invention can provide a method of detecting methamphetamine which is hardly affected by impurities and which can detect MA with high sensitivity.
【0058】また、前記検出方法として、蛍光強度が、
波長が600nm から700nm の蛍光の蛍光強度を測定するこ
とにより、不純物の影響を受けにくく、蛍光強度が強
く、高感度のMAの検出方法を提供することができる。Further, as the detection method, the fluorescence intensity
By measuring the fluorescence intensity of the fluorescence having a wavelength of from 600 nm to 700 nm, it is possible to provide a highly sensitive method for detecting MA which is hardly affected by impurities, has a strong fluorescence intensity, and has a high sensitivity.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 // A61K 39/385 A61K 39/385 (72)発明者 宮崎 仁誠 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電 器産業株式会社内 (72)発明者 光亦 忠泰 大阪府門真市大字門真1006番地 松下電 器産業株式会社内──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Agency reference number FI Technical display location // A61K 39/385 A61K 39/385 (72) Inventor Hitoshi Miyazaki Kazuma Okadoma 1006 Kadoma City, Osaka Prefecture Address Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. (72) Inventor Tadayasu Mitsumata 1006 Oji Kadoma, Kadoma City, Osaka Prefecture Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.
Claims (6)
シアニン誘導体からなる標識色素。 【化1】 但し、XはCl、Br、IまたはCH3 COOのいずれ
かを示す。1. A labeled dye comprising a pentamethinecyanine derivative represented by the following formula (Formula 1). Embedded image Here, X represents any of Cl, Br, I or CH 3 COO.
ンドレニウム塩。 【化2】 但し、XはCl、BrまたはIのいずれかを示す。2. A trimethylindolenium salt represented by the following formula (Formula 2). Embedded image Here, X represents any of Cl, Br and I.
メタンフェタミンのハロゲン化アセチル誘導体。 【化3】 但し、XはCl、BrまたはIのいずれかを示す。3. A halogenated acetyl derivative of aminobutylmethamphetamine represented by the following formula (Formula 3). Embedded image Here, X represents any of Cl, Br and I.
ム塩と、テトラメトキシプロパンとを有機溶媒に溶解
し、加熱、濃縮した後、酢酸を加えて再び加熱、濃縮す
ることを特徴とする請求項1記載のペンタメチンシアニ
ン誘導体の合成方法。4. The method according to claim 1, wherein the trimethylindolenium salt according to claim 2 and tetramethoxypropane are dissolved in an organic solvent, heated and concentrated, acetic acid is added, and the mixture is heated and concentrated again. A method for synthesizing the described pentamethine cyanine derivative.
導体と抗メタンフェタミン抗体とを含む緩衝溶液の蛍光
強度と、その緩衝溶液に測定対象物質を加えた時の蛍光
強度との強度変化を測定することを特徴とする測定対象
物質中に含まれるメタンフェタミンの検出方法。5. A method for measuring a change in fluorescence intensity between a fluorescence intensity of a buffer solution containing the pentamethine cyanine derivative according to claim 1 and an anti-methamphetamine antibody and a fluorescence intensity when a substance to be measured is added to the buffer solution. A method for detecting methamphetamine contained in a substance to be measured.
蛍光の蛍光強度である請求項5記載のメタンフェタミン
の検出方法。6. The method for detecting methamphetamine according to claim 5, wherein the fluorescence intensity is a fluorescence intensity of fluorescence having a wavelength of 600 nm to 700 nm.
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CN105548098B (en) * | 2015-12-03 | 2018-07-13 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | A kind of fluorescence probe and detection method detecting crystal methamphetamine or/and ketamine |
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