JP2512950B2 - 酵素固定化膜の製造法 - Google Patents
酵素固定化膜の製造法Info
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- JP2512950B2 JP2512950B2 JP18353387A JP18353387A JP2512950B2 JP 2512950 B2 JP2512950 B2 JP 2512950B2 JP 18353387 A JP18353387 A JP 18353387A JP 18353387 A JP18353387 A JP 18353387A JP 2512950 B2 JP2512950 B2 JP 2512950B2
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- Japan
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- membrane
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- aqueous
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、酵素固定化膜の製造法に関する。更に詳し
くは、アルブミン膜に酵素を固定化させる酵素固定化膜
の製造法に関する。
くは、アルブミン膜に酵素を固定化させる酵素固定化膜
の製造法に関する。
〔従来の技術〕および〔発明が解決しようとする問題
点〕 従来から、アルブミン膜にグルタルアルデヒドなどの
アルデヒドを反応させ、そこに酵素を固定化させる方法
が知られている。しかしながら、酵素を固定化させる膜
はアルブミンの単体膜であるため膜強度に問題があり、
また酵素の固定化もアルブミンのアミノ基のみに依存し
ているため酵素の固定化量が少なく、従って酵素活性も
不十分なものであった。
点〕 従来から、アルブミン膜にグルタルアルデヒドなどの
アルデヒドを反応させ、そこに酵素を固定化させる方法
が知られている。しかしながら、酵素を固定化させる膜
はアルブミンの単体膜であるため膜強度に問題があり、
また酵素の固定化もアルブミンのアミノ基のみに依存し
ているため酵素の固定化量が少なく、従って酵素活性も
不十分なものであった。
本発明者は、膜強度が大きくかつ酵素活性も十分であ
るようなアルブミンの酵素固定化膜を求めて種々検討し
た結果、アルブミン膜をポリビニルブチラールとの混合
物膜として用いることにより、かかる課題が効果的に解
決されることを見出した。
るようなアルブミンの酵素固定化膜を求めて種々検討し
た結果、アルブミン膜をポリビニルブチラールとの混合
物膜として用いることにより、かかる課題が効果的に解
決されることを見出した。
従って、本発明は酵素固定化膜の製造法に係り、酵素
固定化膜の製造は、アルブミン−ポリビニルブチラール
混合物膜をアルデヒド水溶液および酵素水溶液に順次浸
漬し、膜表面に酵素を固定化させることにより行われ
る。
固定化膜の製造は、アルブミン−ポリビニルブチラール
混合物膜をアルデヒド水溶液および酵素水溶液に順次浸
漬し、膜表面に酵素を固定化させることにより行われ
る。
アルブミン−ポリビニルブチラール混合物膜の製膜
は、ポリビニルブチラールが約１〜25重量％、またアル
ブミンが約0.1〜１重量％の濃度となる割合で塩化メチ
レン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、
アセトン、ジメチルスルホキシドなどの水溶性溶媒中に
混合し、ここに形成されたドープ液をガラス板上などに
約10〜30℃の温度条件下で展開し、そのまま約10秒間乃
至約24時間放置した後、約10〜30℃の水溶液中に浸漬し
てゲル化、溶媒抽出することにより行われる。
は、ポリビニルブチラールが約１〜25重量％、またアル
ブミンが約0.1〜１重量％の濃度となる割合で塩化メチ
レン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、
アセトン、ジメチルスルホキシドなどの水溶性溶媒中に
混合し、ここに形成されたドープ液をガラス板上などに
約10〜30℃の温度条件下で展開し、そのまま約10秒間乃
至約24時間放置した後、約10〜30℃の水溶液中に浸漬し
てゲル化、溶媒抽出することにより行われる。
このようにして担体上で製膜された厚さ約0.05〜2mm
の混合物膜は、担体から剥離された後、適当な大きさに
カットし、アルデヒド水溶液および酵素水溶液に順次浸
漬する。アルデヒド水溶液としては、一般にグルタルア
ルデヒド水溶液が用いられ、約0.1〜10重量％水溶液中
に約10〜30℃の温度で約10分間乃至約24時間浸漬、放置
する。次いで、この膜を水洗した後、濃度約0.1〜100mg
/mlの酵素水溶液中に、約３〜20℃の温度で約10分間乃
至約24時間浸漬し、膜表面に酵素を固定化させる。
の混合物膜は、担体から剥離された後、適当な大きさに
カットし、アルデヒド水溶液および酵素水溶液に順次浸
漬する。アルデヒド水溶液としては、一般にグルタルア
ルデヒド水溶液が用いられ、約0.1〜10重量％水溶液中
に約10〜30℃の温度で約10分間乃至約24時間浸漬、放置
する。次いで、この膜を水洗した後、濃度約0.1〜100mg
/mlの酵素水溶液中に、約３〜20℃の温度で約10分間乃
至約24時間浸漬し、膜表面に酵素を固定化させる。
酵素としては、例えばウレアーゼ、グルコースオキシ
ダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、コレステロールオキシ
ダーゼ、ウリカーゼなどのオキシダーゼ類、クレアキニ
ナーゼ、グルタミナーゼ、ペニシリナーゼ、カタラー
ゼ、パーオキシダーゼ、インベルターゼ、ムタロター
ゼ、アミラーゼ、パパイン、トリプシンなどが用いられ
る。
ダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、コレステロールオキシ
ダーゼ、ウリカーゼなどのオキシダーゼ類、クレアキニ
ナーゼ、グルタミナーゼ、ペニシリナーゼ、カタラー
ゼ、パーオキシダーゼ、インベルターゼ、ムタロター
ゼ、アミラーゼ、パパイン、トリプシンなどが用いられ
る。
〔作用〕および〔発明の効果〕 本発明に係る方法により製造された酵素固定化膜は、
アルブミン膜がポリビニルブチラールとの混合物から形
成されているため、アルブミン分子中にポリビニルブチ
ラール分子が絡まり合い、その絡まり合いによって膜自
体の強度を上昇させている。更に、アルブミンのアミノ
基の他にポリビニルブチラール水酸基分だけ結合基が増
すことになるため、グルタルアルデヒドの結合個所が多
くなり、それを介して結合される酵素量も多くなるた
め、結果として酵素活性も増大するようになる。
アルブミン膜がポリビニルブチラールとの混合物から形
成されているため、アルブミン分子中にポリビニルブチ
ラール分子が絡まり合い、その絡まり合いによって膜自
体の強度を上昇させている。更に、アルブミンのアミノ
基の他にポリビニルブチラール水酸基分だけ結合基が増
すことになるため、グルタルアルデヒドの結合個所が多
くなり、それを介して結合される酵素量も多くなるた
め、結果として酵素活性も増大するようになる。
次に、実施例について本発明を説明する。
実施例 ポリビニルブチラール15重量％および牛血清アルブミ
ン（シグマ社製品）0.5重量％の濃度割合で塩化メチレ
ン中に混合し、ドープ液を調製した。このドープ液を、
ガラス板上に20℃の温度条件下で展開し、18時間放置し
た後温度18℃の水溶液中に浸漬してゲル化および溶媒抽
出を行なった。これをガラス板から剥がし、１×1cmの
大きさにカットした。
ン（シグマ社製品）0.5重量％の濃度割合で塩化メチレ
ン中に混合し、ドープ液を調製した。このドープ液を、
ガラス板上に20℃の温度条件下で展開し、18時間放置し
た後温度18℃の水溶液中に浸漬してゲル化および溶媒抽
出を行なった。これをガラス板から剥がし、１×1cmの
大きさにカットした。
このカットサンプルを、濃度５重量％のグルタルアル
デヒド水溶液中に20℃で18時間浸漬し、その後蒸留水で
十分に洗浄してから、濃度5mg/mlのウレアーゼ水溶液中
に４℃で18時間浸漬し、その後蒸留水で十分に洗浄し
た。
デヒド水溶液中に20℃で18時間浸漬し、その後蒸留水で
十分に洗浄してから、濃度5mg/mlのウレアーゼ水溶液中
に４℃で18時間浸漬し、その後蒸留水で十分に洗浄し
た。
得られたウレアーゼ固定化膜について、そのウレアー
ゼ酵素活性をUrea−NB−Test Wakoキット（和光純薬工
業製品）を用い、インドフェノール法で波長570nmの吸
光度として測定すると、0.502の値が得られた。
ゼ酵素活性をUrea−NB−Test Wakoキット（和光純薬工
業製品）を用い、インドフェノール法で波長570nmの吸
光度として測定すると、0.502の値が得られた。
この膜について、同様の測定を計10回行ない、酵素活
性を測定した結果、活性の低下率は最初の活性の12％に
すぎなかった。
性を測定した結果、活性の低下率は最初の活性の12％に
すぎなかった。
比較例 ポリビニルブチラールは、側鎖に水酸基を有している
ためアルデヒドを用いただけでも固定できるので、アル
ブミンを用いることなく、実施例と同様の製膜および酵
素活性の測定を行なった。
ためアルデヒドを用いただけでも固定できるので、アル
ブミンを用いることなく、実施例と同様の製膜および酵
素活性の測定を行なった。
最初の酵素活性値は0.142であり、測定10回後の活性
の低下率は56％であった。
の低下率は56％であった。
Claims (2)
- 【請求項１】アルブミン−ポリビニルブチラール混合物
膜をアルデヒド水溶液および酵素水溶液に順次浸漬し、
膜表面に酵素を固定化させることを特徴とする酵素固定
化膜の製造法。 - 【請求項２】アルデヒド水溶液がグルタルアルデヒド水
溶液である特許請求の範囲第１項記載の酵素固定化膜の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18353387A JP2512950B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | 酵素固定化膜の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18353387A JP2512950B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | 酵素固定化膜の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6430586A JPS6430586A (en) | 1989-02-01 |
| JP2512950B2 true JP2512950B2 (ja) | 1996-07-03 |
Family
ID=16137495
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18353387A Expired - Lifetime JP2512950B2 (ja) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | 酵素固定化膜の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2512950B2 (ja) |
-
1987
- 1987-07-24 JP JP18353387A patent/JP2512950B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6430586A (en) | 1989-02-01 |
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