JP2024504390A - 抗ｈｅｒ－２／ｔｒｏｐ－２構築物及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本出願は、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方に結合する、新しい二重特異性抗原結合抗体及びその抗原結合断片を提供する。これらの二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ヒトＨＥＲ２又はＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＴｒｏｐ－２又はＨＥＲ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む。二重特異性抗体はＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に対して高い結合親和性を有し、ＨＥＲ２及び／又はＴｒｏｐ－２を発現する細胞によって内在化され得る。二重特異性抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）はｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、ＨＥＲ２及び／又はＴｒｏｐ－２を発現する腫瘍細胞の成長を抑制することが可能である。二重特異性抗体はＨＥＲ２及び／又はＴｒｏｐ－２関連ヒト疾患（例えば、がん、感染症、自己免疫疾患、喘息、移植拒絶反応、及び炎症性障害）を診断、予後予測、及び治療するために使用することができる。【選択図】図１２

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月２２日に出願された米国仮出願第６３／１４０，６３８号の優先権を主張するものであり、その内容全体は、全ての目的のために参照により援用される。
本開示は、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ２構築物及びその使用に関する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：２２７３６２０００４４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２２年１月２４日、サイズ：１０４，０３０バイト）。
今日、がんは、数多くの高度な診断法及び治療法が開発されているが、依然として世界中で主要な死因となっている。がんの治療及び予防を成功させるための主な障壁は、多くのがんが現在の化学療法及び免疫療法の介入に依然として反応せず、積極的な治療法の後でも、多くの人が再発または死亡に見舞われるという事実にある。
がん免疫療法は、ルネサンス期を享受しており、ここ数年で急速に進歩している分野で、新しいがん治療法がいくつか生み出されている。限定するものではないが、特定の腫瘍抗原に対する枯渇抗体を使用した治療；抗体薬物コンジュゲートを使用した治療；共刺激または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト、アンタゴニスト、または遮断抗体を使用した治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を使用した治療；ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β及びＩＦＮ－γなどの生体応答調節物質の投与を伴う治療；シプリューセル－Ｔなどの治療ワクチンを使用した治療；樹状細胞ワクチン、または腫瘍抗原ペプチドワクチンを使用した治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ細胞を使用した治療；ＣＡＲ－ＮＫ細胞を使用した治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を使用した治療；及び養子移入抗腫瘍Ｔ細胞（ｅｘ ｖｉｖｏ拡大及び／またはＴＣＲトランスジェニック）を使用した治療を含む、数多くのがん免疫療法戦略が広範な研究及び臨床評価の焦点となっている。
ヒト上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーであるＨＥＲ２（ＣＤ３４０またはＥＲＢＢ２としても知られている）は、主にＨＥＲ２ゲノムの増幅により、乳癌、胃癌、及び肺癌を含む特定の悪性腫瘍で異常発現している。ＨＥＲ２の過剰発現は、これらのがんの再発リスクの増加及び予後不良に関連している。ＨＥＲ２陽性の悪性腫瘍において、このタンパク質は、下流のＲＡＳ‐ＲＡＦ‐ＥＲＫ及びＰＩ３Ｋ‐ＰＴＥＮ‐ＡＫＴシグナル伝達を刺激し、細胞増殖に重要な役割を果たし得る。
栄養膜細胞表面抗原－２（Ｔｒｏｐ－２）（腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＡＣＳＴＤ１）、膜成分染色体１表面マーカー１（Ｍ１Ｓ１）、消化管抗原７３３－１（ＧＡ７３３－１）、及び上皮糖タンパク質－１（ＥＧＰ－１）としても知られている）は、少なくとも２つのＩ型膜タンパク質を含むＴＡＣＳＴＤファミリーに属する。Ｔｒｏｐ－２は、栄養膜細胞の細胞表面マーカーとして最初に発見されたが、その後の研究で、Ｔｒｏｐ－２は様々ながん種で過剰発現していることが示唆されている。
本明細書で言及される刊行物、特許、特許出願及び特許出願公開の開示は全て、その全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、一態様において、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方に特異的に結合する新しい構築物（例えば、本明細書に記載される二重特異性抗体またはＡＤＣ）を提供する。いくつかの実施形態において、これらの構築物は、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の一方を標的とする全長抗体とＨＥＲ２及びＴｒｏｐ２の他方を標的とするｓｃＦｖを融合させたものを含む。例えば、図１～５を参照されたい。いくつかの実施形態において、構築物は、親抗体よりも高いレベルで、ＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ２を発現するがん細胞にロバストに結合する能力において、特に有利である（例えば、図６Ａに示されるように、例示される二重特異性抗体ＨＴ００２及びＴＨ００２を参照されたい）。いくつかの実施形態において、構築物は、高レベルのＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ－２を発現するがん細胞にロバストに結合する能力において、特に有利である（例えば、図７に示されるように、例示される二重特異性抗体ＨＴ００２及びＴＨ００１ｂを参照されたい）。いくつかの実施形態において、構築物は、持続的及び／または完全な抗腫瘍応答を達成する能力において、特に有利である（例えば、図１２を参照されたい）。
本出願は、別の態様において、例えば、がんを治療するために、本明細書に記載される構築物を使用する方法を提供する。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＥＲ２陽性及び／またはＴｒｏｐ－２陽性である。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＥＲ２低発現及び／またはＴｒｏｐ－２低発現である。いくつかの実施形態において、がんは、ＨＥＲ２高／中発現及び／またはＴｒｏｐ－２高／中発現である。
二重特異性抗体は、２つの異なる抗原または１つの抗原の２つの異なる部位に結合することができるモノクローナル抗体の２つの異なる抗原結合部位を含む、抗体である。２つの異なるシグナル伝達経路を同時に遮断することにより、腫瘍細胞の殺傷を高めることに加えて、二重特異性抗体はまた、１つではなく２つの異なる細胞表面抗原と相互作用することで、結合特異性を高めることができる可能性がある。二重特異性抗体は現在、がん治療法に有効な次世代の分子と考えられている。複数の治療分子の投与から生じる規制や商業上の問題を最小限に抑えることができる。親抗体の混合物には存在しない新しい活性の可能性もある。いくつかの二重特異性抗体は上市されており、臨床開発中のものも多い。
本出願は、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２タンパク質の両方に特異的に結合し、中和する、新しい二重特異性抗体及び抗原結合断片を提供する。本出願は、エフェクター分子に連結された新しい二重特異性抗体及び抗原結合断片を含む、ＡＤＣを更に提供する。したがって、本出願は、本明細書に記載される新しい二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体、抗原結合断片、及びＡＤＣを使用して、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２（例えば、がん、持続性感染症、自己免疫疾患、喘息、移植拒絶反応、及び炎症性障害）を調節することから利益を得るであろう状態を診断、予後予測、及び治療するための新しい組成物及び方法に関する。
一態様において、本出願は、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方に結合し、中和するように特異的に設計された、単離された二重特異性抗体及びその抗原結合断片を含む、構築物を提供する。様々な実施形態において、二重特異性抗体及びその抗原結合断片は、図１～５に示されるように設計される。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメイン及び第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＨＥＲ２抗体結合部位に特異的に結合し、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、Ｔｒｏｐ－２抗体結合部位に特異的に結合する。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメイン及び第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、Ｔｒｏｐ－２抗体結合部位に特異的に結合し、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＨＥＲ２抗体結合部位に結合する。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片を含み、第２の抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含む。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１の抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片を含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、重鎖定常領域またはその断片を更に含むＶＨ及び軽鎖定常領域またはその断片を更に含むＶＬを含む。様々な実施形態において、重鎖定常領域またはその断片は、ＩｇＧ定常領域である。様々な実施形態において、ＩｇＧ定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１定常領域である。様々な実施形態において、ＬＣ定常領域は、カッパ定常領域である。様々な実施形態において、軽鎖定常領域は、ラムダ定常領域である。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含むＦｃドメインを含み得る重鎖を含む。様々な実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。様々な実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、天然型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ヒト化抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ヒト抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、キメラ抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、親和性最適化抗体である。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のカルボキシ末端に共有結合される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のカルボキシ末端との間に介在するリンカーを含む。様々な実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のアミノ末端に共有結合される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のアミノ末端との間に介在するリンカーを含む。様々な実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態において、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーを介して共有結合される。様々な実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）及び免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）を含み、ここで、ＨＣは、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗体は、少なくとも約１×１０－６Ｍ、少なくとも約１×１０－７Ｍ、少なくとも約１×１０－８Ｍ、少なくとも約１×１０－９Ｍ、少なくとも約１×１０－１０Ｍ、少なくとも約１×１０－１１Ｍ、または少なくとも約１×１０－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でＨＥＲ－２及びＴｒｏｐ－２タンパク質に結合する。
別の態様において、本出願は、エフェクター分子にコンジュゲートされた、連結された（または別様に安定的に会合した）二重特異性ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合抗体を含む、単離されたイムノコンジュゲートまたは融合タンパク質を提供する。様々な実施形態において、エフェクター分子は、イムノトキシン、サイトカイン、ケモカイン、薬物部分、治療剤、または化学療法剤である。様々な実施形態において、本出願は、式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｎを有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供し、式中、Ａｂは、二重特異性ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合抗体であり、Ｌは、リンカーであり、Ｄは、薬物部分であり、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０の整数である。
別の態様において、本明細書で開示される二重特異性抗体は、標識または望ましい薬物動態学的特性を付与する部分などの追加の機能性部分に共有結合され得る（または別様に安定的に会合され得る）。様々な実施形態において、標識は、蛍光標識、放射性標識、及び特徴的な核磁気共鳴シグネチャーを有する標識からなる群から選択される。
別の態様において、本出願は、本出願の単離された二重特異性抗体もしくは抗原結合断片、またはＡＤＣを、薬学的に許容される担体と混合して含む、医薬組成物に関する。様々な実施形態において、医薬組成物は、単離されたヒト抗体を、薬学的に許容される担体と混合して含む。様々な実施形態において、医薬組成物は、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、静脈内注射、動脈内注射、髄腔内注射、脳室内注射、尿道内注射、頭蓋内注射、滑液嚢内注射または注入からなる群から選択される経路を介して投与のために製剤化される。
別の態様において、本出願は、ヒト疾患（例えば、がん、感染症、自己免疫疾患、喘息、移植拒絶反応、及び炎症性障害）を診断、予後予測、及び治療するための、本出願の二重特異性抗体もしくはその抗原結合断片、またはＡＤＣの使用に関する。
様々な実施形態において、本出願は、ＨＥＲ－２－またはＴｒｏｐ－２関連障害を患う対象を治療する方法であって、当該対象に、治療上有効な量の本出願の抗体もしくはその抗原結合断片、またはＡＤＣを投与することを含む、方法に関する。様々な実施形態において、がんは、ＨＥＲ－２またはＴｒｏｐ－２の発現上昇に関連するがんである。様々な実施形態において、がんは、大腸癌（ＣＲＣ）、腎臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、肝臓癌、頭頸部癌、及び神経膠腫からなる群から選択される。様々な実施形態において、対象は、以前に、抗がん療法による治療に応答したが、治療を中止すると再発した（以下「再発癌」という）。様々な実施形態において、対象は、抵抗性または不応性のがんを有する。
別の態様において、本出願は、対象のがんまたは感染症を治療するために設計された併用療法であって、対象に、治療上有効な量の本出願の単離された抗体または抗原結合断片の投与と、ｂ）免疫療法、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、ワクチン接種プロトコル、幹細胞移植、及び免疫細胞治療法（ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ）からなる群から選択される１つ以上の追加療法の実施とを含み、ここで、併用療法は、腫瘍細胞の細胞殺傷を増加させ、すなわち、一緒に行うと、単離された抗体または抗原結合断片と追加療法との間に相乗効果が存在する、併用療法に関する。
別の態様において、本出願は、例えば、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２関連疾患を診断するために、試料中のヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２抗原の存在をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで検出するための方法を提供する。
別の態様において、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離された核酸が提供される。また、本出願の発現ベクターを含む、単離された細胞も提供される。様々な実施形態において、細胞は、本出願の発現ベクターを含む、宿主細胞である。様々な実施形態において、細胞は、ハイブリドーマであり、ここで、細胞の染色体は、本出願の核酸を含む。更に、本出願の抗体または抗原結合断片を作製する方法であって、細胞が本出願の抗体または抗原結合断片を発現できるような条件下で、細胞を培養またはインキュベートすることを含む、方法を提供する。
Ｎ末端ハーセプチンｓｃＦｖがリンカーを介して結合された抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４を含む、代表的な二重特異性抗体（ＨＴ２（ＨＴ００２）と命名）を示す。 Ｎ末端Ａ１，２Ｘ４ ｓｃＦｖがリンカーを介して結合された抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンを含む、代表的な二重特異性抗体（ＴＨ２（ＴＨ００２）と命名）を示す。 Ｃ末端ｈＲＳ７ ｓｃＦｖがリンカーを介して結合された抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンを含む、代表的な二重特異性抗体（ＨＢ１（ＨＴ００１ａ）と命名）を示す。 Ｃ末端ハーセプチンｓｃＦｖがリンカーを介して結合された抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７を含む、代表的な二重特異性抗体（ＢＨ１（ＴＨ００１ａ）と命名）を示す。 Ｎ末端ハーセプチンｓｃＦｖがリンカーを介して結合された抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７を含む、代表的な二重特異性抗体（ＢＨ２（ＴＨ００１ｂ）と命名）を示す。 フローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）による二重特異性抗体ＨＴ２（ＨＴ００２）及びＴＨ２（ＴＨ００２）の結合親和性の評価結果を示す折れ線グラフを示す。 フローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）による二重特異性抗体ＨＢ１（ＨＴ００１ａ）の結合親和性の評価結果を示す折れ線グラフを示す。 フローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）による二重特異性抗体ＢＨ１（ＴＨ００１ａ）及びＢＨ２（ＴＨ００１ｂ）の結合親和性の評価結果を示す折れ線グラフを示す。 二重特異性抗体ＴＨ２（ＴＨ００２）、ＢＨ１（ＴＨ００１ａ）、及びＢＨ２（ＴＨ００１ｂ）の内在化に関するフローサイトメトリー解析の結果を示す。 ＤＭペイロードと還元型ｍＡｂとのコンジュゲーション手順を示す。 ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の発現レベルが異なる腫瘍細胞における二重特異性ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性を示す。 ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の発現レベルが異なる腫瘍細胞における二重特異性ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性を示す。 ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の発現レベルが異なる腫瘍細胞における二重特異性ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性を示す。 Ａ～Ｂは、ＢｘＰＣ３異種移植モデルにおけるＨＴ００２－ＢＩ－Ｐ２０３のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 Ａ～Ｂは、Ｎ８７異種移植モデルにおけるＨＴ００２－ＢＩ－Ｐ２０３のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＢｘＰＣ３異種移植モデルにおけるＨＴ００２－ＭＭＡＥのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイにおけるＪＩＭＴ－１乳癌細胞に対するＨＴ００２－ＭＭＡＥの阻害効果を示す。
一態様において、本出願は、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の両方に特異的に結合し、中和する、単離された新しい二重特異性抗体及びその抗原結合断片に関する。別の態様において、本出願は、新しい二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体及びその抗原結合断片を使用して、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２（例えば、がん、持続性感染症、自己免疫疾患、喘息、移植拒絶反応、及び炎症性障害）を調節することから利益を得るであろう状態を診断、予後予測、及び治療することに関する。また、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合するポリペプチドの全部または一部をコードするポリヌクレオチドの配列を含む、核酸分子、ならびにその誘導体及び断片、例えば、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体、抗体断片、または抗体誘導体の全部または一部をコードする核酸も提供される。また、そのような核酸を含むベクター及びプラスミド、ならびにそのような核酸及び／またはベクター及びプラスミドを含む細胞または細胞株も提供される。また、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体などのヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗原結合タンパク質を作製、特定、または単離する方法、抗原結合タンパク質がＴｒｏｐ－２に結合するかどうかを決定する方法、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗原結合タンパク質を含む医薬組成物などの組成物を作製する方法、ならびにＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗体またはその抗原結合断片を対象に投与するための方法、例えば、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２によって媒介される状態を治療するための方法も提供される。
別の態様において、本出願はまた、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体から得られる抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。また、そのような二重特異性抗体から得られるＡＤＣを作製する方法も提供される。また、二重特異性抗体から得られるＡＤＣを使用する方法、例えば、がんを治療することを、それを必要とする対象において行う方法も提供される。
定義
本明細書において別途定義されない限り、本出願に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、文脈上別途要求されない限り、単数形の用語は、複数形の用語を含むものとし、複数形の用語は、単数形の用語を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法及びそれらの技術は、当該技術分野において一般に使用され、よく知られている。別途記載がある場合を除き、本出願の方法及び技術は、一般に、当該技術分野においてよく知られている従来の方法に従って、また、本明細書を通じて引用及び議論される様々な一般的及びより具体的な参考文献に記載されるように実施される。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（２０１２）を参照されたく、参照により本明細書に援用される。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品及び製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにその実験手順及び技術は、当該技術分野において一般に使用され、よく知られている。化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化及び送達、ならびに患者の治療には、標準的な技術が使用され得る。
ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列は、標準的な一文字または三文字の略号を使用して示される。別途記載がある場合を除き、ポリペプチド配列は、左にアミノ末端、右にカルボキシ末端を有し、一本鎖核酸配列及び二本鎖核酸配列の上の鎖は、左に５’末端、右に３’末端を有する。ポリペプチドの特定部分は、アミノ酸８０～１１９のようにアミノ酸残基数によって、またはＳｅｒ８０～Ｓｅｒ１１９のようにその部位の実際の残基によって指定することができる。特定のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列はまた、参照配列とどのように異なるかに基づいて記載することもできる。特定の軽鎖及び重鎖可変ドメインのポリヌクレオチド及びポリペプチド配列は、Ｌ１（「軽鎖可変ドメイン１」）及びＨ１（「重鎖可変ドメイン１」）と名付けられる。軽鎖及び重鎖を含む抗体は、軽鎖可変ドメインの名称と重鎖可変ドメインの名称を組み合わせて示される。例えば、「Ｌ４Ｈ７」は、例えば、Ｌ４の軽鎖可変ドメイン及びＨ７の重鎖可変ドメインを含む抗体を示す。
本明細書で使用される「抗原結合分子」という用語は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、抗体、抗体断片及び足場抗原結合タンパク質である。参照分子と「同じエピトープに結合する抗原結合分子」は、競合アッセイにおいて、参照分子がその抗原に結合するのを５０％以上遮断する抗原結合分子を指し、また逆に、競合アッセイにおいて、抗原結合分子がその抗原に結合するのを５０％以上遮断する参照分子を指す。
本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原決定基に特異的に結合する抗原結合分子の部分を指す。より詳細には、「抗原結合部位」という用語は、抗原の一部または全部に特異的に結合し、相補的な領域を含む、抗体の部分を指す。抗原が大きい場合、抗原結合分子は、抗原の特定の部分にのみ結合し得、その部分は、エピトープと呼ばれる。抗原結合部位は、例えば、１つ以上の可変ドメイン（可変領域とも呼ばれる）によって提供され得る。好ましくは、抗原結合部位は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
本明細書で使用される場合、「抗原決定基」という用語は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分が結合し、抗原結合部分－抗原複合体を形成する、ポリペプチド巨大分子上の部位（例えば、連続するアミノ酸のストレッチ、または連続しないアミノ酸の異なる領域からなる高次構造）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上、ウイルス感染細胞の表面上、他の疾患細胞の表面上、免疫細胞の表面上、血清中遊離状態、及び／または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に見出すことができる。本明細書における抗原として有用なタンパク質は、別途記載がある場合を除き、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然形態のタンパク質であり得る。様々な実施形態において、抗原は、ヒトタンパク質である。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、限定するものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびに所望の抗原結合活性を呈することを条件とした抗体断片を含む、様々な抗体構造を包含する。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の供給源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全ては、非ヒト抗体に対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト抗体に対応する。ヒト化抗体は、任意選択により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を経た抗体を指す。本出願に包含される「ヒト化抗体」の他の形態は、特にＣ１ｑ結合及び／またはＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に関して、本出願に従った特性をもたらすように、定常領域が付加的に修飾されるか、または元の抗体から変更されたものである。
「ヒト」抗体は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に排除する。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は同一であり、及び／または同じエピトープに結合する。ただし、例えば、天然に存在する変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除く。そのようなバリアントは、一般に、微量に存在する。異なる決定基（エピトープ）を対象とする様々な抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。
本明細書で使用される「単一特異性」という用語は、１つ以上の結合部位を有し、そのそれぞれが同じ抗原の同じエピトープに結合する抗体を指す。
「二重特異性」という用語は、抗体が、少なくとも２つの別個の抗原決定基、例えば、異なる抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに結合する抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のペアによってそれぞれ形成される２つの結合部位に特異的に結合することができることを意味する。そのような二重特異性抗体は、１＋１フォーマットである。他の二重特異性抗体フォーマットは、２＋１フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位及び第２の抗原またはエピトープに対する１つの結合部位を含む）または２＋２フォーマット（第１の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位及び第２の抗原またはエピトープに対する２つの結合部位を含む）である。典型的に、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部位を含み、そのそれぞれは、異なる抗原決定基に特異的である。
本出願内で使用される「価」という用語は、抗原結合分子中に特定の数の結合部位が存在することを指す。したがって、「二価」、「四価」、及び「六価」という用語は、抗原結合分子中にそれぞれ２つの結合部位、４つの結合部位、及び６つの結合部位が存在することを示す。本出願による二重特異性抗体は、少なくとも「二価」であり、「三価」または「多価」（例えば、「四価」または「六価」）であってもよい。様々な実施形態において、本出願の抗体は、２つ以上の結合部位を有し、二重特異性である。すなわち、２つを超える結合部位がある（すなわち、抗体が三価または多価である）場合でも、抗体は、二重特異性であり得る。特に、本出願は、各抗原に対して特異的に結合する１つの結合部位を有する二重特異性二価抗体に関する。
「全長抗体」、「全長の抗体」、「インタクト抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で区別なく使用され、天然の抗体構造と実質的に類似の構造を有する抗体を指す。「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧクラス抗体は、ジスルフィド結合された２つの軽鎖及び２つの重鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、軽鎖定常領域とも呼ばれる軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）が続く。抗体の重鎖は、アルファ（ＩｇＡ）、デルタ（ＩｇＤ）、イプシロン（ＩｇＥ）、ガンマ（ＩｇＧ）、またはミュー（ＩｇＭ）と呼ばれる５つのタイプのうちの１つに割り当てることができ、そのいくつかは、サブタイプ、例えば、ガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ２（ＩｇＧ２）、ガンマ３（ＩｇＧ３）、ガンマ４（ＩｇＧ４）、アルファ１（ＩｇＡ１）及びアルファ２（ＩｇＡ２）に更に分けることができる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。
「抗体断片」とは、インタクト抗体が結合する抗原に結合する、インタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、クロスＦａｂ断片；直鎖抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；抗体断片から形成される多重特異性抗体及び単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたく、またＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を含む抗体断片であり、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。加えて、抗体断片は、ＶＨドメインの特徴、すなわち、ＶＬドメインとともに組み立てられて機能的な抗原結合部位になることができること、またはＶＬドメインの特徴、すなわち、ＶＨドメインとともに組み立てられて機能的な抗原結合部位になることができることを有し、それにより、全長抗体の抗原結合特性を提供する、一本鎖ポリペプチドを含む。抗体断片は、限定するものではないが、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化及び組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含む、様々な技術によって作製することができる。
インタクト抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片が得られ、そのそれぞれは、重鎖及び軽鎖可変ドメインを含有し、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。したがって、本明細書で使用される場合、「Ｆａｂ断片」という用語は、軽鎖（ＣＬ）のＶＬドメイン及び定常ドメインを含む軽鎖断片と、重鎖のＶＨドメイン及び第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む、抗体断片を指す。Ｆａｂ’断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来するシステインを１つ以上含む数個の残基が付加されている点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）及びＦｃ領域の一部を有するＦ（ａｂ’）２断片が得られる。
「一本鎖Ｆａｂ断片」または「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーからなるポリペプチドであり、当該抗体ドメイン及び当該リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に次の順序：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１またはｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有し、当該リンカーは、少なくとも３０アミノ酸、好ましくは、３２～５０アミノ酸のである。当該一本鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合を介して安定化される。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ分子は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、可変重鎖の位置４４及び可変軽鎖の位置１００）による鎖間ジスルフィド結合の生成によって更に安定化され得る。
「一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）」は、抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域を１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで接続した融合タンパク質である。リンカーは、通常、柔軟性のためにグリシンを、溶解性のためにセリンまたはトレオニンを多く含んでおり、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端を接続するか、またはその逆に接続することができる。このタンパク質は、定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、元の抗体の特異性を保持している。ｓｃＦｖ抗体は、例えば、Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３（１９９１）４６－９６）に記載されている。加えて、抗体断片は、ＶＨドメインの特徴、すなわち、ＶＬドメインとともに組み立てられて機能的な抗原結合分子になることができること、またはＶＬドメインの特徴、すなわち、ＶＨドメインとともに組み立てられて機能的な抗原結合分子になることができることを有し、それにより、全長抗体の抗原結合特性を提供する、一本鎖ポリペプチドを含む。
本明細書における「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する抗体重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列のＦｃ領域及びバリアントのＦｃ領域を含む。特に、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。重鎖のアミノ酸配列は、常にＣ末端リジンとともに示されるが、Ｃ末端リジンを含まないバリアントも本出願に含まれる。
ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３ドメインを含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」は、通常、位置２３１前後のアミノ酸残基から位置３４０前後のアミノ酸残基に及ぶ。一実施形態において、炭水化物鎖がＣＨ２ドメインに結合される。本明細書のＣＨ２ドメインは、天然配列のＣＨ２ドメインまたはバリアントのＣＨ２ドメインであり得る。「ＣＨ３ドメイン」は、Ｆｃ領域のＣ末端からＣＨ２ドメインまでの残基のストレッチを含む（すなわち、ＩｇＧの位置３４１前後のアミノ酸残基から位置４４７前後のアミノ酸残基）。本明細書におけるＣＨ３領域は、天然配列のＣＨ３ドメインまたはバリアントのＣＨ３ドメインであり得る（例えば、一方の鎖に「突起」（「ノブ」）が導入され、他方の鎖に対応する「空隙」（「ホール」）が導入されたＣＨ３ドメイン；米国特許第５，８２１，３３３号を参照されたく、参照により本明細書に明示的に援用される）。そのようなバリアントＣＨ３ドメインは、本明細書に記載されるような２つの非同一抗体重鎖のヘテロ二量体化を促進するために使用され得る。本明細書で別段特定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。
「免疫グロブリンのＦｃ領域と同等の領域」とは、免疫グロブリンのＦｃ領域の天然アレルバリアントはもちろんのこと、置換、付加、または欠失が生じる改変であるが、エフェクター機能（抗体依存性細胞傷害など）を媒介する免疫グロブリンの能力を実質的に減少させない改変を有するバリアントも含まれることが意図される。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端から、生物学的機能を実質的に損なうことなく、１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。そのようなバリアントは、活性に対する影響が最小になるように、当該技術分野において知られている一般的な規則に従って選択することができる（例えば、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６－１０（１９９０）を参照されたい）。
「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプにより異なる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合体を媒介した抗原の取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃ領域と結合した後、受容体担持細胞を刺激するシグナル伝達イベントを誘起し、エフェクター機能を実行させるＦｃ受容体である。活性化Ｆｃ受容体には、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）、及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が含まれる。特定の活性化Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０８６３７、バージョン１４１を参照されたい）。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、当該抗体が結合する抗原の生物学的活性を阻害または減少させるものである。いくつかの実施形態において、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。例えば、本出願の二重特異性抗体は、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を介してシグナル伝達を遮断する。
本明細書で使用される場合、「特異的結合」は、結合が抗原に選択的であり、望ましくないまたは非特異的な相互作用とは識別され得ることを意味する。抗原結合分子が特定の抗原に結合する能力は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）または当業者に知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器に基づく解析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、及び従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。
本明細書で使用される「親和性」または「結合親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強さを指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離速度定数と会合速度定数（それぞれｋｏｆｆ及びｋｏｎ）の比である解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。本明細書で使用される場合、抗体の「高親和性」という用語は、標的抗原に対して１０－９Ｍ以下のＫｄ、更により詳細には１０－１０Ｍ以下のＫｄを有する抗体を指す。抗体の「低親和性」という用語は、１０－８Ｍ以上のＫｄを有する抗体を指す。「結合の減少」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、ＳＰＲによって測定したときのそれぞれの相互作用に対する親和性の低下を指す。逆に、「結合の増加」とは、それぞれの相互作用に対する結合親和性の増加を指す。
「ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメイン及びＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体」、「ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に特異的に結合する二重特異性抗体」、「ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に特異的な二重特異性抗原結合分子」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、抗体がＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合することが可能な二重特異性抗体を指す。
「抗ＨＥＲ２抗体」及び「ＨＥＲ２に結合する抗原結合部位を含む抗体」という用語は、抗体がＨＥＲ２を標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＨＥＲ２、特に細胞表面上に発現されたＨＥＲ２ポリペプチドに結合することが可能な抗体を指す。一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体が無関係の非ＨＥＲ２タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくはフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される場合、抗体のＨＥＲ２への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ヒトＨＥＲ２に結合する抗原結合分子は、ヒトＨＥＲ２への結合について、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍの結合親和性のＫＤ値を有する。「抗ＨＥＲ２抗体」という用語は、ＨＥＲ２及び第２の抗原に結合することが可能な二重特異性抗体も包含する。
「抗Ｔｒｏｐ－２抗体」及び「Ｔｒｏｐ－２に結合する抗原結合部位を含む抗体」という用語は、抗体がＴｒｏｐ－２を標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＴｒｏｐ－２、特に細胞表面上に発現されたＴｒｏｐ－２ポリペプチドに結合することが可能な抗体を指す。一実施形態において、抗Ｔｒｏｐ－２抗体が無関係の非Ｔｒｏｐ－２タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくはフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される場合、抗体のＴｒｏｐ－２への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ヒトＴｒｏｐ－２に結合する抗原結合分子は、ヒトＴｒｏｐ－２への結合について、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍの結合親和性のＫＤ値を有する。「抗Ｔｒｏｐ－２抗体」という用語は、Ｔｒｏｐ－２及び第２の抗原に結合することが可能な二重特異性抗体も包含する。
「組み換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、組み換え手段によって調製、発現、作製または単離された全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、もしくは単離された抗体を含むことが意図される。そのような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、様々な実施形態において、そのような組み換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ変異導入（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物が使用される場合は、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異導入）に供せられるため、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ及びＶＬ配列に由来し関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏのヒト抗体生殖細胞系列レパートリーには天然に存在し得ない配列となる。そのような組み換え手段は全て当業者によく知られている。
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンもしくはＴ細胞受容体に特異的に結合するか、または別様に分子と相互作用することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または炭水化物もしくは糖の側鎖などの化学的に活性な分子表面基からなり、一般に、特定の三次元構造特徴及び特定の電荷特徴を有する。エピトープは、「線状」または「高次構造」であり得る。線状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との間の相互作用点の全てがタンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に存在している。高次構造エピトープでは、互いに離れたタンパク質上のアミノ酸残基にわたって相互作用点が存在している。抗原上の所望のエピトープが決定されれば、例えば、本開示に記載される技術を使用して、当該エピトープに対する抗体を作製することが可能となる。あるいは、創薬プロセスにおいて、抗体の作製及び特性評価により、所望のエピトープに関する情報を解明することができる。この情報から、同じエピトープに結合する抗体を競合的にスクリーニングすることが可能となる。これを達成するためのアプローチは、クロス競合試験を実施して、互いに競合的に結合する抗体、例えば、抗原への結合について競合する抗体を発見することである。
抗体を含む抗原結合タンパク質は、少なくとも１×１０－６Ｍ、または少なくとも１×１０－７Ｍ、または少なくとも１×１０－８Ｍ、または少なくとも１×１０－９Ｍ、または少なくとも１×１０－１０Ｍ、または少なくとも１×１０－１１Ｍの解離定数（ＫＤ、または以下に定義される対応するＫｂ）値によって決定される高い結合親和性で抗原に結合する場合、抗原に「特異的に結合する」。目的のヒト抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、他の生物種由来の同じ目的の抗原にも、同じ親和性または異なる親和性で結合することが可能であり得る。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
本明細書で使用される「イムノコンジュゲート」または「融合タンパク質」という用語は、エフェクター分子に直接的または間接的にコンジュゲートされた（または連結された）抗体またはその抗原結合断片を含む分子を指す。本明細書で使用される「融合」という用語は、構成要素が直接的または１つ以上のペプチドリンカーのいずれかによりペプチド結合によって連結されることを指す。様々な実施形態において、エフェクター分子は、イムノトキシン、サイトカイン、ケモカイン、薬物部分、治療剤、または化学療法剤である。抗体またはその抗原結合断片は、エフェクター分子にペプチドリンカーを介してコンジュゲートされ得る。イムノコンジュゲート及び／または融合タンパク質は、抗体または抗原結合断片の免疫反応性を保持しており、例えば、抗体または抗原結合断片のコンジュゲーション後の抗原結合能力は、コンジュゲーション前とほぼ同じか、またはわずかに減少するのみである。本明細書で使用される場合、イムノコンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）とも称され得る。イムノコンジュゲート及び／または融合タンパク質は、もともと抗体及びエフェクター分子などの別個の機能を持つ２つの分子から調製されるため、「キメラ分子」と呼ばれることもある。
「リンカー」とは、共有結合、イオン結合、ファンデルワールス結合、または水素結合のいずれかを介して、２つの他の分子を接続する分子を指し、例えば、５’末端の１つの相補的配列にハイブリダイズし、３’末端の別の相補的配列にハイブリダイズすることにより、２つの非相補的配列を接続する核酸分子を指す。「切断性リンカー」とは、切断性リンカーによって接続された２つの成分を切り離すために、分解または別様に切断することができるリンカーを指す。切断性リンカーは、一般に、酵素、典型的に、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼなどによって切断される。切断性リンカーは、例えば、温度、ｐＨ、塩濃度における変化などの環境的なきっかけによっても切断され得る。
本明細書で使用される「ペプチドリンカー」という用語は、１つ以上のアミノ酸、典型的に、約２～２０アミノ酸を含むペプチドを指す。ペプチドリンカーは、当該技術分野において知られており、本明細書に記載される。好適には、非免疫原性リンカーペプチド、例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ、（ＳＧ４）ｎまたはＧ４（ＳＧ４）ｎペプチドリンカーが含まれる。「ｎ」は、一般に、１～１０、典型的に、２～４の数である。
本明細書で使用される「免疫原性」という用語は、レシピエントに投与されたときに抗体または抗原結合断片が免疫応答（体液性または細胞性）を誘発する能力を指し、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を含む。ＨＡＭＡ応答は、投与された抗体に対して対象のＴ細胞が免疫応答を起こすと開始される。次いで、Ｔ細胞は、Ｂ細胞を動員して特異的な「抗抗体」抗体を産生させる。
本明細書で使用される「免疫細胞」という用語は、抗原（例えば、自己抗原）に対する免疫応答の調節に関与する造血系統の任意の細胞を意味する。様々な実施形態において、免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、またはＫｕｆｆｅｒ細胞である。
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基の重合体を指すために本明細書中で区別なく使用される。様々な実施形態において、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、そのアルファ炭素がペプチド結合を介して連結されているアミノ酸の鎖であり得る。したがって、鎖の一端（例えば、アミノ末端）の末端アミノ酸は、遊離アミノ基を有し、鎖の他端（例えば、カルボキシ末端）の末端アミノ酸は、遊離カルボキシル基を有する。本明細書で使用される場合、「アミノ末端」（略してＮ末端）という用語は、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離α－アミノ基、またはペプチド内の任意の他の位置にあるアミノ酸のα－アミノ基（ペプチド結合に関与する場合のイミノ基）を指す。同様に、「カルボキシ末端」という用語は、ペプチドのカルボキシ末端上の遊離カルボキシル基、またはペプチド内の任意の他の位置にあるアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドはまた、本質的にあらゆるポリアミノ酸を含み、限定するものではないが、アミド結合とは対照的に、エーテルによって接続されたアミノ酸などのペプチド模倣物を含む。
「組み換えポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、組み換え手段によって調製、発現、作製、誘導または単離された融合分子、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現されたポリペプチドなどを含む、全てのポリペプチドを含むことが意図される。
本開示のポリペプチドは、例えば、（１）タンパク質分解に対する感受性の低下、（２）酸化に対する感受性の低下、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性の変更、（４）結合親和性の変更、及び（５）他の物理化学的特性または機能特性の付与または改変がなされるように任意の手段及び任意の理由で修飾されたポリペプチドを含む。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）が、天然配列になされてもよい（例えば、分子間接触を形成するドメイン（複数可）以外のポリペプチドの部分）。「保存的アミノ酸置換」は、ポリペプチド中のアミノ酸を機能的に類似のアミノ酸で置換することを指す。次の６つの群は、それぞれ互いに保存的置換であるアミノ酸である：
アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びトレオニン（Ｔ）
アスパラギン酸（Ｄ）及びグルタミン酸（Ｅ）
アスパラギン（Ｎ）及びグルタミン（Ｑ）
アルギニン（Ｒ）及びリジン（Ｋ）
イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）
フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）
「非保存的アミノ酸置換」は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーに置換することを指す。様々な実施形態に従って、そのような変更を行う際には、アミノ酸の疎水性親水性指標が考慮され得る。各アミノ酸は、その疎水性及び電荷特性に基づいて、疎水性親水性指標が割り当てられている。それらは、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（－０．４）、トレオニン（－０．７）、セリン（－０．８）、トリプトファン（－０．９）、チロシン（－１．３）、プロリン（－１．６）、ヒスチジン（－３．２）、グルタミン酸（－３．５）、グルタミン（－３．５）、アスパラギン酸（－３．５）、アスパラギン（－３．５）、リジン（－３．９）、及びアルギニン（－４．５）である。
相互作用的な生物学的機能をタンパク質に付与することにおける疎水性親水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野において理解されている（例えば、Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５－１３１を参照されたい）。ある特定のアミノ酸は、類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸で置換することができ、それでもなお、類似の生物学的活性を維持することが知られている。疎水性親水性指標に基づいた変更を行う場合、様々な実施形態において、疎水性親水性指標が±２以内のアミノ酸の置換が含まれる。様々な実施形態において、±１以内のものが含まれ、様々な実施形態において、±０．５以内のものが含まれる。
同様のアミノ酸の置換は、特に、そのようにして作製された生物学的に機能的なタンパク質またはペプチドが、本明細書で開示される免疫学的実施形態における使用が意図される場合、親水性に基づいて効果的に行うことができることも当該技術分野において理解されている。様々な実施形態において、タンパク質の最大の局所的平均親水性は、隣接するアミノ酸の親水性に支配され、免疫原性及び抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。
これらのアミノ酸残基には次の親水性値が割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０．＋－．１）、グルタミン酸（＋３．０．＋－．１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、トレオニン（－０．４）、プロリン（－０．５．＋－．１）、アラニン（－０．５）、ヒスチジン（－０．５）、システイン（－１．０）、メチオニン（－１．３）、バリン（－１．５）、ロイシン（－１．８）、イソロイシン（－１．８）、チロシン（－２．３）、フェニルアラニン（－２．５）及びトリプトファン（－３．４）。類似の親水性値に基づいた変更を行う場合、様々な実施形態において、親水性値が±２以内のアミノ酸の置換が含まれ、様々な実施形態において、±１以内のものが含まれ、様々な実施形態において、±０．５以内のものが含まれる。例示的なアミノ酸置換は、表１に記載される。
Figure 2024504390000002
本明細書で使用される「ポリペプチド断片」及び「切断型ポリペプチド」という用語は、対応する全長タンパク質と比較して、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端の欠失を有するポリペプチドを指す。様々な実施形態において、断片は、例えば、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００または少なくとも１０００アミノ酸長であり得る。様々な実施形態において、断片はまた、例えば、最大１０００、最大９００、最大８００、最大７００、最大６００、最大５００、最大４５０、最大４００、最大３５０、最大３００、最大２５０、最大２００、最大１５０、最大１００、最大５０、最大２５、最大１０、または最大５アミノ酸長であり得る。断片は、その末端のいずれかまたは両方に、１つ以上の追加のアミノ酸、例えば、異なる天然タンパク質に由来するアミノ酸の配列（例えば、Ｆｃまたはロイシンジッパードメイン）または人工アミノ酸配列（例えば、人工リンカー配列）を更に含み得る。
本明細書で使用される「ポリペプチドバリアント」及び「ポリペプチド変異体」という用語は、別のポリペプチド配列と比べて、１つ以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列に挿入、欠失及び／または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。様々な実施形態において、挿入、欠失、または置換されるアミノ酸残基の数は、例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０または少なくとも５００アミノ酸長であり得る。本開示のバリアントは、融合タンパク質を含む。
ポリペプチドの「誘導体」は、化学修飾された、例えば、別の化学部分、例えば、ポリエチレングリコール、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）などへのコンジュゲーション、リン酸化、及びグリコシル化されたポリペプチドである。
「％の配列同一性」という用語は、「％の同一性」という用語と本明細書中で区別なく使用され、配列アライメントプログラムを使用して整列させた場合における、２つ以上のペプチド配列間のアミノ酸配列の同一性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列の同一性のレベルを指す。例えば、本明細書で使用される場合、８０％の同一性とは、定義されたアルゴリズムによって決定された８０％の配列同一性と同じことを意味し、所定の配列が別の長さの別の配列に対して少なくとも８０％同一であることを意味する。様々な実施形態において、％の同一性は、所定の配列に対して、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％またはそれ以上の配列同一性から選択される。様々な実施形態において、％の同一性は、例えば、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約８５％、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、または約９５％～約９９％の範囲内である。
「％の配列相同性」という用語は、「％の相同性」という用語と本明細書中で区別なく使用され、配列アライメントプログラムを使用して整列させた場合における、２つ以上のペプチド配列間のアミノ酸配列の相同性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列の相同性のレベルを指す。例えば、本明細書で使用される場合、８０％の相同性とは、定義されたアルゴリズムによって決定された８０％の配列相同性と同じことを意味し、したがって、所定の配列の相同体は、所定の配列の長さにわたって８０％を超える配列相同性を有する。様々な実施形態において、％の相同性は、所定の配列に対して、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％またはそれ以上の配列相同性から選択される。様々な実施形態において、％の相同性は、例えば、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約８５％、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、または約９５％～約９９％の範囲内である。
２つの配列間の同一性を決定するために使用することができる例示的なコンピュータプログラムには、インターネット上で一般に利用可能なＮＣＢＩウェブサイトのＢＬＡＳＴプログラム群、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、及びＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰ及びＴＢＬＡＳＴＮが含まれるが、これらに限定されない。また、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０（公開されているデフォルト設定、すなわち、ｗ＝４、ｔ＝１７のパラメーターを特に参照）及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２，１９９７を参照されたい。配列検索は、典型的に、所定のアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ及び他の公開データベースのアミノ酸配列と比べて評価する場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムを使用して実施される。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ及び他の公開データベースのアミノ酸配列に対して、全ての読み枠で翻訳された核酸配列を検索するのに好ましい。ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＸの両方は、開始ギャップペナルティ１１．０及び伸長ギャップペナルティ１．０のデフォルトパラメーターを使用して実施され、ＢＬＯＳＵＭ－６２マトリックスを利用する。同文献を参照されたい。
配列同一性パーセントの算出に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的分析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３－５７８７，１９９３を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の一致が偶然に起こり得る確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸の比較における最小合計確率が、例えば、約０．１未満、約０．０１未満、または約０．００１未満である場合、核酸は、参照配列に類似するとみなされる。
ポリペプチド配列の文脈における「実質的な類似性」または「実質的に類似する」という用語は、ポリペプチド領域が、参照配列に対して、少なくとも７０％、典型的には、少なくとも８０％、より典型的には、少なくとも８５％、または少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列類似性である配列を有することを示す。例えば、ポリペプチドは、例えば、２つのペプチドが１つ以上の保存的置換（複数可）で異なる場合、第２のポリペプチドに実質的に類似する。
「ポリヌクレオチド」とは、ヌクレオチド単位から構成される高分子化合物を指す。ポリヌクレオチドは、天然核酸、例えば、デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）及びリボ核酸（「ＲＮＡ」）ならびに核酸類似体を含む。核酸類似体には、天然に存在しない塩基、天然に存在するホスホジエステル結合以外の他のヌクレオチドと結合するヌクレオチドを含むもの、またはホスホジエステル結合以外の連結により結合された塩基を含むものが含まれる。したがって、ヌクレオチド類似体には、例えば、限定するものではないが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロトリエステル、ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、メチルホスホネート、キラル－メチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などが含まれる。そのようなポリヌクレオチドは、例えば、自動ＤＮＡシンセサイザーを使用して合成することができる。「核酸」という用語は、典型的に、大きなポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」という用語は、典型的には、一般に、約５０ヌクレオチド以下の短いポリヌクレオチドを指す。ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）によって表される場合、これには、「Ｕ」が「Ｔ」で置き換えられたＲＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）も含まれることが理解されよう。
本明細書において、ポリヌクレオチド配列の記載には、従来の表記法が使用され、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側の末端が５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向が５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写物に対するヌクレオチドの５’から３’への付加方向は、転写方向と呼ばれる。ｍＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖は、「コード鎖」と呼ばれ、当該ＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の５’末端までの５’側に位置するＤＮＡ鎖上の配列は、「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の３’末端までの３’側に位置するＤＮＡ鎖上の配列は、「下流配列」と呼ばれる。
「相補的」とは、２つのポリヌクレオチドの相互作用表面のトポロジー的な互換性または一致を指す。したがって、２つの分子は、相補性であると記載することができ、更に、接触表面の特徴も互いに相補的である。第１のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、第２のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド結合パートナーのヌクレオチド配列に対して実質的に同一である場合、または第１のポリヌクレオチドが、第２のポリヌクレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができる場合、第１のポリヌクレオチドは、第２のポリヌクレオチドに対して相補的である。
「特異的にハイブリダイズする」または「特異的なハイブリダイゼーション」または「選択的にハイブリダイズする」とは、様々な混合物（例えば、全細胞）のＤＮＡまたはＲＮＡ中に配列が存在する場合、ストリンジェントな条件下で、核酸分子が特定のヌクレオチド配列に優先的に結合、二重鎖形成、またはハイブリダイズすることを指す。「ストリンジェントな条件」という用語は、プローブがその標的部分配列に優先的にハイブリダイズし、他の配列には低い程度でハイブリダイズするか、全くハイブリダイズしない条件を指す。サザン及びノーザンハイブリダイゼーションなどの核酸ハイブリダイゼーション実験の文脈における「ストリンジェントなハイブリダイゼーション」及び「ストリンジェントなハイブリダイゼーション洗浄条件」は、配列依存性であり、様々な環境パラメーター下で異なる。核酸のハイブリダイゼーションに関する広範な指針は、Ｔｉｊｓｓｅｎ，１９９３，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ－－Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓ，ｐａｒｔ Ｉ，ｃｈａｐｔｅｒ ２，“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙｓ”，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，３．ｓｕｐ．ｒｄ ｅｄ．，ＮＹ；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ．に見出すことができる。
一般に、極めてストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄条件は、定義されたイオン強度及びｐＨにおける特定の配列の熱融点（Ｔｍ）よりも約５℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が、完全に一致するプローブにハイブリダイズする温度（定義されたイオン強度及びｐＨ下における温度）である。非常にストリンジェントな条件は、特定のプローブのＴｍと等しくなるように選択される。サザンブロットまたはノーザンブロットにおいて、フィルター上に約１００を超える相補的残基を有する相補的核酸のハイブリダイゼーションにおけるストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の一例は、ヘパリン１ｍｇを含む５０％ホルマリン、４２℃であり、ハイブリダイゼーションは、一晩実施される。極めてストリンジェントな洗浄条件の一例は、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、７２℃、約１５分間である。ストリンジェントな洗浄条件の一例は、０．２×ＳＳＣ洗浄、６５℃、１５分間である。ＳＳＣ緩衝液の説明については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。バックグラウンドのプローブシグナルを除去するために、高ストリンジェンシー洗浄の前に低ストリンジェンシー洗浄を行うことができる。例えば、約１００ヌクレオチドを超える二重鎖に対する例示的な中ストリンジェンシー洗浄は、１×ＳＳＣ、４５°Ｃ、１５分間である。例えば、約１００ヌクレオチドを超える二重鎖に対する例示的な低ストリンジェンシー洗浄は、４～６×ＳＳＣ、４０℃、１５分間である。一般に、特定のハイブリダイゼーションアッセイにおいて、無関係なプローブで観察されたシグナル対ノイズ比よりも２倍（またはそれ以上）のシグナル対ノイズ比は、特異的なハイブリダイゼーションの検出を示す。
「プライマー」とは、指定されたポリヌクレオチド鋳型に特異的にハイブリダイズし、相補的なポリヌクレオチドの合成開始点を提供することができるポリヌクレオチドを指す。そのような合成は、ポリヌクレオチドプライマーが合成が誘導される条件下、すなわち、ヌクレオチド、相補的なポリヌクレオチド鋳型、及びＤＮＡポリメラーゼなどの重合剤の存在下に置かれたときに生じる。プライマーは、典型的に、一本鎖であるが、二本鎖であってもよい。プライマーは、典型的に、デオキシリボ核酸であるが、多種多様な合成及び天然プライマーが多くの用途に有用である。プライマーは、ハイブリダイズするように設計された鋳型と相補的であり、合成を開始する部位として機能するが、鋳型の正確な配列を反映する必要はない。そのような場合、鋳型に対するプライマーの特異的なハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに依存する。プライマーは、例えば、発色性、放射性、または蛍光性部分で標識することができ、検出可能部分として使用される。
「プローブ」は、ポリヌクレオチドに関して使用される場合、別のポリヌクレオチドの指定された配列に特異的にハイブリダイズすることが可能なポリヌクレオチドを指す。プローブは、標的の相補的なポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするが、鋳型の正確な相補配列を反映する必要はない。そのような場合、標的に対するプローブの特異的なハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに依存する。プローブは、例えば、発色性、放射性、または蛍光性部分で標識することができ、検出可能部分として使用される。プローブが相補的なポリヌクレオチドの合成開始点を提供する場合、プローブはプライマーでもあり得る。
「ベクター」は、ベクターに連結された別の核酸を細胞に導入するために使用することができるポリヌクレオチドである。ベクターの１つのタイプは、「プラスミド」であり、追加の核酸セグメントをライゲートすることができる直鎖または環状の二本鎖ＤＮＡ分子を指す。別のタイプのベクターは、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）であり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに導入することができる。ある特定のベクターは、導入された宿主細胞内で自己複製が可能である（例えば、細菌複製起点を含む細菌ベクター及びエピソーム型哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム型哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。「発現ベクター」は、選択されたポリヌクレオチドの発現を誘導することができるベクターの一種である。
「調節配列」は、作動可能に連結された核酸の発現（例えば、発現のレベル、タイミング、または位置）に影響する核酸である。調節配列は、例えば、調節される核酸に直接的に、または１つ以上の他の分子（例えば、調節配列及び／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を介して、その効果を発揮することができる。調節配列の例としては、プロモーター、エンハンサー及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。調節配列の更なる実施例としては、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．及びＢａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：３６０５－０６に記載されている。調節配列がヌクレオチド配列の発現（例えば、発現のレベル、タイミング、または位置）に影響する場合、ヌクレオチド配列は調節配列に「作動可能に連結」している。
「宿主細胞」は、本開示のポリヌクレオチドを発現するために使用することができる細胞である。宿主細胞は、原核生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉであってもよいし、または真核生物、例えば、単細胞の真核生物（例えば、酵母または他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）もしくはハイブリドーマであってもよい。典型的に、宿主細胞は、ポリペプチドをコードする核酸で形質転換またはトランスフェクトすることができる培養細胞であり、次いで、当該核酸が宿主細胞で発現され得る。「組み換え宿主細胞」という語句は、発現させる核酸で形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を示すために使用することができる。宿主細胞はまた、核酸を含むが、調節配列が核酸に作動可能に連結するように宿主細胞に導入されない限り、核酸を所望のレベルで発現しない細胞であってもよい。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫または潜在的な子孫を指すことが理解される。後続の世代には、例えば、変異または環境の影響に起因して、いくらかの改変が生じ得るため、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一ではない場合があるが、本明細書で使用される用語の範囲内に依然として含まれる。
「単離された分子」（ここで、分子は、例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドである）という用語は、その起源または由来源により、（１）その本来の状態で付随している天然に関連する成分と会合していない分子、（２）同じ種に由来する他の分子を実質的に含んでいない分子、（３）異なる種に由来する細胞によって発現された分子、または（４）天然に存在しない分子である。したがって、化学合成された分子、または天然においてその由来となる細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、天然に関連する成分から「単離」されている。分子は、当該技術分野でよく知られている精製技術を使用して単離することにより、天然に関連する成分を実質的に含まないようにすることもできる。分子の純度または均一性は、当該技術分野でよく知られている多くの手段によって、評価することができる。例えば、ポリペプチド試料の純度は、当該技術分野でよく知られている技術を使用する、ポリアクリルアミドゲル電気泳動及びポリペプチドを可視化するためのゲルの染色を使用して、評価することができる。ある特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは当該技術分野でよく知られている他の精製手段を使用することによって、より高い分解能を得ることもできる。
タンパク質またはポリペプチドは、試料の少なくとも約６０％～７５％が単一種のポリペプチドを示す場合、「実質的に純粋」、「実質的に均質」、または「実質的に精製」であり得る。ポリペプチドまたはタンパク質は、単量体または多量体であり得る。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、典型的に、タンパク質試料の約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％Ｗ／Ｗ、より一般的には約９５％であり、好ましくは、９９％を超える純度である。タンパク質の純度または均一性は、当該技術分野でよく知られている多くの手段によって、例えば、タンパク質試料をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、続いて、当該技術分野でよく知られている染色を用いてゲルを染色して、単一のポリペプチドバンドを可視化することによって、示すことができる。ある特定の目的のために、ＨＰＬＣまたは当該技術分野でよく知られている他の精製手段を使用することによって、より高い分解能を得ることもできる。
本明細書で使用される「標識」または「標識された」という用語は、抗体に別の分子を組み込むことを指す。一実施形態において、標識は、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識アミノ酸の組み込み、または標識されたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的もしくは熱量測定法によって検出することができる酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチニル部分のポリペプチドへの結合である。別の実施形態において、標識またはマーカーは、治療的なものであり得、例えば、薬物コンジュゲートまたは毒素であり得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が当該技術分野において知られており、使用され得る。ポリペプチドに対する標識の例としては、次のもの：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、ガドリニウムキレートなどの磁性剤、百日咳毒素などの毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームを介して結合される。
本明細書で使用される場合、「免疫療法」という用語は、限定するものではないが、特定の腫瘍抗原に対する枯渇抗体を使用した治療；抗体薬物コンジュゲートを使用した治療；ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＯＸ－４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡなどの共刺激または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト、アンタゴニスト、または遮断抗体を使用した治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を使用した治療；ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β及びＩＦＮ－γなどの生体応答調節物質の投与を伴う治療；シプリューセル－Ｔなどの治療ワクチンを使用した治療；樹状細胞ワクチン、または腫瘍抗原ペプチドワクチンを使用した治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ細胞を使用した治療；ＣＡＲ－ＮＫ細胞を使用した治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を使用した治療；養子移入抗腫瘍Ｔ細胞（ｅｘ ｖｉｖｏ拡大及び／またはＴＣＲトランスジェニック）を使用した治療；ＴＡＬＬ－１０４細胞を使用した治療；ならびにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫活性化剤を使用した治療を含む、がん治療を指す。
「医薬組成物」とは、動物における医薬用途に好適な組成物を指す。医薬組成物は、薬理学上有効な量の活性剤及び薬学的に許容される担体を含む。「薬理学上有効な量」とは、意図された薬理学的な結果をもたらすのに有効な剤の量を指す。「薬学的に許容される担体」とは、標準的な薬学的担体、ビヒクル、緩衝液、及び賦形剤、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、５％デキストロース水溶液、及び油／水または水／油乳剤などの乳剤、及び様々な種類の湿潤剤及び／または補助剤のいずれかを指す。好適な薬学的担体及び製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ Ｅｄ．２００５，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎに記載されている。「薬学的に許容される塩」は、薬学的用途の化合物に製剤化することができる塩であり、例えば、金属塩（ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど）及びアンモニアまたは有機アミンの塩が含まれる。
ＨＥＲ２またはＴｒｏｐ－２を発現する細胞の「成長抑制」または「成長阻害」という用語は、本明細書で使用される場合、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子、例えば、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体またはその抗原結合断片を含むＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子が、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子がない状態での増殖と比べて、ＨＥＲ２またはＴｒｏｐ－２を発現する細胞の増殖を統計的に有意に減少させる能力を指す。一態様において、ＨＥＲ２またはＴｒｏｐ－２を発現する細胞（例えば、がん細胞）の増殖は、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子、例えば、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体またはその抗原結合断片を含むＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子と細胞を接触させると、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子がない状態（対照条件）で測定された増殖と比べて、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または約１００％減少し得る。細胞増殖は、当該技術分野において知られている様々な方法に従って、例えば、生細胞の数を計数すること、成長マーカーのマーカーの存在を特定すること、分子（例えば、Ｈ－チミジンなどの放射性標識分子）の取り込みを測定すること、腫瘍の大きさ（例えば、体積または重量）を測定することなどによって測定することができる。ある特定の態様において、成長抑制とは、転移の数、大きさ、または分布の減少を指す。
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変化形）とは、治療される個体の疾患の自然経過を変えようとする臨床的介入を指し、予防のためまたは臨床病理の経過中のいずれかに実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の軽減、転移の予防、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、及び寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、疾患、障害または状態を「緩和する」ことは、疾患、障害、または状態の重症度及び／または症状の発生頻度を減らすことを意味する。更に、本明細書における「治療」への言及は、治癒的、緩和的、及び予防的治療への言及を含む。
本明細書で使用される「有効量」または「治療上有効な量」という用語は、特定の障害、状態または疾患の治療、例えば、その症状のうちの１つ以上の改善、緩和、軽減、及び／または遅延に十分な化合物または組成物の量を指す。がんまたは他の望ましくない細胞増殖に関して、有効量は、（ｉ）がん細胞数の減少、（ｉｉ）腫瘍サイズの縮小、（ｉｉｉ）周辺器官へのがん細胞の浸潤のある程度の阻害、抑制、緩徐化、好ましくは、停止、（ｉｖ）腫瘍の転移阻害（すなわち、ある程度の緩徐化、好ましくは、停止）、（ｖ）腫瘍の成長阻害、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発の予防もしくは遅延、及び／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上のある程度の緩和に十分な量を含む。有効量は、１以上の投与で投与され得る。
「投与すること」または「投与させる」という語句は、医療専門家（例えば、医師）または患者の医療を管理する者によって取られる、問題の剤（複数可）／化合物（複数可）を患者に投与することを管理及び／または許可する行為を指す。投与させることは、患者に対する、診断及び／または適切な治療レジメンの決定、及び／または特定の剤（複数可）／化合物の処方を伴い得る。そのような処方には、例えば、処方箋の作製、医療記録の注釈などが含まれ得る。本明細書で投与と記載されている場合、「投与させる」ことも企図される。
「患者」、「個体」、及び「対象」という用語は、区別なく使用され得、哺乳動物、好ましくは、ヒトまたは非ヒト霊長類を指すが、飼育されている哺乳動物（例えば、イヌまたはネコ）、実験用の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット）、及び農業用の哺乳動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ）も指す。様々な実施形態において、患者は、病院、精神科医療施設、外来患者、または他の臨床的状況において、医師または他の医療従事者のケアを受けているヒト（例えば、成人男性、成人女性、青年期の男性、青年期の女性、男児、女児）であり得る。様々な実施形態において、患者は、免疫不全患者または免疫系が低下した患者であり得、限定するものではないが、原発性免疫不全症、ＡＩＤＳを有する患者；特定の免疫抑制薬を服用しているがん患者及び移植患者、ならびに免疫系に影響する遺伝疾患（例えば、先天性無ガンマグロブリン血症、先天性ＩｇＡ欠損症）を有する者が含まれる。様々な実施形態において、患者は、限定するものではないが、膀胱癌、肺癌、黒色腫、及び変異の確率が高いことが報告されている他のがんを含む、免疫原性癌を有する（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４９９（７４５７）：２１４－２１８，２０１３）。
「抵抗性または不応性がん」とは、例えば、化学療法、手術、放射線療法、幹細胞移植、及び免疫療法を含む、以前の抗がん療法に応答しない腫瘍細胞またはがんを指す。腫瘍細胞は、治療の開始時に抵抗性または不応性であることもあれば、治療中に抵抗性または不応性になることもある。不応性腫瘍細胞には、治療開始時に応答しない腫瘍、または最初は短い期間応答するが、治療に応答しなくなる腫瘍が含まれる。不応性腫瘍細胞にはまた、抗がん療法による治療に応答するが、その後の一連の治療法に応答しなくなる腫瘍も含まれる。本出願の目的のために、不応性腫瘍細胞は、抗がん療法による治療によって抑制されたように見えたが、治療の中止から最大５年、ときには最大１０年またはそれ以上後に再発する腫瘍も包含する。抗がん療法は、化学療法剤のみ、放射線のみ、標的療法のみ、手術のみ、またはこれらの組み合わせを採用することができる。限定ではなく説明を容易にするために、不応性腫瘍細胞は、耐性腫瘍と置き換え可能であることが理解される。
本明細書に記載される本出願の態様及び実施形態は、態様及び実施形態から「なること」及び／または「本質的になること」を含むことが理解される。
本明細書における「約」という値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に対する変形を含む（及び説明する）。例えば、「約Ｘ」に関する記載は、「Ｘ」についての記載を含む。
本明細書及び添付される特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ｏｒ」及び「ｔｈｅ」は、別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。本明細書に記載される本出願の態様及び変形は、態様及び変形から「なること」及び／または「本質的になること」を含むことが理解される。
ＨＥＲ２抗原
ヒト上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーであるＨＥＲ２（ＣＤ３４０またはＥＲＢＢ２としても知られている）は、主にＨＥＲ２ゲノムの増幅により、乳癌、胃癌、及び肺癌を含む特定の悪性腫瘍で異常発現している。ＨＥＲ２の過剰発現は、これらのがんの再発リスクの増加及び予後不良に関連している。ＨＥＲ２陽性の悪性腫瘍において、このタンパク質は、下流のＲＡＳ‐ＲＡＦ‐ＥＲＫ及びＰＩ３Ｋ‐ＰＴＥＮ‐ＡＫＴシグナル伝達を刺激し、細胞増殖に重要な役割を果たし得る。したがって、ＨＥＲ２は、がんの好ましい治療標的である。ＨＥＲ２を標的とする抗体は数多く開発されている。例えば、トラスツズマブ及びペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、ならびにラパチニブなどのＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤は、生存期間を改善することが示されており、乳癌及び胃癌を含むＨＥＲ２陽性癌の標的療法として使用されている。
抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、リンカー及び細胞傷害性剤ペイロードを含むＡＤＣもまた、ＨＥＲ２陽性悪性腫瘍の標的療法として採用されている。トラスツズマブエムタンシン（Ｔ‐ＤＭ１）は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体であるトラスツズマブとチューブリン重合阻害剤であるＤＭ１をコンジュゲートさせたものからなり、ＨＥＲ２陽性乳癌の治療に既に使用されている。その第ＩＩＩ相臨床試験（ＥＭＩＬＩＡ試験）において、Ｔ‐ＤＭ１は、ＨＥＲ２陽性乳癌患者の生存期間及び生活の質を改善することが確認された。更に、４４％の患者がＴ‐ＤＭ１治療に反応した。しかしながら、他の症例ではその効果は限定的であり、最終的には全ての患者にＴ－ＤＭ１耐性が生じた。ＨＥＲ２陽性癌患者の治療を改善するために、この限界の根底にある機序の理解を深める必要がある。
トラスツズマブデルクステカン（ＤＳ－８２０１ａ）は、強力なトポイソメラーゼＩ阻害剤であるエキサテカン誘導体（ＤＸ－８９５１誘導体、ＤＸｄ）と新規リンカー－ペイロード系を使用して調製された、別のＨＥＲ２標的ＡＤＣである。これは、Ｔ－ＤＭ１非感受性患者に由来する異種移植モデルに対して、ＨＥＲ２発現の高低にかかわらず有効であった。ＤＳ－８２０１ａは、膜透過性の高いペイロードにより、強力なバイスタンダー効果を有し、Ｔ－ＤＭ１に反応しないＨＥＲ２不均一性を有する腫瘍の治療に有益である。ＤＳ－８２０１ａは、最近、切除不能または治療歴のある転移性ＨＥＲ２陽性乳癌に対して、ＦＤＡに承認された。この承認は、他のＨＥＲ２療法による治療を以前に受けたことがあるＨＥＲ２陽性乳癌患者を含めた第ＩＩ相ＤＥＳＴＩＮＹ－Ｂｒｅａｓｔ０１試験を根拠としている。全体として、６０．９％患者がこの新規ＨＥＲ２ ＡＤＣに応答した。ＤＳ－８２０１ａは、乳癌以外にも、肺癌及び胃癌などの他のＨＥＲ２陽性癌種でも良好な臨床効果を示している。持続的応答が高い割合で観察されているが、ＤＳ－８２０１ａによる全生存期間に対する臨床上の利益は、まだ明らかにされていない。
本明細書で使用される「ＨＥＲ２」という用語は、ヒトＨＥＲ２（ｈＨＥＲ２）、ｈＨＥＲ２のバリアント、アイソフォーム、及び種ホモログ、ならびにｈＨＥＲ２と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。様々な実施形態において、本明細書で使用されるｈＨＥＲ２ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１００５８６２（配列番号１）に記載されるアミノ酸配列を含み得る：
ＭＫＬＲＬＰＡＳＰＥＴＨＬＤＭＬＲＨＬＹＱＧＣＱＶＶＱＧＮＬＥＬＴＹＬＰＴＮＡＳＬＳＦＬＱＤＩＱＥＶＱＧＹＶＬＩＡＨＮＱＶＲＱＶＰＬＱＲＬＲＩＶＲＧＴＱＬＦＥＤＮＹＡＬＡＶＬＤＮＧＤＰＬＮＮＴＴＰＶＴＧＡＳＰＧＧＬＲＥＬＱＬＲＳＬＴＥＩＬＫＧＧＶＬＩＱＲＮＰＱＬＣＹＱＤＴＩＬＷＫＤＩＦＨＫＮＮＱＬＡＬＴＬＩＤＴＮＲＳＲＡＣＨＰＣＳＰＭＣＫＧＳＲＣＷＧＥＳＳＥＤＣＱＳＬＴＲＴＶＣＡＧＧＣＡＲＣＫＧＰＬＰＴＤＣＣＨＥＱＣＡＡＧＣＴＧＰＫＨＳＤＣＬＡＣＬＨＦＮＨＳＧＩＣＥＬＨＣＰＡＬＶＴＹＮＴＤＴＦＥＳＭＰＮＰＥＧＲＹＴＦＧＡＳＣＶＴＡＣＰＹＮＹＬＳＴＤＶＧＳＣＴＬＶＣＰＬＨＮＱＥＶＴＡＥＤＧＴＱＲＣＥＫＣＳＫＰＣＡＲＶＣＹＧＬＧＭＥＨＬＲＥＶＲＡＶＴＳＡＮＩＱＥＦＡＧＣＫＫＩＦＧＳＬＡＦＬＰＥＳＦＤＧＤＰＡＳＮＴＡＰＬＱＰＥＱＬＱＶＦＥＴＬＥＥＩＴＧＹＬＹＩＳＡＷＰＤＳＬＰＤＬＳＶＦＱＮＬＱＶＩＲＧＲＩＬＨＮＧＡＹＳＬＴＬＱＧＬＧＩＳＷＬＧＬＲＳＬＲＥＬＧＳＧＬＡＬＩＨＨＮＴＨＬＣＦＶＨＴＶＰＷＤＱＬＦＲＮＰＨＱＡＬＬＨＴＡＮＲＰＥＤＥＣＶＧＥＧＬＡＣＨＱＬＣＡＲＧＨＣＷＧＰＧＰＴＱＣＶＮＣＳＱＦＬＲＧＱＥＣＶＥＥＣＲＶＬＱＧＬＰＲＥＹＶＮＡＲＨＣＬＰＣＨＰＥＣＱＰＱＮＧＳＶＴＣＦＧＰＥＡＤＱＣＶＡＣＡＨＹＫＤＰＰＦＣＶＡＲＣＰＳＧＶＫＰＤＬＳＹＭＰＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰＣＰＩＮＣＴＨＳＣＶＤＬＤＤＫＧＣＰＡＥＱＲＡＳＰＬＴＳＩＩＳＡＶＶＧＩＬＬＶＶＶＬＧＶＶＦＧＩＬＩＫＲＲＱＱＫＩＲＫＹＴＭＲＲＬＬＱＥＴＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＡＭＰＮＱＡＱＭＲＩＬＫＥＴＥＬＲＫＶＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＩＷＩＰＤＧＥＮＶＫＩＰＶＡＩＫＶＬＲＥＮＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＧＶＧＳＰＹＶＳＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＶＴＱＬＭＰＹＧＣＬＬＤＨＶＲＥＮＲＧＲＬＧＳＱＤＬＬＮＷＣＭＱＩＡＫＧＭＳＹＬＥＤＶＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＳＰＮＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＲＬＬＤＩＤＥＴＥＹＨＡＤＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＲＲＲＦＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＡＫＰＹＤＧＩＰＡＲＥＩＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＳＥＣＲＰＲＦＲＥＬＶＳＥＦＳＲＭＡＲＤＰＱＲＦＶＶＩＱＮＥＤＬＧＰＡＳＰＬＤＳＴＦＹＲＳＬＬＥＤＤＤＭＧＤＬＶＤＡＥＥＹＬＶＰＱＱＧＦＦＣＰＤＰＡＰＧＡＧＧＭＶＨＨＲＨＲＳＳＳＴＲＳＧＧＧＤＬＴＬＧＬＥＰＳＥＥＥＡＰＲＳＰＬＡＰＳＥＧＡＧＳＤＶＦＤＧＤＬＧＭＧＡＡＫＧＬＱＳＬＰＴＨＤＰＳＰＬＱＲＹＳＥＤＰＴＶＰＬＰＳＥＴＤＧＹＶＡＰＬＴＣＳＰＱＰＥＹＶＮＱＰＤＶＲＰＱＰＰＳＰＲＥＧＰＬＰＡＡＲＰＡＧＡＴＬＥＲＰＫＴＬＳＰＧＫＮＧＶＶＫＤＶＦＡＦＧＧＡＶＥＮＰＥＹＬＴＰＱＧＧＡＡＰＱＰＨＰＰＰＡＦＳＰＡＦＤＮＬＹＹＷＤＱＤＰＰＥＲＧＡＰＰＳＴＦＫＧＴＰＴＡＥＮＰＥＹＬＧＬＤＶＰＶ（配列番号１）
様々な実施形態において、ＨＥＲ２ポリペプチドは、配列番号１のヒトＨＥＲ２配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性が観察される共有するアミノ酸配列を含む。ＨＥＲ２のポリペプチドバリアントは、配列番号１の２２３のアミノ酸配列の所定の位置に存在するアミノ酸残基の付加、欠失、または置換を参照して、本明細書に記載され得る。したがって、例えば、「Ｐ２１Ｗ」という用語は、配列番号１の位置２１にある「Ｐ」（標準的な一文字コードにおいてプロリン）残基が、「Ｗ」（標準的な一文字コードにおいてトリプトファン）で置換されていることを示す。
Ｔｒｏｐ－２抗原
栄養膜細胞表面抗原－２（Ｔｒｏｐ－２）（腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２（ＴＡＣＳＴＤ１）、膜成分染色体１表面マーカー１（Ｍ１Ｓ１）、消化管抗原７３３－１（ＧＡ７３３－１）、及び上皮糖タンパク質－１（ＥＧＰ－１）としても知られている）は、少なくとも２つのＩ型膜タンパク質を含むＴＡＣＳＴＤファミリーに属する。Ｔｒｏｐ－２は、少なくとも２つのＩ型膜タンパク質を含むＴＡＣＳＴＤファミリーに属する。Ｔｒｏｐ－２は、細胞内カルシウムシグナルを伝達し、細胞表面受容体として機能する。Ｔｒｏｐ－２は、３２３個のアミノ酸を有し、１つの大きい細胞外ドメイン、１つの膜貫通ドメイン、及び短い細胞質尾部から構成される。
栄養膜細胞の細胞表面マーカーとして最初に発見されたが、その後の研究で、Ｔｒｏｐ－２は、鼻、乳房、皮膚、及び気管支上皮細胞などの限られた正常組織にも低レベルで発現していることが明らかになった。更なる研究では、口腔癌、頭頸部癌、甲状腺癌、肺癌、乳癌、胃癌、大腸癌、膵臓癌、腎臓癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮体癌、子宮頸癌、神経膠腫などの多くの異なるがん種で、Ｔｒｏｐ－２が過剰発現していることが示唆されている。この発現の上昇は、がん患者の疾患進行及び予後不良と関連している。がん細胞におけるＴｒｏｐ－２の過剰発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で腫瘍の成長を刺激することが示されている。同様に、ｓｉＲＮＡでＴｒｏｐ－２の発現を阻害すると、腫瘍細胞の増殖が抑制されることが示されている。腫瘍成長に重要であることに加えて、Ｔｒｏｐ－２は、転移にも関与している。Ｔｒｏｐ－２は、ＩＧＦ、ＥｒｂＢ３、ＥＲＫ、ＭＡＰＫ、Ｎｏｔｃｈ－Ｗｎｔ、及びＲａｆ経路を含む、少なくとも６つの主要なシグナル伝達経路に関与している。しかしながら、これらの経路におけるその正確な役割、ならびに様々ながん及び様々な治療アプローチにおいてどの下流経路が重要であるかは、まだ解明されていない。
腫瘍と正常組織における発現の差、腫瘍の成長及び転移を促進する役割、ならびに予後に対する負の値に基づき、Ｔｒｏｐ－２は、有望な診断／治療標的として提案されている。Ｔｒｏｐ－２シグナル伝達の遮断は、がんの治療手段となり得る。Ｔｒｏｐ－２を標的とした抗原結合断片（Ｆａｂ）は、アポトーシスを誘導し、乳癌細胞の増殖に対して抑制効果があることが示されている。いくつかの抗Ｔｒｏｐ－２抗体が開発されているが、ネイキッド抗体として治療に使用できるものはなかった。Ｔｒｏｐ－２を標的とした抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が最近開発されている。サシツズマブゴビテカン（ＩＭＭＵ－１３２）は、ヒト化抗Ｔｒｏｐ－２抗体であるｈＲＳ７とイリノテカンの活性代謝産物であるＳＮ－３８のコンジュゲートである。開発された後、多くの前臨床試験で試験され、広範囲の腫瘍成長を抑制することができた。非小細胞肺癌、小細胞肺癌、転移性トリプルネガティブ乳癌、及び膵臓癌患者における初期段階の臨床試験においても、有望な有効性を示した。第ＩＩ相ＩＭＭＵ－１３２－０１臨床試験において、ＩＭＭＵ－１３２は、前治療ラインが奏効しなかった転移性トリプルネガティブ乳癌患者で３３．３％の全奏効率を示した。奏効期間の中央値は、７．７ヶ月であった。この結果に基づき、ＩＭＭＵ－１３２はＦＤＡが承認した最初の抗Ｔｒｏｐ－２ＡＤＣとなった。この抗Ｔｒｏｐ－２－ＡＤＣは、良好な臨床効果を示しているが、Ｔｒｏｐ－２活性に関連するがん及び他の疾患のために、抗Ｔｒｏｐ－２抗体を使用した治療剤の改善がまだ必要とされている。
本明細書で使用される「Ｔｒｏｐ－２」という用語は、ヒトＴｒｏｐ－２（ｈＴｒｏｐ－２）、ｈＴｒｏｐ－２のバリアント、アイソフォーム、及び種ホモログ、ならびにｈＴｒｏｐ－２と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。様々な実施形態において、本明細書で使用されるｈＴｒｏｐ－２ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２３４４．２（配列番号２）に記載されるアミノ酸配列を含み得る：
ＭＡＲＧＰＧＬＡＰＰＰＬＲＬＰＬＬＬＬＶＬＡＡＶＴＧＨＴＡＡＱＤＮＣＴＣＰＴＮＫＭＴＶＣＳＰＤＧＰＧＧＲＣＱＣＡＬＧＳＧＭＡＶＤＣＳＴＬＴＳＫＣＬＬＬＫＡＲＭＳＡＰＫＮＡＲＴＬＶＲＰＳＥＨＡＬＶＤＮＤＧＬＹＤＰＤＣＤＰＥＧＲＦＫＡＲＱＣＮＱＴＳＶＣＷＣＶＮＳＶＧＶＲＲＴＤＫＧＤＬＳＬＲＣＤＥＬＶＲＴＨＨＩＬＩＤＬＲＨＲＰＴＡＧＡＦＮＨＳＤＬＤＡＥＬＲＲＬＦＲＥＲＹＲＬＨＰＫＦＶＡＡＶＨＹＥＱＰＴＩＱＩＥＬＲＱＮＴＳＱＫＡＡＧＤＶＤＩＧＤＡＡＹＹＦＥＲＤＩＫＧＥＳＬＦＱＧＲＧＧＬＤＬＲＶＲＧＥＰＬＱＶＥＲＴＬＩＹＹＬＤＥＩＰＰＫＦＳＭＫＲＬＴＡＧＬＩＡＶＩＶＶ ＶＶＶＡＬＶＡＧＭＡＶＬＶＩＴＮＲＲＫＳ ＧＫＹＫＫＶＥＩＫＥＬＧＥＬＲＫＥＰＳＬ（配列番号２）
様々な実施形態において、Ｔｒｏｐ－２ポリペプチドは、配列番号２のヒトＴｒｏｐ－２配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の相同性が観察される共有するアミノ酸配列を含む。Ｔｒｏｐ－２のポリペプチドバリアントは、配列番号２の２２３のアミノ酸配列の所定の位置に存在するアミノ酸残基の付加、欠失、または置換を参照して、本明細書に記載され得る。したがって、例えば、「Ｐ２１Ｗ」という用語は、配列番号２の位置２１にある「Ｐ」（標準的な一文字コードにおいてプロリン）残基が、「Ｗ」（標準的な一文字コードにおいてトリプトファン）で置換されていることを示す。
抗体
抗体は、様々な方法で操作することができる。抗体は、一本鎖抗体（小モジュラー免疫薬またはＳＭＩＰｓ（商標）を含む）、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片などとして作製することができ、ヒト化、キメラ化、脱免疫化、または完全ヒト化することができる。数多くの公開物に、多くの種類の抗体及びそのような抗体の操作方法が記載されている。例えば、米国特許第６，３５５，２４５号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第６，４０７，２１３号；同第６，５４８，６４０号；同第５，５６５，３３２号；同第５，２２５，５３９号；同第６，１０３，８８９号；及び同第５，２６０，２０３号を参照されたい。
ヒトＴｒｏｐ－２に結合する新規抗体を作製する方法は、当業者に知られている。本発明者らは、ヒトＴｒｏｐ－２に結合する新規抗体を作製した。簡潔に述べると、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合するモノクローナル抗体を作製するための方法は、検出可能な免疫応答を刺激するのに有効な量のＴｒｏｐ－２を含む免疫原性組成物をマウスに投与することと、マウスから抗体産生細胞（例えば、脾臓の細胞）を得、抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを得ることと、抗体産生ハイブリドーマを試験してＴｒｏｐ－２に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを特定することとを含み得る。ハイブリドーマが得られたら、細胞培養で、任意選択により、ハイブリドーマ由来細胞がＴｒｏｐ－２に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件で、増殖を行うことができる。モノクローナル抗体は、細胞培養物から精製され得る。キメラ抗体は、組み換えＤＮＡ技術によって生産される。ヒト化抗体を調製するには、ＣＤＲグラフティング及び復帰突然変異法が使用された。
必要な特異性を有する抗体を産生または単離する他の好適な方法も使用することができ、例えば、組み換え抗体をライブラリーから選択する方法、またはヒト抗体の全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）の免疫化に基づくものが含まれる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１－２５５５，１９９３；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５－２５８，１９９３；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，５４５，８０６号；Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，５４５，８０７号を参照されたい。
例示的な構築物
本出願は、ＨＥＲ２（例えば、ヒトＨＥＲ２）に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２（例えば、ヒトＴｒｏｐ－２）に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、構築物を提供する。
いくつかの実施形態において、本出願は、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含むヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含むヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む構築物を提供し、ここで、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号７、５５、または５６に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－１と、２）配列番号８または５７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ及び全長抗体は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、構築物は、ａ）配列番号１４、６０、もしくは６２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアント、ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、本出願は、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含むヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含むヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む構築物を提供し、ここで、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号７、５５、または５６に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－１と、２）配列番号８または５７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ及び全長抗体は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、構築物は、ａ）配列番号１６、５９、もしくは６１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアント、ｂ）配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、本出願は、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含むヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含むヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む構築物を提供し、ここで、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号７、５５、または５６に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－１と、２）配列番号８または５７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号１０または５８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ及び全長抗体は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、構築物は、ａ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアント、ｂ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、本出願は、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含むヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含むヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む構築物を提供し、ここで、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号７、５５、または５６に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－１と、２）配列番号８または５７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号１０または５８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ及び全長抗体は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、構築物は、ａ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアント、ｂ）配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む。
いくつかの実施形態において、本出願は、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含むヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含むヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む構築物を提供し、ここで、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、１）配列番号７、５５、または５６に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－１と、２）配列番号８または５７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、第２の抗原結合ドメインは、１）配列番号１０または５８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、第１の抗原結合ドメインは、全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ及び全長抗体は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むリンカー）により融合される。いくつかの実施形態において、構築物は、ａ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアント、ｂ）配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、または少なくとも（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ断片は、任意選択によりＩｇＧ定常ドメイン（例えば、配列番号１２を含む）を含む重鎖定常ドメインと、任意選択によりカッパ定常領域またはラムダ定常領域（例えば、配列番号１３を含む）を含む軽鎖定常ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、構築物は、二重特異性抗体またはその結合断片であるか、またはそれらを含み、任意選択により、二重特異性抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、構築物は、式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｎを有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、式中、Ａｂは、前記二重特異性抗体またはその結合断片であり、Ｌは、リンカーまたは直接結合であり、Ｄは、治療剤であり、ｎは、１～１０の整数である。
二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合分子
一態様において、本出願は、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体、またはその抗原結合断片を含む構築物を提供する。本出願の抗体またはその抗原結合断片は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体または受容体に対するリガンド）に誘導体化または連結させて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成することができる。本出願の抗体は、実際には、複数の他の機能性分子に誘導体化または連結させて、２つを超える異なる結合部位及び／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成することができ、そのような多重特異性分子もまた、本明細書で使用される「二重特異性分子」という用語に包含されることが意図される。本出願の二重特異性分子を作製するために、本出願の抗体は、二重特異性分子が調製されるように別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合模倣物などの１つ以上の他の結合分子に機能的に連結することができる（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合または他の方法によって）。様々な実施形態において、本出願は、ＦｃγＲまたはＦｃαＲを発現するエフェクター細胞（例えば、単球、マクロファージまたは多形核細胞（ＰＭＮ））とＴｒｏｐ－２を発現する標的細胞の両方に結合することが可能な二重特異性分子を含む。このような実施形態において、二重特異性分子は、Ｔｒｏｐ－２発現細胞をエフェクター細胞に標的化し、Ｆｃ受容体を媒介したエフェクター細胞活性、例えば、Ｔｒｏｐ－２発現細胞の貪食、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、サイトカイン放出、またはスーパーオキシドアニオンの産生を誘発する。本出願の二重特異性分子を調製する方法は、当該技術分野においてよく知られている。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメイン及び第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＨＥＲ２抗体結合部位に特異的に結合し、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、Ｔｒｏｐ－２抗体結合部位に特異的に結合する。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメイン及び第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、Ｔｒｏｐ－２抗体結合部位に特異的に結合し、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＨＥＲ２抗体結合部位に結合する。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、（ａ）ＶＨ及びＶＬ、（ｂ）重鎖定常領域もしくはその断片を更に含むＶＨ、及び軽鎖定常領域（ＬＣ）もしくはその断片を含むＶＬ、（ｃ）一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、（ｄ）ダイアボディ、（ｅ）ミニボディ、（ｆ）Ｆ（ａｂ’）２、ならびに（ｇ）Ｆ（ａｂ）を含むか、またはそれらからなる。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片を含み、第２の抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含む。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１の抗原結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ抗体断片を含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、重鎖定常領域またはその断片を更に含むＶＨ及び軽鎖定常領域またはその断片を更に含むＶＬを含む。様々な実施形態において、重鎖定常領域またはその断片は、ＩｇＧ定常領域である。様々な実施形態において、ＩｇＧ定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１定常領域である。様々な実施形態において、ＬＣ定常領域は、カッパ定常領域である。様々な実施形態において、軽鎖定常領域は、ラムダ定常領域である。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含むＦｃドメインを含み得る重鎖を含む。様々な実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。様々な実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、天然型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ヒト化抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、ヒト抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、キメラ抗体である。様々な実施形態において、第１または第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、親和性最適化抗体である。様々な実施形態において、ヒト抗体は、トランスジェニックマウスで発現される（例えば、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，“Ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ，” Ａｒｃｈ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｅｘｐｅｒ．４９：２０３－２０８，２００１を参照されたく、その全体が参照により本明細書に援用される）。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のカルボキシ末端に共有結合される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のカルボキシ末端との間に介在するリンカーを含む。様々な実施形態において、ペプチドリンカーＩＩは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のアミノ末端に共有結合される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインの重鎖のアミノ末端との間に介在するリンカーを含む。様々な実施形態において、ペプチドリンカーＩＩは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
本明細書で開示されるｓｃＦｖは、天然であるかどうかにかかわらず、任意の適切な供給源から入手可能であるか、もしくはそれによって産生され、または本開示のｓｃＦｖの必要な結合特異性を保持する限り、組み換えｓｃＦｖ、合成ｓｃＦｖ、半合成ｓｃＦｖ、誘導体化ｓｃＦｖ、発酵最適化ｓｃＦｖ、融合タンパク質もしくはその同等物、変異体及び誘導体であってもよい。これらは、アミノ酸置換を有するか、またはアミノ酸官能基に糖もしくは他の分子が結合された、結合特異性を持つｓｃＦｖを含む。本明細書でｓｃＦｖに関して使用される「誘導体」または「誘導体化」という用語は、ｓｃＦｖの化学修飾を含む。そのような修飾の例示は、アルキル、アシル、またはアミノ基による水素の置き換えであり得る。
リンカー
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される構築物は、２つの部分またはドメイン間（例えば、Ｔｒｏｐ２に特異的に結合するｓｃＦｖとハーセプチンの全長抗体との間、例えば、ハーセプチンｓｃＦｖとＴｒｏｐ２に結合する全長抗体との間、例えば、ｓｃＦｖ中のＶＨまたはＶＬの間）に１つ以上のリンカーを含む。構築物に使用されるリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度、及び／または他の特性は、限定するものではないが、１つ以上の特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性またはアビディティを含む、特性に何らかの影響を与え得る。例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないように、より長いリンカーを選択することができる。いくつかの実施形態において、リンカー（ペプチドリンカーなど）は、柔軟な残基（例えば、グリシン及びセリン）を含むため、隣接するドメインは互いに対して自由に動ける。例えば、グリシン－セリンダブレットは、好適なペプチドリンカーであり得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、非ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、非切断性リンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、切断性リンカーである。
リンカーに関する他の考慮事項としては、溶解性、脂溶性、親水性、疎水性、安定性（大抵安定であるが予定される分解もある）、剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の調節、ミセルまたはリポソームに組み込まれる能力などの、結果として得られる化合物の物理的または薬物動態学的特性に対する影響が含まれる。
ペプチドリンカー
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列、または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列が、リンカーとして使用され得る。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。
ペプチドリンカーは、任意の好適な長さのものであり得る。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００またはそれ以上のうちのいずれかのアミノ酸長である。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５またはそれ以下のうちのいずれかのアミノ酸長である。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、または約１アミノ酸～約１００アミノ酸のいずれかである。
そのようなペプチドリンカーの極めて重要な技術的特徴は、当該ペプチドリンカーがいかなる重合活性も持たないことである。二次構造の促進がないことを備えるペプチドリンカーの特徴は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）３７，９２６６－９２７３），Ｃｈｅａｄｌｅ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２９，２１－３０）及びＲａａｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｌｏｗ（ＦＡＳＥＢ（１９９５）９（１），７３－８０）に記載されている。「ペプチドリンカー」の文脈において特に好ましいアミノ酸は、Ｇｌｙである。更に、いかなる二次構造も促進しないペプチドリンカーも好ましい。ドメイン同士の連結は、例えば、遺伝子工学によって提供され得る。融合され作動可能に連結された二重特異性単鎖構築物を調製し、哺乳動物細胞または細菌において発現させるための方法は、当該技術分野においてよく知られている（例えば、ＷＯ９９／５４４４０、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．１９８９ ａｎｄ １９９４またはＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）。
ペプチドリンカーは、プロテアーゼ、特にマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）によって切断されない安定なリンカーであり得る。
リンカーは、フレキシブルリンカーであり得る。例示的なフレキシブルリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ（配列番号４８）、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ（配列番号４９）、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号５０）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５１）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５２）を含み、式中、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野において知られている他のフレキシブルリンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン－セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、成分間の中性テザーとして機能することが可能であり得る。グリシンは、Φ－Ψ空間をアラニンよりも極めて多く利用でき、より長い側鎖を持つ残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１ １７３－１４２（１９９２）を参照されたい）。当業者であれば、抗体融合タンパク質の設計には、所望の抗体融合タンパク質構造を提供するために、リンカーが、柔軟なリンカー部分だけでなく、柔軟性の低い構造を付与する１つ以上の部分を含むことができるように、完全にまたは部分的に柔軟性のあるリンカーを含めることができることを認識するであろう。
更に、例示的なリンカーはまた、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５１）などのアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～８の整数であり、例えば、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号４６）、（ＧＧＧＧＳ）４（配列番号４７）、または（ＧＧＧＧＳ）６（配列番号５３）である。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳ）ｎ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～３の整数である。
非ペプチドリンカー
２つの部分のカップリング、例えば、本明細書に記載される構築物において、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２へのそれぞれの結合は、両成分がそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応によって達成することができる。この連結には、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、錯化など、多くの化学的メカニズムが含まれ得る。いくつかの実施形態において、結合は、共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合または外部の架橋分子の組み込みのいずれかによって達成することができる。この文脈におけるタンパク質分子のカップリングには、多くの二価または多価連結剤が有用であり得る。例えば、代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン及びヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を挙げることができる。この列挙は、当該技術分野で知られている様々なクラスのカップリング剤を網羅することを意図したものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤を例示したものである（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；及びＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照されたい）。
本出願に適用することができるリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用について記載されているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）を参照されたい。いくつかの実施形態において、本明細書で使用される非ペプチドリンカーには、（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノ－プロピル）カルボジイミド塩酸塩、（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－ジチオ）－トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．、Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）、（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノアート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．、カタログ番号２１６５１Ｇ）、（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピアンアミド］ヘキサノアート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．カタログ番号２１６５－Ｇ）、及び（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートされたスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．、カタログ番号２４５１０）が含まれる。
上に記載されるリンカーは、異なる属性を有する成分を含有するため、物理化学的特性が異なる二重特異性抗体になり得る。例えば、アルキルカルボキシラートのスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシラートのスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホＮＨＳエステルよりも溶解性が低い。更に、リンカーＳＭＰＴは、立体障害のあるジスルフィド結合を含有し、安定性が増加した抗体融合タンパク質を形成することができる。ジスルフィド連結は、一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏで切断されるので、他の連結よりも安定性が低く、その結果、利用可能な抗体融合タンパク質が少なくなる。スルホ－ＮＨＳは、特に、カルボジイミドカップリングの安定性を高めることができる。カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ－ＮＨＳとともに使用すると、カルボジイミドカップリング反応単独よりも加水分解に対してより耐性があるエステルが形成される。
例示的な実施形態
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）
を含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＭＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＮＷＤＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４）
及び配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＳＷＡＳＳＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
（配列番号５）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）
及び配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号１１）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＳＷＡＳＳＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＭＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＮＷＤＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６）
を含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）
及び配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖ：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＤＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号９）
を含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、第２は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＭＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＮＷＤＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
及び配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＳＷＡＳＳＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＭＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＷＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＴＥＫＴＴＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＩ．ＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＲＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２）
及び配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＩＩＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＳＷＡＳＳＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＳＹＧＶＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＭＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＮＷＤＧＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
（配列番号１６）
及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１７）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、ＨＥＲ２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＤＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２０）
及び配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２１）を含む。
本出願の様々な実施形態において、単離された二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＨＥＲ２に特異的に結合する第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインと、Ｔｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインとを含み、ここで、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＤＩＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８）
及び配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９）
を含み、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗体は、ｓｃＦｖドメイン、重鎖及び軽鎖を含む抗体であり、ｓｃＦｖドメインは、配列番号３、６、９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含み、重鎖は、配列番号１４、１６、１８、２０、２２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号１５、１７，１９，２１、２３に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含む。
様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのカルボキシ末端に共有結合される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのカルボキシ末端との間に介在する少なくとも１つのリンカーを含む。様々な実施形態において、１つのリンカーが、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのカルボキシ末端との間に介在する。
様々な実施形態において、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのアミノ末端に共有結合的に連結される。様々な実施形態において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのアミノ末端との間に介在する少なくとも１つのリンカーを含む。様々な実施形態において、１つのリンカーが、第２の免疫グロブリン抗原結合ドメインと第１の免疫グロブリン抗原結合ドメインのＨＣのアミノ末端との間に介在する。
本開示の様々な実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号１４、１６、１８、２０、及び２２のいずれかに記載される重鎖配列を含む抗体と同じか、またはそれより高い抗原結合親和性を有する抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１４、１６、１８、２０、及び２２のいずれかに記載される重鎖配列を含む抗体と同じエピトープに結合するＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１４、１６、１８、２０、及び２２のいずれかに記載される重鎖配列を含む抗体と競合する抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体である。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１４、１６、１８、２０、及び２２のいずれかに記載される軽鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つまたは３つ）のＣＤＲを含む抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。
本開示の様々な実施形態において、二重特異性抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれかに記載される軽鎖配列を含む抗体と同じか、またはそれより高い抗原結合親和性を有する抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれかに記載される軽鎖配列を含む抗体と同じエピトープに結合するＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれかに記載される軽鎖配列を含む抗体と競合する抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体である。様々な実施形態において、抗体は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれかに記載される軽鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つまたは３つ）のＣＤＲを含む抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体であり得る。
本出願の二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野において知られている任意の定常領域を含み得る。軽鎖定常領域は、例えば、カッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュータイプの重鎖定常領域、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭタイプの重鎖定常領域であり得る。様々な実施形態において、軽鎖または重鎖定常領域は、天然に存在する定常領域の断片、誘導体、バリアント、または変異体である。
目的の抗体から異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を得る技術、すなわち、サブクラススイッチングが知られている。したがって、例えば、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＭ抗体から得ることができ、その逆も同様である。そのような技術により、所定の抗体（親抗体）の抗原結合特性を保持しながら、親抗体とは異なる抗体のアイソタイプまたはサブクラスに関連した生物学的特性を示す新しい抗体を調製することができる。組み換えＤＮＡ技術が採用され得る。そのような手順において、特定の抗体ポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡが採用され得る。Ｌａｎｉｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：３０３－１６，２００２も参照されたい。
本出願の抗体はまた、交差反応性の観点から記載または特定され得る。ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に対して少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、及び少なくとも５０％の同一性（当該技術分野において知られている及び本明細書に記載される方法を使用して算出される）を有する、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗体もまた本出願に含まれる。
様々な実施形態において、本出願の抗体は、一方もしくは両方の可変領域（すなわち、ＶＨ及び／またはＶＬ）内の１つ以上の残基を改変すること、または定常領域（複数可）内の残基を、例えば、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更するように改変することによって、操作することができる。様々な実施形態において、抗体の可変領域は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む公開ＤＮＡデータベースまたは公開文献から得ることができるフレームワーク配列を使用して、ＣＤＲグラフティングを実施することによって改変される（例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８，１９９２；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６，１９９４；それぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に援用される）。様々な実施形態において、抗体は、結合親和性の改善及び／または免疫原性の低減をもたらす変異（複数可）をＶＨ及び／またはＶＬ中に導入するために、部位特異的変異導入またはＰＣＲによる変異導入を使用して改変され得る。様々な実施形態において、抗体は、抗体の血清半減期、補体の固定、Ｆｃ受容体結合、及び／または抗原依存性細胞傷害を変更する目的で、Ｆｃ領域に改変がなされ得る。様々な実施形態において、抗体は、抗体のグリコシル化を修飾する目的で改変され得る。本明細書に記載される改変のそれぞれを行うための方法及びその他は、当業者によく知られている。
二重特異性抗体の抗原結合の特性評価
本出願の二重特異性抗体は、細胞表面上に発現されたヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２への結合について、例えば、フローサイトメトリーによって試験され得る。簡潔に述べると、抗体をＦＡＣＳ緩衝液中の細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートすることができる。インキュベーション後、細胞を洗浄して未結合の抗体を除去する。次いで、細胞を解離させ、蛍光標識二次抗体を用いて氷上で３０分間染色した後、Ｂａｃｋｍａｎフローサイトメトリーシステムを使用して解析する。Ｂｅｃｋｍａｎフローサイトメトリーによって、蛍光強度及び細胞結合パーセンテージを解析することができる。
医薬組成物
別の態様において、本出願は、上に記載される抗体またはその抗原結合断片を含む、医薬組成物を提供する。したがって、本出願の医薬組成物、方法及び使用は、以下に詳述されるように、他の活性剤との組み合わせ（共投与）の実施形態も包含する。
一般に、本出願の抗体、またはその抗体の抗原結合断片は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤（複数可）と合わせた製剤として投与するのに好適である。「賦形剤」という用語は、本出願の化合物（複数可）以外の任意の成分を記載するために本明細書で使用される。賦形剤（複数可）の選択は、特定の投与方式、溶解度及び安定性に対する賦形剤の影響、ならびに剤形の性質などの因子に大きく左右される。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」には、生理学的に適合性である、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に許容される賦形剤のいくつかの例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組み合わせである。多くの場合、等張剤、例えば、砂糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなど）を組成物中に含むことが好ましい。薬学的に許容される物質の更なる例は、湿潤剤、または抗体の貯蔵寿命もしくは有効性を高める湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤もしくは緩衝液などの少量の補助物質である。本出願の医薬組成物及びその調製方法は、当業者には容易に明らかであろう。そのような組成物及びその調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見ることができる。医薬組成物は、好ましくは、ＧＭＰ条件下で製造される。
本出願の医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、または複数の単一単位用量として、調製、梱包、または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、規定量の有効成分を含む医薬組成物の個々の量である。有効成分の量は、一般に、対象に投与される有効成分の投薬量または当該投薬量の簡便な分数、例えば、当該投薬量の１／２または１／３に相当する。
当該技術分野において許容されるペプチド、タンパク質または抗体を投与するための任意の方法が、本出願の抗体及び部分に好適に採用され得る。
本出願の医薬組成物は、典型的に、非経口投与に適している。本明細書で使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」は、対象の組織を物理的に破断し、組織の破断部を通して医薬組成物を投与することを特徴とする任意の投与経路を含み、したがって、一般に、血流中、筋肉中、または内臓への直接投与をもたらす。したがって、非経口投与には、組成物の注射、外科的切開を介する組成物の適用、組織貫通非外科的創傷を介する組成物の適用などによる医薬組成物の投与が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与は、限定するものではないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内、静脈内、動脈内、髄腔内、脳室内、尿道内、頭蓋内、滑液嚢内の注射または注入、及び腎臓透析注入技術を含むことが企図される。様々な実施形態は、静脈内及び皮下経路を含む。
非経口投与に好適な医薬組成物の製剤は、典型的に、一般に、有効成分を無菌水または無菌等張生理食塩水などの薬学的に許容される担体と組み合わせて含む。そのような製剤は、ボーラス投与または持続投与に好適な形態で、調製、梱包、または販売され得る。注射用製剤は、保存剤を含有するアンプルまたは多回投与容器などの単位剤形で、調製、梱包、または販売され得る。非経口投与用製剤には、懸濁剤、液剤、油性または水性ビヒクル中の乳剤、ペースト剤などが含まれるが、これらに限定されない。そのような製剤は、限定するものではないが、懸濁化剤、安定化剤、または分散剤を含む、１つ以上の追加の成分を更に含み得る。非経口投与用製剤の一実施形態において、有効成分は、好適なビヒクル（例えば、無菌パイロジェンフリー水）で再構成された後、再構成された組成物が非経口投与される、乾燥（すなわち、粉末または顆粒）形態で提供される。非経口製剤には、塩、炭水化物及び緩衝剤などの賦形剤を有し得る水溶液（好ましくは、ｐＨ３～９）が含まれ得るが、いくつかの用途では、無菌非水性溶液として、または無菌パイロジェンフリー水などの好適なビヒクルとともに使用される乾燥形態として、より好適に製剤化され得る。例示的な非経口投与形態としては、無菌水溶液中の溶液または懸濁液、例えば、プロピレングリコールまたはデキストロース水溶液が挙げられる。そのような剤形は、所望により、好適に緩衝化することができる。有用な他の非経口投与用製剤には、有効成分を微結晶形態で含むもの、またはリポソーム調製物が含まれる。非経口投与用製剤は、即時放出型及び／または放出調節型に製剤化され得る。放出調節製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出、及びプログラム放出が含まれる。
例えば、一態様において、注射用無菌溶液は、適切な溶媒中に必要な量の二重特異性抗体を、必要に応じて上述した成分の１つまたは組み合わせとともに組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を無菌ビヒクル中に組み込むことによって調製され、無菌ビヒクルは、基本的な分散媒及び上述のものから必要な他の成分を含む。注射用無菌溶液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライであり、これにより、予め無菌濾過した当該溶液から、活性成分及び任意の所望の追加成分の粉末が得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
本出願の抗体はまた、典型的に、ドライパウダー吸入器からの乾燥粉末（単独、混合物、または混合成分粒子のいずれかとして、例えば、好適な薬学的に許容される賦形剤と混合したもの）の形態で、好適な噴射剤の使用の有無にかかわらず、加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器（好ましくは、微細なミストを生成する電気流体力学を使用する噴霧器）もしくはネブライザーからのエアロゾルスプレーとして、または点鼻剤として、鼻腔内または吸入によって投与することもできる。
加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器、またはネブライザーは、一般に、例えば、活性を分散、可溶化、または放出を延長するための好適な剤、溶媒としての噴射剤（複数可）を含む、本出願の抗体の溶液または懸濁液を含有する。
乾燥粉末または懸濁製剤における使用の前に、薬品は、一般に、吸入による送達に好適なサイズ（典型的には５ミクロン未満）まで微粉化される。これは、スパイラルジェットミリング、流動床ジェットミリング、ナノ粒子を形成するための超臨界流体処理、高圧ホモジナイザー、または噴霧乾燥などの任意の適切な粉砕方法によって達成され得る。
吸入器または吹入器で使用するためのカプセル、ブリスター及びカートリッジは、本出願の化合物の粉末混合物、好適な粉末ベース及び性能調整剤を含有するように製剤化され得る。
吸入／鼻腔内投与を目的とする本出願の製剤には、メントール及びレボメントールなどの好適な香料、またはサッカリンもしくはサッカリンナトリウムなどの甘味剤を添加してもよい。
吸入／鼻腔内投与用製剤は、即時放出型及び／または放出調節型に製剤化され得る。放出調節製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出、及びプログラム放出が含まれる。
乾燥粉末吸入器及びエアロゾルの場合、投薬量単位は、定量を送達するバルブを用いることによって決定される。本出願による単位は、典型的に、本出願の抗体の定量または「ｐｕｆｆ」が投与されるようにアレンジされる。全体的な一日用量は、典型的には、単回用量で投与されてもよいし、またはより通常には、１日を通して分割用量として投与されてもよい。
本出願の抗体及び抗体部分は、経口投与用に製剤化することができる。経口投与は、化合物が胃腸管に入るように嚥下すること、及び／または化合物が口から直接血流に入る頬側、舌側、もしくは舌下投与を伴い得る。
経口投与に好適な製剤には、錠剤などの固体、半固体及び液体系；多粒子もしくはナノ粒子、液体、または粉末を含有する軟カプセル剤または硬カプセル剤；ロゼンジ剤（液体充填を含む）；チュー；ゲル；高速分散性剤形；フィルム；オビュール；スプレー；ならびに頬側／粘膜付着性パッチが含まれる。
経口使用が意図される医薬組成物は、医薬組成物の製造の当該技術分野で知られている任意の方法に従って調製され得、そのような組成物は、薬剤的に洗練され、味の良い調製物を提供するために、甘味剤からなる群から選択される１つ以上の剤を含有し得る。例えば、経口送達可能な錠剤を調製するには、抗体またはその抗原結合断片を少なくとも１つの薬学的賦形剤と混合し、既知の方法に従って固形製剤を圧縮して、胃腸管に送達するための錠剤を形成する。錠剤組成物は、典型的に、添加剤、例えば、糖もしくはセルロース担体、デンプンペーストもしくはメチルセルロースなどの結合剤、充填剤、崩壊剤、または典型的に医療調製物の製造に通常使用される他の添加剤とともに製剤化される。経口送達可能なカプセル剤を調製するには、ＤＨＥＡを少なくとも１つの薬学的賦形剤と混合し、固形製剤を胃腸管への送達に好適なカプセル容器に置く。抗体またはその抗原結合断片を含む組成物は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．１９９０（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．１８０４２）（第８９章）に記載されているように調製することができ、参照により本明細書に援用される。
様々な実施形態において、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片を、錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して含有する、経口送達可能な錠剤として製剤化される。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤、造粒剤及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム、ならびに滑沢化剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであり得る。錠剤は、コーティングされていなくてもよいし、消化管での崩壊及び吸収を遅らせ、それにより、長い期間にわたって持続作用を提供するために、既知の技術によってコーティングされてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を単独でまたはロウと一緒に利用することができる。
様々な実施形態において、医薬組成物は、抗体もしくはその抗原結合断片が、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、もしくはカオリンと混合された硬ゼラチンカプセル剤として、または抗体もしくはその抗原結合断片が、水もしくは油の媒体、例えば、落花生油、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセル剤として製剤化される。
液体製剤には、懸濁剤、液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は、軟カプセル剤または硬カプセル剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから製造される）中の充填剤として採用され得、典型的に、担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または好適な油、及び１つ以上の乳化剤、及び／または懸濁化剤を含む。液体製剤はまた、固体の再構成によって、例えば、サシェから、調製されてもよい。
治療用途
別の態様において、本出願は、対象のがんを治療するための方法であって、当該対象に、治療上有効な量（単剤療法として、または併用治療法レジメン中のいずれか）の本出願の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。そのような障害には、固形腫瘍、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む慢性または急性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿道の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、及び当該がんの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。様々な実施形態において、対象は、以前に、抗がん療法による治療に応答したが、治療を中止すると再発した（以下「再発癌」という）。様々な実施形態において、対象は、抵抗性または不応性のがんを有する。様々な実施形態において、がん性細胞は、免疫原性腫瘍（例えば、腫瘍自体を使用するワクチン接種により、腫瘍接種に対する免疫性をもたらすことができる腫瘍）である。様々な実施形態において、がんは、大腸癌（ＣＲＣ）、腎臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、及び神経膠腫からなる群から選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、及び胃癌からなる群から選択される。
様々な実施形態において、本抗体及びその抗原結合断片は、ｉｎ ｖｉｖｏでがん性細胞を直接殺傷または除去するために利用することができる。直接殺傷は、かかる治療を必要とする対象に、抗体（任意選択により細胞傷害性薬物に融合される）を投与することを伴う。様々な実施形態において、がんは、同等の組織の非がん性細胞よりも高レベルでＴｒｏｐ－２を発現するがん細胞を含む。抗体は、がん細胞上のＴｒｏｐ－２を認識するので、抗体が結合したあらゆる当該細胞は破壊される。抗体ががん性細胞の殺傷または除去に単独で使用される場合、そのような殺傷または除去は、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣなどの内因性宿主免疫機能の開始の影響を受け得る。抗体がこのように細胞を殺傷するかどうかを決定するためのアッセイは、当業者の範囲内である。
いくつかの実施形態において、がんは、Ｔｒｏｐ２陽性及び／またはＨＥＲ２陽性である。
いくつかの実施形態において、がんは、Ｔｒｏｐ２中発現もしくは高発現及び／またはＨＥＲ２中発現もしくは高発現である。
いくつかの実施形態において、がんは、Ｔｒｏｐ２低発現及び／またはＨＥＲ２低発現である。
Ｔｒｏｐ２またはＨＥＲ２の発現レベルは、例えば、対象の検体から得た腫瘍切片に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色などの好適な方法により評価することができ、Ｔｒｏｐ２及び／またはＨＥＲ２の低発現、中発現及び高発現の分類は、がんの種類及び／または当該分野で広く認められている基準、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ．２０２０ Ａｕｇ ２７；２０（１）：８１５；Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐａｔｈｏｌ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０２０ Ｊａｎ；５４（１）：３４－４４；及びＩｎａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１７ Ａｐｒ ２５；８（１７）：２８７２５－２８７３５に例示されるものに基づく。
いくつかの実施形態において、がんは、Ｃｏｌｏ２０５細胞またはＢｘＰＣ－３細胞と同等レベルのＴｒｏｐ２発現（例えば、Ｃｏｌｏ２０５またはＢｘＰＣ３におけるＴｒｏｐ２発現レベルの２５％以内または５０％以下）を有する場合、Ｔｒｏｐ２低発現である。いくつかの実施形態において、がんは、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞またはＳＫ－ＢＲ－３細胞と同等レベルのＴｒｏｐ２発現（例えば、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞またはＳＫ－ＢＲ－３細胞におけるＴｒｏｐ２発現レベルの２５％以内または５０％以下）を有する場合、Ｔｒｏｐ２高発現である。いくつかの実施形態において、がんは、Ｃｏｌｏ２０５またはＢｘＰＣ３におけるＴｒｏｐ２発現レベルの２５％、５０％、７５％、または１００％より高く、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞またはＳＫ－ＢＲ－３細胞におけるＴｒｏｐ２発現レベルよりも１００％、７５％、５０％または２５％よりも低い場合、Ｔｒｏｐ２中発現である。
いくつかの実施形態において、がんは、Ｃｏｌｏ２０５細胞と同等レベルのＨＥＲ２発現（例えば、Ｃｏｌｏ２０５におけるＨＥＲ２発現レベルの２５％以内または５０％以下）を有する場合、ＨＥＲ２低発現である。いくつかの実施形態において、がんは、ＮＣＩ－Ｎ８７またはＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞と同等レベルのＨＥＲ２発現（例えば、ＮＣＩ－Ｎ８７またはＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞におけるＨＥＲ２発現レベルの２５％以内または５０％以下）を有する場合、ＨＥＲ２中発現である。いくつかの実施形態において、がんは、ＢｘＰＣ－３細胞と同等レベルのＨＥＲ２発現（例えば、ＢｘＰＣ－３におけるＨＥＲ２発現レベルの２５％以内または５０％以下）を有する場合、ＨＥＲ２高発現である。
様々な実施形態において、本抗体及びその抗原結合断片は、がん性腫瘍細胞の成長阻害及び／または増殖を促進するために利用することができる。これらの方法は、当該対象のがん細胞の成長を、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害または防止することができる。結果として、がんが固形腫瘍である場合、調節は、固形腫瘍サイズを少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させ得る。
がん細胞増殖の阻害は、ブロモデオキシウリジン（ＢＲＤＵ）の取り込み（Ｈｏｓｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ３８，３６９，１９８６；Ｃａｍｐａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１０７：７９，１９８８；［３Ｈ］－チミジンの取り込み（Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：１３９５－４０３，１９９６；Ｊｅｏｕｎｇ，Ｊ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１８３６７－７３，１９９５；Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ色素（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌより入手可能）（Ｖｏｙｔｉｋ－Ｈａｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ａｎｉｍ ３４：２３９－４６，１９９８）などのセルベースアッセイによって測定することができる。がん細胞の足場非依存的な成長は、軟寒天でのコロニー形成アッセイ、例えば、軟寒天上に形成されたがん細胞のコロニー数をカウントすることによって評価される（実施例及びＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，１９８９を参照されたい）。
対象におけるがん細胞の成長阻害は、対象、例えば、動物モデルまたはヒト対象におけるがん成長をモニタリングすることによって評価され得る。１つの例示的なモニタリング法は、造腫瘍性アッセイである。一例において、異種移植片は、既存の腫瘍または腫瘍細胞株に由来するヒト細胞を含む。腫瘍異種移植片アッセイは、当該技術分野において知られており、本明細書に記載される（例えば、Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：６０４３－６０５２，２０００を参照されたい）。別の実施形態において、造腫瘍性は、米国特許第５，６９８，４１３号に記載されている中空繊維アッセイを使用してモニタリングされ、当該特許は、その全体が参照により本明細書に援用される。
阻害のパーセンテージは、調節因子での処理下におけるがん細胞増殖、足場非依存的成長、またはがん細胞成長と、陰性対照条件下によるもの（典型的に調節因子の処理なし）を比較することによって算出される。例えば、がん細胞もしくはがん細胞コロニーの数（コロニー形成アッセイ）またはＰＲＤＵもしくは［３Ｈ］－チミジンの取り込みがＡ（調節因子での処理下）及びＣ（陰性対照条件下）である場合、阻害の割合は、（Ｃ－Ａ）／Ｃ×１００％となる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ試験での使用に利用可能なヒト腫瘍に由来する腫瘍細胞株の例としては、白血病細胞株（例えば、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＨＬ－６０（ＴＢ）、Ｋ－５６２、ＭＯＬＴ－４、ＲＰＭ１－８２２６、ＳＲ、Ｐ３８８及びＰ３８８／ＡＤＲ、Ｈ２９２、ＭＶ－４１１）；非小細胞肺癌細胞株（例えば、Ａ５４９／ＡＴＣＣ、ＥＫＶＸ、ＨＯＰ－６２、ＨＯＰ－９２、ＮＣＩ－Ｈ２２６、ＮＣＩ－Ｈ２３、ＮＣＩ－Ｈ３２２Ｍ、ＮＣＩ－Ｈ４６０、ＮＣＩ－Ｈ５２２及びＬＸＦＬ５２９）；小細胞肺癌細胞株（例えば、ＤＭＳ１１４及びＳＨＰ－７７）；結腸癌細胞株（例えば、ＣＯＬＯ２０５、ＨＣＣ－２９９８、ＨＣＴ－１１６、ＨＣＴ－１５、ＨＴ２９、ＫＭ１２、ＳＷ－６２０、ＤＬＤ－１及びＫＭ２０Ｌ２）；中枢神経系（ＣＮＳ）癌細胞株（例えば、ＳＦ－２６８、ＳＦ－２９５、ＳＦ－５３９、ＳＮＢ－１９、ＳＮＢ－７５、Ｕ２５１、ＳＮＢ－７８及びＸＦ４９８）；黒色腫細胞株（例えば、ＬＯＸ ＩＭＶＩ、ＭＡＬＭＥ－３Ｍ、Ｍ１４、ＳＫ－ＭＥＬ－２、ＳＫ－ＭＥＬ－２８、ＳＫ－ＭＥＬ－５、ＵＡＣＣ－２５７、ＵＡＣＣ－６２、ＲＰＭＩ－７９５１及びＭ１９－ＭＥＬ）；卵巣癌細胞株（例えば、ＩＧＲＯＶ１、ＯＶＣＡＲ－３、ＯＶＣＡＲ－４、ＯＶＣＡＲ－５、ＯＶＣＡＲ－８及びＳＫ－ＯＶ－３）；腎臓癌細胞株（例えば、７８６－０、Ａ４９８、ＡＣＨＮ、ＣＡＫＩ－１、ＲＸＦ ３９３、ＳＮ１２Ｃ、ＴＫ－１０、ＵＯ－３１、ＲＸＦ－６３１及びＳＮ１２Ｋ１）；前立腺癌細胞株（例えば、ＰＣ－３及びＤＵ－１４５）；乳癌細胞株（例えば、ＭＣＦ７、ＮＣＩ／ＡＤＲ－ＲＥＳ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ＡＴＣＣ、ＨＳ ５７８Ｔ、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５、ＢＴ－５４９、Ｔ－４７Ｄ及びＭＤＡ－ＭＢ－４６８）；及び甲状腺癌細胞株（例えば、ＳＫ－Ｎ－ＳＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。
別の態様において、本出願は、対象の感染症を治療するための方法であって、当該対象に、治療上有効な量（単剤療法として、または併用療法レジメン中のいずれか）の本出願の単離された抗体または抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。様々な実施形態において、対象は、病原性ウイルスによって引き起こされた感染症に罹患している。様々な実施形態において、対象は、病原性細菌によって引き起こされた感染症に罹患している。様々な実施形態において、対象は、病原性真菌によって引き起こされた感染症に罹患している。様々な実施形態において、対象は、病原性寄生生物によって引き起こされた感染症に罹患している。様々な実施形態において、対象は、従来のワクチンを使用した治療に耐性があるか、またはそれによって効果的に治療されない感染症に罹患している。
「治療上有効な量」または「治療上有効な用量」とは、治療対象の障害の症状のうちの１つ以上をある程度まで軽減する、投与される治療剤の十分な量を指す。
治療上有効な用量は、まず、細胞培養アッセイからＩＣ５０を決定することによって推定することができる。次いで、細胞培養で決定されたＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するように、動物モデルで用量を定めることができる。そのような情報を使用して、ヒトに有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中濃度は、例えば、ＨＰＬＣによって測定され得る。正確な組成、投与経路及び投薬量は、対象の状態を考慮して、個々の医師によって選択され得る。
投薬レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療的または予防的反応）をもたらすように調整することができる。例えば、単回ボーラスが投与されてもよいし、複数の分割用量（複数または反復または維持）が経時的に投与されてもよいし、治療状況の緊急性による指示に従って用量を比例的に減量または増量してもよい。投与の容易性及び投薬量の均一性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療される哺乳動物対象への単位投与量に適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。本開示の投薬量単位の仕様は、抗体の固有の特徴及び達成しようとする特定の治療または予防効果によって決定される。
したがって、当業者は、本明細書で提供される本開示に基づいて、用量及び投与レジメンが治療分野においてよく知られている方法に従って調整されることを理解するであろう。すなわち、最大耐用量を容易に決定することができ、対象に検出可能な治療上の利益をもたらす有効量も、対象に検出可能な治療上の利益をもたらすための各剤の時間的な投与要件も決定することができる。したがって、ある特定の用量及び投与レジメンが本明細書で例示されるが、これらの例は、本開示を実施する際に対象に提供され得る用量及び投与レジメンを決して限定するものではない。
投薬量の値は、緩和される状態の種類及び重症度によって異なり、単回投与または複数回投与が含まれることに留意されたい。いかなる特定の対象に関しても、特定の投薬レジメンは、個々の必要性及び組成物の投与を管理または指示する者の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであり、また、本明細書に記載される投薬量範囲は、単なる例示であり、特許請求される組成物の範囲または実施を限定することを意図しないことも更に理解されたい。更に、本開示の組成物による投薬レジメンは、疾患の種類、対象の年齢、体重、性別、病状、状態の重症度、投与経路、及び採用される特定の抗体など様々な因子に基づき得る。したがって、投薬レジメンは、大きく異なり得るが、標準的な方法を使用して定常的に決定することができる。例えば、用量は、薬物動態学的または薬力学的パラメーターに基づいて調整することができ、これらには、毒性作用などの臨床効果及び／または臨床検査値が含まれ得る。したがって、本開示は、当業者によって決定される対象内用量漸増を包含する。適切な投薬量及びレジメンの決定は、関連技術分野においてよく知られており、本明細書で開示される教示が示されれば、それらが包含されることは、当業者には理解されよう。
ヒト対象への投与の場合、本開示の抗体またはその抗原結合断片の月あたりの総用量は、むろん投与様式にもよるが、対象あたり０．５～１２００ｍｇ、対象あたり０．５～１１００ｍｇ、対象あたり０．５～１０００ｍｇ、対象あたり０．５～９００ｍｇ、対象あたり０．５～８００ｍｇ、対象あたり０．５～７００ｍｇ、対象あたり０．５～６００ｍｇ、対象あたり０．５～５００ｍｇ、対象あたり０．５～４００ｍｇ、対象あたり０．５～３００ｍｇ、対象あたり０．５～２００ｍｇ、対象あたり０．５～１００ｍｇ、対象あたり０．５～５０ｍｇ、対象あたり１～１２００ｍｇ、対象あたり１～１１００ｍｇ、対象あたり１～１０００ｍｇ、対象あたり１～９００ｍｇ、対象あたり１～８００ｍｇ、対象あたり１～７００ｍｇ、対象あたり１～６００ｍｇ、対象あたり１～５００ｍｇ、対象あたり１～４００ｍｇ、対象あたり１～３００ｍｇ、対象あたり１～２００ｍｇ、対象あたり１～１００ｍｇ、または対象あたり１～５０ｍｇの範囲であり得る。例えば、月あたりの静脈内用量は、約１～１０００ｍｇ／対象が必要とされ得る。様々な実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合断片は、対象あたり約１～２００ｍｇ、対象あたり１～１５０ｍｇまたは１～１００ｍｇ／対象で投与することができる。月あたりの総用量は、単回用量または分割用量で投与することができ、医師の判断で、本明細書で与えられる典型的な範囲から外れてもよい。
いくつかの実施形態において、構築物は、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。いくつかの実施形態において、構築物は、マウスにおける少なくとも５ｍｇ／ｋｇの用量と同等の用量でヒトに投与される。Ｎａｉｒ，Ａ．Ｂ．，＆ Ｊａｃｏｂ，Ｓ．（２０１６）．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｄｏｓｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｎｉｍａｌｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂａｓｉｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｙ，７（２），２７を参照されたい。
数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合、治療は、状態に応じて、所望される症状の抑制が生じるまで、または十分な治療レベルが達成されるまで、例えば、疼痛が減少するまで、継続される。例示的な投与レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の初回用量の投与に続いて、約１ｍｇ／ｋｇの週１回の維持用量、または約１ｍｇ／ｋｇの隔週１回の維持用量の投与を含む。しかしながら、医師が達成しようとする薬物動態学的減衰パターンに応じて、他の投薬レジメンも有用であり得る。例えば、いくつかの実施形態において、週１～４回の投与が企図される。この治療法の経過は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。投与レジメン（使用されるＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２アンタゴニスト（複数可）を含む）は、経時的に変わってもよい。様々な実施形態において、ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２アンタゴニスト抗体の適切な投薬量は、採用される二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体（またはその組成物）、治療される頭痛（例えば、片頭痛）の種類及び重症度、当該剤が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、それまでの治療法、患者の臨床歴及び剤への反応、ならびに主治医の判断に応じて異なる。典型的に、臨床医は、所望の結果が得られる用量に達するまで、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体を投与する。用量及び／または頻度は、治療期間中に変わってもよい。
投薬量の値は、緩和される状態の種類及び重症度によって異なり得ることに留意されたい。いかなる特定の対象に関しても、特定の投薬レジメンは、個々の必要性及び組成物の投与を管理または指示する者の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであり、また、本明細書に記載される投薬量範囲は、単なる例示であり、特許請求される組成物の範囲または実施を限定することを意図しないことも更に理解されたい。
様々な実施形態において、投与される総用量は、例えば、約１～１０００μｇ／ｍｌ、約１～７５０μｇ／ｍｌ、約１～５００μｇ／ｍｌ、約１～２５０μｇ／ｍｌ、約１０～１０００μｇ／ｍｌ、約１０～７５０μｇ／ｍｌ、約１０～５００μｇ／ｍｌ、約１０～２５０μｇ／ｍｌ、約２０～１０００μｇ／ｍｌ、約２０～７５０μｇ／ｍｌ、約２０～５００μｇ／ｍｌ、約２０～２５０μｇ／ｍｌ、約３０～１０００μｇ／ｍｌ、約３０～７５０μｇ／ｍｌ、約３０～５００μｇ／ｍｌ、約３０～２５０μｇ／ｍｌの範囲の血漿中抗体濃度を達成する。
本出願の医薬組成物の毒性及び治療指数は、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％にとって致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための手順によって決定することができる。毒性と治療上有効な用量との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比で表すことができる。大きな治療指数を示す組成物が一般に好ましい。
様々な実施形態において、医薬組成物の単回または複数回投与は、対象によって必要とされる及び許容される投薬量及び頻度に応じて行われる。いずれの場合においても、組成物は、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片のうちの少なくとも１つを、対象を効果的に治療するのに十分な量で提供する必要がある。投薬は、１回の投与でもよいが、治療結果が達成されるまで、または副作用により治療法の継続が難しくなるまで、定期的に行われてもよい。
抗体またはその抗原結合断片医薬組成物の投与の投与頻度は、治療法の性質及び治療される特定の疾患に依存する。対象は、所望の治療結果が達成されるまで、毎週または毎月などの定期的な間隔で治療を受けることができる。例示的な投与頻度としては、週１回休みなし；週１回、隔週；２週間に１回；３週間に１回；休みなしで２週間弱、その後月１回；休みなしで３週間弱、その後月１回；月１回；隔月１回；３ヶ月に１回；４ヶ月に１回；５ヶ月に１回；または６ヶ月に１回、または年１回が挙げられるが、これらに限定されない。
併用療法
本明細書で使用される場合、本開示の抗体またはその抗原結合断片及び１つ以上の他の治療剤に関する「共投与」、「共投与された」及び「組み合わせて」という用語は、以下を意味し、以下を指し、以下を含むことが意図される：本開示の抗体またはその抗原結合断片と治療剤（複数可）の組み合わせを、治療を必要とする対象に同時投与することであって、かかる構成成分が単一の剤形に一緒に製剤化され、当該構成成分が当該対象に実質的に同時に放出される投与；本開示の抗体またはその抗原結合断片と治療剤（複数可）の組み合わせを、治療を必要とする対象に実質的に同時に投与することであって、かかる構成成分が互いに別々に別個の剤形に製剤化され、当該対象によって実質的に同時に服用され、当該構成成分が当該対象に実質的に同時に放出される投与；本開示の抗体またはその抗原結合断片と治療剤（複数可）の組み合わせを、治療を必要とする対象に逐次投与することであって、かかる構成成分が互いに別々に別個の剤形に製剤化され、当該対象によって各投与の間に有意な時間間隔を空けて連続的に服用され、当該構成成分が当該対象に実質的に異なる時間に放出される投与；ならびに本開示の抗体またはその抗原結合断片と治療剤（複数可）の組み合わせを、治療を必要とする対象に逐次投与することであって、かかる構成成分が単一の剤形に一緒に製剤化され、当該構成成分が制御された様式で放出され、当該対象に同時、連続、及び／または重複して同じ時間及び／または異なる時間に放出され、各部分は、同一経路または異なる経路のいずれかによって投与され得る投与。
別の態様において、本出願は、対象のがんまたは感染症を治療するために設計された併用療法であって、対象に、治療上有効な量の本出願の単離された抗体または抗原結合断片の投与と、ｂ）免疫療法、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、ワクチン接種プロトコル、及び幹細胞移植からなる群から選択される１つ以上の追加療法の実施とを含み、ここで、併用療法は、腫瘍細胞の細胞殺傷を増加させ、すなわち、一緒に行うと、単離された抗体または抗原結合断片と追加療法との間に相乗効果が存在する、併用療法に関する。
様々な実施形態において、免疫療法は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＯＸ－４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡなどの共刺激または共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト、アンタゴニスト、または遮断抗体を使用した治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を使用した治療；ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β及びＩＦＮ－γなどの生体応答調節物質の投与を伴う治療；シプリューセル－Ｔなどの治療ワクチンを使用した治療；樹状細胞ワクチン、または腫瘍抗原ペプチドワクチンを使用した治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ細胞を使用した治療；ＣＡＲ－ＮＫ細胞を使用した治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を使用した治療；養子移入抗腫瘍Ｔ細胞（ｅｘ ｖｉｖｏ拡大及び／またはＴＣＲトランスジェニック）を使用した治療；ＴＡＬＬ－１０４細胞を使用した治療；ならびにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫活性化剤を使用した治療からなる群から選択される。
従来の多種多様な化合物には、抗新生物活性があることが示されている。これらの化合物は、化学療法において、固形腫瘍の縮小、転移及び更なる成長の防止、または白血病もしくは骨髄悪性腫瘍における悪性Ｔ細胞の数の減少をもたらす医薬品として使用されている。化学療法は、様々な種類の悪性腫瘍の治療に有効であるが、多くの抗新生物化合物が望ましくない副作用を誘発する。２つ以上の異なる治療を組み合わせると、治療が相乗的に働くことから、それぞれの治療の投薬量を減らすことができ、それにより、より高い投薬量の各化合物によって引き起こされる有害な副作用を軽減できることが示されている。他の場合において、ある治療に対して不応性である悪性腫瘍は、２つ以上の異なる治療の併用療法に反応する可能性がある。
本明細書で開示される二重特異性抗体が、従来の別の抗新生物剤と同時にまたは逐次的のいずれかで組み合わせて投与される場合、かかる抗体または抗原結合断片は、抗新生物剤の治療効果を向上させるか、またはかかる抗新生物剤に対する細胞耐性を克服し得る。これにより、抗新生物剤の投薬量を減らすことができ、望ましくない副作用が軽減されたり、または抵抗性Ｔ細胞において、抗新生物剤の効果が回復する。
組み合わせによる抗腫瘍治療法に使用され得る医薬化合物には、単なる例示ではあるが、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ｂｃｇ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルヒチン、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、イロノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、チタノセンジクロリド、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが含まれる。
これらの化学療法用抗腫瘍化合物は、その作用機序によって、例えば、以下の群に分類することができる：代謝拮抗薬／抗がん剤、例えば、ピリミジン類似体（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリン類似体、葉酸アンタゴニスト及び関連阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；抗増殖性／抗有糸分裂性剤、例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビン）などの天然産物、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン及びナベルビンなどの微小管破壊剤、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド及びエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身性に代謝し、自らアスパラギンを合成する能力を持たない細胞を減らすＬ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖性／抗有糸分裂性アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、スルホン酸アルキル－ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン－ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖性／抗有糸分裂性代謝拮抗物質、例えば、葉酸類似体（メトトレキサート）；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；凝固防止剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；線維素溶解剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレベルジン）；免疫抑制（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ－４７０、ゲニステイン）及び増殖因子阻害剤（血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断剤；一酸化窒素供与剤；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤及び分化誘導座位（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルペドニゾロン、プレドニゾン、及びプレニゾロン）；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全誘導剤及びカスパーゼ活性剤；ならびにクロマチン破壊剤。
様々な実施形態において、化学療法は、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ナイトロジェンマスタード、クロラムブシル、メルファラン、シクロホスファミド、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、ベンダムスチン、シタラビン（ＣＡ）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、フロクスウリジン（５－ＦＵｄＲ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、コルヒチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ペントスタチン、クラドリビン、シタラビン、ゲムシタビン、プララトレキサート、ミトキサントロン、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、フルラダビン、イホスファミド、ヒドロキシウレアタキサン（パクリタキセル及びドキシタキセルなど）及び／またはアントラサイクリン抗生物質、ならびに限定するものではないが、ＤＡ－ＥＰＯＣＨ、ＣＨＯＰ、ＣＶＰまたはＦＯＬＦＯＸなどの剤の組み合わせからなる群から選択される化学療法剤を含む。
様々な実施形態において、低分子キナーゼ阻害剤による標的療法は、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、ＳＹＫ阻害剤（例えば、エントスプレチニブ）、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、Ｓｒｃ阻害剤、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ阻害剤、及びＡｕｒｏｒａ阻害剤（Ｄ’Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ，１４（６）：７０７－２１，２０１３を参照されたい）からなる群から選択される低分子キナーゼ阻害剤を含む。
様々な実施形態において、併用療法は、抗体またはその抗原結合断片の投与と、１つ以上の追加療法を同時に行うことを含む。様々な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片組成物及び１つ以上の追加療法は、逐次的に行われ、すなわち、抗体またはその抗原結合断片組成物は、１つ以上の追加療法の実施の前または後のいずれかに投与される。
様々な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片組成物及び１つ以上の追加療法の実施は、同時であり、すなわち、抗体またはその抗原結合断片組成物の投与期間と１つ以上の追加療法の実施は重なり合う。
様々な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片組成物の投与と１つ以上の追加療法の実施は、同時ではない。例えば、様々な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片組成物の投与は、１つ以上の追加療法が実施される前に終了する。様々な実施形態において、１つ以上の追加療法の実施は、抗体またはその抗原結合断片組成物が投与される前に終了する。
本明細書で開示される二重特異性抗体が、１つ以上の追加療法と同時にまたは逐次的のいずれかで組み合わせて投与される場合、かかる抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の追加療法の治療効果を向上させるか、または１つ以上の追加療法に対する細胞耐性を克服し得る。これにより、１つ以上の追加療法の投薬量または期間を減らすことができ、望ましくない副作用が軽減されたり、または１つ以上の追加療法の有効性が回復する。
診断用途
別の態様において、本出願は、例えば、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２関連障害を診断するために、試料中のヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２ペプチドの存在をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで検出するための方法を提供する。いくつかの方法において、これは、対照試料に加えて、試験される試料と二重特異性抗体とを、抗体とヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２との間で複合体の形成が可能な条件下で接触させることによって達成される。次いで、両試料における複合体の形成を検出し（例えば、ＥＬＩＳＡを使用）、試料間における複合体形成に統計的な有意差があれば、試験試料中にヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２抗原が存在することが示唆される。
様々な実施形態において、対象のがんを検出するまたはがんの診断を確認するための方法が提供される。方法は、対象から得た生体試料と、本出願の単離された抗体またはその抗原結合断片を接触させることと、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の試料への結合を検出することとを含む。単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の試料への結合が、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の対照試料への結合と比較して増加している場合、対象のがんの検出または対照のがんの診断の確認となる。対照は、がんでないことがわかっている対象の試料、または標準値とすることができる。試料は、限定するものではないが、生検、剖検及び病理標本の組織を含む、任意の試料であり得る。生体試料には、組織切片、例えば、組織学的な目的で採取された凍結切片も含まれる。生体試料は、血液、血清、血漿、痰、及び髄液などの体液を更に含む。
一実施形態において、血液試料などの生体試料中の血液試料などの生体試料中のＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を検出するためのキットが提供される。ポリペプチドを検出するためのキットは、典型的に、本明細書で開示される抗体のいずれかなどのＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に特異的に結合するヒト抗体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｖ断片などの抗体断片がキットに含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏで使用する場合、抗体は、ｓｃＦｖ断片であり得る。更なる実施形態において、抗体は、標識される（例えば、蛍光標識、放射性標識、または酵素標識）。
一実施形態において、キットは、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に特異的に結合する抗体の使用手段を開示する説明資料を含む。説明資料は、書面、電子形式（コンピュータディスクまたはコンパクトディスクなど）または視覚的なもの（動画ファイルなど）であってもよい。キットはまた、キットの設計である特定の用途を容易にする追加の構成要素を含み得る。したがって、例えば、キットは、標識を検出する手段（酵素標識のための酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、二次抗体などの適切な二次標識など）を追加的に含有し得る。キットは、特定の方法の実施に日常的に使用される緩衝液及び他の試薬を追加的に含み得る。そのようなキット及び適切な内容物は、当業者によく知られている。
一実施形態において、診断用キットは、イムノアッセイを含む。イムノアッセイの詳細は、採用される特定のフォーマットによって変わり得るが、生体試料中のＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を検出する方法は、一般に、生体試料を、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に特異的に反応する抗体と免疫学的反応条件下で接触させるステップを含む。抗体を免疫学的反応条件下で特異的に結合させて免疫複合体を形成させ、免疫複合体（抗体の結合）の存在を直接的または間接的に検出する。
様々な実施形態において、抗体または抗原結合断片は、診断目的のために、標識されても非標識であってもよい。典型的に、診断アッセイは、抗体のＨＥＲ２またはＴｒｏｐ－２への結合から生じる複合体の形成を検出することを含む。抗体は、直接標識され得る。様々な標識が採用され得、限定するものではないが、放射性核種、蛍光物質、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤及びリガンド（例えば、ビオチン、ハプテン）が含まれる。多数の適切なイムノアッセイは、当業者に知られている（例えば、米国特許第３，８１７，８２７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９０１，６５４号；及び同第４，０９８，８７６号を参照されたい）。非標識の場合、抗体は、凝集アッセイなどのアッセイで使用することができる。非標識抗体はまた、抗体の検出に使用され得る別の（１つ以上の）好適な試薬、例えば、第１の抗体と反応性の標識抗体（例えば、第２の抗体）（例えば、抗イディオタイプ抗体または非標識免疫グロブリンに特異的な他の抗体）または他の好適な試薬（例えば、標識プロテインＡ）と組み合わせて使用することもできる。
本明細書で提供される抗体または抗原結合断片はまた、特定の疾患に対する哺乳動物の易罹患性を検出する方法に使用され得る。例示すると、方法は、哺乳動物の細胞上に存在するＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の量及び／またはＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２陽性細胞の数に基づいて進行する疾患に対する哺乳動物の易罹患性を検出するために使用することができる。一実施形態において、本出願は、腫瘍に対する哺乳動物の易罹患性を検出する方法を提供する。この実施形態において、試験される試料を、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗体またはその部分と、当該抗体への結合に適切な条件下で接触させる。試料は、正常な個体でＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を発現する細胞を含む。個体の腫瘍への易罹患性を示す抗体の結合及び／または結合の量を検出し、ここで、受容体レベルの高さと個体の腫瘍に対する易罹患性の高さは相関する。
様々な実施形態において、抗体または抗原結合断片は、検出することが可能な標識に結合される（例えば、標識は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子であり得る）。活性部分は、放射性剤、例えば、鉄キレートなどの放射性重金属、ガドリニウムまたはマンガンの放射性キレート、酸素、窒素、鉄、炭素、またはガリウムの陽電子放出体、４３Ｋ、５２Ｆｅ、５７Ｃｏ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３２Ｉ、または９９Ｔｃであり得る。そのような部分に結合された結合剤は、造影剤として使用され得、ヒトなどの哺乳動物における診断用途に有効な量で投与され、次いで、造影剤の局在化及び蓄積が検出される。造影剤の局在化及び蓄積は、ラジオシンチグラフィー、核磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影法または陽電子放射断層撮影法によって検出され得る。
ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を対象にした抗体または抗原結合断片を使用する免疫シンチグラフィーは、がん及び脈管構造を検出及び／または診断するために使用され得る。例えば、９９テクネチウム、１１１インジウム、または１２５ヨウ素で標識されたＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２マーカーに対するモノクローナル抗体は、そのようなイメージング法に効果的に使用され得る。当業者には明らかなように、投与される放射性同位体の量は、放射性同位体に依存する。当業者であれば、活性部分として使用される所定の放射性核種の比活性及びエネルギーに基づいて、投与される造影剤の量を容易に決めることができる。典型的に、造影剤の１回の投与あたり０．１～１００ミリキュリーまたは１～１０ミリキュリー、または２～５ミリキュリーが投与される。したがって、本開示の組成物は、放射性部分にコンジュゲートされた標的化部分を含む造影剤として有用であり、０．１～１００ミリキュリー、いくつかの実施形態において、１～１０ミリキュリー、いくつかの実施形態において、２～５ミリキュリー、いくつかの実施形態において、１～５ミリキュリーを含む。
イムノコンジュゲート
本出願は、エフェクター分子に直接的または間接的にコンジュゲートされた（または連結された）本出願の二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体またはその抗原結合断片のうちの少なくとも１つを含む、イムノコンジュゲートを更に提供する。この点で、「コンジュゲートされた」または「連結された」という用語は、２つのポリペプチドを１つの連続するポリペプチド分子にすることを指す。この連結は、化学的手段または組み換え手段のいずれかによることができる。一実施形態において、連結は、化学的であり、抗体部分とエフェクター分子との間の反応により、２つの分子間で共有結合が形成され、１つの分子が形成される。任意選択により、ペプチドリンカー（短いペプチド配列）が抗体とエフェクター分子との間に含まれ得る。様々な実施形態において、抗体または抗原結合断片は、エフェクター分子に接続される。他の実施形態において、エフェクター分子に接続された抗体または抗原結合断片は、体内での半減期を長くするために、脂質、タンパク質またはペプチドに更に接続される。したがって、様々な実施形態において、本開示の抗体は、様々なエフェクター分子を送達するために使用され得る。
エフェクター分子は、放射性同位体、放射性同位体、免疫調節剤、サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、成長因子、腫瘍壊死因子、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、酵素、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、マイクロＲＮＡ、光活性治療剤、抗血管新生剤、アポトーシス促進剤、ペプチド 脂質、炭水化物、キレート剤、治療剤、または化学療法剤であり得る。
イムノトキシンの具体的な非限定的な例としては、アブリン、リシン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素（ＰＥ３５、ＰＥ３７、ＰＥ３８、及びＰＥ４０などのＰＥ）、ジフテリア毒素（ＤＴ）、ボツリヌス毒素、コレラ菌由来毒素もしくはその改変毒素、または直接的もしくは間接的に細胞成長を阻害するもしくは細胞を殺傷する他の毒性物質が挙げられるが、これらに限定されない。
「サイトカイン」は、細胞間伝達物質として別の細胞に作用する、ある細胞集団によって放出されるタンパク質またはペプチドである。サイトカインは、免疫調節剤としても作用し得る。サイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン、成長因子及び従来のポリペプチドホルモンが挙げられる。したがって、実施形態は、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γ）；腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）メンバー；ヒト成長ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）；黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；プロスタグランジン、線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質；ＴＮＦ－α；ＴＮＦ－β；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ－βなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ－α；ＴＧＦ－β；インスリン様成長因子－Ｉ及び－ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；ならびに顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ－１～ＩＬ－２１）、ｋｉｔ－リガンドまたはＦＬＴ－３、アンギオスタチン、トロンボスポンジン、またはエンドスタチンを利用し得る。これらのサイトカインは、天然源由来または組み換え細胞培養由来のタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
ケモカインもまた本明細書で開示される抗体にコンジュゲートされ得る。ケモカインは、小さい（およそ約４～約１４ｋＤａ）誘導性及び分泌性の炎症促進性サイトカインのスーパーファミリーであり、主に特定の白血球サブタイプの化学誘引物質として作用する。ケモカイン産生は、炎症性サイトカイン、成長因子及び病原性刺激によって誘発される。ケモカインタンパク質は、保存的アミノ酸配列モチーフに基づいてサブファミリー（アルファ、ベータ、及びデルタ）に分けられ、アミノ末端に隣接する最初の２つのシステインの位置に基づいて、４つの高度に保存された群ＣＸＣ、ＣＣ、Ｃ及びＣＸ３Ｃに分類される。現在までに、５０を超えるケモカインが発見されており、少なくとも１８個のヒト７回膜貫通型ドメイン（７ＴＭ）ケモカイン受容体がある。使用されるケモカインには、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＣＰ－１、及びフラクタルカインが含まれるが、これらに限定されない。
治療剤は、化学療法剤であり得る。当業者であれば、使用される化学療法剤を容易に特定することができる（例えば、Ｓｌａｐａｋ ａｎｄ Ｋｕｆｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ ８６ ｉｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｐｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈ．１７ ｉｎ Ａｂｅｌｏｆｆ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２ｎｄ ｅｄ．（登録商標）．２０００ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ；Ｂａｌｔｚｅｒ Ｌ．，Ｂｅｒｋｅｒｙ Ｒ．（ｅｄｓ）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｐｏｃｋｅｔ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２ｎｄ ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ－Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ，１９９５；Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｄ Ｓ，Ｋｎｏｂｆ Ｍ Ｆ，Ｄｕｒｉｖａｇｅ Ｈ Ｊ（ｅｄｓ）：Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４ｔｈ ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ－Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ，１９９３を参照されたい）。イムノコンジュゲートの調製に有用な化学療法剤には、アウリスタチン、ドラスタチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、チューブリシン、ＡＦＰ、ＤＭ１、ＤＭ４、カリケアミシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ＡＥＢ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキサート、メルファラン、クロラムブシル、ビンカアルカロイド、５－フルオロウリジン、マイトマイシン－Ｃ、タキソール、Ｌ－アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、シトキサン、エトポシド、ＢＣＮＵ、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、イダルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、及びドセタキセルならびにその塩、溶媒及び誘導体が含まれる。様々な実施形態において、化学療法剤は、アウリスタチンＥ（当該技術分野においてドラスタチン－１０としても知られる）またはその誘導体及びその薬学的塩または溶媒和物である。典型的なアウリスタチン誘導体には、ＤＭ１、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、及びＭＭＡＥが含まれる。アウリスタチンＥ及びその誘導体の合成及び構造、ならびにリンカーは、例えば、米国特許出願公開第２００３００８３２６３号；米国特許出願公開第２００５０２３８６２９号；及び米国特許第６，８８４，８６９号に記載されている（そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される）。様々な実施形態において、治療剤は、アウリスタチンまたはアウリスタチン誘導体である。様々な実施形態において、アウリスタチン誘導体は、ドバリン－バリン－ドライソロニン－ドラプロイン－フェニルアラニン（ＭＭＡＦ）またはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。様々な実施形態において、治療剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノール類似体である。様々な実施形態において、メイタンシノイドは、ＤＭ１及びＤＭ４誘導体である。様々な実施形態において、治療剤は、カリケアミシン、バリアント、または誘導体である。様々な実施形態において、治療剤は、デュオカルマイシン、バリアント、または誘導体である。
エフェクター分子は、当業者に知られた任意の手段数を使用して、本出願の抗体または抗原結合断片に連結することができる。共有結合及び非共有結合の両方の結合手段を使用することができる。エフェクター分子を抗体に結合するための手順は、エフェクター分子の化学構造によって異なる。ポリペプチドは、典型的に、カルボン酸（ＣＯＯＨ）、遊離アミン（－－ＮＨ２）またはスルフヒドリル（－－ＳＨ）基などの様々な官能基を含有し、抗体上の好適な官能基との反応に利用することができ、エフェクター分子の結合をもたらす。あるいは、抗体は、追加の反応性官能基を露出または結合させるために、誘導体化される。誘導体化は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌから入手可能なものなどの多数のリンカー分子のいずれかの結合を伴い得る。リンカーは、抗体をエフェクター分子に接続するために使用される任意の分子であり得る。リンカーは、抗体とエフェクター分子の両方に共有結合を形成することが可能である。好適なリンカーは、当業者によく知られており、直鎖もしくは分岐鎖の炭素リンカー、複素環式炭素リンカー、またはペプチドリンカーが含まれるが、これらに限定されない。抗体及びエフェクター分子がポリペプチドである場合、リンカーは、構成アミノ酸にその側基を介して（システインへのジスルフィド連結などを介して）、または末端アミノ酸のアルファ炭素アミノ及びカルボキシル基に接続され得る。
いくつかの状況において、イムノコンジュゲートがその標的部位に到達したときに、エフェクター分子が抗体から遊離するのが望ましい。したがって、これらの状況において、イムノコンジュゲートは、標的部位の近傍で切断可能な連結を含む。エフェクター分子を抗体から放出するためのリンカーの切断は、標的細胞の内部または標的部位の近傍のいずれかでイムノコンジュゲートが受ける酵素活性または条件によって促進され得る。
抗体をエフェクター分子とコンジュゲートするための手順は、これまでに記載されており、当業者の範囲内である。例えば、イムノトキシンの酵素活性ポリペプチドを調製するための手順は、ＷＯ８４／０３５０８及びＷＯ８５／０３５０８に記載されており、その特定の教示の目的のために、参照により本明細書に援用される。他の技術は、Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４１：８３２－８３９（１９８８）；Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４６：１１０１－１１０６（１９９０）；Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，０５７，３１３号；Ｓｈｉｈ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：４１９２、国際公開ＷＯ０２／０８８１７２；米国特許第６，８８４，８６９号；国際特許公開ＷＯ２００５／０８１７１１；米国特許出願２００３－０１３０１８９Ａ；及び米国特許出願第２００８０３０５０４４号に記載されており、そのそれぞれは、かかる技術の教示の目的のために、参照により本明細書に援用される。
本出願のイムノコンジュゲートは、抗体または抗原結合断片の免疫反応性を保持しており、例えば、抗体または抗原結合断片のコンジュゲーション後の抗原結合能力は、コンジュゲーション前とほぼ同じか、またはわずかに減少するのみである。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）
本明細書で使用される場合、イムノコンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）とも称される。本出願の一実施形態による抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｎを有し、式中、Ａｂは、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２結合抗体であり、Ｌは、リンカーであり、Ｄは、イムノトキシン、薬物部分、サイトカイン、ケモカイン、治療剤、または化学療法剤であるエフェクター分子であり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の整数である。
様々な実施形態において、ＡＤＣは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の治療部分を含む。様々な実施形態において、ＡＤＣは、２、３、または４個の治療部分を含む。様々な実施形態において、全ての治療用部分は、同じである。様々な実施形態において、少なくとも１つの治療部分は、残りの部分と異なる。様々な実施形態において、全ての治療部分は、異なる。
ポリヌクレオチド及び抗体の発現
本出願は、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドを更に提供する。遺伝暗号の縮重により、各抗体のアミノ酸配列を様々な核酸配列がコードする。本出願は、例えば、本明細書に定義されるストリンジェントまたはより低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２に結合する抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを更に提供する。
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件には、約４５℃における６×ＳＳＣでのフィルター結合ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションに続く、約５０～６５℃における０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳでの１回以上の洗浄、約４５℃における６×ＳＳＣでのフィルター結合ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションに続く、約６０℃における０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳでの１回以上の洗浄などの極めてストリンジェントな条件、または当業者に知られている任意の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９８９ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ ａｔ ｐａｇｅｓ ６．３．１ ｔｏ ６．３．６ ａｎｄ ２．１０．３を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
ポリヌクレオチドは、当該技術分野において知られている任意の方法によって得ることができ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。例えば、抗体のヌクレオチド配列が知られている場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載されているとおり）、簡潔に述べれば、抗体をコードする配列の一部を含有する重複するオリゴヌクレオチドを合成し、これらのオリゴヌクレオチドをアニーリング及びライゲーションし、次いで、ライゲートしたオリゴヌクレオチドをＰＣＲによって増幅することを伴う。一実施形態において、使用されるコドンは、ヒトまたはマウスに典型的なものである（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｙ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８：２９２（２０００）を参照されたい）。
抗体をコードするポリヌクレオチドは、好適な供給源の核酸から生成することもできる。特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンを入手することはできないが、抗体分子の配列がわかっている場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学合成するか、または好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞、例えば、抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリーもしくは単離された核酸、好ましくは、ポリＡ＋ＲＮＡ）から、配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、もしくは特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからｃＤＮＡクローンを特定することで、得ることができる。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅核酸を、当技術分野においてよく知られた任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。
本出願はまた、本出願の抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体を発現する宿主細胞を目的とする。当該技術分野において知られている多種多様な宿主発現系を使用して本出願の抗体を発現させることができ、例えば、原核生物（細菌）及び真核生物発現系（酵母、バキュロウイルス、植物、哺乳動物及び他の動物細胞、トランスジェニック動物、及びハイブリドーマ細胞など）、ならびにファージディスプレイ発現系が含まれる。
本出願の二重特異性抗体は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖及び重鎖の遺伝子の組み換え発現によって調製することができる。抗体を組み換え的に発現させるために、宿主細胞の形質転換、形質導入、感染などを、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び／または重鎖をコードするＤＮＡ断片を有する１つ以上の組み換え発現ベクターを用いて、軽鎖及び／または重鎖が宿主細胞で発現されるように行う。重鎖及び軽鎖は、１つのベクターにおいて作動可能に連結された異なるプロモーターから独立して発現されてもよく、あるいは、重鎖及び軽鎖は、重鎖を発現するベクターと軽鎖を発現するベクターの２つのベクターにおいて作動可能に連結された異なるプロモーターから独立して発現されてもよい。任意選択により、重鎖及び軽鎖は、異なる宿主細胞で発現させてもよい。
更に、組み換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体軽鎖及び／または重鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体軽鎖及び／または重鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで作動可能に連結されるように、ベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチドであり得る。好ましくは、組み換え抗体は、宿主細胞を培養されている媒体中に分泌され、そこから抗体を回収または精製することができる。
ＨＣＶＲをコードする単離されたＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト及び他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において知られている。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、Ｋａｂａｔ（上掲）に記載されるように、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）またはサブクラスの定常領域及び任意のそのアロタイプバリアントのものであり得る。
ＬＣＶＲ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト及び他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において知られている。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。
抗体重鎖及び／または軽鎖遺伝子（複数可）に加えて、本出願の組み換え発現ベクターは、宿主細胞において抗体鎖遺伝子（複数可）の発現を制御する調節配列を有する。「調節配列」という用語は、必要に応じて、抗体鎖遺伝子（複数可）の転写または翻訳を制御する、プロモーター、エンハンサー及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの因子に依存し得る。哺乳動物宿主細胞の発現に好ましい調節配列には、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を誘導するウイルス要素、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及び／またはポリオーマウイルスに由来するプロモーター及び／またはエンハンサーである。
更に、本出願の組み換え発現ベクターは、宿主細胞でベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び１つ以上の選択マーカー遺伝子などの追加の配列を有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする。例えば、典型的に、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ｄｈｆｒ）遺伝子（ｄｈｆｒマイナス宿主細胞においてメトトレキサートによる選択／増幅のために使用）、ｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択）、及びＧＳ陰性細胞株（ＮＳＯなど）における選択／増幅のためのグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）が含まれる。
軽鎖及び／または重鎖の発現のために、重鎖及び／または軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）を、標準的な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、トランスダクション、感染症などによって、宿主細胞に導入する。本出願の抗体は、原核生物または真核生物のいずれの宿主細胞でも発現させることが理論的には可能であるが、真核細胞が好ましく、最も好ましくは、哺乳動物宿主細胞である。これは、かかる細胞が適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が高いからである。本出願の組み換え抗体を発現するのに好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）［Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－２０，１９８０に記載されるｄｈｆｒマイナスＣＨＯ細胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－２１，１９８２に記載されるようにＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される］、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２／０細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組み換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞において抗体が発現されるか、またはより好ましくは、当該技術分野において知られている適切な条件下で、宿主細胞が成長する培養培地中に抗体が分泌されるのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的な精製方法を使用して、宿主細胞及び／または培養培地から回収することができる。
本出願は、本出願の核酸分子を含む、宿主細胞を提供する。好ましくは、本出願の宿主細胞は、本出願の核酸分子を含む、１つ以上のベクターまたは構築物を含む。例えば、本出願の宿主細胞は、本出願のベクターが導入された細胞であり、当該ベクターは、本出願の抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド及び／または本出願のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチドを含む。本出願はまた、本出願の２つのベクターを導入した宿主細胞を提供し、１つは、本出願の抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチドを含み、１つは、本出願の抗体中に存在するＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチドを含み、それぞれは、高い遺伝子転写レベルを駆動するために、エンハンサー／プロモーター調節要素（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの、例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素）に作動可能に連結される。
一旦発現されたら、本出願のインタクト抗体、個々の軽鎖及び重鎖、または他の免疫グロブリン形態は、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換、親和性（例えば、プロテインＡ）、逆相、疎水性相互作用カラムクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従って精製することができる。治療抗体の精製に関する標準的な手順は、例えば、Ｆｅｎｇ Ｌｌ，Ｊｏｅ Ｘ．Ｚｈｏｕ，Ｘｉａｏｍｉｎｇ Ｙａｎｇ，Ｔｉｍ Ｔｒｅｓｓｅｌ，ａｎｄ Ｂｒｉａｎ Ｌｅｅの“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”と題された論文（ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ／Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００５）（治療抗体の精製の教示を目的として、その全体が参照により援用される）に記載されている。更に、組み換え的に発現された抗体調製物からウイルスを除去するための標準的な技術も当該技術分野において知られている（例えば、Ｇｅｒｄ Ｋｅｒｎ ａｎｄ Ｍａｎｉ Ｋｒｉｓｈｎａｎ，“Ｖｉｒａｌ Ｒｅｍｏｖａｌ ｂｙ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ： Ｐｏｉｎｔｓ ｔｏ Ｃｏｎｓｉｄｅｒ”（Ｂｉｏｐｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００６）を参照されたい）。治療抗体の調製物からウイルスを除去する濾過の有効性は、濾過する溶液中のタンパク質及び／または抗体の濃度に少なくとも部分的に依存することが知られている。本出願の抗体のための精製プロセスは、１つ以上のクロマトグラフィー操作の主流液からウイルスを除去するために濾過するステップを含み得る。好ましくは、医薬品等級のナノフィルターにより濾過してウイルスを除去する前に、本出願の抗体を含有するクロマトグラフィー主流液を希釈または濃縮して約１ｇ／Ｌ～約３ｇ／Ｌの総タンパク質及び／または総抗体濃度を得る。更により好ましくは、ナノフィルターは、ＤＶ２０ナノフィルター（例えば、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，Ｎ．Ｙ．）である。治療用途では、均質性が少なくとも約９０％、約９２％、約９４％または約９６％の実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、約９８～約９９％またはそれ以上の均質性が最も好ましい。所望により部分的または均質に精製されたら、無菌抗体は、本明細書に記載されるように治療的に使用することができる。
上述の考察を鑑み、本出願は、本出願の抗体をコードする核酸分子を含むポリヌクレオチドまたはベクターによって形質転換された宿主細胞、例えば、限定するものではないが、哺乳動物、植物、細菌、トランスジェニック動物、またはトランスジェニック植物細胞を、核酸が発現されるように培養するステップと、任意選択により、宿主細胞の培養培地から抗体を回収するステップとを含むプロセスによって得ることができる抗体を更に目的とする。
ある特定の態様において、本出願は、ハイブリドーマ細胞株、及び当該ハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体を提供する。開示される細胞株は、モノクローナル抗体の産生以外の用途を有する。例えば、細胞株は、他の細胞（好適に薬物標識されたヒト骨髄腫、マウス骨髄腫、ヒト－マウスヘテロ骨髄腫またはヒトリンパ芽球様細胞など）と融合させて、更なるハイブリドーマを生成することにより、モノクローナル抗体をコードする遺伝子の導入を提供することができる。加えて、細胞株は、抗ＨＥＲ２免疫グロブリン鎖をコードする核酸の供給源として使用することができ、これにより、核酸の単離及び発現が可能となる（例えば、任意の好適な技術を使用して他の細胞に導入することによる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい））。例えば、再構成された抗ＨＥＲ２軽鎖または重鎖を含むクローンを単離することができ（例えば、ＰＣＲによる）、または細胞株から単離されたｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを調製し、抗ＨＥＲ２免疫グロブリン鎖をコードするｃＤＮＡクローンを単離することができる。したがって、抗体の重鎖及び／または軽鎖またはその一部をコードする核酸は、様々な宿主Ｔ細胞またはｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳系で特定の免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのバリアント（例えば、ヒト化免疫グロブリン）を産生するための組み換えＤＮＡ技術に従って、入手し、使用することができる。例えば、ヒト化免疫グロブリンもしくは免疫グロブリン鎖などのバリアントをコードするｃＤＮＡを含む核酸またはその誘導体を、好適な原核生物または真核生物ベクター（例えば、発現ベクター）に配置し、適切な方法（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、感染）によって、好適な宿主Ｔ細胞に導入することができる。それにより、核酸は、１つ以上の発現制御要素に作動可能に連結される（例えば、ベクター中で、または宿主Ｔ細胞ゲノム中に組み込まれる）。産生のためには、宿主Ｔ細胞を発現に好適な条件下（例えば、誘導物質の存在下、適切な塩、成長因子、抗生物質、栄養補助物質を添加した好適な培地など）で維持することができ、それにより、コードされたポリペプチドが産生される。所望であれば、コードされたタンパク質は、回収及び／または単離することができる（例えば、宿主Ｔ細胞または培地から）。産生方法は、トランスジェニック動物の宿主Ｔ細胞における発現を包含することは理解されるであろう（例えば、１９９２年３月１９日に公開されたＷＯ９２／０３９１８、ＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌを参照されたい）（その全体が参照により援用される）。
宿主細胞はまた、インタクト抗体の一部または断片、例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子を、従来の技術によって産生するために使用することができる。例えば、本出願の抗体の軽鎖または重鎖のいずれかをコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある。組み換えＤＮＡ技術はまた、ヒトＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２への結合に必要ではない、軽鎖及び重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡのいくつかまたは全部を除去するために使用することもできる。そのように切断されたＤＮＡ分子から発現された分子も本出願の抗体に包含される。
Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌に由来する単鎖抗体を含む単鎖抗体の発現及び／または適切な活性型へのリフォールディングの方法は、記載され、よく知られており、本明細書で開示される抗体に適用可能である（例えば、Ｂｕｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０５：２６３－２７０，１９９２；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５，１９９１；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５，１９８９及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４，１９８９を参照されたく、これらは全て参照により本明細書に援用される）。
多くの場合、Ｅ．ｃｏｌｉまたは他の細菌に由来する機能性異種タンパク質は、封入体から単離され、強力な変性剤を使用して可溶化した後、リフォールディングすることが必要となる。可溶化ステップでは、当該技術分野においてよく知られているように、ジスルフィド結合を切り離すために、還元剤が存在しなければならない。例示的な還元剤を含む緩衝液は、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ８、６Ｍ グアニジン、２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．３Ｍ ＤＴＥ（ジチオエリトリトール）である。ジスルフィド結合の再酸化は、Ｓａｘｅｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９：５０１５－５０２１，１９７０（参照により本明細書に援用される）に記載されるように、また特にＢｕｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（上掲）に記載されるように、還元及び酸化型の低分子量のチオール試薬の存在下で生じ得る。
再変性は、典型的に、変性及び還元されたタンパク質をリフォールディング緩衝液に希釈（例えば、１００倍）することによって達成される。例示的な緩衝液は、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、０．５Ｍ Ｌ－アルギニン、８ｍＭ 酸化グルタチオン（ＧＳＳＧ）、及び２ｍＭ ＥＤＴＡである。
２本鎖抗体の精製プロトコルに対する改良として、重鎖及び軽鎖領域を別々に可溶化して還元し、次いで、リフォールディング溶液中で結合させる。これらの２つのタンパク質を、一方のタンパク質が他方のタンパク質に対して５倍モル過剰を超えないようなモル比で混合する場合、例示的な収率が得られる。過剰の酸化グルタチオンまたは他の酸化低分子量化合物は、酸化還元シャッフリングが完了した後に、リフォールディング溶液に加えることができる。
組み換え方法に加えて、本明細書で開示される抗体、標識抗体及びその抗原結合断片は、標準的なペプチド合成を使用して、全体的または部分的に構築することもできる。約５０アミノ酸長未満のポリペプチドの固相合成は、配列のＣ末端アミノ酸を不溶性支持体に結合させ、続いて、配列の残りのアミノ酸を順次付加することによって達成することができる。固相合成のための技術は、Ｂａｒａｎｙ ＆ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ Ａ．ｐｐ．３－２８４；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－２１５６，１９６３、及びＳｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，１９８４に記載されている。より長いタンパク質は、短い断片のアミノ末端とカルボキシル末端の縮合によって合成され得る。カルボキシル末端の活性化によってペプチド結合を形成する方法（カップリング試薬Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドの使用など）は、当該技術分野においてよく知られている。
以下の実施例は、本出願をより完全に例示するために提供されるが、その範囲を限定するものとして解釈されるものではない。以下に提供される特定の実施例に詳述されるように、ハーセプチン抗体またはハーセプチンｓｃＦｖと抗Ｔｒｏｐ－２抗体または抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖを組み合わせることによって、極めて強力な二重特異性抗体が作製された。多くの異なる二重特異性抗体構造を作製し、試験した。提供される固有の二重特異性抗体は、試験した単一特異性抗ＨＥＲ２及び単一特異性抗Ｔｒｏｐ－２抗体のいずれよりも優れた生物学的活性を示す。多くのアッセイにおいて、二重特異性抗体はまた、単一特異性抗ＨＥＲ２抗体よりも相乗的な活性を示す。二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体は、ＤＭ１誘導体細胞傷害性剤とコンジュゲートした場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで優れた抗腫瘍活性を示した。これらのデータは、二重特異性抗体が、トラスツズマブ、ペルツズマブまたはＴ－ＤＭ１による治療に現在適さない患者を含む、ＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ－２レベルを発現するがんの治療において、特にＡＤＣまたはＡＤＣＣ増強抗体として治療用途を有し得ることを示唆している。加えて、二重特異性抗体は、既存の抗ＨＥＲ２及び／または抗Ｔｒｏｐ－２療法の効果がなかったがん患者の治療に対して、治療用途を有し得る。
更なる例示的な実施形態
１．ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、構築物。
２．前記ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含み、及び／または前記ヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインが、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む、実施形態１に記載の構築物。
３．ａ）前記ＶＨ－２が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ－２が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含むか、
ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ－２が、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、
実施形態２に記載の構築物。
４．前記ＶＨ－１が、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
前記ＶＬ－１が、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、
実施形態２または実施形態３に記載の構築物。
５．ａ）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号７に記載される配列を有する前記ＶＨ－１内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号８に記載される配列を有する前記ＶＬ－１内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、及び／または
ｂ１）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号４に記載される配列を有する前記ＶＨ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号５に記載される配列を有する前記ＶＬ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、または
ｂ２）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号１０に記載される配列を有する前記ＶＨ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号１１に記載される配列を有する前記ＶＬ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
実施形態２～４のいずれか１つに記載の構築物。
６．前記第１の抗原結合ドメイン及び／または前記第２の抗原結合ドメインが、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂからなる群から選択される、実施形態１～５のいずれか１つに記載の構築物。
７．前記第１の抗原結合ドメインが、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含む、実施形態６に記載の構築物。
８．前記第２の抗原結合ドメインが、前記ＶＨ－２及びＶＬ－２を含むｓｃＦｖを含む、実施形態７に記載の構築物。
９．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖の一方または両方に融合される、実施形態８に記載の構築物。
１０．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の軽鎖の一方または両方に融合される、実施形態８に記載の構築物。
１１．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＮ末端に融合される、実施形態９または１０に記載の構築物。
１２．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＣ末端に融合される、実施形態９～１１のいずれか１つに記載の構築物。
１３．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体に第１のリンカーを介して融合される、実施形態９～１２のいずれか１つに記載の構築物。
１４．前記第１の抗原結合ドメインが、前記ＶＨ－１及びＶＬ－１を含むｓｃＦｖを含む、実施形態６に記載の構築物。
１５．前記第２の抗原結合ドメインが、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含む、実施形態１４に記載の構築物。
１６．前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖の一方または両方に融合される、実施形態１５に記載の構築物。
１７．前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の軽鎖の一方または両方に融合される、実施形態１５に記載の構築物。
１８．前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＮ末端に融合される、実施形態１６または１７に記載の構築物。
１９．前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＣ末端に融合される、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の構築物。
２０．前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体に第１のリンカーを介して融合される、実施形態１６～１９のいずれか１つに記載の構築物。
２１．前記第１のリンカーが、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるＧＳリンカーである、実施形態１３または実施形態２０に記載の構築物。
２２．前記第１の抗原結合ドメイン中の前記ｓｃＦｖの前記ＶＨ－１及びＶＬ－１、または前記第２の抗原結合ドメイン中の前記ｓｃＦｖの前記ＶＨ－２及びＶＬ－２が、第２のリンカーを介して互いに連結される、実施形態８～２１のいずれか１つに記載の構築物。
２３．前記第２のリンカーが、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるＧＳリンカーである、実施形態２２に記載の構築物。
２４．ａ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合されるか、
ｂ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合されるか、
ｃ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合されるか、
ｄ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合されるか、または
ｅ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合される、
実施形態２～２３のいずれか１つに記載の構築物。
２５．ａ）前記ＶＨ－１が、配列番号７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－１が、配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、
ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－２が、配列番号５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む、
実施形態２～２４のいずれか１つに記載の構築物。
２６．ａ）前記ＶＨ－１が、配列番号７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－１が、配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、
ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－２が、配列番号１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む、
実施形態２～２４のいずれか１つに記載の構築物。
２７．ａ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合されるか、
ｂ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合されるか、
ｃ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合されるか、
ｄ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合されるか、または
ｅ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される、
実施形態２～２４のいずれか１つに記載の構築物。
２８．前記Ｆｃ断片が、任意選択によりＩｇＧ定常ドメインを含む重鎖定常ドメインと、任意選択によりカッパ定常領域またはラムダ定常領域を含む軽鎖定常ドメインとを含む、実施形態７～１３及び１５～２７のいずれか１つに記載の構築物。
２９．ａ）配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｂ）配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｃ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｄ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｅ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｆ）配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｇ）配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；
ｈ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；または
ｉ）配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント；配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖、もしくは少なくとも約８０％（少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つなど）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む、
実施形態１～２８のいずれか１つに記載の構築物。
３０．前記構築物が、ＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ－２発現細胞に特異的に結合し、標的（複数可）に結合すると、内在化を誘導する、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の構築物。
３１．前記構築物が、二重特異性抗体またはその結合断片であるか、またはそれらを含み、任意選択により、前記二重特異性抗体は、ヒト化抗体である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の構築物。
３２．前記構築物が、式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｎを有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、式中、Ａｂは、前記二重特異性抗体またはその結合断片であり、Ｌは、リンカーまたは直接結合であり、Ｄは、治療剤であり、ｎは、１～１０の整数である、実施形態３１に記載の構築物。
３３．前記治療剤が、細胞傷害性剤である、実施形態３２に記載の構築物。
３４．前記細胞傷害性剤が、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはＢ１－Ｐ２０３である、実施形態３３に記載の構築物。
３５．前記細胞傷害性剤が、マイタンシノイド（ＤＭ１）またはその誘導体である、実施形態３３に記載の構築物。
３６．ヒトＴｒｏｐ２及びヒトＨＥＲ２に特異的に結合する構築物であって、実施形態２～３５のいずれか１つに記載の構築物と競合的にヒトＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ２に結合する、前記構築物。
３７．実施形態１～３６のいずれか１つに記載の構築物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
３８．実施形態１～３１及び３６のいずれか１つに記載の構築物をコードする、単離された核酸。
３９．実施形態３８に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
４０．実施形態３８に記載の単離された核酸または実施形態３９に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
４１．構築物を産生する方法であって、
ａ）実施形態４０に記載の単離された宿主細胞を、前記構築物またはその一部分を発現するのに有効な条件下で培養することと、
ｂ）前記発現された構築物またはその一部分を前記宿主細胞から得ることと
を含む、前記方法。
４２．対象の疾患または状態を治療する方法であって、前記対象に、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の構築物または実施形態３７に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
４３．前記疾患または状態が、がんである、実施形態４２に記載の方法。
４４．前記がんが、Ｔｒｏｐ２陽性及び／またはＨＥＲ２陽性である、実施形態４３に記載の方法。
４５．前記がんが、Ｔｒｏｐ２中発現もしくは高発現及び／またはＨＥＲ２中発現もしくは高発現である、実施形態４４に記載の方法。
４６．前記がんが、Ｔｒｏｐ２低発現及び／またはＨＥＲ２低発現である、実施形態４３に記載の方法。
４７．前記がんが、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、及び胃癌からなる群から選択される、実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の方法。
４８．前記方法が、第２の治療法を更に含み、任意選択により、前記第２の治療法は、免疫療法、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、ワクチン接種プロトコル、及び幹細胞移植からなる群から選択される、実施形態４１～４７のいずれか１つに記載の方法。
実施例１
二重特異性抗体の構築
本出願に記載される抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体フォーマットの模式図を図１～５に示す。これらの構築物は、ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２抗原を同時に標的とするように設計される。全ての抗体フォーマットにおけるｓｃＦｖ部分は、例えば、ＶＨドメインを、リンカー（例えば、合成フレキシブルリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２５に記載されるリンカー配列）を使用して連結することによって構築した。ｓｃＦｖは、重鎖のＮ末端及びＣＨ３ドメインのＣ末端に、例えば、フレキシブルリンカー、例えば、ＧＳリンカー、例えば、配列番号２５に記載されるリンカー配列を介して共有結合的に連結される。
二重特異性抗体ＨＴ２（図１）を作製するために、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンｓｃＦｖ（配列番号３）、抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４ ＶＨ（配列番号４）、及びＩｇＧ１定常（ＣＨ）領域を含有する重鎖（ＨＣ）を合成した。ｓｃＦｖ及びＶＨをＧＳリンカーを介して連結した。得られたｓｃＦｖ－ＶＨ－ＣＨ融合体をｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４ ＶＬ（配列番号５）及びＣＬ領域を含有する軽鎖（ＬＣ）も合成し、ｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。次いで、ＨＣ及びＬＣを発現ベクターにコトランスフェクトした。得られる二重特異性抗体は、ｓｃＦｖのハーセプチン及びＦａｂの抗Ｔｒｏｐ２抗体Ａ１，２Ｘ４から構成され、ハーセプチンｓｃＦｖは、抗Ｔｒｏｐ－２抗体の両重鎖のＮ末端に融合された場合、ＶＫ－リンカー－ＶＨとして配向される。
二重特異性抗体ＴＨ２（図２）を作製するために、抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４ ｓｃＦｖ（配列番号６）及び抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンＶＨ（配列番号７）及びＩｇＧ１ ＣＨ領域を含有するＨＣを合成した。ｓｃＦｖ及びＶＨをＧＳリンカーを介して連結した。得られたｓｃＦｖ－ＶＨ－ＣＨ融合体をｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンＶＬ（配列番号８）及びＣＬ（配列番号１３）領域を含有するＬＣも合成し、ｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。次いで、ＨＣ及びＬＣを発現ベクターにコトランスフェクトした。得られる二重特異性抗体は、ｓｃＦｖの抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４及びＦａｂのハーセプチンから構成され、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖは、ハーセプチンの両重鎖のＮ末端に融合された場合、ＶＫ－リンカー－ＶＨとして配向される。
二重特異性抗体ＨＢ１（図３）を作製するために、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンＶＨ（配列番号７）及びＩｇＧ１ ＣＨ領域及び抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７ ｓｃＦｖ（配列番号９）を含有するＨＣを合成した。ＶＨ及びｓｃＦｖをＧＳリンカーを介して連結した。得られたＶＨ－ＣＨ－ｓｃＦｖ融合体をｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンＶＬ（配列番号８）及びＣＬ領域を含有するＬＣも合成し、ｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。次いで、ＨＣ及びＬＣを発現ベクターにコトランスフェクトした。得られる二重特異性抗体は、Ｆａｂのハーセプチン及びｓｃＦｖの抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７から構成され、抗Ｔｒｏｐ－２ ｓｃＦｖは、ハーセプチンの両重鎖のＣ末端に融合された場合、ＶＫ－リンカー－ＣＨとして配向される。
二重特異性抗体ＢＨ１（図４）を作製するために、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンｓｃＦｖ（配列番号９）及びＩｇＧ１定常領域を含有するＨＣを合成した。ｓｃＦｖ及びＶＨをＧＳリンカーを介して連結した。得られたｓｃＦｖ－ＶＨ－ＣＨ融合体をｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７ ＶＬ（配列番号１１）及びＣＬ領域を含有するＬＣも合成し、ｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。次いで、ＨＣ及びＬＣを発現ベクターにコトランスフェクトした。得られる二重特異性抗体は、ｓｃＦｖのハーセプチン及びＦａｂの抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７から構成され、抗ハーセプチンｓｃＦｖは、ｈＲＳ７抗体の両重鎖のＣ末端に融合された場合、ＶＫ－リンカー－ＶＨとして配向される。
二重特異性抗体ＢＨ２（図５）を作製するために、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンｓｃＦｖ（配列番号３）及び抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７ ＶＨ（配列番号１０）及びＩｇＧ１ ＣＨ領域を含有する重鎖（ＨＣ）を合成した。ｓｃＦｖ及びＶＨをＧＳリンカーを介して連結した。得られたｓｃＦｖ－ＶＨ－ＣＨ融合体をｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。抗Ｔｒｏｐ－２抗体ｈＲＳ７ ＶＬ（配列番号１１）及びＣＬ領域を含有するＬＣも合成し、ｐＵＣ５７発現ベクターにクローニングした。次いで、ＨＣ及びＬＣを発現ベクターにコトランスフェクトした。得られる二重特異性抗体は、ｓｃＦｖのハーセプチン及びＦａｂの抗Ｔｒｏｐ２抗体ｈＲＳ７から構成され、ハーセプチンｓｃＦｖは、ｈＲＳ７抗体の両重鎖のＮ末端に融合された場合、ＶＫ－リンカー－ＶＨとして配向される。
全ての抗体構築物は、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一過性に発現され、発現レベルは、ＨＴ２（ＨＴ００２）で１．０８ｍｇ／ｍＬ、ＴＨ２（ＴＨ００２）で０．５５ｍｇ／ｍＬ、ＨＢ１（ＨＴ００１ａ）で０．６９５ｍｇ／ｍＬとなった。なかでも、ＨＴ２（ＨＴ００２）の発現レベルが特に有利である。
全ての二重特異性抗体は、標準的なプロテインＡ精製によって均質になるまで精製し（＞９０％）、還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。
実施例２
二重特異性抗体の結合親和性
精製した抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体の結合親和性をＦＡＣＳ解析によって決定した。ＨＥＲ２は発現するがＴｒｏｐ－２を発現しない前立腺癌細胞ＬＮＣａｐ、Ｔｒｏｐ－２は発現するがＨＥＲ２発現を発現しない乳癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の両方を発現する結腸癌細胞Ｃｏｌｏ２０５を採取し、ＦＡＣＳ緩衝液中に０．５～１×１０６細胞／ｍｌで懸濁した。次いで、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチン、抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４の二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＨＴ２（ＨＴ００２）及びＴＨ２（ＴＨ００１）を１．２５、２．５、５、１０、２０、４０ ｇ／ｍｌで細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄して、未結合の抗体を除去した。次いで、細胞を解離させ、蛍光標識二次抗体を２０ ｇ／ｍｌで用いて、暗所で氷上で３０分間染色した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁した後、ｂａｃｋｍａｎフローサイトメトリーシステム（ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６）を使用して解析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＢｅｃｋｍａｎフローサイトメトリーのソフトウェアによって解析した。平衡結合定数Ｋｄは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７の「１サイト－特異的結合」解析モデルを使用して得た。Ｋｄは、平衡状態で最大半数の結合を達成するのに必要な放射性リガンド濃度である。
図６Ｂは、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＨＢ１に関する結果を示す。細胞表面上にＨｅｒ２のみを発現するＬＮＣａｐ細胞及びＴｒｏｐ－２のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞において、ＨＢ１は、親の単一特異性抗体ハーセプチンまたはｈＲＳ７と比較して少ない結合を示した。ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方を発現するＣｏｌｏ２０５細胞において、ＨＢ１は、親抗体と比較して同等の結合親和性を有した。
図６Ｃは、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＢＨ１（ＴＨ００１ａ）及びＢＨ２（ＴＨ００１ｂ）に関する結果を示す。細胞表面上にＨｅｒ２のみを発現するＬＮＣａｐ細胞において、二重特異性抗体ＴＨ００１ｂは、親の単一特異性抗体ハーセプチンと同様の結合親和性を有したが、二重特異性抗体ＴＨ００１ａは、ハーセプチンと比較して中程度の結合親和性であった。細胞表面上にＴｒｏｐ－２のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞において、ＴＨ００１ａは、ＴＨ００１ｂよりも、親の単一特異性抗体Ａ１，２Ｘ４に匹敵する良好な結合を示した。両抗原を発現するＣｏｌｏ２０５細胞において、二重特異性抗体は、親の単一特異性抗体と同等か、またはそれよりも良好な結合を示した。
図６Ａは、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＨＴ２（ＨＴ００２）及びＴＨ２（ＴＨ００２）に関する結果を示す。細胞表面上にＨｅｒ２のみを発現するＬＮＣａｐ細胞において、ＨＴ００２及びＴＨ００２は、親の単一特異性抗体ハーセプチンと同様の結合親和性で細胞に結合した。しかしながら、Ｔｒｏｐ－２のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞に対しては、どちらの二重特異性抗体も単一特異性抗体Ａ１，２Ｘ４と比較して中程度の結合親和性であった。印象的なことに、両抗原を発現するＣｏｌｏ２０５細胞においては、細胞表面上で結合したＨＴ００２及びＴＨ００２二重特異性抗体の検出量が単一特異性抗体のどちらか単独と比較して劇的に増加した。このような効果は、Ｔｒｏｐ２陽性及びＨＥＲ２陽性の両方のがん細胞を持つ患者の治療に特別な利点を提供する。
実施例３
二重特異性抗体の内在化
二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体の内在化及び分解をフローサイトメトリーによって測定した。この試験では、蛍光標識二次抗体を使用して、内在化後に残った一次抗体を検出した。
ＨＥＲ２低発現／Ｔｒｏｐ－２低発現の結腸癌細胞Ｃｏｌｏ２０５、ＨＥＲ２陰性／Ｔｒｏｐ－２高発現の乳癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＨＥＲ２高発現／Ｔｒｏｐ－２中発現の卵巣癌細胞ＳＫ－ＢＲ－３を１×１０５細胞／ウェルで播種した。次に、二重特異性抗体または親の単一特異性抗体のいずれかを、ＦＡＣＳ緩衝液中、それぞれ４００、１０００、３０００、または１００００ｎｇ／ｍｌの濃度で細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄して、未結合の抗体を除去した。次いで、抗体内在化のために、細胞を３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。２時間後、細胞をトリプシンで解離させ、蛍光標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いて、暗所で氷上で３０分間染色した後、Ｂｅｃｋｍａｎフローサイトメトリーシステムを使用して解析した。各時点における蛍光強度及び細胞結合パーセンテージをＢｅｃｋｍａｎフローサイトメトリーのソフトウェアによって解析した。各濃度における、細胞に内在化した抗体の量を次式：（ＭＦＩ４℃－ＭＦＩ３７℃）×１０３を使用して決定した。
図７は、試験の結果を示す。結果は、本出願の二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＨＴ２（ＨＴ００２）、ＢＨ１（ＴＨ００１ａ）、及びＢＨ２（ＴＨ００１ｂ）が、ＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ－２を発現する細胞によって内在化され得ることを示している。二重特異性抗体の内在化量は、Ｔｒｏｐ－２は発現するが、ＨＥＲ２レベルを発現しないＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞、ならびにＨｅｒ２低発現及びＴｒｏｐ－２低発現のＣｏｌｏ２０５細胞において、親の抗Ｔｒｏｐ－２抗体Ａ１，２Ｘ４またはｈＲＳ７及び抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチンと同様であった。ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の両方を中レベルまたは高レベルで発現するＳＫ－ＢＲ－３細胞において、二重特異性抗体ＨＴ２及びＢＨ２は、親の単一特異性抗体よりも増大した内在化を誘導したが、ＢＨ１は、単一特異性抗体と比較して同様の内在化であった。ＨＴ２及びＢＨ２の内在化量は、単一特異性抗体ハーセプチン及びＡ１，２Ｘ４の合計よりも多かった。これらの結果は、中レベルまたは高レベルのＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐｓを発現するがん細胞を有する患者の治療に、ＨＴ２またはＢＨ２を使用することの特別な利点を示している。
実施例４
二重特異性抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の作製
本明細書に記載される構築物は、ＨＴ２（ＨＴ００２）及びＨＢ１（ＨＴ００１ａ）を含む抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体がＢＩ－Ｐ２０３、ＤＭ１、またはＭＭＡＥにコンジュゲートされてＡＤＣを形成したものを含み、異なるレベルのＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を発現する複数のがん細胞株の成長を阻害する能力について評価した。
本出願のいくつかの実施形態は、二重特異性抗体に非切断性リンカーを介して連結されたＢＩ－Ｐ２０３またはＤＭ１またはＭＭＡＥに関する。本実施例において、二重特異性抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２抗体ＨＴ２（ＨＴ００２）またはＨＢ１（ＨＴ００１ａ）は、ｐＨ調整したＰＢＳ ＥＤＴＡ緩衝液中に溶解したＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）に抗体を加えることによって還元した。抗体／ＴＣＥＰ溶液を３７℃で２～３時間インキュベートした。還元した抗体をコンジュゲーション反応緩衝液に緩衝液交換した。還元した抗Ｔｒｏｐ－２モノクローナル抗体の溶液に、ＤＭＳＯ中に溶解したＢＩ－Ｐ２０３、ＤＭ１、またはＭＭＡＥペイロードを、異なる薬物抗体比（ＤＡＲ）を達成するように７～３０：１のペイロード／抗体比で加えた。ペイロード／抗体溶液を２０℃で１～２時間インキュベートし、その間に、還元した抗体は、マレイミド基を介してＢＩ－Ｐ２０３ペイロードにコンジュゲートされた。コンジュゲーションが完了したら、反応混合物を脱塩し、濃縮して、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２－ＢＩ－Ｐ２０３ ＡＤＣを得た。得られたＡＤＣの生化学的特性は、サイズ排除クロマトグラフィー高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を使用して純度及び凝集量を決定し、疎水性相互作用クロマトグラフィーＨＰＬＣ（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）を使用して薬物の担持量（ＤＡＲ）を確認して、特徴付けた。コンジュゲーション手順を図８に示す。最終的なＡＤＣ生成物は、４または６または７つのＢＩ－Ｐ２０３及びＤＭ１－リンカー分子と、２または４つのＭＭＡＥ－リンカー分子を含む。コンジュゲーションプロセスで使用したシステインコンジュゲーション法は、リジンコンジュゲーション法と比較して、より均質なＡＤＣが得られる。
実施例５
二重特異性ＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
細胞毒性ペイロードを含有する本出願のＡＤＣは、がん細胞の殺傷などの標的細胞の殺傷に使用され得る。ＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３、ＨＴ２－ＭＭＡＥ、及びＨＢ１－ＤＭ１ ＡＤＣをｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイで試験した。ネイキッドＨＴ２抗体もアッセイに含めた。ＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイでは、ＢｘＰＣ－３膵臓癌細胞、Ｎ８７胃癌細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８乳癌細胞、及びＡ５４９肺癌細胞を使用した。ＢｘＰＣ－３細胞は、低ＨＥＲ２及び高Ｔｒｏｐ－２発現であり、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞は、高ＨＥＲ２及び中Ｔｒｏｐ－２発現であり、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞は、ＨＥＲ２を発現しないが、中レベルのＴｒｏｐ－２を発現し、Ａ５４９細胞は、検出されないレベルのＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を有した。全ての細胞株を好適な培養培地中、５％ＣＯ２の加湿したインキュベーター雰囲気下、３７℃で培養した。細胞を９６ウェル平底プレートにプレーティングした。細胞の播種数は、５００細胞／１００ｕｌ／ウェル～６，０００細胞／１００μｌ／ウェルの範囲であった。細胞を、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で一晩接着させた。ＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３ ＡＤＣまたはＨＴ２抗体をストック溶液から調製し、細胞播種から２４時間後、適切な作業濃度に希釈した。培養培地を用いて、１０倍段階希釈を７点で行った。最終濃度は、１０００ｎＭ～０．００１ｎＭの範囲であった。細胞をＡＤＣとともに７２時間インキュベートした。Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８溶液（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｃｈｉｎａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ、ロット番号ＰＬ７０１）をウェルに３７℃で１～４時間加え、４５０ｎｍでの吸光度をＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）及びＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ５．４．１ソフトウェアを使用して測定した。阻害パーセントは、次式：（試験した試料の平均吸光度／対照試料の平均吸光度）×１００によって算出した。全ての細胞アッセイについて、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７の３パラメーターカーブフィッティングを使用して用量反応曲線を生成した。
表２は、ＢｘＰＣ－３、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、及びＡ５４９細胞におけるＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の発現レベル、ならびに各被験物質のＩＣ５０をまとめたものである。殺傷曲線を図９Ａに示した。結果は、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体ＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３が、異なるレベルのＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を発現する全てのがん細胞を効果的に殺傷することを示している。ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２陰性のＡ５４９細胞では、ＩＣ５０は、全てのＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３で算出することができず、特異的な殺傷活性が達成されなかったことを示している。ネイキッドＨＴ２抗体は、試験した全ての細胞株で特異的な殺傷活性を持たなかった。
Figure 2024504390000003
ＨＴ２－ＭＭＡＥのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイでは、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８乳癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞、ＳＫ－ＢＲ－３卵巣癌細胞、及びＡ５４９肺癌細胞を使用した。ＨＴ２（ＨＴ００２）－ＭＭＡＥを、親の単一特異性抗体ハーセプチンＡＤＣ及びＡ１，２Ｘ４－ＭＭＡＥ ＡＤＣと直接試験した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを上記の手順に従って実施した。
表３は、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＳＫ－ＢＲ－３、及びＡ５４９細胞におけるＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２の発現レベル、ならびに各被験物質のＩＣ５０をまとめたものである。殺傷曲線を図９Ｂに示した。Ｔｒｏｐ－２のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞において、ハーセプチン－ＭＭＡＥは、特異的殺傷を示さず、ＨＴ００２－ＭＭＡＥは、Ａ１，２Ｘ４－ＭＭＡＥと比較して弱い細胞毒性を有した。３つのＡＤＣは全て、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方を発現するＳＫ－ＢＲ－３細胞に対して強力であった。
結果は、抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体ＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３が、異なるレベルのＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２を発現する全てのがん細胞を効果的に殺傷することを示している。ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２陰性のＡ５４９細胞では、ＩＣ５０は、全てのＨＴ２－ＢＩ－Ｐ２０３で算出することができず、特異的な殺傷活性が達成されなかったことを示している。ネイキッドＨＴ２抗体は、試験した全ての細胞株で特異的な殺傷活性を持たなかった。ＨＥＲ２及びＴｒｏｐ－２陰性のＡ５４９細胞では、ＩＣ５０は、３つのＡＤＣ全てで、２００ｎＭを超えるか、または算出することができず、特異的な殺傷活性が達成されなかったことを示している。
Figure 2024504390000004
ＨＢ１－ＤＭ１のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイでは、ＢｘＰＣ－３膵臓癌細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８乳癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞、及びＳＫ－ＢＲ－３卵巣癌細胞を使用した。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞は、Ｔｒｏｐ－２のみを発現し、ＬｎＣａＰ細胞は、ＨＥＲ２のみを発現し、ＳＫ－ＢＲ－３細胞は、ＨＥＲ２とＴｒｏｐ－２の両方の発現を有する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを上記の手順に従って実施した。
表４は、各細胞株におけるＨＢ１－ＤＭ１のＩＣ５０をまとめたものである。殺傷曲線を図９Ｃに示した。ＨＢ１－ＤＭ１ ＡＤＣは、ＳＫ－ＢＲ－３細胞に対して最も強力であり、１ｎＭ未満のＩＣ５０値をもたらした。
Figure 2024504390000005
実施例６
二重特異性ＡＤＣのｉｎ ｖｉｖｏ活性
抗ＨＥＲ２／Ｔｒｏｐ－２二重特異性抗体ＨＴ００２－ＢＩ－Ｐ２０３ ＡＤＣの抗腫瘍活性を、Ｔｒｏｐ－２陽性／Ｈｅｒ２陰性のＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＴｒｏｐ－２陽性／ＨＥＲ２陽性のＮＣＩ－Ｎ８７異種移植モデルを使用してマウス対象で評価した。５００万個のＢｘＰＣ３またはＮＣＩ－Ｎ８７細胞を培養フラスコから採取し、６～７週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍を実験期間を通して週２回測定し、腫瘍体積を次式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（縦×横２）／２を使用して算出した。
ＢｘＰＣ３モデルで試験したＡＤＣを異なるＤＡＲでコンジュゲートし、Ａ１，２Ｘ４－ＢＩ－Ｐ２０３は７．２のＤＡＲ、Ｔ－ＤＭ１は３．２のＤＡＲ、ＨＴ００２－ＢＩ－Ｐ２０３は５．２のＤＡＲを有した。ＡＤＣを単回ボーラス投与として静脈内投与した。
図１０Ａは、ｉｎ ｖｉｖｏ ＢｘＰＣ－３異種移植試験の結果を示す。示されるように、本出願の二重特異性ＡＤＣを３ｍｇ／ｋｇで単回投与すると、持続的な疾患安定が誘導され、単一特異性抗体Ｔｒｏｐ－２ ＡＤＣまたはＴ－ＤＭ１の３ｍｇ／ｋｇ投与では、腫瘍成長の抑制がもたらされた。図１０Ｂに示されるように、ビヒクル対照及びＩｇＧアイソタイプＡＤＣ対照と比較して、全てのＡＤＣ処置で有意な体重変化はなかった。
二重特異性ＡＤＣの抗腫瘍活性を更に評価するために、Ｎ８７異種移植モデルにおいて、ＨＴ００２－ＢＩ－Ｐ２０３を１．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇの２つの用量レベルで試験した。ＡＤＣを単回ボーラス投与として静脈内投与した。
図１１Ａは、ｉｎ ｖｉｖｏ Ｎ８７異種移植試験の結果を示す。結果は、二重特異性ＡＤＣが、用量５ｍｇ／ｋｇの単回投与で持続的な疾患安定を達成できたことを示している。図１１Ｂに示されるように、ビヒクル対照及びＩｇＧアイソタイプＡＤＣ対照と比較して、全てのＡＤＣ処置で有意な体重変化はなかった。
本明細書で開示及び特許請求される全ての物品及び方法は、本開示に照らして、過度な実験を行うことなく、実行及び達成することができる。本出願の物品及び方法を好ましい実施形態の観点から記載してきたが、本出願の趣旨及び範囲から逸脱することなく、変形が物品及び方法に適用され得ることは、当業者には明らかであろう。当業者に明らかなそのような変形及び等価物は全て、現存するものであれ後に開発されるものであれ、添付される特許請求の範囲によって定義される本出願の趣旨及び範囲内であるものとみなされる。本明細書で言及される特許、特許出願、及び刊行物は全て、本出願が属する技術分野の当業者のレベルを示すものである。特許、特許出願、及び刊行物は全て、あらゆる目的のために、それぞれ個々の刊行物について、あらゆる目的のために、その全体が参照により援用されることが具体的かつ個別に示されている場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。本明細書において例示的に記載される本出願は、本明細書で具体的に開示されていない任意の要素（複数可）がない状態でも好適に実施され得る。したがって、本出願は、好ましい実施形態及び任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書で開示される概念の改変及び変形は、当業者によって利用され得、そのような改変及び変形は、添付される特許請求の範囲によって定義される本出願の範囲内であるとみなされることが理解されるべきである。
実施例７
ＨＴ００２－ＭＭＡＥ（ＤＡＲ３．５）を、ＢｘＰＣ－３異種移植モデルにおいて、Ｔ－ＤＭ１に対して試験した。コンジュゲートのない二重特異性抗体ＨＴ００２も含めた。試験物質を０日目及び７日目に静脈内投与した。
図１２は、ｉｎ ｖｉｖｏ ＢｘＰＣ－３異種移植試験の結果を示す。示されるように、本出願の二重特異性ＡＤＣ ＨＴ００２を５ｍｇ／ｋｇで投与すると、試験終了（４３日目）まで持続する腫瘍退縮がもたらされ、用量５ｍｇ／ｋｇのＴ－ＤＭ１は、腫瘍成長の抑制を誘導した。腫瘍成長の抑制は、コンジュゲートのない二重特異性抗体ＨＴ００２の投与でも観察された。
実施例８
二重特異性抗体ＡＤＣのＨＴ００２－ＭＭＡＥを、親抗体であるＡＤＣのＡ１，２Ｘ４－ＭＭＡＥ及びハーセプチン－ＭＭＡＥとともに、ＪＩＭＴ－１乳癌細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイで試験した。コンジュゲートのないＨＴ００２抗体及びハーセプチンもアッセイに含めた。ＪＩＭＴ－１細胞は、ハーセプチン耐性乳癌を有する患者に由来し、中程度から高レベルのＴｒｏｐ－２及びＨＥＲ２を発現する。殺傷曲線を図１３に示した。結果は、二重特異性抗体ＡＤＣ ＨＴ００２－ＭＭＡＥがＪＩＭＴ－１細胞成長を効果的に阻害したことを示しており、０．４３０１ｎＭというＩＣ５０値は、それぞれ０．３８７４ｎＭ及び０．５０４３ｎＭのＩＣ５０値を有した２つの親抗体ＡＤＣと同様であった。コンジュゲートのない二重特異性抗体ＨＴ００２は、単独で、ＪＩＭＴ－１の細胞成長を０．１８５３ｎＭのＩＣ５０値で抑制することができた。予想したとおり、ハーセプチンは、この細胞株において最小の抗増殖活性であった。
Figure 2024504390000006
Figure 2024504390000007
Figure 2024504390000008
Figure 2024504390000009
Figure 2024504390000010
Figure 2024504390000011
Figure 2024504390000012
Figure 2024504390000013
Figure 2024504390000014

Claims (48)

  1. ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、構築物。
  2. 前記ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが、第１の重鎖可変領域（ＶＨ－１）及び第１の軽鎖可変領域（ＶＬ－１）を含み、及び／または前記ヒトＴｒｏｐ－２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインが、第２の重鎖可変領域（ＶＨ－２）及び第２の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む、請求項１に記載の構築物。
  3. ａ）前記ＶＨ－２が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
    前記ＶＬ－２が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含むか、
    ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
    前記ＶＬ－２が、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、
    請求項２に記載の構築物。
  4. 前記ＶＨ－１が、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、
    前記ＶＬ－１が、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、
    請求項２または請求項３に記載の構築物。
  5. ａ）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号７に記載される配列を有する前記ＶＨ－１内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号８に記載される配列を有する前記ＶＬ－１内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、及び／または
    ｂ１）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号４に記載される配列を有する前記ＶＨ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号５に記載される配列を有する前記ＶＬ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むか、または
    ｂ２）ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３が、配列番号１０に記載される配列を有する前記ＶＨ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３が、配列番号１１に記載される配列を有する前記ＶＬ－２内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
    請求項２～４のいずれか１項に記載の構築物。
  6. 前記第１の抗原結合ドメイン及び／または前記第２の抗原結合ドメインが、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の構築物。
  7. 前記第１の抗原結合ドメインが、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含む、請求項６に記載の構築物。
  8. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記ＶＨ－２及びＶＬ－２を含むｓｃＦｖを含む、請求項７に記載の構築物。
  9. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖の一方または両方に融合される、請求項８に記載の構築物。
  10. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の軽鎖の一方または両方に融合される、請求項８に記載の構築物。
  11. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＮ末端に融合される、請求項９または１０に記載の構築物。
  12. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＣ末端に融合される、請求項９～１１のいずれか１項に記載の構築物。
  13. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体に第１のリンカーを介して融合される、請求項９～１２のいずれか１項に記載の構築物。
  14. 前記第１の抗原結合ドメインが、前記ＶＨ－１及びＶＬ－１を含むｓｃＦｖを含む、請求項６に記載の構築物。
  15. 前記第２の抗原結合ドメインが、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含む、請求項１４に記載の構築物。
  16. 前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖の一方または両方に融合される、請求項１５に記載の構築物。
  17. 前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の軽鎖の一方または両方に融合される、請求項１５に記載の構築物。
  18. 前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＮ末端に融合される、請求項１６または１７に記載の構築物。
  19. 前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の重鎖または軽鎖の一方または両方のＣ末端に融合される、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の構築物。
  20. 前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体に第１のリンカーを介して融合される、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の構築物。
  21. 前記第１のリンカーが、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるＧＳリンカーである、請求項１３または請求項２０に記載の構築物。
  22. 前記第１の抗原結合ドメイン中の前記ｓｃＦｖの前記ＶＨ－１及びＶＬ－１、または前記第２の抗原結合ドメイン中の前記ｓｃＦｖの前記ＶＨ－２及びＶＬ－２が、第２のリンカーを介して互いに連結される、請求項８～２１のいずれか１項に記載の構築物。
  23. 前記第２のリンカーが、配列番号２４、２５、及び４４～５４からなる群から選択されるＧＳリンカーである、請求項２２に記載の構築物。
  24. ａ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合されるか、
    ｂ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合されるか、
    ｃ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合されるか、
    ｄ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合されるか、または
    ｅ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－１と、２）配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３６に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＨ－２と、２）配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、及び配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合される、
    請求項２～２３のいずれか１項に記載の構築物。
  25. ａ）前記ＶＨ－１が、配列番号７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－１が、配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、
    ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－２が、配列番号５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む、
    請求項２～２４のいずれか１項に記載の構築物。
  26. ａ）前記ＶＨ－１が、配列番号７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－１が、配列番号８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、
    ｂ）前記ＶＨ－２が、配列番号１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含み、前記ＶＬ－２が、配列番号１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアントを含む、
    請求項２～２４のいずれか１項に記載の構築物。
  27. ａ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合されるか、
    ｂ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合されるか、
    ｃ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合されるか、
    ｄ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＣ末端に融合されるか、または
    ｅ）前記第１の抗原結合ドメインが、１）配列番号７、５５、もしくは５６に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－１と、２）配列番号８もしくは５７に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－１とを含む、ｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインが、１）配列番号１０もしくは５８に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＨ－２と、２）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む前記ＶＬ－２とを含む、Ｆｃ断片を含む全長抗体を含み、前記第１の抗原結合ドメインが、前記全長抗体の両重鎖のＮ末端に融合される、
    請求項２～２４のいずれか１項に記載の構築物。
  28. 前記Ｆｃ断片が、任意選択によりＩｇＧ定常ドメインを含む重鎖定常ドメインと、任意選択によりカッパ定常領域またはラムダ定常領域を含む軽鎖定常ドメインとを含む、請求項７～１３及び１５～２７のいずれか１項に記載の構築物。
  29. ａ）配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｂ）配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｃ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｄ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｅ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｆ）配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｇ）配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、
    ｈ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、または
    ｉ）配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含む２つの重鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む２つの軽鎖もしくは少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むバリアント
    を含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載の構築物。
  30. 前記構築物が、ＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ－２発現細胞に特異的に結合し、標的（複数可）に結合すると、内在化を誘導する、請求項１～２９のいずれか１項に記載の構築物。
  31. 前記構築物が、二重特異性抗体もしくはその結合断片であるか、またはそれらを含み、任意選択により、前記二重特異性抗体は、ヒト化抗体である、請求項１～３０のいずれか１項に記載の構築物。
  32. 前記構築物が、式：Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｎを有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、式中、Ａｂは、前記二重特異性抗体またはその結合断片であり、Ｌは、リンカーまたは直接結合であり、Ｄは、治療剤であり、ｎは、１～１０の整数である、請求項３１に記載の構築物。
  33. 前記治療剤が、細胞傷害性剤である、請求項３２に記載の構築物。
  34. 前記細胞傷害性剤が、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である、請求項３３に記載の構築物。
  35. 前記細胞傷害性剤が、マイタンシノイド（ＤＭ１）またはその誘導体である、請求項３３に記載の構築物。
  36. ヒトＴｒｏｐ２及びヒトＨＥＲ２に特異的に結合する構築物であって、請求項２～３５のいずれか１項に記載の構築物と競合的にヒトＨＥＲ２及び／またはＴｒｏｐ２に結合する、前記構築物。
  37. 請求項１～３６のいずれか１項に記載の構築物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  38. 請求項１～３１及び３６のいずれか１項に記載の構築物をコードする、単離された核酸。
  39. 請求項３８に記載の単離された核酸を含む、ベクター。
  40. 請求項３８に記載の単離された核酸または請求項３９に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
  41. 構築物を産生する方法であって、
    ａ）請求項４０に記載の単離された宿主細胞を、前記構築物またはその一部分を発現するのに有効な条件下で培養することと、
    ｂ）前記発現された構築物またはその一部分を前記宿主細胞から得ることと
    を含む、前記方法。
  42. 対象の疾患または状態を治療する方法であって、前記対象に、請求項１～３６のいずれか１項に記載の構築物または請求項３７に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  43. 前記疾患または状態が、がんである、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記がんが、Ｔｒｏｐ２陽性及び／またはＨＥＲ２陽性である、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記がんが、Ｔｒｏｐ２中発現もしくは高発現及び／またはＨＥＲ２中発現もしくは高発現である、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記がんが、Ｔｒｏｐ２低発現及び／またはＨＥＲ２低発現である、請求項４３に記載の方法。
  47. 前記がんが、前立腺癌、乳癌、結腸癌、膵臓癌、及び胃癌からなる群から選択される、請求項４３～４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記方法が、第２の治療法を更に含み、任意選択により、前記第２の治療法は、免疫療法、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、ワクチン接種プロトコル、及び幹細胞移植からなる群から選択される、請求項４１～４７のいずれか１項に記載の方法。
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