JP2023085527A - 新規の細胞タグの発現 - Google Patents
新規の細胞タグの発現 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023085527A JP2023085527A JP2023063807A JP2023063807A JP2023085527A JP 2023085527 A JP2023085527 A JP 2023085527A JP 2023063807 A JP2023063807 A JP 2023063807A JP 2023063807 A JP2023063807 A JP 2023063807A JP 2023085527 A JP2023085527 A JP 2023085527A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- seq
- domain
- polynucleotide
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 920
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 862
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 859
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 487
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 150
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 150
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 150
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 120
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 119
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 113
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 36
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 149
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 109
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 84
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 75
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 75
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 75
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 75
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 69
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 claims description 59
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 57
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 56
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 56
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 54
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 53
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 52
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 52
- 102100035716 Glycophorin-A Human genes 0.000 claims description 47
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 claims description 44
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 claims description 44
- -1 CE A Proteins 0.000 claims description 35
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 35
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 35
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 26
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 26
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims description 26
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 26
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 26
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 claims description 24
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 claims description 24
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 24
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims description 23
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 23
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 18
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 18
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 15
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 15
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 15
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 12
- 102000028180 Glycophorins Human genes 0.000 claims description 12
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 12
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 claims description 11
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 claims description 11
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 claims description 11
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims description 10
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims description 10
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 10
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 10
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 claims description 10
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 10
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 10
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 claims description 10
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 claims description 10
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 10
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 claims description 10
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 10
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 10
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 10
- 101001039269 Rattus norvegicus Glycine N-methyltransferase Proteins 0.000 claims description 10
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims description 10
- 229940014144 folate Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 10
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 10
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 claims description 9
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 9
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 claims description 9
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 9
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 claims description 9
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 9
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 8
- 229950008001 matuzumab Drugs 0.000 claims description 8
- 229960000513 necitumumab Drugs 0.000 claims description 8
- 229950010203 nimotuzumab Drugs 0.000 claims description 8
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 claims description 8
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 8
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 claims description 8
- 229950000815 veltuzumab Drugs 0.000 claims description 8
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 7
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 claims description 7
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 claims description 7
- 229950008250 zalutumumab Drugs 0.000 claims description 7
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 claims description 6
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 229950002140 futuximab Drugs 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229950002756 depatuxizumab Drugs 0.000 claims description 5
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 claims description 5
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 229950001813 laprituximab Drugs 0.000 claims description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 4
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 claims description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 2
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008718 systemic inflammatory response Effects 0.000 claims description 2
- 102100031491 Arylsulfatase B Human genes 0.000 claims 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 claims 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 abstract description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 abstract description 2
- 206010045170 Tumour lysis syndrome Diseases 0.000 abstract 1
- 208000010380 tumor lysis syndrome Diseases 0.000 abstract 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 117
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 79
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 79
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 79
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 54
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 53
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 42
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 41
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 37
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 32
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 32
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 28
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 28
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 27
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 20
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 19
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 18
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 18
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 18
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 17
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 17
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 16
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 16
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 16
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 15
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 15
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 15
- 101000809875 Homo sapiens TYRO protein tyrosine kinase-binding protein Proteins 0.000 description 14
- 102100038717 TYRO protein tyrosine kinase-binding protein Human genes 0.000 description 14
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 13
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 11
- 102100029360 Hematopoietic cell signal transducer Human genes 0.000 description 11
- 101000990188 Homo sapiens Hematopoietic cell signal transducer Proteins 0.000 description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 11
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 11
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 11
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 10
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 8
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 8
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 7
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 7
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 7
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 description 7
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 6
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 6
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 6
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 6
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 description 6
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 6
- 102000008607 Integrin beta3 Human genes 0.000 description 6
- 108010020950 Integrin beta3 Proteins 0.000 description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 6
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 5
- 101710114790 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000710127 Cricket paralysis virus Species 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 4
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 4
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 4
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 4
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[6-[3-[(2r)-2-amino-2-carboxyethyl]sulfanyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]hexanoyl-methylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]-methylamino]-3-methoxy-5-methylheptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-3-met Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H]1CCCN1C(=O)C[C@H]([C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CCCCCN1C(C(SC[C@H](N)C(O)=O)CC1=O)=O)C(C)C)OC)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N 0.000 description 3
- 101100136147 Arabidopsis thaliana PER10 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010088141 Argonaute Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 3
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 3
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 3
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 3
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 3
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 3
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 101100180399 Mus musculus Izumo1r gene Proteins 0.000 description 3
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 101150010944 P10 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 3
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 3
- 102100033725 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 16 Human genes 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 3
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 229950004079 denintuzumab mafodotin Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCCC1 WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 2
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AILRADAXUVEEIR-UHFFFAOYSA-N 5-chloro-4-n-(2-dimethylphosphorylphenyl)-2-n-[2-methoxy-4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)piperidin-1-yl]phenyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound COC1=CC(N2CCC(CC2)N2CCN(C)CC2)=CC=C1NC(N=1)=NC=C(Cl)C=1NC1=CC=CC=C1P(C)(C)=O AILRADAXUVEEIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001036151 Aichi virus 1 Species 0.000 description 2
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 101100504181 Arabidopsis thaliana GCS1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000008682 Argonaute Proteins Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 102100021677 Baculoviral IAP repeat-containing protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 241000922536 Blackcurrant reversion virus Species 0.000 description 2
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 2
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 2
- 101000801254 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 16 Proteins 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 241000829111 Human polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 241000701460 JC polyomavirus Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 2
- 241000745542 Leishmania RNA virus 1 Species 0.000 description 2
- 102000003959 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 102100023302 Myelin-oligodendrocyte glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000936948 Rhopalosiphum padi virus Species 0.000 description 2
- 241000837158 Senecavirus A Species 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 2
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000723792 Tobacco etch virus Species 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 241001480150 Triatoma virus Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229960001686 afatinib Drugs 0.000 description 2
- ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N afatinib Chemical compound N1=CN=C2C=C(O[C@@H]3COCC3)C(NC(=O)/C=C/CN(C)C)=CC2=C1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 ULXXDDBFHOBEHA-CWDCEQMOSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229950004272 brigatinib Drugs 0.000 description 2
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 2
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 2
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 2
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 2
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 2
- 229950007440 icotinib Drugs 0.000 description 2
- QQLKULDARVNMAL-UHFFFAOYSA-N icotinib Chemical compound C#CC1=CC=CC(NC=2C3=CC=4OCCOCCOCCOC=4C=C3N=CN=2)=C1 QQLKULDARVNMAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 229940050282 inebilizumab-cdon Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229950005751 ocrelizumab Drugs 0.000 description 2
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 2
- 229960003278 osimertinib Drugs 0.000 description 2
- DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N osimertinib Chemical compound COC1=CC(N(C)CCN(C)C)=C(NC(=O)C=C)C=C1NC1=NC=CC(C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=N1 DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 108010078373 tisagenlecleucel Proteins 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- JFCFGYGEYRIEBE-YVLHJLIDSA-N wob38vs2ni Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(=O)CCC(C)(C)S)CC(=O)N1C)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 JFCFGYGEYRIEBE-YVLHJLIDSA-N 0.000 description 2
- OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C([C@@](N)(C(O)=O)C)=CC=CC2=C1 OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- QFQYGJMNIDGZSG-YFKPBYRVSA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-azaniumylpropanoate Chemical compound CC(=O)NCSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QFQYGJMNIDGZSG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- BFNDLDRNJFLIKE-ROLXFIACSA-N (2s)-2,6-diamino-6-hydroxyhexanoic acid Chemical compound NC(O)CCC[C@H](N)C(O)=O BFNDLDRNJFLIKE-ROLXFIACSA-N 0.000 description 1
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CNC(C(=O)O)CC2=C1 BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KNQHBAFIWGORKW-UHFFFAOYSA-N 2,3-diamino-3-oxopropanoic acid Chemical compound NC(=O)C(N)C(O)=O KNQHBAFIWGORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHVGNTVUSQUXPS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-hydroxy-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)C(O)C1=CC=CC=C1 VHVGNTVUSQUXPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JINGUCXQUOKWKH-UHFFFAOYSA-N 2-aminodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(N)C(O)=O JINGUCXQUOKWKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- YXDGRBPZVQPESQ-QMMMGPOBSA-N 4-[(2s)-2-amino-2-carboxyethyl]benzoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 YXDGRBPZVQPESQ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GTVVZTAFGPQSPC-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenylalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101710125690 50S ribosomal protein L17, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 241000192542 Anabaena Species 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100037152 BAG family molecular chaperone regulator 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710089792 BAG family molecular chaperone regulator 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091007065 BIRCs Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102100023995 Beta-nerve growth factor Human genes 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100023702 C-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 description 1
- 102100023705 C-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100023703 C-C motif chemokine 15 Human genes 0.000 description 1
- 102100023700 C-C motif chemokine 16 Human genes 0.000 description 1
- 102100023701 C-C motif chemokine 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100036848 C-C motif chemokine 20 Human genes 0.000 description 1
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 description 1
- 102100036850 C-C motif chemokine 23 Human genes 0.000 description 1
- 102100036849 C-C motif chemokine 24 Human genes 0.000 description 1
- 102100021933 C-C motif chemokine 25 Human genes 0.000 description 1
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 1
- 102100021936 C-C motif chemokine 27 Human genes 0.000 description 1
- 102100021942 C-C motif chemokine 28 Human genes 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100025279 C-X-C motif chemokine 11 Human genes 0.000 description 1
- 102100025277 C-X-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 description 1
- 102100025250 C-X-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100039396 C-X-C motif chemokine 16 Human genes 0.000 description 1
- 102100039435 C-X-C motif chemokine 17 Human genes 0.000 description 1
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036189 C-X-C motif chemokine 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100036150 C-X-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036153 C-X-C motif chemokine 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100040840 C-type lectin domain family 7 member A Human genes 0.000 description 1
- 101150049756 CCL6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150011672 CCL9 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010005327 CD19-specific chimeric antigen receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010046080 CD27 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150043687 CLPB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100494773 Caenorhabditis elegans ctl-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 102100025466 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Human genes 0.000 description 1
- 101150075117 Ccl12 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 102100021198 Chemerin-like receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000272194 Ciconiiformes Species 0.000 description 1
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023774 Cold-inducible RNA-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 1
- 108010002947 Connectin Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 102100032857 Cyclin-dependent kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710106279 Cyclin-dependent kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 102100035298 Cytokine SCM-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 101100125027 Dictyostelium discoideum mhsp70 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100018928 Drosophila melanogaster InR gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037024 E3 ubiquitin-protein ligase XIAP Human genes 0.000 description 1
- 241001046947 Ectropis obliqua Species 0.000 description 1
- 108700041152 Endoplasmic Reticulum Chaperone BiP Proteins 0.000 description 1
- 102100021451 Endoplasmic reticulum chaperone BiP Human genes 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 102000050554 Eph Family Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008815 Eph receptors Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012858 Eukaryotic Initiation Factor-4G Human genes 0.000 description 1
- 108010057192 Eukaryotic Initiation Factor-4G Proteins 0.000 description 1
- 102100039737 Eukaryotic translation initiation factor 4 gamma 2 Human genes 0.000 description 1
- 101150089023 FASLG gene Proteins 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150006710 FLO8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100112369 Fasciola hepatica Cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000888214 Flaveria pringlei Serine hydroxymethyltransferase 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000710938 Giardiavirus Species 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000578422 Graphosoma lineatum Species 0.000 description 1
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010093061 HLA-DPA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 1
- 101150031823 HSP70 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700739 Hepadnaviridae Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 235000005206 Hibiscus Nutrition 0.000 description 1
- 241000519953 Hibiscus chlorotic ringspot virus Species 0.000 description 1
- 235000007185 Hibiscus lunariifolius Nutrition 0.000 description 1
- 244000284380 Hibiscus rosa sinensis Species 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 241000228402 Histoplasma Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000896157 Homo sapiens Baculoviral IAP repeat-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000978379 Homo sapiens C-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 description 1
- 101000978381 Homo sapiens C-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 description 1
- 101000978376 Homo sapiens C-C motif chemokine 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000978375 Homo sapiens C-C motif chemokine 16 Proteins 0.000 description 1
- 101000978371 Homo sapiens C-C motif chemokine 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 1
- 101000713099 Homo sapiens C-C motif chemokine 20 Proteins 0.000 description 1
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 description 1
- 101000713081 Homo sapiens C-C motif chemokine 23 Proteins 0.000 description 1
- 101000713078 Homo sapiens C-C motif chemokine 24 Proteins 0.000 description 1
- 101000897486 Homo sapiens C-C motif chemokine 25 Proteins 0.000 description 1
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 1
- 101000897494 Homo sapiens C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 1
- 101000897477 Homo sapiens C-C motif chemokine 28 Proteins 0.000 description 1
- 101000797762 Homo sapiens C-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000797758 Homo sapiens C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000946794 Homo sapiens C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000858060 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 11 Proteins 0.000 description 1
- 101000858064 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 description 1
- 101000858068 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 description 1
- 101000889133 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 16 Proteins 0.000 description 1
- 101000889048 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 17 Proteins 0.000 description 1
- 101000889128 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000947193 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000947186 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000947177 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 101100383038 Homo sapiens CD19 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914337 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- 101000750094 Homo sapiens Chemerin-like receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000906744 Homo sapiens Cold-inducible RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101000804771 Homo sapiens Cytokine SCM-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 101000978392 Homo sapiens Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 101001034811 Homo sapiens Eukaryotic translation initiation factor 4 gamma 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101001034829 Homo sapiens Interferon alpha-10 Proteins 0.000 description 1
- 101001034828 Homo sapiens Interferon alpha-14 Proteins 0.000 description 1
- 101001034835 Homo sapiens Interferon alpha-16 Proteins 0.000 description 1
- 101001034834 Homo sapiens Interferon alpha-17 Proteins 0.000 description 1
- 101000959794 Homo sapiens Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001034833 Homo sapiens Interferon alpha-21 Proteins 0.000 description 1
- 101000959708 Homo sapiens Interferon alpha-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000959704 Homo sapiens Interferon alpha-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000959714 Homo sapiens Interferon alpha-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000961126 Homo sapiens Interferon alpha-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000999391 Homo sapiens Interferon alpha-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001002470 Homo sapiens Interferon lambda-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000853000 Homo sapiens Interleukin-26 Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000804764 Homo sapiens Lymphotactin Proteins 0.000 description 1
- 101000634196 Homo sapiens Neurotrophin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000996663 Homo sapiens Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101100519221 Homo sapiens PDGFB gene Proteins 0.000 description 1
- 101000947178 Homo sapiens Platelet basic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000582950 Homo sapiens Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101600132127 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 (isoform 1) Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101001040808 Homo sapiens Serine hydroxymethyltransferase, cytosolic Proteins 0.000 description 1
- 101000772110 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 21 Proteins 0.000 description 1
- 101000606204 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 101710192051 Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 1
- 102100039734 Interferon alpha-10 Human genes 0.000 description 1
- 102100039733 Interferon alpha-14 Human genes 0.000 description 1
- 102100039728 Interferon alpha-16 Human genes 0.000 description 1
- 102100039730 Interferon alpha-17 Human genes 0.000 description 1
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039729 Interferon alpha-21 Human genes 0.000 description 1
- 102100039949 Interferon alpha-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039948 Interferon alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100040007 Interferon alpha-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100039350 Interferon alpha-7 Human genes 0.000 description 1
- 102100036532 Interferon alpha-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100026688 Interferon epsilon Human genes 0.000 description 1
- 101710147309 Interferon epsilon Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100022469 Interferon kappa Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 1
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 102100039879 Interleukin-19 Human genes 0.000 description 1
- 108050009288 Interleukin-19 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 1
- 102100036679 Interleukin-26 Human genes 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 description 1
- 108091007973 Interleukin-36 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 241001163131 Israeli acute paralysis virus Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N L-homophenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=CC=CC=C1 JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- VHVGNTVUSQUXPS-YUMQZZPRSA-N L-threo-3-phenylserine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 VHVGNTVUSQUXPS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102000010954 Link domains Human genes 0.000 description 1
- 108050001157 Link domains Proteins 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 102100022699 Lymphoid enhancer-binding factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090001093 Lymphoid enhancer-binding factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100035304 Lymphotactin Human genes 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 101100222387 Mus musculus Cxcl15 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 102100031789 Myeloid-derived growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101100005271 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100029268 Neurotrophin-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033857 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000208181 Pelargonium Species 0.000 description 1
- 241001492219 Pelargonium flower break virus Species 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 102100036154 Platelet basic protein Human genes 0.000 description 1
- 102100030304 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100040990 Platelet-derived growth factor subunit B Human genes 0.000 description 1
- 241001527110 Plautia Species 0.000 description 1
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 101100437782 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) BOI1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100066910 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) FLO1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100282741 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GIC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100078101 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MSN1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100132884 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) NCE101 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 102100021225 Serine hydroxymethyltransferase, cytosolic Human genes 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010052160 Site-specific recombinase Proteins 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 241001279361 Stachybotrys Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 229940100514 Syk tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100029487 T cell receptor alpha variable 21 Human genes 0.000 description 1
- 102100039739 T cell receptor beta variable 5-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108700042805 TRU-015 Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102100026260 Titin Human genes 0.000 description 1
- 241000723848 Tobamovirus Species 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 108091061763 Triple-stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700031544 X-Linked Inhibitor of Apoptosis Proteins 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- JINBYESILADKFW-UHFFFAOYSA-N aminomalonic acid Chemical compound OC(=O)C(N)C(O)=O JINBYESILADKFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N csfv Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 108010025838 dectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150052825 dnaK gene Proteins 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000006203 ethylation Effects 0.000 description 1
- 238000006200 ethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006126 farnesylation Effects 0.000 description 1
- 229940029303 fibroblast growth factor-1 Drugs 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000006127 geranylation Effects 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N indoline-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 108010080375 interferon kappa Proteins 0.000 description 1
- 108010018844 interferon type III Proteins 0.000 description 1
- 108090000681 interleukin 20 Proteins 0.000 description 1
- 102000004114 interleukin 20 Human genes 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 108090000237 interleukin-24 Proteins 0.000 description 1
- 102000003898 interleukin-24 Human genes 0.000 description 1
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000006122 isoprenylation Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000006144 lipoylation Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 108700024542 myc Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000026792 palmitoylation Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940079889 pyrrolidonecarboxylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102220044405 rs587781277 Human genes 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000003584 silencer Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229950001603 taplitumomab paptox Drugs 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N tert-butylglycine Chemical compound CC(C)(C)C(N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N trans-3-hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@H]1CC[NH2+][C@@H]1C([O-])=O BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N trans-4-Hydroxy-L-proline Natural products O[C@@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- JOPDZQBPOWAEHC-UHFFFAOYSA-H tristrontium;diphosphate Chemical compound [Sr+2].[Sr+2].[Sr+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O JOPDZQBPOWAEHC-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5443—IL-15
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70592—CD52
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/10—Protein-tyrosine kinases (2.7.10)
- C12Y207/10001—Receptor protein-tyrosine kinase (2.7.10.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、2017年6月7日
に出願された米国特許仮出願第62/516,639号明細書の利益を主張する。
本出願は、ASCIIフォーマットにおいて、電子的に提出され、参照によりその全体
において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。2018年5月30日に作成された
前記ASCIIコピーは、50471_708_601_SL.txtと名付けられ、4
64,445バイトのサイズである。
。輸血は、最初の種類の、血液悪性腫瘍を処置する細胞療法であった。細胞の単離技術、
誘導技術、および遺伝子導入技術における近年の進歩は、多様な疾患、例えば、がん、心
血管疾患、皮膚疾患、神経疾患、および眼科疾患の処置のための、多様な細胞型(初代細
胞および不死化細胞)の遺伝子改変を可能としている。多くの場合、治療目的の選択され
た細胞の拡大を可能とするのに必要な純度を達成するには、患者における輸注の前に、遺
伝子改変された細胞療法製品を濃縮し、かつ/または非遺伝子改変細胞型または他の細胞
型を消失させることが、極めて重要である。加えて、例えば、サイトカイン、キメラ抗原
受容体(CAR)、およびT細胞受容体(TCR)を使用する養子細胞免疫療法は、腫瘍
細胞の殺滅の方向付けに成功するのに、極めて有望であることが示されている。この新規
の技術は、有望であるが、改変免疫細胞の、腫瘍を保有する個体への投与は、安全性問題
、例えば、CAR-T細胞療法の場合、毒性、腫瘍溶解、およびサイトカイン放出症候群
(すなわち、「サイトカインストーム」)を伴わないことはなかった。養子T細胞免疫療
法によりもたらされる治療的可能性を十分に利用するために、治療時に、サイトカインス
トームなどの副作用を制御することが不可欠である。
本明細書で言及される、全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特
許、または特許出願が、参照により具体的かつ個別に組み込まれることが指し示された場
合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
ド構築物およびポリヌクレオチドが提供される。
リペプチドのトランケート型変異体を含むポリペプチド構築物が提供される。一部の実施
形態では、ポリペプチド構築物は、膜貫通ドメインもしくはその断片、シグナルペプチド
、および/またはペプチドリンカーをさらに含みうる。本明細書ではまた、ポリヌクレオ
チドおよびポリペプチド構築物を発現する操作細胞(engineered cell)も提示される。
操作細胞は、ポリペプチド構築物を、細胞表面において発現し、これにより、一部の実施
形態では、操作細胞を固有に同定する、細胞マーカー(または「細胞タグ」)をもたらし
うる。
ヌクレオチド、天然ポリペプチドのトランケート型変異体と膜貫通ドメインとを含むポリ
ペプチド構築物が提示される。ある特定の実施形態では、トランケート型変異体は、細胞
外ドメインまたはその部分と、膜貫通ドメインまたはその部分とを含む。一部の実施形態
では、ポリペプチド構築物は、異なる天然タンパク質に由来する膜貫通ドメインと、トラ
ンケート型変異体とを含みうる。場合によって、ポリペプチド構築物のトランケート型変
異体である膜貫通ドメインは、1回膜貫通型膜貫通ドメインである。他の場合には、ポリ
ペプチド構築物の膜貫通ドメインは、複数回膜貫通型膜貫通ドメインである。
オチド、細胞表面ポリペプチド(例えば、膜貫通ドメインへと融合させたトランケート型
変異体)を、細胞表面において、第2の細胞表面ポリペプチドへと共役する(coupling)
ことが可能な、膜貫通二量体化ドメインを含むポリペプチド構築物が提示される。ある特
定の実施形態では、膜貫通二量体化ドメインを介して、細胞表面ポリペプチドを共役する
ことは、非二量体化立体配置と比べて、細胞表面ポリペプチドに由来するシグナルを増幅
しうる。
ポリヌクレオチド、異なる天然タンパク質に由来するドメインまたはその断片を含むポリ
ペプチド構築物が提示される。一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリペプチド
構築物は、天然ポリペプチドのトランケート型変異体、膜貫通ドメイン、トランケート型
変異体を、膜貫通ドメインへと接続する、任意選択のペプチドリンカー、およびポリペプ
チド構築物を、細胞表面へと方向付けるシグナルペプチドを含みうる。例えば、一部の実
施形態では、ポリペプチド構築物は、トランケート型変異体またはその断片へと、直接的
にまたは間接的に融合させた膜貫通ドメインまたはその断片と異なる天然タンパク質に由
来するトランケート型変異体またはその断片を含有する。一部の実施形態では、本明細書
で記載されるポリペプチド構築物の特定のドメイン(例えば、細胞外ドメイン)は、キメ
ラであり、異なる天然タンパク質に由来するアミノ酸配列を含有する。
ド構築物であって、膜貫通二量体化ドメインが、細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導
し、細胞表面ポリペプチドが、所定の抗体またはその変異体もしくは断片に結合する、ポ
リペプチド構築物を含む方法および組成物が提示される。本明細書ではまた、本明細書で
記載されるポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド配列も提示される。
のトランケート型変異体を含む細胞タグを含む方法および組成物が提示される。場合によ
って、ポリペプチドのトランケート型変異体は、内因性受容体に結合しない。開示される
トランケート型非免疫原性ポリペプチドは、細胞タグとして、例えば、細胞マーカー、枯
渇マーカー、または殺滅タグとして使用することができる。
現する操作細胞を含む組成物が提示される。場合によって、操作細胞は、キメラ抗原受容
体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、および/またはサイトカインのうちの少なくと
も1つをさらに発現する。
節する方法であって、対象へと、本明細書で開示されるポリヌクレオチド構築物をコード
する遺伝子操作細胞を提供し、対象へと、細胞に結合し、これらの活性を調節する、所定
の結合パートナーをさらに提供するステップを含む方法が提示される。また、方法におけ
る使用のためのシステムおよびキットも提示される。
て、前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、前
記細胞表面ポリペプチドが、所定の抗体またはその変異体もしくは断片に結合する、ポリ
ペプチド構築物が提供される。
Rポリペプチド、CD20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくと
も1つを含む。場合によって、前記細胞表面ポリペプチドは、HER1ポリペプチドを含
み、前記HER1ポリペプチドは、配列番号211、212、213、214、215、
216、または217に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、8
5%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を
含む。一部の場合には、前記HER1ポリペプチドは、配列番号211、212、213
、214、215、216、または217に示される配列を含むポリペプチド配列を含む
。
記CD20ポリペプチドは、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に
示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、
99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。場合によって、前
記CD20ポリペプチドは、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に
示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
前記LNGFRポリペプチドは、配列番号156、配列番号158、または配列番号16
0に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95
%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。場合によって
、前記細胞表面ポリペプチドは、LNGFRポリペプチドを含み、前記LNGFRポリペ
プチドは、配列番号156、配列番号158、または配列番号160に示される配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または9
9.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。
って、前記膜貫通二量体化ドメインは、相補的な二量体化ドメインと共に、ホモ二量体ま
たはヘテロ二量体を形成しうる。一部の場合には、前記膜貫通二量体化ドメインは、少な
くとも1つのシステイン残基を含む。一部の実施形態では、前記膜貫通二量体化ドメイン
は、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、グリコホリンA-イ
ンテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、あるいはCD3ゼ
ータ膜貫通ドメインを含む。場合によって、このような細胞表面ポリペプチドは、少なく
ともHER1ポリペプチドを含む。
では、前記操作細胞は、動物細胞である。一部の場合には、前記動物細胞は、ヒト細胞で
ある。一部の実施形態では、前記ヒト細胞は、T細胞またはNK細胞である。場合によっ
て、前記操作細胞は、Sleeping Beautyトランスポザーゼをさらに含む。
さらに発現する。場合によって、前記操作細胞は、少なくとも1つの、外因性受容体ポリ
ペプチドまたはその断片をさらに発現する。一部の場合には、前記操作細胞は、キメラ抗
原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも
1つをさらに発現する。一部の実施形態では、前記操作細胞は、少なくとも1つのCAR
をさらに発現し、前記CARは、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受
容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、
HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、ED
B-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1
、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF
-R2のうちの少なくとも1つに結合する。
る。一部の場合には、前記組換えサイトカインは、IL-15、mbIL-15、IL-
2、IL-12、およびIL-21のうちの少なくとも1つを含む。一部の実施形態では
、前記ポリペプチド構築物は、ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポリヌ
クレオチドによりコードされる。場合によって、前記ゲノム編集は、少なくとも部位特異
的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む。一部の場合には、前記ポリペプチド構築物は、
前記細胞表面ポリペプチドを、前記膜貫通二量体化ドメインと融合させるリンカーを含む
。場合によって、ポリペプチドのホモ二量体またはヘテロ二量体は、ポリペプチド構築物
を含む。
チド構築物であって、前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量
体化を誘導する、ポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドが提供される。一部
の実施形態では、前記細胞表面ポリペプチドは、内因性受容体に結合しない。場合によっ
て、前記細胞表面ポリペプチドは、任意の内因性シグナル伝達機能またはトラフィッキン
グ機能を含有しない。
、少なくとも1つの配列を含む。一部の実施形態では、前記少なくとも1つの異種遺伝子
は、誘導性プロモーターによりモジュレートされる。場合によって、前記少なくとも1つ
の異種遺伝子は、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイト
カインのうちの少なくとも1つを含む。一部の実施形態では、前記少なくとも1つの異種
遺伝子は、前記CARを含み、前記CARは、CD19、CD33、BCMA、CD44
、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40
、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、
KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、M
AGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、お
よびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する。
によって、前記サイトカインは、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およ
びIL-15とIL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む。一部の実施形
態では、前記サイトカインは、分泌形態である。一部の場合には、前記サイトカインは、
膜結合形態である。
(配列番号16)、SGSGリンカー(配列番号18)、フューリンリンク変異体、およ
びそれらの誘導体からなる群から選択されるポリペプチドリンカーを含む、少なくとも1
つの配列を含む。一部の実施形態では、前記2Aリンカーは、p2Aリンカー、T2Aリ
ンカー、F2Aリンカー、またはE2Aリンカーである。
または前記細胞表面分子を発現する細胞における細胞死を誘導するタグとして作用する。
場合によって、前記細胞表面ポリペプチドは、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペ
プチド、CD20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを
含む。一部の実施形態では、前記膜貫通二量体化ドメインは、グリコホリンA膜貫通ドメ
インまたはその断片もしくは変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ド
メインまたはその断片もしくは変異体、あるいはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む。
は、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターであ
る。一部の実施形態では、非ウイルスベクターは、Sleeping Beautyトラ
ンスポゾンである。場合によって、前記ポリヌクレオチドは、ゲノム編集により、操作細
胞へと組み込まれる。場合によって、前記ゲノム編集は、少なくとも部位特異的セリンリ
コンビナーゼ系の使用を含む。
量体化ドメインと融合させた細胞表面ポリペプチドを含むポリペプチド構築物をコードす
る、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって、前記膜貫通二量体化ドメイン
が、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、前記細胞表面ポリペプチドが、所定
の結合パートナーまたはその変異体もしくは断片に結合する、ステップと;前記遺伝子操
作細胞に結合し、それにより、前記遺伝子操作細胞の活性を調節するのに十分な量で、前
記対象へと、前記所定の結合パートナーを提供するステップとを含む方法が提供される。
一部の実施形態では、前記細胞表面ポリペプチドは、HER1ポリペプチド、LNGFR
ポリペプチド、CD20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも
1つを含む。一部の場合には、前記細胞表面ポリペプチドは、内因性受容体に結合しない
。場合によって、前記膜貫通二量体化ドメインは、相補的な二量体化ドメインと共に、ホ
モ二量体またはヘテロ二量体を形成しうる。一部の実施形態では、前記膜貫通二量体化ド
メインは、少なくとも1つのシステイン残基を含む。一部の場合には、前記膜貫通二量体
化ドメインは、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、グリコホ
リンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、あるい
はCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む。
領域を含む。一部の実施形態では、前記抗体は、モノクローナル抗体、scFv、scF
ab、ダイアボディー、およびラクダ科動物(camelid)抗体のうちの少なくとも1つを
含む。一部の場合には、前記抗体は、リツキシマブ、セツキシマブ、アレムツズマブ、パ
ニツムマブ、およびネシツムマブのうちの少なくとも1つを含む。
を含む。一部の実施形態では、前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つは、少なくと
も1つの、さらなる外因性ポリペプチドをさらに発現する。一部の場合には、前記遺伝子
操作細胞のうちの少なくとも1つは、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TC
R)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つをさらに発現する。場合によって、前
記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つは、少なくとも1つのCARをさらに発現し、
前記CARは、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、
CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結
合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリ
ン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PS
MA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少
なくとも1つに結合する。
の組換えサイトカインをさらに発現する。一部の場合には、前記組換えサイトカインは、
IL-15、mbIL-15、IL-2、IL-12、およびIL-21のうちの少なく
とも1つを含む。場合によって、前記所定の結合パートナーを、サイトカインストームま
たは全身性炎症性応答と関連する、少なくとも1つの症状の軽減を引き起こすのに十分な
量で提供する。一部の実施形態では、前記所定の結合パートナーを、腫瘍溶解症候群と関
連する、少なくとも1つの症状の軽減を引き起こすのに十分な量で提供する。一部の場合
には、前記ポリペプチド構築物は、ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポ
リヌクレオチドによりコードされる。場合によって、前記ゲノム編集は、少なくとも部位
特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む。
るポリヌクレオチドであって、前記トランケート型非免疫原性CD20ポリペプチドが、
内因性受容体に結合しない、ポリヌクレオチドが提供される。
対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または
99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。場合によって、前記CD20ポリ
ペプチドは、配列番号109の配列を含むポリペプチド配列を含む。一部の場合には、前
記CD20ポリペプチドは、天然(native)CD20の、少なくとも50%、60%、7
0%、80%、または90%の結合効率で、前記抗CD20抗体に結合する。一部の実施
形態では、前記抗CD20抗体は、リツキシマブ、セツキシマブ、トシツモマブ、ベルツ
ズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1
つを含む。
ンIVとからなるトランケート型非免疫原性HER1ポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドであって、前記HER1ポリペプチドが、抗HER1抗体に結合し、前記HER
1ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、ポリヌクレオチドが提供される。
インIVのうちの、少なくとも10%、15%、20%、25%、30%、35%、40
%、45%、または50%のトランケーションを含む。
、205、206、207、208、または209に示される配列に対する、少なくとも
70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性
を有するポリペプチド配列を含む。一部の場合には、前記トランケート型HER1ドメイ
ンIVは、配列番号203、204、205、206、207、208、または209に
示される配列を含むポリペプチド配列を含む。一部の実施形態では、前記HER1ドメイ
ンIIIまたはその断片は、配列番号200に示される配列に対する、少なくとも70%
、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有す
るポリペプチド配列を含む。場合によって、前記HER1ドメインIIIは、配列番号2
00に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
ポリペプチドを、前記CD28膜貫通ドメインへと共役するためのペプチドリンカーとを
さらにコードする。場合によって、前記ポリヌクレオチドは、配列番号57に示される配
列を含むポリペプチド配列を含むポリペプチド構築物をコードする。一部の実施形態では
、前記抗HER1抗体は、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマ
ブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パ
ニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む。
るポリヌクレオチドであって、前記トランケート型非免疫原性CD52ポリペプチドが、
内因性受容体に結合せず、前記CD52ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、ポリ
ヌクレオチドが提供される。
、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.
5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。一部の場合には、前記CD52ポリペプ
チドは、配列番号143に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
、少なくとも1つの配列をさらに含む細胞内で発現させる。一部の実施形態では、前記少
なくとも1つの異種遺伝子は、誘導性プロモーターによりモジュレートされる。一部の場
合には、前記少なくとも1つの異種遺伝子は、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容
体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つを含む。一部の実施形態では
、前記少なくとも1つの異種遺伝子は、CARを含み、前記CARは、CD19、CD3
3、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、E
GP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3
、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC
-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRv
III、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する。
の実施形態では、前記サイトカインは、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21
、およびIL-15とIL-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む。
場合によって、前記サイトカインは、分泌形態である。一部の場合には、前記サイトカイ
ンは、膜結合形態である。
ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベク
ターである。一部の場合には、前記非ウイルスベクターは、Sleeping Beau
tyトランスポゾンである。一部の実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、ゲノム編集
により、操作細胞へと組み込まれる。一部の場合には、前記ゲノム編集は、少なくとも部
位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む。場合によって、操作細胞は、ポリヌクレ
オチドをコードする。場合によって、操作細胞は、T細胞またはNK細胞である。場合に
よって、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドをコードする。
オチドを含む操作細胞を投与するステップを含む方法が提示される。一部の実施形態では
、方法は、前記操作細胞上で発現させたポリペプチドへの結合が可能な、少なくとも1つ
の結合パートナーを投与するステップをさらに含む。場合によって、前記結合パートナー
は、抗体である。
へと、第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドと、第2のトランケート型非免疫原
性ポリペプチドとを含むキメラポリペプチドである細胞表面ポリペプチドを含むポリペプ
チド構築物をコードする、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって、前記細
胞表面ポリペプチドが、少なくとも1つの所定の結合パートナーまたはその変異体もしく
は断片に結合する、ステップと;前記遺伝子操作細胞に結合し、これにより、これらの活
性を調節するのに十分な量で、前記対象へと、前記所定の結合パートナーを提供するステ
ップとを含む方法が提示される。
ファミリーのメンバーの断片または誘導体を含む。場合によって、前記第2のトランケー
ト型非免疫原性ポリペプチドは、EGFRファミリーのメンバーの断片または誘導体を含
む。一部の場合には、前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドは、HER1ポ
リペプチドを含む。一部の実施形態では、前記HER1ポリペプチドは、配列番号211
、212、213、214、215、216、または217に示される配列に対する、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%
の同一性を有するポリペプチド配列を含む。一部の実施形態では、前記HER1ポリペプ
チドは、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示
される配列を含むポリペプチド配列を含む。場合によって、前記HER1ポリペプチドは
、配列番号211に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
プチド、ErbB3ポリペプチド、およびErbB4ポリペプチドのうちの少なくとも1
つを含む。一部の実施形態では、前記ポリペプチド構築物は、配列番号89、配列番号9
3、配列番号97、配列番号101、または配列番号105に示される配列に対する、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%
の同一性を有するポリペプチド配列を含む。
リペプチドに結合する。一部の場合には、前記少なくとも1つの所定の結合パートナーは
、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラ
プリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、およびザル
ツムマブのうちの少なくとも1つを含む。場合によって、前記少なくとも1つの所定の結
合パートナーは、前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドに結合する、第2の
所定の結合パートナーをさらに含む。場合によって、前記第2のトランケート型非免疫原
性ポリペプチドは、HER2ポリペプチドであり、前記第2の所定の結合パートナーは、
ペルツズマブである。
場合には、前記ポリペプチド構築物は、膜貫通ドメインをさらに含む。一部の実施形態で
は、前記膜貫通ドメインは、膜貫通二量体化ドメインを含む。場合によって、前記膜貫通
二量体化ドメインは、グリコホリンA膜貫通ドメイン、グリコホリンA-インテグリンβ
3キメラ膜貫通ドメイン、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む。場合によって、前
記膜貫通二量体化ドメインは、配列番号26、配列番号28、配列番号30、または配列
番号32に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%
、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む。一部の
実施形態では、前記膜貫通二量体化ドメインは、配列番号26、配列番号28、配列番号
30、または配列番号32に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
ペプチドを含む。一部の実施形態では、前記CD20ポリペプチドは、配列番号218、
配列番号219、または配列番号220に示される配列に対する、少なくとも70%、7
5%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポ
リペプチド配列を含む。場合によって、前記CD20ポリペプチドは、配列番号218、
配列番号219、または配列番号220に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。
一部の実施形態では、前記少なくとも1つの所定の結合パートナーは、リツキシマブ、ト
シツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブの
うちの少なくとも1つを含む。
ート型非免疫原性HER1ポリペプチドであって、抗HER1抗体に結合するHER1ポ
リペプチドと;CD28膜貫通ドメインと;前記HER1ポリペプチドを、前記CD28
膜貫通ドメインへと共役するためのペプチドリンカーとを含むポリペプチド構築物であっ
て、操作細胞内で発現されるポリペプチド構築物が提供される。
を含むポリペプチド配列を含み、前記HER1ドメインIVは、配列番号203に示され
る配列を含むポリペプチド配列を含む。一部の場合には、前記CD28膜貫通ドメインは
、配列番号36に示される配列を含むポリペプチド配列を含み、前記ペプチドリンカーは
、G4Sペプチドリンカー(配列番号221)を含む。場合によって、前記G4Sペプチ
ドリンカー(配列番号221)は、配列番号22に示される配列を含むポリペプチド配列
を含む。一部の実施形態では、前記ポリペプチド構築物は、配列番号57に示される配列
を含むポリペプチド配列を含む。
デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニ
モツズマブ、パニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む。
ペプチド構築物であって、操作細胞内で発現されるポリペプチド構築物が提供される。
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または9
9.5%の同一性を有する。場合によって、前記ポリペプチド構築物は、配列番号109
に示される配列を含むポリペプチド配列を含む。一部の場合には、前記抗CD20抗体は
、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およ
びオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む。
および利点についてのよりよい理解は、本開示の原理が用いられる、例示的な実施形態を
明示する、以下の詳細な記載および付属の図面を参照することにより得られるであろう。
細書で記載される特定の実施形態に限定されず、そのようなものとして、変動しうること
を理解されたい。当業者は、本発明には、多数の変動および改変がなされ、これらは、そ
の範囲内に包含されることを認識するであろう。
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される技術用語および科学
用語は、本開示が関連する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有
する。
題を限定するものと見なすべきではない。
示される場合もあり、任意の適切な組合せで提示される場合もある。逆に、本明細書では
、明確さのために、本発明を、個別の実施形態の文脈で記載しうるが、本発明はまた、単
一の実施形態でも、実施することができる。
関連または非関連の案件、例えば、共同所有される、いかなる特許または出願にも帰属し
ない。本明細書で記載される方法および材料と、同様または同等である、任意の方法およ
び材料を、本開示の試験の実施において使用しうるが、本明細書では、好ましい材料およ
び方法について記載する。したがって、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態
について記載することだけを目的とするものであり、限定的であることを意図するもので
はない。
数形を含む。本明細書で使用される通り、そうでないことが文脈により明確に指示されな
い限りにおいて、単数形の「ある(a)」、「ある(an)」、および「その」は、複数の
指示対象を含むことに注意しなければならない。本出願では、そうでないことが言明され
ない限りにおいて、「または」の使用は、「および/または」を意味する。さらに、「~
を含むこと」という用語のほか、「~を含む(include)」、「~を含む(includes)」
、および「含まれた」など、他の形態の使用は、限定的ではない。
「他の実施形態」への言及は、実施形態との関連で記載される、特定の特色、構造、また
は特徴が、本発明の、少なくとも一部の実施形態には含まれるが、全ての実施形態には、
必ずしも含まれないことを意味する。
含む(comprise)」および「~を含む(comprises)」など、「~を含むこと(comprisin
g)」の任意の形態)、「~を有すること」(「~を有する(have)」および「~を有す
る(has)」など、「~を有すること」の任意の形態)、「~を含むこと(including)」
(「~を含む(include)」および「~を含む(includes)」など、「~を含むこと(inc
luding)」の任意の形態)、または「~を含有すること」(「~を含有する(contain)
」および「~を含有する(contains)」など、「~を含有すること」の任意の形態)とい
う語は、包含的またはオープンエンドであり、さらなる、列挙されていない要素または方
法ステップを除外しない。本明細書で論じられる任意の実施形態は、本発明の任意の方法
または組成物に関して実施することが可能であり、この逆も成り立つことが想定される。
さらに、本発明の組成物を使用して、本発明の方法を達成することができる。
よびその文法的同等物は、数値自体と、この数値±10%の範囲の値とを含みうる。例え
ば、「約10」という量は、9~11の、任意の量を含む。例えば、基準数値との関係に
おける「約」という用語はまた、値±この値から10%、9%、8%、7%、6%、5%
、4%、3%、2%、または1%の範囲も含む。
が、天然から摘出されたもの(ゲノムDNAおよびmRNAを含む)であれ、合成された
もの(cDNAを含む)であれ、かつ/または検査室条件下で増幅されたのであれ、純度
が増大しており、この場合、「純度」とは、相対的用語であり、「絶対純度」ではないこ
とを意味する。一方、核酸およびタンパク質は、希釈剤またはアジュバントと共に製剤化
される場合があるが、実際的な目的では、単離されているものとしうることを理解された
い。例えば、核酸は、細胞への導入のために使用する場合、許容可能な担体または希釈剤
と混合することが典型的である。
ヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドである、任意の長さのヌクレオチドのポリ
マー形態を指す。この用語は、分子の一次構造だけを指す。したがって、この用語は、二
本鎖DNAおよび一本鎖DNA、三重鎖DNAのほか、二本鎖RNAおよび一本鎖RNA
も含む。この用語はまた、例えば、ポリヌクレオチドのメチル化および/またはキャッピ
ングによる修飾形態、ならびにポリヌクレオチドの非修飾形態も含みうる。用語はまた、
天然のものではないヌクレオチドまたは合成ヌクレオチドのほか、ヌクレオチド類似体を
含む分子を含むことも意図する。
用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。「成熟タンパク質」とは、全長タンパク質であ
り、任意選択で、グリコシル化または所与の細胞内環境内のタンパク質に典型的な他の修
飾を含むタンパク質である。
的変異体を含む)は、1または複数の、天然のアミノ酸の代わりに、合成アミノ酸を含み
うる。当技術分野では、このような合成アミノ酸が公知であり、例えば、アミノシクロヘ
キサンカルボン酸、ノルロイシン、α-アミノ n-デカン酸、ホモセリン、S-アセチ
ルアミノメチルシステイン、trans-3-ヒドロキシプロリンおよびtrans-4
-ヒドロキシプロリン、4-アミノフェニルアラニン、4-ニトロフェニルアラニン、4
-クロロフェニルアラニン、4-カルボキシフェニルアラニン、β-フェニルセリン、β
-ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α-ナフチルアラニン、シクロヘキ
シルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン-2-カルボン酸、1,2,3,4
-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノア
ミド、N’-ベンジル-N’-メチルリシン、N’,N’-ジベンジルリシン、6-ヒド
ロキシリシン、オルニチン、α-アミノシクロペンタンカルボン酸、α-アミノシクロヘ
キサンカルボン酸、α-アミノシクロヘプタンカルボン酸、α-(2-アミノ-2-ノル
ボルナン)カルボン酸、α,γ-ジアミノ酪酸、α,β-ジアミノプロピオン酸、ホモフ
ェニルアラニン、およびα-tert-ブチルグリシンを含む。本開示は、操作細胞内の
、本明細書で記載されるポリペプチドの発現が、ポリペプチド構築物の、1または複数の
アミノ酸の翻訳後修飾と関連しうることをさらに想定する。翻訳後修飾の非限定例は、リ
ン酸化、アセチル化およびホルミル化を含むアシル化、グリコシル化(N連結型およびO
連結型を含む)、アミド化、ヒドロキシル化、メチル化およびエチル化を含むアルキル化
、ユビキチン化、ピロリドンカルボン酸の付加、ジスルフィド架橋の形成、硫酸化、ミリ
ストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化、ファルネシル化、ゲラニル化、グリピオ
ン化、リポイル化、およびヨード化を含む。
指す。全抗体は、典型的に、4つのポリペプチド:重(H)鎖ポリペプチドの2つの同一
なコピー、および軽(L)鎖ポリペプチドの2つの同一なコピーからなる。重鎖の各々は
、1つのN末端の可変(VH)領域と、3つのC末端の定常(CH1、CH2、およびC
H3)領域とを含有し、各軽鎖は、1つのN末端の可変(VL)領域と、1つのC末端の
定常(CL)領域とを含有する。軽鎖および重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗原結合性
部位を形成する。VH領域と、VL領域とは、各領域が、それらの配列が比較的保存され
ている、4つのフレームワーク領域を含む、共通の一般的な構造を有する。フレームワー
ク領域は、3つの相補性決定領域(CDR)により接続されている。CDR1、CDR2
、およびCDR3として公知である、3つのCDRは、抗原への結合の一因となる、抗体
の「超可変領域」を形成する。
を指す。一部の実施形態では、抗原認識部分は、抗体、抗体様分子、またはこれらの断片
であり、抗原は、腫瘍抗原である。
ーファミリーのメンバーであるタンパク質でありうる。MHC分子およびT細胞受容体は
、このような分子である。一部の実施形態では、抗体様分子は、TCRである。一部の実
施形態では、TCRは、そのMHCへの結合アフィニティーを増大させるように改変され
ている。
結合性部分」という用語を、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の、1または複
数の断片または部分を意味するように、互換的に使用する(一般に、Holliger et al., N
at. Biotech., 23(9):1126-1129 (2005)を参照されたい)。抗体断片は、例えば、1もし
くは複数のCDR、可変領域(またはその部分)、定常領域(またはその部分)、または
これらの組合せを含むことが所望される。抗体断片の例は、(i)VLドメイン、VHド
メイン、CLドメイン、およびCH1ドメインからなる一価断片である、Fab断片;(
ii)ストーク領域におけるジスルフィド架橋により連結された2つのFab断片を含む
二価断片である、F(ab’)2断片;(iii)抗体の単一のアームのVLドメインお
よびVHドメインからなる、Fv断片;(iv)2つのドメインを、単一のポリペプチド
鎖として合成することを可能とする合成リンカーにより接合された、Fv断片の2つのド
メイン(すなわち、VLおよびVH)からなる一価分子である、単鎖Fv(scFv)(
例えば、Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988); and Osbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 77
8 (1998)を参照されたい);ならびに(v)各ポリペプチド鎖が、同じポリペプチド鎖上
のVHとVLとの間の対合を可能とするには短すぎるペプチドリンカーにより、VLへと
接続されたVHを含み、これにより、2つの機能的な抗原結合性部位を有する二量体分子
を作出するように、異なるVH-VLポリペプチド鎖上の相補的ドメインの間の対合を駆
動する、ポリペプチド鎖の二量体である、ダイアボディーを含むがこれらに限定されない
。当技術分野では、抗体断片が公知であり、例えば、米国特許第8,603,950号明
細書において、より詳細に記載されている。
列に由来する場合、「相同」である。タンパク質および/またはタンパク質配列は、それ
らのコードDNAが、天然または人工で、共通の先祖核酸または先祖核酸配列に由来する
場合、相同である。相同な分子は、相同体と称する場合がある。例えば、本明細書で記載
される、任意の天然タンパク質は、任意の利用可能な突然変異誘発法により修飾すること
ができる。発現させると、この突然変異核酸は、元の核酸によりコードされるタンパク質
と相同なポリペプチドをコードする。相同性は一般に、2つまたはこれを超える核酸また
はタンパク質(またはこれらの配列)の間の配列同一性から推定される。相同性を確立す
るのに有用な配列の間の同一性の、正確な百分率は、問題の核酸およびタンパク質と共に
変動するが、少なくとも25%の配列同一性を使用して、相同性を確立する。高レベルの
配列同一性、例えば、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95
%、もしくは99%、またはこれを超える配列同一性もまた、相同性を確立するのに使用
することができる。
「配列同一性」という用語は、指定された比較域にわたり、最大の照応関係についてアラ
イメントされた場合に同じである、2つの配列内の残基を指す。一部の実施形態では、本
明細書におけるポリペプチドは、例えば、デフォルトパラメータを使用する、BLAST
P(もしくはCLUSTAL、または他の任意の利用可能なアライメントソフトウェア)
により測定される通り、基準ポリペプチドまたはその断片と少なくとも60%、65%、
70%、75%、80%、85%、90%、98%の99%、または100%同一である
。同様に、核酸はまた、出発核酸に照らして記載することもでき、例えば、それらは、例
えば、デフォルトパラメータを使用する、BLASTN(もしくはCLUSTAL、また
は他の任意の利用可能なアライメントソフトウェア)により測定される通り、基準核酸ま
たはその断片と50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、98%、9
9%、または100%同一でありうる。1つの分子が、大型の分子に対して、ある特定の
百分率の配列同一性を有するという場合、これは、2つの分子が最適にアライメントされ
れば、小型の分子内の、前記百分率の残基は、2つの分子が最適にアライメントされた順
序に従い、大型の分子内にマッチ残基を見出すことを意味する。
変化させ、場合によって、突然変異を創出または保存し、細胞のゲノムサイズを変更する
、ベクターDNA配列である。転移は、TEの重複を結果としてもたらすことが多い。ク
ラスIのTEは、2段階でコピーされる:まず、クラスIのTEは、DNAからRNAへ
と転写され、次いで、産生されたRNAは、DNAへと逆転写される。次いで、この、コ
ピーされたDNAは、ゲノム内の新たな位置へと挿入される。逆転写ステップは、TE自
身によりコードされうる、逆転写酵素により触媒される。レトロトランスポゾンの特徴は
、HIVなどのレトロウイルスと同様である。クラスIIのTEによるカットアンドペー
スト転移機構は、RNA中間体を伴わない。転移は、いくつかのトランスポザーゼ酵素に
より触媒される。あるトランスポザーゼは、DNA内の任意の標的部位に非特異的に結合
するのに対し、他のトランスポザーゼは、特異的DNA配列標的に結合する。トランスポ
ザーゼは、標的部位において、互い違いの(staggered)切断をもたらす結果として、5
’側または3’側における、一本鎖のDNA突出(粘着(sticky)末端)をもたらす。こ
のステップは、DNAトランスポゾンを切り出し、次いで、DNAトランスポゾンは、新
たな標的部位へとライゲーションされるが、この過程は、ギャップを埋めるDNAポリメ
ラーゼの活性と、糖リン酸骨格をつなぎ合わせるDNAリガーゼの活性とを伴う。これは
、標的部位の重複を結果としてもたらす。DNAトランスポゾンの挿入部位は、標的DN
A内が互い違いに切断され、DNAポリメラーゼにより埋められることにより創出されう
る短い直接的なリピート、ならびにそれらに続く、トランスポザーゼによるTEの切出し
に重要な一連の逆位リピートにより同定されうる。細胞周期のS期において、ドナー部位
は既に複製されているが、標的部位はまだ複製されていない場合に転移が生じるとカット
アンドペーストTEは重複される。転移は、クラスI TEおよびクラスII TEのい
ずれにおいても、「自律型」または「非自律型」として分類することができる。自律型T
Eが、それ自身で移動しうるのに対し、非自律型TEは、移動するのに、別のTEの存在
を必要とする。これは、非自律型TEが、トランスポザーゼ(クラスIIの場合)または
逆転写酵素(クラスIの場合)を欠くためであることが多い。
構または複製性転移機構による、トランスポゾンの、ゲノムの別の部分への移動を触媒す
る酵素を指す。一部の実施形態では、トランスポザーゼの触媒活性を用いて、遺伝子を、
ベクターからゲノムへと移動させることができる。
ェクション」、「形質転換」、「ヌクレオフェクション」または「形質導入」により導入
することができる。本明細書で使用される「トランスフェクション」、「形質転換」、ま
たは「形質導入」とは、物理的方法または化学的方法を使用することによる、1または複
数の外因性ポリヌクレオチドの、宿主細胞への導入を指す。当技術分野では、多くのトラ
ンスフェクション法が公知であり、例えば、リン酸カルシウムDNA共沈殿法(例えば、
Murray E. J. (ed.), Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Expr
ession Protocols, Humana Press (1991)を参照されたい);DEAE-デキストラン法
;電気穿孔法;カチオン性リポソーム媒介性トランスフェクション法;タングステン粒子
促進型遺伝子銃法(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990));リン酸ストロンチウム共
沈殿法(Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987));およびヌクレオフェ
クション(Trompeter et al., J. Immunol. Methods 274:245-256 (2003))を含む。ファ
ージベクターまたはウイルスベクターは、それらの多くが市販されている、適切なパッケ
ージング細胞内で、感染性粒子を増殖させた後で、宿主細胞へと導入することができる。
る、任意の抗原性物質を指す。腫瘍抗原は、例えば、宿主における免疫応答を誘発しうる
。代替的に、本開示の目的では、腫瘍抗原は、健常細胞および腫瘍細胞のいずれもが発現
するが、ある特定の腫瘍型を同定するため、適切な治療標的であるタンパク質でありうる
。
。プロモーターは、DNAの、同じ鎖上の、遺伝子の転写開始部位の近傍であり、かつ、
上流に(センス鎖の5’側領域に向かって)位置する。あるプロモーターが、細胞内の全
ての状況において活性であるので、構成的であるのに対し、他のプロモーター、例えば、
誘導性プロモーターは、特異的刺激に応答して調節され、活性となる。
連結されたヌクレオチド配列の発現の程度を指す。プロモーター活性は、例えば、ノーザ
ンブロット解析により、産生されるRNA転写物の量を決定することにより、直接的に測
定することもでき、プロモーターに連結されたレポーター核酸配列など、連結された核酸
配列によりコードされる産物の量を決定することにより、間接的に測定することもできる
。
または非生物因子の存在または非存在により、活性へと誘導されるプロモーターを指す。
誘導性プロモーターは、それらに作動可能に連結した遺伝子の発現が、生物または特に、
組織の発生の、ある特定の段階において、オンまたはオフにされうるため、有用である。
誘導性プロモーターの例は、アルコール調節性プロモーター、テトラサイクリン調節性プ
ロモーター、ステロイド調節性プロモーター、金属調節性プロモーター、発症機序調節性
プロモーター、温度調節性プロモーター、および光調節性プロモーターである。一部の実
施形態では、誘導性プロモーターは、遺伝子スイッチの一部である。
された核酸配列の転写を増大させるDNA配列を指す。エンハンサーは、核酸配列のコー
ド領域から、何キロベースも離れて位置することが可能であり、調節因子の結合、DNA
のメチル化パターン、またはDNA構造の変化を媒介しうる。当技術分野では、様々な異
なる供給源に由来する、多数のエンハンサーが周知であり、クローニングされたポリヌク
レオチドとして、またはクローニングされたポリヌクレオチド内で利用可能である(例え
ば、ATCCなどの寄託先のほか、他の商業的供給源または個人的供給源から)。プロモ
ーター(一般に使用されるCMVプロモーターなど)を含む、多数のポリヌクレオチドは
また、エンハンサー配列も含む。エンハンサーは、コード配列の上流に位置する場合もあ
り、この中に位置する場合もあり、この下流に位置する場合もある。「Igエンハンサー
」という用語は、免疫グロブリン(Ig)遺伝子座内にマップされるエンハンサー領域に
由来するエンハンサーエレメント(このようなエンハンサーは、例えば、重鎖(ミュー)
5’側エンハンサー、軽鎖(カッパ)5’側エンハンサー、カッパイントロンエンハンサ
ーおよびミューイントロンエンハンサー、ならびに3’側エンハンサーを含む)を指す(
一般に、Paul W. E. (ed), Fundamental Immunology, 3rd Edition, Raven Press, New Y
ork (1993), pages 353-363、および米国特許第5,885,827号明細書を参照され
たい)。
ドのセグメントを指す。領域または配列には、5’末端の近傍では、開始コドンが結合し
、3’末端の近傍では、終止コドンが結合する。コード配列はまた、オープンリーディン
グフレームと称することもできる。
Aセグメントへの、物理的な連結および/または機能的な連結であって、セグメントが、
それらの意図される方式で機能することを可能とするような連結を指す。遺伝子産物をコ
ードするDNA配列は、それが、例えば、プロモーター、エンハンサー、および/または
サイレンサーなどの調節配列に、DNA配列の転写のモジュレーションを、直接的または
間接的に可能とする方式で連結されている場合に、調節配列に作動可能に連結されている
。例えば、DNA配列は、それが、プロモーターの転写開始部位に対して、下流において
、転写開始部位に対して、適正なリーディングフレーム内で、プロモーターへとライゲー
ションされており、DNA配列を通して、転写の伸長が進行することを可能とする場合に
、プロモーターに作動可能に連結されている。エンハンサーまたはサイレンサーは、それ
が、それぞれ、DNA配列の転写を増加または減少させるように、DNA配列へとライゲ
ーションされている場合に、遺伝子産物をコードするDNA配列に作動可能に連結されて
いる。エンハンサーおよびサイレンサーは、DNA配列のコード領域の上流に位置する場
合もあり、この下流に位置する場合もあり、この中に埋め込まれている場合もある。シグ
ナル配列が、ポリペプチドの分泌に参与するプレタンパク質として発現する場合、シグナ
ル配列のDNAは、ポリペプチドをコードするDNAに作動可能に連結されている。DN
A配列の、調節配列への連結は、典型的に、適切な制限部位におけるライゲーションによ
り、または当業者に公知の制限エンドヌクレアーゼを使用して、配列内に挿入された、ア
ダプターまたはリンカーを介して達せられる。
配列の転写を防止もしくは阻害するように作用する生化学的エレメント(例えば、リプレ
ッサータンパク質または核阻害性タンパク質)、または、ある特定の環境条件下で、プロ
モーター駆動性DNA配列の転写を可能とするか、もしくは刺激するように作用する生化
学的エレメント(例えば、インデューサーまたはエンハンサー)を指す。
ターの活性、および/またはプロモーターの発現の、何らかの転写基礎レベルと比べた上
昇を指す。
導入により宿主細胞へと導入される遺伝子を指す。
えを容易としうる酵素群であって、部位が、単一のDNA分子上で物理的に隔てられてい
るか、または部位が、別個のDNA分子上に存在する、酵素群を指す。規定された組換え
部位のDNA配列は、必ずしも同一ではない。組換えの開始は、タンパク質-DNA間相
互作用に依存し、酵素群内には、ファージの組込みおよび切出し(例えば、λインテグラ
ーゼ、ΦC31)、環状プラスミドの切断(resolution)(例えば、Tn3、
ガンマデルタ、Cre、Flp)、代替的遺伝子の発現のためのDNAの反転(例えば、
Hin、Gin、Pin)、発生時における遺伝子(例えば、アナベナ属(Anabaena)に
よる窒素固定遺伝子)のアセンブリ、および転移(例えば、IS607トランスポゾン)
を触媒する、多数のタンパク質が存在する。大半の部位特異的リコンビナーゼは、進化的
類縁性および機構的類縁性に基づき、2つのファミリーのうちの1つに収まる。これらは
、λインテグラーゼファミリーまたはチロシンリコンビナーゼ(例えば、Cre、Flp
、XerD)、およびレゾルバーゼ/インテグラーゼファミリー、またはセリンリコンビ
ナーゼファミリー(例えば、ΦC31、TP901-1、Tn3、ガンマデルタ)である
。
、特異的ポリヌクレオチド配列である。典型的に、1つの部位が、標的核酸(例えば、真
核生物または原核生物の染色体またはエピソーム)内に存在し、別の部位が、標的組換え
部位において統合される核酸上に存在する、2つの異なる部位(「相補的部位」と称する
)が関与する。本明細書では、それぞれ、細菌標的およびファージドナーに由来する、接
合(または組換え)部位を指す、「attB」および「attP」という用語が使用され
るが、特定の酵素のための組換え部位は、異なる名称を有しうる。組換え部位は、典型的
に、コア領域またはスペーサー領域により隔てられた、左側アームおよび右側アームを含
む。したがって、attB組換え部位は、BOB’[配列中、BおよびB’は、それぞれ
、左側アームおよび右側アームであり、Oは、コア領域である]からなる。同様に、at
tPとは、POP’[配列中、PおよびP’は、アームであり、Oは、ここでもまた、コ
ア領域である]である。attB部位と、attP部位との組換え時、および標的におけ
る、同時の核酸の組込み時に、組み込まれるDNAを挟む組換え部位を、「attL」お
よび「attR」と称する。したがって、上記の用語法を使用する、attL部位および
attR部位は、それぞれ、BOP’およびPOB’’からなる。本明細書における一部
の表示では、「O」を省き、attBおよびattPを、例えば、それぞれ、BB’およ
びPP’と呼ぶ。
オチドの挿入、欠失、または置きかえを指す。典型的に、ゲノム編集は、ゲノムの所定の
位置において、部位特異的二本鎖切断を創出しうる、操作ヌクレアーゼを使用する。本開
示は、ゲノムを編集するための任意の手段を想定する。ゲノム編集法の非限定的な例は、
CRISPR、Argonaute、およびAttSite部位特異的セリンリコンビナ
ーゼ系を含む。本明細書では、「CRISPR遺伝子編集系」(CRISPR gene editing sy
stem)または「CRISPR系」(CRISPR system)とは、DNA配列の変化を、ゲノム
の特異的領域へとターゲティングするための、任意のRNA誘導型のCasタンパク質媒
介性過程を指す。本明細書では、「Argonaute遺伝子編集系」とは、DNA配列
の変化を、ゲノムの特異的領域へとターゲティングするための、任意の一本鎖DNA誘導
型のArgonauteエンドヌクレアーゼ媒介性過程を指す。本明細書では、「Att
Site遺伝子編集系」または「部位特異的セリンリコンビナーゼ遺伝子編集系」または
「部位特異的セリンリコンビナーゼ系」とは、第1の組換え接合部位および第2の組換え
接合部位を含む真核細胞を用意するステップと;第1の組換え接合部位および第2の組換
え接合部位を、原核細胞のリコンビナーゼポリペプチドと接触させる結果として、組換え
部位の間の組換えをもたらすステップとを含み、リコンビナーゼポリペプチドが、第1の
組換え接合部位と、第2の組換え接合部位との組換えを媒介することが可能であり、第1
の組換え接合部位が、ファージゲノム組換え接合部位(attP)、または細菌ゲノム組
換え接合部位(attB)であり、第2の組換え接合部位が、attBまたはattPで
あり、第1の組換え接合部位が、attBである場合、第2の組換え接合部位が、att
Pであり、第1の組換え接合部位が、attPである場合、第2の組換え接合部位が、a
ttBであるという条件で、リコンビナーゼが、リステリア・モノサイトゲネス(Lister
ia monocytogenes)のファージリコンビナーゼ、化膿連鎖球菌(Streptococcus pyogenes
)のファージリコンビナーゼ、枯草菌(Bacillus subtilis)のファージリコンビナーゼ
、結核菌(Mycobacterium tuberculosis)のファージリコンビナーゼ、およびスメグマ菌
(Mycobacterium smegmatis)のファージリコンビナーゼからなる群から選択される、任
意の工程を指す。AttSiteセリンリコンビナーゼ系についての実施形態の例は、そ
の全てが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第9,034,650号明細書に
おいて提示されている。
内因性」という用語は、野生型の細胞または生物において見出されうる分子の、天然の形
態を指す。生物において内因的に見出される分子は、典型的に、天然のものではない、本
明細書で記載される操作分子と対比することができる。例えば、操作分子は、天然のポリ
ペプチドまたはポリヌクレオチドの変異体を含みうる。一部の実施形態では、天然のポリ
ペプチドの変異体は、天然のポリペプチドのトランケート型変異体である。本明細書では
、「トランケート型変異体」という用語は、アミノ酸による1または複数の配列および/
またはドメインを、タンパク質またはポリペプチドの内因性変化形と比べて逸失している
、タンパク質またはポリペプチドを指す。例えば、本明細書で記載されるポリペプチド構
築物へと組み込まれたトランケート型変異体は、通常、内因性タンパク質内に存在するド
メイン(例えば、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、リガンド結合ドメイン
など)に対応するアミノ酸の配列を逸失している場合がある。トランケート型ポリペプチ
ドの天然変化形は、マウス、ラット、ウサギ、およびヒトなどの哺乳動物種を含む、任意
の生物に由来しうる。本明細書で記載される操作ポリヌクレオチドおよび操作ポリペプチ
ドは、操作細胞内で発現させうる。本明細書では、操作細胞は、その天然状態または内因
性状態から改変された細胞である。操作細胞の例は、天然ポリペプチドのトランケート型
変異体または天然ポリヌクレオチドのトランケート型変異体をコードするように改変され
た(例えば、細胞へのポリヌクレオチドのトランスフェクションにより)、本明細書で記
載される細胞である。
本明細書では、ポリペプチド構築物、これをコードするポリヌクレオチド、ポリペプチ
ド構築物およびポリヌクレオチドを保有し、かつ/または発現する操作細胞、ならびに操
作細胞の活性を調節する方法が開示される。本明細書で記載される操作細胞は、サイトカ
イン、キメラ抗原受容体、およびT細胞受容体をコードし、かつ発現するように操作され
た免疫エフェクター細胞を含みうる。
れる場合の「~を調節すること」または「調節」という用語は、一般に、対象への投与の
後における、操作細胞の活性または量の調節を指す。一部の実施形態では、操作細胞の活
性の調節とは、対象における操作細胞の枯渇を指す。一部の実施形態では、操作細胞の活
性の調節とは、対象へと、ある量の、操作細胞上で発現させたポリペプチド構築物に結合
する抗体または結合パートナーを投与する結果としての、対象における、一部の操作細胞
の枯渇を指す。一部の実施形態では、操作細胞の活性の調節とは、抗体または結合パート
ナーの、前記操作細胞上で発現させるか、またはこれと関連する、本明細書で記載される
ポリペプチド構築物への結合を介して、細胞死を活性化させる結果としての、操作細胞の
枯渇を指す。一部の実施形態では、操作細胞の活性の調節とは、操作細胞内のADCC経
路またはCDC経路を活性化させることを指す。
、従来型の免疫療法の有効性を改善し、特に、養子細胞療法の有効性を改善するのに使用
しうる、一連の治療的ツールを表す。例えば、本明細書で記載される操作細胞は、細胞表
面において、新規の細胞タグとして、ポリペプチド構築物をコードし、これを発現しうる
。一部の実施形態では、細胞タグは、細胞タグを発現する細胞を、操作細胞として、標識
化するか、マークするか、またはFlagタグ付けする(flag)、細胞マーカーとして機
能しうる。複数の実施形態では、細胞タグを、内因性タンパク質により認識されるエピト
ープを欠くように操作した場合、このような細胞タグは、例えば、養子細胞免疫療法時に
、生物において、操作細胞を、他の細胞から固有に識別するように機能しうる。
を使用して、安全性が懸念される(例えば、サイトカインストームの発生に対する潜在的
可能性に起因して)場合に、対象における免疫療法の毒性を、最小化するか、または消失
させることができる。本明細書で記載される細胞タグは、免疫療法時に導入される抗体に
より認識されて、これにより、治療的アウトプットを緩徐化し、かつ/または治療の可能
な副作用を軽減する細胞機構を誘導する、1または複数のエピトープを含みうる。一部の
実施形態では、抗体は、エピトープに結合して、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用(A
DCC)および/または補体依存性細胞傷害作用(CDC)を誘導する。したがって、本
明細書で記載される細胞タグは、医療従事者が、治療的アウトプットを制御し、これによ
り、治療の有効性および安全性を最適化することを可能とする、操作細胞に固有の枯渇マ
ーカーまたは「キルタグ」をもたらしうる。
可能性をもたらすことにより、従来型の免疫療法を改善する。一部の実施形態では、操作
細胞は、操作細胞の表面で、二量体化または多量体化することが可能なポリペプチド構築
物を発現させることにより、細胞枯渇戦略に対して感作されうる。このような二量体化ポ
リペプチドまたは多量体化ポリペプチドを使用して、枯渇シグナルを増幅し、これにより
、治療と関連する副作用を受けやすいか、またはこれを被りつつある対象における操作免
疫細胞療法を、迅速に下方調節するか、または消失させることができる。二量体化ポリペ
プチド構築物または多量体化ポリペプチド構築物を発現する操作細胞の投与は、細胞枯渇
による介入に対する、さらなる制御および最適化をもたらしうる。さらなる実施形態では
、本明細書で開示されるポリヌクレオチド構築物の、誘導性プロモーターを用いる「キル
スイッチ」(または「自殺スイッチ」)系としての実装は、特定のポリペプチド構築物を
発現させる時点に対する制御を可能とし、これにより、転写レベルおよび翻訳後レベルの
両方において、免疫療法に対する、さらなる制御点を付与しうる。
特異的に発現する操作細胞を濃縮することができる。例えば、治療目的の選択された細胞
の拡大を可能とするのに必要な純度を達成するために、細胞タグを使用して、このような
細胞タグのみを発現するある特定の操作細胞を単離するように、ある特定の操作細胞を濃
縮することができる。必要に応じて、FAC、カラムによる精製、または磁気ビーズベー
スの方法など、多様な方法を用いることができる。
の特異的断片を含みうる。典型的に、ポリペプチド構築物は、それらの各々が、所望され
る特定の特性を、ポリペプチド構築物へと付与するように機能する、シグナルペプチド配
列、細胞外ドメイン、ペプチドリンカー、および膜貫通ドメインを含みうる。例えば、ポ
リペプチド構築物は、ポリペプチド構築物を、翻訳後に、細胞表面へと方向付ける、シグ
ナルペプチドと;ポリペプチドドメインを、細胞へとアンカリングする膜貫通ドメインと
;天然ポリペプチドのトランケート型変異体を含みうる、細胞外部分と;膜貫通ドメイン
を、細胞外部分へと接続するペプチドリンカーとを含みうる。一部の実施形態では、ペプ
チドリンカーは、ポリペプチドの細胞外部分を、細胞外マトリックス内に配置し、これに
より、この部分を、細胞タグの機能性を付与する(例えば、抗体に結合するためのアクセ
スを与えるエピトープを提示するか、または伸長させる)のに利用可能とする、細胞外の
ペプチド伸長部として機能する。ある特定の実施形態では、上記のドメインのうちの1ま
たは複数は、ポリペプチド構築物内に存在しない場合もある。例えば、本明細書で記載さ
れるポリペプチド構築物を、ペプチドリンカードメインを欠くように操作することができ
る。他の実施形態では、ポリペプチド構築物は、異なるタンパク質に由来する(すなわち
、ポリペプチド構築物は、キメラである)、1または複数のドメインを含む。
用語は、細胞膜の外側に位置するポリペプチドのアミノ酸を指す。一部の実施形態では、
細胞外部分は、細胞表面ポリペプチドと称することができる。典型的に、細胞表面ポリペ
プチドの部分(例えば、遠位部分)は、遠位において、細胞の細胞膜から、細胞外腔へと
伸長または突出する。一部の場合には、伸長部分は、伸長部分の構造と相補的であり、か
つこれに特異的な構造を有する抗体または抗原認識ポリペプチドに結合し、これにより、
これらに認識される。細胞表面ポリペプチドは、細胞表面において天然に見出される、ポ
リペプチドまたはその断片のほか、天然では、細胞表面において見出されない、ポリペプ
チドまたはその断片(例えば、天然ポリペプチドのトランケート型変異体)を包含しうる
。
を含みうる。トランケート型変異体は、例えば、細胞膜(例えば、膜貫通ドメインへと接
続されるか、またはこれと隣接するリンカーを介して)の外側から、細胞外腔へと伸長し
うる。ある特定の実施形態では、トランケート型変異体は、ポリペプチドの天然変化形で
は、細胞内ドメインおよび/または膜貫通ドメインに寄与するアミノ酸を逸失している。
トランケート型変異体は、細胞タグの細胞外部分をもたらすように、任意の形で、内因性
ポリペプチドから修飾することができる。例えば、トランケート型変異体は、通常、抗原
または受容体などの内因性タンパク質により認識されうる、細胞外ドメイン内のエピトー
プを含むように機能するアミノ酸を低減するか、または消失させるように修飾することが
できる。通常、(例えば、細胞シグナル伝達経路内で)細胞外分子とのインターフェース
をなすアミノ酸を除去することにより、トランケート型変異体を、細胞表面において、非
反応性であるか、または免疫学的/エピトープ的にサイレントとすることもでき、内因性
分子との、その反応性もしくは結合を、低減もしくは最小化することもできる。本明細書
では、天然エピトープを除去する、天然ポリペプチドに対する、任意の修飾であって、細
胞外ドメインの全部または一部のトランケーション、およびエピトープの一部を形成する
か、またはエピトープの一部を形成するように翻訳後修飾される、1または複数のアミノ
酸の除去を含む修飾が想定される。
ピトープ的にサイレントであるが、トランケート型変異体は、通常、本明細書で記載され
る操作細胞に対応する細胞表面に接触しない分子(例えば、抗体)による認識が可能な、
1または複数のエピトープを含みうる。一部の実施形態では、トランケート型変異体のエ
ピトープに特異的な抗体または結合パートナーを、外因的に(例えば、養子細胞を使用す
る免疫療法時に)導入する。この点で、導入される抗体またはその断片による認識が可能
な、トランケート型変異体のエピトープは、休眠エピトープまたは静止エピトープと称す
ることができる。すなわち、養子免疫療法に使用される操作細胞の細胞表面に組み込まれ
る細胞タグは、適正な分子を、対象へと導入して、細胞タグ誘因か、またはこれ活性化さ
せる(すなわち、エピトープの認識を介して)まで、休眠状態にあるエピトープを含有し
うる。このようなエピトープは、治療が所望される通りに進行している場合には、操作細
胞の治療アウトプットに干渉しない(すなわち、エピトープが、サイレントまたは静止を
維持する)が、任意の理由で、免疫療法を緩和する必要がある場合には、細胞のアウトプ
ットを下方調節するように活性化させうる誘因をもたらす。本開示は、このような細胞の
消失(例えば、ADCC、またはCDCを介する)を介して、タグを発現する操作細胞の
治療的アウトプットを抑制するように、細胞タグのエピトープを認識することが可能な、
任意の抗体または低分子の使用を想定する。細胞タグの細胞外ドメイン(例えば、トラン
ケート型変異体)のエピトープを認識するのに使用されうる抗体の非限定的な例は、リツ
キシマブ、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブ、
イコチニブ、オシメルチニブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ
、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、オビヌツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ト
シツモマブ、オファツムマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、TRU-015(Tr
ubion)、ベルツズマブ(IMMU-106)、アレムツズマブ、ANT1034、
HI186(Bio Rad)、YTH34.5(Bio Rad)、およびYTH66
.9HL(Bio-Rad)、トラスツズマブ、およびペルツズマブを含む。
して施されうる修飾の別の例は、通常、細胞内シグナル伝達経路および/またはトラフィ
ッキング経路に寄与または参与する、1または複数のアミノ酸を除去することである。シ
グナル伝達ドメインを除去する、内因性ポリペプチドのトランケーションは、その休眠状
態において、細胞の機能(例えば、養子細胞療法時の養子細胞内の)に干渉しない、休眠
的で誘導性の細胞マーカーとしての細胞タグの機能を強化する。
キナーゼのトランケート型変異体を含みうる。非限定的な例は、EGF受容体ファミリー
(例えば、HER1のトランケート型変異体)、PDGF受容体ファミリー、VEGF受
容体ファミリー、インスリン受容体ファミリー、FGF受容体ファミリー、Trk受容体
ファミリー、およびEph受容体ファミリーの受容体に由来するトランケート型変異体を
含む。他の実施形態では、細胞表面ポリペプチドは、CDタンパク質(例えば、CD20
またはCD52)のトランケート型変異体、またはLNFGR(CD271)のトランケ
ート型変異体を含みうる。
は内因性ポリペプチドの膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達部分を除去するように
改変されたトランケート型変異体を含みうる。膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達
部分のトランケーションは、ポリペプチドの細胞表面部分または細胞外部分を、その内因
性文脈から解放し、例えば、異なる天然タンパク質に由来する膜貫通ドメイン(例えば、
リンカーを介して)へと融合させた細胞表面ポリペプチドを含むキメラポリペプチド構築
物への組込みに利用可能とする。このようなキメラポリペプチド構築物は、細胞表面ポリ
ペプチド(例えば、トランケート型変異体)に、ポリペプチドの内因形と比較して、変更
された活性または特徴を付与しうる。一部の実施形態では、細胞表面ポリペプチドは、キ
メラポリペプチド構築物内で発現させると、二量体化が可能である。
想定する。例えば、本明細書で開示される細胞は、細胞表面ポリペプチドおよび/または
膜貫通ドメインの識別が異なる、複数のポリペプチド構築物を発現しうる。
体と、細胞表面ポリペプチドへと融合させた膜貫通ドメインと、任意選択で、トランケー
ト型変異体を、膜貫通ドメインへと接続するリンカーと、細胞タグを、操作細胞の細胞表
面へと方向付けるシグナルペプチドとを含む細胞表面ポリペプチドを含みうる。
シグナルペプチドは、新たに合成されるタンパク質またはポリペプチドのN末端に位置
することが典型的なアミノ酸配列であって、タンパク質またはポリペプチドを、細胞表面
へと方向付けるアミノ酸配列である。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、細胞膜
へと挿入される(例えば、膜貫通ドメインを介して)ポリペプチドを、細胞表面へと方向
付ける。一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリペプチド構築物は、シグナルペ
プチドと共に合成されるが、次いで、成熟ポリペプチド構築物が、シグナルペプチドのア
ミノ酸配列を欠くように、翻訳後プロセシングされて、シグナルペプチドを切断する。他
の実施形態では、シグナルペプチド配列は、切断されず、成熟ポリペプチド構築物内に残
存する。
ングすることが可能な、任意の、公知または未知のシグナルペプチドを含むポリペプチド
構築物を提示する。例えば、一部の実施形態では、ポリペプチド構築物は、GMCSFR
α、Igカッパ、免疫グロブリンE、CD8α、TVB2(T21A)、CD52、また
は低アフィニティー神経増殖因子受容体(LNGFR、TNFRSF16)のシグナルペ
プチドに対応するシグナル配列を含む。
列番号7、配列番号9、配列番号11、または配列番号13からなるリストから選択され
るヌクレオチド配列との、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%
、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに
よりコードされる。複数の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号2、配列番号4
、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、および配列番号14からなる
リストから選択されるアミノ酸配列との、少なくとも70%、75%、80%、85%、
90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書で記載されるポリペプチド構築物は、ポリペプチド構築物のドメインまたはそ
の断片を、ポリペプチド構築物の、異なるドメインまたはその断片へと接続するペプチド
リンカーを含みうる。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ポリペプチド構築物の
膜貫通ドメインを、ポリペプチド構築物の細胞表面ポリペプチド(例えば、天然ポリペプ
チドのトランケート型変異体)へと接続する。例えば、ポリペプチド構築物は、GSGリ
ンカー(配列番号16)、SGSGリンカー(配列番号18)、(G4S)3リンカー(
配列番号20)、(G4S)4リンカー(配列番号22)、および/またはホイットロー
リンカーを含むペプチドリンカーを含みうる。
異体)へと連結する、任意の長さまたはサイズのペプチドリンカーが提示される。例えば
、一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、トランケート型変異体と、膜貫通ドメイン
との距離を、ポリペプチドの天然非トランケート形と、その内因性膜貫通ドメインとの間
で生じる距離とほぼ同じ距離に維持するサイズである。複数の実施形態では、本明細書で
記載されるトランケート型変異体を、異なるサイズのG4Sリンカー(G4S)n[配列
中、n=0、1、2、3、4、5](配列番号222)を介して、膜貫通ドメインへと連
結して、HER1tと、膜貫通タンパク質との「天然」の距離を維持する。例えば、同じ
天然ポリペプチドの、2つの異なるトランケート型変異体が、異なる長さである場合、両
方のトランケート型変異体を、細胞表面から、ほぼ同じ距離に配置するために、長さの短
いトランケート型変異体を、大きなサイズのリンカーで補完することができる。
ンまたはその部分を、併せて連結することができる。例えば、ペプチドリンカーは、細胞
表面ポリペプチドの、2つのタンパク質部分を接続しうる。場合によって、細胞表面ポリ
ペプチドは、キメラポリペプチドであることが可能であり、ペプチドリンカーを介して接
続されうる、複数の天然ポリペプチドに由来するトランケート型変異体を含む。例は、E
GFRファミリー(例えば、HER2、ErbB3、およびErbB4)の別のメンバー
の、1または複数のトランケート型変異体と合わせた、HER1tを含むポリペプチド構
築物である。他の場合には、細胞表面ポリペプチドは、ペプチドリンカーを介して接続さ
れた、2コピーまたはこれを超えるトランケート型変異体のコンカタマー(例えば、SG
Sリンカーを介して連結された、2コピーのCD20トランケート型ポリペプチドを含む
配列番号123)を含みうる。
9;配列番号21;および配列番号23からなるリストから選択されるヌクレオチド配列
に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、また
は100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされ
る。複数の実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号16;配列番号18;配列番号
20;配列番号22;および配列番号24からなるリストから選択されるアミノ酸配列に
対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または
100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書で記載されるポリペプチド構築物は、細胞膜へと挿入されて、ポリペプチド構
築物を、細胞表面にアンカリングしうる膜貫通ドメインを含みうる。本開示は、任意の公
知もしくは未知の膜貫通ドメインまたはその断片のうちの1または複数を含むポリペプチ
ド構築物を提示する。一部の実施形態では、ポリペプチド構築物の膜貫通ドメインは、1
または複数の天然タンパク質に由来し、かつ/またはこれと相同な膜貫通ドメインを含み
うる。一部の実施形態では、ポリペプチド構築物の膜貫通ドメインは、単一の天然タンパ
ク質の膜貫通ドメインに対応するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチ
ド構築物の膜貫通ドメインは、2つまたはこれを超える天然タンパク質に由来するアミノ
酸配列を含む、キメラ膜貫通ドメインを含む。
数回膜貫通型(multi-pass)である膜貫通ドメインを含みうる。CD8αは、1回膜貫通
型膜貫通ドメインを有するタンパク質の例である。一部の実施形態では、本明細書で開示
されるポリペプチド構築物は、CD8αタンパク質に由来する膜貫通ドメインまたはその
断片に対応し、かつ/またはこれと相同な膜貫通ドメインを含む。複数の実施形態では、
ポリペプチド構築物の膜貫通ドメインは、配列番号33のヌクレオチド配列に対する、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の
同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。複数の実
施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号34のアミノ酸配列に対する、少なくとも70
%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有す
るアミノ酸配列を含む。
ド構築物の膜貫通ドメインは、CD28タンパク質に由来する膜貫通ドメインまたはその
断片に対応し、かつ/またはこれと相同な膜貫通ドメインを含みうる。複数の実施形態で
は、ポリペプチド構築物の膜貫通ドメインは、配列番号35のヌクレオチド配列に対する
、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100
%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。複数
の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号36のアミノ酸配列に対する、少なくとも
70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を
有するアミノ酸配列を含む。
は、「膜貫通二量体化ドメイン」とは、細胞の細胞膜内で、第2の膜貫通ドメインまたは
その断片と、物理的に相互作用するか、または「二量体化すること」が可能な、膜貫通ド
メインまたはその断片を指す。典型的に、膜貫通二量体化ドメインは、膜貫通二量体化ド
メインを介して、第2のポリペプチドと二量体化する、第1のポリペプチド構築物内に含
まれる。第1のポリペプチドの膜貫通二量体化ドメインを、その遠位(細胞外指向性)末
端において、第1の細胞表面ポリペプチドと融合させ、第2のポリペプチドの膜貫通二量
体化ドメインを、その遠位末端において、第2の細胞表面ポリペプチドと融合させる場合
、細胞膜内の、第1の膜貫通ドメインと、第2の膜貫通ドメインとの物理的相互作用は、
第1の細胞表面ポリペプチドと、第2の細胞表面ポリペプチドとの二量体化を結果として
もたらしうる。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、多量体化して、三量体、四量体
、または多量体を形成しうる。
ドまたは細胞表面ポリペプチドのエピトープに特異的な抗体)を必要とせずに、細胞表面
ポリペプチドの二量体化を誘導する。例えば、膜貫通二量体化ドメインは、細胞の細胞膜
内の、第2の膜貫通二量体化ドメインと、自発的に、物理的に相互作用または共役するこ
とにより、細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導しうる。したがって、本明細書で記載
されるポリペプチド構築物を発現する細胞は、本明細書で記載される抗体、タンパク質、
リガンド、または分子を含む、任意の細胞外細胞表面結合剤の投与の前に、細胞の細胞表
面上に、二量体化させた細胞表面ポリペプチドを提示しうることが理解されるであろう。
膜貫通二量体化ドメインを介する、細胞表面ポリペプチドの二量体化は、二量体化させた
細胞表面ポリペプチドが、リガンドまたは抗体に接触し、これらを認識する場合に、細胞
の応答を増強するように、このようなポリペプチド構築物を発現する細胞を利用しうる。
例えば、ポリペプチド構築物が、HER1tを含む細胞表面ポリペプチドを含む場合、H
ER1t細胞表面ポリペプチドの対を、セツキシマブなどのCDC誘導剤またはADCC
誘導剤との接触前または接触時に二量体化させることができる。セツキシマブ結合性細胞
表面ポリペプチドの二量体化立体配置の結果として、苦痛時(例えば、サイトカインスト
ーム中)の結合剤の投与は、細胞傷害性効果を増幅し、これにより、細胞を殺滅する可能
性を増大させうる。一部の実施形態では、細胞表面ポリペプチド(例えば、二量体化させ
た細胞表面ポリペプチド)に結合して、本明細書で開示されるポリペプチド構築物を発現
する操作細胞内で、細胞応答を誘導する薬剤は、外因的に施され、かつ/または内因的に
は存在しない。本開示は、HER1t、LNGFRt、CD20t、およびCD52tな
ど、天然ポリペプチドのトランケート型変異体を含む、任意の細胞表面ポリペプチドの二
量体化を容易とする、膜貫通二量体化ドメインを提示する。
的連結を形成して、細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導する。一部の実施形態では、
共有結合的接続は、隣接する膜貫通ドメインの各々の中に存在するシステインアミノ酸の
間で形成される、ジスルフィド結合の形態である。他の実施形態では、細胞膜内の膜貫通
二量体化ドメインは、第2の膜貫通ドメインとの非共有結合的接続を形成して、細胞表面
ポリペプチドの二量体化を誘導する。
相互作用する、膜貫通二量体化ドメインを有しうる。このような場合に、それぞれの第1
のポリペプチド構築物および第2のポリペプチド構築物の、第1の膜貫通二量体化ドメイ
ンおよび第2の膜貫通二量体化ドメインは、同じアミノ酸配列(すなわち、膜貫通二量体
化ドメインに関して、ホモ二量体)を有する場合もあり、異なるアミノ酸配列(すなわち
、膜貫通二量体化ドメインに関して、ヘテロ二量体)を有する場合もある。ある特定の実
施形態では、二量体化ポリペプチド対の、それぞれの各膜貫通二量体化ドメインは、第1
の膜貫通二量体化ドメイン内および第2の膜貫通二量体化ドメイン内の、対応するシステ
イン残基の間のジスルフィド架橋の形成を媒介する、少なくとも1つのシステイン残基を
含む。
配列に対応し、かつ/またはこれと相同なアミノ酸配列を含みうる。一部の実施形態では
、本明細書で記載されるポリペプチド構築物へと組み込まれた、グリコホリンAのアミノ
酸配列は、グリコホリンAの膜貫通ドメインまたはその断片を含む。一部の実施形態では
、ポリペプチド構築物の膜貫通ドメインは、通常、グリコホリンA膜貫通ドメインに隣接
する、1または複数のアミノ酸を含みうる。一部の実施形態では、グリコホリンA膜貫通
ドメインの全部または一部を含むポリペプチド構築物は、グリコホリンA膜貫通ドメイン
の全部または一部を含む、第2のポリペプチド構築物と二量体化すること(例えば、ホモ
二量体化すること)が可能である。このような場合に、グリコホリンAから、ポリペプチ
ド構築物へと組み込まれたアミノ酸配列は、膜貫通二量体化ドメインを規定しうる。例え
ば、グリコホリンA二量体化ドメインは、二量体化モチーフであるGXXXGを含みうる
。
E91~R116を含む膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ポリペプチド構築
物は、グリコホリンAの、少なくともアミノ酸I92~I114を含む膜貫通ドメインを
含む。複数の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号25および配列番号27か
らなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、8
0%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド
配列を含むポリヌクレオチドによりコードされた、グリコホリンAドメインまたはその断
片に対応する膜貫通ドメインを含む。複数の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列
番号26および配列番号28からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少な
くとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同
一性を有する、グリコホリンAドメインまたはその断片に対応する膜貫通ドメインを含む
。
ドに由来するアミノ酸配列のキメラである膜貫通ドメインを含みうる。例えば、膜貫通ド
メインは、第2のタンパク質に由来するアミノ酸配列へと連結されるか、または融合させ
たグリコホリンAドメインまたはその部分に対応するアミノ酸配列を含みうる。一部の実
施形態では、このようなキメラ膜貫通ドメインは、第2の膜貫通ドメイン(例えば、キメ
ラまたは非キメラ)との二量体化が可能であり、したがって、膜貫通二量体化ドメインを
もたらすことが可能である。例えば、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片に対
応するアミノ酸配列を、インテグリンβ3のドメインまたはその断片に対応するアミノ酸
配列へと融合させて、ポリペプチド構築物のキメラ膜貫通ドメインを形成することができ
る。一部の実施形態では、ポリペプチド構築物は、インテグリンβ3のアミノ酸A737
~W741へと融合させたグリコホリンAのアミノ酸I92~L109を含む膜貫通ドメ
インを含む。複数の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号29のヌクレオチド
配列との、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、また
は100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりによりコー
ドされた、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ配列に対応する膜貫通ドメインを含
む。複数の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号30のアミノ酸配列との、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の
同一性を有する膜貫通ドメインを含む。
酸配列に対応し、かつ/またはこれと相同なアミノ酸配列を含みうる。一部の実施形態で
は、CD3ゼータ鎖の膜貫通ドメインまたはその断片を含むポリペプチド構築物は、CD
3ゼータ鎖の膜貫通ドメインまたはその断片を含む、第2のポリペプチド構築物と二量体
化すること(例えば、ホモ二量体化すること)が可能である。このような場合に、CD3
ゼータ鎖膜貫通ドメインに対応するアミノ酸配列は、膜貫通二量体化ドメインを規定しう
る。一部の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号31のヌクレオチド配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または1
00%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされた膜
貫通ドメインを含む。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号31のヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。複数の実施形態では、ポリペプチド
構築物は、配列番号32のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、
85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する膜貫通ドメインを含
む。
ンパク質であるCTLA4(細胞傷害性Tリンパ球タンパク質4)および/もしくはLN
GFR(TNFRSF16)に由来する膜貫通ドメインまたはその断片に対応し、かつ/
またはこれと相同なアミノ酸配列を含みうる。例えば、ポリペプチド構築物は、配列番号
37および配列番号39からなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少な
くとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同
一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされた膜貫通ドメイ
ンを含みうる。複数の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号38および配列番
号40からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%
、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する膜貫通ド
メインを含む。
本明細書で記載されるポリペプチド構築物は、膜貫通ドメインへと連結された細胞表面
ポリペプチドを含みうる。ある特定の実施形態では、細胞表面ポリペプチドは、天然ポリ
ペプチドのトランケート型変異体を含む。本明細書では、多種多様な天然ポリペプチドが
、ポリペプチド構築物へと組み込まれるトランケート型変異体を産生する、前駆体または
基質として提示される。各天然ポリペプチド前駆体は、本明細書で記載されるポリペプチ
ド構築物における使用のための、多数の可能なトランケート型変異体をもたらすように、
複数の異なるトランケーションにさらにかけることができる。
(例えば、配列番号50);受容体チロシンタンパク質キナーゼErbB2(HER2)
アイソフォーム前駆体(例えば、配列番号51);受容体チロシンタンパク質キナーゼE
rbB3(HER3)アイソフォーム1前駆体(例えば、配列番号52)、受容体チロシ
ンタンパク質キナーゼErbB4(HER4)アイソフォームJM-a/CVT-1前駆
体(例えば、配列番号53)、受容体チロシンタンパク質キナーゼErbB4(HER4
)アイソフォームJM-bアイソフォームX7(例えば、配列番号54)、CD20前駆
体(例えば、配列番号108)、CD52前駆体、およびLNGFR前駆体(例えば、配
列番号154)を含む。
チド(本明細書では、HER1tまたはEGFRtと称する)を含む。天然HER1は、
ドメインI、II、III、およびIVを含む細胞外領域、膜貫通ドメイン、ならびに細
胞内チロシンキナーゼおよび調節領域を含む。ADCCを誘導することが可能な、ある特
定の抗体(例えば、パニツムマブおよびセツキシマブ)は、内因性HER1のドメインI
IIに結合することが公知である。
ートされたHER1ポリペプチドを含むポリペプチド構築物が提示される。本明細書では
、HER1ポリペプチドは、HER1tポリペプチドを含みうる。一部の実施形態では、
HER1ポリペプチドは、HER1tポリペプチドからなるか、またはこれから本質的に
なる。他の実施形態では、HER1ポリペプチドは、他のHER1ドメイン(例えば、H
ER1膜貫通ドメイン)に加えて、HER1tポリペプチドを含みうる。複数の実施形態
では、HER1ポリペプチドは、チロシンキナーゼドメインおよび調節性領域を含む、H
ER1内に通常見出される、細胞内ドメインまたはその断片を欠く場合がある。一部の実
施形態では、HER1ポリペプチドは、HER1内に通常見出される、膜貫通ドメインま
たはその断片を欠く場合がある。一部の実施形態では、HER1ポリペプチドは、HER
1内で通常見出される、ドメインI、ドメインII、およびドメインIVの全部または一
部を含む、HER1内に通常見出される、細胞外ドメインまたはその断片を欠く場合があ
る。
IIIを欠くHER1tポリペプチドを含む。一部の実施形態では、HER1tポリペプ
チドは、内因性HER1タンパク質のドメインIIIの全部または一部からなるか、また
はこれらから本質的になる。一部の実施形態では、HER1tポリペプチドは、内因性H
ER1タンパク質のドメインIIIの全部からなるか、またはこれらから本質的になる。
ある実施形態では、細胞表面ポリペプチドへと組み込まれたHER1tドメインIIIは
、配列番号199のヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、8
5%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含
むポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態では、細胞表面ポリペプチドへと
組み込まれたHER1tドメインIIIは、配列番号200のアミノ酸配列に対する、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の
同一性を有する。
は、内因性HER1のドメインIVまたはその断片を含む。内因性HER1ドメインIV
は、配列番号201のヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、
85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を
含むポリヌクレオチドによりコードされうる。ある実施形態では、内因性HER1tドメ
インIVは、配列番号202のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80
%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。他の実施形態
では、細胞表面ポリペプチドへと組み込まれたHER1tポリペプチドは、トランケート
型ドメインIVを含みうる。HER1tトランケート型ドメインIVは、天然HER1の
うちの、少なくとも10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%
、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%
、または100%のトランケーションを含みうる。ある実施形態では、細胞表面ポリペプ
チドへと組み込まれたHER1tトランケート型ドメインIVは、配列番号203、配列
番号 配列番号204、配列番号205、配列番号206、配列番号207、配列番号2
08、および配列番号209からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少な
くとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同
一性を有する。
IVを含むHER1tポリペプチドを含みうる。ある実施形態では、HER1tポリペプ
チドは、配列番号210のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、
85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するHER1ドメインI
IIおよびドメインIVを含む。
IVの断片とを含むHER1tポリペプチドを含みうる。ある実施形態では、HER1t
ポリペプチドは、配列番号211、配列番号212、配列番号213、配列番号214、
配列番号215、配列番号216、および配列番号217からなるリストから選択される
アミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、
99%、または100%の同一性を有する。
の実施形態では、HER1tトランケート型ドメインIVは、ジスルフィド結合対を保存
する位置において、トランケーションを含みうる。さらなる実施形態では、本明細書で記
載されるHER1t変異体を、異なるサイズのG4Sリンカー(G4S)n[配列中、n
=0、1、2、3、4、5](配列番号222)を介して、膜貫通ドメインへと連結して
、HER1tと、膜貫通タンパク質との「天然」の距離を維持する。さらなる実施形態で
は、このリンカーは、EGFリガンドの活性化をもたらすEGFR受容体の二量体化にお
いて役割を果たすので、ドメインIVとEGFR膜貫通ドメインとの間の7残基のリンカ
ーを、さらに除去することができる。
ドは、外因的に導入された結合パートナーまたは抗体により認識されうるエピトープを含
みうる。一部の実施形態では、HER1tポリペプチドには、本明細書で記載されるポリ
ペプチド構築物を発現する細胞の、ターゲティングされた枯渇を容易とするために、セツ
キシマブ結合性ドメインを組み込みうる。枯渇は、例えば、CDCおよび/またはADC
Cから生じる細胞死に起因しうる。HER1tを含む細胞表面ポリペプチド上のエピトー
プに結合し、かつ/またはこれを認識するように内因的に導入されうる分子の非限定的な
例は、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブ、イコ
チニブ、オシメルチニブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、およびマツズマ
ブを含みうる。多様な実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、scFv、scFa
b、ダイアボディー、またはラクダ科動物抗体でありうる。別の実施形態では、抗体を、
薬物または毒素へとコンジュゲートさせることができる。
複数の異なる天然ポリペプチドのトランケート型変異体を含みうる。例えば、細胞表面ポ
リペプチドは、EGFRファミリーに由来する複数のトランケート型ポリペプチドを含む
ポリペプチドキメラを含みうる。図4Bは、細胞タグの機能性を付与する、ポリペプチド
構築物についての実施形態を例示するが、この場合、細胞表面ポリペプチドは、HER/
EGFRファミリーの1つのメンバー(HER(m))のドメインIIIと、HER/E
GFRファミリーの異なるメンバー(HER(n))に由来するドメインIVまたはその
断片とを含む。本明細書では、EGFR/HER1、HER2、ErbB3、およびEr
bB4のうちの、2つまたはこれを超えるものに由来する細胞外ドメインの任意の組合せ
を含むキメラ細胞表面ポリペプチドが提示される。図4Cは、ドメインIIIが、EGF
R/HER1に由来する、具体的な場合を描示する。このようなキメラ細胞表面ポリペプ
チドの利点は、各個別のトランケーションが、養子細胞治療時に、外因的に導入される抗
体により認識されうるエピトープを保存しながら、内因性分子に結合する傾向がある、そ
れぞれの天然ポリペプチドのエピトープを除去しうることである。例えば、キメラ細胞表
面ポリペプチドが、EGFRに由来するドメインIIIと、HER2に由来するドメイン
IVとを含む場合、ポリペプチドを発現する操作細胞は、抗体である、セツキシマブ(E
GFRに由来するドメインIIIを認識する)、およびトラスツズマブ(HER2に由来
するドメインIVを認識する)の両方に対して、感受性でありうる。したがって、本明細
書で記載されるキメラ細胞表面ポリペプチドは、複数の抗生剤/結合パートナーに対する
結合部位をもたらすことにより、免疫療法時に免疫細胞の挙動を制御する、さらなる機構
をもたらす。例えば、養子細胞療法時に副作用を被る対象が、キメラ細胞表面ポリペプチ
ド内のトランケート型変異体のうちの1つにおけるエピトープをターゲティングする、投
与された抗生剤(例えば、セツキシマブ)に応答しない状況下では、異なる抗体(例えば
、トラスツズマブ)を、対象へと投与して、キメラ細胞表面ポリペプチドの、他のトラン
ケート型変異体上の、異なるエピトープを介して、同じ操作細胞をターゲティングするこ
とができる。
相同な膜貫通ドメインと融合させることができる。例えば、膜貫通ドメインは、EGFR
/HER1、HER2、ErbB3、またはErbB4に由来する膜貫通ドメインに対応
しうる。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号26、配列番号28、配列番号
30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、および配列番号40
に対応する膜貫通ドメインを含む、非EGFR膜貫通ドメインと相同でありうる。
ランケート型HER2(HER2t)ポリペプチドまたはその断片とのキメラを含みうる
。例えば、ポリペプチド構築物は、HER1ドメインIIIを含む、HER1t/EGF
Rtポリペプチドと、HER2ドメインIVを含むHER2tポリペプチドと、HER2
膜貫通ドメインとを含みうる。ある実施形態では、HER2膜貫通ドメインへと融合させ
たEGFR-HER2キメラ細胞表面ポリペプチドは、配列番号88および配列番号92
(デルタ16)からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%
、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされうる。ある実施形態では、H
ER2膜貫通ドメインへと融合させたEGFR-HER2キメラ細胞表面ポリペプチドは
、配列番号89および配列番号93(デルタ16)からなる群から選択されるアミノ酸配
列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、ま
たは100%の同一性を有する。
ランケート型ErbB3(ErbB3t)ポリペプチドまたはその断片とのキメラを含み
うる。例えば、ポリペプチド構築物は、HER1ドメインIIIを含む、HER1t/E
GFRtポリペプチドと、ErbB3ドメインIVを含むErbB3tポリペプチドと、
ErbB3膜貫通ドメインとを含みうる。ある実施形態では、ErbB3膜貫通ドメイン
へと融合させたEGFR-ErbB3キメラ細胞表面ポリペプチドは、配列番号96のヌ
クレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%
、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに
よりコードされうる。ある実施形態では、ErbB3膜貫通ドメインへと融合させたEG
FR-ErbB3キメラ細胞表面ポリペプチドは、配列番号97のアミノ酸配列に対する
、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100
%の同一性を有する。
ランケート型ErbB4(ErbB4t)ポリペプチドまたはその断片とのキメラを含み
うる。例えば、ポリペプチド構築物は、ドメインIIIを含む、HER1t/EGFRt
ポリペプチドと、ErbB4ドメインIVを含むErbB4tポリペプチドと、ErbB
4膜貫通ドメインとを含みうる。一部の実施形態では、ErbB4tポリペプチドは、E
rbB4 JM-aの代替転写物によりコードされるErbB4 JM-a細胞外膜近傍
ドメインを含みうる。一部の実施形態では、ErbB4tポリペプチドは、ErbB4
JM-bの代替転写物によりコードされるErbB4 JM-b細胞外膜近傍ドメインを
含みうる。ある実施形態では、ErbB4膜貫通ドメインへと融合させたキメラ細胞表面
ポリペプチドは、配列番号100(EGFR-ErbB4(JM-a))および配列番号
104(EGFR-ErbB4(JM-b))からなるリストから選択されるヌクレオチ
ド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%
、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコー
ドされうる。ある実施形態では、ErbB4膜貫通ドメインへと融合させたEGFR-E
rbB4キメラ細胞表面ポリペプチドは、配列番号101(EGFR-ErbB4(JM
-a))および配列番号105(EGFR-ErbB4(JM-b))からなるリストか
ら選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90
%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
プチド(例えば、HER1tのみを含むか、またはHER1tを含むキメラポリペプチド
)を含む細胞表面ポリペプチドと、膜貫通ドメインと、任意選択で、リンカーとの任意の
組合せを含みうる。例えば、ポリペプチド構築物は、HER1tポリペプチドまたはHE
R1tを含むキメラポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドであって、リンカー(例え
ば、1または複数(例えば、1~4)コピーのG4S(配列番号221))を介して、C
D28膜貫通ドメインの誘導体または断片へと連結されるか、または融合させた細胞表面
ポリペプチドを含みうる。一部の実施形態では、細胞表面ポリペプチドは、配列番号56
(HER1t1);配列番号58(HER1t2);配列番号60(HER1t3);配
列番号62(HER1t4);配列番号64(HER1t5);配列番号66(HER1
t6);配列番号68(HER1t7);配列番号72(HER1t8);配列番号76
(HER1t9);配列番号80(HER1t10);および配列番号84(HER1t
11)からなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、7
5%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるHER1tポリペプチドを含み
うる。一部の実施形態では、細胞表面ポリペプチドは、配列番号55(HER1t);配
列番号57(HER1t1);配列番号59(HER1t2);配列番号61(HER1
t3);配列番号63(HER1t4);配列番号65(HER1t5);配列番号67
(HER1t6);配列番号69(HER1t7);配列番号73(HER1t8);配
列番号77(HER1t9);配列番号81(HER1t10);および配列番号85(
HER1t11)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70
%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有す
るアミノ酸配列を含むHER1tポリペプチドを含みうる。
チドまたはHER1tポリペプチドを含むキメラポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチ
ド、膜貫通二量体化ドメインを含む膜貫通ドメイン、および膜貫通ドメインと、細胞表面
ポリペプチドとを接続するリンカーを含みうる。例えば、ポリペプチド構築物は、Igカ
ッパシグナルペプチド、HER1の特定のトランケート型変異体、リンカー(例えば、(
G4S)4(配列番号22))、および膜貫通二量体化ドメイン(例えば、グリコホリン
AのI92~I114またはCD3ゼータに由来する膜貫通ドメインを含む)を含みうる
。複数の実施形態では、HER1tポリペプチドと、膜貫通二量体化ドメインとを含むポ
リペプチド構築物は、配列番号70(グリコホリンA;HER1t8);配列番号74(
グリコホリンA;HER1t9);配列番号78(グリコホリンA;HER1t10);
および配列番号82(CD3ゼータ;HER1t11)からなるリストから選択されるヌ
クレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%
、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに
よりコードされる。複数の実施形態では、HER1tポリペプチドと、膜貫通二量体化ド
メインとを含むポリペプチド構築物は、配列番号71(グリコホリンA;HER1t8)
;配列番号75(グリコホリンA;HER1t9);配列番号79(グリコホリンA;H
ER1t10);および配列番号83(CD3ゼータ;HER1t11)からなるリスト
から選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、9
0%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
HER1t-HER2tキメラを含む、細胞表面ポリペプチドを含みうる。トランケート
型HER1t-HER2tキメラおよび膜貫通ドメインを、ポリペプチド構築物を、細胞
表面へと方向付ける、シグナルペプチド(例えば、GMCSFRα)へとさらに接続する
ことができる。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号86および配列番号
90(デルタ16)からなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくと
も70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性
を有するポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態では、ポリペプチド構築物
は、配列番号87および配列番号91(デルタ16)からなるリストから選択されるアミ
ノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99
%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
R1t-ErbB3tキメラを含む、細胞表面ポリペプチドを含みうる。ある実施形態で
は、HER1t-ErbB3tキメラおよび膜貫通ドメインを、ポリペプチド構築物を、
細胞表面へと方向付ける、シグナルペプチド(例えば、GMCSFRα)へとさらに接続
する。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号94のヌクレオチド配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または1
00%の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態では、ポリ
ペプチド構築物は、配列番号95のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、
80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配
列を有する。
、HER1t-ErbB4tキメラを含む、細胞表面ポリペプチドを含みうる。ある実施
形態では、HER1t-ErbB4tキメラおよび膜貫通ドメインを、ポリペプチド構築
物を、細胞表面へと方向付ける、シグナルペプチド(例えば、GMCSFRα)へとさら
に接続する。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号98(JM-a変異体
)および配列番号102(JM-b変異体)からなるリストから選択されるヌクレオチド
配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、
または100%の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態で
は、ポリペプチド構築物は、配列番号99(JM-a変異体)および配列番号103(J
M-b変異体)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%
、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する
アミノ酸配列を有する。
面へと方向付けることが可能な、任意のシグナルペプチドを含みうる。例えば、HER1
tポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチド(例えば、配列番号200、配列番号210
、配列番号211、配列番号212、配列番号213、配列番号214、配列番号215
、配列番号216および配列番号217からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または1
00%の同一性を有するアミノ酸配列を含む)を、配列番号2(GMCSFRα)、配列
番号4(Igカッパ)、配列番号6(免疫グロブリンE)、配列番号8(CD8α)、配
列番号10(TVB2)、配列番号12(CD52)、または配列番号14(LNFGR
)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、8
0%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列
を含むシグナルペプチドと融合させることができる。
貫通ドメインを含む、任意の膜貫通ドメインを含みうる。例えば、HER1tポリペプチ
ドを含む細胞表面ポリペプチド(例えば、配列番号200、配列番号210、配列番号2
11、配列番号212、配列番号213、配列番号214、配列番号215、配列番号2
16および配列番号217からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なく
とも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一
性を有するアミノ酸配列を含む)は、配列番号26(グリコホリンA E91~R116
)、配列番号28(グリコホリンA I92~I114)、配列番号30(グリコホリン
A(I92~L109).インテグリンβ3(A737~W741)、配列番号32(C
D3ゼータ鎖)、配列番号34(CD8α)、配列番号36(CD28)、配列番号38
(CTLA4)および配列番号40(LNGFR)からなるリストから選択されるアミノ
酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%
、または100%の同一性を含む膜貫通ドメインへと連結することができる。
うる(または、一部の実施形態では、ペプチドリンカーを含みえない)。例えば、HER
1tを含む細胞表面ポリペプチド(例えば、配列番号200、配列番号210、配列番号
211、配列番号212、配列番号213、配列番号214、配列番号215、配列番号
216および配列番号217からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少な
くとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同
一性を有するアミノ酸配列を含む)を、配列番号16(GSG)、配列番号18(SGS
G)、配列番号20((G4S)3)、配列番号22((G4S)4)および配列番号2
4(ホイットロー)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも7
0%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有
するアミノ酸配列を含むペプチドリンカーと融合させることができる。
、細胞表面ポリペプチドは、トランケート型CD20ポリペプチド(本明細書では、CD
20tと称する)を含みうる。天然CD20ポリペプチドは、4回膜貫通ドメインサブフ
ァミリーAメンバー1(MS4A1)遺伝子によりコードされる、複数回膜貫通型膜貫通
タンパク質である。ある特定の実施形態では、全長CD20は、配列番号106のヌクレ
オチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされ、全長CD20アミノ酸配列は、配
列番号107のアミノ酸配列に対応しうる。一部の実施形態では、CD20は、アミノ酸
57~78、85~105、121~141、および189~209を包含する、4つの
膜貫通ドメイン膜貫通部分を含む。一部の実施形態では、CD20は、アミノ酸79~8
4および142~188を包含する、2つの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では
、CD20は、アミノ酸1~56、106~120、および210~297を包含する、
3つの細胞質ドメインを含む。
ートされたCD20ポリペプチドを含むポリペプチド構築物が提示される。本明細書では
、CD20ポリペプチドは、CD20tポリペプチドを含みうる。一部の実施形態では、
CD20ポリペプチドは、CD20tポリペプチドからなるか、またはこれから本質的に
なる。他の実施形態では、CD20ポリペプチドは、別のCD20ドメインまたはその部
分(例えば、CD20膜貫通ドメインおよび/または細胞質ドメイン)に加えて、CD2
0tポリペプチドを含みうる。例えば、CD20ポリペプチドは、細胞内細胞質(例えば
、シグナル伝達)ドメインもしくはその部分、膜貫通(例えば、ヘリックス)ドメインも
しくはその部分、および/または細胞外ドメインもしくはその部分をトランケートするこ
とができる。一部の実施形態では、CD20ポリペプチドは、野生型ポリペプチドと比べ
て、複数のドメインまたはドメインの複数の部分を逸失している場合がある。ある実施形
態では、CD20ポリペプチドは、内因性CD20のM1~E263(配列番号109;
CD20t1)、内因性CD20のM117~N214(配列番号111(CD20t2
)、内因性CD20のM1~N214(配列番号115;CD20t4)、内因性CD2
0のV82~N214(配列番号117;CD20t5)、または内因性CD20のV8
2~I186(配列番号119、CD20t6)を含む。
うる。ある実施形態では、CD20tポリペプチドは、配列番号218、配列番号219
、および配列番号220からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくと
も70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性
を有する。一部の実施形態では、CD20tポリペプチドは、膜貫通ドメインまたはその
断片へと連結することができる。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、CD20膜
貫通ドメインへと連結されたCD20tポリペプチドを含む。一部の実施形態では、CD
20膜貫通ドメインへと連結されたCD20tポリペプチドを含むポリペプチド構築物は
、配列番号108(M1~E263をコードするCD20t1);配列番号110(M1
17~N214をコードするCD20t2);配列番号114(M1~N214をコード
するCD20t4);配列番号116(V82~N214をコードするCD20t5);
配列番号118(V82~I186をコードするCD20t6);配列番号132(M1
~A54およびC111~P297をコードするCD20t13);配列番号134(M
1~A54およびC111~E281をコードするCD20t14);配列番号136(
M1~A54およびC111~E263をコードするCD20t15);配列番号138
(M1~A54およびC111~V228をコードするCD20t16);および配列番
号140(M1~V8およびC111~P297をコードするCD20t17)からなる
リストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、
85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を
含むポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態では、CD20膜貫通ドメイン
へと連結されたCD20tポリペプチドを含むポリペプチド構築物は、配列番号109(
CD20t1:M1~E263);配列番号111(CD20t2:M117~N214
);配列番号115(CD20t4:M1~N214);配列番号117(CD20t5
:V82~N214);配列番号119(CD20t6:V82~I186);配列番号
133(CD20t13:M1~A54およびC111~P297);配列番号135(
CD20t14:M1~A54およびC111~E281);配列番号137(CD20
t15:M1~A54およびC111~E263);配列番号139(CD20t16:
M1~A54およびC111~V228);および配列番号141(CD20t17:M
1~V8およびC111~P297)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対す
る、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または10
0%の同一性を有するアミノ酸配列を含みうる。
y compact epitope-based marker/suicide gene for easier and safer T-cell therapy,
” Blood: 124: 1277-1287において記載されている通り、内因性CD20のリツキシマブ
結合性ミモトープの、少なくとも1つのコピーを保持しうる。一部の実施形態では、CD
20tの、1または複数コピーのリツキシマブ結合性エピトープを、抗CD34モノクロ
ーナル抗体の結合を容易とする、CD34の、アミノ末端の40アミノ酸など、1または
複数のCD34由来のアミノ酸配列と融合させることができる。一部の実施形態では、C
D20tポリペプチドは、除去された複数のドメイン、または除去された複数のドメイン
の部分を有しうる。
体または結合パートナーにより認識されうるエピトープを含みうる。例えば、細胞表面ポ
リペプチド内に含まれるCD20tポリペプチドには、本明細書で記載されるポリペプチ
ド構築物を発現する細胞の、ターゲティングされた枯渇(例えば、CDCおよび/または
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性ADCCを介する)を容易とするために、リツキシマブ
結合性ドメインを組み込みうる。CD20tポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドの
エピトープに結合しうるように使用される抗体の非限定的な例は、リツキシマブ、hOU
BM3/6、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、オビヌツズマブ、イブリツモマブチウキ
セタン、トシツモマブ、オファツムマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、TRU-0
15(Trubion)、およびベルツズマブ(IMMU-106)を含む。多様な実施
形態では、抗体は、モノクローナル抗体、scFv、scFab、ダイアボディー、また
はラクダ科動物抗体でありうる。他の実施形態では、抗体を、薬物または毒素へとコンジ
ュゲートさせることができる。一部の実施形態では、CD20tポリペプチドは、内因性
CD20の細胞外ドメイン内で見出されるエピトープを含む。一部の実施形態では、CD
20tポリペプチドのエピトープは、内因性CD20のアミノ酸170~185を含む。
一部の実施形態では、CD20tポリペプチドのエピトープは、内因性CD20のアミノ
酸170~173および182~185を含む。
たは複数のさらなるポリペプチドのトランケート型変異体についてキメラである。例えば
、キメラ細胞表面ポリペプチドは、CD20tポリペプチドと、トランケート型CD8α
(CD8αt)ポリペプチドとを含みうる。
さらに含みうる。例えば、細胞表面ポリペプチドは、連続で繰り返される、同じCD20
tアミノ酸配列を含む場合もあり、併せて接続された、異なるCD20t変異体を含む場
合もある。一部の実施形態では、CD20tアミノ酸配列を、細胞表面ポリペプチド内で
、ペプチドリンカーにより併せて連結する。ある実施形態では、SGSリンカーまたはS
G4Sリンカー(配列番号223)を使用して、SG4Sリンカー(配列番号223)に
より、CD28膜貫通ドメインへと連結された細胞表面ポリペプチドをさらに含む、細胞
表面ポリペプチド内の、反復するCD20アミノ酸配列を、併せて連結することができる
(例えば、配列番号123(SGSリンカー)および配列番号129(SG4Sリンカー
(配列番号223)を参照されたい)。
プチド(例えば、CD20tのみを含むか、またはCD20tキメラポリペプチド)を含
む細胞表面ポリペプチドと、膜貫通ドメインと、任意選択で、リンカーとの任意の組合せ
を含みうる。例えば、ポリペプチド構築物は、CD20tポリペプチドを含む細胞表面ポ
リペプチドを、膜貫通ドメインへと接続するか、または融合させるSG4Sリンカー(配
列番号223)を含みうる。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、CD20、C
D28、またはCD8αに由来する膜貫通ドメインまたはその断片に由来するか、または
これと相同である。ある実施形態では、CD20tを含むポリペプチド構築物は、配列番
号112(CD20t(K142~S188)およびCD8α(I183~T203)膜
貫通ドメインをコードするCD20t3);配列番号120(CD20t(P160~Q
187)、SG4Sリンカー(配列番号223)、およびCD28(I96~D172)
膜貫通ドメインをコードするCD20t7);配列番号122(CD20tコンカタマー
(SGSリンカーにより隔てられたP160~Q187)、SG4Sリンカー(配列番号
223)、およびCD28(I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD20t
8);配列番号124(CD20t(P160~Q187)、SG4Sリンカー(配列番
号223)、およびCD8α(P120~V201)膜貫通ドメインをコードするCD2
0t9);配列番号126(CD20t(C167~C183)、SG4Sリンカー(配
列番号223)、およびCD28(I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD
20t10;配列番号128(CD20コンカタマー(SG4Sリンカー(配列番号22
3)により隔てられたC167~C183)、SG4Sリンカー(配列番号223)、お
よびCD28(I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD20t11);およ
び配列番号130(CD20t(C167~C183)、SG4Sリンカー(配列番号2
23)、およびCD8α(P120~V201)膜貫通ドメインをコードするCD20t
12)からなるリストから選択されるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコ
ードされる。ある実施形態では、CD20tを含むポリペプチド構築物は、配列番号11
3(CD20t3;CD20t(K142~S188)およびCD8α(I183~T2
03)膜貫通ドメイン);配列番号121(CD20t(P160~Q187)、SG4
Sリンカー(配列番号223)、およびCD28(I96~D172)膜貫通ドメインを
コードするCD20t7);配列番号123(CD20tコンカタマー(SGSリンカー
により隔てられたP160~Q187)、SG4Sリンカー(配列番号223)、および
CD28(I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD20t8);配列番号1
25(CD20t(P160~Q187)、SG4Sリンカー(配列番号223)、およ
びCD8α(P120~V201)膜貫通ドメインをコードするCD20t9);配列番
号127(CD20t(C167~C183)、SG4Sリンカー(配列番号223)、
およびCD28(I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD20t10);配
列番号129(CD20コンカタマー(SG4Sリンカー(配列番号223)により隔て
られたC167~C183)、SG4Sリンカー(配列番号223)、およびCD28(
I96~D172)膜貫通ドメインをコードするCD20t11);および配列番号13
1(CD20t(C167~C183)、SG4Sリンカー(配列番号223)、および
CD8α(P120~V201)膜貫通ドメインをコードするCD20t12)からなる
リストから選択されるアミノ酸配列を含む。
面へと方向付けることが可能な、任意のシグナルペプチドを含みうる。例えば、CD20
tポリペプチドを含むポリペプチド構築物(例えば、配列番号218、配列番号219、
および配列番号220からなるリストから選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド)
を、配列番号2(GMCSFRα)、配列番号4(IGカッパ)、配列番号6(免疫グロ
ブリンE)、配列番号8(CD8α)、配列番号10(TVB2)、配列番号12(CD
52)、または配列番号14(LNFGR)からなるリストから選択されるアミノ酸配列
に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、また
は100%の同一性を有するアミノ酸配列を含むシグナルペプチドと融合させることがで
きる。
たは二量体化ドメインを含まない膜貫通ドメインを含む、任意の膜貫通ドメインを含みう
る。例えば、CD20tポリペプチドを含むポリペプチド構築物(例えば、配列番号21
8、配列番号219、および配列番号220からなるリストから選択されるアミノ酸配列
を含むポリペプチド)を、配列番号26(グリコホリンA E91~R116)、配列番
号28(グリコホリンA I92~I114)、配列番号30(グリコホリンA (I9
2~L109).インテグリンβ3(A737~W741)、配列番号32(CD3ゼー
タ鎖)、配列番号34(CD8α)、配列番号36(CD28)、配列番号38(CTL
A4)および配列番号40(LNGFR)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に
対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または
100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインと融合させることができる
。CD20tを含むポリペプチド構築物は、CD28および/またはCD8αに由来する
か、またはこれと相同な膜貫通ドメインをさらに含みうる。
うる(または、一部の実施形態では、ペプチドリンカーを含みえない)。例えば、CD2
0tポリペプチドを含むポリペプチド構築物(例えば、配列番号218、配列番号219
、および配列番号220からなるリストから選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド
)を、配列番号16(GSG)、配列番号18(SGSG)、配列番号20((G4S)
3)、配列番号22((G4S)4)および配列番号24(ホイットロー)からなるリス
トから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、
90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド
リンカーと融合させることができる。
ドの別の例は、CD52である。CD52は、そのC末端において、グリコシルホスファ
チジルイノシトール(GPI)アンカーへと連結された、12アミノ酸のペプチドとして
、ヒトにおいて内因的に生じる。一部の実施形態では、グリコシルホスファチジルイノシ
トール(GPI)を使用して、本明細書で記載されるポリペプチドを、細胞表面へとアン
カリングすることができる。
ートされたCD52ポリペプチドを含むポリペプチド構築物が提示される。本明細書では
、CD52ポリペプチドは、トランケート型CD52(CD52t)ポリペプチドを含み
うる。一部の実施形態では、CD52ポリペプチドは、CD52tポリペプチドを含む細
胞表面ポリペプチドからなるか、またはこれらから本質的になる。他の実施形態では、C
D52ポリペプチドは、他のCD52ドメイン(例えば、CD52シグナルペプチド)に
加えて、CD52tポリペプチドを含む、細胞表面ポリペプチドを含みうる。
を含むポリペプチド構築物が提示される。一部の実施形態では、トランケート型変異体を
、細胞表面へと方向付けるために、CD52シグナルペプチドを、CD52tポリペプチ
ドへと連結する。一部の実施形態では、CD52tポリペプチドを含む細胞表面ポリペプ
チドには、外因的に導入された抗体または結合パートナーにより認識されうる、1または
複数のエピトープを組み込みうる。例えば、CD52tポリペプチドには、1または複数
のアレムツズマブ結合性ドメインを組み込み、これにより、本明細書で記載されるポリペ
プチド構築物を発現する細胞の、ターゲティングされた枯渇が容易となりうる。一部の実
施形態では、ターゲティングされた枯渇は、アレムツズマブにより媒介されたCDCおよ
び/もしくADCC、またはアレムツズマブによる認識の細胞傷害性効果を媒介する、別
の細胞機構から生じうる。CD52tポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドを認識し
うる、抗CD52分子の非限定的な例は、アレムツズマブ、ANT1034、HI186
(Bio Rad)、YTH34.5(Bio Rad)、およびYTH66.9HL(
Bio-Rad)を含む。多様な実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、scFv
、scFab、ダイアボディー、またはラクダ科動物抗体でありうる。ある実施形態では
、CD52エピトープをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号142のヌクレオ
チド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99
%、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、CD
52エピトープは、配列番号143のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%
、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
れうる、複数のエピトープを有しうる。例えば、CD52tポリペプチドの場合、CD5
2tポリペプチドを含むポリペプチド構築物は、結合パートナー(例えば、アレムツズマ
ブ)に特異的な、複数のエピトープを含みうる。ある実施形態では、CD52tポリペプ
チドは、複数コピー(例えば、少なくとも2コピー、少なくとも3コピー、少なくとも4
コピー、少なくとも5コピー、少なくとも6コピー、または少なくとも10コピー)の、
配列番号143に示されるアミノ酸配列を含む。アミノ酸配列の各コピーまたは各リピー
トは、ポリペプチド構築物内で、リンカー(例えば、ホイットローリンカー)により隔て
ることができる。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、膜貫通ドメイン(例えば、
CD28膜貫通ドメインまたはその断片)へと連結された(例えば、1または複数コピー
の(G4S)リンカー(配列番号221)を介して)、ホイットローリンカーと融合させ
た、1または複数コピーのCD52tポリペプチドへと連結されたCD52シグナルペプ
チドを含む。ある実施形態では、CD52tポリペプチドを含むポリペプチド構築物は、
配列番号144(CD52t1;1コピーのエピトープ/リンカーをコードする;)、配
列番号146(CD52t2;2コピーのエピトープ/リンカーをコードする)、および
配列番号148(CD52t3;3コピーのエピトープ/リンカーをコードする)からな
るリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも70%、75%、80%
、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するポリヌクレオチド
によりコードされる。ある実施形態では、CD52tポリペプチドを含むポリペプチドは
、配列番号145(CD52t1;1コピーのエピトープ/リンカーをコードする)、配
列番号147(CD52t2;2コピーのエピトープ/リンカーをコードする)、および
配列番号149(CD52t3;3コピーのエピトープ/リンカーをコードする)からな
るリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、8
5%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
たは二量体化ドメインを含まない膜貫通ドメインを含む、任意の膜貫通ドメインを含みう
る。例えば、CD52tポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドを、リンカー(例えば
、3×GSリンカー(配列番号224))を介して、膜貫通二量体化ドメインを含む膜貫
通ドメイン(例えば、グリコホリンAまたはグリコホリンA-インテグリンβ3の膜貫通
ドメインに由来するか、またはこれと相同な)と融合させることができる。ある実施形態
では、CD52tポリペプチドを含むポリペプチド構築物は、配列番号150(CD52
t4;CD52シグナルペプチド、3×GSペプチドリンカー(配列番号224)、およ
びグリコホリンA膜貫通ドメイン)、配列番号151(CD52t5;CD52シグナル
ペプチド、3×GSペプチドリンカー(配列番号224)、およびグリコホリンA膜貫通
ドメイン)、および配列番号152(CD52t6;CD52シグナルペプチド、3×G
Sリンカー(配列番号224)、およびグリコホリンA-インテグリンβ3膜貫通ドメイ
ン)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、
80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
列番号145、配列番号147、および配列番号149からなるリストから選択されるア
ミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、9
9%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列をもたらすように、CD52シグナ
ルペプチドへと連結しうる配列番号143)は、配列番号26(グリコホリンA E91
~R116)、配列番号28(グリコホリンA I92~I114)、配列番号30(グ
リコホリンA(I92~L109).インテグリンβ3(A737~W741)、配列番
号32(CD3ゼータ鎖)、配列番号34(CD8α)、配列番号36(CD28)、配
列番号38(CTLA4)および配列番号40(LNGFR)からなるリストから選択さ
れるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95
%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインへと連
結することができる。
面へと方向付けることが可能な、任意のシグナルペプチドを含みうる。ある実施形態では
、CD52tポリペプチドを、CD52のシグナルペプチドへと連結する(例えば、ポリ
ペプチド構築物は、配列番号145、配列番号147、および配列番号149からなるリ
ストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%
、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む)。一
部の実施形態では、ポリペプチド構築物は、配列番号2(GMCSFRα)、配列番号4
(IGカッパ)、配列番号6(免疫グロブリンE)、配列番号8(CD8α)、配列番号
10(TVB2)、配列番号12(CD52)、または配列番号14(LNFGR)から
なるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、
85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む
シグナルペプチドへと連結されたCD52tポリペプチド(例えば、配列番号143)を
含む。
うる(または、一部の実施形態では、ペプチドリンカーを含みえない)。例えば、CD5
2tを含む細胞表面ポリペプチド(例えば、配列番号143のアミノ酸配列に対する、少
なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の
同一性を有するアミノ酸配列を含む)を、配列番号16(GSG)、配列番号18(SG
SG)、配列番号20((G4S)3)、配列番号22((G4S)4)および配列番号
24(ホイットロー)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも
70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を
有するアミノ酸配列を含むペプチドリンカーと融合させることができる。
ファミリーに由来するポリペプチドのトランケート形を含みうる。例えば、LNGFRは
、タンパク質のシステイン残基の間のジスルフィド結合の形成に部分的に起因して、フォ
ールディングされた構造を呈する細胞外ドメインを有する1回膜貫通型I型膜貫通糖タン
パク質である。ある実施形態では、LNGFRまたはその部分をコードするポリヌクレオ
チドは、配列番号153、配列番号155(LNGFR細胞外ドメインのK29~N25
0をコードする)、配列番号157(ジスルフィド結合を形成することが可能な、システ
イン残基2、3、4を含むE65~N250をコードする)、および配列番号159(ジ
スルフィド結合を形成することが可能な、システイン残基3、4を含むR108~N25
0をコードする)からなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも
70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を
有するヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、LNGFRは、配列番号154、配
列番号156(LNGFR細胞外ドメインのK29~N250を含む)、配列番号158
(ジスルフィド結合を形成することが可能な、システイン残基2、3、4を含むE65~
N250を含む)、および配列番号160(ジスルフィド結合を形成することが可能な、
システイン残基3、4を含むR108~N250を含む)からなるリストから選択される
アミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、
99%、または100%の同一性を有する。
ケートされたLNGFRポリペプチドを含むポリペプチド構築物が提示される。本明細書
では、LNGFRポリペプチドは、LNGFRtポリペプチドを含みうる。一部の実施形
態では、LNGFRポリペプチドは、LNGFRtポリペプチドを含む細胞表面ポリペプ
チドからなるか、またはこれらから本質的になる。他の実施形態では、LNGFRポリペ
プチドは、他のLNGFRドメイン(例えば、LNGFR膜貫通ドメイン)に加えて、L
NGFRtポリペプチドを含む、細胞表面ポリペプチドを含みうる。
トランケートされた、トランケート型LNGFR(本明細書にLNGFRt)ポリペプチ
ドを含みうる。例えば、LNGFRtポリペプチドは、膜貫通ドメインもしくはその部分
、細胞内ドメインもしくはその部分、または細胞外ドメインもしくはその部分のうちの1
または複数をトランケートすることができる。一部の実施形態では、LNGFRtポリペ
プチドは、そのリガンド(例えば、NGF、BDNF、NTF3、およびNTF4)のた
めの天然結合ドメインを形成する、1または複数のTNFR-Cysリピートをトランケ
ートすることができる。ある実施形態では、ポリペプチド構築物は、全細胞外ドメイン(
配列番号156)を含むLNGFRtポリペプチドを含む。ある実施形態では、LNGF
Rtポリペプチドを含むポリペプチド構築物を、LNGFR膜貫通ドメインと融合させる
。ある実施形態では、LNGFR膜貫通ドメインへと連結された、LNGFRtポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号161のヌクレオチド配列(LNGFR
t1)に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%
、または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、LNG
FR膜貫通ドメインへと連結された、LNGFRtポリペプチドは、配列番号162のア
ミノ酸配列(LNGFRt1)に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、
90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
または二量体化ドメインを含まない膜貫通ドメインを含む、任意の膜貫通ドメインを含み
うる。例えば、ポリペプチド構築物は、LNGFR膜貫通ドメインまたはその断片へと連
結されたLNGFRtポリペプチドを含みうる。他の実施形態では、LNGFRtポリペ
プチドを、二量体化が可能な膜貫通ドメインを含む、異なるポリペプチドに由来する膜貫
通ドメインまたはその断片と(例えば、リンカーを介して)融合させることができる。あ
る実施形態では、LNGFRtポリペプチドを含むポリペプチド構築物は、配列番号16
3(LNGFRt2;全LNGFR細胞外ドメイン;GSリンカーおよびCD28膜貫通
ドメイン);配列番号164(LNGFRt3;システイン残基2~4、GSペプチドリ
ンカー、およびCD28膜貫通ドメインを含む、LNGFR細胞外ドメインの断片)、配
列番号165(LNGFRt3;システイン残基3~4、GSペプチドリンカー、および
CD28膜貫通ドメインを含む、LNGFR細胞外ドメインの断片);配列番号166(
LNGFRt5;システイン残基3~4、GSリンカー、およびグリコホリンA膜貫通ド
メインを含む、LNGFR細胞外ドメインの断片)、配列番号167(LNGFRt6;
システイン残基3~4、GSリンカー、およびグリコホリンA膜貫通ドメインを含む、L
NGFR細胞外ドメインの断片);および配列番号168(LNGFRt7;システイン
残基3~4、GSリンカー、およびグリコホリンA-インテグリンβ3膜貫通ドメインを
含む、LNGFR細胞外ドメインの断片)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に
対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または
100%の同一性を有する。
号26(グリコホリンA E91~R116)、配列番号28(グリコホリンA I92
~I114)、配列番号30(グリコホリンA(I92~L109).インテグリンβ3
(A737~W741)、配列番号32(CD3ゼータ鎖)、配列番号34(CD8α)
、配列番号36(CD28)、配列番号38(CTLA4)、および配列番号40(LN
GFR)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75
%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ
酸配列を含む膜貫通ドメインと融合させることができる。
表面へと方向付けることが可能な、任意のシグナルペプチドを含みうる。例えば、LNG
FRtポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドを、配列番号2(GMCSFRα)、配
列番号4(IGカッパ)、配列番号6(免疫グロブリンE)、配列番号8(CD8α)、
配列番号10(TVB2)、配列番号12(CD52)、または配列番号14(LNFG
R)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、
80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配
列を含むシグナルペプチドと融合させることができる。
みうる(または、一部の実施形態では、ペプチドリンカーを含みえない)。例えば、LN
GFRtポリペプチドを含む細胞表面ポリペプチドを、配列番号16(GSG)、配列番
号18(SGSG)、配列番号20((G4S)3)、配列番号22((G4S)4)、
および配列番号24(ホイットロー)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対す
る、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または10
0%の同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチドリンカーと融合させることができる。
ベクター
本明細書で記載されるポリペプチド構築物は、ベクターを介して、操作細胞へと組み込
まれた、1または複数のポリヌクレオチドによりコードされうる。本明細書では、「発現
ベクター」または「ベクター」とは、細胞内のポリヌクレオチドの複製の自律的単位とし
て挙動する(すなわち、それ自身の制御下における複製が可能である)か、または宿主細
胞の染色体への挿入により複製が可能となる、任意の遺伝子エレメント、例えば、プラス
ミド、染色体、ウイルス、トランスポゾンであって、接合させたセグメントの複製および
/または発現をもたらすように、それへと、別のポリヌクレオチドセグメントを接合させ
た遺伝子エレメントである。適切なベクターは、プラスミド、トランスポゾン、バクテリ
オファージ、およびコスミドを含むがこれらに限定されない。ベクターは、所望の宿主細
胞中へのベクターのライゲーションまたは挿入を実施し、接合させたセグメントの発現を
実施するのに必要なポリヌクレオチド配列を含有しうる。このような配列は、宿主生物に
応じて異なり、転写を実施するプロモーター配列、転写を増加させるエンハンサー配列、
リボソーム結合性部位の配列、および転写翻訳終結配列を含む。代替的に、発現ベクター
は、ベクターの、宿主細胞のDNA配列へのライゲーションまたは組込みを伴わずに、そ
の中でコードされる核酸配列の産物を、直接発現させることが可能でありうる。
用マーカー遺伝子」という用語は、核酸配列を発現する細胞を、対応する選択用薬剤の存
在下で、これと順方向または逆方向に、特異的に選択することを可能とする核酸配列を指
す。当技術分野では、適切な選択用マーカー遺伝子が公知であり、例えば、国際特許出願
公開第1992/08796号パンフレットおよび同第1994/28143号パンフレ
ット、Wigler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567 (1980)、O’Hare et al.
, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527 (1981)、Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad
. Sci. USA, 78: 2072 (1981)、Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150:1 (1981
)、Santerre et al., Gene, 30: 147 (1984)、Kent et al., Science, 237: 901-903 (19
87)、Wigler et al., Cell, 11: 223 (1977)、Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 48: 2026 (1962)、Lowy et al., Cell, 22: 817 (1980)、ならびに米国特
許第5,122,464号明細書および同第5,770,359号明細書において記載さ
れている。
択的圧の存在下で、宿主細胞内のDNAの染色体外セグメントとして存続する、「エピソ
ーム発現ベクター」または「エピソーム」である(例えば、Conese et al., Gene Therap
y, 11:1735-1742 (2004)を参照されたい)。代表的な、市販のエピソーム発現ベクターは
、エプスタイン-バー核抗原1(EBNA1)およびエプスタイン-バーウイルス(EB
V)複製起点(oriP)を用いるエピソームプラスミドを含むがこれらに限定されない
。ベクターである、pREP4、pCEP4、pREP7、ならびにInvitroge
n(Carlsbad、Calif.)製のpcDNA3.1およびStratagen
e(LaJolla、Calif.)製のpBK-CMVは、EBNA1およびoriP
の代わりに、T抗原およびSV40の複製起点を使用する、エピソームベクターの非限定
的な例を表す。
ート型変異体を含む細胞表面ポリペプチドと、任意選択で、膜貫通ドメインを、細胞表面
ポリペプチドへと接続するペプチドリンカーとを含みうるポリペプチド構築物が提示され
る。例えば、図4Aは、細胞タグの機能性を有するポリペプチド構築物についての実施形
態を例示する。トランケート型変異体は、膜貫通ドメインへと接続されるペプチドリンカ
ーを介して細胞外マトリックスへと伸長する。トランケート型変異体は、トランケート型
変異体/細胞タグを認識し、これに結合しうる、抗トランケート型変異体抗体(例えば、
外因的に付加された)に対する、1または複数のエピトープを含みうる。一部の実施形態
では、抗体の、トランケート型変異体への結合は、例えば、サイトカイン、TCR、およ
び/またはCARなど、1または複数のさらなる分子を発現するように細胞を操作した、
養子細胞治療時に有益でありうる、細胞の枯渇(例えば、ADCCを介する)を結果とし
てもたらしうる。一部の実施形態では、異なるポリペプチド構築物は、一定の膜貫通ドメ
インおよびシグナルペプチドを含むが、ポリペプチド構築物へと組み込まれたトランケー
ト型変異体の識別を変動させる。例えば、異なるポリペプチド構築物は、同じ天然ポリペ
プチドの、異なるトランケート型変異体を含みうる。2つのポリペプチド構築物に、同じ
天然ポリペプチドの、異なるトランケート型変異体が組み込まれている場合、ポリペプチ
ド構築物は、ポリペプチド構築物内の、ペプチドリンカーの存在/非存在、またはペプチ
ドリンカーの長さに基づき、さらに異なりうる。一部の実施形態では、各ポリペプチド構
築物のペプチドリンカーは、特定のトランケート型変異体の遠位末端と、細胞表面との、
比較的一定の距離を維持するサイズである。
プチド構築物の構築を容易とするための、ポリヌクレオチドおよび方法が提示される。あ
る特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドおよび膜貫通ドメイン(
例えば、膜貫通二量体化ドメインを含むかまたは欠く)をコードする配列を含むベクター
を含みうる。ベクターは、インサートが、特定のトランケート型変異体と、任意選択で、
ペプチドリンカーとをコードするヌクレオチド配列を含むように、シグナルペプチドと、
膜貫通ドメインとの間に、インサートをクローニングすることをもたらしうる。代替的に
、シグナルペプチドと、特定のトランケート型変異体と、任意選択で、リンカーとをコー
ドするポリヌクレオチドを含み、トランケート型変異体またはリンカーのコード配列と隣
接する膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列の挿入をもたらすベクターを提供す
ることもできる。結果として得られるポリペプチド構築物内の、1または複数の特定のド
メインを、一定に維持するが、ポリペプチド構築物の間で可変的でありうるドメインの出
し入れを可能とする、一連のベクターを提示することにより、本開示は、シグナルペプチ
ドと、トランケート型変異体と、膜貫通ドメインと、リンカーとの、任意の組合せを含む
ポリペプチド構築物の作製を容易とする。
本明細書で記載される方法および組成物に有用なポリヌクレオチドベクターは、「医薬
品および医薬部外品の製造管理および品質管理の基準」(GMP)に適合するベクターで
ありうる。例えば、GMPベクターは、非GMPベクターより純粋でありうる。場合によ
って、純度は、バイオバーデンにより測定することができる。例えば、バイオバーデンは
、ベクター組成物中の、好気性細菌、嫌気性細菌、芽胞形成菌、真菌、またはこれらの組
合せの存在または非存在でありうる。場合によって、純粋なベクターは、低内毒素または
内毒素非含有でありうる。純度は、二本鎖プライマーウォーキングシーケンシングによっ
てもまた測定することができる。プラスミドの同一性は、ベクターの純度を決定する源泉
でありうる。本発明のGMPベクターは、非GMPベクターより、10%~99%純粋で
ありうる。GMPベクターは、バイオバーデン、内毒素、シーケンシング、またはこれら
の組合せの存在により測定される通り、非GMPベクターより、10%、15%、20%
、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%
、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、または99%純
粋でありうる。
。ターミネーター配列は、第2の遺伝子プログラムを開始する前に転写物が終結すること
を確実にしうる。例えば、発現ベクターは、転写の終結およびmRNAの安定化に必要な
配列を含有しうる。このような配列は、真核生物またはウイルスの、DNAまたはcDN
Aの5’側非翻訳領域から入手可能であり、時に、3’側非翻訳領域からも入手可能であ
る。これらの領域は、mRNAの非翻訳部分内の、ポリアデニル化断片として転写される
ヌクレオチドセグメントを含有しうる。発現ベクターを含む細胞を、in vivoまた
はin vitroの、所望のポリペプチドの発現をもたらす条件下で増殖させる。
、第1のポリペプチドの末端において使用することができる。他の場合には、スペーサー
配列は、ベクター内の、第2の遺伝子の末端において使用することができる。スペーサー
配列はまた、ベクター内で、第1の遺伝子および第2の遺伝子に後続して使用することも
できる。
されるポリペプチドを発現させることができる。遺伝子または遺伝子の部分は、ウイルス
法または非ウイルス法の任意の方法を使用して挿入することができる。例えば、方法は、
非ウイルスベースの技法でありうる。
本明細書で開示されるポリヌクレオチドは、上記で記載したポリヌクレオチド構築物に
加えて、またはこれと共に、1または複数のタンパク質をコードしうる。例えば、一部の
実施形態では、ポリペプチド構築物は、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(T
CR)、および/またはサイトカインへと連結することができる。
本明細書で記載される一部の実施形態は、細胞表面上で発現したキメラ受容体をコード
する、ポリヌクレオチドを含む。一部の場合には、キメラ受容体は、抗原、例えば、腫瘍
関連抗原または腫瘍特異的抗原などの腫瘍抗原の認識およびこれへの結合を可能とする抗
原結合性領域を含む。一部の場合には、抗原結合性領域は、抗体または結合性断片、例え
ば、Fab、Fab’、F(ab’)2、F(ab’)3、scFv、sc(Fv)2、
dsFv、ダイアボディー、ミニボディー、およびナノボディーまたはこれらの結合性断
片を含む。場合によって、抗原結合性領域は、scFvを含む。場合によって、キメラ受
容体は、scFv(例えば、キメラ抗原受容体(CAR))を含む。一部の場合には、キ
メラ抗原受容体は、パターン認識受容体を含む。他の場合には、キメラ受容体は、操作T
細胞受容体(TCR)を含む。
一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリペプチド構築物を発現する細胞はまた
、1または複数のキメラ抗原受容体(CAR)も発現する。
クター細胞へとグラフトする、操作受容体である。一部の場合には、CARは、抗原結合
性ドメイン、ストーク領域、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメイン(エンドドメイン)
を含む細胞外ドメイン(エクトドメイン)を含む。一部の場合には、細胞内ドメインは、
1または複数の細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の場合には、本明細書で
記載されるCARは、T細胞活性化のための、抗原結合性ドメイン、ストーク領域、膜貫
通ドメイン、1または複数の共刺激ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む。
標的特異的結合エレメントを含む。複数の実施形態では、腫瘍細胞上の所定の抗原に特異
的に結合する、所望の抗原結合性部分を操作することにより、目的の腫瘍抗原をターゲテ
ィングするように、本開示のCARを操作する。本開示の文脈では、「腫瘍抗原」または
「過剰増殖性障害抗原」または「過剰増殖性障害と関連する抗原」とは、がんなど、特異
的な過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。
可変領域、および/またはこれらの抗原結合性断片を含みうる。相補性決定領域(CDR
)とは、抗原受容体(例えば、免疫グロブリンおよびT細胞受容体)タンパク質の可変ド
メイン内に見出される、短いアミノ酸配列であって、抗原の構造と相補的であり、したが
って、受容体に、この特定の抗原に対するその特異性をもたらす構造を呈するアミノ酸配
列である。抗原受容体の各ポリペプチド鎖は、3つのCDR(CDR1、CDR2、およ
びCDR3)を含有しうる。一部の場合には、抗原結合性ドメインは、F(ab’)2、
Fab’、Fab、Fv、またはscFvを含む。場合によって、抗原結合性ドメインは
、scFvである。場合によって、抗原結合性ドメインは、Fabである。場合によって
、抗原結合性ドメインは、Fab’である。場合によって、抗原結合性ドメインは、F(
ab’)2である。場合によって、抗原結合性ドメインは、Fvである。
、CD44、BCMA、CD123、EGFRvIII、α-葉酸受容体、CAIX、C
D30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合
性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン
、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSM
A、TAG-72、またはVEGF-R2におけるエピトープに結合する抗原結合性ドメ
インを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるCARは、CD19、CD33
、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EG
P-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、
IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-
1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvI
II、CD123、およびVEGF-R2上のエピトープに結合する抗原結合性ドメイン
を含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるCARは、CD19またはCD33
上のエピトープに結合する抗原結合性ドメインを含む。一部の場合には、本明細書で記載
されるCARは、CD19上のエピトープに結合する抗原結合性ドメインを含む。場合に
よって、本明細書で記載されるCARは、CD33上のエピトープに結合する抗原結合性
ドメインを含む。さらなる実施形態では、本明細書で記載されるCARまたはキメラ受容
体または抗原結合性ポリペプチドは、HLA-A2、ミエリン希突起膠細胞糖タンパク質
(MOG)、第VIII因子(FVIII)、MAdCAM1、SDF1、またはII型
コラーゲン上のエピトープに結合する、自己抗原結合性領域または抗原結合性領域を含む
。
法を、がんなどの過剰増殖性疾患、自己免疫疾患の処置、またはウイルス感染、細菌感染
、または寄生虫感染など、感染の処置のために使用することができる。一部の態様では、
抗原は、がん細胞内、自己免疫細胞内、またはウイルス、細菌、もしくは寄生虫に感染し
た細胞内で増大する抗原である。ターゲティングされうる病原体は、限定せずに述べると
、マラリア原虫(Plasmodium)属、トリパノソーム、アスペルギルス(Asp
ergillus)属、カンジダ(Candida)属、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウ
イルス、C型肝炎ウイルス、HSV、HPV、RSV、EBV、CMV、JCウイルス、
BKウイルス、またはエボラ病原体を含む。自己免疫疾患は、移植片対宿主病、関節リウ
マチ、全身性エリテマトーデス、セリアック病、クローン病、シェーグレン症候群、リウ
マチ性多発筋痛症、多発性硬化症、視神経脊髄炎、強直性脊椎炎、1型糖尿病、円形脱毛
症、血管炎、側頭動脈炎、水疱性類天疱瘡、乾癬、尋常性天疱瘡、または自己免疫性ブド
ウ膜炎を含みうる。
実施形態では、病原体は、真菌、細菌、またはウイルスである。例示的なウイルス性病原
体は、アデノウイルス科(Adenoviridae)、エプスタイン-バーウイルス(EBV)、サ
イトメガロウイルス(CMV)、RS(Respiratory Syncytial)
ウイルス(RSV)、JCウイルス、BKウイルス、HPV、HSV、HHVファミリー
のウイルス、肝炎ファミリーのウイルス、ピコルナウイルス科(Picornaviridae)、ヘル
ペスウイルス科(Herpesviridae)、ヘパドナウイルス科(Hepadnaviridae)、フラビウ
イルス科(Flaviviridae)、レトロウイルス科(Retroviridae)、オルトミクソウイルス
科(Orthomyxoviridae)、パラミクソウイルス科(Paramyxoviridae)、パポバウイルス
科(Papovaviridae)、ポリオーマウイルス属(Polyomavirus)、ラブドウイルス科(Rha
bdoviridae)、およびトガウイルス科(Togaviridae)の病原体を含む。例示的な病原性
ウイルスは、天然痘、インフルエンザ、耳下腺炎、麻疹、水痘、エボラ、および風疹を引
き起こす。例示的な病原性真菌は、カンジダ属(Candida)、アスペルギルス属(Aspergi
llus)、クリプトコッカス属(Cryptococcus)、ヒストプラズマ属(Histoplasma)、ニ
ューモシスチス属(Pneumocystis)、およびスタキボトリス属(Stachybotrys)を含む。
例示的な病原性細菌は、ストレプトコッカス属(Streptococcus)、シュードモナス属(P
seudomonas)、赤痢菌属(Shigella)、カンピロバクター属(Campylobacter)、スタフ
ィロコッカス属(Staphylococcus)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、大腸菌(E. c
oli)、リケッチア属(Rickettsia)、バチルス属(Bacillus)、ボルデテラ属(Bordete
lla)、クラミジア属(Chlamydia)、スピロヘータ門(Spirochetes)、およびサルモネ
ラ属(Salmonella)を含む。一部の実施形態では、病原体受容体であるデクチン1を使用
して、アスペルギルス(Aspergillus)属など、真菌の細胞壁上の炭水化物構造を認識す
るCARを作出することができる。別の実施形態では、ウイルス決定基(例えば、CMV
およびエボラに由来する糖タンパク質)を認識する抗体に基づき、ウイルス感染およびウ
イルス病態を阻止するCARを作ることができる。
領域を使用して、抗原結合性ドメインを、膜貫通ドメインへと連結する。一部の場合には
、「ストークドメイン」または「ストーク領域」は、ポリペプチド鎖内で、膜貫通ドメイ
ンを、細胞外ドメインまたは細胞質ドメインへと連結するように機能する、任意のオリゴ
ヌクレオチドまたはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ストークドメインは、抗
原結合性ドメインが、抗原認識を容易とするように、異なる方向を向くことを可能とする
のに十分な程度に可撓性である。場合によって、ストーク領域は、IgG1に由来するヒ
ンジ領域を含む。代替的な場合に、ストーク領域は、免疫グロブリンのCH2CH3領域
と、任意選択で、CD3の一部とを含む。場合によって、ストーク領域は、国際公開第2
016/073755号パンフレットにおいて記載されている、CD8αヒンジ領域、I
gG4-Fcの12アミノ酸のヒンジ領域(ESKYGPPCPPCP(配列番号225
))、またはIgG4ヒンジ領域を含む。
ある。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合性タンパク質または膜貫通タ
ンパク質に由来しうる。適切な膜貫通ドメインは、T細胞受容体の、アルファ鎖、ベータ
鎖、またはゼータ鎖の膜貫通領域を含む場合もあり、CD28、CD3イプシロン、CD
3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、
CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、またはCD154
に由来する膜貫通領域を含む場合もある。代替的に、膜貫通ドメインは、合成の場合もあ
り、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含みうる。一部の実施形態では、合成膜貫
通ドメインの、一方または両方の末端では、フェニルアラニン、トリプトファン、および
バリンのトリプレットが見出される。任意選択で、一部の実施形態では、2~10アミノ
酸の間の長さである、短いオリゴヌクレオチドリンカーまたはポリペプチドリンカーは、
CARの膜貫通ドメインと、細胞質シグナル伝達ドメインとの間の連結を形成しうる。一
部の実施形態では、リンカーは、グリシン-セリンリンカーである。一部の実施形態では
、膜貫通ドメインは、CD8α膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインを含む。一
部の実施形態では、膜貫通ドメインは、CD8α膜貫通ドメインを含む。他の実施形態で
は、膜貫通ドメインは、CD3ζ膜貫通ドメインを含む。さらに他の実施形態では、膜貫
通ドメインは、膜貫通二量体化ドメインを含む。
ンは、CD8、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10
、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せを含むがこ
れらに限定されない。場合によって、本明細書で記載されるCARは、CD8、CD27
、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40
(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される共刺激ドメインのう
ちの1もしくは複数、または2つもしくはこれを超えるものを含む。場合によって、本明
細書で記載されるCARは、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS
、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される共刺激ド
メインのうちの1もしくは複数、または2つもしくはこれを超えるものを含む。場合によ
って、本明細書で記載されるCARは、CD8、CD28、4-1BB(CD137)、
またはこれらの断片もしくは組合せから選択される共刺激ドメインのうちの1もしくは複
数、または2つもしくはこれを超えるものを含む。場合によって、本明細書で記載される
CARは、CD28、4-1BB(CD137)、またはこれらの断片もしくは組合せか
ら選択される共刺激ドメインのうちの1もしくは複数、または2つもしくはこれを超える
ものを含む。場合によって、本明細書で記載されるCARは、共刺激ドメインであるCD
28および4-1BB(CD137)、またはこれらのそれぞれの断片を含む。場合によ
って、本明細書で記載されるCARは、共刺激ドメインであるCD28およびOX40(
CD134)、またはこれらのそれぞれの断片を含む。場合によって、本明細書で記載さ
れるCARは、共刺激ドメインであるCD8およびCD28、またはこれらのそれぞれの
断片を含む。場合によって、本明細書で記載されるCARは、共刺激ドメインであるCD
28、またはその断片を含む。場合によって、本明細書で記載されるCARは、共刺激ド
メインである4-1BB(CD137)、またはその断片を含む。場合によって、本明細
書で記載されるCARは、共刺激ドメインであるOX40(CD134)、またはその断
片を含む。場合によって、本明細書で記載されるCARは、共刺激ドメインであるCD8
、またはその断片を含む。
CARを入れた免疫細胞の正常エフェクター機能のうちの少なくとも1つの活性化の一因
となる。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特化機能を指す。T細胞のエフェク
ター機能は、例えば、細胞傷害活性の場合もあり、サイトカインの分泌を含むヘルパー活
性の場合もある。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェク
ター機能シグナルを伝達し、特化機能を実施するように、細胞を方向付ける、タンパク質
の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメインの全体が用いられうるが、多くの場合
、鎖全体を使用することは必要でない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされ
た部分を使用し、エフェクター機能シグナルを伝達する限りにおいて、このようなトラン
ケートされた部分を、無傷鎖の代わりに使用することができる。したがって、細胞内シグ
ナル伝達ドメインという用語とは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細
胞内シグナル伝達ドメインの、任意のトランケートされた部分を含むことが意図される。
一部の実施形態では、細胞内ドメインは、T細胞活性化のためのシグナル伝達ドメインを
さらに含む。場合によって、T細胞活性化のためのシグナル伝達ドメインは、TCRゼー
タ、FcRガンマ、FcRベータ、CD3ガンマ、CD3デルタ、CD3イプシロン、C
D5、CD22、CD79a、CD79b、またはCD66dに由来するドメインを含む
。場合によって、T細胞活性化のためのシグナル伝達ドメインは、CD3ζに由来するド
メインを含む。
意の部分または断片であって、機能的部分がその一部であるCAR(親CAR)の生物学
的活性を保持する部分または断片を指す。親CARをコードする核酸配列に関して、CA
Rの機能的部分をコードする核酸配列は、親CARのうちの、例えば、約10%、25%
、30%、50%、68%、80%、90%、95%、またはこれを超える親CARを含
むタンパク質をコードしうる。
質的または著明な配列同一性または配列類似性を有するポリペプチドまたはタンパク質を
指し、それがその変異体である、基準ポリペプチドの生物学的活性を保持する。機能的変
異体は、例えば、本明細書で記載されるCAR(親CAR)の変異体であって、標的細胞
を、親CARと同様の程度、これと同程度、またはこれより高い程度に認識する能力を保
持する変異体を包含する。親CARをコードする核酸配列に照らして、CARの機能的変
異体をコードする核酸配列は、親CARをコードする核酸配列と、例えば、約10%同一
、約25%同一、約30%同一、約50%同一、約65%同一、約80%同一、約90%
同一、約95%同一、または約99%同一でありうる。
ることができる。一部の実施形態では、ポリペプチド構築物およびCARは、単一の転写
物によりコードされうる。トランケート型変異体と、CARとを、同じ転写物内に含むポ
リペプチド構築物をコードすることの利点は、CARタンパク質を作り出す操作細胞はま
た、ポリペプチド構築物も作り出した可能性が高いことである。したがって、免疫療法時
に、CARの発現を減少させる(例えば、治療の副作用を軽減する)介入が必要とされる
場合、ポリペプチド構築物を、CARと共発現する操作細胞を、本明細書で開示されるト
ランケート型変異体により付与される細胞タグをターゲティングする外因性抗体の投与に
、比較的短い時間枠で応答するように、プライミングすることができる。
CD19とは、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面糖タンパク質である。一
部の場合には、CD19は、膵臓がん、肝臓がん、および前立腺がんなど、充実性腫瘍内
で検出されている。
異的である。CD19特異的CARは、細胞表面上で発現すると、T細胞の特異性を、ヒ
トCD19へとリダイレクトする。複数の実施形態では、抗原結合性ドメインは、標的抗
原特異的な、抗CD19モノクローナル抗体の、可変ドメイン軽鎖(VL)および可変ド
メイン重鎖(VH)であって、グリシン-セリンリンカーまたはホイットローリンカーな
どの可撓性リンカーにより接続されたVLおよびVHを含む単鎖抗体断片(scFv)を
含む。複数の実施形態では、scFvは、SJ25C1および/またはFMC63である
。複数の実施形態では、scFvは、ヒト化scFvである。一部の実施形態では、抗原
結合性部分は、例えば、N末端からC末端へと、VH-リンカー-VLまたはVL-リン
カー-VHと、方向性をもって連結されたVHおよびVLを含みうる。
Fvを含む、CD19特異的CARが記載される。一部の場合には、抗原結合性ドメイン
は、CD19上のエピトープを認識する。
AR017、または19-28z CAR(Juno Therapeutics)によ
ってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の実施形態では、本明
細書では、抗原結合性ドメインが、JCAR014、JCAR015、JCAR017、
または19-28z CAR(Juno Therapeutics)によってもまた認
識される、CD19上のエピトープを認識する、CD19特異的CAR-T細胞が記載さ
れる。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメイ
ンまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、
4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134
)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン
;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
vの抗原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、JCAR014、JCAR01
5、JCAR017、または19-28z CAR(Juno Therapeutic
s)によってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の場合には、
CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通
ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD137
)、ICOS、DAP10、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合
せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル
伝達ドメインをさらに含む。
許出願公開第20160152723号明細書において記載されている抗CD19抗体を
含む。
a,Inc.)によってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の
実施形態では、本明細書では、抗原結合性ドメインが、KTE-C19によってもまた認
識される、CD19上のエピトープを認識する、CD19特異的CAR-T細胞が記載さ
れる。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメイ
ンまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、
4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134
)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン
;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
vの抗原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、KTE-C19によってもまた
認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の場合には、CD19特異的CA
R-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択さ
れる膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DA
P10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから
選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ド
メインをさらに含む。
開第2015187528号パンフレットにおいて記載されている抗CD19抗体、また
はその断片もしくは誘導体を含む。
ってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の実施形態では、本明
細書では、抗原結合性ドメインが、CTL019によってもまた認識される、CD19上
のエピトープを認識する、CD19特異的CAR-T細胞が記載される。一部の場合には
、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫
通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD13
7)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断
片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由
来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
vの抗原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、CTL019によってもまた認
識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の場合には、CD19特異的CAR
-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択され
る膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP
10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから選
択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ドメ
インをさらに含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、UCART19(Ce
llectis)によってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部
の実施形態では、本明細書では、抗原結合性ドメインが、UCART19によってもまた
認識される、CD19上のエピトープを認識する、CD19特異的CAR-T細胞が記載
される。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメ
インまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28
、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD13
4)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイ
ン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
vの抗原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、UCART19によってもまた
認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の場合には、CD19特異的CA
R-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択さ
れる膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DA
P10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから
選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ド
メインをさらに含む。
よってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の実施形態では、本
明細書では、抗原結合性ドメインが、BPX-401によってもまた認識される、CD1
9上のエピトープを認識する、CD19特異的CAR-T細胞が記載される。一部の場合
には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ
膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD
137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれら
の断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζ
に由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
vの抗原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、BPX-401によってもまた
認識される、CD19上のエピトープを認識する。一部の場合には、CD19特異的CA
R-T細胞は、CD8アルファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択さ
れる膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DA
P10、DAP12、OX40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから
選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ド
メインをさらに含む。
ブラブタンシン(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis)、M
OR208(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MEDI-551
(Medimmune)、デニンツズマブマホドチン(Seattle Genetic
s)、B4(またはDI-B4)(Merck Serono)、タプリツモマブパプト
ックス(National Cancer Institute)、XmAb 5871
(Amgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Medarex)または
AFM11(Affimed)によってもまた認識される、CD19上のエピトープを認
識する。一部の場合には、CD19特異的CARは、CD8アルファ膜貫通ドメインまた
はCD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1
BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)、ま
たはこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン;およ
びCD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
ab’、Fab、Fv、またはscFvを含む、CD19特異的CAR-T細胞を含む。
一部の場合には、抗原結合性ドメインは、CD19上のエピトープを認識する。場合によ
って、抗原結合性ドメインは、ブリナツモマブ(Amgen)、コルツキシマブ・ラブタ
ンシン(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis)、MOR20
8(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MEDI-551(Med
immune)、デニンツズマブ・マホドチン(Seattle Genetics)、
B4(またはDI-B4)(Merck Serono)、タプリツモマブ・パプトック
ス(National Cancer Institute)、XmAb 5871(A
mgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Medarex)またはAF
M11(Affimed)によってもまた認識される、CD19上のエピトープを認識す
る。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8α膜貫通ドメインまたは
CD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD27、CD28、4-1B
B(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)、また
はこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数の共刺激ドメイン;および
CD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
原結合性ドメインを含み、抗原結合性ドメインは、ブリナツモマブ(Amgen)、コル
ツキシマブ・ラブタンシン(ImmunoGen Inc./Sanofi-avent
is)、MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MED
I-551(Medimmune)、デニンツズマブ・マホドチン(Seattle G
enetics)、B4(またはDI-B4)(Merck Serono)、タプリツ
モマブ・パプトックス(National Cancer Institute)、Xm
Ab 5871(Amgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Meda
rex)またはAFM11(Affimed)によってもまた認識される、CD19上の
エピトープを認識する。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞は、CD8アル
ファ膜貫通ドメインまたはCD3ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン;CD
27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX
40(CD134)、またはこれらの断片もしくは組合せから選択される、1または複数
の共刺激ドメイン;およびCD3ζに由来するシグナル伝達ドメインをさらに含む。
9-CD3ζ CARをコードする)、配列番号171(CD19-CD137-CD3
ζ CARをコードする)、配列番号173(CD19-CD28-CD3ζ CARを
コードする)、および配列番号175(IgG4 Fcスペーサーをさらに含むCD19
-CD28-CDζ CARをコードする)からなるリストから選択されるヌクレオチド
配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、
または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、CARを
含むアミノ酸配列は、配列番号170(CD19-CD3ζ CAR)、配列番号172
(CD19-CD137-CD3ζ CAR)、配列番号174(CD19-CD28-
CD3ζ CAR)、および配列番号176(IgG4 Fcスペーサーをさらに含むC
D19-CD28-CD3ζ CAR)からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または1
00%の同一性を有する。
ド(例えば、HER1t)へと接続される、抗CD19 CARおよび切断可能T2Aリ
ンカーをコードする、コドン最適化cDNA配列を含みうる。例えば、細胞傷害性Tリン
パ球を操作して、細胞質CD3-ζドメインへと融合させた細胞質共刺激(CD28)ド
メインを介してシグナル伝達する、CD19特異的キメラ抗原受容体(CAR)を発現さ
せることができる。このポリペプチドには、C末端の2A切断可能リンカーに続いて、例
えば、一部の実施形態では、トランケート型ヒトHER1(HER1t)、トランケート
型CD20(CD20t)、トランケート型CD52(CD52t)、またはトランケー
ト型LNGFR(LNGFRt)を含む細胞外細胞タグをさらに組み込みうる。他の実施
形態では、ポリペプチドは、CD19特異的CAR(例えば、P2A切断可能リンカーを
介して連結された)に先行するトランケート型変異体を含むポリペプチド構築物を含みう
る。
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを提示する。ある実施形態では、抗CD19 CA
R、切断可能T2Aリンカーと細胞表面ポリペプチドとを組み込んだポリペプチド構築物
は、配列番号181(CD19-CD28-CD3ζ CAR.P2A.Igカッパシグ
ナルペプチド.配列番号56によるHER1t1)および配列番号185(CD19-C
D137-CD3ζ CAR.E2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号68によ
るHER1t7)からなるリストから選択されるヌクレオチド配列に対する、少なくとも
70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を
有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。
チドとを組み込んだポリペプチド構築物は、配列番号179(CD19-CD137-C
D3ζ CAR.T2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号55によるHER1t
)、配列番号180(CD19-CD137-CD3ζ CAR.T2A.Igカッパシ
グナルペプチド.配列番号55によるHER1t)、配列番号182(CD19-CD2
8-CD3ζ CAR.P2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号57によるHE
R1t1)、配列番号183(Igカッパシグナルペプチド.HER1t1.P2A.C
D8αシグナルペプチド.CD19-CD28-CD3ζ CAR[配列中、HER1t
1は、配列番号57である])、配列番号184(CD19-CD28-CD3ζ CA
R.フューリン-T2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号57によるHER1t
1)、配列番号186(CD19-CD137-CD3ζ CAR.E2A.Igカッパ
シグナルペプチド.配列番号69によるHER1t7)、配列番号187(CD19-C
D28-CD3ζ CAR.フューリン-T2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番
号73によるHER1t8)、配列番号188(CD19-CD137-CD3ζ CA
R.E2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号73によるHER1t8)、配列番
号189(CD19-CD28-CD3ζ CAR.フューリン-T2A.Igカッパシ
グナルペプチド.配列番号77によるHER1t9)、配列番号190(CD19-CD
137-CD3ζ CAR.E2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号77による
HER1t9)、配列番号191(CD19-CD28-CD3ζ CAR.フューリン
-T2A.Igカッパシグナルペプチド.配列番号81によるHER1t10)、配列番
号192(CD19-CD137-CD3ζ CAR.E2A.Igカッパシグナルペプ
チド.配列番号81によるHER1t10)、配列番号194(CD19-CD28-C
D3ζ CAR.P2A.CD20)、配列番号195(CD19-CD28-CD3ζ
CAR.P2A.配列番号109によるCD20t1)、配列番号196(CD19-
CD28-CD3ζ CAR.P2A.配列番号115によるCD20t4)、配列番号
197(CD52t3.P2A.CD8αシグナルペプチド.CD19-CD28-CD
3ζ CAR[配列中、CD52t3は、配列番号149である])、および配列番号1
98(Igカッパシグナルペプチド.LNGFRt4.P2A.CD8αシグナルペプチ
ド.CD19-CD28-CD3ζ CAR[配列中、LNGFRt4は、配列番号16
5である])からなるリストから選択されるアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、
75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドによりコードされるキメ
ラ受容体は、操作T細胞受容体を含む。T細胞受容体(TCR)は、T細胞の表面上で対
合して、ヘテロ二量体の受容体を形成する、2つの鎖(αβまたはγδ)から構成される
。一部の場合には、αβ TCRは、体内の大半のT細胞上で発現し、特異的MHC拘束
抗原の認識に関与することが公知である。α鎖およびβ鎖の各々は、2つのドメイン:タ
ンパク質を、細胞膜へとアンカリングし、CD3シグナル伝達装置の不変サブユニットと
関連する定常ドメイン(C)と;相補性決定領域(CDR)と称する、6回ループを介し
て、抗原認識を付与する可変ドメイン(V)とから構成される。一部の場合には、各Vド
メインは、3つのCDR、例えば、CDR3を超可変領域とする、CDR1、CDR2、
およびCDR3を含む。これらのCDRは、主要組織適合性複合体によりコードされるタ
ンパク質とそれに結合された抗原性ペプチド間で形成される複合体(pepMHC)(例
えば、HLA-A複合体、HLA-B複合体、HLA-C複合体、HLA-DPA1複合
体、HLA-DPB1複合体、HLA-DQA1複合体、HLA-DQB1複合体、HL
A-DRA複合体、またはHLA-DRB1複合体)と相互作用する。一部の場合には、
定常ドメインは、定常ドメインを、可変ドメインへと接続する接合領域をさらに含む。場
合によって、ベータ鎖は、接合領域の一部を構成する、短い多様性領域をさらに含む。
eA3、Titinと反応性である。他の場合には、このようなTCRは、患者の腫瘍内
で発現する、特異的ネオ抗原(すなわち、腫瘍が発現する、患者特異的な、体細胞性の、
非同義突然変異)と反応性である。場合によって、操作TCRは、アフィニティー増強さ
れうる。
tics(IMGT)によるTCR命名法を使用して記載され、IMGTによる、TCR
配列についての公開データベースへとリンクする。例えば、それらのフレームワーク配列
、CDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列により識別される、いくつかの種類
のアルファ鎖可変(Vα)領域と、いくつかの種類のベータ鎖可変(Vβ)領域とが存在
しうる。このようにして、Vαの種類は、IMGT命名法では、固有のTRAV数により
言及されうる。例えば、「TRAV21」は、固有のフレームワーク配列およびCDR1
配列およびCDR2配列、ならびにTCRから、TCRへと保存されるアミノ酸配列によ
り、部分的に規定されるが、また、TCRから、TCRへと変動するアミノ酸配列も含む
CDR3配列を有するTCRVα領域を規定する。同様に、「TRBV5-1」は、固有
のフレームワーク配列およびCDR1配列およびCDR2配列を有するが、CDR3配列
は、部分的に規定されているに過ぎない、TCRVβ領域を規定する。
及される。
CRの分野に携わる者に閲覧可能である。例えば、これらは、IMGTによる公開データ
ベースおよび“T cell Receptor Factsbook”, (2001) LeFranc and LeFranc, Academic
Press, ISBN 0-12-441352-8において見出すことができる。
通ドメインの両方を有する全長鎖としてトランスフェクトされる。場合によって、TCR
は、例えば、国際公開第2006/000830号パンフレットにおいて記載されている
、それぞれの定常ドメインの残基の間に導入されたジスルフィド結合を含有する。
国際公開第2004/033685号パンフレットを参照されたい)。単鎖フォーマット
は、Vα-L-Vβ型、Vβ-L-Vα型、Vα-Cα-L-Vβ型、Vα-L-Vβ-
Cβ型、Vα-Cα-L-Vβ-Cβ型のαβ TCRポリペプチド[フォーマット中、
VαおよびVβは、それぞれ、TCRα可変領域およびTCRβ可変領域であり、Cαお
よびCβは、それぞれ、TCRα定常領域およびTCRβ定常領域であり、Lは、リンカ
ー配列である]を含む。ある特定の実施形態では、本開示の単鎖TCRは、国際公開第2
004/033685号パンフレットにおいて記載されている、それぞれの定常ドメイン
の残基の間に導入されたジスルフィド結合を有しうる。
ることができる。
ブ、および造影試薬を含むがこれらに限定されない。
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを提示する。一部の実施形態では、本明細書で開示
されるポリヌクレオチドは、細胞表面ポリペプチド(例えば、HER1t)へと接続され
る、TCRおよび切断可能T2Aリンカーをコードする、コドン最適化cDNA配列を含
みうる。例えば、細胞傷害性Tリンパ球を操作して、C末端の2A切断可能リンカーに続
いて、例えば、一部の実施形態では、トランケート型ヒトHER1(HER1t)、トラ
ンケート型CD20(CD20t)、トランケート型CD52(CD52t)、またはト
ランケート型LNGFR(LNGFRt)を含む細胞外細胞タグをさらに組み込んだTC
Rポリペプチドを発現させることができる。他の実施形態では、ポリペプチドは、TCR
(例えば、P2A切断可能リンカーを介して連結された)に先行するトランケート型変異
体を含むポリペプチド構築物を含みうる。
本明細書では、ポリペプチドである細胞タグと、サイトカインまたはその変異体もしく
は誘導体とをコードするポリヌクレオチド、ならびにこれらを組み込む方法およびシステ
ムが提示される。サイトカインは、細胞シグナル伝達に関与する、約5~20kDaの間
の低分子タンパク質の類型である。一部の実施形態では、サイトカインは、膜結合型の場
合もあり、分泌型の場合もある。他の実施形態では、サイトカインは、細胞内サイトカイ
ンでありうる。一部の場合には、サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、イン
ターロイキン、コロニー刺激因子、または腫瘍壊死因子を含む。一部の実施形態では、ケ
モカインは、細胞の遊走を導く、化学誘引物質としての役割を果たし、4つのサブファミ
リー:CXC、CC、CX3C、およびXCへと分類される。非限定的な例示的ケモカイ
ンは、CCサブファミリー:CCL1、CCL2(MCP-1)、CCL3、CCL4、
CCL5(RANTES)、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9(またはCCL1
0)、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、C
CL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23
、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、およびCCL28;CXCサブフ
ァミリー:CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6
、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、
CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、およびCXCL17;XC
サブファミリー:XCL1およびXCL2;ならびにCX3CサブファミリーであるCX
3CL1に由来するケモカインを含む。
-β、IFN-ε、IFN-κ、およびIFN-ω)、II型インターフェロン(例えば
、IFN-γ)、およびIII型インターフェロンを含む。一部の実施形態では、IFN
-αは、IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、
IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17
、およびIFNA21を含む、約13の亜型へとさらに分類される。
発現され、Tリンパ球およびBリンパ球ならびに造血細胞の発生および分化を促進する。
例示的なインターロイキンは、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、I
L-6、IL-7、IL-8(CXCL8)、IL-9、IL-10、IL-11、IL
-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、
IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-2
5、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL
-32、IL-33、IL-35、およびIL-36を含む。
は、mbIL-15は、本明細書で記載される改変エフェクター細胞を用いて共発現させ
ることができる、膜結合型キメラIL-15である。一部の実施形態では、mbIL-1
5は、全長IL-15Rα、またはこれらの機能的な断片もしくは変異体とインフレーム
で融合させた、全長IL-15(例えば、天然IL-15ポリペプチド)、またはこれら
の断片もしくは変異体を含む。場合によって、IL-15を、IL-15Rαへと、リン
カーを介して、間接的に連結する。場合によって、mbIL-15は、Hurton et al.,
“Tethered IL-15 augments antitumor activity and promotes a stem-cell memory sub
set in tumor-specific T cells,” PNAS 2016において記載されている通りである。ある
実施形態では、mbIL-15は、配列番号177のヌクレオチド配列に対する、少なく
とも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一
性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。ある実施形態
では、mbIL-15は、配列番号178のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、
75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%の同一性を有する。
L-12は、単鎖IL-12(scIL-12)、プロテアーゼ感受性IL-12、不安
定化IL-12、膜結合型IL-12、挿入IL-12である。一部の場合には、IL-
12変異体は、それらの全てが参照によりそれらの全体に組み込まれる、WO2015/
095249、WO2016/048903、WO2017/062953に記載されて
いる通りである。
る。一部の場合には、TNFファミリー内には、TNFα、リンホトキシンアルファ(L
T-アルファ)、リンホトキシンベータ(LT-ベータ)、T細胞抗原であるgp39(
CD40L)、CD27L、CD30L、FASL、4-1BBL、OX40L、および
TNF放出型アポトーシス誘導リガンド(TRAIL)を含むがこれらに限定されない、
約19のメンバーが存在する。
する、分泌糖タンパク質であって、その後、細胞の増殖および特異的種類の血液細胞への
分化をモジュレートする分泌糖タンパク質である。一部の場合には、CSFは、マクロフ
ァージコロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、顆
粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、またはプロメガポエチンを含む。
/またはTCRと共に共発現される膜結合型サイトカインである。
与をさらに含む。一部の場合には、サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、イ
ンターロイキン、コロニー刺激因子、または腫瘍壊死因子を含む。一部の場合には、1ま
たは複数の本明細書で記載される方法は、ケモカイン、インターフェロン、インターロイ
キン、コロニー刺激因子、または腫瘍壊死因子から選択されるサイトカインの投与をさら
に含む。一部の場合には、1または複数の本明細書で記載される方法は、IL-2、IL
-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ、またはTNF-αから選択され
るサイトカインの投与をさらに含む。
ド(例えば、HER1t)へと接続される、サイトカインおよび切断可能T2Aリンカー
をコードする、コドン最適化cDNA配列を含みうる。例えば、細胞傷害性Tリンパ球を
操作して、サイトカインを含むポリペプチドを発現させ、2A切断可能リンカーに続いて
、例えば、一部の実施形態では、トランケート型ヒトHER1(HER1t)、トランケ
ート型CD20(CD20t)、トランケート型CD52(CD52t)、またはトラン
ケート型LNGFR(LNGFRt)を含む細胞外細胞タグをさらに組み込むことができ
る。他の実施形態では、ポリペプチドは、サイトカイン(例えば、P2A切断可能リンカ
ーを介して連結された)に先行するトランケート型変異体を含むポリペプチド構築物を含
みうる。
ドするポリヌクレオチドを提示する。ある実施形態では、サイトカイン、切断可能T2A
リンカー、および細胞表面ポリペプチドを組み込んだポリペプチド構築物は、配列番号1
93のアミノ酸配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、9
5%、99%、または100%の同一性(膜結合型IL-15.T2A.配列番号57に
よるHER1t1)を有する。
また、本明細書で記載されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現および機能性
を容易とする、リンカーおよびIRESエレメントを含む構築物も開示される。
本明細書で使用される「内部リボソーム進入部位(IRES)」という用語は、内部リ
ボソーム進入部位を意味することが意図されうる。IRES配列を含むベクター内では、
第1の遺伝子が、その独自の5’-UTRを伴う機構である、キャップ依存性のリボソー
ム走査により翻訳されうるのに対し、後続の遺伝子の翻訳は、リボソームの、IRESへ
の直接的な動員により、キャップ非依存的に達せられうる。IRES配列は、真核リボソ
ームが結合し、5’キャップ末端に結合せずに、翻訳を開始することを可能としうる。I
RES配列は、1つの転写物からの、複数の遺伝子の発現を可能としうる(Mountford an
d Smith 1995)。
語は、一般に、真核生物mRNAの5’末端へと、3’-5’連結された、7-メチルグ
アノシン(7meG-ppp-G)である修飾ヌクレオチドであって、このmRNAから
のタンパク質の発現時に、正常な翻訳開始経路内で必要とされるエレメントとして用いら
れる修飾ヌクレオチドを指す。
炎ウイルスのIRES配列など、ウイルスに由来しうる。他の場合には、IRES領域は
、脳心筋炎ウイルスに由来しうる。本明細書で使用される「EMCV」または「脳心筋炎
ウイルス」という用語は、ピコルナウイルス科(Picornaviridae)の属の、脳心筋炎ウイ
ルス種の、任意のメンバーである単離株または株を指す。例は、EMCV-R(リュッカ
ート)株ウイルス、コロンビアSKウイルスである。場合によって、真核開始因子4G、
免疫グロブリン重鎖結合性タンパク質、c-mycがん原遺伝子、血管内皮増殖因子、線
維芽細胞増殖因子1のIRES、またはこれらの任意の組合せまたは修飾など、細胞性I
RESエレメントを使用することができる。場合によって、細胞性IRESは、ウイルス
IRESと比較した場合の、遺伝子発現の増大を有しうる。
で用いることができる。IRESは、脳心筋炎ウイルス(EMCV)またはポリオウイル
ス(PV)に由来しうる。場合によって、IRESエレメントは、ポリオウイルス(PV
)、脳心筋炎ウイルス(EMCV)、口蹄疫ウイルス(FMDV)、ブタテッショウウイ
ルス1(PTV-1)、愛知ウイルス(AiV)、セネカバレーウイルス(SVV)、C
型肝炎ウイルス(HCV)、豚コレラウイルス(CSFV)、ヒト免疫不全ウイルス2(
HIV-2)、ヒト免疫不全ウイルス1(HIV-1)、モロニーマウス白血病ウイルス
(MoMLV)、ネコ免疫不全ウイルス(FIV)、マウス乳がんウイルス(MMTV)
、潜伏期ヒトサイトメガロウイルス(pUL138)、エプスタイン-バーウイルス(E
BNA-1)、ヘルペスウイルスマレック病(MDVRLORF9)、SV40ポリシス
トロニック19S(SV4019S)、ムギクビレアブラムシ(Rhopalosiphum padi)ウ
イルス(RhPV)、クリケット麻痺ウイルス(CrPV)、ウスジロエダシャク(Ectr
opis obliqua)ピコルナ様ウイルス(EoPV)、チャバネアオカメムシ(Plautia stal
i)腸ウイルス(PSIV)、サシガメ属(Triatoma)ウイルス(TrV)、ミツバチ麻
痺病シシストウイルス(IAPV、KBV)、ブラックカラン復帰ウイルス(BRV)、
テンジクアオイ属(Pelargonium)斑入りウイルス(PFBV)、ハイビスカス退緑斑ウ
イルス(HCRSV)、アブラナ科感染トバモウイルス(CrTMV)、ジャガイモ葉巻
ウイルス(PLRV)、タバコエッチウイルス(TEV)、ジアルジアウイルス(GLV
)、リーシュマニア属(Leishmania)RNAウイルス1(LRV-1)、およびこれらの
組合せまたは修飾からなる群から選択される。場合によって、IRESは、Apaf-1
、XIAP、HIAP2/c-IAP1、DAP5、Bcl-2、c-myc、CAT-
1、INR、分化LEF-1、PDGF2、HIF-1a、VEGF、FGF2、BiP
、BAG-1、CIRP、p53、SHMT1、PITSLREp58、CDK1、Rp
r、hid、hsp70、grim、skl、Antennapedia、dFoxO、
dInR、Adh-Adhr、HSP101、ADH、URE-2,GPR1、NCE1
02、YMR181a、MSN1、BOI1、FLO8、GIC1、およびこれらの任意
の組合せまたは修飾からなる群から選択される。
とも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%、または1
00%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むEMCV IRESである。
れる場合、翻訳の開始は、第1のORF内の、カノニカルの5’-m7GpppNキャッ
プ依存性機構、およびIRESエレメントの下流における、第2のORF内の、キャップ
非依存性の機構により生じうる。
できる。IRESは、複数の遺伝子の、同時的な発現を可能としうる。例えば、IRES
配列は、単一のmRNA転写物からの、複数のタンパク質の産生を許容しうる。リボソー
ムは、IRESに、5’キャップ非依存的に結合し、翻訳を開始することが可能である。
りうる。IRES配列は、300塩基対~1000塩基対でありうる。例えば、IRES
は、300、350、400、450、500、550、600、650、700、75
0、800、850、900、950、または1000塩基対の長さでありうる。
ができる。例えば、IRES配列に後続する遺伝子は、IRES配列に先行する遺伝子に
対して、発現が低減されうる。発現の低減は、先行する遺伝子に対する、1%~99%の
低減でありうる。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドリンカーは、本明細書で記載されるポリヌクレ
オチド内で用いることができる。ポリヌクレオチドリンカーは、本明細書で記載されるポ
リヌクレオチドを含むベクターと適合性である末端構造を創出するように付加されうる、
所望の制限部位を含有する、DNAの二本鎖セグメントでありうる。場合によって、ポリ
ヌクレオチドリンカーは、本明細書で記載されるポリヌクレオチドを含むベクターを修飾
するために有用でありうる。例えば、ポリヌクレオチドリンカーを含む、ベクターの修飾
は、複数のクローニング部位の変化、またはポリヒスチジンテールの付加でありうる。ポ
リヌクレオチドリンカーはまた、平滑末端インサートDNAの末端を、制限酵素により切
断され、粘着末端を伴うベクターへのクローニングに適応させるのに使用することもでき
る。ポリヌクレオチドリンカーの使用は、ベクターへの平滑末端ライゲーションより効率
的な場合があり、後段の適用において、インサートを、ベクターから放出する方法をもた
らしうる。場合によって、インサートは、治療適用に有用なポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド配列でありうる。
DNA二本鎖、DNA一本鎖、またはこれらの組合せでありうる。場合によって、リンカ
ーは、RNAでありうる。場合によって、ポリヌクレオチドリンカーは、T4リガーゼに
より、本明細書で記載されるポリヌクレオチドを含むベクターへとライゲーションするこ
とができる。ライゲーションを容易とするために、過剰量のポリヌクレオチドリンカーを
、インサートおよびベクターを含む組成物へと添加することができる。場合によって、リ
ンカーを導入する前に、インサートおよびベクターを前処理する。例えば、メチラーゼに
よる前処理により、インサートDNAの望ましくない切断を防止することができる。
域(P2A)(配列番号41);A型ウマ鼻炎ウイルス2A領域(E2A)(配列番号4
3);トセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス2A領域(T2A)(配列番号45
);または口蹄疫ウイルス2A領域(F2A)(配列番号47)のヌクレオチド配列との
、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%、
または100%の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
、2つまたはこれを超えるポリペプチドは、介在リンカーポリペプチドをコードする介在
配列により隔てることができる。本明細書では、ポリヌクレオチドによりコードされる、
2つまたはこれを超えるポリペプチドを隔てるアミノ酸配列を指す、「介在リンカーポリ
ペプチド」という用語は、膜貫通ドメインを、細胞表面ポリペプチド(例えば、天然ポリ
ペプチドのトランケート型変異体を含む)へと接続するように、本明細書で開示されるポ
リペプチド構築物内に、任意選択で組み入れられる、アミノ酸の配列を指す、「ペプチド
リンカー」という用語と区別される。ある特定の場合には、介在リンカーポリペプチドは
、易切断性介在リンカーポリペプチドである。一部の実施形態では、目的のポリペプチド
は、易切断性介在リンカーポリペプチドにより連結された、融合タンパク質として発現す
る。ある特定の実施形態では、易切断性介在リンカーポリペプチドは、F/T2A、T2
A、p2A、2A、GSG-p2A、GSGリンカー(配列番号16)、およびフューリ
ンリンク変異体のうちの、任意の1または複数でありうる。
域(P2A)(配列番号41);A型ウマ鼻炎ウイルス2A領域(E2A)(配列番号4
4);トセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス2A領域(T2A)(配列番号46
);または口蹄疫ウイルス2A領域(F2A)(配列番号48)と、少なくとも70%、
75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%、または100%の同一
性を有するアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。
00塩基対を有するIRESより短くなりうる。場合によって、2A配列は、5、10、
15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、8
0、85、90、または100ヌクレオチドの長さを有しうる。2Aを連結された遺伝子
は、単一のオープンリーディングフレーム内で発現させることができ、「自己切断」は、
2AポリペプチドC末端の、最後の2つのアミノ酸であるG-P間で、共翻訳的に生じる
ことが可能であり、等量の共発現タンパク質をもたらす。
、コンセンサスモチーフである、Asp-Val/Ile-Glu-X-Asn-Pro
-Gly-Pro(配列番号229)を含有しうる。コンセンサスモチーフ配列は、共翻
訳的に作用しうる。例えば、グリシン残基とプロリン残基との、正常なペプチド結合の形
成を防止することができ、これは、リボソームスキッピングおよび新生ポリペプチドの切
断を結果としてもたらしうる。この効果は、等モルレベルで、複数の遺伝子をもたらしう
る。
の後、リボソームスキッピング機構を介して、個別のポリペプチドへと切断されうる、ポ
リペプチドへの翻訳を可能としうる(Funston, Kallioinen et al. 2008)。一部の実施
形態では、2A配列は、F/T2A、T2A、p2A、2A、T2A、E2A、F2A、
およびBmCPV2A、BmIFV2A、ならびにこれらの任意の組合せを含みうる。
含みうる。他の場合には、2Aペプチドと連結された、複数の遺伝子の発現は、2Aペプ
チドに前置されたスペーサー配列(GSG(配列番号16))により容易とすることがで
きる。場合によって、構築物は、スペーサー、リンカー、アダプター、プロモーター、ま
たはこれらの組合せを組み合わせうる。例えば、構築物は、異なる2Aペプチドと共に、
スペーサー(SGSG(配列番号18)またはGSG(配列番号16))およびフューリ
ン介在ポリペプチドリンカー(R-A-K-R(配列番号230))切断部位を有しうる
。スペーサーは、I-Ceuiでありうる。場合によって、リンカーは、操作することが
できる。例えば、リンカーは、疎水性などの化学的特徴を含むようにデザインすることが
できる。場合によって、少なくとも2つのリンカー配列は、同じタンパク質をもたらしう
る。他の場合には、複数のリンカーを、ベクター内で使用することができる。
号230)」を含みうる。ある特定の場合には、フューリン介在リンカーポリペプチドは
、「AGAGCTAAGAGG(配列番号231)」を含むポリヌクレオチド配列により
コードされうる。
リンカーでありうる。
ことができる。リンカーは、可撓性リンカー、非可撓性リンカー、in vivo切断可
能リンカー、またはこれらの任意の組合せでありうる。場合によって、リンカーは、機能
的ドメインを、併せて連結する(可撓性リンカーおよび非可撓性リンカーの場合のように
)場合もあり、in vivo切断可能リンカーの場合のように、機能的ドメインを、i
n vivoにおいて放出する場合もある。
生物学的活性を改善することが可能であり、発現収量を増大させ、所望の薬物動態プロフ
ァイルを達成しうる。
ーを含みうる。可撓性リンカーは、接合されるドメインが、ある程度の移動または相互作
用を必要とする場合に適用することができる。可撓性リンカーは、小型、非極性(例えば
、Gly)、または極性(例えば、SerまたはThr)のアミノ酸から構成されうる。
可撓性リンカーは、Gly残基およびSer残基の連なりから主になる配列(「GS」リ
ンカー)を有しうる。可撓性リンカーの例は、(Gly-Gly-Gly-Gly-Se
r)nの配列(配列番号221、例えば、配列番号20または22)を有しうる。コピー
数である「n」を調整することにより、この例示的GSリンカーの長さを最適化して、機
能的ドメインの適切な分離を達成することもでき、必要なドメイン間相互作用を維持する
こともできる。GSリンカーのほかに、他の可撓性リンカーも、組換え融合タンパク質に
用いることができる。場合によって、可撓性リンカーはまた、GlyおよびSerなど、
小型アミノ酸または極性アミノ酸に富む場合もあるが、可撓性を維持するように、Thr
およびAlaなど、さらなるアミノ酸を含有する場合もある。他の場合には、Lysおよ
びGluなどの極性アミノ酸を使用して、可溶性を改善することができる。
性および可溶性をもたらすように、GlyおよびSerなど、小型アミノ酸または極性ア
ミノ酸に富む場合がある。可撓性リンカーは、ある特定の移動または相互作用が、融合タ
ンパク質ドメインに所望される場合に適切でありうる。加えて、可撓性リンカーは、非可
撓性構造を有さない場合もあるが、機能的ドメイン間の距離を保持する、受動的リンカー
として用いられる場合もある。可撓性リンカーの長さを調整して、適正なフォールディン
グを可能とすることもでき、融合タンパク質の最適な生物学的活性を可能とすることもで
きる。
をさらに含みうる。非可撓性リンカーを用いて、ポリペプチドのドメイン間で、一定の距
離を維持することができる。非可撓性リンカーの例は、少数を挙げれば、アルファヘリッ
クス形成リンカー、Proに富む配列、(XP)n、X-Pro骨格(配列番号239)
、A(EAAAK)nA(配列番号240)(n=2~5)でありうる。非可撓性リンカ
ーは、場合によって、αヘリックス構造を取ることにより、または複数のPro残基を含
有することにより、比較的剛直な構造を呈しうる。
る。他の場合には、介在リンカーポリペプチドは、切断可能ではない。切断可能でないリ
ンカーは、機能的ドメインを、in vivo過程またはex vivo過程を通して1
つの分子として作用するように、共有結合的に、併せて接合しうる。介在リンカーポリペ
プチドはまた、in vivoにおいて、切断可能でもありうる。例えば、切断可能な介
在リンカーポリペプチドは、遊離の機能的ドメインを、in vivoにおいて、放出す
るように導入することができる。介在リンカーポリペプチドは、例えば、還元剤およびプ
ロテアーゼの存在により切断されうる。例えば、ジスルフィド結合の還元を用いて、切断
可能な介在リンカーポリペプチドを作製することができる。ジスルフィド介在リンカーポ
リペプチドの場合、グルタチオンなどのチオールとのジスルフィド交換を介する切断イベ
ントが切断をもたらしうるであろう。他の場合には、組換え融合タンパク質内の介在リン
カーポリペプチドの、in vivoにおける切断はまた、in vivoの、病理学的
状態(例えば、がんまたは炎症)下の、特異的細胞内もしくは組織内で発現させうるか、
またはある特定の細胞コンパートメント内に拘束されうるプロテアーゼによっても実行す
ることができる。場合によって、切断可能な介在リンカーポリペプチドは、ターゲティン
グされた切断を可能としうる。例えば、多くのプロテアーゼの特異性は、拘束されたコン
パートメント内の、介在リンカーポリペプチドの、緩徐な切断をもたらしうる。切断可能
な介在リンカーポリペプチドはまた、ヒドラゾン、ペプチド、ジスルフィド、またはチオ
エーテル(thioesther)も含みうる。例えば、ヒドラゾンは、血清中の安定性を付与しう
る。他の場合には、ヒドラゾンは、酸性区画内の切断を可能としうる。酸性区画は、最大
で約7のpHを有しうる。リンカーはまた、チオエーテルも含みうる。チオエーテルは、
非還元性でありうる、および/または細胞内タンパク質分解のためにデザインすることが
できる。
計算による方法でありうる。場合によって、コンピュータ計算による方法は、グラフ法を
含みうる。コンピュータ計算法を使用して、データベースから導出された三次元ペプチド
構造のライブラリーから、適切なペプチドを検索することができる。例えば、Brook
haven Protein Data Bank(PDB)を使用して、リンカーの選
択されたアミノ酸の間の間隔の距離を測ることができる。
チド構築物をコードするポリヌクレオチドが提供されるが、この場合、フューリンポリペ
プチドおよび2Aポリペプチドが、少なくとも3つの疎水性アミノ酸を含む介在リンカー
ポリペプチドにより接続されている。場合によって、少なくとも3つの疎水性アミノ酸は
、グリシン(Gly)(G)、アラニン(Ala)(A)、バリン(Val)(V)、ロ
イシン(Leu)(L)、イソロイシン(Ile)(I)、プロリン(Pro)(P)、
フェニルアラニン(Phe)(F)、メチオニン(Met)(M)、トリプトファン(T
rp)(W)からなるリストから選択される。
一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、
例えば、ウイルス送達系および非ウイルス送達系の構成的プロモーター(下記を参照され
たい)を使用して構成的に発現させることができる。他の実施形態では、本明細書で提示
されるポリペプチド構築物、ポリヌクレオチド、および方法を、遺伝子スイッチ系により
実行することができる。「遺伝子スイッチ(gene switch)」という用語は、プロモータ
ーと関連する応答エレメントの組合せを指し、例えば、1または複数のリガンドの存在下
で、応答エレメントおよびプロモーターを組み込んだ遺伝子の発現をモジュレートする、
EcRベースの系を指す。緊密に調節された誘導性遺伝子発現系または遺伝子スイッチは
、遺伝子治療、細胞内の、大スケールのタンパク質の作製、細胞ベースのハイスループッ
トのスクリーニングアッセイ、機能的なゲノミクス、ならびにトランスジェニック植物お
よびトランスジェニック動物における形質の調節など、多様な適用に有用である。このよ
うな誘導性遺伝子発現系は、リガンド誘導性異種遺伝子発現系を含みうる。
anogaster)EcR(DmEcR)ポリペプチドおよびマウス(Mus musculus)RXR(
MmRXR)ポリペプチドを使用し、これらの受容体が、ステロイドであるポナステロン
Aの存在下で、哺乳動物細胞系およびトランスジェニックマウスにおいて、レポーター遺
伝子をトランス活性化させることを示した(Christopherson et al., 1992;No et al.,
1996)。その後、Suhr et al., 1998は、非ステロイド系のエクジソンアゴニストである
テブフェノジドが、外因性ヘテロ二量体パートナーの非存在下で、カイコ(Bombyx mori
)EcR(BmEcR)を介して、哺乳動物細胞内のレポーター遺伝子の、高レベルのト
ランス活性化を誘導することを示した。
17号パンフレット)およびPCT国際特許出願/米国出願第99/08381号明細書
(国際公開第99/58155号パンフレット)は、外因性遺伝子の発現をモジュレート
するための方法であって、外因性遺伝子およびエクジソン応答エレメントを含むDNA構
築物が、それに対するリガンドの存在下で、かつ、任意選択で、サイレントパートナーと
して作用することが可能な受容体の存在下で、エクジソン応答エレメントに結合して、遺
伝子発現を誘導するエクジソン受容体を含む、第2のDNA構築物により活性化する方法
について開示している。この例では、エクジソン受容体を、キイロショウジョウバエ(Dr
osophila melanogaster)から単離した。典型的に、このような系は、最適の活性化をも
たらすために、サイレントパートナー、好ましくはレチノイドX受容体(RXR)の存在
を必要とする。哺乳動物細胞内では、昆虫エクジソン受容体(EcR)は、哺乳動物レチ
ノイドX受容体(RXR)と、ヘテロ二量体化し、これにより、標的遺伝子または異種遺
伝子の発現を、リガンド依存的に調節するのに使用することが可能である。PCT国際特
許出願/米国出願第98/14215号明細書(国際公開第99/02683号パンフレ
ット)は、カイコガであるカイコ(Bombyx mori)から単離されたエクジソン受容体が、
外因性の二量体パートナーを必要とせずに、哺乳動物系内で機能的であることについて開
示している。
ミリーの多様なメンバーを、遺伝子発現系における使用のための、USPの、少なくとも
二量体化ドメインを含むキイロショウジョウバエ(Drosophila melanogaster)ウルトラ
スピラクル受容体(USP)またはその断片と組み合わせうることについて開示している
。米国特許第5,880,333号明細書は、植物において使用された、キイロショウジ
ョウバエ(Drosophila melanogaster)のEcRおよびウルトラスピラクル(USP)に
よるヘテロ二量体系であって、トランス活性化ドメインおよびDNA結合性ドメインが、
2つの異なるハイブリッドタンパク質上に位置する、ヘテロ二量体系について開示してい
る。これらの場合の各々では、トランス活性化ドメインおよびDNA結合性ドメイン(P
CT国際特許出願/米国出願第98/14215号明細書における通りに、天然のEcR
として、またはPCT国際特許出願/米国出願第97/05330号明細書における通り
に、修飾EcRとして)を、単一の分子へと組み込み、USPまたはRXRである、他の
ヘテロ二量体パートナーを、それらの天然状態において使用した。
と、DNA結合ドメインとを2つの異なるタンパク質上に置くことにより互いから隔てた
、エクジソン受容体ベースの誘導性遺伝子発現系が、リガンドの非存在下で、バックグラ
ウンド活性の大幅な低減を結果としてもたらし、リガンドの存在下で、バックグラウンド
を上回る活性の著明な増大を結果としてもたらすことについて開示している。この2ハイ
ブリッド系は、PCT出願/米国出願第97/05330号明細書およびPCT出願/米
国出願第98/14215号明細書の出願において開示されている、2つの系と比較して
、著明に改善された誘導性遺伝子発現モジュレーション系である。2ハイブリッド系は、
DNA結合性ドメインが、遺伝子上のDNA結合性部位に結合すると、トランス活性化ド
メインが、プロモーターを、より効果的に活性化させるように、相互作用タンパク質の対
が、転写活性化ドメインを、DNA結合性ドメインに対して、より好適な位置に置く能力
を利用すると考えられる(例えば、米国特許第5,283,173号明細書を参照された
い)。2ハイブリッド遺伝子発現系は、核内受容体ポリペプチドへと融合させたDNA結
合性ドメインをコードする、第1の遺伝子発現カセット、および異なる核内受容体ポリペ
プチドへと融合させたトランス活性化ドメインをコードする、第2の遺伝子発現カセット
である、2つの遺伝子発現カセットを含む。リガンドの存在下では、第1のポリペプチド
の、第2のポリペプチドとの相互作用を促進するコンフォメーション変化が誘導され、こ
れにより、DNA結合性ドメインと、トランス活性化ドメインとの二量体化が結果として
もたらされると考えられる。DNA結合性ドメインおよびトランス活性化ドメインは、2
つの異なる分子上に存在するので、リガンドの非存在下では、バックグラウンド活性が、
大幅に低減される。
サブファミリー1、群H(本明細書では、「群H核内受容体」と称する)へと分類される
。各群のメンバーは、E(リガンド結合)ドメイン内で、40~60%のアミノ酸同一性
を共有する(Laudet et al., A Unified Nomenclature System for the Nuclear Recepto
r Subfamily, 1999; Cell 97: 161-163)。エクジソン受容体に加えて、この核内受容体
サブファミリー1、群Hの他のメンバーは、ユビキタス受容体(UR)、オーファン受容
体1(OR-1)、ステロイドホルモン核内受容体1(NER-1)、RXR相互作用性
タンパク質15(RIP-15)、肝臓x受容体β(LXRβ)、ステロイドホルモン受
容体様タンパク質(RLD-1)、肝臓x受容体(LXR)、肝臓x受容体α(LXRα
)、ファルネソイドx受容体(FXR)、受容体相互作用性タンパク質14(RIP-1
4)、およびファルネソール受容体(HRR-1)を含む。
のRHEOSWITCH(登録商標)遺伝子スイッチなど、低分子リガンド誘導性の、2
つのポリペプチドによる、エクジソン受容体ベースの遺伝子スイッチでありうる。場合に
よって、遺伝子スイッチは、それらの各々が、参照によりその全体において組み込まれる
、PCT/米国出願第2001/009050号明細書(国際公開第2001/0708
16号パンフレット);米国特許第7,091,038号明細書;同第7,776,58
7号明細書;同第7,807,417号明細書;同第8,202,718号明細書;PC
T/米国出願第2001/030608号明細書(国際公開第2002/029075号
パンフレット);米国特許第8,105,825号明細書;同第8,168,426号明
細書;PCT/1J5第2002/005235号明細書(国際公開第2002/0666
13号パンフレット);米国特許出願公開第10/468,200号明細書(米国公開第
20120167239号明細書);PCT/米国出願第2002/005706号明細
書(国際公開第2002/066614号パンフレット);米国特許第7,531,32
6号明細書;同第8,236,556号明細書;同第8,598,409号明細書;PC
T/米国出願第2002/005090号明細書(国際公開第2002/066612号
パンフレット);米国特許第8,715,959号明細書(米国公開第20060100
416号明細書);PCT/米国出願第2002/005234号明細書(国際公開第2
003/027266号パンフレット);米国特許第7,601,508号明細書;同第
7,829,676号明細書;同第7,919,269号明細書;同第8,030,06
7号明細書;PCT/米国出願第2002/005708号明細書(国際公開第2002
/066615号パンフレット);米国特許出願公開第10/468,192号明細書(
米国公開第20110212528号明細書);PCT/米国出願第2002/0050
26号明細書(国際公開第2003/027289号パンフレット);米国特許第7,5
63,879号明細書;同第8,021,878号明細書;同第8,497,093号明
細書;PCT/米国出願第2005/015089号明細書(国際公開第2005/10
8617号パンフレット);米国特許第7,935,510号明細書;同第8,076,
454号明細書;PCT/米国出願第2008/011270号明細書(国際公開第20
09/045370号パンフレット);米国特許出願公開第12/241,018号明細
書(米国公開第20090136465号明細書);PCT/米国出願第2008/01
1563号明細書(国際公開第2009/048560号パンフレット);米国特許出願
公開第12/247,738号明細書(米国公開第20090123441号明細書);
PCT/米国出願第2009/005510号明細書(国際公開第2010/04218
9号パンフレット);米国特許出願公開第13/123,129号明細書(米国公開第2
0110268766号明細書);PCT/米国出願第2011/029682号明細書
(国際公開第2011/119773号パンフレット);米国特許出願公開第13/63
6,473号明細書(米国公開第20130195800号明細書);PCT/米国出願
第2012/027515号明細書(国際公開第2012/122025号パンフレット
);および米国特許第9,402,919号明細書において記載されている系のうちのい
ずれかの、エクジソンベースの受容体による構成要素から選択しうるが、これらに限定さ
れない。
細胞タグとして、エフェクター細胞内で機能することが可能な、1または複数のポリペ
プチド構築物を発現するように改変されたエフェクター細胞が提供される。
、中心的な役割を果たす、リンパ球の種類である。「T細胞」または「Tリンパ球」は、
細胞表面上のT細胞受容体(TCR)の存在により、B細胞およびナチュラルキラー細胞
(NK細胞)など、他のリンパ球と区別されうる。
ー細胞を含む改変免疫細胞である。T細胞またはTリンパ球は、細胞媒介性免疫に関与す
る白血球の亜型である。例示的なT細胞は、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、TH1
7細胞、ステムセルメモリーT細胞(TSCM)、ナイーブT細胞、メモリーT細胞、エ
フェクターT細胞、調節性T細胞、またはナチュラルキラーT細胞を含む。
ならびに細胞傷害性T細胞およびマクロファージの活性化を含む免疫過程において、他の
白血球を支援する。場合によって、TH細胞は、細胞表面上のCD4糖タンパク質の発現
のために、CD4+ T細胞として公知である。ヘルパーT細胞は、抗原提示細胞(AP
C)の表面上で発現する、MHCクラスII分子により、ペプチド抗原を提示されると、
活性化する。活性化すると、ヘルパーT細胞は、急速に分裂し、活性の免疫応答を調節す
るか、またはこれらを支援する、サイトカインと呼ばれる、小型のタンパク質を分泌する
。これらの細胞は、TH1、TH2、TH3、TH17、Th9、またはTFHを含む、
いくつかの亜型であって、異なるサイトカインを分泌して、異なる種類の免疫応答を容易
とする、いくつかの亜型のうちの1つへと分化しうる。APCからのシグナル伝達は、T
細胞を、特定の亜型へと方向付ける。一部の実施形態では、本明細書に、分泌型サイトカ
インは、組換えサイトカインでありうる。
壊し、また、移植片拒絶にも関与している。これらの細胞はまた、それらの表面上におい
て、CD8糖タンパク質を発現するので、CD8+ T細胞としても公知である。これら
の細胞は、全ての有核細胞の表面上に存在する、MHCクラスI分子と会合する抗原に結
合することにより、それらの標的を認識する。調節性T細胞により分泌される、IL-1
0、アデノシン、および他の分子を介して、CD8+細胞は、アネルギー状態へと不活化
される場合があり、これにより、自己免疫疾患を防止する。
サブセットである。メモリーT細胞は、それらのコグネイト抗原へと再曝露されると、多
数のエフェクターT細胞へと急速に拡大増殖し、これにより、免疫系に、過去の感染に対
する「メモリー」をもたらす。メモリーT細胞は、亜型:ステムセルメモリーT細胞(T
SCM)、セントラルメモリーT細胞(TCM細胞)および2種類のエフェクターメモリ
ーT細胞(TEM細胞およびTEMRA細胞)を含む。メモリー細胞は、CD4+細胞の
場合もあり、CD8+細胞の場合もある。メモリーT細胞は、細胞表面タンパク質である
、CD45RO、CD45RA、および/またはCCR7を発現しうる。
、免疫寛容の維持において役割を果たす。調節性T細胞の主要な役割は、T細胞媒介性免
疫を遮断して、免疫反応を終了させ、胸腺内の陰性選択過程を回避した自己反応性T細胞
を抑制することである。
主要組織適合性複合体(MHC)分子により提示されるペプチド抗原を認識する従来のT
細胞と異なり、NKT細胞は、CD1dと呼ばれる分子により提示される糖脂質抗原を認
識する。活性化すると、これらの細胞は、Th細胞およびTc細胞の両方に帰せられた機
能(すなわち、サイトカインの産生および細胞溶解性/細胞殺滅分子の放出)を果たしう
る。NKT細胞はまた、一部の腫瘍細胞およびヘルペスウイルスに感染した細胞を認識し
、これらを消失させることも可能である。
。場合によって、NK細胞は、ウイルス感染および/または腫瘍形成に対する、最前線の
防御をもたらす。NK細胞は、感染細胞上またはがん性細胞上に提示されたMHCを検出
することが可能であり、サイトカイン放出を誘発し、その後、溶解およびアポトーシスを
誘導する。NK細胞はさらに、抗体および/またはMHCの非存在下で、ストレス細胞を
検出することが可能であり、これにより、迅速な免疫応答を可能とする。
本開示はまた、本明細書で記載される核酸を挿入したウイルスのベースの系などの送達
系も提供する。代表的なウイルス発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター、アデノ
ウイルスベースのベクター(例えば、Crucell,Inc.(Leiden、Net
herlands)から市販されている、アデノウイルスベースのPer.C6系)、レ
ンチウイルスベースのベクター(例えば、Life Technologies(Car
lsbad、Calif.)製の、レンチウイルスベースのpLPI)、レトロウイルス
ベクター(例えば、pCFB-EGSHを付加したpFB-ERV)、およびヘルペスウ
イルスベースのベクターを含むがこれらに限定されない。ある実施形態では、ウイルスベ
クターは、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来
するベクターは、トランス遺伝子の、娘細胞における、長期にわたる、安定的な組込みお
よびその繁殖を可能とするので、長期にわたる遺伝子導入を達成するのに適するツールで
ある。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖性細胞に形質導入しうるという点
で、マウス白血病ウイルスなど、がんレトロウイルスに由来するベクターに優る追加の利
点を有する。レンチウイルスベクターはまた、低免疫原性という追加の利点も有する。さ
らなる実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。さらな
る実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。一般に、かつ、
複数の実施形態では、適切なベクターは、少なくとも1つの生物において機能的な複製起
点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位、および1または複数の選
択用マーカー(例えば、国際公開第01/96584号パンフレット、国際公開第01/
29058号パンフレット、および米国特許第6,326,193号明細書)を含有する
。
り、発現ベクターと、宿主細胞の染色体との特異的組換えを可能とする組換え部位を含む
場合もある、組込み用発現ベクターを含む。このような組込み用発現ベクターは、宿主細
胞の染色体の内因性発現制御配列を用いて、所望のタンパク質の発現をもたらしうる。部
位特異的に組み込むベクターの例は、例えば、Invitrogen(Carlsbad
、Calif.)(例えば、pcDNA(商標)5/FRT)製のflp-in系、また
はStratagene(LaJolla、Calif.)製のpExchange-6
Core Vectorsにおいて見出されうるcre-lox系などのcre-lo
x系の構成要素を含む。宿主細胞染色体へとランダムに組み込まれるベクターの例は、例
えば、Invitrogen(Carlsbad、Calif.)製のpcDNA3.1
(T抗原の非存在下で導入される場合)、およびPromega(Madison、Wi
s.)製のpCIまたはpFN10A(ACT)FLEXI(商標)を含む。さらなるプ
ロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的に
、プロモーターエレメントは、開始部位の30~110bp上流の領域内に位置するが、
多数のプロモーターは、開始部位の下流にも、機能的なエレメントを含有することが近年
示されている。エレメントが、互いに対して逆位であるか、または移動している場合にも
、プロモーター機能が保存されるように、プロモーターエレメントの間のスペーシングは
、柔軟であることが多い。チミジンキナーゼ(tk)プロモーターでは、活性が減衰し始
める前に、プロモーターエレメントの間のスペーシングが、50bpの距離まで増大する
場合がある。個別のエレメントは、転写を活性化させるように、プロモーターに応じて、
共作動的に機能する場合もあり、独立に機能する場合もあると考えられる。
ー配列である。このプロモーター配列は、それへと作動的に連結された、任意のポリヌク
レオチド配列の、高レベルの発現を駆動することが可能である、強力な構成的プロモータ
ー配列である。
る。複数の実施形態では、本開示のCARおよび/またはTCRを含むベクター構築物は
、hEF1a1機能的変異体を含む。
MMTV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)LTR(long terminal r
epeat)プロモーター、MoMuLVプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモータ
ー、エプスタイン-バーウイルス即初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター
のほか、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、お
よびクレアチンキナーゼプロモーターなどであるがこれらに限定されない、ヒト遺伝子プ
ロモーターを含むがこれらに限定されない、他の構成的プロモーター配列もまた、使用す
ることができる。さらに、本開示は、構成的プロモーターの使用に限定されないものとす
る。誘導性プロモーターもまた、本開示の一部として想定される。誘導性プロモーターの
使用は、このような発現が所望される場合に、それが作動的に連結されたポリヌクレオチ
ド配列の発現をオンにするか、または発現が所望されない場合に、発現をオフにすること
が可能な分子スイッチをもたらす。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモ
ーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラ
サイクリンプロモーターを含むがこれらに限定されない。
導入される発現ベクターはまた、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染
させることが求められる細胞集団からの、発現細胞の同定および選択を容易とする、選択
用マーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子またはこれらの両方も含有しうる。他の態様
では、選択用マーカーは、別個のDNA片上に保有され、共トランスフェクション手順で
使用さる場合もある。選択用マーカーおよびレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞内の
発現を可能とするように、適切な調節配列で挟むことができる。有用な選択用マーカーは
、例えば、ネオマイシン耐性遺伝子(neo)およびアンピシリン耐性遺伝子などの抗生
剤耐性遺伝子を含む。一部の実施形態では、トランケート型表皮増殖因子受容体(HER
1t)タグを、選択用マーカー遺伝子として使用することができる。
機能性について査定するために使用することができる。一般に、レポーター遺伝子は、レ
シピエントの生物または組織において存在しないか、またはこれらにより発現せず、その
発現が、何らかの、容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性により顕在化されるポリペ
プチドをコードする遺伝子である。DNAを、レシピエント細胞へと導入した後の適切な
時点において、レポーター遺伝子の発現についてアッセイする。適切なレポーター遺伝子
は、ルシフェラーゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトラン
スフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、または緑色蛍光タン
パク質遺伝子(例えば、Ui-Tei et al., FEBS Letters 479: 79-82 (2000))を含むこと
ができる。適切な発現系が周知であり、公知の技法を使用して調製することもでき、市販
品を購入することもできる。一般に、最高レベルのレポーター遺伝子の発現を示す、最小
の5’側フランキング領域を伴う構築物は、プロモーターとして同定される。このような
プロモーター領域は、レポーター遺伝子へと連結することができ、薬剤を、プロモーター
駆動型転写をモジュレートする能力について査定するのに使用することができる。
プロモーター、転写を増強するウシ成長ホルモンポリA配列、ウッドチャック肝炎ウイル
ス転写後調節エレメント(WPRE)のほか、pFUGWプラスミドに由来するLTR配
列を含む。
の文脈では、ベクターを、当技術分野における任意の方法により、宿主細胞、例えば、哺
乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞、または昆虫細胞へと、たやすく導入することができる
。例えば、発現ベクターは、宿主細胞へと、物理的手段により導入することもでき、化学
的手段により導入することもでき、生物学的手段により導入することもできる。
殿法、リポフェクション法、遺伝子銃法、マイクロインジェクション法、電気穿孔法など
を含む。当技術分野では、ベクターおよび/または外因性核酸を含む細胞を作製するため
の方法が周知である。例えば、Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Man
ual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (2001))を参照されたい。複数の実施形
態では、ポリヌクレオチドを、宿主細胞へと導入するための方法は、リン酸カルシウムト
ランスフェクションまたはポリエチレンイミン(PEI)トランスフェクションである。
ターおよびRNAベクターの使用を含む。ウイルスベクターと、とりわけ、レトロウイル
スベクターとは、遺伝子を、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞へと挿入するための、最も
広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックス
ウイルス、単純ヘルペスウイルスI、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなどに
由来しうる。例えば、米国特許第5,350,674号明細書および同第5,585,3
62号明細書を参照されたい。
カプセル、マイクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合型ミ
セル、およびリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散系を含む。in vi
troおよびin vivoにおける、送達媒体としての使用のための、例示的なコロイ
ド状系は、リポソーム(例えば、人工膜小胞)である。
細胞への導入(in vitro、ex vivo、またはin vivoにおける)の
ために、脂質製剤の使用が想定される。別の態様では、核酸は、脂質と会合させることが
できる。脂質と会合させた核酸は、リポソームの脂質二重層内に散在する、水性のリポソ
ーム内部に封入することもでき、リポソームおよびオリゴヌクレオチドのいずれとも会合
する連結分子を介して、リポソームへと接合させることもでき、リポソーム内に取り込む
こともでき、リポソームと複合体化させることもでき、脂質を含有する溶液中に分散させ
ることもでき、脂質と混合することもでき、脂質と組み合わせることもでき、脂質中の懸
濁液として含有することもでき、ミセルと共に含有するかもしくは複合体化させることも
でき、または他の形で脂質と会合させることもできる。脂質、脂質/DNA、または脂質
/発現ベクターに関連する組成物は、溶液中の、任意の特定の構造に限定されない。例え
ば、組成物は、ミセルとしての二重層構造内に存在する場合もあり、「コラプシング」構
造を伴う二重層構造内に存在する場合もある。組成物はまた、単に、溶液中に散在させる
こともでき、おそらく、サイズまたは形状が均質ではない凝集物を形成しうる。脂質とは
、天然脂質の場合もあり、合成脂質の場合もある、脂肪性物質である。例えば、脂質は、
天然では、細胞質内で発生する脂肪性液滴のほか、長鎖脂肪族炭化水素、ならびに脂肪酸
、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドなど、それらの誘導体を含
有する化合物のクラスを含む。
ァチジルコリン(「DMPC」)は、Sigma、St.Louis、Mo.から購入す
ることができ、ジセチルリン酸(「DCP」)は、K & K Laboratorie
s(Plainview、N.Y.)から購入することができ、コレステロール(「Ch
oi」)は、Calbiochem-Behringから購入することができ、ジミリス
チルホスファチジルグリセロール(「DMPG」)および他の脂質は、Avanti P
olar Lipids,Inc.(Birmingham、Ala.)から購入するこ
とができる。クロロホルムまたはクロロホルム/メタノール中の脂質原液は、約-20℃
で保存することができる。クロロホルムは、メタノールよりたやすく蒸発するので、唯一
の溶媒として使用される。「リポソーム」とは、封入された脂質の二重層または脂凝集物
の作出により形成される、様々な単一の脂質媒体および多層性脂質媒体を包含する、一般
的な用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜および内部の水性媒質を伴う小胞構造
を有するものとして特徴づけることができる。多層性リポソームは、水性媒質により分離
された複数の脂質層を有する。多層性リポソームは、リン脂質を、過剰量の水溶液中に懸
濁させると、自発的に形成される。脂質成分は、閉止構造を形成する前に、自己転移を経
、脂質二重層の間に、水および溶解させた溶質を取り込む(Ghosh et al., Glycobiology
5: 505-10 (1991))。しかし、溶液中に通常の小胞構造と異なる構造を有する組成物も
また、包含される。例えば、脂質は、ミセル構造を取る場合もあり、脂質分子による不均
質の凝集物として存在する場合もある。また、リポフェクタミン-核酸複合体も想定され
る。
場合によって、本明細書で記載される細胞タグをコードするポリヌクレオチドはまた、
DNA配列を、脊椎動物の染色体へと導入するための、合成DNAトランスポゾン系を指
す、「Sleeping Beauty(SB)トランスポゾン系」など、非ウイルスベ
ースの送達系を使用して、T細胞へと導入することもできる。SBトランスポゾン系の、
一部の例示的な実施形態については、例えば、米国特許第6,489,458号明細書お
よび同第8,227,432号明細書において記載されている。Sleeping Be
autyトランスポゾン系は、Sleeping Beauty(SB)トランスポザー
ゼおよびSBトランスポゾンから構成される。複数の実施形態では、Sleeping
Beautyトランスポゾン系は、SB11トランスポゾン系、SB100Xトランスポ
ゾン系、またはSB110トランスポゾン系を含みうる。
アンドペースト方式で転座する。転移は、規定されたDNAセグメントを、1つのDNA
分子から切り出し、同じDNA分子内もしくはゲノム内、または異なるDNA分子内もし
くはゲノム内の別の部位へと移動させる、正確な過程である。他のTc1/marine
r型トランスポザーゼと同様、SBトランスポザーゼも、トランスポゾンを、レシピエン
トDNA配列内の、TAジヌクレオチド塩基対へと挿入する。挿入部位は、同じDNA分
子内の別の部位の場合もあり、別のDNA分子(または染色体)内の場合もある。ヒトゲ
ノムを含む哺乳動物ゲノムには、約2億カ所のTA部位が存在する。TA挿入部位は、ト
ランスポゾン組込みの過程において、重複される。このTA配列の重複は、転移の顕著な
特徴であり、一部の実験では、機構を確認するのに使用される。トランスポザーゼは、ト
ランスポゾン内でコードされる場合もあり、トランスポザーゼは、別の供給源、例えば、
DNA供給源またはmRNA供給源により供給される場合もあり、この場合、トランスポ
ゾンは、非自律型エレメントとなる。非自律型トランスポゾンは、挿入の後、独立では切
出しおよび再挿入を行いえないため、遺伝子ツールとして最も有用である。SBトランス
ポゾンは、脊椎動物のゲノムへの遺伝子の導入および遺伝子治療のための非ウイルスベク
ターとして使用することが想定されている。略述すると、T細胞を遺伝子改変するように
、Sleeping Beauty(SB)系(Hackett et al., Mol Ther 18:674-83,
(2010))を適合させた(Cooper et al., Blood 105:1622-31, (2005))。これは、2つの
ステップ:(i)T細胞の特異性をリダイレクトするためのSBトランスポゾン[すなわ
ち、キメラ抗原受容体(CAR)およびSBトランスポザーゼを発現するDNAプラスミ
ドのエレクトロトランスファー(Jin et al., Gene Ther 18:849-56, (2011)、Kebriaei
et al., Hum Gene Ther 23:444-50, (2012))、ならびに(ii)K562細胞株に由来
するデザイナー人工抗原提示細胞(AaPC)(AaPC(Activating an
d Propagating Cell)としてもまた公知である)に接する形での、組
込み配列を安定的に発現するT細胞の繁殖および拡大増殖を伴った。一実施形態では、S
Bトランスポゾン系は、膜結合型IL-15および/またはキメラ抗原受容体をコードす
るコード配列を含む。このような系については、例えば、参照によりそれらの全体におい
て本明細書に組み込まれる、Singh et al., Cancer Res (8):68 (2008). April 15, 2008
およびMaiti et al., J Immunother. 36(2): 112-123 (2013)において記載されている。
ある特定の実施形態では、CARまたはTCR、およびサイトカイン、およびポリペプチ
ド細胞タグを含むSBトランスポゾンを発現させるDNAプラスミドを、エフェクター細
胞へと電気穿孔し、次いで、さらなる繁殖および拡大を伴わずに、患者へと輸注する。
TCRまたはサイトカイン、および1または複数のポリペプチドである細胞タグをコード
するポリヌクレオチドは、1または複数のトランスポゾンDNAプラスミドベクター内で
コードされ、SBトランスポザーゼは、別個のベクター内でコードされる。複数の実施形
態では、ポリペプチドである細胞タグは、トランスポゾンDNAプラスミドベクター内で
コードされ、CARまたはTCRまたはサイトカインは、第2のトランスポゾンDNAプ
ラスミドベクター内でコードされ、SBトランスポザーゼは、第3のDNAプラスミドベ
クター内でコードされる。一部の実施形態では、CARまたはTCRおよびサイトカイン
およびポリペプチドである細胞タグは、単一のトランスポゾン内でコードされる。
るように、ポリペプチド構築物を認識する、FDAで承認された抗体または任意の抗体の
投与を介して、輸注されたCAR-T細胞の枯渇を可能とすることにより、安全性機構を
もたらす。一部の実施形態では、本明細書で記載されるHER1t変異体は、導入された
セツキシマブに結合し、細胞の枯渇を可能とすることにより、安全性機構をもたらす。一
部の実施形態では、また、CD20t変異体も、FDAで承認されたリツキシマブ療法の
投与を介して、輸注されたCAR-T細胞の枯渇を可能とすることにより、安全性機構を
もたらす。
で曝露するのに使用される方法にかかわらず、宿主細胞内の組換えDNA配列の存在を確
認するために、様々なアッセイを実施することができる。このようなアッセイは、例えば
、サザンブロット法およびノーザンブロット法、RT-PCRおよびPCRなど、当業者
に周知の分子アッセイ;例えば、免疫学的手段(ELISAおよびウェスタンブロット)
、または薬剤を同定するための、本明細書で記載されるアッセイであって、本開示の範囲
内に収まるアッセイにより、特定のペプチドの有無を検出するアッセイなどの「生化学的
」アッセイを含む。
B110トランスポゾン系、piggyBacトランスポゾン系(例えば、参照によりそ
の全体において本明細書に組み込まれる、Wilson et al, “PiggyBac Transposon-mediat
ed Gene Transfer in Human Cells,” Molecular Therapy 15:139-145 (2007)を参照され
たい)、および/またはpiggyBatトランスポゾン系(例えば、Mitra et al., “
Functional characterization of piggyBat from the bat Myotis lucifugus unveils an
active mammalian DNA transposon,” Proc. Natl. Acad. Sci USA 110:234-239 (2013)
を参照されたい)を使用して、本明細書で説明される改変エフェクター細胞および他の遺
伝子エレメントを、細胞へと送達する。さらなるトランスポザーゼおよびトランスポゾン
系については、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、
米国特許第6,489,458号明細書、同第6,613,752号明細書、同第7,1
48,203号明細書、同第7,985,739号明細書、同第8,227,432号明
細書、同第9,228,180号明細書、米国特許公開第2011/0117072号明
細書、Mates et al., Nat Genet, 41(6):753-61 (2009). doi: 10.1038/ng.343. Epub 20
09 May 3, Gene Ther., 18(9):849-56 (2011). doi: 10.1038/gt.2011.40. Epub 2011 Ma
r 31 およびIvics et al., Cell. 91(4):501-10, (1997)において提示されている。さら
なる適切な非ウイルス系は、宿主細胞のDNAへと、ランダムに組み込まれる場合もあり
、発現ベクターと、宿主細胞の染色体との特異的組換えを可能とする組換え部位を含む場
合もある、組込み用発現ベクターを含みうる。トランス遺伝子の、所定の遺伝子座への組
込みのターゲティングが、多くの適用に所望される目標である。まず、部位特異的リコン
ビナーゼの第1の組換え部位を、ゲノム部位に、ランダムに、または所定の位置に挿入す
る。続いて、細胞に、目的の遺伝子またはDNA、ならびに第2の組換え部位およびリコ
ンビナーゼの供給源(リコンビナーゼを発現させる、発現プラスミド、RNA、タンパク
質、またはウイルス)を保有するプラスミドをトランスフェクトする。第1の組換え部位
と第2の組換え部位との組換えは、プラスミドDNAの組込みをもたらす。
、所望のタンパク質の発現をもたらしうる。一部の実施形態では、ドナーポリヌクレオチ
ド上の配列であって、組込み部位を挟む配列と相同な配列の存在により、組込みのターゲ
ティングを促進する。例えば、本明細書で記載されるドナーポリヌクレオチドを使用する
、組込みのターゲティングは、従来のトランスフェクション法、例えば、相同組換えによ
り、遺伝子のノックアウトまたはノックインを創出するのに使用される技法に従い達成す
ることができる。他の実施形態では、ドナーポリヌクレオチド上の配列であって、組込み
部位を挟む配列と相同な配列の存在、および部位特異的リコンビナーゼの存在下で、細胞
を、ドナーポリヌクレオチドと接触させることの両方により、組込みのターゲティングを
促進する。部位特異的リコンビナーゼ、または、単に、リコンビナーゼとは、その適合性
の組換え部位の間の、保存的な部位特異的組換えを触媒するポリペプチドを意味する。本
明細書で使用される部位特異的リコンビナーゼは、天然ポリペプチドのほか、活性を保持
する誘導体、変異体、および/または断片、ならびに天然ポリヌクレオチド、活性を保持
するリコンビナーゼをコードする誘導体、変異体、および/または断片を含む。
種遺伝子を組み込むための系も提示される。場合によって、系は、第1のポリペプチド構
築物をコードする、第1のポリヌクレオチドを含む、第1の遺伝子発現カセットを含む。
他の場合には、系は、第2のポリペプチド構築物をコードする、第2のポリヌクレオチド
を含む、第2の遺伝子発現カセットを含みうる。さらに他の場合には、系は、第3の遺伝
子発現カセットを含みうる。一実施形態では、系は、前記宿主細胞を、セリンリコンビナ
ーゼの存在下で、少なくとも前記第1の遺伝子発現カセットと接触させると、前記異種遺
伝子が、前記宿主細胞へと組み込まれるように、組換え接合部位およびセリンリコンビナ
ーゼを含む。
種遺伝子が、前記宿主細胞内で発現するように、リガンドをさらに含む。1つの場合には
、系はまた、組換え接合部位も含む。場合によって、1つの組換え接合部位は、ファージ
ゲノム組換え接合部位(attP)または細菌ゲノム組換え接合部位(attB)である
。1つの場合には、宿主細胞は、真核細胞である。別の場合には、宿主細胞は、ヒト細胞
である。さらなる場合には、宿主細胞は、T細胞またはNK細胞である。
では、CARは、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX
、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸
結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテ
リン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、P
SMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの
少なくとも1つに結合する。
イトカインは、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およびIL-15とI
L-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む。一部の実施形態では、系
は、本明細書で記載される、少なくとも1つの細胞タグを含む異種遺伝子を含む。一部の
実施形態では、前記細胞タグは、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD
20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む。一部の
実施形態では、mbIL-15は、細胞タグと共にコードされる。細胞タグの例は、トラ
ンケート型の、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD20ポリペプチド
、CD52ポリペプチド、あるいは枯渇スイッチもしくはキルスイッチ、またはエンリッ
チメントマーカーとしての使用のための、他の任意の適切な細胞タグを含みうる。
合には、系は、1つのベクター内に含有される。1つの場合には、第1の遺伝子発現カセ
ット、第2の遺伝子発現カセット、および組換え接合部位は、1つのベクター内に含有さ
れる。1つの場合には、第1の遺伝子発現カセット、第2の遺伝子発現カセット、第3の
遺伝子発現カセット、および組換え接合部位は、1つのベクター内に含有される。別の場
合には、セリンリコンビナーゼは、SF370である。他の場合には、セリンリコンビナ
ーゼは、別個のベクター内にある。
もでき、これと共時的に導入することもでき、この後で導入することもできる。リコンビ
ナーゼは、例えば、リポソーム、粒子のコーティング、またはマイクロインジェクション
を使用して、細胞へと、タンパク質として直接導入することができる。代替的に、適切な
発現ベクターを使用して、リコンビナーゼをコードするDNAまたはメッセンジャーRN
Aである、ポリヌクレオチドを、細胞へと導入することもできる。上記で記載したターゲ
ティングベクターの構成要素は、目的のリコンビナーゼをコードする配列を含有する発現
カセットの構築において有用である。しかし、リコンビナーゼの発現は、他の方式で、例
えば、リコンビナーゼの発現を、調節可能なプロモーター(すなわち、その発現を選択的
に誘導または抑制しうるプロモーター)の制御下に置くことにより調節することもできる
。
き、既に記載された通りに精製することもできる。所望のリコンビナーゼ活性を有するポ
リペプチドは、当技術分野で公知の方法であって、タンパク質の硫酸アンモニウム沈殿の
方法、サイズ分画、アフィニティークロマトグラフィー、HPLC、イオン交換クロマト
グラフィー、ヘパリンアガロースアフィニティークロマトグラフィー(例えば、Thorpe &
Smith, Proc. Nat. Acad. Sci. 95:5505-5510, 1998)を含むがこれらに限定されないタ
ンパク質精製の方法により、所望の純度まで精製することができる。
え接合部位を含有する真核細胞へと導入することができる。当技術分野では、例えば、マ
イクロインジェクションまたは他の方法により、機能的タンパク質を、細胞へと導入する
方法が周知である。精製リコンビナーゼタンパク質の導入は、タンパク質の一過性の存在
、およびその機能を確保するが、これは、好ましい実施形態であることが多い。代替的に
、リコンビナーゼをコードする遺伝子は、細胞を形質転換するのに使用される発現ベクタ
ーであって、リコンビナーゼをコードするポリヌクレオチドを、真核細胞内のポリヌクレ
オチドの発現を媒介するプロモーターに作動可能に連結した、発現ベクター内に含まれう
る。リコンビナーゼポリペプチドはまた、リコンビナーゼポリペプチドをコードするメッ
センジャーRNAによっても、真核細胞へと導入することができる。リコンビナーゼは、
核酸断片の、改変されるゲノムへの挿入に必要であるような時間の間だけ存在することが
一般に好ましい。したがって、大半の発現ベクターと関連する永続性の欠如は、有害では
ないと予測される。リコンビナーゼ遺伝子を、目的の外因性ポリヌクレオチドの導入の前
に導入することもでき、これと同時に導入することもでき、この後で導入することもでき
る。一実施形態では、リコンビナーゼ遺伝子は、挿入されるポリヌクレオチドを保有する
ベクター内に存在し、リコンビナーゼ遺伝子はなお、ポリヌクレオチド内にも、組み入れ
ることができる。他の実施形態では、リコンビナーゼ遺伝子を、トランスジェニックの真
核生物へと導入する。リコンビナーゼを、構成的に、あるいは細胞特異的プロモーター、
組織特異的プロモーター、発生特異的プロモーター、細胞小器官特異的プロモーター、ま
たは低分子誘導性プロモーターもしくは低分子抑制性プロモーター下で発現させる、トラ
ンスジェニック細胞またはトランスジェニック動物を作製することができる。リコンビナ
ーゼはまた、他のペプチド、タンパク質、核局在化シグナルペプチド、シグナルペプチド
、または細胞小器官特異的シグナルペプチド(例えば、ミトコンドリア内またはクロロプ
ラスト内の組換えを容易とする、ミトコンドリアまたはクロロプラストにおけるトランジ
ットペプチド)との融合タンパク質としても発現させることができる。
に由来しうる。リコンビナーゼのインテグラーゼファミリーは、100を超えるメンバー
を有し、例えば、FLP、Cre、およびラムダインテグラーゼを含む。インテグラーゼ
ファミリーはまた、チロシンファミリーまたはラムダインテグラーゼファミリーとも称し
、DNAのホスホジエステル結合に対する求核攻撃のために、チロシンの触媒性ヒドロキ
シル基を使用する。典型的に、チロシンファミリーのメンバーはまず、DNAにニックを
入れ、これにより、その後、二重鎖切断を形成する。チロシンファミリーインテグラーゼ
の例は、Creインテグラーゼ、FLPインテグラーゼ、SSV1インテグラーゼ、およ
びラムダ(λ)インテグラーゼを含む。セリンリコンビナーゼファミリーとしてもまた公
知の、リゾルバーゼファミリーでは、保存性セリン残基が、DNA標的部位への共有結合
性連結を形成する(Grindley, et al., (2006) Ann Rev Biochem 16:16)。
ンビナーゼ、Bxb1リコンビナーゼ、A118リコンビナーゼ、およびΦRv1リコン
ビナーゼからなる群から選択されるリコンビナーゼをコードする核酸配列を含む、単離ポ
リヌクレオチド配列である。セリンリコンビナーゼの例については、参照によりその全体
において本明細書に組み込まれる、米国特許第9,034,652号明細書において詳細
に記載されている。
換え部位を用意するステップと、第1の組換え部位および第2の組換え部位を、原核細胞
のリコンビナーゼポリペプチドと接触させる結果として、組換え部位の間の組換えをもた
らすステップとを含み、リコンビナーゼポリペプチドは、第1の組換え部位と、第2の組
換え部位との組換えを媒介することが可能であり、第1の組換え部位は、attPまたは
attBであり、第2の組換え部位は、attBまたはattPであり、第1の組換え接
合部位が、attBである場合、第2の組換え接合部位は、attPであり、第1の組換
え接合部位が、attPである場合、第2の組換え接合部位は、attBであるという条
件で、リコンビナーゼは、リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)の
ファージリコンビナーゼ、化膿連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)のファージリコンビ
ナーゼ、枯草菌(Bacillus subtilis)のファージリコンビナーゼ、結核菌(Mycobacteri
um tuberculosis)のファージリコンビナーゼ、およびスメグマ菌(Mycobacterium smegm
atis)のファージリコンビナーゼからなる群から選択される。さらなる実施形態は、部位
特異的リコンビナーゼの、ゲノムが改変される細胞への導入を提供する。一実施形態は、
真核細胞内の部位特異的組換えを得るための方法であって、第1の組換え接合部位および
第2の組換え接合部位を含む真核細胞を用意するステップと、第1の組換え接合部位およ
び第2の組換え接合部位を、原核細胞のリコンビナーゼポリペプチドと接触させる結果と
して、組換え接合部位の間の組換えをもたらすステップとを含み、リコンビナーゼポリペ
プチドが、第1の組換え接合部位と、第2の組換え接合部位との組換えを媒介することが
可能であり、第1の組換え接合部位が、ファージゲノムの組換え接合部位(attP)、
または細菌ゲノムの組換え接合部位(attB)であり、第2の組換え接合部位が、at
tBまたはattPであり、第1の組換え接合部位が、attBである場合、第2の組換
え接合部位が、attPであり、第1の組換え接合部位が、attPである場合、第2の
組換え接合部位が、attBであるという条件で、リコンビナーゼが、リステリア・モノ
サイトゲネス(Listeria monocytogenes)のファージリコンビナーゼ、化膿連鎖球菌(St
reptococcus pyogenes)のファージリコンビナーゼ、枯草菌(Bacillus subtilis)のフ
ァージリコンビナーゼ、結核菌(Mycobacterium tuberculosis)のファージリコンビナー
ゼ、およびスメグマ菌(Mycobacterium smegmatis)のファージリコンビナーゼからなる
群から選択される、方法に関する。ある実施形態では、リコンビナーゼは、A118リコ
ンビナーゼ、SF370.1リコンビナーゼ、SPβc2リコンビナーゼ、ΦRv1リコ
ンビナーゼ、およびBxb1リコンビナーゼからなる群から選択される。一実施形態では
、組換えは、組込みを結果としてもたらす。
ある特定の態様では、本明細書で記載される実施形態は、リダイレクトされた、抗原特
異的免疫エフェクター細胞(例えば、T細胞、NK細胞、またはNK T細胞)を作り出
し、かつ/またはこれを拡大増殖させる方法であって、細胞に、ポリペプチド構築物をコ
ードするDNA(またはRNA)構築物を含有する発現ベクターによりトランスフェクト
し、次いで、任意選択で、細胞を、フィーダー細胞、組換え抗原、または受容体に対する
抗体で刺激して、細胞を増殖させるステップを含む方法を含む。ある特定の態様では、C
ARまたはTCRを発現するように操作された細胞(または細胞集団)は、幹細胞、iP
S細胞、免疫エフェクター細胞、またはこれらの細胞の前駆細胞である。
合によって、免疫エフェクター細胞は、幹細胞または人工多能性幹細胞(iPSC)から
分化させることもできる。したがって、実施形態に従い操作するための細胞は、臍帯血、
末梢血、ヒト胚性幹細胞、またはiPSCから単離することができる。例えば、同種T細
胞は、キメラ抗原受容体を含むように(そして、任意選択で、機能的なTCRを欠くよう
に)改変することができる。一部の態様では、免疫エフェクター細胞は、ヒト末梢血単核
細胞(PBMC)に由来するT細胞などの初代ヒトT細胞である。PBMCは、末梢血か
ら回収することもでき、G-CSF(顆粒球コロニー刺激因子)による刺激の後で、骨髄
または臍帯血から回収することもできる。トランスフェクションまたは形質導入(例えば
、CAR発現構築物の)の後、細胞を、速やかに輸注することもでき、凍結保存すること
もできる。ある特定の態様では、トランスフェクションの後、細胞は、細胞への遺伝子導
入後、約1、2、3、4、5日間またはこれを超える日数以内に、ex vivoにおい
て、バルク集団として、数日間、数週間、または数カ月間にわたり繁殖させることができ
る。さらなる態様では、トランスフェクションの後、トランスフェクト細胞を、クローニ
ングし、組み込まれるか、またはエピソーム内に維持された、単一の発現カセットまたは
プラスミドの存在、およびキメラ抗原受容体の発現を裏付けるクローンを、ex viv
oにおいて拡大増殖させる。拡大増殖のために選択されたクローンは、抗原を発現する標
的細胞を特異的に認識し、溶解させる能力を裏付ける。組換えT細胞は、IL-2または
共通のガンマ鎖に結合する他のサイトカイン(例えば、IL-7、IL-12、IL-1
5、IL-21、および他のサイトカイン)を伴う刺激により拡大増殖させることができ
る。組換えT細胞は、人工抗原提示細胞を伴う刺激により拡大増殖させることができる。
組換えT細胞は、人工抗原提示細胞に接する形で拡大増殖させることもでき、T細胞表面
上のCD3を架橋する、OKT3などの抗体により拡大増殖させることもできる。組換え
T細胞のサブセットは、磁気ビーズベースの単離法および/または蛍光活性化細胞分取技
術の使用により、さらに選択することができ、AaPCと共にさらに培養することができ
る。さらなる態様では、遺伝子改変細胞は、凍結保存することができる。
組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍(腫瘍浸潤リンパ球)を含む、多数の供給源か
らも得ることができる。本開示の、ある特定の実施形態では、当技術分野において入手可
能な、任意の数のT細胞株を使用することができる。本開示の、ある特定の実施形態では
、T細胞は、Ficoll(登録商標)分離など、当業者に公知の、任意の数の技法を使
用して、対象から回収された血液単位から得ることができる。複数の実施形態では、個体
の循環血液に由来する細胞は、アフェレーシスにより得る。アフェレーシス生成物は、典
型的に、T細胞、単球、顆粒球、B細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む
リンパ球を含有する。一実施形態では、アフェレーシスにより回収された細胞を洗浄して
、血漿画分を除去し、細胞を、その語における加工ステップのために、適切な緩衝液中ま
たは培地中に入れる。本開示の一実施形態では、細胞を、リン酸緩衝生理食塩液(PBS
)で洗浄する。代替的な実施形態では、洗浄液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠
く場合もあり、全てではないが、多くの二価カチオンを欠く場合もある。カルシウムの非
存在下における初期活性化ステップは、活性化の強化をもたらす。当業者がたやすく理解
する通り、洗浄ステップは、製造元の指示書に従い、半自動式「フロースルー」型遠心分
離機(例えば、Cobe 2991細胞プロセッサー、Baxter CytoMate
、またはHaemonetics Cell Saver 5)を使用することなど、当
業者に公知の方法により達することができる。洗浄の後、細胞を、例えば、Ca2+非含
有PBS、Mg2+非含有PBS、Plasmalyte A、または緩衝液を伴うかも
しくは伴わない、他の生理食塩液溶液など、様々な生体適合性の緩衝液中に再懸濁させる
ことができる。代替的に、アフェレーシス試料の、所望されない構成要素を除去し、細胞
を、培養培地中に、直接再懸濁させることもできる。
は対向流遠心溶出により、赤血球を溶解させ、単球を枯渇させることにより、T細胞を、
末梢血リンパ球から単離する。CD3+、CD28+、CD4+、CD8+、CD45R
A+、およびCD45RO+T細胞など、T細胞の特異的亜集団も、陽性選択法または陰
性選択法により、さらに単離することができる。別の実施形態では、CD14+細胞を、
T細胞集団から枯渇させる。例えば、一実施形態では、T細胞を、DYNABEADS(
登録商標)M-450 CD3/CD28 Tなどの、抗CD3/抗CD28(すなわち
、3×28)コンジュゲートビーズを伴う、所望のT細胞陽性選択に十分な時間にわたる
インキュベーションにより単離する。一実施形態では、時間は、約30分間である。さら
なる実施形態では、時間は、30分間~36時間、またはこれより長い時間、およびこれ
らの間の任意の整数値の時間の範囲である。さらなる実施形態では、時間は、少なくとも
1、2、3、4、5、または6時間である。さらに別の実施形態では、時間は、10~2
4時間である。一実施形態では、インキュベーション時間は、24時間である。白血病を
伴う患者からのT細胞の単離ための、24時間など、長いインキュベーション時間の使用
は、細胞収率を増大させうる。腫瘍組織または免疫障害個体から、腫瘍浸潤リンパ球(T
IL)を単離する状況など、T細胞が、他の細胞型と比較して少数である、任意の状況に
おいては、より長いインキュベーション時間を使用してT細胞を単離することができる。
さらに、長いインキュベーション時間の使用は、CD8+ T細胞の捕捉効率も増加させ
うる。したがって、単に、時間を短くするかまたは長くすることにより、T細胞を、CD
3/CD28ビーズに結合させることが可能となり、かつ/またはビーズの、T細胞に対
する比(本明細書で、さらに記載される通り)を増加もしくは減少させることにより、T
細胞の亜集団を、培養の開始時、もしくは工程中の他の時点において、優先的に、陽性も
しくは陰性に選択することができる。加えて、ビーズ上または他の表面上の、抗CD3お
よび/または抗CD28抗体の比を増加または減少させることにより、T細胞の亜集団を
、培養の開始時、または他の所望の時点において、優先的に、陽性または陰性に選択する
ことができる。当業者は、本開示の文脈では、複数ラウンドにわたる選択もまた、使用し
うることを認識するであろう。ある特定の実施形態では、選択手順を実施し、「選択され
なかった」細胞を、活性化工程および拡大増殖工程において使用することも所望でありう
る。「選択されなかった」細胞はまた、さらなるラウンドにわたる選択にかけることもで
きる。
する抗体の組合せにより達することができる。1つの方法は、陰性選択された細胞上に存
在する細胞表面マーカーを指向する、モノクローナル抗体のカクテルを使用する、細胞分
取および/または陰性の磁気免疫接着もしくはフローサイトメトリーを介する選択である
。例えば、CD4+細胞を、陰性選択により濃縮するために、モノクローナル抗体カクテ
ルは、典型的に、CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR、およびC
D8に対する抗体を含む。ある特定の実施形態では、典型的に、CD4+、CD25+、
CD62Lhi、GITR+、およびFoxP3+を発現する調節性T細胞を、濃縮また
は陽性選択することが所望でありうる。代替的に、ある特定の実施形態では、調節性T細
胞を、抗CD25コンジュゲートビーズまたは他の同様の選択法により枯渇させることが
できる。
表面(例えば、ビーズなどの粒子)を変動させることができる。ある特定の実施形態では
、ビーズと細胞とを、併せて混合する容量を著明に減少させて(すなわち、細胞の濃度を
増加させて)、細胞とビーズとの最大の接触を確保することが所望でありうる。例えば、
一実施形態では、1ml当たりの細胞20億個の濃度を使用する。一実施形態では、1m
l当たりの細胞10億個の濃度を使用する。さらなる実施形態では、1ml当たり細胞1
億個超を使用する。さらなる実施形態では、1ml当たりの細胞1000万、1500万
、2000万、2500万、3000万、3500万、4000万、4500万、または
5000万個の細胞濃度を使用する。さらに別の実施形態では、1ml当たりの細胞75
00万、8000万、8500万、9000万、9500万、または1億個の細胞濃度を
使用する。さらなる実施形態では、1ml当たりの細胞1億2500万または1億500
0万個の濃度を使用しうる。高濃度の使用は、細胞の収量、細胞の活性化、および細胞の
拡大増殖の増大を結果としてもたらしうる。さらに、高細胞濃度の使用は、CD28陰性
T細胞、または多くの腫瘍細胞(すなわち、白血病性血液、腫瘍組織など)が存在する試
料に由来する細胞など、目的の標的抗原の発現が低度でありうる細胞の、より効率的な捕
捉を可能とする。このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、得ることが
所望であろう。例えば、高細胞濃度の使用は、CD28の発現が通常低度である、CD8
+T細胞の、より効率的な選択を可能とする。
(例えば、ビーズなどの粒子)との混合物を、著明に希釈することにより、粒子と細胞と
の相互作用を最小化する。これは、粒子に結合する、高量の所望の抗原を発現する細胞を
選択する。例えば、CD4+T細胞は、高レベルのCD28を発現し、希釈濃度のCD8
+T細胞より効率的に捕捉される。一実施形態では、使用される細胞濃度は、1ml当た
りの細胞5×106個である。他の実施形態では、使用される濃度は、1ml当たりの細
胞約1×105個~1ml当たりの細胞1×106個、およびこれらの間の任意の整数値
でありうる。
させる時間にわたり、ロテーター上でインキュベートすることができる。
血小板を除去する洗浄ステップの後で、細胞を、凍結用溶液中に懸濁させることができる
。当技術分野では、多くの凍結用溶液および凍結パラメータが公知であり、この文脈でも
有用であろうが、1つの方法は、20%のDMSOおよび8%のヒト血清アルブミンを含
有するPBS、もしくは10%のデキストラン40および5%のデキストロース、20%
のヒト血清アルブミン、ならびに7.5%のDMSOを含有する培養培地、もしくは31
.25%のPlasmalyte-A、31.25%のデキストロース5%、0.45%
のNaCl、10%のデキストラン40および5%のデキストロース、20%のヒト血清
アルブミン、ならびに7.5%のDMSO、または例えば、HespanおよびPlas
malyte Aを含有する、他の適切な細胞凍結用培地の使用を伴い、次いで、細胞を
、1分間当たり1℃の速度で、-80℃へと凍結させ、液体窒素保管タンクの蒸気相中で
保存する。制御型凍結の他の方法を使用しうるほか、-20℃または液体窒素中における
速やかな非制御型凍結も使用しうる。
させ、洗浄し、本開示の方法を使用する活性化の前に、室温で、1時間にわたり休眠させ
る。
の時期における、血液試料またはアフェレーシス生成物の、対象からの回収も想定される
。したがって、拡大増殖させる細胞の供給源は、任意の必要な時点において回収すること
ができ、T細胞など、所望の細胞を、本明細書で記載されるT細胞療法などのT細胞療法
から利益を得る、任意の数の疾患または状態のためのT細胞療法におけるその後の使用の
ために、単離し、凍結させることができる。一実施形態では、血液試料またはアフェレー
シスを、一般に、健常対象から採取する。ある特定の実施形態では、血液試料またはアフ
ェレーシスを、一般に、疾患を発症する危険性があるが、疾患をいまだ発症していない健
常対象から採取し、目的の細胞を、その後の使用のために単離し、凍結させる。ある特定
の実施形態では、T細胞を、その後の時点において、拡大増殖させ、凍結させ、使用する
ことができる。ある特定の実施形態では、試料を、患者から、本明細書で記載される特定
の疾患についての診断の直後であるが、任意の処置の前において回収する。さらなる実施
形態では、細胞を、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法、放射線、
シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、およびFK
506などの免疫抑制剤、抗体、またはCAMPATH、抗CD3抗体、シトキサン、フ
ルダラビン、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイ
ド、FR901228、および照射など、他の免疫除去剤などの薬剤による処置を含むが
これらに限定されない、任意の数の妥当な処置モダリティーの前に、対象に由来する血液
試料またはアフェレーシスから単離する。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファタ
ーゼである、カルシニューリン(シクロスポリンおよびFK506)を阻害するか、また
は、増殖因子誘導性シグナル伝達に重要なp70S6キナーゼを阻害する(ラパマイシン
)(Liu et al., Cell 66:807-815, (1991)、Henderson et al., Immun 73:316-321, (19
91)、Bierer et al., Curr. Opin. Immun 5:763-773, (1993))。さらなる実施形態では
、細胞を、患者のために単離し、骨髄移植または幹細胞移植、フルダラビンなどの化学療
法剤、外部ビーム放射線療法(XRT)、シクロホスファミド、またはOKT3もしくは
CAMPATHなどの抗体を使用するT細胞除去療法を伴う(例えば、その前に、それと
同時に、またはその後で)その後の使用のために凍結させる。別の実施形態では、細胞を
、あらかじめ単離し、CD20と反応する薬剤、例えば、RituxanなどのB細胞除
去療法の後における処置のためのその後の使用のために凍結させることができる。
点で、ある特定のがん処置、特に、免疫系を損なう薬物による処置の後であって、患者が
通常、処置から回復する期間中の、処置の直後である、処置の後において、得られるT細
胞お品質は、最適でありうるか、またはex vivoにおいて拡大増殖するそれらの能
力について改善されうることが観察されている。同様に、本明細書で記載される方法を使
用する、ex vivoにおける操作の後、これらの細胞は、生着の延長、およびin
vivoにおける拡大増殖に好ましい状態でありうる。したがって、本開示の文脈内では
、この回復期において、T細胞、樹状細胞、または他の造血系列の細胞を含む血液細胞を
回収することが想定される。さらに、ある特定の実施形態では、動員(例えば、GM-C
SFによる動員)レジメンおよびコンディショニングレジメンを使用して、対象において
、とりわけ、治療後における規定された時間窓において、特定の細胞型の再増殖、再循環
、再生、および/またはぞうが好適となる条件を創出することができる。例示的な細胞型
は、T細胞、B細胞、樹状細胞、および免疫系の他の細胞を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドおよびポリペプチド
を含むT細胞は、任意選択で、一般に、例えば、米国特許第6,352,694号明細書
;同第6,534,055号明細書;同第6,905,680号明細書;同第6,692
,964号明細書;同第5,858,358号明細書;同第6,887,466号明細書
;同第6,905,681号明細書;同第7,144,575号明細書;同第7,067
,318号明細書;同第7,172,869号明細書;同第7,232,566号明細書
;同第7,175,843号明細書;同第5,883,223号明細書;同第6,905
,874号明細書;同第6,797,514号明細書;同第6,867,041号明細書
;および米国特許出願公開第20060121005号明細書において記載されている方
法を使用して、活性化し、拡大することができる。
増殖であって、ワクチン接種単独または患者の天然の腫瘍応答により得られうる数の細胞
より大きな数のT細胞を達成する、単離および拡大増殖を指す。次いで、それらの免疫系
に、がんに攻撃し、これらを死滅させうるT細胞を介して、残りの腫瘍を圧倒する能力を
もたらそうとする試みにおいて、がんを伴う患者へと、腫瘍特異的T細胞を輸注する。が
ん処置のための、養子T細胞療法の多くの形態であって、腫瘍浸潤リンパ球またはTIL
を培養する形態と、1つの特定のT細胞またはクローンを単離および拡大増殖させる形態
とが使用されており、なお、腫瘍を強力に認識し、これらに攻撃するように操作されたT
細胞を使用する形態も使用されている。
る、CD3/TCR複合体と関連するシグナルおよびリガンドを刺激する薬剤を、それへ
と接合させた表面と接触させることにより拡大増殖させる。特に、T細胞集団は、本明細
書で記載される通り、表面上に固定化させた、抗CD3抗体、もしくはその抗原結合性断
片、または抗CD2抗体との接触、あるいはカルシウムイオノフォアを伴う、タンパク質
キナーゼC活性化因子(例えば、ブリオスタチン)との接触などにより刺激することがで
きる。T細胞表面上のアクセサリー分子を共刺激するために、アクセサリー分子に結合す
るリガンドを使用する。例えば、T細胞の集団は、T細胞の増殖を刺激するために適切な
条件下で、抗CD3抗体および抗CD28抗体と接触させることができる。CD4+T細
胞またはCD8+T細胞の増殖を刺激するには、抗CD3抗体および抗CD28抗体と接
触させることができる。抗CD28抗体の例は、9.3、B-T3、XR-CD28(D
iaclone、Besancon、France)を含み、当技術分野で一般に公知の
他の方法と同様に使用することができる(Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3
977, (1998)、Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, (1999)、Garland et al.
, J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, (1999))。
異なるプロトコールによりもたらされる。例えば、各シグナルをもたらす薬剤は、溶液中
とする場合もあり、表面へと共役させる場合もある。表面へと共役させる場合、薬剤は、
同じ表面へと共役させることもでき(すなわち、「シス」構成)、別個の表面へと共役さ
せることもできる(すなわち、「トランス」構成)。代替的に、1つの薬剤を、表面へと
共役させ、他の薬剤を、溶液中とすることもできる。一実施形態では、共刺激シグナルを
もたらす薬剤を、細胞表面に結合させ、一次活性化シグナルをもたらす薬剤を、溶液とす
るか、または表面へと共役させる。ある特定の実施形態では、いずれの薬剤も、溶液中と
する。別の実施形態では、薬剤は、可溶性形態であることが可能であり、次いで、Fc受
容体もしくは抗体、または薬剤に結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面へと架橋
される。この点で、本開示における、T細胞の活性化および拡大増殖における使用のため
に想定される人工抗原提示細胞(aAPC)については、例えば、米国特許出願公開第2
0040101519号明細書および同20060034810号明細書を参照されたい
。
は別個のビーズへと、すなわち、「トランス」である、ビーズ上に固定化させる。例を目
的として述べると、一次活性化シグナルをもたらす薬剤は、抗CD3抗体またはその抗原
結合性断片であり、共刺激シグナルをもたらす薬剤は、抗CD28抗体またはその抗原結
合性断片であり、両方の薬剤を、等分子量で、同じビーズへと、共固定化させる。一実施
形態では、CD4+T細胞の拡大増殖およびT細胞の増殖のために、ビーズへと結合させ
た各抗体の、1:1の比を使用する。本開示のある特定の態様では、ビーズへと結合させ
た抗CD3:CD28抗体の比を、1:1の比を使用して観察される拡大増殖と比較した
、T細胞の拡大増殖の増大が観察されるように使用する。特定の一実施形態では、1:1
の比を使用して観察される拡大増殖と比較した、約1~約3倍の増大が観察される。一実
施形態では、ビーズへと結合させたCD3:CD28抗体の比は、100:1~1:10
0、およびこれらの間の全ての整数値の範囲である。本開示の一態様では、抗CD3抗体
より多くの抗CD28抗体を、粒子へと結合させる、すなわち、CD3:CD28の比は
、1未満である。本開示のある特定の実施形態では、抗CD28抗体の、ビーズへと結合
させた抗CD3に対する比は、2:1を超える。特定の一実施形態では、ビーズへと結合
させたCD3:CD28の、1:100の比を使用する。別の実施形態では、ビーズへと
結合させたCD3:CD28の、1:75の比を使用する。さらなる実施形態では、ビー
ズへと結合させたCD3:CD28の、1:50の比を使用する。別の実施形態では、ビ
ーズへと結合させたCD3:CD28の、1:30の比を使用する。複数の実施形態では
、ビーズへと結合させたCD3:CD28の、1:10の比を使用する。別の実施形態で
は、ビーズへと結合させたCD3:CD28の、1:3の比を使用する。さらに別の実施
形態では、ビーズへと結合させたCD3:CD28の、3:1の比を使用する。
する比を使用して、T細胞または他の標的細胞を刺激することができる。当業者がたやす
く理解しうる通り、粒子の、細胞に対する比は、標的細胞と比べた粒子サイズに依存しう
る。例えば、小型サイズのビーズが、少数の細胞だけに結合しうるのに対し、大型のビー
ズは、多くの細胞に結合しうるであろう。ある特定の実施形態では、細胞の、粒子に対す
る比は、1:100~100:1、およびこれらの間の任意の整数値の範囲であり、さら
なる実施形態では、比は、1:9~9:1、およびこれらの間の任意の整数値を含み、こ
れらもまた、T細胞を刺激するのに使用しうる。抗CD3/抗CD28共役粒子の、T細
胞に対する比であって、T細胞の刺激を結果としてもたらす比は、上記で言及した通り、
変動しうるが、ある特定の値は、1:100、1:50、1:40、1:30、1:20
、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:
1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、お
よび15:1を含み、1つの比は、少なくとも1:1の、T細胞当たりの粒子である。一
実施形態では、1:1またはこれ未満の、粒子の、細胞に対する比を使用する。特定の一
実施形態では、粒子:細胞比は、1:5である。さらなる実施形態では、粒子の、細胞に
対する比は、刺激日に応じて変動しうる。例えば、一実施形態では、粒子の、細胞に対す
る比は、1日目には、1:1~10:1であり、さらなる粒子を、細胞へと、その後、最
長10日間にわたり、毎日または隔日で追加し、最終的な比を1:1~1:10とする(
追加日における細胞カウントに基づく)。特定の一実施形態では、粒子の、細胞に対する
比は、第1の刺激日には、1:1であり、第3の刺激日および第5の刺激日には、1:5
へと調整される。別の実施形態では、粒子を、1日目における、1:1の最終比、ならび
に第3の刺激日および第5の刺激日における1:5へと、毎日または隔日で追加する。別
の実施形態では、粒子の、細胞に対する比は、第1の刺激日には、2:1であり、第3の
刺激日および第5の刺激日には、1:10へと調整される。別の実施形態では、粒子を、
1日目における、1:1の最終比、ならびに第3の刺激日および第5の刺激日における1
:10へと、毎日または隔日で追加する。当業者は、様々な他の比も、本開示における使
用に適しうることを理解するであろう。特に、比は、粒子のサイズ、ならびに細胞のサイ
ズおよび種類に応じて変動するであろう。
合わせ、その後、ビーズと細胞とを分離し、次いで、細胞を培養する。代替的な実施形態
では、培養の前に、薬剤コーティングビーズと、細胞とを分離せず、併せて培養する。さ
らなる実施形態では、ビーズおよび細胞を、まず、磁力などの力を適用することにより濃
縮する結果として、細胞表面マーカーのライゲーションの増加をもたらし、これにより、
細胞の刺激を誘導する
28ビーズ)を、T細胞に接触させることにより、細胞表面タンパク質をライゲーション
させることができる。一実施形態では、細胞(例えば、T細胞104~109個)と、ビ
ーズ(例えば、比を1:1とする、DYNABEADS(登録商標)M-450 CD3
/CD28 T常磁性ビーズ、またはMiltenyi Biotec製のMACS(登
録商標)MicroBeads)とを、緩衝液中、例えば、PBS(カルシウムおよびマ
グネシウムなどの二価カチオンを伴わない)中で組み合わせる。ここでもまた、当業者は
、任意の細胞濃度を使用しうることをたやすく理解することができる。例えば、標的細胞
は、試料中で極めて稀であり、試料のうちの0.01%だけを含む場合もあり、全試料(
すなわち、100%)が、目的の標的細胞を含む場合もある。したがって、任意の細胞数
が、本開示の文脈内にある。ある特定の実施形態では、粒子と細胞とを、併せて混合する
容量を著明に減少させて(すなわち、細胞の濃度を増大させて)、細胞と粒子との最大の
接触を確保することが所望でありうる。例えば、一実施形態では、約1ml当たりの細胞
20億個の濃度を使用する。別の実施形態では、1ml当たり細胞1億個超を使用する。
さらなる実施形態では、1ml当たりの細胞1000万、1500万、2000万、25
00万、3000万、3500万、4000万、4500万、または5000万個の細胞
濃度を使用する。さらに別の実施形態では、1ml当たりの細胞7500万、8000万
、8500万、9000万、9500万、または1億個の細胞濃度を使用する。さらなる
実施形態では、1ml当たりの細胞1億2500万または1億5000万個の濃度を使用
しうる。高濃度の使用は、細胞の収量、細胞の活性化、および細胞の拡大増殖の増大を結
果としてもたらしうる。さらに、高細胞濃度の使用は、CD28陰性T細胞など、目的の
標的抗原の発現が低度でありうる細胞の、より効率的な捕捉を可能とする。ある特定の実
施形態では、このような細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、得ることが所望
であろう。例えば、高細胞濃度の使用は、CD28の発現が通常低度である、CD8+T
細胞の、より効率的な選択を可能とする。
間の任意の整数値時間にわたり培養することができる。別の実施形態では、混合物を、2
1日間にわたり培養することができる。本発明の一実施形態では、ビーズおよびT細胞を
、併せて、約8日間にわたり培養する。別の実施形態では、ビーズおよびT細胞を、併せ
て、2~3日間にわたり培養する。T細胞の培養期間が、60日間またはこれを超えるよ
うに、数サイクルにわたる刺激もまた、所望でありうる。T細胞の培養に適切な条件は、
増殖および生存に必要な因子であって、血清(例えば、ウシ胎仔血清またはヒト血清)、
インターロイキン2(IL-2)、インスリン、IFN-ガンマ、IL-4、IL-7、
GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ、およびTNF-アルフ
ァ、または当業者に公知である、細胞の増殖のための、他の任意の添加剤を含む因子を含
有しうる、適切な培地(例えば、最小必須培地またはRPMI培地1640、またはX-
vivo 15(Lonza))を含む。細胞の増殖のための、他の添加剤は、界面活性
剤、プラズマネート、およびN-アセチルシステインおよび2-メルカプトエタノールな
どの還元剤を含むがこれらに限定されない。培地は、RPMI 1640、AIM-V、
DMEM、MEM、アルファ-MEM、F-12、X-Vivo 15およびX-Viv
o 20、Optimizer、アミノ酸の添加、ピルビン酸ナトリウム、ならびにビタ
ミン、無血清もしくは適量の血清(または血漿)の補充、または規定されたセットのホル
モン、ならびに/あるいはT細胞の増殖および拡大増殖に十分な量のサイトカインを含み
うる。抗生剤、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培養物に限り組み
入れ、対象へと輸注される細胞培養物には組み入れない。標的細胞は、増殖を支援するの
に必要な条件、例えば、適切な温度(例えば、37℃)および雰囲気(例えば、空気+5
%のCO2)下で維持する。
な血液生成物またはアファレーシスされた末梢血単核細胞生成物は、細胞傷害性T細胞集
団またはサプレッサーT細胞集団(TC、CD8+)より多くのヘルパーT細胞集団(T
H、CD4+)を有する。CD3受容体およびCD28受容体を刺激することによる、e
x vivoにおけるT細胞の拡大増殖は、約8~9日目の前には、主にTH細胞からな
るが、約8~9日目の後では、ますます多くのTC細胞の集団を含むT細胞の集団をもた
らす。したがって、処置の目的に応じて、対象に、主にTH細胞を含むT細胞集団を輸注
することも、有利でありうる。同様に、TC細胞の抗原特異的サブセットを単離した場合
、このサブセットを、より大きな程度で拡大増殖させることが有益でありうる。
に変動するが、大部分は、細胞拡大増殖工程の経過中において、再現可能な形で変動する
。したがって、このような再現性は、特殊な目的のためのT細胞生成物の活性化を調整す
る能力を可能とする。
activating and propagating cell)と共に共培養して
、細胞の拡大増殖を支援する。AaPCはまた、人工抗原提示細胞(AaPC)と称する
こともできる。例えば、抗原提示細胞(APC)は、実施形態の治療用組成物および細胞
療法用生成物の調製において有用である。一態様では、AaPCは、遺伝子改変されたK
562細胞でありうる。抗原提示系の調製および使用に関する、一般的な指針については
、例えば、それらの各々が参照により組み込まれる、米国特許第6,225,042号明
細書、同第6,355,479号明細書、同第6,362,001号明細書、および同第
6,790,662号明細書、米国特許出願公開第2009/0017000号明細書お
よび同第2009/0004142号明細書、ならびに国際公開第2007/10300
9号パンフレットを参照されたい。実施形態についてのなおさらなる態様では、遺伝子改
変されたCAR細胞の培養は、CARを発現する免疫エフェクター細胞の拡大増殖を刺激
する、樹状細胞またはAaPC (activating and propagati
ng cell)の存在下で、遺伝子改変されたCAR細胞を培養することを含む。なお
さらなる態様では、AaPCは、AaPCの表面上で発現したCAR結合性抗体またはそ
の断片を含む。AaPCは、場合によって、T細胞を活性化させるかまたは共刺激する、
さらなる分子を含みうる。さらなる分子は、場合によって、膜結合型Cγサイトカインを
含みうる。なおまださらなる態様では、AaPCは、不活化させているかもしくは照射さ
れているか、または感染性物質について調べられ、これを含まないことが確認されている
。なおさらなる態様では、AaPCの存在下におけるトランスジェニックCAR細胞の培
養は、IL-15、IL-21、および/またはIL-2などの可溶性サイトカインを含
む培地中で、トランスジェニックCAR細胞を培養することを含む。細胞を、約10:1
~約1:10、約3:1~約1:5、約1:1~約1:3(免疫エフェクター細胞対Aa
PC)、またはこの中で導出可能な任意の範囲の比で培養することができる。例えば、T
細胞およびAaPCの共培養は、約1:1、約1:2または約1:3の比でありうる。
CAR細胞によりターゲティングされる抗原をさらに発現しうる。他の態様では、AaP
Cは、CD19、CD64、CD86、またはmIL15をさらに発現しうる。ある特定
の態様では、AaPCは、例えば、OKT3および/またはUCHT1など、少なくとも
1つの抗CD3抗体クローンを発現しうる。一態様では、AaPCを処理して(例えば、
照射するか、またはマイトマイシンCで処理して)、それらの増殖可能性を消失させるこ
とができる。一態様では、AaPCは、感染性物質について調べられ、これを含まないこ
とが確認されている場合がある。当技術分野では、このようなAaPCを作製するための
方法が公知である。一態様では、AaPCを伴うCAR改変T細胞集団の培養は、細胞を
、約10:1~約1:10、約3:1~約1:5、約1:1~約1:3(T細胞対AaP
C)、またはこの中で導出可能な任意の範囲の比で培養することを含みうる。例えば、T
細胞およびAaPCの共培養は、約1:1、約1:2または約1:3の比でありうる。一
態様では、培養するステップは、アミノビスホスホネート(例えば、ゾレドロン酸)と共
に培養することをさらに含みうる。
、49、56、63、または70日間を超えない日数にわたり培養および/または刺激す
る。一部の実施形態では、CAR-T細胞の集団を、少なくとも0、2、4、6、8、1
0、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30日間、またはこれを
超える期間にわたり培養および/または刺激する。一部の実施形態では、CAR-T細胞
の集団を、少なくとも5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、5
5、60日間、またはこれを超える期間にわたり培養および/または刺激する。一部の実
施形態では、CAR-T細胞の集団を、少なくとも7、14、21、28、35、42、
49、56、63日間、またはこれを超える期間にわたり培養および/または刺激する。
他の実施形態では、刺激は、CAR-T細胞の、AaPCとの共培養であって、CAR陽
性T細胞の増殖を促進する共培養を含む。別の態様では、遺伝子改変されたCAR細胞の
集団を、刺激1回、刺激2回、刺激3回、刺激4回、刺激5回、刺激5回、刺激6回、刺
激7回、刺激8回、刺激9回、または刺激10回を超えない回数にわたり刺激する。場合
によって、遺伝子改変された細胞を、AaPCの存在下にあるex vivoでは培養し
ない。一部の特殊な場合には、実施形態の方法は、トランスフェクションステップおよび
/または培養するステップの後で、細胞集団を、CARを発現する免疫エフェクター細胞
(例えば、T細胞)について濃縮するステップをさらに含む。濃縮するステップは、蛍光
活性化細胞分取(FACS)と、CARを発現する細胞について分取することとを含みう
る。さらなる態様では、CARを発現する細胞について分取することは、CAR結合性抗
体の使用を含む。濃縮するステップはまた、CD56+細胞の枯渇も含みうる。実施形態
についての、なおまださらなる態様では、方法は、遺伝子改変されたCAR細胞の集団に
ついての凍結保存試料をさらに含む。
子との直接的な結合を可能とする、最適な長さのペプチドと共にインキュベートする。代
替的に、細胞は、目的の抗原(すなわち、MHC非依存型の抗原認識の場合)を発現しう
る。さらに、場合によって、APCは、特異的なCARポリペプチドまたは一般的なCA
Rポリペプチド(例えば、uAaPC(universal activating a
nd propagating cell)に結合する抗体を発現しうる。このような方
法については、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第2014/190273
号パンフレットにおいて開示されている。ペプチド-MHC分子または目的の抗原に加え
て、AaPC系はまた、少なくとも1つの外因性支援分子も含みうる。任意の適切な数お
よび組合せの支援分子を利用することができる。支援分子は、共刺激分子および接着分子
などの支援分子から選択することができる。例示的な共刺激分子は、CD70およびB7
.1(B7.1は、かつては、B7として公知であり、また、CD80としても公知であ
った)を含み、これらは、とりわけ、T細胞の表面上のCD28分子および/またはCT
LA-4分子に結合し、これにより、例えば、T細胞の拡大増殖、Th1の分化、短期的
なT細胞の生存、およびインターロイキン(IL)2など、サイトカインの分泌に影響を
及ぼす。接着分子は、セレクチンなどの炭水化物結合性糖タンパク質、インテグリンなど
の膜貫通結合生糖タンパク質、カドヘリンなどのカルシウム依存性タンパク質、および例
えば、細胞間または細胞-マトリックス間の接触を促進する、細胞間接着分子(ICAM
)などの、1回膜貫通免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリータンパク質を含みうる
。例示的な接着分子は、LFA-3およびICAM-1などのICAM、を含む。共刺激
分子および接着分子を含む、例示的な支援分子の選択、クローニング、調製、および発現
に有用な技法、方法、および試薬については、例えば、参照により本明細書に組み込まれ
る、米国特許第6,225,042号明細書、同第6,355,479号明細書、および
同第6,362,001号明細書において例示されている。
内ペプチドトラフィッキング、および/またはMHCクラスI分子もしくはクラスII分
子の細胞内ペプチドローディングを欠損させているか、あるいは。変温性(すなわち、哺
乳動物細胞株より、温度刺激に対する感受性が小さい)であるか、あるいは欠損および変
温特性の両方を有する。好ましくは、AaPCとなるように選択される細胞はまた、細胞
へと導入される、外因性のMHCクラスI分子またはクラスII分子、および支援分子の
構成要素に対する、少なくとも1つの内因性対応物(例えば、内因性のMHCクラスI分
子もしくはクラスII分子、および/または上記で記載した内因性支援分子)を発現する
能力も欠く。さらに、AaPCは、AaPCを作出するための、それらの改変の前に、細
胞が保有していた欠損および変温特性を保持することが好ましい。例示的なAaPCは、
昆虫細胞株など、TAP(transporter associated with
antigen processing)欠損細胞株を構成するか、またはこれに由来す
る。例示的な変温性昆虫細胞株は、Schneider 2細胞株などのショウジョウバ
エ(Drosophila)属細胞株(例えば、Schneider 1972を参照されたい)である。Schn
eider 2細胞の調製、増殖、および培養のための例示的な方法は、米国特許第6,
225,042号明細書、同第6,355,479号明細書、および同第6,362,0
01号明細書において提示されている。
イクルでは、凍結が、迅速に生じるように、AaPCを含有する、適切なレセプタクルを
、適量の液体窒素、固体二酸化炭素(すなわち、ドライアイス)、または同様の低温材料
と接触させることにより、AaPCを凍結させることができる。次いで、凍結させたAP
Cを、AaPCの、低温材料からの摘出、および周囲の室温条件への曝露により、または
微温水浴もしくは手の温熱を利用して、融解時間の短縮を促進する、促進融解工程により
融解させる。加えて、融解の前に、AaPCを、凍結させ、長f時間にわたり保存するこ
とができる。凍結させたAaPCはまた、融解させ、次いで、さらなる使用の前に、凍結
乾燥させることもできる。好ましくは、ジメチルスルホキシド(DMSO)、ポリエチレ
ングリコール(PEG)、および他の保存剤など、凍結融解手順に有害な影響を及ぼしう
る保存剤は、凍結融解サイクルを経るAaPCを含有する培地には非含有とするか、また
はこのような保存剤を本質的に欠く培地へのAaPCの導入などにより、本質的に除去す
る。
に生じないように、異種核酸およびAaPCに内因性の核酸を、架橋により不活化させる
ことができる。一実施形態では、AaPCを、外因性MHCおよび支援分子の発現、この
ような分子の、AaPC表面上の提示、ならびに提示されたMHC分子への、選択された
、1または複数のペプチドのローディングの後の時点において不活化させる。したがって
、このような、選択されたペプチドをロードした不活化AaPCは、増殖または複製が本
質的に不可能とされているが、選択されたペプチドの提示機能は保持する。好ましくは、
架橋はまた、AaPCの抗原提示細胞機能を、実質的に低下させずに、細菌およびウイル
スなどの汚染微生物を本質的に含まない、AaPCももたらす。したがって、架橋は、A
aPCを使用して開発される細胞療法製品の安全性に関する懸念を軽減する一助となる一
方、重要なAaPC機能を維持する。架橋およびAaPCに関する方法については、例え
ば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第20090017000号
明細書を参照されたい。
ivoにおいて、免疫エフェクター細胞を繁殖させるのに、このような細胞を、例えば、
上記で記載した通りに使用することができる。さらなる態様では、操作APC自体を、患
者へと投与し、これにより、in vivoにおける免疫エフェクター細胞の拡大増殖を
刺激することができる。実施形態の操作APC自体を、治療剤として使用することができ
る。他の実施形態では、操作APCを、標的抗原に特異的な内因性免疫エフェクター細胞
の活性化を刺激し、かつ/または標的抗原に特異的な、養子導入された免疫エフェクター
細胞の活性を増加させるか、もしくは存続を延長しうる治療剤として使用することができ
る。
を含み、第1のトランス遺伝子が、HLAをコードする細胞を指す。このような操作AP
Cは、抗原が、HLAと複合したAPCの表面上に提示されるように、抗原の発現のため
の第2のトランス遺伝子をさらに含みうる。一部の態様では、操作APCは、抗原を提示
した細胞型(例えば、樹状細胞)でありうる。さらなる態様では、操作APCは、T細胞
またはT細胞の前駆細胞など、通常、抗原を提示しない細胞型(「T-APC」と称する
)から作製することができる。したがって、一部の態様では、実施形態の操作APCは、
HLAが、標的抗原のエピトープと複合した操作APCの表面上で発現するように、標的
抗原をコードする第1のトランス遺伝子と、ヒト白血球抗原(HLA)をコードする第2
のトランス遺伝子とを含む。ある特定の具体的な態様では、操作APC内で発現するHL
Aは、HLA-A2である。
のトランス遺伝子をさらに含みうる。共刺激分子は、膜結合型Cγサイトカインでありう
る、共刺激サイトカインでありうる。ある特定の態様では、共刺激サイトカインは、膜結
合型IL-15などのIL-15である。一部のさらなる態様では、操作APCは、編集
(または欠失)遺伝子を含みうる。例えば、PD-1、LIM-3、CTLA-4、また
はTCRなどの阻害性遺伝子は、遺伝子の発現を低減するかまたは消失させるように編集
することができる。実施形態の操作APCは、任意の目的の標的抗原をコードするトラン
ス遺伝子をさらに含みうる。例えば、標的抗原は、感染性疾患抗原または腫瘍関連抗原(
TAA)でありうる。
本開示の一実施形態では、本明細書で記載される免疫エフェクター細胞を、POC(p
oint-of-care)施設で改変する。場合によって、POC(point-of
-care)施設は、処置を必要とする対象の近隣の病院または機関(例えば、医療機関
)にある。対象は、アフェレーシスを受け、末梢血単核細胞(PBMC)またはPBMC
の部分集団は、例えば、湿式分級またはFicoll分離により濃縮することができる。
濃縮されたPBMCまたはPBMCの部分集団は、さらなる加工の前に、任意の適切な低
温保存液中で低温保存することができる。1つの場合には、ヒト血清アルブミンを含有す
る緩衝液を使用して、湿式分級工程を実施する。T細胞などの免疫エフェクター細胞は、
本明細書で記載される選択法により単離することができる。1つの場合には、T細胞につ
いての選択法は、T細胞上のCD3およびCD8に特異的なビーズを含む。1つの場合に
は、ビーズは、常磁性ビーズでありうる。採取された免疫エフェクター細胞は、改変の前
に、任意の適切な低温保存用溶液中で低温保存することができる。免疫エフェクター細胞
は、輸注に先立ち、最大で24時間、36時間、48時間、72時間、または96時間に
わたり融解させることができる。融解させた細胞は、改変の前に、細胞培養緩衝液、例え
ば、ウシ胎仔血清(FBS)を補充した細胞培養緩衝液(例えば、RPMI)、またはI
L-2およびIL-21などのサイトカインを含む緩衝液に入れることができる。別の態
様では、採取された免疫エフェクター細胞は、低温保存を必要とせずに、速やかに改変す
ることができる。
び/またはサイトカインを、免疫エフェクター細胞へと操作/導入することにより、免疫
エフェクター細胞を改変し、次いで、対象へと、迅速に輸注する。場合によって、免疫エ
フェクター細胞の供給源は、同種供給源および自家供給源の両方を含みうる。1つの場合
には、免疫エフェクター細胞は、T細胞またはNK細胞でありうる。1つの場合には、キ
メラ受容体は、CD19 CARでありうる。別の場合には、キメラ受容体は、CD33
CARでありうる。さらなる場合には、キメラ受容体は、MUC16 CARでありう
る。別の場合には、サイトカインは、mbIL-15でありうる。1つの場合には、mb
IL-15は、配列番号178のmbIL-15、またはその変異体もしくは断片である
。1つの場合には、細胞タグは、配列番号57でありうる。さらに別の場合には、mbI
L-15の発現は、本明細書で記載される、リガンド誘導性遺伝子スイッチ発現系により
モジュレートされる。例えば、ベレジメクスなどのリガンドを、対象へと送達して、mb
IL-15の発現をモジュレートすることができる。別の態様では、ベレジメクスを、5
mg、10mg、15mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70
mg、80mg、90mg、または100mgで提供する。さらなる態様では、低用量の
ベレジメクスを、例えば、0.5mg、1mg、5mg、10mg、15mg、または2
0mgで提供する。一実施形態では、ベレジメクスを、改変免疫エフェクター細胞を輸注
する0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、または21日前に、対象へと投与する。さらなる実施形
態では、ベレジメクスを、改変免疫エフェクター細胞の輸注後、有効期間にわたり、約1
2時間ごとに1回、約24時間ごとに1回、約36時間ごとに1回、または約48時間ご
とに1回、対象へと投与する。一実施形態では、ベレジメクス投与のための有効期間は、
約7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、25、26、27、28、29、30日間である。他の実施形
態では、休薬期間後の休眠期間の後、または対象が、再発を被る場合に、ベレジメクスを
再投与することができる。
は、例えば、セツキシマブを介して、in vivoにおける、改変免疫エフェクター細
胞の、条件付けアブレーションのために、本明細書で記載されるトランケート型表皮増殖
因子受容体タグ(HER1t変異体)などの細胞タグを含む細胞タグを活性化させること
ができる。
介して改変する。1つの場合には、電気穿孔を、Lonza製のNucleofecto
r(商標)電気穿孔器などの電気穿孔器により実施する。他の実施形態では、上述の構築
物を含むベクターは、非ウイルスベクターまたはウイルスベクターである。1つの場合に
は、非ウイルスベクターは、Sleeping Beautyトランスポゾン-トランス
ポザーゼ系を含む。1つの場合には、特異的配列を使用して、免疫エフェクター細胞に電
気穿孔する。例えば、免疫エフェクター細胞に、1つのトランスポゾンに続く、トランス
ポザーゼをコードするDNAに続く、第2のトランスポゾンを電気穿孔することができる
。別の場合には、免疫エフェクター細胞に、全てのトランスポゾンと、トランスポザーゼ
とを、同時に電気穿孔することができる。別の場合には、免疫エフェクター細胞に、トラ
ンスポザーゼに続き、両方のトランスポゾンまたは1つのトランスポゾンを、同時に電気
穿孔することができる。逐次的な電気穿孔を経ながら、免疫エフェクター細胞を、次の電
気穿孔ステップの前に、ある時間にわたり、休眠させることができる。
ない。場合によって、改変免疫エフェクター細胞は、インキュベーションステップまたは
培養ステップ(例えば、ex vivoにおける繁殖)を経ない。ある特定の場合には、
輸注の前に、改変免疫エフェクター細胞を、IL-2およびIL21を含む緩衝液に入れ
る。他の場合には、輸注の前に、改変免疫エフェクター細胞を、細胞培養緩衝液、例えば
、ウシ胎仔血清(FBS)を補充した細胞培養緩衝液(例えば、RPMI)に入れるか、
またはこの中で休眠させる。輸注の前に、改変免疫エフェクター細胞を、採取し、洗浄し
、生理食塩緩衝液中で、対象への輸注のための調製物に製剤化することができる。
枯渇は、必要とされず、改変免疫エフェクター細胞は、対象へと、迅速に、輸注される。
例示的なリンパ枯渇レジメンを、下記の表2および3に一覧する。
渇とは、リンパ枯渇レジメン後1日、2日、または3日以内に対象に輸注しうるような、
低減型リンパ枯渇プロトコールを指す。1つの場合には、低減型リンパ枯渇プロトコール
は、低用量のフルダラビンおよび/またはシクロホスファミドを含みうる。別の場合には
、低減型リンパ枯渇プロトコールは、短期間、例えば、1日間または2日間にわたるリン
パ枯渇を含みうる。
/導入することにより、免疫エフェクター細胞を改変し、次いで、対象へと、迅速に輸注
する。他の場合には、キメラ受容体およびサイトカインを、細胞へと操作/導入すること
により、免疫エフェクター細胞を改変し、次いで、少なくとも0、0.5、1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、1
9、20、21、22、23,24、25、26、27、28、29、30、31、32
、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、
46、47、48、49、または50時間以内に、対象へと輸注する。他の場合には、キ
メラ受容体およびサイトカインを、免疫エフェクター細胞へと操作/導入することにより
、免疫エフェクター細胞を改変し、次いで、0日間、<1日間、<2日間、<3日間、<
4日間、<5日間、<6日間、または<7日間以内に、対象へと輸注する。
与し、その量を、有効性およびサイトカイン関連毒性を誘導する潜在的可能性に基づき決
定する。別の実施形態では、改変エフェクター細胞は、CAR+細胞およびCD3+細胞
である。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター
細胞約104~約109個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg
当たりの改変エフェクター細胞約104~約105個を含む。場合によって、改変エフェ
クター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約105~約106個を含む。
場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約1
06~約107個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの
改変エフェクター細胞>104個、かつ、≦約105個を含む。場合によって、改変エフ
ェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞>105個、かつ、≦約10
6個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェク
ター細胞>106個、かつ、≦約107個を含む。一実施形態では、1kg当たりの改変
免疫エフェクター細胞>102個であるが、≦104個の低用量を輸注することができる
。
胞を、がんへとターゲティングする。例えば、卵巣がんでは、改変免疫エフェクター細胞
を、腹部または腹腔へと、腹腔内(IP)送達することができる。このようなIP送達は
、ポートまたは化学療法薬の送達のために留置された既存のポートを介して実施すること
ができる。改変免疫エフェクター細胞の、他の局所送達法は、切除腔へのカテーテル輸注
、超音波誘導型腫瘍内注射、肝動脈輸注、または胸膜内送達を含みうる。
疫エフェクター細胞の投与に続く、IVを介して送達される、2回目の改変免疫エフェク
ター細胞の投与で治療を開始することができる。さらなる実施形態では、2回目の改変免
疫エフェクター細胞の投与に、IVまたはIPを介して送達されうる、後続の投与を後続
させることができる。一実施形態では、1回目および2回目またはさらに後続の投与の間
の持続期間は、約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、2
7、28、29、30日間でありうる。一実施形態では、1回目および2回目またはさら
に後続の投与の間の持続期間は、約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1
1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24
、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、または36カ
月間でありうる。別の実施形態では、1回目および2回目またはさらに後続の投与の間の
持続期間は、約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10年間でありうる。
、6、7、8、9、10回の投与のための、さらなる投与のために、腫瘍部位または転移
部位に留置することができる。場合によって、改変エフェクター細胞の投与は、1kg当
たりの改変免疫エフェクター細胞約102~約109個を含みうる。毒性が観察される場
合には、改変エフェクター細胞の投与は、1kg当たりの改変免疫エフェクター細胞約1
02~約105個を含みうる。場合によって、改変エフェクター細胞の投与は、1kg当
たりの改変免疫エフェクター細胞約102個で始めることができ、後続の用量は、1kg
当たりの改変免疫エフェクター細胞約104、105、106、107、108、または
109個へと増大させることができる。
、対象から得るステップと、細胞試料の細胞に、1または複数のトランスポゾンを含む、
1または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップとを含む。一実施形態
では、トランスポゾンは、操作細胞の集団をもたらすように、キメラ抗原受容体(CAR
)、サイトカイン、1または複数の細胞タグ、および前記1または複数のポリヌクレオチ
ドを、前記細胞のゲノムへと組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードする。ある実
施形態では、トランスポゾンは、キメラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、1または
複数の細胞タグ、サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチ
ド、および前記1または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、
操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼをコードする。ある実施形態では
、遺伝子スイッチポリペプチドは、i)第1の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融
合させたDNA結合性ドメインを含む、第1の遺伝子スイッチポリペプチド、およびii
)第2の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含
む、第2の遺伝子スイッチポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第1の遺伝子スイ
ッチポリペプチドと、第2の遺伝子スイッチポリペプチドとは、リンカーにより接続され
ている。1つの場合には、操作細胞の、対象への投与の前に、リンパ枯渇が必要とされな
い。
、対象から得るステップと、細胞試料の細胞に、1または複数のトランスポゾンを含む、
1または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップとを含む。一実施形態
では、キメラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、1または複数の細胞タグ;および前
記1または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノムへと組み込むのに有効なトラン
スポザーゼを含むトランスポゾンを、細胞の試料へと電気穿孔して、操作細胞の集団をも
たらす。さらなる実施形態では、トランスポゾンは、キメラ抗原受容体(CAR)、サイ
トカイン、1または複数の細胞タグ、サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子
スイッチポリペプチド、および前記1または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノ
ムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼをコードする
。ある実施形態では、遺伝子スイッチポリペプチドは、i)第1の核内受容体リガンド結
合性ドメインへと融合させたDNA結合性ドメインを含む、第1の遺伝子スイッチポリペ
プチド、およびii)第2の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス
活性化ドメインを含む、第2の遺伝子スイッチポリペプチドを含む。一部の実施形態では
、第1の遺伝子スイッチポリペプチドと、第2の遺伝子スイッチポリペプチドとは、リン
カーにより接続されている。別の実施形態では、単一のトランスポゾンは、キメラ抗原受
容体(CAR)、サイトカイン、本明細書で記載される、HER1tまたは任意の変異体
など、1または複数の細胞タグを含みうる。1つの場合には、操作細胞の、対象への投与
の前に、リンパ枯渇が必要とされない。
を増強する方法は、細胞試料を、対象から得るステップと、細胞試料の細胞に、1または
複数のトランスポゾンを含む、1または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトする
ステップとを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、1ま
たは複数の細胞タグ;および前記1または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノム
へと組み込むのに有効なトランスポザーゼを含むトランスポゾンを、細胞の試料へと電気
穿孔して、操作細胞の集団をもたらす。別の実施形態では、単一のトランスポゾンは、キ
メラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、本明細書で記載される、HER1tまたは任
意の変異体など、1または複数の細胞タグを含みうる。場合によって、1または複数のト
ランスポゾンは、キメラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、1または複数の細胞タグ
、サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、およびDN
Aを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランス
ポザーゼをコードする。場合によって、遺伝子スイッチポリペプチドは、i)第1の核内
受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたDNA結合性ドメインを含む、第1の遺伝
子スイッチポリペプチド、およびii)第2の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融
合させたトランス活性化ドメインを含む、第2の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、第
1の遺伝子スイッチポリペプチドと、第2の遺伝子スイッチポリペプチドとは、リンカー
により接続されている。1つの場合には、操作細胞の、対象への投与の前に、リンパ枯渇
が必要とされない。
るステップと、試料の細胞に、1または複数のトランスポゾンを含む、1または複数のポ
リヌクレオチドをトランスフェクトするステップと、操作細胞の集団を、対象へと投与す
るステップとを含む。1つの場合には、操作細胞の、対象への投与の前に、リンパ枯渇が
必要とされない。場合によって、1または複数のトランスポゾンは、キメラ抗原受容体(
CAR)、サイトカイン、1または複数の細胞タグ、およびDNAを、細胞のゲノムへと
組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードする。場合によって、1または複数のトラ
ンスポゾンは、キメラ抗原受容体(CAR)、サイトカイン、1または複数の細胞タグ、
サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、およびDNA
を、細胞のゲノムへと組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードする。場合によって
、遺伝子スイッチポリペプチドは、i)第1の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融
合させたDNA結合性ドメインを含む、第1の遺伝子スイッチポリペプチド、およびii
)第2の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含
む、第2の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、第1の遺伝子スイッチポリペプチドと、
第2の遺伝子スイッチポリペプチドとは、リンカーにより接続されている。場合によって
、細胞は、電気穿孔を介してトランスフェクトされる。場合によって、遺伝子スイッチポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドは、プロモーターによりモジュレートされる。
場合によって、プロモーターは、組織特異的プロモーターもしくはEF1Aプロモーター
、またはこれらの機能的な変異体である。場合によって、組織特異的プロモーターは、T
細胞特異的応答エレメントまたはNFAT応答エレメントを含む。場合によって、サイト
カインは、IL-1、IL-2、IL-15、IL-12、IL-21、IL-15、I
L-15R、またはIL-15変異体の融合体のうちの少なくとも1つを含む。場合によ
って、サイトカインは、分泌形態にある。場合によって、サイトカインは、膜結合形態に
ある。場合によって、細胞は、NK細胞、NKT細胞、T細胞、またはT細胞前駆細胞で
ある。場合によって、細胞は、対象へと(例えば、対象に、操作細胞を輸注することによ
り)投与される。場合によって、方法は、有効量のリガンド(例えば、ベレジメクス)を
投与して、サイトカインの発現を誘導するステップをさらに含む。場合によって、CAR
は、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、
ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパ
ク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD2
2、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、MUC-16、h5T4、
PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうち
の少なくとも1つに結合することが可能である。場合によって、トランスポザーゼは、サ
ケ科型Tc1様トランスポザーゼである。場合によって、トランスポザーゼは、SB11
またはSB100xトランスポザーゼである。他の場合には、トランスポザーゼは、Pi
ggyBacである。場合によって、細胞タグは、HER1t1のうちの少なくとも1つ
を含む。
一部の実施形態では、本明細書で記載されるポリヌクレオチドをコードする改変エフェ
クター細胞を、障害、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象へと投与する方法が開
示される。場合によって、がんは、CD19、CD20、CD33、CD44、BCMA
、CD123、EGFRvIII、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、C
EA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2
、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR
、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、ま
たはVEGF-R2の発現と関連するがんである。
ポリヌクレオチドをコードする改変エフェクター細胞を、CD19の過剰発現と関連する
がんを有する対象へと投与する方法が開示される。一部の実施形態では、本明細書では、
改変エフェクター細胞を、CD33の過剰発現と関連するがんを有する対象へと投与する
方法が開示される。一部の実施形態では、本明細書では、改変エフェクター細胞を、CD
44、BCMA、CD123、EGFRvIII、α-葉酸受容体、CAIX、CD30
、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タン
パク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD
22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、T
AG-72、またはVEGF-R2の過剰発現と関連するがんを有する対象へと投与する
方法が開示される。場合によって、がんは、転移性がんである。他の場合には、がんは、
再発性がんまたは不応性がんである。
は、充実性腫瘍である。他の場合には、がんは、血液悪性腫瘍である。場合によって、が
んは、転移性がんである。場合によって、がんは、再発性がんまたは不応性がんである。
がん;胆管がん(すなわち、胆管癌);膀胱がん;脳腫瘍;乳がん;子宮頸がん;結腸が
ん;原発不明がん(CUP);食道がん;眼がん;卵管がん;消化器がん;腎臓がん;肝
臓がん;肺がん;髄芽腫;黒色腫;口腔がん;卵巣がん;膵臓がん;上皮小体疾患;陰茎
がん;下垂体腫瘍;前立腺がん;直腸がん;皮膚がん;胃がん;精巣がん;咽頭がん;甲
状腺がん;子宮がん;膣がん;または外陰がんを含むがこれらに限定されない。
パ腫、白血病、骨髄腫、またはB細胞性悪性腫瘍を含む。場合によって、血液悪性腫瘍は
、リンパ腫、白血病、または骨髄腫を含む。一部の場合には、例示的な血液悪性腫瘍は、
慢性リンパ球性白血病(CLL)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、高危険性CLL、
非CLL/SLL性リンパ腫、前リンパ球性白血病(PLL)、濾胞性リンパ腫(FL)
、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、マントル細胞リンパ腫(MCL)、
ワルデンシュトロームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯B細胞リンパ
腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度B細胞リン
パ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫(PMBL)、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Bリン
パ芽球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リ
ンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔(胸腺)大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大
細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症を含む。一部
の実施形態では、血液悪性腫瘍は、骨髄性白血病を含む。一部の実施形態では、血液悪性
腫瘍は、急性骨髄性白血病(AML)または慢性骨髄性白血病(CML)を含む。
パ腫(SLL)、高危険性CLL、非CLL/SLL性リンパ腫、前リンパ球性白血病(
PLL)、濾胞性リンパ腫(FL)、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、
マントル細胞リンパ腫(MCL)、ワルデンシュトロームマクログロブリン血症、多発性
骨髄腫、節外性辺縁帯B細胞リンパ腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫
、非バーキット高悪性度B細胞リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫(PMBL)、免疫芽
球性大細胞型リンパ腫、前駆Bリンパ芽球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リン
パ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔(胸腺)
大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、また
はリンパ腫様肉芽腫症から選択される血液悪性腫瘍を有する対象へと、本明細書で記載さ
れる改変エフェクター細胞を投与する方法が開示される。一部の場合には、本明細書では
、AMLまたはCMLから選択される血液悪性腫瘍を有する対象へと、改変エフェクター
細胞を対象に投与する方法が開示される。
法が開示される。感染性疾患は、細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染から生じる疾
患でありうる。他の場合には、例示的ウイルス性病原体は、アデノウイルス科(Adenovir
idae)、エプスタイン-バーウイルス(EBV)、サイトメガロウイルス(CMV)、R
SV(respiratory syncytial virus)、JCウイルス、B
Kウイルス、HSV、HHV科のウイルス、ピコルナウイルス科(Picornaviridae)、ヘ
ルペスウイルス科(Herpesviridae)、ヘパドナウイルス科(Hepadnaviridae)、フラビ
ウイルス科(Flaviviridae)、レトロウイルス科(Retroviridae)、オルトミクソウイル
ス科(Orthomyxoviridae)、パラミクソウイルス科(Paramyxoviridae)、パポバウイル
ス科(Papovaviridae)、ポリオーマウイルス属(Polyomavirus)、ラブドウイルス科(R
habdoviridae)、およびトガウイルス科(Togaviridae)の病原体を含む。例示的な病原
性ウイルスは、天然痘、インフルエンザ、流行性耳下腺炎、麻疹、水痘、エボラ熱、およ
び風疹を引き起こす。例示的な病原性真菌は、カンジダ属(Candida)、アスペルギルス
属(Aspergillus)、クリプトコッカス属(Cryptococcus)、ヒストプラズマ属(Histopl
asma)、ニューモシスチス属(Pneumocystis)、およびスタキボトリス属(Stachybotrys
)を含む。例示的な病原性細菌は、連鎖球菌属(Streptococcus)、シュードモナス属(P
seudomonas)、赤痢菌属(Shigella)、カンピロバクター属(Campylobacter)、ブドウ
球菌属(Staphylococcus)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、大腸菌(E. coli)、
リケッチア属(Rickettsia)、バチルス属(Bacillus)、ボルデテラ属(Bordetella)、
クラミジア属(Chlamydia)、スピロヘータ綱(Spirochetes)、およびサルモネラ属(Sa
lmonella)を含む。
一部の実施形態では、ある量の改変エフェクター細胞を、それを必要とする対象へと投
与するが、量は、サイトカインと関連する傷害作用を誘導する有効性および潜在的可能性
に基づき決定する。場合によって、改変免疫エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改
変免疫エフェクター細胞約102~約109個を含む。場合によって、改変免疫エフェク
ター細胞の量は、1kg当たりの改変免疫エフェクター細胞約103~約109個を含む
。場合によって、改変免疫エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変免疫エフェクタ
ー細胞約104~約109個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1k
g当たりの改変エフェクター細胞約105~約109個を含む。場合によって、改変エフ
ェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約105~約108個を含む
。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約
105~約107個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たり
の改変エフェクター細胞約106~約109個を含む。場合によって、改変エフェクター
細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約106~約108個を含む。場合に
よって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約107~
約109個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エ
フェクター細胞約105~約106個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量
は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約106~約107個を含む。場合によって、
改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約107~約108
個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクタ
ー細胞約108~約109個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1k
g当たりの改変エフェクター細胞約109個を含む。場合によって、改変エフェクター細
胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約108個を含む。場合によって、改変
エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約107個を含む。場合
によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクター細胞約106
個を含む。場合によって、改変エフェクター細胞の量は、1kg当たりの改変エフェクタ
ー細胞約105個を含む。
改変T細胞は、CAR-T細胞である。場合によって、CAR-T細胞の量は、1kg当
たりのCAR-T細胞約102~約104個を含む。場合によって、CAR-T細胞の量
は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約109個を含む。場合によって、CAR
-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約108個を含む。場合によ
って、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約107個を含
む。場合によって、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約106~約
109個を含む。場合によって、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞
約106~約108個を含む。場合によって、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのC
AR-T細胞約107~約109個を含む。場合によって、CAR-T細胞の量は、1k
g当たりのCAR-T細胞約105~約106個を含む。場合によって、CAR-T細胞
の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約106~約107個を含む。場合によって、C
AR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約107~約108個を含む。場合
によって、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約108~約109個
を含む。一部の場合には、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約10
9個を含む。一部の場合には、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約
108個を含む。一部の場合には、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細
胞約107個を含む。一部の場合には、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-
T細胞約106個を含む。一部の場合には、CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCA
R-T細胞約105個を含む。
によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約10
2~約109個を含む。一部の実施形態では、CAR-T細胞は、CD19特異的CAR
-T細胞である。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりの
CAR-T細胞約103~約109個を含む。一部の実施形態では、CAR-T細胞は、
CD19特異的CAR-T細胞である。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の
量は、1kg当たりのCAR-T細胞約104~約109個を含む。場合によって、CD
19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約109個
を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-
T細胞約105~約108個を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量
は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約107個を含む。場合によって、CD1
9特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約106~約109個を
含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T
細胞約106~約108個を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は
、1kg当たりのCAR-T細胞約107~約109個を含む。場合によって、CD19
特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約105~約106個を含
む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細
胞約106~約107個を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、
1kg当たりのCAR-T細胞約107~約108個を含む。場合によって、CD19特
異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約108~約109個を含む
。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞
約109個を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たり
のCAR-T細胞約108個を含む。場合によって、CD19特異的CAR-T細胞の量
は、1kg当たりのCAR-T細胞約107個を含む。場合によって、CD19特異的C
AR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約106個を含む。場合によって、
CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約105個を含む
。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当たりのCAR-T細
胞約104個を含む。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細胞の量は、1kg当
たりのCAR-T細胞約103個を含む。一部の場合には、CD19特異的CAR-T細
胞の量は、1kg当たりのCAR-T細胞約102個を含む。
作TCR T細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約102~約109個を含む。場合
によって、操作TCR T細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約103~約109個
を含む。場合によって、操作TCR T細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約104
~約109個を含む。場合によって、操作TCR T細胞の量は、1kg当たりのTCR
細胞約105~約109個を含む。場合によって、操作TCR細胞の量は、1kg当たり
のTCR細胞約105~約108個を含む。場合によって、操作TCR細胞の量は、1k
g当たりのTCR細胞約105~約107個を含む。場合によって、操作TCR細胞の量
は、1kg当たりのTCR細胞約106~約109個を含む。場合によって、操作TCR
細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約106~約108個を含む。場合によって、操
作TCR細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約107~約109個を含む。場合によ
って、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約105~約106個を含む。
場合によって、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約106~約107個
を含む。場合によって、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約107~約
108個を含む。場合によって、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTCR細胞約1
08~約109個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約109個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約108個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約107個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約106個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約105個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約104個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約103個を含む。一部の場合には、操作TCR細胞の量は、1kg当たりのTC
R細胞約102個を含む。
一部の実施形態では、対象における投与のための、本明細書で開示されるポリヌクレオ
チドまたはポリペプチドを含む組成物が開示される。場合によって、本明細書では、本明
細書で開示されるポリヌクレオチドまたはポリペプチドをコードし、任意選択で、サイト
カインおよび/またはさらなる治療剤を含有する、改変エフェクター細胞組成物が開示さ
れる。一部の場合には、本明細書にはまた、エフェクター細胞を改変するための細胞タグ
を発現させるための、ポリペプチド構築物をコードするベクターも含まれる。
容体をコードするベクターによる医薬組成物を、活性化合物の、薬学的に使用されうる調
製物への加工を容易とする、賦形剤および補助剤を含む、1または複数の生理学的に許容
される担体を使用する、常套的な形で製剤化する。適正な製剤は、選択される投与経路に
依存する。本明細書で記載される医薬組成物の概要については、例えば、Remington: The
Science and Practice ofPharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Co
mpany, 1995); Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publis
hing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharm
aceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; and Pharmaceutical
Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilki
ns 1999)において見出される。
工程、顆粒化工程、糖衣錠作製工程、微粒化工程、乳化工程、カプセル化工程、封入工程
、または圧縮工程などによる、常套的な形で製造される。
よび塩酸などの酸;水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸
ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、およびトリス-ヒドロキシメチルアミノ
メタンなどの塩基を含む、1または複数のpH調整剤または緩衝剤;ならびにクエン酸塩
/デキストロース、炭酸水素ナトリウム、および塩化アンモニウムなどの緩衝液も含みう
る。このような酸、塩基、および緩衝剤は、組成物のpHを、許容可能な範囲で維持する
のに必要とされる量で組み入れられる。
のに必要とされる量の、1または複数の塩も含みうる。このような塩は、ナトリウムカチ
オン、カリウムカチオン、またはアンモニウムカチオンと、塩化物アニオン、クエン酸ア
ニオン、アスコルビン酸アニオン、ホウ酸アニオン、リン酸アニオン、重炭酸アニオン、
硫酸アニオン、チオ硫酸アニオン、または亜硫酸水素アニオンとを有する塩を含み、適切
な塩は、塩化ナトリウム塩、塩化カリウム塩、チオ硫酸ナトリウム塩、亜硫酸水素ナトリ
ウム塩、および硫酸アンモニウム塩を含む。
筋内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内)投与経路、鼻腔内投与経路、口腔
内投与経路、舌下投与経路、または直腸内投与経路を含むがこれらに限定されない、任意
の適切な投与経路により投与される。一部の場合には、医薬組成物を、非経口(例えば、
静脈内、皮下、筋内、脳内、脳室内、関節内、腹腔内、または頭蓋内)投与のために製剤
化する。
経口分散液、液体、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁液など、固体経口剤形
、エアゾール剤、制御放出製剤、即時融解製剤、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、粉剤、
丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出製剤、多粒子製
剤、即時放出製剤と制御放出製剤との混合剤を含むがこれらに限定されない、任意の適切
な剤形へと製剤化する。一部の実施形態では、医薬組成物を、カプセル剤へと製剤化する
。一部の実施形態では、医薬組成物を、溶液(例えば、静脈内投与のための)へと製剤化
する。場合によって、医薬組成物を、輸注液として製剤化する。場合によって、医薬組成
物を、注射液として製剤化する。
物と、適合性の担体、結合剤、充填剤、懸濁剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面
活性剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、湿潤剤、可塑化剤、安定化剤、浸透増強剤
、保湿剤、消泡剤、抗酸化剤、防腐剤、または1もしくは複数のこれらの組合せなど、1
または複数の薬学的に許容される添加剤とを含む。
において記載されている手順など、標準的なコーティング手順を使用して、組成物の周囲
に、薄膜コーティングを提供する。一部の実施形態では、組成物を、粒子(例えば、カプ
セルによる投与のための)へと製剤化し、粒子の一部または全部をコーティングする。一
部の実施形態では、組成物を、粒子(例えば、カプセルによる投与のための)へと製剤化
し、粒子の一部または全部をマイクロカプセル化する。一部の実施形態では、組成物を、
粒子(例えば、カプセルによる投与のための)へと製剤化し、粒子の一部または全部をマ
イクロカプセル化せず、アンコーティングする。
、1または複数の保存剤も含みうる。適切な保存剤は、メルフェンおよびチオメルサール
などの水銀含有物質;安定化二酸化塩素;ならびに塩化ベンザルコニウム、臭化セチルト
リメチルアンモニウム、および塩化セチルピリジニウムなどの四級アンモニウム化合物を
含む。
スの過剰な代謝回転が、がんを含むいくつかの疾患の発症機序に著明に寄与する、という
統一的概念が提示されていることを意味する。
または感染症を伴うか、またはこれを有するかもしくは発症することが疑われると診断さ
れた哺乳動物対象を指す。一部の実施形態では、「患者」という用語は、がんを発症する
可能性が平均より高い哺乳動物対象を指す。例示的な患者は、ヒト、類人猿、イヌ、ブタ
、ウシ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、齧歯動物、および本明細書で開示される療法から利
益を得うる、他の哺乳動物でありうる。例示的なヒト患者は、男性および/または女性で
ありうる。
指す。例を目的として、限定せずに述べると、組成物の投与、例えば、注射は、静脈内(
i.v.)注射、皮下(s.c.)注射、皮内(i.d.)注射、腹腔内(i.p.)注
射、または筋内(i.m.)注射により実施することができる。1または複数のこのよう
な経路を利用することができる。非経口投与は、例えば、ボーラス注射による場合もあり
、時間経過にわたる、漸次的な灌流による場合もある。代替的に、または共時的に、投与
は、経口経路による投与でありうる。加えて、投与はまた、ボーラスまたは細胞ペレット
のデポ手術による場合もあり、医療用デバイスの設置による場合もある。
、がんなどの増殖性障害であるがこれらに限定されない、疾患または障害を伴うと診断さ
れているか、またはこれを有することか疑われる患者または対象と称する。一実施形態で
は、患者または対象は、充実性腫瘍または白血病を有するか、またはこれを発症する可能
性が高い。一部の実施形態では、白血病は、例えば、急性リンパ芽球性白血病(ALL)
、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、および慢性骨髄性白
血病(CML)でありうる。
含むベクターを、増殖性障害を処置または防止するのに有効な量で含みうる。本明細書で
使用される「処置」、「~を処置すること」などの用語は、所望の薬理学的効果および/
または生理学的効果を得ることを指す。複数の実施形態では、効果は、治療的である、す
なわち、効果は、疾患および/または疾患に帰せられうる有害症状を、部分的または完全
に治癒させる。この目的で、本発明方法は、本発明の核酸配列を発現する宿主細胞、また
は本発明の核酸配列を含むベクターを含む、「治療有効量」の組成物を投与するステップ
を含む。
間にわたり有効な量を指す。治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、
ならびに個体において所望の応答を誘発する、本発明の核酸配列の能力などの因子に従い
変動しうる。
なわち、効果は、疾患またはその症状を、完全に、または部分的に予防する場合もある。
要な投与量において、必要な期間にわたり有効な量を指す。
を結果としてもたらすか、または、一般に、加工を損なう発泡を低減する。例示的な抗発
泡剤は、シリコンエマルジョン(silicon emulsion)またはセスキオレ
イン酸(sesquoleate)ソルビタンを含む。
トリウム、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、およびトコフェロールを含む。あ
る特定の実施形態では、抗酸化剤は、必要とされる場合、化学的安定性を増強する。
物、および他の一般的な安定化剤から利益を得る場合がある。このような安定化剤の例は
、(a)約0.5%~約2%w/vのグリセロール、(b)約0.1%~約1%w/vの
メチオニン、(c)約0.1%~約2%w/vのモノチオグリセロール、(d)約1mM
~約10mMのEDTA、(e)約0.01%~約2%w/vのアスコルビン酸、(f)
0.003%~約0.02%w/vのポリソルベート80、(g)0.001%~約0.
05%w/vのポリソルベート20、(h)アルギニン、(i)ヘパリン、(j)硫酸デ
キストラン、(k)シクロデキストリン、(l)ポリ硫酸ペントサン、および他のヘパリ
ノイド、(m)マグネシウムおよび亜鉛などの二価カチオン、または(n)これらの組合
せを含むがこれらに限定されない。
メチルセルロース、メチルセルロース(例えば、Methocel(登録商標))、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセ
ルロース(例えば、Klucel(登録商標))、エチルセルロース(例えば、Etho
cel(登録商標))、および結晶セルロース(例えば、Avicel(登録商標))な
どのセルロース誘導体;微晶質デキストロース;アミロース;ケイ酸マグネシウムアルミ
ニウム;多糖酸;ベントナイト;ゼラチン;ポリビニルピロリドン/酢酸ビニルコポリマ
ー;クロスポビドン;ポビドン;デンプン;アルファデンプン;トラガント、デキストリ
ン、スクロース(例えば、Dipac(登録商標))、グルコース、デキストロース、糖
蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール(例えば、Xylitab(登録商標)
)、およびラクトースなどの糖;アカシア、トラガント、ガッティガム、イサポールハス
クの粘液、ポリビニルピロリドン(例えば、Polyvidone(登録商標)CL、K
ollidon(登録商標)CL、Polyplasdone(登録商標)XL-10)
、カラマツ由来のアラビノガラクタン(arabogalactan)、Veegum(登録商標)、
ポリエチレングリコール、蝋、アルギン酸ナトリウムなどの天然ガムまたは合成ガムを含
む。
ルチニブおよび抗がん剤の化合物など、本明細書で開示される化合物との適合性、ならび
に所望の剤形の放出プロファイル特性に基づき選択されるものとする。例示的な担体材料
は、例えば、結合剤、懸濁剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢
剤、保湿剤、希釈剤などを含む。「薬学的に適合性の担体材料」は、アカシア、ゼラチン
、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、カルシウム乳酸、マルトデキス
トリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン(PVP)、コレステ
ロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム、ダイズレシチン、タウロコー
ル酸、ホスファチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム
、セルロースおよびセルロースコンジュゲート、糖、ステアロイル乳酸ナトリウム、カラ
ギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファデンプンなどを含みうるがこれらに
限定されない。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteent
h Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)、Hoover, John E., Remington’s
Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975、Liberm
an, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New
York, N.Y., 1980、およびPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, S
eventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)を参照されたい。
またブレンド法を介して、薬物の拡散および均質性を制御する材料を含む。一部の実施形
態では、これらの薬剤はまた、コーティングマトリックスまたはエローディングマトリッ
クスの有効性も促進する。例示的な拡散促進剤/分散剤は、例えば、親水性ポリマー、電
解質、Tween(登録商標)60またはTween(登録商標)80、PEG、ポリビ
ニルピロリドン(PVP;市販品では、Plasdone(登録商標)として公知である
)、and例えば、ヒドロキシプロピルセルロース(例えば、HPC、HPC-SL、お
よびHPC-L)、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(例えば、HPMC K100
、HPMC K4M、HPMC K15M、およびHPMC K100M)、カルボキシ
メチルセルロースナトリウム(carboxymethylcellulose sodium)、メチルセルロース、
ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロース、ステアリン酸酢酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPM
CAS)、非晶質セルロースなど、炭水化物ベースの分散剤、ケイ酸マグネシウムアルミ
ニウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール(PVA)、ビニルピロリドン/
酢酸ビニルコポリマー(S630)、酸化エチレンおよびホルムアルデヒドを伴う、4-
(1,1,3,3-テトラメチルブチル)-フェノールポリマー(チロキサポールとして
もまた公知である)、ポロキサマー(例えば、酸化エチレンと、酸化プロピレンとのブロ
ックコポリマーである、Pluronics F68(登録商標)、Pluronics
F88(登録商標)、およびPluronics F108(登録商標));およびポ
ロキサミン(例えば、酸化プロピレンおよび酸化エチレンの、エチレンジアミンへの逐次
的付加から導出される四官能性ブロックコポリマーである、Poloxamine 90
8(登録商標)(BASF Corporation、Parsippany、N.J.
)としてもまた公知のTetronic 908(登録商標))、ポリビニルピロリドン
K12、ポリビニルピロリドンK17、ポリビニルピロリドンK25、またはポリビニル
ピロリドンK30、ポリビニルピロリドン/酢酸ビニルコポリマー(S-630)、ポリ
エチレングリコール(例えば、ポリエチレングリコールは、約300~約6000、また
は約3350~約4000、または約7000~約5400の分子量を有しうる)、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリソルベート80、アルギン
酸ナトリウム、例えば、トラガントガムおよびアカシアガム、グアルガムなどのガム、キ
サンタンガムを含むキサンタン、糖、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、
メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、ポ
リソルベート80、アルギン酸ナトリウム、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン
、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、ポビドン、カルボマー、ポリビニルアル
コール(PVA)、アルギン酸塩、キトサン、およびこれらの組合せを含む。セルロース
またはトリエチルセルロースなどの可塑化剤もまた、分散剤として使用することができる
。特に、リポソーム分散液中および自己乳化分散液中で有用な分散剤は、ジミリストイル
ホスファチジルコリン、鶏卵に由来する天然ホスファチジルコリン、鶏卵に由来する天然
ホスファチジルグリセロール、コレステロール、およびイソプロピルミリスチン酸である
。
本組成物中で使用することができる。
を指す。希釈剤はまた、より安定的な環境をもたらしうるため、化合物を安定化させるの
にも使用することができる。当技術分野では、緩衝液中に溶解させた塩(これはまた、p
Hの制御または維持ももたらしうる)を、リン酸緩衝生理食塩液溶液を含むがこれらに限
定されない希釈剤として用いる。ある特定の実施形態では、希釈剤は、組成物のバルクを
増大させて、圧縮を容易とするか、またはカプセルの充填のための均質なブレンドに十分
なバルクを創出する。このような化合物は、例えば、ラクトース、デンプン、マンニトー
ル、ソルビトール、デキストロース、Avicel(登録商標)などの結晶セルロース;
二塩基性リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物;リン酸三カルシウム、リン酸
カルシウム;無水ラクトース、噴霧乾燥ラクトース;アルファデンプン、Di-Pac(
登録商標)(Amstar)などの圧縮糖;マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、ステアリン酸酢酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロースベースの
希釈剤、粉砂糖;一塩基性硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物;乳酸カル
シウム三水和物、デキストレート(dextrate);加水分解シリアル固形、アミロース;粉
末セルロース、炭酸カルシウム;グリシン、カオリン;マンニトール、塩化ナトリウム;
イノシトール、ベントナイトなどを含む。
シウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、セルロース 粉末、デキストロース、デキス
トレート(dextrate)、デキストラン、デンプン、アルファデンプン、スクロース、キシ
リトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレン
グリコールなどの化合物を含む。
害する化合物である。例示的な滑沢剤は、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、滑
石、フマル酸ステアリルナトリウム、鉱物油などの炭化水素、または水素化ダイズ油(S
terotex(登録商標))などの水素化植物油、高脂肪酸、ならびにアルミニウム、
カルシウム、マグネシウム、亜鉛など、それらのアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属
塩、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、滑石、蝋、Stearow
et(登録商標)、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、ナトリウム酢酸、塩化ナトリウム、ロ
イシン、ポリエチレングリコール(例えば、PEG-4000)、またはCarbowa
x(商標)などのメトキシポリエチレングリコール、ナトリウムオレイン酸、安息香酸ナ
トリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸マグネシウムま
たはラウリル硫酸ナトリウム、Syloid(商標)、Cab-O-Sil(登録商標)
などのコロイド状シリカ、トウモロコシデンプンなどのデンプン、シリコーン油、界面活
性剤などを含む。
はマイクロカプセル化材料の脆性を低下させるフィルムコーティングである。適切な可塑
化剤は、例えば、PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450
、PEG 3350、およびPEG 800などのポリエチレングリコール、ステアリン
酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロース、およびトリアセチンを
含む。一部の実施形態では、可塑化剤はまた、分散剤または保湿剤としても機能しうる。
エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクセート(doccusate)、ビタミンE
TPGS、ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、N-ヒドロキシエチルピロリ
ドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルシクロデキストリン、エタノール、n-ブタノール、イソプロピルアルコール、コレス
テロール、胆汁塩、ポリエチレングリコール200~600、グリコフロール、トランス
クトール、プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドなどの化合物を含む。
ニルピロリドンK17、ポリビニルピロリドンK25、またはポリビニルピロリドンK3
0、ビニルピロリドン/酢酸ビニルコポリマー(S630)、ポリエチレングリコール(
例えば、ポリエチレングリコールは、約300~約6000、または約3350~約40
00、または約7000~約5400の分子量を有しうる)、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ステアリン酸
酢酸ヒドロキシメチルセルロース、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、
アルギン酸ナトリウム、例えば、トラガントガムおよびアカシアガム、グアルガムなどの
ガム、キサンタンガムを含むキサンタン、糖、例えば、カルボキシメチルセルロースナト
リウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリソルベ
ート80、アルギン酸ナトリウム、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、モノラ
ウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、ポビドンなどの化合物を含む。
ween 60またはTween 80、トリアセチン、ビタミンE TPGS、モノオ
レイン酸ソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ポリソルベート(
polysorbate)、ポロキサマー、胆汁塩、モノステアリン酸グリセリン、酸化
エチレンと酸化プロピレンとのコポリマー、例えば、Pluronic(登録商標)(B
ASF)などの化合物を含む。他の一部の界面活性剤は、ポリオキシエチレングリセリン
脂肪酸エステルおよび植物油、例えば、ポリオキシエチレン(60)水素化ヒマシ油;な
らびにポリオキシエチレンアルキルエーテルおよびアルキルフェニルエーテル、例えば、
オクトキシノール10、オクトキシノール40を含む。一部の実施形態では、界面活性剤
は、物理的安定性を増強するか、または他の目的で、組み入れることができる。
ルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ステ
アリン酸酢酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサン、
およびこれらの組合せを含む。
、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、モノオレイン酸ポリオ
キシエチレンソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ナトリウムド
クセート(docusate)、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムド
クセート(doccusate)、トリアセチン、Tween 80、ビタミンE TPGS、ア
ンモニウム塩などの化合物を含む。
本明細書の、ある特定の実施形態では、本明細書で記載される、1または複数の方法に
よる使用のためのキットおよび製品が開示される。このようなキットは、バイアル、試験
管など、1または複数の容器であって、容器の各々が、本明細書で記載される方法におい
て使用される個別のエレメントのうち1つを含む容器を受容するように区画化されたキャ
リングケース、パッケージ、または容器を含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイア
ル、シリンジ、および試験管を含む。一実施形態では、容器は、ガラスまたはプラスチッ
クなど、様々な材料から形成されている。
料の例は、ブリスターパック、ボトル、試験管、バッグ、容器、ボトル、ならびに選択さ
れる製剤と、意図される投与方式および処置方式とに適する、任意のパッケージング材料
を含むがこれらに限定されない。
えば、CD20またはCD52)のうちの1または複数を発現するポリペプチド構築物を
コードする細胞を含む。任意選択で、細胞は、加えて、1または複数の異種遺伝子、例え
ば、CAR、T細胞受容体、および/またはサイトカインをコードする遺伝子を含有しう
る。このようなキットは、任意選択で、本明細書で記載される方法におけるその使用に関
する記載または表示または指示書の内容確認を含む。
らびに使用のための指示書を伴う添付文書を含む。典型的に、指示書のセットもまた、組
み入れられると予想される。
実施形態では、表示を形成する文字、数、または他の記号が、容器自体へと接着されてい
るか、鋳造されているか、またはエッチングされている場合、表示は容器上に貼付されて
おり、表示はまた、容器を保持する、レセプタクルまたはキャリングケース内に、例えば
、パッケージ添付文書として存在する場合、容器に付随する。一実施形態では、表示は、
内容物が、具体的な治療適用に使用されるものであることを指し示すのに使用される。表
示はまた、内容物の、本明細書で記載される方法などにおける使用のための指示も指し示
す。
本明細書で提示される実施形態に含まれる、ある特定の配列の代表的なリストを、下記
に提示する。
請求の範囲を限定しようとするものではない。
トランケート型CD20(CD20t)ポリペプチド構築物の、細胞タグとしての発現お
よび活性
HEK-293T細胞に、抗CD20抗体リツキシマブに対して、野生型CD20、ト
ランケート型CD20細胞タグのほか、陽性対照をトランスフェクトした。発現は、リツ
キシマブを使用するフローサイトメトリーにより測定した。図1に示す通り、CD20ト
ランケート型変異体であるCD20t1(配列番号109)は、リツキシマブにより検出
する場合、変異体であるCD20t4(配列番号115)と比べて、ロバストな発現を呈
した。これらのデータは、CD20内因性ポリペプチド内の特定のトランケーションのみ
が、細胞タグとしてのCD20tの使用に適合性でありうることを指し示す。
ポザーゼプラスミドをコードするSleeping Beautyトランスポゾンを使用
して、ヒトPBMCにヌクレオフェクトした。フローサイトメトリーを使用して、CAR
と、CD20tとの共発現を測定した。図2は、CD20t1(配列番号109;y軸)
と、CAR(x軸)とを、CAR-CD20t1構築物から共発現されることを、非トラ
ンスフェクト細胞と比較して示す。
Jurkatレポーター細胞系を、CD20t1細胞タグを安定的に発現するように改
変した。CD20t1の発現は、フローサイトメトリーを使用するリツキシマブ染色によ
り確認した。CD20t1を発現するJurkat標的細胞を特異的に消失させるリツキ
シマブの能力は、in vitro細胞傷害アッセイにより測定した。図3は、リツキシ
マブにより誘導される、CD20t1発現細胞系に対するADCC活性を示す。これと比
較して、抗EGFRセツキシマブによる処置は、ADCC活性に対する効果を及ぼさなか
った。
トランケート型HER1(HER1t)ポリペプチド構築物の、細胞タグとしての発現
キメラ細胞タグの発現
新規のキメラ細胞タグは、HER1遺伝子のドメインIIIと、HER2遺伝子、HE
R3遺伝子、またはHER4遺伝子のドメインIVとを使用することにより作出した。H
ER1-ErBB4キメラ細胞タグを、ヒト初代細胞内で発現させた。HER1遺伝子の
ドメインIIIを、ErbB4遺伝子変異体であるJM-aまたはJM-bのドメインI
V、およびErbB4遺伝子のTMドメインと遺伝子融合させて、キメラ細胞タグを作出
した。GMCSFアルファシグナルペプチドを、シグナルペプチドとして用いて、キメラ
細胞タグを、細胞表面へと方向付けた。HER1-ErbB4細胞タグ(配列番号101
に対応するトランケート型EGFR-ErbB4(JM-a)、および配列番号105に
対応するトランケート型EGFR-ErbB4(JM-b))を、pCDNA3.1ベク
ター骨格内に対照HER1t細胞タグと共にクローニングし、電気穿孔により、初代ヒト
PBMCへとトランスフェクトした。HER1-ErbB4細胞タグの発現は、抗HER
1特異的抗体であるセツキシマブを使用するフローサイトメトリーにより、CD3+T細
胞内で確認した。図4Dに示す通り、形質導入T細胞は、トランスフェクション後におい
て、高レベルのキメラ細胞タグを発現した。アイソタイプ抗体染色ならびに非トランスフ
ェクトモック細胞は、セツキシマブ染色の、細胞タグに対する特異性を示した。
多様なトランケート型細胞タグを、図4Aに示す概略図内に描示される通りに構築した
。トランケート型HER1t変異体(配列番号57に対応するHER1t1、配列番号5
9に対応するHER1t2、配列番号61に対応するHER1t3、配列番号63に対応
するHER1t4、配列番号65に対応するHER1t5、配列番号67に対応するHE
R1t6、および配列番号69に対応するHER1t7)を、HER1t対照細胞タグと
共に、pCDNA3.1ベクター骨格内にクローニングして、発現について調べた。電気
穿孔により、初代ヒトPBMCにおいて、これらの発現ベクターをトランスフェクトした
。トランケート型細胞タグの発現は、抗HER1特異的抗体であるセツキシマブを使用す
るフローサイトメトリーにより、CD3+T細胞内で確認した。図4Eに示す通り、T細
胞は、トランスフェクション後において、高レベルの細胞タグを発現した。アイソタイプ
抗体染色ならびに非トランスフェクトモック細胞は、セツキシマブ染色の、細胞タグに対
する特異性を示した。
己不活化レンチウイルスベクターを作出して、両方の遺伝子の共発現を査定した。レンチ
ウイルスベクターを、活性化ヒト汎T細胞へと形質導入し、CARおよびHER1t1の
両方の発現を、形質導入後において、CAR特異的抗原-Fc融合タンパク質および抗H
ER1抗体であるセツキシマブのそれぞれを使用するフローサイトメトリーにより測定し
た。図5Aおよび図5Bの右パネルに示す通り、形質導入T細胞は、CAR(x軸)およ
びHER1t(y軸)の両方を共発現した。図5Aの左パネルは、非形質導入T細胞内で
観察される、最小のバックグラウンド染色を示した。図5Bの左パネルは、CARのみを
コードするレンチウイルスベクターを、T細胞へと形質導入した場合に、CARの発現は
裏付けたが、HER1tの発現は裏付けなかった。
SUP-T1細胞系を、HER1t1(SUP-T1/HER1t1)を発現するよう
に遺伝子改変した。SUP-T1/HER1t1細胞系を、フローサイトメトリーにより
測定される、高レベルまたは低レベルのHER1t1発現について、FACSにより分取
した。トランケート型HER1t細胞タグの発現は、ウェスタンブロット解析により、S
UP-T1/HER1t1(高)細胞系内およびSUP-T1/HER1t1(低)細胞
系内で確認した。抗HER1抗体であるセツキシマブを、SUP-T1/CAR/HER
1t1細胞系抽出物または対照(JurkatandA431)細胞系抽出物と共にイン
キュベートして、抗体が、HER1に由来する細胞タグタンパク質に結合することを可能
とした。次いで、プロテインA/G共役アガロースビーズを使用して、抗体/抗原複合体
を沈殿させた。次いで、この試料を、抗HER1抗体を使用するウェスタンブロット解析
のために、SDS-PAGEにより分離した。図8に示すウェスタンブロットは、SUP
T1/HER1t1細胞系内のHER1t1の発現を確認する。HER1t1の強度は、
SUP-T1/HER1t1(低)細胞系内で、SUP-T1/HER1t1(高)細胞
系と比較して低度である。全長HER1は、A431陽性対照細胞系内で検出した。非改
変Jurkat細胞系内では、HER1の発現が検出されなかった。図8:レーン1:I
P抗体のみ;レーン2:Jurkat細胞のみ;レーン3:SUPT1/HER1t1(
高レベルのHER1t1);レーン4:SUPT1/HER1t1(低レベルのHER1
t1);レーン5:全長HER1を発現するA431細胞;レーン6:マーカーである。
太字矢印は、全長HER1を指すレーン5を除くレーンにおいて、セツキシマブにより沈
殿したタンパク質を指示する。
抗HER1抗体による、トランケート型HER1t細胞タグを発現する細胞に対するAD
CCおよびCDC
NK細胞系を使用して、ADCCアッセイにおける、HER1t1細胞タグの機能性を
評価した。親NK細胞系を、CD16受容体の変異体を発現させて、ADCCを誘導する
ように改変した。CD16+NK細胞系を、CARと、HER1t1細胞タグとを共発現
するように、さらに改変した。親NK細胞系、CD16+NK細胞系、およびCD16+
/CAR+/HER1t1+NK細胞系を、抗HER1セツキシマブ、またはNK細胞上
のCD52に結合することが可能な、陽性対照のアレムツズマブの存在下で、ADCCに
ついて解析した。図6に示す通り、CD16への抗体の結合は、エフェクター機能を誘導
するので、予測される通り、NK細胞が、CD16を発現する場合に限り、ADCCは観
察された。さらに、これらの細胞が、HER1t細胞タグを発現するのであれ、発現しな
いのであれ、CD16を発現する限りにおいて、アレムツズマブは、NK細胞に対するA
DCCを誘導することが可能であった。これに対し、セツキシマブは、HER1t1およ
びCD16の両方を発現する場合に限り、ADCCを誘導したので、特異性が確認された
。
R1t1(SUP-T1/CAR/HER1t1)を共発現するように遺伝子改変した。
SUP-T1/CAR-HER1t1細胞系を、フローサイトメトリーにより測定された
HER1t1発現の高レベルまたは中レベルについて、FACSにより分取して、抗HE
R1抗体を使用するADCCについて、細胞表面上の細胞タグ密度の効果を査定した。図
7Aは、分取されたSUP-T1/CAR/HER1t1集団内の、CARおよびHER
1t1の発現レベルを示す。図7Aの左パネルは、フローサイトメトリーにより、アイソ
タイプ抗体のみによる染色を示し、中パネルは、高HER1t発現を示し、右パネルは、
中HER1t発現を示す。CARおよびHER1t1遺伝子は、同じ転写物から発現され
るので、HER1t1に基づき細胞を分取することは、CARの発現にも、同様の形で影
響を及ぼした。SUP-T1/CAR/HER1t1の高細胞系および中細胞系について
、セツキシマブ、または対照としての非特異的リツキシマブを使用するADCCアッセイ
で調べた。アッセイには、5:1のエフェクター(E)細胞対HER1t1+標的(T)
細胞比を用いた。ADCCは、レポーター遺伝子発現の誘導倍数として定量化した。図7
Bに示す通り、セツキシマブは、HER1t1発現細胞系に対するADCCを、用量依存
的に、特異的に誘導した。さらに、ADCCの誘導は、細胞表面上の、HER1t1発現
のレベルに依存した。
ランスポザーゼと共に発現させて、T細胞の特異性をリダイレクトする、2つのSlee
ping Beautyトランスポゾンベクターを、電気穿孔によりトランスフェクトし
た。トランスフェクションの1日後(1日目)、細胞をカウントし、フローサイトメトリ
ーにより、CAR発現を測定した。CAR T細胞を、γ照射される(100Gy)か、
またはマイトマイシンCで処理された、1:1比のAaPCにより、4刺激サイクルにわ
たり刺激した。使用したAaPC細胞は、CD19抗原を発現するK562-AaPCで
あった。培養物に、第1のラウンドの刺激には、IL-21(30ng/ml)だけを補
充し、その後、残りの刺激には、組換えヒトIL-2(50IU/ml)およびIL-2
1(30ng/ml)(Pepro Tech)を補充した。T細胞培養物を、7日間に
わたり持続することが典型的な、各刺激サイクルの終了時に表現型解析した。プロテイン
LまたはCD19 CARを認識する抗イディオタイプ抗体を用いる、マルチパラメータ
のフローサイトメトリーにより、培養物を、CAR発現について、表現型解析した。セツ
キシマブが、in vitroにおいて、CD19 CAR+/HER1t1+T細胞を
特異的に消失させる能力について、ADCCアッセイおよび補体依存性細胞傷害作用(C
DC)アッセイにおいて調べた。5μg/mlのセツキシマブまたはリツキシマブを伴う
、CSFEで標識されたCD19 CAR+/HER1t1+T標的細胞(T)(ウェル
1つ当たりの細胞5×104個)を、CD16+NKエフェクター細胞系(E)(ウェル
1つ当たりの細胞2.5×105個)と共に、5:1のE:T比で、2~24時間にわた
り、三連でインキュベートした。CDCアッセイには、熱不活化(HI)を伴う10%の
ウサギ血清、およびHIを伴わない同血清、ならびに熱不活化(HI)を伴う30%のヒ
ト血清、およびHIを伴わない同血清を用いた。細胞を、DAPIにより染色し、データ
は、iQUE Screener plus測定器により収集した。生細胞カウントは、
各条件について報告した。図9(左パネル)に示す通り、ADCCアッセイにおける低生
細胞カウントにより明らかな通り、セツキシマブは、CD19 CAR+/HER1t1
+T細胞に対する特異的細胞傷害作用を誘導した。図9(右パネル)に示す通り、CDC
アッセイにおける低生細胞カウントにより明らかな通り、セツキシマブは、ヒト血清また
はウサギ血清を熱不活化しなかった場合、CD19 CAR+/HER1t1+T細胞に
対する特異的細胞傷害作用を誘導した。
次世代キルスイッチ/細胞タグ構築物は、ADCCおよびCDCを増強する
図10は、トランケート型細胞タグを含む、第1世代ポリペプチド構築物のデザインと
、次世代ポリペプチド構築物のデザインとを比較する概略図である。第1世代トランケー
ト型細胞タグ(上)は、任意選択のペプチドリンカーにより接続されたトランケート型変
異体と、非二量体化膜貫通ドメイン(TM)とを含む。次世代トランケート型細胞タグ(
下パネル)は、細胞表面上で多量体化することが可能な細胞タグを作出する多量体化ドメ
インを含む。図10の下パネルで描示される例は、細胞表面上で、細胞タグの二量体を誘
導する、ホモ二量体化が可能な膜貫通ドメイン(TM-A)を用いる。細胞表面ポリペプ
チドのホモ二量体化が示されているが、細胞を、異なる細胞表面ポリペプチドを有するポ
リペプチド構築物を共発現するように操作する場合は、細胞表面におけるヘテロ二量体の
形成もまた可能である。第1世代ポリペプチド構築物および次世代ポリペプチド構築物の
いずれにおいても、抗トランケート型変異体抗体または別の結合性ドメインは、トランケ
ート型変異体を認識し、これに結合する。このような次世代構築物のために、細胞表面ポ
リペプチドの二量体化は、第1世代構築物の場合を超えて、アビディティーを増大させ、
抗体の結合により誘導されるシグナル伝達効果を増幅しうるほか、多量体細胞タグを使用
する細胞の精製および分取を改善しうる。
世代HER1t細胞タグを、SB11トランスポザーゼと共に共発現させて、T細胞の特
異性をリダイレクトするようにデザインされた、Sleeping Beautyトラン
スポゾンベクターを、電気穿孔によりトランスフェクトした(0日目)。トランスフェク
ションの1日後(1日目)、細胞をカウントし、フローサイトメトリーにより、CAR発
現を測定した。CAR T細胞を、γ照射される(100Gy)か、またはマイトマイシ
ンCで処理された、1:1比のAaPCにより、4刺激サイクルにわたり刺激した。使用
したAaPC細胞は、CD19抗原を発現するK562-AaPCであった。第1ラウン
ドの刺激には、培養物に、IL-21(30ng/ml)のみを補充し、その後、残りの
刺激には、組換えヒトIL-2(50IU/ml)およびIL-21(30ng/ml)
(Pepro Tech)を補充した。各刺激サイクルの終了時に、T細胞培養物を、表
現型解析したが、これは、典型的に、7日間続いた。培養物を、CD19 CARを認識
する、プロテインLまたは抗イディオタイプ抗体、および多様なトランケート型HER1
t細胞タグを認識する、抗HER1抗体であるセツキシマブを用いる、マルチパラメータ
のフローサイトメトリーにより、CARの発現について表現型解析した。図11は、次世
代HER1t変異体を含むポリペプチド構築物(例えば、配列番号71に対応するHER
1t8、配列番号75に対応するHER1t9、および配列番号79に対応するHER1
t10)内のCD19 CARの発現が、時間経過にわたり、第1世代ポリペプチド構築
物(配列番号57に対応するHER1t1)およびHER1tを発現しない対照細胞系と
比較して変動しないことを裏付ける。多様な培養物中の、CD19 CARを発現するC
D3+T細胞の百分率を、表4に示す。
ド構築物(変異体である、配列番号71に対応するHER1t8、配列番号75に対応す
るHER1t9、および配列番号79に対応するHER1t10)を発現する細胞系が、
時間経過にわたり、第1世代HER1tポリペプチド構築物(配列番号57に対応するH
ER1t1)を発現する細胞系と同様のHER1t発現レベルを示すことを示す。CAR
のみのトランスポゾンをトランスフェクトされた培養物中では、HER1t発現は、検出
されなかった。表5が、多様な培養物中の、HER1t変異体を発現するCD3+T細胞
の百分率を示すのに対し、表6は、14、21、および28日目における、図12による
、HER1tの平均値蛍光強度(MFI)を示す。
ッセイにおいて、セツキシマブに誘導されるADCCについて調べ、有効性について、第
1世代HER1tデザインと比較した。CD19 CAR-T標的細胞(T)を、HER
1t変異体を発現するCAR-T細胞には、0.0005μMのCFSEで標識化し、H
ER1tを伴わないCAR-T細胞には、0.01μMのCFSEで標識化した。標的細
胞を、1ml当たりの細胞0.8×106個で懸濁させ、1:1の比で混合し、ウェル1
つ当たり50μl当たりの細胞4×104個(各々、ウェル1つ当たり50μl当たりの
細胞2×104個ずつ)で播種した。次に、CD16+NKエフェクター細胞(E)を、
回収し、洗浄し、1ml当たりの細胞0.2×106個で再懸濁させた。次いで、細胞を
、ウェル1つ当たり100μl当たりの細胞2×104個(E:T=0.5:1)で播種
した。リツキシマブ抗体またはセツキシマブ抗体は、抗体を欠く対照溶液と共に、0.4
μg/mlで調製し、溶液を、ウェルへと、以下:(i)リツキシマブ(抗CD20)対
照:各ウェル内0.1μg/mlの最終濃度で、ウェル1つ当たり50μl;(ii)セ
ツキシマブ(抗HER1):各ウェル内0.1μg/mlの最終濃度で、ウェル1つ当た
り50μl;(iii)対照溶液(抗体を伴わない):各ウェル内0μg/mlの最終濃
度で、ウェル1つ当たり50μlの通りに添加した。各ウェル内の最終容量を、200μ
lへと調整した。溶液を、十分に混合し、4、8、16、および24時間にわたり培養し
た。インキュベーションの後、細胞を洗浄し、Human Fc Blockの存在下で
、CD3-BV786により染色した。次いで、細胞を、FACS緩衝液により、2回に
わたり洗浄し、7AADを含有する、50μlのFAC緩衝液中に、10分間にわたり再
懸濁させ、次いで、解析した。図13A~13Bは、セツキシマブの存在下で、細胞表面
ポリペプチド上に、潜在的な二量体化HER1t変異体を含む、次世代HER1tポリペ
プチド構築物(HER1t8、HER1t9、およびHER1t10)が、ADCCの、
非二量体化膜貫通ドメイン(HER1t対照)を含むポリペプチド構築物と比べた改善を
媒介することを裏付ける。
細胞に対するADCCを誘導する能力を確認した。CD19CAR-mbIL15-T細
胞は、CD19 CARおよびmbIL15-HER1tトランスポゾンおよびSB11
トランスポザーゼのエレクトロトランスファーにより作出した。ADCCアッセイのため
に、遺伝子改変T細胞を、ex vivoの、照射されたCD19+フィーダー細胞上で
、数量的に拡大した。mbIL15-HER1tトランスポゾンがバイシストロニックデ
ザインになっているため、mbIL15を発現させると、CD19 CAR-mbIL1
5-T細胞は、HER1t1を共発現した。同じCD19+フィーダー細胞を使用して、
CD19 CARトランスポゾンおよびSB11トランスポザーゼのトランスフェクショ
ンにより作出された、mbIL15-HER1tの発現を欠く、陰性対照のCD19 C
AR+mbIL15-HER1tnegT細胞を、ex vivoにおいて、数量的に拡
大した。内因性FcRを発現する、拡大された同種NK細胞を、エフェクター細胞として
使用し、標識化CAR+T細胞と共に、10μg/mLのセツキシマブ、または陰性対照
として用いられる抗CD20抗体(リツキシマブ)の存在下、10:1のE:T比で、一
晩にわたり共培養した。抗体による処置後に、培養物中に残存するmbIL15-HER
1t+T細胞を、フローサイトメトリーにより決定して、殺滅パーセントを計算した。セ
ツキシマブの添加は、CD19-mbIL15-CAR T細胞のうちの、>90%のm
bIL15-HER1t+集団の消失を結果としてもたらした(図14)。リツキシマブ
は、CD19-mbIL15-CAR-T細胞の、低レベルの非特異的消失を示した。セ
ツキシマブは、CAR+mbIL15-HER1tnegT細胞の、有意なレベルの溶解
を呈することができなかったことから、HER1t特異的な作用機構が確認される。この
実験で用いられた、10μg/mLの濃度のセツキシマブは、セツキシマブを投与された
患者において、既に報告された範囲内である。これらのデータは、望ましくない臨床作用
の発生に起因して必要とされる場合に、CD19 CAR-mbIL15-T細胞を枯渇
させる、セツキシマブの使用を支持する。
1T細胞5×106個およびKHYG-1-CD16high細胞5×106個を、各マ
ウスへと、腹腔内(IP)注射した。同じ日に、マウスを無作為化し、生理食塩液または
セツキシマブ(0.5mg:IP)で処置した。腹腔内洗浄液を、1日目に採取し、フロ
ーサイトメトリー評価を実施して、両方の群内のマウスに由来するCAR-HER1t1
T細胞の頻度について評価した。CAR-HER1t1 T細胞の絶対細胞カウントも
また実施した。データ(示さない)は、生理食塩液で処置されたマウスとは対照的に、H
ER1t1タグを発現するCAR T細胞を特異的に消失させる、セツキシマブの能力を
裏付ける。
業者には、このような実施形態が、例だけを目的として提示されていることが明らかであ
ろう。今や、本開示から逸脱しない限りにおいて、当業者は、多数の変更、変化、および
代用に想到するであろう。本明細書で記載される実施形態、またはこれらの実施形態、も
しくはその中で記載される態様のうちの1または複数の組合せに対する、多様な代替物を
、本開示の実施において利用しうることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本開
示の範囲を規定するものであり、これらの特許請求の範囲の範囲内にある方法および構造
、ならびにそれらの均等物は、その対象となることが意図される。
本発明は以下の態様を含み得る。
[1]
少なくともHER1ドメインIIIまたはその断片と、トランケート型HER1ドメインIVとからなるトランケート型非免疫原性HER1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記HER1ポリペプチドが、抗HER1抗体に結合し、
前記HER1ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、
ポリヌクレオチド。
[2]
前記トランケート型HER1ドメインIVが、前記HER1ドメインIVのうちの、少なくとも10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、または50%のトランケーションを含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
[3]
前記トランケート型HER1ドメインIVが、配列番号203、204、205、206、207、208、および209に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
[4]
前記トランケート型HER1ドメインIVが、配列番号203、204、205、206、207、208、および209に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項3に記載のポリヌクレオチド。
[5]
前記HER1ドメインIIIまたはその断片が、配列番号200に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
[6]
前記HER1ドメインIIIが、配列番号200に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項5に記載のポリヌクレオチド。
[7]
CD28膜貫通ドメインと、前記HER1ポリペプチドを、前記CD28膜貫通ドメインへと共役するためのペプチドリンカーとをさらにコードする、請求項1から6のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[8]
配列番号57に示される配列を含むポリペプチド配列を含むポリペプチド構築物をコードする、請求項7に記載のポリヌクレオチド。
[9]
前記抗HER1抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[10]
抗CD20抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD20ポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドであって、
前記トランケート型非免疫原性CD20ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、ポリヌクレオチド。
[11]
前記CD20ポリペプチドが、配列番号109に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項10に記載のポリヌクレオチド。
[12]
前記CD20ポリペプチドが、配列番号109の配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項10に記載のポリヌクレオチド。
[13]
前記CD20ポリペプチドが、天然CD20の、少なくとも50%、60%、70%、80%、または90%の結合効率で、前記抗CD20抗体に結合する、請求項10から12のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[14]
前記抗CD20抗体が、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項13に記載のポリヌクレオチド。
[15]
抗CD52抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD52ポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドであって、
前記トランケート型非免疫原性CD52ポリペプチドが、内因性受容体に結合せず、
前記非免疫原性CD52ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、
ポリヌクレオチド。
[16]
前記CD52ポリペプチドが、配列番号143に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項15に記載のポリヌクレオチド。
[17]
前記CD52ポリペプチドが、配列番号143に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項16に記載のポリヌクレオチド。
[18]
少なくとも1つの異種遺伝子をコードする、少なくとも1つの配列をさらに含む細胞内で発現される、請求項10から17のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[19]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項18に記載のポリヌクレオチド。
[20]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つを含む、請求項18に記載のポリヌクレオチド。
[21]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、CARを含み、前記CARが、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請求項20に記載のポリヌクレオチド。
[22]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、サイトカインを含む、請求項18から20のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[23]
前記サイトカインが、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およびIL-15とIL-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む、請求項22に記載のポリヌクレオチド。
[24]
前記サイトカインが、分泌形態である、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
[25]
前記サイトカインが、膜結合形態である、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
[26]
請求項10から25のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
[27]
レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項26に記載のベクター。
[28]
前記非ウイルスベクターが、Sleeping Beautyトランスポゾンである、請求項27に記載のベクター。
[29]
ゲノム編集により、操作細胞へと組み込まれる、請求項10から25のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[30]
前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求項29に記載のポリヌクレオチド。
[31]
請求項10から25および29から30のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む操作細胞。
[32]
T細胞またはNK細胞である、請求項31に記載の操作細胞。
[33]
細胞表面ポリペプチドと、膜貫通二量体化ドメインと
を含むポリペプチド構築物であって、
前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、
前記細胞表面ポリペプチドが、所定の抗体またはその変異体もしくは断片に結合する、ポリペプチド構築物。
[34]
前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD20ポリペプチド、またはCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項33に記載のポリペプチド構築物。
[35]
前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチドを含み、前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構築物。
[36]
前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項35に記載のポリペプチド構築物。
[37]
前記細胞表面ポリペプチドが、CD20ポリペプチドを含み、前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構築物。
[38]
前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項37に記載のポリペプチド構築物。
[39]
前記細胞表面ポリペプチドが、LNGFRポリペプチドを含み、前記LNGFRポリペプチドが、配列番号156、配列番号158、または配列番号160に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構築物。
[40]
前記細胞表面ポリペプチドが、LNGFRポリペプチドを含み、前記LNGFRポリペプチドが、配列番号156、配列番号158、または配列番号160に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構築物。
[41]
前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項33から40のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[42]
前記膜貫通二量体化ドメインが、相補的な二量体化ドメインと共に、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成しうる、請求項33から41のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[43]
前記膜貫通二量体化ドメインが、少なくとも1つのシステイン残基を含む、請求項33から42のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[44]
前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項33から43のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[45]
前記細胞表面ポリペプチドが、少なくともHER1ポリペプチドを含む、請求項44に記載のポリペプチド構築物。
[46]
操作細胞内で発現される、請求項33から45のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[47]
前記操作細胞が、動物細胞である、請求項46に記載のポリペプチド構築物。
[48]
前記動物細胞が、ヒト細胞である、請求項47に記載のポリペプチド構築物。
[49]
前記ヒト細胞が、T細胞またはNK細胞である、請求項48に記載のポリペプチド構築物。
[50]
前記操作細胞が、Sleeping Beautyトランスポザーゼをさらに含む、請求項46から49のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[51]
前記操作細胞が、少なくとも1つの、さらなる外因性ポリペプチドをさらに発現する、請求項46から50のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[52]
前記操作細胞が、少なくとも1つの、外因性受容体ポリペプチドまたはその断片をさらに発現する、請求項46から50のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[53]
前記操作細胞が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求項46から50のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[54]
前記操作細胞が、少なくとも1つのCARをさらに発現し、前記CARが、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請求項53に記載のポリペプチド構築物。
[55]
前記操作細胞が、少なくとも1つの組換えサイトカインをさらに発現する、請求項52から53のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[56]
前記組換えサイトカインが、IL-15、mbIL-15、IL-2、IL-12、またはIL-21である、請求項55に記載のポリペプチド構築物。
[57]
ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポリヌクレオチドによりコードされる、請求項46から56のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[58]
前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求項57に記載のポリペプチド構築物。
[59]
前記細胞表面ポリペプチドを、前記膜貫通二量体化ドメインと融合させるリンカーを含む、請求項33から58のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[60]
請求項33から59のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物を含む、ポリペプチドのホモ二量体またはヘテロ二量体。
[61]
膜貫通二量体化ドメインと融合させた非免疫原性細胞表面ポリペプチド
を含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドであって、前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導する、
ポリヌクレオチド。
[62]
前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項61に記載のポリヌクレオチド。
[63]
前記細胞表面ポリペプチドが、任意の内因性シグナル伝達機能またはトラフィッキング機能を含有しない、請求項61に記載のポリヌクレオチド。
[64]
少なくとも1つの異種遺伝子をコードする、少なくとも1つの配列をさらに含む細胞内で発現された、請求項61から63のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[65]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項64に記載のポリヌクレオチド。
[66]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つを含む、請求項64に記載のポリヌクレオチド。
[67]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、前記CARを含み、前記CARが、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請求項66に記載のポリヌクレオチド。
[68]
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、サイトカインを含む、請求項66から67のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[69]
前記サイトカインが、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およびIL-15とIL-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む、請求項68に記載のポリヌクレオチド。
[70]
前記サイトカインが、分泌形態である、請求項68に記載のポリヌクレオチド。
[71]
前記サイトカインが、膜結合形態である、請求項68に記載のポリヌクレオチド。
[72]
2A、GSG-2A、GSGリンカー(配列番号16)、SGSGリンカー(配列番号18)、フューリンリンク変異体、およびそれらの誘導体を含むポリペプチドリンカーをコードする、少なくとも1つの配列を含む、請求項61から71のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[73]
前記2Aリンカーが、p2Aリンカー、T2Aリンカー、F2Aリンカー、またはE2Aリンカーである、請求項72に記載のポリヌクレオチド。
[74]
前記ポリペプチド構築物が、細胞を濃縮するか、細胞を選択するか、または前記細胞表面ポリペプチドを発現する細胞における細胞死を誘導するタグとして作用する、請求項61から73のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[75]
前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項61から74のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[76]
前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項61から75のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[77]
請求項61から76のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
[78]
レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項77に記載のベクター。
[79]
前記非ウイルスベクターが、Sleeping Beautyトランスポゾンである、請求項78に記載のベクター。
[80]
ゲノム編集により、操作細胞へと組み込まれる、請求項61から76のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
[81]
前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求項80に記載のポリヌクレオチド。
[82]
対象における遺伝子操作細胞の活性を調節する方法であって、
前記対象へ、膜貫通二量体化ドメインと融合させた細胞表面ポリペプチドを含むポリペプチド構築物をコードする、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって、前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、前記細胞表面ポリペプチドが、所定の結合パートナーまたはその変異体もしくは断片に結合する、ステップと;
前記遺伝子操作細胞に結合し、それにより、前記遺伝子操作細胞の活性を調節するのに十分な量で、前記対象へ、前記所定の結合パートナーを提供するステップと
を含む方法。
[83]
前記細胞表面ポリペプチドが、非免疫原性ポリペプチドである、請求項82に記載の方法。
[84]
前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項82から83のいずれか一項に記載の方法。
[85]
前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項82から84のいずれか一項に記載の方法。
[86]
前記膜貫通二量体化ドメインが、相補的な二量体化ドメインと共に、ホモ二量体またはヘテロ二量体を形成しうる、請求項82から85のいずれか一項に記載の方法。
[87]
前記膜貫通二量体化ドメインが、少なくとも1つのシステイン残基を含む、請求項82から85のいずれか一項に記載の方法。
[88]
前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もしくは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項82から85のいずれか一項に記載の方法。
[89]
前記結合パートナーが、抗体、またはその細胞表面ポリペプチド結合性領域を含む、請求項82から88のいずれか一項に記載の方法。
[90]
前記抗体が、モノクローナル抗体、scFv、scFab、ダイアボディー、およびラクダ科動物抗体のうちの少なくとも1つを含む、請求項89に記載の方法。
[91]
前記抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、アレムツズマブ、パニツムマブ、およびネシツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項89に記載の方法。
[92]
前記遺伝子操作細胞が、T細胞およびNK細胞のうちの少なくとも1つを含む、請求項82から91のいずれか一項に記載の方法。
[93]
前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つの、さらなる外因性ポリペプチドをさらに発現する、請求項82から92のいずれか一項に記載の方法。
[94]
前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求項82から92のいずれか一項に記載の方法。
[95]
前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つのCARをさらに発現し、前記CARが、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請求項94に記載の方法。
[96]
前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つの組換えサイトカインをさらに発現する、請求項94に記載の方法。
[97]
前記組換えサイトカインが、IL-15、mbIL-15、IL-2、IL-12、およびIL-21のうちの少なくとも1つを含む、請求項96に記載の方法。
[98]
前記所定の結合パートナーを、サイトカインストームまたは全身性炎症性応答と関連する、少なくとも1つの症状の軽減を引き起こすのに十分な量で提供する、請求項82から97のいずれか一項に記載の方法。
[99]
前記所定の結合パートナーを、腫瘍溶解症候群と関連する、少なくとも1つの症状の軽減を引き起こすのに十分な量で提供する、請求項82から98のいずれか一項に記載の方法。
[100]
前記ポリペプチド構築物が、ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポリヌクレオチドによりコードされる、請求項82から99のいずれか一項に記載の方法。
[101]
前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求項100に記載の方法。
[102]
請求項1~25、29~30、61~76、および80~81のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。
[103]
がんを処置する方法であって、対象へ、有効量の、請求項1~25、29~30、61~76、および80~81のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む操作細胞を投与するステップを含む方法。
[104]
前記操作細胞上で発現させたポリペプチドへの結合が可能な、少なくとも1つの結合パートナーを投与するステップをさらに含む、請求項103に記載の方法。
[105]
前記結合パートナーが、抗体である、請求項104に記載の方法。
[106]
対象における遺伝子操作細胞の活性を調節する方法であって、
前記対象へ、第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドと、第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドとを含むキメラポリペプチドである細胞表面ポリペプチドを含むポリペプチド構築物をコードする、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって、前記細胞表面ポリペプチドが、少なくとも1つの所定の結合パートナーまたはその変異体もしくは断片に結合する、ステップと;
前記遺伝子操作細胞に結合し、それにより、前記遺伝子操作細胞の活性を調節するのに十分な量で、前記対象へ、前記所定の結合パートナーを提供するステップと
を含む方法。
[107]
前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、EGFRファミリーのメンバーの断片または誘導体を含む、請求項106に記載の方法。
[108]
前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、EGFRファミリーのメンバーの断片または誘導体を含む、請求項106または107に記載の方法。
[109]
前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER1ポリペプチドを含む、請求項106から108のいずれか一項に記載の方法。
[110]
前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項109に記載の方法。
[111]
前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項110に記載の方法。
[112]
前記HER1ポリペプチドが、配列番号211に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項111に記載の方法。
[113]
前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER2ポリペプチド、ErbB3ポリペプチド、またはErbB4ポリペプチドを含む、請求項109から112のいずれか一項に記載の方法。
[114]
前記ポリペプチド構築物が、配列番号89、配列番号93、配列番号97、配列番号101、または配列番号105に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項113に記載の方法。
[115]
前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、前記HER1ポリペプチドに結合する、請求項109に記載の方法。
[116]
前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項115に記載の方法。
[117]
前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドに結合する、第2の所定の結合パートナーをさらに含む、請求項116に記載の方法。
[118]
前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER2ポリペプチドであり、前記第2の所定の結合パートナーが、ペルツズマブである、請求項117に記載の方法。
[119]
前記ポリペプチド構築物が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項106に記載の方法。
[120]
前記ポリペプチド構築物が、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項106に記載の方法。
[121]
前記膜貫通ドメインが、膜貫通二量体化ドメインを含む、請求項120に記載の方法。
[122]
前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメイン、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメイン、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項121に記載の方法。
[123]
前記膜貫通二量体化ドメインが、配列番号26、配列番号28、配列番号30、または配列番号32に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項121に記載の方法。
[124]
前記膜貫通二量体化ドメインが、配列番号26、配列番号28、配列番号30、または配列番号32に示されるポリペプチド配列を含む、請求項123に記載の方法。
[125]
前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、CD20ポリペプチドを含む、請求項106に記載の方法。
[126]
前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項125に記載の方法。
[127]
前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項126に記載の方法。
[128]
前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項125から127のいずれか一項に記載の方法。
[129]
HER1ドメインIIIと、トランケート型HER1ドメインIVとからなるトランケート型非免疫原性HER1ポリペプチドであって、抗HER1抗体に結合するHER1ポリペプチドと;
CD28膜貫通ドメインと;
前記HER1ポリペプチドを、前記CD28膜貫通ドメインへと共役するためのペプチドリンカーと
を含むポリペプチド構築物であって、
操作細胞内で発現される、
ポリペプチド構築物。
[130]
前記HER1ドメインIIIが、配列番号200に示される配列を含むポリペプチド配列を含み、前記HER1ドメインIVが、配列番号203に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項129に記載のポリペプチド構築物。
[131]
前記CD28膜貫通ドメインが、配列番号36に示される配列を含むポリペプチド配列を含み、前記ペプチドリンカーが、G4Sペプチドリンカー(配列番号221)を含む、請求項130に記載のポリペプチド構築物。
[132]
前記G4Sペプチドリンカー(配列番号221)が、配列番号22に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項131に記載のポリペプチド構築物。
[133]
配列番号57に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項132に記載のポリペプチド構築物。
[134]
前記抗HER1抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項129から133のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
[135]
抗CD20抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD20ポリペプチド
を含むポリペプチド構築物であって、
操作細胞内で発現されるポリペプチド構築物。
[136]
配列番号109に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有する、請求項135に記載のポリペプチド構築物。
[137]
配列番号109に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項136に記載のポリペプチド構築物。
[138]
前記抗CD20抗体が、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項135から137のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
Claims (138)
- 少なくともHER1ドメインIIIまたはその断片と、トランケート型HER1ドメイ
ンIVとからなるトランケート型非免疫原性HER1ポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドであって、前記HER1ポリペプチドが、抗HER1抗体に結合し、
前記HER1ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、
ポリヌクレオチド。 - 前記トランケート型HER1ドメインIVが、前記HER1ドメインIVのうちの、少
なくとも10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、または5
0%のトランケーションを含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。 - 前記トランケート型HER1ドメインIVが、配列番号203、204、205、20
6、207、208、および209に示される配列に対する、少なくとも70%、75%
、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペ
プチド配列を含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。 - 前記トランケート型HER1ドメインIVが、配列番号203、204、205、20
6、207、208、および209に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求
項3に記載のポリヌクレオチド。 - 前記HER1ドメインIIIまたはその断片が、配列番号200に示される配列に対す
る、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99
.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。 - 前記HER1ドメインIIIが、配列番号200に示される配列を含むポリペプチド配
列を含む、請求項5に記載のポリヌクレオチド。 - CD28膜貫通ドメインと、前記HER1ポリペプチドを、前記CD28膜貫通ドメイ
ンへと共役するためのペプチドリンカーとをさらにコードする、請求項1から6のいずれ
か一項に記載のポリヌクレオチド。 - 配列番号57に示される配列を含むポリペプチド配列を含むポリペプチド構築物をコー
ドする、請求項7に記載のポリヌクレオチド。 - 前記抗HER1抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマ
ブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パ
ニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項1から8のいず
れか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 抗CD20抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD20ポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドであって、
前記トランケート型非免疫原性CD20ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、
ポリヌクレオチド。 - 前記CD20ポリペプチドが、配列番号109に示される配列に対する、少なくとも7
0%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を
有するポリペプチド配列を含む、請求項10に記載のポリヌクレオチド。 - 前記CD20ポリペプチドが、配列番号109の配列を含むポリペプチド配列を含む、
請求項10に記載のポリヌクレオチド。 - 前記CD20ポリペプチドが、天然CD20の、少なくとも50%、60%、70%、
80%、または90%の結合効率で、前記抗CD20抗体に結合する、請求項10から1
2のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記抗CD20抗体が、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、
ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項13に
記載のポリヌクレオチド。 - 抗CD52抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD52ポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドであって、
前記トランケート型非免疫原性CD52ポリペプチドが、内因性受容体に結合せず、
前記非免疫原性CD52ポリペプチドが、操作細胞内で発現される、
ポリヌクレオチド。 - 前記CD52ポリペプチドが、配列番号143に示される配列に対する、少なくとも7
0%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を
有するポリペプチド配列を含む、請求項15に記載のポリヌクレオチド。 - 前記CD52ポリペプチドが、配列番号143に示される配列を含むポリペプチド配列
を含む、請求項16に記載のポリヌクレオチド。 - 少なくとも1つの異種遺伝子をコードする、少なくとも1つの配列をさらに含む細胞内
で発現される、請求項10から17のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、
請求項18に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(T
CR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つを含む、請求項18に記載のポリヌ
クレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、CARを含み、前記CARが、CD19、CD3
3、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、E
GP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、GD3
、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、MUC
-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRv
III、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請求項
20に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、サイトカインを含む、請求項18から20のいず
れか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記サイトカインが、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およびIL-
15とIL-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む、請求項22に記
載のポリヌクレオチド。 - 前記サイトカインが、分泌形態である、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
- 前記サイトカインが、膜結合形態である、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項10から25のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである
、請求項26に記載のベクター。 - 前記非ウイルスベクターが、Sleeping Beautyトランスポゾンである、
請求項27に記載のベクター。 - ゲノム編集により、操作細胞へと組み込まれる、請求項10から25のいずれか一項に
記載のポリヌクレオチド。 - 前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求
項29に記載のポリヌクレオチド。 - 請求項10から25および29から30のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含
む操作細胞。 - T細胞またはNK細胞である、請求項31に記載の操作細胞。
- 細胞表面ポリペプチドと、膜貫通二量体化ドメインと
を含むポリペプチド構築物であって、
前記膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、
前記細胞表面ポリペプチドが、所定の抗体またはその変異体もしくは断片に結合する、
ポリペプチド構築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD
20ポリペプチド、またはCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項
33に記載のポリペプチド構築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチドを含み、前記HER1ポリペプチ
ドが、配列番号211、212、213、214、215、216、または217に示さ
れる配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99
%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポ
リペプチド構築物。 - 前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、2
16、または217に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項35に記載の
ポリペプチド構築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、CD20ポリペプチドを含み、前記CD20ポリペプチ
ドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号220に示される配列に対する
、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または99.
5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構築物
。 - 前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号22
0に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項37に記載のポリペプチド構築
物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、LNGFRポリペプチドを含み、前記LNGFRポリペ
プチドが、配列番号156、配列番号158、または配列番号160に示される配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または9
9.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構
築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、LNGFRポリペプチドを含み、前記LNGFRポリペ
プチドが、配列番号156、配列番号158、または配列番号160に示される配列に対
する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または9
9.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項34に記載のポリペプチド構
築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項33から40のいず
れか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、相補的な二量体化ドメインと共に、ホモ二量体または
ヘテロ二量体を形成しうる、請求項33から41のいずれか一項に記載のポリペプチド構
築物。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、少なくとも1つのシステイン残基を含む、請求項33
から42のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしく
は変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もし
くは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項33から43のいずれか
一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、少なくともHER1ポリペプチドを含む、請求項44に
記載のポリペプチド構築物。 - 操作細胞内で発現される、請求項33から45のいずれか一項に記載のポリペプチド構
築物。 - 前記操作細胞が、動物細胞である、請求項46に記載のポリペプチド構築物。
- 前記動物細胞が、ヒト細胞である、請求項47に記載のポリペプチド構築物。
- 前記ヒト細胞が、T細胞またはNK細胞である、請求項48に記載のポリペプチド構築
物。 - 前記操作細胞が、Sleeping Beautyトランスポザーゼをさらに含む、請
求項46から49のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記操作細胞が、少なくとも1つの、さらなる外因性ポリペプチドをさらに発現する、
請求項46から50のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記操作細胞が、少なくとも1つの、外因性受容体ポリペプチドまたはその断片をさら
に発現する、請求項46から50のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記操作細胞が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(TCR)、およびサイ
トカインのうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求項46から50のいずれか一項
に記載のポリペプチド構築物。 - 前記操作細胞が、少なくとも1つのCARをさらに発現し、前記CARが、CD19、
CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CE
A、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、
GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、
MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EG
FRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、
請求項53に記載のポリペプチド構築物。 - 前記操作細胞が、少なくとも1つの組換えサイトカインをさらに発現する、請求項52
から53のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記組換えサイトカインが、IL-15、mbIL-15、IL-2、IL-12、ま
たはIL-21である、請求項55に記載のポリペプチド構築物。 - ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポリヌクレオチドによりコードされ
る、請求項46から56のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求
項57に記載のポリペプチド構築物。 - 前記細胞表面ポリペプチドを、前記膜貫通二量体化ドメインと融合させるリンカーを含
む、請求項33から58のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 請求項33から59のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物を含む、ポリペプチド
のホモ二量体またはヘテロ二量体。 - 膜貫通二量体化ドメインと融合させた非免疫原性細胞表面ポリペプチド
を含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドであって、前記膜貫通二量体化
ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導する、
ポリヌクレオチド。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項61に記載のポリヌ
クレオチド。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、任意の内因性シグナル伝達機能またはトラフィッキング
機能を含有しない、請求項61に記載のポリヌクレオチド。 - 少なくとも1つの異種遺伝子をコードする、少なくとも1つの配列をさらに含む細胞内
で発現された、請求項61から63のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、
請求項64に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞受容体(T
CR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つを含む、請求項64に記載のポリヌ
クレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、前記CARを含み、前記CARが、CD19、C
D33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAIX、CD30、ROR1、CEA
、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉酸結合性タンパク質、GD2、G
D3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソテリン、CD22、EGFR、M
UC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGF
RvIII、CD123、およびVEGF-R2のうちの少なくとも1つに結合する、請
求項66に記載のポリヌクレオチド。 - 前記少なくとも1つの異種遺伝子が、サイトカインを含む、請求項66から67のいず
れか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記サイトカインが、IL-15、IL-2、IL-12、IL-21、およびIL-
15とIL-IL-15Rαとの融合体のうちの少なくとも1つを含む、請求項68に記
載のポリヌクレオチド。 - 前記サイトカインが、分泌形態である、請求項68に記載のポリヌクレオチド。
- 前記サイトカインが、膜結合形態である、請求項68に記載のポリヌクレオチド。
- 2A、GSG-2A、GSGリンカー(配列番号16)、SGSGリンカー(配列番号
18)、フューリンリンク変異体、およびそれらの誘導体を含むポリペプチドリンカーを
コードする、少なくとも1つの配列を含む、請求項61から71のいずれか一項に記載の
ポリヌクレオチド。 - 前記2Aリンカーが、p2Aリンカー、T2Aリンカー、F2Aリンカー、またはE2
Aリンカーである、請求項72に記載のポリヌクレオチド。 - 前記ポリペプチド構築物が、細胞を濃縮するか、細胞を選択するか、または前記細胞表
面ポリペプチドを発現する細胞における細胞死を誘導するタグとして作用する、請求項6
1から73のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD
20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項
61から74のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしく
は変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もし
くは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項61から75のいずれか
一項に記載のポリヌクレオチド。 - 請求項61から76のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである
、請求項77に記載のベクター。 - 前記非ウイルスベクターが、Sleeping Beautyトランスポゾンである、
請求項78に記載のベクター。 - ゲノム編集により、操作細胞へと組み込まれる、請求項61から76のいずれか一項に
記載のポリヌクレオチド。 - 前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求
項80に記載のポリヌクレオチド。 - 対象における遺伝子操作細胞の活性を調節する方法であって、
前記対象へ、膜貫通二量体化ドメインと融合させた細胞表面ポリペプチドを含むポリペ
プチド構築物をコードする、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって、前記
膜貫通二量体化ドメインが、前記細胞表面ポリペプチドの二量体化を誘導し、前記細胞表
面ポリペプチドが、所定の結合パートナーまたはその変異体もしくは断片に結合する、ス
テップと;
前記遺伝子操作細胞に結合し、それにより、前記遺伝子操作細胞の活性を調節するのに
十分な量で、前記対象へ、前記所定の結合パートナーを提供するステップと
を含む方法。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、非免疫原性ポリペプチドである、請求項82に記載の方
法。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、HER1ポリペプチド、LNGFRポリペプチド、CD
20ポリペプチド、およびCD52ポリペプチドのうちの少なくとも1つを含む、請求項
82から83のいずれか一項に記載の方法。 - 前記細胞表面ポリペプチドが、内因性受容体に結合しない、請求項82から84のいず
れか一項に記載の方法。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、相補的な二量体化ドメインと共に、ホモ二量体または
ヘテロ二量体を形成しうる、請求項82から85のいずれか一項に記載の方法。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、少なくとも1つのシステイン残基を含む、請求項82
から85のいずれか一項に記載の方法。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメインまたはその断片もしく
は変異体、グリコホリンA-インテグリンβ3キメラ膜貫通ドメインまたはその断片もし
くは変異体、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求項82から85のいずれか
一項に記載の方法。 - 前記結合パートナーが、抗体、またはその細胞表面ポリペプチド結合性領域を含む、請
求項82から88のいずれか一項に記載の方法。 - 前記抗体が、モノクローナル抗体、scFv、scFab、ダイアボディー、およびラ
クダ科動物抗体のうちの少なくとも1つを含む、請求項89に記載の方法。 - 前記抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、アレムツズマブ、パニツムマブ、およびネ
シツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項89に記載の方法。 - 前記遺伝子操作細胞が、T細胞およびNK細胞のうちの少なくとも1つを含む、請求項
82から91のいずれか一項に記載の方法。 - 前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つの、さらなる外因性ポ
リペプチドをさらに発現する、請求項82から92のいずれか一項に記載の方法。 - 前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、キメラ抗原受容体(CAR)、T細胞
受容体(TCR)、およびサイトカインのうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求
項82から92のいずれか一項に記載の方法。 - 前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つのCARをさらに発現
し、前記CARが、CD19、CD33、BCMA、CD44、α-葉酸受容体、CAI
X、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、葉
酸結合性タンパク質、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、メソ
テリン、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、
PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123、およびVEGF-R2のうち
の少なくとも1つに結合する、請求項94に記載の方法。 - 前記遺伝子操作細胞のうちの少なくとも1つが、少なくとも1つの組換えサイトカイン
をさらに発現する、請求項94に記載の方法。 - 前記組換えサイトカインが、IL-15、mbIL-15、IL-2、IL-12、お
よびIL-21のうちの少なくとも1つを含む、請求項96に記載の方法。 - 前記所定の結合パートナーを、サイトカインストームまたは全身性炎症性応答と関連す
る、少なくとも1つの症状の軽減を引き起こすのに十分な量で提供する、請求項82から
97のいずれか一項に記載の方法。 - 前記所定の結合パートナーを、腫瘍溶解症候群と関連する、少なくとも1つの症状の軽
減を引き起こすのに十分な量で提供する、請求項82から98のいずれか一項に記載の方
法。 - 前記ポリペプチド構築物が、ゲノム編集により、前記操作細胞へと組み込まれたポリヌ
クレオチドによりコードされる、請求項82から99のいずれか一項に記載の方法。 - 前記ゲノム編集が、少なくとも部位特異的セリンリコンビナーゼ系の使用を含む、請求
項100に記載の方法。 - 請求項1~25、29~30、61~76、および80~81のいずれか一項に記載の
ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。 - がんを処置する方法であって、対象へ、有効量の、請求項1~25、29~30、61
~76、および80~81のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む操作細胞を投
与するステップを含む方法。 - 前記操作細胞上で発現させたポリペプチドへの結合が可能な、少なくとも1つの結合パ
ートナーを投与するステップをさらに含む、請求項103に記載の方法。 - 前記結合パートナーが、抗体である、請求項104に記載の方法。
- 対象における遺伝子操作細胞の活性を調節する方法であって、
前記対象へ、第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドと、第2のトランケート型
非免疫原性ポリペプチドとを含むキメラポリペプチドである細胞表面ポリペプチドを含む
ポリペプチド構築物をコードする、ある量の遺伝子操作細胞を提供するステップであって
、前記細胞表面ポリペプチドが、少なくとも1つの所定の結合パートナーまたはその変異
体もしくは断片に結合する、ステップと;
前記遺伝子操作細胞に結合し、それにより、前記遺伝子操作細胞の活性を調節するのに
十分な量で、前記対象へ、前記所定の結合パートナーを提供するステップと
を含む方法。 - 前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、EGFRファミリーのメンバー
の断片または誘導体を含む、請求項106に記載の方法。 - 前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、EGFRファミリーのメンバー
の断片または誘導体を含む、請求項106または107に記載の方法。 - 前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER1ポリペプチドを含む、
請求項106から108のいずれか一項に記載の方法。 - 前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、2
16、または217に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85
%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含
む、請求項109に記載の方法。 - 前記HER1ポリペプチドが、配列番号211、212、213、214、215、2
16、または217に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項110に記載
の方法。 - 前記HER1ポリペプチドが、配列番号211に示される配列を含むポリペプチド配列
を含む、請求項111に記載の方法。 - 前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER2ポリペプチド、Erb
B3ポリペプチド、またはErbB4ポリペプチドを含む、請求項109から112のい
ずれか一項に記載の方法。 - 前記ポリペプチド構築物が、配列番号89、配列番号93、配列番号97、配列番号1
01、または配列番号105に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80
%、85%、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド
配列を含む、請求項113に記載の方法。 - 前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、前記HER1ポリペプチドに結合する
、請求項109に記載の方法。 - 前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキ
シマブ、デパツキシズマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツム
マブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む
、請求項115に記載の方法。 - 前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、前記第2のトランケート型非免疫原性
ポリペプチドに結合する、第2の所定の結合パートナーをさらに含む、請求項116に記
載の方法。 - 前記第2のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、HER2ポリペプチドであり、
前記第2の所定の結合パートナーが、ペルツズマブである、請求項117に記載の方法。 - 前記ポリペプチド構築物が、シグナルペプチドをさらに含む、請求項106に記載の方
法。 - 前記ポリペプチド構築物が、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項106に記載の方法
。 - 前記膜貫通ドメインが、膜貫通二量体化ドメインを含む、請求項120に記載の方法。
- 前記膜貫通二量体化ドメインが、グリコホリンA膜貫通ドメイン、グリコホリンA-イ
ンテグリンβ3キメラ膜貫通ドメイン、またはCD3ゼータ膜貫通ドメインを含む、請求
項121に記載の方法。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、配列番号26、配列番号28、配列番号30、または
配列番号32に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、9
0%、95%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請
求項121に記載の方法。 - 前記膜貫通二量体化ドメインが、配列番号26、配列番号28、配列番号30、または
配列番号32に示されるポリペプチド配列を含む、請求項123に記載の方法。 - 前記第1のトランケート型非免疫原性ポリペプチドが、CD20ポリペプチドを含む、
請求項106に記載の方法。 - 前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号22
0に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95
%、99%、または99.5%の同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項125
に記載の方法。 - 前記CD20ポリペプチドが、配列番号218、配列番号219、または配列番号22
0に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項126に記載の方法。 - 前記少なくとも1つの所定の結合パートナーが、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツ
ズマブ、アフツズマブ、ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1
つを含む、請求項125から127のいずれか一項に記載の方法。 - HER1ドメインIIIと、トランケート型HER1ドメインIVとからなるトランケ
ート型非免疫原性HER1ポリペプチドであって、抗HER1抗体に結合するHER1ポ
リペプチドと;
CD28膜貫通ドメインと;
前記HER1ポリペプチドを、前記CD28膜貫通ドメインへと共役するためのペプチ
ドリンカーと
を含むポリペプチド構築物であって、
操作細胞内で発現される、
ポリペプチド構築物。 - 前記HER1ドメインIIIが、配列番号200に示される配列を含むポリペプチド配
列を含み、前記HER1ドメインIVが、配列番号203に示される配列を含むポリペプ
チド配列を含む、請求項129に記載のポリペプチド構築物。 - 前記CD28膜貫通ドメインが、配列番号36に示される配列を含むポリペプチド配列
を含み、前記ペプチドリンカーが、G4Sペプチドリンカー(配列番号221)を含む、
請求項130に記載のポリペプチド構築物。 - 前記G4Sペプチドリンカー(配列番号221)が、配列番号22に示される配列を含
むポリペプチド配列を含む、請求項131に記載のポリペプチド構築物。 - 配列番号57に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項132に記載のポ
リペプチド構築物。 - 前記抗HER1抗体が、リツキシマブ、セツキシマブ、フツキシマブ、デパツキシズマ
ブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブ、マツズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パ
ニツムマブ、およびザルツムマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項129から13
3のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。 - 抗CD20抗体に結合するトランケート型非免疫原性CD20ポリペプチド
を含むポリペプチド構築物であって、
操作細胞内で発現されるポリペプチド構築物。 - 配列番号109に示される配列に対する、少なくとも70%、75%、80%、85%
、90%、95%、99%、または99.5%の同一性を有する、請求項135に記載の
ポリペプチド構築物。 - 配列番号109に示される配列を含むポリペプチド配列を含む、請求項136に記載の
ポリペプチド構築物。 - 前記抗CD20抗体が、リツキシマブ、トシツモマブ、ベルツズマブ、アフツズマブ、
ブロンツベトマブ、およびオビヌツズマブのうちの少なくとも1つを含む、請求項135
から137のいずれか一項に記載のポリペプチド構築物。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762516639P | 2017-06-07 | 2017-06-07 | |
US62/516,639 | 2017-06-07 | ||
PCT/US2018/036357 WO2018226897A1 (en) | 2017-06-07 | 2018-06-06 | Expression of novel cell tags |
JP2019567571A JP7262403B2 (ja) | 2017-06-07 | 2018-06-06 | 新規の細胞タグの発現 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019567571A Division JP7262403B2 (ja) | 2017-06-07 | 2018-06-06 | 新規の細胞タグの発現 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023085527A true JP2023085527A (ja) | 2023-06-20 |
JP2023085527A5 JP2023085527A5 (ja) | 2023-12-04 |
Family
ID=64566601
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019567571A Active JP7262403B2 (ja) | 2017-06-07 | 2018-06-06 | 新規の細胞タグの発現 |
JP2023063807A Pending JP2023085527A (ja) | 2017-06-07 | 2023-04-11 | 新規の細胞タグの発現 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019567571A Active JP7262403B2 (ja) | 2017-06-07 | 2018-06-06 | 新規の細胞タグの発現 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US11118168B2 (ja) |
EP (1) | EP3635132A4 (ja) |
JP (2) | JP7262403B2 (ja) |
KR (2) | KR20230115343A (ja) |
CN (1) | CN110997920A (ja) |
AU (1) | AU2018281316B2 (ja) |
CA (1) | CA3065930A1 (ja) |
IL (2) | IL306102A (ja) |
WO (1) | WO2018226897A1 (ja) |
ZA (2) | ZA201908215B (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3568474A1 (en) | 2017-01-10 | 2019-11-20 | Intrexon Corporation | Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems |
KR20200096758A (ko) * | 2017-10-18 | 2020-08-13 | 인트렉손 코포레이션 | 스페이서를 포함하는 폴리펩타이드 조성물 |
US11390655B2 (en) * | 2017-11-16 | 2022-07-19 | Kite Pharma, Inc. | Modified chimeric antigen receptors and methods of use |
SE544015C2 (en) * | 2019-06-18 | 2021-11-02 | Tx Medic Ab | Allogenic car-t cell therapy |
GB202007169D0 (en) * | 2020-05-14 | 2020-07-01 | Ospedale San Raffaele Srl | Epidermal growth factor receptor |
JP2023550148A (ja) | 2020-11-20 | 2023-11-30 | シンシア・イノベーション・インコーポレイテッド | がん免疫治療に用いられる武装二重car-t組成物及び方法 |
US11661459B2 (en) | 2020-12-03 | 2023-05-30 | Century Therapeutics, Inc. | Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof |
EP4271817A2 (en) * | 2020-12-30 | 2023-11-08 | Alaunos Therapeutics, Inc. | Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof |
AU2022205683A1 (en) * | 2021-01-11 | 2023-07-06 | Precigen, Inc. | Chimeric receptor therapy |
WO2022177677A1 (en) * | 2021-02-16 | 2022-08-25 | City Of Hope | Truncated domain iv egfr and uses thereof |
CA3209732A1 (en) * | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Drew Caldwell DENIGER | Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof |
WO2022187289A1 (en) | 2021-03-01 | 2022-09-09 | Exuma Biotech Corp. | Methods and compositions for the delivery of retroviral particles |
MX2024003250A (es) * | 2021-09-22 | 2024-05-28 | Sonoma Biotherapeutics Inc | Marcadores de superficie celular il5ra. |
WO2023168305A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Exuma Biotech Corp. | Viral particles with membrane-bound hyaluronidase |
WO2024015724A1 (en) * | 2022-07-10 | 2024-01-18 | Precigen, Inc. | POLYCISTRONIC miRNA CONSTRUCTS FOR IMMUNE CHECKPOINT INHIBITION |
WO2024117920A1 (en) * | 2022-11-29 | 2024-06-06 | Malcorp Biodiscoveries Limited | Novel cd20 protein |
CN118206620A (zh) * | 2022-12-09 | 2024-06-18 | 上海细胞治疗集团股份有限公司 | 一种多肽标签及其应用 |
Family Cites Families (77)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US6534055B1 (en) | 1988-11-23 | 2003-03-18 | Genetics Institute, Inc. | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
US6905680B2 (en) | 1988-11-23 | 2005-06-14 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating HIV infected subjects |
US6352694B1 (en) | 1994-06-03 | 2002-03-05 | Genetics Institute, Inc. | Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells |
US5858358A (en) | 1992-04-07 | 1999-01-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
US5585362A (en) | 1989-08-22 | 1996-12-17 | The Regents Of The University Of Michigan | Adenovirus vectors for gene therapy |
US5283173A (en) | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
WO1991014695A1 (en) | 1990-03-22 | 1991-10-03 | The Salk Institute For Biological Studies | Insect retinoid receptor compositions and methods |
DE69128037T2 (de) | 1990-11-13 | 1998-05-07 | Immunex Corp., Seattle, Wash. | Bifunktionelle wählbare fusionsgene |
US5350674A (en) | 1992-09-04 | 1994-09-27 | Becton, Dickinson And Company | Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof |
CA2163427A1 (en) | 1993-05-21 | 1994-12-08 | Stephen D. Lupton | Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene |
US7175843B2 (en) | 1994-06-03 | 2007-02-13 | Genetics Institute, Llc | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
ES2237764T3 (es) | 1995-03-03 | 2005-08-01 | Syngenta Participations Ag | Control de la expresion genica en plantas por transactivacion mediada por un receptor en presencia de un ligando quimico. |
WO1996027392A1 (en) | 1995-03-08 | 1996-09-12 | The Scripps Research Institute | Antigen presenting system and methods for activation of t-cells |
US7067318B2 (en) | 1995-06-07 | 2006-06-27 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods for transfecting T cells |
US6692964B1 (en) | 1995-05-04 | 2004-02-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for transfecting T cells |
US5885827A (en) | 1996-01-23 | 1999-03-23 | The Regents Of The Universtiy Of California | Eukaryotic high rate mutagenesis system |
IL126418A0 (en) | 1996-04-05 | 1999-05-09 | Salk Inst For Biological Studi | Hormone-mediated methods for modulating expression of exogenous genes and pharmaceutical compositions for modulating the same |
IL126843A (en) | 1996-05-23 | 2007-06-17 | Scripps Research Inst | Mhc class ii antigen-presenting systems and methods for activating cd4+t cells in vitro |
ATE466948T1 (de) | 1997-03-11 | 2010-05-15 | Univ Minnesota | Dns-basiertes transposon-system für die einführung von nucleinsäure in die dns einer zelle |
EP0998560A1 (en) | 1997-07-10 | 2000-05-10 | The Salk Institute For Biological Studies | Modified lepidopteran receptors and hybrid multifunctional proteins for use in regulation of transgene expression |
US6333318B1 (en) | 1998-05-14 | 2001-12-25 | The Salk Institute For Biological Studies | Formulations useful for modulating expression of exogenous genes in mammalian systems, and products related thereto |
US6790662B1 (en) | 1999-03-12 | 2004-09-14 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Method of isolating CD8+ cells, and related hybridoma cells antibodies and polypeptides |
WO2001030965A2 (en) | 1999-10-28 | 2001-05-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of in vivo gene transfer using a sleeping beauty transposon system |
US6797514B2 (en) | 2000-02-24 | 2004-09-28 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
DE60130435T2 (de) | 2000-02-24 | 2009-07-23 | Invitrogen Corp., Carlsbad | Gleichzeitige stimulation und konzentration von zellen |
US7572631B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-08-11 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of T cells |
US6867041B2 (en) | 2000-02-24 | 2005-03-15 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
CA2404253C (en) | 2000-03-22 | 2014-05-13 | Rohm And Haas Company | Novel ecdysone receptor-based inducible gene expression system |
US20040033600A1 (en) | 2001-03-21 | 2004-02-19 | Palli Subba Reddy | Ecdysone receptor-based inducible gene expression system |
US8105825B2 (en) | 2000-10-03 | 2012-01-31 | Intrexon Corporation | Multiple inducible gene regulation system |
US9493540B2 (en) | 2001-02-20 | 2016-11-15 | Intrexon Corporation | Ecdysone receptor/invertebrate retinoid X receptor-based inducible gene expression system |
US20040071671A1 (en) | 2001-02-20 | 2004-04-15 | Leturcq Didier J. | Cell therapy method for the treatment of tumors |
CA2438133C (en) | 2001-02-20 | 2015-01-27 | Rheogene, Inc. | Novel substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system |
JP4328094B2 (ja) | 2001-02-20 | 2009-09-09 | イントレクソン・コーポレイション | 新規置換突然変異体受容体および核受容体−ベースの誘導性遺伝子発現システムにおけるその使用 |
DK1572862T3 (da) | 2001-02-20 | 2012-11-26 | Intrexon Corp | Kimære, retinoide x-receptorer og deres anvendelse i et hidtil ukendt ecdysonrecepttorbaseret inducerbart genekspressionssystem |
US7638598B2 (en) | 2001-04-06 | 2009-12-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | ErbB interface peptidomimetics and methods of use thereof |
JP2005507247A (ja) | 2001-09-26 | 2005-03-17 | レオジーン・ホールディングス,インコーポレーテッド | コナジラミエクジソン受容体核酸、ポリペプチド、およびそれらの使用 |
EP1436394A4 (en) | 2001-09-26 | 2004-12-29 | Rheo Gene Holdings Inc | CICADA ECDYSON RECEPTOR NUCLEIC ACIDS, POLYPEPTIDES AND THEIR USE |
US7745140B2 (en) | 2002-01-03 | 2010-06-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool |
US8227432B2 (en) | 2002-04-22 | 2012-07-24 | Regents Of The University Of Minnesota | Transposon system and methods of use |
EP1549748B1 (en) | 2002-10-09 | 2014-10-01 | Immunocore Ltd. | Single chain recombinant t cell receptors |
US7985739B2 (en) | 2003-06-04 | 2011-07-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced sleeping beauty transposon system and methods for using the same |
US7935510B2 (en) | 2004-04-30 | 2011-05-03 | Intrexon Corporation | Mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system |
ES2653570T3 (es) | 2004-05-27 | 2018-02-07 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Células presentadoras de antígeno artificiales novedosas y usos de las mismas |
JP5563194B2 (ja) | 2004-06-29 | 2014-07-30 | イムノコア リミテッド | 改変t細胞レセプターを発現する細胞 |
GB0523954D0 (en) * | 2005-11-24 | 2006-01-04 | Ucb Celltech | Bioassays |
EP1996232B1 (en) | 2006-03-01 | 2016-04-06 | Janssen Pharmaceutica N.V. | CANCER TREATMENT COMBINING LYMPHODEPLETING AGENT WITH CTLs AND CYTOKINES |
BRPI0713272A2 (pt) | 2006-06-12 | 2017-05-02 | Receptor Biologix Inc | produtos terapêuticos específicos ao receptor na superfície de pan-células |
CA2665568C (en) | 2006-10-04 | 2018-01-09 | Janssen Pharmaceutica, N.V. | Preparation of inactivated artificial antigen presenting cells and their use in cell therapies |
EP2126105A4 (en) | 2007-02-20 | 2010-11-03 | Anaptysbio Inc | SOMATIC HYPERPERMUTATION SYSTEMS |
EP2160461B1 (en) | 2007-07-04 | 2012-08-08 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) | Hyperactive variants of the transposase protein of the transposon system sleeping beauty |
WO2009045370A2 (en) | 2007-09-28 | 2009-04-09 | Intrexon Corporation | Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof |
ES2636460T3 (es) | 2007-10-08 | 2017-10-05 | Intrexon Corporation | Células dendríticas modificadas por ingeniería y usos para el tratamiento del cáncer |
US7985559B2 (en) | 2007-10-19 | 2011-07-26 | Amgen Inc. | Methods of selecting epidermal growth factor receptor (EGFR) binding agents |
CN102575227A (zh) | 2008-10-08 | 2012-07-11 | 英特瑞克斯顿股份有限公司 | 表达多种免疫调节剂的工程改造细胞及其应用 |
PL2496698T3 (pl) | 2009-11-03 | 2019-07-31 | City Of Hope | Skrócony receptor naskórkowego czynnika wzrostu (EGFRt) do selekcji transdukowanych komórek T |
RU2612788C2 (ru) | 2010-03-23 | 2017-03-13 | Интрексон Корпорейшн | Векторы, условно экспрессирующие терапевтические белки, клетки-хозяева, содержащие указанные векторы, и их применение |
CN103298489A (zh) * | 2010-10-29 | 2013-09-11 | 伊缪诺金公司 | 新型egfr结合分子及其免疫偶联物 |
WO2012122025A2 (en) | 2011-03-04 | 2012-09-13 | Intrexon Corporation | Vectors conditionally expressing protein |
WO2013123061A1 (en) * | 2012-02-13 | 2013-08-22 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
EP2844267A4 (en) | 2012-04-25 | 2016-02-24 | Ligacept Llc | BROAD SPECTRUM ERBB LIGAND BINDING MOLECULES AND METHODS OF USING THE SAME |
CN105122032B (zh) | 2013-03-12 | 2018-10-12 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 胶体考马斯染剂 |
SG11201509609SA (en) | 2013-05-24 | 2015-12-30 | Univ Texas | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
CN104341504B (zh) | 2013-08-06 | 2017-10-24 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 双特异性抗体 |
WO2015095249A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-25 | Intrexon Corporation | Single chain il-12 nucleic acids, polypeptids, and uses thereof |
MX2016015834A (es) | 2014-06-02 | 2017-07-19 | Us Health | Receptores quiméricos de antigeno que tienen como diana a cd-19. |
TWI805109B (zh) | 2014-08-28 | 2023-06-11 | 美商奇諾治療有限公司 | 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體 |
WO2016048903A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrexon Corporation | Improved therapeutic control of heterodimeric and single chain forms of interleukin-12 |
EP3215535A2 (en) | 2014-11-05 | 2017-09-13 | Board of Regents, The University of Texas System | Gene modified immune effector cells and engineered cells for expansion of immune effector cells |
EP3766895B1 (en) | 2014-12-03 | 2024-07-10 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for adoptive cell therapy |
WO2016120217A1 (en) | 2015-01-26 | 2016-08-04 | Cellectis | Anti-hsp70 specific chimeric antigen receptors (cars) for cancer immunotherapy |
US20190062394A1 (en) | 2015-10-10 | 2019-02-28 | Intrexon Corporation | Improved Therapeutic Control of Proteolytically Sensitive, Destabilized Forms of Interleukin-12 |
EP4012415A3 (en) | 2015-12-04 | 2022-12-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods and compositions related to toxicity associated with cell therapy |
US11787848B2 (en) | 2016-06-08 | 2023-10-17 | Precigen, Inc. | CD33 specific chimeric antigen receptors |
CN108330133B (zh) | 2017-01-20 | 2020-06-30 | 上海恒润达生生物科技有限公司 | 靶向cd19嵌合抗原受体并对其双重修饰的方法及其用途 |
CN110573177A (zh) | 2017-04-28 | 2019-12-13 | 尤利乌斯·马克西米利安维尔茨堡大学 | 具有人源化靶向结构域的ror1特异性嵌合抗原受体(car) |
-
2018
- 2018-06-06 CA CA3065930A patent/CA3065930A1/en active Pending
- 2018-06-06 AU AU2018281316A patent/AU2018281316B2/en active Active
- 2018-06-06 IL IL306102A patent/IL306102A/en unknown
- 2018-06-06 WO PCT/US2018/036357 patent/WO2018226897A1/en active Application Filing
- 2018-06-06 IL IL270990A patent/IL270990B2/en unknown
- 2018-06-06 KR KR1020237024368A patent/KR20230115343A/ko active IP Right Grant
- 2018-06-06 EP EP18812776.5A patent/EP3635132A4/en active Pending
- 2018-06-06 JP JP2019567571A patent/JP7262403B2/ja active Active
- 2018-06-06 KR KR1020207000388A patent/KR102557834B1/ko active IP Right Grant
- 2018-06-06 CN CN201880051711.8A patent/CN110997920A/zh active Pending
- 2018-06-06 US US16/001,759 patent/US11118168B2/en active Active
-
2019
- 2019-12-10 ZA ZA2019/08215A patent/ZA201908215B/en unknown
-
2021
- 2021-05-05 US US17/302,514 patent/US12060585B2/en active Active
- 2021-06-11 US US17/303,970 patent/US20220064609A1/en active Pending
- 2021-12-09 ZA ZA2021/10208A patent/ZA202110208B/en unknown
-
2023
- 2023-04-11 JP JP2023063807A patent/JP2023085527A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA201908215B (en) | 2022-03-30 |
RU2019142086A3 (ja) | 2021-07-30 |
ZA202110208B (en) | 2024-04-24 |
AU2018281316A1 (en) | 2020-01-02 |
IL270990A (en) | 2020-01-30 |
IL306102A (en) | 2023-11-01 |
RU2019142086A (ru) | 2021-07-09 |
US20220064609A1 (en) | 2022-03-03 |
WO2018226897A1 (en) | 2018-12-13 |
EP3635132A4 (en) | 2021-05-26 |
CN110997920A (zh) | 2020-04-10 |
EP3635132A1 (en) | 2020-04-15 |
IL270990B1 (en) | 2023-10-01 |
JP7262403B2 (ja) | 2023-04-21 |
US20210324350A1 (en) | 2021-10-21 |
AU2018281316B2 (en) | 2024-05-30 |
IL270990B2 (en) | 2024-02-01 |
JP2020527937A (ja) | 2020-09-17 |
KR20200015939A (ko) | 2020-02-13 |
US12060585B2 (en) | 2024-08-13 |
US11118168B2 (en) | 2021-09-14 |
KR102557834B1 (ko) | 2023-07-21 |
CA3065930A1 (en) | 2018-12-13 |
KR20230115343A (ko) | 2023-08-02 |
US20180362940A1 (en) | 2018-12-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7262403B2 (ja) | 新規の細胞タグの発現 | |
US11946054B2 (en) | Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems | |
US20210177902A1 (en) | Ror-1 specific chimeric antigen receptors and uses thereof | |
US11981746B2 (en) | MUC16 specific chimeric antigen receptors and uses thereof | |
AU2018352984A1 (en) | Polypeptide compositions comprising spacers | |
RU2796334C9 (ru) | Экспрессия новых клеточных меток | |
RU2796334C2 (ru) | Экспрессия новых клеточных меток |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230509 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240507 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240806 |