JP2022521705A - 抗ｃｌｅｃ２ｄ抗体及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

本出願開示は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ（ＣＬＥＣ２Ｄは、ヒトＮＫＲ－Ｐ１Ａ受容体用の機能性リガンドであるレクチン様転写物－１－ＬＬＴ１－タンパク質用の遺伝子をコードする）抗体及び関連組成物ならびにその使用方法に関する。これらの抗体は、様々ながん及びその他の疾患において、治療薬として、また予後判定用途及び診断用途に用いられる。

Description

関連出願
本出願は、２０１９年２月１１日出願の印国仮特許出願第２０１９４１００５３９５号に対する優先権及び利益を主張するものであり、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、免疫学、とりわけ免疫腫瘍学に関する。詳細には、本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する新規抗体分子に関する。本開示はまた、開示抗体分子の複数種のフォーマット及びアミノ酸組成、抗体分子の重鎖及び軽鎖の可変領域、ならびにＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するＣＤＲの組成及び長さ分布に関する。本開示の組成物は、単剤治療薬、または、がんなどの疾患の治療または予防に適切なその他の抗体分子または任意のその他の治療薬との組み合わせのいずれかとして、使用することができる。

抗体ベース／指向性治療アプローチによる免疫細胞チェックポイント受容体の調節は、過去１０年間にわたり一定の関心を集めてきた。これらの受容体の多くは、Ｔ細胞のチェックポイントの調節に関与している。しかしながら、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び骨髄細胞のチェックポイントの調節が注目を集めている。

ＮＫ細胞は、広範囲の標的細胞、例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞などを認識して、それらに対する細胞傷害を誘導する自然免疫の一部である。加えて、ＮＫ細胞は、様々なサイトカインの産生を介した適応免疫応答の誘導及び進行に関与している。一般的に、これらの応答は、幅広く様々な活性化受容体及び阻害受容体の、標的細胞及び免疫細胞の表面上のリガンドとの相互作用によって調節される。

ＮＫ細胞受容体は、２つの主な構造クラス、免疫グロブリンスーパーファミリー及びＣ型レクチン様（ＣＴＬ）スーパーファミリーに分類される。ＮＫＲ－Ｐ１受容体（例えば、ＣＤ１６１）は、重要な免疫調節遺伝子であるＣ型レクチン様膜貫通分子のファミリーであり、脾臓樹状細胞、Ｔ細胞及び顆粒球の亜型を含む様々な細胞型上に発現している。レクチン様転写物１（ＬＬＴ１）分子またはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）分子または破骨細胞阻害性レクチン（ＯＣＩＬ）分子は、ＣＤ１６１受容体に対するリガンドであり、この相互作用は、ＮＫ細胞及びＴ細胞の機能を区別的に調節する。ＣＬＥＣ２Ｄには６種のスプライスバリアントがあるが、アイソフォーム１は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、単球／マクロファージ、活性化Ｂ細胞及び活性化樹状細胞上に発現している標準的な配列であり、ヒトＮＫ細胞活性化受容体として機能している。ＣＬＥＣ２Ｄのポリペプチド鎖は、Ｎ末端細胞質部分、膜貫通領域及びストーク領域、ならびに２つの予測Ｎ－グリコシル化部位を有するＣ末端ＣＴＬ外部ドメインに分類することができる。

ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用により、様々ながんを含むいくつかの疾患シナリオにおいて、宿主防御からの回避が引き起こされる。このような免疫回避はヒト膠芽腫及びその他の疾患において報告されている。更に、Ｂ細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ発現が、ＮＫ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）の間のクロストークを調節すると考えられている。ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用を遮断することにより、様々ながんを治療するための新規の治療選択肢がもたらされる。

ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用の下流シグナル伝達への理解は不十分である。ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１の相互作用により、ＮＫ細胞の機能が阻害され、Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの分泌が促進される。それゆえ、ＣＬＥＣ２Ｄに特異的に結合するモノクローナル抗体を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄとその既知の受容体ＣＤ１６１またはその他の未知の細胞機構の間の相互作用を阻害することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１相互作用の効果を逆転させることができる。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、（ａ）配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｂ）配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｃ）配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｄ）配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｅ）配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、（ｆ）配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、（ｇ）配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、ならびに、（ｈ）配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、からなる群から選択される配列を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）に結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、（ａ）配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｂ）配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｃ）配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｄ）配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｅ）配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｆ）配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｇ）配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、からなる群から選択される配列を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、（ａ）（ｉ）配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉ）配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉｉ）配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｖ）配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖ）配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉ）配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉｉ）配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｖｉｉｉ）配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、から選択される配列を含む重鎖、ならびに、（ｂ）（ｉ）配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉ）配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉｉ）配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｖ）配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖ）配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉ）配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｖｉｉ）配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、から選択される配列を含む軽鎖、を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、（ｉ）配列番号：４３３～４８５から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号：４８６～５４６から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び、（ｉｉｉ）配列番号：５４７～６５３から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ３、を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、（ｉ）配列番号：６５４～７２６から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号：７２７～７８３から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、及び、（ｉｉｉ）配列番号：７８４～８８５から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、配列番号：４３３～４８５から選択されるＨＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：４８６～５４６から選択されるＨＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：５４７～６５３から選択されるＨＣ ＣＤＲ３配列、を含む重鎖、配列番号：６５４～７２６から選択されるＬＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：７２７～７８３から選択されるＬＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：７８４～８８５から選択されるＬＣ ＣＤＲ３配列、を含む軽鎖、または、これらの組み合わせ、を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９３０～１００３から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１８～９２０から選択される配列を含むカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１１～９１５から選択される配列を含むマウスＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１０の配列を含むラットＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、及び／または、配列番号：９１６～９１７から選択される配列を含むイヌＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、に結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、軽鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列を含み、軽鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生殖細胞系ファミリーの重鎖フレームワーク領域配列を含み、軽鎖は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を含む。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体である。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、受容体へのＣＬＥＣ２Ｄの結合を遮断する。一部の実施形態では、受容体はＣＤ１６１受容体を含み、ＣＤ１６１受容体は、配列番号：９２１～９２９から選択される配列を含む。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト、マウス、またはキメラである。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びディアボディフラグメントからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１００ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、本開示に記載のペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）または核酸を含む医薬組成物を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。

本開示の医薬組成物の一部の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、及び防腐剤のうちの少なくとも１つを更に含む。

本開示は、配列番号：１０９～２１６から選択されるアミノ酸重鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、配列番号：３２５～４３２から選択されるアミノ酸軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列に記載の、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列に記載の、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列に記載の重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列に記載の軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖フレームワーク領域アミノ酸配列に記載のフレームワーク領域アミノ酸配列を含む重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖フレームワーク領域アミノ酸配列に記載のフレームワーク領域アミノ酸配列を含む軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、配列番号：１０９～２１６から選択されるポリペプチドをコードする第１の核酸、及び配列番号：３２５～４３２から選択されるポリペプチドをコードする第２の核酸、を含む、組成物を提供する。

本開示は、本開示の核酸を含むベクターを提供する。

本開示は、本開示の核酸、核酸組成物、またはベクターを含む細胞を提供する。一部の実施形態では、細胞は真核細胞である。一部の実施形態では、真核細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は２９３－６Ｅ細胞またはＤＧ４４細胞である。一部の実施形態では、細胞は本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現している。一部の実施形態では、細胞は生殖細胞系細胞である。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する細胞を提供する。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。

本開示は、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む、疾患の治療を必要とする対象に使用する組成物を提供する。

本開示は、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む、疾患の予防または治療を必要とする対象のための医薬品の製造に使用する組成物を提供する。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、疾患は関節リウマチである。一部の実施形態では、対象は、関節リウマチを有することによってもたらされる骨減少を示す。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における骨減少を遅延または逆転させる。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌（ｃｅｎｄｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、及び肺腺癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんの細胞は、細胞表面上にＣＬＥＣ２Ｄを発現している。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における抗腫瘍効果をもたらす。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは単剤治療薬として投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔ細胞指向性免疫調節剤、第２の免疫調節剤、がんワクチン、養子細胞療法剤、腫瘍崩壊ウイルス、第２の抗体治療薬、放射線療法剤、抗体薬物複合体、低分子干渉ＲＮＡ、化学療法剤、免疫療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、有糸分裂阻害剤、またはこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、養子細胞療法剤はＣＡＲ－Ｔ療法薬を含む。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、疾患の徴候または症候を緩和する。

本開示は、少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリを提供し、抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する。

本開示の抗体ライブラリの一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９２０及び配列番号：９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む。本開示の抗体ライブラリの一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９０９及び配列番号：９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、腫瘍細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアント、またはＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアントはＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のフラグメントを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログは、ヒト、マウス、イヌ、ラット、またはカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄを含む。

本開示は、免疫の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、自然免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の向上を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、適応免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、（ａ）抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、複数のファージを形質転換してファージライブラリを作製すること（ファージライブラリ内のファージは、ファージの表面上に抗体遺伝子のライブラリを提示している）、（ｂ）ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原でファージライブラリをパニングすることにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製すること、（ｃ）工程（ｂ）を少なくとも１回または少なくとも２回繰り返すこと、（ｄ）濃縮ファージライブラリに由来する抗体遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入すること、（ｅ）酵母表面ディスプレイライブラリから、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々の酵母細胞を単離すること、（ｆ）ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する単離された個々の酵母細胞を培養して、酵母表面ディスプレイライブラリクローンを作製すること、及び、（ｇ）酵母表面ディスプレイライブラリクローンをシークエンシングすること、により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を単離すること、を含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法を提供する。

本開示のスクリーニング方法の一部の実施形態では、パニング工程（ｂ）は、ＣＬＥＣ２Ｄをコーティングした磁性ビーズでファージライブラリをパニングすることを含む。一部の実施形態では、導入工程（ｄ）は、抗体遺伝子を酵母発現ベクターにクローニングして、酵母細胞を形質転換することを含む。一部の実施形態では、方法は、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む。一部の実施形態では、試験工程（ｅ）は、フローサイトメトリーを用いて、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を発現する酵母細胞を単離することを含む。一部の実施形態では、方法は、フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返すことを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む。

本開示は、（ａ）プロモーターをコードする配列及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含むベクターで哺乳動物細胞を形質転換すること（プロモーターをコードする配列及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントをコードする配列は機能的に連結している）、（ｂ）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントの発現に好適な条件下で哺乳動物細胞を培養すること、（ｃ）培養哺乳動物細胞を遠心分離にかけて上清を作製すること、（ｄ）上清を濾過すること、及び、（ｅ）液体クロマトグラフィーを使用して濾過上清を精製すること、を含む、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法を提供する。

本開示の方法の一部の実施形態では、濾過工程（ｄ）は３μｍ～３０μｍフィルターを含む。一部の実施形態では、濾過工程（ｄ）は０．２２μｍフィルターを更に含む。一部の実施形態では、精製工程（ｅ）はプロテインＡカラムを含む。一部の実施形態では、プロテインＡカラムは、宿主細胞タンパク質を除去するために高塩洗浄バッファーで処理される。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ｐＨ３．０～４．０の３０ｍＭリン酸バッファーを使用して溶出される。一部の実施形態では、精製工程（ｅ）は陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）工程を更に含む。一部の実施形態では、ＡＥＸ工程はＱセファロースカラムを含む。一部の実施形態では、Ｑセファロースは、１０～１００ｍＭヒスチジンを含む予備平衡化バッファーで予め平衡化される。一部の実施形態では、予備平衡化バッファーは、クエン酸塩、リン酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、酢酸塩、またはこれらの組み合わせを更に含む。一部の実施形態では、予備平衡化バッファーは４．５～６．５のｐＨを含む。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、工程（ｅ）において、２００～１０００ｍＭ ＮａＣｌ、ＫＣｌ、またはこれらの組み合わせを含む溶出バッファーで溶出される。一部の実施形態では、溶出バッファーは４．５～６．５のｐＨを含む。

一態様では、本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する新規モノクローナル抗体の単離に関する。新規抗体は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用を調節（例えば、阻害）して、ＮＫ細胞／免疫細胞介在性細胞傷害及び／またはサイトカイン産生を変化させる。

別の態様では、本開示は、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）及び／またはＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）及び／またはＡＤＣＰ（抗体依存性細胞貪食）により腫瘍細胞を殺傷し得るこれらの新規抗体が特異的に認識するＣＬＥＣ２Ｄを発現するがん細胞に関する。

関連する態様では、本開示は、高多様性抗体遺伝子ライブラリから抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を選択することを含む、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を作製するための方法に関する。一実施形態では、高多様性抗体遺伝子ライブラリは、ファージ表面ディスプレイ及び／または酵母表面ディスプレイにより提示されている。一実施形態では、ファージ及び／または酵母が提示した高多様性抗体遺伝子ライブラリは、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を標的として使用して選択される。一実施形態では、選択された抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子は、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）において発現している。一実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する単一細胞クローンを細胞株へと発達させて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現を確認する。一実施形態では、選択された抗体クローンの過剰発現は、所定の培地、補足剤、及び、上流プロセスの開発として本明細書に累積的に記載した特定のバイオリアクタープロセスにより実現される。一実施形態では、細胞株から発現する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、例えば、様々な濾過及びクロマトグラフィーを介して、均一になるように精製されるが、本明細書では、下流精製プロセスと呼ばれる。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び治療有効量の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌（ｒｅｎａｌａｄｉｎｏｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胎児性癌、類内膜癌（ａｎｏｍｅｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌（ｌｅｐｔｏｍａｎｉｇｉｏ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症（ｍｅｎｉｇｕａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、中前腎癌（ｍｅｓｏｍｅｔｏｎｅｐｈｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌（ｓｑｕａｍａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫（ｃｏｐｐｉｃｅｓ ｓａｒｃｏｍａ）、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫（ａｕｓｔｉｏｇｅｎｃｉ ｓａｒｃｏｍａ）、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む。一部の実施形態では、対象のがん細胞は、がんを有していない正常細胞と比較した場合に、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を有している。一部の実施形態では、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄは、不十分な予後効果と関連している。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である。一部の実施形態では、自己免疫性障害または炎症性障害は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、狼瘡、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、または多発性硬化症である。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である。一部の実施形態では、自己免疫性障害は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、狼瘡、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、または多発性硬化症である。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は感染性疾患である。一部の実施形態では、疾患は、ＨＩＶ感染症、ヒトサイトメガロウイルス感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、エボラウイルス感染症、デング熱、黄熱、リステリア症、結核、コレラ、マラリア、リーシュマニア症、またはトリパノソーマ感染症である。

別の態様では、様々な生物物理学的パラメータ、抗原認識、腫瘍細胞表面結合、腫瘍細胞死、サイトカインの産生、及び作用機序を定義するための下流遺伝子の解析、を含む複数のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ及びｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して、ＣＨＯ細胞株から産生される新規抗体を特性決定する。これらのモノクローナル抗体はまた、長期安定性、がん、感染性疾患、自己免疫疾患、及び慢性疾患の治療用途、予後判定用途、及び診断用途に適した様々な配合について試験される。別の態様では、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍抑制アッセイを実施して、単剤治療薬またはその他の治療用製品との組み合わせとしての、選択した抗体の抗腫瘍活性を確立させる。

一態様では、本開示は更に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する新規かつ固有のモノクローナル抗体の単離に関する。一部の態様では、新規抗体は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用に影響を及ぼして、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞）介在性細胞傷害及び／またはサイトカイン産生を変化させる。一部の態様では、ＣＬＥＣ２Ｄを発現する様々ながん細胞は、これらの新規抗体によって認識され、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）及び／またはＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）及び／またはＡＤＣＰ（抗体依存性細胞貪食）を含む様々な方法による細胞傷害効果が明らかとなっている。一態様では、本開示は、リンパ球間のクロストーク及び免疫寛容におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割に関する主眼点及び仮説を提供する。別の態様では、承認済み治療薬または前臨床または臨床試験中の治療薬の分野において、本明細書で提供する新規抗体分子及び関連組成物を同定するための方法は、製造性／開発性に適した薬学的特徴を含む。

一態様では、本開示は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、免疫の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、自然免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、適応免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の上昇を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

本開示の特徴は、添付図面と組み合わせた以下の記述から完全に明らかとなる。特許ファイルまたは出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有している。カラー図面を備えた本特許または特許出願公開の写しは、請求及び必要な手数料の納付に応じ、特許局によって提供される。図が本開示によるいくつかの実施形態のみを表しており、本開示の範囲を限定するものであるとみなされないという理解を前提として、添付図面を使用して本開示を更に説明する。

Ａ～Ｃは、概略フォーマットにおける本開示を示す。Ａは、ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１が相互作用して腫瘍細胞の免疫細胞回避がもたらされるシナリオを示す。Ｂは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用してＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用が遮断されて溶解シグナルに続く腫瘍細胞の殺傷がもたらされるシナリオを示す。Ｃは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原が抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と結合することにより、ＮＫ細胞の活性化及びサイトカイン発現の上昇がもたらされ、その後、直接殺傷またはその他の免疫細胞の関与のいずれかによる高い標的細胞排除がもたらされるシナリオを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ外部ドメインを可溶性抗原として発現させるための哺乳動物発現プラスミドの作製を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｑ７２－Ｖ１９１）の精製を示すＩＭＡＣクロマトグラフィープロファイルを示す（挿入図はＣＬＥＣ２Ｄ抗原の溶出特性を示している）。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。充填、洗浄、及び最終的に溶出したＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥプロファイルを示す（精製ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質が均一かつ純粋であり更なる下流実験用に好適であることを示している）。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する市販の抗体でプローブした精製ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のウェスタンブロットを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。異なる濃度の精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する市販の抗体の結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の脱グリコシル化を明らかとした、還元条件下、ＰＮＧａｓｅ酵素と共に３時間または６時間培養した精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を示す。 ファージ表面ディスプレイ系及び酵母表面ディスプレイ系を使用して標的ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対してナイーブ抗体ライブラリをスクリーニングする抗体ライブラリスクリーニング戦略の概略図を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。フローサイトメトリーによる磁性ビーズコンジュゲート効率の推定を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。Ｆａｂライブラリのパニング後における別々の重鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。Ｆａｂライブラリのパニング後における別々のカッパ軽鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。ＳｃＦｖライブラリのパニング後における別々の重鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。ＳｃＦｖライブラリのパニング後における別々のカッパ軽鎖クローンの制限酵素消化を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。エレクトロポレーションによるＳｃＦｖ抗体ライブラリの作製に向けた酵母コロニーを表すプレート画像を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。半数体重鎖及び軽鎖抗体ライブラリの作製を表すプレート画像を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。重鎖抗体ライブラリまたは軽鎖抗体ライブラリを含有する半数体酵母株の交配効率を示すプレート画像を示す（交配効率は約２９％であると推定された）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。酵母細胞の表面上に発現した抗体分子のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合の代表的なフローサイトメトリー解析を示す（ＳｃＦｖライブラリを複数回ソートして高親和性酵母クローンを濃縮した）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。酵母細胞の表面上に発現した抗体分子のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合の代表的なフローサイトメトリー解析を示す（Ｆａｂライブラリを複数回ソートして高親和性酵母クローンを濃縮した）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。発現の観点と抗原認識の観点の両方における、複数ラウンドのソーティング後における、酵母クローンの濃縮に関する代表的なデータを示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。個々の酵母クローンを分離してＣＬＥＣ２Ｄ抗原で試験を行い、高親和性抗体クローンを発現する酵母細胞株を同定したことを示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のモノクローナル抗体クローンとの結合パーセンテージを示すための代表的なフローサイトメトリーデータを示す。少なくとも約８０％のクローンが検出可能かつ特異的にＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合した。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。選択分子のＣＤＲＨ３長分布を示す棒グラフを示す。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。重鎖ＣＤＲＨ３の相対アミノ酸頻度分布を示す棒グラフを示す（Ｋａｂａｔ命名法）。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。重鎖コンセンサスファミリー分布を示す円グラフを示す。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。軽鎖コンセンサスファミリー分布を示す円グラフを示す。 Ａは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変重鎖遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｂは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変軽鎖（カッパ）遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 Ａは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変重鎖遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｂは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変軽鎖（カッパ）遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。遺伝子合成によりＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子発現構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認したことを示す。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。トランスフェクトＣＨＯ細胞表面（Ｃ４５４８）上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現を示す市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）を用いたフローサイトメトリーを示す。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。共焦点顕微鏡（６０×）による、固定細胞上及び非透過処理細胞上の抗ＣＬＥＣ２Ｄ（４Ｃ７）抗体を用いてモニターしたＣＬＥＣ２Ｄの表面発現を示す。Ｃ４５４８細胞上に抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合が認められた一方で、非トランスフェクトＣＨＯ細胞では結合は認められなかった。核をＤＡＰＩ（青色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥプロファイルを示す。精製抗体を非還元条件と還元条件の両方のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析に供した。Ｃ３５６６から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを、レーン９、還元ゲル及び非還元ゲルの上部パネルに示した。レーン４のクローンを除く下部パネルの全てのクローンにより、還元ゲル及び非還元ゲルにおける良好なプロファイルが明らかとなった。分解産物を示すクローンについては、更なる試験用には検討しなかった。実施例セクションに記載のとおり、その他のクローンに、類似した基準を採用した。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。フローサイトメトリーによる、ＣＨＯ細胞の表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用を示す。全長ＣＬＥＣ２Ｄ構築物をトランスフェクションしていないまたはトランスフェクションしたのいずれかのＣＨＯ細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ結合について、Ｃ４５７７、Ｃ２９０７、Ｃ３５６６、Ｃ５５８２、Ｃ５３９７に例示される代表的な抗体クローンを評価した。右方向へのＭＦＩのシフトは、対応するクローンの表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合を示した。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。ＰＣ３腫瘍細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用の代表的な画像を示す。表２２に示すとおり、結合の定性的評価を実施した（低い結合を示す「＋」から非常に高い結合を示す「＋＋＋」）。例示として、抗体Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。ＰＣ３腫瘍細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用の代表的な画像を示す。表２２に示すとおり、結合の定性的評価を実施した（低い結合を示す「＋」から非常に高い結合を示す「＋＋＋」）。例示として、抗体Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。表面発現ＣＬＥＣ２Ｄを用いて実施し、フローサイトメトリーを使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現プラスミドをトランスフェクションしたＣＨＯミニプール試料から得た上清を使用してモニターした、結合試験を示す。ヒストグラムは、様々なクローンにおいて認められた、Ｃ４５４８細胞上に発現した表面ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合の度合いを表している。ＭＦＩの倍率変化を個々のミニプールの結合に対してプロットしている。より高い倍率変化は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのより強い結合を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。単一細胞クローンスクリーニングを示す（単一細胞クローン株から発現した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を精製してから、フローサイトメトリー実験用に使用した）。蛍光シグナルのより高い倍率変化は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのより強い結合を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。安定ＣＨＯ細胞株から産生されたモノクローナル抗体のフローサイトメトリー解析を示す（単一細胞クローン株から発現した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を精製してから、フローサイトメトリー実験用に使用した）。フローサイトメトリーにより、ＣＨＯ細胞の表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合について、複数のモノクローナル細胞株が発現する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（例えば、Ｃ４６０８、Ｃ５０９３、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ６７２６、Ｃ７７２０、Ｃ９１０３、Ｃ５８４８、及びＣ３４５２など）を試験した。複数の安定クローンにおける平均蛍光強度の倍率の上昇を推定すると、３～１０倍の範囲であることが認められた。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。ＰＣ３腫瘍細胞株上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原とのクローンＣＨＯ細胞株から産生された抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の相互作用の代表的な画像を示す。本明細書に記載するとおり、様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＰＣ３細胞の表面上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原への特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。抗体重鎖及び軽鎖遺伝子の安定した導入を確認するために抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体－安定細胞クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に実施した定量的ＲＴ ＰＣＲを示す。ＧＡＰＤＨハウスキーピング遺伝子を内部標準物質として使用した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する６０世代のＣＨＯモノクローナル株について、試験を実施した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ２４３８、Ｃ３４５２、Ｃ０９４９の、前立腺癌細胞株ＰＣ３上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ上への結合を示す。右方向へのＭＦＩのシフトは、ＰＣ３細胞株上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原への抗体の結合を示した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。１：５の比率のエフェクター細胞としてのＰＢＭＣ、固定濃度の１００ｕｇ／ｍＬの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析を示す。本明細書において機能性について評価したクローンは、ドナー１に由来するＰＢＭＣと共にＣ５５１１、Ｃ４６０８、及びＣ６４８１であった一方で、クローンＣ５３９２及びＣ３４５２から精製した抗体をドナー２に由来するＰＢＭＣと共に試験した。ＰＣ３生細胞のパーセンテージはＡＰＣ（ｅＦｌｕｏｒ ６７０）陽性細胞によって示されており、死細胞はＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞を示している。対応する単一細胞クローンをそれぞれのプロットに対して標識した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。濃度を１０μｇ／ｍＬから２００ｕｇ／ｍＬへと上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１）と共に、エフェクター細胞（１：５）としてのＰＢＭＣを使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析により、高用量依存的な腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エフェクター細胞としてのＰＢＭＣ、固定濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析を示す。腫瘍：エフェクター細胞の比率（Ｔ：Ｅ）を１：５から１：１０へと上昇させた。データにより、エフェクター細胞の比率が上昇するにつれてより高いレベルの腫瘍細胞の細胞傷害がもたらされるということが明らかとなった。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エンドポイント細胞傷害アッセイにより、１０μｇ／ｍＬにおける腫瘍細胞の有意な細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイではまた、共焦点顕微鏡を使用して、標的細胞を殺傷するための抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の最適な濃度を同定する。上部パネルは、予測どおりに細胞傷害が認められなかった全ての対照処理を示しており、下部パネルは、ＰＢＭＣ（Ｔ：Ｅ＝１：５）の存在下、濃度を上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）で処理した際の、高いＰＣ３腫瘍細胞死を示している。最大細胞死は５０ｕｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において認められた。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エンドポイント細胞傷害アッセイにより、１０μｇ／ｍＬにおける腫瘍細胞の有意な細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイではまた、共焦点顕微鏡を使用して、標的細胞を殺傷するための抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の最適な濃度を同定する。上部パネルは、予測どおりに細胞傷害が認められなかった全ての対照処理を示しており、下部パネルは、ＰＢＭＣ（Ｔ：Ｅ＝１：５）の存在下、濃度を上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）で処理した際の、高いＰＣ３腫瘍細胞死を示している。最大細胞死は５０ｕｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において認められた。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。共焦点顕微鏡を使用した、標的細胞を殺傷するための選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用したエンドポイント細胞傷害アッセイを示す。細胞傷害は、ＰＣ３腫瘍細胞のみ、ＰＢＭＣのみ、アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を伴うＰＢＭＣのような対照処理において認められなかった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６、Ｃ５８４８、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１）クローンを使用した際に、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が認められた。サイズを拡大した画像により、ＰＣ３腫瘍細胞がエフェクター細胞に取り囲まれて腫瘍細胞死が誘導されていることが明らかとなった。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。共焦点顕微鏡を使用した、標的細胞を殺傷するための選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用したエンドポイント細胞傷害アッセイを示す。細胞傷害は、ＰＣ３腫瘍細胞のみ、ＰＢＭＣのみ、アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を伴うＰＢＭＣのような対照処理において認められなかった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６、Ｃ５８４８、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１）クローンを使用した際に、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が認められた。サイズを拡大した画像により、ＰＣ３腫瘍細胞がエフェクター細胞に取り囲まれて腫瘍細胞死が誘導されていることが明らかとなった。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。精製したＮＫ細胞及び１００ｕｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６４８１及びＣ５５１１）で処理した際の、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を示す。データにより、１：１のＴ：ＥにおけるＰＣ３腫瘍細胞の８６％ＮＫ細胞介在性細胞傷害が明らかとなった。ＰＣ３死細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。アイソタイプ対照（ヒトＩｇＧ１抗体）または１：０．５から開始して１：１０までＴ：Ｅ比率を上昇させていったＮＫ細胞のみのいずれかと共に培養した際に、標的細胞死が認められなかったことを示す。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のみがＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を誘導できないことを示す。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１（５０ｕｇ／ｍＬ）により、１：０．５から開始して１：５及び１：１０にＴ：Ｅ比率が上昇するにつれてＰＣ３腫瘍細胞死がますます多くなることが明らかとなったことを示す。スケールバーは１０μｍである。 単離したＴ細胞及び１００ｕｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１及びＣ６４８１）で処理したＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を示す。死ＰＣ３腫瘍細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞によって示された。 ＰＣ３腫瘍細胞の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性細胞傷害を伴う生細胞イメージングを示す。生細胞イメージングにより、ヒトＰＢＭＣ細胞及び２００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体との培養期間にわたるＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイを、画像取得中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内で２０時間実施した。これに対して、対照ヒトＩｇＧ１抗体（２００μｇ／ｍｌ）との培養では、腫瘍細胞の細胞傷害はもたらされなかった。生ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。スケールバーは２０μｍである。 ＰＣ３腫瘍細胞の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性細胞傷害を伴う生細胞イメージングを示す。生細胞イメージングにより、ヒトＮＫ細胞及び２００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体との培養期間にわたるＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイを、画像取得中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内で２０時間実施した。これに対して、対照ヒトＩｇＧ１抗体（２００μｇ／ｍｌ）との培養では、腫瘍細胞の細胞傷害はもたらされなかった。生ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＮＫ細胞－赤色、死細胞－青色。スケールバーは２０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。エピトープ認識（分子鎖Ａ－濃青色、分子鎖Ｂ－青緑色）＆ＣＤ１６１（分子鎖Ｃ－オレンジレッド、分子鎖Ｄ－紫色）複合体（ＰＤＢ ＩＤ ５ＭＧＴ）のカートゥーン表示を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。赤色選択がＮＫＲ－Ｐ１の分子鎖の６Å内の残基を表していることを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体構造体のリボン表示を示す。特定の抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体用の対応するクローンを適切に標識した。可変軽鎖をより暗い色合いで示している一方で、重鎖可変領域は白色で示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ４６０８に属し、ＣＬＥＣ２Ｄ（より暗い色合い）に対して相互作用するクラスターのうちの１つに寄与する、ＰＩＺＳＡスコアリング及び構造体クラスター化法の後に選択した構造体を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ４６０８に由来するＧ００００１－Ｇ００００４－Ｇ００００７－Ｇ０００１０－Ｇ０００１５クラスターの組み合わせがＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合部位を含有しているかどうかを確認するための変異用に選択した残基の可視化を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ５５１１に属し、ＣＬＥＣ２Ｄ（より暗い色合い）に対して相互作用するクラスターのうちの１つに寄与する、ＰＩＺＳＡスコアリング及び構造体クラスター化法の後に選択した構造体を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ５５１１に由来するＧ００００１－Ｇ００００５－Ｇ０００１１－Ｇ０００１９－Ｇ０００２０クラスターの組み合わせがＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合部位を含有しているかどうかを確認するための変異用に選択した残基の可視化を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８の接点の表面表示を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ上のＣＤ１６１結合領域と重複している、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８の接点を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の接点の表面表示を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ上のＣＤ１６１結合領域と重複している、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の接点を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性阻害を示す（ＣＬＥＣ２Ｄ抗原ビーズコンジュゲート効率の確認のモニタリング）。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。磁性ビーズ上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのＣＤ１６１－ＦＣの結合が濃度依存的に認められたことを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ベタ塗りの黒色矢印で示した、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの結合の阻害の指標としての、対照と比較した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無におけるＣＤ１６１結合のフローサイトメトリーモニタリングを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によるＮＫ細胞活性化を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１がＣＤ６９発現を誘導してＮＫ細胞活性化が細胞傷害となることを示していることを示す。対応する実験条件をそれぞれのプロットに対して記載した。ＣＤ６９過剰発現の陽性対照としてＩＬ２処理を実施した。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によるＮＫ細胞活性化を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性ＣＤ６９発現が、ＮＫ細胞上のＰＣ３細胞初回刺激ＣＤ６９発現レベルと比較してより高いことを示す。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を１０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの濃度で使用してＩＦＮγ発現レベルの上昇をモニターしたことを示す。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、ＰＣ３細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）の有無において、１００ｕｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。ＣＤ３＋ゲート集団のＩＦＮγ発現をモニターした。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、ＰＣ３細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）の有無において、１００ｕｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。ＣＤ３－ゲート集団のＩＦＮγ発現をモニターした。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、単離ＮＫ細胞の有無において、１００μｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１においてＩＦＮγ過剰発現が認められた。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。選択抗体可変重鎖遺伝子をＩｇＧ４主鎖にクローニングするために設計されたベクターを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。選択抗体可変重鎖遺伝子をＩｇＧ１ Ｎ～Ａ主鎖にクローニングするために設計されたベクターを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。ＩｇＧ４アイソタイプ主鎖を有する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ３２５６及びＣ３２７６）のＣＨＯ細胞の表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合のフローサイトメトリー解析を示す。右方向へのピークシフトから推定した結合を非トランスフェクトＣＨＯ細胞と比較した。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。様々な抗体アイソタイプを使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の細胞傷害を示す。ＩｇＧ１アイソタイプ（Ｃ３４５２及びＣ４６０８）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びＩｇＧ４アイソタイプ（Ｃ３２５６及びＣ３２７６）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、新たに単離したＰＢＭＣ及びＰＣ３腫瘍細胞と培養した際に、有意な細胞傷害を示した。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。フローサイトメトリーを用いた、アフコシル化モノクローナル抗体Ｃ０６１３、Ｃ１３０１、Ｃ６２６８、Ｃ１６９９、Ｃ２４３７、Ｃ９８３２、Ｃ８９００、及びＣ７７４９として作製した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体により、ＣＨＯ細胞の表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合が明らかとなったことを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｃ５５１１と比較して５×より低い濃度で使用したアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ７７４９、Ｃ８８００、Ｃ９８３２）による、ＰＣ３腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。データにより、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が５倍より低い濃度でほぼ同等の細胞死を達成し、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がより細胞傷害性であることを示したことが明らかとなった。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｒａｍｏｓ腫瘍細胞株及びＰＣ３腫瘍細胞株を使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１のＣＤＣ介在性細胞傷害を測定したことを示す。リツキシマブを陽性対照として使用した。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体単独または抗ＰＤＬ１抗体との組み合わせにおいて認められた有意な抗腫瘍効果を示す時間に対する腫瘍容積のプロットを示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。ＣＤ３＋Ｔ細胞の染色による、腫瘍微小環境における免疫細胞浸潤を示す画像を示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。９６時間の期間にわたり腫瘍内に注射されたＡｌｅｘａ ６４７標識抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す、異種移植片を有するマウスの画像を示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊ｐ＜０．０１、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊ｐ＜０．０１、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。非還元条件及び還元条件における精製Ｃ５５１１抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のインタクト質量分析解析のＴＩＣクロマトグラム（３つの複製）を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＷＣＸクロマトグラム解析を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のサイズ排除クロマトグラムを示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ精製ビオチン化抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＥＬＩＳＡアッセイ発現を示す。データを１部位結合モデルにフィッティングして、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＫｄを計算した。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ＢＩＡＣＯＲＥ試験において精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原外部ドメインを抗原の供給源として使用したことを示す。モニターした応答を時間に対してプロットしている。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ｐＨ５．９における、ＦｃＲｎを用いた代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ｐＨ７．４における、ＦｃＲｎを用いた代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の親和性ベースの結合試験を示す。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。結合特性に基づいた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ０９４９）の選択を示す。ＰＣ３標的細胞上のＣＬＥＣ２Ｄへの結合について、４つの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ２７７９、Ｃ２４３８、Ｃ０９４９、及びＣ２５４３）を評価した。Ｃ０９４９は、良好な結合及びピークの中央へのシフトを示した。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ０９４９が複数種の前立腺癌細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ０９４９が複数種の腫瘍細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。試験と対照の間の平均ＦＩＴＣ蛍光の比率により、特異的結合及び平均蛍光の倍率変化を計算した。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＴＣＧＡデータ解析後の、前立腺癌疾患ステージにおけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＤＵ１４５、２２ＲＶ１、及びＬｎＣａｐ上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。悪性前立腺癌組織内の腫瘍細胞の染色を示す、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ２６８５で染色したヒト組織マイクロアレイスライドを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。様々ながんにおけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現のＴＣＧＡデータ解析を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。様々な腫瘍細胞株ＨｅｐＧ２（肝臓癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＢＴ４７４（乳癌）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＲａｍｏｓ（リンパ腫）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＳＫＯＶ３（卵巣癌）上に１００μｇ／ｍｌで認められた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１が介在する細胞傷害、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）細胞株上に１００μｇ／ｍｌで認められた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１が介在する細胞傷害を示す。死細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞によって示された。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。抗体ウェットコーティングプロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。空気乾燥抗体コーティングプロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。高密度前培養プロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。ＰＢＭＣを抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）と長期間培養した際の、エフェクター細胞からのＩＦＮγサイトカイン分泌の測定を示す。ＯＫＴ３抗体を用いた処理を陽性対照として使用した。抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１（１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、及び１００μｇ／ｍｌ）でＰＢＭＣを処理してから、４日間培養した。フローサイトメーターを使用して、蛍光増殖色素の状態をモニターした。未処理ＰＢＭＣを対照として使用した。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。ＰＢＭＣを抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）と長期間培養した際の、エフェクター細胞からのＩＬ２サイトカイン分泌の測定を示す。ＯＫＴ３抗体を用いた処理を陽性対照として使用した。抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１（１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、及び１００μｇ／ｍｌ）でＰＢＭＣを処理してから、４日間培養した。フローサイトメーターを使用して、蛍光増殖色素の状態をモニターした。未処理ＰＢＭＣを対照として使用した。 フローサイトメトリー解析を使用して、ＣＨＯ細胞の表面上に発現したラット、マウス、及びカニクイザルに由来するＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログに対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ３５６６及びＣ５５１１）の結合をオーバーレイで示すヒストグラムを示す。

抗体ベース／指向性治療アプローチによる免疫細胞チェックポイント受容体の調節は、過去数年間にわたり一定の関心を集めてきた。最大の努力はＴ細胞のチェックポイントの調節に傾けられてきた。しかしながら、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及び骨髄細胞のチェックポイントの調節にも同様に、ますます多くの注目が集められている。自然免疫系はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含み、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、広範囲の標的細胞、例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞などを認識して細胞傷害を誘導する能力を有する。ＮＫ細胞は事前の抗原感作を何ら必要としない。直接的な細胞傷害に加えて、ＮＫ細胞はまた、サイトカインの産生及び分泌を介した適応免疫応答の誘導及び進行に関与している。一般的に、これらの応答は、幅広く様々な表面活性化受容体及び表面阻害受容体の、標的細胞の表面上のリガンドとの相互作用によって誘導されるシグナルの適切なバランスによって調節される。様々な物質、例えば、モノクローナル抗体、サイトカインなどを介したＮＫ細胞の数及びその関連機能の調節により、抗腫瘍活性の向上がもたらされ得る。これらの物質を、単独または組み合わせのいずれかで、潜在的な治療薬として提供することができる。それゆえ、活性化種及び／または阻害種の両方の表面受容体を抑制することにより、ＮＫ細胞の抗がん活性を解放することができる。

これらの相互作用を遮断することは、いくつかのがんを治療するための新規の治療選択肢になり得る。しかしながら、発見、理解、及び設計を調整する必要があり、また治療処置を様々ながんに対する標的としての個々の受容体用に更に適応させる必要があり、それらは依然として対応されていない。

本明細書において特に定義しない限り、本開示と関連させて用いる科学用語及び専門用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。更に、文脈上特に必要としない限り、文脈及び／または用途にとって適切と考えられる場合、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。各種単数形／複数形の交換は、明確とするために、本明細書中に明示的に記載され得る。一般的に、本明細書に記載するバイオテクノロジー技術、免疫学技術、分子細胞生物学技術、組換えＤＮＡ技術と関連させて用いる専門用語は、当該技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。本明細書で引用する特定の参照文献及びその他の文献は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。矛盾が生じた場合には、本明細書（定義を含む）が優先される。物質、方法、図、及び例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

更に、開示する抗体ナイーブライブラリの方法、調製、及び使用においては、特に明記しない限り、分子生物学、生化学、計算化学、細胞培養、組換えＤＮＡ技術、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、及び関連分野における従来技術を採用する。これらの技術、その原理及び条件については、文献中において説明されており、当業者には周知である。

抗体ナイーブライブラリ及び抗体ナイーブライブラリをコードする核酸を作製するための方法、及び本開示のその他の実施形態について開示及び説明する前に、本明細書で使用する専門用語が特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定することを意図するものではないということを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明確に定めない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。

一実施形態では、用語「ライブラリ（ｌｉｂｒａｒｙ）」及び「ライブラリ（ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」は本開示内において同じ意味で用いられ、本開示の作製物に関する。一実施形態では、核酸配列の集合またはプールを意味する。一実施形態では、アミノ酸配列の集合またはプールを意味する。一部の実施形態では、アミノ酸配列または核酸配列の集合またはプールを含む、生物の集合またはプールを意味する。一部の実施形態では、生物はバクテリオファージ（ファージ）または酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である。

一実施形態では、本開示の文脈における用語「プールすること」、「プールした」、「プール（ｐｏｏｌ）」、及び「プール（ｐｏｏｌｓ）」とは、本開示の方法を採用することによって複数のドナー、すなわち、２つ以上のドナーから得た試料／核酸配列／核酸フラグメント／遺伝子クローン／増幅産物／抗体を混合することを意味する。

一実施形態では、用語「ＰＢＭＣ」とは、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球、赤血球、血小板、ならびに顆粒球（好中球、好塩基球、及び好酸球）からなる、円形核を有する任意の末梢血細胞のことを意味する。

抗原
本明細書で使用する場合、用語「抗原」または「免疫原」とは、体内において免疫応答を誘導する任意の外来物質のことを意味する。一実施形態では、抗原は細胞タンパク質である。一実施形態では、抗原は細胞表面タンパク質である。

抗原は、任意の種から単離または誘導してもよい。代表的な種としては、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、またはＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導された野生型タンパク質のフラグメントである。一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、またはＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓに由来するタンパク質の変異バリアントである。一部の実施形態では、抗原を変異させて、抗原の溶解性及び／または安定性を向上させることができる。例えば、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、追加のジスルフィド架橋をＣｙｓ１６３アミノ酸に導入して発現タンパク質の安定性及び均一性を向上させるために、Ｈ１７６Ｃに変異を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、抗原は、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかに、エピトープタグを含む。例示的なタグとしては、ポリヒスチジンタグ及びＦＬＡＧタグが挙げられるがこれらに限定されない。当該技術分野において周知の任意のエピトープタグは本開示の範囲内であるとみなされる。

ＣＬＡＸ、レクチン様転写物－１（ＬＬＴ１）、及びＯＣＩＬとも呼ばれるＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）は、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ型レクチンファミリーのメンバーである。ＣＬＥＣ２Ｄはキラー細胞レクチン様受容体Ｂ１（ＫＬＲＢ１）に結合する。ＫＬＲＢ１は、ＣＤ１６１、ＣＬＥＣ５Ｂ、ＮＫＲ、ＮＫＲ－Ｐ１、ＮＫＲ－Ｐ１Ａ、ＮＫＲＰ１Ａ、及びｈＮＫＲ－Ｐ１Ａとしても知られている。ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の全てのオルソログ及びアイソフォームは、本開示の範囲内であるとみなされる。

一部の実施形態では、当該技術分野において周知のＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）タンパク質またはそのエイリアスまたはホモログのいずれかは、ヒトに由来するかまたはその他の種に由来するかにかかわらず、本明細書に記載の方法により作製された抗体の標的抗原を表す。

一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導したＣＬＥＣ２Ｄ配列に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するＣＬＥＣ２Ｄ抗原である。

一部の実施形態では、当該技術分野において周知のＣＤ１６１タンパク質またはそのエイリアスまたはホモログのいずれかは、ヒトに由来するかまたはその他の種に由来するかにかかわらず、本明細書に記載の方法により作製された抗体の標的抗原を表す。

一部の実施形態では、ＣＤ１６１抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導したＣＤ１６１配列に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。

例示的な抗原を以下の表１に示す。

抗体
一実施形態では、用語「抗体」とは、全てまたは一部が天然供給源に由来していてもよいまたは合成的に作製されていてもよい免疫グロブリンのことを意味する。用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、特に明記しない限り、本明細書の全体にわたり同義的に用いられる。

一実施形態では、用語「抗体」はポリクローナル抗体調製物とモノクローナル抗体調製物の両方を含み、以下、キメラ抗体分子、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント及びＦ（ａｂ）フラグメント、Ｆｖ分子、一本鎖Ｆｖ分子（ＳｃＦｖ）、二量体抗体フラグメント及び三量体抗体フラグメント、二重特異性抗体、ミニボディ、ヒト化モノクローナル抗体分子、ヒト抗体、抗体のＦｃ領域及びこれらの分子から生じる任意の機能性フラグメントを含む融合タンパク質もまた含み、誘導体分子は親抗体分子の免疫学的機能を保持している。本開示の抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または、本開示の特性が保持される限りにおいて更に遺伝子組換えされた抗体である。

「天然の抗体及び免疫グロブリン」は通常、２つの同一軽（Ｌ）鎖及び２つの同一重（Ｈ）鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結しており、更に、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なっている。それぞれの重鎖及び軽鎖はまた、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋を有している。それぞれの重鎖は、多くの定常ドメインに続いて、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有している。それぞれの軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、そのもう一方の端に定常ドメインを有しており、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと一列に並んでおり、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと合わせて並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成すると考えられている（Ｃｌｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ ａｎｄ Ｈａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２（１９８５））。

用語「抗原結合部位」または「結合部分」とは、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の一部のことを意味する。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成されている。「超可変領域」と呼ばれる、重鎖及び軽鎖のＶ領域内における３つの極めて異なるストレッチは、「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」として知られているより保存された隣接ストレッチの間に配置されている。それゆえ、用語「ＦＲ」とは、免疫グロブリンの超可変領域の間及びその隣接部に天然に存在するアミノ酸配列のことを意味する。抗体分子内において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、互いに対して三次元空間に配置されて抗原結合表面を形成している。抗原結合表面は結合抗原の三次元表面に対して相補的であり、重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」と呼ばれる。

用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で大きく異なっており、それら特定の部分がそれぞれ個々の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に利用されているという事実のことを意味する。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインの全体にわたり均一に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、βシート構造に結合するループを形成する３つのＣＤＲによって結合した、場合によってはβシート構造の一部を形成する３つのＣＤＲによって結合した、主にβシート構造をとる４つのＦＲ領域を含む。それぞれの分子鎖内のＣＤＲは、ＦＲ領域により共に近接して維持されており、もう一方の分子鎖のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接的には関与していないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を発揮する。

「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部、好ましくはその可変ドメイン、または少なくともその抗原結合部位を含む。ｓｃＦｖ抗体については、例えば、Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３（１９９１）４６－８８に記載されている。一実施形態では、「抗体フラグメント」は、抗原結合活性を示す能力を保持している完全抗体の一部である。加えて、抗体フラグメントは、対応する抗原に結合するＶＨドメインの特性（すなわち、ＶＬドメインと共に集合することができる）またはＶＬドメインの特性（ＶＨドメインと共に集合することができる）、機能性抗原結合部位を有することにより、本開示の抗体の特性をもたらす、一本鎖ポリペプチドを含む。

抗体のパパイン消化により、それぞれが１つの抗原結合部位を有し「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び、残りの「Ｆｃ」フラグメント（その名称は容易に結晶化可能であることを意味する）がもたらされる。ペプシン処理により、なおも抗原に架橋可能な２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントが生じる。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。この領域は、しっかりと非共有結合した１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体で構成されている。この構造では、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用することで、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を定めている。６つのＣＤＲが集合的に、抗体に抗原結合特異性を付与している。しかしながら、たとえ単一可変ドメイン（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）であっても、完全な結合部位と比較してより低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有している。

一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチド分子は、ペプチドコードリンカーにより連結したＶＨコード遺伝子及びＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合体から発現させることが可能な、共有結合で連結したＶＨ：ＶＬヘテロ二量体である。抗体Ｖ領域に由来する、天然に凝集しているが化学的には分離している軽ポリペプチド鎖及び重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に類似した三次元構造へと折り畳まれるｓｃＦｖ分子へと変換するために、化学構造を識別するための多くの方法が説明されている。例えば、米国特許第５，０９１，５１３号、第５，１３２，４０５号、及び第４，９４６，７７８号を参照されたい。

Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有している。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含むいくつかの残基の、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端への追加によって、Ｆａｂフラグメントとは異なっている。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有しているＦａｂ’のための、本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々、Ｆａｂ’フラグメント間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして作製されたものである。抗体フラグメントのその他の化学的カップリングもまた知られている。

任意の脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（ｋ）及びラムダ（ｌ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの一方に割り当てることができる。

本明細書で使用する場合、用語「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」とは、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的な抗原の間に生じるタイプの非共有結合相互作用のことを意味する。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）を基準として表すことができ、より小さなＫｄはより高い親和性を表している。選択したポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知の方法を用いて定量することができる。１つのこのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体の形成速度及び解離速度を測定することを必要とするが、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータによって決まる。それゆえ、「ｏｎ速度定数」（Ｋｏｎ）と「ｏｆｆ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに実際の結合速度及び解離速度の計算により求めることができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率は、親和性に関係していない全てのパラメータを相殺することを可能とし、解離定数Ｋｄに相当する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アッセイ、例えば、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に周知の類似したアッセイなどを用いて測定した際に、≦１０μＭ、好ましくは≦１μＭ、より好ましくは≦１００ｎＭ、例えば、≦９０ｎＭ、≦８０ｎＭ、≦７０ｎＭ、≦６０ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、または≦１ｎＭのＫｄで、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体の結合親和性は、１０^－５Ｍ～１０^－１２Ｍの範囲内である。例えば、本開示の抗体の結合親和性は、１０^－６Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－７Ｍ、または１０^－５Ｍ～１０^－６Ｍである。

本開示はまた、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸またはヌクレオチド配列に対して特定のパーセンテージの同一性または類似性を有する抗体を特徴とする。例えば、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。より好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。更により好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。本開示の核酸及びタンパク質に対する配列同一性または類似性は、当該技術分野において周知の方法を用いた配列比較及び／またはアライメントにより求めることができる。例えば、配列比較アルゴリズム（すなわち、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ ２．０）、マニュアルアライメント、または目視検査を利用して、本開示の核酸及びタンパク質に対するパーセント配列同一性または類似性を求めることができる。

アミノ酸配列に関して、コード配列内の単一アミノ酸またはわずかなパーセンテージのアミノ酸を変化、付加、欠失、または置換させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失、または付加が、本明細書において、「保存的修飾バリアント」と集合的に呼ばれることを、当業者は容易に理解するであろう。一部の実施形態では、変化により、化学的に類似したアミノ酸へのアミノ酸の置換がもたらされる。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は当該技術分野において周知である。

免疫グロブリンの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスへと割り当てることができる。５種の主なクラスの免疫グロブリン、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在しており、これらのうちの数種を、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２へと更に分類することができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、∂、ε、γ、及びμと呼ばれている。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構造は周知である。

一実施形態では、本明細書で提供する組成物及び方法にヒト化抗体を使用してもよい。一部の実施形態では、用語「ヒト化抗体」または「抗体のヒト化型」とは、親免疫グロブリンの特異性と比較して異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むようにフレームワークまたは「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が修飾された抗体のことを意味する。その他の実施形態では、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域にグラフトして、「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２（１９８８）３２３－３２７；及びＮｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３１４（１９８５）２６８－２７０を参照されたい。重鎖可変フレームワーク領域及び軽鎖可変フレームワーク領域は、同一のまたは異なるヒト抗体配列から誘導することができる。ヒト抗体配列は天然ヒト抗体の配列であってもよい。ヒト重鎖可変フレームワーク領域及びヒト軽鎖可変フレームワーク領域は、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０００）－Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＰ Ａ．１Ｐ．１－Ａ．１Ｐ．３７に列挙されており、ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（http://imgt.cines.fr）またはhttp://vbase.mrc-cpe.cam.ac.ukを介して入手可能である。任意選択的に、更なる変異によりフレームワーク領域を修飾してもよい。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体に対する上記の抗原を認識する配列を表すＣＤＲに相当する。用語「ヒト化抗体」はまた、本明細書で使用する場合、例えば、「クラススイッチング」、すなわち、Ｆｃ部分の変化または変異（例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ４への変異及び／またはＩｇＧ１／ＩｇＧ４変異）により、特にＣ１ｑ結合及び／またはＦｃＲ結合に関する本開示の特性を生むように定常領域を修飾されているような抗体を含む。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意味している。ヒト抗体は現況技術において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体はまた、免疫化した際に、内在性免疫グロブリン産生を行うことなく、ヒト抗体の完全レパートリーまたは選択物を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いて作製することができる。ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイをこのような生殖細胞系変異マウスに導入することにより、抗原誘発時にヒト抗体の産生がもたらされる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；Ｂｒｕｅｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３－４０を参照のこと）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリを用いて作製することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。Ｃｏｌｅ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．の技術はまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｓｓ，Ａ．Ｌ．，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）。本開示のヒト化抗体において既に言及しているが、用語「ヒト抗体」はまた、本明細書で使用する場合、本開示の特性を生むように定常領域を修飾されているような抗体を含む。

一実施形態では、用語「モノクローナル抗体」とは、均一抗体集団を有する抗体組成物のことを意味する。抗体は、抗体の種または供給源、または抗体の作製方法によって限定されない。別の実施形態では、この用語は、完全免疫グロブリンに加えて、フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びその他のフラグメントなど、ならびに、親モノクローナル抗体分子の免疫学的結合特性を示すキメラ均一抗体集団及びヒト化均一抗体集団を包含する。別の実施形態では、用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」とは、本明細書で使用する場合、単一アミノ酸組成の抗体分子の調製物のことを意味する。別の実施形態では、用語「Ｆａｂ」または「ＳｃＦｖ」は、具体的に言及される抗体フラグメントとして使用される。

一部の実施形態では、本明細書で提供する組成物及び方法にキメラ抗体を使用してもよい。一実施形態では、用語「キメラ抗体」とは、一般的に組換えＤＮＡ技術を用いて調製された、１つの種（例えば、マウスまたはラット）に由来する可変領域、すなわち、結合領域、及び、異なる供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域の少なくとも一部を含むモノクローナル抗体のことを意味する。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。このようなキメラ抗体は、１つの種に由来する免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメント及び異なる種の免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子の発現産物である。本開示に包含されるその他の形態の「キメラ抗体」は、クラスまたはサブクラスが元の抗体のクラスまたはサブクラスから変更または変化しているキメラ抗体である。このような「キメラ」抗体はまた、「クラススイッチ抗体」とも呼ばれる。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野において現在周知の、従来の組換えＤＮＡ技術及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１（１９８４）６８５１－６８５５；ＵＳ５，２０２，２３８、及びＵＳ５，２０４，２４４を参照されたい。

一実施形態では、「抗体ディスプレイライブラリ」とは、標的抗原に対するスクリーニング法に適した細胞または無細胞の表面上に抗体を発現するプラットフォーム（複数可）のことを意味する。本明細書では、ファージディスプレイライブラリ及び酵母ディスプレイライブラリは、特に明記しない限り、正確な規格で使用される。

一実施形態では、用語「ナイーブライブラリ」とは、非免疫化供給源に由来する天然ＶＨレパートリーをコードする核酸配列の集合のことを意味する。

一実施形態では、用語「ＶＨ」とは、軽鎖または軽鎖の一部を天然に欠く哺乳動物に存在し得るタイプの抗体の単一の重鎖可変ドメインのことを意味し、ナイーブＶＨについては、適宜理解することができる。

一実施形態では、用語「ＶＬ」とは、抗体の単一の軽鎖可変ドメインのことを意味し、それらは、定常ドメイン配列に基づいて、２つのタイプに存在している。Ｖｋ（カッパ定常領域）及びＶｌ（ラムダ定常領域）は適宜理解される。

一実施形態では、用語「ＣＤＲ」とは、抗体構造の相補性決定領域のことを意味する。

一実施形態では、用語「レパートリー」とは、集合のことを意味し、遺伝的多様性を示す。

一実施形態では、用語「フレームワーク領域」は、本明細書において、分子の構造エレメントをコードする、抗体分子の核酸配列領域を意味するために使用される。

別の実施形態では、用語「ベクター」とは、抗体遺伝子を特定の指定制限部位に供給するための、クローニング系または発現系に関連するＤＮＡのことを意味する。ファージミドベクター（ファージディスプレイ系に適用可能）もしくは酵母ベクター（酵母ディスプレイ系に適用可能）または哺乳動物発現ベクター（哺乳動物発現系に適用可能）は適宜理解される。

本開示は、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体及び抗体フラグメントを提供する。

本開示は、本開示に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗原またはＣＬＥＣ２Ｄのエピトープに結合する抗体または抗体フラグメントのＶＨドメイン及びＶＬドメインを提供する。

本開示は、本開示に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗原またはＣＬＥＣ２Ｄのエピトープに結合する抗体の、ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及びＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を提供する。

本開示のＶＨ配列及びＶＬ配列の任意の組み合わせは、本開示の範囲内であるとみなされる。ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、またはＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列の任意の組み合わせは、本開示の範囲内であるとみなされる。

あるモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体と同一の特異性を有する場合、前者が後者がＣＬＥＣ２Ｄに結合するのを阻害するかどうかを確認することにより、過度な実験をすることなく測定することが可能であることを当業者は理解するであろう。本開示のモノクローナル抗体による結合の低下が示すとおりに、試験するモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体と競合している場合、２種のモノクローナル抗体が、同一のエピトープまたは密接に関連したエピトープに結合すると考えられる。

あるモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体の特異性を有しているかどうかを確認するための別の方法は、本開示のモノクローナル抗体をＣＬＥＣ２Ｄタンパク質と前培養することであるが、正常に反応している場合、試験するモノクローナル抗体のＣＬＥＣ２Ｄに結合する能力が阻害されるかどうかを確認するために、試験するモノクローナル抗体を加える。試験するモノクローナル抗体が阻害された場合、そのモノクローナル抗体は、十中八九、本開示のモノクローナル抗体と同一または機能的に同等のエピトープ特異性を有している。本開示のモノクローナル抗体のスクリーニングはまた、ＣＬＥＣ２Ｄを利用して、試験モノクローナル抗体がＣＬＥＣ２Ｄを中和することが可能であるかどうかを確認することにより、実施することができる。

本開示のタンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログ、もしくはオルソログに向かうポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を作製するために、当該技術分野において周知の様々な手法を使用してもよい。（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｅ，ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。

免疫血清のＩｇＧ画分を主にもたらす、プロテインＡまたはプロテインＧを使用したアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術を用いて、抗体を精製してもよい。続いてまたは代替的に、イムノアフィニティークロマトグラフィーを用いて、探索する免疫グロブリンの標的である特異的抗原またはそのエピトープをカラムに固定して、免疫特異的抗体を精製してもよい。免疫グロブリンの精製については、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎが議論している（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ＰＡが出版したＴｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ １７，２０００），ｐｐ．２５－２８）。

モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載のようなハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、一般的に、マウス、ハムスター、またはその他の適切な宿主動物を免疫化剤で免疫化して、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することができるリンパ球を誘導する。代替的に、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化してもよい。

免疫化剤は一般的に、タンパク質抗原、そのフラグメント、またはその融合タンパク質を含む。一般的に、ヒト起源の細胞が望まれる場合、末梢血リンパ球のいずれかを使用する、または、非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合、脾臓細胞またはリンパ節細胞を使用する。次に、好適な融合剤、例えば、ポリエチレングリコールなどを使用して、リンパ球を不死化細胞株と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３）。不死化細胞株は通常、形質転換哺乳動物細胞、とりわけ、げっ歯類、ウシ、及びヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞を採用する。ハイブリドーマ細胞は、未融合不死化細胞の増殖または生存を阻害する１種または複数種の物質を好ましくは含有する好適な培地内で培養してもよい。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマ用の培地は通常、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻害する。

好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択した抗体産生細胞による抗体の安定した高レベル発現を持続させ、ＨＡＴ培地などの培地の影響を受けやすい、不死化細胞株である。より好ましい不死化細胞株は、例えば、ｔｈｅ Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ及びｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから得ることができるマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株についてもまた、ヒトモノクローナル抗体の作製用に記載されている。（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１－６３を参照のこと）。

次に、ハイブリドーマ細胞を培養する培地を、抗原に向かうモノクローナル抗体の存在用にアッセイしてもよい。好ましくは、ハイブリドーマ細胞が産生したモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降、または、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などにより、測定される。このような技術及びアッセイは当該技術分野において周知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード解析を用いて測定することができる。更に、モノクローナル抗体の治療適用においては、標的抗原に対する高度の特異性及び高い結合親和性を有する抗体を同定することが重要である。

所定のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを限界希釈法でサブクローニングして、標準的な方法で増殖させてもよい。（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３を参照のこと）。この目的のための好適な培地としては、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。代替的に、ハイブリドーマ細胞をｉｎ ｖｉｖｏ、哺乳動物の腹水で増殖させてもよい。

サブクローンが分泌したモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインＡ－セファロース、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどを用いて、培地または腹水から単離または精製してもよい。

モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組換えＤＮＡ法などを用いて作製することができる。従来の方法を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、本開示のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離及びシークエンスすることができる。一部の実施形態では、本開示のハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの供給源としての役割を果たす。一部の実施形態では、抗体遺伝子配列を本開示の方法（例えば、ファージライブラリディスプレイ及び酵母ライブラリディスプレイ）を用いて単離及びクローニングするが、抗体遺伝子配列は、このようなＤＮＡの供給源としての役割を果たす。単離後、ＤＮＡを発現ベクター内に入れてから、その発現ベクターを、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、類人猿ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などへとトランスフェクションして、組換え宿主細胞内におけるモノクローナル抗体の合成を得てもよい。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインでコード配列を置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８１２－１３（１９９４）を参照のこと）、または、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合連結することにより、修飾してもよい。このような非免疫グロブリンポリペプチドを、キメラ二価抗体を作製するために、本開示の抗体の定常ドメインで置換してもよく、または、本開示の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインで置換してもよい。

抗体または抗体フラグメントの発現及び精製に好適な全ての細胞株は、本開示の範囲内であるとみなされる。一部の実施形態では、細胞株は哺乳動物細胞株である。細胞株は、ヒト、マウス、及びハムスターを含む任意の供給源から単離または誘導してもよい。好適な細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｂ細胞、ＨＥＫ ２９３－６Ｅ細胞、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４細胞、及びＤＧ４４細胞が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、細胞株はハイブリドーマ細胞株である。

抗体は、本明細書に記載の一本鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントを含有するベクターを用いて、発現させてもよい。

これらとしては、ベクター、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバント補助ＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどを挙げることができる。ベクターとしては、標的化部分（例えば、細胞表面受容体に対するリガンド）及び核酸結合部分（例えば、ポリリジン）を有する、ＷＯ９３／６４７０１に記載されているような化学コンジュゲート、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡウイルスベクターまたはＲＮＡウイルスベクター）、標的部分（例えば、標的細胞に特異的な抗体）及び核酸結合部分（例えば、プロタミン）を含有する融合タンパク質である、ＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載されているような融合タンパク質、プラスミド、ファージなどが挙げられる。ベクターは、染色体性、非染色体性、または合成であってもよい。

好ましいベクターとしては、ウイルスベクター、融合タンパク質、及び化学コンジュゲートが挙げられる。レトロウイルスベクターとしてはモロニーマウス白血病ウイルスが挙げられる。ＤＮＡウイルスベクターが好ましい。これらのベクターとしては、ポックスベクター、例えば、オルソポックスベクターまたはトリポックスベクターなど、ヘルペスウイルスベクター、例えば、単純ヘルペスＩ型ウイルス（ＨＳＶ）ベクターなど（Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６４：４８７（１９９５）；Ｌｉｍ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９９５）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．：Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：７６０３（１９９３）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：１１４９（１９９０）を参照のこと）、アデノウイルスベクター（ＬｅＧａｌ ＬａＳａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ ３：２１９（１９９３）；Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）を参照のこと）、及びアデノ随伴ウイルスベクター（Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｍ．Ｇ．．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）を参照のこと）が挙げられる。

ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞の細胞質に導入する。トリポックスウイルスベクターは、核酸の短期間発現のみをもたらす。核酸を神経細胞に導入するには、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが好ましい。アデノウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（約４ヶ月間）と比較してより短い期間の発現（約２ヶ月間）をもたらすが、それはひいてはＨＳＶベクターよりも短い。選択する特定のベクターは、標的細胞及び治療する症状によって決まる。導入は、標準的な技術、例えば、感染、トランスフェクション、形質導入、または形質転換によるものであってもよい。遺伝子導入方法の例としては、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰＯ４沈降、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、原形質融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクション、及びウイルスベクターが挙げられる。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＶＨアミノ酸配列を以下の表２に示す。表２に列挙する配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列は、本開示の範囲内であるとみなされる。

本開示のＶＨアミノ酸配列は、以下の表３に示すポリヌクレオチドによってコードされていてもよい。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＶＬアミノ酸配列を以下の表４に示す。表４に列挙する配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列は、本開示の範囲内であるとみなされる。

本開示のＶＬアミノ酸配列は、以下の表５に示すポリヌクレオチドによってコードされていてもよい。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＣＤＲアミノ酸配列を以下の表６に示す。

一部の実施形態では、本開示の抗体、抗体フラグメント、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＣＤＲをコードするヌクレオチド配列は、野生型配列である。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、哺乳動物細胞内における発現用にコドン最適化されている。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内における発現用にコドン最適化されている。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断する抗体に関する（図１）。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はポリクローナル抗体である。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断することにより、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によりＣＬＥＣ２Ｄ発現細胞を除去することができる抗体に関する。一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断することにより、サイトカイン産生及びＮＫ細胞が介在する細胞傷害を促進することができる抗体に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はヒト化抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ１ Ｎ２９６Ａ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、またはＩｇＧ３アイソタイプである。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１０９～２１６からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：３２５～４３２からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１０９～２１６からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：３２５～４３２からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２５８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２１７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２８９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２３７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：５８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２７４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、ならびに、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５９０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９５に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４８６に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７２７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：７８４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：６１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６７８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８５２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４４６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：５０１に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５６７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８０４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４８８に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７８２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４６６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：５２１に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：６０３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８１４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５５３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：７９０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

本開示は、少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリを提供し、抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する。重鎖、軽鎖、重鎖ＣＤＲ１～３（すなわち、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）、及び軽鎖ＣＤＲ１～３（すなわち、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）の特定の組み合わせを有する様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を表９Ａに記載する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ２のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ３、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｏ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｏ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ１、ＩＧＨＤ６、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｑ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｑ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｒ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｒ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｓ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｓ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｔ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｔ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ１、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ４及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｖ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｖ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｗ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｗ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｘ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｘ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ５、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｚ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｚ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ１、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ６、ＩＧＨＤ１、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ３のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９に開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）はアフコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９に開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、アフコシル化抗体領域を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域または主鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全てはアフコシル化されている。一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、アフコシル化抗体領域を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は脱グリコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する脱グリコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のグリコシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はＮ－結合型グリコシル化を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はアフコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示するアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のフコシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はシアリル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示するシアリル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非シアリル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は高ガラクトシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する高ガラクトシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非ガラクトシル化または低ガラクトシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は高マンノシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する高マンノシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非ガラクトシル化または低マンノシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を有する、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を有する、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト、マウス、げっ歯類、ウサギ、ウマ、ウシ、トリ、ヤギ、ブタ、魚類、イヌ、またはネコフレームワーク生殖細胞系ファミリーに由来するまたはそれであるフレームワーク領域配列を含んでいてもよい。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ヒトフレームワーク生殖細胞系ファミリーに由来するまたはそれであるフレームワーク領域配列を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸を搭載するベクターに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列のうちのいずれか１つまたは全てを搭載するベクターに関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸を搭載するベクターをトランスフェクションした宿主細胞に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列を搭載するベクターをトランスフェクションした宿主細胞に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、薬剤、化学物質、または低分子にコンジュゲートしていてもよい。一部の実施形態では、薬剤は治療薬である。一部の実施形態では、治療薬は化学療法剤である。一部の実施形態では、治療薬は細胞傷害薬または薬物である。一部の実施形態では、治療薬は放射性同位体である。一部の実施形態では、薬剤は診断薬である。一部の実施形態では、診断薬としては、蛍光、化学発光、または放射性同位体の色素または薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。

エピトープ認識
一般的に、用語「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原上のエリアまたは領域のことを意味し、すなわち、「エピトープ」は、抗体と物理的に接触するエリアまたは領域のことである。タンパク質エピトープは、抗体への結合に直接関与する抗原内のアミノ酸残基（エピトープの主要抗原構成要素とも呼ばれる）、及び結合に直接関与しないその他のアミノ酸残基を含んでいてもよい。一部の実施形態では、本明細書における用語「エピトープ」は、特に明記しない限り、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または別のＣＬＥＣ２Ｄ特異的物質に特異的に結合するＣＬＥＣ２Ｄにおける任意の特定の領域の、両方のタイプの結合部位を含む（例えば、一部の状況において、本開示は、特定のアミノ酸残基に直接結合する抗体に関する）。個々の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のより詳細なエピトープマッピングは、アラニンスキャニング法により求めることができる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６、８８９、８９４、８９９、９０３、９０５、９０６、または９０７に記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄ内のアミノ酸残基ＴＨＲ１７８、ＡＳＮ９５、ＡＲＧ１３７、ＧＬＵ１７９、ＴＹＲ１７７、ＳＥＲ９８、ＧＬＵ１６２、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１０１、ＡＬＡ１６０、ＴＲＰ９６、ＣＹＳ１７６、ＧＬＵ１３８、ＡＲＧ１７５、ＧＬＹ１４０、ＳＥＲ１３６、ＡＳＰ１０４、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９４、ＧＬＵ１５０、ＴＨＲ１４９、ＧＬＹ１４８、ＧＬＮ１４１、ＰＲＯ１４２、ＬＹＳ１４４、ＴＨＲ１５２、ＴＲＰ１５１、ＡＳＮ１４７、ＡＲＧ１５３、ＴＲＰ１４３、ＩＬＥ１５７、ＣＹＳ１６３、ＳＥＲ１２９、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ１８１、ＡＳＰ９１、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１９４、ＴＹＲ１６５、ＡＬＡ１７４、ＬＥＵ１１０、ＡＳＮ１６７、ＡＳＰ１６８、ＩＬＥ１４６、ＳＥＲ１７２、ＧＬＹ１６１、ＳＥＲ１７３、ＬＥＵ１３５、ＡＳＰ１３０、ＧＬＮ１００、ＰＨＥ１５５、ＧＬＹ１５９、ＰＲＯ１５６、ＬＥＵ１５８、ＧＬＮ１１７、ＳＥＲ１１５、ＧＬＵ１１４、ＧＬＮ１５４、ＡＳＮ１２０、ＰＨＥ１１６、ＰＨＥ１０２、ＧＬＮ１０６、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＬＹＳ１８６、ＡＳＰ１０９、ＧＬＮ１１２、ＶＡＬ１９１、ＴＲＰ１４５、ＬＹＳ１６９、ＧＬＹ１２７、ＰＲＯ１２８、ＧＬＮ８３、ＬＹＳ８５、ＧＬＵ７７、ＧＬＹ１７０、ＬＥＵ１１９、ＬＥＵ１２３、ＴＲＰ１８２、ＳＥＲ９０、ＡＬＡ１０８、ＴＹＲ８８、ＨＩＳ１９０、ＩＬＥ１８９、ＡＬＡ７３、ＡＲＧ８４、ＳＥＲ７８、ＴＲＰ７９、ＰＲＯ７６、ＰＨＥ８２、ＡＬＡ１７１、ＡＳＰ１８８、ＣＹＳ７５を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６、８８９、８９４、８９９、９０３、９０５、９０６、または９０７に記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄ内のアミノ酸残基ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する配列番号：４２及び配列番号：２５８の可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９２１～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する配列番号：４２及び配列番号：２５８の可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４２及び配列番号：２５８は、アミノ酸ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４４及び配列番号：２６０は、アミノ酸ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０－ＸＡＡ１５１－ＴＨＲ１５２－ＡＲＧ１５３－ＧＬＮ１５４、ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４５及び配列番号：２６１は、アミノ酸ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１０１－ＸＡＡ１０２－ＸＡＡ－１０３－ＸＡＡ１０４－ＳＥＲ１０５－ＸＡＡ１０６－ＡＳＰ１０７、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：１及び配列番号：２１７は、アミノ酸ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１５３、ＡＳＰ９２－ＴＨＲ９３－ＬＹＳ９４、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：５８及び配列番号：２７４は、アミノ酸ＧＬＵ１３８－ＸＡＡ１３９－ＸＡＡ１４０－ＧＬＮ１４１－ＸＡＡ１４２－ＸＡＡ１４３－ＬＹＳ１４４、ＣＹＳ１７６を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：３５及び配列番号：２５１は、アミノ酸ＧＬＵ１３８－ＧＬＮ１３９－ＸＡＡ１４０－ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＸＡＡ１７９－ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：２１及び配列番号：２３７は、アミノ酸ＡＳＰ９２、ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７９－ＸＡＡ１８０－ＬＹＳ１８１、ＴＨＲ１５２－ＡＲＧ１５３－ＧＬＮ１５４を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７及び配列番号：２２３は、アミノ酸ＴＨＲ９３－ＸＡＡ９４－ＡＳＮ９５、ＡＲＧ１０１、ＧＬＮ１３９、ＰＨＥ１１６、ＡＲＧ１５３を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、アミノ酸ＴＨＲ９３－ＬＹＳ９４、ＡＲＧ１０１、ＧＬＮ１４１、ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６０に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６１に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６２に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６３に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６４に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６５に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６６に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６７に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

ライブラリスクリーニング
任意の特定の技術に束縛されるものではないが、本開示の抗原に結合する抗体は、以下に記載する方法を用いて同定及び特性決定することができる。

本明細書では、がん、関節リウマチ、神経性障害、感染性疾患、及び代謝性障害、またはこれらの任意の組み合わせを含む疾患を治療するための治療薬の供給源としてのナイーブ抗体ライブラリを提供する。本開示の方法を用いて同定した抗体を、研究用途用、標的発見用、機能ゲノミクスまたは抗体または抗体の誘導体を用いる任意の用途における確認用の、診断ツール、予後判定ツールとして使用してもよい。

一実施形態では、用語「パニング」とは、特定の標的／抗原に対する結合物質を選択する親和性選択技術のことを意味する。

一部の実施形態では、ナイーブ抗体遺伝子発現ライブラリをスクリーニングするための方法は、２つの独立したスキャニングツール：１）ファージディスプレイ技術及び２）酵母ディスプレイ技術を利用することにより、遺伝子クローンのプールの発現プロファイルを連続的に調査すること（図３）を含む。抗体遺伝子発現用に酵母系を使用することは、真核細胞タンパク質の翻訳、プロセシング、及び細胞表面上における抗体産物の適切な折り畳みのために、有利である。更に、酵母発現により、抗原性標的との高特異性の適切な相互作用が可能となる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する方法は、様々な抗原性標的に対する固有分子の同定を可能とする、ライブラリにおける多様性を維持する。

本開示の方法の一部の実施形態では、方法はまた、キメラ抗体分子、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＳｃＦａｂ、二量体抗体フラグメント及び三量体抗体フラグメント、ミニボディ、ヒト化モノクローナル抗体分子、ヒト抗体、二重特異性抗体、抗体のＦｃ領域及びこれらの分子から生じる任意の機能性フラグメントを含む融合タンパク質（誘導体分子は親抗体分子の免疫学的機能を保持している）、ならびに全てのその他の抗体フォーマットを含むがこれらに限定されない様々な組換え抗体フォーマットとして、多様性を２つのプラットフォーム間で移動させて探索する戦略を含む。

一部の実施形態では、本方法により得られた候補抗体分子は、抗体－抗原相互作用の構造－機能試験によって導かれる合理的設計により、更に最適化される。モノクローナル抗体医薬品の製造性における成功のための必要条件は、様々な生物学的特性及び／または相関特性、例えば、溶解性、凝集、抗原性、安定性などによって決まる。例示として、合理的であり、エビデンスに基づいており、より迅速な構造ベースの薬物設計は、とりわけ、がん化学療法、薬剤耐性感染症、神経性疾患の分野に非常に寄与している。これらの方法により得られた結果は、抗体ライブラリ構築及び選択分子の製造性を向上させるために本開示に採用されている。

一部の実施形態では、用語「単離」は、生体膜の一部ではない２つのタンパク質鎖またはそのフラグメントを含む新規かつ固有の分子に関する。詳細には、本開示の単離分子は、可溶性であり、共有結合または非共有結合により、直接またはリンカー分子を介した間接的のいずれかで連結している。これらの分子としては、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を挙げることができ、それらは、当業者に周知の方法に従い、容易に得ることができる。

一部の実施形態では、単離目的または検出目的用に、本明細書で開示する抗原または抗体にアフィニティータグを含ませてもよい。アフィニティータグは当該技術分野において周知であり、標的に結合されて、アフィニティータグに結合する分子を用いて標的を検出または単離するために使用される。主として、抗体またはその他の特異的結合物質が取得可能な任意のペプチドまたはタンパク質は、アフィニティータグとして使用することができる。使用に適した例示的なアフィニティータグとしては、単球アダプタータンパク質（ＭＯＮＡ）結合ペプチド、Ｔ７結合ペプチド、Ｖ５タグ、ストレプトアビジン結合ペプチド、ポリヒスチジントラクト、プロテインＡ（Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．４：１０７５（１９８５）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８：３（１９９１））、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｎｅ ６７：３１（１９８８））、Ｇｌｕ－Ｇｌｕアフィニティータグ（Ｇｒｕｓｓｅｎｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：７９５２（１９８５））、サブスタンスＰ、ＦＬＡＧペプチド（Ｈｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１２０４（１９８８））、またはその他の抗原性エピトープもしくは結合ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。一般的には、Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２：９５（１９９１）を参照されたい。一実施形態では、本明細書で開示する方法にＨｉｓ６タグを使用する。別の実施形態では、本明細書で開示する方法にＦＬＡＧタグを使用する。別の実施形態では、本明細書で開示する方法及び組成物にＶ５タグを使用する。アフィニティータグをコードするＤＮＡ分子は、市販の業者（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）から市販されている。

まとめると、本開示の方法は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原性標的に対する新規モノクローナル抗体を同定、確認、特性決定、及び開発することに集中している。これらの新規モノクローナル抗体は、がんを含む様々な疾患に適用可能な治療用製品、診断用製品、及び予後判定用製品に使用するために開発されている。

一部の実施形態では、ナイーブ抗体ライブラリであってもよい抗体ライブラリは、特定の治療標的、すなわち、抗原、例えば、本明細書で開示するＣＬＥＣ２Ｄタンパク質またはその任意のフラグメントなどに対する所望の機能特性を有する固有抗体分子の単離を可能にする。

多様なライブラリ及び適切かつ相性のよいディスプレイプラットフォームを組み合わせることにより、特定の抗原分子に対するより高い親和性及び優れた機能性を有する治療抗体の迅速な選択及び作製が可能となる。指向性治療抗体分子の標準的なスクリーニングは、より小さな抗体フラグメントによるディスプレイプラットフォームを用いて、標的抗原に対する多様かつ大規模な抗体ライブラリから分子を選択してから、哺乳動物細胞株内で発現する全長抗体分子を構築することを含む。発現後、精製プロセス及びその精製を確認するためのいくつかの機能アッセイを実施する。エピトープの同定、配合、安定性試験、及びｉｎ ｖｉｖｏ効果などのパラメータを最適化することにより、選択リード抗体の開発が更に強化される。

本開示の例示的な実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するヒトナイーブ抗体ライブラリからモノクローナル抗体をスクリーニング、単離、及び開発するための方法は、以下の記述を含む。哺乳動物系内で発現させるために適切に最適化／カスタマイズしたベクターを用いて、様々なＣＬＥＣ２Ｄ抗原構築物、すなわち、野生型及び変異体全長ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の可溶性外部ドメインを設計及び作製してから、均一になるまでアフィニティークロマトグラフィー法を用いて精製すること。

一部の実施形態では、約１～３ラウンドのＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いたファージパニングにより、分子のライブラリのスクリーニングを実施する。それぞれのラウンド中、非結合物質を除去することにより、ライブラリから特異的結合物質を選択する。選択多様性の無作為化を行ってまたは行わずに、ファージディスプレイプラットフォームを用いてスクリーニングした選択分子プールを酵母表面ディスプレイプラットフォームに導入する。これにより、任意のＰＣＲベース法の工程が回避され、それにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する選択分子プールが維持される。酵母ディスプレイプラットフォームは、異なるフォーマットの様々な抗体部分を発現させることを含む。特定の抗原性標的に対して提示フラグメントをスクリーニングしてから、標的抗原に対するより高い親和性を示す特定の集団を分離する。これらの選択されたプールの抗原特異性を更に試験する。最後に、個々のクローンを分離して、クローン集団を個々の抗体クローンのシークエンシングに使用する。

抗原に対してファージパニングするための方法は当該技術分野において周知である。例えば、磁性ビーズを使用してもよい。磁性ダイナビーズ上にコーティングされた抗原を調製し、抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングして、所望の抗体クローンを発現するファージ粒子を分離してもよい。

次に、精製ＤＮＡを消化して、好適な酵母発現ベクターにライゲートしてから、所望のフォーマットの抗体、例えば、ＦａｂまたはＳｃＦｖなどを作製してもよい。標準的な方法を用いて酵母細胞を形質転換してから、抗体発現を確認してもよい。それぞれ重鎖及び軽鎖用、免疫組織化学用の複数種のタグ、例えば、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、及び（Ｈｉｓ）_６タグ、ならびにＶ５タグなどを用いて、抗体の表面発現を解析してもよい。フローサイトメトリーを使用して、特異的抗原結合を示す抗体配列を発現する酵母細胞を単離してもよい。酵母細胞集団のフローサイトメトリーソーティングを少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返して、標識抗原に対するより高い親和性を有する抗体クローンを濃縮してもよい。

当該技術分野において標準的な方法を用いて個々の酵母クローンをシークエンスしてから、抗体配列を好適な哺乳動物遺伝子発現ベクターに更にクローニングする。

本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、ベクターを用いて抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、ファージを形質転換して、高多様性抗体遺伝子ライブラリを含むファージライブラリを作製することを含む。ファージライブラリ内のファージは、ファージの表面上に抗体遺伝子のライブラリを提示している。次に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原でこのファージライブラリをパニングすることにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製する。このパニングは、例えば、抗原を磁性ビーズにコンジュゲートすることにより、実施することができ、ビーズ上の抗原に結合するファージを単離するために使用することができる。パニング工程を少なくとも１回、少なくとも２回、またはそれ以上の回数繰り返して、抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現するファージを濃縮してもよい。

次に、濃縮ファージライブラリに由来する抗体または抗体フラグメントの遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入する。一部の実施形態では、この導入は、抗体または抗体フラグメントの遺伝子を好適な酵母形質転換用ベクターにクローニングしてから、当該技術分野において標準的な方法を用いて酵母細胞を形質転換することによって実施される。次に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現する酵母細胞を単離する。一部の実施形態では、この単離は、酵母細胞をソートするためのフローサイトメトリーを使用して、実施される。一部の実施形態では、方法は、フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、もしくは少なくとも５×、またはそれ以上の回数繰り返して、抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現する酵母細胞を濃縮することを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む。

最適化及び精製
一部の実施形態では、本明細書で開示する方法は、選択抗体遺伝子配列を発現用の哺乳動物細胞株、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株などに円滑に導入するためのベクター構築物の設計、作製、及び最適化、安定細胞株の作製、及びそれに続く全長モノクローナル抗体の精製を含む。これにより、下流プロセスに見られるコンフォメーション及び翻訳後修飾の観点から優れた均一性でモノクローナル抗体を発現する安定細胞株の迅速かつ効率的な樹立が可能となる。

抗体または抗体フラグメントの発現及び精製に好適な全ての細胞株は、本開示の範囲内であるとみなされる。一部の実施形態では、細胞株は哺乳動物細胞株である。細胞株は、ヒト、マウス、及びハムスターを含む任意の供給源から単離または誘導してもよい。好適な細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｂ細胞、ＨＥＫ ２９３－６Ｅ細胞、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４細胞、及びＤＧ４４細胞が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、抗体クローンのＣＤＲ長及びアミノ酸組成を解析して、これらのクローンの新規性を理解する。精製戦略、安定性、及び存在する電荷バリアントまたは抗体内の電荷バリアントに直接的な影響を及ぼす物理化学的特性にとって好ましくないモチーフを有するクローンを除去するために、追加の慎重な解析を実施する。

一部の実施形態では、リード抗体クローンの量産化は、所定の培地、補足剤、及び、当該技術分野において周知及び本明細書に記載の特定のバイオリアクタープロセスにより実現される。

本開示の例示的な精製方法は、抗体分子内のアミノ酸組成物の物理化学的性質を利用したクロマトグラフィー技術の複数の工程を含む。加えて、抗体の宿主細胞タンパク質／不純物、ポリマー（または凝集物）を効果的に除去して、抗体回収率を向上させることにより、より高い純度を達成することができる。安定性を更に向上させる適切な製剤を用いて、抗体分子の精製を完了させる。

治療用組成物は、製造及び保存の条件下で滅菌かつ安定な条件からなる。

抗体精製プロセスは当業者に周知である。任意の特定のプロセスに束縛されるものではないが、例示的な抗体精製プロセスは、精製する抗体または抗体フラグメントを発現する初代細胞培養物を遠心分離にかけてから、３μｍ～３０μｍフィルターなどのフィルターを使用して更に透明にすることを含む。それに続き、回収した濾液を、例えば、０．２２μｍフィルターを通して、更に濾過してもよい。液体クロマトグラフィーを用いて更に精製するために、この試料をカラムに充填してもよい。例示的なカラムとしては、ＸＫ １６／２０プロテインＡカラムが挙げられるがこれらに限定されない。液体クロマトグラフィーは、緩く結合した宿主細胞タンパク質及びその他の不純物を除去するための、高塩洗浄バッファーを用いた処理を含んでいてもよい。低ｐＨ洗浄バッファーを用いて微量の不純物を除去してもよい。それに続き、ｐＨ．３．０～４．０の３０ｍＭリン酸バッファーを使用して、結合タンパク質を溶出してもよい。この試料を希釈して伝導性を低下させてもよく、その後、陰イオン交換（ＡＥＸ）クロマトグラフィーをフロースルーモード（すなわち、陰性結合を使用した）で使用して、更に精製してもよい。例示的なＡＥＸカラムとしては、１０～１００ｍＭヒスチジン及び／またはクエン酸塩及び／またはリン酸塩及び／またはＭＥＳ及び／または酢酸塩バッファー（ｐＨ４．５～６．５）で予め平衡化していてもよい、ＱセファロースＸＫ １６／２０カラムが挙げられるがこれらに限定されない。溶出バッファーを洗浄液として使用して、相互作用の弱いタンパク質を除去してから、例えば、１Ｍ ＮａＣｌ及び／またはＫＣｌを含有する溶出バッファーを使用した単一工程で、結合タンパク質、例えば、本開示の抗体または抗体フラグメントなどを溶出してもよい。ＡＥＸクロマトグラフィーからのフロースルーを、１０～１００ｍＭヒスチジン及び／またはクエン酸塩及び／またはリン酸塩及び／または２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）及び／または酢酸塩バッファー（ｐＨ４．５～６．５）で予め平衡化したａｐｔｏ ＳＰ ＩｍｐＲｅｓ Ｃ１０／２０カラムに充填してもよい。溶出バッファー（ｐＨ４．５～６．５の、２００～１０００ｍＭ ＮａＣｌ及び／またはＫＣｌを含有する平衡バッファー）を使用した段階的溶出に続くグラジエント溶出により、結合タンパク質、例えば、本開示の抗体または抗体フラグメントなどを溶出してもよい。しかしながら、強く結合したタンパク質（存在する場合）を除去するために、ｐＨ４．５～６．５の、１～１．５Ｍ ＮａＣｌを含有する高塩バッファーであってもよい。

まとめると、高純度を達成しつつ、抗体の宿主細胞タンパク質／不純物、ポリマー（または凝集物）を効果的に除去して、抗体回収率を向上させるために、本開示の抗体及び抗体フラグメントをクロマトグラフィー技術の複数の工程で精製してもよい。例示的なクロマトグラフィー法は、イオン交換基と疎水性官能基の両方を含む混合様式レジンの使用を含む。アミノ酸を添加剤として使用してもよい。

治療の方法
本明細書で使用する場合、「治療すること」または「治療する」とは、疾患、症状、または障害を抑制しようとする目的における患者の管理及び看護を表し、疾患、症状、または障害の１種または複数種の症候または合併症を緩和するため、または、疾患、症状、または障害を除去するための、本開示の抗体または本開示の抗体を含む医薬組成物の投与を含む。用語「治療する」はまた、細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ処理または動物モデルの治療を含んでいてもよい。

本開示の抗体またはその医薬組成物はまた、疾患、症状、または障害を予防するために、または、このような目的のための好適な候補を同定するために、使用されてもよい。本明細書で使用する場合、「予防すること」または「予防する」とは、疾患、症状、または障害の症候または合併症の発症を抑制または除去することを表す。

本明細書で使用する場合、用語「緩和する」とは、障害の徴候または症候の重症度が低下するプロセスを表すことを意味する。重要なことに、徴候または症候は、除去されることなく緩和され得る。好ましい実施形態では、本開示の医薬組成物の投与は徴候または症候の除去をもたらすが、除去は必須ではない。有効用量は徴候または症候の重症度を低下させるものと予測される。例えば、複数箇所で生じ得るがんなどの障害の徴候または症候は、複数箇所のうちの少なくとも１箇所の内部においてがんの重症度が低下する場合に、緩和される。

本明細書で使用する場合、用語「症候」は、疾患、疾病、損傷の前兆、または体内において何かが正常ではないことの前兆と定義される。症候は、その症候を経験している個人によって感知または認知されるものであるが、他人によって容易に認知され得るものではない。他人は非医療従事者と定義される。

本明細書で使用する場合、用語「徴候」はまた、体内において何かが正常ではないことの前兆と定義される。しかし、徴候は、医師、看護師、またはその他の医療従事者によって認識され得る事柄と定義される。

本開示の抗体の治療有効量は一般的に、治療目的を達成するのに必要な量に関する。上記のとおり、このことは、特定の例において標的の機能を阻害する、抗体とその標的抗原の間の結合相互作用であり得る。投与が必要な量は更に、抗体のその特異的抗原に対する結合親和性によって決まり、抗体が投与されるその他の対象の遊離容量から投与抗体が枯渇する速度によってもまた決まる。本開示の抗体または抗体フラグメントの治療有効用量の一般的な範囲は、非限定例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）～約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）であってもよい。一般的な投与頻度は、例えば、１日２回から週に１回の範囲であってもよい。

抗体フラグメントを使用する場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さな阻害性フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列をベースとして、標的タンパク質配列への結合能を保持するペプチド分子を設計してもよい。このようなペプチドは、化学的に合成する及び／または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することができる。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）を参照のこと）。

本開示の非限定実施形態では、単離モノクローナル抗体により、様々な誘導条件に応じた、免疫細胞及び腫瘍細胞を含む様々な細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的発現が明らかとなった。このことは、複数の疾患適応症用の治療薬としての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の使用を示している。

本開示は、本開示の組成物、抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を必要とする対象にそれを投与することによって、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害することにより、疾患を治療するための方法を提供する。

一部の実施形態では、本開示の組成物、抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸によって治療される疾患は、がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患、または、ＣＬＥＣ２Ｄが疾患の誘導及び／または発症において役割を果たしている（例えば、ＣＤ１６１を阻害することにより）その他の疾患である。

例示的な疾患としては、血清反応陰性脊椎関節症、例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、及び炎症性腸疾患を伴う脊椎関節症などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては人工関節弛緩が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としてはアテローム性動脈硬化症が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、及び血球貪食症候群などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む、がんに関連した疾患及びがんが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮細胞癌及び子宮頸腺癌、胆管癌、結腸腺癌、リンパ系腫瘍びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、多形膠芽腫、頭頸部扁平上皮細胞癌、色素嫌性腎癌、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳低グレード神経膠腫、肝臓肝細胞癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜黒色腫が挙げられるがこれらに限定されない。

好ましい実施形態では、本開示の組成物及び方法は、骨への転移性がんの治療に関し、転移性がんは、乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、白血病及びリンパ腫を含む血液細胞悪性腫瘍；頭頸部癌；食道癌、胃癌、結腸癌、腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、咽頭癌、胆管または胆嚢の癌を含む消化管癌；卵巣癌、子宮内膜癌、腟癌、及び子宮頸癌を含む女性生殖管の悪性腫瘍；膀胱癌；神経芽細胞腫を含む脳癌；肉腫、骨肉腫；ならびに、悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌である。

一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、免疫細胞の活性化を必要とする対象においてそれを実施することに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞）の活性化に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、哺乳動物対象の治療に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、ヒト対象の治療に関する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、細胞は免疫細胞または腫瘍細胞である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害するのに有効な量で、対象に投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＮＫ細胞に結合して活性化させるのに有効な量で、対象に投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用される本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、血清反応陰性脊椎関節症、例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、及び炎症性腸疾患を伴う脊椎関節症などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、アテローム性動脈硬化症及び冠状動脈疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、及び血球貪食症候群などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、がんに関連した疾患及びがんを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む、がんに関連した疾患及びがんを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、骨への転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患（転移性がんは、乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、白血病及びリンパ腫を含む血液細胞悪性腫瘍；頭頸部癌；食道癌、胃癌、結腸癌、腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管または胆嚢の癌を含む消化管癌；卵巣癌、子宮内膜癌、腟癌、及び子宮頸癌を含む女性生殖管の悪性腫瘍；膀胱癌；神経芽細胞腫を含む脳癌；肉腫、骨肉腫；ならびに、悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌である）を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、臓器移植または養子免疫細胞移植による対象の治療方法に使用される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用を遮断して、レシピエントの樹状細胞が同種反応性ＮＫ細胞によって殺傷される場合に起因して、移植片対宿主拒絶反応を抑制する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物によって引き起こされる、対象における感染性疾患を治療するための方法に使用される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、とりわけ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．（例えば、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ及びＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉなど）、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ．（例えば、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｖｅｒｏｎｉｉ ｂｉｏｖａｒ ｓｏｂｒｉａ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、及びＡｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅなど），Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎａｐｌａｓｍａ ｍａｒｇｉｎａｌｅ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓなど）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．（例えば、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓなど）、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ及びＢａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅなど）、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、及びＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａなど）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐ．（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ，及びＢｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉなど）、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｃａｎｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｎｔｅｎｓｉｓ及びＢｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓなど）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ．（例えば、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａなど）、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｌａｒｉ及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓなど）、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｓｐ．、Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｉｋｅｕｍ及びＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍなど）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉなど）、Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ及びｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（例えば、ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｉｎｖａｓｉｖｅ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅ．ｃｏｌｉ及びｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉなど）を含むＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなど）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍなど）、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｓｐ．（例えば、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｅｅｎｓｉａ及びＥｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓなど）、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ａｅｇｙｐｔｉｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ及びＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓなど）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｃｉｎａｅｄｉ及びＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｎｎｅｌｌｉａｅなど）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇｉｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ及びＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａなど）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍなど）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ ｓｐ．（例えば、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ、及びＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍなど）、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐ．（例えば、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｃｙｒｉａｃｉｇｅｏｒｇｉｃａ及びＮｏｃａｒｄｉａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなど）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ．（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ及びＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓなど）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｒｂｉｃｕｌａｒｅ（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ）、Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ．、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ及びＰｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓなど）、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｐ．（例えば、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｒｅｔｔｇｅｒｉ及びＰｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉｉなど）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｓｐ．（例えば、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ及びＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ（ｆｏｒｍｅｒｌｙ： Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ）及びＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉなど）、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍなど）、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｓｐ．（例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓａｎｓ及びＳｅｒｒａｔｉａ ｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓなど）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ及びＳｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉなど）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、クロラムフェニコール耐性血清型４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、スペクチノマイシン耐性血清型６Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ストレプトマイシン耐性血清型９Ｖ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、エリスロマイシン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オプトヒン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、リファンピシン耐性血清型１８Ｃ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、テトラサイクリン耐性血清型１９Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ペニシリン耐性血清型１９Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、及びトリメトプリム耐性血清型２３Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、クロラムフェニコール耐性血清型４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、スペクチノマイシン耐性血清型６Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ストレプトマイシン耐性血清型、９Ｖ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オプトヒン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、リファンピシン耐性血清型１８Ｃ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ペニシリン耐性血清型１９Ｆ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはトリメトプリム耐性血清型２３Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｃ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ

ｅｑｕｉｓｍｉｌｉｓ、Ｄ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｆ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ Ｇ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｍｉｎｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｓｐ．（例えば、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｃａｒａｔｅｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｔｅｎｕｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ及びＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｅｎｄｅｍｉｃｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ、Ｔ． ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ、Ｔｒｏｐｈｅｒｙｍａ ｗｈｉｐｐｅｌｉｉなど）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．（例えば、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ，Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｍｉｍｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｈｏｌｌｉｓａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｍｅｔｃｈｎｉｋｏｖｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ ｄａｍｓｅｌａ及びＶｉｂｒｉｏ ｆｕｒｎｉｓｉｉなど）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｐ．（例えば、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、及びＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）及びＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における細菌性疾患を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉ、ｓｐ．Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．（例えば、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍなど）、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．（例えば、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉなど）、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ（例えば、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔａｒｕｍなど）、Ｍｕｃｒｏｙｍｃｏｓｉｓ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ、真菌眼感染症白癬、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における真菌性疾患を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、Ｅｕｇｌｅｎｏｚｏａ、Ｈｅｔｅｒｏｌｏｂｏｓｅａ、Ｄｉｐｌｏｍｏｎａｄｉｄａ、Ａｍｏｅｂｏｚｏａ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｃ、及びＡｐｉｃｏｍｐｌｅｘａのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における原虫感染症を治療するための方法に使用される。例示的なＥｕｇｌｅｎｏｚａとしては、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌ．ｍａｊｏｒ、Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、及びＬ．ｄｏｎｏｖａｎｉが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＨｅｔｅｒｏｌｏｂｏｓｅａとしてはＮａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＤｉｐｌｏｍｏｎａｄｉｄｓとしてはＧｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（Ｇ．ｌａｍｂｌｉａ、Ｇ．ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＡｍｏｅｂｏｚｏａとしては、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｉ、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ ｍａｄｒｉｌｌａｒｉｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＢｌａｓｔｏｃｙｓｔｓとしてはＢｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｃ ｈｏｍｉｎｉｓが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＡｐｉｃｏｍｐｌｅｘａとしては、Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｏｖａｌｅ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、エボラウイルス、麻疹ウイルス、ＳＡＲＳ、チクングニヤウイルス、肝炎ウイルス、マールブルグウイルス、黄熱ウイルス、ＭＥＲＳ、デング熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、インフルエンザウイルス、ラブドウイルス、またはＨＩＶのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象におけるウイルス性疾患を治療するための方法に使用される。肝炎ウイルスは、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎を含み得る。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、スーダンエボラウイルス、ブンディブギョウイルス、タイフォレストエボラウイルス、レストンエボラウイルス、Ａｃｈｉｍｏｔａ、ヤブカ属フラビウイルス、Ａｇｕａｃａｔｅウイルス、アカバネウイルス、Ａｌｅｔｈｉｎｏｐｈｉｄ ｒｅｐｔａｒｅｎａウイルス、Ａｌｌｐａｈｕａｙｏマンマレナウイルス、Ａｍａｐｒｉマンマレナウイルス、アンデスウイルス、アポイウイルス、アラバンウイルス、アロアウイルス、Ａｒｕｍｗｏｔウイルス、タイセイヨウサケパラミクソウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、トリボルナウイルス、トリメタニューモウイルス、トリパラミクソウイルス、ペンギンまたはフォークランド諸島ウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バガザウイルス、バンナウイルス、コウモリヘルペスウイルス、コウモリサポウイルス、Ｂｅａｒ Ｃａｎｏｎマンマレナウイルス、Ｂｅｉｌｏｎｇウイルス、ベータコロナウイルス、ベータパピローマウイルス１～６、Ｂｈａｎｊａウイルス、ボケローコウモリリッサウイルス、ボルナ病ウイルス、バーボンウイルス、ウシヘパシウイルス、ウシパラインフルエンザウイルス３、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、Ｂｒａｚｏｒａｎウイルス、ブニヤンベラウイルス、カリシウイルス科ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、カンディルーウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌニューモウイルス、シダーウイルス、細胞融合因子ウイルス、クジラ目モルビリウイルス、チャンディプラウイルス、朝陽ウイルス、チャパレマンマレナウイルス、チクングニヤウイルス、コロブスサルパピローマウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、牛痘ウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、イエカ属フラビウイルス、Ｃｕｐｉｘｉマンマレナウイルス、デング熱ウイルス、ドブラバベオグラードウイルス、Ｄｏｎｇｇａｎｇウイルス、Ｄｕｇｂｅウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エンテベコウモリウイルス、エンテロウイルスＡ～Ｄ、ヨーロッパコウモリリッサウイルス１～２、Ｅｙａｃｈウイルス、ネコモルビリウイルス、フェルドランスパラミクソウイルス、フィッツロイ川ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、フレキサルマンマレナウイルス、ＧＢウイルスＣ、Ｇａｉｒｏウイルス、ゲミサーキュラーウイルス、ガチョウパラミクソウイルスＳＦ０２、グレートアイランドウイルス、グアナリトマンマレナウイルス、ハンタンウイルス、ハンタウイルスＺ１０、ハートランドウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｅ型肝炎、デルタ型肝炎ウイルス、ヒトボカウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒト内在性レトロウイルスＫ、ヒト腸内コロナウイルス、ヒト生殖器関連環状ＤＮＡウイルス－１、ヒトヘルペスウイルス１～８、ヒト免疫不全ウイルス１／２、ヒトマストアデノウイルスＡＧ、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス１～４、ヒトパレコウイルス、ヒトピコルナウイルス、ヒトスマコウイルス、イコマリッサウイルス、イレウスウイルス、インフルエンザＡ～Ｃ、イッピーマンマレナウイルス、イルクーツウイルス、Ｊ－ウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンマンマレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、カディピロウイルス、カミチ川ウイルス、Ｋｅｄｏｕｇｏｕウイルス、クージャンウイルス、ココベラウイルス、キャサヌル森林病ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ランガットウイルス、ラッサマンマレナウイルス、ラティーノマンマレナウイルス、Ｌｅｏｐａｒｄｓ Ｈｉｌｌウイルス、遼寧ウイルス、ユンガンウイルス、Ｌｌｏｖｉｕウイルス、跳躍病ウイルス、ルジョマンマレナウイルス、Ｌｕｎａマンマレナウイルス、Ｌｕｎｋウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎マンマレナウイルス、リッサウイルスＯｚｅｒｎｏｅ、ＭＳＳＩ２Ｙ２２５ウイルス、マチュポマンマレナウイルス、ママストロウイルス１、マンサニリャウイルス、マプエラウイルス、マールブルグウイルス、マヤロウイルス、麻疹ウイルス、メナングルウイルス、Ｍｅｒｃａｄｅｏウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス、モバラマンマレナウイルス、モドックウイルス、Ｍｏｉｊａｎｇウイルス、Ｍｏｋｏｌｏウイルス、サル痘ウイルス、モンタナホオヒゲコウモリ白質脳炎ウイルス、モペイアラッサウイルス再集合２９、モペイアマンマレナウイルス、モロゴロウイルス、モスマンウイルス、ムンプスウイルス、マウス肺炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、Ｎａｒｉｖａウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、ノルウェーラットヘパシウイルス、ウンタヤウイルス、オニョンニョンウイルス、オリベロスマンマレナウイルス、オムスク出血熱ウイルス、オロポーチウイルス、パラインフルエンザウイルス５、パラナマンマレナウイルス、パラマッタ川ウイルス、小反芻獣疫ウイルス、Ｐｉｃｈａｎｄｅマンマレナウイルス、ピコルナウイルス科ウイルス、Ｐｉｒｉｔａｌマンマレナウイルス、ピスチヘペウイルスＡ、ブタパラインフルエンザウイルス１、ブタルブラウイルス、ポワッサンウイルス、霊長類Ｔリンパ指向性ウイルス１～２、霊長類エリスロパルボウイルス１、プンタトロウイルス、プーマラウイルス、クアンビンウイルス、狂犬病ウイルス、Ｒａｚｄａｎウイルス、爬虫類ボルナウイルス１、ライノウイルスＡ～Ｂ、リフトバレー熱ウイルス、牛疫ウイルス、リオブラボーウイルス、げっ歯類トルクテノウイルス、げっ歯類ヘパシウイルス、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ～Ｉ、ロイヤルファームウイルス、風疹ウイルス、サビアマンマレナウイルス、セーラムウイルス、サシチョウバエ熱ナポリウイルス、サシチョウバエ熱シシリアンウイルス、サッポロウイルス、サシュペリウイルス、アザラシ科アネロウイルス、セムリキ森林ウイルス、センダイウイルス、ソウルウイルス、セピックウイルス、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス、重症熱性血小板減少症候群ウイルス、シャモンダウイルス、Ｓｈｉｍｏｎｉコウモリウイルス、シュニウイルス、シンブウイルス、類人猿トルクテノウイルス、シミアンウイルス４０～４１、シンノンブレウイルス、シンドビスウイルス、小アネロウイルス、Ｓｏｓｕｇａウイルス、スペインヤギ脳炎ウイルス、スポンドウェニウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、サンシャインウイルス、ＴＴＶ様ミニウイルス、タカリベマンマレナウイルス、タイラウイルス、タマナコウモリウイルス、タミアミマンマレナウイルス、テンブスウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤムウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、ティオマンウイルス、トガウイルス科ウイルス、トルクテノイヌウイルス、トルクテノヨザルウイルス、トルクテノネコウイルス、トルクテノミディウイルス、トルクテノｓｕｓウイルス、トルクテノタマリンウイルス、トルクテノウイルス、トルクテノアシカウイルス、Ｔｕｈｏｋｏウイルス、トゥーラウイルス、ツパイパラミクソウイルス、ウスツウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、痘瘡ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎インディアナウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウェッセルスブロンウイルス、西コーカサスコウモリウイルス、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ホワイトウォーターアロヨマンマレナウイルス、黄熱ウイルス、ヨコセウイルス、Ｙｕｇ Ｂｏｇｄａｎｏｖａｃウイルス、ザイールエボラウイルス、ジカウイルス、またはＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉウイルスＺウイルス性配列のうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象におけるウイルス性疾患を治療するための方法に使用される。治療可能なＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患の例は、コロナウイルス科ウイルス、ピコルナウイルス科ウイルス、カリシウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、トガウイルス科ウイルス、ボルナウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ニューモウイルス科、ラブドウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、オルソミクソウイルス科、またはデルタウイルスのうちの１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）を含む。特定の実施形態では、ウイルスは、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ポリオウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎、ノーウォークウイルス、黄熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、ロスリバーウイルス、シンドビスウイルス、チクングニヤウイルス、ボルナ病ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ニパウイルス、ヘンドラウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、ラッサウイルス、ハンタウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、インフルエンザ、またはＤ型肝炎ウイルスである。特定の実施形態では、ウイルスは、アルファレトロウイルス属、ベータレトロウイルス属、ガンマレトロウイルス属、デルタレトロウイルス属、イプシロンレトロウイルス属、レンチウイルス属、スプーマウイルス属、または、メタウイルス科、シュードウイルス科、及びレトロウイルス科（ＨＩＶを含む）、ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルスを含む）、ならびにカリモウイルス科（カリフラワーモザイクウイルスを含む）のウイルスのうちの１つまたは複数またはその任意の組み合わせを含むがこれらに限定されないレトロウイルスである。

一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性ウイルス感染症、例えば、ＨＩＶなどを含む。一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性細菌感染症、例えば、結核（ＴＢ）などを含む。一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性寄生虫感染症、例えば、マラリアなどを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、（ｉ）様々な細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄの、免疫細胞の表面上におけるＣＤ１６１への結合を遮断すること、（ｉｉ）様々な細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現を抑制すること、（ｉｉｉ）ＣＬＥＣ２Ｄの免疫細胞上のＣＤ１６１への結合により免疫細胞において誘導される１種または複数種の遺伝子の発現を抑制すること、（ｉｖ）免疫細胞の表面上における１つまたは複数のＦｃ受容体に結合すること及び／またはそれを活性化させること、（ｖ）免疫細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して免疫細胞を活性化させること、またはこれらの任意の組み合わせのいずれかにとって十分な量で、１種または複数種の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を治療薬として、疾患または障害の治療を必要とする対象に投与することを含む、疾患または障害の治療を必要とする対象の様々な細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの高発現を特徴とする疾患または障害を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本発明は、ａ）対象に由来する試料中における生存及び／または増殖がん細胞の数を検出すること、ｂ）治療有効量の１種または複数種の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、ｃ）工程ａ）を１回または複数回繰り返すこと、及びｄ）工程ａ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数を工程ｃ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数と比較すること、を含む、がんもしくは腫瘍またはその両方を患う対象における治療薬の効果を評価するための方法に関し、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、（ｉ）がん細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して、腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄと免疫細胞の表面上におけるＣＤ１６１の間の相互作用を阻害する、（ｉｉ）がん細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ及び免疫細胞の表面上におけるＦｃ受容体に結合して、がん細胞の溶解を誘導する、（ｉｉｉ）免疫細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して免疫細胞を活性化させる、またはこれらの組み合わせであり、工程ａ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数と比較した、工程ｃ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の不在またはその数の減少は、治療薬が有効であることを示す。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞の機能を向上させ得る。

一部の実施形態では、本発明は、対象における疾患または障害を治療するための方法に関し、方法は、治療有効量の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び治療有効量の少なくとも第２の治療薬の組み合わせを必要とする対象にそれを投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、腫瘍細胞または免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。

一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、腫瘍細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、抗体誘導細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体誘導細胞傷害（ＣＤＣ）を介した免疫細胞による殺傷を誘導する、腫瘍細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞の活性化を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞によるサイトカイン産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞によるケモカイン産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞の炎症性サイトカインの産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞を活性化させることによりがん細胞を認識させてがん細胞における細胞傷害を誘導させる、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞を活性化させることにより病原体に感染した細胞を認識させてそれら細胞における細胞傷害を誘導させる、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含み、病原体としてはウイルスまたは細菌が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物及び少なくとも第２の治療薬を連続的または同時に投与することを含む。

炎症性疾患の治療
一部の実施形態では、本開示の抗体及び抗体を含む医薬組成物によって治療される疾患または障害は、炎症性疾患もしくは炎症性障害または自己免疫疾患もしくは自己免疫障害を含む。

本明細書で使用する場合、用語「炎症性障害」とは、通常は好中球の走化性によって引き起こされる炎症を招く病理学的状態のことを意味する。

本明細書で使用する場合、自己免疫疾患または自己免疫障害は、通常は細菌、ウイルス、及びその他の感染性物質から体を防御する体の免疫系が「自己」組織、細胞、及び器官を攻撃する際に引き起こされる。このような「自己」標的に対して免疫系を動員することを自己免疫と呼ぶ。全ての個体にはある程度の自己免疫が存在しているが、自己免疫が正常に無症候性となるくらいまで、厳格な制御系が免疫系の自己認識細胞を抑制している。疾患状態は、制御系に何らかの遮断が生じて自己免疫細胞の抑制回避が可能となる際、または、標的組織に何らかの変化が生じ、その結果、標的組織がもはや自己として認識されないようになる際に生じる。自己免疫障害は炎症反応を特徴とし得る。

炎症性障害または自己免疫障害の例示的ではあるが非限定例としては、血清反応陰性脊椎関節症、結合組織病、炎症性腸疾患、関節炎、炎症性皮膚症状、炎症性肺疾患、炎症性腎疾患、全身性血管炎、マクロファージ活性化疾患、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、レイノー現象及びグッドパスチャー症候群が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、炎症性障害または自己免疫障害の徴候または症候を緩和または予防する。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、対象の１つまたは複数の組織または器官における炎症の量を低下させる。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、疾患または免疫応答の１つまたは複数の局面を一時的に抑制または阻害する。疾患または免疫系の１つまたは複数の局面におけるこのような一時的な阻害または抑制は、何時間、何日間、何週間、または何ヶ月間にもわたり継続し得る。好ましくは、疾患または免疫応答の１つまたは複数の局面における一時的な阻害または抑制は、数時間（例えば、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２４時間、３６時間、または４８時間）、数日間（例えば、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、または１４日間）、または数週間（例えば、３週間、４週間、５週間、または６週間）にわたり継続する。

本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物の予防活性、治療活性、または免疫調節活性は、例えば、共刺激分子及びサイトカインなどの特定のタンパク質の発現用のＣＴＬアッセイ、増殖アッセイ、及びイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を含む当業者に周知の任意の技術を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。

がんの治療
本明細書で使用する場合、用語「重症度」とは、前がん性または良性の状態から悪性の状態へとがんが変化する可能性を表すことを意味する。代替的にまたは加えて、重症度とは、例えば、ＴＮＭシステム（ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃａｎｃｅｒ（ＵＩＣＣ）及びｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）によって承認されている）またはその他の技術分野において認知されている方法による、がんのステージを表すことを意味する。がんのステージとは、原発性腫瘍の場所、腫瘍サイズ、腫瘍の数、及びリンパ節浸潤（リンパ節へのがんの拡散）などの因子に基づいた、がんの程度または重症度のことを意味する。代替的にまたは加えて、重症度とは、技術分野において認知されている方法による腫瘍グレードを表すことを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。腫瘍グレードは、顕微鏡下でがん細胞がどの程度異常に見えるか及び腫瘍がどの程度急速に増殖及び拡散する可能性があるかを基準として、がん細胞を分類するのに用いられるシステムである。腫瘍グレードを判定する際には、細胞の構造パターン及び増殖パターンを含む多くの因子を検討する。腫瘍グレードを判定するのに用いられる個々の因子は、それぞれのがんのタイプによって変化する。重症度はまた、組織学的グレード（分化とも呼ばれる）を表し、組織学的グレードとは、腫瘍細胞がどの程度同一組織タイプの正常細胞に類似しているかということを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。更に、重症度は核グレードを表し、核グレードとは、腫瘍細胞内の核のサイズ及び形状、及び分裂している腫瘍細胞のパーセンテージのことを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。

本開示の別の態様では、重症度は、腫瘍が増殖因子を分泌した度合い、腫瘍が細胞外マトリックスを分解した度合い、腫瘍が血管を新生した度合い、腫瘍が近位組織への接着を失った度合い、または腫瘍が転移した度合いを表す。更に、重症度は、原発性腫瘍が転移した場所の数を表す。最後に、重症度は、様々なタイプ及び場所の腫瘍を治療することの困難さを含む。例えば、複数の身体系へとより多く侵入する手術不能腫瘍及び手術不能がん（血液腫瘍及び免疫学的腫瘍）、ならびに、従来の治療法に最大限の耐性を示す手術不能腫瘍及び手術不能がんが、最も重度であると考えられる。これらの状況において、対象の平均余命を延長すること及び／または疼痛を軽減すること、がん性細胞の比率を低下させることまたはそれらの細胞を１つの系に限定すること、及びがんのステージ／腫瘍グレード／組織学的グレード／核グレードを改善することは、がんの徴候または症候を緩和するものと考えられる。

がんは、ほぼあらゆる徴候または症候を引き起こし得る疾患の集合である。徴候及び症候は、がんがどこにあるか、がんのサイズ、及びがんがどの程度隣接する器官または構造体に影響を及ぼしているかによって決まる。がんが拡散（転移）している場合、症候は体の様々な部分に現れ得る。

がんを治療することにより、腫瘍サイズの低下をもたらすことができる。腫瘍サイズの低下はまた、「腫瘍退縮」と呼ばれることもある。好ましくは、治療後、腫瘍サイズは、その治療前のサイズと比較して５％以上低下する、より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上低下する、より好ましくは、２０％以上低下する、より好ましくは、３０％以上低下する、より好ましくは、４０％以上低下する、更により好ましくは、５０％以上低下する、及び最も好ましくは、７５％超またはそれ以上低下する。腫瘍サイズは、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍サイズは、腫瘍の直径で測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍容積の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍容積は、その治療前のサイズと比較して５％以上低下する、より好ましくは、腫瘍容積は、１０％以上低下する、より好ましくは、２０％以上低下する、より好ましくは、３０％以上低下する、より好ましくは、４０％以上低下する、更により好ましくは、５０％以上低下する、及び最も好ましくは、７５％超またはそれ以上低下する。腫瘍容積は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍の数の減少がもたらされる。好ましくは、治療後、腫瘍の数は、治療前の数と比較して５％以上減少する、より好ましくは、腫瘍の数は、１０％以上減少する、より好ましくは、２０％以上減少する、より好ましくは、３０％以上減少する、より好ましくは、４０％以上減少する、更により好ましくは、５０％以上減少する、及び最も好ましくは、７５％超減少する。腫瘍の数は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍の数は、肉眼または特定の倍率で確認できる腫瘍をカウントすることによって測定してもよい。好ましくは、特定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。

がんを治療することにより、原発性腫瘍部位から離れたその他の組織または器官における転移性病変の数の減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、転移性病変の数は、治療前の数と比較して５％以上減少する、より好ましくは、転移性病変の数は、１０％以上減少する、より好ましくは、２０％以上減少する、より好ましくは、３０％以上減少する、より好ましくは、４０％以上減少する、更により好ましくは、５０％以上減少する、及び最も好ましくは、７５％超減少する。転移性病変の数は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。転移性病変の数は、肉眼または特定の倍率で確認できる転移性病変をカウントすることによって測定してもよい。好ましくは、特定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。

がんを治療することにより、担体のみを投与されている集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、未治療対象の集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、本開示の抗体ではない薬物を用いた単剤治療を受けている集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、担体のみを投与されている集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。がんを治療することにより、未治療集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。がんを治療することにより、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物ではない薬物を用いた単剤治療を受けている集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。好ましくは、死亡率は、２％超、より好ましくは、５％超、より好ましくは、１０％超、及び最も好ましくは、２５％超低下する。治療対象の集団における死亡率の低下は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の死亡率の低下は、例えば、抗体を用いた治療の開始後における、単位時間あたりの集団の平均疾患関連死亡数を計算することによって測定してもよい。集団の死亡率の低下はまた、例えば、抗体を用いた治療の第１のラウンドの完了後における、単位時間あたりの集団の平均疾患関連死亡数を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍増殖速度の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍増殖速度は、治療前の数値と比較して少なくとも５％低下する、より好ましくは、腫瘍増殖速度は、少なくとも１０％低下する、より好ましくは、少なくとも２０％低下する、より好ましくは、少なくとも３０％低下する、より好ましくは、少なくとも４０％低下する、より好ましくは、少なくとも５０％低下する、更により好ましくは、少なくとも５０％低下する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。腫瘍増殖速度は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍増殖速度は、単位時間あたりの腫瘍直径の変化によって測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍再増殖の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍再増殖は、５％未満である、より好ましくは、腫瘍再増殖は、１０％未満である、より好ましくは、２０％未満である、より好ましくは、３０％未満である、より好ましくは、４０％未満である、より好ましくは、５０％未満である、更により好ましくは、５０％未満である、及び最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再増殖は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍再増殖は、例えば、治療に続く事前の腫瘍縮小後における腫瘍直径の増加を測定することによって測定される。腫瘍再増殖の低下は、治療停止後において腫瘍が再発しないことによって示される。

がんを治療することにより、細胞増殖速度の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、細胞増殖速度は、少なくとも５％、より好ましくは、少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、更により好ましくは、少なくとも５０％、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖速度は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。細胞増殖速度は、例えば、単位時間あたりの組織試料中における分裂細胞の数を測定することによって測定される。

がんを治療することにより、増殖細胞比率の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、増殖細胞比率は、少なくとも５％、より好ましくは、少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、更により好ましくは、少なくとも５０％、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。増殖細胞比率は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。好ましくは、増殖細胞比率は、例えば、組織試料中における非分裂細胞の数と比較して分裂細胞の数を定量することによって測定される。増殖細胞比率は有糸分裂指数と同義であってもよい。

がんを治療することにより、細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズ低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、その治療前のサイズと比較して少なくとも５％低下する、より好ましくは、少なくとも１０％低下する、より好ましくは、少なくとも２０％低下する、より好ましくは、少なくとも３０％低下する、より好ましくは、少なくとも４０％低下する、より好ましくは、少なくとも５０％低下する、更により好ましくは、少なくとも５０％低下する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、細胞増殖エリアまたはゾーンの直径または幅で測定してもよい。がんを治療することにより、異常な外観または形態を有する細胞の数の減少または比率の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、異常な形態を有する細胞の数は、その治療前のサイズと比較して少なくとも５％減少する、より好ましくは、少なくとも１０％減少する、より好ましくは、少なくとも２０％減少する、より好ましくは、少なくとも３０％減少する、より好ましくは、少なくとも４０％減少する、より好ましくは、少なくとも５０％減少する、更により好ましくは、少なくとも５０％減少する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％減少する。異常細胞の外観または形態は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。異常細胞の形態は、顕微鏡により、例えば、倒立組織培養顕微鏡を使用して測定することができる。異常細胞の形態は、核多型の形態を取り得る。

がんを治療することにより、細胞死をもたらすことができる、及び好ましくは、細胞死により、集団の細胞の数において少なくとも１０％の減少がもたらされる。より好ましくは、細胞死とは、少なくとも２０％の減少、より好ましくは、少なくとも３０％の減少、より好ましくは、少なくとも４０％の減少、より好ましくは、少なくとも５０％の減少、最も好ましくは、少なくとも７５％の減少のことを意味する。集団の細胞の数は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の細胞の数は、蛍光活性化細胞分離法（ＦＡＣＳ）、免疫蛍光顕微鏡検査法、及び光学顕微鏡検査法を用いて測定することができる。細胞死を測定するための方法については、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１００（５）：２６７４－８，２００３に示されている。一態様では、細胞死はアポトーシスによって生じる。

単剤治療薬
本開示の一部の実施形態では、本開示の抗体及び組成物は、疾患を治療するための単剤治療薬として投与される。

本明細書で使用する場合、「単剤治療」とは、単一の活性化合物または治療用化合物を必要とする対象にそれを投与することのことを意味する。好ましくは、単剤治療は、治療有効量の活性化合物の投与を含む。例えば、がんの治療を必要とする対象への、本開示の抗体またはその医薬組成物のうちの１つを用いたがん単剤治療である。単剤治療は、複数の活性化合物の組み合わせを投与する組み合わせ治療と対照をなし得、好ましくは、組み合わせのそれぞれの構成成分は治療有効量で含まれている。一態様では、本開示の抗体または医薬組成物を用いた単剤治療は、所望の生物学的効果を誘導する上で、組み合わせ治療と比較してより効果的である。

本開示の抗体はまた、試料中におけるＣＬＥＣ２Ｄ（またはタンパク質もしくはそのタンパク質フラグメント）の存在を検出するための薬剤として使用することができる。好ましくは、抗体は検出可能標識を含有している。抗体はポリクローナルであってもよく、またはより好ましくは、モノクローナルであってもよい。インタクト抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆ_ａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ_{（ａｂ）２}）を使用してもよい。プローブまたは抗体に関する用語「標識」とは、検出可能物質をプローブまたは抗体にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことによるプローブまたは抗体の直接標識に加えて、直接標識されていない別の試薬と反応させることによるプローブまたは抗体の間接標識を包含することを意図する。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出、及び、蛍光標識ストレプトアビジンによる検出が可能となるような、ビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。用語「生体試料」とは、対象から単離した組織、細胞、及び体液に加えて、対象内に存在する組織、細胞、及び体液を含むことを意味している。それゆえ、用語「生体試料」の用法内に含まれるのは、血液、及び、血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または構成成分である。つまり、本開示の検出方法を使用して、生体試料中の検体ｍＲＮＡ、検体タンパク質、または検体ゲノムＤＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏに加えてｉｎ ｖｉｖｏで検出することができる。例えば、検体ｍＲＮＡを検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーション及びｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが挙げられる。検体タンパク質を検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としては、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット法、免疫沈降、及び免疫蛍光法が挙げられる。検体ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としてはサザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを実施するための手法については、例えば、“ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ａｎｄ Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６；及び“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。更に、検体タンパク質を検出するためのｉｎ ｖｉｖｏ技術は、標識抗検体タンパク質抗体を対象に導入することを含む。例えば、対象内におけるその存在及び位置を標準的なイメージング技術で検出することができる放射性マーカーで抗体を標識してもよい。

ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質（またはそのフラグメント）に向かう抗体を、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の位置確認及び／または定量に関する当該技術分野において周知の方法に使用してもよい（例えば、適切な生理学的試料中におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定するのに使用する、診断法に使用する、タンパク質をイメージングするのに使用するなど）。任意の実施形態では、抗体由来抗原結合ドメインを含有する、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に特異的な抗体、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログを、薬理活性化合物（以下、「治療薬」と呼ぶ）として利用する。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に特異的な抗体を使用して、イムノアフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降などの標準的な技術によりＣＬＥＣ２Ｄポリペプチドを単離してもよい。例えば、任意の治療レジメンの効果を確認するための臨床検査手法の一部として、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質（またはそのフラグメント）に向かう抗体を診断的に使用して、組織中におけるタンパク質レベルをモニターしてもよい。検出は、抗体を検出可能物質にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことにより容易となり得る。検出可能物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び放射性物質が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリスリンが挙げられ、発光物質の例としてはルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ、好適な放射性物質の例としては、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、または^３Ｈが挙げられる。

組み合わせ治療
本開示の一部の実施形態では、本開示の抗体及び組成物は、疾患を治療するための組み合わせ治療の一部として投与される。

例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、異種移植試験において、単独及びチェックポイントモノクローナル抗体（抗ＰＤＬ１）との組み合わせで試験が行われている。抗ＣＬＥＣ２Ｄ及び抗ＰＤＬ１を用いた組み合わせ治療により、有意な腫瘍増殖抑制が明らかとなった。それゆえ、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を、治療目的用にその他の治療薬と組み合わせて使用してもよい。

これらの治療薬としては、Ｔ細胞指向性の免疫調節機構、その他の免疫調節機構、がんワクチン、養子細胞療法剤、腫瘍崩壊ウイルス、二重特異性を含む別の抗体治療薬、及び抗体フラグメントのその他の組み合わせ、放射線療法剤、抗体薬物複合体、低分子干渉ＲＮＡ、化学療法剤、免疫療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、有糸分裂阻害剤、またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物と組み合わせて投与することができる化学療法剤、低分子、及び生物学的製剤としては、ホルモン療法剤、ＰＡＲＰ阻害剤、アンドロゲン受容体阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、アビラテロン酢酸エステル、エンザルタミド、アパルタミド、ダロルタミド、ホスホイノシチド３キナーゼβ選択性阻害剤、二塩化ラジウム２２３及びその他のバリアント、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、ＣＹＰ１７Ａ１阻害剤、ＬＨＲＨアンタゴニスト、ＬＨＲＨアナログ、シクロホスファミド、カバジタキセル、ドセタキセル、シプリューセル－Ｔ、Ｐｒｏｓｔｖａｃ、プロベンジ、ＰＳＣＡのようなＰＵＬＰワクチン、全菌体ワクチン及びその他のワクチン、ＰＵＬＰ表面抗原に対する治療薬、シスプラチン、ＣＤ３及びＡＤＡＭ１７の二重特異性抗体、ｐＴＶＧ－ＨＰプラスミドＤＮＡワクチン及びその他の類似ワクチン、チソツマブベドチン、ＤＣＶＡＣ／ＰＣａ、ＧＸ３０１、ＧＶＡＸ－ＰＣａ、及びデノスマブが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物と組み合わせて投与することができる化学療法剤及び抗がん剤としては、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物アルカロイド、ビンカアルカロイド、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、白金系抗腫瘍剤、トポイソメラーゼ阻害剤、及びプロテインキナーゼ阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なアルキル化剤は、ブスルファン、シクロホスファミド、及びテモゾロミドを含む。例示的な代謝拮抗薬は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、カペシタビン（ゼローダ）、及びゲムシタビンを含む。例示的な抗腫瘍抗生物質は、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、及びドキソルビシンを含む。例示的な白金系抗腫瘍剤は、シスプラチン及びカルボプラチンを含む。例示的なトポイソメラーゼ阻害剤は、エトポシド、イリノテカン、及びトポテカンを含む。例示的な有糸分裂阻害剤は、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン）、及びコルヒチンを含む。別の化学療法剤はメトトレキサートを含む。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物と組み合わせて投与することができる治療薬としては、オルテロネル、ゲルダナマイシン、カボザンチニブ、アルファラディン、１７７Ｌｕ－Ｊ５９１、ミトキサントロン、Ｖｉａｍｅｔ、ＣＦＧ９２０、ガレテロン、オラパリブ、ＡＤＸＳ－ＰＳＡ、タキソテール、ゴナックス、デカペプチル、リュープロン、Ｖａｎｔａｓ、カソデックス、ゾラデックス、エリガード、リュープリン、ファーマゴン、ミトキサントロン、エンサイト、ランレオチド、ザルトラップ、クスチルセンナトリウム、及びスプリセルが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、以下の標的、分化抗原群１９（ＣＤ１９）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、ヒト上皮増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２）、シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）、分化抗原群１５２（ＣＴＬＡ４）、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹＥＳＯ１）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ネオアンチゲン、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１（ＣＤ２０）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、分化抗原群４７（ＣＤ４７）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（４－１ＢＢ）、ジシアロガングリオシドＧＤ２、アデノシンＡ２ａ受容体（ＡＤＯＲＡ２Ａ）、インターフェロン－α／β受容体α鎖（ＩＦＮＡＲ１）、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）、分化抗原群４０（ＣＤ４０）、メソテリン、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒストン脱アセチル化酵素１（ＨＤＡＣ１）、インターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ＣＤ３３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＯＸ４０）、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、ヒストン脱アセチル化酵素６（ＨＤＡＣ６）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体（ＧＭＣＳＦＲ）、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）、インターロイキン－３受容体（ＣＤ１２３）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、Ｉｇドメイン及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ヒトパピローマウイルス遺伝子Ｅ６（ＨＰＶ－Ｅ６）、５’－ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）、サバイビン、分化抗原群３（ＣＤ３）、サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼ（ＣＤ３８）、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ヒトパピローマウイルスＥ７オンコプロテイン（ＨＰＶＥ７）、インターロイキン２１受容体（ＩＬ２１Ｒ）（ＣＤ１３７）、分化抗原群２２（ＣＤ２２）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８（ＣＤ３０）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、βカテニン、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ－Ａ３）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｋ－ｒａｓ（ＫＲＡＳ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＵＳＰ７）、栄養膜糖タンパク質（５Ｔ４）、インターロイキン－２受容体α鎖（ＣＤ２５）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、顆粒球コロニー刺激因子受容体（ＧＣＳＦＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｋ１（ＮＫＧ２Ｄ）、プレメラノソームタンパク質（ＰＭＥＬ）、黒色腫において優先的に発現している抗原（ＰＲＡＭＥ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）、分化抗原群４６（ＣＤ４６）、マクロファージ刺激タンパク質受容体（ＣＤｗ１３６）、シクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＣＳ１）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ｐ９６、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）、インターロイキン－５受容体（ＩＬ５Ｒ）、ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、シグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）、トランスフォーミング増殖因子β受容体２（ＴＧＦＢＲ２）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、α－ガラクトシダーゼＡ（α－ｇａｌ）、分化抗原群２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＣＲ１）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体２型（ＣＣＲ２）、ＣＤ２７分子（ＣＤ２７）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ゲラクチン－３、インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ１３ＲＡ２）、インターロイキン６（ＩＬ６）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）、ＭＥＲがん原遺伝子チロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、タンパク質ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＬＡＮＡ）、プロスタグランジンＥ受容体４（ＰＴＧＥＲ４）、ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス３（ＴＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦＢ、ＴＧＦＢ１）、ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、アンジオポエチン１（ＡＮＧ１）、ＢＴＬＡ、プロミニン１（ＣＤ１３３）、神経細胞接着分子１（ＣＤ５６）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子６（ＣＥＡＣＡＭ６）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）、インターフェロンα及びβ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ）、インターフェロンγ受容体１（ＩＦＮＧＲ１）、インターロイキン１７受容体Ａ（ＩＬ１７Ｒ）、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、ムチン１６細胞表面関連（ＭＵＣ１６）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（Ｐ３８）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＤＥｘＤ／Ｈ－ボックスヘリカーゼ６８（ＲＩＧ１）、ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｃ（ＲＯＲＣ）、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）、トランスフォーミング増殖因子β受容体１（ＴＧＦＢＲ１）、ドーパクロムトートメラーゼ（ＴＲＰ２）、アデノシンＡ３受容体（ＡＤＯＲＡ３）、ブラキウリ、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）、シンデカン１（ＣＤ１３８）、Ｌ１細胞接着分子（ＣＤ１７１）、フコシルトランスフェラーゼ３（ルイス血液型）（ＣＤ１７４）、ＩｇＧ受容体ＩＩａのＦｃフラグメント（ＣＤ３２）、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）、ＦＰＨＡ２、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、β－１，３－Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ１（グロボシド血液型）（ＧｌｏｂｏＨ）、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））１、細胞質基質（ＩＤＨ１）、インターロイキン２受容体サブユニットβ（ＩＬ２ｒＢ）、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＲＡＳ、トランスフォーミング増殖因子β２（ＴＧＦＢ２）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）、酸性ホスファターゼ、前立腺（ＡＣＰＰ）、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＡＤＡＢＰ）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１７（ＡＤＡＭ１７）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＡＴＲＴ、ＡＸＬ受容体チロシンキナーゼ（ＡＸＬ）、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害因子１（Ｂ７－Ｈ４）、ＣＡ１９－９、インテグリンサブユニットαＭ（ＣＤ１１ｂ）、ＩｇＧ受容体ＩＩＩａのＦｃフラグメント（ＣＤ１６）、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２００分子（ＣＤ２００）、ＣＤ２８分子（ＣＤ２８）、ＣＤ５２分子（ＣＤ５２）、ＣＤ７分子（ＣＤ７）、ＣＤ８０分子（ＣＤ８０）、補体Ｃ５ａ受容体１（ＣＤ８８）、カドヘリン３（ＣＤＨ３）、ＣＥＣＡＭ１、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＩＩ（ＣＯＸ２）、ＣＣＣＴＣ結合因子様（ＣＴＣＦＬ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体５（ＣＸＣＲ５）、非定型ケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ７）、Ｅ１ａ、ガストリン、グレーヴス病感受性Ｘ連結（ＧＤ３）、ゲラクチン－１コロニー刺激因子２（ＧＭＣＳＦ）、ＨＢＶ、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－ＤＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６／７、ＨＰＶ Ｌ２、インターフェロンα及びβ受容体サブユニット２（ＩＦＮＡＲ２）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン１β（ＩＬ１Ｂ）、インターロイキン７受容体（ＩＬ７Ｒ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド８（ＩＬ８）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部１（ＫＩＲ２ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部３（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＬＸＲ、ＣＤ２４４分子（２Ｂ４）、ＭａｇｅファミリーメンバーＡ（ＭＡＧＥ－Ａ）、ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）、アポトーシスのＸ連結阻害因子（ＭｉＨＡ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｃ１（ＮＫＧ２Ａ）、天然細胞傷害誘導受容体１（ＮＫｐ４６）、核内受容体サブファミリー２グループＦメンバー６（ＮＲ２Ｆ６）、ＰＴＴＧ１相互作用タンパク質（ＰＢＦ）、精子接着分子１（ＳＰＡＭ１）、シグナル伝達兼転写活性化因子１（ＳＴＡＴ１）、ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）、ペルオキシレドキシン２（ＴＳＡ）、チロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＶＥＧＦＲ２）、５’ヌクレオチダーゼ、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー５（ＡＢＣＢ５）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン９（ＡＤＡＭ９）、アデノシン、ＡＤＰ、メタドヘリン（ＡＥＧ１）、ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ２（ＡＩＭ２）、α－ラクトアルブミン、抗ミュラーホルモン受容体２型（ＡＭＨＲ２）、アンジオポエチン２（ＡＮＧ２）、血管新生アスパラギン酸β－ヒドロキシラーゼ（ＡＳＰＨ）、ナチュラルキラー細胞細胞傷害性受容体３リガンド１（Ｂ７－Ｈ６）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ（ＢＡＦＦ－Ｒ）、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼファミリーメンバー９（Ｂａｌ１）、ＢＲＣＡ１関連ＲＩＮＧドメイン１（ＢＡＲＤ１）、ＢＣＬ２アポトーシス調節因子（ＢＣＬ２）、ＰＯＵクラス２関連因子１（ＢＯＢ－１）、ＢＴＥ６－ｌＸ－８ｂ、ＢＴＥ６－Ｘ－１５－７、ＫＩＴがん原遺伝子受容体チロシンキナーゼ（ｃＫＩＴ）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ９）、糖鎖抗原、カンナビノイド受容体２（ＣＢ２）、Ｃｂｌがん原遺伝子Ｂ（ＣＢＬＢ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２０（ＣＣＬ２０）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド３（ＣＣＬ３）、サイクリンＢ１（ＣＣＮＢ１）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体９（ＣＣＲ９）、アラニルアミノペプチダーゼ膜（ＣＤ１３）、インターロイキン６シグナル伝達物質（ＣＤ１３０）、バシジン（Ｏｋ血液型）（ＣＤ１４７）、ポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）、ＣＤ１６０分子（ＣＤ１６０）、セレクチンＰリガンド（ＣＤ１６２）、ＣＤ２００受容体１（ＣＤ２００Ｒ１）、補体Ｃ３ｄ受容体２（ＣＤ２１）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＣＤ２６７）、インテグリンサブユニットβ１（ＣＤ２９）、ＣＤ３ｅ分子（ＣＤ３Ｅ）、ＣＤ４分子（ＣＤ４）、ＣＤ４４分子（インド血液型）（ＣＤ４４）、インテグリンサブユニットαＶ（ＣＤ５１）、細胞間接着分子１（ＣＤ５４）、ＣＤ８ａ分子（ＣＤ８）、ＣＧＥＮ－ＸＸＸＸ、クローディン１８、クローディン６、ＭＥＴがん原遺伝子受容体チロシンキナーゼ（ｃＭｅｔ）、コプロポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＣＯＸ）、プロスタグランジン－エンドペルオキシド合成酵素（ＣＯＸ－１）、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＩ（ＣＯＸ－１）、ＣＰＥＧ４、セレブロン（ＣＲＢＮ）、サイトカイン受容体様因子２（ＣＲＬＦ２）、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）、リン酸シチジリルトランスフェラーゼ１コリンα（ＣＴＡ）

、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１（ＣＸＣＬ１）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ３）、デオキシシチジンキナーゼ（ＤＣＫ）、ｄｉｃｋｋｏｐｆ ＷＮＴシグナル伝達経路阻害因子（ＤＫＫ１）、デルタ様標準的Ｎｏｔｃｈリガンド３（ＤＬＬ３）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＤＲ５）、ＥＢＮＡ３Ｃ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、Ｃ型レクチンドメイン含有１４Ａ（ＥＧＦＲ５）、真核生物翻訳開始因子２αキナーゼ３（ＥＩＦ２ＡＫ３）、ＥＬＶＡＬ４、ＥＰＨ受容体Ａ３（ＥＰＨＡ３）、上皮増殖因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＲＧ、ＩｇＭ受容体のＦｃフラグメント（ＦＡＩＭ－３）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ）、フォークヘッドボックスＭ１（ＦＯＸＭ１）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ガレクチン３、Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（ＧａｌＮＡｃ）、ロイシンリッチリピート含有３２（ＧＡＲＰ）、ＧＣビタミンＤ結合タンパク質（ＧＣ）、ゲラクチン９、ゲラクチン１／３／９、ＧＭ２、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体（ＧＮＲＨＲ）、グルタミルアミノペプチダーゼ（ＧＰ１６０）、ゴルジ膜タンパク質１（ＧＰ７３）、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、Ｈ３．３Ｋ２７Ｍ、ＤＥＡＤ－ボックスヘリカーゼ４３（ＨＡＧＥ）、ヒストン脱アセチル化酵素２（ＨＤＡＣ２）、ヒストン脱アセチル化酵素８（ＨＤＡＣ８）、ヘマグルチニン、ｅｒｂ－ｂ２受容体チロシンキナーゼ３（ＨＥＲ３）、低酸素誘導性脂肪滴関連（ＨＩＬＰＤＡ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＨＭＷＭＡＡ）、ＨＰ５９、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１１、熱ショックタンパク質ファミリーＨ（Ｈｓｐ１１０）メンバー１（ＨＳＰ１０５）、熱ショックタンパク質ファミリーＤ（Ｈｓｐ６０）メンバー１（ＨＳＰ６５）、熱ショックタンパク質ファミリーＡ（Ｈｓｐ７０）メンバー４（ＨＳＰ７０）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＨＶＥＭ）、ヒアルロナン、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）、インターフェロンγ（ＩＦＮＧ）、インターフェロンγ受容体１（ＩＦＮＧＲ）、インターフェロンγ受容体２（ＩＦＮＧＲ２）、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ２）、インスリン様増殖因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ２）、ＩＧＫ２、インターロイキン１０（ＩＬ１０）、インターロイキン１０受容体サブユニットα（ＩＬ１０ＲＡ）、インターロイキン１２受容体サブユニットβ１（ＩＬ１２ＲＢ１）、インターロイキン（ＩＬ１３）、インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ１３Ｒ）、インターロイキン１３受容体サブユニットα１（ＩＬ１３ＲＡ１）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、インターロイキン１５受容体サブユニットα（ＩＬ１５ＲＡ）、インターロイキン１７Ａ（ＩＬ１７ ＩＬ１７Ａ）、インターロイキン１７Ｂ（ＩＬ１７Ｂ）、インターロイキン１受容体１型（ＩＬ１Ｒ１）、インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１Ｒ３）、インターロイキン２１受容体（ＩＬ２１Ｒ）、インターロイキン２７受容体サブユニットα（ＩＬ２７Ｒ）、インターロイキン２受容体サブユニットα（ＩＬ２ＲＡ）、ＩＬ３５、インターロイキン９受容体（ＩＬ９Ｒ）、インテグリンβ７、インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）、インテグリンサブユニットβ５（ＩＴＧＢ５）、カッパ骨髄腫抗原、キネシンファミリーメンバー２０Ａ（ＫＩＦ２０Ａ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部２（ＫＩＲ２ＤＬ２）、キヌレニン、ラムダ骨髄腫抗原、リソソーム関連膜タンパク質３（ＬＡＭＰ）、ＬＬＯ、核内受容体サブファミリー１グループＨメンバー３（ＬＸＲＡ）、核内受容体サブファミリー１グループＨメンバー２（ＬＸＲＢ）、ＭＡＧＥＡ１０ ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ１０（ＭＡＧＥ－Ａ１０）、ＭＡＧＥＡ６ ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ６（ＭＡＧＥ－Ａ６）、ＭＡＧＥＣ２ ＭＡＧＥファミリーメンバーＣ２（ＭＡＧＥ－Ｃ２）、マンマグロビンＡ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、ヘリカーゼＣドメイン１で誘導されるＭａｓ受容体インターフェロン（ＭＤＡ５）、ＭＧ７、主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣＩＩ）、ＭＩＣ、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列（ＭＩＣＢ）、マトリックスメタロペプチダーゼ１１（ＭＭＰ－１１）、運動精子ドメイン含有２（ＭＯＳＰＤ２）、多剤耐性関連タンパク質１（ＭＲＰ１）、ＭＲＰ３７６５、ｍｕＧＮＴＰ０１、主要ヴォールトタンパク質（ＭＶＰ）、ＭＹＢがん原遺伝子転写因子（ＭＹＢ）、ＭＹＢがん原遺伝子様２（ＭＹＢＬ２）、ミエロブラスチン、ＭＹＣＮがん原遺伝子、ｂＨＬＨ転写因子（Ｎ－ｍｙｃ）、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）、ＮＬＲファミリーピリンドメイン含有３（ＮＬＲＰ３）、がん胎児性抗原、プリン受容体Ｐ２Ｘ ５（Ｐ２ＲＸ５）、ｐ３８マップキナーゼ、ホスホイノシチド－３－キナーゼ調節サブユニット３（Ｐ５５）、ＰＡＭ４、再生ファミリーメンバー３α（ＰＡＰ）、ＰＡＳドメイン含有抑制因子１（ＰＡＳＤ１）、プロトカドヘリン１８（ＰＣＤＨ１８）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤＬ２）、ＰＯＴＥアンキリンドメインファミリーメンバーＤ（ＰＯＴＥ）、タンパク質ホスファターゼ５触媒サブユニット（ＰＰＴ）、プロスタグランジンＥ受容体２（ＰＴＧＥＲ２）、ＰＶＲ関連免疫グロブリンドメイン含有（ＰＶＲＩＧ）、ＲＢＬ００１、ｒａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体２（ＲＯＲ２）、ＳＥＲＥＸ、ＳＩＭ ｂＨＬＨ転写因子２（ＳＩＭ２）、ソマトスタチン受容体２（ＳＳＴＲ２）、ＳＳＸファミリーメンバー２（ＳＳＸ２）、ステロールＯ－アシルトランスフェラーゼ１（ＳＴＡＴ）、真核生物翻訳伸長因子１α２（ＳＴｎ）、ｍＲＮＡキャップグアニン－Ｎ７メチルトランスフェラーゼ（ＴＡＧ７２）、ＴＡＭＡ、ＴＡＳＴＤ２、ＴＤ０２、転写因子Ｄｐファミリーメンバー３（ＴＦＤＰ３）、チミジル酸合成酵素、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ（ＴＯＰ１）、Ｔ細胞受容体β定常１（ＴＲＢＣ１）、Ｔ細胞受容体β定常２（ＴＲＢＣ２）、トリプトファン、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＷＥＡＫ）、チロシン、リンパ球抗原６ファミリーメンバーＫ（ＵＲＬＣ１０）、レトロエレメントサイレンシング因子１（ＵＴＡ２－１）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ１（ＶＥＧＦＲ１）、Ｖセット及び免疫グロブリンドメイン含有４（ＶＳＩＧ－４）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）、透明帯糖タンパク質３（ＺＰ３）、ＳＴＥＡＰファミリーメンバー１（ＳＴＥＡＰ１）、またはＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＲＡＮＫＬ）を阻害または調節するモノクローナル抗体もしくはそのフラグメント、治療用生物学的製剤、低分子、または化学薬剤と組み合わせて使用することができる。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、ＣＴＬＡ４、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＰＤＬ１、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＨＡＶＣＲ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＧＦＲＢＲＩ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＶＩＳＴＡ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＭＴ１、ＭＴ２、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＳＨＰ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、またはＣＥＡＣＡＭ－５を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。例示的な免疫チェックポイント遺伝子及び治療標的としては、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）が挙げられる。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＣＬＴＡ－４、またはＴＩＭ３に結合してそれを阻害する治療抗体である。例示的なＰＤ１阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、及びセミプリマブを含む。例示的なＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブを含む。例示的なＣＬＴＡ－４阻害剤はイピリムマブを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、キナーゼ阻害剤と組み合わせて投与され、キナーゼ阻害剤は、ＢＣＲ－Ａｂｌ、Ｂ－ｒａｆ、ＢＴＫ、ＣＤＫファミリー、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲファミリー、ＪＡＫファミリー、ＭＥＫ１／２、ＰＤＧＦＲα／β、ＲＥＴ、Ｓｒｃファミリー、またはＶＥＧＦＲファミリーキナーゼを阻害する。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、小さなキナーゼ分子阻害剤である。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、治療抗体またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、イブルチニブ、パルボシクリブ、ソラフェニブ、リボシクリブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、オシメルチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、トラメチニブ、アキシチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、ポナチニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、またはこれらの組み合わせである。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、関節リウマチを治療するために、抗ＣＤ２０抗体、ＴＮＦ受容体アンタゴニスト、抗ＴＮＦ－α、またはこれらの組み合わせと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、乾癬を治療するために、抗ＣＤ１１ａと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、多発性硬化症を治療するために、ＩＦＮ－γと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、潰瘍性大腸炎を治療するために、ＴＮＦ－αと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、クローン病を治療するために、インフリキシマブまたはナタリズマブと組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、がんと関連する免疫チェックポイント遺伝子産物及び／または標的抗原の任意の組み合わせに向かう多重特異性抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、がんと関連する免疫チェックポイント遺伝子産物及び／または標的抗原の任意の組み合わせに向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）からなる群から選択される免疫チェックポイントタンパク質に向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＣＬＴＡ－４、またはＴＩＭ３に結合してそれを阻害する治療抗体である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原に向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、ミコフェノール酸、アザチオプリン、シクロホスファミド、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ランソプラゾール（プレバシド２４時間）、オメプラゾール（プリロセックＯＴＣ）、及びパントプラゾール（プロトニックス）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない薬物または治療薬と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＬ－８、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、間質細胞由来因子－１、及びインターフェロンγ誘導性タンパク質－１０（ＩＰ－１０）、ケモカイン（ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、及びＣＸＣＬ８）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないサイトカインまたはケモカインと組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は自家である。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は同種異系である。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などを含む。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法剤またはＣＡＲ－ＮＫ療法剤を含む。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、固形腫瘍と関連する標的抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、及びその他のがんを含むがこれらに限定されないがんと関連する標的抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原である第２の抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を利用して二重特異性抗体を形成してもよく、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、ＣＴＬＡ４、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＰＤＬ１、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＨＡＶＣＲ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＧＦＲＢＲＩ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＶＩＳＴＡ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＭＴ１、ＭＴ２、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＳＨＰ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、またはＣＥＡＣＡＭ－５を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント遺伝子及び治療標的である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＬ－８、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、間質細胞由来因子－１、及びインターフェロンγ誘導性タンパク質－１０（ＩＰ－１０）、ケモカイン（ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、及びＣＸＣＬ８）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないサイトカインまたはケモカインと関連している。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄに特異的に結合する第１のペアの可変軽鎖及び可変重鎖、及び、宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合する第２のペアの可変軽鎖及び可変重鎖を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、がんまたは腫瘍細胞と関連する抗原である。

本明細書で開示する二重特異性抗体は、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、またはそのバリアントを示す定常領域を含んでいてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、もしくはＩｇＧ３、またはそのバリアントを示す定常領域を含んでいてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、及びＩｇＧ４のアイソタイプ主鎖を有していてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、三官能性抗体、タンデムｓｃＦｖ（二重特異性Ｔ細胞誘導または「ＢｉＴＥ」として使用されることが多い）、四価ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ディアボディを含む、化学的に連結したＦａｂ、ｓｃＦｖ、またはジスルフィド結合したＦｖ、を使用した二重特異性抗体フォーマット、及び多くのその他のフォーマットであってもよい。一部の実施形態では、本明細書で開示する二重特異性抗体は、２つの異なるｓｃＦｖをコードする配列を、重鎖が単一のポリペプチド内で発現している１つの構築物へと組み合わせてから、対応する軽鎖と連結させることにより作製される、ディアボディとして作製される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、及びびまん性リンパ腫を含むがこれらに限定されないがんと関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌からなる群から選択されるがんまたは腫瘍細胞と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原菌または病原体と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原性の細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、細胞内細菌を含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原性の細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物に感染した宿主細胞上に特異的に発現した抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、血清反応陰性脊椎関節症、結合組織病、炎症性腸疾患、関節炎、炎症性皮膚症状、炎症性肺疾患、炎症性腎疾患、全身性血管炎、マクロファージ活性化疾患、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、レイノー現象及びグッドパスチャー症候群を含むがこれらに限定されない炎症性障害または自己免疫障害と関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などと関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎など、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎など、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎など、アテローム性動脈硬化症、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病など、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、血球貪食症候群、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群などと関連する抗原である。

本発明の二重特異性抗体は、当該技術分野において周知の任意の方法を用いて、例えば、非限定例として、架橋フラグメント、クアドローマ、及び／または様々な組換えフォーマット、例えば、非限定例として、単一ドメインをベースとした連結抗体フラグメント、強制ヘテロ二量体、及び／または組換えフォーマットなどのうちのいずれかなどを用いて、作製される。二重特異性フォーマットの例としては、Ｆａｂアーム交換に基づいた二重特異性ＩｇＧ（Ｇｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３ ＭＡｂｓ．５（６））、ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマット（Ｋｌｅｉｎ Ｃ ｅｔ ａｌ．，２０１２ ＭＡｂｓ ４（６））、強制ヘテロ二量体化アプローチ、例えば、ＳＥＥＤ技術（Ｄａｖｉｓ ＪＨ ｅｔ ａｌ．，２０１０ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３（４）：１９５－２０２）、静電気的ステアリング（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２８５（２５）：１９６３７－４６．）、もしくはｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ（Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ ９（７）：６１７－２１．）、またはホモ二量体形成を防止するその他の変異セット（Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ＴＳ ｅｔ ａｌ．，２０１３ ＭＡｂｓ．５（５）：６４６－５４．）、などに基づいた複数のフォーマット、フラグメントベースの二重特異性フォーマット、例えば、タンデムｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥなど）など（Ｗｏｌｆ Ｅ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７－４４．）、二重特異性四価抗体（Ｐｏｒｔｎｅｒ ＬＭ ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６１（１０）：１８６９－７５．）、デュアル親和性再標的化分子（Ｍｏｏｒｅ ＰＡ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｂｌｏｏｄ．１１７（１７）：４５４２－５１）、ディアボディ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＲＥ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ １５（７）：６２９－３１）が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物ならびに別の治療薬（複数可）は、疾患の徴候または症候を治療するために相加的に作用する。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物ならびに別の治療薬（複数可）は、疾患の徴候または症候を治療するために相乗的に作用する。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物を別の治療薬と組み合わせることにより、疾患または障害における１種または複数種の症候の抑制の向上、治療における１種または複数種の副作用の抑制、または、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体もしくは組成物または別の治療薬の治療有効用量の減少を含む、疾患または障害の治療における優れた効果がもたらされる。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、別の治療モダリティにコンジュゲートしていてもよい。コンジュゲートすることにより、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを標的、例えば、標的細胞などへと近接させること、標的特異性を向上させること、コンジュゲートの標的に対する総合的な結合親和性を向上させること、及び／または標的に対するＮＫ細胞の細胞傷害を向上させること、が可能となり、それにより、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの治療効果及び／または特異性が向上する。別の治療モダリティは、本明細書に記載の別の治療薬のうちのいずれかであってもよい。抗体コンジュゲートを作製するための方法は当該技術分野において周知であり、例えば、タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（例えば、トリエン ２，６－ジイソシアネートなど）、及びビス活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などを用いる。抗体及びもう一方の部分がその対応する活性を保持する限り、２つの分子を結合させる任意の化学反応を用いてカップリングを実施してもよい。この連結は、多くの化学的メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、及び複合体形成を含んでいてもよい。しかしながら、好ましい結合は共有結合である。共有結合は、既存側鎖の直接縮合または外部架橋分子の導入のいずれかにより実施することができる。多くの二価または多価連結剤は、タンパク質分子、例えば、本発明の抗体などをその他の分子にカップリングさせるのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、有機化合物、例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、及びヘキサメチレンジアミンなどを挙げることができる。このリストは、当該技術分野において周知の様々な部類のカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の例示である。（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；及びＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、二重特異性抗体を作製するために使用することができる。例えば、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書に記載の別の抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、二重特異性抗体を作製してもよい。二重特異性抗体を作製するための方法は当該技術分野において周知である。

最適な所望の効果、例えば、治療効果または最小限の副作用を得るために、用量レジメンを調節する。例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を投与するための用量は、約０．０００１～約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。例えば、用量は、少なくとも０．１、少なくとも０．３、少なくとも１、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、または少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ（体重）であってもよい。投与スケジュールは通常、抗体の標準的な薬物動態特性に基づく持続的な受容体占有率をもたらす曝露を達成するように設計される。例示的な治療レジメンは、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月間に１回、または３～６ヶ月間に１回の投与を必要とする。用量及びスケジューリングは治療期間中に変更してもよい。例えば、投与スケジュールは、（ｉ）６週間サイクルにおける２週間に１回、（ｉｉ）６回の用量を４週間に１回、その後、３ヶ月間に１回、（ｉｉｉ）３週間に１回、（ｉｖ）初期の高用量に続けて定期的なより少ない維持用量で抗体を投与することを含んでいてもよい。単回用量間の間隔は、例えば、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回、３ヶ月間に１回、または年に１回であってもよい。間隔はまた、患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルを測定することによって指定されるとおりに、不規則であってもよい。一部の方法では、用量は、所望の血漿中抗体濃度を達成するように調節される。

一部の実施形態では、Ａｂは、持続放出製剤として投与されてもよく、その場合、より少ない頻度の投与が必要となる。用量及び頻度は、患者における抗体の半減期によって変化する。一般的に、ヒト抗体が最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。用量及び投与頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかによって変化し得る。予防適用では、比較的少ない用量が通常、長期間にわたり比較的頻繁ではない間隔で投与される。患者の中には残りの生涯にわたり治療を受け続ける者もいる。治療適用では、疾患の進行が抑制または終了するまで、好ましくは、患者が疾患の症候の部分寛解または完全寛解を示すまで、比較的短い間隔での比較的多い用量が必要となる場合がある。そのため、患者に予防レジメンを実施してもよい。

本開示の医薬組成物中における活性成分の実際の用量レベルは、患者に過度に毒性とはならずに、個々の患者、組成物、及び投与方法における所望の治療効果を得ることが可能な活性成分の量を得るために、様々であり得る。選択用量レベルは、使用する個々の本開示の組成物の活性、投与経路、投与期間、使用する個々の化合物の排出速度、治療期間、使用する個々の組成物と組み合わせて使用するその他の薬物、化合物、及び／または物質、治療する患者の年齢、性別、体重、症状、全身健康及び既往歴、及び、医学技術分野において周知の類似の因子を含む様々な薬物動態学的因子によって決まる。本開示の組成物は、当該技術分野において周知の様々な方法のうちの１つまたは複数を用いて、１つまたは複数の投与経路を介して投与することができる。当業者は理解するであろうが、投与経路及び／または投与方法は、所望の結果によって変化する。

診断及び予後判定
本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルは、対象に由来する細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ発現のレベルを測定することによって測定される。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する試料を得ること、試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルが対照試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルよりも高い場合に、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも高い場合に、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与することを継続すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、第１の治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも低い場合に、第２の治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含み、第２の治療有効量は第１の治療有効量よりも多い。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも低い場合に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与することを終了すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

単離した新規抗体クローンを使用して、疾患のステージ及び侵襲性を判定してから、その疾患を適切に治療してもよい。

本開示は、疾患及び障害を診断及び予後判定するのに用いるための、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びその抗体フラグメント、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸、またはそれらを含む組成物を提供する。

一部の実施形態では、単離モノクローナル抗体により、様々な腫瘍細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的発現が明らかとなり、ＣＬＥＣ２Ｄが様々な疾患症状を診断するための新規バイオマーカーであることが示された。更に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原が様々な腫瘍上で有意に過剰発現しており、疾患を診断するための新規分子マーカーとしてのこの標的分子の有用性が示された。更に、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルは、様々な誘導因子の影響下で有意に上昇した。誘導腫瘍細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の特異的発現は、異なるステージの疾患、増悪、転移などと相関している。それゆえ、ＣＬＥＣ２Ｄには予後バイオマーカーとしての膨大な可能性がある。一部の実施形態では、例えば、対象のがん細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質発現の上昇は、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質発現が上昇していない場合と比較して、より不十分な予後効果と関連している。

本明細書で詳述するとおり、単離モノクローナル抗体を使用して、腫瘍細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現をモニターする。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、及びびまん性リンパ腫を含むがこれらに限定されない疾患を診断及び予後判定してもよい。

様々な治療選択肢が現在利用可能であるにもかかわらず、複数のがん、例えば、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌などは、依然として世界中の人々の主要な死因のままであり、独自の治療展望に欠けている。初期ステージにおけるこれらの疾患の診断は、生存率を決める最も重要な因子のうちの１つである。本開示は、深い治療的影響を有する、これらの疾患及びその他の疾患のためのバイオマーカー標的としてのＣＬＥＣ２Ｄの同定について記載している。本開示に記載されている、ＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体同定法全般の急速な進歩により、上記の様々な疾患適応症に対する新規バイオマーカーとしてＣＬＥＣ２Ｄを有効にすることが可能となっている。

本開示は、特定の治療により良好な応答を示す可能性がある患者を階層化するための予測バイオマーカーとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の同定に使用する、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメント、ならびに抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメントを含む組成物を提供する。

本開示は、予測バイオマーカーとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の同定に使用するための、また、転移性がん患者におけるＮＫ細胞の細胞溶解活性の増強を目標とした治療法を探索するための道筋をつけるための、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメント、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸、またはそれらを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、腫瘍微小環境における免疫細胞上のこれらＣＬＥＣ２Ｄ受容体の発現は、良好な予後と関連している。特定の免疫細胞、例えば、ＮＫ細胞及びＴ細胞上における、特定の分子の発現は、特定の免疫機能の維持に関与している。本開示は、前立腺癌におけるものを含む、ＮＫ受容体リガンドとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の予後判定的役割、及び、ＣＬＥＣ２Ｄ発現の、異なる前立腺癌疾患ステージ、分子サブタイプ、及び臨床病理学的特徴との関連について記載している。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ発現を遮断することにより、ＮＫ細胞介在性細胞傷害の免疫コンテキストにおけるシグナルが伝達されて、浸潤性Ｔ細胞の正の予後判定値が抑制される。本開示のヒト抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体は、単独、またはその他のリガンド、サイトカイン、またはその他の細胞性因子との組み合わせのいずれかで、様々ながんのタイプにおける治療薬としてだけではなく、予後判定薬及び診断薬としても、これらの抗体の可能性／範囲を広げる。

医薬品製剤
本開示は、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントのうちのいずれかの医薬組成物を提供する。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれは、対象への投与に好適な組成物へと製剤化することができる。例示的な態様では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれは、例えば、特定の温度、例えば、室温において抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を安定化させること、有効期間を延長すること、分解、例えば、酸化タンパク質分解酵素介在性分解を抑制すること、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の半減期を延長することなどにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の化学物理学的特性を向上させる、１種または複数種の薬剤と共に製剤化することができる。本開示の例示的な態様では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を追加で含む組成物へと製剤化してもよい。

「医薬組成物」及び「医薬品製剤」は、文脈上特に明確に示さない限り、本明細書において同じ意味で用いられる。

医薬組成物は、固体、半固体、または液体であってもよい。一般的に、医薬組成物は、特定の投与経路に適したものである。例えば、医薬組成物は、経口投与、直腸投与、頬側投与、局所投与などに適したものであってもよい。好ましくは、医薬組成物は、静脈内投与に適したものである。一部の実施形態では、本開示の抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物は、静脈注射または静脈注入に適したものである。一部の実施形態では、水溶性安定モノクローナル抗体製剤は、好ましくは、筋肉内注射、皮下注射、ｉ．ｖ．注射、または最も好ましくは、ｉ．ｖ．注入により、非経口経路で投与される。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に相性のよい全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗カビ剤、等張化剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適したものである。本開示の医薬組成物は、１種または複数種の、薬学的に許容される塩、酸化防止剤、水性担体及び非水性担体、及び／または、補助剤、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などを含んでいてもよい。例えば、薬学的に許容される担体としては、標準的な医薬品担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルションまたは水／油エマルションなどのエマルション、及び、様々なタイプの湿潤剤などのうちのいずれかが挙げられる。この用語はまた、米国連邦政府の監督機関により承認された薬剤、または、ヒトを含む動物における使用用に米国薬局方に記載された薬剤のうちのいずれかを包含する。

医薬組成物は、例えば、酸性化剤、添加剤、吸着剤、エアゾール噴射剤、排気剤、アルカリ化剤、固化防止剤、抗凝固剤、抗菌防腐剤、酸化防止剤、防腐剤、基剤、結合剤、緩衝剤、キレート化剤、コーティング剤、着色剤、乾燥剤、洗剤、希釈剤、殺菌剤、崩壊剤、分散剤、溶解促進剤、色素、皮膚軟化剤、乳化剤、乳化安定剤、充填剤、フィルム形成剤、風味増強剤、風味剤、流動促進剤、ゲル化剤、造粒剤、保湿剤、滑沢剤、粘膜付着剤、軟膏基剤、軟膏剤、油性媒体、有機塩基、パステル剤基剤、顔料、可塑剤、艶出剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、皮膚浸透剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、坐剤基剤、表面活性剤、界面活性剤、懸濁化剤、甘味剤、治療剤、増粘剤、張性剤、毒性剤、粘度増強剤、吸水剤、水混和性共溶媒、硬水軟化剤、または湿潤剤を含む、任意の薬学的に許容される成分を含んでいてもよい。当該技術分野において周知のその他の薬学的に許容される賦形剤としては、希釈剤、担体、充填剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、流動促進剤、着色剤、顔料、味覚マスキング剤、甘味剤、可塑剤、ならびに、任意の許容される補助物質、例えば、吸収促進剤、浸透促進剤、界面活性剤、補助界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、及び特殊油などが挙げられる。バイオ医薬品タンパク質の分野に特有なのは、タンパク質を安定させることを目的とする賦形剤、及び凍結乾燥中の保護をもたらす凍結保護剤である。好適な賦形剤（複数可）は、剤形、対象となる投与方法、対象となる放出速度、及び製造信頼性に部分的に基づいて選択される。一般的に用いられる賦形剤の非限定例としては、ポリマー、蜜蝋、リン酸カルシウム、糖（例えば、トレハロース、スクロース、またはマンニトール）、緩衝剤（例えば、５～７．５のｐＨのリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、またはグリシンをベースとした緩衝剤など）、塩（例えば、ＮａＣｌまたはＮａＥＤＴＡ）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ヒトアルブミン、デキストラン、及びベンジルアルコールが挙げられる。例えば、ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，２０００）（その全体は参照により組み込まれる）を参照されたい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）（その全体は参照により組み込まれる）。

例示的な態様では、医薬組成物は、採用する用量及び濃度においてレシピエントに無毒な配合物質を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、活性剤、及び、１種または複数種の、薬学的に許容される塩、ポリオール、界面活性剤、浸透圧バランス調整剤、張性剤、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、増量剤、凍結乾燥保護剤、消泡剤、キレート化剤、防腐剤、着色剤、鎮痛剤、または別の薬剤を含む。

例示的な態様では、医薬組成物は、任意選択的に、薬学的に許容される塩、浸透圧バランス調整剤（張性剤）、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、増量剤、凍結乾燥保護剤、消泡剤、キレート化剤、防腐剤、着色剤、及び鎮痛剤を含むがこれらに限定されない１種または複数種の賦形剤に加えて、１種または複数種のポリオール及び／または１種または複数種の界面活性剤を含む。

特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、容積モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、芳香、滅菌状態、安定性、溶解速度もしくは放出速度、吸着、または浸透を、調節、維持、または保持するための、配合物質を含有していてもよい。このような実施形態における好適な配合物質としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなど）、抗菌剤、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウムなど）、緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、またはその他の有機酸など）、増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシンなど）、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）、錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなど）、充填剤、単糖、二糖、及びその他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリンなど）、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、着色剤、風味剤及び希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウムなど）、防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素など）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトールなど）、懸濁化剤、界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｃなどのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）、安定促進剤（例えば、スクロースまたはソルビトールなど）、張度増強剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール、ソルビトールなど）、送達媒体、希釈剤、添加剤、及び／または医薬補助剤、が挙げられるがこれらに限定されない。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＡＲ－ＴＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８”Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙを参照されたい。

医薬組成物は、生理学的に適合性のあるｐＨを達成するように製剤化されてもよい。一部の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、例えば、約４または約５～約８．０、約４．５～約７．５、または約５．０～約７．５であってもよい。例示的な実施形態では、医薬組成物のｐＨは５．５～７．５である。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を非経口投与で投与するための医薬組成物は一般的に液体である。水が主な賦形剤として一般的に使用されるが、その他の薬学的に許容される液体、例えば、エタノール、グリセロール、オレイン酸エチル、ミグリオール、オレイン酸ベンジル、ヒマシ油、ＭＣＴ、ベンジルアルコール、イソプロピルミリステートなどを、単独で、もしくは水と組み合わせて、または互いと組み合わせて使用してもよい。その他の賦形剤を含有していない水溶性組成物もまた検討され、凍結乾燥化合物、非晶質化合物、または結晶性化合物から調製することができる。多くの場合、皮下注射、ＩＭ注射、またはＩＶ注射用であってもよい注射用組成物は、等張化剤を含有している。注射用液剤または注射用懸濁剤は一般的に、全ての液体医薬剤形がそうであるように、滅菌である。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を局所投与で投与するための医薬組成物としては、散剤、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、ローション剤、液剤、及び懸濁剤（うがい薬を含む）が挙げられる。賦形剤担体は、それぞれが任意選択的にエマルションまたはマイクロエマルションの形態である、水溶液ベース、油ベース、またはポリマーベースである場合が多い。用語「局所投与」としては、例えば、目の投与（例えば、クリーム剤／軟膏剤による）、及び皮膚への投与（例えば、炎症を起こした関節における）が挙げられる。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を経口投与で投与するための医薬組成物としては、固体経口剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、その腸溶性形態、ロゼンジ剤、及びフィルム剤など、ならびに、液剤、懸濁剤、液剤充填カプセル剤、及びうがい薬を含む液体剤形が挙げられる。錠剤は、可溶性錠剤、分散錠、発泡錠、チュアブル錠、凍結乾燥錠剤、コート錠（例えば、糖衣または腸溶コーティングされた）、及び調節放出錠剤であってもよい。カプセルとしては、散剤、ペレット剤、顆粒剤、小型錠剤、もしくはミニ錠剤、または液剤もしくはエマルション剤、あるいは組み合わせを充填することができる硬質ゼラチンカプセルが挙げられ、腸内放出または調節放出用にコーティングされていてもよい。軟質カプセルもまた検討され、より一般的には、液剤、ゲル剤、または分散液剤を充填されているがそれらに限定されない。顆粒剤は、発泡性顆粒剤、コート顆粒剤（例えば、糖衣または腸溶コーティングされた）、及び調節放出顆粒剤であってもよい。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は経口投与することができるが、このような投与はＧＩ管への局所投与とみなされ得るということを理解すべきである。同様に、腸へと局所的とするために、坐剤または直腸注射もまた使用してもよい。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用した、消化管疾患（複数可）を治療するための経口剤形の使用は、本開示の態様である。

剤形の概要については、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．９^ｔｈ ｅｄ．Ｌ．Ｖ．Ａｌｌａｎ，Ｎ．Ｇ．Ｐｏｐｏｖｉｔｃｈ，Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ，２０１０ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＩＳＢＮ：９７８－０７８１７７９３４０；Ｆｏｒｍｕｌａｒｉｕｍ ｄｅｒ Ｎｅｄｅｒｌａｎｄｓｅ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒｓ．２００４ ＷＩＮＡｐ ＩＳＢＮ ９０－７０６０５－７５－９；Ｒｅｃｅｐｔｅｅｒｋｕｎｄｅ，Ｇ．Ｋ．Ｂｏｌｈｕｉｓ，Ｙ．Ｂｏｕｗｍａｎ－Ｂｏｅｒ，Ｆ．Ｋａｄｉｒ ｅｎ Ｊ．Ｚｕｉｄｅｒｍａ，２００５ ＷＩＮＡｐ ＩＳＢＮ ９０－７０６０５－６５－１；及びＡｐｏｔｈｅｋｅｎｒｅｚｅｐｔｕｒ ｕｎｄ－ｄｅｆｅｋｔｕｒ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒ Ｖｅｒｌａｇ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９８６ ＩＳＢＮ ３－７６９２－１０９２－１に見出すことができる。乾癬などの皮膚炎症性疾患を治療するためにＩＬ－８抗体を送達するための局所製剤の説明については、ＵＳ７，１４７，８５４もまた参照されたい。

医薬組成物は一般的に、採用する剤形に部分的に応じて、用量あたり約０．０１～１０００ｍｇの抗体を含有している。用量は、例えば、固定または可変（例えば、体重に基づいて）であってもよい。

安定製剤の開発は、本開示の抗体及び抗原結合フラグメントを含む医薬組成物の成功裏の臨床製造にとって極めて重要である。

一部の実施形態では、安定製剤は、添加剤を使用して異なるｐＨの様々な緩衝剤、安定化剤をスクリーニングすることによって調製されるが、最終安定製剤は、保存時における物理的安定性、化学的安定性、及び生物学的活性を有する必要がある。安定製剤における賦形剤の役割は、許容される有効期間を得るために分解を防止する及び／または分解速度を低下させることである。

本開示は、一部の実施形態において、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の安定液体製剤及び／または安定凍結乾燥製剤を提供する。一部の実施形態では、本開示における使用に検討される製剤緩衝剤は、４．０～８．０の範囲のｐＨ、好ましくは、４．５～７．５のｐＨ範囲、最も好ましくは、５．０～６．５のｐＨ範囲を有する。

一部の実施形態では、本開示は、以下、ｐＨを所望の範囲に調節するための、クエン酸ナトリウム、クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、ヒスチジン、ヒスチジンＨＣｌ、コハク酸、コハク酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、マレイン酸、マレイン酸塩、コハク酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、及び塩酸、ならびに水酸化ナトリウムのうちのいずれか及びこれらの組み合わせであってもよい緩衝剤を含む。

一部の実施形態では、組成物は、その他の緩衝剤、例えば、トリス緩衝剤、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ＭＯＰＳ－ＳＤＳ（ＭＥＰＳ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－ヒドロキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）などを含み、一部の実施形態では、製剤は、糖アルコールであるポリオールを含む。一部の実施形態では、製剤中の安定化剤は、以下、α－トレハロース、スクロース、マンニトール、ソルビトールのうちのいずれか１つを単独で、または組み合わせで含む。その他の実施形態では、製剤は、以下、メチオニン、リジン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸塩などのうちのいずれか１つである第２の安定化剤を含む。

一部の実施形態では、本抗体製剤は、疎水性の塩、すなわち、硫酸樟脳ナトリウム、トリメチルヨウ化アンモニウムを含む。別の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体製剤は、同様に、界面活性剤を含む。一部の実施形態では、以下、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、及びポロキサマー１８８に例示される界面活性剤のうちのいずれか１つは、製剤中に含まれる。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を含む組成物は、酸化防止剤、例えば、メチオニン及び／またはグルタチオンを含む。一部の実施形態では、組成物は、製剤緩衝剤のｐＨを調節するための塩酸及び水酸化ナトリウムを含む。

一部の実施形態では、本開示は、その他の安定化剤及び錯化剤、例えば、エデト酸二ナトリウム（Ｎａ（２）ＥＤＴＡ）及びジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）などを含む。一部の実施形態では、安定製剤の全ての賦形剤は、注射用蒸留水（ＷＦＩ）中に溶解している。

一実施形態では、最終水溶性安定製剤は、粒子状物質を除去するために適切に濾過される。一部の実施形態では、濾過は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルター、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）フィルター、または再生セルロース（ＲＣ）フィルターのいずれかにより行われ、好適には、０．２２及び／または０．４５マイクロメートル孔径のいずれかのサイズのフィルターである。

一部の実施形態では、薬剤送達デバイスは、抗体製剤の第２の重要な態様である。その他の実施形態では、薬剤送達デバイスは滅菌である。その他の実施形態では、薬剤送達デバイスは、バイアル、アンプル、注射器、注射ペン、または点滴静注（ｉ．ｖ）バッグである。

本開示の非限定実施形態では、機能特性解析は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合の動態及び動力学を理解するために、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、及びイメージング、当該技術分野において周知のその他の技術のうちの１つが挙げられるがこれらに限定されない技術を使用して、実験を実施することを含む。更に、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用部位をマッピングしてから、フローサイトメトリーベース結合実験によりモニター及び確認する。

本開示の非限定実施形態では、モノクローナル抗体は、免疫系の自然群または適応群のいずれかを初回刺激する基本的な効果で腫瘍細胞を破壊するための様々なメカニズムを介して機能する。エフェクター機能としては、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）が挙げられる。本明細書で開示する方法に採用する１つの非限定アプローチは、免疫グロブリン定常領域を修飾することによって治療抗体の効果を増強することである。このような抗体の一例としては、可変領域（新規の重鎖領域及び軽鎖領域）で構成され、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、またはそのバリアントを示す定常領域で構成されていてもよい、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が挙げられる。同様に、固有の可変領域配列を使用して、高いＡＤＣＣ機能または改変された熱安定性を有する抗体分子を開発してもよく、更に、更に本明細書で記載されるとおり、二重特異性抗体、ＳｃＦｖ分子、または任意のその他の抗体フォーマットを開発してもよい。

本開示の非限定実施形態では、語句「サイトカイン」としては、言及した疾患と関連した細胞株及び／またはこれらの組み合わせのうちのいずれかに対して使用される単離抗体の治療の効果として産生され得るケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカイン、及び腫瘍壊死因子を挙げることができる。

本開示の非限定実施形態では、語句「誘導因子」とは、遺伝子発現を調節する分子のことである。

本開示の実施形態は、選択抗体分子の作用機序と関連させて、ＮＫ細胞シグネチャー、ＩＦＮ－γ産生などの経路と関連する遺伝子の相互作用を理解するための方法及びツールを使用することを含む。例示的に、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡によるイメージング、及びＲＴ ＰＣＲなどの技術を共に使用して、選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の機械的影響を解読するが、主なシグナル伝達経路に対する様々な阻害因子の効果は、複数種のがん細胞を用いて評価される。一実施形態では、ＩＦＮ－γ放出アッセイ、ＣＤ１０７ａ＋発現アッセイ、及び／または細胞傷害アッセイを使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の効果を推定する。

本開示の非限定実施形態では、皮下ＰＣ３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを用いて抗腫瘍活性を評価するが、選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の効果は、単独またはチェックポイント標的に対するモノクローナル抗体との組み合わせのいずれかで、モニターされる。別の実施形態では、最適かつ所望の抗腫瘍効果を得るために抗体用量レジメンを調節する。一部の実施形態では、語句「非経口投与」または関連用語とは、本明細書で使用する場合、経腸投与及び局所投与以外の投与方法のことを意味し、一般的には、注射によるものであり、以下の投与方法、筋肉内、静脈内、動脈内、硬膜内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、皮下、表皮下、脊髄内、硬膜外、胸骨内の注射及び注入が挙げられるがこれらに限定されない。

以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態をより詳細に説明するために提示されるものである。しかしながら、それら実施例は、本開示の広範な範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現
野生型または変異型のいずれかの、ＣＬＥＣ２Ｄの外部ドメインを含む抗原構築物を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株内で発現させてから、可溶性抗原として精製した。ＣＬＥＣ２Ｄ外部ドメインは、２つの推定上のジスルフィド結合を有する５つのシステインを含有している。発現タンパク質の安定性及び均一性を向上させるために、変異Ｈ１７６Ｃを実施して、Ｃｙｓ１６３アミノ酸に更なるジスルフィド架橋を導入した。抗原精製プロセスを容易とするためのＣ末端ヒスチジンタグを有する構築物を開発した。

ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｑ７２－Ｖ１９１、Ｈ１７６Ｃ）抗原の細胞外ドメインをヒト発現系とＣＨＯ発現系の両方用にコドン最適化してから、構築物を合成した。特定のシグナル配列をＣＨＯが発現する抗原の分泌用に使用した。ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子配列及び適切なシグナル配列をｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングした（図２Ａ）。

９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞を、ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子をコードする発現プラスミドのトランスフェクション用に使用した。細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントしてから、細胞を２５０ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プラスミドをトランスフェクションした。５００μｇのＤＮＡ及び５００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５０ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で２０分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で５時間培養した。５００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で３日間培養した。トランスフェクションの３日後、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘを含有する２００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清を回収した。

細胞回収液を遠心分離にかけてから濾過して、細胞デブリを除去した。透明な上清を予め平衡化したＮｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ Ｃ１０カラムに充填した。それに続き、カラムを５０ｍＭ及び１００ｍＭのイミダゾール溶液で連続的に洗浄してから、５００ｍＭのイミダゾールを用いたＨｉｓタグ付きＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の単一工程溶出を行った。複数の画分を回収してから、バッファーをｐＨ７．４の１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に交換した。

精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をＳＤＳ－ＰＡＧＥで解析した。ヒトＣＬＥＣ２Ｄ配列は、２つの推定上のＮ－グリコシル化部位、Ｎ９５及びＮ１４７を有している。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおける異常な移動度は、特異的なＮ－グリコシル化パターンによるものであると推測された。ＰＮＧａｓｅ酵素を使用して精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を脱グリコシル化すると、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析により判定されたものと同様の予測分子量上の単一バンドであると思われた（図２Ｂ～図２Ｆ）。それに続き、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたウェスタンブロット実験により、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を解析した。精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原はまた、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたＥＬＩＳＡにより確認された。タンパク質のオリゴマー状態は、サイズ排除クロマトグラフィー実験を使用することにより、二量体であることが判明した。最後に、エドマン分解法によるＮ末端シークエンシングを実施して、抗原配列を確認した。

実施例２：ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームを使用した抗体遺伝子ライブラリのスクリーニング
抗体ライブラリのファージディスプレイ及び酵母ディスプレイを組み合わせることにより、抗体遺伝子ライブラリのスクリーニングを実施した。ヒト抗体レパートリーを発現するファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームを連続的に使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するより高い親和性及び特異性を有する新規抗体クローンを同定した（図３）。抗原に対するファージパニング実験用に、磁性ビーズベースのアプローチを採用した。磁性ダイナビーズ上にコーティングされた抗原を調製したが、コンジュゲート効率は＞９０％であった。抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングして、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを発現するファージ粒子を分離した。選択ファージ粒子を使用して、重鎖及び軽鎖レパートリーを含有する複製型を作製した。精製ＤＮＡを消化してから、２種の異なるプラスミド構築物を用いて酵母発現ベクターにライゲートして、Ｆａｂフォーマットの抗体及びＳｃＦｖフォーマットの抗体を作製した。

精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた磁性ビーズコンジュゲート用に、先ず、ダイナビーズを、約０．５～１．０×１０^８ビーズに相当する０．５ｍｇ～１．５ｍｇの範囲の量に計量してから、ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー中に溶解させた。この懸濁液を３０～６０秒間ボルテックスしてから、回転させ続けながら室温で１０～１５分間培養した。懸濁液を０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファーで２回洗浄してから、１００μＬの０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー中に再度再懸濁させた。５～１０μｇの精製可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原溶液（７５～１５０μＬ）をビーズ懸濁液に加えた。更に、懸濁液を十分混合してから、１００μＬの３Ｍ硫酸アンモニウム溶液を加えた。ゆっくりとした動きではあるが回転させ続けながら混合液を３０～３７℃で１５～２０時間培養した。培養後、磁気分離を行うために、チューブをマグネットホルダー上に１分間置いた。マグネットホルダー（チューブを所定の位置に置いた状態）を２回慎重にひっくり返して、確実に、ビーズがキャップ内に残らないようにした。上清を除去してから、ビーズを、ＢＳＡ（０．０５％）を含有する１ｍＬの１×ＰＢＳで４回洗浄した。最後に、ビーズを、ＢＳＡ（０．０５％）を含む１００μＬの１×ＰＢＳ中に再懸濁させて、パニングに使用した。

１μＬ（約１０^６の数のビーズ）のビーズ単独及びＣＬＥＣ２Ｄ抗原でコーティングしたビーズを、０．１μｇの量の市販のＰ４５００／抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と混合してから、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳで容量を１００μＬに調整した。混合液を氷上で２時間培養してから、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳで洗浄した。１：４００希釈の、ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ヤギＩｇＧを、１００μＬの容量となるように、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳの溶液中の再懸濁ビーズに加えてから、測定値を記録した。全てのフローサイトメトリー実験はＡｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーターを使用して実施したが、解析はＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ソフトウェアを使用することによって実施した。第１に、前方散乱光データ及び側方散乱光データを確認してゲートを固定してから、ＦＬＨ１フィルターを通った蛍光を読んだ。それぞれの試料について少なくとも５，０００～１０，０００のデータポイントを収集する（図４Ａ）。

新たに画線培養したＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを３ｍｌ ＬＢ培地に播種してからＯＤ６００≒０．９となるまで３７℃で培養することで、ファージパニング実験を開始し、これを後ほどのファージ感染用に使用した。ファージナイーブ抗体ライブラリを解凍し、２５０μｌ（ファージ懸濁液容量の約１／４）のＰＥＧ／ＮａＣｌ溶液（２０％ＰＥＧ８０００及び２．５Ｍ ＮａＣｌ）でファージ粒子を沈殿させ、氷上で３０分間培養してから、沈殿ファージを１０，０００×ｇ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、ファージペレットを２００μｌのＰＢＳ溶液中に再懸濁させた。ファージ懸濁液（２００μｌ）をＢＳＡをコンジュゲートしたビーズに加え、ローテータ上、室温で２時間培養してから、上清をＣＬＥＣ２Ｄ抗原をコンジュゲートしたビーズに加え、１０μＬの上清を後ほどのプラークアッセイ用に保管した。抗原をコンジュゲートしたビーズを含むファージ懸濁液をローテータ上、室温で２時間培養した。ビーズを１ｍｌの０．０５％ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０）で２回洗浄した。最後に、ファージ粒子が結合した磁性ビーズを１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させる。１０μＬのビーズ懸濁液を後ほどのプラークアッセイ用に保管した。残りの９０μｌの懸濁液を、先に調製した２ｍｌの増殖ＴＧ１細胞に加えてから、混合液を３７℃で１時間培養した。培養後、混合液を、アンピシリンを含有する１０ｍｌのＬＢ培地中に２５μｇ／ｍｌの終濃度に希釈した。２５０ｒｐｍで常時振盪しつつ、３７℃で２時間培養した後、アンピシリンの濃度は１００μｇ／ｍｌの終濃度へと上昇した。Ｍ１３ＫＯ７、ヘルパーファージを、１０の感染多重度（ＭＯＩ）で増幅ＴＧ１細胞に混合してから、３７℃で更に３０分間培養した。ヘルパーファージ感染細菌を遠心分離にかけて、ペレットを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリン及び２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを補足した１０ｍｌのＬＢ培地中に再懸濁させてから、ファージ増幅用に３０℃で３０分間～１００分間培養した。１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離により細菌培養物を沈殿させた。ペレットを廃棄してから、ＰＥＧ／ＮａＣＬ溶液（上清の約１／４の容量）を上清に加えることによる増幅ファージ分子の沈殿用に上清を使用した。混合液を氷上で３０分間培養してから、沈殿ファージを、１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、ペレットを１ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。１０μＬの増幅ファージ懸濁液でプラークアッセイを実施して、増幅ファージ数を推定する一方で、沈殿ファージの残りを、５０％グリセロールを用いて長期保存用の－８０℃のフリーザーで保存した。

全ての工程でプラークアッセイを実施して、ファージ粒子の数を確認した。ＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを３ｍｌ ＬＢ培地中の細菌に播種してから、ＯＤ６００≒０．９となるまで３７℃で増殖させた。精製水で０．７％のアガロースを調製してから、それぞれ１５ｍｌのファルコンチューブに入れた３ｍｌのアリコートで、５０℃で保存した。ファージ上清及びペレットを、対応する工程で１０^－１から１０^－５へと希釈した。１００μｌの希釈ファージ及び１００μｌのＴＧ１細胞をそれぞれのアガロースアリコートに加えて混合してから直ちに、ＬＢ寒天プレート上に薄く広げた。プレートをインキュベータ内、３７℃で一晩培養した。プラーク形成が認められ、翌日カウントした。認められたプラークの数に基づいて、パニング分子の数を計算した（表１０）。

ＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを、ＯＤ６００が約０．９に達するまで３７℃の２０ｍｌ ＬＢ培地に播種した。２００μｌの沈殿パニングファージ懸濁液を２ｍｌのＴＧ１細胞（１０個の異なるチューブ内にあり、それぞれのチューブは２～５ｍｌのＴＧ１細胞を含有している）に播種してから、混合液を振盪しつつ３７℃で１時間培養した。それぞれのチューブ内の容量を、２５μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有する１０ｍｌのＬＢ培地に希釈した。２２０ｒｐｍで振盪しつつ、３７℃で更に２時間培養した後、アンピシリン濃度は１００μｇ／ｍｌの終濃度へと上昇し、更に３０分間～１００分間培養した。細菌培養物を１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離にかけ、そのペレットを、更に使用するためのＱｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐを用いたＤＮＡ単離用に製造業者のプロトコルに従い使用した。

Ｆａｂフォーマットの酵母シャトルベクターを用いた重鎖及び軽鎖ライブラリの構築。
パニング分子の単離複製型ＤＮＡに加えて軽鎖導入用に指定された自社製酵母発現ベクターｐＺＢ００３（ＭＴＣＣ ２５１２７）をＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｓｃＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に個別に形質転換した。同様に、重鎖プール（単離複製型に由来する）及び対応するベクターｐＺＢ００２（ＭＴＣＣ ２５１２６）をＮｃｏＩ及びＮｏｔＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に形質転換した。重鎖パニングライブラリと軽鎖パニングライブラリの両方用に得られた形質転換効率は＞１０^７ｃｆｕである。重鎖ライブラリと軽鎖ライブラリの両方用に得られた形質転換コロニーについて、重鎖（図４Ｂ）用のＮｃｏＩ／ＮｏｔＩ及び軽鎖（図４Ｃ）用のＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｓｃＩを使用したインサート遊離を確認してから、それら形質転換コロニーをグリセロールストック調製用にスクレープした。両方の分子鎖のインサート遊離について、パニング可変重鎖及び軽鎖カッパ分子の存在を確認した。グリセロールストックを今後の使用用に－８０℃で保存した。表１０、表１１、及び表１２は、酵母ベクターを用いたライブラリの構築に使用可能な構成成分を提供する。

ＳｃＦｖフォーマットの酵母シャトルベクターを用いた重鎖及び軽鎖ライブラリの構築。
ＳｃＦｖフォーマットは、軽鎖（ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するパニングファージに由来するカッパレパートリー）をｐＺＢ００４．４ベクターのＮｄｅＩ制限部位とＡｓｃＩ制限部位の間に導入してから、軽鎖ＳｃＦｖライブラリのプールを作製することからなる。それに続き、制限消化確認でライブラリを確認してから、パニング重鎖プールをＳｃＦｖ軽鎖ライブラリのＮｃｏＩ制限酵素とＮｏｔＩ制限酵素の間に導入した。この最終ライブラリを、酵母発現系を用いて更に形質転換、ソート、及びスクリーニングされるパニング分子のＳｃＦｖライブラリとして使用した。パニング分子の単離複製型ＤＮＡに加えて自社製ＳｃＦｖ酵母発現ベクターをＮｄｅＩ及びＡｓｃＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に個別に形質転換した。

軽鎖ライブラリ用に得られた形質転換コロニーについて、ＮｄｅＩ／ＡｓｃＩを使用したインサート遊離を確認してから、それら形質転換コロニーをグリセロールストック調製用にスクレープした。インサート遊離について、パニング分子の存在を確認した。グリセロールストックを今後の使用用に－８０℃で保存した。パニングにより得られた重鎖レパートリーの導入用に使用されるＱｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐキットを使用して、プラスミド単離を実施した。

同様に、単離複製型に由来する重鎖プール及びＳｃＦｖ含有軽鎖ライブラリをＮｃｏＩ及びＮｏｔＩで消化してから（図４Ｄ）、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に形質転換した。重鎖パニングライブラリと軽鎖パニングライブラリの両方用に得られた形質転換効率は＞１０^７ｃｆｕである。ＮｃｏＩ／ＮｏｔＩを用いた重鎖とＮｄｅＩ／ＡｓｃＩを用いた軽鎖の両方用のインサート遊離で、コロニーを確認した（図４Ｅ）。

表１３、表１４、及び表１５は、酵母発現ベクターを用いたライブラリの構築に使用可能な構成成分を提供する。

大規模に単離したＤＮＡについて制限消化を確認してから、酵母形質転換用に導入した。制限消化により確認した後、それぞれのフォーマット用の可変重鎖及び軽カッパ鎖を含有する少なくとも１０の別々のクローンをシークエンシング反応用に送付した。シークエンシング結果については、重鎖及び軽カッパ鎖の生産性の観点から以下の表１７にまとめている。

上で詳述したとおり、非特異的結合物質を除去するために、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングした。選択ファージ粒子を使用して、重鎖及び軽鎖レパートリーを含有する複製型を作製した。この方法は、パニング分子プールに対する望ましくないバイアスをもたらし得るあらゆるＰＣＲベースアプローチを欠いていた。精製複製型のＤＮＡを消化してから、２種の異なるプラスミド構築物を用いて酵母発現ベクターにライゲートして、Ｆａｂフォーマットの抗体及びＳｃＦｖフォーマットの抗体を作製したが、クローニング効率は＞９５％であると推定され、ＴＧ１細胞の形質転換効率は１０^７ｃｆｕ超であった。これらのパラメータは、パニング多様性の完全な獲得確保を満たすために不可欠であった。

続いて、両方のフォーマット、すなわち、ＳｃＦｖ及びＦａｂの酵母ＤＮＡライブラリを酵母細胞に形質転換した。形質転換酵母細胞について、重鎖、軽鎖、及びＦａｂ分子の発現を確認した。それぞれ重鎖及び軽鎖用の複数種のタグ、例えば、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、及び（Ｈｉｓ）_６タグ、ならびにＶ５タグなどを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析した。フローサイトメトリーベースのソーティングを実施して、特異的抗原結合を示す抗体配列を発現する酵母細胞を単離した。酵母細胞集団のフローソーティングを２～３回繰り返して、標識ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するより高い親和性を有する抗体クローンを濃縮した。

酵母ＳｃＦｖライブラリの作製
ＥＢＹ１００株（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞）を、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上の５ｍｌ ＹＰＤ培地内で、一晩増殖させた。翌朝、一晩培養したうちのアリコートを、１００ｍｌのＹＰＤ培地に約０．３のＯＤ６００で播種した。播種細胞は、ＯＤ６００が約１．６に達する（一般的には、５時間～６時間後）まで、３０℃及び２２０ｒｐｍのプラットフォーム振盪器上で増殖し続けた。３０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離により酵母細胞を回収してから、培地を除去した。細胞ペレットを、５０ｍｌの氷冷水で２回、５０ｍｌの氷冷エレクトロポレーションバッファー（１Ｍソルビトール／１ｍＭ ＣａＣｌ２）で１回洗浄した。細胞ペレットを２０ｍｌ（０．１Ｍ ＬｉＡｃ／１０ｍＭ ＤＴＴ）中に再懸濁させてから、３０℃の培養フラスコ内、２２０ｒｐｍで３０分間振盪することにより、酵母細胞を調整した。遠心分離により調整細胞を回収してから、５０ｍｌの氷冷エレクトロポレーションバッファーで１回洗浄し、１ｍｌの最終容量に達するように、細胞ペレットを１００μｌ～２００μｌのエレクトロポレーションバッファー中に再懸濁させた。

これは約１．６×１０^９細胞／ｍｌに相当し、それぞれ４００μｌの２回のエレクトロポレーション反応用に十分である。細胞はエレクトロポレーションを行うまで氷上で保管した。４００μｌのエレクトロコンピテント細胞を所定量のプラスミドＤＮＡと軽く混合してから、予め冷却したＢｉｏ－Ｒａｄ ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒキュベット（０．２ｃｍの電極間距離）へと移し、エレクトロポレーションを行うまで氷上で５分間保管した。２．５ｋＶ及び２５μＦで細胞にエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーションを行った細胞を、それぞれのキュベットから８ｍＬの１Ｍソルビトール：ＹＰＤ培地の１：１混合液に移してから、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上で１時間培養した。遠心分離により細胞を回収してから、ＳＤＣＡＡ培地中に再懸濁させた。細胞懸濁液から１０倍系列希釈細胞を調製してから、１００μｌの１０－３及び１０－４希釈細胞を選択プレート（ＳＤＣＡＡプレート）上に播種し、３０℃のインキュベータで３～４日間培養した。３～４日後のコロニーカウントからライブラリサイズを測定した（図５Ａ）。３～４日後、ＳＤＣＡＡプレート上にコロニーが認められた。最後に、酵母細胞をスクレープすることにより酵母ＳｃＦｖ抗体ライブラリの２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。

Ｆａｂ抗体ライブラリを開発するための酵母半数体抗体ライブラリの作製
軽微な変更を行いつつ製造業者（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）のプロトコルに従い形質転換を実施した。要約すると、ＥＢＹ１００ｕｒａ３Δ４．０３株（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞）及びＹＶＨ１０を、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上の５ｍｌ ＹＰＤ培地内で、一晩増殖させた。一晩培養したもののＯＤ６００値を確認してから、一晩培養したものを、約０．４のＯＤ６００で開始してＯＤ６００が約１．０～１．２に達するまで、２２０ｒｐｍの振盪インキュベータ内、５０ｍｌのＹＰＤ培地に３０℃で再播種した。３０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離により酵母細胞を回収してから、培地を除去した。細胞ペレットを１０ｍｌのＥＺ１溶液で洗浄してから、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離にかけた。次に、細胞ペレットを６００μｌのＥＺ２溶液中に再懸濁させて、更にＲＴで５分間培養した。コンピテント酵母細胞を含有する２００μｌのＥＺ２溶液を、適量のプラスミドＤＮＡ及び５００μｌのＥＺ３溶液と混合した。コンピテント酵母細胞及びＤＮＡの上記混合液を３０℃で１時間３０分培養した。酵母細胞を２４００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけた。２００μｌの上清を廃棄してから、細胞ペレットを残りの上清中に再懸濁させた。

細胞懸濁液から１０倍系列希釈細胞を調製してから、１００μｌの１０－３希釈細胞を選択プレート上に播種し、３０℃のインキュベータで３～４日間培養した。重鎖抗体ライブラリで形質転換したＥＢＹ１００ｕｒａ３Δ４．０３を、トリプトファンドロップアウトグルコース培地上で選択した。しかしながら、軽鎖抗体ライブラリを含むＹＶＨ１０株を、ウラシルドロップアウト培地上で選択した。３日後のコロニーカウントからライブラリサイズを測定したが、約１０^５であると推定された。（図５Ａ）半数体酵母抗体ライブラリの２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。

酵母交配による二倍体酵母Ｆａｂライブラリの作製
異なる交配タイプを有する、重鎖及び軽鎖ライブラリを含む２種の半数体酵母株を、アミノ酸ドロップアウトグルコース培地でスクレープした。両方の半数体細胞培養物のＯＤ６００を確認した。それぞれの培養物の約１のＯＤ６００を１．５ｍｌマイクロチューブに入れてから、１３０００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄し、次に、１００μＬの精製水をそれぞれのペレットに加えてから、それらを共に混合した。混合酵母培養物をＹＰＤプレート上に播種してから、３０℃で５～６時間培養した。５～６時間後のＹＰＤプレートに由来する酵母細胞をスクレープしてから、スクレープ酵母細胞のＯＤ６００をモニターした。スクレープ培養物を、０．１のＯＤ６００で開始して、ｕｒａ ｔｒｐ二重ドロップアウトグルコース培地に播種してから、３０℃、２２０ｒｐｍで、少なくとも２４時間培養した（二倍体濃縮用）。

濃縮二倍体培養物のＯＤ６００をモニターしてから、約５００及び１０００の細胞を含有する濃縮培養物から希釈溶液を調製した。希釈溶液を単一及び二重ドロップアウトアミノ酸グルコース寒天プレート上に播種してから、３０℃で２～３日間培養した。二倍体ライブラリをｕｒａ ｔｒｐ二重ドロップアウトグルコースプレート上で選択した。残りの濃縮二倍体培養物の２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。単一ドロップアウトプレート内で増殖した総コロニーの数で割った、二重ドロップアウト培地プレート内で増殖した二倍体コロニーの数として、交配効率のパーセンテージを計算した。酵母交配により酵母ｆａｂ抗体ライブラリを作製した（図５Ｃ）。

酵母Ｆａｂライブラリ及び酵母ＳｃＦｖライブラリのフローソーティング
酵母試料を３ｍｌのＳＤＣＡＡ培地に播種してから、酵母細胞を３０℃、２２０ｒｐｍで一晩培養した。翌日、１：１０に希釈することにより、播種培養物のＯＤ６００値をモニターした。酵母試料の０．３のＯＤ６００の細胞を２０ｍｌの２×ＳＧＣＡＡ培地に播種してから、振盪インキュベータ内、２０℃、２２０ｒｐｍで４８時間培養した。４８時間後１：１０に希釈することにより、誘導培養物のＯＤ６００をモニターした。約０．１のＯＤ６００の細胞を増殖酵母培養物から１．５ｍｌチューブに入れてから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄して、１００μｌの１×ＰＢＳを加えることによりペレットを洗浄してから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。上清を再度廃棄した。適切な濃度の２００μｌの一次抗体またはビオチン化抗原を酵母細胞ペレットに加えてから、回転させながらＲＴで４５分間培養した。培養後、細胞を１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。０．１％ＢＳＡを含有する２００μｌのＰＢＳを加えることにより細胞ペレットを２回洗浄して、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。適切な濃度の２００μｌの二次抗体を酵母細胞ペレットに加えてから、氷上で３０分間培養した。培養後、細胞を１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。０．１％ＢＳＡを含有する２００μｌの１×ＰＢＳを加えることによりペレットを３回洗浄してから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。３００μＬの１×ＰＢＳを酵母細胞ペレットに加えてから、フローソーターで試料を解析した（図５Ｄ及び図５Ｅ）。一次抗体、二次抗体、及びビオチン化抗原の濃度を表１８に示す。

ソート／リソートＳｃＦｖプールまたはソート／リソートＦａｂプールからの個々のクローンのスクリーニング
個々のクローンをスクリーニングするためのフローソーティング中に述べたのと同様のフロー染色プロトコルを使用した。約１０００のコロニーを、発現及び抗原結合用にフローサイトメトリーでスクリーニングした（図５Ｆ、図５Ｇ、及び図５Ｈ）。それぞれＦａｂクローン及びＳｃＦｖクローンの場合に、結合と発現の両方に対して＞２％及び＞５％陽性であることを基準として、これらのクローンを選択した。

加えて、可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するソーティングにより得た選択抗体遺伝子プールを次世代シークエンシングに供した。ＳｃＦｖフォーマットの抗体遺伝子プールとＦａｂフォーマットの抗体遺伝子プールの両方に対してこの作業を実施した。例示として、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４２、配列番号１、配列番号７３、配列番号２１、配列番号３５、配列番号５８、配列番号７、配列番号２６０、配列番号２６１、配列番号２５８、配列番号２１７、配列番号２８９、配列番号２３７、配列番号２５１、配列番号２７４、配列番号２２３を、最終ソートラウンドにおいて、Ｆａｂフォーマットでスクリーニングしたクローンに適用可能な２．５倍～７倍の範囲で濃縮した一方で、ＳｃＦｖフォーマットでスクリーニングしたクローンをおおよそ、２倍～１０６倍の範囲の倍数で濃縮した。全てのソートラウンド時に確認された遺伝子コピーの数により、濃縮倍数の推定を行った。このことは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体が、ファージディスプレイ技術及び酵母ディスプレイ技術でスクリーニングしたナイーブ抗体ライブラリを含む強力なプラットフォームによりスクリーニング、単離、及び同定されたという事実を更に裏付けた。

最後に、フローサイトメトリーアッセイを使用して個々の酵母クローンを同定した。それに続き、ピアグループ抗体遺伝子シークエンシングを実施してから、新規抗体配列を、哺乳動物遺伝子発現ベクターへの更なるクローニング用に取得した。Ｚｙｍｏｐｒｅｐ Ｙｅａｓｔ Ｐｌａｓｍｉｄ ｍｉｎｉｐｒｅｐキットを使用して、ＦａｂフォーマットとＳｃＦｖフォーマットの両方で存在する選択酵母クローンから酵母プラスミドＤＮＡを単離した。ベクター特異的プライマーを使用して、Ｆａｂフォーマットを有する選択酵母クローン内における重鎖及び軽鎖の可変領域を増幅させてから、シークエンシングを行った。一方、ＳｃＦｖフォーマットのクローンでは、酵母コロニーから単離したプラスミドを、続けて、より大規模な産生用に、ＮＥＢ－α細胞に形質転換した。ＮＥＢ－α細胞から単離したプラスミドをシークエンシング確認用に送付した。図５Ｈは、フローサイトメトリーを用いて測定した、モノクローナル抗体クローンのＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合パーセンテージについてまとめている。データは、約８０％のモノクローナル抗体クローンが検出可能かつ特異的にＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合することが明らかとなったことを示唆した。

全ての配列識別子及び適切な配列同一性解析については、可変重鎖の抗体クローンを列挙する表１９、及び可変カッパ軽鎖の抗体クローンを列挙する表２０に記載されている。

実施例３：新規抗体クローンを同定するための抗体配列解析
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する、重鎖と軽鎖の両方の単離抗体の可変領域は、６つの超可変領域：軽鎖に由来する３つの超可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）及び重鎖に由来する３つの超可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）からなる。超可変領域の長さは、その長さがプール内における４～２３アミノ酸の範囲の有意な表示を有するＣＤＲＨ３に示されるとおり、有意に様々であり得る。ＣＬＥＣ２Ｄに対する選択抗体遺伝子の配列のばらつきを理解するために、全ての重鎖ＣＤＲＨ３長のアミノ酸組成を測定した（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、及び図６Ｄ）。固有性を確認するために、抗体配列を解析した。複数種の配列アライメントツールを使用して、抗体遺伝子配列を、ＩＭＧＴ、ＩｇＢＬＡＳＴなどのようなデータベースに公開されている抗体配列と比較した。

選択配列を更に解析して、脱アミド化モチーフ、異性化モチーフ、タンパク質分解開裂モチーフ、Ｎ－結合型グリコシル化部位、可塑性結合モチーフ、ストレプトアビジン結合モチーフ、ヒトＦｃ結合モチーフ、マウスＩｇＭ結合モチーフ、ウシＩｇＧモチーフ、プロリンリッチモチーフ、及びシステインリッチモチーフなどを有する抗体遺伝子を同定した。このような抗体遺伝子は、治療用モノクローナル抗体の開発に適しているとは考えられないことから、更なる評価用には検討しなかった。個々の酵母コロニースクリーニングの段階において可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体遺伝子に認められた結合度合いに基づき、限定するわけではないが上位４０の結合物質を、その後の開発に対する更なる目的とした。確認された抗体遺伝子配列のみを、更なるクローニング、発現、及び特性解析用に取得した。

実施例４：新規抗体遺伝子のクローニング
続いて、エラーのない抗体可変重鎖及び可変軽鎖領域を、野生型または変異型のいずれかであり、ヒト、マウス、及びカニクイザル種に由来する様々なアイソタイプ主鎖を有する哺乳動物発現ベクターにクローニングした。以下の表２１は、同定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子のクローニング用に開発され、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ（ＭＴＣＣ），Ｉｎｄｉａへと寄託された関連ベクターについてまとめている。

例示として、哺乳動物発現ベクターｐＺＢ００７（ＭＴＣＣ ２５３５８）及びｐＺＢ００８（ＭＴＣＣ ２５３５９）をそれぞれ、可変重鎖遺伝子クローニング及び可変軽鎖遺伝子クローニング用に指定及び使用した（図７Ａ及び図７Ｂ）。好適なプロモーター配列の制御下における抗体遺伝子の発現用に、ベクターをカスタム設計して合成した。プラスミドは、強力なプロモーターによって駆動されるカナマイシンＲ／ピューロマイシンＲカセット、及び増殖用の高コピー数ＣｏｌＥ１／ｐＭＢ１／ｐＢＲ３２２／ｐＵＣ複製起点を搭載している（図７Ａ及び図７Ｂ）。

ヒトナイーブ抗体ライブラリを使用した可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングした配列確認済み選択プラスミドを、その後のＰＣＲ増幅用の鋳型として使用した。配列特異的プライマーを使用してＰＣＲ反応を実施し、可変重鎖及び軽鎖領域を有する選択クローンを増幅させた。０．２μＭのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｉｎｄｉａ）、２００ユニットのＰｈｕｓｉｏｎポリメラーゼ（ＮＥＢ）からなる５０μＬの混合容量を入れたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（商標）Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ（商標）ｐｒｏ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ上で、ＰＣＲ反応を実施した。９４℃、３分間の初期変性に続いて、３０サイクルの、９４℃、３０秒間の変性、６０℃、５０秒間のアニーリング、７２℃、１０秒間のプライマー伸長、７２℃、１０分間の最終伸長を実施した。ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用してＰＣＲ増幅産物を抽出した。ＡｓｃＩ及びＸｂａＩによる制限酵素消化によりプラスミドベクターｐＺＢ００７を直鎖化し、ＥｃｏＲＩ及びＡｓｃＩによりｐＺＢ００８を直鎖化した。ＱＩＡＧＥＮキット（２００２１）を使用してインサートフラグメント及び直鎖化ベクターをゲル抽出した。これらの精製ベクター及びインサートを、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｔａｋａｒａ，ＵＳＡ）を用いた組換えに使用した。インフュージョン反応用混合液の細菌細胞への形質転換を実施した。－８０℃のフリーザーからコンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｓｔｅｌｌａｒ）の１００μＬのアリコートを取り出して、氷上で５分間解凍した。組換え試料のうちの５０％をコンピテント細胞に加えて軽く混合してから、氷上で２０分間培養した。ドライバス内、４２℃で５０秒間熱ショックを与えた。バイアルを氷上で２分間素早く冷却した。３７℃に予め温めた０．９５０ｍＬのＬＢ液体培地を加えてから、振盪インキュベータ内、３７℃、２２０ｒｐｍで１時間培養した。１００μＬの得られた培養液を、カナマイシンを含むＬＢ寒天培地上に播種してから、３７℃で一晩培養した。

特定のＤＮＡプラスミドを含有する形質転換細胞を、カナマイシンを含む５ｍＬのＬＢ液体培地に播種してから、２２０ｒｐｍ、３７℃で一晩培養した。ＱＩＡＧＥＮキットを使用して増殖培養液からプラスミドＤＮＡを一晩単離した。ＳｐｅＩ酵素及びＸｈｏＩ酵素を使用して実施した制限酵素解析により単離クローンをスクリーニングし、シークエンシングにより確認すると、エラーを含まないことが判明した。その後のトランスフェクション実験に使用するために、ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｄｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、確認済みクローンに由来する配列確認済みプラスミドＤＮＡを大規模に精製した。

実施例５：抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の調製及びＣＨＯが発現する新規モノクローナル抗体の選択
新規モノクローナル抗体クローンを選択するための戦略
治療抗体の設計及び特性に注意するために、更なる開発用の特定のモノクローナル抗体を選択することは合理的である必要がある。更に、抗体の作製、製造、及び保存は、分子特性、例えば、薬物動態、溶解性、発現、粘度、及び長期安定性などの課題を提起し続けており、それらの分子特性を予測することは困難であり、パラメータ間の相関の理解はかなり限定的なものである。更に、抗体ディスプレイプラットフォームを通して選択／同定した多様な抗体遺伝子の検討は、順位付けプロトコルにより調整する必要がある。とりわけ、固有性、クローンの更なる選択／開発に有利とならない可能性のある特定のモチーフの存在、可溶性形態または膜結合形態のいずれかのＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する親和性、及び機能、力価、収率、回収率、解析プロファイル（単独またはこれらの組み合わせのいずれか）に例示される既存のシークエンシングデータに基づいて、包括的なスコアリング関数／法を採用／開発した。クローンは、最終クローンの選択において実際に採用される動的選択機構を有する正当な開発過程において、重要なパラメータに対する複数ラウンドの確認を受け得る。

細胞表面発現用の全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子を用いたＣＨＯ細胞トランスフェクション。
細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に対して同定された新規抗体遺伝子の結合性を推定するために、全長ＣＬＥＣ２Ｄ構築物を合成した。ＣＨＯ細胞上で効率的に表面発現させるために、天然のシグナル配列を使用した。全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子配列をｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングした（図８Ａ）。それに続き、構築物をｎｅｂ－αに形質転換してから、Ｑｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐキットを使用して大量に単離した。＞９０％の生存能のＣＨＯ懸濁細胞に全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子発現プラスミドをトランスフェクションした。例示として、１０ｍｌ容量のトランスフェクション用に、１．２５×１０^６細胞／ｍｌを取り出したが、ＣＨＯ細胞は、１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントしてから、細胞を２．５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＤＮＡ構築物をトランスフェクションした。５～１０μｇのＤＮＡ及び５～１０μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２．５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～４日後、２ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの３日後、４日後、及び５日後にフローサイトメトリーを用いて、細胞の表面抗原結合を解析した。全長構築物をトランスフェクションしたＣＨＯ細胞は、他の箇所において特に言及しない限り、これ以降、Ｃ４５４８として知られる。

全長膜アンカーＣＬＥＣ２Ｄ抗原を一過的に発現するＣ４５４８細胞は、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することにより、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方により確認された。約５０，０００～１００，０００の細胞を９６ウェルＵ底プレートに入れた。１００μｌのアッセイバッファー中の１～５μｇの市販抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）（Ｃａｔ ＃ Ｈ０００２９１２１－Ｍ０１；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を、トランスフェクションしていないＣＨＯと、全長ＣＬＥＣ２Ｄ表面抗原構築物をトランスフェクションしたＣ４５４８の両方に加えてから、１～２％のＢＳＡを含むＤＰＢＳ中、室温で１時間培養した。１時間の培養後、プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。細胞を２００μｌの０．１％ＢＳＡ溶液で２回更に洗浄した。１：１００希釈の二次抗体、すなわち、抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えた。それに続き、プレートを暗黒下、室温で３０分間培養した。０．１％ＢＳＡ溶液でウェルを２回洗浄してから、フローサイトメトリーで解析した。ＣＬＥＣ２Ｄ発現ＣＨＯ細胞と非トランスフェクトＣＨＯ細胞の間の蛍光シグナルの上昇を比較することにより、モノクローナル抗体の細胞表面結合を推定した。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の表面発現は、Ｃ４５４８トランスフェクトＣＨＯ細胞上、４日目～５日目において最適であった（図８Ｂ）。

共焦点顕微鏡実験用に、ウェルあたり２５０μｌの１２μｇ／ｍｌポリＤリジンを加えてから、３７℃で一晩培養した。５００μｌのＤＰＢＳでチャンバーを２回洗浄してから、２℃～８℃で保存した。非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現ＣＨＯ細胞（Ｃ４５４８）を使用したが、細胞のカウント及び生存能のデータは、ｖｉ－ｃｅｌｌ Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ウェルあたり５０，０００の細胞を、１０％ＦＢＳを含む５００μｌの増殖培地（４ｍＭグルタミン＋１％Ｐｅｎｓｔｒｅｐを含むＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２）に播種した。実験の前に、全ての細胞を、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で２日間培養した。更に、細胞を１×ＰＢＳで洗浄してから、ＰＢＳ中の２％ホルムアルデヒド中、室温（ＲＴ）で５分間固定した。次に、細胞を１×ＰＢＳで２回すすいでから、５％ＢＳＡを用いて、ＲＴで１時間ブロッキングした。１時間後、希釈一次抗体、すなわち、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）（２μｇ）とＲＴで１時間培養してから、ＰＢＳで少なくとも３回洗浄し、次に、二次抗体である抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（２μｇ）とＲＴで１時間培養した。ＤＡＰＩを使用して細胞核を染色した（１：１０００、ＲＴで５分間）。次に、細胞を１×ＰＢＳで３回すすいで、イメージングを行うまでＰＢＳ中に浸したままにした。１．３５－ＮＡ対物レンズを備えた６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡上で免疫蛍光顕微鏡検査法を実施した。適切な波長（ＤＡＰＩ用にはλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４３０～４７０ｎｍ、Ａｌｅｘａ ４８８用にはλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ）を使用して、処理の１６時間後の細胞をイメージングした。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。顕微鏡画像で確認したところ、顕微鏡下、Ｃ４５４８細胞上のＣＬＥＣ２Ｄの表面発現が細胞表面上に分布して観察された一方で、非トランスフェクトＣＨＯ細胞は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性シグナルを何らもたらさなかった（図８Ｃ）。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを発現させるためのＣＨＯ細胞トランスフェクション
適切に折り畳まれたモノクローナル抗体を培地に分泌させるための適切なシグナル配列を含む哺乳動物遺伝子発現ベクターを使用して、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子を発現させた。抗体遺伝子発現用に、９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞にトランスフェクションした。１．２５×１０^６細胞／ｍｌのＣＨＯ細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントした。細胞を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、抗体重鎖遺伝子を発現するプラスミド及び抗体軽鎖遺伝子を発現するプラスミドを様々な化学量論（例えば、１：２、１：３、１：４、２：３、３：１、４：１など）で共トランスフェクションした。５０～１００μｇのＤＮＡ及び５０～１００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～４日後、２０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清（５０ｍＬ）を回収した。

細胞表面結合：一過性を用いた、ＣＨＯが発現するモノクローナル抗体のスクリーニング
続いて、分泌された新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを含有する５０ｍＬの回収培養上清を、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含有するｃｅｌｌｇｒａｖｉｔｙカラムを使用したプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによる精製に供した。方法はプロテインＡカラム消毒工程から開始するが、３カラム容量（ＣＶ）の０．５Ｍ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）溶液をＲＴで５分間通過させてから、８カラム容量の精製水を通過させた。それに続き、３０ｍＭリン酸ナトリウム、１２０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．０±０．２からなる３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーでプロテインＡカラムを平衡化した。５０ｍＬの培養上清を平衡化プロテインＡカラムに充填し、更にフロースルーを再充填した。この手順を２回繰り返した。３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーによる洗浄を実施してから、３ＣＶのプロテインＡ高塩バッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、１Ｍ ＮａＣｌ ｐＨ７．０±０．２）による洗浄を実施した。

更なる３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーをカラムに通過させてから、４ＣＶのプロテインＡ低ｐＨバッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６．０±０．２）による洗浄を実施した。次に、結合したモノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を溶出するために、５ＣＶのプロテインＡ溶出バッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．０±０．１）を使用した。更に、適量の１Ｍトリス溶液を加えることにより、抗体を含有するプロテインＡ溶出液をｐＨ約７．０に中和した。

中和後、Ａｍｉｃｏｎ ３０ｋＤａ分画濃縮器を使用して、プロテインＡ溶出液を濃縮してバッファーを１×ＰＢＳに交換した。濃縮器からタンパク質試料を回収してから、Ｎａｎｏｄｒｏｐ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを使用してＡ２８０で濃度を測定した。図９Ａに示すとおり、還元及び非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いてタンパク質を解析した。それに続き、これらのタンパク質試料を更なる実験用に使用した。

定量により判定したが、１００μｇよりも多い生成収量のクローンを、還元及び非還元条件下における生成物の品質を確認するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析用の最終候補リストに載せた。引き続いて、非還元条件下における約１５０ｋＤａならびに還元条件下における約５０ｋＤａ（重鎖を表す）及び約２５ｋＤａ（軽鎖を表す）の出現により説明されるＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル中の顕著なバンドを有するクローンを、更なる解析用の最終候補リストに載せた（図９Ａ）。加えて、純度についてもまた、標的タンパク質に沿って出現したバンドの数により判定したが、純度はまた、クローンを選択する／最終候補リストに載せるための基準とみなされた。非還元条件下において３超のバンドを有するタンパク質、同様に、還元条件下において重鎖または軽鎖の２以上のバンドを有するタンパク質については、考慮に入れなかった。

細胞表面結合アッセイ：フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による
全長膜アンカーＣＬＥＣ２Ｄ抗原を一過的に発現するＣＨＯ懸濁細胞を使用して、抗体試料（細胞培養上清及び／または精製タンパク質）をスクリーニングした。５０，０００～１００，０００の細胞を９６ウェルＵ底プレートに入れた。１００μｌの細胞培養上清、または１００μｌのアッセイバッファー中の０．０３～３μｇの精製抗体を、ＣＬＥＣ２Ｄ発現細胞に加えてから、１～２％ＢＳＡを含むＤＰＢＳ中、室温で１時間培養した。１時間の培養後、プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。細胞を２００μｌの０．１％ＢＳＡ溶液で２回更に洗浄した。１：１００希釈の二次抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣ）を加えた。それに続き、プレートを暗黒下、室温で３０分間培養した。０．１％ＢＳＡ溶液でウェルを２回洗浄してから、フローサイトメトリーで解析した。市販の抗ＣＬＥＣ２ＤモノクローナルＡｂ（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を陽性対照として使用し、抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を二次抗体として使用した。ＣＬＥＣ２Ｄ発現ＣＨＯ細胞と非トランスフェクトＣＨＯ細胞の間の蛍光シグナルの上昇を比較することにより、モノクローナル抗体の細胞表面結合を推定した。

同定した新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体をスクリーニングするために、確認したＣ４５４８細胞及びＰＣ３細胞を、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方によるＣＬＥＣ２Ｄ抗原のモニタリングに供した。実験の前に、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。フローサイトメトリー用の試料調製法は上記のとおりであり、一方、約１～５μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するためのものであった。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。試験試料と参照対照の両方をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した（図９Ｂ）。

非トランスフェクトＣＨＯ細胞上への試験試料上清の結合を推定し、以下の式、

を使用して、Ｃ４５４８細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

顕微鏡実験用に、ＰＣ３細胞を播種し、ウェルあたり２５０μｌの１２μｇ／ｍｌポリＤリジンを加えてから、３７℃で一晩培養した。５００μｌのＤＰＢＳでチャンバーを２回洗浄してから、２℃～８℃で保存した。０．０５％トリプシンを使用して、接着細胞株、例えば、ＰＣ３などをトリプシン処理した。細胞のカウント及び生存能のデータは、トリパンブルー染色を用いた血球計算盤で収集した。実験の前に、２００００細胞／ウェル（ウェルあたり５００μｌの増殖培地を含む）の密度で細胞を播種してから、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で２日間培養した。更に、ＰＣ３細胞を１×ＰＢＳで洗浄してから、ＰＢＳ中の２％ホルムアルデヒド中、ＲＴで５分間固定した。次に、細胞を１×ＰＢＳで２回すすいでから、５％ＢＳＡを用いて、ＲＴで１時間ブロッキングした。

１時間後、希釈試験抗体試料、すなわち、新規かつ固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（２μｇ）及び参照対照としての市販の抗体とＲＴで１時間培養してから、ＰＢＳで少なくとも３回洗浄し、次に、二次抗体であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ及び抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（それぞれ使用可能な場合）（２μｇ）とＲＴで１時間培養した。ＤＡＰＩを使用して細胞核を染色した（１：１０００、ＲＴで５分間）。次に、細胞を１×ＰＢＳで３回すすいで、イメージングを行うまでＰＢＳ中に浸したままにした。１．３５－ＮＡ対物レンズを備えた６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡上で免疫蛍光顕微鏡検査法を実施した。適切な波長（ＤＡＰＩ用にはλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４３０～４７０ｎｍ、Ａｌｅｘａ ４８８用にはλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ）を使用して、処理の１６時間後の細胞をイメージングした。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。ｍＡｂのＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合のばらつきを試験したが、結合データは、＋（低結合）から＋＋＋（高結合）の評価で提供されている（表１９及び図９Ｃ）。表面結合のばらつきが認められたが、結合データは、表２２において、＋（低結合）から＋＋＋（高結合）の評価で提供されている。例示として、ｍＡｂ Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。

上記の基準及び単離抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生物物理学的特性及び機能特性を含む対応する観察結果の全てに基づき、限定するわけではないが、９種の固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体配列、Ｃ５３９７、Ｃ５８５２、Ｃ３５６６、Ｃ２９０１、Ｃ４５７７、Ｃ２６８５、Ｃ０６９４、Ｃ０９９７、Ｃ０８００を安定細胞株の開発用に選択した。

安定細胞株の作製
臨床効果はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）製品の商業的成功を推進してきた。他の人々に知られているように、生産されるｍＡｂがヒト形態に生化学的に類似していることから、哺乳動物細胞は現時点において、大規模生産用の好ましい系である。安定細胞株の作製プロセスは、高い生産性、安定した長期発現、及び良好な製品品質を有するクローンが滅多に生じないことから、冗長であり多くの時間を要する。哺乳動物細胞を用いたｍＡｂの作製は、一過性トランスフェクションまたは安定トランスフェクションのいずれかで実施することができる。これまでのセクションから分かるように、一過性トランスフェクションにより、薬物発見の初期段階中に使用するための少量の生成物の比較的迅速な生成が可能となる。しかしながら、安定的にトランスフェクションされた細胞株は、大規模工業生産により広く使用されている。より重要なことに、製造に使用される安定細胞株は、多量の均一な生成物を得るために、単一細胞クローンに由来している。

抗生物質選択：
９０％の細胞生存能のトランスフェクション後に、抗生物質選択を開始した。細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４分間の遠心分離にかけた。ペレットを完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中に再懸濁させてから、ピューロマイシン二塩酸塩の濃度を２μｇ／１×１０＾６細胞に調節した。２日毎または３日毎に抗生物質選択を実施した。細胞のカウント及び生存能のデータについては表５を参照されたい。

安定プールの反復トランスフェクション
Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して細胞カウントを取得した（表１０を参照のこと）。細胞を継代培養してからトランスフェクションを実施した。これまでに言及したように、更に２回の連続的なトランスフェクションを実施した。３ラウンドのトランスフェクションが完了すると、そのプールをＲ３安定プールと呼んだ。表２４を参照されたい。

ミニプールへの播種
系列希釈法によりミニプールを作製した。播種の２日前に、増殖し続けている細胞株培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、０．５百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した（表２５を参照のこと）。

完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した（表２６を参照のこと）。０．５２ｍｌの細胞懸濁液を希釈Ｄから取り出して、２５ｍｌのクローニング培地に加えた。細胞を、１０細胞／ウェルの密度で、ウェルあたり２００μｌ容量の９６ウェルプレート内に播種した。これらのミニプールを、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。

ミニプールのスクリーニング及び増幅：
合計１１７のミニプールをフローサイトメトリーでスクリーニングしてから、ＣＨＯ細胞の表面に発現している抗原への結合を推定した。細胞表面結合に基づいてミニプールを順位付けしたが、フローサイトメトリー用の試料調製法は上記のとおりであり、一方、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質を発現する約２００μｌの細胞培養上清及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ａ）。フローサイトメトリースクリーニングにより同定したミニプール（認められた平均蛍光強度の倍率変化から導かれた結合度合いにより選択された）を９６ウェルプレートから２４ウェルプレートへと増幅させてから、５％ＣＯ_２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。これらのプールを２４ウェルプレートから６ウェルプレートの１つのウェルへと更に増幅させた。細胞がコンフルエントになった後、６ウェルプレートの１つのウェルから２５ｍｌの増殖培地を含むバイオリアクターチューブへとミニプールを増幅させてから、２００ｒｐｍの５％ＣＯ_２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。

単一細胞のクローニング
系列希釈法により単一細胞を作製した。クローニングの１日前に、増殖し続けているミニプール培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、１百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した（表２６を参照のこと）。細胞を、０．５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート内に播種してから、加湿した５％ＣＯ２静置インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。細胞を希釈Ｄから吸引してから、ウェルあたり０．５細胞／２００μｌのクローニング培地の密度で、９６ウェルプレート内に播種した。プレートを、７５％相対湿度の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で培養した。０日目から１０日目までのモノクローナリティレポート作製用にＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用することにより、プレートをスキャンした。０日目、１日目、２日目、３日目、６日目、８日目、及び１０日目に、個々のウェル画像を収集した。全てのウェルの０日目の画像からクローン集団を確認してから、ＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒを用いてモノクローナリティレポートを作製した。継代番号はＰ（ｘ＋０）であった。細胞がコンフルエントになった後、単一細胞クローンを２４ウェルプレートへと増幅させた。継代番号はＰ（ｘ＋１）であった。

単一細胞クローンのスクリーニング及びクローン増幅：
細胞培養上清中の抗体を推定してクローンを順位付けするために、細胞表面結合アッセイを実施した。２日後、ＣＨＯ細胞の表面に発現している抗原への高い結合性を示す単一細胞クローンを２４ウェルから６ウェルへと増幅させた。継代番号は（ｘ＋２）であった。続いて、この単一細胞クローンを６ウェルプレートの３つのウェル内で増幅させた。継代番号は（ｘ＋３）であった。クローンを２０ｍｌ容量のバイオリアクターチューブへと更に増幅させたが、継代番号は（ｘ＋４）であった。増幅後、継代番号（ｘ＋５）のクローン用に、ＲＣＢバイアルを調製した。

フローサイトメトリーにより、安定細胞培養上清の、Ｃ４５４８細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ表面タンパク質との結合を推定したが、フローサイトメトリー用の試料調製法及び実験法は上記のとおりであり、一方、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質を発現する約２００μＬの細胞培養上清及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ｂ）。

安定細胞株から発現及び精製したモノクローナル抗体クローンの選択
タンパク質精製用の培養回収液：
細胞を、約０．３×１０^６細胞／ｍｌの密度で、３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地内に播種してから、１２０ＲＰＭ回転の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件で、６日間培養した。４日目に、２０ｍｌの培地を完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地に継ぎ足した。全ての細胞懸濁液を２０００ＲＰＭ、１０分間の遠心分離にかけることにより、細胞を回収した。上清を回収してから、更なる精製用に－２０℃で保存した。これ以降、新規の固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子を含有する全ての対応する安定細胞クローンをＣ××××と呼ぶが、××××は４桁の数を表す（表１９）。それぞれのコードは、他の箇所において特に言及しない限り、特定の抗体遺伝子を含有する特定の安定細胞株を表す。

続いて、約２２１の固有かつ確認された安定細胞クローンの培養上清を、プロテインＡによる精製に供してから、純度、力価に例示されるがなおもこれらに限定されないパラメータに対する合理的な判定を実施した。加えて、サーマルシフトアッセイ（ＴＳＡ）による熱安定性推定を、選択／スクリーニングに対する追加のパラメータとして組み込んだ。

より高い融解温度をより安定したタンパク質の特性とみなした一方で、６５℃未満の融解温度を有するタンパク質については、更なる開発用には含ませないことを決定した。ＴＳＡ実験は、タンパク質試料を、１×ＰＢＳを用いて０．５ｍｇ／ｍｌ濃度に適切に希釈することにより開始したが、５×の終濃度となるように、ＳＹＰＲＯ－ＯＲＡＮＧＥ蛍光色素（５０００×）を標的タンパク質に加えた。更に、混合液を５００ＲＰＭ、２分間の遠心分離にかけてから、ＣＦＸ９６ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍを用いて解析を行った。２５℃から９５℃まで１分間あたり０．５℃の速度で温度を上昇させることによって、熱変性を実施した。０．５℃の間隔で蛍光強度を収集し、ＣＦＸ Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェアを用いて解析を行い、融解曲線からＴｍ値を計算した。

フロー及び／イメージング：
加えて、それぞれの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質はまた、フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による細胞表面結合アッセイで評価した。フローサイトメトリー試験及び共焦点顕微鏡試験を組み込むことの背後にある根本的理由は、組み合わせ順位付けマトリックスにより抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンの包括的なリストを得ることであった。

フローサイトメトリー用の試料調製法を含む実験は上記のとおりであり、一方、約１～５μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への、膜に発現しているＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ｃ）。

共焦点顕微鏡を介した画像収集のための試料調製法を含む実験は上記のとおりであり、一方、約２μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質、例えば、限定するわけではないが、Ｃ５８４８、Ｃ８４０８、Ｃ７８３２、Ｃ８８００、Ｃ５５９５、Ｃ０６９４など、及び参照陽性対照はそれぞれ、ＰＣ３細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の結合をモニターするために使用された。安定細胞クローンから精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄのイメージング試験によって観察されたとおり、Ｃ５８４８、Ｃ８４０８、Ｃ８８００、Ｃ５５９５、Ｃ７８３２に限定されない抗ＣＬＥＣ２Ｄは、ＰＣ３細胞の表面上への均一でなおも特異的なＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合を示す（図１０Ｄ）。

安定細胞クローン内における抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子の安定性を評価／理解するために、ＲＴ ＰＣＲによる定量的測定を採用したが、ＣＨＯ細胞ゲノムへと安定的に導入された抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子の増幅は、モニター及び推定され得る。ＣＨＯ細胞は、６０世代（Ｐ０１が１番目の継代に相当する一方で、Ｐ１８は最後の６０番目の世代に相当する）のそれぞれのクローンの継続的な継代培養の一部として全ての継代から得た。ここで、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）は、製造業者のプロトコル（プロテイナーゼＫ処理を伴う培養細胞用のプロトコル）に従いＤＮｅａｓｙ（登録商標）Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅキット（ＱＩＡＧＥＮ ＧｍｂＨ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、細胞ペレットから単離した。ｇＤＮＡ試料の濃度及び純度は、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）Ｄ３０（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して分光光度的に解析した。単離ｇＤＮＡを１００ｎｇ／μＬの濃度に希釈してから、ｑＰＣＲ用にＢＤ Ｕｌｔｒａ－Ｆｉｎｅ（商標）Ｎｅｅｄｌｅ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｓｙｒｉｎｇｅｓ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を通過させた。Ｃｔ値を定量するために、設計されたプライマーを使用して、９６ウェル薄壁Ｈａｒｄ－Ｓｈｅｌｌ ＰＣＲプレート及びＭｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）‘Ｂ’密封フィルム封止材（全てＢｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ製）を備えたＣＦＸ９６（商標）Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅシステム上で、ｑＰＣＲを実施した。それぞれの試料につき３回、それぞれのｑＰＣＲランを実施した。ＧＡＰＤＨを相対的対照として使用し、それぞれのｑＰＣＲランに鋳型なし対照（ＮＴＣ）を含ませた。それぞれの反応用混合液は、１２．５μＬのＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｂｙ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｗｏｏｌｓｔｏｎ Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）、１０ｐｍｏｌのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａで合成された）、及び、水、ＨＰＬＣで２５μＬの最終容量に調節した１００ｎｇの溶解ｇＤＮＡ（ＨｉＭｅｄｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ）を含有していた。ｑＰＣＲランは、９５℃、１０分間の初期変性工程に続く、４０サイクルの、９５℃、１５秒間の変性、及び６０℃、６０秒間のアニーリングの２工程プロトコルで実施した。ベースライン差分設定を用いたＢｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒ（商標）ソフトウェアアプリケーションバージョン３．１．１５１７．０８２３（ＢｉｏＲａｄ）で生データを処理して、Ｃｑ（サイクル定量）値を得た。

Ｃ５５１１、Ｃ４６０８に例示される全てのクローンに、記載した定量的アプローチを採用した。試験から得たデータを図１０Ｅに示している。図１０Ｅは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子がＣＨＯ細胞ゲノムへと安定的に導入されて少なくとも６０世代にわたり維持されたことを裏付ける、全ての継代番号にわたる対応する抗体鎖のＣｔ値における＜５％の有意ではないばらつきを示している。

組み合わせマトリックスを考慮して、安定細胞株の数を、Ｃ４６０８、Ｃ７７２０、Ｃ５０９３、Ｃ３４５２、Ｃ９１３６、Ｃ３６４１、Ｃ５３７２、Ｃ６４８１、Ｃ５５１１、Ｃ６７２６、Ｃ５３９２に例示される１１のクローンに選択した。これ以降、大規模生産面及び機能特性、例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が駆動する細胞傷害などに対する理解を、更なる開発用の最終クローンの選択に採り入れた。

クローン選択のプロセスにとって、強力、繰り返し可能であり、品質が安定したタンパク質を生産する方法を有することは不可欠であった。それゆえ、クローンのスクリーニングを開始する前に、効率的なクローンのスクリーニングを確保するためのプラットフォームプロセスを開発した。基本培地としてのＡｃｔｉＰｒｏ、及び添加基質としてのｃｅｌｌ ｂｏｏｓｔ ７ａ及びｃｅｌｌ ｂｏｏｓｔ ７ｂを使用して、流加培養プロセスを開発した。添加基質の間隔及び量を実験で最適化し、最適化したプロセスを繰り返してロバスト性を確立した。流加プロセスを更に、パフォーマンス上位のクローンを単離するためのクローンのスクリーニングに適用した。パフォーマンス上位のクローンを単離した後、最適化した流加培養プロセスを使用して、１０Ｌバイオリアクター内で細胞を培養することにより、クローンを確認した。この工程は、より大規模なものへと移行した場合の選択クローンの製造性を確保するために実施した。

様々な基本培地と比較した履歴データに基づいて、プラットフォームプロセスを開発するための基本培地としてＡｃｔｉＰｒｏ培地を選択した。ＡｃｔｉＰｒｏに４ｍＭのグルタミンを補足して、確実に、細胞の代謝条件が満たされるようにした。

よりパフォーマンスの良いものを理解、順位付け、及び選択するために、複数種のモノクローナル細胞株を評価した。生存細胞密度、生存能、力価に関して得られた結果に基づいて、Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ３４５２、Ｃ５３９２、Ｃ６４８１を、全てのパフォーマンスパラメータの観点から最もパフォーマンスの良いものであると評価した。

様々な前立腺癌細胞株：ＰＣ３上における表面抗原発現
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を発現する腫瘍細胞をトリプシン処理により回収した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。Ｃ５５１１に例示される１μｇの試験試料、対照をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを１：１００の希釈で対照として使用した。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

試験試料の結合を推定し、以下の式、

を使用して、腫瘍細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１、Ｃ２４３８、Ｃ３４５２、Ｃ０９４９抗体に例示されるがこれらに限定されないフローサイトメトリー実験により観察された、ＰＣ３表面結合のＭＦＩの倍率変化が、対照と比較した際に２倍超上昇することが判明した（図１１Ａ）。

更に、表面結合は、実施例４、セクション：細胞表面結合アッセイ（フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による）に記載のとおりに、共焦点顕微鏡を介したＰＣ３細胞の表面上への抗体の結合による、ＰＣ３の表面上における様々な固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体安定クローンによるものであった。図１１Ａに示すように、ＰＣ３の表面上における精製新規抗ＣＬＥＣ２Ｄの均一に分布したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合が、ＰＣ３細胞上の新規抗体により観察された。

細胞傷害アッセイ：フローサイトメトリー及びイメージング法（生＋エンドポイント＋）による
抗ＣＬＥＣ２Ｄの機能活性を評価するために、フローサイトメトリー法と共焦点顕微鏡法の両方を採用し、ＰＢＭＣを単離して、標的細胞及び抗ＣＬＥＣ２Ｄと培養する、細胞傷害アッセイを実施した。このアッセイの前に、ｍＡｂ濃度及び理想的なＴ：Ｅ比率に対する最適化を実施した。

従来のプロトコル（Ｊｅｗｅｔｔ Ａ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９６）に従い、健康ドナーからエフェクター細胞、ＰＢＭＣを単離した。要約すると、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Ｓｉｇｍａ）遠心分離後に末梢血リンパ球を得た。１：２希釈の血液を１５ｍＬのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ上に層状に重ねた。全ての試薬を室温に維持した。ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ及び血液を含有するチューブを、室温、加速及びブレーキなし、４００ｇ、３０分間の遠心分離にかけた。遠心分離後、単核球を含有する０．５ｃｍの不透明な境界面まで上層を慎重に吸引して、上層を廃棄した。不透明な境界面を遠心チューブへと慎重に移した。１０～１５ｍＬの１×ＰＢＳを加えて２５０ｇ、１０分間実施することにより、細胞を２回洗浄した。ペレットを２ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁させてから、ＰＢＭＣカウントを実施した。１０ｍＬの血液から合計１０百万のＰＢＭＣを得た。ＣＤ４５＋集団９９％のフローサイトメトリーに基づいて、ＰＢＭＣの品質確認を実施した。ＮＫ単離キット（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）を使用した陰性選択によりＮＫ細胞を単離した。フローサイトメトリーのＣＤ５６＋集団に基づき、ＮＫ細胞の純度が＞９０％であることが判明した。

製造業者のプロトコルに従い標的前立腺癌細胞株ＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加えた。Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、Ｃ３４５２、及びＣ４６０８に限定されない新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に約２００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

フローサイトメトリーによる二重標的細胞染色で細胞傷害を解析した。図１１Ｂは、対照と比較して認められた、３種の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体Ｃ５５１１（約４１％）、Ｃ４６０８（約３２％）、及びＣ６４８１（約３７％）の細胞傷害を示しており、細胞死率は、処理を行うことなく１：５比率で共に培養した、ドナー１から単離したＰＢＭＣ、及び標的細胞から測定した。類似した条件に従い、ドナー２についてＣ５３９２クローン及びＣ３４５２クローンを試験したが、細胞傷害はそれぞれ、約１４％及び約２８％であることが判明した（図１１Ｂ）。抗ＣＬＥＣ２Ｄ濃度が５０μｇ／ｍｌから２００μｇ／ｍｌへと上昇した際に標的細胞の８０％超の細胞傷害が認められ（図１１Ｃ）、Ｔ：Ｅ比率が１：５から１：１０へと上昇した際に腫瘍細胞殺傷の有意な上昇もまたモニターされた（図１１Ｄ）。

共焦点顕微鏡実験用に、８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。新たに単離したＰＢＭＣ細胞を培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）中に一晩置いてから、休止ＰＢＭＣ細胞として細胞傷害に使用した。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素（１００ｎＭ）で染色し、ＰＢＭＣ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０（１０μＭ）で染色した。異なる濃度の新規抗体を染色したＰＣ３細胞及びＰＢＭＣ細胞と共に６～７時間培養してから、６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡、１．３５－ＮＡ対物レンズを使用して、画像を取得した。死色素ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ（５μＭ）用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６４０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍのレーザー光線を使用した。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害アッセイ用の、新規ｍＡｂの最適な濃度を同定するために、標的：エフェクター細胞の比率（１：５）及び３つの異なる濃度（すなわち、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、及び５０μｇ／ｍｌ）の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）を使用して、完全培地中で６～７時間培養した。ＰＣ３細胞上における緑色蛍光の消失及び紫色蛍光の出現により、細胞死をモニターした。最大細胞傷害は５０μｇ／ｍｌで認められた（図１１Ｅ）。更に、試験したその他の抗体クローン、限定するわけではないがＣ６７２６、Ｃ４６０８、Ｃ５８４８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１クローンについて、同一の培養タイミングで５０μｇ／ｍｌの濃度を使用してエンドポイント細胞死アッセイを続けたが（図１１Ｆ）、新規抗体の存在下において標的細胞の死滅が認められた一方で標的細胞を新規抗体で処理しない場合には細胞死はモニターされなかったことが示された。

上記の利用可能なデータに基づいて、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、及びＣ３４５２クローンを最終ｉｎ ｖｉｖｏマウス効果実験用に選択した。

治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の開発中において、臨床で成功する見込みの最も高い候補抗体を早期に同定するための戦略は、不十分な曝露、毒性、または効果の欠如と関連する費用がかかる後期の失敗を回避するために求められている。ｍＡｂの早期のスクリーニング及び最適化では、リード構築物を選択するための特性、例えば、親和性、力価、及び安定性などに焦点をあてるが、その一方で、開発後期に特性決定される、少数のリードｍＡｂ構築物に関するｉｎ ｖｉｖｏ効果の確認は一般的に必要とされる。ここで、確認した抗ＣＬＥＣ２ＤクローンＣ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、及びＣ３４５２を、前立腺癌異種移植片に対するｉｎ ｖｉｖｏ効果の評価に供した。

実施例６：新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の作用機序を解読する
阻害経路及び刺激経路からなる免疫チェックポイントは、自己寛容を維持し、免疫応答を補助する。がんにおいて、免疫チェックポイント経路は多くの場合、初期の抗腫瘍免疫応答を阻害するために活性化されている。免疫チェックポイント療法薬は、これらの経路を遮断または刺激することにより作用し、腫瘍に対する体の免疫学的活性を向上させる。正常な状況下では、免疫チェックポイントは、感染及び悪性腫瘍に対して免疫系を応答させつつ、この作用に由来し得る任意の害から組織を保護する。しかしながら、悪性細胞による、これら免疫チェックポイントタンパク質のうちの一部の発現は、抗腫瘍免疫を調節不全にし、がん細胞の成長及び増殖を促進させる。複数のアプローチを介して、免疫療法薬の作用機序、とりわけ、モノクローナル抗体ベースの療法薬による作用機序を理解することは、単独または組み合わせにかかわらず、腫瘍細胞殺傷に好都合となるように作用する特定の方法を更に再活性化させ得る。

本開示では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験により理解することができる抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のメカニズムは一般的に、分子相互作用レベル、例えば、ＣＬＥＣ２Ｄ標的依存、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１間相互作用など、細胞ネットワークレベル、例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無における、腫瘍細胞の殺傷における様々なエフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞の関与など、で生じる現象、または、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアイソタイプによって駆動される特定のメカニズム、例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはこれらの組み合わせなど、サイトカイン／ケモカインレベルもしくは様々な活性化／阻害受容体の発現またはこれらの組み合わせの上昇により誘導される腫瘍細胞の死滅、及びｉｎ ｖｉｖｏ実験によるもの、で構成され、腫瘍退縮はリンパ球浸潤により生じた。

更に、抗体の機能及び標的分子がより多様であることから、標的分子がどのように生物学的に作用するか、及び何が抗体により誘導された改変作用に対する生物学的反応であるのかを理解することは、ますます必要になってきている。これに言及すると、作用機序に対する理解は、前立腺癌治療、とりわけ、去勢抵抗性前立腺癌に非常に重きを置いており、新規免疫療法戦略による、あらゆる範囲の複数の疾患適応症に対する道筋をつけるものである。これに言及すると、合理的なアプローチ／階層化を徹底的に採用することにより、より適切に理解された免疫学をがん療法に着実に導入することが確保されるようになり、全体的な治療情勢の発展に劇的に影響を及ぼすことになる。

フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡を用いて、細胞傷害に関与する特定の細胞型を調査したが、顕微鏡ベースのアプローチには、エンドポイントアッセイ法と生細胞イメージング法の両方があった。

ＮＫ細胞介在性細胞傷害
製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＮＫ細胞を１：１のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。予め標識した標的腫瘍細胞株及び抗ＣＬＥＣ２Ｄと１４時間共培養した新たに単離したＮＫ細胞を使用することにより、ＮＫ細胞介在性細胞傷害（ＮＫＣＣ）を測定した。アッセイ試料を死細胞色素ｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎと培養してから、フローサイトメトリーで蛍光を測定した。推定したとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、細胞傷害アッセイにおいて８０％超の細胞死を示した（図１２Ａ）。

固定細胞イメージングと生細胞イメージングの両方を用いてＮＫ細胞介在性細胞傷害の影響を理解するために、更に、共焦点顕微鏡ベースのアプローチを採用した。

８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。ＮＫ細胞を上記のとおりに単離した。新たに単離したＮＫ細胞を１０％ＲＰＭＩ培地中に一晩置いてから、休止ＮＫ細胞として細胞傷害に使用した。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素で染色し、ＮＫ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０で染色した。異なる比率のＮＫ細胞：標的細胞（１：０．５、１：５、１：１０）を、Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１に限定されない５０μｇ／ｍｌの新規抗体と共に使用して、６～７時間培養してから、６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡、１．３５－ＮＡ対物レンズを使用して、画像を取得した。死色素ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６４０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍのレーザー光線を使用した。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害に対するＮＫ細胞の役割を調査するために、本発明者らは、固定濃度の新規抗体と共に、ＰＣ３を異なる比率のＮＫ細胞と６～７時間培養した。本発明者らは、試験した全ての抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）について、Ｅ：Ｔの比率が上昇するにつれて細胞死が増加することを観察したが、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄに示すとおり、１：１０のＴ：Ｅ比率が最も多い細胞死を示した。

Ｔ細胞介在性細胞傷害
製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。新たに単離したＴ細胞を、１：３のＴ：Ｅ及び１００ｕｇ／ｍｌの抗体濃度の細胞傷害アッセイに使用した。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００ｕｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１３は、ＰＣ３細胞に対して観察されたＴ細胞介在性殺傷を示しているが、クローンＣ５５１１及びＣ６４８１は１００μｇ／ｍｌの濃度で培養され、６％死細胞の基底レベルを示す対照と比較した際に、腫瘍細胞の細胞傷害を誘導した。１：３のＴ：Ｅを使用する実験条件では、最大５５％のＴ細胞介在性細胞傷害が認められた（図１３）。

細胞傷害のプロセスを更に定義するために、ＰＢＭＣとＮＫ細胞の両方のエフェクター細胞による標的細胞殺傷を追跡するための生細胞顕微鏡実験を実施した。生細胞イメージング実験用に、８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素で染色し、ＰＢＭＣ／ＮＫ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０で染色した。２００μｇ／ｍｌの新規抗体を、染色したＰＣ３細胞及びＰＢＭＣ／ＮＫ細胞に加えた。ＰＢＭＣとＮＫ細胞の両方における標的：エフェクターの比率はそれぞれ、１：５及び１：１であった。細胞は、イメージング中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内に保管した。６３×倍率、１．４－ＮＡ対物レンズのＺｅｉｓｓ ＬＳＭ８００共焦点顕微鏡上で生細胞イメージングを実施し、適切な波長（ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６３０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍ）を使用することにより、８分間の間隔で最長２０時間にわたり画像を取得した。Ｚｅｎ ｌｉｔｅ Ｉｍａｇｉｎｇソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害のプロセスを更に定義するために、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞のいずれかのエフェクター細胞による標的細胞殺傷を追跡するための生細胞顕微鏡検査法を実施した。

生細胞イメージングの目的は、制御された実験条件下において時間依存的な方法で、エフェクター細胞、例えば、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞などの存在下における抗ＣＬＥＣ２Ｄ介在性腫瘍細胞殺傷プロセスを理解及び追跡することであった。生細胞イメージングから得た結果は、アイソタイプ対照の存在下において、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞がＰＣ３標的細胞とほとんど直接接触しないことによりわずかなパーセンテージの標的細胞死がもたらされるという事実を暗示した。これに対して、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞及び標的細胞に抗ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｃ５５１１）抗体を加えると、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞の両方とＰＣ３標的細胞の間の直接接触の度合いが上昇することになり、有意な標的細胞死がもたらされる。興味深いことに、ＮＫ細胞の存在下において抗ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｃ５５１１）抗体が介在するＰＣ３標的細胞殺傷は、より効率的な腫瘍細胞の排除を誘導し、腫瘍細胞の溶解の大部分は培養の１０時間以内に生じたが、その一方で、ＰＢＭＣの存在下において認められた腫瘍細胞死は、上記の時点内において有意により少ないことが判明した。このことは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を介したＰＣ３腫瘍細胞の効果的な排除が主にＮＫ細胞介在性であることを示している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＣＬＥＣ２Ｄ抗原の間の分子相互作用：エピトープマッピングによる
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ試験
ＣＬＥＣ２Ｄ－抗体複合体によって形成された結合部位を同定するために、以下のプロトコルを開発した。要約すると、方法は、抗体とＣＬＥＣ２Ｄの両方のタンパク質構造体を形状相補性ベースのドッキングに使用してＣＬＥＣ２Ｄ－抗体構造体を作製してから、その構造体を解析して、結合部位を確認するための変異を最終候補リストに載せることを含む。（Ｇｅｒｍａｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｒｏｚｂｅｓｋｙ ｅｔ ａｌ，２０１５）。

このプロトコルの主要な仮定のうちの１つは、潜在的な結合部位（すなわち、適切な結合パートナーが嵌合可能となり得る溝またはチャネル）が結合パートナーをより収容するはずであるということであり、特定の鍵穴（すなわち結合部位）が特定の鍵（すなわち結合パートナー）をそれらの構造適合性に基づいて受容し得る、酵素と基質の鍵と鍵穴モデルにより幾分説明される。このコンセプトを発展させて、形状ベースのドッキングに従い結合部位を同定したが、作製した構造体の最高密度は、推定される結合部位であるとみなされた。

次に、相互作用残基ペアに基づいて構造体を共にクラスター化させたが、クラスターに編入できなかった構造体については、残りの構造体がエネルギーの最小化を実施されて実行可能性でスクリーニングされた後に廃棄した。実行可能であることが判明した構造体について、それらの相互作用残基ペアをより詳細に精査すると、結合を試験するための変異が示唆された。

キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＮＫＲ－Ｐ１）は、ＮＫ細胞介在性細胞傷害を調節する阻害受容体である。Ｃ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）はＮＫＲ－Ｐ１のリガンドであり、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１相互作用はＮＫ細胞介在性細胞傷害を阻害し、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１複合体を遮断することにより、初代ＮＫ細胞の活性を増強させることができる。

新規ライブラリに由来する全ての固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄと結合することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１結合を防止することが判明したが、この阻害の正確な位置及び性質は未知であった。以下のプロトコルは、モデリング、ドッキング、及び部位特異的変異誘発を使用することによって、結合部位の見込みを判定すると考えられた。

方法は、ＣＬＥＣ２Ｄ上の重要な相互作用残基を同定することから開始するが、ＣＬＥＣ２Ｄ－抗体複合体の相互作用は、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）複合体を接近して観察することによって理解することができ、５ＭＧＴとしてＰＤＢに寄託された複合体の結晶構造（図１５Ａ）を調査することによって実施した。

５ＭＧＴ結晶構造は、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１複合体間の結合を示している。結合に関与する残基は目的の残基である。抗体－ＣＬＥＣ２Ｄ複合体の阻害様式が立体構造種のものである場合、両方の相互作用に関与する残基及びそれら残基に直に隣接している残基は重複している可能性があり得る。ＣＬＥＣ２Ｄ鎖に含まれる残基（以後、抗原相互作用残基と呼ぶ）は、キメラの５ＭＧＴ構造体（図１５Ｂ）（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２００４）を調査することによって同定された。ＣＬＥＣ２Ｄ鎖とＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）鎖の間の接触距離（最長６Å）内における実質的に全ての残基を同定した（表２８を参照のこと）。

これらの抗原相互作用残基は、ＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）－ＣＬＥＣ２Ｄ複合体において非常に重要な役割を果たすことが知られており、それにより、以下の構造体解析における「重要な」残基とみなされ得た。

抗体構造物の構築
ホモロジーモデリングプログラムＭＯＤＥＬＬＥＲを使用することによって、１４種の抗体のモデルを作製した。作製したモデルは、主な目的のエリアであることから抗体の可変領域に限定されていた。抗体の完全可変領域の構造についてＰＤＢを解析した。固有の抗体可変領域配列のそれぞれを利用可能な構造体の配列にアラインして、それぞれの抗体配列に最もマッチするものを、そこから抗体モデルを構築する鋳型として使用した。それぞれの配列について複数種のモデルを作製してから、最もエネルギー効率のよい構造を抗体用の主なモデルとして選択した（図１５Ｃ）。

抗体は、その超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）ループの外側及び抗体の２つの分子鎖上の６つのＣＤＲ（重鎖及び軽鎖のそれぞれにある３つ）において極めて十分に保存されており、重鎖上のＣＤＲ３ループは、最も大きくかつ相互作用の確立に最も影響を及ぼすものであることが知られており、この領域に加えて軽鎖ＣＤＲ３に、数ラウンドのＭＯＤＥＬＬＥＲ’ｓ Ｌｏｏｐ Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔを実施して、ＣＤＲループの点において最もエネルギー効率のよい構造を作製した。もう１度、主なモデルの複数種のバリアントを作製してから、最もエネルギー効率のよい１点を精製抗体モデルとして前に進めた。

ＣＬＥＣ２Ｄ上への抗体のドッキング
ＰＤＢからＣＬＥＣ２Ｄモデル（４ＱＫＩとして寄託されている、ＣＬＥＣ２Ｄ鎖の二量体）を取得した。相互作用の正確な位置は知られていないが、分子ドッキングを使用して、可能性のある相互作用様式を調査するための複合体の構造体を作製した。使用したプログラムは、構造的可能性に基づいて全ての可能性のある相互作用様式を入れ替える形状相補性ドッキングプログラムであるＰａｔｃｈＤｏｃｋであった。（Ｓｃｈｎｅｉｄｍａｎ－Ｄｕｈｏｖｎｙ ｅｔ ａｌ，２００５）。

ＰａｔｃｈＤｏｃｋ’ｓ Ｈｉｇｈ Ａｃｃｕｒａｃｙ Ｍｏｄｅを４Åのクラスター距離（存在する構造体のうちの４Å内の構造体が作製されるのを防止する）で使用して、精製抗体可変領域構造体と抗原ＣＬＥＣ２Ｄ（ＰＤＢ：４ＱＫＩ）の間のドッキングを実施した。抗原構造のみに制約を課して、軽鎖及び重鎖に由来する両方のＣＤＲ３ループを特定した。

ＰａｔｃｈＤｏｃｋを用いて、提供した抗体のそれぞれに対する数種類のドッキング構造体を作製した。（表２９を参照のこと）。

構造体の解析
ドッキングした構造体を作製した後、その相互作用残基を解析した。

自社スクリプトを使用して複合体構造を検索し、互いに４Åの最長距離にある、異なる分子鎖に由来する関与物質を含む全ての残基ペアを同定した。これらの残基ペアをリストにまとめたが、表３０及び表３１は、このようなリストに由来するこのような少しの系統を示しており、その後、構造体をクラスター化するために使用した。

構造体のクラスター化及び実行可能性の評価
重複する接点に基づいて構造体をクラスター化したが、残基ペアの少なくとも７５％が共通している場合に、構造体を共にクラスター化した。クラスターに編入されなかった構造体を廃棄した。

残りの構造体について、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｚ Ｓｃｏｒｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＰＩＺＳＡ）ツールを使用して非結合構造体を取り除く次のフィルタリング工程の前に、全ての複合体に対するエネルギーの最小化を実施した。ＰＩＺＳＡを用いて、タンパク質複合体を取り込み、残基の原子に適用した距離閾値に基づいて全ての可能性のある残基相互作用を同定した。それを同定した後、全ての接触ペアを評価して、構成要素結合をスコア付けし、同定された結合が安定した結合をもたらし得るかどうか、複合体が実行可能であるかまたはそうでないかを確認するために最終的に使用する累積スコアを蓄積させた。（Ｒｏｙ ｅｔ ａｌ，２０１９）（この実行可能性は、同定した接触ペアの組成及び組み合わせに基づいている）。実行可能であると同定された構造体は、残った唯一の構造体であった。（表３２を参照のこと）。

これらの減少したクラスターは、いくつかの厳重にグループ分けされた構造体で構成され、その全ては、ＣＬＥＣ２Ｄ鎖との重複結合を形成していた。

これらのクラスター形成は、可能性のある結合部位位置とみなされ、それぞれの部位の確認の実施が必要であった（図１５Ｄ、図１５Ｅ、図１５Ｆ、及び図１５Ｇ）。

変異の解析
調査するための少数の実行可能な構造体を最終候補リストに載せた後、変異解析を実施した。ＰＩＺＳＡはまた、同定した接触ペアを選んでそれぞれの関与残基を別の１９の天然アミノ酸に置換する特徴を有しており、その置換における構造体の総合的なスコアに対する影響を確認した。影響値は、特定の残基が別の残基に置換された場合に複合体が経験し得る安定性低下の指標であり得る。強い結合を形成する、複合体にとって重要な残基は、それらの位置を変異させることが複合体を弱体化または不安定化させ得ることから、高影響値を有し得る。この情報を利用して、どの残基ペア変異が複合体全体を最も不安定化させ得るかを判定した。構造体が既にクラスター化されていることから、全てのメンバーのクラスターにおいて一般的な、変異に対する約３～４の高影響残基ペアを同定することにより、全てのクラスターを評価することができた。ここで、以下のパラメータ、例えば、同一抗体における同一クラスター内の相互作用において特定の残基が観察される総回数を示す同一クラスターカウント、同一抗体における同一クラスター内の相互作用において特定の残基が観察される比例回数を示す同一クラスター比例、同一クラスター内で複数回確認され得る同一抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される総回数を意味する同一抗体、別のクラスター発生カウント、同一クラスター内で複数例捕捉されるが１回だけカウントされる同一抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される構造体の総数を示す同一抗体、別のクラスターカウント、別の抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される総回数を示す別の抗体、別のクラスター発生カウント、別の抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される構造体の総数（同一クラスター内における複数例は１回だけカウントされる）を示す別の抗体、別のクラスターカウント、などに基づいて、重要な検討を行った。まとめると、このアプローチはその結果として、対応する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画をもたらした。類似した方法を全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に然るべく同様に採用した。

どのクラスターが真の結合部位を示しているかを確認するために、一連の変異が重要な残基であると示唆され得た。多い数のクラスターに起因して、複数のクラスターを同時に試験可能な変異を同定することは有利であった。この同定を達成するために、全ての単一抗体のクラスターについて同定した全ての残基を解析した。アイデアは、複数のクラスターを組み合わせにし得、それらクラスターの潜在的な結合様式の全てに重大な役割を果たす残基を、多くの構造体を同時に試験するための変異と示唆することであった。重複している有意に関与する残基（それぞれのクラスターの上位３つの比率で発生している残基）を調査することにより、これらの組み合わせを同定した。クラスターが複数の有意に関与する残基を共有している場合、それらクラスターを可能性のある組み合わせとみなした。本明細書で例示しているとおり、Ｃ４６０８及びＣ５５１１において変異が示唆された。これらの抗体はそれぞれ、２１のクラスター及び７のクラスターを有しており、これらのクラスターをクラスター化するために、全てのこれらのクラスターに由来する代表的な残基を解析した。有意に発生している残基の代表的な重複の調査により、Ｃ４６０８におけるＧ００００１－Ｇ００００４－Ｇ００００７－Ｇ０００１０－Ｇ０００１５、Ｇ０００１２－Ｇ０００１４－Ｇ０００１６－Ｇ０００１７－Ｇ０００１８－Ｇ０００２１－Ｇ０００２６、Ｇ００００５－Ｇ００００８－Ｇ０００２０－Ｇ０００２２－Ｇ０００３１、及びＧ０００１１－Ｇ０００１２－Ｇ０００１４－Ｇ０００１８の可能性のある組み合わせ、及びＣ５５１１におけるＧ００００１－Ｇ００００５－Ｇ０００１１－Ｇ０００１９－Ｇ０００２０のＧ０００１５及びＧ０００１７それら自体との可能性のある組み合わせが示唆された。全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に上記の戦略を採用した。

どの残基がクラスターの組み合わせに役割を果たしているかを確認するために、２～１３のクラスター（利用可能な最初のクラスターの総数によって決まる）で変化する長さの全ての可能性のある組み合わせを作製した。全ての組み合わせについて、全ての関与する残基に加えてそれら残基の影響値を同定した。組み合わせのメンバーの全てまたは大部分（最大で２つのメンバーを欠く）に含まれる残基が維持された一方で、組み合わせ内におけるクラスターの一部においてのみ役割を果たす残基は検討から除外され、多く発生している残基のリストのみが残された。

残基の重複に基づいて好ましい組み合わせが同定されると、その組み合わせにおいて多く発生している残基を精査し、高影響値を有することが観察された残基を変異選択肢として前に進めた（図１６Ｅ及び図１６Ｇ）。

全てのそれらの検討後に実施された選択は、以下の特性、（ａ）荷電残基または極性残基であること（とはいえ、このような残基が観察されなかった場合、相互作用に対する残基の影響に基づいて別の残基が選択された）、（ｂ）組み合わせのクラスターの全てまたは大部分に含まれていること、（ｃ）潜在的な結合様式に対して有意性を有していること、及び（ｄ）抗原相互作用残基を含んでいること、の全てを有し得た。

Ｃ４６０８によって例示されているとおり、上記の戦略を採用したが、以下の組み合わせの残基は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との相互作用に関与していると考えられている。類似した方法を全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に然るべく同様に採用した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄバリアントとしての構築物の作製
アミノ酸（組み合わせまたは単独）を、ＣＤ１６１相互作用点と重複するまたは重複しないのいずれかとした後、新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン用のエピトープをマッピングするためのＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントとして作製した。部位特異的変異誘発または遺伝子合成のいずれかにより、構築物を作製した。全ての構築物は、スクリーニングに使用する可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と同様に、更なる精製を容易とするためのＣ末端ヒスチジンタグを有していた。観察されたｉｎ ｓｉｌｉｃｏ変異影響がアミノ酸アラニンにおいて最大となると考えられたことから、全ての可能性のある位置をアミノ酸アラニンに変化させた。表３５は、変異を導入したＣＬＥＣ２Ｄ可溶性抗原内の位置について記載している。

本明細書で例示しているとおり、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいて合成された、未修飾ヌクレオチド配列に隣接した所望の変異を含有する２つの相補的オリゴヌクレオチドを合成することを用いたＰＣＲにより、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキットを使用して、部位特異的変異誘発を実施した。０．２ μＭのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｉｎｄｉａ）、１．５μＬのＱｕｉｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ、１μＬのＱｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ ＸＬ ｄＮＴＰ ｍｉｘ、２．５μＬの１０× ｑｕｉｃｋ ｃｈａｎｇｅ ｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒからなる容量を入れたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（商標）Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ（商標）ｐｒｏ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ上で、ＰＣＲを実施した。１５ｎｇの鋳型ＤＮＡもまた含有していた。９５℃、２分間の初期変性に続いて、１８サイクルの、９５℃、２０秒間の変性、６０℃、６０秒間のアニーリング、６８℃、３分間のプライマー伸長、６８℃、５分間の最終伸長を実施した。ＰＣＲ後、メチル化及びヘミメチル化ＤＮＡに特異的であり、親ＤＮＡ鋳型を消化するため、及び変異含有合成ＤＮＡを選択するために使用される、２μＬのＤｐｎ Ｉエンドヌクレアーゼを加えた（ほぼ全てのＥ．ｃｏｌｉ株から単離したＤＮＡはｄａｍメチル化されることにより、Ｄｐｎ Ｉ消化を受けやすくなる）。次に、所望の変異を含有するニックベクターＤＮＡをＸＬ１０－Ｇｏｌｄウルトラコンピテントセルに形質転換してから、アンピシリン含有ＬＢ寒天プレート上に播種した。ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて形質転換コロニーに由来するプラスミドＤＮＡを精製してから、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいてシークエンスを行った。

ベクター、及び特定の変異を有するＳＤＭ構築物を、ＨｉｎｄＩＩＩ酵素及びＸｈｏＩ酵素による制限エンドヌクレアーゼ活性に供してから、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用して生成物を抽出し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（ＮＥＢ）を使用してライゲートし、混合物の５０％をＮＥＢ５αコンピテント細胞Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換した。それに続き、制限消化によるクローンスクリーニングを実施し、最後に、シークエンシング反応によるクローンスクリーニングを実施した。シークエンシングプロセスにより、クローンが所望の変異を含有していることを確認した。

ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性遮断。
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体結合部位が、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原上に確立された固有の接点と排他的な接点の両方を有する接点、及びＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１複合体間に確立された接点と重複する結合部位からなるという事実を暗示したエピトープマッピング試験により得られた観察結果を更に厳密に調査した。本明細書で例示しているとおり、限定するわけではないが、Ｃ４６０８用のＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画（図１６Ａ及び図１６Ｂ）及びＣ５５１１用のＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）を示しているが、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用するＣ４６０８抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＣ５５１１抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の両方用の結合部位は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原とＣＤ１６１の間の接点と有意に重複している。本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質とＣＤ１６１タンパク質の間の相互作用に対する同定抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の影響を調査するものである。上記のＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用により腫瘍細胞が免疫系を回避することから、相互作用を阻害するＣＬＥＣ２Ｄ結合物質、すなわち、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の実験的確認を以下で更に証明した。実験の詳細では、ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の確認から開始して、その後、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによりＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用を抑止する。

本明細書で例示しているとおり、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を磁性ビーズ上にコンジュゲートしたが、１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水を０．５ｍｇのダイナビーズに加えて、３０秒間ボルテックスしてから、回転させながらＲＴで１０分間培養した。培養後、Ｄｙｎａｍａｇ ２を使用して１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水でビーズを２回洗浄してから、洗浄したビーズを１００μｌの０．１Ｍ ＰＢＳ中に再懸濁させた。抗原を磁性ビーズ上にコンジュゲートさせるために、１００μｌの３Ｍ硫酸アンモニウムの存在下、１００μｌの洗浄ビーズ、及び１μｇのＣＬＥＣ２Ｄ抗原を含有する１００μｌのＰＢＳを完全に混合してから、３７℃で一晩培養した。一晩培養した混合液をＰＢＳで２回洗浄し、０．５％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳで２時間ブロッキングしてから、Ｄｙｎａｍａｇ ２を用いて磁性ビーズを分離させた。

最後に、コンジュゲート抗原ビーズを１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。抗原の同一性を確認するために、１μｌの上記コンジュゲート抗原ビーズを９９μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させて、０．１Ｍ ＰＢＳで１回洗浄してから、再度、１００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓから市販されている０．５μｇの抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を１００μｌの洗浄コンジュゲート抗原ビーズに加えてから、常時タッピングしつつ、氷上で２時間培養した。培養後、コンジュゲート抗原ビーズを、０．２５％ＢＳＡを含有する１００μｌの１×ＰＢＳで２回洗浄してから、１００μｌの５μｇ／ｍｌ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）をコンジュゲート抗原ビーズに加え、更に、氷上で３０分間培養した。培養後、コンジュゲート抗原ビーズを、０．２５％ ＢＳＡを含有する１００μｌの１×ＰＢＳで２回洗浄してから、２００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｅに示すように、フローサイトメトリー解析により判定したところ、ビーズのコンジュゲート効率は＞９５％であることが判明した。

ＣＤ１６１－ＦｃのＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合を確認するために、２μｌの上記コンジュゲートＣＬＥＣ２Ｄ抗原ビーズを取り出して、異なる濃度のＣＤ１６１－ＦＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入）を加えてから、ビーズが沈殿するのを避けるために常時タッピングしつつ、氷上で２時間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含む１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄した。１００μｌの５μｇ／ｍｌのａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒヤギ抗ヒトＩｇＧを加えてから、回転させながら氷上で２０分間培養した。１％ＢＳＡを含む１００μｌのＰＢＳでビーズを１回洗浄してから、１００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｆから参照可能なように、磁性ビーズ上にコンジュゲートしたＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、ＣＤ１６１タンパク質と用量依存的に相互作用している。

０．５μｇのビオチン化ＣＤ１６１－ＦＣを２μｌのＣＬＥＣ２Ｄコンジュゲートビーズに加えてから、氷上で２時間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄してから、２００ｎｇのストレプトアビジン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）６３３コンジュゲートを加えて、更に、氷上で２０分間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄してから、２μｇのＣ５５１１抗体を加えて、氷上で２時間置いた。２時間の培養後、５μｇ／ｍｌのａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒヤギ抗ヒトＩｇＧを加えてから、更に、回転させながら氷上で２０分間保管した。最後に、ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｇから参照されるように、シグナルの低下（最適な濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体におけるＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用）は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１接触部位と競合することができ、相互作用を阻害することを示している。

免疫細胞の活性化：抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合による
ＮＫ細胞活性化の一般的な見解は、活性化受容体からのシグナルと阻害受容体からのシグナルの間のバランスにより健常細胞と高感度な標的細胞を識別するその能力である。ＮＫ細胞が標的細胞を殺傷する能力を測定するために、主な正及び負のシグナル伝達イベントの正味の結果を調査した。しかしながら、阻害シグナルが活性化経路を抑止する正確な分子チェックポイントは明確ではない。

しかしながら、ＮＫ細胞活性化への個々の受容体の寄与を描写する試みにおいて、ＣＤ６９表面受容体は、活性化直後にＮＫ細胞によって速やかに誘導される初期活性化免疫細胞マーカーであるとみなされた。ＣＤ６９プロモーターは、ＮＦ－κＢ用の結合部位、赤芽球形質転換特異的関連遺伝子－１（ＥＲＧ－１）、及びＡＰ－１を含有している。その発現は、ほとんどの白血球によって活性化される際に上方制御され、活性化リンパ球及びＮＫ細胞のマーカーとして使用される。加えて、ＣＤ６９はまた、免疫応答の重要な調節因子である。ＣＤ６９は、Ｓｙｋ－Ｓｒｃ依存的な様式によるＮＫ細胞活性化に関与している。それに対しＴ細胞では、ＣＤ６９は、ＣＤ６９がＴＨ１／ＴＨ１７応答を負に調節するＴＣＲ／ＣＤ３結合後に誘導され、またＴＧＦ－Ｂシグナル伝達により、ｉｎ ｖｉｖｏにおける炎症を制御する。しかしながら、ＮＫ細胞では、ＣＤ６９のクロスリンクが、細胞傷害活性及び活性化ＮＫ細胞のサイトカイン産生を誘導することが判明している。それゆえ、ＣＤ６９は、活性化ＮＫ細胞における標的細胞用の推定上の受容体として表され得る。上記のプロトコルを使用して、この試験で使用するエフェクター細胞、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞（使用可能な場合）を単離した。

ＮＫ細胞の状態に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の影響を理解するために、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無における、ＮＫ細胞上におけるＣＤ６９マーカー発現のレベルをモニターした。それぞれの反応用に、０．１×１０^６の単離ＮＫ細胞を取り出した。ＩＬ－２を陽性対照として使用した。２００ＵのＩＬ－２（Ａｃｒｏ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ １００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬをそれぞれのウェルに加えてから、一晩培養した。ＰＣ３初回刺激によるＣＤ６９発現における変化を理解するために、ＰＣ３細胞を１：１（Ｔ：Ｅ）の比率で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を含有するまたは含有しないＮＫ細胞に加えた。何ら処理を行っていないＮＫ細胞または標的を対照として保管した。培養の１２～１６時間後、０．１×１０^６細胞に対する０．５ｕＬの対応する抗体を使用して、抗ヒトＣＤ３－ＦＩＴＣ及び抗ヒトＣＤ６９－ＡＰＣ７５０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に限定されないＣＤマーカーによる染色を実施した。１×ＰＢＳ ０．２％ＢＳＡで細胞を１回洗浄してから、ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して測定値を記録した。デフォルトのゲイン設定を使用してデータを取得し、試料あたり５０００～１００００のイベントを記録した。

結果は、処理を行っていないＮＫ対照と比較した際のＣ５５１１抗体（１００μｇ／ｍＬ及び／または２００μｇ／ｍＬ）の存在下のＮＫ細胞において観察されたＣＤ６９発現の４０～５０％の上方制御を示したが、ベースライン発現は１～２％と記録された（図１７Ａ）。ＩＬ－２を陽性対照として使用すると、３０～４０％の上方制御が示された（図１７Ａ）。腫瘍（ＰＣ３）の場合、初回刺激ＮＫ細胞がＣＤ６９の高発現（ほぼ７０～７５％の発現）を示した一方で、ＣＤ６９発現は、ＰＣ３細胞と抗体（１００μｇ／ｍＬ）の両方の存在下、約８５％に上方制御された（図１７Ｂ）。

サイトカイン／ケモカインの分泌／細胞内発現
ＮＫ細胞が腫瘍細胞／感染細胞を認識すると、細胞傷害及びサイトカイン分泌が誘導される。サイトカイン産生を調節するシグナル伝達経路及びそのプロセスにおける標的細胞認識へのＮＫ細胞活性化受容体の寄与については十分には理解されていない。加えて、標的細胞における特定のリガンドの結合に対するサイトカイン分泌の条件／要件については知られていない。それゆえ、ＮＫ細胞が標的細胞を認識した際の免疫応答の初期誘導を理解するためには、サイトカイン及びケモカインのプロファイル／スクリーニングが重要である。ここで、新規抗体Ｃ５５１１の存在下でサイトカイン分泌を検出するための試験を設計した。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αは、ＮＫ細胞によって産生される最も有名なサイトカインのうちの２つであり、細胞傷害と様々な免疫細胞の増殖の両方に関連している。それゆえ、この試験では、フローベースアッセイにおける確立された細胞内ＩＦＮ－γ染色技術を用いた、ＰＢＭＣまたは単離ＮＫ細胞におけるＩＦＮ－γ分泌を検出するための実験を実施した。

細胞刺激及びＩＦＮ－γ染色プロトコル：
ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞を３７℃で一晩置いた後、活性化試薬及び分泌阻害剤（ブレフェルディンＡ（１０μｇ／ｍＬ）／モネンシン（６μｇ／ｍＬ））をウェルに加えた。ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞は、未処理のままとした、または、１００μｇ／ｍＬの新規抗体Ｃ５５１１で処理した。抗ヒトＯＫＴ－３がＩＦＮ－γ分泌を誘導することが知られているため、細胞を陽性対照として抗ヒトＯＫＴ－３（１～２μｇ／ｍＬ）で刺激した。必要な場合は常に、１０：１のエフェクター：標的の比率で標的細胞を使用した。培地のみは陰性対照の役割を果たした。細胞を、ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４時間培養した。

培養後、２ｍＭの終濃度となるようにＥＤＴＡを加えてから、室温で１５分間培養した。細胞を、ＰＢＳを用いて、１６００ｒｐｍ、室温で８分間洗浄した。１６００ｒｐｍ、室温で８分間のＰＢＳ洗浄を繰り返してから、５００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。それぞれの試料（最終２０μｌ）用に抗ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）カクテルを加えた。コンペンセーション対照用に、適量の単一抗体でコンペンセーションを実施した。細胞を暗黒下、室温で３０分間培養した。２ｍｌのＦＡＣＳバッファーをそれぞれのウェルチューブに加えた。細胞を、ＦＡＣＳバッファーを用いて、１６００ｒｐｍ、室温で８分間２回洗浄した。次に、２５０μｌ／チューブのＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍを含む１００μｌのフローバッファー（ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ）、または２５０μｌ／チューブのＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ中に細胞を再懸濁させてから、ＲＴで１５分間培養した。次に、細胞を２０００ｒｐｍ、８分間、４℃の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。

細胞を洗浄バッファーで２回洗浄した。上清を廃棄してから、製造業者のプロトコルに従いＩＦＮ－γ ＰＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）細胞内染色を実施した。細胞を暗黒下、氷上で３０分間～６０分間培養した。培養後、細胞を、１ｍｌのＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。上清を廃棄してから、フロー用の最終容量の１５０μｌのＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。

図１８Ａから参照可能なように、１００μｇ／ｍＬの濃度のＣ５５１１、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によって誘導された際のＰＢＭＣにおけるＩＦＮ－γの放出は、非誘導対照と比較して約２．９７％であることが判明した。抗ＯＫＴ－３抗体、ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ＣＤ３抗体を陽性対照として使用すると、非誘導ＰＢＭＣと比較した際に３～６％のＩＦＮ－γ放出が示された（図１８Ａ）。それに続き、ＣＤ３＋集団及びＣＤ３－集団を基準にしてＰＢＭＣ細胞をゲーティングしたが、全ＰＢＭＣに由来するＣＤ３＋細胞は、単独または標的細胞（１：１０のＴ：Ｅ比率）と共にのいずれかにおいて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に、ＩＦＮ－γ放出の有意ではない上昇を示した（図１８Ｂ）。これに対して、ＣＤ３－集団は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際におけるＩＦＮ－γ放出の有意な上昇を示した（図１８Ｃ）。ここで、全ＰＢＭＣまたはＣＤ３＋細胞もしくはＣＤ３－細胞のいずれかにおいて、ＰＣ３初回刺激エフェクター細胞のＩＦＮ－γ産生が全く上昇しなかったまたはわずかに上昇したということに留意すべきである。観察を単離ＮＫ細胞へと拡大し、ＩＦＮ－γ放出実験を実施したが、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の存在下、約１～２％のＩＦＮ－γ放出がモニターされた（図１８Ｄ）。まとめると、サイトカイン、例えば、ＩＦＮ－γなどの放出は、本開示に記載のとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に上昇した。ＣＤ３－／ＮＫ細胞に限定されないエフェクター細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原へと抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を結合させることによりもたらされた上記の観察は、その他の免疫細胞の活性化への独立した経路及び標的細胞の実質的に効果的な排除を示唆していた。

細胞傷害機構：
細胞傷害機構における抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能的役割を理解するために、抗ＣＬＥＣ２Ｄアイソタイプバリアントを構築して、細胞傷害アッセイで評価した。

適切なアイソタイプ構築物の作製
例示として、哺乳動物発現ベクター、ＩｇＧ１、Ｎ－＞Ａ変異を含むｐＺＢ０１３（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３６４）、及びＩｇＧ４を含むｐＺＢ０１４（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３６５）を作製したが、選択した抗ＣＬＥＣ２Ｄ可変重鎖領域をクローニングされていてもよかった。続いて、可変重鎖を含む上記構築物及び可変軽鎖を含むｐＺＢ００８（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３５９）をトランスフェクションして発現させてから、その後の実験用に精製する。哺乳動物構築物、ＩｇＧ１、Ｎ－＞Ａ変異を含むｐＺＢ０１３と、ＩｇＧ４を含むｐＺＢ０１４の両方を、カスタム設計して合成した（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。プラスミドは、強力なプロモーターによって駆動されるカナマイシンＲ／ピューロマイシンＲカセット、及び増殖用の高コピー数ＣｏｌＥ１／ｐＭＢ１／ｐＢＲ３２２／ｐＵＣ複製起点を搭載している。制限酵素ＡｓｃＩ及びＸｂａＩを使用して可変重鎖を置換してもよい。制限酵素ＥｃｏＲＩ及びＡｓｃＩにより可変軽鎖を置換してもよい。

本明細書で例示しているとおり、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいて合成された配列特異的プライマーを使用してＰＣＲを実施し、ｐＺＢ０１４ベクター及びｐＺＢ００８ベクターを対応する酵素による制限エンドヌクレアーゼ活性に供し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用してＰＣＲ増幅産物を抽出し、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｐｌｕｓ ＣＥを使用してインフュージョンクローニングを実施し、混合物の５０％をＳｔｅｌｌａｒコンピテント細胞Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、カナマイシン含有ＬＢ寒天プレート上に播種した。ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて形質転換コロニーに由来するプラスミドＤＮＡを精製し、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいてシークエンスを行ってから、大規模プラスミドを単離して、トランスフェクションに使用した。ここで、熱ショック法によるプラスミドＤＮＡの細菌細胞への形質転換、ＱＩＡＧＥＮキットを用いた細菌細胞からのプラスミドＤＮＡの単離、及びクローンのスクリーニングについては、上のセクションに記載のものと同様であった。その後、全てのクローンを配列確認すると、エラーを含まないことが判明した。哺乳動物発現系、ＣＨＯ細胞にトランスフェクションするために、ＩｇＧ４変異フォーマット及び／またはＩｇＧ１変異フォーマットの両方のそれぞれの抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンを大規模に単離した。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体ＩｇＧ４バリアントを発現させるためのＣＨＯ細胞トランスフェクション：
例示として、トランスフェクション用に、細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンター、Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ＰＬＵＳ試薬を含むリポフェクタミン（登録商標）ＬＴＸ試薬を使用して、製造業者のプロトコルに従いトランスフェクションを実施した。必要な容量の細胞懸濁液を１４００～１５００ＲＰＭ、４～５分間の遠心分離にかけてから、１２５ｍｌ振盪フラスコ内の、表３６のとおりの特定の容量のＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中に再懸濁させた。表３に従いトランスフェクション混合液を調製した。ＤＮＡの詳細については表Ａを参照されたい。トランスフェクションの２～３日後、１０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清を回収した。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、細胞培養上清からＩｇＧ４抗体バリアントを精製した。

例示として、更なる精製及び細胞傷害アッセイ評価用に、限定するわけではないがＣ４７０１、Ｃ３２７６、Ｃ３２５６クローンをトランスフェクションした。

抗体介在性細胞傷害
精製後、フローサイトメトリーを使用して、Ｃ４５４８細胞上への細胞表面結合について、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを評価した。図１９Ｃから参照可能なように、ＩｇＧ４アイソタイプを含む両方のクローンは、対照非トランスフェクトＣＨＯ細胞と比較した際に、約４～８倍より高いＭＦＩでの、表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合を示した。

アイソタイプバリアントの機能性を評価するために、製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加え、新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ３２７６、Ｃ３２５６、Ｃ３４５２、及びＣ４６０８を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１９Ｄから参照可能なように、Ｃ３２７６ ＩｇＧ４バリアント及びＣ４６０８ ＩｇＧ１バリアントは、ＰＣ３細胞に対する類似したパーセンテージの細胞傷害を示した。まとめると、ＩｇＧ１バリアントとＩｇＧ４バリアントの両方（１００μｇ／ｍｌで処理）は、ＣＤ１６依存性標的細胞死とＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の遮断による標的細胞の殺傷の両方の関与を意味する、ＰＣ３細胞に対する抗腫瘍活性を示しており、更には、おそらくＡＤＣＣ機構とは無関係に機能して腫瘍細胞を速やかに殺傷する複数の経路の関与を示唆している。加えて、上記抗体の異なるアイソタイプフォーマットは潜在的に、前立腺癌に限定されない特定の疾患用の治療への新たな道筋をつけることができる。

修飾グリコシル化を有する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の細胞傷害に対する影響
モノクローナル抗体ベースのバイオ医薬品は、標的細胞上の抗原性エピトープの効果的な認識に加えて、免疫複合体の形成の結果としての抗体エフェクター機能を介して機能する。最近では、抗体エフェクター機能は、上記の部類のバイオ医薬品の効果を向上させることに対するかなりの関心を得ている。抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は治療抗体の臨床効果を向上させるが、患者の白血球受容体（ＦｃγＲ）の対立遺伝子多型に関係する研究に例示されているとおり、その効果は抗がん抗体の場合により顕著である。近年、化学－酵素法により開発された均一ＩｇＧグライコフォームを用いたエレガントな研究により、抗体のシアリル化がコアフコシル化との関係において（非フコシル化抗体の場合ではない）ＡＤＣＣに悪影響を及ぼすことが明らかとなった。完全非フコシル化モノクローナル抗体がＦｃγＲＩＩＩに対する有意に上昇したＦｃ親和性を有しており、その結果、抗体ＡＤＣＣ機能がｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにおいて何倍も向上していることを複数の研究が報告した。

自然免疫系が腫瘍微小環境に動員されている免疫腫瘍学標的に対する次世代モノクローナル抗体医薬品の出現に伴い、ＮＫ細胞のエフェクター機能を保証することは、非常に重要なものとなっている。腫瘍細胞上のエピトープを認識する向上したＡＤＣＣ機能を有するあらゆるこのような抗体は、腫瘍細胞生存、またそれによる腫瘍進行に対するより高い阻害効果を発揮する潜在能力を有している。この場合、モノクローナル抗体医薬品のＡＤＣＣ機能を制御することは、最適なエフェクター機能と有害なサイトカイン放出のバランスをとるのに役立つ。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現：
ＧＳ陰性ＣＨＯ細胞株を用いて、Ｔａｌｅｎ Ｆｕｔ８遺伝子ノックアウト細胞株を分化させた。この細胞株をＦＵＴ８遺伝子ノックアウト用に配列確認し、Ｃ２８９９としてコード化した。Ｃ０６９４（ＨＣベクター及びＬＣベクター）及びＣ２６８５（ＨＣベクター及びＬＣベクター）をこの細胞株にトランスフェクションした。抗生物質選択を実施してから、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現するこの細胞株からミニプール及び単一細胞クローンを分化させた。Ｃ４５４８細胞上への細胞表面抗原結合についてフローサイトメトリーを用いて、標的細胞上への細胞表面抗原結合について共焦点イメージングを用いて、アフコシル化抗体を試験した。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを発現させるためのＣ２８９９細胞トランスフェクショントランスフェクション：
Ｃ０６９４及びＣ２６８５の重鎖ベクター及び軽鎖ベクターをＣ２８９９細胞にトランスフェクションした。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンター、Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ＰＬＵＳ試薬を含むリポフェクタミン（登録商標）ＬＴＸ試薬を使用して、製造業者のプロトコルに従いトランスフェクションを実施した。必要な容量の細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４分間の遠心分離にかけてから、１２５ｍｌ振盪フラスコ内の、特定の容量のＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中に再懸濁させた。前述したとおりにトランスフェクション混合液を調製した。Ｃ０６９４のＨＣベクター及びＬＣベクターをトランスフェクションしたＣ２８９９細胞がＣ３２３４として知られている一方で、Ｃ２６８５のＨＣベクター及びＬＣベクターをトランスフェクションしたＣ２８９９細胞はＣ４３３５として知られていた。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定細胞株の作製：
抗生物質選択：
＞８０％の細胞生存能のトランスフェクション後に、抗生物質選択を開始した。細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中に再懸濁させてから、ピューロマイシン二塩酸塩の濃度を２μｇ／１×１０＾６細胞に調節した。２日毎または３日毎に抗生物質選択を実施した。

安定プールの反復トランスフェクション：
Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して細胞カウントを取得した。細胞を継代培養してからトランスフェクションを実施した。これまでに言及したように、更に２回の連続的なトランスフェクションを実施した。３ラウンドのトランスフェクションが完了すると、そのプールをＲ３安定プールと呼んだ。

ミニプールへの播種：
系列希釈法によりミニプールを作製した。播種の１～２日前に、増殖し続けている細胞株培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、０．５百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した。細胞を、１０細胞／ウェルの密度で、ウェルあたり２００μｌ容量の９６ウェルプレート内のクローニング培地に播種した。これらのミニプールを、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。

ミニプールのスクリーニング及び増幅：
ミニプールをフローサイトメトリーでスクリーニングしたが、Ｃ４５４８細胞への結合を推定した。細胞表面結合に基づいてミニプールを順位付けした。フローサイトメトリースクリーニングにより選択したミニプールを９６ウェルプレートから２４ウェルプレートへと増幅させてから、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。これらのプールを２４ウェルプレートから６ウェルプレートの１つのウェルへと更に増幅させた。細胞がコンフルエントになった後、６ウェルプレートの１つのウェルから２５～３０ｍｌの増殖培地を含む５０ｍｌバイオリアクターチューブまたは１２５ｍｌ三角振盪フラスコへとミニプールを増幅させてから、１２０～２００ＲＰＭの５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。

単一細胞のクローニング
系列希釈法により単一細胞を作製した。クローニングの１～２日前に、増殖し続けている選択ミニプール培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、１百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した。細胞を、０．５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート内に播種してから、加湿した５％ＣＯ２静置インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。０日目から１０日目までのモノクローナリティレポート作製用にＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用することにより、プレートをスキャンした。全てのウェルの０日目の画像からクローン集団を確認してから、ＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒを用いてモノクローナリティレポートを作製した。継代番号はＰ（ｘ＋０）であった。単一細胞クローンを４桁のランダム数でコード化した。細胞がコンフルエントになった後、単一細胞クローンを２４ウェルプレートへと増幅させた。継代番号はＰ（ｘ＋１）であった。

単一細胞クローンのスクリーニング及びクローン増幅：
細胞培養上清中の抗体を推定してクローンを順位付けするために、細胞表面結合アッセイを実施した。Ｃ４５４８細胞の表面に発現しているＣＬＥＣ２Ｄ抗原への高い結合性を示す単一細胞クローンを２４ウェルから６ウェルへと増幅させた。継代番号は（ｘ＋２）であった。続いて、この単一細胞クローンを６ウェルプレートの３つのウェル内で増幅させた。継代番号は（ｘ＋３）であった。クローンをバイオリアクターチューブまたは三角フラスコへと更に増幅させた。クローン用にＲＣＢバイアルを調製した。

タンパク質精製用の培養回収液：
細胞を、約０．３×１０＾６細胞／ｍｌの密度で、３０～１００ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地内に播種してから、１２０ＲＰＭ回転の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件で、６日間培養した。３日目または４日目に、２０％（体積／体積）の培地を完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地に継ぎ足した。全ての細胞懸濁液を１４００～２０００ＲＰＭ、１０分間の遠心分離にかけることにより、上清を回収した。上清を回収してから、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによる精製に供した。

フローサイトメトリーによる細胞表面結合アッセイ：
ＣＬＥＣ２Ｄ表面発現ベクターをＣＨＯ細胞に一過的にトランスフェクションした。表面発現は、トランスフェクト細胞上、４日目～５日目において最適であった。これらの細胞をＣ４５４８としてコード化した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。ＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。１～５μｇの精製抗体試料及び参照対照をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で４０～６０分間培養した。プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの２％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

非トランスフェクトＣＨＯ細胞上への試験試料上清の結合を推定し、以下の式、

を使用して、Ｃ４５４８細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

最初に、フローサイトメトリーを用いて、Ｃ４５４８細胞上への細胞表面結合について、安定細胞クローンに由来する精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の評価を行ったが、フローサイトメトリーベース結合試験用の実験は、セクション・・・に記載のものと同様のままであった。図１９Ｅから参照可能なように、Ｃ０６１３、Ｃ１３０１、Ｃ６２６８、Ｃ１６９９、Ｃ２４３７、Ｃ９８３２、Ｃ８９００、及びＣ７７４９に例示される全てのクローンは、非トランスフェクトＣＨＯ細胞である対照と比較した際に、約２～１０倍より高いＭＦＩでの、表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への特異的な結合を示した。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体による細胞傷害
続いて、確認したアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を細胞傷害実験用に使用して、グリコシル化の効果をフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と比較した。

ここで、製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＮＫ細胞を１：１のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１（１００μｇ／ｍｌ）ならびにアフコシル化ｍａｂ Ｃ７７４９、Ｃ８８００、及びＣ９８３２を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に２０μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。それに続き、２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞のトリプシン処理を行った。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターを使用して蛍光シグナルを検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１９Ｆは、ＰＣ３細胞の殺傷により評価した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性細胞傷害に対するフコシル化の影響を示している。これまでに言及したとおり、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、フコシル化抗体、すなわち、Ｃ５５１１よりも５倍低い濃度で使用した。観察された細胞傷害は、フコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と比較した際に、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が少なくとも５倍より効果的であることを示唆している。それゆえ、上記及び記載バージョン、すなわち、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、高い臨床効果を得るための効率的な代替治療／療法選択肢として使用することができた。

まとめると、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の機能的効率は、ＩｇＧ４アイソタイプフォーマットの上記抗体の機能性から分かるように、ＡＤＣＣ非依存性であり得、その一方で、アフコシル化バージョンの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は効率的なＡＤＣＣ介在性標的殺傷を誘導し、その結果として、治療領域における機能的汎用性及び用途に関連する汎用性にみがきがかかり、それらが広がる。

補体依存性細胞傷害
補体依存性細胞傷害、すなわちＣＤＣは、補体関連反応のカスケードを活性化させることにより、それをとおして抗体が望ましくない標的を溶解する周知のメカニズムである。一般的にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、そのＦｃ領域を血清補体成分、とりわけＣ１ｑに結合させることにより、ＣＤＣ殺傷効果を誘導する。２０超の高度に調節されたエレメントが関与する複雑な酵素活性化及び開裂イベントの後、最終的に、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成、それによる標的細胞破壊がもたらされる。

実験について詳しく述べる特定の例では、５×１０^４細胞を含有する５０μＬの標的細胞懸濁液（ＰＣ３及びＲａｍｏｓ）を９６ウェルアッセイプレートのそれぞれのウェルに加えた。５０μＬの異なる濃度のＣ５５１１抗体（２００、４０、０．４、０．０４μｇ／ｍＬ）希釈溶液をプレートに加えて、反応を開始させた。プレートを３０秒間振盪させた。次に、仔ウサギ補体を細胞培地中に希釈（１：２０）してから、５０μＬを適切なウェルに加えた。３０秒間振盪させた後、プレートを５％ＣＯ２、３７℃で１２０分間培養した。次に、プレートを３７℃のインキュベータから取り出してから、室温（ＲＴ）になるまで１５分間冷まし、その後、２５μＬの温かいＲｉｓａｚｕｒｉｎ溶液を加えてから、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で一晩（１６～２０時間）培養した。次に、プレートを３７℃のインキュベータから取り出してから、室温（ＲＴ）になるまで１５分間冷まし、その後、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ ＢＩＯＴＥＫマイクロプレートリーダーを使用して、蛍光モード（励起５３０及び放出５９０）でプレートを読んだ。

Ｒａｍｏｓ細胞株とＰＣ３細胞株の両方から得たデータは、図１９Ｇに示すとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が、ＣＤＣ経路によるその細胞殺傷機構を発揮していないことを示唆している。

実施例７：抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いたｉｎ ｖｉｖｏマウス効果試験
ｉｎ ｖｉｖｏマウス効果試験
治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の開発中において、臨床で成功する見込みの最も高い候補ｍＡｂを早期に同定するための戦略は、不十分な曝露、毒性、または効果の欠如と関連する費用がかかる後期の失敗を回避するために求められている。ｍＡｂの早期のスクリーニング及び最適化では、リード構築物を選択するための特性、例えば、親和性、力価、及び安定性などに焦点をあてるが、その一方で、ｉｎ ｖｉｖｏ効果の確認は一般的に必要とされる。

皮下ＰＣ３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを用いて抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の抗がん活性を評価した（図２０Ａ及び図２０Ｂ）。手法は、ヒト造血幹細胞を移植することによりヒト様免疫系（ヒト起源のリンパ球系及び骨髄系）がもたらされる、超免疫欠損ｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３トランスジェニック－ＮＯＧマウスに基づいている。このモデルにより、免疫療法剤の機能に関する重要な固有のメカニズムの効果試験が可能となった。試験は、４～５週間の期間にわたり、腫瘍容積及び体重を定期的に観察しながら実施した。試験は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＥＣ）に従い実施した。

全ての動物は、実験開始前の約５～７日間の期間にわたり、馴化のために保管された。動物を群（ケージあたり５匹の動物）でＩＶＣ内に収容し、オートクレーブ済みトウモロコシ穂軸を敷わら材として使用した。２２±３℃の温度、５０±２０％の湿度、それぞれ１２時間の明／暗サイクル、及び１時間あたり１５～２０回の新鮮な空気への換気の、制御された環境下に、動物を維持した。動物には、認可済みＩｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔを自由に摂らせた。
種 Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ
系統 ｈｕＮＯＧＥＸＬ
供給元 Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
性別 雄
齢 ５～６週齢
体重 １９～２１ｇ
がん細胞株 ＰＣ３（ヒト前立腺腺癌）
細胞移植密度 ５×１０^６細胞／動物
試験開始 腫瘍容積（≒１００ｍｍ^３）
試験期間 ４～５週間
試験品目 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン、ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体、チェックポイントモノクローナル抗体
用量及び投与スケジュール １０ｍｇ／ｋｇ、４腹腔内投与－７日に１回
投与経路 腹腔内
腫瘍容積の測定 ３日に１回
体重の測定 ３日に１回

全ての手順は、滅菌技術に従い層流フード内で実施した。＞９０％の生存能のＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌）細胞を試験用に選択した。約５×１０^６細胞を、５０％のマトリゲルを含有する２００μｌの無血清培地中に再懸濁させてから、氷中に保管した。個別換気ケージ（ＩＶＣ）に収容した雄ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを試験に使用した。動物の右脇腹領域にＰＣ－３細胞を皮下注射することにより、ＰＣ－３細胞株を動物内に伝播させた。移植エリアの腫瘍増殖をモニターした。腫瘍が触知可能なステージ及び所定の容積（平均腫瘍容積１１５ｍｍ^３）に達すると、動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体、ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体、及びチェックポイントモノクローナル抗体の投与を開始した。抗体を腹腔内投与した。それぞれ個々の動物の用量は、その体重に基づいて調節した。

試験の主な目的は、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の抗腫瘍活性を評価することであった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン単独の効果に加えて、ＰＤＬ１抗原に対するチェックポイントモノクローナル抗体との組み合わせ治療用の実験を実施した。ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスでは、動物の体重、臨床徴候、及び腫瘍容積を実験期間中にわたり３日に１回記録した。試験は、表４２に記載の以下の群で構成されていた。

「群１」の動物では、試験期間中における進行性の腫瘍増殖が明らかとなった。全てのその他の実験群において腫瘍増殖阻害が認められた。試験期間中、３日に１回個々の体重を測定した。個々のマウスの体重の変化パーセンテージを計算して記録した。試験期間中毎日、目に見える臨床徴候について動物を観察した。無作為化の日（０日目）、及びその後３日に１回（すなわち、体重を測定するのと同日）、デジタルノギスを用いた二次元測定により腫瘍容積を測定した。ノギスを使用して、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定した。腫瘍容積（ＴＶ）は、以下の式：
ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２（式中、Ｌ＝長さ（ｍｍ）、Ｗ＝幅（ｍｍ））
を使用して計算した。
個々の群の標準偏差（ＳＤ）または標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。対照ＩｇＧ１群（群１）に対する最大腫瘍容積阻害として抗腫瘍活性を評価した。データの評価は、統計ソフトウェアＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ５．０を使用して実施した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、以下の式：

（式中、Ｔ＝Ｘ日目における試験群の平均腫瘍容積（ＴＶ）－０日目における試験群の平均ＴＶ、Ｃ＝Ｘ日目における対照ヒトＩｇＧ（群１）の平均ＴＶ－０日目における対照ヒトＩｇＧ（群１）の平均ＴＶ）
を使用して計算した。

相対腫瘍容積（ＲＴＶ）及び腫瘍増殖阻害を計算した。ＲＴＶデータの平均±ＳＥＭを計算し、腫瘍増殖阻害をパーセンテージで示した。統計解析にｔｗｏ ｗａｙ ＡＮＯＶＡを利用し、群間のｐ値＜０．０５を有意とみなした。結果は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた単剤治療とＰＤＬ１に対するチェックポイントモノクローナル抗体との組み合わせの両方による、有意な腫瘍増殖抑制を示している。

対照ヒトＩｇＧ１を示す群１と比較して、群２、群３、群４、及び群５において有意な腫瘍増殖阻害が認められた。抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローン及び抗ＰＤＬ１抗体で治療した動物において全試験期間にわたる有意な腫瘍増殖阻害が認められたのは予想外であった。更に興味深いことに、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローン及び抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体の組み合わせで治療した動物において腫瘍サイズが半分低下したという全く新しい所見が認められた。この所見は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び抗ＰＤＬ１抗体を用いた組み合わせ治療が５ｍｇ／ｋｇの低用量でこの高レベルの腫瘍増殖阻害を達成したことから、極めて重要である。データは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を単独で使用した際及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせて使用した際の有意な抗腫瘍活性を示しており、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体クローンが様々な疾患適応症に対する大きな治療ポテンシャルを有していることを示している。

試験期間中、モノクローナル抗体の用量はわずかな体重減少がありつつも良好な忍容性を示した。ケージサイド観察に基づくと、実験期間中、群のいずれかにおいて、異常行動の可視徴候または何らかの有害な臨床症状は認められなかった。切除腫瘍の免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して、腫瘍部位へのＴ細胞浸潤を解析した。浸潤を理解するために、採取した腫瘍細胞を異なるタイプのＴ細胞マーカーに供した。ＦＦＰＥ組織（ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織標本）の免疫組織化学用に組織学処理を実施した。動物を安楽死させてから、腫瘍を採取して１０％中性緩衝ホルマリンで２４時間固定した。組織を組織処理に供した。組織処理の完了後にパラフィン包埋組織ブロックを調製した。それに続き、ミクロトームの切断刃ホルダーの角度を組織ブロックの表面に調節した。粗トリミングを実施してから、５マイクロメートル厚の薄片を取得して、組織水浴に移した。標準的な試薬を用いて、ＩＨＣ染色用にホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織標本を処理した。

試料を洗浄バッファー（ＰＢＳＴ－０．３％トリトンＸ－１００）で１０分間洗浄した。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中の１０％標準ヤギ血清及び３％ＢＳＡ）を用いて、試料を加湿環境下、３０～６０分間培養した。一次抗体を抗体希釈バッファー（ＰＢＳ中の３％ＢＳＡ）中に希釈した。組織をＣＤ３抗原に対する１：１００希釈の一次抗体と培養してから、４℃で一晩培養した。それに続き、スライドを洗浄バッファーで３回洗浄した（１０～３０分間／洗浄）。これに続いて、二次抗体ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＨＲＰ）と室温で培養した。スライドを洗浄バッファーで３回洗浄した（それぞれの洗浄において１５～３０分間）。ＤＡＢ色原体を加えて、適度な強度の組織染色を発現させた。ヘマトキシリンで対比染色を実施した。

腫瘍試料を抗ＣＤ３抗体で免疫組織化学的に染色した。ヒトＩｇＧ対照（群１）の腫瘍組織の周縁部にＣＤ３細胞（全Ｔ細胞マーカー）浸潤が認められた。しかしながら、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、チェックポイント抗体単独または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びチェックポイント抗体の組み合わせで治療した動物では、ＣＤ３細胞浸潤は、周縁部において均一に、また腫瘍細胞の周りでも認められた。ＣＤ３、膜性免疫組織化学マーカーにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、チェックポイント抗体、及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びチェックポイント抗体の組み合わせで治療した動物から採取した腫瘍試料の軽度から中程度の染色が明らかとなった。データは、腫瘍介在性免疫抑制のメカニズムへの明確な洞察をもたらしている。

標識抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の位置確認
別のイメージング実験では、Ａｌｅｘａ ６４７で標識した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内投与した。皮下ＰＣ－３腫瘍（平均腫瘍容積、約２１３ｍｍ^３）を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスに蛍光標識抗体を投与した。Ａｌｅｘａ ６４７標識抗体の投与の０分後、５分後、１５分後、３０分後、１時間後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、及び９６時間後に、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングを実施した（図２０Ｃ）。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対するモノクローナル抗体は、皮下ＰＣ－３腫瘍を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウス内の目的の標的抗原に対する親和性（腫瘍シグナル強度から明白）を示した。

腫瘍からのシグナル強度は、早くも抗体の注射の５分後に現れ、時間の経過とともに徐々に高くなった。シグナル強度のピークは３時間時点において観察され、腫瘍からのシグナル強度は９６時間時点まで続いた。

選択モノクローナル抗体製品を用いたｉｎ ｖｉｖｏマウス効果
別のフォローアップ異種移植マウス試験では、モノクローナル抗体医薬品を試験して、モノクローナル抗体治療時の腫瘍増殖抑制を評価した。

動物の系統：ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植したｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３ ＮＯＧマウスは、早くも注射の６～８週間後に、広範囲にわたる細胞系統を安定的に分化させた。骨髄系細胞とリンパ球系細胞の両方は、末梢血、骨髄、胸腺及び脾臓、ならびに肺及び肝臓を含む非リンパ組織に存在している。目下の試験用に、末梢血に２５％超のｈＣＤ４５＋を含むｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用した。

理論的根拠：手法は、ヒト造血幹細胞を移植することによりヒト様免疫系（ヒト起源のリンパ球系及び骨髄系）がもたらされる、超免疫欠損ｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３トランスジェニック－ＮＯＧマウスに基づいている。このモデルにより、免疫療法関連薬剤の効果に関する重要な固有のメカニズムを試験することが可能となり、ヒト異種移植片を樹立するための好適なモデルがもたらされる。
系統 ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ
性別 雄
供給元 Ｔａｃｏｎｉｃ（ＵＳＡ）
実験開始時の齢 １３～１４週齢
動物の体重 １８～２２ｇ

動物の世話
動物福祉
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ（ＣＰＣＳＥＡ）（インド政府）の規則、及びＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）ガイドラインに従い動物の世話を行った。

住環境及び給餌
２２＋３℃の温度、５０＋２０％の湿度、１２時間の明／暗サイクル、及び１時間あたり１５～２０回の新鮮な空気への換気の、制御された環境下に維持された個別換気ケージ内に動物を収容した。動物を群で収容し、オートクレーブ済みトウモロコシ穂軸（Ｓｐａｒｃｏｎｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）を敷わら材として使用した。試験期間中、動物には、認可済みｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｒｏｄｅｎｔ ｄｉｅｔを自由に摂らせた（ＮＩＨ－３１）。

飲料水
オートクレーブ処理後のＲＯに通して濾過した新鮮な飲料水を、ノズルを取り付けたボトルを介して、全ての動物に自由に提供した。

動物の準備
動物は、１０日間の期間にわたり、実験室内、馴化下に保管された。動物を選択する前に徹底的な観察を実施して、明らかに健康な動物のみを試験に使用した。

動物の識別
動物にそれぞれ番号を振り、実験、試験番号、無作為化の日付、マウス系統、性別、及びそれぞれのマウス番号を示すケージカードを対応するケージに表示した。無作為化群の識別後、治療コード、用量、スケジュール、及び投与経路がケージカードに含まれていた。

実験手順
腫瘍細胞の調製
全ての手順は、滅菌技術に従い層流フード内で実施した。＞９０％の生存能のＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌）細胞を試験用に選択した。約５×１０^６細胞を、５０％のマトリゲルを含有する２００μｌの無血清培地中に再懸濁させてから、氷中に保管した。

細胞の皮下注射
個別換気ケージ（ＩＶＣ）に収容した雄ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを試験に使用した。動物の右脇腹領域にＰＣ－３細胞を皮下注射することにより、ＰＣ－３細胞株を動物内に伝播させた。移植エリアの腫瘍増殖をモニターした。細胞の注射の４日後、腫瘍容積（平均腫瘍容積≒３７ｍｍ３）に基づいて動物を無作為化してから、投与を開始した。

試験物質の投与経路及び投与方法：
必要な量の試験抗体を調製してから、２～８０℃で保存した。抗体を腹腔内投与した。個々の動物の用量は、体重に基づいて調節した。それぞれの抗体用に、未使用の新しい注射器及び針を使用した。

実験デザイン
●モノクローナル抗体製品を、
ａ．Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、
ｂ．Ｃ６４８１ ｍＡｂ群
に１０ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。
●溶媒対照ＩｇＧ１群－対照ＩｇＧ１を１０ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。
●治療群あたり５匹の動物。
●最初の２週間にわたり３日に１回、残りの試験期間にわたり１週間に１回、抗体薬物製品を注射した。
●総試験期間３６日間。
●３日に１回、腫瘍容積の測定及び動物の体重の測定を実施した。

用量及び投与経路
必要な量の試験化合物（レディートゥーユース製剤）を使用し、それを－２００℃で保存した。試験化合物をそのそれぞれの群に腹腔内投与した。それぞれ個々の動物の用量を投与の直前に測定した体重に基づいて調節し、投与容量を１０ｍＬ／ｋｇ（体重）に維持した。それぞれの試験化合物用に、滅菌の新しい注射器及び針を使用した。試験化合物は、薬剤投与の当日に新たに解凍した。

観察
体重－試験期間中、３日に１回個々の体重を測定した。個々のマウスの体重の変化％を計算して記録した。

臨床徴候－試験期間中３日に１回、目に見える臨床徴候について毎日動物を観察して記録した。

腫瘍容積測定－無作為化の日（１日目）、デジタルノギスを用いた二次元測定により腫瘍容積を測定した。２回目の腫瘍容積測定は３日目であり、実験の終了まで更に３日に１回、腫瘍容積測定を実施した（すなわち、体重を測定するのと同日）。ノギスを使用して、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定した。腫瘍容積（ＴＶ）は、以下の式：

（式中、Ｌ＝長さ（ｍｍ）、Ｗ＝幅（ｍｍ））
を使用して計算した。個々の群の標準偏差（ＳＤ）または標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。

抗腫瘍活性
溶媒対照群に対する最大腫瘍容積阻害として抗腫瘍活性を評価した。データの評価は、統計ソフトウェアＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ５．０を使用して実施した。
●腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）
ＴＧＩは、以下の式：
ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００
（式中、Ｔ＝（Ｘ日目における試験群の平均ＴＶ－１日目における試験群の平均ＴＶ）、Ｃ＝（Ｘ日目における対照群の平均ＴＶ－１日目における対照群の平均ＴＶ））
を使用して計算した。
●相対腫瘍容積（ＲＴＶ）
相対腫瘍容積（ＲＴＶ）は、以下の式：

を使用して計算した。

統計解析
腫瘍阻害の統計的有意性を評価するために、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ８．３．０を使用して、ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続いてボンフェローニ事後検定を実施した。ｐ値＜０．０５は、群間の統計的に有意な差を示す。

剖検
進行性の腫瘍増殖による全身腫瘍組織量（ＴＶ＞１５００ｍｍ３）及び腫瘍壊死／潰瘍形成が認められた。それゆえ、腫瘍エンドポイント及び倫理的理由に基づいて（３６日目）、全実験群の全ての動物を人道的に安楽死させてから、全ての病理学的所見を記録した。安楽死の前に、採血を実施し、血清を分離させてから－８０℃で保存した。全ての生存動物及び切除腫瘍組織を等倍で撮影してから、全腫瘍組織をホルマリン固定した。

ｉｎ ｖｉｖｏ試験から得た結果
抗腫瘍活性
この試験では、１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内用量（１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、１８日目、２４日目、３０日目、及び３３日目）の試験化合物で、ＰＣ－３腫瘍を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを治療した。本実験条件下において、溶媒対照ＩｇＧ１群は、実験期間中に進行性の腫瘍増殖を示した。それゆえ、抗がん効果を評価するために、その他の治療群をこの群と比較した。試験を行った用量及びレジメンにおいて、２つの試験群が、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群がそれぞれ、２４日目に溶媒対照ＩｇＧ１と比較した際にｐ＜０．００１及びｐ＜０．０５の有意な腫瘍増殖阻害を示したことを明らかにした。それに対し、３６日目に、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群のみが、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際にｐ＜０．０５の有意な腫瘍増殖阻害を示した。データを表４３に示す。

２４日目及び３６日目における腫瘍容積（ＴＶ）及びデルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）
２４日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均腫瘍容積（ｍｍ３）はそれぞれ、２４１±３１、４７４±３８、及び３５５±６８であった。更に、２４日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）はそれぞれ、２０４±３２、４３７±３８、及び３１８±６８ｍｍ３であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群は、２４日目に溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に腫瘍容積及びデルタ腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．００１及びｐ＜０．０５）を示した。３６日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均腫瘍容積はそれぞれ、６９０±１８６、１０６２±１５７、及び９７７±２３０ｍｍ３であった。３６日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）はそれぞれ、６５４±１８７、１０２５±１５９、及び９４０±２３１ｍｍ３であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群は、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に腫瘍容積及びデルタ腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．０５）を示した。全ての治療群の腫瘍容積（ＴＶ）及びデルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）の結果については、表４４及び表４５ならびに図２０Ｄ、図２０Ｅ、図２０Ｆ、及び図２０Ｇにまとめている。

２４日目及び３６日目における腫瘍増殖阻害のパーセンテージ（％ＴＧＩ）
２４日目に、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群の％腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）が４９％の最大値を示し、それに続き、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群が２５％の％ＴＧＩ値を示した。それに対し、３６日目のＣ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の％ＴＧＩ値はそれぞれ、溶媒対照ＩｇＧ１群に対して、３６日目において３５％及び８％であった。個々の動物の腫瘍増殖阻害については、表４６にまとめている。

２４日目及び３６日目における相対腫瘍容積（ＲＴＶ）及びデルタ相対腫瘍容積（ΔＲＴＶ）
２４日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均相対腫瘍容積はそれぞれ、７±１、１３±１、及び１０±２であった。Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群のデルタ相対腫瘍容積（ΔＲＴＶ）はそれぞれ、表５に示すとおり、６±１、１２±１、及び９±２であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群は、図２０Ｈ及び図２０Ｉに示すとおり、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に相対腫瘍容積及びデルタ相対腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．００１）を示した。３６日目における平均相対腫瘍容積は、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群において２０±６、溶媒対照ＩｇＧ１群において２９±５、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群において２７±７であった。それに対し、３６日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＲＴＶ）はそれぞれ、表４７ならびに図２０Ｊ及び図２０Ｋに示すとおり、１９±６、２８±５、及び２６±７であった。

試験は、試験条件下、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群において１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内用量（１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、１８日目、２４日目、３０日目、及び３３日目）で使用された試験化合物が、ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウス内のＰＣ－３腫瘍異種移植片に対する抗がん効果を評価するために試験されたことを明らかとした。溶媒対照ＩｇＧ１群に対する効果の評価を計算した。試験を行った化合物のうち、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群は、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に有意な抗がん効果を示した。腫瘍容積、腫瘍増殖阻害、相対腫瘍容積の統計解析に基づき、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群の治療は、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群に使用した試験化合物と比較してより優れた抗腫瘍効果を示した。全ての治療群において中程度の体重減少が認められた。

この場合、目下のＨｕＮＯＧ試験において試験したモノクローナル抗体製品が次善のアッセイ条件下で利用されたという点に留意すべきである。この試験に使用したモノクローナル抗体製品は最適に機能するためにヒトＮＫ細胞を必要とするが、今日に至るまで、ヒトＮＫ細胞がｉｎ ｖｉｖｏ条件を模倣し得る動物モデルは利用可能ではない。これらの制約条件を考慮して、マウス内にヒト免疫細胞（ヒトＮＫ細胞を含む）を樹立したＨｕＮＯＧモデルを合理的に使用した。しかしながら、ＮＫ細胞の存在量は有意に低い。それゆえ、ＨｕＮＯＧマウスモデルは、これらの新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体製品を試験するための好適な実験条件を然るべくもたらした。更に、試験の進行に伴い動物が高齢となるにつれてヒト免疫細胞の総数が減少し始めることが認められた。ＨｕＮＯＧ ＰＣ３異種移植モデルにおけるこれらのレベルの腫瘍増殖抑制は驚くべきことであり、本開示の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の非常に優れた効果を示している。

実施例８：抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の特性解析
精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を、抗体の複数の固有の特性、例えば、とりわけ、質量、コンフォメーション、翻訳後修飾などを指標とする様々な生物物理学的特性解析及び生化学的特性解析に供した。

単離フラグメントのコンフォメーションを同定するために、非還元条件下でＳＤＳ ＰＡＧＥを実施したが、全ての試料において、インタクト抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す１５０ｋＤａの分子量（ＭＷ）に対応する単一の主なバンドが認められた。その一方、還元条件下では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖及び重鎖と関連する２５ｋＤａ及び５０ｋＤａの２つのバンドが明らかとなった。ＳＤＳ ＰＡＧＥデータを図２１Ａに示す。

ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＢＩＡＣＯＲＥ、ＵＮＩＦＩによるＸｅｖｏ Ｇ２ ＸＳ ＱＴＯＦを備えたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓ Ｂｉｏをベースとした方法を使用して、インタクト質量実験を実施した。Ｘｅｖｏ Ｇ２ ＸＳ ＱＴＯＦを正感度ＭＳのみモードで実施した。前処理を行わずに、上記のサブユニット質量分析と同一のクロマトグラフィー条件（サブユニット質量分析とは異なるグラジエントのみ）及び質量分析条件を使用して、１μｇの試料を解析した。

最も豊富な質量は、図２１Ｂ及び表４９に示すとおり、一般的なグリコシル化ＩｇＧ１モノクローナル抗体に類似しており、その結果、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の分子量が確認された。

酸性ピーク、塩基性ピーク、及び主要ピークを分解したが、以下で表にした、主要ピークと共にそれぞれのバリアントのパーセンテージは、ＷＣＸ－ＬＣ法で測定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子内の電荷分布を示している。酸性アイソフォームの相対存在量は一般的に、抗体内の酸化プロセス、脱アミド化プロセス、及びグリコシル化プロセスに起因している。その一方で、Ｃ末端リジンの存在及びアミド化は主に、抗体内の塩基性アイソフォームの形成に影響を及ぼす。ＷＣＸクロマトグラムを図２１Ｃに示す。
酸性種：１０％
主要種：８３％
塩基性種：７％

タンパク質凝集が免疫原性を誘導し得ることが知られているが、少量の凝集物が予測され、この量は、抗体がその製造中、精製中、配合中、及び有効期間中に受け得る負荷条件によって増加する可能性がある。凝集はまた、投与時に活性の低下をもたらし得るまたは副作用をもたらし得る抗薬物抗体（ＡＤＡ）の生成を誘導し得る。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体試料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で解析したが、代表的なクロマトグラムを以下に示した。図２１Ｄの添付クロマトグラムにおいて認められるように、１００％モノマーが認められ、その結果、試料が凝集物及び／または分解物を何ら含んでいないことが確認された。

治療用モノクローナル抗体の重要な品質特性のうちの１つは、そのグリコシル化プロファイルである。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のグリカン分布を確認するために、ＨＩＬＩＣ Ｎ－グリカンプロファイリング法により試料を解析した。主なグリカン、例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ１Ｆ’、及びＧ２Ｆなどを同定したが、ガラクトシル化グリカンの総パーセンテージは約４６．４４％であることが判明した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合試験：
精製可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して結合試験を実施した一方で、ＥＬＩＳＡベースの方法とＳＰＲベースの方法の両方により測定を実施した。

加えて、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との結合相互作用が組換えヒトモノクローナル抗体医薬品の薬物動態特性の１つの決定因子であり、ＩｇＧ分子の結晶性フラグメント（Ｆｃ）領域内の保存された結合モチーフがＦｃＲｎと相互作用することから、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＦｃＲｎの間の相互作用を理解するためにＳＰＲをまた採用した。

ＥＬＩＳＡ；
ＣＨＯ細胞培養系を使用して可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を生成及び精製し、ＥＬＩＳＡアッセイ用に抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用した。直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、及びサンドイッチＥＬＩＳＡに例示される様々なＥＬＩＳＡフォーマットを使用して、方法を最適化した。最終的に、最適化したＥＬＩＳＡアッセイは、抗原をビオチン部分で標識した、プロテインＡをコーティングしたプレートをベースとしていた。（０．０５％ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＤＰＢＳ）中の０．５％ＢＳＡ希釈バッファーを用いて、０．０１μｇ／ｍＬから６２．５μｇ／ｍＬの範囲の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体希釈溶液を調製した。

プロテインＡでコーティングしたウェルを２００μＬの洗浄バッファー（０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＤＰＢＳ）で３回洗浄した。それぞれの抗体希釈溶液の１００μＬをウェルに加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で９０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで４回すすいだ。前述したとおりに標識を実施した１００μＬの異なる濃度のビオチン化抗原をそれぞれのウェルに加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で６０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで４回すすいだ。１００μＬの１：５０００希釈ＨＲＰ標識ストレプトアビジンを加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で６０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで５回すすいだ。１００μｌの１×ＴＭＢを加えてから、プレートを暗黒下、ＲＴで３０分間培養した。３０分後、１００μｌの停止液を加えてから、４５０ｎｍでプレートを読んだ。

更に、ブランクを適切に差し引いてから、Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰＲＩＳＭ ６．０を使用して、吸光度値をプロットして、シグモイド結合に基づく結合モデルにフィッティングした。フィッティングから得たＫＤ値は、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において１０～１７ｎＭであることが判明した（図２１Ｆ）。統計的信頼度を達成するために実験を少なくとも３回別々に３連で繰り返したが、ばらつきは、信頼区間が９５％以内にありつつ、５％未満であることが判明した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたＢＩＡｃｏｒｅ結合試験
ＢＩＡＣＯＲＥを使用して、表面プラズモン共鳴により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の特定のモノクローナル抗体との相互作用をモニターした。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との相互作用の動態パラメータを評価した。この方法を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する潜在的な高親和性モノクローナル抗体をスクリーニングした。異なるモノクローナル抗体により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する特異的な親和性が明らかとなった。実験により、１００ｎＭ未満の範囲（例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、または１ｎＭ）の親和性定数が明らかとなった。

ＢＩＡＣＯＲＥ ３０００機器上で抗Ｈｉｓ抗体結合捕捉化学反応を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の間のＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合動態試験及び親和性結合試験を実施した。Ｈｉｓ Ｃａｐｔｕｒｅキット（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＣＭ５チップ表面上に約１８００のＲＵで固定した。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をＣＭ５チップ表面に結合した抗Ｈｉｓ上に約２００μｇ／ｍＬの濃度で捕捉したが、抗原の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含む泳動バッファーを用いて実施した。それに続き、それぞれ３分間及び２５分間の結合時間及び解離時間で、１～１００μｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を通過させた。抗体の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施した。それぞれ参照フローセルシグナル及びブランクから、得られた応答曲線（図２１Ｇ）を適切に差し引いてから、１：１：１ラングミュア結合にフィッティングすると、約１０^９Ｍ－１の推定ＫＤがもたらされた。

ＦｃＲｎ結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーアッセイは多くの場合、ＦｃＲｎと抗体医薬品の間の相互作用を特性決定するために使用される。試験は、ＦｃＲｎが、ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン境界において、ＩｇＧの結晶性フラグメント（Ｆｃ）内の結合モチーフとｐＨ依存的に相互作用することを示している。この相互作用のｐＨ依存性は、ＩｇＧ分子の長い血清中半減期を維持するのに不可欠である。具体的には、内皮細胞のエンドソーム（ｐＨ約６．０）において、ピノサイトーシスにより内部移行したＩｇＧは、ＦｃＲｎに結合してＩｇＧ－ＦｃＲｎ複合体を形成し、ＩｇＧ－ＦｃＲｎ複合体は、その後、細胞表面へと輸送され、そこで、ＩｇＧは生理学的ｐＨ（約７．４）の循環血液へと再放出される。これによりＩｇＧのリソソーム分解が防止される。組換えヒトモノクローナル抗体（ｒｈｕｍＡｂ）医薬品において、ＦｃＲｎ－ｒｈｕｍＡｂ結合相互作用は、薬物動態（ＰＫ）特性の重要な決定因子であり、ＦｃＲｎ結合モチーフの標的化組換えにより、患者における抗体医薬品のより少ない頻度の投与が可能となり得る。ＦｃＲｎ結合親和性と抗体半減期の間に相関があることを複数の研究が示唆しているが、このような相関の欠如についてもまた報告されている。

ＢＩＡＣＯＲＥ ３０００機器を使用して、Ｈｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎと抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の間の結合動態試験及び親和性結合試験を実施した。Ｈｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＣＭ５チップ表面上に約３００のＲＵで固定した。アミンカップリングによりＨｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ ＰｒｏｔｅｉｎをＣＭ５チップ表面上に約１μｇ／ｍＬの濃度で捕捉したが、タンパク質の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含む泳動バッファーを用いて実施した。それに続き、ｐＨ５．９とｐＨ７．４の両方で、０．０３１５～０．５μＭの範囲の濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を通過させた。抗体の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施した。応答曲線から参照可能なように、ｐＨ７．４において認められた結合はなく（図２１Ｈ）、その一方で、ｐＨ５．９において応答がモニターされた（図２１Ｉ）。それぞれ参照フローセルシグナル及びブランクから、得られた応答曲線を適切に差し引いてから、１：１：１ラングミュア結合にフィッティングすると、約１．８８×１０^６Ｍ－１の推定ＫＤがもたらされた。中性ｐＨにおける結合がないことにより抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が血流へと再放出される可能性が上昇し得ると結論付けることができた。

実施例９：複数の疾患適応症に対する診断ツール／予後判定マーカーとしての抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体
上位の結合物質を診断用抗体として選択するために、全ての高結合抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体をスクリーニングした。ＰＣ３腫瘍細胞株を用いた抗原結合アッセイにより、４つの高結合抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちの１つを選択した。

ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を発現する腫瘍細胞をトリプシン処理により回収した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。１μｇのＣ２７７９、Ｃ２４３８、Ｃ０９４９、Ｃ２５４３をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。全ての関連実験用に、二次抗体、ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを、１：１００の希釈で対照として使用した。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

その他の抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンと比較した際の、ＰＣ３上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄに対して認められた結合の最大パーセンテージゆえに、Ｃ０９４９を診断用抗体試薬として選択し（図２２Ａ）、更に、様々な腫瘍細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を検出することを目的とした。

前立腺癌細胞株の中で、２２ＲＶは、二次抗体対照と比較して５倍高い、最も高い抗原発現を示した（図２２Ｂ）。更に、図２２Ｃに示すいくつかの疾患適応症の複数種の腫瘍細胞株用の抗原結合アッセイに、Ｃ０９４９に限定されない診断用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用した。

様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを使用して、前立腺癌細胞株を含む複数種のがん細胞株において認められた効率的かつ高感度の結合は、上記分子の診断用試薬／予後判定用試薬としての候補資格を強力に支持するものである。

抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の臨床展望
疾患関連性：前立腺癌
ＴＣＧＡ解析
前立腺癌患者におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルに加えて疾患進行に関与する遺伝子についての現状の理解を向上させるために、Ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｏｍｅ ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）データ、転移性前立腺癌を解析した。

ＰＲＡＤプロジェクトはＴＣＧＡの前立腺癌プロジェクトであり、５００のがん症例のデータを含有している。解析を行うデータの適切な供給源を、ＨＴＳｅｑカウントデータを含む遺伝子発現定量、ｍｉＲＮＡ発現定量、及びアイソフォーム発現定量に限定した。表５０は、目的のデータカテゴリーからダウンロードするためにアクセス可能なデータにおける、上記の特定のファイルの存在における症例面での分類を示している。

ＴＣＧＡデータ－トランスクリプトームプロファイリング
トランスクリプトームプロファイリングデータのカテゴリーは、遺伝子のカウント、ｍｉＲＮＡ発現、及びアイソフォーム発現を含有している。ＴＣＧＡに寄託された５００の症例のうち、４９８が原発性腫瘍組織と関連するデータを有している一方で、５２の症例は正常組織と関連する発現データを有している。ファイルは、遺伝子のＥｎｓｅｍｂｌ ＩＤ及びそれぞれの症例内における遺伝子のカウントによって表される、６０４８３の遺伝子及びそのバリアントのリストである。

ＴＣＧＡデータ－転移性症例の同定
５００のＴＣＧＡ ＰＲＡＤプロジェクト症例を解析して、転移性前立腺癌の症例と同定させ得る特性を示す症例を同定した。合計２８９の症例を転移性と同定し、この同定は重要なパラメータに基づいて行われたが、その他のＴＣＧＡ資料では、とりわけ、パラメータであるグリーソンスコア及び処方薬剤を列挙している。２８９のうちの１８のみが適切な正常組織データを有していたが、この解析が疾患の前後における発現レベルの変化と関連していることから、その他の遺伝子のベースライン値、正常データを同様に確立することが必要であった。このことは、全５２の正常組織データを調査することによって達成されたが、これらのデータを使用して、それぞれの症例に由来するそれぞれの遺伝子の全５２の値を考慮に入れて、外れ値を除去してから、遺伝子の「正常ベースライン」値を計算することによって、ベースラインファイルを作成した。正常組織カウントを欠く症例では、比較解析用にベースラインファイルを使用した。

ＴＣＧＡデータ－転移性症例の部分群
転移性症例同定の基準としての役割を果たす同一の重要なパラメータをまた使用して、データを、その他の部分群、例えば、がんのステージ及び目下の治療レジメンなどへと分離したが、このデータを使用して、部分群中におけるＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルを解析した。

続いて、ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子の発現をモニターしたが、プロジェクトに由来する全ての関連するＦＰＫＭファイルをダウンロードしてＣＬＥＣ２Ｄ発現で詳細に検索した。ＦＰＫＭファイルは、腫瘍発現ファイルで、一部の例においては、正常組織発現ファイルで構成されていた。両方のセットを別々に使用して、正常症例及び組織症例中におけるそれぞれのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現の範囲を計算した。加えて、発現値の正規分布を仮定してから平均から２標準偏差超離れた値を破棄することにより、データから外れ値を除外した。

がんにおけるＣＬＥＣ２Ｄの役割をより適切に理解するために、正常組織試料及び腫瘍組織試料における遺伝子の相対発現レベルを解析した。この解析は、特定のがん／症状の全ての症例データを収集して、それぞれのファイルからＣＬＥＣ２Ｄ発現値を抽出してから、値のセットを解析することにより実施した。それぞれの部分集合において、最小値、最大値、及び四分位数値を調査することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プロファイルの「分散」をプロットした。図２３Ａから参照可能なように、ＣＬＥＣ２Ｄは、異なる部分集合症状、例えば、とりわけ、転移、腫瘍ステージ、及び受けた治療などにおいて認められた発現レベルの点から、顕著な存在に合致していると考えられる。

誘導駆動性の発現上昇
異なる腫瘍細胞株の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを測定するために、最初に、ＣＬＥＣ２ＤトランスフェクトＨＤＣＨＯ（Ｃ４５４８）の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現を調査してから、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ（４Ｃ７）抗体を使用することにより、トランスフェクト細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現の分布を観察した。ＣＬＥＣ２Ｄの翻訳が様々な種類の誘導によって大いに調節され得ると仮定して、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣまたはＰＢＭＣの上清のいずれか）などの複数の誘導因子、または前立腺腫瘍細胞株（ＰＣ３）上のＮＫ細胞の活性化因子（例えば、ＬＰＳ）で、様々な前立腺癌細胞型を誘導してから、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルに対する影響をモニターした。様々な誘導因子による処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた。

誘導を行っていない前立腺腫瘍細胞株のうち、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株、すなわち、ＰＣ３及びＤＵ１４５は、非ＣＲＰＣ細胞株、すなわち、ＬＮＣａｐ及び２２ＲＶ１と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ表面発現を示していたが、ＣＬＥＣ２Ｄは、限定するわけではないがＣ２６８５クローンに例示される新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによって精査した（図２３Ｂ）。非誘導条件において得られた観察結果を拡張して、治療用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、例えば、限定するわけではないが、Ｃ２６８５などを使用して、誘導因子の有無における発現レベルの変化を理解した。次に、様々な処理を行った再の全ての前立腺腫瘍細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルの変化を調査するために、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣもしくはＰＢＭＣの上清または単離ＮＫ細胞または単離Ｔ細胞のいずれか）またはＮＫ細胞の活性化因子／誘導因子（ＬＰＳまたはポリＩ：ＣまたはＩＦＮγのいずれか）と共に、前立腺腫瘍細胞を培養してから、Ｃ２６８５抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによってＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを調査した。処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた（図２３Ｃ）。前立腺腫瘍細胞株のうち、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株、すなわち、ＰＣ３、及び非ＣＲＰＣ細胞株、すなわち、ＬＮＣａｐは、上記誘導因子で処理したＤＵ１４５及び２２ＲＶ１と比較して、処理を行った際のＣＬＥＣ２Ｄ表面発現の更なる増強を示していた（図２３Ｃ）。

全てを考慮して特に前立腺癌に焦点をあてると、細胞株、例えば、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株（例えば、ＰＣ３及びＤＵ１４５など）及び非ＣＲＰＣ細胞株（例えば、ＬＮＣａｐ及び２２ＲＶ１など）などにより、腫瘍細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の有意な発現レベルが明らかとなり、その発現レベルは、複数のＴＬＲ処理を含む様々な処理により更に上昇した。本明細書で使用する全ての前立腺癌細胞株が前立腺癌疾患の特定のステージまたは症状を示しＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルと関連し得ることから、細胞株の選択は戦略的であった。本開示において記載及び提示するとおり、前立腺癌細胞株、ＬＮＣａｐ、ＤＵ１４５、２２ＲＶ１、及びＰＣ３は、低度、中程度、及び高度の転移の潜在能を有しており、高い細胞表面ＣＬＥＣ２Ｄ発現を示すＰＣ３が、同定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することでＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１軸による阻害シグナルが遮断される際にＮＫ細胞によって効果的に殺傷されることから、ＣＬＥＣ２Ｄは、前立腺癌における臨床的に適切な標的として確立されている。

実施例１０：がん組織におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現
ＣＬＥＣ２Ｄを多機能性タンパク質として説明し、その受容体であるＣＤ１６１とのその相互作用の機能的結果を十分に説明してきたが、ＣＬＥＣ２Ｄ分布の包括的な特性解析が必要である。ＣＬＥＣ２Ｄは、異なる腫瘍細胞株において活性化されており、ヒトの様々な免疫細胞上に存在していることが認められた。ＣＬＥＣ２Ｄは、いくつかの健康なヒト組織において検出され得、免疫特権部位において非常に広く認められ得る。この情報を使用して、リンパ球間のクロストーク及び免疫寛容におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割に重きを置いて仮説を立てる。

組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）は、免疫組織化学及び蛍光ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含む組織学ベース検査試験を評価するためのハイスループット技術に相当する。直接標識または間接標識のいずれかを行った抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を免疫蛍光染色用の一次抗体として使用し、検出用の標識二次Ａｂを使用する。それにより、様々ながん及び様々なステージのがんとの関係におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割を同定する。

加えて、組織に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原とヒト免疫系の相互作用を理解するために、３Ｄ細胞培養法を使用して、腫瘍細胞上、及びＢ細胞、Ｔ細胞、単球、及びＮＫ細胞などの免疫細胞型上に発現した、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用パートナー（ＣＤ１６１を含む）の間のクロストークを確認する。

添付図面を参照しながら本開示の実施形態について記載してきたが、本開示は正確な実施形態に限定されず、当業者は、添付の特許請求の範囲において定義する本開示の範囲または趣旨を逸脱することなく、それら実施形態において様々な変更及び修正を実施してもよいということを理解すべきである。

ＵＳ Ｂｉｏｍａｘ製のヒト組織マイクロアレイ（ｃａｔ番号ＴＰ２４２ｄ）、ＴＮＭ及び病理学的グレードを含む、正常組織を含む上位４タイプのがん（結腸癌、乳癌、肺癌、及び前立腺癌）組織アレイ（２４症例／２４コア）を使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ０６９４及びＣ２６８５の反応を解析した。前立腺癌試料は以下のとおりである。

ＣＣ１プロトコルとＣＣ２プロトコルの両方に従い、１：１０希釈～１：３０希釈の異なる濃度の抗体で、ＩＨＣ染色を実施した。データは、Ｃ２６８５により強力な反応及び陰性領域からのより少ない阻害が明らかになったことを示唆している。結果を図２３Ｄに記載する。

ＴＣＧＡデータ－全てのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現
全てのＴＣＧＡがんプロジェクトを試験することにより、全がん解析を実施した。プロジェクトに由来する全ての関連するＦＰＫＭファイルをダウンロードしてＣＬＥＣ２Ｄ発現で詳細に検索した。ＦＰＫＭファイルは、腫瘍発現ファイルで、一部の例においては、正常組織発現ファイルで構成されていた。両方のセットを別々に使用して、正常症例及び組織症例中におけるそれぞれのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現の範囲を計算した。加えて、発現値の正規分布を仮定してから平均から２標準偏差超離れた値を破棄することにより、データから外れ値を除外した。

それぞれの部分集合において、最小値、最大値、及び四分位数値を調査することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プロファイルの「分散」をプロットした。図２４Ａから参照可能なように、ＣＬＥＣ２Ｄは、とりわけ、上の表に列挙した異なるがん症状において認められた発現レベルの点から、顕著な存在に合致していると考えられる。

結合試験：フローサイトメトリー及びイメージング
前立腺癌細胞株において観察されたことから、とりわけ、Ｃ２６８５、Ｃ５５１１に例示される同定抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを使用して、観察をその他の腫瘍細胞株へと同様に拡大した。結合をまた、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方を用いてモニターしたが、対応する実験条件は上の記載に類似している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用したフローサイトメトリー観察については、以下の表５３にまとめている。

理解可能なように、様々ながん細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルは、低度から高度または中程度から高度のいずれかであることが判明した。

同様に、新規抗体の疾患関連性を確認するために、本発明者らは、共焦点顕微鏡を用いて、異なる腫瘍細胞株、例えば、肝臓癌腫癌、神経膠腫、卵巣腺癌、肺癌、骨髄腫、リンパ腫、及び乳癌などの表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを確認した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ２６８５を使用して試験したがん細胞株にわたり、様々なレベルのＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた（図２４Ｂ）。肝細胞癌（ＨｅｐＧ２）、乳癌（ＢＴ４７４）、及び神経膠腫（ＬＮ２２９）の表面上において支配的なＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた一方で、卵巣腺癌（ＳｋｏＶ３）、骨髄腫（ＮＣＩ－Ｈ９２９）、及びリンパ腫（Ｒａｍｏｓ）においては、極めて低い発現が認められた、または発現が認められなかった（図２４Ｂ）。

これらのがん細胞株におけるＣＬＥＣ２Ｄの翻訳の調節を確認するために、前立腺腫瘍細胞株と同様に、全ての腫瘍細胞株（ＨｅｐＧ２、ＢＴ４７４、ＬＮ２２９、ＳｋｏＶ３、ＮＣＩ－Ｈ９２９、及びＲａｍｏｓ）に対して、様々な誘導因子、例えば、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣまたはＰＢＭＣのスープのいずれか）など、またはＮＫ細胞の活性化因子（例えば、ＬＰＳ、ＩＦＮ－γ、ポリＩ：Ｃ）で誘導を行ってから、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルをモニターした。処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた（図２４Ｃ）。興味深いことに、ＳｋｏＶ３細胞、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞、及びＲａｍｏｓ細胞において処理後に高いＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた一方で、未処理細胞においては、発現が認められなかった、またはより少ない発現が認められた（図２４Ｃ）。これらの発見は、ＣＬＥＣ２Ｄが、これらの細胞に特定のＴＬＲ刺激が加えられた際に誘導され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して標的とすることが可能な、これらのがん症状における潜在的な標的となり得ることを示している。

細胞傷害
製造業者のプロトコルに従い、ＳＫＯＶ３（卵巣癌細胞株）細胞、ＨｅｐＧ２（肝細胞癌）細胞に例示される腫瘍細胞株をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に２００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより特定の細胞の死滅比率を測定すると、卵巣（ＳＫＯｖ３）癌細胞株及び肝臓（ＨｅｐＧ２）癌細胞株における有意な細胞傷害が示され（図２４Ｄ）、複数の疾患に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の抗腫瘍活性が示された。

理解可能なように、疾患、例えば、乳癌（ＢＴ４７４）、リンパ腫（ｒａｍｏｓ）、肝臓癌（ＨｅｐＧ２）、前立腺癌（ＰＣ３、ＤＵ１４５、ＬＮＣＡＰ、及び２２ＲＶ１）、神経膠腫（ＬＮ２２９）、卵巣腺癌（ＳｋｏＶ３）、骨髄腫（ＮＣＩ－Ｈ９２９）などと関連するいくつかの細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現をモニターするために使用した単離抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、当領域におけるファーストインクラスである。更に、上記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によって誘導された細胞傷害は、これらの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が潜在的に、それぞれの疾患に対する治療法として使用され得るという事実を反映している。まとめると、このことはまた、本開示において推測するとおり、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現が複数のがん細胞株と関連しており、がん生物学において重要な役割を果たし得るということを意味している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いて実施したリスク緩和試験
タンパク質ベースのバイオ医薬品に対する免疫原性は、薬剤の品質及び患者などの重要な特性を含む、製品に特異的な多数の因子が関与する複雑なプロセスである。これらの重要な品質特性としては、一次配列のバリエーション、宿主細胞特異的翻訳後修飾、宿主細胞タンパク質の存在、配合の変化、凝集、化学修飾（酸化、脱アミド化、またはグリコシル化）、及びタンパク質構造の変化を挙げることができる。特定のタイプの特性の正確な寄与は知られてはいないが、抗体薬物製品の一部の重要な品質特性は、配列ベースの免疫原性リスクを高めることにより、患者の安全性に影響を及ぼすことが示唆されている。Ｔ細胞依存性応答は、臨床における生物学的製剤に対する長期親和性成熟免疫応答の主な駆動因子である。これらとしては、少数の例を挙げると、全血、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ＣＤ８＋－枯渇ＰＢＭＣ、不死化細胞株、自家ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した樹状細胞／単球／マクロファージ、及び人工リンパ節系を使用したアッセイ系が挙げられる。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、サイトカイン分泌、活性化細胞表面マーカーの発現、ＨＬＡ－ＤＲ結合ペプチドの同定、シグナル伝達イベント、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による貪食、及び増殖を含む様々な生物学的効果を、免疫細胞活性化の異なる段階において測定してもよい。指定アッセイのバイオ医薬品開発への適用は、初期開発段階における候補選択から免疫原性リスクに影響を及ぼし得る特定の特性の後期段階における評価までの範囲であり得る。本開示は、免疫原性または関連特性に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体関連リスクを評価するための試みについて詳細に説明するものである。

リンパ球増殖試験
３つの独立した実験プロトコル、抗体のウェットコーティング、抗体の空気乾燥コーティング、及び高密度ＰＢＭＣの前培養に続く試験抗体を用いた誘導により、リンパ球の増殖を試験した。

抗体のウェットコーティング
１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲のＣ５５１１に限定されない異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照－抗ＣＤ３抗体、抗ＯＫＴ３抗体を、９６ウェル平底プレートのウェルに加えてから、３７℃インキュベータ内で２～３時間培養した。その後、２００μｌのＤＰＢＳでウェルを３回洗浄した。製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに３００００のＰＢＭＣ細胞を播種した。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

抗体の空気乾燥コーティング
１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３を、９６ウェル平底プレートのウェルに加えてから、安全キャビネット内で空気乾燥させた。最適な空気乾燥のために抗体の容量を５０μｌ未満に制限した。製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。ウェルが乾燥すると、合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに３００００のＰＢＭＣ細胞を播種した。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

ＴＣＲ初回刺激用のＰＢＭＣの高密度前培養に続く溶液中の抗体を用いた誘導
ＰＢＭＣ細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、増殖培地中、１×１０＾６細胞／ｍｌ及び１０×１０＾６細胞／ｍｌの密度で、３７℃で４８時間前培養した。４８時間後、製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに１×１０＾６ＰＢＭＣ細胞／ｍｌを播種した。１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３を、ＰＢＭＣを含有するウェルに加えた。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

フローサイトメトリーのための試料処理
ＰＢＭＣ試料を２００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートと共に０．５％ＢＳＡを含む１００μｌのＤＰＢＳ（最終反応における１：１００希釈）中に細胞を再懸濁させた。細胞を暗黒下、３０分間培養した。その後、細胞を２００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけてから、上清を除去して、０．５％ＢＳＡを含む１００μｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理を陽性対照として使用した図２５Ａ、図２５Ｂ、及び図２５Ｃから観察可能なように、抗ＯＫＴ３抗体で処理したＰＢＭＣは、Ｅｆｌｕｏｒ生存色素を複数の娘集団（ヒストグラム上の矢印によって示される）に分割することによって観察されたとおり、リンパ球増殖を示した。未処理ＰＢＭＣ対照及び１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した試験試料において４日間の培養後に認められた単一集団の出現は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がリンパ球増殖を何ら誘導しなかったことを示している。この観察結果は、抗体のウェットコーティング（図２５Ａ）、抗体の空気乾燥コーティング（図２５Ｂ）、及び高密度ＰＢＭＣ前培養に続く試験抗体を用いた誘導（図２５Ｃ）である３つの独立した試験プロトコルと一致していた。複数の健康ドナーに由来するＰＢＭＣを試験したが、得られた結果は一致していた。

分泌サイトカイン：ＩＦＮ－γ及びＩＬ２の測定
目下のセグメントにおいて前述したとおり、リンパ球増殖アッセイによる理解に加えて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が任意のサイトカイン、例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ２などを誘導するかまたは誘導しないかを確認することが不可欠である。分泌サイトカイン、例えば、限定するわけではないが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ２などの測定をＥＬＩＳＡベースの検出法により実施したが、上で詳述した様々な実験構成／条件、例えば、高密度、ウェットコーティングから回収した上清を、その後の定量用に２４時間間隔で使用した。全ての実験において、使用したそれぞれの抗体の濃度は、抗ＯＫＴ３抗体（１ｕｇ／ｍｌ）及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン（１００ｕｇ／ｍｌ）、例えば、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ４６０８などである。それに続き、抗ＯＫＴ３抗体処理試料から得た上清を１：４の比率で希釈し（１５０ｕｌの１０％ＲＰＭＩ １６４０を加えることによって５０ｕｌの上清を希釈した）、これに対し、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理試料は、上清の更なる希釈を何ら行うことなく直接使用した。同時に、サイトカインＩＬ２を測定するための試料をウェットコーティング法を用いて調製した。ここで、抗ＯＫＴ３抗体処理試料を１：１０の比率で希釈し（２２５ｕｌの１０％ＲＰＭＩ １６４０を加えることによって２５ｕｌを希釈した）、その一方で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理試料から回収した上清を直接使用した。処理を行っていないＰＢＭＣから得た上清を、ＩＦＮ－γまたはＩＬ２のいずれか用の対応する実験に対する対照として使用した。

図２５Ｄから参照可能なように、抗ＯＫＴ３抗体で処理したＰＢＭＣが、上清中における１１５５ｐｇ／ｍＬの濃度の最も高いレベルのＩＦＮγ分泌を示した一方で、試験した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、任意の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンと関連して、ＩＦＮγ産生を３０ｐｇ／ｍＬの濃度を越えて上昇させなかった（図２５Ｄ）。同様に、ＩＬ２測定では、抗ＯＫＴ３抗体が誘導した分泌上昇が１２１．５０ｐｇ／ｍＬであることが判明した一方で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は４．７ｐｇ／ｍＬ超のＩＬ２分泌を生じさせなかった（図２５Ｅ）。まとめると、同定した治療用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に認められた任意のＴリンパ球娘集団の欠如、及び更に、ＩＦＮ－γとＩＬ２の両方において認められた極めて少ない量のサイトカイン分泌により判定すると、免疫原性反応に対する低い可能性を有している。

ラット／非ヒト霊長類において抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いて実施した安全性試験
治療用モノクローナル抗体を用いた毒性試験は、薬理学的に適切な種を用いて実施する必要があるが、それは、ヒトにおいて予測されるのと同様に、モノクローナル抗体が認識する標的抗原を発現することと抗体結合後に類似した薬理学的応答を誘発することの両方が生じる種を意味する。とりわけ、比較的強力なエフェクター機能を有する抗体、例えば、ＩｇＧ１などにおいて、ヒトへと拡大可能な動物におけるモノクローナル抗体の比較可能なエフェクター機能を示す必要がある。それゆえ、ヒトの安全性を予測するために利用可能な最も感受性の高い動物モデルを利用する。しかしながら、交差反応性または交差反応性の欠如は、配列の詳細なｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析、及びヒト抗原タンパク質または標的エピトープと毒性試験に使用する一般的な種における同等タンパク質の間の構造的理解により、予測することができる。利用可能な場合、２つの適切な種（１つはげっ歯類、１つは非げっ歯類）を用いて毒性評価を実施すべきことが望ましい一方で、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、例えば、カニクイザルなどは、その使用を倫理的に正当化するための最も好適な種及び霊長類の使用を最小化する戦略として賛美される。

ヒト、ラット、マウス、及びカニクイザルに由来するＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログの比較配列解析のｉｎ ｓｉｌｉｃｏ理解は、ヒトＣＬＥＣ２Ｄ抗原が、カニクイザルＣＬＥＣ２Ｄホモログと最も高い配列相同性（＞９０％）を共有している一方で、ラットホモログ及びマウスホモログに対する配列相同性は約７０％未満であることを示した。しかしながら、抗体パラトープ配列と接触する重要な残基の存在を同定するために、配列を詳細に調査した。上記の実施により、全ての種が、保存されており抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と相互作用するのに場合により利用可能な接点及び相互作用アミノ酸残基のうちの少なくとも７０％を含有していることが示された。そのため、ラット種、マウス種、及びカニクイザル種から表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログを作製することにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の結合を理解するための努力を試みた。フローサイトメトリーベースの方法を採用して、抗体とＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログの間の結合を評価した。

配列番号８８６、９１０、９１１、９１８と関連し得るが、それぞれの種に由来する全長ＣＬＥＣ２Ｄ相同配列を合成してから、ｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングし、フローサイトメトリーを用いた結合試験用に、そのベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクションした。

相同性試験用の、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントの構築物を用いたトランスフェクション
９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞を、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントの発現用に使用した。１００ｍｌ容量のトランスフェクション用に、１．２５×１０＾８細胞を取り出した。細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、廃培地をデカントし、２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＤＮＡ構築物をトランスフェクションした。５０～１００μｇのそれぞれのｐＣＤＮＡ３．１構築物及び５０～１００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～３日後、２００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの３日後～６日後にフローサイトメトリーを用いて、細胞の細胞表面抗原結合を解析した。

図２６から参照可能なように、限定するわけではないが、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ５５１１、Ｃ４６０８は、ヒトＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対して生じ、２～４倍のＭＦＩの範囲の類似した結合を示した。このことは、げっ歯類種と非ヒト霊長類種の両方におけるＣＬＥＣ２Ｄホモログに対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の広範な特異性を示している。

関連出願
本出願は、２０１９年２月１１日出願の印国仮特許出願第２０１９４１００５３９５号に対する優先権及び利益を主張するものであり、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、免疫学、とりわけ免疫腫瘍学に関する。詳細には、本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する新規抗体分子に関する。本開示はまた、開示抗体分子の複数種のフォーマット及びアミノ酸組成、抗体分子の重鎖及び軽鎖の可変領域、ならびにＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するＣＤＲの組成及び長さ分布に関する。本開示の組成物は、単剤治療薬、または、がんなどの疾患の治療または予防に適切なその他の抗体分子または任意のその他の治療薬との組み合わせのいずれかとして、使用することができる。

抗体ベース／指向性治療アプローチによる免疫細胞チェックポイント受容体の調節は、過去１０年間にわたり一定の関心を集めてきた。これらの受容体の多くは、Ｔ細胞のチェックポイントの調節に関与している。しかしながら、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び骨髄細胞のチェックポイントの調節が注目を集めている。

ＮＫ細胞は、広範囲の標的細胞、例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞などを認識して、それらに対する細胞傷害を誘導する自然免疫の一部である。加えて、ＮＫ細胞は、様々なサイトカインの産生を介した適応免疫応答の誘導及び進行に関与している。一般的に、これらの応答は、幅広く様々な活性化受容体及び阻害受容体の、標的細胞及び免疫細胞の表面上のリガンドとの相互作用によって調節される。

ＮＫ細胞受容体は、２つの主な構造クラス、免疫グロブリンスーパーファミリー及びＣ型レクチン様（ＣＴＬ）スーパーファミリーに分類される。ＮＫＲ－Ｐ１受容体（例えば、ＣＤ１６１）は、重要な免疫調節遺伝子であるＣ型レクチン様膜貫通分子のファミリーであり、脾臓樹状細胞、Ｔ細胞及び顆粒球の亜型を含む様々な細胞型上に発現している。レクチン様転写物１（ＬＬＴ１）分子またはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）分子または破骨細胞阻害性レクチン（ＯＣＩＬ）分子は、ＣＤ１６１受容体に対するリガンドであり、この相互作用は、ＮＫ細胞及びＴ細胞の機能を区別的に調節する。ＣＬＥＣ２Ｄには６種のスプライスバリアントがあるが、アイソフォーム１は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、単球／マクロファージ、活性化Ｂ細胞及び活性化樹状細胞上に発現している標準的な配列であり、ヒトＮＫ細胞活性化受容体として機能している。ＣＬＥＣ２Ｄのポリペプチド鎖は、Ｎ末端細胞質部分、膜貫通領域及びストーク領域、ならびに２つの予測Ｎ－グリコシル化部位を有するＣ末端ＣＴＬ外部ドメインに分類することができる。

ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用により、様々ながんを含むいくつかの疾患シナリオにおいて、宿主防御からの回避が引き起こされる。このような免疫回避はヒト膠芽腫及びその他の疾患において報告されている。更に、Ｂ細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ発現が、ＮＫ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）の間のクロストークを調節すると考えられている。ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用を遮断することにより、様々ながんを治療するための新規の治療選択肢がもたらされる。

ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用の下流シグナル伝達への理解は不十分である。ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１の相互作用により、ＮＫ細胞の機能が阻害され、Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの分泌が促進される。それゆえ、ＣＬＥＣ２Ｄに特異的に結合するモノクローナル抗体を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄとその既知の受容体ＣＤ１６１またはその他の未知の細胞機構の間の相互作用を阻害することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１相互作用の効果を逆転させることができる。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、（ａ）配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｂ）配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｃ）配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｄ）配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｅ）配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、（ｆ）配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、（ｇ）配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、ならびに、（ｈ）配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、からなる群から選択される配列を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）に結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、（ａ）配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｂ）配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｃ）配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｄ）配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｅ）配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｆ）配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｇ）配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、からなる群から選択される配列を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、（ａ）（ｉ）配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉ）配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉｉ）配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｖ）配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖ）配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉ）配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉｉ）配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｖｉｉｉ）配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、から選択される配列を含む重鎖、ならびに、（ｂ）（ｉ）配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉ）配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｉｉ）配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｉｖ）配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖ）配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、（ｖｉ）配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、（ｖｉｉ）配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、から選択される配列を含む軽鎖、を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、（ｉ）配列番号：４３３～４８５から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号：４８６～５４６から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び、（ｉｉｉ）配列番号：５４７～６５３から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ３、を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、軽鎖は、（ｉ）配列番号：６５４～７２６から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号：７２７～７８３から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、及び、（ｉｉｉ）配列番号：７８４～８８５から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、を含み、抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、配列番号：４３３～４８５から選択されるＨＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：４８６～５４６から選択されるＨＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：５４７～６５３から選択されるＨＣ ＣＤＲ３配列、を含む重鎖、配列番号：６５４～７２６から選択されるＬＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：７２７～７８３から選択されるＬＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：７８４～８８５から選択されるＬＣ ＣＤＲ３配列、を含む軽鎖、または、これらの組み合わせ、を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９３０～１００３から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１８～９２０から選択される配列を含むカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１１～９１５から選択される配列を含むマウスＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、配列番号：９１０の配列を含むラットＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、及び／または、配列番号：９１６～９１７から選択される配列を含むイヌＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、に結合する。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、軽鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列を含み、軽鎖は、表９Ａに開示されるＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列を含む。

本開示は、重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、重鎖は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生殖細胞系ファミリーの重鎖フレームワーク領域配列を含み、軽鎖は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を含む。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体である。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、受容体へのＣＬＥＣ２Ｄの結合を遮断する。一部の実施形態では、受容体はＣＤ１６１受容体を含み、ＣＤ１６１受容体は、配列番号：９２１～９２９から選択される配列を含む。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト、マウス、またはキメラである。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びディアボディフラグメントからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、１００ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトＣＬＥＣ２Ｄに結合する。

本開示は、本開示に記載のペプチド（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）または核酸を含む医薬組成物を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。

本開示の医薬組成物の一部の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、及び防腐剤のうちの少なくとも１つを更に含む。

本開示は、配列番号：１０９～２１６から選択されるアミノ酸重鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、配列番号：３２５～４３２から選択されるアミノ酸軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列に記載の、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列に記載の、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列に記載の重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列に記載の軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖フレームワーク領域アミノ酸配列に記載のフレームワーク領域アミノ酸配列を含む重鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本明細書で開示する表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖フレームワーク領域アミノ酸配列に記載のフレームワーク領域アミノ酸配列を含む軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

本開示は、配列番号：１０９～２１６から選択されるポリペプチドをコードする第１の核酸、及び配列番号：３２５～４３２から選択されるポリペプチドをコードする第２の核酸、を含む、組成物を提供する。

本開示は、本開示の核酸を含むベクターを提供する。

本開示は、本開示の核酸、核酸組成物、またはベクターを含む細胞を提供する。一部の実施形態では、細胞は真核細胞である。一部の実施形態では、真核細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は２９３－６Ｅ細胞またはＤＧ４４細胞である。一部の実施形態では、細胞は本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現している。一部の実施形態では、細胞は生殖細胞系細胞である。

本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する細胞を提供する。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。

本開示は、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む、疾患の治療を必要とする対象に使用する組成物を提供する。

本開示は、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む、疾患の予防または治療を必要とする対象のための医薬品の製造に使用する組成物を提供する。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、疾患は関節リウマチである。一部の実施形態では、対象は、関節リウマチを有することによってもたらされる骨減少を示す。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における骨減少を遅延または逆転させる。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌（ｃｅｎｄｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、及び肺腺癌からなる群から選択される。一部の実施形態では、がんの細胞は、細胞表面上にＣＬＥＣ２Ｄを発現している。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、対象における抗腫瘍効果をもたらす。

本開示の使用のための方法または組成物の一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは単剤治療薬として投与される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔ細胞指向性免疫調節剤、第２の免疫調節剤、がんワクチン、養子細胞療法剤、腫瘍崩壊ウイルス、第２の抗体治療薬、放射線療法剤、抗体薬物複合体、低分子干渉ＲＮＡ、化学療法剤、免疫療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、有糸分裂阻害剤、またはこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、養子細胞療法剤はＣＡＲ－Ｔ療法薬を含む。一部の実施形態では、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、疾患の徴候または症候を緩和する。

本開示は、少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリを提供し、抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する。

本開示の抗体ライブラリの一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９２０及び配列番号：９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む。本開示の抗体ライブラリの一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９０９及び配列番号：９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、腫瘍細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアント、またはＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアントはＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のフラグメントを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログは、ヒト、マウス、イヌ、ラット、またはカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄを含む。

本開示は、免疫の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、自然免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の向上を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、適応免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、治療有効量の本開示の抗体または抗原結合フラグメントまたは本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を対象に投与することを含む。

本開示は、（ａ）抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、複数のファージを形質転換してファージライブラリを作製すること（ファージライブラリ内のファージは、ファージの表面上に抗体遺伝子のライブラリを提示している）、（ｂ）ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原でファージライブラリをパニングすることにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製すること、（ｃ）工程（ｂ）を少なくとも１回または少なくとも２回繰り返すこと、（ｄ）濃縮ファージライブラリに由来する抗体遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入すること、（ｅ）酵母表面ディスプレイライブラリから、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々の酵母細胞を単離すること、（ｆ）ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する単離された個々の酵母細胞を培養して、酵母表面ディスプレイライブラリクローンを作製すること、及び、（ｇ）酵母表面ディスプレイライブラリクローンをシークエンシングすること、により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を単離すること、を含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法を提供する。

本開示のスクリーニング方法の一部の実施形態では、パニング工程（ｂ）は、ＣＬＥＣ２Ｄをコーティングした磁性ビーズでファージライブラリをパニングすることを含む。一部の実施形態では、導入工程（ｄ）は、抗体遺伝子を酵母発現ベクターにクローニングして、酵母細胞を形質転換することを含む。一部の実施形態では、方法は、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む。一部の実施形態では、試験工程（ｅ）は、フローサイトメトリーを用いて、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を発現する酵母細胞を単離することを含む。一部の実施形態では、方法は、フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返すことを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む。

本開示は、（ａ）プロモーターをコードする配列及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントをコードする配列を含むベクターで哺乳動物細胞を形質転換すること（プロモーターをコードする配列及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントをコードする配列は機能的に連結している）、（ｂ）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗体フラグメントの発現に好適な条件下で哺乳動物細胞を培養すること、（ｃ）培養哺乳動物細胞を遠心分離にかけて上清を作製すること、（ｄ）上清を濾過すること、及び、（ｅ）液体クロマトグラフィーを使用して濾過上清を精製すること、を含む、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法を提供する。

本開示の方法の一部の実施形態では、濾過工程（ｄ）は３μｍ～３０μｍフィルターを含む。一部の実施形態では、濾過工程（ｄ）は０．２２μｍフィルターを更に含む。一部の実施形態では、精製工程（ｅ）はプロテインＡカラムを含む。一部の実施形態では、プロテインＡカラムは、宿主細胞タンパク質を除去するために高塩洗浄バッファーで処理される。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ｐＨ３．０～４．０の３０ｍＭリン酸バッファーを使用して溶出される。一部の実施形態では、精製工程（ｅ）は陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）工程を更に含む。一部の実施形態では、ＡＥＸ工程はＱセファロースカラムを含む。一部の実施形態では、Ｑセファロースは、１０～１００ｍＭヒスチジンを含む予備平衡化バッファーで予め平衡化される。一部の実施形態では、予備平衡化バッファーは、クエン酸塩、リン酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、酢酸塩、またはこれらの組み合わせを更に含む。一部の実施形態では、予備平衡化バッファーは４．５～６．５のｐＨを含む。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、工程（ｅ）において、２００～１０００ｍＭ ＮａＣｌ、ＫＣｌ、またはこれらの組み合わせを含む溶出バッファーで溶出される。一部の実施形態では、溶出バッファーは４．５～６．５のｐＨを含む。

一態様では、本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する新規モノクローナル抗体の単離に関する。新規抗体は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用を調節（例えば、阻害）して、ＮＫ細胞／免疫細胞介在性細胞傷害及び／またはサイトカイン産生を変化させる。

別の態様では、本開示は、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）及び／またはＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）及び／またはＡＤＣＰ（抗体依存性細胞貪食）により腫瘍細胞を殺傷し得るこれらの新規抗体が特異的に認識するＣＬＥＣ２Ｄを発現するがん細胞に関する。

関連する態様では、本開示は、高多様性抗体遺伝子ライブラリから抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を選択することを含む、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を作製するための方法に関する。一実施形態では、高多様性抗体遺伝子ライブラリは、ファージ表面ディスプレイ及び／または酵母表面ディスプレイにより提示されている。一実施形態では、ファージ及び／または酵母が提示した高多様性抗体遺伝子ライブラリは、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を標的として使用して選択される。一実施形態では、選択された抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子は、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）において発現している。一実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する単一細胞クローンを細胞株へと発達させて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現を確認する。一実施形態では、選択された抗体クローンの過剰発現は、所定の培地、補足剤、及び、上流プロセスの開発として本明細書に累積的に記載した特定のバイオリアクタープロセスにより実現される。一実施形態では、細胞株から発現する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、例えば、様々な濾過及びクロマトグラフィーを介して、均一になるように精製されるが、本明細書では、下流精製プロセスと呼ばれる。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び治療有効量の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌（ｒｅｎａｌａｄｉｎｏｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胎児性癌、類内膜癌（ａｎｏｍｅｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌（ｌｅｐｔｏｍａｎｉｇｉｏ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症（ｍｅｎｉｇｕａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、中前腎癌（ｍｅｓｏｍｅｔｏｎｅｐｈｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌（ｓｑｕａｍａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫（ｃｏｐｐｉｃｅｓ ｓａｒｃｏｍａ）、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫（ａｕｓｔｉｏｇｅｎｃｉ ｓａｒｃｏｍａ）、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む。一部の実施形態では、対象のがん細胞は、がんを有していない正常細胞と比較した場合に、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を有している。一部の実施形態では、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄは、不十分な予後効果と関連している。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である。一部の実施形態では、自己免疫性障害または炎症性障害は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、狼瘡、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、または多発性硬化症である。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である。一部の実施形態では、自己免疫性障害は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、狼瘡、炎症性腸疾患、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、または多発性硬化症である。

本開示の方法の一部の実施形態では、疾患は感染性疾患である。一部の実施形態では、疾患は、ＨＩＶ感染症、ヒトサイトメガロウイルス感染症、Ｂ型肝炎感染症、Ｃ型肝炎感染症、エボラウイルス感染症、デング熱、黄熱、リステリア症、結核、コレラ、マラリア、リーシュマニア症、またはトリパノソーマ感染症である。

別の態様では、様々な生物物理学的パラメータ、抗原認識、腫瘍細胞表面結合、腫瘍細胞死、サイトカインの産生、及び作用機序を定義するための下流遺伝子の解析、を含む複数のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ及びｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して、ＣＨＯ細胞株から産生される新規抗体を特性決定する。これらのモノクローナル抗体はまた、長期安定性、がん、感染性疾患、自己免疫疾患、及び慢性疾患の治療用途、予後判定用途、及び診断用途に適した様々な配合について試験される。別の態様では、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍抑制アッセイを実施して、単剤治療薬またはその他の治療用製品との組み合わせとしての、選択した抗体の抗腫瘍活性を確立させる。

一態様では、本開示は更に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する新規かつ固有のモノクローナル抗体の単離に関する。一部の態様では、新規抗体は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用に影響を及ぼして、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞）介在性細胞傷害及び／またはサイトカイン産生を変化させる。一部の態様では、ＣＬＥＣ２Ｄを発現する様々ながん細胞は、これらの新規抗体によって認識され、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）及び／またはＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）及び／またはＡＤＣＰ（抗体依存性細胞貪食）を含む様々な方法による細胞傷害効果が明らかとなっている。一態様では、本開示は、リンパ球間のクロストーク及び免疫寛容におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割に関する主眼点及び仮説を提供する。別の態様では、承認済み治療薬または前臨床または臨床試験中の治療薬の分野において、本明細書で提供する新規抗体分子及び関連組成物を同定するための方法は、製造性／開発性に適した薬学的特徴を含む。

一態様では、本開示は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、免疫の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、自然免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、適応免疫の調節（例えば、向上）を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。

一態様では、本開示は、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の上昇を必要とする対象においてそれを実施するための方法に関し、治療有効量の抗体または抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、抗体は、本明細書で開示する表９Ａ及び表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、
ａ．配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｂ．配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｃ．配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｄ．配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｅ．配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
ｆ．配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
ｇ．配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、ならびに、
ｈ．配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
からなる群から選択される配列を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）に結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、
ａ．配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｂ．配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｃ．配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｄ．配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｅ．配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｆ．配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
ｇ．配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
からなる群から選択される配列を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３）
ａ．
ｉ．配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｉ．配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｉｉ．配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｖ．配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｖ．配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｖｉ．配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｖｉｉ．配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
ｖｉｉｉ．配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
から選択される配列を含む重鎖、ならびに、
ｂ．
ｉ．配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｉ．配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｉｉ．配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｉｖ．配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｖ．配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
ｖｉ．配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
ｖｉｉ．配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
から選択される配列を含む軽鎖、
を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目５）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目６）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、前記軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目７）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、
（ｉ）配列番号：４３３～４８５から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号：４８６～５４６から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び、
（ｉｉｉ）配列番号：５４７～６５３から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ３、
を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目８）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、
（ｉ）配列番号：６５４～７２６から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号：７２７～７８３から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、及び、
（ｉｉｉ）配列番号：７８４～８８５から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
を含み、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目９）
ａ．配列番号：４３３～４８５から選択されるＨＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：４８６～５４６から選択されるＨＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：５４７～６５３から選択されるＨＣ ＣＤＲ３配列、を含む重鎖、
ｂ．配列番号：６５４～７２６から選択されるＬＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：７２７～７８３から選択されるＬＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：７８４～８８５から選択されるＬＣ ＣＤＲ３配列、を含む軽鎖、または、
ｃ．これらの組み合わせ、
を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１０）
ａ．配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
ｂ．配列番号：９１８～９２０から選択される配列を含むカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
ｃ．配列番号：９１１～９１５から選択される配列を含むマウスＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
ｄ．配列番号：９１０の配列を含むラットＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、及び／または、
ｅ．配列番号：９１６～９１７から選択される配列を含むイヌＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
に結合する、項目１から項目９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１１）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１２）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの重鎖アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの軽鎖アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１３）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１４）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１５）
重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生殖細胞系ファミリーの重鎖フレームワーク領域配列を含み、前記軽鎖は、表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１６）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１７）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１８）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目１９）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２０）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２１）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２２）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２３）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２４）
前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２である、項目６２から項目６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２５）
モノクローナル抗体である、項目１から項目２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２６）
受容体へのＣＬＥＣ２Ｄの結合を調節または遮断する、項目１から項目２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２７）
前記受容体はＣＤ１６１受容体を含み、前記ＣＤ１６１受容体は、配列番号：９２１～９２９から選択される配列を含む、項目２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２８）
ヒト、マウス、またはキメラである、項目１から項目２７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目２９）
前記抗原結合フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びディアボディフラグメントからなる群から選択される、項目１から項目２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３０）
前記抗体はアフコシル化されている、項目１から項目２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３１）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはアフコシル化されている、項目１から項目３０のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３２）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは前記抗体領域においてアフコシル化されている、項目１から項目３１のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３３）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、項目１から項目３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３４）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、項目１から項目３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３５）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域を含む、項目１から項目３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３６）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む、項目１から項目３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３７）
１００ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトＣＬＥＣ２Ｄに結合する、項目１から項目３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３８）
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合し、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないアミノ酸部位からなる、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目３９）
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４０）
アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４１）
アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４２）
配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４３）
配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、項目１から項目３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４４）
配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、項目１から項目４３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４５）
前記抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する、項目４４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
（項目４６）
項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。
（項目４７）
緩衝剤、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、及び防腐剤のうちの少なくとも１つを更に含む、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目４８）
配列番号：１０９～２１６から選択されるアミノ酸重鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
（項目４９）
配列番号：３２５～４３２から選択されるアミノ酸軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
（項目５０）
項目１、項目３、項目４、項目６、項目７、及び項目９から項目３７のいずれか１項に記載の重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
（項目５１）
項目２、項目３、項目５、項目６、項目８、及び項目９から項目３７のいずれか１項に記載の軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
（項目５２）
配列番号：１０９～２１６から選択されるポリペプチドをコードする第１の核酸、及び配列番号：３２５～４３２から選択されるポリペプチドをコードする第２の核酸を含む、組成物。
（項目５３）
項目４８から項目５１のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
（項目５４）
項目４８から項目５１のいずれか１項に記載の核酸、項目５２に記載の組成物、または項目５３に記載のベクターを含む、細胞であって、真核細胞である、前記細胞。
（項目５５）
前記真核細胞は哺乳動物細胞である、項目５４に記載の細胞。
（項目５６）
前記哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、項目５５に記載の細胞。
（項目５７）
前記哺乳動物細胞は２９３－６Ｅ細胞またはＤＧ４４細胞である、項目５６に記載の細胞。
（項目５８）
項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する細胞。
（項目５９）
疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目６０）
前記疾患または障害は、前記疾患または前記障害の治療を必要とする対象の様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連している、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記疾患または障害は、前記疾患または前記障害の治療を必要とする対象の様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの高発現と関連している、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記細胞は免疫細胞である、項目６０から項目６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記免疫細胞はＮＫ細胞である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記細胞はがん細胞である、項目６０から項目６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記細胞は微生物に感染した細胞である、項目６０から項目６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記微生物は、細菌、ウイルス、真菌、寄生性微生物、または原虫である、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記微生物は細胞内細菌である、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記疾患は関節リウマチである、項目５９から項目６７のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記対象は、関節リウマチを有することによってもたらされる骨減少を示す、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記対象における前記骨減少を遅延または逆転させる、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記疾患はがんである、項目５９から項目６７のいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
前記がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌からなる群から選択される、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記がんは、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮細胞癌及び子宮頸腺癌、胆管癌、結腸腺癌、リンパ系腫瘍びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、多形膠芽腫、頭頸部扁平上皮細胞癌、色素嫌性腎癌、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳低グレード神経膠腫、肝臓肝細胞癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜黒色腫からなる群から選択される、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記対象における抗腫瘍効果をもたらす、項目７１から項目７３のいずれか１項に記載の方法。
（項目７５）
治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記疾患の徴候または症候を緩和する、項目５９から項目７４のいずれか１項に記載の方法。
（項目７６）
前記治療有効量の項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害する、項目５９から項目７５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７７）
微生物によって引き起こされる疾患、障害、または感染症に対する免疫応答の活性化の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、前記免疫応答は、自然免疫応答もしくは適応免疫応答またはこれらの組み合わせである、前記方法。
（項目７８）
ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の上昇を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の項目１から項目４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目７９）
少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリであって、前記抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する、前記抗体ライブラリ。
（項目８０）
前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む、項目７９に記載の抗体ライブラリ。
（項目８１）
前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、腫瘍細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアント、または前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログを含む、項目７９または項目８０に記載の抗体ライブラリ。
（項目８２）
前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の前記バリアントはＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のフラグメントを含む、項目８１に記載の抗体ライブラリ。
（項目８３）
前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の前記ホモログは、ヒト、マウス、イヌ、ラット、またはカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄを含む、項目８２に記載の抗体ライブラリ。
（項目８４）
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法であって、
ａ）抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、複数のファージを形質転換してファージライブラリを作製することであって、前記ファージライブラリ内の前記ファージは、前記ファージの表面上に前記抗体遺伝子のライブラリを提示している、前記作製すること、
ｂ）前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対する前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原で前記ファージライブラリをパニングすることにより、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製すること、
ｃ）前記工程（ｂ）を少なくとも１回または少なくとも２回繰り返すこと、
ｄ）前記濃縮ファージライブラリに由来する前記抗体遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入すること、
ｅ）前記酵母表面ディスプレイライブラリから、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々の酵母細胞を単離すること、
ｆ）前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する前記単離された個々の酵母細胞を培養して、酵母表面ディスプレイライブラリクローンを作製すること、及び、
ｇ）前記酵母表面ディスプレイライブラリクローンをシークエンシングすること、
により、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を単離すること、
を含む、前記方法。
（項目８５）
前記パニング工程（ｂ）は、ＣＬＥＣ２Ｄをコーティングした磁性ビーズで前記ファージライブラリをパニングすることを含む、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記導入工程（ｄ）は、前記抗体遺伝子を酵母発現ベクターにクローニングすることを含む、項目８４に記載の方法。
（項目８７）
ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、前記抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
試験工程（ｅ）は、フローサイトメトリーを用いて、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を発現する酵母細胞を単離することを含む、項目８４に記載の方法。
（項目８９）
前記フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返すことを更に含む、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する前記抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む、項目８４から項目８９のいずれか１項に記載の方法。
（項目９１）
抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法であって、
ａ）プロモーターをコードする配列及び前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする配列を含むベクターで哺乳動物細胞を形質転換することであって、前記プロモーターをコードする前記配列及び前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする前記配列は機能的に連結している、前記形質転換すること、
ｂ）前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントの発現に好適な条件下で前記哺乳動物細胞を培養すること、ならびに、
ｃ）前記培養哺乳動物細胞から前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを得て、上清を作製すること、
を含む、前記方法。
（項目９２）
前記工程（ｃ）は、前記培養哺乳動物細胞の前記上清を回収することを含む、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
工程（ｄ）前記工程（ｃ）の後に前記上清を濾過すること、を更に含む、項目９１または項目９２に記載の方法。
（項目９４）
工程（ｅ）前記濾過上清を精製すること、を更に含む、項目９１から項目９３のいずれか１項に記載の方法。
（項目９５）
疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、
ａ．前記対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び、
ｂ．治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を前記対象に投与すること、
を含む、前記方法。
（項目９６）
前記疾患はがんである、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
前記対象のがん細胞は、がんを有していない正常細胞と比較した場合に、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を有している、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
高レベルのＣＬＥＣ２Ｄは、不十分な予後効果と関連している、項目９５に記載の方法。
（項目９９）
前記疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である、項目９５に記載の方法。

本開示の特徴は、添付図面と組み合わせた以下の記述から完全に明らかとなる。特許ファイルまたは出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有している。カラー図面を備えた本特許または特許出願公開の写しは、請求及び必要な手数料の納付に応じ、特許局によって提供される。図が本開示によるいくつかの実施形態のみを表しており、本開示の範囲を限定するものであるとみなされないという理解を前提として、添付図面を使用して本開示を更に説明する。

Ａ～Ｃは、概略フォーマットにおける本開示を示す。Ａは、ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１が相互作用して腫瘍細胞の免疫細胞回避がもたらされるシナリオを示す。Ｂは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用してＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用が遮断されて溶解シグナルに続く腫瘍細胞の殺傷がもたらされるシナリオを示す。Ｃは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原が抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と結合することにより、ＮＫ細胞の活性化及びサイトカイン発現の上昇がもたらされ、その後、直接殺傷またはその他の免疫細胞の関与のいずれかによる高い標的細胞排除がもたらされるシナリオを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ外部ドメインを可溶性抗原として発現させるための哺乳動物発現プラスミドの作製を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｑ７２－Ｖ１９１）の精製を示すＩＭＡＣクロマトグラフィープロファイルを示す（挿入図はＣＬＥＣ２Ｄ抗原の溶出特性を示している）。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。充填、洗浄、及び最終的に溶出したＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のＳＤＳ－ＰＡＧＥプロファイルを示す（精製ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質が均一かつ純粋であり更なる下流実験用に好適であることを示している）。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する市販の抗体でプローブした精製ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のウェスタンブロットを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。異なる濃度の精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する市販の抗体の結合特異性を示すＥＬＩＳＡアッセイを示す。 哺乳動物細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現及び精製を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の脱グリコシル化を明らかとした、還元条件下、ＰＮＧａｓｅ酵素と共に３時間または６時間培養した精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を示す。 ファージ表面ディスプレイ系及び酵母表面ディスプレイ系を使用して標的ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対してナイーブ抗体ライブラリをスクリーニングする抗体ライブラリスクリーニング戦略の概略図を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。フローサイトメトリーによる磁性ビーズコンジュゲート効率の推定を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。Ｆａｂライブラリのパニング後における別々の重鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。Ｆａｂライブラリのパニング後における別々のカッパ軽鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。ＳｃＦｖライブラリのパニング後における別々の重鎖クローンの制限酵素消化を示す。 磁性ビーズ上にコーティングされたＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた抗体ライブラリのファージパニングを示す。ＳｃＦｖライブラリのパニング後における別々のカッパ軽鎖クローンの制限酵素消化を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。エレクトロポレーションによるＳｃＦｖ抗体ライブラリの作製に向けた酵母コロニーを表すプレート画像を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。半数体重鎖及び軽鎖抗体ライブラリの作製を表すプレート画像を示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。重鎖抗体ライブラリまたは軽鎖抗体ライブラリを含有する半数体酵母株の交配効率を示すプレート画像を示す（交配効率は約２９％であると推定された）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。酵母細胞の表面上に発現した抗体分子のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合の代表的なフローサイトメトリー解析を示す（ＳｃＦｖライブラリを複数回ソートして高親和性酵母クローンを濃縮した）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。酵母細胞の表面上に発現した抗体分子のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合の代表的なフローサイトメトリー解析を示す（Ｆａｂライブラリを複数回ソートして高親和性酵母クローンを濃縮した）。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。発現の観点と抗原認識の観点の両方における、複数ラウンドのソーティング後における、酵母クローンの濃縮に関する代表的なデータを示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。個々の酵母クローンを分離してＣＬＥＣ２Ｄ抗原で試験を行い、高親和性抗体クローンを発現する酵母細胞株を同定したことを示す。 酵母表面ディスプレイを使用したＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体のスクリーニングを示す。可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のモノクローナル抗体クローンとの結合パーセンテージを示すための代表的なフローサイトメトリーデータを示す。少なくとも約８０％のクローンが検出可能かつ特異的にＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合した。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。選択分子のＣＤＲＨ３長分布を示す棒グラフを示す。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。重鎖ＣＤＲＨ３の相対アミノ酸頻度分布を示す棒グラフを示す（Ｋａｂａｔ命名法）。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。重鎖コンセンサスファミリー分布を示す円グラフを示す。 酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングしたクローンのピアグループ配列解析を示す。軽鎖コンセンサスファミリー分布を示す円グラフを示す。 Ａは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変重鎖遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｂは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変軽鎖（カッパ）遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 Ａは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変重鎖遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｂは、全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによるスクリーニング後に、選択抗体可変軽鎖（カッパ）遺伝子をクローニングするために設計されたベクターを示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。遺伝子合成によりＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子発現構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認したことを示す。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。トランスフェクトＣＨＯ細胞表面（Ｃ４５４８）上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現を示す市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）を用いたフローサイトメトリーを示す。 細胞表面上に全長ＣＬＥＣ２Ｄを発現させるための哺乳動物発現系を示す。共焦点顕微鏡（６０×）による、固定細胞上及び非透過処理細胞上の抗ＣＬＥＣ２Ｄ（４Ｃ７）抗体を用いてモニターしたＣＬＥＣ２Ｄの表面発現を示す。Ｃ４５４８細胞上に抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合が認められた一方で、非トランスフェクトＣＨＯ細胞では結合は認められなかった。核をＤＡＰＩ（青色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥプロファイルを示す。精製抗体を非還元条件と還元条件の両方のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析に供した。Ｃ３５６６から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを、レーン９、還元ゲル及び非還元ゲルの上部パネルに示した。レーン４のクローンを除く下部パネルの全てのクローンにより、還元ゲル及び非還元ゲルにおける良好なプロファイルが明らかとなった。分解産物を示すクローンについては、更なる試験用には検討しなかった。実施例セクションに記載のとおり、その他のクローンに、類似した基準を採用した。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。フローサイトメトリーによる、ＣＨＯ細胞の表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用を示す。全長ＣＬＥＣ２Ｄ構築物をトランスフェクションしていないまたはトランスフェクションしたのいずれかのＣＨＯ細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ結合について、Ｃ４５７７、Ｃ２９０７、Ｃ３５６６、Ｃ５５８２、Ｃ５３９７に例示される代表的な抗体クローンを評価した。右方向へのＭＦＩのシフトは、対応するクローンの表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合を示した。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。ＰＣ３腫瘍細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用の代表的な画像を示す。表２２に示すとおり、結合の定性的評価を実施した（低い結合を示す「＋」から非常に高い結合を示す「＋＋＋」）。例示として、抗体Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 一過的にトランスフェクションしたＣＨＯ細胞から精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを示す。プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して抗体を精製した。ＰＣ３腫瘍細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の相互作用の代表的な画像を示す。表２２に示すとおり、結合の定性的評価を実施した（低い結合を示す「＋」から非常に高い結合を示す「＋＋＋」）。例示として、抗体Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。表面発現ＣＬＥＣ２Ｄを用いて実施し、フローサイトメトリーを使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現プラスミドをトランスフェクションしたＣＨＯミニプール試料から得た上清を使用してモニターした、結合試験を示す。ヒストグラムは、様々なクローンにおいて認められた、Ｃ４５４８細胞上に発現した表面ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合の度合いを表している。ＭＦＩの倍率変化を個々のミニプールの結合に対してプロットしている。より高い倍率変化は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのより強い結合を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。単一細胞クローンスクリーニングを示す（単一細胞クローン株から発現した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を精製してから、フローサイトメトリー実験用に使用した）。蛍光シグナルのより高い倍率変化は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのより強い結合を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。安定ＣＨＯ細胞株から産生されたモノクローナル抗体のフローサイトメトリー解析を示す（単一細胞クローン株から発現した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を精製してから、フローサイトメトリー実験用に使用した）。フローサイトメトリーにより、ＣＨＯ細胞の表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合について、複数のモノクローナル細胞株が発現する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（例えば、Ｃ４６０８、Ｃ５０９３、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ６７２６、Ｃ７７２０、Ｃ９１０３、Ｃ５８４８、及びＣ３４５２など）を試験した。複数の安定クローンにおける平均蛍光強度の倍率の上昇を推定すると、３～１０倍の範囲であることが認められた。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。ＰＣ３腫瘍細胞株上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原とのクローンＣＨＯ細胞株から産生された抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の相互作用の代表的な画像を示す。本明細書に記載するとおり、様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＰＣ３細胞の表面上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原への特異的で、更に有意な表面結合を示した。核をＤＡＰＩ（紫色）で対比染色した。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定ＣＨＯ細胞株の開発を示す。抗体重鎖及び軽鎖遺伝子の安定した導入を確認するために抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体－安定細胞クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に実施した定量的ＲＴ ＰＣＲを示す。ＧＡＰＤＨハウスキーピング遺伝子を内部標準物質として使用した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する６０世代のＣＨＯモノクローナル株について、試験を実施した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ２４３８、Ｃ３４５２、Ｃ０９４９の、前立腺癌細胞株ＰＣ３上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ上への結合を示す。右方向へのＭＦＩのシフトは、ＰＣ３細胞株上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原への抗体の結合を示した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。１：５の比率のエフェクター細胞としてのＰＢＭＣ、固定濃度の１００ｕｇ／ｍＬの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析を示す。本明細書において機能性について評価したクローンは、ドナー１に由来するＰＢＭＣと共にＣ５５１１、Ｃ４６０８、及びＣ６４８１であった一方で、クローンＣ５３９２及びＣ３４５２から精製した抗体をドナー２に由来するＰＢＭＣと共に試験した。ＰＣ３生細胞のパーセンテージはＡＰＣ（ｅＦｌｕｏｒ ６７０）陽性細胞によって示されており、死細胞はＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞を示している。対応する単一細胞クローンをそれぞれのプロットに対して標識した。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。濃度を１０μｇ／ｍＬから２００ｕｇ／ｍＬへと上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１）と共に、エフェクター細胞（１：５）としてのＰＢＭＣを使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析により、高用量依存的な腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エフェクター細胞としてのＰＢＭＣ、固定濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用して、ＰＣ３標的細胞に対して実施した細胞傷害アッセイの代表的なフローサイトメトリー解析を示す。腫瘍：エフェクター細胞の比率（Ｔ：Ｅ）を１：５から１：１０へと上昇させた。データにより、エフェクター細胞の比率が上昇するにつれてより高いレベルの腫瘍細胞の細胞傷害がもたらされるということが明らかとなった。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エンドポイント細胞傷害アッセイにより、１０μｇ／ｍＬにおける腫瘍細胞の有意な細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイではまた、共焦点顕微鏡を使用して、標的細胞を殺傷するための抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の最適な濃度を同定する。上部パネルは、予測どおりに細胞傷害が認められなかった全ての対照処理を示しており、下部パネルは、ＰＢＭＣ（Ｔ：Ｅ＝１：５）の存在下、濃度を上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）で処理した際の、高いＰＣ３腫瘍細胞死を示している。最大細胞死は５０ｕｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において認められた。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。エンドポイント細胞傷害アッセイにより、１０μｇ／ｍＬにおける腫瘍細胞の有意な細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイではまた、共焦点顕微鏡を使用して、標的細胞を殺傷するための抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の最適な濃度を同定する。上部パネルは、予測どおりに細胞傷害が認められなかった全ての対照処理を示しており、下部パネルは、ＰＢＭＣ（Ｔ：Ｅ＝１：５）の存在下、濃度を上昇させていった抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）で処理した際の、高いＰＣ３腫瘍細胞死を示している。最大細胞死は５０ｕｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において認められた。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。共焦点顕微鏡を使用した、標的細胞を殺傷するための選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用したエンドポイント細胞傷害アッセイを示す。細胞傷害は、ＰＣ３腫瘍細胞のみ、ＰＢＭＣのみ、アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を伴うＰＢＭＣのような対照処理において認められなかった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６、Ｃ５８４８、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１）クローンを使用した際に、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が認められた。サイズを拡大した画像により、ＰＣ３腫瘍細胞がエフェクター細胞に取り囲まれて腫瘍細胞死が誘導されていることが明らかとなった。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能特性解析を示す。共焦点顕微鏡を使用した、標的細胞を殺傷するための選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用したエンドポイント細胞傷害アッセイを示す。細胞傷害は、ＰＣ３腫瘍細胞のみ、ＰＢＭＣのみ、アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を伴うＰＢＭＣのような対照処理において認められなかった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６、Ｃ５８４８、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１）クローンを使用した際に、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が認められた。サイズを拡大した画像により、ＰＣ３腫瘍細胞がエフェクター細胞に取り囲まれて腫瘍細胞死が誘導されていることが明らかとなった。ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。精製したＮＫ細胞及び１００ｕｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６４８１及びＣ５５１１）で処理した際の、ＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を示す。データにより、１：１のＴ：ＥにおけるＰＣ３腫瘍細胞の８６％ＮＫ細胞介在性細胞傷害が明らかとなった。ＰＣ３死細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。アイソタイプ対照（ヒトＩｇＧ１抗体）または１：０．５から開始して１：１０までＴ：Ｅ比率を上昇させていったＮＫ細胞のみのいずれかと共に培養した際に、標的細胞死が認められなかったことを示す。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のみがＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を誘導できないことを示す。スケールバーは１０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１（５０ｕｇ／ｍＬ）により、１：０．５から開始して１：５及び１：１０にＴ：Ｅ比率が上昇するにつれてＰＣ３腫瘍細胞死がますます多くなることが明らかとなったことを示す。スケールバーは１０μｍである。 単離したＴ細胞及び１００ｕｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１及びＣ６４８１）で処理したＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害を示す。死ＰＣ３腫瘍細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞によって示された。 ＰＣ３腫瘍細胞の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性細胞傷害を伴う生細胞イメージングを示す。生細胞イメージングにより、ヒトＰＢＭＣ細胞及び２００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体との培養期間にわたるＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイを、画像取得中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内で２０時間実施した。これに対して、対照ヒトＩｇＧ１抗体（２００μｇ／ｍｌ）との培養では、腫瘍細胞の細胞傷害はもたらされなかった。生ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＰＢＭＣ－赤色、死細胞－青色。スケールバーは２０μｍである。 ＰＣ３腫瘍細胞の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性細胞傷害を伴う生細胞イメージングを示す。生細胞イメージングにより、ヒトＮＫ細胞及び２００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体との培養期間にわたるＰＣ３腫瘍細胞の細胞傷害が明らかとなったことを示す。アッセイを、画像取得中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内で２０時間実施した。これに対して、対照ヒトＩｇＧ１抗体（２００μｇ／ｍｌ）との培養では、腫瘍細胞の細胞傷害はもたらされなかった。生ＰＣ３腫瘍細胞－緑色、ＮＫ細胞－赤色、死細胞－青色。スケールバーは２０μｍである。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。エピトープ認識（分子鎖Ａ－濃青色、分子鎖Ｂ－青緑色）＆ＣＤ１６１（分子鎖Ｃ－オレンジレッド、分子鎖Ｄ－紫色）複合体（ＰＤＢ ＩＤ ５ＭＧＴ）のカートゥーン表示を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。赤色選択がＮＫＲ－Ｐ１の分子鎖の６Å内の残基を表していることを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体構造体のリボン表示を示す。特定の抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体用の対応するクローンを適切に標識した。可変軽鎖をより暗い色合いで示している一方で、重鎖可変領域は白色で示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ４６０８に属し、ＣＬＥＣ２Ｄ（より暗い色合い）に対して相互作用するクラスターのうちの１つに寄与する、ＰＩＺＳＡスコアリング及び構造体クラスター化法の後に選択した構造体を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ４６０８に由来するＧ００００１－Ｇ００００４－Ｇ００００７－Ｇ０００１０－Ｇ０００１５クラスターの組み合わせがＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合部位を含有しているかどうかを確認するための変異用に選択した残基の可視化を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ５５１１に属し、ＣＬＥＣ２Ｄ（より暗い色合い）に対して相互作用するクラスターのうちの１つに寄与する、ＰＩＺＳＡスコアリング及び構造体クラスター化法の後に選択した構造体を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の予測モデルを示す。Ｃ５５１１に由来するＧ００００１－Ｇ００００５－Ｇ０００１１－Ｇ０００１９－Ｇ０００２０クラスターの組み合わせがＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合部位を含有しているかどうかを確認するための変異用に選択した残基の可視化を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８の接点の表面表示を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ上のＣＤ１６１結合領域と重複している、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８の接点を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の接点の表面表示を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ上のＣＤ１６１結合領域と重複している、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の接点を示す。描写において、より暗い色合いは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用する残基の位置を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性阻害を示す（ＣＬＥＣ２Ｄ抗原ビーズコンジュゲート効率の確認のモニタリング）。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。磁性ビーズ上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原へのＣＤ１６１－ＦＣの結合が濃度依存的に認められたことを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ４６０８及びＣ５５１１に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の同定エピトープ区画を示す。ベタ塗りの黒色矢印で示した、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの結合の阻害の指標としての、対照と比較した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無におけるＣＤ１６１結合のフローサイトメトリーモニタリングを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によるＮＫ細胞活性化を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１がＣＤ６９発現を誘導してＮＫ細胞活性化が細胞傷害となることを示していることを示す。対応する実験条件をそれぞれのプロットに対して記載した。ＣＤ６９過剰発現の陽性対照としてＩＬ２処理を実施した。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によるＮＫ細胞活性化を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性ＣＤ６９発現が、ＮＫ細胞上のＰＣ３細胞初回刺激ＣＤ６９発現レベルと比較してより高いことを示す。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を１０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの濃度で使用してＩＦＮγ発現レベルの上昇をモニターしたことを示す。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、ＰＣ３細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）の有無において、１００ｕｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。ＣＤ３＋ゲート集団のＩＦＮγ発現をモニターした。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、ＰＣ３細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）の有無において、１００ｕｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。ＣＤ３－ゲート集団のＩＦＮγ発現をモニターした。 エフェクター細胞によるサイトカイン発現に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１の効果を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を、単離ＮＫ細胞の有無において、１００μｇ／ｍＬの濃度で使用したことを示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１においてＩＦＮγ過剰発現が認められた。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。選択抗体可変重鎖遺伝子をＩｇＧ４主鎖にクローニングするために設計されたベクターを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。選択抗体可変重鎖遺伝子をＩｇＧ１ Ｎ～Ａ主鎖にクローニングするために設計されたベクターを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。ＩｇＧ４アイソタイプ主鎖を有する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ３２５６及びＣ３２７６）のＣＨＯ細胞の表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合のフローサイトメトリー解析を示す。右方向へのピークシフトから推定した結合を非トランスフェクトＣＨＯ細胞と比較した。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。様々な抗体アイソタイプを使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の細胞傷害を示す。ＩｇＧ１アイソタイプ（Ｃ３４５２及びＣ４６０８）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びＩｇＧ４アイソタイプ（Ｃ３２５６及びＣ３２７６）抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、新たに単離したＰＢＭＣ及びＰＣ３腫瘍細胞と培養した際に、有意な細胞傷害を示した。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。フローサイトメトリーを用いた、アフコシル化モノクローナル抗体Ｃ０６１３、Ｃ１３０１、Ｃ６２６８、Ｃ１６９９、Ｃ２４３７、Ｃ９８３２、Ｃ８９００、及びＣ７７４９として作製した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体により、ＣＨＯ細胞の表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合が明らかとなったことを示す。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｃ５５１１と比較して５×より低い濃度で使用したアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ７７４９、Ｃ８８００、Ｃ９８３２）による、ＰＣ３腫瘍細胞のＮＫ細胞介在性細胞傷害を示す。データにより、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が５倍より低い濃度でほぼ同等の細胞死を達成し、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がより細胞傷害性であることを示したことが明らかとなった。 全長モノクローナル抗体を作製するのに使用する哺乳動物発現構築物を示す。遺伝子合成により構築物を作製してから、制限消化及びサンガーシークエンシングにより確認した。Ｒａｍｏｓ腫瘍細胞株及びＰＣ３腫瘍細胞株を使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１のＣＤＣ介在性細胞傷害を測定したことを示す。リツキシマブを陽性対照として使用した。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体単独または抗ＰＤＬ１抗体との組み合わせにおいて認められた有意な抗腫瘍効果を示す時間に対する腫瘍容積のプロットを示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。ＣＤ３＋Ｔ細胞の染色による、腫瘍微小環境における免疫細胞浸潤を示す画像を示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。９６時間の期間にわたり腫瘍内に注射されたＡｌｅｘａ ６４７標識抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す、異種移植片を有するマウスの画像を示す。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊ｐ＜０．０１、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊ｐ＜０．０１、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスの相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（３６日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群を溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（３６日目）である。 がん異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果を示す。ＰＣ３異種移植用にｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用し、腫瘍を有する動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品を注射するのに使用した。皮下ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するヒト化（ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ）マウスのデルタ相対腫瘍容積に対する試験化合物の効果を示す（２４日目まで）。それぞれの治療群は５匹の動物で構成されており、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群と命名された。値はそれぞれの群における２～５匹の動物の平均で表されている。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．３．０）を使用したｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続くボンフェローニ事後検定により、統計解析を実施した。＊＊＊ｐ＜０．００１及び＊ｐ＜０．０５、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群をそれぞれ溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に統計的に有意（２４日目）である。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。非還元条件及び還元条件における精製Ｃ５５１１抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のインタクト質量分析解析のＴＩＣクロマトグラム（３つの複製）を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＷＣＸクロマトグラム解析を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のサイズ排除クロマトグラムを示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ＣＬＥＣ２Ｄ精製ビオチン化抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＥＬＩＳＡアッセイ発現を示す。データを１部位結合モデルにフィッティングして、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＫｄを計算した。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ＢＩＡＣＯＲＥ試験において精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原外部ドメインを抗原の供給源として使用したことを示す。モニターした応答を時間に対してプロットしている。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ｐＨ５．９における、ＦｃＲｎを用いた代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の親和性ベースの結合試験を示す。 精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体製品の特性解析を示す。ｐＨ７．４における、ＦｃＲｎを用いた代表的な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の親和性ベースの結合試験を示す。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。結合特性に基づいた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ０９４９）の選択を示す。ＰＣ３標的細胞上のＣＬＥＣ２Ｄへの結合について、４つの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ２７７９、Ｃ２４３８、Ｃ０９４９、及びＣ２５４３）を評価した。Ｃ０９４９は、良好な結合及びピークの中央へのシフトを示した。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ０９４９が複数種の前立腺癌細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。 妥当な診断用途及び予後判定用途用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ０９４９が複数種の腫瘍細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。試験と対照の間の平均ＦＩＴＣ蛍光の比率により、特異的結合及び平均蛍光の倍率変化を計算した。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＴＣＧＡデータ解析後の、前立腺癌疾患ステージにおけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＤＵ１４５、２２ＲＶ１、及びＬｎＣａｐ上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮ－γ、ＰＢＭＣ上清、ＰＢＭＣ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を使用して誘導した、前立腺癌細胞株ＰＣ３、ＬｎＣａｐ、２２ＲＶ１、及びＤＵ１４５上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。上部パネルは抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示しており、下部パネルはマージ画像を示している。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が前立腺癌腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。悪性前立腺癌組織内の腫瘍細胞の染色を示す、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ２６８５で染色したヒト組織マイクロアレイスライドを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。様々ながんにおけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現のＴＣＧＡデータ解析を示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。様々な腫瘍細胞株ＨｅｐＧ２（肝臓癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＢＴ４７４（乳癌）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＲａｍｏｓ（リンパ腫）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＬＰＳ、ポリＩ：Ｃ、ＩＦＮγを用いて誘導した際の、ＢＴ４７４（乳癌）、ＳＫＯＶ３（卵巣癌）、ＬＮ２２９（膠芽腫）、Ｒａｍｏｓ（リンパ腫）、ＮＣＩ－Ｈ９２９（骨髄腫）、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現レベルを示す。 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が様々なその他の腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を認識することを示す。ＳＫＯＶ３（卵巣癌）上に１００μｇ／ｍｌで認められた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１が介在する細胞傷害、及びＨｅｐＧ２（肝臓癌）細胞株上に１００μｇ／ｍｌで認められた抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１が介在する細胞傷害を示す。死細胞のパーセンテージはＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ陽性細胞によって示された。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。抗体ウェットコーティングプロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。空気乾燥抗体コーティングプロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。高密度前培養プロトコルを示す。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。ＰＢＭＣを抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）と長期間培養した際の、エフェクター細胞からのＩＦＮγサイトカイン分泌の測定を示す。ＯＫＴ３抗体を用いた処理を陽性対照として使用した。抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１（１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、及び１００μｇ／ｍｌ）でＰＢＭＣを処理してから、４日間培養した。フローサイトメーターを使用して、蛍光増殖色素の状態をモニターした。未処理ＰＢＭＣを対照として使用した。 フローサイトメトリー解析を使用した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたリンパ球増殖アッセイを示す。ＰＢＭＣを抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）と長期間培養した際の、エフェクター細胞からのＩＬ２サイトカイン分泌の測定を示す。ＯＫＴ３抗体を用いた処理を陽性対照として使用した。抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、及びＣ６４８１（１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、及び１００μｇ／ｍｌ）でＰＢＭＣを処理してから、４日間培養した。フローサイトメーターを使用して、蛍光増殖色素の状態をモニターした。未処理ＰＢＭＣを対照として使用した。 フローサイトメトリー解析を使用して、ＣＨＯ細胞の表面上に発現したラット、マウス、及びカニクイザルに由来するＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログに対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ３５６６及びＣ５５１１）の結合をオーバーレイで示すヒストグラムを示す。

抗体ベース／指向性治療アプローチによる免疫細胞チェックポイント受容体の調節は、過去数年間にわたり一定の関心を集めてきた。最大の努力はＴ細胞のチェックポイントの調節に傾けられてきた。しかしながら、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及び骨髄細胞のチェックポイントの調節にも同様に、ますます多くの注目が集められている。自然免疫系はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含み、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、広範囲の標的細胞、例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞などを認識して細胞傷害を誘導する能力を有する。ＮＫ細胞は事前の抗原感作を何ら必要としない。直接的な細胞傷害に加えて、ＮＫ細胞はまた、サイトカインの産生及び分泌を介した適応免疫応答の誘導及び進行に関与している。一般的に、これらの応答は、幅広く様々な表面活性化受容体及び表面阻害受容体の、標的細胞の表面上のリガンドとの相互作用によって誘導されるシグナルの適切なバランスによって調節される。様々な物質、例えば、モノクローナル抗体、サイトカインなどを介したＮＫ細胞の数及びその関連機能の調節により、抗腫瘍活性の向上がもたらされ得る。これらの物質を、単独または組み合わせのいずれかで、潜在的な治療薬として提供することができる。それゆえ、活性化種及び／または阻害種の両方の表面受容体を抑制することにより、ＮＫ細胞の抗がん活性を解放することができる。

これらの相互作用を遮断することは、いくつかのがんを治療するための新規の治療選択肢になり得る。しかしながら、発見、理解、及び設計を調整する必要があり、また治療処置を様々ながんに対する標的としての個々の受容体用に更に適応させる必要があり、それらは依然として対応されていない。

本明細書において特に定義しない限り、本開示と関連させて用いる科学用語及び専門用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。更に、文脈上特に必要としない限り、文脈及び／または用途にとって適切と考えられる場合、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。各種単数形／複数形の交換は、明確とするために、本明細書中に明示的に記載され得る。一般的に、本明細書に記載するバイオテクノロジー技術、免疫学技術、分子細胞生物学技術、組換えＤＮＡ技術と関連させて用いる専門用語は、当該技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。本明細書で引用する特定の参照文献及びその他の文献は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。矛盾が生じた場合には、本明細書（定義を含む）が優先される。物質、方法、図、及び例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

更に、開示する抗体ナイーブライブラリの方法、調製、及び使用においては、特に明記しない限り、分子生物学、生化学、計算化学、細胞培養、組換えＤＮＡ技術、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、及び関連分野における従来技術を採用する。これらの技術、その原理及び条件については、文献中において説明されており、当業者には周知である。

抗体ナイーブライブラリ及び抗体ナイーブライブラリをコードする核酸を作製するための方法、及び本開示のその他の実施形態について開示及び説明する前に、本明細書で使用する専門用語が特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定することを意図するものではないということを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明確に定めない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。

一実施形態では、用語「ライブラリ（ｌｉｂｒａｒｙ）」及び「ライブラリ（ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」は本開示内において同じ意味で用いられ、本開示の作製物に関する。一実施形態では、核酸配列の集合またはプールを意味する。一実施形態では、アミノ酸配列の集合またはプールを意味する。一部の実施形態では、アミノ酸配列または核酸配列の集合またはプールを含む、生物の集合またはプールを意味する。一部の実施形態では、生物はバクテリオファージ（ファージ）または酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である。

一実施形態では、本開示の文脈における用語「プールすること」、「プールした」、「プール（ｐｏｏｌ）」、及び「プール（ｐｏｏｌｓ）」とは、本開示の方法を採用することによって複数のドナー、すなわち、２つ以上のドナーから得た試料／核酸配列／核酸フラグメント／遺伝子クローン／増幅産物／抗体を混合することを意味する。

一実施形態では、用語「ＰＢＭＣ」とは、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球、赤血球、血小板、ならびに顆粒球（好中球、好塩基球、及び好酸球）からなる、円形核を有する任意の末梢血細胞のことを意味する。

抗原
本明細書で使用する場合、用語「抗原」または「免疫原」とは、体内において免疫応答を誘導する任意の外来物質のことを意味する。一実施形態では、抗原は細胞タンパク質である。一実施形態では、抗原は細胞表面タンパク質である。

抗原は、任意の種から単離または誘導してもよい。代表的な種としては、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、またはＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導された野生型タンパク質のフラグメントである。一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、またはＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓに由来するタンパク質の変異バリアントである。一部の実施形態では、抗原を変異させて、抗原の溶解性及び／または安定性を向上させることができる。例えば、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、追加のジスルフィド架橋をＣｙｓ１６３アミノ酸に導入して発現タンパク質の安定性及び均一性を向上させるために、Ｈ１７６Ｃに変異を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、抗原は、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかに、エピトープタグを含む。例示的なタグとしては、ポリヒスチジンタグ及びＦＬＡＧタグが挙げられるがこれらに限定されない。当該技術分野において周知の任意のエピトープタグは本開示の範囲内であるとみなされる。

ＣＬＡＸ、レクチン様転写物－１（ＬＬＴ１）、及びＯＣＩＬとも呼ばれるＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）は、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ型レクチンファミリーのメンバーである。ＣＬＥＣ２Ｄはキラー細胞レクチン様受容体Ｂ１（ＫＬＲＢ１）に結合する。ＫＬＲＢ１は、ＣＤ１６１、ＣＬＥＣ５Ｂ、ＮＫＲ、ＮＫＲ－Ｐ１、ＮＫＲ－Ｐ１Ａ、ＮＫＲＰ１Ａ、及びｈＮＫＲ－Ｐ１Ａとしても知られている。ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の全てのオルソログ及びアイソフォームは、本開示の範囲内であるとみなされる。

一部の実施形態では、当該技術分野において周知のＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）タンパク質またはそのエイリアスまたはホモログのいずれかは、ヒトに由来するかまたはその他の種に由来するかにかかわらず、本明細書に記載の方法により作製された抗体の標的抗原を表す。

一部の実施形態では、抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導したＣＬＥＣ２Ｄ配列に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するＣＬＥＣ２Ｄ抗原である。

一部の実施形態では、当該技術分野において周知のＣＤ１６１タンパク質またはそのエイリアスまたはホモログのいずれかは、ヒトに由来するかまたはその他の種に由来するかにかかわらず、本明細書に記載の方法により作製された抗体の標的抗原を表す。

一部の実施形態では、ＣＤ１６１抗原は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、Ｃａｎｉｓ ｌｕｐｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ、及びＣｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓから単離または誘導したＣＤ１６１配列に対する少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有する。

例示的な抗原を以下の表１に示す。

抗体
一実施形態では、用語「抗体」とは、全てまたは一部が天然供給源に由来していてもよいまたは合成的に作製されていてもよい免疫グロブリンのことを意味する。用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、特に明記しない限り、本明細書の全体にわたり同義的に用いられる。

一実施形態では、用語「抗体」はポリクローナル抗体調製物とモノクローナル抗体調製物の両方を含み、以下、キメラ抗体分子、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント及びＦ（ａｂ）フラグメント、Ｆｖ分子、一本鎖Ｆｖ分子（ＳｃＦｖ）、二量体抗体フラグメント及び三量体抗体フラグメント、二重特異性抗体、ミニボディ、ヒト化モノクローナル抗体分子、ヒト抗体、抗体のＦｃ領域及びこれらの分子から生じる任意の機能性フラグメントを含む融合タンパク質もまた含み、誘導体分子は親抗体分子の免疫学的機能を保持している。本開示の抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または、本開示の特性が保持される限りにおいて更に遺伝子組換えされた抗体である。

「天然の抗体及び免疫グロブリン」は通常、２つの同一軽（Ｌ）鎖及び２つの同一重（Ｈ）鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結しており、更に、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なっている。それぞれの重鎖及び軽鎖はまた、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋を有している。それぞれの重鎖は、多くの定常ドメインに続いて、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有している。それぞれの軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、そのもう一方の端に定常ドメインを有しており、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと一列に並んでおり、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと合わせて並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成すると考えられている（Ｃｌｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ ａｎｄ Ｈａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２（１９８５））。

用語「抗原結合部位」または「結合部分」とは、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の一部のことを意味する。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成されている。「超可変領域」と呼ばれる、重鎖及び軽鎖のＶ領域内における３つの極めて異なるストレッチは、「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」として知られているより保存された隣接ストレッチの間に配置されている。それゆえ、用語「ＦＲ」とは、免疫グロブリンの超可変領域の間及びその隣接部に天然に存在するアミノ酸配列のことを意味する。抗体分子内において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、互いに対して三次元空間に配置されて抗原結合表面を形成している。抗原結合表面は結合抗原の三次元表面に対して相補的であり、重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」と呼ばれる。

用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で大きく異なっており、それら特定の部分がそれぞれ個々の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に利用されているという事実のことを意味する。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインの全体にわたり均一に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、βシート構造に結合するループを形成する３つのＣＤＲによって結合した、場合によってはβシート構造の一部を形成する３つのＣＤＲによって結合した、主にβシート構造をとる４つのＦＲ領域を含む。それぞれの分子鎖内のＣＤＲは、ＦＲ領域により共に近接して維持されており、もう一方の分子鎖のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接的には関与していないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を発揮する。

「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部、好ましくはその可変ドメイン、または少なくともその抗原結合部位を含む。ｓｃＦｖ抗体については、例えば、Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３（１９９１）４６－８８に記載されている。一実施形態では、「抗体フラグメント」は、抗原結合活性を示す能力を保持している完全抗体の一部である。加えて、抗体フラグメントは、対応する抗原に結合するＶＨドメインの特性（すなわち、ＶＬドメインと共に集合することができる）またはＶＬドメインの特性（ＶＨドメインと共に集合することができる）、機能性抗原結合部位を有することにより、本開示の抗体の特性をもたらす、一本鎖ポリペプチドを含む。

抗体のパパイン消化により、それぞれが１つの抗原結合部位を有し「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び、残りの「Ｆｃ」フラグメント（その名称は容易に結晶化可能であることを意味する）がもたらされる。ペプシン処理により、なおも抗原に架橋可能な２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントが生じる。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。この領域は、しっかりと非共有結合した１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体で構成されている。この構造では、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用することで、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上に抗原結合部位を定めている。６つのＣＤＲが集合的に、抗体に抗原結合特異性を付与している。しかしながら、たとえ単一可変ドメイン（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）であっても、完全な結合部位と比較してより低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有している。

一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチド分子は、ペプチドコードリンカーにより連結したＶＨコード遺伝子及びＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合体から発現させることが可能な、共有結合で連結したＶＨ：ＶＬヘテロ二量体である。抗体Ｖ領域に由来する、天然に凝集しているが化学的には分離している軽ポリペプチド鎖及び重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に類似した三次元構造へと折り畳まれるｓｃＦｖ分子へと変換するために、化学構造を識別するための多くの方法が説明されている。例えば、米国特許第５，０９１，５１３号、第５，１３２，４０５号、及び第４，９４６，７７８号を参照されたい。

Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有している。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含むいくつかの残基の、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端への追加によって、Ｆａｂフラグメントとは異なっている。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有しているＦａｂ’のための、本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々、Ｆａｂ’フラグメント間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして作製されたものである。抗体フラグメントのその他の化学的カップリングもまた知られている。

任意の脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（ｋ）及びラムダ（ｌ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの一方に割り当てることができる。

本明細書で使用する場合、用語「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」とは、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的な抗原の間に生じるタイプの非共有結合相互作用のことを意味する。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）を基準として表すことができ、より小さなＫｄはより高い親和性を表している。選択したポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知の方法を用いて定量することができる。１つのこのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体の形成速度及び解離速度を測定することを必要とするが、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータによって決まる。それゆえ、「ｏｎ速度定数」（Ｋｏｎ）と「ｏｆｆ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに実際の結合速度及び解離速度の計算により求めることができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率は、親和性に関係していない全てのパラメータを相殺することを可能とし、解離定数Ｋｄに相当する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アッセイ、例えば、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に周知の類似したアッセイなどを用いて測定した際に、≦１０μＭ、好ましくは≦１μＭ、より好ましくは≦１００ｎＭ、例えば、≦９０ｎＭ、≦８０ｎＭ、≦７０ｎＭ、≦６０ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、または≦１ｎＭのＫｄで、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体の結合親和性は、１０^－５Ｍ～１０^－１２Ｍの範囲内である。例えば、本開示の抗体の結合親和性は、１０^－６Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－７Ｍ、または１０^－５Ｍ～１０^－６Ｍである。

本開示はまた、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸またはヌクレオチド配列に対して特定のパーセンテージの同一性または類似性を有する抗体を特徴とする。例えば、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。より好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。更により好ましくは、抗体は、本明細書に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つの特定の領域または全長と比較した際に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはより高い％の同一性を有していてもよい。本開示の核酸及びタンパク質に対する配列同一性または類似性は、当該技術分野において周知の方法を用いた配列比較及び／またはアライメントにより求めることができる。例えば、配列比較アルゴリズム（すなわち、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ ２．０）、マニュアルアライメント、または目視検査を利用して、本開示の核酸及びタンパク質に対するパーセント配列同一性または類似性を求めることができる。

アミノ酸配列に関して、コード配列内の単一アミノ酸またはわずかなパーセンテージのアミノ酸を変化、付加、欠失、または置換させる、核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失、または付加が、本明細書において、「保存的修飾バリアント」と集合的に呼ばれることを、当業者は容易に理解するであろう。一部の実施形態では、変化により、化学的に類似したアミノ酸へのアミノ酸の置換がもたらされる。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は当該技術分野において周知である。

免疫グロブリンの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスへと割り当てることができる。５種の主なクラスの免疫グロブリン、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在しており、これらのうちの数種を、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２へと更に分類することができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、∂、ε、γ、及びμと呼ばれている。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構造は周知である。

一実施形態では、本明細書で提供する組成物及び方法にヒト化抗体を使用してもよい。一部の実施形態では、用語「ヒト化抗体」または「抗体のヒト化型」とは、親免疫グロブリンの特異性と比較して異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むようにフレームワークまたは「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が修飾された抗体のことを意味する。その他の実施形態では、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域にグラフトして、「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２（１９８８）３２３－３２７；及びＮｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３１４（１９８５）２６８－２７０を参照されたい。重鎖可変フレームワーク領域及び軽鎖可変フレームワーク領域は、同一のまたは異なるヒト抗体配列から誘導することができる。ヒト抗体配列は天然ヒト抗体の配列であってもよい。ヒト重鎖可変フレームワーク領域及びヒト軽鎖可変フレームワーク領域は、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０００）－Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＰ Ａ．１Ｐ．１－Ａ．１Ｐ．３７に列挙されており、ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（http://imgt.cines.fr）またはhttp://vbase.mrc-cpe.cam.ac.ukを介して入手可能である。任意選択的に、更なる変異によりフレームワーク領域を修飾してもよい。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体に対する上記の抗原を認識する配列を表すＣＤＲに相当する。用語「ヒト化抗体」はまた、本明細書で使用する場合、例えば、「クラススイッチング」、すなわち、Ｆｃ部分の変化または変異（例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ４への変異及び／またはＩｇＧ１／ＩｇＧ４変異）により、特にＣ１ｑ結合及び／またはＦｃＲ結合に関する本開示の特性を生むように定常領域を修飾されているような抗体を含む。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意味している。ヒト抗体は現況技術において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体はまた、免疫化した際に、内在性免疫グロブリン産生を行うことなく、ヒト抗体の完全レパートリーまたは選択物を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いて作製することができる。ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイをこのような生殖細胞系変異マウスに導入することにより、抗原誘発時にヒト抗体の産生がもたらされる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；Ｂｒｕｅｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３－４０を参照のこと）。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリを用いて作製することができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。Ｃｏｌｅ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．の技術はまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｓｓ，Ａ．Ｌ．，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）。本開示のヒト化抗体において既に言及しているが、用語「ヒト抗体」はまた、本明細書で使用する場合、本開示の特性を生むように定常領域を修飾されているような抗体を含む。

一実施形態では、用語「モノクローナル抗体」とは、均一抗体集団を有する抗体組成物のことを意味する。抗体は、抗体の種または供給源、または抗体の作製方法によって限定されない。別の実施形態では、この用語は、完全免疫グロブリンに加えて、フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びその他のフラグメントなど、ならびに、親モノクローナル抗体分子の免疫学的結合特性を示すキメラ均一抗体集団及びヒト化均一抗体集団を包含する。別の実施形態では、用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」とは、本明細書で使用する場合、単一アミノ酸組成の抗体分子の調製物のことを意味する。別の実施形態では、用語「Ｆａｂ」または「ＳｃＦｖ」は、具体的に言及される抗体フラグメントとして使用される。

一部の実施形態では、本明細書で提供する組成物及び方法にキメラ抗体を使用してもよい。一実施形態では、用語「キメラ抗体」とは、一般的に組換えＤＮＡ技術を用いて調製された、１つの種（例えば、マウスまたはラット）に由来する可変領域、すなわち、結合領域、及び、異なる供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域の少なくとも一部を含むモノクローナル抗体のことを意味する。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。このようなキメラ抗体は、１つの種に由来する免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメント及び異なる種の免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子の発現産物である。本開示に包含されるその他の形態の「キメラ抗体」は、クラスまたはサブクラスが元の抗体のクラスまたはサブクラスから変更または変化しているキメラ抗体である。このような「キメラ」抗体はまた、「クラススイッチ抗体」とも呼ばれる。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野において現在周知の、従来の組換えＤＮＡ技術及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１（１９８４）６８５１－６８５５；ＵＳ５，２０２，２３８、及びＵＳ５，２０４，２４４を参照されたい。

一実施形態では、「抗体ディスプレイライブラリ」とは、標的抗原に対するスクリーニング法に適した細胞または無細胞の表面上に抗体を発現するプラットフォーム（複数可）のことを意味する。本明細書では、ファージディスプレイライブラリ及び酵母ディスプレイライブラリは、特に明記しない限り、正確な規格で使用される。

一実施形態では、用語「ナイーブライブラリ」とは、非免疫化供給源に由来する天然ＶＨレパートリーをコードする核酸配列の集合のことを意味する。

一実施形態では、用語「ＶＨ」とは、軽鎖または軽鎖の一部を天然に欠く哺乳動物に存在し得るタイプの抗体の単一の重鎖可変ドメインのことを意味し、ナイーブＶＨについては、適宜理解することができる。

一実施形態では、用語「ＶＬ」とは、抗体の単一の軽鎖可変ドメインのことを意味し、それらは、定常ドメイン配列に基づいて、２つのタイプに存在している。Ｖｋ（カッパ定常領域）及びＶｌ（ラムダ定常領域）は適宜理解される。

一実施形態では、用語「ＣＤＲ」とは、抗体構造の相補性決定領域のことを意味する。

一実施形態では、用語「レパートリー」とは、集合のことを意味し、遺伝的多様性を示す。

一実施形態では、用語「フレームワーク領域」は、本明細書において、分子の構造エレメントをコードする、抗体分子の核酸配列領域を意味するために使用される。

別の実施形態では、用語「ベクター」とは、抗体遺伝子を特定の指定制限部位に供給するための、クローニング系または発現系に関連するＤＮＡのことを意味する。ファージミドベクター（ファージディスプレイ系に適用可能）もしくは酵母ベクター（酵母ディスプレイ系に適用可能）または哺乳動物発現ベクター（哺乳動物発現系に適用可能）は適宜理解される。

本開示は、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体及び抗体フラグメントを提供する。

本開示は、本開示に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗原またはＣＬＥＣ２Ｄのエピトープに結合する抗体または抗体フラグメントのＶＨドメイン及びＶＬドメインを提供する。

本開示は、本開示に記載のＣＬＥＣ２Ｄ抗原またはＣＬＥＣ２Ｄのエピトープに結合する抗体の、ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及びＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を提供する。

本開示のＶＨ配列及びＶＬ配列の任意の組み合わせは、本開示の範囲内であるとみなされる。ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、またはＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列の任意の組み合わせは、本開示の範囲内であるとみなされる。

あるモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体と同一の特異性を有する場合、前者が後者がＣＬＥＣ２Ｄに結合するのを阻害するかどうかを確認することにより、過度な実験をすることなく測定することが可能であることを当業者は理解するであろう。本開示のモノクローナル抗体による結合の低下が示すとおりに、試験するモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体と競合している場合、２種のモノクローナル抗体が、同一のエピトープまたは密接に関連したエピトープに結合すると考えられる。

あるモノクローナル抗体が本開示のモノクローナル抗体の特異性を有しているかどうかを確認するための別の方法は、本開示のモノクローナル抗体をＣＬＥＣ２Ｄタンパク質と前培養することであるが、正常に反応している場合、試験するモノクローナル抗体のＣＬＥＣ２Ｄに結合する能力が阻害されるかどうかを確認するために、試験するモノクローナル抗体を加える。試験するモノクローナル抗体が阻害された場合、そのモノクローナル抗体は、十中八九、本開示のモノクローナル抗体と同一または機能的に同等のエピトープ特異性を有している。本開示のモノクローナル抗体のスクリーニングはまた、ＣＬＥＣ２Ｄを利用して、試験モノクローナル抗体がＣＬＥＣ２Ｄを中和することが可能であるかどうかを確認することにより、実施することができる。

本開示のタンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログ、もしくはオルソログに向かうポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を作製するために、当該技術分野において周知の様々な手法を使用してもよい。（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｅ，ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。

免疫血清のＩｇＧ画分を主にもたらす、プロテインＡまたはプロテインＧを使用したアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術を用いて、抗体を精製してもよい。続いてまたは代替的に、イムノアフィニティークロマトグラフィーを用いて、探索する免疫グロブリンの標的である特異的抗原またはそのエピトープをカラムに固定して、免疫特異的抗体を精製してもよい。免疫グロブリンの精製については、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎが議論している（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ＰＡが出版したＴｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ １７，２０００），ｐｐ．２５－２８）。

モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載のようなハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、一般的に、マウス、ハムスター、またはその他の適切な宿主動物を免疫化剤で免疫化して、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することができるリンパ球を誘導する。代替的に、リンパ球をｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化してもよい。

免疫化剤は一般的に、タンパク質抗原、そのフラグメント、またはその融合タンパク質を含む。一般的に、ヒト起源の細胞が望まれる場合、末梢血リンパ球のいずれかを使用する、または、非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合、脾臓細胞またはリンパ節細胞を使用する。次に、好適な融合剤、例えば、ポリエチレングリコールなどを使用して、リンパ球を不死化細胞株と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３）。不死化細胞株は通常、形質転換哺乳動物細胞、とりわけ、げっ歯類、ウシ、及びヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞を採用する。ハイブリドーマ細胞は、未融合不死化細胞の増殖または生存を阻害する１種または複数種の物質を好ましくは含有する好適な培地内で培養してもよい。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマ用の培地は通常、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻害する。

好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択した抗体産生細胞による抗体の安定した高レベル発現を持続させ、ＨＡＴ培地などの培地の影響を受けやすい、不死化細胞株である。より好ましい不死化細胞株は、例えば、ｔｈｅ Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ及びｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから得ることができるマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株についてもまた、ヒトモノクローナル抗体の作製用に記載されている。（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１－６３を参照のこと）。

次に、ハイブリドーマ細胞を培養する培地を、抗原に向かうモノクローナル抗体の存在用にアッセイしてもよい。好ましくは、ハイブリドーマ細胞が産生したモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降、または、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などにより、測定される。このような技術及びアッセイは当該技術分野において周知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード解析を用いて測定することができる。更に、モノクローナル抗体の治療適用においては、標的抗原に対する高度の特異性及び高い結合親和性を有する抗体を同定することが重要である。

所定のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを限界希釈法でサブクローニングして、標準的な方法で増殖させてもよい。（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３を参照のこと）。この目的のための好適な培地としては、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。代替的に、ハイブリドーマ細胞をｉｎ ｖｉｖｏ、哺乳動物の腹水で増殖させてもよい。

サブクローンが分泌したモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインＡ－セファロース、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどを用いて、培地または腹水から単離または精製してもよい。

モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の組換えＤＮＡ法などを用いて作製することができる。従来の方法を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、本開示のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離及びシークエンスすることができる。一部の実施形態では、本開示のハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの供給源としての役割を果たす。一部の実施形態では、抗体遺伝子配列を本開示の方法（例えば、ファージライブラリディスプレイ及び酵母ライブラリディスプレイ）を用いて単離及びクローニングするが、抗体遺伝子配列は、このようなＤＮＡの供給源としての役割を果たす。単離後、ＤＮＡを発現ベクター内に入れてから、その発現ベクターを、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、類人猿ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などへとトランスフェクションして、組換え宿主細胞内におけるモノクローナル抗体の合成を得てもよい。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインでコード配列を置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８１２－１３（１９９４）を参照のこと）、または、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合連結することにより、修飾してもよい。このような非免疫グロブリンポリペプチドを、キメラ二価抗体を作製するために、本開示の抗体の定常ドメインで置換してもよく、または、本開示の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインで置換してもよい。

抗体または抗体フラグメントの発現及び精製に好適な全ての細胞株は、本開示の範囲内であるとみなされる。一部の実施形態では、細胞株は哺乳動物細胞株である。細胞株は、ヒト、マウス、及びハムスターを含む任意の供給源から単離または誘導してもよい。好適な細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｂ細胞、ＨＥＫ ２９３－６Ｅ細胞、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４細胞、及びＤＧ４４細胞が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、細胞株はハイブリドーマ細胞株である。

抗体は、本明細書に記載の一本鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントを含有するベクターを用いて、発現させてもよい。

これらとしては、ベクター、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバント補助ＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどを挙げることができる。ベクターとしては、標的化部分（例えば、細胞表面受容体に対するリガンド）及び核酸結合部分（例えば、ポリリジン）を有する、ＷＯ９３／６４７０１に記載されているような化学コンジュゲート、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡウイルスベクターまたはＲＮＡウイルスベクター）、標的部分（例えば、標的細胞に特異的な抗体）及び核酸結合部分（例えば、プロタミン）を含有する融合タンパク質である、ＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載されているような融合タンパク質、プラスミド、ファージなどが挙げられる。ベクターは、染色体性、非染色体性、または合成であってもよい。

好ましいベクターとしては、ウイルスベクター、融合タンパク質、及び化学コンジュゲートが挙げられる。レトロウイルスベクターとしてはモロニーマウス白血病ウイルスが挙げられる。ＤＮＡウイルスベクターが好ましい。これらのベクターとしては、ポックスベクター、例えば、オルソポックスベクターまたはトリポックスベクターなど、ヘルペスウイルスベクター、例えば、単純ヘルペスＩ型ウイルス（ＨＳＶ）ベクターなど（Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６４：４８７（１９９５）；Ｌｉｍ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９９５）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．：Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：７６０３（１９９３）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：１１４９（１９９０）を参照のこと）、アデノウイルスベクター（ＬｅＧａｌ ＬａＳａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ ３：２１９（１９９３）；Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）を参照のこと）、及びアデノ随伴ウイルスベクター（Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｍ．Ｇ．．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）を参照のこと）が挙げられる。

ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞の細胞質に導入する。トリポックスウイルスベクターは、核酸の短期間発現のみをもたらす。核酸を神経細胞に導入するには、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが好ましい。アデノウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（約４ヶ月間）と比較してより短い期間の発現（約２ヶ月間）をもたらすが、それはひいてはＨＳＶベクターよりも短い。選択する特定のベクターは、標的細胞及び治療する症状によって決まる。導入は、標準的な技術、例えば、感染、トランスフェクション、形質導入、または形質転換によるものであってもよい。遺伝子導入方法の例としては、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰＯ４沈降、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、原形質融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクション、及びウイルスベクターが挙げられる。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＶＨアミノ酸配列を以下の表２に示す。表２に列挙する配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列は、本開示の範囲内であるとみなされる。

本開示のＶＨアミノ酸配列は、以下の表３に示すポリヌクレオチドによってコードされていてもよい。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＶＬアミノ酸配列を以下の表４に示す。表４に列挙する配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列は、本開示の範囲内であるとみなされる。

本開示のＶＬアミノ酸配列は、以下の表５に示すポリヌクレオチドによってコードされていてもよい。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体の例示的なＣＤＲアミノ酸配列を以下の表６に示す。

一部の実施形態では、本開示の抗体、抗体フラグメント、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＣＤＲをコードするヌクレオチド配列は、野生型配列である。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、哺乳動物細胞内における発現用にコドン最適化されている。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、ヒト細胞内における発現用にコドン最適化されている。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断する抗体に関する（図１）。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はポリクローナル抗体である。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断することにより、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によりＣＬＥＣ２Ｄ発現細胞を除去することができる抗体に関する。一部の実施形態では、本発明は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合可能であり、ＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用を遮断することにより、サイトカイン産生及びＮＫ細胞が介在する細胞傷害を促進することができる抗体に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はヒト化抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ１ Ｎ２９６Ａ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、またはＩｇＧ３アイソタイプである。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対する少なくとも５０％の同一性、少なくとも５５％の同一性、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％の同一性、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９１％の同一性、少なくとも９２％の同一性、少なくとも９３％の同一性、少なくとも９４％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１０９～２１６からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：３２５～４３２からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１０９～２１６からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：３２５～４３２からなる群から選択される核酸によりコードされるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１～１０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）、及び、配列番号：２１７～３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４４に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２５８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２１７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２８９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：２１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２３７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：５８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２７４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、配列番号：２２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域２（ＣＤＲ２）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３～４８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：４８６～５４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：５４７～６５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、ならびに、配列番号：６５４～７２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号：７２７～７８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び、配列番号：７８４～８８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７２９に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５９０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４７３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９５に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８２５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４８６に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５４７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７２７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：７８４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：６１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６７８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８５２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４４６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：５０１に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５６７に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６５５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８０４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４８８に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５８１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６８０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７８２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８１８に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４６６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：５２１に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：６０３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：８１４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：４３９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号：４９２に記載のアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び、配列番号：５５３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、ならびに、配列番号：６６０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号：７３３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び、配列番号：７９０に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、を含む。

本開示は、少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリを提供し、抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する。重鎖、軽鎖、重鎖ＣＤＲ１～３（すなわち、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）、及び軽鎖ＣＤＲ１～３（すなわち、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）の特定の組み合わせを有する様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を表９Ａに記載する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ２のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ３、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｏ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｏ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ１、ＩＧＨＤ６、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ５のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｑ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｑ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｒ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｒ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｓ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｓ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｔ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｔ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ１、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ４及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｖ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｖ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｗ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｗ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｘ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｘ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ５、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｚ１の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｚ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｃ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｄ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ１、ＩＧＨＤ５、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｆ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｇ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｈ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ６、ＩＧＨＤ１、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ３及びＩＧＫＪ１のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｊ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｋ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２は、生殖細胞遺伝子ファミリー：ＩＧＨＶ４、ＩＧＨＤ３、及びＩＧＨＪ４のフレームワーク領域配列を有する可変重鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｂに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２は、生殖細胞系ファミリー：ＩＧＫＶ１及びＩＧＫＪ３のフレームワーク領域配列を有する可変軽鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｍ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ２の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列に記載の重鎖ＣＤＲ１、２、及び３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３の組み合わせを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｎ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９に開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）はアフコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全て（例えば、表９に開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２のうちのいずれか１つまたは全てを含む）は、アフコシル化抗体領域を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ａ及び表９Ｂに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域または主鎖を含む。一部の実施形態では、表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域または主鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ１フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖の組み合わせを含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ４フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ２フォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載の重鎖を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ｃに開示されるＩｇＧ Ｎ２Ａフォーマット抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２の重鎖のアミノ酸配列に記載のＩｇＧ Ｎ２Ａ配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全てはアフコシル化されている。一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれか１つまたは全ては、アフコシル化抗体領域を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、表９Ａ、表９Ｂ、及び表９Ｃに開示される抗体番号：Ａ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は脱グリコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する脱グリコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のグリコシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はＮ－結合型グリコシル化を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はアフコシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示するアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のフコシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体はシアリル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示するシアリル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非シアリル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は高ガラクトシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する高ガラクトシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非ガラクトシル化または低ガラクトシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は高マンノシル化されている。一部の実施形態では、本明細書で開示する高マンノシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、同一抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の非ガラクトシル化または低マンノシル化形態と比較して、宿主細胞に対する高い細胞傷害を示す。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちのいずれかの可変軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を有する、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を有する、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ヒト、マウス、げっ歯類、ウサギ、ウマ、ウシ、トリ、ヤギ、ブタ、魚類、イヌ、またはネコフレームワーク生殖細胞系ファミリーに由来するまたはそれであるフレームワーク領域配列を含んでいてもよい。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ヒトフレームワーク生殖細胞系ファミリーに由来するまたはそれであるフレームワーク領域配列を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸を搭載するベクターに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列のうちのいずれか１つまたは全てを搭載するベクターに関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸を搭載するベクターをトランスフェクションした宿主細胞に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する本発明は、表９Ａに開示される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列を搭載するベクターをトランスフェクションした宿主細胞に関する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、薬剤、化学物質、または低分子にコンジュゲートしていてもよい。一部の実施形態では、薬剤は治療薬である。一部の実施形態では、治療薬は化学療法剤である。一部の実施形態では、治療薬は細胞傷害薬または薬物である。一部の実施形態では、治療薬は放射性同位体である。一部の実施形態では、薬剤は診断薬である。一部の実施形態では、診断薬としては、蛍光、化学発光、または放射性同位体の色素または薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。

エピトープ認識
一般的に、用語「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原上のエリアまたは領域のことを意味し、すなわち、「エピトープ」は、抗体と物理的に接触するエリアまたは領域のことである。タンパク質エピトープは、抗体への結合に直接関与する抗原内のアミノ酸残基（エピトープの主要抗原構成要素とも呼ばれる）、及び結合に直接関与しないその他のアミノ酸残基を含んでいてもよい。一部の実施形態では、本明細書における用語「エピトープ」は、特に明記しない限り、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または別のＣＬＥＣ２Ｄ特異的物質に特異的に結合するＣＬＥＣ２Ｄにおける任意の特定の領域の、両方のタイプの結合部位を含む（例えば、一部の状況において、本開示は、特定のアミノ酸残基に直接結合する抗体に関する）。個々の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のより詳細なエピトープマッピングは、アラニンスキャニング法により求めることができる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９３０～１００３のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６、８８９、８９４、８９９、９０３、９０５、９０６、または９０７に記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄ内のアミノ酸残基ＴＨＲ１７８、ＡＳＮ９５、ＡＲＧ１３７、ＧＬＵ１７９、ＴＹＲ１７７、ＳＥＲ９８、ＧＬＵ１６２、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１０１、ＡＬＡ１６０、ＴＲＰ９６、ＣＹＳ１７６、ＧＬＵ１３８、ＡＲＧ１７５、ＧＬＹ１４０、ＳＥＲ１３６、ＡＳＰ１０４、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９４、ＧＬＵ１５０、ＴＨＲ１４９、ＧＬＹ１４８、ＧＬＮ１４１、ＰＲＯ１４２、ＬＹＳ１４４、ＴＨＲ１５２、ＴＲＰ１５１、ＡＳＮ１４７、ＡＲＧ１５３、ＴＲＰ１４３、ＩＬＥ１５７、ＣＹＳ１６３、ＳＥＲ１２９、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ１８１、ＡＳＰ９１、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１９４、ＴＹＲ１６５、ＡＬＡ１７４、ＬＥＵ１１０、ＡＳＮ１６７、ＡＳＰ１６８、ＩＬＥ１４６、ＳＥＲ１７２、ＧＬＹ１６１、ＳＥＲ１７３、ＬＥＵ１３５、ＡＳＰ１３０、ＧＬＮ１００、ＰＨＥ１５５、ＧＬＹ１５９、ＰＲＯ１５６、ＬＥＵ１５８、ＧＬＮ１１７、ＳＥＲ１１５、ＧＬＵ１１４、ＧＬＮ１５４、ＡＳＮ１２０、ＰＨＥ１１６、ＰＨＥ１０２、ＧＬＮ１０６、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＬＹＳ１８６、ＡＳＰ１０９、ＧＬＮ１１２、ＶＡＬ１９１、ＴＲＰ１４５、ＬＹＳ１６９、ＧＬＹ１２７、ＰＲＯ１２８、ＧＬＮ８３、ＬＹＳ８５、ＧＬＵ７７、ＧＬＹ１７０、ＬＥＵ１１９、ＬＥＵ１２３、ＴＲＰ１８２、ＳＥＲ９０、ＡＬＡ１０８、ＴＹＲ８８、ＨＩＳ１９０、ＩＬＥ１８９、ＡＬＡ７３、ＡＲＧ８４、ＳＥＲ７８、ＴＲＰ７９、ＰＲＯ７６、ＰＨＥ８２、ＡＬＡ１７１、ＡＳＰ１８８、ＣＹＳ７５を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、配列番号：８８６、８８９、８９４、８９９、９０３、９０５、９０６、または９０７に記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄ内のアミノ酸残基ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：８８６～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する配列番号：４２及び配列番号：２５８の可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、配列番号：９２１～９０９のうちの少なくとも１つに記載のアミノ酸配列のヒトＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を認識して結合する配列番号：４２及び配列番号：２５８の可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：８８６～８９０から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせのいずれかで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４２及び配列番号：２５８は、アミノ酸ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４４及び配列番号：２６０は、アミノ酸ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０－ＸＡＡ１５１－ＴＨＲ１５２－ＡＲＧ１５３－ＧＬＮ１５４、ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：４５及び配列番号：２６１は、アミノ酸ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１０１－ＸＡＡ１０２－ＸＡＡ－１０３－ＸＡＡ１０４－ＳＥＲ１０５－ＸＡＡ１０６－ＡＳＰ１０７、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：１及び配列番号：２１７は、アミノ酸ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１５３、ＡＳＰ９２－ＴＨＲ９３－ＬＹＳ９４、ＨＩＳ１９０を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：５８及び配列番号：２７４は、アミノ酸ＧＬＵ１３８－ＸＡＡ１３９－ＸＡＡ１４０－ＧＬＮ１４１－ＸＡＡ１４２－ＸＡＡ１４３－ＬＹＳ１４４、ＣＹＳ１７６を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：３５及び配列番号：２５１は、アミノ酸ＧＬＵ１３８－ＧＬＮ１３９－ＸＡＡ１４０－ＧＬＮ１４１、ＡＲＧ１７５－ＸＡＡ１７６－ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＸＡＡ１７９－ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：２１及び配列番号：２３７は、アミノ酸ＡＳＰ９２、ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７９－ＸＡＡ１８０－ＬＹＳ１８１、ＴＨＲ１５２－ＡＲＧ１５３－ＧＬＮ１５４を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７及び配列番号：２２３は、アミノ酸ＴＨＲ９３－ＸＡＡ９４－ＡＳＮ９５、ＡＲＧ１０１、ＧＬＮ１３９、ＰＨＥ１１６、ＡＲＧ１５３を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、アミノ酸ＴＨＲ９３－ＬＹＳ９４、ＡＲＧ１０１、ＧＬＮ１４１、ＴＹＲ１７７－ＸＡＡ１７８－ＧＬＵ１７９を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６１～２５６７に記載のアミノ酸のいずれか１つを認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６１に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６２に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６３に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６４に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６５に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６６に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、配列番号：７３及び配列番号：２８９は、配列番号：２５６７に記載のアミノ酸を認識して結合する可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む。

ライブラリスクリーニング
任意の特定の技術に束縛されるものではないが、本開示の抗原に結合する抗体は、以下に記載する方法を用いて同定及び特性決定することができる。

本明細書では、がん、関節リウマチ、神経性障害、感染性疾患、及び代謝性障害、またはこれらの任意の組み合わせを含む疾患を治療するための治療薬の供給源としてのナイーブ抗体ライブラリを提供する。本開示の方法を用いて同定した抗体を、研究用途用、標的発見用、機能ゲノミクスまたは抗体または抗体の誘導体を用いる任意の用途における確認用の、診断ツール、予後判定ツールとして使用してもよい。

一実施形態では、用語「パニング」とは、特定の標的／抗原に対する結合物質を選択する親和性選択技術のことを意味する。

一部の実施形態では、ナイーブ抗体遺伝子発現ライブラリをスクリーニングするための方法は、２つの独立したスキャニングツール：１）ファージディスプレイ技術及び２）酵母ディスプレイ技術を利用することにより、遺伝子クローンのプールの発現プロファイルを連続的に調査すること（図３）を含む。抗体遺伝子発現用に酵母系を使用することは、真核細胞タンパク質の翻訳、プロセシング、及び細胞表面上における抗体産物の適切な折り畳みのために、有利である。更に、酵母発現により、抗原性標的との高特異性の適切な相互作用が可能となる。

一部の実施形態では、本明細書で開示する方法は、様々な抗原性標的に対する固有分子の同定を可能とする、ライブラリにおける多様性を維持する。

本開示の方法の一部の実施形態では、方法はまた、キメラ抗体分子、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＳｃＦａｂ、二量体抗体フラグメント及び三量体抗体フラグメント、ミニボディ、ヒト化モノクローナル抗体分子、ヒト抗体、二重特異性抗体、抗体のＦｃ領域及びこれらの分子から生じる任意の機能性フラグメントを含む融合タンパク質（誘導体分子は親抗体分子の免疫学的機能を保持している）、ならびに全てのその他の抗体フォーマットを含むがこれらに限定されない様々な組換え抗体フォーマットとして、多様性を２つのプラットフォーム間で移動させて探索する戦略を含む。

一部の実施形態では、本方法により得られた候補抗体分子は、抗体－抗原相互作用の構造－機能試験によって導かれる合理的設計により、更に最適化される。モノクローナル抗体医薬品の製造性における成功のための必要条件は、様々な生物学的特性及び／または相関特性、例えば、溶解性、凝集、抗原性、安定性などによって決まる。例示として、合理的であり、エビデンスに基づいており、より迅速な構造ベースの薬物設計は、とりわけ、がん化学療法、薬剤耐性感染症、神経性疾患の分野に非常に寄与している。これらの方法により得られた結果は、抗体ライブラリ構築及び選択分子の製造性を向上させるために本開示に採用されている。

一部の実施形態では、用語「単離」は、生体膜の一部ではない２つのタンパク質鎖またはそのフラグメントを含む新規かつ固有の分子に関する。詳細には、本開示の単離分子は、可溶性であり、共有結合または非共有結合により、直接またはリンカー分子を介した間接的のいずれかで連結している。これらの分子としては、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を挙げることができ、それらは、当業者に周知の方法に従い、容易に得ることができる。

一部の実施形態では、単離目的または検出目的用に、本明細書で開示する抗原または抗体にアフィニティータグを含ませてもよい。アフィニティータグは当該技術分野において周知であり、標的に結合されて、アフィニティータグに結合する分子を用いて標的を検出または単離するために使用される。主として、抗体またはその他の特異的結合物質が取得可能な任意のペプチドまたはタンパク質は、アフィニティータグとして使用することができる。使用に適した例示的なアフィニティータグとしては、単球アダプタータンパク質（ＭＯＮＡ）結合ペプチド、Ｔ７結合ペプチド、Ｖ５タグ、ストレプトアビジン結合ペプチド、ポリヒスチジントラクト、プロテインＡ（Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．４：１０７５（１９８５）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８：３（１９９１））、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｎｅ ６７：３１（１９８８））、Ｇｌｕ－Ｇｌｕアフィニティータグ（Ｇｒｕｓｓｅｎｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：７９５２（１９８５））、サブスタンスＰ、ＦＬＡＧペプチド（Ｈｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１２０４（１９８８））、またはその他の抗原性エピトープもしくは結合ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。一般的には、Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２：９５（１９９１）を参照されたい。一実施形態では、本明細書で開示する方法にＨｉｓ６タグを使用する。別の実施形態では、本明細書で開示する方法にＦＬＡＧタグを使用する。別の実施形態では、本明細書で開示する方法及び組成物にＶ５タグを使用する。アフィニティータグをコードするＤＮＡ分子は、市販の業者（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）から市販されている。

まとめると、本開示の方法は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原性標的に対する新規モノクローナル抗体を同定、確認、特性決定、及び開発することに集中している。これらの新規モノクローナル抗体は、がんを含む様々な疾患に適用可能な治療用製品、診断用製品、及び予後判定用製品に使用するために開発されている。

一部の実施形態では、ナイーブ抗体ライブラリであってもよい抗体ライブラリは、特定の治療標的、すなわち、抗原、例えば、本明細書で開示するＣＬＥＣ２Ｄタンパク質またはその任意のフラグメントなどに対する所望の機能特性を有する固有抗体分子の単離を可能にする。

多様なライブラリ及び適切かつ相性のよいディスプレイプラットフォームを組み合わせることにより、特定の抗原分子に対するより高い親和性及び優れた機能性を有する治療抗体の迅速な選択及び作製が可能となる。指向性治療抗体分子の標準的なスクリーニングは、より小さな抗体フラグメントによるディスプレイプラットフォームを用いて、標的抗原に対する多様かつ大規模な抗体ライブラリから分子を選択してから、哺乳動物細胞株内で発現する全長抗体分子を構築することを含む。発現後、精製プロセス及びその精製を確認するためのいくつかの機能アッセイを実施する。エピトープの同定、配合、安定性試験、及びｉｎ ｖｉｖｏ効果などのパラメータを最適化することにより、選択リード抗体の開発が更に強化される。

本開示の例示的な実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するヒトナイーブ抗体ライブラリからモノクローナル抗体をスクリーニング、単離、及び開発するための方法は、以下の記述を含む。哺乳動物系内で発現させるために適切に最適化／カスタマイズしたベクターを用いて、様々なＣＬＥＣ２Ｄ抗原構築物、すなわち、野生型及び変異体全長ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の可溶性外部ドメインを設計及び作製してから、均一になるまでアフィニティークロマトグラフィー法を用いて精製すること。

一部の実施形態では、約１～３ラウンドのＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いたファージパニングにより、分子のライブラリのスクリーニングを実施する。それぞれのラウンド中、非結合物質を除去することにより、ライブラリから特異的結合物質を選択する。選択多様性の無作為化を行ってまたは行わずに、ファージディスプレイプラットフォームを用いてスクリーニングした選択分子プールを酵母表面ディスプレイプラットフォームに導入する。これにより、任意のＰＣＲベース法の工程が回避され、それにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する選択分子プールが維持される。酵母ディスプレイプラットフォームは、異なるフォーマットの様々な抗体部分を発現させることを含む。特定の抗原性標的に対して提示フラグメントをスクリーニングしてから、標的抗原に対するより高い親和性を示す特定の集団を分離する。これらの選択されたプールの抗原特異性を更に試験する。最後に、個々のクローンを分離して、クローン集団を個々の抗体クローンのシークエンシングに使用する。

抗原に対してファージパニングするための方法は当該技術分野において周知である。例えば、磁性ビーズを使用してもよい。磁性ダイナビーズ上にコーティングされた抗原を調製し、抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングして、所望の抗体クローンを発現するファージ粒子を分離してもよい。

次に、精製ＤＮＡを消化して、好適な酵母発現ベクターにライゲートしてから、所望のフォーマットの抗体、例えば、ＦａｂまたはＳｃＦｖなどを作製してもよい。標準的な方法を用いて酵母細胞を形質転換してから、抗体発現を確認してもよい。それぞれ重鎖及び軽鎖用、免疫組織化学用の複数種のタグ、例えば、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、及び（Ｈｉｓ）_６タグ、ならびにＶ５タグなどを用いて、抗体の表面発現を解析してもよい。フローサイトメトリーを使用して、特異的抗原結合を示す抗体配列を発現する酵母細胞を単離してもよい。酵母細胞集団のフローサイトメトリーソーティングを少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返して、標識抗原に対するより高い親和性を有する抗体クローンを濃縮してもよい。

当該技術分野において標準的な方法を用いて個々の酵母クローンをシークエンスしてから、抗体配列を好適な哺乳動物遺伝子発現ベクターに更にクローニングする。

本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、ベクターを用いて抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、ファージを形質転換して、高多様性抗体遺伝子ライブラリを含むファージライブラリを作製することを含む。ファージライブラリ内のファージは、ファージの表面上に抗体遺伝子のライブラリを提示している。次に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原でこのファージライブラリをパニングすることにより、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製する。このパニングは、例えば、抗原を磁性ビーズにコンジュゲートすることにより、実施することができ、ビーズ上の抗原に結合するファージを単離するために使用することができる。パニング工程を少なくとも１回、少なくとも２回、またはそれ以上の回数繰り返して、抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現するファージを濃縮してもよい。

次に、濃縮ファージライブラリに由来する抗体または抗体フラグメントの遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入する。一部の実施形態では、この導入は、抗体または抗体フラグメントの遺伝子を好適な酵母形質転換用ベクターにクローニングしてから、当該技術分野において標準的な方法を用いて酵母細胞を形質転換することによって実施される。次に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現する酵母細胞を単離する。一部の実施形態では、この単離は、酵母細胞をソートするためのフローサイトメトリーを使用して、実施される。一部の実施形態では、方法は、フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、もしくは少なくとも５×、またはそれ以上の回数繰り返して、抗原に結合する抗体または抗体フラグメントを発現する酵母細胞を濃縮することを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む。一部の実施形態では、方法は、ＣＬＥＣ２Ｄに結合する抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む。

最適化及び精製
一部の実施形態では、本明細書で開示する方法は、選択抗体遺伝子配列を発現用の哺乳動物細胞株、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株などに円滑に導入するためのベクター構築物の設計、作製、及び最適化、安定細胞株の作製、及びそれに続く全長モノクローナル抗体の精製を含む。これにより、下流プロセスに見られるコンフォメーション及び翻訳後修飾の観点から優れた均一性でモノクローナル抗体を発現する安定細胞株の迅速かつ効率的な樹立が可能となる。

抗体または抗体フラグメントの発現及び精製に好適な全ての細胞株は、本開示の範囲内であるとみなされる。一部の実施形態では、細胞株は哺乳動物細胞株である。細胞株は、ヒト、マウス、及びハムスターを含む任意の供給源から単離または誘導してもよい。好適な細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｂ細胞、ＨＥＫ ２９３－６Ｅ細胞、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４細胞、及びＤＧ４４細胞が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、抗体クローンのＣＤＲ長及びアミノ酸組成を解析して、これらのクローンの新規性を理解する。精製戦略、安定性、及び存在する電荷バリアントまたは抗体内の電荷バリアントに直接的な影響を及ぼす物理化学的特性にとって好ましくないモチーフを有するクローンを除去するために、追加の慎重な解析を実施する。

一部の実施形態では、リード抗体クローンの量産化は、所定の培地、補足剤、及び、当該技術分野において周知及び本明細書に記載の特定のバイオリアクタープロセスにより実現される。

本開示の例示的な精製方法は、抗体分子内のアミノ酸組成物の物理化学的性質を利用したクロマトグラフィー技術の複数の工程を含む。加えて、抗体の宿主細胞タンパク質／不純物、ポリマー（または凝集物）を効果的に除去して、抗体回収率を向上させることにより、より高い純度を達成することができる。安定性を更に向上させる適切な製剤を用いて、抗体分子の精製を完了させる。

治療用組成物は、製造及び保存の条件下で滅菌かつ安定な条件からなる。

抗体精製プロセスは当業者に周知である。任意の特定のプロセスに束縛されるものではないが、例示的な抗体精製プロセスは、精製する抗体または抗体フラグメントを発現する初代細胞培養物を遠心分離にかけてから、３μｍ～３０μｍフィルターなどのフィルターを使用して更に透明にすることを含む。それに続き、回収した濾液を、例えば、０．２２μｍフィルターを通して、更に濾過してもよい。液体クロマトグラフィーを用いて更に精製するために、この試料をカラムに充填してもよい。例示的なカラムとしては、ＸＫ １６／２０プロテインＡカラムが挙げられるがこれらに限定されない。液体クロマトグラフィーは、緩く結合した宿主細胞タンパク質及びその他の不純物を除去するための、高塩洗浄バッファーを用いた処理を含んでいてもよい。低ｐＨ洗浄バッファーを用いて微量の不純物を除去してもよい。それに続き、ｐＨ．３．０～４．０の３０ｍＭリン酸バッファーを使用して、結合タンパク質を溶出してもよい。この試料を希釈して伝導性を低下させてもよく、その後、陰イオン交換（ＡＥＸ）クロマトグラフィーをフロースルーモード（すなわち、陰性結合を使用した）で使用して、更に精製してもよい。例示的なＡＥＸカラムとしては、１０～１００ｍＭヒスチジン及び／またはクエン酸塩及び／またはリン酸塩及び／またはＭＥＳ及び／または酢酸塩バッファー（ｐＨ４．５～６．５）で予め平衡化していてもよい、ＱセファロースＸＫ １６／２０カラムが挙げられるがこれらに限定されない。溶出バッファーを洗浄液として使用して、相互作用の弱いタンパク質を除去してから、例えば、１Ｍ ＮａＣｌ及び／またはＫＣｌを含有する溶出バッファーを使用した単一工程で、結合タンパク質、例えば、本開示の抗体または抗体フラグメントなどを溶出してもよい。ＡＥＸクロマトグラフィーからのフロースルーを、１０～１００ｍＭヒスチジン及び／またはクエン酸塩及び／またはリン酸塩及び／または２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）及び／または酢酸塩バッファー（ｐＨ４．５～６．５）で予め平衡化したａｐｔｏ ＳＰ ＩｍｐＲｅｓ Ｃ１０／２０カラムに充填してもよい。溶出バッファー（ｐＨ４．５～６．５の、２００～１０００ｍＭ ＮａＣｌ及び／またはＫＣｌを含有する平衡バッファー）を使用した段階的溶出に続くグラジエント溶出により、結合タンパク質、例えば、本開示の抗体または抗体フラグメントなどを溶出してもよい。しかしながら、強く結合したタンパク質（存在する場合）を除去するために、ｐＨ４．５～６．５の、１～１．５Ｍ ＮａＣｌを含有する高塩バッファーであってもよい。

まとめると、高純度を達成しつつ、抗体の宿主細胞タンパク質／不純物、ポリマー（または凝集物）を効果的に除去して、抗体回収率を向上させるために、本開示の抗体及び抗体フラグメントをクロマトグラフィー技術の複数の工程で精製してもよい。例示的なクロマトグラフィー法は、イオン交換基と疎水性官能基の両方を含む混合様式レジンの使用を含む。アミノ酸を添加剤として使用してもよい。

治療の方法
本明細書で使用する場合、「治療すること」または「治療する」とは、疾患、症状、または障害を抑制しようとする目的における患者の管理及び看護を表し、疾患、症状、または障害の１種または複数種の症候または合併症を緩和するため、または、疾患、症状、または障害を除去するための、本開示の抗体または本開示の抗体を含む医薬組成物の投与を含む。用語「治療する」はまた、細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ処理または動物モデルの治療を含んでいてもよい。

本開示の抗体またはその医薬組成物はまた、疾患、症状、または障害を予防するために、または、このような目的のための好適な候補を同定するために、使用されてもよい。本明細書で使用する場合、「予防すること」または「予防する」とは、疾患、症状、または障害の症候または合併症の発症を抑制または除去することを表す。

本明細書で使用する場合、用語「緩和する」とは、障害の徴候または症候の重症度が低下するプロセスを表すことを意味する。重要なことに、徴候または症候は、除去されることなく緩和され得る。好ましい実施形態では、本開示の医薬組成物の投与は徴候または症候の除去をもたらすが、除去は必須ではない。有効用量は徴候または症候の重症度を低下させるものと予測される。例えば、複数箇所で生じ得るがんなどの障害の徴候または症候は、複数箇所のうちの少なくとも１箇所の内部においてがんの重症度が低下する場合に、緩和される。

本明細書で使用する場合、用語「症候」は、疾患、疾病、損傷の前兆、または体内において何かが正常ではないことの前兆と定義される。症候は、その症候を経験している個人によって感知または認知されるものであるが、他人によって容易に認知され得るものではない。他人は非医療従事者と定義される。

本明細書で使用する場合、用語「徴候」はまた、体内において何かが正常ではないことの前兆と定義される。しかし、徴候は、医師、看護師、またはその他の医療従事者によって認識され得る事柄と定義される。

本開示の抗体の治療有効量は一般的に、治療目的を達成するのに必要な量に関する。上記のとおり、このことは、特定の例において標的の機能を阻害する、抗体とその標的抗原の間の結合相互作用であり得る。投与が必要な量は更に、抗体のその特異的抗原に対する結合親和性によって決まり、抗体が投与されるその他の対象の遊離容量から投与抗体が枯渇する速度によってもまた決まる。本開示の抗体または抗体フラグメントの治療有効用量の一般的な範囲は、非限定例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）～約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）であってもよい。一般的な投与頻度は、例えば、１日２回から週に１回の範囲であってもよい。

抗体フラグメントを使用する場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さな阻害性フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列をベースとして、標的タンパク質配列への結合能を保持するペプチド分子を設計してもよい。このようなペプチドは、化学的に合成する及び／または組換えＤＮＡ技術を用いて作製することができる。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）を参照のこと）。

本開示の非限定実施形態では、単離モノクローナル抗体により、様々な誘導条件に応じた、免疫細胞及び腫瘍細胞を含む様々な細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的発現が明らかとなった。このことは、複数の疾患適応症用の治療薬としての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の使用を示している。

本開示は、本開示の組成物、抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を必要とする対象にそれを投与することによって、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害することにより、疾患を治療するための方法を提供する。

一部の実施形態では、本開示の組成物、抗体またはその抗原結合フラグメント、及び／または抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸によって治療される疾患は、がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染性疾患、または、ＣＬＥＣ２Ｄが疾患の誘導及び／または発症において役割を果たしている（例えば、ＣＤ１６１を阻害することにより）その他の疾患である。

例示的な疾患としては、血清反応陰性脊椎関節症、例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、及び炎症性腸疾患を伴う脊椎関節症などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては人工関節弛緩が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としてはアテローム性動脈硬化症が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、及び血球貪食症候群などが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群が挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む、がんに関連した疾患及びがんが挙げられるがこれらに限定されない。

例示的な疾患としては、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮細胞癌及び子宮頸腺癌、胆管癌、結腸腺癌、リンパ系腫瘍びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、多形膠芽腫、頭頸部扁平上皮細胞癌、色素嫌性腎癌、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳低グレード神経膠腫、肝臓肝細胞癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜黒色腫が挙げられるがこれらに限定されない。

好ましい実施形態では、本開示の組成物及び方法は、骨への転移性がんの治療に関し、転移性がんは、乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、白血病及びリンパ腫を含む血液細胞悪性腫瘍；頭頸部癌；食道癌、胃癌、結腸癌、腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、咽頭癌、胆管または胆嚢の癌を含む消化管癌；卵巣癌、子宮内膜癌、腟癌、及び子宮頸癌を含む女性生殖管の悪性腫瘍；膀胱癌；神経芽細胞腫を含む脳癌；肉腫、骨肉腫；ならびに、悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌である。

一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、免疫細胞の活性化を必要とする対象においてそれを実施することに関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはＴ細胞）の活性化に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、哺乳動物対象の治療に関する。一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、ヒト対象の治療に関する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、細胞は免疫細胞または腫瘍細胞である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害するのに有効な量で、対象に投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、様々な細胞表面におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＮＫ細胞に結合して活性化させるのに有効な量で、対象に投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための治療薬として使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連する疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用される本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、血清反応陰性脊椎関節症、例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、ライター症候群、及び炎症性腸疾患を伴う脊椎関節症などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、結合組織病、例えば、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、アテローム性動脈硬化症及び冠状動脈疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、及び血球貪食症候群などを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、がんに関連した疾患及びがんを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、子宮癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、骨髄腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、胃癌、腸癌、精巣癌、皮膚癌、甲状腺癌、胸腺腫、頭頸部癌、肝臓癌、咽頭癌、副腎皮質癌、胆管癌、中皮腫、肉腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、びまん性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫を含む、がんに関連した疾患及びがんを含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、骨への転移性がんまたはがんに関連した疾患を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、転移性がんまたはがんに関連した疾患（転移性がんは、乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、白血病及びリンパ腫を含む血液細胞悪性腫瘍；頭頸部癌；食道癌、胃癌、結腸癌、腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管または胆嚢の癌を含む消化管癌；卵巣癌、子宮内膜癌、腟癌、及び子宮頸癌を含む女性生殖管の悪性腫瘍；膀胱癌；神経芽細胞腫を含む脳癌；肉腫、骨肉腫；ならびに、悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌である）を含むがこれらに限定されない疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法に使用され、方法は、対象における疾患の症候を治療または緩和するのに有効な量で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物を投与することを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、臓器移植または養子免疫細胞移植による対象の治療方法に使用される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、ＣＤ１６１及びＣＬＥＣ２Ｄの相互作用を遮断して、レシピエントの樹状細胞が同種反応性ＮＫ細胞によって殺傷される場合に起因して、移植片対宿主拒絶反応を抑制する。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物によって引き起こされる、対象における感染性疾患を治療するための方法に使用される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、とりわけ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．（例えば、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ及びＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉなど）、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ．（例えば、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｖｅｒｏｎｉｉ ｂｉｏｖａｒ ｓｏｂｒｉａ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、及びＡｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅなど），Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎａｐｌａｓｍａ ｍａｒｇｉｎａｌｅ Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓなど）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．（例えば、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓなど）、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ及びＢａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅなど）、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、及びＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａなど）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐ．（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ，及びＢｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉなど）、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｃａｎｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｎｔｅｎｓｉｓ及びＢｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓなど）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐ．（例えば、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ及びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａなど）、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｌａｒｉ及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓなど）、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｓｐ．、Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｉｋｅｕｍ及びＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍなど）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉなど）、Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ及びｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（例えば、ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｉｎｖａｓｉｖｅ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ、ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅ．ｃｏｌｉ及びｕｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉなど）を含むＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなど）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍなど）、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｓｐ．（例えば、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｅｅｎｓｉａ及びＥｈｒｌｉｃｈｉａ ｃａｎｉｓなど）、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ａｅｇｙｐｔｉｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ及びＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓなど）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．（例えば、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｃｉｎａｅｄｉ及びＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｎｎｅｌｌｉａｅなど）、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇｉｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ及びＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａなど）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍなど）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ ｓｐ．（例えば、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ、及びＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍなど）、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐ．（例えば、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｃｙｒｉａｃｉｇｅｏｒｇｉｃａ及びＮｏｃａｒｄｉａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなど）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ．（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ及びＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓなど）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｒｂｉｃｕｌａｒｅ（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ）、Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐ．、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｓｐ．、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ及びＰｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓなど）、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｐ．（例えば、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｒｅｔｔｇｅｒｉ及びＰｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ ｓｔｕａｒｔｉｉなど）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｓｐ．（例えば、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ及びＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ（ｆｏｒｍｅｒｌｙ： Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ）及びＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉなど）、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍなど）、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｓｐ．（例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓａｎｓ及びＳｅｒｒａｔｉａ ｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓなど）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐ．（例えば、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ及びＳｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉなど）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、クロラムフェニコール耐性血清型４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、スペクチノマイシン耐性血清型６Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ストレプトマイシン耐性血清型９Ｖ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、エリスロマイシン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オプトヒン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、リファンピシン耐性血清型１８Ｃ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、テトラサイクリン耐性血清型１９Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ペニシリン耐性血清型１９Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、及びトリメトプリム耐性血清型２３Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、クロラムフェニコール耐性血清型４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、スペクチノマイシン耐性血清型６Ｂ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ストレプトマイシン耐性血清型、９Ｖ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オプトヒン耐性血清型１４ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、リファンピシン耐性血清型１８Ｃ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ペニシリン耐性血清型１９Ｆ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはトリメトプリム耐性血清型２３Ｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｃ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ


ｅｑｕｉｓｍｉｌｉｓ、Ｄ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｆ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｇｉｎｏｓｕｓ Ｇ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｍｉｎｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｓｐ．（例えば、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｃａｒａｔｅｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｔｅｎｕｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ及びＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｅｎｄｅｍｉｃｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ、Ｔ． ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ、Ｔｒｏｐｈｅｒｙｍａ ｗｈｉｐｐｅｌｉｉなど）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｓｐ．、Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐ．（例えば、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ，Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｍｉｍｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｈｏｌｌｉｓａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｍｅｔｃｈｎｉｋｏｖｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ ｄａｍｓｅｌａ及びＶｉｂｒｉｏ ｆｕｒｎｉｓｉｉなど）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｐ．（例えば、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、及びＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）及びＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における細菌性疾患を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉ、ｓｐ．Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐ．（例えば、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍなど）、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．（例えば、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉなど）、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ（例えば、Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｃｈａｒｔａｒｕｍなど）、Ｍｕｃｒｏｙｍｃｏｓｉｓ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ、真菌眼感染症白癬、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における真菌性疾患を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、Ｅｕｇｌｅｎｏｚｏａ、Ｈｅｔｅｒｏｌｏｂｏｓｅａ、Ｄｉｐｌｏｍｏｎａｄｉｄａ、Ａｍｏｅｂｏｚｏａ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｃ、及びＡｐｉｃｏｍｐｌｅｘａのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象における原虫感染症を治療するための方法に使用される。例示的なＥｕｇｌｅｎｏｚａとしては、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌ．ｍａｊｏｒ、Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、及びＬ．ｄｏｎｏｖａｎｉが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＨｅｔｅｒｏｌｏｂｏｓｅａとしてはＮａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＤｉｐｌｏｍｏｎａｄｉｄｓとしてはＧｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ（Ｇ．ｌａｍｂｌｉａ、Ｇ．ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ）が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＡｍｏｅｂｏｚｏａとしては、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｉ、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ ｍａｄｒｉｌｌａｒｉｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＢｌａｓｔｏｃｙｓｔｓとしてはＢｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｃ ｈｏｍｉｎｉｓが挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＡｐｉｃｏｍｐｌｅｘａとしては、Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｏｖａｌｅ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、及びＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、エボラウイルス、麻疹ウイルス、ＳＡＲＳ、チクングニヤウイルス、肝炎ウイルス、マールブルグウイルス、黄熱ウイルス、ＭＥＲＳ、デング熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、インフルエンザウイルス、ラブドウイルス、またはＨＩＶのうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象におけるウイルス性疾患を治療するための方法に使用される。肝炎ウイルスは、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎を含み得る。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物は、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、スーダンエボラウイルス、ブンディブギョウイルス、タイフォレストエボラウイルス、レストンエボラウイルス、Ａｃｈｉｍｏｔａ、ヤブカ属フラビウイルス、Ａｇｕａｃａｔｅウイルス、アカバネウイルス、Ａｌｅｔｈｉｎｏｐｈｉｄ ｒｅｐｔａｒｅｎａウイルス、Ａｌｌｐａｈｕａｙｏマンマレナウイルス、Ａｍａｐｒｉマンマレナウイルス、アンデスウイルス、アポイウイルス、アラバンウイルス、アロアウイルス、Ａｒｕｍｗｏｔウイルス、タイセイヨウサケパラミクソウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、トリボルナウイルス、トリメタニューモウイルス、トリパラミクソウイルス、ペンギンまたはフォークランド諸島ウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バガザウイルス、バンナウイルス、コウモリヘルペスウイルス、コウモリサポウイルス、Ｂｅａｒ Ｃａｎｏｎマンマレナウイルス、Ｂｅｉｌｏｎｇウイルス、ベータコロナウイルス、ベータパピローマウイルス１～６、Ｂｈａｎｊａウイルス、ボケローコウモリリッサウイルス、ボルナ病ウイルス、バーボンウイルス、ウシヘパシウイルス、ウシパラインフルエンザウイルス３、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、Ｂｒａｚｏｒａｎウイルス、ブニヤンベラウイルス、カリシウイルス科ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、カンディルーウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌニューモウイルス、シダーウイルス、細胞融合因子ウイルス、クジラ目モルビリウイルス、チャンディプラウイルス、朝陽ウイルス、チャパレマンマレナウイルス、チクングニヤウイルス、コロブスサルパピローマウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、牛痘ウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、イエカ属フラビウイルス、Ｃｕｐｉｘｉマンマレナウイルス、デング熱ウイルス、ドブラバベオグラードウイルス、Ｄｏｎｇｇａｎｇウイルス、Ｄｕｇｂｅウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エンテベコウモリウイルス、エンテロウイルスＡ～Ｄ、ヨーロッパコウモリリッサウイルス１～２、Ｅｙａｃｈウイルス、ネコモルビリウイルス、フェルドランスパラミクソウイルス、フィッツロイ川ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、フレキサルマンマレナウイルス、ＧＢウイルスＣ、Ｇａｉｒｏウイルス、ゲミサーキュラーウイルス、ガチョウパラミクソウイルスＳＦ０２、グレートアイランドウイルス、グアナリトマンマレナウイルス、ハンタンウイルス、ハンタウイルスＺ１０、ハートランドウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｅ型肝炎、デルタ型肝炎ウイルス、ヒトボカウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒト内在性レトロウイルスＫ、ヒト腸内コロナウイルス、ヒト生殖器関連環状ＤＮＡウイルス－１、ヒトヘルペスウイルス１～８、ヒト免疫不全ウイルス１／２、ヒトマストアデノウイルスＡＧ、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス１～４、ヒトパレコウイルス、ヒトピコルナウイルス、ヒトスマコウイルス、イコマリッサウイルス、イレウスウイルス、インフルエンザＡ～Ｃ、イッピーマンマレナウイルス、イルクーツウイルス、Ｊ－ウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンマンマレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、カディピロウイルス、カミチ川ウイルス、Ｋｅｄｏｕｇｏｕウイルス、クージャンウイルス、ココベラウイルス、キャサヌル森林病ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ランガットウイルス、ラッサマンマレナウイルス、ラティーノマンマレナウイルス、Ｌｅｏｐａｒｄｓ Ｈｉｌｌウイルス、遼寧ウイルス、ユンガンウイルス、Ｌｌｏｖｉｕウイルス、跳躍病ウイルス、ルジョマンマレナウイルス、Ｌｕｎａマンマレナウイルス、Ｌｕｎｋウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎マンマレナウイルス、リッサウイルスＯｚｅｒｎｏｅ、ＭＳＳＩ２Ｙ２２５ウイルス、マチュポマンマレナウイルス、ママストロウイルス１、マンサニリャウイルス、マプエラウイルス、マールブルグウイルス、マヤロウイルス、麻疹ウイルス、メナングルウイルス、Ｍｅｒｃａｄｅｏウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス、モバラマンマレナウイルス、モドックウイルス、Ｍｏｉｊａｎｇウイルス、Ｍｏｋｏｌｏウイルス、サル痘ウイルス、モンタナホオヒゲコウモリ白質脳炎ウイルス、モペイアラッサウイルス再集合２９、モペイアマンマレナウイルス、モロゴロウイルス、モスマンウイルス、ムンプスウイルス、マウス肺炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、Ｎａｒｉｖａウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、ノルウェーラットヘパシウイルス、ウンタヤウイルス、オニョンニョンウイルス、オリベロスマンマレナウイルス、オムスク出血熱ウイルス、オロポーチウイルス、パラインフルエンザウイルス５、パラナマンマレナウイルス、パラマッタ川ウイルス、小反芻獣疫ウイルス、Ｐｉｃｈａｎｄｅマンマレナウイルス、ピコルナウイルス科ウイルス、Ｐｉｒｉｔａｌマンマレナウイルス、ピスチヘペウイルスＡ、ブタパラインフルエンザウイルス１、ブタルブラウイルス、ポワッサンウイルス、霊長類Ｔリンパ指向性ウイルス１～２、霊長類エリスロパルボウイルス１、プンタトロウイルス、プーマラウイルス、クアンビンウイルス、狂犬病ウイルス、Ｒａｚｄａｎウイルス、爬虫類ボルナウイルス１、ライノウイルスＡ～Ｂ、リフトバレー熱ウイルス、牛疫ウイルス、リオブラボーウイルス、げっ歯類トルクテノウイルス、げっ歯類ヘパシウイルス、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ～Ｉ、ロイヤルファームウイルス、風疹ウイルス、サビアマンマレナウイルス、セーラムウイルス、サシチョウバエ熱ナポリウイルス、サシチョウバエ熱シシリアンウイルス、サッポロウイルス、サシュペリウイルス、アザラシ科アネロウイルス、セムリキ森林ウイルス、センダイウイルス、ソウルウイルス、セピックウイルス、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス、重症熱性血小板減少症候群ウイルス、シャモンダウイルス、Ｓｈｉｍｏｎｉコウモリウイルス、シュニウイルス、シンブウイルス、類人猿トルクテノウイルス、シミアンウイルス４０～４１、シンノンブレウイルス、シンドビスウイルス、小アネロウイルス、Ｓｏｓｕｇａウイルス、スペインヤギ脳炎ウイルス、スポンドウェニウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、サンシャインウイルス、ＴＴＶ様ミニウイルス、タカリベマンマレナウイルス、タイラウイルス、タマナコウモリウイルス、タミアミマンマレナウイルス、テンブスウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤムウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、ティオマンウイルス、トガウイルス科ウイルス、トルクテノイヌウイルス、トルクテノヨザルウイルス、トルクテノネコウイルス、トルクテノミディウイルス、トルクテノｓｕｓウイルス、トルクテノタマリンウイルス、トルクテノウイルス、トルクテノアシカウイルス、Ｔｕｈｏｋｏウイルス、トゥーラウイルス、ツパイパラミクソウイルス、ウスツウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、痘瘡ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎インディアナウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウェッセルスブロンウイルス、西コーカサスコウモリウイルス、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ホワイトウォーターアロヨマンマレナウイルス、黄熱ウイルス、ヨコセウイルス、Ｙｕｇ Ｂｏｇｄａｎｏｖａｃウイルス、ザイールエボラウイルス、ジカウイルス、またはＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉウイルスＺウイルス性配列のうちのいずれか１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）によって引き起こされる、対象におけるウイルス性疾患を治療するための方法に使用される。治療可能なＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患の例は、コロナウイルス科ウイルス、ピコルナウイルス科ウイルス、カリシウイルス科ウイルス、フラビウイルス科ウイルス、トガウイルス科ウイルス、ボルナウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ニューモウイルス科、ラブドウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、オルソミクソウイルス科、またはデルタウイルスのうちの１つまたは複数（またはその任意の組み合わせ）を含む。特定の実施形態では、ウイルスは、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ポリオウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎、ノーウォークウイルス、黄熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、ロスリバーウイルス、シンドビスウイルス、チクングニヤウイルス、ボルナ病ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ニパウイルス、ヘンドラウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、ラッサウイルス、ハンタウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、インフルエンザ、またはＤ型肝炎ウイルスである。特定の実施形態では、ウイルスは、アルファレトロウイルス属、ベータレトロウイルス属、ガンマレトロウイルス属、デルタレトロウイルス属、イプシロンレトロウイルス属、レンチウイルス属、スプーマウイルス属、または、メタウイルス科、シュードウイルス科、及びレトロウイルス科（ＨＩＶを含む）、ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルスを含む）、ならびにカリモウイルス科（カリフラワーモザイクウイルスを含む）のウイルスのうちの１つまたは複数またはその任意の組み合わせを含むがこれらに限定されないレトロウイルスである。

一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性ウイルス感染症、例えば、ＨＩＶなどを含む。一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性細菌感染症、例えば、結核（ＴＢ）などを含む。一部の実施形態では、感染性疾患は、慢性寄生虫感染症、例えば、マラリアなどを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、（ｉ）様々な細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄの、免疫細胞の表面上におけるＣＤ１６１への結合を遮断すること、（ｉｉ）様々な細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現を抑制すること、（ｉｉｉ）ＣＬＥＣ２Ｄの免疫細胞上のＣＤ１６１への結合により免疫細胞において誘導される１種または複数種の遺伝子の発現を抑制すること、（ｉｖ）免疫細胞の表面上における１つまたは複数のＦｃ受容体に結合すること及び／またはそれを活性化させること、（ｖ）免疫細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して免疫細胞を活性化させること、またはこれらの任意の組み合わせのいずれかにとって十分な量で、１種または複数種の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を治療薬として、疾患または障害の治療を必要とする対象に投与することを含む、疾患または障害の治療を必要とする対象の様々な細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの高発現を特徴とする疾患または障害を治療するための方法に使用される。

一部の実施形態では、本発明は、ａ）対象に由来する試料中における生存及び／または増殖がん細胞の数を検出すること、ｂ）治療有効量の１種または複数種の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、ｃ）工程ａ）を１回または複数回繰り返すこと、及びｄ）工程ａ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数を工程ｃ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数と比較すること、を含む、がんもしくは腫瘍またはその両方を患う対象における治療薬の効果を評価するための方法に関し、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、（ｉ）がん細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して、腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄと免疫細胞の表面上におけるＣＤ１６１の間の相互作用を阻害する、（ｉｉ）がん細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ及び免疫細胞の表面上におけるＦｃ受容体に結合して、がん細胞の溶解を誘導する、（ｉｉｉ）免疫細胞の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄに結合して免疫細胞を活性化させる、またはこれらの組み合わせであり、工程ａ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の数と比較した、工程ｃ）で検出した生存及び／または増殖がん細胞の不在またはその数の減少は、治療薬が有効であることを示す。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物は、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞の機能を向上させ得る。

一部の実施形態では、本発明は、対象における疾患または障害を治療するための方法に関し、方法は、治療有効量の本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び治療有効量の少なくとも第２の治療薬の組み合わせを必要とする対象にそれを投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、腫瘍細胞または免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。

一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、腫瘍細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、抗体誘導細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体誘導細胞傷害（ＣＤＣ）を介した免疫細胞による殺傷を誘導する、腫瘍細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞の活性化を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞によるサイトカイン産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞によるケモカイン産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞の炎症性サイトカインの産生を誘導する、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞を活性化させることによりがん細胞を認識させてがん細胞における細胞傷害を誘導させる、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含む。一部の実施形態では、少なくとも１種の本明細書で開示する第２の治療薬は、免疫細胞を活性化させることにより病原体に感染した細胞を認識させてそれら細胞における細胞傷害を誘導させる、免疫細胞の表面上に発現するタンパク質または抗原に対する治療抗体を含み、病原体としてはウイルスまたは細菌が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本明細書で開示する、対象における疾患または障害を治療するための方法は、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物及び少なくとも第２の治療薬を連続的または同時に投与することを含む。

炎症性疾患の治療
一部の実施形態では、本開示の抗体及び抗体を含む医薬組成物によって治療される疾患または障害は、炎症性疾患もしくは炎症性障害または自己免疫疾患もしくは自己免疫障害を含む。

本明細書で使用する場合、用語「炎症性障害」とは、通常は好中球の走化性によって引き起こされる炎症を招く病理学的状態のことを意味する。

本明細書で使用する場合、自己免疫疾患または自己免疫障害は、通常は細菌、ウイルス、及びその他の感染性物質から体を防御する体の免疫系が「自己」組織、細胞、及び器官を攻撃する際に引き起こされる。このような「自己」標的に対して免疫系を動員することを自己免疫と呼ぶ。全ての個体にはある程度の自己免疫が存在しているが、自己免疫が正常に無症候性となるくらいまで、厳格な制御系が免疫系の自己認識細胞を抑制している。疾患状態は、制御系に何らかの遮断が生じて自己免疫細胞の抑制回避が可能となる際、または、標的組織に何らかの変化が生じ、その結果、標的組織がもはや自己として認識されないようになる際に生じる。自己免疫障害は炎症反応を特徴とし得る。

炎症性障害または自己免疫障害の例示的ではあるが非限定例としては、血清反応陰性脊椎関節症、結合組織病、炎症性腸疾患、関節炎、炎症性皮膚症状、炎症性肺疾患、炎症性腎疾患、全身性血管炎、マクロファージ活性化疾患、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、レイノー現象及びグッドパスチャー症候群が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、炎症性障害または自己免疫障害の徴候または症候を緩和または予防する。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、対象の１つまたは複数の組織または器官における炎症の量を低下させる。

一部の実施形態では、治療有効量の、本開示の抗体を含む医薬組成物の抗体は、疾患または免疫応答の１つまたは複数の局面を一時的に抑制または阻害する。疾患または免疫系の１つまたは複数の局面におけるこのような一時的な阻害または抑制は、何時間、何日間、何週間、または何ヶ月間にもわたり継続し得る。好ましくは、疾患または免疫応答の１つまたは複数の局面における一時的な阻害または抑制は、数時間（例えば、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２４時間、３６時間、または４８時間）、数日間（例えば、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、または１４日間）、または数週間（例えば、３週間、４週間、５週間、または６週間）にわたり継続する。

本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物の予防活性、治療活性、または免疫調節活性は、例えば、共刺激分子及びサイトカインなどの特定のタンパク質の発現用のＣＴＬアッセイ、増殖アッセイ、及びイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）を含む当業者に周知の任意の技術を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏで測定することができる。

がんの治療
本明細書で使用する場合、用語「重症度」とは、前がん性または良性の状態から悪性の状態へとがんが変化する可能性を表すことを意味する。代替的にまたは加えて、重症度とは、例えば、ＴＮＭシステム（ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃａｎｃｅｒ（ＵＩＣＣ）及びｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）によって承認されている）またはその他の技術分野において認知されている方法による、がんのステージを表すことを意味する。がんのステージとは、原発性腫瘍の場所、腫瘍サイズ、腫瘍の数、及びリンパ節浸潤（リンパ節へのがんの拡散）などの因子に基づいた、がんの程度または重症度のことを意味する。代替的にまたは加えて、重症度とは、技術分野において認知されている方法による腫瘍グレードを表すことを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。腫瘍グレードは、顕微鏡下でがん細胞がどの程度異常に見えるか及び腫瘍がどの程度急速に増殖及び拡散する可能性があるかを基準として、がん細胞を分類するのに用いられるシステムである。腫瘍グレードを判定する際には、細胞の構造パターン及び増殖パターンを含む多くの因子を検討する。腫瘍グレードを判定するのに用いられる個々の因子は、それぞれのがんのタイプによって変化する。重症度はまた、組織学的グレード（分化とも呼ばれる）を表し、組織学的グレードとは、腫瘍細胞がどの程度同一組織タイプの正常細胞に類似しているかということを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。更に、重症度は核グレードを表し、核グレードとは、腫瘍細胞内の核のサイズ及び形状、及び分裂している腫瘍細胞のパーセンテージのことを意味する（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照のこと）。

本開示の別の態様では、重症度は、腫瘍が増殖因子を分泌した度合い、腫瘍が細胞外マトリックスを分解した度合い、腫瘍が血管を新生した度合い、腫瘍が近位組織への接着を失った度合い、または腫瘍が転移した度合いを表す。更に、重症度は、原発性腫瘍が転移した場所の数を表す。最後に、重症度は、様々なタイプ及び場所の腫瘍を治療することの困難さを含む。例えば、複数の身体系へとより多く侵入する手術不能腫瘍及び手術不能がん（血液腫瘍及び免疫学的腫瘍）、ならびに、従来の治療法に最大限の耐性を示す手術不能腫瘍及び手術不能がんが、最も重度であると考えられる。これらの状況において、対象の平均余命を延長すること及び／または疼痛を軽減すること、がん性細胞の比率を低下させることまたはそれらの細胞を１つの系に限定すること、及びがんのステージ／腫瘍グレード／組織学的グレード／核グレードを改善することは、がんの徴候または症候を緩和するものと考えられる。

がんは、ほぼあらゆる徴候または症候を引き起こし得る疾患の集合である。徴候及び症候は、がんがどこにあるか、がんのサイズ、及びがんがどの程度隣接する器官または構造体に影響を及ぼしているかによって決まる。がんが拡散（転移）している場合、症候は体の様々な部分に現れ得る。

がんを治療することにより、腫瘍サイズの低下をもたらすことができる。腫瘍サイズの低下はまた、「腫瘍退縮」と呼ばれることもある。好ましくは、治療後、腫瘍サイズは、その治療前のサイズと比較して５％以上低下する、より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上低下する、より好ましくは、２０％以上低下する、より好ましくは、３０％以上低下する、より好ましくは、４０％以上低下する、更により好ましくは、５０％以上低下する、及び最も好ましくは、７５％超またはそれ以上低下する。腫瘍サイズは、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍サイズは、腫瘍の直径で測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍容積の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍容積は、その治療前のサイズと比較して５％以上低下する、より好ましくは、腫瘍容積は、１０％以上低下する、より好ましくは、２０％以上低下する、より好ましくは、３０％以上低下する、より好ましくは、４０％以上低下する、更により好ましくは、５０％以上低下する、及び最も好ましくは、７５％超またはそれ以上低下する。腫瘍容積は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍の数の減少がもたらされる。好ましくは、治療後、腫瘍の数は、治療前の数と比較して５％以上減少する、より好ましくは、腫瘍の数は、１０％以上減少する、より好ましくは、２０％以上減少する、より好ましくは、３０％以上減少する、より好ましくは、４０％以上減少する、更により好ましくは、５０％以上減少する、及び最も好ましくは、７５％超減少する。腫瘍の数は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍の数は、肉眼または特定の倍率で確認できる腫瘍をカウントすることによって測定してもよい。好ましくは、特定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。

がんを治療することにより、原発性腫瘍部位から離れたその他の組織または器官における転移性病変の数の減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、転移性病変の数は、治療前の数と比較して５％以上減少する、より好ましくは、転移性病変の数は、１０％以上減少する、より好ましくは、２０％以上減少する、より好ましくは、３０％以上減少する、より好ましくは、４０％以上減少する、更により好ましくは、５０％以上減少する、及び最も好ましくは、７５％超減少する。転移性病変の数は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。転移性病変の数は、肉眼または特定の倍率で確認できる転移性病変をカウントすることによって測定してもよい。好ましくは、特定の倍率は、２×、３×、４×、５×、１０×、または５０×である。

がんを治療することにより、担体のみを投与されている集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、未治療対象の集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、本開示の抗体ではない薬物を用いた単剤治療を受けている集団と比較して、治療対象の集団における平均生存期間の延長をもたらすことができる。好ましくは、平均生存期間は、３０日間超、より好ましくは、６０日間超、より好ましくは、９０日間超、及び最も好ましくは、１２０日間超延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の開始後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。集団の平均生存期間の延長はまた、例えば、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物を用いた治療の第１のラウンドの完了後における集団の平均生存長を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、担体のみを投与されている集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。がんを治療することにより、未治療集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。がんを治療することにより、本開示の抗体または抗体を含む医薬組成物ではない薬物を用いた単剤治療を受けている集団と比較して、治療対象の集団における死亡率の低下をもたらすことができる。好ましくは、死亡率は、２％超、より好ましくは、５％超、より好ましくは、１０％超、及び最も好ましくは、２５％超低下する。治療対象の集団における死亡率の低下は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の死亡率の低下は、例えば、抗体を用いた治療の開始後における、単位時間あたりの集団の平均疾患関連死亡数を計算することによって測定してもよい。集団の死亡率の低下はまた、例えば、抗体を用いた治療の第１のラウンドの完了後における、単位時間あたりの集団の平均疾患関連死亡数を計算することによって測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍増殖速度の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍増殖速度は、治療前の数値と比較して少なくとも５％低下する、より好ましくは、腫瘍増殖速度は、少なくとも１０％低下する、より好ましくは、少なくとも２０％低下する、より好ましくは、少なくとも３０％低下する、より好ましくは、少なくとも４０％低下する、より好ましくは、少なくとも５０％低下する、更により好ましくは、少なくとも５０％低下する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。腫瘍増殖速度は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍増殖速度は、単位時間あたりの腫瘍直径の変化によって測定してもよい。

がんを治療することにより、腫瘍再増殖の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍再増殖は、５％未満である、より好ましくは、腫瘍再増殖は、１０％未満である、より好ましくは、２０％未満である、より好ましくは、３０％未満である、より好ましくは、４０％未満である、より好ましくは、５０％未満である、更により好ましくは、５０％未満である、及び最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再増殖は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。腫瘍再増殖は、例えば、治療に続く事前の腫瘍縮小後における腫瘍直径の増加を測定することによって測定される。腫瘍再増殖の低下は、治療停止後において腫瘍が再発しないことによって示される。

がんを治療することにより、細胞増殖速度の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、細胞増殖速度は、少なくとも５％、より好ましくは、少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、更により好ましくは、少なくとも５０％、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖速度は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。細胞増殖速度は、例えば、単位時間あたりの組織試料中における分裂細胞の数を測定することによって測定される。

がんを治療することにより、増殖細胞比率の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、増殖細胞比率は、少なくとも５％、より好ましくは、少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、より好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、更により好ましくは、少なくとも５０％、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。増殖細胞比率は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。好ましくは、増殖細胞比率は、例えば、組織試料中における非分裂細胞の数と比較して分裂細胞の数を定量することによって測定される。増殖細胞比率は有糸分裂指数と同義であってもよい。

がんを治療することにより、細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズ低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、その治療前のサイズと比較して少なくとも５％低下する、より好ましくは、少なくとも１０％低下する、より好ましくは、少なくとも２０％低下する、より好ましくは、少なくとも３０％低下する、より好ましくは、少なくとも４０％低下する、より好ましくは、少なくとも５０％低下する、更により好ましくは、少なくとも５０％低下する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％低下する。細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。細胞増殖エリアまたはゾーンのサイズは、細胞増殖エリアまたはゾーンの直径または幅で測定してもよい。がんを治療することにより、異常な外観または形態を有する細胞の数の減少または比率の低下をもたらすことができる。好ましくは、治療後、異常な形態を有する細胞の数は、その治療前のサイズと比較して少なくとも５％減少する、より好ましくは、少なくとも１０％減少する、より好ましくは、少なくとも２０％減少する、より好ましくは、少なくとも３０％減少する、より好ましくは、少なくとも４０％減少する、より好ましくは、少なくとも５０％減少する、更により好ましくは、少なくとも５０％減少する、及び最も好ましくは、少なくとも７５％減少する。異常細胞の外観または形態は、任意の再現可能な測定方法を用いて測定してもよい。異常細胞の形態は、顕微鏡により、例えば、倒立組織培養顕微鏡を使用して測定することができる。異常細胞の形態は、核多型の形態を取り得る。

がんを治療することにより、細胞死をもたらすことができる、及び好ましくは、細胞死により、集団の細胞の数において少なくとも１０％の減少がもたらされる。より好ましくは、細胞死とは、少なくとも２０％の減少、より好ましくは、少なくとも３０％の減少、より好ましくは、少なくとも４０％の減少、より好ましくは、少なくとも５０％の減少、最も好ましくは、少なくとも７５％の減少のことを意味する。集団の細胞の数は、任意の再現可能な方法を用いて測定してもよい。集団の細胞の数は、蛍光活性化細胞分離法（ＦＡＣＳ）、免疫蛍光顕微鏡検査法、及び光学顕微鏡検査法を用いて測定することができる。細胞死を測定するための方法については、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１００（５）：２６７４－８，２００３に示されている。一態様では、細胞死はアポトーシスによって生じる。

単剤治療薬
本開示の一部の実施形態では、本開示の抗体及び組成物は、疾患を治療するための単剤治療薬として投与される。

本明細書で使用する場合、「単剤治療」とは、単一の活性化合物または治療用化合物を必要とする対象にそれを投与することのことを意味する。好ましくは、単剤治療は、治療有効量の活性化合物の投与を含む。例えば、がんの治療を必要とする対象への、本開示の抗体またはその医薬組成物のうちの１つを用いたがん単剤治療である。単剤治療は、複数の活性化合物の組み合わせを投与する組み合わせ治療と対照をなし得、好ましくは、組み合わせのそれぞれの構成成分は治療有効量で含まれている。一態様では、本開示の抗体または医薬組成物を用いた単剤治療は、所望の生物学的効果を誘導する上で、組み合わせ治療と比較してより効果的である。

本開示の抗体はまた、試料中におけるＣＬＥＣ２Ｄ（またはタンパク質もしくはそのタンパク質フラグメント）の存在を検出するための薬剤として使用することができる。好ましくは、抗体は検出可能標識を含有している。抗体はポリクローナルであってもよく、またはより好ましくは、モノクローナルであってもよい。インタクト抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆ_ａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ_{（ａｂ）２}）を使用してもよい。プローブまたは抗体に関する用語「標識」とは、検出可能物質をプローブまたは抗体にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことによるプローブまたは抗体の直接標識に加えて、直接標識されていない別の試薬と反応させることによるプローブまたは抗体の間接標識を包含することを意図する。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出、及び、蛍光標識ストレプトアビジンによる検出が可能となるような、ビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。用語「生体試料」とは、対象から単離した組織、細胞、及び体液に加えて、対象内に存在する組織、細胞、及び体液を含むことを意味している。それゆえ、用語「生体試料」の用法内に含まれるのは、血液、及び、血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または構成成分である。つまり、本開示の検出方法を使用して、生体試料中の検体ｍＲＮＡ、検体タンパク質、または検体ゲノムＤＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏに加えてｉｎ ｖｉｖｏで検出することができる。例えば、検体ｍＲＮＡを検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーション及びｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが挙げられる。検体タンパク質を検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としては、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット法、免疫沈降、及び免疫蛍光法が挙げられる。検体ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術としてはサザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを実施するための手法については、例えば、“ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ａｎｄ Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６；及び“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。更に、検体タンパク質を検出するためのｉｎ ｖｉｖｏ技術は、標識抗検体タンパク質抗体を対象に導入することを含む。例えば、対象内におけるその存在及び位置を標準的なイメージング技術で検出することができる放射性マーカーで抗体を標識してもよい。

ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質（またはそのフラグメント）に向かう抗体を、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の位置確認及び／または定量に関する当該技術分野において周知の方法に使用してもよい（例えば、適切な生理学的試料中におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定するのに使用する、診断法に使用する、タンパク質をイメージングするのに使用するなど）。任意の実施形態では、抗体由来抗原結合ドメインを含有する、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に特異的な抗体、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログを、薬理活性化合物（以下、「治療薬」と呼ぶ）として利用する。

本開示のＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に特異的な抗体を使用して、イムノアフィニティークロマトグラフィーまたは免疫沈降などの標準的な技術によりＣＬＥＣ２Ｄポリペプチドを単離してもよい。例えば、任意の治療レジメンの効果を確認するための臨床検査手法の一部として、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質（またはそのフラグメント）に向かう抗体を診断的に使用して、組織中におけるタンパク質レベルをモニターしてもよい。検出は、抗体を検出可能物質にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結させる）ことにより容易となり得る。検出可能物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び放射性物質が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリスリンが挙げられ、発光物質の例としてはルミノールが挙げられ、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ、好適な放射性物質の例としては、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、または^３Ｈが挙げられる。

組み合わせ治療
本開示の一部の実施形態では、本開示の抗体及び組成物は、疾患を治療するための組み合わせ治療の一部として投与される。

例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、異種移植試験において、単独及びチェックポイントモノクローナル抗体（抗ＰＤＬ１）との組み合わせで試験が行われている。抗ＣＬＥＣ２Ｄ及び抗ＰＤＬ１を用いた組み合わせ治療により、有意な腫瘍増殖抑制が明らかとなった。それゆえ、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を、治療目的用にその他の治療薬と組み合わせて使用してもよい。

これらの治療薬としては、Ｔ細胞指向性の免疫調節機構、その他の免疫調節機構、がんワクチン、養子細胞療法剤、腫瘍崩壊ウイルス、二重特異性を含む別の抗体治療薬、及び抗体フラグメントのその他の組み合わせ、放射線療法剤、抗体薬物複合体、低分子干渉ＲＮＡ、化学療法剤、免疫療法剤、免疫チェックポイント阻害剤、有糸分裂阻害剤、またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物と組み合わせて投与することができる化学療法剤、低分子、及び生物学的製剤としては、ホルモン療法剤、ＰＡＲＰ阻害剤、アンドロゲン受容体阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、アビラテロン酢酸エステル、エンザルタミド、アパルタミド、ダロルタミド、ホスホイノシチド３キナーゼβ選択性阻害剤、二塩化ラジウム２２３及びその他のバリアント、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、ＣＹＰ１７Ａ１阻害剤、ＬＨＲＨアンタゴニスト、ＬＨＲＨアナログ、シクロホスファミド、カバジタキセル、ドセタキセル、シプリューセル－Ｔ、Ｐｒｏｓｔｖａｃ、プロベンジ、ＰＳＣＡのようなＰＵＬＰワクチン、全菌体ワクチン及びその他のワクチン、ＰＵＬＰ表面抗原に対する治療薬、シスプラチン、ＣＤ３及びＡＤＡＭ１７の二重特異性抗体、ｐＴＶＧ－ＨＰプラスミドＤＮＡワクチン及びその他の類似ワクチン、チソツマブベドチン、ＤＣＶＡＣ／ＰＣａ、ＧＸ３０１、ＧＶＡＸ－ＰＣａ、及びデノスマブが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物と組み合わせて投与することができる化学療法剤及び抗がん剤としては、アルキル化剤、代謝拮抗薬、植物アルカロイド、ビンカアルカロイド、有糸分裂阻害剤、抗腫瘍抗生物質、白金系抗腫瘍剤、トポイソメラーゼ阻害剤、及びプロテインキナーゼ阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なアルキル化剤は、ブスルファン、シクロホスファミド、及びテモゾロミドを含む。例示的な代謝拮抗薬は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、カペシタビン（ゼローダ）、及びゲムシタビンを含む。例示的な抗腫瘍抗生物質は、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、及びドキソルビシンを含む。例示的な白金系抗腫瘍剤は、シスプラチン及びカルボプラチンを含む。例示的なトポイソメラーゼ阻害剤は、エトポシド、イリノテカン、及びトポテカンを含む。例示的な有糸分裂阻害剤は、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン）、及びコルヒチンを含む。別の化学療法剤はメトトレキサートを含む。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を含む組成物と組み合わせて投与することができる治療薬としては、オルテロネル、ゲルダナマイシン、カボザンチニブ、アルファラディン、１７７Ｌｕ－Ｊ５９１、ミトキサントロン、Ｖｉａｍｅｔ、ＣＦＧ９２０、ガレテロン、オラパリブ、ＡＤＸＳ－ＰＳＡ、タキソテール、ゴナックス、デカペプチル、リュープロン、Ｖａｎｔａｓ、カソデックス、ゾラデックス、エリガード、リュープリン、ファーマゴン、ミトキサントロン、エンサイト、ランレオチド、ザルトラップ、クスチルセンナトリウム、及びスプリセルが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、以下の標的、分化抗原群１９（ＣＤ１９）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、ヒト上皮増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２）、シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）、分化抗原群１５２（ＣＴＬＡ４）、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹＥＳＯ１）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ネオアンチゲン、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１（ＣＤ２０）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、分化抗原群４７（ＣＤ４７）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（４－１ＢＢ）、ジシアロガングリオシドＧＤ２、アデノシンＡ２ａ受容体（ＡＤＯＲＡ２Ａ）、インターフェロン－α／β受容体α鎖（ＩＦＮＡＲ１）、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）、分化抗原群４０（ＣＤ４０）、メソテリン、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒストン脱アセチル化酵素１（ＨＤＡＣ１）、インターロイキン－２受容体（ＩＬ２Ｒ）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ＣＤ３３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＯＸ４０）、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型（ＣＸＣＲ４）、ヒストン脱アセチル化酵素６（ＨＤＡＣ６）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体（ＧＭＣＳＦＲ）、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）、インターロイキン－３受容体（ＣＤ１２３）、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、Ｉｇドメイン及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ヒトパピローマウイルス遺伝子Ｅ６（ＨＰＶ－Ｅ６）、５’－ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）、サバイビン、分化抗原群３（ＣＤ３）、サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼ（ＣＤ３８）、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ヒトパピローマウイルスＥ７オンコプロテイン（ＨＰＶＥ７）、インターロイキン２１受容体（ＩＬ２１Ｒ）（ＣＤ１３７）、分化抗原群２２（ＣＤ２２）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８（ＣＤ３０）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、βカテニン、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ－Ａ３）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｋ－ｒａｓ（ＫＲＡＳ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＵＳＰ７）、栄養膜糖タンパク質（５Ｔ４）、インターロイキン－２受容体α鎖（ＣＤ２５）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、顆粒球コロニー刺激因子受容体（ＧＣＳＦＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｋ１（ＮＫＧ２Ｄ）、プレメラノソームタンパク質（ＰＭＥＬ）、黒色腫において優先的に発現している抗原（ＰＲＡＭＥ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＣＲ４）、分化抗原群４６（ＣＤ４６）、マクロファージ刺激タンパク質受容体（ＣＤｗ１３６）、シクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＣＳ１）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸＣＲ１）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ｐ９６、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）、インターロイキン－５受容体（ＩＬ５Ｒ）、ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、シグナル伝達兼転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）、トランスフォーミング増殖因子β受容体２（ＴＧＦＢＲ２）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、α－ガラクトシダーゼＡ（α－ｇａｌ）、分化抗原群２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＣＲ１）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体２型（ＣＣＲ２）、ＣＤ２７分子（ＣＤ２７）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ゲラクチン－３、インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ１３ＲＡ２）、インターロイキン６（ＩＬ６）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）、ＭＥＲがん原遺伝子チロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、タンパク質ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＬＡＮＡ）、プロスタグランジンＥ受容体４（ＰＴＧＥＲ４）、ｄｉｓｔａｌ－ｌｅｓｓホメオボックス３（ＴＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦＢ、ＴＧＦＢ１）、ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、アンジオポエチン１（ＡＮＧ１）、ＢＴＬＡ、プロミニン１（ＣＤ１３３）、神経細胞接着分子１（ＣＤ５６）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、がん胎児性抗原関連細胞接着分子６（ＣＥＡＣＡＭ６）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）、インターフェロンα及びβ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ）、インターフェロンγ受容体１（ＩＦＮＧＲ１）、インターロイキン１７受容体Ａ（ＩＬ１７Ｒ）、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、ムチン１６細胞表面関連（ＭＵＣ１６）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（Ｐ３８）、腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）、ＤＥｘＤ／Ｈ－ボックスヘリカーゼ６８（ＲＩＧ１）、ＲＡＲ関連オーファン受容体Ｃ（ＲＯＲＣ）、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）、トランスフォーミング増殖因子β受容体１（ＴＧＦＢＲ１）、ドーパクロムトートメラーゼ（ＴＲＰ２）、アデノシンＡ３受容体（ＡＤＯＲＡ３）、ブラキウリ、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）、シンデカン１（ＣＤ１３８）、Ｌ１細胞接着分子（ＣＤ１７１）、フコシルトランスフェラーゼ３（ルイス血液型）（ＣＤ１７４）、ＩｇＧ受容体ＩＩａのＦｃフラグメント（ＣＤ３２）、Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフケモカイン受容体１（ＣＸ３ＣＲ１）、ＦＰＨＡ２、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、β－１，３－Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ１（グロボシド血液型）（ＧｌｏｂｏＨ）、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））１、細胞質基質（ＩＤＨ１）、インターロイキン２受容体サブユニットβ（ＩＬ２ｒＢ）、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＲＡＳ、トランスフォーミング増殖因子β２（ＴＧＦＢ２）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）、酸性ホスファターゼ、前立腺（ＡＣＰＰ）、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＡＤＡＢＰ）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン１７（ＡＤＡＭ１７）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＡＴＲＴ、ＡＸＬ受容体チロシンキナーゼ（ＡＸＬ）、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害因子１（Ｂ７－Ｈ４）、ＣＡ１９－９、インテグリンサブユニットαＭ（ＣＤ１１ｂ）、ＩｇＧ受容体ＩＩＩａのＦｃフラグメント（ＣＤ１６）、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２００分子（ＣＤ２００）、ＣＤ２８分子（ＣＤ２８）、ＣＤ５２分子（ＣＤ５２）、ＣＤ７分子（ＣＤ７）、ＣＤ８０分子（ＣＤ８０）、補体Ｃ５ａ受容体１（ＣＤ８８）、カドヘリン３（ＣＤＨ３）、ＣＥＣＡＭ１、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＩＩ（ＣＯＸ２）、ＣＣＣＴＣ結合因子様（ＣＴＣＦＬ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体５（ＣＸＣＲ５）、非定型ケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ７）、Ｅ１ａ、ガストリン、グレーヴス病感受性Ｘ連結（ＧＤ３）、ゲラクチン－１コロニー刺激因子２（ＧＭＣＳＦ）、ＨＢＶ、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－ＤＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６／７、ＨＰＶ Ｌ２、インターフェロンα及びβ受容体サブユニット２（ＩＦＮＡＲ２）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、インターロイキン１β（ＩＬ１Ｂ）、インターロイキン７受容体（ＩＬ７Ｒ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド８（ＩＬ８）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部１（ＫＩＲ２ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部３（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＬＸＲ、ＣＤ２４４分子（２Ｂ４）、ＭａｇｅファミリーメンバーＡ（ＭＡＧＥ－Ａ）、ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）、アポトーシスのＸ連結阻害因子（ＭｉＨＡ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｃ１（ＮＫＧ２Ａ）、天然細胞傷害誘導受容体１（ＮＫｐ４６）、核内受容体サブファミリー２グループＦメンバー６（ＮＲ２Ｆ６）、ＰＴＴＧ１相互作用タンパク質（ＰＢＦ）、精子接着分子１（ＳＰＡＭ１）、シグナル伝達兼転写活性化因子１（ＳＴＡＴ１）、ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）、ペルオキシレドキシン２（ＴＳＡ）、チロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＶＥＧＦＲ２）、５’ヌクレオチダーゼ、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー５（ＡＢＣＢ５）、ＡＤＡＭメタロペプチダーゼドメイン９（ＡＤＡＭ９）、アデノシン、ＡＤＰ、メタドヘリン（ＡＥＧ１）、ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ２（ＡＩＭ２）、α－ラクトアルブミン、抗ミュラーホルモン受容体２型（ＡＭＨＲ２）、アンジオポエチン２（ＡＮＧ２）、血管新生アスパラギン酸β－ヒドロキシラーゼ（ＡＳＰＨ）、ナチュラルキラー細胞細胞傷害性受容体３リガンド１（Ｂ７－Ｈ６）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ（ＢＡＦＦ－Ｒ）、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼファミリーメンバー９（Ｂａｌ１）、ＢＲＣＡ１関連ＲＩＮＧドメイン１（ＢＡＲＤ１）、ＢＣＬ２アポトーシス調節因子（ＢＣＬ２）、ＰＯＵクラス２関連因子１（ＢＯＢ－１）、ＢＴＥ６－ｌＸ－８ｂ、ＢＴＥ６－Ｘ－１５－７、ＫＩＴがん原遺伝子受容体チロシンキナーゼ（ｃＫＩＴ）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ９）、糖鎖抗原、カンナビノイド受容体２（ＣＢ２）、Ｃｂｌがん原遺伝子Ｂ（ＣＢＬＢ）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２０（ＣＣＬ２０）、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド３（ＣＣＬ３）、サイクリンＢ１（ＣＣＮＢ１）、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体９（ＣＣＲ９）、アラニルアミノペプチダーゼ膜（ＣＤ１３）、インターロイキン６シグナル伝達物質（ＣＤ１３０）、バシジン（Ｏｋ血液型）（ＣＤ１４７）、ポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）、ＣＤ１６０分子（ＣＤ１６０）、セレクチンＰリガンド（ＣＤ１６２）、ＣＤ２００受容体１（ＣＤ２００Ｒ１）、補体Ｃ３ｄ受容体２（ＣＤ２１）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＣＤ２６７）、インテグリンサブユニットβ１（ＣＤ２９）、ＣＤ３ｅ分子（ＣＤ３Ｅ）、ＣＤ４分子（ＣＤ４）、ＣＤ４４分子（インド血液型）（ＣＤ４４）、インテグリンサブユニットαＶ（ＣＤ５１）、細胞間接着分子１（ＣＤ５４）、ＣＤ８ａ分子（ＣＤ８）、ＣＧＥＮ－ＸＸＸＸ、クローディン１８、クローディン６、ＭＥＴがん原遺伝子受容体チロシンキナーゼ（ｃＭｅｔ）、コプロポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＣＯＸ）、プロスタグランジン－エンドペルオキシド合成酵素（ＣＯＸ－１）、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＩ（ＣＯＸ－１）、ＣＰＥＧ４、セレブロン（ＣＲＢＮ）、サイトカイン受容体様因子２（ＣＲＬＦ２）、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）、リン酸シチジリルトランスフェラーゼ１コリンα（ＣＴＡ）


、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１（ＣＸＣＬ１）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体３（ＣＸＣＲ３）、デオキシシチジンキナーゼ（ＤＣＫ）、ｄｉｃｋｋｏｐｆ ＷＮＴシグナル伝達経路阻害因子（ＤＫＫ１）、デルタ様標準的Ｎｏｔｃｈリガンド３（ＤＬＬ３）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＤＲ５）、ＥＢＮＡ３Ｃ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、Ｃ型レクチンドメイン含有１４Ａ（ＥＧＦＲ５）、真核生物翻訳開始因子２αキナーゼ３（ＥＩＦ２ＡＫ３）、ＥＬＶＡＬ４、ＥＰＨ受容体Ａ３（ＥＰＨＡ３）、上皮増殖因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＲＧ、ＩｇＭ受容体のＦｃフラグメント（ＦＡＩＭ－３）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、フィブロネクチン１（ＦＮ１）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ）、フォークヘッドボックスＭ１（ＦＯＸＭ１）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ガレクチン３、Ｎ－アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（ＧａｌＮＡｃ）、ロイシンリッチリピート含有３２（ＧＡＲＰ）、ＧＣビタミンＤ結合タンパク質（ＧＣ）、ゲラクチン９、ゲラクチン１／３／９、ＧＭ２、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体（ＧＮＲＨＲ）、グルタミルアミノペプチダーゼ（ＧＰ１６０）、ゴルジ膜タンパク質１（ＧＰ７３）、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、Ｈ３．３Ｋ２７Ｍ、ＤＥＡＤ－ボックスヘリカーゼ４３（ＨＡＧＥ）、ヒストン脱アセチル化酵素２（ＨＤＡＣ２）、ヒストン脱アセチル化酵素８（ＨＤＡＣ８）、ヘマグルチニン、ｅｒｂ－ｂ２受容体チロシンキナーゼ３（ＨＥＲ３）、低酸素誘導性脂肪滴関連（ＨＩＬＰＤＡ）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（ＨＭＷＭＡＡ）、ＨＰ５９、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１１、熱ショックタンパク質ファミリーＨ（Ｈｓｐ１１０）メンバー１（ＨＳＰ１０５）、熱ショックタンパク質ファミリーＤ（Ｈｓｐ６０）メンバー１（ＨＳＰ６５）、熱ショックタンパク質ファミリーＡ（Ｈｓｐ７０）メンバー４（ＨＳＰ７０）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＨＶＥＭ）、ヒアルロナン、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）、インターフェロンγ（ＩＦＮＧ）、インターフェロンγ受容体１（ＩＦＮＧＲ）、インターフェロンγ受容体２（ＩＦＮＧＲ２）、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ２）、インスリン様増殖因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ２）、ＩＧＫ２、インターロイキン１０（ＩＬ１０）、インターロイキン１０受容体サブユニットα（ＩＬ１０ＲＡ）、インターロイキン１２受容体サブユニットβ１（ＩＬ１２ＲＢ１）、インターロイキン（ＩＬ１３）、インターロイキン１３受容体サブユニットα２（ＩＬ１３Ｒ）、インターロイキン１３受容体サブユニットα１（ＩＬ１３ＲＡ１）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、インターロイキン１５受容体サブユニットα（ＩＬ１５ＲＡ）、インターロイキン１７Ａ（ＩＬ１７ ＩＬ１７Ａ）、インターロイキン１７Ｂ（ＩＬ１７Ｂ）、インターロイキン１受容体１型（ＩＬ１Ｒ１）、インターロイキン１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１Ｒ３）、インターロイキン２１受容体（ＩＬ２１Ｒ）、インターロイキン２７受容体サブユニットα（ＩＬ２７Ｒ）、インターロイキン２受容体サブユニットα（ＩＬ２ＲＡ）、ＩＬ３５、インターロイキン９受容体（ＩＬ９Ｒ）、インテグリンβ７、インターロイキン１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）、インテグリンサブユニットβ５（ＩＴＧＢ５）、カッパ骨髄腫抗原、キネシンファミリーメンバー２０Ａ（ＫＩＦ２０Ａ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、２つのＩｇドメイン及び長い細胞質尾部２（ＫＩＲ２ＤＬ２）、キヌレニン、ラムダ骨髄腫抗原、リソソーム関連膜タンパク質３（ＬＡＭＰ）、ＬＬＯ、核内受容体サブファミリー１グループＨメンバー３（ＬＸＲＡ）、核内受容体サブファミリー１グループＨメンバー２（ＬＸＲＢ）、ＭＡＧＥＡ１０ ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ１０（ＭＡＧＥ－Ａ１０）、ＭＡＧＥＡ６ ＭＡＧＥファミリーメンバーＡ６（ＭＡＧＥ－Ａ６）、ＭＡＧＥＣ２ ＭＡＧＥファミリーメンバーＣ２（ＭＡＧＥ－Ｃ２）、マンマグロビンＡ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、ヘリカーゼＣドメイン１で誘導されるＭａｓ受容体インターフェロン（ＭＤＡ５）、ＭＧ７、主要組織適合遺伝子複合体ＩＩ（ＭＨＣＩＩ）、ＭＩＣ、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列（ＭＩＣＢ）、マトリックスメタロペプチダーゼ１１（ＭＭＰ－１１）、運動精子ドメイン含有２（ＭＯＳＰＤ２）、多剤耐性関連タンパク質１（ＭＲＰ１）、ＭＲＰ３７６５、ｍｕＧＮＴＰ０１、主要ヴォールトタンパク質（ＭＶＰ）、ＭＹＢがん原遺伝子転写因子（ＭＹＢ）、ＭＹＢがん原遺伝子様２（ＭＹＢＬ２）、ミエロブラスチン、ＭＹＣＮがん原遺伝子、ｂＨＬＨ転写因子（Ｎ－ｍｙｃ）、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）、ＮＬＲファミリーピリンドメイン含有３（ＮＬＲＰ３）、がん胎児性抗原、プリン受容体Ｐ２Ｘ ５（Ｐ２ＲＸ５）、ｐ３８マップキナーゼ、ホスホイノシチド－３－キナーゼ調節サブユニット３（Ｐ５５）、ＰＡＭ４、再生ファミリーメンバー３α（ＰＡＰ）、ＰＡＳドメイン含有抑制因子１（ＰＡＳＤ１）、プロトカドヘリン１８（ＰＣＤＨ１８）、プログラム細胞死１リガンド２（ＰＤＬ２）、ＰＯＴＥアンキリンドメインファミリーメンバーＤ（ＰＯＴＥ）、タンパク質ホスファターゼ５触媒サブユニット（ＰＰＴ）、プロスタグランジンＥ受容体２（ＰＴＧＥＲ２）、ＰＶＲ関連免疫グロブリンドメイン含有（ＰＶＲＩＧ）、ＲＢＬ００１、ｒａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体２（ＲＯＲ２）、ＳＥＲＥＸ、ＳＩＭ ｂＨＬＨ転写因子２（ＳＩＭ２）、ソマトスタチン受容体２（ＳＳＴＲ２）、ＳＳＸファミリーメンバー２（ＳＳＸ２）、ステロールＯ－アシルトランスフェラーゼ１（ＳＴＡＴ）、真核生物翻訳伸長因子１α２（ＳＴｎ）、ｍＲＮＡキャップグアニン－Ｎ７メチルトランスフェラーゼ（ＴＡＧ７２）、ＴＡＭＡ、ＴＡＳＴＤ２、ＴＤ０２、転写因子Ｄｐファミリーメンバー３（ＴＦＤＰ３）、チミジル酸合成酵素、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ（ＴＯＰ１）、Ｔ細胞受容体β定常１（ＴＲＢＣ１）、Ｔ細胞受容体β定常２（ＴＲＢＣ２）、トリプトファン、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＷＥＡＫ）、チロシン、リンパ球抗原６ファミリーメンバーＫ（ＵＲＬＣ１０）、レトロエレメントサイレンシング因子１（ＵＴＡ２－１）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ１（ＶＥＧＦＲ１）、Ｖセット及び免疫グロブリンドメイン含有４（ＶＳＩＧ－４）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）、透明帯糖タンパク質３（ＺＰ３）、ＳＴＥＡＰファミリーメンバー１（ＳＴＥＡＰ１）、またはＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＲＡＮＫＬ）を阻害または調節するモノクローナル抗体もしくはそのフラグメント、治療用生物学的製剤、低分子、または化学薬剤と組み合わせて使用することができる。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、ＣＴＬＡ４、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＰＤＬ１、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＨＡＶＣＲ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＧＦＲＢＲＩ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＶＩＳＴＡ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＭＴ１、ＭＴ２、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＳＨＰ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、またはＣＥＡＣＡＭ－５を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。例示的な免疫チェックポイント遺伝子及び治療標的としては、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）が挙げられる。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＣＬＴＡ－４、またはＴＩＭ３に結合してそれを阻害する治療抗体である。例示的なＰＤ１阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、及びセミプリマブを含む。例示的なＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブを含む。例示的なＣＬＴＡ－４阻害剤はイピリムマブを含む。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、キナーゼ阻害剤と組み合わせて投与され、キナーゼ阻害剤は、ＢＣＲ－Ａｂｌ、Ｂ－ｒａｆ、ＢＴＫ、ＣＤＫファミリー、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲファミリー、ＪＡＫファミリー、ＭＥＫ１／２、ＰＤＧＦＲα／β、ＲＥＴ、Ｓｒｃファミリー、またはＶＥＧＦＲファミリーキナーゼを阻害する。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、小さなキナーゼ分子阻害剤である。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、治療抗体またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本明細書で開示するキナーゼ阻害剤は、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、イブルチニブ、パルボシクリブ、ソラフェニブ、リボシクリブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、オシメルチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、トラメチニブ、アキシチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、ポナチニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、またはこれらの組み合わせである。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、関節リウマチを治療するために、抗ＣＤ２０抗体、ＴＮＦ受容体アンタゴニスト、抗ＴＮＦ－α、またはこれらの組み合わせと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、乾癬を治療するために、抗ＣＤ１１ａと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、多発性硬化症を治療するために、ＩＦＮ－γと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、潰瘍性大腸炎を治療するために、ＴＮＦ－αと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、例えば、クローン病を治療するために、インフリキシマブまたはナタリズマブと組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、がんと関連する免疫チェックポイント遺伝子産物及び／または標的抗原の任意の組み合わせに向かう多重特異性抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、がんと関連する免疫チェックポイント遺伝子産物及び／または標的抗原の任意の組み合わせに向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）からなる群から選択される免疫チェックポイントタンパク質に向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＣＬＴＡ－４、またはＴＩＭ３に結合してそれを阻害する治療抗体である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原に向かう二重特異性抗体と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、ミコフェノール酸、アザチオプリン、シクロホスファミド、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ランソプラゾール（プレバシド２４時間）、オメプラゾール（プリロセックＯＴＣ）、及びパントプラゾール（プロトニックス）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない薬物または治療薬と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＬ－８、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、間質細胞由来因子－１、及びインターフェロンγ誘導性タンパク質－１０（ＩＰ－１０）、ケモカイン（ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、及びＣＸＣＬ８）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないサイトカインまたはケモカインと組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は自家である。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は同種異系である。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などを含む。一部の実施形態では、養子細胞療法剤は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法剤またはＣＡＲ－ＮＫ療法剤を含む。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、固形腫瘍と関連する標的抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、及びその他のがんを含むがこれらに限定されないがんと関連する標的抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

一部の実施形態では、本開示のＣＬＥＣ２Ｄ抗体または組成物は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原である第２の抗原に向かうキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）を含む養子細胞療法剤と組み合わせて投与される。

本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を利用して二重特異性抗体を形成してもよく、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、ＣＴＬＡ４、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＰＤＬ１、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＨＡＶＣＲ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＧＦＲＢＲＩ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＶＩＳＴＡ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＭＴ１、ＭＴ２、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＳＨＰ－１、ＴＩＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、またはＣＥＡＣＡＭ－５を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）、ＰＤ－Ｌ１、ＣＬＴＡ－４、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチン３（ＴＩＭ－３）、及びリンパ球活性化３（ＬＡＧ－３）を含むがこれらに限定されない免疫チェックポイント遺伝子及び治療標的である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＩＬ－８、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、間質細胞由来因子－１、及びインターフェロンγ誘導性タンパク質－１０（ＩＰ－１０）、ケモカイン（ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、及びＣＸＣＬ８）、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないサイトカインまたはケモカインと関連している。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄに特異的に結合する第１のペアの可変軽鎖及び可変重鎖、及び、宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合する第２のペアの可変軽鎖及び可変重鎖を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、がんまたは腫瘍細胞と関連する抗原である。

本明細書で開示する二重特異性抗体は、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、またはそのバリアントを示す定常領域を含んでいてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、もしくはＩｇＧ３、またはそのバリアントを示す定常領域を含んでいてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、及びＩｇＧ４のアイソタイプ主鎖を有していてもよい。本明細書で開示する二重特異性抗体は、三官能性抗体、タンデムｓｃＦｖ（二重特異性Ｔ細胞誘導または「ＢｉＴＥ」として使用されることが多い）、四価ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ディアボディを含む、化学的に連結したＦａｂ、ｓｃＦｖ、またはジスルフィド結合したＦｖ、を使用した二重特異性抗体フォーマット、及び多くのその他のフォーマットであってもよい。一部の実施形態では、本明細書で開示する二重特異性抗体は、２つの異なるｓｃＦｖをコードする配列を、重鎖が単一のポリペプチド内で発現している１つの構築物へと組み合わせてから、対応する軽鎖と連結させることにより作製される、ディアボディとして作製される。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、及びびまん性リンパ腫を含むがこれらに限定されないがんと関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌からなる群から選択されるがんまたは腫瘍細胞と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び宿主細胞の表面上の第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、チロシン－タンパク質キナーゼ膜貫通受容体ＲＯＲ１、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）、メソテリン、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ））、プロスターゼ、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）、伸長因子２変異体（ＥＬＦ２Ｍ）、インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、ｇｐ１００、ＢＣＲ－ＡＢＬ（切断点クラスター領域－エーベルソン）、チロシナーゼ、ニューヨーク食道扁平上皮癌１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）、ｋ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ Ａ３、ＭＡＧＥ Ａ６、レグマイン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６、ＨＰＶＥ７、プロステイン、サバイビン、ＰＣＴＡ１（ガレクチン８）、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、Ｒａｓ変異体、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、またはｇｐ７５）、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、高次グリコシル化最終産物受容体１（ＲＡＧＥ１）、腎臓遍在１、２（ＲＵ１、ＲＵ２）、腸内カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、熱ショックタンパク質７０－２（ＨＳＰ７０－２）変異体、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８（分化抗原群４４、エキソン７／８）、ＣＤ５３、ＣＤ９２、ＣＤ１００、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２００、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ３６２、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、及び１９Ａ２４）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌｌ）Ｃｅｒ）、Ｔｎ抗原（Ｔｎ Ａｇ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮増殖因子受容体バリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、プロテアソーム（プロソーム、マクロペイン）、サブユニットβ型９（ＬＭＰ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、エフリンＢ２、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体α、葉酸受容体β、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、Ｇタンパク質共役型受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、パネキシン３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質共役型受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、１２ｐ染色体上に位置するＥＴＳ転座バリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ ２）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、黒色腫癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、黒色腫癌精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫転座切断点、黒色腫アポトーシス抑制（ＭＬ－ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルスがん遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、シトクロムＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞－１または３が認識する扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ３）、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、滑膜肉腫Ｘ切断点１、２、３、または４（ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ３、ＳＳＸ４）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、マウス二重微小染色体２ホモログ（ＭＤＭ２）、リビン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ－Ｒ）、Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞が認識する腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂカテニン／変異）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ１（がん胎児性抗原ペプチド１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異）、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原黒色腫）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ－２、３、４）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児型アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧｎＴ－Ｖ（ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＵＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＳＴ２（ヒト印環腫瘍２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬＩＣＡＭ（ＬＩ細胞接着分子）、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在変異１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ｐｉ ９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質ｂｃｒ－ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫において優先的に発現している抗原）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異）、ＣＤ７０、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される腫瘍抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原菌または病原体と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原性の細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、細胞内細菌を含むがこれらに限定されない微生物と関連する抗原である。一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、病原性の細菌、真菌、原虫、寄生生物、及びウイルスを含むがこれらに限定されない微生物に感染した宿主細胞上に特異的に発現した抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、血清反応陰性脊椎関節症、結合組織病、炎症性腸疾患、関節炎、炎症性皮膚症状、炎症性肺疾患、炎症性腎疾患、全身性血管炎、マクロファージ活性化疾患、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、レイノー現象及びグッドパスチャー症候群を含むがこれらに限定されない炎症性障害または自己免疫障害と関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、結合組織病、例えば、若年性関節リウマチ、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎、強皮症、シェーグレン症候群、混合性結合組織病及び多発性筋炎、皮膚筋炎などと関連する抗原である。

一部の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は二重特異性抗体であり、二重特異性抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄ及び第２の抗原に特異的に結合し、第２の抗原は、ウィップル病、及び肉芽腫性回結腸炎を伴う関節炎、炎症性皮膚症状、例えば、自己免疫性水疱性類天疱瘡、自己免疫性尋常性天疱瘡、湿疹、及び皮膚炎など、炎症性肺疾患、例えば、肺胞炎、肺線維症、サルコイドーシス、喘息、気管支炎、及び閉塞性細気管支炎など、炎症性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、腎臓同種移植片拒絶反応、及び腎尿細管炎など、アテローム性動脈硬化症、全身性血管炎、例えば、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎、川崎病、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグストラウス症候群、顕微鏡的多発血管炎、壊死性糸球体腎炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性クリオグロブリン血症性血管炎、その他の小血管血管炎、及びベーチェット病など、マクロファージ活性化疾患、例えば、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、成人発症スティル病、血球貪食症候群、リウマチ性多発性筋痛症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、グレーヴス病、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、アジソン病、及び／またはレイノー現象及びグッドパスチャー症候群などと関連する抗原である。

本発明の二重特異性抗体は、当該技術分野において周知の任意の方法を用いて、例えば、非限定例として、架橋フラグメント、クアドローマ、及び／または様々な組換えフォーマット、例えば、非限定例として、単一ドメインをベースとした連結抗体フラグメント、強制ヘテロ二量体、及び／または組換えフォーマットなどのうちのいずれかなどを用いて、作製される。二重特異性フォーマットの例としては、Ｆａｂアーム交換に基づいた二重特異性ＩｇＧ（Ｇｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３ ＭＡｂｓ．５（６））、ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマット（Ｋｌｅｉｎ Ｃ ｅｔ ａｌ．，２０１２ ＭＡｂｓ ４（６））、強制ヘテロ二量体化アプローチ、例えば、ＳＥＥＤ技術（Ｄａｖｉｓ ＪＨ ｅｔ ａｌ．，２０１０ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３（４）：１９５－２０２）、静電気的ステアリング（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２８５（２５）：１９６３７－４６．）、もしくはｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ（Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ ９（７）：６１７－２１．）、またはホモ二量体形成を防止するその他の変異セット（Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ＴＳ ｅｔ ａｌ．，２０１３ ＭＡｂｓ．５（５）：６４６－５４．）、などに基づいた複数のフォーマット、フラグメントベースの二重特異性フォーマット、例えば、タンデムｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥなど）など（Ｗｏｌｆ Ｅ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７－４４．）、二重特異性四価抗体（Ｐｏｒｔｎｅｒ ＬＭ ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６１（１０）：１８６９－７５．）、デュアル親和性再標的化分子（Ｍｏｏｒｅ ＰＡ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｂｌｏｏｄ．１１７（１７）：４５４２－５１）、ディアボディ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＲＥ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ １５（７）：６２９－３１）が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物ならびに別の治療薬（複数可）は、疾患の徴候または症候を治療するために相加的に作用する。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物ならびに別の治療薬（複数可）は、疾患の徴候または症候を治療するために相乗的に作用する。

一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び組成物を別の治療薬と組み合わせることにより、疾患または障害における１種または複数種の症候の抑制の向上、治療における１種または複数種の副作用の抑制、または、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体もしくは組成物または別の治療薬の治療有効用量の減少を含む、疾患または障害の治療における優れた効果がもたらされる。

抗体またはその抗原結合フラグメントは、別の治療モダリティにコンジュゲートしていてもよい。コンジュゲートすることにより、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを標的、例えば、標的細胞などへと近接させること、標的特異性を向上させること、コンジュゲートの標的に対する総合的な結合親和性を向上させること、及び／または標的に対するＮＫ細胞の細胞傷害を向上させること、が可能となり、それにより、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントの治療効果及び／または特異性が向上する。別の治療モダリティは、本明細書に記載の別の治療薬のうちのいずれかであってもよい。抗体コンジュゲートを作製するための方法は当該技術分野において周知であり、例えば、タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（例えば、トリエン ２，６－ジイソシアネートなど）、及びビス活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などを用いる。抗体及びもう一方の部分がその対応する活性を保持する限り、２つの分子を結合させる任意の化学反応を用いてカップリングを実施してもよい。この連結は、多くの化学的メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、及び複合体形成を含んでいてもよい。しかしながら、好ましい結合は共有結合である。共有結合は、既存側鎖の直接縮合または外部架橋分子の導入のいずれかにより実施することができる。多くの二価または多価連結剤は、タンパク質分子、例えば、本発明の抗体などをその他の分子にカップリングさせるのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、有機化合物、例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、及びヘキサメチレンジアミンなどを挙げることができる。このリストは、当該技術分野において周知の様々な部類のカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の例示である。（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；及びＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。

本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、二重特異性抗体を作製するために使用することができる。例えば、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書に記載の別の抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、二重特異性抗体を作製してもよい。二重特異性抗体を作製するための方法は当該技術分野において周知である。

最適な所望の効果、例えば、治療効果または最小限の副作用を得るために、用量レジメンを調節する。例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を投与するための用量は、約０．０００１～約１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。例えば、用量は、少なくとも０．１、少なくとも０．３、少なくとも１、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、または少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ（体重）であってもよい。投与スケジュールは通常、抗体の標準的な薬物動態特性に基づく持続的な受容体占有率をもたらす曝露を達成するように設計される。例示的な治療レジメンは、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月間に１回、または３～６ヶ月間に１回の投与を必要とする。用量及びスケジューリングは治療期間中に変更してもよい。例えば、投与スケジュールは、（ｉ）６週間サイクルにおける２週間に１回、（ｉｉ）６回の用量を４週間に１回、その後、３ヶ月間に１回、（ｉｉｉ）３週間に１回、（ｉｖ）初期の高用量に続けて定期的なより少ない維持用量で抗体を投与することを含んでいてもよい。単回用量間の間隔は、例えば、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回、３ヶ月間に１回、または年に１回であってもよい。間隔はまた、患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルを測定することによって指定されるとおりに、不規則であってもよい。一部の方法では、用量は、所望の血漿中抗体濃度を達成するように調節される。

一部の実施形態では、Ａｂは、持続放出製剤として投与されてもよく、その場合、より少ない頻度の投与が必要となる。用量及び頻度は、患者における抗体の半減期によって変化する。一般的に、ヒト抗体が最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。用量及び投与頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかによって変化し得る。予防適用では、比較的少ない用量が通常、長期間にわたり比較的頻繁ではない間隔で投与される。患者の中には残りの生涯にわたり治療を受け続ける者もいる。治療適用では、疾患の進行が抑制または終了するまで、好ましくは、患者が疾患の症候の部分寛解または完全寛解を示すまで、比較的短い間隔での比較的多い用量が必要となる場合がある。そのため、患者に予防レジメンを実施してもよい。

本開示の医薬組成物中における活性成分の実際の用量レベルは、患者に過度に毒性とはならずに、個々の患者、組成物、及び投与方法における所望の治療効果を得ることが可能な活性成分の量を得るために、様々であり得る。選択用量レベルは、使用する個々の本開示の組成物の活性、投与経路、投与期間、使用する個々の化合物の排出速度、治療期間、使用する個々の組成物と組み合わせて使用するその他の薬物、化合物、及び／または物質、治療する患者の年齢、性別、体重、症状、全身健康及び既往歴、及び、医学技術分野において周知の類似の因子を含む様々な薬物動態学的因子によって決まる。本開示の組成物は、当該技術分野において周知の様々な方法のうちの１つまたは複数を用いて、１つまたは複数の投与経路を介して投与することができる。当業者は理解するであろうが、投与経路及び／または投与方法は、所望の結果によって変化する。

診断及び予後判定
本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。一実施形態では、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルは、対象に由来する細胞におけるＣＬＥＣ２Ｄ発現のレベルを測定することによって測定される。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する試料を得ること、試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルが対照試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルよりも高い場合に、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも高い場合に、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与することを継続すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、第１の治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも低い場合に、第２の治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、を含み、第２の治療有効量は第１の治療有効量よりも多い。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

本開示は、疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、対象に由来する第１の試料を得ること、第１の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第１のレベルを測定すること、治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与すること、対象に由来する第２の試料を得ること、第２の試料におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の第２のレベルを測定すること、第２のレベルを第１のレベルと比較すること、第１のレベルが第２のレベルよりも低い場合に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を対象に投与することを終了すること、を含む。一実施形態では、試料は、対象に由来する細胞である。一実施形態では、細胞は、疾患組織または疾患器官に由来している。一実施形態では、細胞はがん細胞（例えば、本明細書に記載のがんに由来する細胞）である。一実施形態では、対照試料は、対象の非疾患組織または非疾患器官に由来している。一実施形態では、対照試料は、疾患を有していない対象に由来している。

単離した新規抗体クローンを使用して、疾患のステージ及び侵襲性を判定してから、その疾患を適切に治療してもよい。

本開示は、疾患及び障害を診断及び予後判定するのに用いるための、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びその抗体フラグメント、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸、またはそれらを含む組成物を提供する。

一部の実施形態では、単離モノクローナル抗体により、様々な腫瘍細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的発現が明らかとなり、ＣＬＥＣ２Ｄが様々な疾患症状を診断するための新規バイオマーカーであることが示された。更に、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原が様々な腫瘍上で有意に過剰発現しており、疾患を診断するための新規分子マーカーとしてのこの標的分子の有用性が示された。更に、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルは、様々な誘導因子の影響下で有意に上昇した。誘導腫瘍細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の特異的発現は、異なるステージの疾患、増悪、転移などと相関している。それゆえ、ＣＬＥＣ２Ｄには予後バイオマーカーとしての膨大な可能性がある。一部の実施形態では、例えば、対象のがん細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質発現の上昇は、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質発現が上昇していない場合と比較して、より不十分な予後効果と関連している。

本明細書で詳述するとおり、単離モノクローナル抗体を使用して、腫瘍細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現をモニターする。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、肺腺癌、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質癌腫、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、腎腺癌、胎児性癌、類内膜癌、線維層板状肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌、髄様癌、黒色癌、髄膜癌腫症、中前腎癌、燕麦細胞癌、扁平上皮細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、尿細管細胞癌、エナメル上皮肉腫、砂腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質部肉腫、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、免疫芽球性肉腫、傍骨性骨原性肉腫、コピセス肉腫、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシ肉腫、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘形細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細血管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨ、及びびまん性リンパ腫を含むがこれらに限定されない疾患を診断及び予後判定してもよい。

様々な治療選択肢が現在利用可能であるにもかかわらず、複数のがん、例えば、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌などは、依然として世界中の人々の主要な死因のままであり、独自の治療展望に欠けている。初期ステージにおけるこれらの疾患の診断は、生存率を決める最も重要な因子のうちの１つである。本開示は、深い治療的影響を有する、これらの疾患及びその他の疾患のためのバイオマーカー標的としてのＣＬＥＣ２Ｄの同定について記載している。本開示に記載されている、ＣＬＥＣ２Ｄに対する抗体同定法全般の急速な進歩により、上記の様々な疾患適応症に対する新規バイオマーカーとしてＣＬＥＣ２Ｄを有効にすることが可能となっている。

本開示は、特定の治療により良好な応答を示す可能性がある患者を階層化するための予測バイオマーカーとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の同定に使用する、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメント、ならびに抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメントを含む組成物を提供する。

本開示は、予測バイオマーカーとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の同定に使用するための、また、転移性がん患者におけるＮＫ細胞の細胞溶解活性の増強を目標とした治療法を探索するための道筋をつけるための、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びそのフラグメント、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸、またはそれらを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、腫瘍微小環境における免疫細胞上のこれらＣＬＥＣ２Ｄ受容体の発現は、良好な予後と関連している。特定の免疫細胞、例えば、ＮＫ細胞及びＴ細胞上における、特定の分子の発現は、特定の免疫機能の維持に関与している。本開示は、前立腺癌におけるものを含む、ＮＫ受容体リガンドとしてのＣＬＥＣ２Ｄ発現の予後判定的役割、及び、ＣＬＥＣ２Ｄ発現の、異なる前立腺癌疾患ステージ、分子サブタイプ、及び臨床病理学的特徴との関連について記載している。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で腫瘍細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ発現を遮断することにより、ＮＫ細胞介在性細胞傷害の免疫コンテキストにおけるシグナルが伝達されて、浸潤性Ｔ細胞の正の予後判定値が抑制される。本開示のヒト抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体は、単独、またはその他のリガンド、サイトカイン、またはその他の細胞性因子との組み合わせのいずれかで、様々ながんのタイプにおける治療薬としてだけではなく、予後判定薬及び診断薬としても、これらの抗体の可能性／範囲を広げる。

医薬品製剤
本開示は、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗体フラグメントのうちのいずれかの医薬組成物を提供する。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれは、対象への投与に好適な組成物へと製剤化することができる。例示的な態様では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のそれぞれは、例えば、特定の温度、例えば、室温において抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を安定化させること、有効期間を延長すること、分解、例えば、酸化タンパク質分解酵素介在性分解を抑制すること、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の半減期を延長することなどにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の化学物理学的特性を向上させる、１種または複数種の薬剤と共に製剤化することができる。本開示の例示的な態様では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を追加で含む組成物へと製剤化してもよい。

「医薬組成物」及び「医薬品製剤」は、文脈上特に明確に示さない限り、本明細書において同じ意味で用いられる。

医薬組成物は、固体、半固体、または液体であってもよい。一般的に、医薬組成物は、特定の投与経路に適したものである。例えば、医薬組成物は、経口投与、直腸投与、頬側投与、局所投与などに適したものであってもよい。好ましくは、医薬組成物は、静脈内投与に適したものである。一部の実施形態では、本開示の抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物は、静脈注射または静脈注入に適したものである。一部の実施形態では、水溶性安定モノクローナル抗体製剤は、好ましくは、筋肉内注射、皮下注射、ｉ．ｖ．注射、または最も好ましくは、ｉ．ｖ．注入により、非経口経路で投与される。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に相性のよい全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗カビ剤、等張化剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適したものである。本開示の医薬組成物は、１種または複数種の、薬学的に許容される塩、酸化防止剤、水性担体及び非水性担体、及び／または、補助剤、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などを含んでいてもよい。例えば、薬学的に許容される担体としては、標準的な医薬品担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルションまたは水／油エマルションなどのエマルション、及び、様々なタイプの湿潤剤などのうちのいずれかが挙げられる。この用語はまた、米国連邦政府の監督機関により承認された薬剤、または、ヒトを含む動物における使用用に米国薬局方に記載された薬剤のうちのいずれかを包含する。

医薬組成物は、例えば、酸性化剤、添加剤、吸着剤、エアゾール噴射剤、排気剤、アルカリ化剤、固化防止剤、抗凝固剤、抗菌防腐剤、酸化防止剤、防腐剤、基剤、結合剤、緩衝剤、キレート化剤、コーティング剤、着色剤、乾燥剤、洗剤、希釈剤、殺菌剤、崩壊剤、分散剤、溶解促進剤、色素、皮膚軟化剤、乳化剤、乳化安定剤、充填剤、フィルム形成剤、風味増強剤、風味剤、流動促進剤、ゲル化剤、造粒剤、保湿剤、滑沢剤、粘膜付着剤、軟膏基剤、軟膏剤、油性媒体、有機塩基、パステル剤基剤、顔料、可塑剤、艶出剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、皮膚浸透剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、坐剤基剤、表面活性剤、界面活性剤、懸濁化剤、甘味剤、治療剤、増粘剤、張性剤、毒性剤、粘度増強剤、吸水剤、水混和性共溶媒、硬水軟化剤、または湿潤剤を含む、任意の薬学的に許容される成分を含んでいてもよい。当該技術分野において周知のその他の薬学的に許容される賦形剤としては、希釈剤、担体、充填剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、流動促進剤、着色剤、顔料、味覚マスキング剤、甘味剤、可塑剤、ならびに、任意の許容される補助物質、例えば、吸収促進剤、浸透促進剤、界面活性剤、補助界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、及び特殊油などが挙げられる。バイオ医薬品タンパク質の分野に特有なのは、タンパク質を安定させることを目的とする賦形剤、及び凍結乾燥中の保護をもたらす凍結保護剤である。好適な賦形剤（複数可）は、剤形、対象となる投与方法、対象となる放出速度、及び製造信頼性に部分的に基づいて選択される。一般的に用いられる賦形剤の非限定例としては、ポリマー、蜜蝋、リン酸カルシウム、糖（例えば、トレハロース、スクロース、またはマンニトール）、緩衝剤（例えば、５～７．５のｐＨのリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、またはグリシンをベースとした緩衝剤など）、塩（例えば、ＮａＣｌまたはＮａＥＤＴＡ）、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ヒトアルブミン、デキストラン、及びベンジルアルコールが挙げられる。例えば、ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，２０００）（その全体は参照により組み込まれる）を参照されたい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）（その全体は参照により組み込まれる）。

例示的な態様では、医薬組成物は、採用する用量及び濃度においてレシピエントに無毒な配合物質を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、活性剤、及び、１種または複数種の、薬学的に許容される塩、ポリオール、界面活性剤、浸透圧バランス調整剤、張性剤、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、増量剤、凍結乾燥保護剤、消泡剤、キレート化剤、防腐剤、着色剤、鎮痛剤、または別の薬剤を含む。

例示的な態様では、医薬組成物は、任意選択的に、薬学的に許容される塩、浸透圧バランス調整剤（張性剤）、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、増量剤、凍結乾燥保護剤、消泡剤、キレート化剤、防腐剤、着色剤、及び鎮痛剤を含むがこれらに限定されない１種または複数種の賦形剤に加えて、１種または複数種のポリオール及び／または１種または複数種の界面活性剤を含む。

特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、容積モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、芳香、滅菌状態、安定性、溶解速度もしくは放出速度、吸着、または浸透を、調節、維持、または保持するための、配合物質を含有していてもよい。このような実施形態における好適な配合物質としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなど）、抗菌剤、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウムなど）、緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、またはその他の有機酸など）、増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシンなど）、キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）、錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなど）、充填剤、単糖、二糖、及びその他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリンなど）、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、着色剤、風味剤及び希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウムなど）、防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素など）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトールなど）、懸濁化剤、界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｃなどのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）、安定促進剤（例えば、スクロースまたはソルビトールなど）、張度増強剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトール、ソルビトールなど）、送達媒体、希釈剤、添加剤、及び／または医薬補助剤、が挙げられるがこれらに限定されない。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＡＲ－ＴＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８”Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙを参照されたい。

医薬組成物は、生理学的に適合性のあるｐＨを達成するように製剤化されてもよい。一部の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、例えば、約４または約５～約８．０、約４．５～約７．５、または約５．０～約７．５であってもよい。例示的な実施形態では、医薬組成物のｐＨは５．５～７．５である。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を非経口投与で投与するための医薬組成物は一般的に液体である。水が主な賦形剤として一般的に使用されるが、その他の薬学的に許容される液体、例えば、エタノール、グリセロール、オレイン酸エチル、ミグリオール、オレイン酸ベンジル、ヒマシ油、ＭＣＴ、ベンジルアルコール、イソプロピルミリステートなどを、単独で、もしくは水と組み合わせて、または互いと組み合わせて使用してもよい。その他の賦形剤を含有していない水溶性組成物もまた検討され、凍結乾燥化合物、非晶質化合物、または結晶性化合物から調製することができる。多くの場合、皮下注射、ＩＭ注射、またはＩＶ注射用であってもよい注射用組成物は、等張化剤を含有している。注射用液剤または注射用懸濁剤は一般的に、全ての液体医薬剤形がそうであるように、滅菌である。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を局所投与で投与するための医薬組成物としては、散剤、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、ローション剤、液剤、及び懸濁剤（うがい薬を含む）が挙げられる。賦形剤担体は、それぞれが任意選択的にエマルションまたはマイクロエマルションの形態である、水溶液ベース、油ベース、またはポリマーベースである場合が多い。用語「局所投与」としては、例えば、目の投与（例えば、クリーム剤／軟膏剤による）、及び皮膚への投与（例えば、炎症を起こした関節における）が挙げられる。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を経口投与で投与するための医薬組成物としては、固体経口剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、その腸溶性形態、ロゼンジ剤、及びフィルム剤など、ならびに、液剤、懸濁剤、液剤充填カプセル剤、及びうがい薬を含む液体剤形が挙げられる。錠剤は、可溶性錠剤、分散錠、発泡錠、チュアブル錠、凍結乾燥錠剤、コート錠（例えば、糖衣または腸溶コーティングされた）、及び調節放出錠剤であってもよい。カプセルとしては、散剤、ペレット剤、顆粒剤、小型錠剤、もしくはミニ錠剤、または液剤もしくはエマルション剤、あるいは組み合わせを充填することができる硬質ゼラチンカプセルが挙げられ、腸内放出または調節放出用にコーティングされていてもよい。軟質カプセルもまた検討され、より一般的には、液剤、ゲル剤、または分散液剤を充填されているがそれらに限定されない。顆粒剤は、発泡性顆粒剤、コート顆粒剤（例えば、糖衣または腸溶コーティングされた）、及び調節放出顆粒剤であってもよい。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は経口投与することができるが、このような投与はＧＩ管への局所投与とみなされ得るということを理解すべきである。同様に、腸へと局所的とするために、坐剤または直腸注射もまた使用してもよい。本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用した、消化管疾患（複数可）を治療するための経口剤形の使用は、本開示の態様である。

剤形の概要については、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．９^ｔｈ ｅｄ．Ｌ．Ｖ．Ａｌｌａｎ，Ｎ．Ｇ．Ｐｏｐｏｖｉｔｃｈ，Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ，２０１０ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＩＳＢＮ：９７８－０７８１７７９３４０；Ｆｏｒｍｕｌａｒｉｕｍ ｄｅｒ Ｎｅｄｅｒｌａｎｄｓｅ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒｓ．２００４ ＷＩＮＡｐ ＩＳＢＮ ９０－７０６０５－７５－９；Ｒｅｃｅｐｔｅｅｒｋｕｎｄｅ，Ｇ．Ｋ．Ｂｏｌｈｕｉｓ，Ｙ．Ｂｏｕｗｍａｎ－Ｂｏｅｒ，Ｆ．Ｋａｄｉｒ ｅｎ Ｊ．Ｚｕｉｄｅｒｍａ，２００５ ＷＩＮＡｐ ＩＳＢＮ ９０－７０６０５－６５－１；及びＡｐｏｔｈｅｋｅｎｒｅｚｅｐｔｕｒ ｕｎｄ－ｄｅｆｅｋｔｕｒ．Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒ Ｖｅｒｌａｇ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ １９８６ ＩＳＢＮ ３－７６９２－１０９２－１に見出すことができる。乾癬などの皮膚炎症性疾患を治療するためにＩＬ－８抗体を送達するための局所製剤の説明については、ＵＳ７，１４７，８５４もまた参照されたい。

医薬組成物は一般的に、採用する剤形に部分的に応じて、用量あたり約０．０１～１０００ｍｇの抗体を含有している。用量は、例えば、固定または可変（例えば、体重に基づいて）であってもよい。

安定製剤の開発は、本開示の抗体及び抗原結合フラグメントを含む医薬組成物の成功裏の臨床製造にとって極めて重要である。

一部の実施形態では、安定製剤は、添加剤を使用して異なるｐＨの様々な緩衝剤、安定化剤をスクリーニングすることによって調製されるが、最終安定製剤は、保存時における物理的安定性、化学的安定性、及び生物学的活性を有する必要がある。安定製剤における賦形剤の役割は、許容される有効期間を得るために分解を防止する及び／または分解速度を低下させることである。

本開示は、一部の実施形態において、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の安定液体製剤及び／または安定凍結乾燥製剤を提供する。一部の実施形態では、本開示における使用に検討される製剤緩衝剤は、４．０～８．０の範囲のｐＨ、好ましくは、４．５～７．５のｐＨ範囲、最も好ましくは、５．０～６．５のｐＨ範囲を有する。

一部の実施形態では、本開示は、以下、ｐＨを所望の範囲に調節するための、クエン酸ナトリウム、クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、酢酸、酢酸ナトリウム、ヒスチジン、ヒスチジンＨＣｌ、コハク酸、コハク酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、マレイン酸、マレイン酸塩、コハク酸塩、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、及び塩酸、ならびに水酸化ナトリウムのうちのいずれか及びこれらの組み合わせであってもよい緩衝剤を含む。

一部の実施形態では、組成物は、その他の緩衝剤、例えば、トリス緩衝剤、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ＭＯＰＳ－ＳＤＳ（ＭＥＰＳ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－ヒドロキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）などを含み、一部の実施形態では、製剤は、糖アルコールであるポリオールを含む。一部の実施形態では、製剤中の安定化剤は、以下、α－トレハロース、スクロース、マンニトール、ソルビトールのうちのいずれか１つを単独で、または組み合わせで含む。その他の実施形態では、製剤は、以下、メチオニン、リジン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸塩などのうちのいずれか１つである第２の安定化剤を含む。

一部の実施形態では、本抗体製剤は、疎水性の塩、すなわち、硫酸樟脳ナトリウム、トリメチルヨウ化アンモニウムを含む。別の実施形態では、本開示の抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体製剤は、同様に、界面活性剤を含む。一部の実施形態では、以下、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、及びポロキサマー１８８に例示される界面活性剤のうちのいずれか１つは、製剤中に含まれる。一部の実施形態では、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を含む組成物は、酸化防止剤、例えば、メチオニン及び／またはグルタチオンを含む。一部の実施形態では、組成物は、製剤緩衝剤のｐＨを調節するための塩酸及び水酸化ナトリウムを含む。

一部の実施形態では、本開示は、その他の安定化剤及び錯化剤、例えば、エデト酸二ナトリウム（Ｎａ（２）ＥＤＴＡ）及びジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）などを含む。一部の実施形態では、安定製剤の全ての賦形剤は、注射用蒸留水（ＷＦＩ）中に溶解している。

一実施形態では、最終水溶性安定製剤は、粒子状物質を除去するために適切に濾過される。一部の実施形態では、濾過は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルター、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）フィルター、または再生セルロース（ＲＣ）フィルターのいずれかにより行われ、好適には、０．２２及び／または０．４５マイクロメートル孔径のいずれかのサイズのフィルターである。

一部の実施形態では、薬剤送達デバイスは、抗体製剤の第２の重要な態様である。その他の実施形態では、薬剤送達デバイスは滅菌である。その他の実施形態では、薬剤送達デバイスは、バイアル、アンプル、注射器、注射ペン、または点滴静注（ｉ．ｖ）バッグである。

本開示の非限定実施形態では、機能特性解析は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合の動態及び動力学を理解するために、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、及びイメージング、当該技術分野において周知のその他の技術のうちの１つが挙げられるがこれらに限定されない技術を使用して、実験を実施することを含む。更に、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用部位をマッピングしてから、フローサイトメトリーベース結合実験によりモニター及び確認する。

本開示の非限定実施形態では、モノクローナル抗体は、免疫系の自然群または適応群のいずれかを初回刺激する基本的な効果で腫瘍細胞を破壊するための様々なメカニズムを介して機能する。エフェクター機能としては、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）が挙げられる。本明細書で開示する方法に採用する１つの非限定アプローチは、免疫グロブリン定常領域を修飾することによって治療抗体の効果を増強することである。このような抗体の一例としては、可変領域（新規の重鎖領域及び軽鎖領域）で構成され、特定のアイソタイプ、例えば、本開示に記載のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、またはそのバリアントを示す定常領域で構成されていてもよい、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が挙げられる。同様に、固有の可変領域配列を使用して、高いＡＤＣＣ機能または改変された熱安定性を有する抗体分子を開発してもよく、更に、更に本明細書で記載されるとおり、二重特異性抗体、ＳｃＦｖ分子、または任意のその他の抗体フォーマットを開発してもよい。

本開示の非限定実施形態では、語句「サイトカイン」としては、言及した疾患と関連した細胞株及び／またはこれらの組み合わせのうちのいずれかに対して使用される単離抗体の治療の効果として産生され得るケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカイン、及び腫瘍壊死因子を挙げることができる。

本開示の非限定実施形態では、語句「誘導因子」とは、遺伝子発現を調節する分子のことである。

本開示の実施形態は、選択抗体分子の作用機序と関連させて、ＮＫ細胞シグネチャー、ＩＦＮ－γ産生などの経路と関連する遺伝子の相互作用を理解するための方法及びツールを使用することを含む。例示的に、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡によるイメージング、及びＲＴ ＰＣＲなどの技術を共に使用して、選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の機械的影響を解読するが、主なシグナル伝達経路に対する様々な阻害因子の効果は、複数種のがん細胞を用いて評価される。一実施形態では、ＩＦＮ－γ放出アッセイ、ＣＤ１０７ａ＋発現アッセイ、及び／または細胞傷害アッセイを使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の効果を推定する。

本開示の非限定実施形態では、皮下ＰＣ３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを用いて抗腫瘍活性を評価するが、選択抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の効果は、単独またはチェックポイント標的に対するモノクローナル抗体との組み合わせのいずれかで、モニターされる。別の実施形態では、最適かつ所望の抗腫瘍効果を得るために抗体用量レジメンを調節する。一部の実施形態では、語句「非経口投与」または関連用語とは、本明細書で使用する場合、経腸投与及び局所投与以外の投与方法のことを意味し、一般的には、注射によるものであり、以下の投与方法、筋肉内、静脈内、動脈内、硬膜内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、皮下、表皮下、脊髄内、硬膜外、胸骨内の注射及び注入が挙げられるがこれらに限定されない。

以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態をより詳細に説明するために提示されるものである。しかしながら、それら実施例は、本開示の広範な範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現
野生型または変異型のいずれかの、ＣＬＥＣ２Ｄの外部ドメインを含む抗原構築物を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株内で発現させてから、可溶性抗原として精製した。ＣＬＥＣ２Ｄ外部ドメインは、２つの推定上のジスルフィド結合を有する５つのシステインを含有している。発現タンパク質の安定性及び均一性を向上させるために、変異Ｈ１７６Ｃを実施して、Ｃｙｓ１６３アミノ酸に更なるジスルフィド架橋を導入した。抗原精製プロセスを容易とするためのＣ末端ヒスチジンタグを有する構築物を開発した。

ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｑ７２－Ｖ１９１、Ｈ１７６Ｃ）抗原の細胞外ドメインをヒト発現系とＣＨＯ発現系の両方用にコドン最適化してから、構築物を合成した。特定のシグナル配列をＣＨＯが発現する抗原の分泌用に使用した。ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子配列及び適切なシグナル配列をｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングした（図２Ａ）。

９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞を、ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子をコードする発現プラスミドのトランスフェクション用に使用した。細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントしてから、細胞を２５０ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プラスミドをトランスフェクションした。５００μｇのＤＮＡ及び５００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５０ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で２０分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で５時間培養した。５００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で３日間培養した。トランスフェクションの３日後、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘを含有する２００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清を回収した。

細胞回収液を遠心分離にかけてから濾過して、細胞デブリを除去した。透明な上清を予め平衡化したＮｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ Ｃ１０カラムに充填した。それに続き、カラムを５０ｍＭ及び１００ｍＭのイミダゾール溶液で連続的に洗浄してから、５００ｍＭのイミダゾールを用いたＨｉｓタグ付きＣＬＥＣ２Ｄタンパク質の単一工程溶出を行った。複数の画分を回収してから、バッファーをｐＨ７．４の１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に交換した。

精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をＳＤＳ－ＰＡＧＥで解析した。ヒトＣＬＥＣ２Ｄ配列は、２つの推定上のＮ－グリコシル化部位、Ｎ９５及びＮ１４７を有している。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおける異常な移動度は、特異的なＮ－グリコシル化パターンによるものであると推測された。ＰＮＧａｓｅ酵素を使用して精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を脱グリコシル化すると、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析により判定されたものと同様の予測分子量上の単一バンドであると思われた（図２Ｂ～図２Ｆ）。それに続き、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたウェスタンブロット実験により、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を解析した。精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原はまた、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたＥＬＩＳＡにより確認された。タンパク質のオリゴマー状態は、サイズ排除クロマトグラフィー実験を使用することにより、二量体であることが判明した。最後に、エドマン分解法によるＮ末端シークエンシングを実施して、抗原配列を確認した。

実施例２：ファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームを使用した抗体遺伝子ライブラリのスクリーニング
抗体ライブラリのファージディスプレイ及び酵母ディスプレイを組み合わせることにより、抗体遺伝子ライブラリのスクリーニングを実施した。ヒト抗体レパートリーを発現するファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームを連続的に使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するより高い親和性及び特異性を有する新規抗体クローンを同定した（図３）。抗原に対するファージパニング実験用に、磁性ビーズベースのアプローチを採用した。磁性ダイナビーズ上にコーティングされた抗原を調製したが、コンジュゲート効率は＞９０％であった。抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングして、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを発現するファージ粒子を分離した。選択ファージ粒子を使用して、重鎖及び軽鎖レパートリーを含有する複製型を作製した。精製ＤＮＡを消化してから、２種の異なるプラスミド構築物を用いて酵母発現ベクターにライゲートして、Ｆａｂフォーマットの抗体及びＳｃＦｖフォーマットの抗体を作製した。

精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を用いた磁性ビーズコンジュゲート用に、先ず、ダイナビーズを、約０．５～１．０×１０^８ビーズに相当する０．５ｍｇ～１．５ｍｇの範囲の量に計量してから、ｐＨ７．４の０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー中に溶解させた。この懸濁液を３０～６０秒間ボルテックスしてから、回転させ続けながら室温で１０～１５分間培養した。懸濁液を０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファーで２回洗浄してから、１００μＬの０．１Ｍリン酸ナトリウムバッファー中に再度再懸濁させた。５～１０μｇの精製可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原溶液（７５～１５０μＬ）をビーズ懸濁液に加えた。更に、懸濁液を十分混合してから、１００μＬの３Ｍ硫酸アンモニウム溶液を加えた。ゆっくりとした動きではあるが回転させ続けながら混合液を３０～３７℃で１５～２０時間培養した。培養後、磁気分離を行うために、チューブをマグネットホルダー上に１分間置いた。マグネットホルダー（チューブを所定の位置に置いた状態）を２回慎重にひっくり返して、確実に、ビーズがキャップ内に残らないようにした。上清を除去してから、ビーズを、ＢＳＡ（０．０５％）を含有する１ｍＬの１×ＰＢＳで４回洗浄した。最後に、ビーズを、ＢＳＡ（０．０５％）を含む１００μＬの１×ＰＢＳ中に再懸濁させて、パニングに使用した。

１μＬ（約１０^６の数のビーズ）のビーズ単独及びＣＬＥＣ２Ｄ抗原でコーティングしたビーズを、０．１μｇの量の市販のＰ４５００／抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と混合してから、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳで容量を１００μＬに調整した。混合液を氷上で２時間培養してから、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳで洗浄した。１：４００希釈の、ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ヤギＩｇＧを、１００μＬの容量となるように、０．５％ＢＳＡを含有する１×ＰＢＳの溶液中の再懸濁ビーズに加えてから、測定値を記録した。全てのフローサイトメトリー実験はＡｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーターを使用して実施したが、解析はＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ソフトウェアを使用することによって実施した。第１に、前方散乱光データ及び側方散乱光データを確認してゲートを固定してから、ＦＬＨ１フィルターを通った蛍光を読んだ。それぞれの試料について少なくとも５，０００～１０，０００のデータポイントを収集する（図４Ａ）。

新たに画線培養したＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを３ｍｌ ＬＢ培地に播種してからＯＤ６００≒０．９となるまで３７℃で培養することで、ファージパニング実験を開始し、これを後ほどのファージ感染用に使用した。ファージナイーブ抗体ライブラリを解凍し、２５０μｌ（ファージ懸濁液容量の約１／４）のＰＥＧ／ＮａＣｌ溶液（２０％ＰＥＧ８０００及び２．５Ｍ ＮａＣｌ）でファージ粒子を沈殿させ、氷上で３０分間培養してから、沈殿ファージを１０，０００×ｇ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、ファージペレットを２００μｌのＰＢＳ溶液中に再懸濁させた。ファージ懸濁液（２００μｌ）をＢＳＡをコンジュゲートしたビーズに加え、ローテータ上、室温で２時間培養してから、上清をＣＬＥＣ２Ｄ抗原をコンジュゲートしたビーズに加え、１０μＬの上清を後ほどのプラークアッセイ用に保管した。抗原をコンジュゲートしたビーズを含むファージ懸濁液をローテータ上、室温で２時間培養した。ビーズを１ｍｌの０．０５％ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０）で２回洗浄した。最後に、ファージ粒子が結合した磁性ビーズを１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させる。１０μＬのビーズ懸濁液を後ほどのプラークアッセイ用に保管した。残りの９０μｌの懸濁液を、先に調製した２ｍｌの増殖ＴＧ１細胞に加えてから、混合液を３７℃で１時間培養した。培養後、混合液を、アンピシリンを含有する１０ｍｌのＬＢ培地中に２５μｇ／ｍｌの終濃度に希釈した。２５０ｒｐｍで常時振盪しつつ、３７℃で２時間培養した後、アンピシリンの濃度は１００μｇ／ｍｌの終濃度へと上昇した。Ｍ１３ＫＯ７、ヘルパーファージを、１０の感染多重度（ＭＯＩ）で増幅ＴＧ１細胞に混合してから、３７℃で更に３０分間培養した。ヘルパーファージ感染細菌を遠心分離にかけて、ペレットを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリン及び２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを補足した１０ｍｌのＬＢ培地中に再懸濁させてから、ファージ増幅用に３０℃で３０分間～１００分間培養した。１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離により細菌培養物を沈殿させた。ペレットを廃棄してから、ＰＥＧ／ＮａＣＬ溶液（上清の約１／４の容量）を上清に加えることによる増幅ファージ分子の沈殿用に上清を使用した。混合液を氷上で３０分間培養してから、沈殿ファージを、１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、ペレットを１ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。１０μＬの増幅ファージ懸濁液でプラークアッセイを実施して、増幅ファージ数を推定する一方で、沈殿ファージの残りを、５０％グリセロールを用いて長期保存用の－８０℃のフリーザーで保存した。

全ての工程でプラークアッセイを実施して、ファージ粒子の数を確認した。ＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを３ｍｌ ＬＢ培地中の細菌に播種してから、ＯＤ６００≒０．９となるまで３７℃で増殖させた。精製水で０．７％のアガロースを調製してから、それぞれ１５ｍｌのファルコンチューブに入れた３ｍｌのアリコートで、５０℃で保存した。ファージ上清及びペレットを、対応する工程で１０^－１から１０^－５へと希釈した。１００μｌの希釈ファージ及び１００μｌのＴＧ１細胞をそれぞれのアガロースアリコートに加えて混合してから直ちに、ＬＢ寒天プレート上に薄く広げた。プレートをインキュベータ内、３７℃で一晩培養した。プラーク形成が認められ、翌日カウントした。認められたプラークの数に基づいて、パニング分子の数を計算した（表１０）。

ＴＧ１細菌プレートに由来する単一コロニーを、ＯＤ６００が約０．９に達するまで３７℃の２０ｍｌ ＬＢ培地に播種した。２００μｌの沈殿パニングファージ懸濁液を２ｍｌのＴＧ１細胞（１０個の異なるチューブ内にあり、それぞれのチューブは２～５ｍｌのＴＧ１細胞を含有している）に播種してから、混合液を振盪しつつ３７℃で１時間培養した。それぞれのチューブ内の容量を、２５μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有する１０ｍｌのＬＢ培地に希釈した。２２０ｒｐｍで振盪しつつ、３７℃で更に２時間培養した後、アンピシリン濃度は１００μｇ／ｍｌの終濃度へと上昇し、更に３０分間～１００分間培養した。細菌培養物を１０，０００ｇ、１０分間の遠心分離にかけ、そのペレットを、更に使用するためのＱｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐを用いたＤＮＡ単離用に製造業者のプロトコルに従い使用した。

Ｆａｂフォーマットの酵母シャトルベクターを用いた重鎖及び軽鎖ライブラリの構築。
パニング分子の単離複製型ＤＮＡに加えて軽鎖導入用に指定された自社製酵母発現ベクターｐＺＢ００３（ＭＴＣＣ ２５１２７）をＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｓｃＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に個別に形質転換した。同様に、重鎖プール（単離複製型に由来する）及び対応するベクターｐＺＢ００２（ＭＴＣＣ ２５１２６）をＮｃｏＩ及びＮｏｔＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に形質転換した。重鎖パニングライブラリと軽鎖パニングライブラリの両方用に得られた形質転換効率は＞１０^７ｃｆｕである。重鎖ライブラリと軽鎖ライブラリの両方用に得られた形質転換コロニーについて、重鎖（図４Ｂ）用のＮｃｏＩ／ＮｏｔＩ及び軽鎖（図４Ｃ）用のＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｓｃＩを使用したインサート遊離を確認してから、それら形質転換コロニーをグリセロールストック調製用にスクレープした。両方の分子鎖のインサート遊離について、パニング可変重鎖及び軽鎖カッパ分子の存在を確認した。グリセロールストックを今後の使用用に－８０℃で保存した。表１０、表１１、及び表１２は、酵母ベクターを用いたライブラリの構築に使用可能な構成成分を提供する。

ＳｃＦｖフォーマットの酵母シャトルベクターを用いた重鎖及び軽鎖ライブラリの構築。
ＳｃＦｖフォーマットは、軽鎖（ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するパニングファージに由来するカッパレパートリー）をｐＺＢ００４．４ベクターのＮｄｅＩ制限部位とＡｓｃＩ制限部位の間に導入してから、軽鎖ＳｃＦｖライブラリのプールを作製することからなる。それに続き、制限消化確認でライブラリを確認してから、パニング重鎖プールをＳｃＦｖ軽鎖ライブラリのＮｃｏＩ制限酵素とＮｏｔＩ制限酵素の間に導入した。この最終ライブラリを、酵母発現系を用いて更に形質転換、ソート、及びスクリーニングされるパニング分子のＳｃＦｖライブラリとして使用した。パニング分子の単離複製型ＤＮＡに加えて自社製ＳｃＦｖ酵母発現ベクターをＮｄｅＩ及びＡｓｃＩで消化してから、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に個別に形質転換した。

軽鎖ライブラリ用に得られた形質転換コロニーについて、ＮｄｅＩ／ＡｓｃＩを使用したインサート遊離を確認してから、それら形質転換コロニーをグリセロールストック調製用にスクレープした。インサート遊離について、パニング分子の存在を確認した。グリセロールストックを今後の使用用に－８０℃で保存した。パニングにより得られた重鎖レパートリーの導入用に使用されるＱｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐキットを使用して、プラスミド単離を実施した。

同様に、単離複製型に由来する重鎖プール及びＳｃＦｖ含有軽鎖ライブラリをＮｃｏＩ及びＮｏｔＩで消化してから（図４Ｄ）、ライゲートし、非常にコンピテントな細胞であるＴＧ１に形質転換した。重鎖パニングライブラリと軽鎖パニングライブラリの両方用に得られた形質転換効率は＞１０^７ｃｆｕである。ＮｃｏＩ／ＮｏｔＩを用いた重鎖とＮｄｅＩ／ＡｓｃＩを用いた軽鎖の両方用のインサート遊離で、コロニーを確認した（図４Ｅ）。

表１３、表１４、及び表１５は、酵母発現ベクターを用いたライブラリの構築に使用可能な構成成分を提供する。

大規模に単離したＤＮＡについて制限消化を確認してから、酵母形質転換用に導入した。制限消化により確認した後、それぞれのフォーマット用の可変重鎖及び軽カッパ鎖を含有する少なくとも１０の別々のクローンをシークエンシング反応用に送付した。シークエンシング結果については、重鎖及び軽カッパ鎖の生産性の観点から以下の表１７にまとめている。

上で詳述したとおり、非特異的結合物質を除去するために、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をコーティングしたビーズに対してファージ抗体ライブラリをパニングした。選択ファージ粒子を使用して、重鎖及び軽鎖レパートリーを含有する複製型を作製した。この方法は、パニング分子プールに対する望ましくないバイアスをもたらし得るあらゆるＰＣＲベースアプローチを欠いていた。精製複製型のＤＮＡを消化してから、２種の異なるプラスミド構築物を用いて酵母発現ベクターにライゲートして、Ｆａｂフォーマットの抗体及びＳｃＦｖフォーマットの抗体を作製したが、クローニング効率は＞９５％であると推定され、ＴＧ１細胞の形質転換効率は１０^７ｃｆｕ超であった。これらのパラメータは、パニング多様性の完全な獲得確保を満たすために不可欠であった。

続いて、両方のフォーマット、すなわち、ＳｃＦｖ及びＦａｂの酵母ＤＮＡライブラリを酵母細胞に形質転換した。形質転換酵母細胞について、重鎖、軽鎖、及びＦａｂ分子の発現を確認した。それぞれ重鎖及び軽鎖用の複数種のタグ、例えば、ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、及び（Ｈｉｓ）_６タグ、ならびにＶ５タグなどを用いて、抗体遺伝子の表面発現を解析した。フローサイトメトリーベースのソーティングを実施して、特異的抗原結合を示す抗体配列を発現する酵母細胞を単離した。酵母細胞集団のフローソーティングを２～３回繰り返して、標識ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するより高い親和性を有する抗体クローンを濃縮した。

酵母ＳｃＦｖライブラリの作製
ＥＢＹ１００株（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞）を、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上の５ｍｌ ＹＰＤ培地内で、一晩増殖させた。翌朝、一晩培養したうちのアリコートを、１００ｍｌのＹＰＤ培地に約０．３のＯＤ６００で播種した。播種細胞は、ＯＤ６００が約１．６に達する（一般的には、５時間～６時間後）まで、３０℃及び２２０ｒｐｍのプラットフォーム振盪器上で増殖し続けた。３０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離により酵母細胞を回収してから、培地を除去した。細胞ペレットを、５０ｍｌの氷冷水で２回、５０ｍｌの氷冷エレクトロポレーションバッファー（１Ｍソルビトール／１ｍＭ ＣａＣｌ２）で１回洗浄した。細胞ペレットを２０ｍｌ（０．１Ｍ ＬｉＡｃ／１０ｍＭ ＤＴＴ）中に再懸濁させてから、３０℃の培養フラスコ内、２２０ｒｐｍで３０分間振盪することにより、酵母細胞を調整した。遠心分離により調整細胞を回収してから、５０ｍｌの氷冷エレクトロポレーションバッファーで１回洗浄し、１ｍｌの最終容量に達するように、細胞ペレットを１００μｌ～２００μｌのエレクトロポレーションバッファー中に再懸濁させた。

これは約１．６×１０^９細胞／ｍｌに相当し、それぞれ４００μｌの２回のエレクトロポレーション反応用に十分である。細胞はエレクトロポレーションを行うまで氷上で保管した。４００μｌのエレクトロコンピテント細胞を所定量のプラスミドＤＮＡと軽く混合してから、予め冷却したＢｉｏ－Ｒａｄ ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒキュベット（０．２ｃｍの電極間距離）へと移し、エレクトロポレーションを行うまで氷上で５分間保管した。２．５ｋＶ及び２５μＦで細胞にエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーションを行った細胞を、それぞれのキュベットから８ｍＬの１Ｍソルビトール：ＹＰＤ培地の１：１混合液に移してから、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上で１時間培養した。遠心分離により細胞を回収してから、ＳＤＣＡＡ培地中に再懸濁させた。細胞懸濁液から１０倍系列希釈細胞を調製してから、１００μｌの１０－３及び１０－４希釈細胞を選択プレート（ＳＤＣＡＡプレート）上に播種し、３０℃のインキュベータで３～４日間培養した。３～４日後のコロニーカウントからライブラリサイズを測定した（図５Ａ）。３～４日後、ＳＤＣＡＡプレート上にコロニーが認められた。最後に、酵母細胞をスクレープすることにより酵母ＳｃＦｖ抗体ライブラリの２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。

Ｆａｂ抗体ライブラリを開発するための酵母半数体抗体ライブラリの作製
軽微な変更を行いつつ製造業者（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）のプロトコルに従い形質転換を実施した。要約すると、ＥＢＹ１００ｕｒａ３Δ４．０３株（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞）及びＹＶＨ１０を、２２０ｒｐｍ及び３０℃のプラットフォーム振盪器上の５ｍｌ ＹＰＤ培地内で、一晩増殖させた。一晩培養したもののＯＤ６００値を確認してから、一晩培養したものを、約０．４のＯＤ６００で開始してＯＤ６００が約１．０～１．２に達するまで、２２０ｒｐｍの振盪インキュベータ内、５０ｍｌのＹＰＤ培地に３０℃で再播種した。３０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離により酵母細胞を回収してから、培地を除去した。細胞ペレットを１０ｍｌのＥＺ１溶液で洗浄してから、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離にかけた。次に、細胞ペレットを６００μｌのＥＺ２溶液中に再懸濁させて、更にＲＴで５分間培養した。コンピテント酵母細胞を含有する２００μｌのＥＺ２溶液を、適量のプラスミドＤＮＡ及び５００μｌのＥＺ３溶液と混合した。コンピテント酵母細胞及びＤＮＡの上記混合液を３０℃で１時間３０分培養した。酵母細胞を２４００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけた。２００μｌの上清を廃棄してから、細胞ペレットを残りの上清中に再懸濁させた。

細胞懸濁液から１０倍系列希釈細胞を調製してから、１００μｌの１０－３希釈細胞を選択プレート上に播種し、３０℃のインキュベータで３～４日間培養した。重鎖抗体ライブラリで形質転換したＥＢＹ１００ｕｒａ３Δ４．０３を、トリプトファンドロップアウトグルコース培地上で選択した。しかしながら、軽鎖抗体ライブラリを含むＹＶＨ１０株を、ウラシルドロップアウト培地上で選択した。３日後のコロニーカウントからライブラリサイズを測定したが、約１０^５であると推定された。（図５Ａ）半数体酵母抗体ライブラリの２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。

酵母交配による二倍体酵母Ｆａｂライブラリの作製
異なる交配タイプを有する、重鎖及び軽鎖ライブラリを含む２種の半数体酵母株を、アミノ酸ドロップアウトグルコース培地でスクレープした。両方の半数体細胞培養物のＯＤ６００を確認した。それぞれの培養物の約１のＯＤ６００を１．５ｍｌマイクロチューブに入れてから、１３０００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄し、次に、１００μＬの精製水をそれぞれのペレットに加えてから、それらを共に混合した。混合酵母培養物をＹＰＤプレート上に播種してから、３０℃で５～６時間培養した。５～６時間後のＹＰＤプレートに由来する酵母細胞をスクレープしてから、スクレープ酵母細胞のＯＤ６００をモニターした。スクレープ培養物を、０．１のＯＤ６００で開始して、ｕｒａ ｔｒｐ二重ドロップアウトグルコース培地に播種してから、３０℃、２２０ｒｐｍで、少なくとも２４時間培養した（二倍体濃縮用）。

濃縮二倍体培養物のＯＤ６００をモニターしてから、約５００及び１０００の細胞を含有する濃縮培養物から希釈溶液を調製した。希釈溶液を単一及び二重ドロップアウトアミノ酸グルコース寒天プレート上に播種してから、３０℃で２～３日間培養した。二倍体ライブラリをｕｒａ ｔｒｐ二重ドロップアウトグルコースプレート上で選択した。残りの濃縮二倍体培養物の２０％グリセロールストックを調製し、－８０℃で保存した。単一ドロップアウトプレート内で増殖した総コロニーの数で割った、二重ドロップアウト培地プレート内で増殖した二倍体コロニーの数として、交配効率のパーセンテージを計算した。酵母交配により酵母ｆａｂ抗体ライブラリを作製した（図５Ｃ）。

酵母Ｆａｂライブラリ及び酵母ＳｃＦｖライブラリのフローソーティング
酵母試料を３ｍｌのＳＤＣＡＡ培地に播種してから、酵母細胞を３０℃、２２０ｒｐｍで一晩培養した。翌日、１：１０に希釈することにより、播種培養物のＯＤ６００値をモニターした。酵母試料の０．３のＯＤ６００の細胞を２０ｍｌの２×ＳＧＣＡＡ培地に播種してから、振盪インキュベータ内、２０℃、２２０ｒｐｍで４８時間培養した。４８時間後１：１０に希釈することにより、誘導培養物のＯＤ６００をモニターした。約０．１のＯＤ６００の細胞を増殖酵母培養物から１．５ｍｌチューブに入れてから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄して、１００μｌの１×ＰＢＳを加えることによりペレットを洗浄してから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。上清を再度廃棄した。適切な濃度の２００μｌの一次抗体またはビオチン化抗原を酵母細胞ペレットに加えてから、回転させながらＲＴで４５分間培養した。培養後、細胞を１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。０．１％ＢＳＡを含有する２００μｌのＰＢＳを加えることにより細胞ペレットを２回洗浄して、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。適切な濃度の２００μｌの二次抗体を酵母細胞ペレットに加えてから、氷上で３０分間培養した。培養後、細胞を１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。０．１％ＢＳＡを含有する２００μｌの１×ＰＢＳを加えることによりペレットを３回洗浄してから、１３，０００ｒｐｍ、２分間の遠心分離にかけた。３００μＬの１×ＰＢＳを酵母細胞ペレットに加えてから、フローソーターで試料を解析した（図５Ｄ及び図５Ｅ）。一次抗体、二次抗体、及びビオチン化抗原の濃度を表１８に示す。

ソート／リソートＳｃＦｖプールまたはソート／リソートＦａｂプールからの個々のクローンのスクリーニング
個々のクローンをスクリーニングするためのフローソーティング中に述べたのと同様のフロー染色プロトコルを使用した。約１０００のコロニーを、発現及び抗原結合用にフローサイトメトリーでスクリーニングした（図５Ｆ、図５Ｇ、及び図５Ｈ）。それぞれＦａｂクローン及びＳｃＦｖクローンの場合に、結合と発現の両方に対して＞２％及び＞５％陽性であることを基準として、これらのクローンを選択した。

加えて、可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するソーティングにより得た選択抗体遺伝子プールを次世代シークエンシングに供した。ＳｃＦｖフォーマットの抗体遺伝子プールとＦａｂフォーマットの抗体遺伝子プールの両方に対してこの作業を実施した。例示として、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４２、配列番号１、配列番号７３、配列番号２１、配列番号３５、配列番号５８、配列番号７、配列番号２６０、配列番号２６１、配列番号２５８、配列番号２１７、配列番号２８９、配列番号２３７、配列番号２５１、配列番号２７４、配列番号２２３を、最終ソートラウンドにおいて、Ｆａｂフォーマットでスクリーニングしたクローンに適用可能な２．５倍～７倍の範囲で濃縮した一方で、ＳｃＦｖフォーマットでスクリーニングしたクローンをおおよそ、２倍～１０６倍の範囲の倍数で濃縮した。全てのソートラウンド時に確認された遺伝子コピーの数により、濃縮倍数の推定を行った。このことは、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体が、ファージディスプレイ技術及び酵母ディスプレイ技術でスクリーニングしたナイーブ抗体ライブラリを含む強力なプラットフォームによりスクリーニング、単離、及び同定されたという事実を更に裏付けた。

最後に、フローサイトメトリーアッセイを使用して個々の酵母クローンを同定した。それに続き、ピアグループ抗体遺伝子シークエンシングを実施してから、新規抗体配列を、哺乳動物遺伝子発現ベクターへの更なるクローニング用に取得した。Ｚｙｍｏｐｒｅｐ Ｙｅａｓｔ Ｐｌａｓｍｉｄ ｍｉｎｉｐｒｅｐキットを使用して、ＦａｂフォーマットとＳｃＦｖフォーマットの両方で存在する選択酵母クローンから酵母プラスミドＤＮＡを単離した。ベクター特異的プライマーを使用して、Ｆａｂフォーマットを有する選択酵母クローン内における重鎖及び軽鎖の可変領域を増幅させてから、シークエンシングを行った。一方、ＳｃＦｖフォーマットのクローンでは、酵母コロニーから単離したプラスミドを、続けて、より大規模な産生用に、ＮＥＢ－α細胞に形質転換した。ＮＥＢ－α細胞から単離したプラスミドをシークエンシング確認用に送付した。図５Ｈは、フローサイトメトリーを用いて測定した、モノクローナル抗体クローンのＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合パーセンテージについてまとめている。データは、約８０％のモノクローナル抗体クローンが検出可能かつ特異的にＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合することが明らかとなったことを示唆した。

全ての配列識別子及び適切な配列同一性解析については、可変重鎖の抗体クローンを列挙する表１９、及び可変カッパ軽鎖の抗体クローンを列挙する表２０に記載されている。

実施例３：新規抗体クローンを同定するための抗体配列解析
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に特異的に結合する、重鎖と軽鎖の両方の単離抗体の可変領域は、６つの超可変領域：軽鎖に由来する３つの超可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）及び重鎖に由来する３つの超可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）からなる。超可変領域の長さは、その長さがプール内における４～２３アミノ酸の範囲の有意な表示を有するＣＤＲＨ３に示されるとおり、有意に様々であり得る。ＣＬＥＣ２Ｄに対する選択抗体遺伝子の配列のばらつきを理解するために、全ての重鎖ＣＤＲＨ３長のアミノ酸組成を測定した（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、及び図６Ｄ）。固有性を確認するために、抗体配列を解析した。複数種の配列アライメントツールを使用して、抗体遺伝子配列を、ＩＭＧＴ、ＩｇＢＬＡＳＴなどのようなデータベースに公開されている抗体配列と比較した。

選択配列を更に解析して、脱アミド化モチーフ、異性化モチーフ、タンパク質分解開裂モチーフ、Ｎ－結合型グリコシル化部位、可塑性結合モチーフ、ストレプトアビジン結合モチーフ、ヒトＦｃ結合モチーフ、マウスＩｇＭ結合モチーフ、ウシＩｇＧモチーフ、プロリンリッチモチーフ、及びシステインリッチモチーフなどを有する抗体遺伝子を同定した。このような抗体遺伝子は、治療用モノクローナル抗体の開発に適しているとは考えられないことから、更なる評価用には検討しなかった。個々の酵母コロニースクリーニングの段階において可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体遺伝子に認められた結合度合いに基づき、限定するわけではないが上位４０の結合物質を、その後の開発に対する更なる目的とした。確認された抗体遺伝子配列のみを、更なるクローニング、発現、及び特性解析用に取得した。

実施例４：新規抗体遺伝子のクローニング
続いて、エラーのない抗体可変重鎖及び可変軽鎖領域を、野生型または変異型のいずれかであり、ヒト、マウス、及びカニクイザル種に由来する様々なアイソタイプ主鎖を有する哺乳動物発現ベクターにクローニングした。以下の表２１は、同定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子のクローニング用に開発され、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ（ＭＴＣＣ），Ｉｎｄｉａへと寄託された関連ベクターについてまとめている。

例示として、哺乳動物発現ベクターｐＺＢ００７（ＭＴＣＣ ２５３５８）及びｐＺＢ００８（ＭＴＣＣ ２５３５９）をそれぞれ、可変重鎖遺伝子クローニング及び可変軽鎖遺伝子クローニング用に指定及び使用した（図７Ａ及び図７Ｂ）。好適なプロモーター配列の制御下における抗体遺伝子の発現用に、ベクターをカスタム設計して合成した。プラスミドは、強力なプロモーターによって駆動されるカナマイシンＲ／ピューロマイシンＲカセット、及び増殖用の高コピー数ＣｏｌＥ１／ｐＭＢ１／ｐＢＲ３２２／ｐＵＣ複製起点を搭載している（図７Ａ及び図７Ｂ）。

ヒトナイーブ抗体ライブラリを使用した可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対するファージディスプレイプラットフォーム及び酵母ディスプレイプラットフォームによりスクリーニングした配列確認済み選択プラスミドを、その後のＰＣＲ増幅用の鋳型として使用した。配列特異的プライマーを使用してＰＣＲ反応を実施し、可変重鎖及び軽鎖領域を有する選択クローンを増幅させた。０．２μＭのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｉｎｄｉａ）、２００ユニットのＰｈｕｓｉｏｎポリメラーゼ（ＮＥＢ）からなる５０μＬの混合容量を入れたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（商標）Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ（商標）ｐｒｏ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ上で、ＰＣＲ反応を実施した。９４℃、３分間の初期変性に続いて、３０サイクルの、９４℃、３０秒間の変性、６０℃、５０秒間のアニーリング、７２℃、１０秒間のプライマー伸長、７２℃、１０分間の最終伸長を実施した。ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用してＰＣＲ増幅産物を抽出した。ＡｓｃＩ及びＸｂａＩによる制限酵素消化によりプラスミドベクターｐＺＢ００７を直鎖化し、ＥｃｏＲＩ及びＡｓｃＩによりｐＺＢ００８を直鎖化した。ＱＩＡＧＥＮキット（２００２１）を使用してインサートフラグメント及び直鎖化ベクターをゲル抽出した。これらの精製ベクター及びインサートを、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｔａｋａｒａ，ＵＳＡ）を用いた組換えに使用した。インフュージョン反応用混合液の細菌細胞への形質転換を実施した。－８０℃のフリーザーからコンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｓｔｅｌｌａｒ）の１００μＬのアリコートを取り出して、氷上で５分間解凍した。組換え試料のうちの５０％をコンピテント細胞に加えて軽く混合してから、氷上で２０分間培養した。ドライバス内、４２℃で５０秒間熱ショックを与えた。バイアルを氷上で２分間素早く冷却した。３７℃に予め温めた０．９５０ｍＬのＬＢ液体培地を加えてから、振盪インキュベータ内、３７℃、２２０ｒｐｍで１時間培養した。１００μＬの得られた培養液を、カナマイシンを含むＬＢ寒天培地上に播種してから、３７℃で一晩培養した。

特定のＤＮＡプラスミドを含有する形質転換細胞を、カナマイシンを含む５ｍＬのＬＢ液体培地に播種してから、２２０ｒｐｍ、３７℃で一晩培養した。ＱＩＡＧＥＮキットを使用して増殖培養液からプラスミドＤＮＡを一晩単離した。ＳｐｅＩ酵素及びＸｈｏＩ酵素を使用して実施した制限酵素解析により単離クローンをスクリーニングし、シークエンシングにより確認すると、エラーを含まないことが判明した。その後のトランスフェクション実験に使用するために、ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｄｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、確認済みクローンに由来する配列確認済みプラスミドＤＮＡを大規模に精製した。

実施例５：抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の調製及びＣＨＯが発現する新規モノクローナル抗体の選択
新規モノクローナル抗体クローンを選択するための戦略
治療抗体の設計及び特性に注意するために、更なる開発用の特定のモノクローナル抗体を選択することは合理的である必要がある。更に、抗体の作製、製造、及び保存は、分子特性、例えば、薬物動態、溶解性、発現、粘度、及び長期安定性などの課題を提起し続けており、それらの分子特性を予測することは困難であり、パラメータ間の相関の理解はかなり限定的なものである。更に、抗体ディスプレイプラットフォームを通して選択／同定した多様な抗体遺伝子の検討は、順位付けプロトコルにより調整する必要がある。とりわけ、固有性、クローンの更なる選択／開発に有利とならない可能性のある特定のモチーフの存在、可溶性形態または膜結合形態のいずれかのＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する親和性、及び機能、力価、収率、回収率、解析プロファイル（単独またはこれらの組み合わせのいずれか）に例示される既存のシークエンシングデータに基づいて、包括的なスコアリング関数／法を採用／開発した。クローンは、最終クローンの選択において実際に採用される動的選択機構を有する正当な開発過程において、重要なパラメータに対する複数ラウンドの確認を受け得る。

細胞表面発現用の全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子を用いたＣＨＯ細胞トランスフェクション。
細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄタンパク質に対して同定された新規抗体遺伝子の結合性を推定するために、全長ＣＬＥＣ２Ｄ構築物を合成した。ＣＨＯ細胞上で効率的に表面発現させるために、天然のシグナル配列を使用した。全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子配列をｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングした（図８Ａ）。それに続き、構築物をｎｅｂ－αに形質転換してから、Ｑｉａｇｅｎ ｍｉｄｉ ｐｒｅｐキットを使用して大量に単離した。＞９０％の生存能のＣＨＯ懸濁細胞に全長ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子発現プラスミドをトランスフェクションした。例示として、１０ｍｌ容量のトランスフェクション用に、１．２５×１０^６細胞／ｍｌを取り出したが、ＣＨＯ細胞は、１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントしてから、細胞を２．５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＤＮＡ構築物をトランスフェクションした。５～１０μｇのＤＮＡ及び５～１０μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２．５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～４日後、２ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの３日後、４日後、及び５日後にフローサイトメトリーを用いて、細胞の表面抗原結合を解析した。全長構築物をトランスフェクションしたＣＨＯ細胞は、他の箇所において特に言及しない限り、これ以降、Ｃ４５４８として知られる。

全長膜アンカーＣＬＥＣ２Ｄ抗原を一過的に発現するＣ４５４８細胞は、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することにより、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方により確認された。約５０，０００～１００，０００の細胞を９６ウェルＵ底プレートに入れた。１００μｌのアッセイバッファー中の１～５μｇの市販抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）（Ｃａｔ ＃ Ｈ０００２９１２１－Ｍ０１；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を、トランスフェクションしていないＣＨＯと、全長ＣＬＥＣ２Ｄ表面抗原構築物をトランスフェクションしたＣ４５４８の両方に加えてから、１～２％のＢＳＡを含むＤＰＢＳ中、室温で１時間培養した。１時間の培養後、プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。細胞を２００μｌの０．１％ＢＳＡ溶液で２回更に洗浄した。１：１００希釈の二次抗体、すなわち、抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を加えた。それに続き、プレートを暗黒下、室温で３０分間培養した。０．１％ＢＳＡ溶液でウェルを２回洗浄してから、フローサイトメトリーで解析した。ＣＬＥＣ２Ｄ発現ＣＨＯ細胞と非トランスフェクトＣＨＯ細胞の間の蛍光シグナルの上昇を比較することにより、モノクローナル抗体の細胞表面結合を推定した。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の表面発現は、Ｃ４５４８トランスフェクトＣＨＯ細胞上、４日目～５日目において最適であった（図８Ｂ）。

共焦点顕微鏡実験用に、ウェルあたり２５０μｌの１２μｇ／ｍｌポリＤリジンを加えてから、３７℃で一晩培養した。５００μｌのＤＰＢＳでチャンバーを２回洗浄してから、２℃～８℃で保存した。非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現ＣＨＯ細胞（Ｃ４５４８）を使用したが、細胞のカウント及び生存能のデータは、ｖｉ－ｃｅｌｌ Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ウェルあたり５０，０００の細胞を、１０％ＦＢＳを含む５００μｌの増殖培地（４ｍＭグルタミン＋１％Ｐｅｎｓｔｒｅｐを含むＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２）に播種した。実験の前に、全ての細胞を、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で２日間培養した。更に、細胞を１×ＰＢＳで洗浄してから、ＰＢＳ中の２％ホルムアルデヒド中、室温（ＲＴ）で５分間固定した。次に、細胞を１×ＰＢＳで２回すすいでから、５％ＢＳＡを用いて、ＲＴで１時間ブロッキングした。１時間後、希釈一次抗体、すなわち、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（４Ｃ７）（２μｇ）とＲＴで１時間培養してから、ＰＢＳで少なくとも３回洗浄し、次に、二次抗体である抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（２μｇ）とＲＴで１時間培養した。ＤＡＰＩを使用して細胞核を染色した（１：１０００、ＲＴで５分間）。次に、細胞を１×ＰＢＳで３回すすいで、イメージングを行うまでＰＢＳ中に浸したままにした。１．３５－ＮＡ対物レンズを備えた６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡上で免疫蛍光顕微鏡検査法を実施した。適切な波長（ＤＡＰＩ用にはλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４３０～４７０ｎｍ、Ａｌｅｘａ ４８８用にはλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ）を使用して、処理の１６時間後の細胞をイメージングした。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。顕微鏡画像で確認したところ、顕微鏡下、Ｃ４５４８細胞上のＣＬＥＣ２Ｄの表面発現が細胞表面上に分布して観察された一方で、非トランスフェクトＣＨＯ細胞は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体依存性シグナルを何らもたらさなかった（図８Ｃ）。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを発現させるためのＣＨＯ細胞トランスフェクション
適切に折り畳まれたモノクローナル抗体を培地に分泌させるための適切なシグナル配列を含む哺乳動物遺伝子発現ベクターを使用して、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子を発現させた。抗体遺伝子発現用に、９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞にトランスフェクションした。１．２５×１０^６細胞／ｍｌのＣＨＯ細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。廃培地をデカントした。細胞を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、抗体重鎖遺伝子を発現するプラスミド及び抗体軽鎖遺伝子を発現するプラスミドを様々な化学量論（例えば、１：２、１：３、１：４、２：３、３：１、４：１など）で共トランスフェクションした。５０～１００μｇのＤＮＡ及び５０～１００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～４日後、２０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ_２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清（５０ｍＬ）を回収した。

細胞表面結合：一過性を用いた、ＣＨＯが発現するモノクローナル抗体のスクリーニング
続いて、分泌された新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを含有する５０ｍＬの回収培養上清を、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅレジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含有するｃｅｌｌｇｒａｖｉｔｙカラムを使用したプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによる精製に供した。方法はプロテインＡカラム消毒工程から開始するが、３カラム容量（ＣＶ）の０．５Ｍ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）溶液をＲＴで５分間通過させてから、８カラム容量の精製水を通過させた。それに続き、３０ｍＭリン酸ナトリウム、１２０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．０±０．２からなる３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーでプロテインＡカラムを平衡化した。５０ｍＬの培養上清を平衡化プロテインＡカラムに充填し、更にフロースルーを再充填した。この手順を２回繰り返した。３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーによる洗浄を実施してから、３ＣＶのプロテインＡ高塩バッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、１Ｍ ＮａＣｌ ｐＨ７．０±０．２）による洗浄を実施した。

更なる３ＣＶのプロテインＡ平衡バッファーをカラムに通過させてから、４ＣＶのプロテインＡ低ｐＨバッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６．０±０．２）による洗浄を実施した。次に、結合したモノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を溶出するために、５ＣＶのプロテインＡ溶出バッファー（３０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．０±０．１）を使用した。更に、適量の１Ｍトリス溶液を加えることにより、抗体を含有するプロテインＡ溶出液をｐＨ約７．０に中和した。

中和後、Ａｍｉｃｏｎ ３０ｋＤａ分画濃縮器を使用して、プロテインＡ溶出液を濃縮してバッファーを１×ＰＢＳに交換した。濃縮器からタンパク質試料を回収してから、Ｎａｎｏｄｒｏｐ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを使用してＡ２８０で濃度を測定した。図９Ａに示すとおり、還元及び非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いてタンパク質を解析した。それに続き、これらのタンパク質試料を更なる実験用に使用した。

定量により判定したが、１００μｇよりも多い生成収量のクローンを、還元及び非還元条件下における生成物の品質を確認するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析用の最終候補リストに載せた。引き続いて、非還元条件下における約１５０ｋＤａならびに還元条件下における約５０ｋＤａ（重鎖を表す）及び約２５ｋＤａ（軽鎖を表す）の出現により説明されるＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル中の顕著なバンドを有するクローンを、更なる解析用の最終候補リストに載せた（図９Ａ）。加えて、純度についてもまた、標的タンパク質に沿って出現したバンドの数により判定したが、純度はまた、クローンを選択する／最終候補リストに載せるための基準とみなされた。非還元条件下において３超のバンドを有するタンパク質、同様に、還元条件下において重鎖または軽鎖の２以上のバンドを有するタンパク質については、考慮に入れなかった。

細胞表面結合アッセイ：フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による
全長膜アンカーＣＬＥＣ２Ｄ抗原を一過的に発現するＣＨＯ懸濁細胞を使用して、抗体試料（細胞培養上清及び／または精製タンパク質）をスクリーニングした。５０，０００～１００，０００の細胞を９６ウェルＵ底プレートに入れた。１００μｌの細胞培養上清、または１００μｌのアッセイバッファー中の０．０３～３μｇの精製抗体を、ＣＬＥＣ２Ｄ発現細胞に加えてから、１～２％ＢＳＡを含むＤＰＢＳ中、室温で１時間培養した。１時間の培養後、プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、３～５分間の遠心分離にかけた。細胞を２００μｌの０．１％ＢＳＡ溶液で２回更に洗浄した。１：１００希釈の二次抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣ）を加えた。それに続き、プレートを暗黒下、室温で３０分間培養した。０．１％ＢＳＡ溶液でウェルを２回洗浄してから、フローサイトメトリーで解析した。市販の抗ＣＬＥＣ２ＤモノクローナルＡｂ（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を陽性対照として使用し、抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を二次抗体として使用した。ＣＬＥＣ２Ｄ発現ＣＨＯ細胞と非トランスフェクトＣＨＯ細胞の間の蛍光シグナルの上昇を比較することにより、モノクローナル抗体の細胞表面結合を推定した。

同定した新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体をスクリーニングするために、確認したＣ４５４８細胞及びＰＣ３細胞を、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方によるＣＬＥＣ２Ｄ抗原のモニタリングに供した。実験の前に、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。フローサイトメトリー用の試料調製法は上記のとおりであり、一方、約１～５μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するためのものであった。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。試験試料と参照対照の両方をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した（図９Ｂ）。

非トランスフェクトＣＨＯ細胞上への試験試料上清の結合を推定し、以下の式、

を使用して、Ｃ４５４８細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

顕微鏡実験用に、ＰＣ３細胞を播種し、ウェルあたり２５０μｌの１２μｇ／ｍｌポリＤリジンを加えてから、３７℃で一晩培養した。５００μｌのＤＰＢＳでチャンバーを２回洗浄してから、２℃～８℃で保存した。０．０５％トリプシンを使用して、接着細胞株、例えば、ＰＣ３などをトリプシン処理した。細胞のカウント及び生存能のデータは、トリパンブルー染色を用いた血球計算盤で収集した。実験の前に、２００００細胞／ウェル（ウェルあたり５００μｌの増殖培地を含む）の密度で細胞を播種してから、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で２日間培養した。更に、ＰＣ３細胞を１×ＰＢＳで洗浄してから、ＰＢＳ中の２％ホルムアルデヒド中、ＲＴで５分間固定した。次に、細胞を１×ＰＢＳで２回すすいでから、５％ＢＳＡを用いて、ＲＴで１時間ブロッキングした。

１時間後、希釈試験抗体試料、すなわち、新規かつ固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（２μｇ）及び参照対照としての市販の抗体とＲＴで１時間培養してから、ＰＢＳで少なくとも３回洗浄し、次に、二次抗体であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ及び抗マウスＡｌｅｘａ ４８８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（それぞれ使用可能な場合）（２μｇ）とＲＴで１時間培養した。ＤＡＰＩを使用して細胞核を染色した（１：１０００、ＲＴで５分間）。次に、細胞を１×ＰＢＳで３回すすいで、イメージングを行うまでＰＢＳ中に浸したままにした。１．３５－ＮＡ対物レンズを備えた６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡上で免疫蛍光顕微鏡検査法を実施した。適切な波長（ＤＡＰＩ用にはλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４３０～４７０ｎｍ、Ａｌｅｘａ ４８８用にはλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ）を使用して、処理の１６時間後の細胞をイメージングした。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。ｍＡｂのＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合のばらつきを試験したが、結合データは、＋（低結合）から＋＋＋（高結合）の評価で提供されている（表１９及び図９Ｃ）。表面結合のばらつきが認められたが、結合データは、表２２において、＋（低結合）から＋＋＋（高結合）の評価で提供されている。例示として、ｍＡｂ Ｃ４２５２では表面結合は検出されず、それに対し、抗体Ｃ０６１０では低結合が認められ、それにより、（＋）と評価され、その一方で、その他のクローンは、特異的で、更に有意な表面結合を示した。

上記の基準及び単離抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生物物理学的特性及び機能特性を含む対応する観察結果の全てに基づき、限定するわけではないが、９種の固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体配列、Ｃ５３９７、Ｃ５８５２、Ｃ３５６６、Ｃ２９０１、Ｃ４５７７、Ｃ２６８５、Ｃ０６９４、Ｃ０９９７、Ｃ０８００を安定細胞株の開発用に選択した。

安定細胞株の作製
臨床効果はモノクローナル抗体（ｍＡｂ）製品の商業的成功を推進してきた。他の人々に知られているように、生産されるｍＡｂがヒト形態に生化学的に類似していることから、哺乳動物細胞は現時点において、大規模生産用の好ましい系である。安定細胞株の作製プロセスは、高い生産性、安定した長期発現、及び良好な製品品質を有するクローンが滅多に生じないことから、冗長であり多くの時間を要する。哺乳動物細胞を用いたｍＡｂの作製は、一過性トランスフェクションまたは安定トランスフェクションのいずれかで実施することができる。これまでのセクションから分かるように、一過性トランスフェクションにより、薬物発見の初期段階中に使用するための少量の生成物の比較的迅速な生成が可能となる。しかしながら、安定的にトランスフェクションされた細胞株は、大規模工業生産により広く使用されている。より重要なことに、製造に使用される安定細胞株は、多量の均一な生成物を得るために、単一細胞クローンに由来している。

抗生物質選択：
９０％の細胞生存能のトランスフェクション後に、抗生物質選択を開始した。細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４分間の遠心分離にかけた。ペレットを完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中に再懸濁させてから、ピューロマイシン二塩酸塩の濃度を２μｇ／１×１０＾６細胞に調節した。２日毎または３日毎に抗生物質選択を実施した。細胞のカウント及び生存能のデータについては表５を参照されたい。

安定プールの反復トランスフェクション
Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して細胞カウントを取得した（表１０を参照のこと）。細胞を継代培養してからトランスフェクションを実施した。これまでに言及したように、更に２回の連続的なトランスフェクションを実施した。３ラウンドのトランスフェクションが完了すると、そのプールをＲ３安定プールと呼んだ。表２４を参照されたい。

ミニプールへの播種
系列希釈法によりミニプールを作製した。播種の２日前に、増殖し続けている細胞株培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、０．５百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した（表２５を参照のこと）。

完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した（表２６を参照のこと）。０．５２ｍｌの細胞懸濁液を希釈Ｄから取り出して、２５ｍｌのクローニング培地に加えた。細胞を、１０細胞／ウェルの密度で、ウェルあたり２００μｌ容量の９６ウェルプレート内に播種した。これらのミニプールを、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。

ミニプールのスクリーニング及び増幅：
合計１１７のミニプールをフローサイトメトリーでスクリーニングしてから、ＣＨＯ細胞の表面に発現している抗原への結合を推定した。細胞表面結合に基づいてミニプールを順位付けしたが、フローサイトメトリー用の試料調製法は上記のとおりであり、一方、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質を発現する約２００μｌの細胞培養上清及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ａ）。フローサイトメトリースクリーニングにより同定したミニプール（認められた平均蛍光強度の倍率変化から導かれた結合度合いにより選択された）を９６ウェルプレートから２４ウェルプレートへと増幅させてから、５％ＣＯ_２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。これらのプールを２４ウェルプレートから６ウェルプレートの１つのウェルへと更に増幅させた。細胞がコンフルエントになった後、６ウェルプレートの１つのウェルから２５ｍｌの増殖培地を含むバイオリアクターチューブへとミニプールを増幅させてから、２００ｒｐｍの５％ＣＯ_２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。

単一細胞のクローニング
系列希釈法により単一細胞を作製した。クローニングの１日前に、増殖し続けているミニプール培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、１百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した（表２６を参照のこと）。細胞を、０．５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート内に播種してから、加湿した５％ＣＯ２静置インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。細胞を希釈Ｄから吸引してから、ウェルあたり０．５細胞／２００μｌのクローニング培地の密度で、９６ウェルプレート内に播種した。プレートを、７５％相対湿度の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で培養した。０日目から１０日目までのモノクローナリティレポート作製用にＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用することにより、プレートをスキャンした。０日目、１日目、２日目、３日目、６日目、８日目、及び１０日目に、個々のウェル画像を収集した。全てのウェルの０日目の画像からクローン集団を確認してから、ＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒを用いてモノクローナリティレポートを作製した。継代番号はＰ（ｘ＋０）であった。細胞がコンフルエントになった後、単一細胞クローンを２４ウェルプレートへと増幅させた。継代番号はＰ（ｘ＋１）であった。

単一細胞クローンのスクリーニング及びクローン増幅：
細胞培養上清中の抗体を推定してクローンを順位付けするために、細胞表面結合アッセイを実施した。２日後、ＣＨＯ細胞の表面に発現している抗原への高い結合性を示す単一細胞クローンを２４ウェルから６ウェルへと増幅させた。継代番号は（ｘ＋２）であった。続いて、この単一細胞クローンを６ウェルプレートの３つのウェル内で増幅させた。継代番号は（ｘ＋３）であった。クローンを２０ｍｌ容量のバイオリアクターチューブへと更に増幅させたが、継代番号は（ｘ＋４）であった。増幅後、継代番号（ｘ＋５）のクローン用に、ＲＣＢバイアルを調製した。

フローサイトメトリーにより、安定細胞培養上清の、Ｃ４５４８細胞上のＣＬＥＣ２Ｄ表面タンパク質との結合を推定したが、フローサイトメトリー用の試料調製法及び実験法は上記のとおりであり、一方、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質を発現する約２００μＬの細胞培養上清及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ｂ）。

安定細胞株から発現及び精製したモノクローナル抗体クローンの選択
タンパク質精製用の培養回収液：
細胞を、約０．３×１０^６細胞／ｍｌの密度で、３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地内に播種してから、１２０ＲＰＭ回転の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件で、６日間培養した。４日目に、２０ｍｌの培地を完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地に継ぎ足した。全ての細胞懸濁液を２０００ＲＰＭ、１０分間の遠心分離にかけることにより、細胞を回収した。上清を回収してから、更なる精製用に－２０℃で保存した。これ以降、新規の固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子を含有する全ての対応する安定細胞クローンをＣ××××と呼ぶが、××××は４桁の数を表す（表１９）。それぞれのコードは、他の箇所において特に言及しない限り、特定の抗体遺伝子を含有する特定の安定細胞株を表す。

続いて、約２２１の固有かつ確認された安定細胞クローンの培養上清を、プロテインＡによる精製に供してから、純度、力価に例示されるがなおもこれらに限定されないパラメータに対する合理的な判定を実施した。加えて、サーマルシフトアッセイ（ＴＳＡ）による熱安定性推定を、選択／スクリーニングに対する追加のパラメータとして組み込んだ。

より高い融解温度をより安定したタンパク質の特性とみなした一方で、６５℃未満の融解温度を有するタンパク質については、更なる開発用には含ませないことを決定した。ＴＳＡ実験は、タンパク質試料を、１×ＰＢＳを用いて０．５ｍｇ／ｍｌ濃度に適切に希釈することにより開始したが、５×の終濃度となるように、ＳＹＰＲＯ－ＯＲＡＮＧＥ蛍光色素（５０００×）を標的タンパク質に加えた。更に、混合液を５００ＲＰＭ、２分間の遠心分離にかけてから、ＣＦＸ９６ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍを用いて解析を行った。２５℃から９５℃まで１分間あたり０．５℃の速度で温度を上昇させることによって、熱変性を実施した。０．５℃の間隔で蛍光強度を収集し、ＣＦＸ Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェアを用いて解析を行い、融解曲線からＴｍ値を計算した。

フロー及び／イメージング：
加えて、それぞれの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質はまた、フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による細胞表面結合アッセイで評価した。フローサイトメトリー試験及び共焦点顕微鏡試験を組み込むことの背後にある根本的理由は、組み合わせ順位付けマトリックスにより抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンの包括的なリストを得ることであった。

フローサイトメトリー用の試料調製法を含む実験は上記のとおりであり、一方、約１～５μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質及び参照陽性対照はそれぞれ、非トランスフェクトＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞上への、膜に発現しているＣＬＥＣ２Ｄの結合を推定するために使用された（図１０Ｃ）。

共焦点顕微鏡を介した画像収集のための試料調製法を含む実験は上記のとおりであり、一方、約２μｇの精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体タンパク質、例えば、限定するわけではないが、Ｃ５８４８、Ｃ８４０８、Ｃ７８３２、Ｃ８８００、Ｃ５５９５、Ｃ０６９４など、及び参照陽性対照はそれぞれ、ＰＣ３細胞上への膜結合ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の結合をモニターするために使用された。安定細胞クローンから精製した抗ＣＬＥＣ２Ｄのイメージング試験によって観察されたとおり、Ｃ５８４８、Ｃ８４０８、Ｃ８８００、Ｃ５５９５、Ｃ７８３２に限定されない抗ＣＬＥＣ２Ｄは、ＰＣ３細胞の表面上への均一でなおも特異的なＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合を示す（図１０Ｄ）。

安定細胞クローン内における抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子の安定性を評価／理解するために、ＲＴ ＰＣＲによる定量的測定を採用したが、ＣＨＯ細胞ゲノムへと安定的に導入された抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子の増幅は、モニター及び推定され得る。ＣＨＯ細胞は、６０世代（Ｐ０１が１番目の継代に相当する一方で、Ｐ１８は最後の６０番目の世代に相当する）のそれぞれのクローンの継続的な継代培養の一部として全ての継代から得た。ここで、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）は、製造業者のプロトコル（プロテイナーゼＫ処理を伴う培養細胞用のプロトコル）に従いＤＮｅａｓｙ（登録商標）Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅキット（ＱＩＡＧＥＮ ＧｍｂＨ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、細胞ペレットから単離した。ｇＤＮＡ試料の濃度及び純度は、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＢｉｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）Ｄ３０（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して分光光度的に解析した。単離ｇＤＮＡを１００ｎｇ／μＬの濃度に希釈してから、ｑＰＣＲ用にＢＤ Ｕｌｔｒａ－Ｆｉｎｅ（商標）Ｎｅｅｄｌｅ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｓｙｒｉｎｇｅｓ（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を通過させた。Ｃｔ値を定量するために、設計されたプライマーを使用して、９６ウェル薄壁Ｈａｒｄ－Ｓｈｅｌｌ ＰＣＲプレート及びＭｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）‘Ｂ’密封フィルム封止材（全てＢｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ製）を備えたＣＦＸ９６（商標）Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅシステム上で、ｑＰＣＲを実施した。それぞれの試料につき３回、それぞれのｑＰＣＲランを実施した。ＧＡＰＤＨを相対的対照として使用し、それぞれのｑＰＣＲランに鋳型なし対照（ＮＴＣ）を含ませた。それぞれの反応用混合液は、１２．５μＬのＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｂｙ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｗｏｏｌｓｔｏｎ Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）、１０ｐｍｏｌのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａで合成された）、及び、水、ＨＰＬＣで２５μＬの最終容量に調節した１００ｎｇの溶解ｇＤＮＡ（ＨｉＭｅｄｉａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｕｍｂａｉ，Ｉｎｄｉａ）を含有していた。ｑＰＣＲランは、９５℃、１０分間の初期変性工程に続く、４０サイクルの、９５℃、１５秒間の変性、及び６０℃、６０秒間のアニーリングの２工程プロトコルで実施した。ベースライン差分設定を用いたＢｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒ（商標）ソフトウェアアプリケーションバージョン３．１．１５１７．０８２３（ＢｉｏＲａｄ）で生データを処理して、Ｃｑ（サイクル定量）値を得た。

Ｃ５５１１、Ｃ４６０８に例示される全てのクローンに、記載した定量的アプローチを採用した。試験から得たデータを図１０Ｅに示している。図１０Ｅは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体遺伝子がＣＨＯ細胞ゲノムへと安定的に導入されて少なくとも６０世代にわたり維持されたことを裏付ける、全ての継代番号にわたる対応する抗体鎖のＣｔ値における＜５％の有意ではないばらつきを示している。

組み合わせマトリックスを考慮して、安定細胞株の数を、Ｃ４６０８、Ｃ７７２０、Ｃ５０９３、Ｃ３４５２、Ｃ９１３６、Ｃ３６４１、Ｃ５３７２、Ｃ６４８１、Ｃ５５１１、Ｃ６７２６、Ｃ５３９２に例示される１１のクローンに選択した。これ以降、大規模生産面及び機能特性、例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が駆動する細胞傷害などに対する理解を、更なる開発用の最終クローンの選択に採り入れた。

クローン選択のプロセスにとって、強力、繰り返し可能であり、品質が安定したタンパク質を生産する方法を有することは不可欠であった。それゆえ、クローンのスクリーニングを開始する前に、効率的なクローンのスクリーニングを確保するためのプラットフォームプロセスを開発した。基本培地としてのＡｃｔｉＰｒｏ、及び添加基質としてのｃｅｌｌ ｂｏｏｓｔ ７ａ及びｃｅｌｌ ｂｏｏｓｔ ７ｂを使用して、流加培養プロセスを開発した。添加基質の間隔及び量を実験で最適化し、最適化したプロセスを繰り返してロバスト性を確立した。流加プロセスを更に、パフォーマンス上位のクローンを単離するためのクローンのスクリーニングに適用した。パフォーマンス上位のクローンを単離した後、最適化した流加培養プロセスを使用して、１０Ｌバイオリアクター内で細胞を培養することにより、クローンを確認した。この工程は、より大規模なものへと移行した場合の選択クローンの製造性を確保するために実施した。

様々な基本培地と比較した履歴データに基づいて、プラットフォームプロセスを開発するための基本培地としてＡｃｔｉＰｒｏ培地を選択した。ＡｃｔｉＰｒｏに４ｍＭのグルタミンを補足して、確実に、細胞の代謝条件が満たされるようにした。

よりパフォーマンスの良いものを理解、順位付け、及び選択するために、複数種のモノクローナル細胞株を評価した。生存細胞密度、生存能、力価に関して得られた結果に基づいて、Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ３４５２、Ｃ５３９２、Ｃ６４８１を、全てのパフォーマンスパラメータの観点から最もパフォーマンスの良いものであると評価した。

様々な前立腺癌細胞株：ＰＣ３上における表面抗原発現
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を発現する腫瘍細胞をトリプシン処理により回収した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。Ｃ５５１１に例示される１μｇの試験試料、対照をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを１：１００の希釈で対照として使用した。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

試験試料の結合を推定し、以下の式、

を使用して、腫瘍細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１、Ｃ２４３８、Ｃ３４５２、Ｃ０９４９抗体に例示されるがこれらに限定されないフローサイトメトリー実験により観察された、ＰＣ３表面結合のＭＦＩの倍率変化が、対照と比較した際に２倍超上昇することが判明した（図１１Ａ）。

更に、表面結合は、実施例５、セクション：細胞表面結合アッセイ（フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡による）に記載のとおりに、共焦点顕微鏡を介したＰＣ３細胞の表面上への抗体の結合による、ＰＣ３の表面上における様々な固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体安定クローンによるものであった。図１１Ａに示すように、ＰＣ３の表面上における精製新規抗ＣＬＥＣ２Ｄの均一に分布したＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合が、ＰＣ３細胞上の新規抗体により観察された。

細胞傷害アッセイ：フローサイトメトリー及びイメージング法による
抗ＣＬＥＣ２Ｄの機能活性を評価するために、フローサイトメトリー法と共焦点顕微鏡法の両方を採用し、ＰＢＭＣを単離して、標的細胞及び抗ＣＬＥＣ２Ｄと培養する、細胞傷害アッセイを実施した。このアッセイの前に、ｍＡｂ濃度及び理想的なＴ：Ｅ比率に対する最適化を実施した。

従来のプロトコル（Ｊｅｗｅｔｔ Ａ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９６）に従い、健康ドナーからエフェクター細胞、ＰＢＭＣを単離した。要約すると、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Ｓｉｇｍａ）遠心分離後に末梢血リンパ球を得た。１：２希釈の血液を１５ｍＬのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ上に層状に重ねた。全ての試薬を室温に維持した。ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ及び血液を含有するチューブを、室温、加速及びブレーキなし、４００ｇ、３０分間の遠心分離にかけた。遠心分離後、単核球を含有する０．５ｃｍの不透明な境界面まで上層を慎重に吸引して、上層を廃棄した。不透明な境界面を遠心チューブへと慎重に移した。１０～１５ｍＬの１×ＰＢＳを加えて２５０ｇ、１０分間実施することにより、細胞を２回洗浄した。ペレットを２ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁させてから、ＰＢＭＣカウントを実施した。１０ｍＬの血液から合計１０百万のＰＢＭＣを得た。ＣＤ４５＋集団９９％のフローサイトメトリーに基づいて、ＰＢＭＣの品質確認を実施した。ＮＫ単離キット（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）を使用した陰性選択によりＮＫ細胞を単離した。フローサイトメトリーのＣＤ５６＋集団に基づき、ＮＫ細胞の純度が＞９０％であることが判明した。

製造業者のプロトコルに従い標的前立腺癌細胞株ＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加えた。Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、Ｃ３４５２、及びＣ４６０８に限定されない新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に約２００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

フローサイトメトリーによる二重標的細胞染色で細胞傷害を解析した。図１１Ｂは、対照と比較して認められた、３種の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体Ｃ５５１１（約４１％）、Ｃ４６０８（約３２％）、及びＣ６４８１（約３７％）の細胞傷害を示しており、細胞死率は、処理を行うことなく１：５比率で共に培養した、ドナー１から単離したＰＢＭＣ、及び標的細胞から測定した。類似した条件に従い、ドナー２についてＣ５３９２クローン及びＣ３４５２クローンを試験したが、細胞傷害はそれぞれ、約１４％及び約２８％であることが判明した（図１１Ｂ）。抗ＣＬＥＣ２Ｄ濃度が５０μｇ／ｍｌから２００μｇ／ｍｌへと上昇した際に標的細胞の８０％超の細胞傷害が認められ（図１１Ｃ）、Ｔ：Ｅ比率が１：５から１：１０へと上昇した際に腫瘍細胞殺傷の有意な上昇もまたモニターされた（図１１Ｄ）。

共焦点顕微鏡実験用に、８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。新たに単離したＰＢＭＣ細胞を培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）中に一晩置いてから、休止ＰＢＭＣ細胞として細胞傷害に使用した。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素（１００ｎＭ）で染色し、ＰＢＭＣ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０（１０μＭ）で染色した。異なる濃度の新規抗体を染色したＰＣ３細胞及びＰＢＭＣ細胞と共に６～７時間培養してから、６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡、１．３５－ＮＡ対物レンズを使用して、画像を取得した。死色素ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ（５μＭ）用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６４０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍのレーザー光線を使用した。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害アッセイ用の、新規ｍＡｂの最適な濃度を同定するために、標的：エフェクター細胞の比率（１：５）及び３つの異なる濃度（すなわち、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、及び５０μｇ／ｍｌ）の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体（Ｃ６７２６）を使用して、完全培地中で６～７時間培養した。ＰＣ３細胞上における緑色蛍光の消失及び紫色蛍光の出現により、細胞死をモニターした。最大細胞傷害は５０μｇ／ｍｌで認められた（図１１Ｅ）。更に、試験したその他の抗体クローン、限定するわけではないがＣ６７２６、Ｃ４６０８、Ｃ５８４８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１クローンについて、同一の培養タイミングで５０μｇ／ｍｌの濃度を使用してエンドポイント細胞死アッセイを続けたが（図１１Ｆ）、新規抗体の存在下において標的細胞の死滅が認められた一方で標的細胞を新規抗体で処理しない場合には細胞死はモニターされなかったことが示された。

上記の利用可能なデータに基づいて、Ｃ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、及びＣ３４５２クローンを最終ｉｎ ｖｉｖｏマウス効果実験用に選択した。

治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の開発中において、臨床で成功する見込みの最も高い候補抗体を早期に同定するための戦略は、不十分な曝露、毒性、または効果の欠如と関連する費用がかかる後期の失敗を回避するために求められている。ｍＡｂの早期のスクリーニング及び最適化では、リード構築物を選択するための特性、例えば、親和性、力価、及び安定性などに焦点をあてるが、その一方で、開発後期に特性決定される、少数のリードｍＡｂ構築物に関するｉｎ ｖｉｖｏ効果の確認は一般的に必要とされる。ここで、確認した抗ＣＬＥＣ２ＤクローンＣ４６０８、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ５３９２、及びＣ３４５２を、前立腺癌異種移植片に対するｉｎ ｖｉｖｏ効果の評価に供した。

実施例６：新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子の作用機序を解読する
阻害経路及び刺激経路からなる免疫チェックポイントは、自己寛容を維持し、免疫応答を補助する。がんにおいて、免疫チェックポイント経路は多くの場合、初期の抗腫瘍免疫応答を阻害するために活性化されている。免疫チェックポイント療法薬は、これらの経路を遮断または刺激することにより作用し、腫瘍に対する体の免疫学的活性を向上させる。正常な状況下では、免疫チェックポイントは、感染及び悪性腫瘍に対して免疫系を応答させつつ、この作用に由来し得る任意の害から組織を保護する。しかしながら、悪性細胞による、これら免疫チェックポイントタンパク質のうちの一部の発現は、抗腫瘍免疫を調節不全にし、がん細胞の成長及び増殖を促進させる。複数のアプローチを介して、免疫療法薬の作用機序、とりわけ、モノクローナル抗体ベースの療法薬による作用機序を理解することは、単独または組み合わせにかかわらず、腫瘍細胞殺傷に好都合となるように作用する特定の方法を更に再活性化させ得る。

本開示では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験により理解することができる抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のメカニズムは一般的に、分子相互作用レベル、例えば、ＣＬＥＣ２Ｄ標的依存、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１間相互作用など、細胞ネットワークレベル、例えば、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無における、腫瘍細胞の殺傷における様々なエフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞の関与など、で生じる現象、または、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のアイソタイプによって駆動される特定のメカニズム、例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはこれらの組み合わせなど、サイトカイン／ケモカインレベルもしくは様々な活性化／阻害受容体の発現またはこれらの組み合わせの上昇により誘導される腫瘍細胞の死滅、及びｉｎ ｖｉｖｏ実験によるもの、で構成され、腫瘍退縮はリンパ球浸潤により生じた。

更に、抗体の機能及び標的分子がより多様であることから、標的分子がどのように生物学的に作用するか、及び何が抗体により誘導された改変作用に対する生物学的反応であるのかを理解することは、ますます必要になってきている。これに言及すると、作用機序に対する理解は、前立腺癌治療、とりわけ、去勢抵抗性前立腺癌に非常に重きを置いており、新規免疫療法戦略による、あらゆる範囲の複数の疾患適応症に対する道筋をつけるものである。これに言及すると、合理的なアプローチ／階層化を徹底的に採用することにより、より適切に理解された免疫学をがん療法に着実に導入することが確保されるようになり、全体的な治療情勢の発展に劇的に影響を及ぼすことになる。

フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡を用いて、細胞傷害に関与する特定の細胞型を調査したが、顕微鏡ベースのアプローチには、エンドポイントアッセイ法と生細胞イメージング法の両方があった。

ＮＫ細胞介在性細胞傷害
製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＮＫ細胞を１：１のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。予め標識した標的腫瘍細胞株及び抗ＣＬＥＣ２Ｄと１４時間共培養した新たに単離したＮＫ細胞を使用することにより、ＮＫ細胞介在性細胞傷害（ＮＫＣＣ）を測定した。アッセイ試料を死細胞色素ｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎと培養してから、フローサイトメトリーで蛍光を測定した。推定したとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、細胞傷害アッセイにおいて８０％超の細胞死を示した（図１２Ａ）。

固定細胞イメージングと生細胞イメージングの両方を用いてＮＫ細胞介在性細胞傷害の影響を理解するために、更に、共焦点顕微鏡ベースのアプローチを採用した。

８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。ＮＫ細胞を上記のとおりに単離した。新たに単離したＮＫ細胞を１０％ＲＰＭＩ培地中に一晩置いてから、休止ＮＫ細胞として細胞傷害に使用した。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素で染色し、ＮＫ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０で染色した。異なる比率のＮＫ細胞：標的細胞（１：０．５、１：５、１：１０）を、Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１に限定されない５０μｇ／ｍｌの新規抗体と共に使用して、６～７時間培養してから、６０×倍率のＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ３０００－４レーザー走査共焦点顕微鏡、１．３５－ＮＡ対物レンズを使用して、画像を取得した。死色素ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６４０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍのレーザー光線を使用した。Ｆｉｊｉ ＩｍａｇｅＪソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害に対するＮＫ細胞の役割を調査するために、本発明者らは、固定濃度の新規抗体と共に、ＰＣ３を異なる比率のＮＫ細胞と６～７時間培養した。本発明者らは、試験した全ての抗体（Ｃ５５１１、Ｃ４６０８、Ｃ６４８１）について、Ｅ：Ｔの比率が上昇するにつれて細胞死が増加することを観察したが、図１２Ｂ、図１２Ｃ、及び図１２Ｄに示すとおり、１：１０のＴ：Ｅ比率が最も多い細胞死を示した。

Ｔ細胞介在性細胞傷害
製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。新たに単離したＴ細胞を、１：３のＴ：Ｅ及び１００ｕｇ／ｍｌの抗体濃度の細胞傷害アッセイに使用した。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１及びＣ６４８１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００ｕｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１３は、ＰＣ３細胞に対して観察されたＴ細胞介在性殺傷を示しているが、クローンＣ５５１１及びＣ６４８１は１００μｇ／ｍｌの濃度で培養され、６％死細胞の基底レベルを示す対照と比較した際に、腫瘍細胞の細胞傷害を誘導した。１：３のＴ：Ｅを使用する実験条件では、最大５５％のＴ細胞介在性細胞傷害が認められた（図１３）。

細胞傷害のプロセスを更に定義するために、ＰＢＭＣとＮＫ細胞の両方のエフェクター細胞による標的細胞殺傷を追跡するための生細胞顕微鏡実験を実施した。生細胞イメージング実験用に、８ウェルスライド（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上の完全培地（２０％ＦＢＳ＋ＤＭＥＭ－Ｆ１２＋１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）中で、ＰＣ３細胞を７０～８０％のコンフルエンスに増殖させた。別々に、ＰＣ３細胞を細胞追跡色素で染色し、ＰＢＭＣ／ＮＫ細胞を細胞増殖色素ＥＦ６７０で染色した。２００μｇ／ｍｌの新規抗体を、染色したＰＣ３細胞及びＰＢＭＣ／ＮＫ細胞に加えた。ＰＢＭＣとＮＫ細胞の両方における標的：エフェクターの比率はそれぞれ、１：５及び１：１であった。細胞は、イメージング中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した加湿器内に保管した。６３×倍率、１．４－ＮＡ対物レンズのＺｅｉｓｓ ＬＳＭ８００共焦点顕微鏡上で生細胞イメージングを実施し、適切な波長（ｓｙｔｏｘ ｂｌｕｅ用にλｅｘ４０５ｎｍ及びλｅｍ４５０～５００ｎｍ、細胞追跡ｇｒｅｅｎ用にλｅｘ４８８ｎｍ及びλｅｍ５１０～５３０ｎｍ、細胞増殖色素ＥＦ６７０用にλｅｘ６３０ｎｍ及びλｅｍ６５０～７５０ｎｍ）を使用することにより、８分間の間隔で最長２０時間にわたり画像を取得した。Ｚｅｎ ｌｉｔｅ Ｉｍａｇｉｎｇソフトウェアで画像を解析した。

細胞傷害のプロセスを更に定義するために、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞のいずれかのエフェクター細胞による標的細胞殺傷を追跡するための生細胞顕微鏡検査法を実施した。

生細胞イメージングの目的は、制御された実験条件下において時間依存的な方法で、エフェクター細胞、例えば、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞などの存在下における抗ＣＬＥＣ２Ｄ介在性腫瘍細胞殺傷プロセスを理解及び追跡することであった。生細胞イメージングから得た結果は、アイソタイプ対照の存在下において、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞がＰＣ３標的細胞とほとんど直接接触しないことによりわずかなパーセンテージの標的細胞死がもたらされるという事実を暗示した。これに対して、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞及び標的細胞に抗ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｃ５５１１）抗体を加えると、ＰＢＭＣまたはＮＫ細胞の両方とＰＣ３標的細胞の間の直接接触の度合いが上昇することになり、有意な標的細胞死がもたらされる。興味深いことに、ＮＫ細胞の存在下において抗ＣＬＥＣ２Ｄ（Ｃ５５１１）抗体が介在するＰＣ３標的細胞殺傷は、より効率的な腫瘍細胞の排除を誘導し、腫瘍細胞の溶解の大部分は培養の１０時間以内に生じたが、その一方で、ＰＢＭＣの存在下において認められた腫瘍細胞死は、上記の時点内において有意により少ないことが判明した。このことは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を介したＰＣ３腫瘍細胞の効果的な排除が主にＮＫ細胞介在性であることを示している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＣＬＥＣ２Ｄ抗原の間の分子相互作用：エピトープマッピングによる
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ試験
ＣＬＥＣ２Ｄ－抗体複合体によって形成された結合部位を同定するために、以下のプロトコルを開発した。要約すると、方法は、抗体とＣＬＥＣ２Ｄの両方のタンパク質構造体を形状相補性ベースのドッキングに使用してＣＬＥＣ２Ｄ－抗体構造体を作製してから、その構造体を解析して、結合部位を確認するための変異を最終候補リストに載せることを含む。（Ｇｅｒｍａｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｒｏｚｂｅｓｋｙ ｅｔ ａｌ，２０１５）。

このプロトコルの主要な仮定のうちの１つは、潜在的な結合部位（すなわち、適切な結合パートナーが嵌合可能となり得る溝またはチャネル）が結合パートナーをより収容するはずであるということであり、特定の鍵穴（すなわち結合部位）が特定の鍵（すなわち結合パートナー）をそれらの構造適合性に基づいて受容し得る、酵素と基質の鍵と鍵穴モデルにより幾分説明される。このコンセプトを発展させて、形状ベースのドッキングに従い結合部位を同定したが、作製した構造体の最高密度は、推定される結合部位であるとみなされた。

次に、相互作用残基ペアに基づいて構造体を共にクラスター化させたが、クラスターに編入できなかった構造体については、残りの構造体がエネルギーの最小化を実施されて実行可能性でスクリーニングされた後に廃棄した。実行可能であることが判明した構造体について、それらの相互作用残基ペアをより詳細に精査すると、結合を試験するための変異が示唆された。

キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＮＫＲ－Ｐ１）は、ＮＫ細胞介在性細胞傷害を調節する阻害受容体である。Ｃ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）はＮＫＲ－Ｐ１のリガンドであり、ＣＬＥＣ２Ｄ／ＣＤ１６１相互作用はＮＫ細胞介在性細胞傷害を阻害し、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１複合体を遮断することにより、初代ＮＫ細胞の活性を増強させることができる。

新規ライブラリに由来する全ての固有の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、ＣＬＥＣ２Ｄと結合することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１結合を防止することが判明したが、この阻害の正確な位置及び性質は未知であった。以下のプロトコルは、モデリング、ドッキング、及び部位特異的変異誘発を使用することによって、結合部位の見込みを判定すると考えられた。

方法は、ＣＬＥＣ２Ｄ上の重要な相互作用残基を同定することから開始するが、ＣＬＥＣ２Ｄ－抗体複合体の相互作用は、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）複合体を接近して観察することによって理解することができ、５ＭＧＴとしてＰＤＢに寄託された複合体の結晶構造（図１５Ａ）を調査することによって実施した。

５ＭＧＴ結晶構造は、ＣＬＥＣ２Ｄ－ＮＫＲ－Ｐ１複合体間の結合を示している。結合に関与する残基は目的の残基である。抗体－ＣＬＥＣ２Ｄ複合体の阻害様式が立体構造種のものである場合、両方の相互作用に関与する残基及びそれら残基に直に隣接している残基は重複している可能性があり得る。ＣＬＥＣ２Ｄ鎖に含まれる残基（以後、抗原相互作用残基と呼ぶ）は、キメラの５ＭＧＴ構造体（図１５Ｂ）（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２００４）を調査することによって同定された。ＣＬＥＣ２Ｄ鎖とＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）鎖の間の接触距離（最長６Å）内における実質的に全ての残基を同定した（表２８を参照のこと）。

これらの抗原相互作用残基は、ＮＫＲ－Ｐ１（ＣＤ１６１）－ＣＬＥＣ２Ｄ複合体において非常に重要な役割を果たすことが知られており、それにより、以下の構造体解析における「重要な」残基とみなされ得た。

抗体構造物の構築
ホモロジーモデリングプログラムＭＯＤＥＬＬＥＲを使用することによって、１４種の抗体のモデルを作製した。作製したモデルは、主な目的のエリアであることから抗体の可変領域に限定されていた。抗体の完全可変領域の構造についてＰＤＢを解析した。固有の抗体可変領域配列のそれぞれを利用可能な構造体の配列にアラインして、それぞれの抗体配列に最もマッチするものを、そこから抗体モデルを構築する鋳型として使用した。それぞれの配列について複数種のモデルを作製してから、最もエネルギー効率のよい構造を抗体用の主なモデルとして選択した（図１５Ｃ）。

抗体は、その超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）ループの外側及び抗体の２つの分子鎖上の６つのＣＤＲ（重鎖及び軽鎖のそれぞれにある３つ）において極めて十分に保存されており、重鎖上のＣＤＲ３ループは、最も大きくかつ相互作用の確立に最も影響を及ぼすものであることが知られており、この領域に加えて軽鎖ＣＤＲ３に、数ラウンドのＭＯＤＥＬＬＥＲ’ｓ Ｌｏｏｐ Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔを実施して、ＣＤＲループの点において最もエネルギー効率のよい構造を作製した。もう１度、主なモデルの複数種のバリアントを作製してから、最もエネルギー効率のよい１点を精製抗体モデルとして前に進めた。

ＣＬＥＣ２Ｄ上への抗体のドッキング
ＰＤＢからＣＬＥＣ２Ｄモデル（４ＱＫＩとして寄託されている、ＣＬＥＣ２Ｄ鎖の二量体）を取得した。相互作用の正確な位置は知られていないが、分子ドッキングを使用して、可能性のある相互作用様式を調査するための複合体の構造体を作製した。使用したプログラムは、構造的可能性に基づいて全ての可能性のある相互作用様式を入れ替える形状相補性ドッキングプログラムであるＰａｔｃｈＤｏｃｋであった。（Ｓｃｈｎｅｉｄｍａｎ－Ｄｕｈｏｖｎｙ ｅｔ ａｌ，２００５）。

ＰａｔｃｈＤｏｃｋ’ｓ Ｈｉｇｈ Ａｃｃｕｒａｃｙ Ｍｏｄｅを４Åのクラスター距離（存在する構造体のうちの４Å内の構造体が作製されるのを防止する）で使用して、精製抗体可変領域構造体と抗原ＣＬＥＣ２Ｄ（ＰＤＢ：４ＱＫＩ）の間のドッキングを実施した。抗原構造のみに制約を課して、軽鎖及び重鎖に由来する両方のＣＤＲ３ループを特定した。

ＰａｔｃｈＤｏｃｋを用いて、提供した抗体のそれぞれに対する数種類のドッキング構造体を作製した。（表２９を参照のこと）。

構造体の解析
ドッキングした構造体を作製した後、その相互作用残基を解析した。

自社スクリプトを使用して複合体構造を検索し、互いに４Åの最長距離にある、異なる分子鎖に由来する関与物質を含む全ての残基ペアを同定した。これらの残基ペアをリストにまとめたが、表３０及び表３１は、このようなリストに由来するこのような少しの系統を示しており、その後、構造体をクラスター化するために使用した。

構造体のクラスター化及び実行可能性の評価
重複する接点に基づいて構造体をクラスター化したが、残基ペアの少なくとも７５％が共通している場合に、構造体を共にクラスター化した。クラスターに編入されなかった構造体を廃棄した。

残りの構造体について、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｚ Ｓｃｏｒｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＰＩＺＳＡ）ツールを使用して非結合構造体を取り除く次のフィルタリング工程の前に、全ての複合体に対するエネルギーの最小化を実施した。ＰＩＺＳＡを用いて、タンパク質複合体を取り込み、残基の原子に適用した距離閾値に基づいて全ての可能性のある残基相互作用を同定した。それを同定した後、全ての接触ペアを評価して、構成要素結合をスコア付けし、同定された結合が安定した結合をもたらし得るかどうか、複合体が実行可能であるかまたはそうでないかを確認するために最終的に使用する累積スコアを蓄積させた。（Ｒｏｙ ｅｔ ａｌ，２０１９）（この実行可能性は、同定した接触ペアの組成及び組み合わせに基づいている）。実行可能であると同定された構造体は、残った唯一の構造体であった。（表３２を参照のこと）。

これらの減少したクラスターは、いくつかの厳重にグループ分けされた構造体で構成され、その全ては、ＣＬＥＣ２Ｄ鎖との重複結合を形成していた。

これらのクラスター形成は、可能性のある結合部位位置とみなされ、それぞれの部位の確認の実施が必要であった（図１５Ｄ、図１５Ｅ、図１５Ｆ、及び図１５Ｇ）。

変異の解析
調査するための少数の実行可能な構造体を最終候補リストに載せた後、変異解析を実施した。ＰＩＺＳＡはまた、同定した接触ペアを選んでそれぞれの関与残基を別の１９の天然アミノ酸に置換する特徴を有しており、その置換における構造体の総合的なスコアに対する影響を確認した。影響値は、特定の残基が別の残基に置換された場合に複合体が経験し得る安定性低下の指標であり得る。強い結合を形成する、複合体にとって重要な残基は、それらの位置を変異させることが複合体を弱体化または不安定化させ得ることから、高影響値を有し得る。この情報を利用して、どの残基ペア変異が複合体全体を最も不安定化させ得るかを判定した。構造体が既にクラスター化されていることから、全てのメンバーのクラスターにおいて一般的な、変異に対する約３～４の高影響残基ペアを同定することにより、全てのクラスターを評価することができた。ここで、以下のパラメータ、例えば、同一抗体における同一クラスター内の相互作用において特定の残基が観察される総回数を示す同一クラスターカウント、同一抗体における同一クラスター内の相互作用において特定の残基が観察される比例回数を示す同一クラスター比例、同一クラスター内で複数回確認され得る同一抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される総回数を意味する同一抗体、別のクラスター発生カウント、同一クラスター内で複数例捕捉されるが１回だけカウントされる同一抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される構造体の総数を示す同一抗体、別のクラスターカウント、別の抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される総回数を示す別の抗体、別のクラスター発生カウント、別の抗体における全てのクラスター間の相互作用において特定の残基が観察される構造体の総数（同一クラスター内における複数例は１回だけカウントされる）を示す別の抗体、別のクラスターカウント、などに基づいて、重要な検討を行った。まとめると、このアプローチはその結果として、対応する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対するＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画をもたらした。類似した方法を全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に然るべく同様に採用した。

どのクラスターが真の結合部位を示しているかを確認するために、一連の変異が重要な残基であると示唆され得た。多い数のクラスターに起因して、複数のクラスターを同時に試験可能な変異を同定することは有利であった。この同定を達成するために、全ての単一抗体のクラスターについて同定した全ての残基を解析した。アイデアは、複数のクラスターを組み合わせにし得、それらクラスターの潜在的な結合様式の全てに重大な役割を果たす残基を、多くの構造体を同時に試験するための変異と示唆することであった。重複している有意に関与する残基（それぞれのクラスターの上位３つの比率で発生している残基）を調査することにより、これらの組み合わせを同定した。クラスターが複数の有意に関与する残基を共有している場合、それらクラスターを可能性のある組み合わせとみなした。本明細書で例示しているとおり、Ｃ４６０８及びＣ５５１１において変異が示唆された。これらの抗体はそれぞれ、２１のクラスター及び７のクラスターを有しており、これらのクラスターをクラスター化するために、全てのこれらのクラスターに由来する代表的な残基を解析した。有意に発生している残基の代表的な重複の調査により、Ｃ４６０８におけるＧ００００１－Ｇ００００４－Ｇ００００７－Ｇ０００１０－Ｇ０００１５、Ｇ０００１２－Ｇ０００１４－Ｇ０００１６－Ｇ０００１７－Ｇ０００１８－Ｇ０００２１－Ｇ０００２６、Ｇ００００５－Ｇ００００８－Ｇ０００２０－Ｇ０００２２－Ｇ０００３１、及びＧ０００１１－Ｇ０００１２－Ｇ０００１４－Ｇ０００１８の可能性のある組み合わせ、及びＣ５５１１におけるＧ００００１－Ｇ００００５－Ｇ０００１１－Ｇ０００１９－Ｇ０００２０のＧ０００１５及びＧ０００１７それら自体との可能性のある組み合わせが示唆された。全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に上記の戦略を採用した。

どの残基がクラスターの組み合わせに役割を果たしているかを確認するために、２～１３のクラスター（利用可能な最初のクラスターの総数によって決まる）で変化する長さの全ての可能性のある組み合わせを作製した。全ての組み合わせについて、全ての関与する残基に加えてそれら残基の影響値を同定した。組み合わせのメンバーの全てまたは大部分（最大で２つのメンバーを欠く）に含まれる残基が維持された一方で、組み合わせ内におけるクラスターの一部においてのみ役割を果たす残基は検討から除外され、多く発生している残基のリストのみが残された。

残基の重複に基づいて好ましい組み合わせが同定されると、その組み合わせにおいて多く発生している残基を精査し、高影響値を有することが観察された残基を変異選択肢として前に進めた（図１６Ｅ及び図１６Ｇ）。

全てのそれらの検討後に実施された選択は、以下の特性、（ａ）荷電残基または極性残基であること（とはいえ、このような残基が観察されなかった場合、相互作用に対する残基の影響に基づいて別の残基が選択された）、（ｂ）組み合わせのクラスターの全てまたは大部分に含まれていること、（ｃ）潜在的な結合様式に対して有意性を有していること、及び（ｄ）抗原相互作用残基を含んでいること、の全てを有し得た。

Ｃ４６０８によって例示されているとおり、上記の戦略を採用したが、以下の組み合わせの残基は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原との相互作用に関与していると考えられている。類似した方法を全ての抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に然るべく同様に採用した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄバリアントとしての構築物の作製
アミノ酸（組み合わせまたは単独）を、ＣＤ１６１相互作用点と重複するまたは重複しないのいずれかとした後、新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン用のエピトープをマッピングするためのＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントとして作製した。部位特異的変異誘発または遺伝子合成のいずれかにより、構築物を作製した。全ての構築物は、スクリーニングに使用する可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と同様に、更なる精製を容易とするためのＣ末端ヒスチジンタグを有していた。観察されたｉｎ ｓｉｌｉｃｏ変異影響がアミノ酸アラニンにおいて最大となると考えられたことから、全ての可能性のある位置をアミノ酸アラニンに変化させた。表３５は、変異を導入したＣＬＥＣ２Ｄ可溶性抗原内の位置について記載している。

本明細書で例示しているとおり、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいて合成された、未修飾ヌクレオチド配列に隣接した所望の変異を含有する２つの相補的オリゴヌクレオチドを合成することを用いたＰＣＲにより、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキットを使用して、部位特異的変異誘発を実施した。０．２ μＭのそれぞれのプライマー（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ，Ｉｎｄｉａ）、１．５μＬのＱｕｉｃｋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ、１μＬのＱｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ ＸＬ ｄＮＴＰ ｍｉｘ、２．５μＬの１０× ｑｕｉｃｋ ｃｈａｎｇｅ ｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒからなる容量を入れたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ（商標）Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ（商標）ｐｒｏ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ上で、ＰＣＲを実施した。１５ｎｇの鋳型ＤＮＡもまた含有していた。９５℃、２分間の初期変性に続いて、１８サイクルの、９５℃、２０秒間の変性、６０℃、６０秒間のアニーリング、６８℃、３分間のプライマー伸長、６８℃、５分間の最終伸長を実施した。ＰＣＲ後、メチル化及びヘミメチル化ＤＮＡに特異的であり、親ＤＮＡ鋳型を消化するため、及び変異含有合成ＤＮＡを選択するために使用される、２μＬのＤｐｎ Ｉエンドヌクレアーゼを加えた（ほぼ全てのＥ．ｃｏｌｉ株から単離したＤＮＡはｄａｍメチル化されることにより、Ｄｐｎ Ｉ消化を受けやすくなる）。次に、所望の変異を含有するニックベクターＤＮＡをＸＬ１０－Ｇｏｌｄウルトラコンピテントセルに形質転換してから、アンピシリン含有ＬＢ寒天プレート上に播種した。ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて形質転換コロニーに由来するプラスミドＤＮＡを精製してから、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいてシークエンスを行った。

ベクター、及び特定の変異を有するＳＤＭ構築物を、ＨｉｎｄＩＩＩ酵素及びＸｈｏＩ酵素による制限エンドヌクレアーゼ活性に供してから、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用して生成物を抽出し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（ＮＥＢ）を使用してライゲートし、混合物の５０％をＮＥＢ５αコンピテント細胞Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換した。それに続き、制限消化によるクローンスクリーニングを実施し、最後に、シークエンシング反応によるクローンスクリーニングを実施した。シークエンシングプロセスにより、クローンが所望の変異を含有していることを確認した。

ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性遮断。
ＣＬＥＣ２Ｄ抗原上の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体結合部位が、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原上に確立された固有の接点と排他的な接点の両方を有する接点、及びＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１複合体間に確立された接点と重複する結合部位からなるという事実を暗示したエピトープマッピング試験により得られた観察結果を更に厳密に調査した。本明細書で例示しているとおり、限定するわけではないが、Ｃ４６０８用のＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画（図１６Ａ及び図１６Ｂ）及びＣ５５１１用のＣＬＥＣ２Ｄ抗原上のエピトープ区画（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）を示しているが、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用するＣ４６０８抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＣ５５１１抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の両方用の結合部位は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原とＣＤ１６１の間の接点と有意に重複している。本開示は、ＣＬＥＣ２Ｄタンパク質とＣＤ１６１タンパク質の間の相互作用に対する同定抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の影響を調査するものである。上記のＣＬＥＣ２ＤとＣＤ１６１の間の相互作用により腫瘍細胞が免疫系を回避することから、相互作用を阻害するＣＬＥＣ２Ｄ結合物質、すなわち、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の実験的確認を以下で更に証明した。実験の詳細では、ＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の確認から開始して、その後、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによりＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用を抑止する。

本明細書で例示しているとおり、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を磁性ビーズ上にコンジュゲートしたが、１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水を０．５ｍｇのダイナビーズに加えて、３０秒間ボルテックスしてから、回転させながらＲＴで１０分間培養した。培養後、Ｄｙｎａｍａｇ ２を使用して１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水でビーズを２回洗浄してから、洗浄したビーズを１００μｌの０．１Ｍ ＰＢＳ中に再懸濁させた。抗原を磁性ビーズ上にコンジュゲートさせるために、１００μｌの３Ｍ硫酸アンモニウムの存在下、１００μｌの洗浄ビーズ、及び１μｇのＣＬＥＣ２Ｄ抗原を含有する１００μｌのＰＢＳを完全に混合してから、３７℃で一晩培養した。一晩培養した混合液をＰＢＳで２回洗浄し、０．５％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳで２時間ブロッキングしてから、Ｄｙｎａｍａｇ ２を用いて磁性ビーズを分離させた。

最後に、コンジュゲート抗原ビーズを１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。抗原の同一性を確認するために、１μｌの上記コンジュゲート抗原ビーズを９９μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させて、０．１Ｍ ＰＢＳで１回洗浄してから、再度、１００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓから市販されている０．５μｇの抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を１００μｌの洗浄コンジュゲート抗原ビーズに加えてから、常時タッピングしつつ、氷上で２時間培養した。培養後、コンジュゲート抗原ビーズを、０．２５％ＢＳＡを含有する１００μｌの１×ＰＢＳで２回洗浄してから、１００μｌの５μｇ／ｍｌ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）をコンジュゲート抗原ビーズに加え、更に、氷上で３０分間培養した。培養後、コンジュゲート抗原ビーズを、０．２５％ ＢＳＡを含有する１００μｌの１×ＰＢＳで２回洗浄してから、２００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｅに示すように、フローサイトメトリー解析により判定したところ、ビーズのコンジュゲート効率は＞９５％であることが判明した。

ＣＤ１６１－ＦｃのＣＬＥＣ２Ｄ抗原との結合を確認するために、２μｌの上記コンジュゲートＣＬＥＣ２Ｄ抗原ビーズを取り出して、異なる濃度のＣＤ１６１－ＦＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入）を加えてから、ビーズが沈殿するのを避けるために常時タッピングしつつ、氷上で２時間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含む１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄した。１００μｌの５μｇ／ｍｌのａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒヤギ抗ヒトＩｇＧを加えてから、回転させながら氷上で２０分間培養した。１％ＢＳＡを含む１００μｌのＰＢＳでビーズを１回洗浄してから、１００μｌの１×ＰＢＳ中に再懸濁させた。ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｆから参照可能なように、磁性ビーズ上にコンジュゲートしたＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、ＣＤ１６１タンパク質と用量依存的に相互作用している。

０．５μｇのビオチン化ＣＤ１６１－ＦＣを２μｌのＣＬＥＣ２Ｄコンジュゲートビーズに加えてから、氷上で２時間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄してから、２００ｎｇのストレプトアビジン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）６３３コンジュゲートを加えて、更に、氷上で２０分間培養した。培養後、１％ＢＳＡを含有する１００μｌのＰＢＳでビーズを２回洗浄してから、２μｇのＣ５５１１抗体を加えて、氷上で２時間置いた。２時間の培養後、５μｇ／ｍｌのａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒヤギ抗ヒトＩｇＧを加えてから、更に、回転させながら氷上で２０分間保管した。最後に、ＣｙｔｏＦＬＥＸを用いて、対照を含む全ての試料の蛍光を読んだ。図１６Ｇから参照されるように、シグナルの低下（最適な濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体におけるＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１相互作用）は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１接触部位と競合することができ、相互作用を阻害することを示している。

免疫細胞の活性化：抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の結合による
ＮＫ細胞活性化の一般的な見解は、活性化受容体からのシグナルと阻害受容体からのシグナルの間のバランスにより健常細胞と高感度な標的細胞を識別するその能力である。ＮＫ細胞が標的細胞を殺傷する能力を測定するために、主な正及び負のシグナル伝達イベントの正味の結果を調査した。しかしながら、阻害シグナルが活性化経路を抑止する正確な分子チェックポイントは明確ではない。

しかしながら、ＮＫ細胞活性化への個々の受容体の寄与を描写する試みにおいて、ＣＤ６９表面受容体は、活性化直後にＮＫ細胞によって速やかに誘導される初期活性化免疫細胞マーカーであるとみなされた。ＣＤ６９プロモーターは、ＮＦ－κＢ用の結合部位、赤芽球形質転換特異的関連遺伝子－１（ＥＲＧ－１）、及びＡＰ－１を含有している。その発現は、ほとんどの白血球によって活性化される際に上方制御され、活性化リンパ球及びＮＫ細胞のマーカーとして使用される。加えて、ＣＤ６９はまた、免疫応答の重要な調節因子である。ＣＤ６９は、Ｓｙｋ－Ｓｒｃ依存的な様式によるＮＫ細胞活性化に関与している。それに対しＴ細胞では、ＣＤ６９は、ＣＤ６９がＴＨ１／ＴＨ１７応答を負に調節するＴＣＲ／ＣＤ３結合後に誘導され、またＴＧＦ－Ｂシグナル伝達により、ｉｎ ｖｉｖｏにおける炎症を制御する。しかしながら、ＮＫ細胞では、ＣＤ６９のクロスリンクが、細胞傷害活性及び活性化ＮＫ細胞のサイトカイン産生を誘導することが判明している。それゆえ、ＣＤ６９は、活性化ＮＫ細胞における標的細胞用の推定上の受容体として表され得る。上記のプロトコルを使用して、この試験で使用するエフェクター細胞、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞（使用可能な場合）を単離した。

ＮＫ細胞の状態に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の影響を理解するために、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の有無における、ＮＫ細胞上におけるＣＤ６９マーカー発現のレベルをモニターした。それぞれの反応用に、０．１×１０^６の単離ＮＫ細胞を取り出した。ＩＬ－２を陽性対照として使用した。２００ＵのＩＬ－２（Ａｃｒｏ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ １００μｇ／ｍＬ及び２００μｇ／ｍＬをそれぞれのウェルに加えてから、一晩培養した。ＰＣ３初回刺激によるＣＤ６９発現における変化を理解するために、ＰＣ３細胞を１：１（Ｔ：Ｅ）の比率で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を含有するまたは含有しないＮＫ細胞に加えた。何ら処理を行っていないＮＫ細胞または標的を対照として保管した。培養の１２～１６時間後、０．１×１０^６細胞に対する０．５ｕＬの対応する抗体を使用して、抗ヒトＣＤ３－ＦＩＴＣ及び抗ヒトＣＤ６９－ＡＰＣ７５０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に限定されないＣＤマーカーによる染色を実施した。１×ＰＢＳ ０．２％ＢＳＡで細胞を１回洗浄してから、ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して測定値を記録した。デフォルトのゲイン設定を使用してデータを取得し、試料あたり５０００～１００００のイベントを記録した。

結果は、処理を行っていないＮＫ対照と比較した際のＣ５５１１抗体（１００μｇ／ｍＬ及び／または２００μｇ／ｍＬ）の存在下のＮＫ細胞において観察されたＣＤ６９発現の４０～５０％の上方制御を示したが、ベースライン発現は１～２％と記録された（図１７Ａ）。ＩＬ－２を陽性対照として使用すると、３０～４０％の上方制御が示された（図１７Ａ）。腫瘍（ＰＣ３）の場合、初回刺激ＮＫ細胞がＣＤ６９の高発現（ほぼ７０～７５％の発現）を示した一方で、ＣＤ６９発現は、ＰＣ３細胞と抗体（１００μｇ／ｍＬ）の両方の存在下、約８５％に上方制御された（図１７Ｂ）。

サイトカイン／ケモカインの分泌／細胞内発現
ＮＫ細胞が腫瘍細胞／感染細胞を認識すると、細胞傷害及びサイトカイン分泌が誘導される。サイトカイン産生を調節するシグナル伝達経路及びそのプロセスにおける標的細胞認識へのＮＫ細胞活性化受容体の寄与については十分には理解されていない。加えて、標的細胞における特定のリガンドの結合に対するサイトカイン分泌の条件／要件については知られていない。それゆえ、ＮＫ細胞が標的細胞を認識した際の免疫応答の初期誘導を理解するためには、サイトカイン及びケモカインのプロファイル／スクリーニングが重要である。ここで、新規抗体Ｃ５５１１の存在下でサイトカイン分泌を検出するための試験を設計した。ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αは、ＮＫ細胞によって産生される最も有名なサイトカインのうちの２つであり、細胞傷害と様々な免疫細胞の増殖の両方に関連している。それゆえ、この試験では、フローベースアッセイにおける確立された細胞内ＩＦＮ－γ染色技術を用いた、ＰＢＭＣまたは単離ＮＫ細胞におけるＩＦＮ－γ分泌を検出するための実験を実施した。

細胞刺激及びＩＦＮ－γ染色プロトコル：
ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞を３７℃で一晩置いた後、活性化試薬及び分泌阻害剤（ブレフェルディンＡ（１０μｇ／ｍＬ）／モネンシン（６μｇ／ｍＬ））をウェルに加えた。ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞は、未処理のままとした、または、１００μｇ／ｍＬの新規抗体Ｃ５５１１で処理した。抗ヒトＯＫＴ－３がＩＦＮ－γ分泌を誘導することが知られているため、細胞を陽性対照として抗ヒトＯＫＴ－３（１～２μｇ／ｍＬ）で刺激した。必要な場合は常に、１０：１のエフェクター：標的の比率で標的細胞を使用した。培地のみは陰性対照の役割を果たした。細胞を、ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４時間培養した。

培養後、２ｍＭの終濃度となるようにＥＤＴＡを加えてから、室温で１５分間培養した。細胞を、ＰＢＳを用いて、１６００ｒｐｍ、室温で８分間洗浄した。１６００ｒｐｍ、室温で８分間のＰＢＳ洗浄を繰り返してから、５００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。それぞれの試料（最終２０μｌ）用に抗ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）カクテルを加えた。コンペンセーション対照用に、適量の単一抗体でコンペンセーションを実施した。細胞を暗黒下、室温で３０分間培養した。２ｍｌのＦＡＣＳバッファーをそれぞれのウェルチューブに加えた。細胞を、ＦＡＣＳバッファーを用いて、１６００ｒｐｍ、室温で８分間２回洗浄した。次に、２５０μｌ／チューブのＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍを含む１００μｌのフローバッファー（ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ）、または２５０μｌ／チューブのＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ中に細胞を再懸濁させてから、ＲＴで１５分間培養した。次に、細胞を２０００ｒｐｍ、８分間、４℃の遠心分離にかけてから、上清を廃棄した。

細胞を洗浄バッファーで２回洗浄した。上清を廃棄してから、製造業者のプロトコルに従いＩＦＮ－γ ＰＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）細胞内染色を実施した。細胞を暗黒下、氷上で３０分間～６０分間培養した。培養後、細胞を、１ｍｌのＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。上清を廃棄してから、フロー用の最終容量の１５０μｌのＦＡＣＳバッファー中に再懸濁させた。

図１８Ａから参照可能なように、１００μｇ／ｍＬの濃度のＣ５５１１、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によって誘導された際のＰＢＭＣにおけるＩＦＮ－γの放出は、非誘導対照と比較して約２．９７％であることが判明した。抗ＯＫＴ－３抗体、ＦＩＴＣをコンジュゲートした抗ＣＤ３抗体を陽性対照として使用すると、非誘導ＰＢＭＣと比較した際に３～６％のＩＦＮ－γ放出が示された（図１８Ａ）。それに続き、ＣＤ３＋集団及びＣＤ３－集団を基準にしてＰＢＭＣ細胞をゲーティングしたが、全ＰＢＭＣに由来するＣＤ３＋細胞は、単独または標的細胞（１：１０のＴ：Ｅ比率）と共にのいずれかにおいて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に、ＩＦＮ－γ放出の有意ではない上昇を示した（図１８Ｂ）。これに対して、ＣＤ３－集団は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際におけるＩＦＮ－γ放出の有意な上昇を示した（図１８Ｃ）。ここで、全ＰＢＭＣまたはＣＤ３＋細胞もしくはＣＤ３－細胞のいずれかにおいて、ＰＣ３初回刺激エフェクター細胞のＩＦＮ－γ産生が全く上昇しなかったまたはわずかに上昇したということに留意すべきである。観察を単離ＮＫ細胞へと拡大し、ＩＦＮ－γ放出実験を実施したが、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の存在下、約１～２％のＩＦＮ－γ放出がモニターされた（図１８Ｄ）。まとめると、サイトカイン、例えば、ＩＦＮ－γなどの放出は、本開示に記載のとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に上昇した。ＣＤ３－／ＮＫ細胞に限定されないエフェクター細胞上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原へと抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を結合させることによりもたらされた上記の観察は、その他の免疫細胞の活性化への独立した経路及び標的細胞の実質的に効果的な排除を示唆していた。

細胞傷害機構：
細胞傷害機構における抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の機能的役割を理解するために、抗ＣＬＥＣ２Ｄアイソタイプバリアントを構築して、細胞傷害アッセイで評価した。

適切なアイソタイプ構築物の作製
例示として、哺乳動物発現ベクター、ＩｇＧ１、Ｎ－＞Ａ変異を含むｐＺＢ０１３（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３６４）、及びＩｇＧ４を含むｐＺＢ０１４（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３６５）を作製したが、選択した抗ＣＬＥＣ２Ｄ可変重鎖領域をクローニングされていてもよかった。続いて、可変重鎖を含む上記構築物及び可変軽鎖を含むｐＺＢ００８（受け入れ＃ ＭＴＣＣ ２５３５９）をトランスフェクションして発現させてから、その後の実験用に精製する。哺乳動物構築物、ＩｇＧ１、Ｎ－＞Ａ変異を含むｐＺＢ０１３と、ＩｇＧ４を含むｐＺＢ０１４の両方を、カスタム設計して合成した（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。プラスミドは、強力なプロモーターによって駆動されるカナマイシンＲ／ピューロマイシンＲカセット、及び増殖用の高コピー数ＣｏｌＥ１／ｐＭＢ１／ｐＢＲ３２２／ｐＵＣ複製起点を搭載している。制限酵素ＡｓｃＩ及びＸｂａＩを使用して可変重鎖を置換してもよい。制限酵素ＥｃｏＲＩ及びＡｓｃＩにより可変軽鎖を置換してもよい。

本明細書で例示しているとおり、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいて合成された配列特異的プライマーを使用してＰＣＲを実施し、ｐＺＢ０１４ベクター及びｐＺＢ００８ベクターを対応する酵素による制限エンドヌクレアーゼ活性に供し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用してＰＣＲ増幅産物を抽出し、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｐｌｕｓ ＣＥを使用してインフュージョンクローニングを実施し、混合物の５０％をＳｔｅｌｌａｒコンピテント細胞Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換し、カナマイシン含有ＬＢ寒天プレート上に播種した。ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて形質転換コロニーに由来するプラスミドＤＮＡを精製し、Ｅｕｒｏｆｉｎｓにおいてシークエンスを行ってから、大規模プラスミドを単離して、トランスフェクションに使用した。ここで、熱ショック法によるプラスミドＤＮＡの細菌細胞への形質転換、ＱＩＡＧＥＮキットを用いた細菌細胞からのプラスミドＤＮＡの単離、及びクローンのスクリーニングについては、上のセクションに記載のものと同様であった。その後、全てのクローンを配列確認すると、エラーを含まないことが判明した。哺乳動物発現系、ＣＨＯ細胞にトランスフェクションするために、ＩｇＧ４変異フォーマット及び／またはＩｇＧ１変異フォーマットの両方のそれぞれの抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンを大規模に単離した。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体ＩｇＧ４バリアントを発現させるためのＣＨＯ細胞トランスフェクション：
例示として、トランスフェクション用に、細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンター、Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ＰＬＵＳ試薬を含むリポフェクタミン（登録商標）ＬＴＸ試薬を使用して、製造業者のプロトコルに従いトランスフェクションを実施した。必要な容量の細胞懸濁液を１４００～１５００ＲＰＭ、４～５分間の遠心分離にかけてから、１２５ｍｌ振盪フラスコ内の、表３６のとおりの特定の容量のＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中に再懸濁させた。表３に従いトランスフェクション混合液を調製した。ＤＮＡの詳細については表Ａを参照されたい。トランスフェクションの２～３日後、１０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。トランスフェクションの６日後、１４００～２０００ｒｐｍ、１０～１５分間の遠心分離により細胞培養上清を回収した。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて、細胞培養上清からＩｇＧ４抗体バリアントを精製した。

例示として、更なる精製及び細胞傷害アッセイ評価用に、限定するわけではないがＣ４７０１、Ｃ３２７６、Ｃ３２５６クローンをトランスフェクションした。

抗体介在性細胞傷害
精製後、フローサイトメトリーを使用して、Ｃ４５４８細胞上への細胞表面結合について、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを評価した。図１９Ｃから参照可能なように、ＩｇＧ４アイソタイプを含む両方のクローンは、対照非トランスフェクトＣＨＯ細胞と比較した際に、約４～８倍より高いＭＦＩでの、表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への結合を示した。

アイソタイプバリアントの機能性を評価するために、製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加え、新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ３２７６、Ｃ３２５６、Ｃ３４５２、及びＣ４６０８を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に１００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１９Ｄから参照可能なように、Ｃ３２７６ ＩｇＧ４バリアント及びＣ４６０８ ＩｇＧ１バリアントは、ＰＣ３細胞に対する類似したパーセンテージの細胞傷害を示した。まとめると、ＩｇＧ１バリアントとＩｇＧ４バリアントの両方（１００μｇ／ｍｌで処理）は、ＣＤ１６依存性標的細胞死とＣＬＥＣ２Ｄ及びＣＤ１６１の相互作用の遮断による標的細胞の殺傷の両方の関与を意味する、ＰＣ３細胞に対する抗腫瘍活性を示しており、更には、おそらくＡＤＣＣ機構とは無関係に機能して腫瘍細胞を速やかに殺傷する複数の経路の関与を示唆している。加えて、上記抗体の異なるアイソタイプフォーマットは潜在的に、前立腺癌に限定されない特定の疾患用の治療への新たな道筋をつけることができる。

修飾グリコシル化を有する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の細胞傷害に対する影響
モノクローナル抗体ベースのバイオ医薬品は、標的細胞上の抗原性エピトープの効果的な認識に加えて、免疫複合体の形成の結果としての抗体エフェクター機能を介して機能する。最近では、抗体エフェクター機能は、上記の部類のバイオ医薬品の効果を向上させることに対するかなりの関心を得ている。抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は治療抗体の臨床効果を向上させるが、患者の白血球受容体（ＦｃγＲ）の対立遺伝子多型に関係する研究に例示されているとおり、その効果は抗がん抗体の場合により顕著である。近年、化学－酵素法により開発された均一ＩｇＧグライコフォームを用いたエレガントな研究により、抗体のシアリル化がコアフコシル化との関係において（非フコシル化抗体の場合ではない）ＡＤＣＣに悪影響を及ぼすことが明らかとなった。完全非フコシル化モノクローナル抗体がＦｃγＲＩＩＩに対する有意に上昇したＦｃ親和性を有しており、その結果、抗体ＡＤＣＣ機能がｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにおいて何倍も向上していることを複数の研究が報告した。

自然免疫系が腫瘍微小環境に動員されている免疫腫瘍学標的に対する次世代モノクローナル抗体医薬品の出現に伴い、ＮＫ細胞のエフェクター機能を保証することは、非常に重要なものとなっている。腫瘍細胞上のエピトープを認識する向上したＡＤＣＣ機能を有するあらゆるこのような抗体は、腫瘍細胞生存、またそれによる腫瘍進行に対するより高い阻害効果を発揮する潜在能力を有している。この場合、モノクローナル抗体医薬品のＡＤＣＣ機能を制御することは、最適なエフェクター機能と有害なサイトカイン放出のバランスをとるのに役立つ。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体発現：
ＧＳ陰性ＣＨＯ細胞株を用いて、Ｔａｌｅｎ Ｆｕｔ８遺伝子ノックアウト細胞株を分化させた。この細胞株をＦＵＴ８遺伝子ノックアウト用に配列確認し、Ｃ２８９９としてコード化した。Ｃ０６９４（ＨＣベクター及びＬＣベクター）及びＣ２６８５（ＨＣベクター及びＬＣベクター）をこの細胞株にトランスフェクションした。抗生物質選択を実施してから、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現するこの細胞株からミニプール及び単一細胞クローンを分化させた。Ｃ４５４８細胞上への細胞表面抗原結合についてフローサイトメトリーを用いて、標的細胞上への細胞表面抗原結合について共焦点イメージングを用いて、アフコシル化抗体を試験した。

新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローンを発現させるためのＣ２８９９細胞トランスフェクショントランスフェクション：
Ｃ０６９４及びＣ２６８５の重鎖ベクター及び軽鎖ベクターをＣ２８９９細胞にトランスフェクションした。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンター、Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒを使用して収集した。ＰＬＵＳ試薬を含むリポフェクタミン（登録商標）ＬＴＸ試薬を使用して、製造業者のプロトコルに従いトランスフェクションを実施した。必要な容量の細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４分間の遠心分離にかけてから、１２５ｍｌ振盪フラスコ内の、特定の容量のＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中に再懸濁させた。前述したとおりにトランスフェクション混合液を調製した。Ｃ０６９４のＨＣベクター及びＬＣベクターをトランスフェクションしたＣ２８９９細胞がＣ３２３４として知られている一方で、Ｃ２６８５のＨＣベクター及びＬＣベクターをトランスフェクションしたＣ２８９９細胞はＣ４３３５として知られていた。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を発現する安定細胞株の作製：
抗生物質選択：
＞８０％の細胞生存能のトランスフェクション後に、抗生物質選択を開始した。細胞懸濁液を１４００ＲＰＭ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中に再懸濁させてから、ピューロマイシン二塩酸塩の濃度を２μｇ／１×１０＾６細胞に調節した。２日毎または３日毎に抗生物質選択を実施した。

安定プールの反復トランスフェクション：
Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して細胞カウントを取得した。細胞を継代培養してからトランスフェクションを実施した。これまでに言及したように、更に２回の連続的なトランスフェクションを実施した。３ラウンドのトランスフェクションが完了すると、そのプールをＲ３安定プールと呼んだ。

ミニプールへの播種：
系列希釈法によりミニプールを作製した。播種の１～２日前に、増殖し続けている細胞株培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、０．５百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した。細胞を、１０細胞／ウェルの密度で、ウェルあたり２００μｌ容量の９６ウェルプレート内のクローニング培地に播種した。これらのミニプールを、加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。

ミニプールのスクリーニング及び増幅：
ミニプールをフローサイトメトリーでスクリーニングしたが、Ｃ４５４８細胞への結合を推定した。細胞表面結合に基づいてミニプールを順位付けした。フローサイトメトリースクリーニングにより選択したミニプールを９６ウェルプレートから２４ウェルプレートへと増幅させてから、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。これらのプールを２４ウェルプレートから６ウェルプレートの１つのウェルへと更に増幅させた。細胞がコンフルエントになった後、６ウェルプレートの１つのウェルから２５～３０ｍｌの増殖培地を含む５０ｍｌバイオリアクターチューブまたは１２５ｍｌ三角振盪フラスコへとミニプールを増幅させてから、１２０～２００ＲＰＭの５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件に維持した。

単一細胞のクローニング
系列希釈法により単一細胞を作製した。クローニングの１～２日前に、増殖し続けている選択ミニプール培養液を、２ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを含む３０ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地中、１百万細胞／ｍｌで継代培養した。細胞のカウント及び生存能のデータは、Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲを使用して収集した。完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地を用いて、細胞懸濁液の系列希釈を１：１０の比率で実施した。細胞を、０．５細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート内に播種してから、加湿した５％ＣＯ２静置インキュベータ内、３７℃の温度に維持した。０日目から１０日目までのモノクローナリティレポート作製用にＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用することにより、プレートをスキャンした。全てのウェルの０日目の画像からクローン集団を確認してから、ＣｌｏｎｅＳｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒを用いてモノクローナリティレポートを作製した。継代番号はＰ（ｘ＋０）であった。単一細胞クローンを４桁のランダム数でコード化した。細胞がコンフルエントになった後、単一細胞クローンを２４ウェルプレートへと増幅させた。継代番号はＰ（ｘ＋１）であった。

単一細胞クローンのスクリーニング及びクローン増幅：
細胞培養上清中の抗体を推定してクローンを順位付けするために、細胞表面結合アッセイを実施した。Ｃ４５４８細胞の表面に発現しているＣＬＥＣ２Ｄ抗原への高い結合性を示す単一細胞クローンを２４ウェルから６ウェルへと増幅させた。継代番号は（ｘ＋２）であった。続いて、この単一細胞クローンを６ウェルプレートの３つのウェル内で増幅させた。継代番号は（ｘ＋３）であった。クローンをバイオリアクターチューブまたは三角フラスコへと更に増幅させた。クローン用にＲＣＢバイアルを調製した。

タンパク質精製用の培養回収液：
細胞を、約０．３×１０＾６細胞／ｍｌの密度で、３０～１００ｍｌの完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地内に播種してから、１２０ＲＰＭ回転の５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃、加湿条件で、６日間培養した。３日目または４日目に、２０％（体積／体積）の培地を完全Ｐｏｗｅｒ ＣＨＯ２増殖培地に継ぎ足した。全ての細胞懸濁液を１４００～２０００ＲＰＭ、１０分間の遠心分離にかけることにより、上清を回収した。上清を回収してから、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによる精製に供した。

フローサイトメトリーによる細胞表面結合アッセイ：
ＣＬＥＣ２Ｄ表面発現ベクターをＣＨＯ細胞に一過的にトランスフェクションした。表面発現は、トランスフェクト細胞上、４日目～５日目において最適であった。これらの細胞をＣ４５４８としてコード化した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。ＣＨＯ細胞及びＣ４５４８細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。１～５μｇの精製抗体試料及び参照対照をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で４０～６０分間培養した。プレートを１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの２％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

非トランスフェクトＣＨＯ細胞上への試験試料上清の結合を推定し、以下の式、

を使用して、Ｃ４５４８細胞の表面上への特異的結合の計算に使用した。

最初に、フローサイトメトリーを用いて、Ｃ４５４８細胞上への細胞表面結合について、安定細胞クローンに由来する精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の評価を行ったが、フローサイトメトリーベース結合試験用の実験は、実施例５、セクション：細胞表面結合アッセイ：フローサイトメトリー及び共焦点顕微鏡によるに記載のものと同様のままである。図１９Ｅから参照可能なように、Ｃ０６１３、Ｃ１３０１、Ｃ６２６８、Ｃ１６９９、Ｃ２４３７、Ｃ９８３２、Ｃ８９００、及びＣ７７４９に例示される全てのクローンは、非トランスフェクトＣＨＯ細胞である対照と比較した際に、約２～１０倍より高いＭＦＩでの、表面に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原への特異的な結合を示した。

アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体による細胞傷害
続いて、確認したアフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を細胞傷害実験用に使用して、グリコシル化の効果をフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と比較した。

ここで、製造業者のプロトコルに従いＰＣ３細胞をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＮＫ細胞を１：１のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１（１００μｇ／ｍｌ）ならびにアフコシル化ｍａｂ Ｃ７７４９、Ｃ８８００、及びＣ９８３２を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に２０μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。それに続き、２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞のトリプシン処理を行った。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターを使用して蛍光シグナルを検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより、特定の細胞の死滅比率を測定した。

図１９Ｆは、ＰＣ３細胞の殺傷により評価した、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体介在性細胞傷害に対するフコシル化の影響を示している。これまでに言及したとおり、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、フコシル化抗体、すなわち、Ｃ５５１１よりも５倍低い濃度で使用した。観察された細胞傷害は、フコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と比較した際に、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が少なくとも５倍より効果的であることを示唆している。それゆえ、上記及び記載バージョン、すなわち、アフコシル化抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、高い臨床効果を得るための効率的な代替治療／療法選択肢として使用することができた。

まとめると、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の機能的効率は、ＩｇＧ４アイソタイプフォーマットの上記抗体の機能性から分かるように、ＡＤＣＣ非依存性であり得、その一方で、アフコシル化バージョンの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は効率的なＡＤＣＣ介在性標的殺傷を誘導し、その結果として、治療領域における機能的汎用性及び用途に関連する汎用性にみがきがかかり、それらが広がる。

補体依存性細胞傷害
補体依存性細胞傷害、すなわちＣＤＣは、補体関連反応のカスケードを活性化させることにより、それをとおして抗体が望ましくない標的を溶解する周知のメカニズムである。一般的にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、そのＦｃ領域を血清補体成分、とりわけＣ１ｑに結合させることにより、ＣＤＣ殺傷効果を誘導する。２０超の高度に調節されたエレメントが関与する複雑な酵素活性化及び開裂イベントの後、最終的に、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成、それによる標的細胞破壊がもたらされる。

実験について詳しく述べる特定の例では、５×１０^４細胞を含有する５０μＬの標的細胞懸濁液（ＰＣ３及びＲａｍｏｓ）を９６ウェルアッセイプレートのそれぞれのウェルに加えた。５０μＬの異なる濃度のＣ５５１１抗体（２００、４０、０．４、０．０４μｇ／ｍＬ）希釈溶液をプレートに加えて、反応を開始させた。プレートを３０秒間振盪させた。次に、仔ウサギ補体を細胞培地中に希釈（１：２０）してから、５０μＬを適切なウェルに加えた。３０秒間振盪させた後、プレートを５％ＣＯ２、３７℃で１２０分間培養した。次に、プレートを３７℃のインキュベータから取り出してから、室温（ＲＴ）になるまで１５分間冷まし、その後、２５μＬの温かいＲｉｓａｚｕｒｉｎ溶液を加えてから、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で一晩（１６～２０時間）培養した。次に、プレートを３７℃のインキュベータから取り出してから、室温（ＲＴ）になるまで１５分間冷まし、その後、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴ ＢＩＯＴＥＫマイクロプレートリーダーを使用して、蛍光モード（励起５３０及び放出５９０）でプレートを読んだ。

Ｒａｍｏｓ細胞株とＰＣ３細胞株の両方から得たデータは、図１９Ｇに示すとおり、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が、ＣＤＣ経路によるその細胞殺傷機構を発揮していないことを示唆している。

実施例７：抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いたｉｎ ｖｉｖｏマウス効果試験
ｉｎ ｖｉｖｏマウス効果試験
治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の開発中において、臨床で成功する見込みの最も高い候補ｍＡｂを早期に同定するための戦略は、不十分な曝露、毒性、または効果の欠如と関連する費用がかかる後期の失敗を回避するために求められている。ｍＡｂの早期のスクリーニング及び最適化では、リード構築物を選択するための特性、例えば、親和性、力価、及び安定性などに焦点をあてるが、その一方で、ｉｎ ｖｉｖｏ効果の確認は一般的に必要とされる。

皮下ＰＣ３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを用いて抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の抗がん活性を評価した（図２０Ａ及び図２０Ｂ）。手法は、ヒト造血幹細胞を移植することによりヒト様免疫系（ヒト起源のリンパ球系及び骨髄系）がもたらされる、超免疫欠損ｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３トランスジェニック－ＮＯＧマウスに基づいている。このモデルにより、免疫療法剤の機能に関する重要な固有のメカニズムの効果試験が可能となった。試験は、４～５週間の期間にわたり、腫瘍容積及び体重を定期的に観察しながら実施した。試験は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＥＣ）に従い実施した。

全ての動物は、実験開始前の約５～７日間の期間にわたり、馴化のために保管された。動物を群（ケージあたり５匹の動物）でＩＶＣ内に収容し、オートクレーブ済みトウモロコシ穂軸を敷わら材として使用した。２２±３℃の温度、５０±２０％の湿度、それぞれ１２時間の明／暗サイクル、及び１時間あたり１５～２０回の新鮮な空気への換気の、制御された環境下に、動物を維持した。動物には、認可済みＩｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔを自由に摂らせた。
種 Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ
系統 ｈｕＮＯＧＥＸＬ
供給元 Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ
性別 雄
齢 ５～６週齢
体重 １９～２１ｇ
がん細胞株 ＰＣ３（ヒト前立腺腺癌）
細胞移植密度 ５×１０^６細胞／動物
試験開始 腫瘍容積（≒１００ｍｍ^３）
試験期間 ４～５週間
試験品目 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン、ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体、チェックポイントモノクローナル抗体
用量及び投与スケジュール １０ｍｇ／ｋｇ、４腹腔内投与－７日に１回
投与経路 腹腔内
腫瘍容積の測定 ３日に１回
体重の測定 ３日に１回

全ての手順は、滅菌技術に従い層流フード内で実施した。＞９０％の生存能のＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌）細胞を試験用に選択した。約５×１０^６細胞を、５０％のマトリゲルを含有する２００μｌの無血清培地中に再懸濁させてから、氷中に保管した。個別換気ケージ（ＩＶＣ）に収容した雄ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを試験に使用した。動物の右脇腹領域にＰＣ－３細胞を皮下注射することにより、ＰＣ－３細胞株を動物内に伝播させた。移植エリアの腫瘍増殖をモニターした。腫瘍が触知可能なステージ及び所定の容積（平均腫瘍容積１１５ｍｍ^３）に達すると、動物を無作為化して、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体、ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体、及びチェックポイントモノクローナル抗体の投与を開始した。抗体を腹腔内投与した。それぞれ個々の動物の用量は、その体重に基づいて調節した。

試験の主な目的は、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の抗腫瘍活性を評価することであった。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン単独の効果に加えて、ＰＤＬ１抗原に対するチェックポイントモノクローナル抗体との組み合わせ治療用の実験を実施した。ＰＣ－３腫瘍異種移植片を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスでは、動物の体重、臨床徴候、及び腫瘍容積を実験期間中にわたり３日に１回記録した。試験は、表４２に記載の以下の群で構成されていた。

「群１」の動物では、試験期間中における進行性の腫瘍増殖が明らかとなった。全てのその他の実験群において腫瘍増殖阻害が認められた。試験期間中、３日に１回個々の体重を測定した。個々のマウスの体重の変化パーセンテージを計算して記録した。試験期間中毎日、目に見える臨床徴候について動物を観察した。無作為化の日（０日目）、及びその後３日に１回（すなわち、体重を測定するのと同日）、デジタルノギスを用いた二次元測定により腫瘍容積を測定した。ノギスを使用して、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定した。腫瘍容積（ＴＶ）は、以下の式：
ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２（式中、Ｌ＝長さ（ｍｍ）、Ｗ＝幅（ｍｍ））
を使用して計算した。
個々の群の標準偏差（ＳＤ）または標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。対照ＩｇＧ１群（群１）に対する最大腫瘍容積阻害として抗腫瘍活性を評価した。データの評価は、統計ソフトウェアＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ５．０を使用して実施した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、以下の式：

（式中、Ｔ＝Ｘ日目における試験群の平均腫瘍容積（ＴＶ）－０日目における試験群の平均ＴＶ、Ｃ＝Ｘ日目における対照ヒトＩｇＧ（群１）の平均ＴＶ－０日目における対照ヒトＩｇＧ（群１）の平均ＴＶ）
を使用して計算した。

相対腫瘍容積（ＲＴＶ）及び腫瘍増殖阻害を計算した。ＲＴＶデータの平均±ＳＥＭを計算し、腫瘍増殖阻害をパーセンテージで示した。統計解析にｔｗｏ ｗａｙ ＡＮＯＶＡを利用し、群間のｐ値＜０．０５を有意とみなした。結果は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いた単剤治療とＰＤＬ１に対するチェックポイントモノクローナル抗体との組み合わせの両方による、有意な腫瘍増殖抑制を示している。

対照ヒトＩｇＧ１を示す群１と比較して、群２、群３、群４、及び群５において有意な腫瘍増殖阻害が認められた。抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローン及び抗ＰＤＬ１抗体で治療した動物において全試験期間にわたる有意な腫瘍増殖阻害が認められたのは予想外であった。更に興味深いことに、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体クローン及び抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体の組み合わせで治療した動物において腫瘍サイズが半分低下したという全く新しい所見が認められた。この所見は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及び抗ＰＤＬ１抗体を用いた組み合わせ治療が５ｍｇ／ｋｇの低用量でこの高レベルの腫瘍増殖阻害を達成したことから、極めて重要である。データは、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を単独で使用した際及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を抗ＰＤＬ１抗体と組み合わせて使用した際の有意な抗腫瘍活性を示しており、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗体クローンが様々な疾患適応症に対する大きな治療ポテンシャルを有していることを示している。

試験期間中、モノクローナル抗体の用量はわずかな体重減少がありつつも良好な忍容性を示した。ケージサイド観察に基づくと、実験期間中、群のいずれかにおいて、異常行動の可視徴候または何らかの有害な臨床症状は認められなかった。切除腫瘍の免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して、腫瘍部位へのＴ細胞浸潤を解析した。浸潤を理解するために、採取した腫瘍細胞を異なるタイプのＴ細胞マーカーに供した。ＦＦＰＥ組織（ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織標本）の免疫組織化学用に組織学処理を実施した。動物を安楽死させてから、腫瘍を採取して１０％中性緩衝ホルマリンで２４時間固定した。組織を組織処理に供した。組織処理の完了後にパラフィン包埋組織ブロックを調製した。それに続き、ミクロトームの切断刃ホルダーの角度を組織ブロックの表面に調節した。粗トリミングを実施してから、５マイクロメートル厚の薄片を取得して、組織水浴に移した。標準的な試薬を用いて、ＩＨＣ染色用にホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織標本を処理した。

試料を洗浄バッファー（ＰＢＳＴ－０．３％トリトンＸ－１００）で１０分間洗浄した。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中の１０％標準ヤギ血清及び３％ＢＳＡ）を用いて、試料を加湿環境下、３０～６０分間培養した。一次抗体を抗体希釈バッファー（ＰＢＳ中の３％ＢＳＡ）中に希釈した。組織をＣＤ３抗原に対する１：１００希釈の一次抗体と培養してから、４℃で一晩培養した。それに続き、スライドを洗浄バッファーで３回洗浄した（１０～３０分間／洗浄）。これに続いて、二次抗体ヤギ抗ウサギＩｇＧ Ｈ＆Ｌ（ＨＲＰ）と室温で培養した。スライドを洗浄バッファーで３回洗浄した（それぞれの洗浄において１５～３０分間）。ＤＡＢ色原体を加えて、適度な強度の組織染色を発現させた。ヘマトキシリンで対比染色を実施した。

腫瘍試料を抗ＣＤ３抗体で免疫組織化学的に染色した。ヒトＩｇＧ対照（群１）の腫瘍組織の周縁部にＣＤ３細胞（全Ｔ細胞マーカー）浸潤が認められた。しかしながら、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、チェックポイント抗体単独または抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びチェックポイント抗体の組み合わせで治療した動物では、ＣＤ３細胞浸潤は、周縁部において均一に、また腫瘍細胞の周りでも認められた。ＣＤ３、膜性免疫組織化学マーカーにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、チェックポイント抗体、及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体及びチェックポイント抗体の組み合わせで治療した動物から採取した腫瘍試料の軽度から中程度の染色が明らかとなった。データは、腫瘍介在性免疫抑制のメカニズムへの明確な洞察をもたらしている。

標識抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の位置確認
別のイメージング実験では、Ａｌｅｘａ ６４７で標識した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内投与した。皮下ＰＣ－３腫瘍（平均腫瘍容積、約２１３ｍｍ^３）を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスに蛍光標識抗体を投与した。Ａｌｅｘａ ６４７標識抗体の投与の０分後、５分後、１５分後、３０分後、１時間後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、及び９６時間後に、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングを実施した（図２０Ｃ）。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体に対するモノクローナル抗体は、皮下ＰＣ－３腫瘍を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウス内の目的の標的抗原に対する親和性（腫瘍シグナル強度から明白）を示した。

腫瘍からのシグナル強度は、早くも抗体の注射の５分後に現れ、時間の経過とともに徐々に高くなった。シグナル強度のピークは３時間時点において観察され、腫瘍からのシグナル強度は９６時間時点まで続いた。

選択モノクローナル抗体製品を用いたｉｎ ｖｉｖｏマウス効果
別のフォローアップ異種移植マウス試験では、モノクローナル抗体医薬品を試験して、モノクローナル抗体治療時の腫瘍増殖抑制を評価した。

動物の系統：ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植したｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３ ＮＯＧマウスは、早くも注射の６～８週間後に、広範囲にわたる細胞系統を安定的に分化させた。骨髄系細胞とリンパ球系細胞の両方は、末梢血、骨髄、胸腺及び脾臓、ならびに肺及び肝臓を含む非リンパ組織に存在している。目下の試験用に、末梢血に２５％超のｈＣＤ４５＋を含むｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを使用した。

理論的根拠：手法は、ヒト造血幹細胞を移植することによりヒト様免疫系（ヒト起源のリンパ球系及び骨髄系）がもたらされる、超免疫欠損ｈＧＭ－ＣＳＦ／ｈＩＬ３トランスジェニック－ＮＯＧマウスに基づいている。このモデルにより、免疫療法関連薬剤の効果に関する重要な固有のメカニズムを試験することが可能となり、ヒト異種移植片を樹立するための好適なモデルがもたらされる。
系統 ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬ
性別 雄
供給元 Ｔａｃｏｎｉｃ（ＵＳＡ）
実験開始時の齢 １３～１４週齢
動物の体重 １８～２２ｇ

動物の世話
動物福祉
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌｓ（ＣＰＣＳＥＡ）（インド政府）の規則、及びＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）ガイドラインに従い動物の世話を行った。

住環境及び給餌
２２＋３℃の温度、５０＋２０％の湿度、１２時間の明／暗サイクル、及び１時間あたり１５～２０回の新鮮な空気への換気の、制御された環境下に維持された個別換気ケージ内に動物を収容した。動物を群で収容し、オートクレーブ済みトウモロコシ穂軸（Ｓｐａｒｃｏｎｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）を敷わら材として使用した。試験期間中、動物には、認可済みｉｒｒａｄｉａｔｅｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｒｏｄｅｎｔ ｄｉｅｔを自由に摂らせた（ＮＩＨ－３１）。

飲料水
オートクレーブ処理後のＲＯに通して濾過した新鮮な飲料水を、ノズルを取り付けたボトルを介して、全ての動物に自由に提供した。

動物の準備
動物は、１０日間の期間にわたり、実験室内、馴化下に保管された。動物を選択する前に徹底的な観察を実施して、明らかに健康な動物のみを試験に使用した。

動物の識別
動物にそれぞれ番号を振り、実験、試験番号、無作為化の日付、マウス系統、性別、及びそれぞれのマウス番号を示すケージカードを対応するケージに表示した。無作為化群の識別後、治療コード、用量、スケジュール、及び投与経路がケージカードに含まれていた。

実験手順
腫瘍細胞の調製
全ての手順は、滅菌技術に従い層流フード内で実施した。＞９０％の生存能のＰＣ－３（ヒト前立腺腺癌）細胞を試験用に選択した。約５×１０^６細胞を、５０％のマトリゲルを含有する２００μｌの無血清培地中に再懸濁させてから、氷中に保管した。

細胞の皮下注射
個別換気ケージ（ＩＶＣ）に収容した雄ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを試験に使用した。動物の右脇腹領域にＰＣ－３細胞を皮下注射することにより、ＰＣ－３細胞株を動物内に伝播させた。移植エリアの腫瘍増殖をモニターした。細胞の注射の４日後、腫瘍容積（平均腫瘍容積≒３７ｍｍ３）に基づいて動物を無作為化してから、投与を開始した。

試験物質の投与経路及び投与方法：
必要な量の試験抗体を調製してから、２～８０℃で保存した。抗体を腹腔内投与した。個々の動物の用量は、体重に基づいて調節した。それぞれの抗体用に、未使用の新しい注射器及び針を使用した。

実験デザイン
●モノクローナル抗体製品を、
ａ．Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、
ｂ．Ｃ６４８１ ｍＡｂ群
に１０ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。
●溶媒対照ＩｇＧ１群－対照ＩｇＧ１を１０ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。
●治療群あたり５匹の動物。
●最初の２週間にわたり３日に１回、残りの試験期間にわたり１週間に１回、抗体薬物製品を注射した。
●総試験期間３６日間。
●３日に１回、腫瘍容積の測定及び動物の体重の測定を実施した。

用量及び投与経路
必要な量の試験化合物（レディートゥーユース製剤）を使用し、それを－２００℃で保存した。試験化合物をそのそれぞれの群に腹腔内投与した。それぞれ個々の動物の用量を投与の直前に測定した体重に基づいて調節し、投与容量を１０ｍＬ／ｋｇ（体重）に維持した。それぞれの試験化合物用に、滅菌の新しい注射器及び針を使用した。試験化合物は、薬剤投与の当日に新たに解凍した。

観察
体重－試験期間中、３日に１回個々の体重を測定した。個々のマウスの体重の変化％を計算して記録した。

臨床徴候－試験期間中３日に１回、目に見える臨床徴候について毎日動物を観察して記録した。

腫瘍容積測定－無作為化の日（１日目）、デジタルノギスを用いた二次元測定により腫瘍容積を測定した。２回目の腫瘍容積測定は３日目であり、実験の終了まで更に３日に１回、腫瘍容積測定を実施した（すなわち、体重を測定するのと同日）。ノギスを使用して、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定した。腫瘍容積（ＴＶ）は、以下の式：

（式中、Ｌ＝長さ（ｍｍ）、Ｗ＝幅（ｍｍ））
を使用して計算した。個々の群の標準偏差（ＳＤ）または標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。

抗腫瘍活性
溶媒対照群に対する最大腫瘍容積阻害として抗腫瘍活性を評価した。データの評価は、統計ソフトウェアＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ５．０を使用して実施した。
●腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）
ＴＧＩは、以下の式：
ＴＧＩ＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００
（式中、Ｔ＝（Ｘ日目における試験群の平均ＴＶ－１日目における試験群の平均ＴＶ）、Ｃ＝（Ｘ日目における対照群の平均ＴＶ－１日目における対照群の平均ＴＶ））
を使用して計算した。
●相対腫瘍容積（ＲＴＶ）
相対腫瘍容積（ＲＴＶ）は、以下の式：

を使用して計算した。

統計解析
腫瘍阻害の統計的有意性を評価するために、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ ８．３．０を使用して、ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡに続いてボンフェローニ事後検定を実施した。ｐ値＜０．０５は、群間の統計的に有意な差を示す。

剖検
進行性の腫瘍増殖による全身腫瘍組織量（ＴＶ＞１５００ｍｍ３）及び腫瘍壊死／潰瘍形成が認められた。それゆえ、腫瘍エンドポイント及び倫理的理由に基づいて（３６日目）、全実験群の全ての動物を人道的に安楽死させてから、全ての病理学的所見を記録した。安楽死の前に、採血を実施し、血清を分離させてから－８０℃で保存した。全ての生存動物及び切除腫瘍組織を等倍で撮影してから、全腫瘍組織をホルマリン固定した。

ｉｎ ｖｉｖｏ試験から得た結果
抗腫瘍活性
この試験では、１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内用量（１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、１８日目、２４日目、３０日目、及び３３日目）の試験化合物で、ＰＣ－３腫瘍を有するｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを治療した。本実験条件下において、溶媒対照ＩｇＧ１群は、実験期間中に進行性の腫瘍増殖を示した。それゆえ、抗がん効果を評価するために、その他の治療群をこの群と比較した。試験を行った用量及びレジメンにおいて、２つの試験群が、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群がそれぞれ、２４日目に溶媒対照ＩｇＧ１と比較した際にｐ＜０．００１及びｐ＜０．０５の有意な腫瘍増殖阻害を示したことを明らかにした。それに対し、３６日目に、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群のみが、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際にｐ＜０．０５の有意な腫瘍増殖阻害を示した。データを表４３に示す。

２４日目及び３６日目における腫瘍容積（ＴＶ）及びデルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）
２４日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均腫瘍容積（ｍｍ３）はそれぞれ、２４１±３１、４７４±３８、及び３５５±６８であった。更に、２４日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）はそれぞれ、２０４±３２、４３７±３８、及び３１８±６８ｍｍ３であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群は、２４日目に溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に腫瘍容積及びデルタ腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．００１及びｐ＜０．０５）を示した。３６日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均腫瘍容積はそれぞれ、６９０±１８６、１０６２±１５７、及び９７７±２３０ｍｍ３であった。３６日目におけるＣ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）はそれぞれ、６５４±１８７、１０２５±１５９、及び９４０±２３１ｍｍ３であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群は、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に腫瘍容積及びデルタ腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．０５）を示した。全ての治療群の腫瘍容積（ＴＶ）及びデルタ腫瘍容積（ΔＴＶ）の結果については、表４４及び表４５ならびに図２０Ｄ、図２０Ｅ、図２０Ｆ、及び図２０Ｇにまとめている。

２４日目及び３６日目における腫瘍増殖阻害のパーセンテージ（％ＴＧＩ）
２４日目に、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群の％腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）が４９％の最大値を示し、それに続き、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群が２５％の％ＴＧＩ値を示した。それに対し、３６日目のＣ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の％ＴＧＩ値はそれぞれ、溶媒対照ＩｇＧ１群に対して、３６日目において３５％及び８％であった。個々の動物の腫瘍増殖阻害については、表４６にまとめている。

２４日目及び３６日目における相対腫瘍容積（ＲＴＶ）及びデルタ相対腫瘍容積（ΔＲＴＶ）
２４日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均相対腫瘍容積はそれぞれ、７±１、１３±１、及び１０±２であった。Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群のデルタ相対腫瘍容積（ΔＲＴＶ）はそれぞれ、表５に示すとおり、６±１、１２±１、及び９±２であった。治療群、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群は、図２０Ｈ及び図２０Ｉに示すとおり、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に相対腫瘍容積及びデルタ相対腫瘍容積の有意な低下（ｐ＜０．００１）を示した。３６日目における平均相対腫瘍容積は、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群において２０±６、溶媒対照ＩｇＧ１群において２９±５、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群において２７±７であった。それに対し、３６日目において、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群の平均デルタ腫瘍容積（ΔＲＴＶ）はそれぞれ、表４７ならびに図２０Ｊ及び図２０Ｋに示すとおり、１９±６、２８±５、及び２６±７であった。

試験は、試験条件下、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群、溶媒対照ＩｇＧ１群、及びＣ６４８１ ｍＡｂ群において１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内用量（１日目、３日目、６日目、９日目、１２日目、１８日目、２４日目、３０日目、及び３３日目）で使用された試験化合物が、ｈｕＮＯＧ－ＥＸＬマウス内のＰＣ－３腫瘍異種移植片に対する抗がん効果を評価するために試験されたことを明らかとした。溶媒対照ＩｇＧ１群に対する効果の評価を計算した。試験を行った化合物のうち、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群及びＣ６４８１ ｍＡｂ群は、溶媒対照ＩｇＧ１群と比較した際に有意な抗がん効果を示した。腫瘍容積、腫瘍増殖阻害、相対腫瘍容積の統計解析に基づき、Ｃ５５１１ ｍＡｂ群の治療は、Ｃ６４８１ ｍＡｂ群に使用した試験化合物と比較してより優れた抗腫瘍効果を示した。全ての治療群において中程度の体重減少が認められた。

この場合、目下のＨｕＮＯＧ試験において試験したモノクローナル抗体製品が次善のアッセイ条件下で利用されたという点に留意すべきである。この試験に使用したモノクローナル抗体製品は最適に機能するためにヒトＮＫ細胞を必要とするが、今日に至るまで、ヒトＮＫ細胞がｉｎ ｖｉｖｏ条件を模倣し得る動物モデルは利用可能ではない。これらの制約条件を考慮して、マウス内にヒト免疫細胞（ヒトＮＫ細胞を含む）を樹立したＨｕＮＯＧモデルを合理的に使用した。しかしながら、ＮＫ細胞の存在量は有意に低い。それゆえ、ＨｕＮＯＧマウスモデルは、これらの新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体製品を試験するための好適な実験条件を然るべくもたらした。更に、試験の進行に伴い動物が高齢となるにつれてヒト免疫細胞の総数が減少し始めることが認められた。ＨｕＮＯＧ ＰＣ３異種移植モデルにおけるこれらのレベルの腫瘍増殖抑制は驚くべきことであり、本開示の新規抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の非常に優れた効果を示している。

実施例８：抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の特性解析
精製抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を、抗体の複数の固有の特性、例えば、とりわけ、質量、コンフォメーション、翻訳後修飾などを指標とする様々な生物物理学的特性解析及び生化学的特性解析に供した。

単離フラグメントのコンフォメーションを同定するために、非還元条件下でＳＤＳ ＰＡＧＥを実施したが、全ての試料において、インタクト抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を示す１５０ｋＤａの分子量（ＭＷ）に対応する単一の主なバンドが認められた。その一方、還元条件下では、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖及び重鎖と関連する２５ｋＤａ及び５０ｋＤａの２つのバンドが明らかとなった。ＳＤＳ ＰＡＧＥデータを図２１Ａに示す。

ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＢＩＡＣＯＲＥ、ＵＮＩＦＩによるＸｅｖｏ Ｇ２ ＸＳ ＱＴＯＦを備えたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓ Ｂｉｏをベースとした方法を使用して、インタクト質量実験を実施した。Ｘｅｖｏ Ｇ２ ＸＳ ＱＴＯＦを正感度ＭＳのみモードで実施した。前処理を行わずに、上記のサブユニット質量分析と同一のクロマトグラフィー条件（サブユニット質量分析とは異なるグラジエントのみ）及び質量分析条件を使用して、１μｇの試料を解析した。

最も豊富な質量は、図２１Ｂ及び表４９に示すとおり、一般的なグリコシル化ＩｇＧ１モノクローナル抗体に類似しており、その結果、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の分子量が確認された。

酸性ピーク、塩基性ピーク、及び主要ピークを分解したが、以下で表にした、主要ピークと共にそれぞれのバリアントのパーセンテージは、ＷＣＸ－ＬＣ法で測定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体分子内の電荷分布を示している。酸性アイソフォームの相対存在量は一般的に、抗体内の酸化プロセス、脱アミド化プロセス、及びグリコシル化プロセスに起因している。その一方で、Ｃ末端リジンの存在及びアミド化は主に、抗体内の塩基性アイソフォームの形成に影響を及ぼす。ＷＣＸクロマトグラムを図２１Ｃに示す。
酸性種：１０％
主要種：８３％
塩基性種：７％

タンパク質凝集が免疫原性を誘導し得ることが知られているが、少量の凝集物が予測され、この量は、抗体がその製造中、精製中、配合中、及び有効期間中に受け得る負荷条件によって増加する可能性がある。凝集はまた、投与時に活性の低下をもたらし得るまたは副作用をもたらし得る抗薬物抗体（ＡＤＡ）の生成を誘導し得る。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体試料をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で解析したが、代表的なクロマトグラムを以下に示した。図２１Ｄの添付クロマトグラムにおいて認められるように、１００％モノマーが認められ、その結果、試料が凝集物及び／または分解物を何ら含んでいないことが確認された。

治療用モノクローナル抗体の重要な品質特性のうちの１つは、そのグリコシル化プロファイルである。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のグリカン分布を確認するために、ＨＩＬＩＣ Ｎ－グリカンプロファイリング法により試料を解析した。主なグリカン、例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ１Ｆ’、及びＧ２Ｆなどを同定したが、ガラクトシル化グリカンの総パーセンテージは約４６．４４％であることが判明した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する結合試験：
精製可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して結合試験を実施した一方で、ＥＬＩＳＡベースの方法とＳＰＲベースの方法の両方により測定を実施した。

加えて、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との結合相互作用が組換えヒトモノクローナル抗体医薬品の薬物動態特性の１つの決定因子であり、ＩｇＧ分子の結晶性フラグメント（Ｆｃ）領域内の保存された結合モチーフがＦｃＲｎと相互作用することから、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体とＦｃＲｎの間の相互作用を理解するためにＳＰＲをまた採用した。

ＥＬＩＳＡ；
ＣＨＯ細胞培養系を使用して可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を生成及び精製し、ＥＬＩＳＡアッセイ用に抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用した。直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、及びサンドイッチＥＬＩＳＡに例示される様々なＥＬＩＳＡフォーマットを使用して、方法を最適化した。最終的に、最適化したＥＬＩＳＡアッセイは、抗原をビオチン部分で標識した、プロテインＡをコーティングしたプレートをベースとしていた。（０．０５％ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＤＰＢＳ）中の０．５％ＢＳＡ希釈バッファーを用いて、０．０１μｇ／ｍＬから６２．５μｇ／ｍＬの範囲の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体希釈溶液を調製した。

プロテインＡでコーティングしたウェルを２００μＬの洗浄バッファー（０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＤＰＢＳ）で３回洗浄した。それぞれの抗体希釈溶液の１００μＬをウェルに加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で９０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで４回すすいだ。前述したとおりに標識を実施した１００μＬの異なる濃度のビオチン化抗原をそれぞれのウェルに加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で６０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで４回すすいだ。１００μＬの１：５０００希釈ＨＲＰ標識ストレプトアビジンを加えてから、プレートをオービタルシェーカー上、室温で６０分間培養した。それぞれのウェルを２００μＬの洗浄バッファーで５回すすいだ。１００μｌの１×ＴＭＢを加えてから、プレートを暗黒下、ＲＴで３０分間培養した。３０分後、１００μｌの停止液を加えてから、４５０ｎｍでプレートを読んだ。

更に、ブランクを適切に差し引いてから、Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰＲＩＳＭ ６．０を使用して、吸光度値をプロットして、シグモイド結合に基づく結合モデルにフィッティングした。フィッティングから得たＫＤ値は、精製ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体において１０～１７ｎＭであることが判明した（図２１Ｆ）。統計的信頼度を達成するために実験を少なくとも３回別々に３連で繰り返したが、ばらつきは、信頼区間が９５％以内にありつつ、５％未満であることが判明した。

可溶性ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を用いたＢＩＡｃｏｒｅ結合試験
ＢＩＡＣＯＲＥを使用して、表面プラズモン共鳴により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の特定のモノクローナル抗体との相互作用をモニターした。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のＣＬＥＣ２Ｄ抗原との相互作用の動態パラメータを評価した。この方法を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する潜在的な高親和性モノクローナル抗体をスクリーニングした。異なるモノクローナル抗体により、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対する特異的な親和性が明らかとなった。実験により、１００ｎＭ未満の範囲（例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、または１ｎＭ）の親和性定数が明らかとなった。

ＢＩＡＣＯＲＥ ３０００機器上で抗Ｈｉｓ抗体結合捕捉化学反応を使用して、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の間のＣＬＥＣ２Ｄ抗原結合動態試験及び親和性結合試験を実施した。Ｈｉｓ Ｃａｐｔｕｒｅキット（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＣＭ５チップ表面上に約１８００のＲＵで固定した。ＣＬＥＣ２Ｄ抗原をＣＭ５チップ表面に結合した抗Ｈｉｓ上に約２００μｇ／ｍＬの濃度で捕捉したが、抗原の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含む泳動バッファーを用いて実施した。それに続き、それぞれ３分間及び２５分間の結合時間及び解離時間で、１～１００μｇ／ｍＬの範囲の濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を通過させた。抗体の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施した。それぞれ参照フローセルシグナル及びブランクから、得られた応答曲線（図２１Ｇ）を適切に差し引いてから、１：１：１ラングミュア結合にフィッティングすると、約１０^９Ｍ－１の推定ＫＤがもたらされた。

ＦｃＲｎ結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーアッセイは多くの場合、ＦｃＲｎと抗体医薬品の間の相互作用を特性決定するために使用される。試験は、ＦｃＲｎが、ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン境界において、ＩｇＧの結晶性フラグメント（Ｆｃ）内の結合モチーフとｐＨ依存的に相互作用することを示している。この相互作用のｐＨ依存性は、ＩｇＧ分子の長い血清中半減期を維持するのに不可欠である。具体的には、内皮細胞のエンドソーム（ｐＨ約６．０）において、ピノサイトーシスにより内部移行したＩｇＧは、ＦｃＲｎに結合してＩｇＧ－ＦｃＲｎ複合体を形成し、ＩｇＧ－ＦｃＲｎ複合体は、その後、細胞表面へと輸送され、そこで、ＩｇＧは生理学的ｐＨ（約７．４）の循環血液へと再放出される。これによりＩｇＧのリソソーム分解が防止される。組換えヒトモノクローナル抗体（ｒｈｕｍＡｂ）医薬品において、ＦｃＲｎ－ｒｈｕｍＡｂ結合相互作用は、薬物動態（ＰＫ）特性の重要な決定因子であり、ＦｃＲｎ結合モチーフの標的化組換えにより、患者における抗体医薬品のより少ない頻度の投与が可能となり得る。ＦｃＲｎ結合親和性と抗体半減期の間に相関があることを複数の研究が示唆しているが、このような相関の欠如についてもまた報告されている。

ＢＩＡＣＯＲＥ ３０００機器を使用して、Ｈｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎと抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の間の結合動態試験及び親和性結合試験を実施した。Ｈｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＣＭ５チップ表面上に約３００のＲＵで固定した。アミンカップリングによりＨｕｍａｎ ＦｃＲｎ／ＦＣＧＲＴ ＆ Ｂ２Ｍ Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ ＰｒｏｔｅｉｎをＣＭ５チップ表面上に約１μｇ／ｍＬの濃度で捕捉したが、タンパク質の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を含む泳動バッファーを用いて実施した。それに続き、ｐＨ５．９とｐＨ７．４の両方で、０．０３１５～０．５μＭの範囲の濃度の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を通過させた。抗体の希釈は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施した。応答曲線から参照可能なように、ｐＨ７．４において認められた結合はなく（図２１Ｈ）、その一方で、ｐＨ５．９において応答がモニターされた（図２１Ｉ）。それぞれ参照フローセルシグナル及びブランクから、得られた応答曲線を適切に差し引いてから、１：１：１ラングミュア結合にフィッティングすると、約１．８８×１０^６Ｍ－１の推定ＫＤがもたらされた。中性ｐＨにおける結合がないことにより抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が血流へと再放出される可能性が上昇し得ると結論付けることができた。

実施例９：複数の疾患適応症に対する診断ツール／予後判定マーカーとしての抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体
上位の結合物質を診断用抗体として選択するために、全ての高結合抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体をスクリーニングした。ＰＣ３腫瘍細胞株を用いた抗原結合アッセイにより、４つの高結合抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体のうちの１つを選択した。

ＣＬＥＣ２Ｄ抗原を発現する腫瘍細胞をトリプシン処理により回収した。Ｖｉ－ｃｅｌｌ ＸＲ自動細胞カウンターを用いて細胞カウントを取得した。細胞を１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけた。ペレットを１ｍｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに５０，０００の細胞をアリコートした。１μｇのＣ２７７９、Ｃ２４３８、Ｃ０９４９、Ｃ２５４３をそれぞれのウェルに加えてから、室温（２５℃）で３０～６０分間培養した。プレートを１４００～１５００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、上清を吸引し、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで細胞を洗浄した。２．５ｍｌの２％ＢＳＡをＤＰＢＳで５０ｍｌに希釈した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを二次抗体として使用した。１：１００希釈の二次抗体をＤＰＢＳで調製してから、それぞれのウェルに１００μｌを加えた。全ての関連実験用に、二次抗体、ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲートを、１：１００の希釈で対照として使用した。プレートを暗黒下、室温（２５℃）で３０分間培養した。細胞を０．１％ＢＳＡで洗浄してから、１００μｌの１％ＢＳＡ中に再懸濁させた。試料をフローサイトメトリーで解析した。

その他の抗ＣＬＥＣ２Ｄクローンと比較した際の、ＰＣ３上の表面発現ＣＬＥＣ２Ｄに対して認められた結合の最大パーセンテージゆえに、Ｃ０９４９を診断用抗体試薬として選択し（図２２Ａ）、更に、様々な腫瘍細胞株上のＣＬＥＣ２Ｄ抗原を検出することを目的とした。

前立腺癌細胞株の中で、２２ＲＶは、二次抗体対照と比較して５倍高い、最も高い抗原発現を示した（図２２Ｂ）。更に、図２２Ｃに示すいくつかの疾患適応症の複数種の腫瘍細胞株用の抗原結合アッセイに、Ｃ０９４９に限定されない診断用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用した。

様々な抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを使用して、前立腺癌細胞株を含む複数種のがん細胞株において認められた効率的かつ高感度の結合は、上記分子の診断用試薬／予後判定用試薬としての候補資格を強力に支持するものである。

抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の臨床展望
疾患関連性：前立腺癌
ＴＣＧＡ解析
前立腺癌患者におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルに加えて疾患進行に関与する遺伝子についての現状の理解を向上させるために、Ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｏｍｅ ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）データ、転移性前立腺癌を解析した。

ＰＲＡＤプロジェクトはＴＣＧＡの前立腺癌プロジェクトであり、５００のがん症例のデータを含有している。解析を行うデータの適切な供給源を、ＨＴＳｅｑカウントデータを含む遺伝子発現定量、ｍｉＲＮＡ発現定量、及びアイソフォーム発現定量に限定した。表５０は、目的のデータカテゴリーからダウンロードするためにアクセス可能なデータにおける、上記の特定のファイルの存在における症例面での分類を示している。

ＴＣＧＡデータ－トランスクリプトームプロファイリング
トランスクリプトームプロファイリングデータのカテゴリーは、遺伝子のカウント、ｍｉＲＮＡ発現、及びアイソフォーム発現を含有している。ＴＣＧＡに寄託された５００の症例のうち、４９８が原発性腫瘍組織と関連するデータを有している一方で、５２の症例は正常組織と関連する発現データを有している。ファイルは、遺伝子のＥｎｓｅｍｂｌ ＩＤ及びそれぞれの症例内における遺伝子のカウントによって表される、６０４８３の遺伝子及びそのバリアントのリストである。

ＴＣＧＡデータ－転移性症例の同定
５００のＴＣＧＡ ＰＲＡＤプロジェクト症例を解析して、転移性前立腺癌の症例と同定させ得る特性を示す症例を同定した。合計２８９の症例を転移性と同定し、この同定は重要なパラメータに基づいて行われたが、その他のＴＣＧＡ資料では、とりわけ、パラメータであるグリーソンスコア及び処方薬剤を列挙している。２８９のうちの１８のみが適切な正常組織データを有していたが、この解析が疾患の前後における発現レベルの変化と関連していることから、その他の遺伝子のベースライン値、正常データを同様に確立することが必要であった。このことは、全５２の正常組織データを調査することによって達成されたが、これらのデータを使用して、それぞれの症例に由来するそれぞれの遺伝子の全５２の値を考慮に入れて、外れ値を除去してから、遺伝子の「正常ベースライン」値を計算することによって、ベースラインファイルを作成した。正常組織カウントを欠く症例では、比較解析用にベースラインファイルを使用した。

ＴＣＧＡデータ－転移性症例の部分群
転移性症例同定の基準としての役割を果たす同一の重要なパラメータをまた使用して、データを、その他の部分群、例えば、がんのステージ及び目下の治療レジメンなどへと分離したが、このデータを使用して、部分群中におけるＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルを解析した。

続いて、ＣＬＥＣ２Ｄ遺伝子の発現をモニターしたが、プロジェクトに由来する全ての関連するＦＰＫＭファイルをダウンロードしてＣＬＥＣ２Ｄ発現で詳細に検索した。ＦＰＫＭファイルは、腫瘍発現ファイルで、一部の例においては、正常組織発現ファイルで構成されていた。両方のセットを別々に使用して、正常症例及び組織症例中におけるそれぞれのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現の範囲を計算した。加えて、発現値の正規分布を仮定してから平均から２標準偏差超離れた値を破棄することにより、データから外れ値を除外した。

がんにおけるＣＬＥＣ２Ｄの役割をより適切に理解するために、正常組織試料及び腫瘍組織試料における遺伝子の相対発現レベルを解析した。この解析は、特定のがん／症状の全ての症例データを収集して、それぞれのファイルからＣＬＥＣ２Ｄ発現値を抽出してから、値のセットを解析することにより実施した。それぞれの部分集合において、最小値、最大値、及び四分位数値を調査することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プロファイルの「分散」をプロットした。図２３Ａから参照可能なように、ＣＬＥＣ２Ｄは、異なる部分集合症状、例えば、とりわけ、転移、腫瘍ステージ、及び受けた治療などにおいて認められた発現レベルの点から、顕著な存在に合致していると考えられる。

誘導駆動性の発現上昇
異なる腫瘍細胞株の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを測定するために、最初に、ＣＬＥＣ２ＤトランスフェクトＨＤＣＨＯ（Ｃ４５４８）の表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現を調査してから、市販の抗ＣＬＥＣ２Ｄ（４Ｃ７）抗体を使用することにより、トランスフェクト細胞上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現の分布を観察した。ＣＬＥＣ２Ｄの翻訳が様々な種類の誘導によって大いに調節され得ると仮定して、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣまたはＰＢＭＣの上清のいずれか）などの複数の誘導因子、または前立腺腫瘍細胞株（ＰＣ３）上のＮＫ細胞の活性化因子（例えば、ＬＰＳ）で、様々な前立腺癌細胞型を誘導してから、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルに対する影響をモニターした。様々な誘導因子による処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた。

誘導を行っていない前立腺腫瘍細胞株のうち、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株、すなわち、ＰＣ３及びＤＵ１４５は、非ＣＲＰＣ細胞株、すなわち、ＬＮＣａｐ及び２２ＲＶ１と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ表面発現を示していたが、ＣＬＥＣ２Ｄは、限定するわけではないがＣ２６８５クローンに例示される新規抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによって精査した（図２３Ｂ）。非誘導条件において得られた観察結果を拡張して、治療用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体、例えば、限定するわけではないが、Ｃ２６８５などを使用して、誘導因子の有無における発現レベルの変化を理解した。次に、様々な処理を行った再の全ての前立腺腫瘍細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルの変化を調査するために、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣもしくはＰＢＭＣの上清または単離ＮＫ細胞または単離Ｔ細胞のいずれか）またはＮＫ細胞の活性化因子／誘導因子（ＬＰＳまたはポリＩ：ＣまたはＩＦＮγのいずれか）と共に、前立腺腫瘍細胞を培養してから、Ｃ２６８５抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することによってＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを調査した。処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた（図２３Ｃ）。前立腺腫瘍細胞株のうち、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株、すなわち、ＰＣ３、及び非ＣＲＰＣ細胞株、すなわち、ＬＮＣａｐは、上記誘導因子で処理したＤＵ１４５及び２２ＲＶ１と比較して、処理を行った際のＣＬＥＣ２Ｄ表面発現の更なる増強を示していた（図２３Ｃ）。

全てを考慮して特に前立腺癌に焦点をあてると、細胞株、例えば、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）細胞株（例えば、ＰＣ３及びＤＵ１４５など）及び非ＣＲＰＣ細胞株（例えば、ＬＮＣａｐ及び２２ＲＶ１など）などにより、腫瘍細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の有意な発現レベルが明らかとなり、その発現レベルは、複数のＴＬＲ処理を含む様々な処理により更に上昇した。本明細書で使用する全ての前立腺癌細胞株が前立腺癌疾患の特定のステージまたは症状を示しＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルと関連し得ることから、細胞株の選択は戦略的であった。本開示において記載及び提示するとおり、前立腺癌細胞株、ＬＮＣａｐ、ＤＵ１４５、２２ＲＶ１、及びＰＣ３は、低度、中程度、及び高度の転移の潜在能を有しており、高い細胞表面ＣＬＥＣ２Ｄ発現を示すＰＣ３が、同定した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用することでＣＬＥＣ２Ｄ－ＣＤ１６１軸による阻害シグナルが遮断される際にＮＫ細胞によって効果的に殺傷されることから、ＣＬＥＣ２Ｄは、前立腺癌における臨床的に適切な標的として確立されている。

実施例１０：がん組織におけるＣＬＥＣ２Ｄ抗原の発現
ＣＬＥＣ２Ｄを多機能性タンパク質として説明し、その受容体であるＣＤ１６１とのその相互作用の機能的結果を十分に説明してきたが、ＣＬＥＣ２Ｄ分布の包括的な特性解析が必要である。ＣＬＥＣ２Ｄは、異なる腫瘍細胞株において活性化されており、ヒトの様々な免疫細胞上に存在していることが認められた。ＣＬＥＣ２Ｄは、いくつかの健康なヒト組織において検出され得、免疫特権部位において非常に広く認められ得る。この情報を使用して、リンパ球間のクロストーク及び免疫寛容におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割に重きを置いて仮説を立てる。

組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）は、免疫組織化学及び蛍光ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含む組織学ベース検査試験を評価するためのハイスループット技術に相当する。直接標識または間接標識のいずれかを行った抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を免疫蛍光染色用の一次抗体として使用し、検出用の標識二次Ａｂを使用する。それにより、様々ながん及び様々なステージのがんとの関係におけるＣＬＥＣ２Ｄの役割を同定する。

加えて、組織に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原とヒト免疫系の相互作用を理解するために、３Ｄ細胞培養法を使用して、腫瘍細胞上、及びＢ細胞、Ｔ細胞、単球、及びＮＫ細胞などの免疫細胞型上に発現した、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原と相互作用パートナー（ＣＤ１６１を含む）の間のクロストークを確認する。

添付図面を参照しながら本開示の実施形態について記載してきたが、本開示は正確な実施形態に限定されず、当業者は、添付の特許請求の範囲において定義する本開示の範囲または趣旨を逸脱することなく、それら実施形態において様々な変更及び修正を実施してもよいということを理解すべきである。

ＵＳ Ｂｉｏｍａｘ製のヒト組織マイクロアレイ（ｃａｔ番号ＴＰ２４２ｄ）、ＴＮＭ及び病理学的グレードを含む、正常組織を含む上位４タイプのがん（結腸癌、乳癌、肺癌、及び前立腺癌）組織アレイ（２４症例／２４コア）を使用して、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ０６９４及びＣ２６８５の反応を解析した。前立腺癌試料は以下のとおりである。

ＣＣ１プロトコルとＣＣ２プロトコルの両方に従い、１：１０希釈～１：３０希釈の異なる濃度の抗体で、ＩＨＣ染色を実施した。データは、Ｃ２６８５により強力な反応及び陰性領域からのより少ない阻害が明らかになったことを示唆している。結果を図２３Ｄに記載する。

ＴＣＧＡデータ－全てのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現
全てのＴＣＧＡがんプロジェクトを試験することにより、全がん解析を実施した。プロジェクトに由来する全ての関連するＦＰＫＭファイルをダウンロードしてＣＬＥＣ２Ｄ発現で詳細に検索した。ＦＰＫＭファイルは、腫瘍発現ファイルで、一部の例においては、正常組織発現ファイルで構成されていた。両方のセットを別々に使用して、正常症例及び組織症例中におけるそれぞれのがんのＣＬＥＣ２Ｄ発現の範囲を計算した。加えて、発現値の正規分布を仮定してから平均から２標準偏差超離れた値を破棄することにより、データから外れ値を除外した。

それぞれの部分集合において、最小値、最大値、及び四分位数値を調査することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ発現プロファイルの「分散」をプロットした。図２４Ａから参照可能なように、ＣＬＥＣ２Ｄは、とりわけ、上の表に列挙した異なるがん症状において認められた発現レベルの点から、顕著な存在に合致していると考えられる。

結合試験：フローサイトメトリー及びイメージング
前立腺癌細胞株において観察されたことから、とりわけ、Ｃ２６８５、Ｃ５５１１に例示される同定抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンを使用して、観察をその他の腫瘍細胞株へと同様に拡大した。結合をまた、フローサイトメトリーと共焦点顕微鏡の両方を用いてモニターしたが、対応する実験条件は上の記載に類似している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を使用したフローサイトメトリー観察については、以下の表５３にまとめている。

理解可能なように、様々ながん細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルは、低度から高度または中程度から高度のいずれかであることが判明した。

同様に、新規抗体の疾患関連性を確認するために、本発明者らは、共焦点顕微鏡を用いて、異なる腫瘍細胞株、例えば、肝臓癌腫癌、神経膠腫、卵巣腺癌、肺癌、骨髄腫、リンパ腫、及び乳癌などの表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルを確認した。抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ２６８５を使用して試験したがん細胞株にわたり、様々なレベルのＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた（図２４Ｂ）。肝細胞癌（ＨｅｐＧ２）、乳癌（ＢＴ４７４）、及び神経膠腫（ＬＮ２２９）の表面上において支配的なＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた一方で、卵巣腺癌（ＳｋｏＶ３）、骨髄腫（ＮＣＩ－Ｈ９２９）、及びリンパ腫（Ｒａｍｏｓ）においては、極めて低い発現が認められた、または発現が認められなかった（図２４Ｂ）。

これらのがん細胞株におけるＣＬＥＣ２Ｄの翻訳の調節を確認するために、前立腺腫瘍細胞株と同様に、全ての腫瘍細胞株（ＨｅｐＧ２、ＢＴ４７４、ＬＮ２２９、ＳｋｏＶ３、ＮＣＩ－Ｈ９２９、及びＲａｍｏｓ）に対して、様々な誘導因子、例えば、エフェクター細胞（全ＰＢＭＣまたはＰＢＭＣのスープのいずれか）など、またはＮＫ細胞の活性化因子（例えば、ＬＰＳ、ＩＦＮ－γ、ポリＩ：Ｃ）で誘導を行ってから、ＣＬＥＣ２Ｄの発現レベルをモニターした。処理を行うと、未処理標的細胞と比較して高いＣＬＥＣ２Ｄ発現レベルが認められた（図２４Ｃ）。興味深いことに、ＳｋｏＶ３細胞、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞、及びＲａｍｏｓ細胞において処理後に高いＣＬＥＣ２Ｄ発現が認められた一方で、未処理細胞においては、発現が認められなかった、またはより少ない発現が認められた（図２４Ｃ）。これらの発見は、ＣＬＥＣ２Ｄが、これらの細胞に特定のＴＬＲ刺激が加えられた際に誘導され、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体を使用して標的とすることが可能な、これらのがん症状における潜在的な標的となり得ることを示している。

細胞傷害
製造業者のプロトコルに従い、ＳＫＯＶ３（卵巣癌細胞株）細胞、ＨｅｐＧ２（肝細胞癌）細胞に例示される腫瘍細胞株をＥｆｌｕｏｒで標識してから、０．０４×１０^６の密度で、２４ウェルプレート内の２０％ＤＭＥＭ中に播種した。２４時間後、新たに単離したＰＢＭＣを１：５のＴ：Ｅで加えた。新規モノクローナル抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体Ｃ５５１１を０．５ｍｌのアッセイ反応液中に２００μｇ／ｍｌで加えてから、１４時間培養した。２４ウェルプレートから上清を回収してから、接着細胞をトリプシン処理し、１．５ｍｌチューブ内に回収した。反応用混合液をｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ（１５ｎＭ）と２０分間培養してから、フローサイトメーターで蛍光を検出した。試験試料から対照の細胞死率を引くことにより特定の細胞の死滅比率を測定すると、卵巣（ＳＫＯｖ３）癌細胞株及び肝臓（ＨｅｐＧ２）癌細胞株における有意な細胞傷害が示され（図２４Ｄ）、複数の疾患に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の抗腫瘍活性が示された。

理解可能なように、疾患、例えば、乳癌（ＢＴ４７４）、リンパ腫（ｒａｍｏｓ）、肝臓癌（ＨｅｐＧ２）、前立腺癌（ＰＣ３、ＤＵ１４５、ＬＮＣＡＰ、及び２２ＲＶ１）、神経膠腫（ＬＮ２２９）、卵巣腺癌（ＳｋｏＶ３）、骨髄腫（ＮＣＩ－Ｈ９２９）などと関連するいくつかの細胞株上におけるＣＬＥＣ２Ｄ表面発現をモニターするために使用した単離抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、当領域におけるファーストインクラスである。更に、上記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体によって誘導された細胞傷害は、これらの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が潜在的に、それぞれの疾患に対する治療法として使用され得るという事実を反映している。まとめると、このことはまた、本開示において推測するとおり、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原発現が複数のがん細胞株と関連しており、がん生物学において重要な役割を果たし得るということを意味している。

抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いて実施したリスク緩和試験
タンパク質ベースのバイオ医薬品に対する免疫原性は、薬剤の品質及び患者などの重要な特性を含む、製品に特異的な多数の因子が関与する複雑なプロセスである。これらの重要な品質特性としては、一次配列のバリエーション、宿主細胞特異的翻訳後修飾、宿主細胞タンパク質の存在、配合の変化、凝集、化学修飾（酸化、脱アミド化、またはグリコシル化）、及びタンパク質構造の変化を挙げることができる。特定のタイプの特性の正確な寄与は知られてはいないが、抗体薬物製品の一部の重要な品質特性は、配列ベースの免疫原性リスクを高めることにより、患者の安全性に影響を及ぼすことが示唆されている。Ｔ細胞依存性応答は、臨床における生物学的製剤に対する長期親和性成熟免疫応答の主な駆動因子である。これらとしては、少数の例を挙げると、全血、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ＣＤ８＋－枯渇ＰＢＭＣ、不死化細胞株、自家ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した樹状細胞／単球／マクロファージ、及び人工リンパ節系を使用したアッセイ系が挙げられる。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、サイトカイン分泌、活性化細胞表面マーカーの発現、ＨＬＡ－ＤＲ結合ペプチドの同定、シグナル伝達イベント、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による貪食、及び増殖を含む様々な生物学的効果を、免疫細胞活性化の異なる段階において測定してもよい。指定アッセイのバイオ医薬品開発への適用は、初期開発段階における候補選択から免疫原性リスクに影響を及ぼし得る特定の特性の後期段階における評価までの範囲であり得る。本開示は、免疫原性または関連特性に対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体関連リスクを評価するための試みについて詳細に説明するものである。

リンパ球増殖試験
３つの独立した実験プロトコル、抗体のウェットコーティング、抗体の空気乾燥コーティング、及び高密度ＰＢＭＣの前培養に続く試験抗体を用いた誘導により、リンパ球の増殖を試験した。

抗体のウェットコーティング
１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲のＣ５５１１に限定されない異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照－抗ＣＤ３抗体、抗ＯＫＴ３抗体を、９６ウェル平底プレートのウェルに加えてから、３７℃インキュベータ内で２～３時間培養した。その後、２００μｌのＤＰＢＳでウェルを３回洗浄した。製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに３００００のＰＢＭＣ細胞を播種した。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

抗体の空気乾燥コーティング
１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３を、９６ウェル平底プレートのウェルに加えてから、安全キャビネット内で空気乾燥させた。最適な空気乾燥のために抗体の容量を５０μｌ未満に制限した。製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。ウェルが乾燥すると、合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに３００００のＰＢＭＣ細胞を播種した。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

ＴＣＲ初回刺激用のＰＢＭＣの高密度前培養に続く溶液中の抗体を用いた誘導
ＰＢＭＣ細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、増殖培地中、１×１０＾６細胞／ｍｌ及び１０×１０＾６細胞／ｍｌの密度で、３７℃で４８時間前培養した。４８時間後、製造業者のプロトコルに従いＰＢＭＣをＥｆｌｕｏｒ ６７０生存細胞色素で標識した。合計２００μｌの増殖培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）を入れたそれぞれのウェルに１×１０＾６ＰＢＭＣ細胞／ｍｌを播種した。１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる濃度の試験抗体、及び１μｇ／ｍｌの陽性対照抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３を、ＰＢＭＣを含有するウェルに加えた。０日目に試料を回収してフローサイトメトリーで解析した。細胞を、５％ＣＯ２インキュベータ内、３７℃で４日間培養した。４日目に、試料を回収し、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートで染色してから、フローサイトメトリーで解析した。

フローサイトメトリーのための試料処理
ＰＢＭＣ試料を２００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけた。上清を廃棄してから、抗ＣＤ４抗体－ＦＩＴＣコンジュゲートと共に０．５％ＢＳＡを含む１００μｌのＤＰＢＳ（最終反応における１：１００希釈）中に細胞を再懸濁させた。細胞を暗黒下、３０分間培養した。その後、細胞を２００ｒｐｍ、５分間の遠心分離にかけてから、上清を除去して、０．５％ＢＳＡを含む１００μｌのＤＰＢＳ中に再懸濁させた。

抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理を陽性対照として使用した図２５Ａ、図２５Ｂ、及び図２５Ｃから観察可能なように、抗ＯＫＴ３抗体で処理したＰＢＭＣは、Ｅｆｌｕｏｒ生存色素を複数の娘集団（ヒストグラム上の矢印によって示される）に分割することによって観察されたとおり、リンパ球増殖を示した。未処理ＰＢＭＣ対照及び１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した試験試料において４日間の培養後に認められた単一集団の出現は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体がリンパ球増殖を何ら誘導しなかったことを示している。この観察結果は、抗体のウェットコーティング（図２５Ａ）、抗体の空気乾燥コーティング（図２５Ｂ）、及び高密度ＰＢＭＣ前培養に続く試験抗体を用いた誘導（図２５Ｃ）である３つの独立した試験プロトコルと一致していた。複数の健康ドナーに由来するＰＢＭＣを試験したが、得られた結果は一致していた。

分泌サイトカイン：ＩＦＮ－γ及びＩＬ２の測定
目下のセグメントにおいて前述したとおり、リンパ球増殖アッセイによる理解に加えて、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体が任意のサイトカイン、例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ２などを誘導するかまたは誘導しないかを確認することが不可欠である。分泌サイトカイン、例えば、限定するわけではないが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ２などの測定をＥＬＩＳＡベースの検出法により実施したが、上で詳述した様々な実験構成／条件、例えば、高密度、ウェットコーティングから回収した上清を、その後の定量用に２４時間間隔で使用した。全ての実験において、使用したそれぞれの抗体の濃度は、抗ＯＫＴ３抗体（１ｕｇ／ｍｌ）及び抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローン（１００ｕｇ／ｍｌ）、例えば、Ｃ５５１１、Ｃ６４８１、Ｃ４６０８などである。それに続き、抗ＯＫＴ３抗体処理試料から得た上清を１：４の比率で希釈し（１５０ｕｌの１０％ＲＰＭＩ １６４０を加えることによって５０ｕｌの上清を希釈した）、これに対し、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理試料は、上清の更なる希釈を何ら行うことなく直接使用した。同時に、サイトカインＩＬ２を測定するための試料をウェットコーティング法を用いて調製した。ここで、抗ＯＫＴ３抗体処理試料を１：１０の比率で希釈し（２２５ｕｌの１０％ＲＰＭＩ １６４０を加えることによって２５ｕｌを希釈した）、その一方で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体処理試料から回収した上清を直接使用した。処理を行っていないＰＢＭＣから得た上清を、ＩＦＮ－γまたはＩＬ２のいずれか用の対応する実験に対する対照として使用した。

図２５Ｄから参照可能なように、抗ＯＫＴ３抗体で処理したＰＢＭＣが、上清中における１１５５ｐｇ／ｍＬの濃度の最も高いレベルのＩＦＮγ分泌を示した一方で、試験した抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、任意の抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンと関連して、ＩＦＮγ産生を３０ｐｇ／ｍＬの濃度を越えて上昇させなかった（図２５Ｄ）。同様に、ＩＬ２測定では、抗ＯＫＴ３抗体が誘導した分泌上昇が１２１．５０ｐｇ／ｍＬであることが判明した一方で、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は４．７ｐｇ／ｍＬ超のＩＬ２分泌を生じさせなかった（図２５Ｅ）。まとめると、同定した治療用抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体で処理した際に認められた任意のＴリンパ球娘集団の欠如、及び更に、ＩＦＮ－γとＩＬ２の両方において認められた極めて少ない量のサイトカイン分泌により判定すると、免疫原性反応に対する低い可能性を有している。

ラット／非ヒト霊長類において抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体を用いて実施した安全性試験
治療用モノクローナル抗体を用いた毒性試験は、薬理学的に適切な種を用いて実施する必要があるが、それは、ヒトにおいて予測されるのと同様に、モノクローナル抗体が認識する標的抗原を発現することと抗体結合後に類似した薬理学的応答を誘発することの両方が生じる種を意味する。とりわけ、比較的強力なエフェクター機能を有する抗体、例えば、ＩｇＧ１などにおいて、ヒトへと拡大可能な動物におけるモノクローナル抗体の比較可能なエフェクター機能を示す必要がある。それゆえ、ヒトの安全性を予測するために利用可能な最も感受性の高い動物モデルを利用する。しかしながら、交差反応性または交差反応性の欠如は、配列の詳細なｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析、及びヒト抗原タンパク質または標的エピトープと毒性試験に使用する一般的な種における同等タンパク質の間の構造的理解により、予測することができる。利用可能な場合、２つの適切な種（１つはげっ歯類、１つは非げっ歯類）を用いて毒性評価を実施すべきことが望ましい一方で、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、例えば、カニクイザルなどは、その使用を倫理的に正当化するための最も好適な種及び霊長類の使用を最小化する戦略として賛美される。

ヒト、ラット、マウス、及びカニクイザルに由来するＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログの比較配列解析のｉｎ ｓｉｌｉｃｏ理解は、ヒトＣＬＥＣ２Ｄ抗原が、カニクイザルＣＬＥＣ２Ｄホモログと最も高い配列相同性（＞９０％）を共有している一方で、ラットホモログ及びマウスホモログに対する配列相同性は約７０％未満であることを示した。しかしながら、抗体パラトープ配列と接触する重要な残基の存在を同定するために、配列を詳細に調査した。上記の実施により、全ての種が、保存されており抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体と相互作用するのに場合により利用可能な接点及び相互作用アミノ酸残基のうちの少なくとも７０％を含有していることが示された。そのため、ラット種、マウス種、及びカニクイザル種から表面発現ＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログを作製することにより、抗ＣＬＥＣ２Ｄモノクローナル抗体の結合を理解するための努力を試みた。フローサイトメトリーベースの方法を採用して、抗体とＣＬＥＣ２Ｄ抗原ホモログの間の結合を評価した。

配列番号８８６、９１０、９１１、９１８と関連し得るが、それぞれの種に由来する全長ＣＬＥＣ２Ｄ相同配列を合成してから、ｐＣＤＮＡ３．１哺乳動物発現ベクターにクローニングし、フローサイトメトリーを用いた結合試験用に、そのベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクションした。

相同性試験用の、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントの構築物を用いたトランスフェクション
９０％超の生存能のＣＨＯ懸濁細胞を、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原バリアントの発現用に使用した。１００ｍｌ容量のトランスフェクション用に、１．２５×１０＾８細胞を取り出した。細胞を１０００～１４００ｒｐｍ、４～５分間の遠心分離にかけてから、廃培地をデカントし、２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ培地中に再懸濁させた。Ｐｌｕｓ（商標）試薬を含むＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸを使用して、ＤＮＡ構築物をトランスフェクションした。５０～１００μｇのそれぞれのｐＣＤＮＡ３．１構築物及び５０～１００μｌのＰｌｕｓ（商標）試薬を、１：３～１：６のＤＮＡ：トランスフェクション試薬比率で使用した。ＤＮＡとＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸの複合体を２５ｍｌのＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ中で調製してから、複合体形成用に２０～２５℃で５分間培養した。トランスフェクション混合液を細胞懸濁液にゆっくりと加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で４～６時間培養した。５０ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を細胞に加えた。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの２～３日後、２００ｍｌのＰｏｗｅｒ ＣＨＯ２ ＣＤ増殖培地を加えてから、２００ｍＭのストックからＧｌｕｔａｍａｘを加えて、２ｍＭの終濃度を得た。細胞を、１００～１２０ＲＰＭの５％ＣＯ２振盪インキュベータ内、３７℃で培養した。トランスフェクションの３日後～６日後にフローサイトメトリーを用いて、細胞の細胞表面抗原結合を解析した。

図２６から参照可能なように、限定するわけではないが、抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体クローンＣ５５１１、Ｃ４６０８は、ヒトＣＬＥＣ２Ｄ抗原に対して生じ、２～４倍のＭＦＩの範囲の類似した結合を示した。このことは、げっ歯類種と非ヒト霊長類種の両方におけるＣＬＥＣ２Ｄホモログに対する抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の広範な特異性を示している。

Claims (99)

1. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、
   ａ．配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｂ．配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｃ．配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｄ．配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｅ．配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
   ｆ．配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
   ｇ．配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、ならびに、
   ｈ．配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％同一、または１００％同一な配列、
   からなる群から選択される配列を含み、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣ型レクチンドメインファミリー２メンバーＤ（ＣＬＥＣ２Ｄ）に結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
2. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、
   ａ．配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｂ．配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｃ．配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｄ．配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｅ．配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｆ．配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
   ｇ．配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   からなる群から選択される配列を含み、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
3. ａ．
   ｉ．配列番号：４６、配列番号：６５、配列番号：５９、及び配列番号：９９から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｉ．配列番号：５７、配列番号：９１、配列番号：９８、配列番号：８４、配列番号：５８、配列番号：８８、配列番号：９６、配列番号：４７、配列番号：１７、及び配列番号：８から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｉｉ．配列番号：９３、配列番号：５３、配列番号：９５、配列番号：２３、配列番号：１０３、及び配列番号：７から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｖ．配列番号：４５、配列番号：１５、配列番号：５１、配列番号：４４、配列番号：７３、配列番号：３６、配列番号：７７、配列番号：５０、及び配列番号：６から選択される配列に対して少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｖ．配列番号：９７、配列番号：１６、配列番号：７６、配列番号：９、配列番号：８９、配列番号：１０７、配列番号：６８、配列番号：２９、配列番号：６７、配列番号：７４、配列番号：３２、配列番号：８１、配列番号：１０６、配列番号：３１、配列番号：６２、配列番号：４８、配列番号：７５、配列番号：１２、配列番号：１０２、配列番号：５４、配列番号：８０、配列番号：２６、配列番号：３０、配列番号：９２、配列番号：１０８、及び配列番号：７９から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｖｉ．配列番号：１０５、配列番号：１０１、配列番号：４、配列番号：７２、配列番号：２８、配列番号：６４、配列番号：２５、配列番号：６０、配列番号：５５、配列番号：５２、配列番号：２７、配列番号：４３、配列番号：７０、配列番号：７１、配列番号：１４、配列番号：８５、配列番号：１３、配列番号：６１、配列番号：４２、配列番号：３９、配列番号：１０、配列番号：４９、配列番号：２４、配列番号：４０、配列番号：６３、配列番号：７８、配列番号：２、配列番号：９４、及び配列番号：５から選択される配列に対して少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｖｉｉ．配列番号：１１、配列番号：３５、配列番号：８６、配列番号：２２、配列番号：６９、配列番号：４１、配列番号：３、配列番号：６６、配列番号：３７、配列番号：５６、配列番号：２１、配列番号：３８、配列番号：９０、配列番号：１００、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：８３、配列番号：１、及び配列番号：１９から選択される配列に対して少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
   ｖｉｉｉ．配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：８７、配列番号：８２、及び配列番号：１０４から選択される配列に対して少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   から選択される配列を含む重鎖、ならびに、
   ｂ．
   ｉ．配列番号：２１８、配列番号：２４９、配列番号：２３０、配列番号：２７９、配列番号：３１６、配列番号：２３７、配列番号：３２２、配列番号：２２５、配列番号：３１８、配列番号：２３３、配列番号：３０５、配列番号：２８０、配列番号：２８３、配列番号：２４２、配列番号：２８６、配列番号：２９７、配列番号：３０９、及び配列番号：２４６から選択される配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｉ．配列番号：２２２、配列番号：２５８、配列番号：２１９、配列番号：３１３、配列番号：２９４、配列番号：３０３、配列番号：３１７、配列番号：２７３、配列番号：２６６、配列番号：３１５、配列番号：２５７、配列番号：２８８、配列番号：３０１、配列番号：２２１、配列番号：２４０、配列番号：２９９、配列番号：２４７、配列番号：２６３、及び配列番号：２７４から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｉｉ．配列番号：２３１、配列番号：２５０、配列番号：２６０、配列番号：２２６、配列番号：２７１、配列番号：２５６、配列番号：２７２、配列番号：２７８、配列番号：３０２、配列番号：３２０、配列番号：２９５、配列番号：２９２、配列番号：２２９、配列番号：２６４、配列番号：２５２、配列番号：２６７、配列番号：３０４、配列番号：３００、配列番号：３１１、及び配列番号：３２４から選択される配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｉｖ．配列番号：２５９、配列番号：２３９、配列番号：２８１、配列番号：２２８、配列番号：２１７、配列番号：２２７、及び配列番号：２５１から選択される配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｖ．配列番号：３０７、配列番号：２６２、配列番号：２５３、配列番号：２７６、配列番号：３２３、配列番号：２３４、配列番号：２６１、配列番号：３１２、及び配列番号：２９０から選択される配列に対して少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   ｖｉ．配列番号：２５４、配列番号：２８９、配列番号：２３８、配列番号：２６８、配列番号：２４８、配列番号：２８４、配列番号：２４４、配列番号：３１０、配列番号：２４３、配列番号：２８５、配列番号：２２０、配列番号：２５５、配列番号：２９３、配列番号：２９８、配列番号：２３５、配列番号：３１９、配列番号：２４５、配列番号：２２４、配列番号：２９１、配列番号：２７７、及び配列番号：２３２から選択される配列に対して少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、ならびに、
   ｖｉｉ．配列番号：２８２、配列番号：３０８、配列番号：２８７、配列番号：３２１、配列番号：２３６、配列番号：２６５、配列番号：２７０、配列番号：２７５、配列番号：３０６、配列番号：２９６、配列番号：２４１、配列番号：３１４、及び配列番号：２２３から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、または１００％同一な配列、
   から選択される配列を含む軽鎖、
   を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
4. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
5. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
6. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、配列番号：１～１０８のいずれか１つから選択される配列を含み、前記軽鎖は、配列番号：２１７～３２４のいずれか１つから選択される配列を含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
7. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、
   （ｉ）配列番号：４３３～４８５から選択される配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
   （ｉｉ）配列番号：４８６～５４６から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、及び、
   （ｉｉｉ）配列番号：５４７～６５３から選択される配列を含むＨＣ ＣＤＲ３、
   を含み、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
8. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記軽鎖は、
   （ｉ）配列番号：６５４～７２６から選択される配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
   （ｉｉ）配列番号：７２７～７８３から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、及び、
   （ｉｉｉ）配列番号：７８４～８８５から選択される配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
   を含み、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
9. ａ．配列番号：４３３～４８５から選択されるＨＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：４８６～５４６から選択されるＨＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：５４７～６５３から選択されるＨＣ ＣＤＲ３配列、を含む重鎖、
   ｂ．配列番号：６５４～７２６から選択されるＬＣ ＣＤＲ１配列、配列番号：７２７～７８３から選択されるＬＣ ＣＤＲ２配列、及び配列番号：７８４～８８５から選択されるＬＣ ＣＤＲ３配列、を含む軽鎖、または、
   ｃ．これらの組み合わせ、
   を含む、単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
   前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＣＬＥＣ２Ｄに結合する、
   前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
10. ａ．配列番号：８８６～９０９及び９３０～１００３から選択される配列を含むヒトＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
    ｂ．配列番号：９１８～９２０から選択される配列を含むカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
    ｃ．配列番号：９１１～９１５から選択される配列を含むマウスＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
    ｄ．配列番号：９１０の配列を含むラットＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、及び／または、
    ｅ．配列番号：９１６～９１７から選択される配列を含むイヌＣＬＥＣ２Ｄポリペプチド、
    に結合する、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
11. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
12. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの重鎖アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９Ａの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１～Ｎ２のいずれか１つの軽鎖アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
13. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
14. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変重鎖アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、表９ＡのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の可変軽鎖アミノ酸配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
15. 重鎖及び軽鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記重鎖は、表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の生殖細胞系ファミリーの重鎖フレームワーク領域配列を含み、前記軽鎖は、表９ＢのＡ１、Ｂ１、Ｅ１、Ｐ１、Ｕ１、Ｙ１、Ｅ２、Ｉ２、及びＬ２からなる群から選択される抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体の軽鎖生殖細胞系ファミリーのフレームワーク領域配列を含む、前記単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
16. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ａ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
17. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｂ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
18. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
19. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｐ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
20. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｕ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
21. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｙ１である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
22. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｅ２である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
23. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｉ２である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
24. 前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体は、表９Ａ及び表９Ｂの抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体番号：Ｌ２である、請求項６２から請求項６４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
25. モノクローナル抗体である、請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
26. 受容体へのＣＬＥＣ２Ｄの結合を調節または遮断する、請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
27. 前記受容体はＣＤ１６１受容体を含み、前記ＣＤ１６１受容体は、配列番号：９２１～９２９から選択される配列を含む、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
28. ヒト、マウス、またはキメラである、請求項１から請求項２７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
29. 前記抗原結合フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｓｃＦｖ－ＣＨ３、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、及びディアボディフラグメントからなる群から選択される、請求項１から請求項２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
30. 前記抗体はアフコシル化されている、請求項１から請求項２９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
31. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントはアフコシル化されている、請求項１から請求項３０のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
32. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントは前記抗体領域においてアフコシル化されている、請求項１から請求項３１のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
33. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
34. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
35. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ１ Ｎ～Ａ Ｆｃ領域を含む、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
36. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントはＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント。
37. １００ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトＣＬＥＣ２Ｄに結合する、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
38. ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合し、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないアミノ酸部位からなる、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
39. ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープを認識して結合する別の抗体を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含み、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基と重複する及び／または重複しないのいずれかとなるアミノ酸部位からなる、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
40. アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
41. アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５、またはこれらの組み合わせのいずれかを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープへの、別の抗体の結合を阻害もしくは抑止するまたは競合する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
42. 配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体相互作用アミノ酸残基に対する非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
43. 配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３のアミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つを含む、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の構造的エピトープに結合して、ＣＤ１６１受容体非相互作用アミノ酸残基に対するアロステリックかつ非線形スキャフォールドを構成することにより、ＣＬＥＣ２Ｄ受容体とＣＤ１６１受容体の間の相互作用を遮断する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、請求項１から請求項３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
44. 配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるＣＬＥＣ２Ｄに結合する際に、アミノ酸部位ＡＲＧ１７５、ＴＹＲ１７７、ＧＬＵ１７９、ＡＲＧ１５３、ＡＲＧ８４、ＨＩＳ１９０、ＡＲＧ１０１、ＧＬＵ１５０、ＧＬＮ１５４、ＴＨＲ１５２、ＧＬＮ１４１、ＳＥＲ１０５、ＡＳＰ１０７、ＡＳＰ９２、ＴＨＲ９３、ＬＹＳ９４、ＬＹＳ１４４、ＧＬＵ１３８、ＣＹＳ１７６、ＧＬＮ１３９、ＡＲＧ１８０、ＳＥＲ１８７、ＬＹＳ１８１、ＰＨＥ１１６、ＡＳＮ９５のうちの少なくとも１つに結合して、単独または組み合わせで、腫瘍殺傷または細胞傷害を誘導する、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列を含む、請求項１から請求項４３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
45. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントで処理した細胞の総数のうちの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％において、細胞傷害を誘導する、請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
46. 請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。
47. 緩衝剤、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、及び防腐剤のうちの少なくとも１つを更に含む、請求項４６に記載の医薬組成物。
48. 配列番号：１０９～２１６から選択されるアミノ酸重鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
49. 配列番号：３２５～４３２から選択されるアミノ酸軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
50. 請求項１、請求項３、請求項４、請求項６、請求項７、及び請求項９から請求項３７のいずれか１項に記載の重鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
51. 請求項２、請求項３、請求項５、請求項６、請求項８、及び請求項９から請求項３７のいずれか１項に記載の軽鎖アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離核酸。
52. 配列番号：１０９～２１６から選択されるポリペプチドをコードする第１の核酸、及び配列番号：３２５～４３２から選択されるポリペプチドをコードする第２の核酸を含む、組成物。
53. 請求項４８から請求項５１のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
54. 請求項４８から請求項５１のいずれか１項に記載の核酸、請求項５２に記載の組成物、または請求項５３に記載のベクターを含む、細胞であって、真核細胞である、前記細胞。
55. 前記真核細胞は哺乳動物細胞である、請求項５４に記載の細胞。
56. 前記哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、請求項５５に記載の細胞。
57. 前記哺乳動物細胞は２９３－６Ｅ細胞またはＤＧ４４細胞である、請求項５６に記載の細胞。
58. 請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する細胞。
59. 疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含む、前記方法。
60. 前記疾患または障害は、前記疾患または前記障害の治療を必要とする対象の様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの特異的または異常発現と関連している、請求項５９に記載の方法。
61. 前記疾患または障害は、前記疾患または前記障害の治療を必要とする対象の様々な細胞表面上におけるＣＬＥＣ２Ｄの高発現と関連している、請求項５９に記載の方法。
62. 前記細胞は免疫細胞である、請求項６０から請求項６１のいずれか１項に記載の方法。
63. 前記免疫細胞はＮＫ細胞である、請求項６２に記載の方法。
64. 前記細胞はがん細胞である、請求項６０から請求項６１のいずれか１項に記載の方法。
65. 前記細胞は微生物に感染した細胞である、請求項６０から請求項６１のいずれか１項に記載の方法。
66. 前記微生物は、細菌、ウイルス、真菌、寄生性微生物、または原虫である、請求項６５に記載の方法。
67. 前記微生物は細胞内細菌である、請求項６６に記載の方法。
68. 前記疾患は関節リウマチである、請求項５９から請求項６７のいずれか１項に記載の方法。
69. 前記対象は、関節リウマチを有することによってもたらされる骨減少を示す、請求項６８に記載の方法。
70. 治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記対象における前記骨減少を遅延または逆転させる、請求項６９に記載の方法。
71. 前記疾患はがんである、請求項５９から請求項６７のいずれか１項に記載の方法。
72. 前記がんは、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、膀胱癌、腎臓癌、食道癌、扁平上皮細胞癌、ブドウ膜黒色腫、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巣癌、肺癌、結腸直腸癌、脳癌、膵臓癌、頭頸部癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、黒色腫、星状細胞腫、胃癌、及び肺腺癌からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
73. 前記がんは、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮細胞癌及び子宮頸腺癌、胆管癌、結腸腺癌、リンパ系腫瘍びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、多形膠芽腫、頭頸部扁平上皮細胞癌、色素嫌性腎癌、腎臓腎明細胞癌、腎臓腎乳頭細胞癌、急性骨髄性白血病、脳低グレード神経膠腫、肝臓肝細胞癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、中皮腫、卵巣漿液性嚢胞腺癌、膵腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、肉腫、皮膚皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、ならびにブドウ膜黒色腫からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
74. 治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記対象における抗腫瘍効果をもたらす、請求項７１から請求項７３のいずれか１項に記載の方法。
75. 治療有効量の前記抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は、前記疾患の徴候または症候を緩和する、請求項５９から請求項７４のいずれか１項に記載の方法。
76. 前記治療有効量の請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＬＥＣ２Ｄのその関連受容体ＣＤ１６１との相互作用を調節または阻害する、請求項５９から請求項７５のいずれか１項に記載の方法。
77. 微生物によって引き起こされる疾患、障害、または感染症に対する免疫応答の活性化の調節を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、前記免疫応答は、自然免疫応答もしくは適応免疫応答またはこれらの組み合わせである、前記方法。
78. ナチュラルキラー細胞の細胞傷害の上昇を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、治療有効量の請求項１から請求項４５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含む、前記方法。
79. 少なくとも約１０８の固有のモノクローナル抗体クローンを含む抗体ライブラリであって、前記抗体クローンのうちの少なくとも約８０％は、ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に検出可能かつ特異的に結合する、前記抗体ライブラリ。
80. 前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、配列番号：８８６～９２０及び９３０～１００３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７９に記載の抗体ライブラリ。
81. 前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原は、腫瘍細胞表面上に発現したＣＬＥＣ２Ｄ抗原、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のバリアント、または前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原のホモログを含む、請求項７９または請求項８０に記載の抗体ライブラリ。
82. 前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の前記バリアントはＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のフラグメントを含む、請求項８１に記載の抗体ライブラリ。
83. 前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原の前記ホモログは、ヒト、マウス、イヌ、ラット、またはカニクイザルＣＬＥＣ２Ｄを含む、請求項８２に記載の抗体ライブラリ。
84. ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体で高多様性抗体遺伝子ライブラリをスクリーニングするための方法であって、
    ａ）抗体遺伝子のライブラリをファージタンパク質遺伝子に挿入して、複数のファージを形質転換してファージライブラリを作製することであって、前記ファージライブラリ内の前記ファージは、前記ファージの表面上に前記抗体遺伝子のライブラリを提示している、前記作製すること、
    ｂ）前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々のファージに対する前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原で前記ファージライブラリをパニングすることにより、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体をコードする抗体遺伝子を濃縮させた濃縮ファージライブラリを作製すること、
    ｃ）前記工程（ｂ）を少なくとも１回または少なくとも２回繰り返すこと、
    ｄ）前記濃縮ファージライブラリに由来する前記抗体遺伝子を酵母表面ディスプレイライブラリに導入すること、
    ｅ）前記酵母表面ディスプレイライブラリから、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する個々の酵母細胞を単離すること、
    ｆ）前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する前記単離された個々の酵母細胞を培養して、酵母表面ディスプレイライブラリクローンを作製すること、及び、
    ｇ）前記酵母表面ディスプレイライブラリクローンをシークエンシングすること、
    により、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を単離すること、
    を含む、前記方法。
85. 前記パニング工程（ｂ）は、ＣＬＥＣ２Ｄをコーティングした磁性ビーズで前記ファージライブラリをパニングすることを含む、請求項８４に記載の方法。
86. 前記導入工程（ｄ）は、前記抗体遺伝子を酵母発現ベクターにクローニングすることを含む、請求項８４に記載の方法。
87. ＦＬＡＧタグ、ｃ－Ｍｙｃタグ、ポリヒスチジンタグ、またはＶ５タグを用いて、前記抗体遺伝子の表面発現を解析することを更に含む、請求項８６に記載の方法。
88. 試験工程（ｅ）は、フローサイトメトリーを用いて、前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する抗体遺伝子を発現する酵母細胞を単離することを含む、請求項８４に記載の方法。
89. 前記フローサイトメトリー単離を少なくとも１×、少なくとも２×、少なくとも３×、少なくとも４×、または少なくとも５×繰り返すことを更に含む、請求項８８に記載の方法。
90. 前記ＣＬＥＣ２Ｄ抗原に結合する前記抗体遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングすることを更に含む、請求項８４から請求項８９のいずれか１項に記載の方法。
91. 抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を作製するための方法であって、
    ａ）プロモーターをコードする配列及び前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする配列を含むベクターで哺乳動物細胞を形質転換することであって、前記プロモーターをコードする前記配列及び前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする前記配列は機能的に連結している、前記形質転換すること、
    ｂ）前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントの発現に好適な条件下で前記哺乳動物細胞を培養すること、ならびに、
    ｃ）前記培養哺乳動物細胞から前記抗ＣＬＥＣ２Ｄ抗体またはその抗原結合フラグメントを得て、上清を作製すること、
    を含む、前記方法。
92. 前記工程（ｃ）は、前記培養哺乳動物細胞の前記上清を回収することを含む、請求項９１に記載の方法。
93. 工程（ｄ）前記工程（ｃ）の後に前記上清を濾過すること、を更に含む、請求項９１または請求項９２に記載の方法。
94. 工程（ｅ）前記濾過上清を精製すること、を更に含む、請求項９１から請求項９３のいずれか１項に記載の方法。
95. 疾患の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、
    ａ．前記対象におけるＣＬＥＣ２Ｄタンパク質のレベルを測定すること、及び、
    ｂ．治療有効量のＣＬＥＣ２Ｄ抗体を前記対象に投与すること、
    を含む、前記方法。
96. 前記疾患はがんである、請求項９５に記載の方法。
97. 前記対象のがん細胞は、がんを有していない正常細胞と比較した場合に、高レベルのＣＬＥＣ２Ｄタンパク質を有している、請求項９６に記載の方法。
98. 高レベルのＣＬＥＣ２Ｄは、不十分な予後効果と関連している、請求項９５に記載の方法。
99. 前記疾患は自己免疫性障害または炎症性障害である、請求項９５に記載の方法。

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