JP2022504427A - ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の徐放配合物 - Google Patents

Abstract

【課題】ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の徐放配合物に関する。
【解決手段】本開示は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）又はその誘導体若しくはアイソフォームの徐放剤形に関する。徐放ｈＣＧ剤形は、生分解性ポリマーマイクロスフェアを含み、所望の期間にわたりｈＣＧの徐放を提供する。
【選択図】なし

Description

Ｉ．背景
ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）は、ヒト胎盤及び性腺の合胞体性栄養膜により産生されるホルモンである。ｈＣＧは、黄体形成ホルモン／コリオゴナドトロピン受容体（ＬＨＣＧＲ）（両性の性腺に見出されるルトロピン／コリオゴナドトロピン受容体（ＬＣＧＲ）又は黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）としても知られる）と相互作用する。ｈＣＧの作用は、以下の点で下垂体黄体形成ホルモン（ＬＨ）のものと類似する：両方のホルモンは、精巣のライディッヒ細胞によるテストステロン及び他のステロイドホルモンの産生を刺激し、両方のホルモンが卵巣の黄体によるプロゲステロンの産生を刺激する。

胎児発育の間、胎盤により産生されるｈＣＧは、胎児精巣を刺激して正常な雄性発育に重要であるアンドロゲンを産生する。成人において、外因性ｈＣＧの投与は、精巣のライディッヒ細胞からのテストステロン産生を刺激する。低ゴナドトロピン性性腺機能低下症を有する男性について、外因的に投与されるｈＣＧは、精巣ライディッヒ細胞を刺激し、正常なテストステロン産生を回復させ得る。ｈＣＧの投与は、下降の解剖学的妨害が存在しない場合、停留睾丸を有する男児における睾丸下降も刺激し得る。

女性において、胎盤により産生されるｈＣＧは卵巣を刺激し、妊娠の開始の間の黄体の維持を促進する。これは、黄体が最初の３か月の間、ホルモンのプロゲステロンを分泌するのを可能とする。プロゲステロンは、子宮に血管及び毛細血管の厚い層を濃縮させ、その結果、子宮は胎児の成長を持続し得る。

正常な月経サイクルの間、ＬＨは正常卵胞の発育及び成熟におけるＦＳＨに関与し、中期ＬＨサージは排卵を誘発する。成人女性において、外因性ｈＣＧの臨床的投与は、ＬＨサージの代用となり得る。体外受精を受けた女性について、ｈＣＧは最終成熟誘導のために広範に非経口で使用される。１つ以上の成熟卵胞の存在下で、排卵は、ｈＣＧの投与により誘発され得る。さらに、ｈＣＧは、不妊治療の間、臨床目的のためにプロゲステロンの産生を向上させるために使用されることもある。

最も豊富な生物学的資源は、現在妊娠している女性であるため、一部の組織は、商品名Novarel（登録商標）及びPregnyl（登録商標）のもと市場に出される剤形(dosage form)における薬学的使用のためにｈＣＧを抽出するために、妊娠女性から尿を回収する。組換えｈＣＧは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を介して産生され、商品名Ovidrel（登録商標）のもと市場に出される剤形で市販される。

現在市販されているｈＣＧの剤形は、血清ｈＣＧレベルを短期間にわたり治療レベルに上昇させる筋肉内（ＩＭ）又は皮下（ＳＣ）注射形態に限定される。ｈＣＧの持続投薬が必要とされるいくつかの臨床的用途に、高頻度の注射が要求される。これらの用途としては、限定されるものではないが、低ゴナドトロピン性性腺機能低下症の治療及び女性妊娠のためのプロゲステロン産生の刺激が挙げられる。ｈＣＧの徐放剤形が当分野において必要とされている。本発明は、この必要性を満たす。

ＩＩ．概要
本開示は、徐放ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）配合物の当分野における長きにわたる切実な必要性に関する。特に、本開示は、徐放プロファイルを有するｈＣＧ剤形を対象とする。一部の実施形態において、ｈＣＧ剤形は、約１週間から約２か月の放出プロファイルを示す。他の実施形態において、本明細書に記載のｈＣＧ剤形は、約１週間から約６か月の徐放プロファイルを有し得る。

一部の態様において、徐放ｈＣＧ剤形は、マイクロスフェア中にカプセル化されたｈＣＧを含む。さらなる態様において、マイクロスフェアは、コポリマーにより形成される。いっそうさらなる態様において、コポリマーは、ブロックコポリマー又はマルチブロックコポリマーである。このような態様において、ブロックコポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はＰＥＧ含有ポリマーブロック及び１つ以上の他のポリマーブロックを含み得、或いは本質的にそれからなる。

本明細書に記載のｈＣＧ徐放配合物は、ホルモン療法に関する種々の治療、例として、限定されるものではないが、不妊及び下垂体障害の治療において有用であり得る。したがって、本開示のさらなる態様は、本明細書に記載の徐放ｈＣＧ配合物を投与する方法、及び本明細書に記載の徐放ｈＣＧ配合物を用いて治療する方法に関する。このような方法としては、妊娠及び下垂体障害の治療が挙げられる。本明細書に開示のさらなる方法としては、乳癌の治療が挙げられる。一部の実施形態において、治療は、未経産女性における既存の乳癌のための治療である。一部の実施形態において、女性は、約２５歳以下である。

別の実施形態において、記載の徐放ｈＣＧ剤形を、図１の理論徐放プロファイルを達成し、又はそれに近似するレジメンに従って投与する方法が包含される。

本明細書に記載の及び特許請求される発明は、多くの特性及び実施形態、例として、限定されるものではないが、この概要に説明され、又は記載され、又は参照されるものを有する。これは包括的なものではなく、本明細書に記載の及び特許請求される発明は、説明のみで制限されない目的のために含まれるこの概要で特定される特徴部にも実施形態にも限定されず、それらによって限定もされない。追加の実施形態は、以下の図面の説明及び詳細な説明に開示され得る。
ＩＩＩ．図面の簡単な説明

ｈＣＧ徐放配合物についての例示的な理論放出プロファイル。 １４日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を示す、ｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物の累積放出プロファイル（μｇ放出）；パネルＡは、それぞれの個々の配合物の累積放出を示し、パネルＢは、それぞれの配合物の平均累積放出を示す。 ｈＣＧマイクロスフェアについてのｈＣＧの総含有率（％放出）に正規化されたｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物の放出プロファイル。放出プロファイルは、１４日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を示し；パネルＡは、それぞれの個々の配合物の累積放出を示し、パネルＢは、それぞれの配合物の平均累積放出を示す。 ｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物である配合物１１について計算された１４日間の期間にわたる実測インビトロ放出プロファイル（％放出）。 １８ｎｇ／ｍｌのＣ_ｍｉｎでの７日間ごとの３ｍｇのレジメン化投与に基づく配合物１１の予測放出プロファイル。 １．７ｎｇ／ｍｌのＣ_ｍｉｎでの１４日間ごとの３ｍｇのレジメン化投与に基づく配合物１１の予測放出プロファイル。 ０．０７ｎｇ／ｍｌのＣ_ｍｉｎでの２８日間ごとの３ｍｇのレジメン化投与に基づく配合物１１の予測放出プロファイル。 ３６時間のｔ^１／２及び３ｎｇ／ｍｌのＣ_ｍｉｎでの７日間ごとの２５０μｇのレジメン化投与に基づく配合物１１の予測放出プロファイル。 ３６時間のｔ^１／２及び０．３ｎｇ／ｍｌのＣ_ｍｉｎでの１４日間ごとの２５０μｇのレジメン化投与に基づく配合物１１の予測放出プロファイル。 ５０日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を実証する、ｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物の累積放出プロファイル（μｇ放出）；パネルＡは、それぞれの個々の配合物の平均累積放出を示し、パネルＢは、それぞれの配合物の正規化放出プロファイル（％放出）を示す。 濃縮時のｈＣＧの純度を実証するＨＰＬＣクロマトグラム。 Dong-A ｈＣＧと比較したOvidrel（登録商標）の分子量のゲル分析。 ラウンド１インビトロ放出からのｈＣＧの純度分析。 ４０日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を実証する、ｈＣＧマイクロスフェアを含む徐放配合物の累積放出プロファイル（それぞれの配合物について３つのレプリケートでラン）：パネルＡは、それぞれのレプリケートの累積放出プロファイル（μｇ放出）を示し、パネルＢは、正規化プロファイル（高速サイズ排除クロマトグラフィーに基づく％）を示し、パネルＣは、それぞれの配合物の正規化放出プロファイル（％放出）を示す。 図１４に示されるレプリケートの平均放出プロファイル。 ４０日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を実証する、ｈＣＧマイクロスフェアを含む徐放配合物６９５－０１－００３４についての３つのレプリケートランについての累積放出プロファイル：パネルＡは、それぞれのレプリケートの累積放出プロファイル（μｇ放出）を示し、パネルＢは、正規化プロファイル（高速サイズ排除クロマトグラフィーに基づく％）を示し、パネルＣは、それぞれの配合物の正規化放出プロファイル（％放出）を示す。 濃縮ｈＣＧ溶液のＲＰ－ＵＰＬＣクロマトグラム。 SynBiosys５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０及び３０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０のブレンドから構成されるｈＣＧ徐放マイクロスフェアのＳＥＭ写真。 SynBiosys５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０及び３０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０のブレンドから構成されるｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物の累積放出プロファイル。放出プロファイル（それぞれの配合物についての３つのレプリケートの平均）は、それぞれの配合物のｈＣＧの総含有率（％放出）について正規化され、６０日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を示す。 SynBiosys５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０及び３０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０の３３／６６％ｗ／ｗのブレンドから構成されるｈＣＧマイクロスフェアを含むｈＣＧ徐放配合物（ＪＡ１６０４３）の累積放出プロファイル。放出プロファイル（それぞれの配合物についての３つのレプリケートの平均）は、配合物のｈＣＧの総含有率（％放出）について正規化され、３５日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量及び％インタクトｈＣＧ（総量に対する）を示す。 ２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］（バッチ番号ＪＡ１６１０１）から構成されるｈＣＧ徐放マイクロスフェアのＳＥＭ写真。 SynBiosys２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］から構成されるｈＣＧ徐放配合物（ＪＡ１６１０１及びＪＡ１６１０２）の累積放出プロファイル。放出プロファイル（それぞれの配合物についての３つのレプリケートの平均）は、それぞれの配合物のｈＣＧの総含有率（％放出）について正規化され、７０日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量及び％インタクトｈＣＧ（総量に対する）を示す。 毎日のｈＣＧ注射を受けた対照群サルにおける血清ｈＣＧレベル（パネルＡ）及び血清テストステロンレベル（パネルＢ）。 ２００、６００及び１２００μｇのｈＣＧの総用量を表すｈＣＧ徐放マイクロスフェアにより処理されたサルにおける血清ｒ－ｈＣＧ及びテストステロンレベル：パネルＡは、最初の４８時間についての血清ｒ－ｈＣＧレベルを示し、パネルＢは、試験の完全な２８日間の継続期間についての血清ｒ－ｈＣＧレベルを示し、パネルＣは、試験の完全な２８日間の継続期間についての血清テストステロンレベルを示す。 ２００μｇ（パネルＡ）、６００μｇ（パネルＢ）及び１２００μｇのｈＣＧ（パネルＣ）の総用量を表すｈＣＧ徐放マイクロスフェアにより処理されたサルにおける血清ｒ－ｈＣＧ及びテストステロンレベル。 ｒｈＣＧ及びその潜在的分解産物のＳＥＣ－ＵＰＬＣクロマトグラム。 SynBiosys２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］から構成されるOvidrel ｈＣＧ徐放配合物の累積放出プロファイル。放出プロファイル（それぞれの配合物についての３つのレプリケートの平均）は、それぞれの配合物のｈＣＧの総含有率（％放出）について正規化され、最適化インビトロ溶解法を用いて測定された４９日間の期間にわたり放出されたｈＣＧの総量を示す。 Ovidrelにより産生されたプロゲステロンに対する産生されたｈＣＧ誘導プロゲステロンのパーセント。Ａ）２時間、２３及び３７日間においてマイクロスフェアロットから放出されたｈＣＧ；Ｂ）抽出緩衝液中のマイクロスフェアから抽出されたｈＣＧ（ＡＭＤ－１８－０２２－１）又は添加されたｈＣＧ（ＡＭＤ－１８－０２２－４）及びＣ）Ovidrelに対する時間に応じた、ロットＭＳ１８－０３７、ＭＳ１８－０３８及びＳＲ１８－０３１から放出されたｈＣＧにより産生されたプロゲステロンの平均パーセント。 ｈＣＧ徐放マイクロスフェアから抽出されたｈＣＧの２－ＡＢグリカンマッピングの結果。

ＩＶ．詳細な説明
本発明は、徐放ｈＣＧ剤形を対象とする。現在、市販のｈＣＧ剤形の全てが筋肉内又は皮下注射用の液体であるため、このような剤形は当分野において長きにわたり切実に必要とされてきた。さらに、現在の市販のｈＣＧ剤形の全ては、即時放出プロファイルを有し、その結果、血清レベルは持続されず、ｈＣＧの半減期、約３６時間により限定される。このことは、患者が一定期間にわたり所望のｈＣＧ治療レベルを得るために高頻度の注射を受ける必要があることを意味し、それは不便であり得、したがって不良な患者コンプライアンスをもたらし、又は患者及び提供者が効果の少ない治療を選択するように導き得る。

一部の態様において、徐放ｈＣＧ剤形は、マイクロスフェア中にカプセル化されたｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームを含む。さらなる態様において、マイクロスフェアは、コポリマーにより形成される。いっそうさらなる態様において、コポリマーは、ブロックコポリマー又はマルチブロックコポリマーである。このような態様において、ブロックコポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はＰＥＧ含有ポリマーブロック、及び１つ以上の他のポリマーを含み得、或いは本質的にそれからなる。

本開示による実施形態は、以下により完全に記載される。しかしながら、本開示の態様は、異なる形態で具現化することができ、本明細書に説明される実施形態に限定されると解釈すべきでない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が十分且つ完全であり、本発明の範囲を当業者に十分に伝えるように提供される。本明細書の詳細な説明において使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのものにすぎず、限定的なものでない。

Ａ．ヒト絨毛性ゴナドトロピン
本明細書において使用される用語「ヒト絨毛性ゴナドトロピン」又は「ｈＣＧ」は、この名称と関連する規定の糖タンパク質及び天然発生ｈＣＧ又はそのアイソフォームと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を共有する類似の生物学的機能を有する任意の他の分子を指す。ｈＣＧ誘導体及びアイソフォームは、本明細書に記載の組成物及び方法において利用することもできる。他の実施形態において、天然発生ｈＣＧとの少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％のアミノ酸配列同一性を有するｈＣＧバリアントを、本発明の組成物において使用することができる。

実際、ｈＣＧは、着床後に胎盤中の合胞体性栄養膜により産生され、且つ性腺により少量産生される。これは、全ての年齢の男性及び女性の下垂体中で産生されるＬＨのアナログである。ｈＣＧは合成によっても産生することができ、市販されている。本明細書において使用されるｈＣＧは、糖タンパク質の組換えバージョン、例えば、限定されるものではないが、Ovidrel（登録商標）、Dong-Aの組換えｈＣＧ［製品コードDA-3803］、それらの製品のいずれかとの生物学的同等性を実証する別の組換えｈＣＧ、又はそれらのジェネリック版を指し得る。例えば、Seo et al.,BioDrugs,1;25(2):115-27(2011)参照。一部の実施形態において、このような組換えｈＣＧは、動物（例えば、ヒト又は他の哺乳動物）細胞系又は細菌細胞系により産生される。一部の実施形態において、このような組換えｈＣＧは、約４０から約６０ｋＤａであり、例えば、少なくとも約４０ｋＤａ又は約４０ｋＤａ、少なくとも約４１ｋＤａ又は約４１ｋＤａ、少なくとも約４２ｋＤａ又は約４２ｋＤａ、少なくとも約４３ｋＤａ又は約４３ｋＤａ、少なくとも約４４ｋＤａ又は約４４ｋＤａ、少なくとも約４５ｋＤａ又は約４５ｋＤａ、少なくとも約４６ｋＤａ又は約４６ｋＤａ、少なくとも約４７ｋＤａ又は約４７ｋＤａ、少なくとも約４８ｋＤａ又は約４８ｋＤａ、少なくとも約４９ｋＤａ又は約４９ｋＤａ、少なくとも約５０ｋＤａ又は約５０ｋＤａ、少なくとも約５１ｋＤａ又は約５１ｋＤａ、少なくとも約５２ｋＤａ又は約５２ｋＤａ、少なくとも約５３ｋＤａ又は約５３ｋＤａ、少なくとも約５４ｋＤａ又は約５４ｋＤａ、少なくとも約５５ｋＤａ又は約５５ｋＤａ、少なくとも約５６ｋＤａ又は約５６ｋＤａ、少なくとも約５７ｋＤａ又は約５７ｋＤａ、少なくとも約５８ｋＤａ又は約５８ｋＤａ、少なくとも約５９ｋＤａ又は約５９ｋＤａ、又は約６０ｋＤａである。本明細書において使用されるｈＣＧは、単離天然産生ｈＣＧ、例えば、限定されるものではないが、Novarel（登録商標）、Pregnyl（登録商標）の尿由来ｈＣＧ、それらの製品のいずれかとの生物学的同等性を実証する別の組換えｈＣＧ、又はそれらのジェネリック版も指し得る。

ｈＣＧは、アルファ及びベータサブユニットを含む約３８ｋＤａのヘテロ二量体である。アルファサブユニットは、９２個のアミノ酸及び２つのＮ結合炭水化物鎖を有する。ベータサブユニットは、１４５個のアミノ酸を有し、２つのＮ結合及び４つのＯ結合炭水化物鎖を有する。個々のサブユニットはヘテロ二量体中で非共有結合相互作用により一緒に保持される一方、ヘテロ二量体並びにアルファ及びベータサブユニットは疎水性コアをほとんど有さず、又は有さない。アルファサブユニット中の５つ及びベータサブユニット中の６つのジスルフィド結合は、構造を安定化させる。アルファサブユニット中の１０個のハーフシスチンの相同配置が存在し、ベータサブユニットは１２個の保存ハーフシスチンを含有する。Banerjee et al.,Indian J.of Exp.Biol.,40:434-447(2002)。サブユニットの両方は、３つのジスルフィド架橋及び４つのポリペプチド鎖により形成されるシスチンノットモチーフからなる。それぞれのサブユニットにおいて、３つのヘアピンループが中央シスチンノットから現れる。糖タンパク質ホルモン、例えば、ｈＣＧは、ホルモン活性を有する最も複雑な分子である。Cahoreau et al.,Front Endocrinol.(Lausanne),6:26(2015)。

ｈＣＧ不均一性：ｈＣＧの多数の分子形態が妊娠血清中に存在し、生物学的活性を有さない解離又は分解分子も含まれる。ｈＣＧの公知のアイソフォームの例としては、インタクトｈＣＧ（「ｈＣＧ」）、ニック形成ｈＣＧ（「ｈＣＧｎ」）、ｈＣＧベータサブユニット（「ｈＣＧβ」）、ニック形成ｈＣＧベータサブユニット（「ｈＣＧβｎ」）、ｈＣＧベータコア断片（「ｈＣＧβｃｆ」）、及びｈＣＧアルファサブユニット（「ｈＣＧα」）が挙げられる。

Ｂ．コポリマーマイクロスフェア
本明細書において使用される用語「マイクロスフェア」は、薬物送達のために１つ以上の治療剤を負荷することができる内部ボイドをカプセル化する、直径約９９９μｍ以下の球状又はスフェロイド粒子を指す。

本開示の態様は、コポリマーにより形成されるマイクロスフェアに関する。一部の実施形態において、これらのコポリマーは、以下の特徴の１つ以上を有するコポリマー又はその一部に基づき選択することができる：（ｉ）ポリマーは、格子を形成して酸の自由流動又は酸の放出を可能とする、（ｉｉ）ポリマーは、ｈＣＧ活性成分を、それが貯蔵され、及び／又はマイクロスフェアが放出される環境から保護する（例えば、温度安定性）、（ｉｉｉ）ポリマーは、親水性である、（ｉｖ）ポリマーは、ｈＣＧの純度に影響を与えずに分解する、（ｖ）ポリマーは、生分解性である、（ｖｉ）ポリマーは、活性成分（ｈＣＧ）の拡散を可能とする、及び／又は（ｖｉｉ）ポリマーは、流体力学的半径のｈＣＧ（例えば、Ovidrel(登録商標)又はDong-A ｈＣＧのもの）を収容する。

マイクロスフェアは、マイクロスフェアの総重量に基づきその中の約３％未満から約４０％のｈＣＧを約２４時間以内に放出し得る。

本明細書に記載のポリマーを利用するｈＣＧの安定的な徐放配合物を作製することができることは、予測されなかった。それというのも、ｈＣＧは、上昇温度、例えば、体温において分解することが公知であるためである。ｐＨ変化に応答して分解することも公知である。したがって、本発明前は、患者又は対象にｈＣＧを良好に投与する唯一の手法は注射を介するものであると考えられた。本発明は、ポリマーを使用して構成成分のｈＣＧがインビボで存在する温度によってもｐＨによっても分解されないｈＣＧの安定的な徐放配合物を形成することができるという驚くべき発見を詳述する。

ｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームを含むマイクロスフェアは、当業者に公知の技術、例として、限定されるものではないが、溶媒蒸発及び噴霧乾燥技術により調製することができる。一部の実施形態において、マイクロスフェアは、約０．１から約１．０、例えば、限定されるものではないが、約０．５から約１．０、約０．５５から約１．０、約０．６から約１．０、約０．６５から約１．０、約０．７から約１．０、約０．７５から約１．０、約０．８から約１．０、約０．８５から約１．０、約０．９から約１．０、又は約０．９５から約１．０の水－ポリマー比を用いて形成される。一部の実施形態において、マイクロスフェアの水－ポリマー比は、約０．５、約０．５５、約０．６、約０．６５、約０．７、約０．７５、約０．８、約０．８５、約０．９、約０．９５、又は約１．０である。これらの水ポリマー比は、ｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォーム及び／又はマイクロスフェアを形成するために使用されるポリマーの濃度に基づき特定の放出プロファイルを達成するように調整することができる。Bos et al.,Pharmaceutical Technology,October 2011:110-120参照。

一部の実施形態において、マイクロスフェアは、少なくとも約１μｍ、少なくとも約２μｍ、少なくとも約５μｍ、少なくとも約１０μｍ、少なくとも約２０μｍ、少なくとも約３０μｍ、少なくとも約４０μｍ、少なくとも約５０μｍ、大きくとも約５０μｍ、大きくとも約６０μｍ、大きくとも約７０μｍ、大きくとも約８０μｍ、大きくとも約９０μｍ、又は大きくとも約１００μｍの直径を有する。一部の実施形態において、マイクロスフェアは、約２０μｍから約１００μｍ、約３０μｍから約１００μｍ、約３０μｍから約５０μｍ、又は約５０μｍから約１００μｍの直径を有する。

一部の実施形態においてマイクロスフェアの調製に使用されるｈＣＧの濃度は、少なくとも約５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約４５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約５５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約６５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌである。マイクロスフェアの調製に使用されるｈＣＧの濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ以上のタンパク質であり得る。

Ｂ１．PolyActive（商標）マルチブロックコポリマーから構成されるｈＣＧマイクロスフェア
ある態様において、コポリマーは、ブロックコポリマーであり、任意選択により、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び１つ以上の他のポリマーを含み、或いは本質的にそれからなり得る。一部の態様において、１つ以上の他のポリマーは、任意選択により、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリプロピレンテレフタレート、及びポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）から選択することができる。非限定的な例示的なポリマーは、反復ポリマー単位の化学構造、例えば、

を有する、OctoPlus及び／又はDr.Reddy’s Laboratoriesにより産生されるPolyActive（商標）ポリマーである。

PolyActive（商標）ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧ、及びポリ（ブチレンテレフタレート）、ＰＢＴをベースとする一連のポリ（エーテルエステル）マルチブロックコポリマーにより表される。この系の主な利点は、２つのビルディングブロックのそれぞれの量及び長さを変動させ、カスタム化ポリマーの多様なファミリーを作出する能力である。ポリマーマトリックス特徴、例えば、制御放出の速度、分解、膨潤及び強度は、２つのコポリマーセグメントの適切な組み合わせにより正確に制御することができる。

本発明前は、薬物送達系においてPolyActive（商標）ポリマーが使用されている一方、本発明前は、ポリマーは高度に複雑な糖タンパク質、例えば、ｈＣＧのために良好に製剤化されていない。特に、PolyActive（商標）ポリマーに関する先行刊行物は、ポリマーは「生物医薬及び小型親油性分子」の制御放出に有用であることを記述している、P.Mansell,“OctoPlus broadens rights to PolyActive delivery technology,”In-Pharma Technologist.com,dated April 26,2007（http://www.in-pharmatechnologist.com/Ingredients/OctoPlus-broadens-rights-to-PolyActive-delivery-technology,downloaded on March 9,2016参照）。生物医薬の例としては、タンパク質が挙げられる。

PolyActiveＰＥＧ／ＰＢＴマルチブロックコポリマーから調製されたｈＣＧマイクロスフェア剤形中にＰＥＧポリマーが存在する場合、ＰＥＧの長さは、約１０００から約２５００ｇ／ｍｏｌの間で変えることができる。非限定的な例としては、少なくとも約１０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１１００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１２００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１３００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１５００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１７００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１８００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１９００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約２０００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約２１００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約２２００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約２３００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約２４００ｇ／ｍｏｌ、又は大きくとも約２５００ｇ／ｍｏｌのＰＥＧ長さが挙げられる。

一部の実施形態において、PolyActiveＰＥＧ／ＰＢＴマルチブロックコポリマーから調製されたｈＣＧマイクロスフェア剤形中に存在するＰＥＧ及び１つ以上の他のポリマーは、約８０／２０から約６０／４０、例えば、限定されるものではないが、約７９／２１から約６０／４０、約７８／２２から約６０／４０、約７７／２３から約６０／４０、約７６／２４から約６０／４０、約７５／２５から約６０／４０、約７４／２６から約６０／４０、約７３／２７から約６０／４０、約７２／２８から約６０／４０、約７１／２９から約６０／４０、約７０／３０から約６０／４０、約６９／３１から約６０／４０、約６８／３２から約６０／４０、及び約６７／３３から約６０／４０の比（重量基準）で存在する。重量比の例としては、約８０／２０、約７９／２１、約７８／２２、約７７／２３、約７６／２４、約７５／２５、約７４／２６、約７３／２７、約７２／２８、約７１／２９、約７０／３０、約６９／３１、約６８／３２、又は約６７／３３が挙げられる。

Ｂ２．結晶性ポリ（Ｌ－ラクチド）ビルディングブロックを含有するマルチブロックコポリマーから構成されるｈＣＧマイクロスフェア
本発明の持続放出ｈＣＧ組成物中で利用することができる他の例示的ポリマーとしては、Innocore Pharmaceuticalsにより産生されるSynBiosys（登録商標）ポリマーが挙げられる。InnoCoreのSynBiosys（登録商標）技術は、薬物送達系として機能するように特別に設計される生体吸収性ポリマーの新規プラットフォームを提供する。ポリマーは、ヒト用途に承認されたＤ，Ｌ－ラクチド、グリコリド、ε－カプロラクトン及びポリエチレングリコールから構成される。本発明前は、SynBiosys（登録商標）ポリマーが薬物送達系において使用されている一方、本発明前は、ポリマーは高度に複雑な糖タンパク質、例えば、ｈＣＧのために良好に製剤化されていない。

SynBiosys（登録商標）ポリマーは、全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第Ａ２０１３／０１５６８５号に記載されている。それに記載の生分解性、半結晶性、相分離、熱可塑性マルチブロックコポリマーは、少なくとも１つの加水分解性プレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの加水分解性プレポリマー（Ｂ）セグメントを含み、前記マルチブロックコポリマーは、生理学的条件下で３７℃以下のＴ_ｇ及び１１０～２５０℃のＴ_ｍを有し、セグメントは、多官能性鎖延長剤により結合しており、セグメントは、ポリマー鎖上でランダム分布しており、プレポリマー（Ａ）セグメントは、ポリエチレングリコールを含む。

生理学的条件下（すなわち、体内）での形態及び特性は、周囲温度（乾燥、室温）下での形態及び特性と異なり得る。本明細書において使用される転移温度Ｔ_ｇ及びＴ_ｍは、インビボで適用される場合、すなわち、水蒸気により飽和された雰囲気との平衡における及び体温における材料の対応値を指す。これは、材料を水飽和雰囲気と平衡させた後にＤＳＣ測定を実施することによりインビトロで模擬することができる。

プレポリマー（Ａ）セグメントは、ジオール、ジカルボン酸、及びヒドロキシカルボン酸から選択されるエステル形成モノマーの反応生成物を含み得る。好ましくは、プレポリマー（Ａ）セグメントは、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、ε－カプロラクトン、及び／又はδ－バレロラクトンの反応生成物を含む。

プレポリマー（Ａ）セグメントは、約５００ｇ／ｍｏｌ以上、例えば、約７００ｇ／ｍｏｌ以上、約１０００ｇ／ｍｏｌ以上、約２０００ｇ／ｍｏｌ以上、約３０００ｇ／ｍｏｌ以上、又は約４０００ｇ／ｍｏｌ以上のＭ_ｎを有し得る。典型的には、プレポリマー（Ａ）セグメントは、約８００００ｇ／ｍｏｌ以下のＭ_ｎを有する。

プレポリマー（Ｂ）セグメントは、好ましくは、ポリ（Ｌ－ラクチド）、より好ましくは、約１０００ｇ／ｍｏｌ以上、例えば、約２０００ｇ／ｍｏｌ以上、約３０００ｇ／ｍｏｌ以上、又は約４０００ｇ／ｍｏｌ以上のＭ_ｎを有するポリ（Ｌ－ラクチド）を含む。典型的には、プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約８００００ｇ／ｍｏｌ以下のＭ_ｎを有する。

マルチブロックコポリマー中のプレポリマー（Ａ）の含有率は、マルチブロックコポリマーの総重量に基づき約１０％から約９０％、例えば、約３０％から約７５％、又は約５０％から約７０％であり得る。

マルチブロックコポリマー中のプレポリマー（Ｂ）の含有率は、マルチブロックコポリマーの総重量に基づき約１０％から約９０％、例えば、約２５％から約７０％、又は約３０％から約５０％であり得る。

多官能性鎖延長剤は、二官能性脂肪族鎖延長剤、好ましくは、ジイソシアネート、例えば、１，４－ブタンジイソシアネート又は１，６－ヘキサンジイソシアネートであり得る。

ポリ（Ｌ－ラクチド）ベースのSynBiosys（登録商標）マルチブロックコポリマー中のポリエチレングリコールは、約１５０から約５０００ｇ／ｍｏｌ、例えば、約２００ｇ／ｍｏｌから約１５００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約１０００ｇ／ｍｏｌ、約４００から約３０００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約１５００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約５０００ｇ／ｍｏｌ、又は約１０００から約３０００ｇ／ｍｏｌのＭ_ｎを有し得る。

好ましくは、生分解性マルチブロックコポリマーは、約１から約４、好ましくは、約１から約２、より好ましくは、約１から約１．５の生理学的条件下の膨潤比を有する。

一実施形態において、生分解性マルチブロックコポリマーは、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］マルチブロックコポリマーである。

Ｂ２．結晶性ポリ（ｐ－ジオキサノン）ビルディングブロックを含有するマルチブロックコポリマーから構成されるｈＣＧマイクロスフェア
ある態様において、生分解性マルチブロックコポリマーは、少なくとも１つのアモルファス加水分解性プレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性加水分解性プレポリマー（Ｂ）セグメントを含む生分解性、相分離、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
－ 生理学的条件下の前記マルチブロックコポリマーは、約３７℃以下のＴ_ｇ及び約５０から約１１０℃のＴ_ｍを有し；
－ セグメントは、多官能性鎖延長剤により結合しており；
－ セグメントは、ポリマー鎖上でランダム分布しており；
－ プレポリマー（Ｂ）セグメントは、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、式中、Ｙは、重合開始剤であり、Ｘは、約７以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長さを有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントであり、

Ｘは、好ましくは、約７から約３５、例えば、約８から約３０、約９から約２５、約１０から約２０、又は約１２から約１５のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長さを有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである。

プレポリマー（Ａ）セグメントの少なくとも一部、例えば、プレポリマー（Ａ）の総重量基準の約３０％以上、約４０から約９５％、約５０から約９０％、又は約６０から約８５％は、水溶性ポリマーに由来することができる。

プレポリマー（Ａ）は、例えば、環状モノマー及び／又は非環状モノマーの反応生成物を含み得る。好適な非環状モノマーは、例えば、コハク酸、グルタル酸（gluratic acid）、アジピン酸、セバシン酸、乳酸、グリコール酸、ヒドロキシ酪酸、エチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４－ブタンジオール及び／又は１，６－ヘキサンジオールからなる群から選択することができる。好適な環状モノマーは、例えば、グリコリド、ラクチド、ε－カプロラクトン、δ－バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、１，５－ジオキセパン－２－オン、１，４－ジオキサン－２－オン（ｐ－ジオキサノン）及び／又は環状無水物、例えば、オキセパン－２，７－ジオンからなる群から選択することができる。

好ましくは、プレポリマー（Ｂ）セグメントは、比較的大きいポリ（ｐ－ジオキサノン）部分を含む。例えば、プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量基準の約７０％以上、好ましくは、約８０％以上、より好ましくは、約９０％以上は、ポリ（ｐ－ジオキサノン）であり得る。

プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１３００から約７２００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、約１３００から約５０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、約１５００から約４５００ｇ／ｍｏｌ、さらにより好ましくは、約２０００から約４０００ｇ／ｍｏｌ、例えば、約２２００から約３０００ｇ／ｍｏｌの数平均分子量Ｍ_ｎを有し得る。

プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１８００から約１０８００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、約１８００から約７０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、約２１００から約６３００ｇ／ｍｏｌ、さらにより好ましくは、約２６００から約５６００ｇ／ｍｏｌ、例えば、約３０００から約４２００ｇ／ｍｏｌの重量平均分子量Ｍ_ｗを有し得る。

プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約０℃未満、例えば、約－２０℃未満、又は約－４０℃未満のＴ_ｇを有し得る。プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約６０から約１００℃の範囲、好ましくは、約７５から約９５℃の範囲のＴ_ｍを有し得る。

水溶性ポリマーは、ポリエーテル、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリテトラメチレンオキシド（ＰＴＭＯ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルカプロラクタム、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（ポリ－ＨＥＭＡ））、ポリホスファゼン、又はそれらのポリマーのコポリマーからなるポリマーの群から選択し、又は由来することができる。好ましくは、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコールに由来する。より好ましくは、水溶性ポリマーは、約１５０から約５０００ｇ／ｍｏｌのＭ_ｎを有するポリエチレングリコールに由来する。

鎖延長剤は、二官能性脂肪族鎖延長剤であり得る。好ましくは、鎖延長剤は、ジイソシアネート、例えば、１，４－ブタンジイソシアネート又はヘキサメチレンジイソシアネートである。

一実施形態において、生分解性マルチブロックコポリマーは、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーである。

ある態様において、生分解性マルチブロックコポリマーは、［（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）_ｑ］_ｒ［（Ｒ^４ _ｐＲ^５Ｒ^６ _ｐ）］_ｓにより表され、
式中、
Ｒ^１、及びＲ^３は、それぞれ

であり、
Ｒ^２は、

であり、
Ｒ^４及びＲ^６は、それぞれ

であり、
ｎは、繰り返しＲ^２部分の数であり、約２０から約１１５、好ましくは、約３５から約１００、より好ましくは、約４５から約８５であり；
ｐは、繰り返しＲ^４及びＲ^６部分の数であり、約７以上、好ましくは、約７から約３５、より好ましくは、約１０から約２０、さらにより好ましくは、約１０から約１４であり；
ｑは、（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）ブロックの数平均分子量であり、約１０００から約７０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、約３０００から約５０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、約３８００から約４２００ｇ／ｍｏｌであり；
ｒ／ｓは、プレポリマー（Ａ）セグメントとプレポリマー（Ｂ）セグメントとの比であり、約０．１０から約１．０、例えば、約０．１５から約０．５０、又は約０．２０から約０．３０である。

一実施形態において、生分解性マルチブロックコポリマーは、［（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）_ｑ］_ｒ［（Ｒ^４ _ｐＲ^５Ｒ^６ _ｐ）］_ｓにより表され、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、及びＲ^６のそれぞれは、独立して上記定義のとおりであり、ｎは、約６５から約７１であり、ｐは、約１１から約１３であり、ｑは、約３８００から約４２００であり、ｒは、約１５から約２５であり、ｓは、約７５から約８５である。

ポリ（ｐ－ジオキサノン）ベースマルチブロックコポリマーから調製されたｈＣＧマイクロスフェア剤形中にＰＥＧポリマーが存在する場合、ＰＥＧの長さは、約１０００から約５０００ｇ／ｍｏｌの間で変えることができる。非限定的な例としては、少なくとも約１０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１２００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約１８００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２２００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約２８００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３２００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも約３８００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約４０００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約４２００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約４４００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約４６００ｇ／ｍｏｌ、大きくとも約４８００ｇ／ｍｏｌ、又は大きくとも約５０００ｇ／ｍｏｌのＰＥＧ長さが挙げられる。

Ｃ．配合物
本開示の態様は、複数のｈＣＧマイクロスフェアを含む配合物に関する。このような配合物は、本明細書に開示のパラメータのいずれか１つに従うマイクロスフェアの均一又は不均一混合物を含み得る。さらなるこのような配合物は、任意選択により、治療される規定の適応症に関する薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は他の構成成分をさらに含み得る。

Ｄ．投与の方法及び放出プロファイル
本明細書に開示のマイクロスフェアの特徴部は、ｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームの徐放を可能とする放出プロファイルである。一部の態様において、マイクロスフェア又はマイクロスフェア配合物中のｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームの１／７未満若しくは約１／７、例えば、１／１４未満若しくは約１／１４、１／２１未満若しくは約１／２１、１／２８未満若しくは約１／２８、１／２９未満若しくは約１／２９、１／３０未満若しくは約１／３０、１／３１未満若しくは約１／３１、１／３３未満若しくは約１／３３、１／３４未満若しくは約１／３４、１／３５未満若しくは約１／３５、１／４２未満若しくは約１／４２、１／４９未満若しくは約１／４９、１／５６未満若しくは約１／５６、１／５７未満若しくは約１／５７、１／５８未満若しくは約１／５８、１／５９未満若しくは約１／５９、１／６０未満若しくは約１／６０、１／６１未満若しくは約１／６１、又は１／６２未満若しくは約１／６２が、投与後の最初の２４時間において放出される。一部の態様において、マイクロスフェア又はマイクロスフェア配合物中のｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームの約２％から約４０％、例えば、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、約６％、約６．５％、約７％、約７．５％、約８％、約８．５％、約９％、約９．５％、約１０％、約１０．５％、約１１％、約１１．５％、約１２％、約１２．５％、約１３％、約１３．５％、約１４％、約１４．５％、約１５％、約１５．５％、約１６％、約１６．５％、約１７％、約１７．５％、約１８％、約１８．５％、約１９％、約１９．５％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、又は約４０％、又はそれらの値の２つを含む任意の範囲、例えば、約１８．５％から約２６％が、最初の２４時間において放出される。

いかなる理論によっても拘束されるものではないが、上記の放出プロファイルは、規定の期間、例えば、限定されるものではないが、約１週間以上、約２週間以上、約３週間以上、約４週間以上、約５週間以上、約６週間以上、約７週間以上、約８週間以上、約１か月以上、約２か月以上、又は約７日間以上、約８日間以上、約９日間以上、約１０日間以上、約１１日間以上、約１２日間以上、約１３日間以上、約１４日間以上、約１５日間以上、約１６日間以上、約１７日間以上、約１８日間以上、約１９日間以上、約２０日間以上、約２１日間以上、約２２日間以上、約２３日間以上、約２４日間以上、約２５日間以上、約２６日間以上、約２７日間以上、約２８日間以上、約２９日間以上、約３０日間以上、約３１日間以上、約３２日間以上、約３３日間以上、約３４日間以上、約３５日間以上、約３６日間以上、約３７日間以上、約３８日間以上、約３９日間以上、約４０日間以上、約４１日間以上、約４２日間以上、約４３日間以上、約４４日間以上、約４５日間以上、約４６日間以上、約４７日間以上、約４８日間以上、約４９日間以上、約５０日間以上、約５１日間以上、約５２日間以上、約５３日間以上、約５４日間以上、約５５日間以上、約５６日間以上、約５７日間以上、約５８日間以上、約５９日間以上、約６０日間以上、約６１日間以上、又は約６２日間以上、約１か月以上、約２か月以上、約３か月以上、約４か月以上、約５か月以上、約６か月以上のｈＣＧ又はその誘導体若しくはアイソフォームの徐放を可能とすることが想定される。

マイクロスフェア及びそれらのマイクロスフェアを含む配合物は、当分野において公知の投与の任意の方式、例として、限定されるものではないが、局所、腸内、非経口、経口、舌下、吸入を介するもの、鼻腔、注射を介するもの、皮内、経皮、筋肉内、皮下、ボーラス投与、注入、及び／又は任意の他の好適な方法に従って投与することができることが想定される。

ある態様において、本開示は、図１による理論放出プロファイルを達成し、又はそれに近似する投与の方法に関する。一部の実施形態において、放出プロファイルは、最小のバースト放出を示し、又はバースト放出を示さない。

本開示の態様は、例えば、図１による放出プロファイルに近似する投与のレジメンに関する。このようなレジメンとしては、約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、１か月、２か月、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、約５０、約５１、約５２、約５３、約５４、約５５、約５６、約５７、約５８、約５９、約６０、約６１、又は約６２日間ごとの徐放ｈＣＧ配合物の投与が挙げられる。

Ｅ．治療の方法
本明細書に開示のｈＣＧマイクロスフェア及びその配合物は、種々の治療を治療するために使用することができ、適応症に基づく適切な周期及び用量に従って投与することができる。適応症は、ヒト又は動物であり得る。例示的な適応症としては性腺機能低下症（hyogonadotropism）、停留睾丸、黄体期維持（例えば、生殖補助技術におけるもの）、避妊、体重損失、下垂体障害、乳癌及び／又はｈＣＧ欠損と関連する任意の他の疾患若しくは障害が挙げられる。

ある実施形態は、本明細書に開示のｈＣＧマイクロスフェア及び配合物による乳癌の治療に関する。妊娠は、乳癌に対して保護性であることが公知である。理論により拘束されるものではないが、本明細書に開示のｈＣＧマイクロスフェア及び配合物の投与が、乳癌リスクの約３０％から約４０％の低減まで達成し得ることが予測される。Russo and Russo,Molecular Basis of Breast Cancer:Prevention and Treatment (Springer Science&Business Media,2004）参照。さらに、ｈＣＧの投与についての当分野において開示される方法とは異なり、本明細書に開示のｈＣＧマイクロスフェア及び配合物は、３か月間にわたる慣用のｈＣＧの４５回の投与に対して少ない投与、例えば、約１０回未満、約９回未満、約８回未満、約７回未満、約６回未満、約５回未満、約４回未満、約３回未満の投与、又は約１若しくは２回の投与を要求する。他の実施形態において、記載の配合物は、乳癌の治療及び／又は予防のために週１回の投与、又は月１、２若しくは３回の投与スケジュールで有効であり得る。一部の実施形態において、治療は、未経産女性における既存の乳癌のための治療である。一部の実施形態において、記載の配合物は、１か月よりも長い治療効果を提供する１回の注射の形態である。

Ｆ．一般的定義
本発明の詳細な説明及び添付の特許請求の範囲において使用される単数形「a」、「an」及び「the」は、文脈が特にそうでないことを明確に示さない限り、複数形も含むものとする。

本明細書において使用される用語「約」は、測定可能な値、例えば、量又は濃度などを指す場合、規定量の２０％、１０％、５％、１％、０．５％、又はさらには０．１％の変動を包含することを意味する。

用語「許容可能な」、「有効な」又は「十分な」は、本明細書に開示の任意の構成成分、範囲、用量形態などの選択を説明するために使用される場合、前記構成成分、範囲、用量形態などが開示目的に好適であることを意図する。

また、本明細書において使用される「及び／又は」は、関連する列記項目の１つ以上の任意の及び全ての考えられる組み合わせを指し、包含し、並びに択一的に（「又は」で）解釈される場合の組み合わせを含まない。

本明細書において使用される用語「含む」は、配合物及び方法が引用される要素を含むが、他のものを除外しないことを意味するものとする。本明細書において使用される移行句「から本質的になる」（及び文法的変化形）は、引用される実施形態の引用される材料又はステップ「並びに（１つ以上の）基礎及び新規特徴に実質的に影響を与えないもの」を包含すると解釈すべきである。In re Herz,537 F.2d 549,551-52,190 U.S.P.Q.461,463(CCPA 1976)（強調は原文のまま）参照；MPEP § 2111.03も参照。したがって、本明細書において使用される用語「から本質的になる」は、「含む」と同等であると解釈すべきでない。「からなる」は、微量を超える他の成分の要素及び本明細書に開示の配合物を投与する実質的な方法ステップを除外することを意味するものとする。これらの移行語のそれぞれにより定義される態様は、本開示の範囲内である。

「配合物」は、活性剤と、不活性（例えば、検出可能な薬剤又は標識）又は活性の、別の化合物又は組成物（例えば、アジュバント）との組み合わせを意味するものとする。

「医薬配合物」は、活性剤と、インビトロ、インビボ又はエクスビボでの診断又は治療的使用に配合物を好適にする不活性又は活性担体との組み合わせを含むものとする。

「薬学的に許容可能な担体」は、本発明の配合物中で使用することができる任意の希釈剤、賦形剤、又は担体を指す。薬学的に許容可能な担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベース物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。好適な医薬担体は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company、本分野の標準参照教本に記載されている。これらは、好ましくは、意図される投与形態、すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などに関して選択され、慣用の医薬実務と一致する。

本明細書において使用される用語「徐放」は、活性成分（ｈＣＧ）を規定の期間にわたり放出する能力を指す。用語「バースト放出」は、長期間にわたる継続放出が持続性でないような環境中への活性成分（ｈＣＧ）の急速放出期を指す。

本明細書において使用される用語「対象」又は「患者」は、任意の動物を意味するために互換的に使用される。一部の実施形態において、対象は、哺乳動物であり得；さらなる実施形態において、対象は、ヒト、マウス、又はラットであり得る。

本明細書において使用される対象における疾患を「治療すること」又はその「治療」は、（１）疾患にかかりやすい若しくはその症状を依然として呈していない対象において症状若しくは疾患が発生するのを予防すること；（２）疾患を阻害し、若しくはその発生を停止させること；又は（３）疾患若しくは疾患の症状を改善し、若しくは退行を引き起こすことを指す。当分野において理解されるとおり、「治療」は、有益又は所望の結果、例として、臨床結果を得るためのアプローチである。現在の技術の目的のため、有益又は所望の結果としては、１つ以上の、限定されるものではないが、検出可能か検出不可能かにかかわらず、１つ以上の症状の緩和又は改善、病態（例として、疾患）の程度の縮小、病態（例として、疾患）の安定化（すなわち、悪化しない）状態、病態（例として、疾患）、進行の遅滞又は遅延、病態（例として、疾患）、状態の改善又は軽減、及び寛解（部分か完全かを問わない）を挙げることができる。

特に規定のない限り、本明細書において使用される全ての用語（例として、技術及び科学用語）は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。用語、例えば、一般に使用される辞書において定義されるものは、本出願の文脈及び関連分野におけるそれらの意味と一致する意味を有すると解釈すべきであり、本明細書に明示的に定義されない限り、理想化された又は過剰に形式的な意味で解釈すべきでないことがさらに理解される。例えば、特定の器官の特徴を示す生物材料（例えば、組織、オルガノイド、試料）を指すため記述語を使用することができ、例えば、肝臓由来組織又は肝臓様オルガノイドを記載するために「肝」を使用することができる。以下により明示的に定義されない場合、そのような用語は、それらの一般的な意味に従って解釈すべきである。

本明細書の詳細な説明において使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためにすぎず、本発明を限定するものではない。本明細書に挙げられる全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参照文献は、参照により全体として組み込まれる。

本技術の実施は、特に示されない限り、当業者の技能の範囲内の慣用の技術を用いる。

文脈が特に示さない限り、本明細書に記載の本発明の種々の特徴部は、任意の組み合わせで使用することができることが具体的に意図される。さらに、本開示は、一部の実施形態において、本明細書に説明される任意の特徴部又は特徴部の組み合わせを除外し、又は省略することができることも企図する。説明すると、複合体が構成成分Ａ、Ｂ及びＣを含むことを本明細書が記述する場合、Ａ、Ｂ若しくはＣのいずれか、又はその組み合わせを単体で又は任意の組み合わせで省略し、放棄することができることが明確に意図される。

全ての数値指定、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、及び分子量は、範囲を含め、適宜１．０又は０．１の増分だけ、或いは＋／－１５％、或いは１０％、或いは５％、或いは２％の変動だけ（＋）又は（－）に変動する近似値である。常に明示されるものではないが、全ての数値指定には、用語「約」が先行することを理解すべきである。常に明示されるものではないが、本明細書に記載の試薬は単に例示であること及びそのようなものの同等物は当分野において公知であることも理解すべきである。

Ｖ．実施例
以下の実施例は、非限定的なものであり、本開示の実施における種々の例において使用することができる手順の説明である。さらに、本明細書に開示の全ての参照文献は、参照により全体として組み込まれる。

実施例１－市販ｈＣＧの比較
EMD Seronoから入手したOvidrel（登録商標）（「Serono」）及びDong-A ｈＣＧを、分子量の差について比較した。

コロイダルブルーネイティブ及びＳＤＳ ｐａｇｅゲルを調製した。銀染色に好適なゲルも調製したが、読取不能な結果を生成した。

ネイティブ試料及びランニング緩衝液を用いるネイティブゲル条件下で、Dong-A及びSeronoの両方のＡＰＩ ｈＣＧの調製試料は、同じバンドパターンを示した。

ネイティブＰＡＧＥ分析は、Dong-A及びSeronoからのｈＣＧ間に有意な分子量の差が存在しないことを実証した。ネイティブＰＡＧＥゲル上の分子量は類似であるが、非適合マーカーに起因して読み取ることは困難である。非ネイティブ及び半ネイティブ条件（ＳＤＳの存在）において、Dong-A及びSeronoからのｈＣＧの分子量（４４から５２ｋＤａのバンド形成）は、５０～６０ｋＤａの列記される単一拡散バンドと類似する（図１２）。

実施例２－PolyActive ｈＣＧマイクロスフェアの産生
ｐＨ７．４におけるＰＢＳ緩衝液＋メチオニンを使用してDong-A ｈＣＧを２０ｍｇ／ｍｌの標的濃度に濃縮した。分析のまとめを以下の表１に提示する。

タンパク質の統合性は濃縮ステップの間維持され、約２０ｍｇ／ｍｌ（２１．５ｍｇ／ｍｌ）のタンパク質溶液をもたらし、次いでそれは１．５～２％のタンパク質／ポリマー比を可能とする。したがって、最終薬物生成物は０．２ｃｃ中約０．２～０．６ｍｇのｈＣＧの範囲であるべきである。タンパク質の統合性は、濃縮の間維持された（図１１）。

濃縮ｈＣＧを、ポリマーを含む有機溶液（PolyActive（商標）ポリマー（１ｇ／９ｇのジクロロメタン））を有する一次エマルジョン中に、ポジティブディスプレイスメントピペットを使用して導入し、次いで１９０００ｒｐｍにおいて室温において３０秒間ホモジナイズした。次いで、この一次エマルジョンをＰＢＳ ＰＶＡ ７％と５分間混合し、次いでＰＢＳ＋メチオニンを５時間添加し、次いで５回洗浄した。プラセボ（ＰＢＳ＋メチオニン）負荷マイクロスフェアを用いて同様のプロセスを繰り返した。

マイクロスフェアをこの方法に従って種々のポリマー、例として、以下に列記されるものについて生成した：
PolyAvctive（商標）ＰＥＧ１５００シリーズ：ＰＥＧ／ＰＢＴ重量比＝７０／３０、７５／２５、８０／２０、９０／１０
PolyActive（商標）ＰＥＧ１０００シリーズ：ＰＥＧ／ＰＢＴ重量比＝７０／３０、６７／３３
PolyActive（商標）ＰＥＧ２０００シリーズ：ＰＥＧ／ＰＢＴ重量比＝６０／４０、７５／２５、８０／２０

表２に記載のとおり、Mastersizerを使用して、得られた粒子をサイジングした。

顕微鏡観察は、Mastersizerを用いて得られた結果を裏付けた。大きい卵形のマイクロスフェア形状を与えた重量比１５００／９０／１０を有するマイクロスフェア配合物を除き、有意な形態差は観察されなかった。サイズ分布に基づき、表３の配合物、一般に、いかなる追加の加工も有さない約５０から１００μｍのサイズの範囲のものをさらなる分析のために選択した。

実施例３－PolyActive ｈＣＧマイクロスフェアの放出プロファイルの分析
マイクロスフェアを実施例２の方法に従って調製した。表４に列記される一連の配合物を、インビトロ放出アッセイを介して検査した。

試料及び対照を、ｐＨ７．４におけるＰＢＳ中０．０５％のＮａＮ_３及び０．０５％のTween20と３７℃においてインキュベートした。１４日間まで実施された予備累積及び正規化放出プロファイルを決定した（図２～３）。配合物６９５－０１－０００８、６９５－０１－００１０、及び６９５－０１－００１１は全て、低～無バースト放出を実証した。ｈＣＧは、対照配合物について実質的に純粋のままであり（図１３）、表５により示されるとおり、１４日間にわたり約５％のみ減少した。

配合物６９５－０１－００１１（「配合物１１」）は、徐放ｈＣＧ投与に好適な放出プロファイルを示した。理論放出プロファイルを配合物１１の変動ｈＣＧ用量についてその実測インビトロ放出プロファイル（図４）に基づき決定し（図５～９）、以下を想定した、バイオアベイラビリティ＝０．５；分布容積＝５．５ｌ；吸収半減期＝８時間；終末排泄半減期＝２４時間；２３～２５Ｇ針を用いる注射容易性（injectability）のための最大マイクロスフェア密度は１５％ｗ／ｖ（１５０ｍｇ／ｍｌ）であり；２％の薬物負荷；１ｃｃ注射は３ｍｇのｈＣＧを送達する；及び１回の注射：「配合物１１」PolyActiveマイクロスフェアとして製剤化された１ｍｌ中３ｍｇのｈＣＧ。表６は、いかにｈＣＧの半減期及び投与間隔が配合物１１中の３ｍｇのｈＣＧを有する生成物について血液中の最小の持続ｈＣＧレベル、ｎｇ／ｍｌをもたらすかを示す。

Ｃ_ｍｉｎ及びＣ_ｍａｘ間の比も、大きい差ｔ^１／２＝２４及び３６時間を示す。血漿レベルは投与される用量及び排泄半減期に比例する。例えば、２週間に１回の投薬について実に４又は６週間までのより低い放出速度を有する配合物は、より低いＣ_ｍａｘ／Ｃ_ｍｉｎ比及び用量のより効率的な使用を提供し得、より高い負荷％のｈＣＧの必要性を低減させる。

したがって、機能的配合物１１のパラメータを変えてインビトロ放出の別のラウンドを検討した。提案されるバリエーションを表７に列記する。さらなる検討としては、PolyActive（商標）ＰＥＧ１５００ ７５／２５及びPolyActive（商標）ＰＥＧ１５００ ７０／３０を１：４、１：１、１．５：１、又は４：１の重量比においてブレンドしてPolyActive（商標）ＰＥＧ１５００ ７１／２９、７２．５／２７．５、７３／２７、及び７４／２６をそれぞれ模倣することを含む。

インビトロ放出アッセイの２回目及び３回目のラウンドを、表８に列記される追加の試料について実施した。多数の配合物－６９５－０１－００２１（少なくとも４から６週間の放出）、６９５－０１－００２５、６９５－０１－００３１、６９５－０１－００３２、６９５－０１－００３３（最適と考えられる）、及び６９５－０１－００３４が、１週間から５０日間超の範囲の徐放継続期間に好適なｈＣＧ放出プロファイルを示した（図１０、１４～１６）。これらの配合物のさらなる分析を表８に提供する。

実施例４－SynBiosys［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＬＬＡ］マルチブロックコポリマーから構成されるｈＣＧ徐放マイクロスフェアの産生
本実施例は、SynBiosys［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］（ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＬＬＡ］）マルチブロックコポリマーから調製されたｈＣＧ徐放マイクロスフェアの調製及び特徴付けを記載する。

ｈＣＧ（Dong-A Pharmaceutical Co.,Ltd；Korea）を、ｐＨ７．４におけるＰＢＳ緩衝液＋メチオニン及び１０ｋＤａのカットオフサイズを有するポリエーテルスルホン膜を有するAmicon Ultra-15バイアルを使用して３０ｍｇ／ｍｌの標的濃度に濃縮した。濃縮溶液のｈＣＧ濃度は、ＲＰ－ＵＰＬＣにより決定して３０．７ｍｇ／ｍｌのｈＣＧであった。濃縮タンパク質溶液の可視的試験は、不溶性粒子が存在しないことを示した。ｈＣＧの統合性は、濃縮ステップの間維持された。ＲＰ－ＵＰＬＣ分析（図１７、ＵＰＬＣクロマトグラム）は凝集物の不存在を裏付け、分解の徴候は存在しなかった。

およそ０．３５ｇの濃縮ｈＣＧ溶液を、２．９２ｇのジクロロメタン（ＤＣＭ）中０．５０ｇのポリマーの溶液に添加し、次いで２２０００ｒｐｍにおいて４０秒間ホモジナイズして油中水型（Ｗ／Ｏ）一次エマルジョンを得た。次いで、この一次エマルジョンを、連続フロー反応器を使用して５．０ｗ／ｖ％のＮａＣｌを含有する４．０％の水性ＰＶＡ溶液により乳化させ、それにより水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）二重エマルジョンを形成させた。Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョンを室温において３時間撹拌してジクロロメタンの抽出及び蒸発を可能とした。溶媒蒸発の完了後、ｈＣＧマイクロスフェアを濾過により回収し、凍結乾燥させて乾燥ｈＣＧマイクロスフェアを得た。

上記手順を使用して、マイクロスフェアをSynBiosys５０［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ１０００－ｃｏ－ＰＣＬ］２０００－ｂ－［ＰＬＬＡ］４０００及びSynBiosys３０［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ３０００－ｃｏ－ＰＣＬ］４０００－ｂ－［ＰＬＬＡ］４０００のブレンドから、異なる配合及びプロセスパラメータ設定（ポリマーブレンド比、ポリマー濃度、ＣＰ：ＤＰ比）において調製した。

SynBiosys５０［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ１０００－ｃｏ－ＰＣＬ］２０００－ｂ－［ＰＬＬＡ］４０００（５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とも略される）は、２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する親水性［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ１０００－ｃｏ－ＰＣＬ］プレポリマーセグメント（Ａ）（１０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する５０モル％のポリエチレングリコールを含有）及び１，４－ブタンジイソシアネートにより５０／５０重量％のブロック比で鎖延長されている４０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する半結晶性ポリ（Ｌ－ラクチド）プレポリマーセグメント（Ｂ）から構成されるマルチブロックコポリマーである。SynBiosys ３０［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ３０００－ｃｏ－ＰＣＬ］４０００－ｂ－［ＰＬＬＡ］４０００（３０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０とも略される）は、４０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する親水性［ＰＣＬ－ｃｏ－ＰＥＧ３０００－ｃｏ－ＰＣＬ］プレポリマーセグメント（Ａ）（３０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する７５モル％のポリエチレングリコールを含有）、及び１，４－ブタンジイソシアネートにより３０／７０重量％のブロック比で鎖延長されている４０００ｇ／モルの分子量を有する半結晶性ポリ（Ｌ－ラクチド）プレポリマーセグメント（Ｂ）から構成されるマルチブロックコポリマーである。

得られたｈＣＧマイクロスフェアを、それらの粒子サイズ分布についてCoulter Counter Multisizer IIIを使用して特徴付けした。平均粒子サイズは、２１から４８μｍで変動した（表９）。

JEOL JCM-5000 Neoscopeを使用する走査型電子顕微鏡観察により評価されたｈＣＧマイクロスフェアの顕微鏡観察試験は、Coulter Counterを用いた結果を裏付けた。全てのｈＣＧマイクロスフェアは、類似の形態学的特徴、すなわち、平滑表面を有する球状に成形されたマイクロ粒子を有した（図１８）。

全てのマイクロスフェアのｈＣＧ含有率及びカプセル化効率（ＥＥ）は、０．１ＭのＮａＯＨ中でのポリマーの加水分解、加水分解物と１００ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．４との混合及びＲＰ－ＵＰＬＣによるｈＣＧ濃度の後続の分析により決定した。ｈＣＧマイクロスフェアバッチのｈＣＧ含有率は、１．３％から１．８％で変動し、７５％から９５％のカプセル化効率を表した（表９）。

インビトロ放出キネティクスは、ｈＣＧマイクロスフェアを、０．０１％のTween-20及び０．０１％のアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４中で３７℃においてインキュベートすること、所定の試料採取、及びＲＰ－ＵＰＬＣによるｈＣＧ濃度の分析により決定した。少なくとも４週間まで実施された累積放出プロファイルを決定した（図１９）。全ての配合物は、低～無バースト放出とそれに続くその後のｈＣＧの持続的放出を実証した。配合物の一部は、ラグタイムとそれに続く不規則な放出パターンを示した（ＪＡ１６０４４及びＪＡ１６０４５）。ＪＡ１６０４３は、最も有望な放出キネティクスを示した。それというのも、それはバーストを有さず、１週間の線形放出及び＞７５％の回収率を有したためである。ＪＡ１６－０４３を、放出ｈＣＧの統合性についてさらに分析した。インタクトｈＣＧの濃度をＲＰ－ＵＰＬＣにより決定した。図２０に示されるとおり、ｈＣＧはほぼ完全にそのインタクト形態でｈＣＧマイクロスフェアから放出された。

実施例５－SynBiosys２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーの合成
実施例４において使用された［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］マルチブロックコポリマーは、比較的緩慢に分解することが公知である。ポリ（ｐ－ジオキサノン）ベース結晶性ブロックから構成されるマルチブロックコポリマーは、より早く分解することが公知であり、それは反復皮下投与時のポリマー担体蓄積の防止において有益であり得た。

本実施例は、ＰＥＧ３０００及び２０／８０重量％のブロック比をベースとする［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーの合成及び特徴付けを記載する。

約４０００ｇ／ｍｏｌの分子量（Ｍ_ｎ）を有するポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ３０００－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）プレポリマー（ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬと略される）を、開始剤としての３０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ３０００）及び触媒としてのオクタン酸スズを使用するε－カプロラクトンの開環重合により調製した。約２５００ｇ／ｍｏｌの分子量（Ｍ_ｎ）を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）プレポリマー（ＰＤＯと略される）を、開始剤としての１，４－ブタンジオール及び触媒としてのオクタン酸スズを使用するｐ－ジオキサノンの開環重合により合成した。プレポリマーの分子量を^１Ｈ－ＮＭＲにより分析した。

２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］と略される、２０／８０重量％のブロック比を有する［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーを、鎖延長剤としての１，４－ブタンジイソシアネートを使用するｐ－ジオキサン中のＰＤＯプレポリマーを用いるＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬプレポリマーの鎖延長とそれに続くｐ－ジオキサンを除去するための凍結乾燥又は沈殿により調製した。

ポリマーを、^１Ｈ－ＮＭＲによりポリマー組成、固有粘度（ウベローデ、クロロホルム）、残留ｐ－ジオキサン含有率（ガスクロマトグラフィー）及び変調示差走査熱量測定により熱的特徴について分析した。表１０は、種々の［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーの特徴を列記する。

実施例６－SynBiosys２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーから構成されるｈＣＧ徐放マイクロスフェアの産生
ｈＣＧ（Dong-A Pharmaceutical Co.,Ltd.Korea）を、実施例４に記載のとおり３０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。１．５ｇの２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマー（ＲＣＰ－１５５７）を、ジクロロメタン中で１５重量％の濃度に溶解させた。０．７３ｇの濃縮ｈＣＧ溶液をポリマー溶液に添加し、２２０００ｒｐｍにおいて４０秒間ホモジナイズして油中水型（Ｗ／Ｏ）一次エマルジョンを得た。次いで、一次エマルジョンを、２０μｍの細孔を有する膜を使用する膜乳化を介して５．０ｗ／ｖ％のＮａＣｌを含有する４．０％の水性ＰＶＡ溶液により乳化させ、それにより水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）二重エマルジョンを形成させた。Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョンを室温において３時間撹拌してジクロロメタンの抽出及び蒸発を可能とした。溶媒蒸発の完了後、ｈＣＧマイクロスフェアを濾過により回収し、凍結乾燥させて乾燥ｈＣＧマイクロスフェアを得た。

実施例４に記載の方法を使用して特徴付けされたｈＣＧマイクロ粒子は、平滑表面形態を有する球状であり（図２１）、３８μｍの平均粒子サイズ及び狭い粒子サイズ分布（ＣＶ＝１４～１８％）を有した。ｈＣＧ含有率は、１．３３から１．６２重量％で変動し、６７から８６％のカプセル化効率を表した（表１０）。全てのマイクロ粒子は、ｒｈＣＧを徐々に且つ大部分インタクトで１１週間の期間にわたり、いかなる有意なバースト放出も示さずに放出した（図２２）。

バッチＪＡ１６１０１及びＪＡ１６１０２を、インビボ薬物動態／薬力学のさらなる検査のために１つのバッチに組み合わせた。

実施例７－若年成体カニクイザルにおけるｈＣＧ徐放マイクロスフェアのパイロット薬物動態／薬力学試験
ＪＡ１６１０１及びＪＡ１６１０２（実施例５）から回収されたｈＣＧ徐放マイクロスフェアを用いるインビボ薬物動態／薬力学試験を、５匹の健常な若年成体雄カニクイザルにおいて実施した。

試験の継続期間、全てのサルを３日間ごとにＧｎＲＨアンタゴニスト（Cetrorelix ２５０μｇ）により処理して下垂体機能及び内因性テストステロン産生を抑制した。全てのサルをCetrorelixにより前処理し（－５及び－２日目）、ｈＣＧ及びテストステロンレベルの両方について評価した。２匹のサルは、試験の継続期間、３μｇのｈＣＧの毎日の皮下注射を受け（対照群）：一方のサルにはOvidrelを投与し、他方のサルにはDong-A ｈＣＧを投与した。３匹のサルに単一用量のｈＣＧ徐放マイクロスフェア（２００μｇ、６００μｇ、及び１２００μｇのｒ－ｈＣＧ）を皮下投与した（ｈＣＧ－ＭＳＰ群）。

両方の群について、血液試料を最初の２４時間にわたり高頻度で、及びその後は定期的な間隔において得た。得られた血清をｈＣＧについてＥＬＩＳＡ法（ＬＬＯＱ＝０．５ｎｇ／ｍｌ）により、及びテストステロンレベルについてＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法（ＬＬＯＱ＝０．２５ｎｇ／ｍｌ）により、ｈＣＧ及びテストステロンレベルが低レベルに降下するまで評価した。

対照群のサルは、最初に血清ｈＣＧレベルの上昇を有し、これは血清テストステロンレベルの対応する上昇を伴った（図２３）。血清レベルは、３日目までに定常状態に達した。しかしながら、血清ｈＣＧ及び血清テストステロンレベルの両方は、ｈＣＧの継続的な毎日の注射にもかかわらず、後に最終的にほぼゼロまで下降した。

結合阻害分析を使用してｈＣＧに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在を確認した。対照群のサルから５５日目に回収された試料に対する添加回収分析は、血清ｈＣＧ及び血清テストステロンレベルの下降がｈＣＧに対するＡＤＡ応答を伴うことを裏付けた。処理サル血清に対する５及び５５ｎｇ／ｎｌの参照標準の両方の添加は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して未投与サル血清又は投与前のものが添加された場合の８０％＋超の回収率と異なりｈＣＧ回収率の完全な阻害をもたらした。

ｈＣＧ徐放マイクロスフェアにより処理された３匹全てのサルについて、ｈＣＧレベルは、近線形及び用量依存的に上昇する。４８時間にわたる血清ｈＣＧレベルは、最大用量についても、ほぼゼロのバーストが存在することを裏付けた（図２４、パネルＡ）。試験の継続期間にわたる血清ｈＣＧレベル及び血清テストステロンレベルを、図２４のパネルＢ及びパネルＣ）にグラフ化する。図２５は、２００μｇ（パネルＡ）、６００μｇ（パネルＢ）及び１２００μｇのｈＣＧ（パネルＣ）を表すｈＣＧ徐放マイクロスフェアを受けたそれぞれの個々のサルについての同じグラフ上の血清ｈＣＧ及び血清テストステロンを示す。これらのグラフは、試験全体にわたる血清ｈＣＧ及び血清テストステロンレベルの明確な類似を示す。さらに、これらは血清ｈＣＧが、約１４日間で有意な減少が生じるまで安定的に放出されることを示す。３３日目に回収されたｈＣＧ徐放マイクロスフェア処理サル血清の添加回収分析は、血清ｈＣＧレベルの下降が対照群と同様に不活性化ＡＤＡ応答により引き起こされることを裏付けた。

まとめると、このパイロット試験は、ｈＣＧ徐放マイクロスフェアの単一皮下注射がカニクイザルにおけるｈＣＧの用量依存的な持続放出を最小のバーストで提供すること、及びマイクロスフェアから放出されたｈＣＧがその生物活性を保持し、テストステロン応答を誘導することを実証する。

しかしながら、組換えヒトタンパク質に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の配合物に関する霊長類モデルの制限に起因して、放出の完全な継続期間にわたる薬物動態を評価することはできなかった。

抗薬物抗体は動物において反復曝露後にｈＣＧに対して形成することが公知であるため、本試験におけるｈＣＧに対するＡＤＡの形成は驚くべきことではなかった。まとめると、これらの観察は、ｈＣＧレベルの降下が配合物についての問題を反映するのではなく、単にヒトタンパク質の持続放出の評価のための動物モデルの制限であることを示す。不活性化ＡＤＡの発生はヒトにおいて予測されず、治療効果を縮小する可能性は低い。ヒト男性は、極めて低レベルであるが検出可能な天然発生レベルのｈＣＧを成人期において有し、ｈＣＧの投与に対する免疫応答を有することが予測されない。まとめると、ｈＣＧ徐放マイクロスフェアの単一皮下注射は、カニクイザルにおけるｈＣＧの用量依存的な持続放出を最小のバーストで提供する。

実施例８－SynBiosysマルチブロックコポリマー２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］から構成されるOvidrelベースｈＣＧマイクロスフェア
本実施例は、代替ｈＣＧ資源としてOvidrelを使用するｈＣＧ徐放マイクロスフェアの調製及び特徴付けを記載する。実施例５に記載のとおり合成された２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］の様々なバッチ（ＲＣＰ－１８０１、ＲＣＰ－１８０３、ＲＣ１８１１及びＲＣＰ－１８１４）を使用した。

ｈＣＧ溶液（Ovidrel、Serono）を、実施例４に記載のとおり３０ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ｈＣＧの統合性は、濃縮ステップの間維持された。ＳＥＣ－ＵＰＬＣ分析は、凝集物及びｈＣＧ分解の不存在を裏付けた。ｈＣＧ徐放マイクロスフェアを、実施例５に記載の一般的手順に従う一方、重要な配合及びプロセスパラメータを変えて１．５ｇのスケールにおいて製造した（表１３）。

全てのｈＣＧマイクロスフェアを、レーザ回折により粒子サイズ分布について特徴付けした。粒子は狭い粒子サイズ分布を有し、平均粒子サイズは３８から４９μｍであった（表１４）。ＳＥＭによる顕微鏡観察試験は、全てのマイクロ粒子が平滑表面形態を有することを示した。

ｈＣＧ ＵＰＬＣ法を、インタクトｈＣＧ及び主にそのサブユニットからなる分解産物間の最大分解能について最適化した。この方法を、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器及び蛍光検出器を備えるWaters Acquity H-Class UPLCシステム上で実施した。ｈＣＧ統合性は、インタクトタンパク質の濃度を全てのｈＣＧ関連化合物の総濃度と比較することにより決定した。インタクトｈＣＧ、α及びβサブユニット、可溶性凝集物並びにタンパク質断片を含有する典型的なクロマトグラムの一例を、図２６に示す。

マイクロ粒子からのｈＣＧの抽出及び最適化ＳＥＣ－ＵＰＬＣ法によるｈＣＧ濃度の分析により決定されたｈＣＧ含有率は、０．８８％（ＥＥ４４％）から１．９３％（ＥＥ９７％）まで変動した（表１４）。

ｈＣＧ及びｈＣＧ統合性のより正確な同定及び定量を可能とするより高い緩衝能を用いる最適化法を使用してインビトロ放出キネティクスを分析した。０．０２５％のTween-20及び０．０２％のアジ化ナトリウムを含有する１．０ｍｌの１００ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．４を含有し、振盪サーモスタット水浴中に配置されたバイアル中で３７℃においてｈＣＧマイクロスフェアをインキュベートした。試料を１週間以内の２日間の試料採取間隔の制限で週２回採取した。それぞれの試料採取時点において、試料を遠心分離し、０．８５ｍｌの上清を分析のために取り出した。試料をフレッシュＩＶＲ培地により２回洗浄し、取り出した容量をフレッシュＰＢＳ緩衝液により置き換えた。インビトロ放出試料における総及びインタクトｈＣＧ含有率を、ＳＥＣ－ＵＰＬＣにより決定した。放出ｒｈＣＧの統合性は、２日間の試料採取間隔後に採取された試料についてのみ確立して放出ｒｈＣＧ（溶液中）の最小の分解を確保した。

最適化インビトロ放出アッセイを使用し、ｈＣＧは、旧式の方法と比較して有意に早くｈＣＧ徐放マイクロ粒子から放出した。図２７は、表１３に従って調製された２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］ベースｈＣＧ徐放マイクロスフェアの累積放出キネティクスを示す。１２．５％の低ポリマー濃度を使用して調製されたＭＳ１８－０３５を除き、全ての配合物は、１から４週間、及びおよそ５週間の放出の総継続期間、ｒｈＣＧの低いバースト放出とそれに続くほぼ線形の放出により特徴付けされた類似のｈＣＧインビトロ放出キネティクスを示した。ＳＥＣ－ＵＰＬＣにより測定された放出ｒｈＣＧの統合性は、８５から９９％で変動した（表１５）。

まとめると、マイクロカプセル化プロセスはロバストであり、再現可能であり、狭い粒子サイズ分布、約１．６２重量％の平均ｈＣＧ含有率、＞８０％の許容可能なＥＥ、カプセル化ｈＣＧの良好な統合性（＞８６％）及び約５週間の継続期間を有するＳ字形インビトロ放出プロファイルを有するｈＣＧ徐放マイクロスフェアを生じさせることを結論付けることができる。

実施例９－カプセル化ｈＣＧ及びｈＣＧ－ＭＳＰから放出されたｈＣＧの生物活性
カプセル化及び放出ｈＣＧの生物活性を、マウスＭＡ－１０ライディッヒ細胞バイオアッセイにおいて測定した。検査試料を、実施例８に記載のとおり調製された２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］ベースｈＣＧ徐放マイクロスフェアの３つの代表的なロット（ＭＳ１８－０３１、ＭＳ１８－０３７及びＭＳ１８－０３８）から生成した。徐放マイクロスフェアをインビトロ放出アッセイに供し、ｈＣＧを放出させ、２時間、２３日及び３７日後に回収した。さらに、カプセル化ｒｈＣＧの安定性を評価するため、ｈＣＧを、５か月間凍結貯蔵された徐放マイクロスフェアのロットから抽出し、ライディッヒ細胞バイオアッセイにおいて検査した。

ENZOプロゲステロン酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キットを介してネズミライディッヒ細胞腫瘍系ＭＡ－１０中のプロゲステロンのｈＣＧ誘導産生を測定するｈＣＧバイオアッセイを使用してそれぞれのｈＣＧ－ＭＳＰロットからの放出ｒｈＣＧの生物活性を測定し、Ovidrel（組換え絨毛性ゴナドトロピン）の生物活性と比較した。

高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＵＰＬＣ）法により測定されたそれぞれの検査試料の総ｈＣＧ濃度及びインタクトｈＣＧのパーセントを、表１６に列記する。

様々なｈＣＧ試料により誘導されたプロゲステロンの測定レベルを表１７にまとめる。

ＭＡ－１０細胞中のプロゲステロン産生を誘導するｈＣＧ検査試料の能力における差のパーセントを、参照標準に対して計算した、表１８及び図２８（パネルＡ及びＢ）参照。

ＩＶＲ試料について、それぞれの試料採取時における３つのロットの平均を計算し（表１９、図２８（パネルＣ）にプロットした。

データは、マイクロスフェアから抽出され、又は放出されたｈＣＧがネズミＭＡ－１０ライディッヒ細胞によるプロゲステロンの産生を誘導し得ることを示す。抽出ｈＣＧについて、生物学的活性は参照標準（＞９０％）のものと類似しており、これは、ｈＣＧ－ＭＳＰ中のOvidrelが５．５か月間凍結貯蔵された場合にその効力を維持したことを示唆する。さらに、抽出溶媒は、ｈＣＧ統合性を減弱させず、それはｈＣＧバイオアッセイを干渉することもなかった。ｈＣＧ－ＭＳＰから放出されたｈＣＧについて、プロゲステロン応答は初期、中期及び後期の放出時点にわたり維持された。プロゲステロン応答は、９つのうち８つの放出試料において７５％超であり、９つの試料のうち６つにおいて８４％超であった。プロゲステロン応答の減少は経時的に存在した一方、これは全てのｈＣＧマイクロスフェアバッチについて生じるわけではなく、例えば、バッチＭＳ１８－０３７は、３つの時点にわたり活性の変化を実証しなかった。

まとめると、本試験は、ｈＣＧをマイクロスフェア中にカプセル化し、ｈＣＧ徐放マイクロスフェアから経時的に放出させることができる一方、その生物学的活性の薬理学的に重要な部分を維持することを実証する。

実施例１０－マイクロカプセル化ｈＣＧの２－ＡＢグリカンマッピング
ｈＣＧは、高グリコシル化及びシアリル化分子である。ｈＣＧシアリル化は、受容体相互作用、シグナル伝達、薬物動態及びインビボ曝露に影響するＣＱＡである。特に末端シアル酸に関するｈＣＧ分子への糖部分のリンカーは、潜在的に不安定である。水中油中水型プロセスを介するマイクロスフェア中へのｈＣＧのカプセル化がシアリル化レベル又は一般的グリコシル化に影響したか否か、次いでそれがタンパク質のインビトロ生物活性を必ずしも変化させずに薬物動態に影響を与えたか否かを調査するため、マイクロカプセル化ｈＣＧのシアリル化及び一般的グリコシル化レベルを２－ＡＢグリカンマッピングの特徴付けにより分析した。２０［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］ベースｈＣＧ－ＭＳＰ（ＭＳ１８－０３７）を、実施例８に記載のとおり調製した。ｈＣＧを実施例７に記載の手順に従って抽出し、抽出ｈＣＧの濃度及び統合性をＳＥＣ－ＵＰＬＣにより決定した（表２０）。抽出緩衝液（すなわち、０．２％のＳＤＳを有するＰＢＳ：ＭｅＯＨ（６７：３３））に関して考えられるマトリックス干渉又は試料調製に要求される真空濃縮の潜在的な効果を考慮するため、数層の対照を含めた。

６９個の異なるグリカン種を、ｒ－ｈＣＧについてモニタリングした。それぞれの種の存在量を総面積に関して評価し、相対的存在量で表した。主な種を図２９のパネルＡにまとめる。全てのＮ－グリカン種を、それらの構造的特性を考慮してそれらをグループ化することによりさらに詳細に示した。分岐性（antennarity）、ガラクトシル化、フコシル化及びシアリル化分布を得、図２９のパネルＢに提示する。

ＲＨＳを用いる実用性実験において、抽出材料からの２－ＡＢグリカンマッピングの適用及び結果の解釈を考慮して主にフコシル化種上で、部分的にはシアリル化種上でもマトリックス効果が観察された（図２９、パネルＢにおいて抽出緩衝液中のＲＨＳに対するＲＨＳについての値により示されるとおり））。シアリル化（ｈＣＧの活性及び効力についての重要品質特性として公知である）に関して、ＭＳＰから抽出されたｈＣＧの「試料」中で観察されるレベルは、「抽出緩衝液中の関連対照」と同等であり、これは、それぞれの対照に対するシアリル化レベルに対するカプセル化の影響がないことを示す。Ovidrel（抽出緩衝液の添加なしのベースラインとしての「参照」）と比較された差は、実用性実験において観察されたマトリックス効果と完全に並び、これは、追加の干渉を示さない。まとめると、カプセル化／抽出は、関連対照に対するシアリル化プロファイルを改変しなかった。フコシル化について、一部の差はマトリックス効果に関して明確に存在した。オルソゴナルに確認した場合の抽出手順の標準化を考慮してあるレベルの変動がＭＳＰから抽出された２つの試料間で観察された。全ての他のグリカン種は完全に並んだ。

本明細書に記載の規定の方法及び組成物は好ましい実施形態の代表例であり、例示であり、本発明の範囲を限定するものではない。他の目的、態様、及び実施形態は、本明細書の検討時に当業者に想起され、特許請求の範囲の範囲により定義される本発明の主旨内に包含される。種々の置換及び改変を、本発明の範囲及び主旨から逸脱せずに本明細書に開示の本発明になすことができることが当業者には容易に明らかである。本明細書に説明として記載される本発明は、好適には、本明細書に不可欠なものとして具体的に開示されていない任意の１つ若しくは複数の要素、又は１つ若しくは複数の限定の不存在下で実施することができる。したがって、例えば、本明細書のそれぞれの例において、本発明の実施形態又は実施例において、用語「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」のいずれも、本明細書において他の２つの用語のいずれかにより置き換えることができる。また、用語「含む（comprising）」、「含む（including）」、含有する」などは、広く限定なしで読むべきである。本明細書に説明として記載される方法及びプロセスは、好適には、ステップの異なる順序で実施することができ、それらは本明細書又は特許請求の範囲に示されるステップの順序に必ずしも制限されない。また、本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される単数形「a」、「an」及び「the」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り複数の参照対象を含む。いかなる状況下でも、特許が本明細書に具体的に開示される規定の実施例又は実施形態又は方法に限定されると解釈することはできない。

本発明を本明細書において広く一般的に記載してきた。包括的開示内に収まるより狭い種及び準包括的な群のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これは、除外された材料が本明細書に具体的に引用されるか否かにかかわらず、属から任意の主題を除く条件又は負の限定を有する本発明の包括的説明を含む。

他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内に存在する。さらに、本発明の特徴部又は態様がマーカッシュ群で記載される場合、当業者は、それにより本発明がマーカッシュ群の任意の個々のメンバー又はメンバーの下位群によっても記載されることを認識する。

Claims (37)

1. 徐放ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）剤形であって、
   （ａ）ｈＣＧ又はその生物学的に活性な誘導体若しくは生物学的に活性なアイソフォーム；及び
   （ｂ）生分解性ポリマーマイクロスフェア
   を含み、
   前記ｈＣＧは、前記マイクロスフェア中に存在し、前記マイクロスフェアは、前記ｈＣＧの徐放を提供する剤形。
2. 前記マイクロスフェアは、前記マイクロスフェア中に存在するｈＣＧの総重量に基づき約３％未満から約４０％の前記ｈＣＧを約２４時間以内に放出する、請求項１に記載の剤形。
3. 前記生分解性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリ（ブチレンテレフタレート）（ＰＢＴ）を含むコポリマーである、請求項１又は２に記載の剤形。
4. 前記ＰＥＧは、約１０００から約２５００ｇ／ｍｏｌ、例えば、約１２００から約２４００ｇ／ｍｏｌ、約１４００から約２３００ｇ／ｍｏｌ、約１５００から約２２００ｇ／ｍｏｌ、約１６００から約２１００ｇ／ｍｏｌ、約１８００から約２０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する、請求項３に記載の剤形。
5. 前記ＰＥＧ及びＰＢＴポリマーは、７５／２５及び７７／２３からなる群から選択される重量比で存在し、前記コポリマー中に含まれる前記ＰＥＧは、１５００ｇ／ｍｏｌの鎖長を有し；前記マイクロスフェアは、０．５から１．０の水ポリマー重量比を有する、請求項３又は４に記載の剤形。
6. 前記生分解性ポリマーは、少なくとも１つの加水分解性プレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの加水分解性プレポリマー（Ｂ）セグメントを含むマルチブロックコポリマーを含み、前記マルチブロックコポリマーは、生理学的条件下で３７℃以下のＴ_ｇ及び１１０～２５０℃のＴ_ｍを有し、前記セグメントは、多官能性鎖延長剤により結合しており、前記セグメントは、前記ポリマー鎖上でランダム分布しており、プレポリマー（Ａ）セグメントは、ポリエチレングリコールを含む、請求項１又は２に記載の剤形。
7. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントは、ジオール、ジカルボン酸、及びヒドロキシカルボン酸から選択されるエステル形成モノマーの反応生成物を含み、好ましくは、前記プレポリマー（Ａ）セグメントは、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、ε－カプロラクトン、及び／又はδ－バレロラクトンの反応生成物を含む、請求項６に記載の剤形。
8. 前記マルチブロックコポリマー中のプレポリマー（Ａ）の含有率は、前記マルチブロックコポリマーの総重量に基づき約１０％から約９０％、例えば、約３０％から約７５％、又は約５０％から約７０％である、請求項６又は７に記載の剤形。
9. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントは、約５００ｇ／ｍｏｌ以上、例えば、約７００ｇ／ｍｏｌ以上、約１０００ｇ／ｍｏｌ以上、約２０００ｇ／ｍｏｌ以上、約３０００ｇ／ｍｏｌ以上、又は約４０００ｇ／ｍｏｌ以上のＭ_ｎを有する、請求項６～８のいずれか一項に記載の剤形。
10. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントは、ポリ（Ｌ－ラクチド）を含み、好ましくは、約１０００ｇ／ｍｏｌ以上、例えば、約２０００ｇ／ｍｏｌ以上、約３０００ｇ／ｍｏｌ以上、又は約４０００ｇ／ｍｏｌ以上のＭ_ｎを有するポリ（Ｌ－ラクチド）を含む、請求項６～９のいずれか一項に記載の剤形。
11. 前記コポリマー中のプレポリマー（Ｂ）の含有率は、前記マルチブロックコポリマーの総重量に基づき約１０％から約９０％、例えば、約２５％から約７０％、又は約３０％から約５０％である、請求項６～１０のいずれか一項に記載の剤形。
12. 前記多官能性鎖延長剤は、二官能性脂肪族鎖延長剤であり、好ましくは、ジイソシアネート、例えば、１，４－ブタンジイソシアネートである、請求項６～１１のいずれか一項に記載の剤形。
13. 前記ポリエチレングリコールは、約１５０から約５０００ｇ／ｍｏｌ、例えば、約２００ｇ／ｍｏｌから約１５００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約１０００ｇ／ｍｏｌ、約４００から約３０００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約１５００ｇ／ｍｏｌ、約６００から約５０００ｇ／ｍｏｌ、又は約１０００から約３０００ｇ／ｍｏｌのＭ_ｎを有する、請求項６～１２のいずれか一項に記載の剤形。
14. 前記生分解性マルチブロックコポリマーは、約１から約４、好ましくは、約１から約２、より好ましくは、約１から約１．５の生理学的条件下の膨潤比を有する、請求項６～１３のいずれか一項に記載の剤形。
15. 前記生分解性マルチブロックコポリマーは、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］マルチブロックコポリマーである、請求項６～１４のいずれか一項に記載の剤形。
16. 前記生分解性ポリマーは、少なくとも１つのアモルファス加水分解性プレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性加水分解性プレポリマー（Ｂ）セグメントを含む生分解性、相分離、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
    － 生理学的条件下の前記マルチブロックコポリマーは、３７℃以下のＴ_ｇ及び５０～１１０℃のＴ_ｍを有し；
    － 前記セグメントは、多官能性鎖延長剤により結合しており；
    － 前記セグメントは、前記ポリマー鎖上でランダム分布しており；
    － 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントは、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、式中、Ｙは、重合開始剤であり、Ｘは、７以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長さを有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、請求項１又は２に記載の剤形。
17. Ｘは、約７から約３５、例えば、約８から約３０、約９から約２５、約１０から約２０、又は約１２から約１５のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長さを有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、請求項１６に記載の剤形。
18. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントの少なくとも一部は、水溶性ポリマーに由来し、好ましくは、プレポリマー（Ａ）の総重量基準の約３０％以上、例えば、約４０から約９５％、約５０から約９０％、又は約６０から約８５％は、水溶性ポリマーに由来する、請求項１６又は１７に記載の剤形。
19. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量基準の約７０％以上、好ましくは、約８０％以上、より好ましくは、約９０％以上は、ポリ（ｐ－ジオキサノン）である、請求項１７又は１８に記載の剤形。
20. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１３００から約７２００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、約１３００から約５０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、約１５００から約４５００ｇ／ｍｏｌ、さらにより好ましくは、約２０００から約４０００ｇ／ｍｏｌ、最も好ましくは、約２２００から約３０００ｇ／ｍｏｌの数平均分子量Ｍ_ｎを有する、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の剤形。
21. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１８００から約１００８０ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、約１８００から約７０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、約２１００から約６３００ｇ／ｍｏｌ、さらにより好ましくは、約２６００から約５６００ｇ／ｍｏｌ、最も好ましくは、約３０００から約４２００ｇ／ｍｏｌの重量平均分子量Ｍ_ｗを有する、請求項１６～２０のいずれか一項に記載の剤形。
22. 前記プレポリマー（Ｂ）は、約０℃未満、好ましくは、約－２０℃未満、より好ましくは、約－４０℃未満のＴ_ｇを有する、請求項１６～２１のいずれか一項に記載の剤形。
23. 前記プレポリマー（Ｂ）は、約６０から約１００℃の範囲、好ましくは、約７５から約９５℃の範囲のＴ_ｍを有する、請求項１６～２２のいずれか一項に記載の剤形。
24. 前記水溶性ポリマーは、ポリエーテル、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリテトラメチレンオキシド（ＰＴＭＯ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルカプロラクタム、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（ポリ－（ＨＥＭＡ））、ポリホスファゼン、又はそれらのポリマーのコポリマーからなる群から選択され、好ましくは、前記水溶性ポリマーは、約１５０から約５０００ｇ／ｍｏｌのＭ_ｎを有するポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）に由来する、請求項１６～２３のいずれか一項に記載の剤形。
25. 前記鎖延長剤は、二官能性脂肪族鎖延長剤であり、好ましくは、ジイソシアネート、例えば、１，４－ブタンジイソシアネートである、請求項１６～２４のいずれか一項に記載の剤形。
26. プレポリマー（Ａ）は、環状モノマー及び／又は非環状モノマーの反応生成物を含み、前記非環状モノマーは、好ましくは、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、セバシン酸、乳酸、グリコール酸、ヒドロキシ酪酸、エチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４－ブタンジオール及び／又は１，６－ヘキサンジオールからなる群から選択され、前記環状モノマーは、好ましくは、グリコリド、ラクチド、ε－カプロラクトン、δ－バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、１，５－ジオキセパン－２－オン、１，４－ジオキサン－２－オン（ｐ－ジオキサノン）及び／又は環状無水物、例えば、オキセパン－２，７－ジオンからなる群から選択される、請求項１６～２５のいずれか一項に記載の剤形。
27. 前記生分解性マルチブロックコポリマーは、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリエチレングリコール－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーである、請求項１６～２６のいずれか一項に記載の剤形。
28. 前記生分解性マルチブロックコポリマーは、［（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）_ｑ］_ｒ［（Ｒ^４ _ｐＲ^５Ｒ^６ _ｐ）］_ｓにより表され、
    式中、
    Ｒ^１、及びＲ^３は、それぞれ
    

    

    
    であり、
    Ｒ^２は、
    

    

    
    であり、
    Ｒ^４及びＲ^６は、それぞれ
    

    

    
    であり、
    ｎは、繰り返しＲ^２部分の数であり、２０～１１５、好ましくは、３５～１００、より好ましくは、４５～８５であり；
    ｐは、繰り返しＲ^４及びＲ^６部分の数であり、７以上、好ましくは、７～３５、例えば、１０～２０、又は１０～１４であり；
    ｑは、（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）ブロックの数平均分子量であり、１０００～７０００ｇ／ｍｏｌ、好ましくは、３０００～５０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは、３８００～４２００ｇ／ｍｏｌであり；
    ｒ／ｓは、プレポリマー（Ａ）セグメントとプレポリマー（Ｂ）セグメントとの比であり、０．１０～１．０、例えば、０．１５～０．５０、又は０．２０～０．３０である、
    請求項１６～２７のいずれか一項に記載の剤形。
29. ｎは、６３～７３であり、ｐは、１０～１４であり、ｑは、３８００～４２００であり、ｒ／ｓは、０．１５～０．３５である、請求項２８に記載の剤形。
30. 前記マイクロスフェアは、約１４から約５０日間の徐放を可能とする放出プロファイルを有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の剤形。
31. 少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の剤形。
32. 請求項１～３１のいずれか一項に記載の剤形を投与する方法であって、前記マイクロスフェアは、前記マイクロスフェアのｈＣＧ含有量の総量に基づき約２０％未満、好ましくは、約１０％未満、より好ましくは、約５％未満のｈＣＧを最初の約２４時間以内に放出する方法。
33. 前記投与は、皮内、筋肉内、経皮、又は皮下である、請求項３２に記載の方法。
34. ｈＣＧを必要とする対象を治療する方法であって、請求項１～３１のいずれか一項に記載の剤形を投与することを含む方法。
35. 前記治療は、性腺機能低下症、停留睾丸、黄体期維持、避妊、下垂体障害、乳癌、及び体重損失からなる群から選択される適応症のための治療である、請求項３４に記載の方法。
36. ｈＣＧを必要とする対象の治療において、前記剤形を前記対象に投与することを含む使用のための、請求項１～３１のいずれか一項に記載の剤形。
37. 好ましくは、ｈＣＧの徐放のための、請求項１～３１のいずれか一項に記載の生分解性ポリマーマイクロスフェアの使用。
    

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