JP2022124931A - シワ改善剤、およびコラーゲン産生促進剤 - Google Patents

Abstract

【課題】新規なシワ改善剤とコラーゲン産生促進剤を提供すること。【解決手段】（Ａ）ナイアシンアミドと、（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上と、を含有するシワ改善剤、及びコラーゲン産生促進剤。【選択図】図１

Description

本発明は、（Ａ）ナイアシンアミドと、（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上を含有するシワ改善剤、およびコラーゲン産生促進剤に関する。

ナイアシンアミドは、水溶性ビタミンの一種であるニコチン酸（ビタミンＢ３／ナイアシン）のアミドである。ナイアシンアミドは、美白効果、シワ改善硬化を有することが知られており、例えば、特許文献１には、（ａ）ナイアシンアミドと、（ｂ）ダイズ、ゴマ、ローズヒップ、チャノキ、エンメイソウ、ゲットウ、から選ばれる１種または２種以上のポリフェノール含有植物抽出物とを含有するシワ改善用の皮膚外用剤又は化粧料が提案されている。

環状アミノ酸は、側鎖に環状構造をもつアミノ酸の総称のことであり、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、エクトインなどが例示できる。その中でもとくに、エクトインは、低分子量の環状アミノ酸で、紫外線を浴びたことによる日焼け細胞の生成を低下させることが報告されたことから（特許文献２）、皮膚外用剤としての適用が注目されている。
環状ジペプチドは、直鎖状ジペプチドの末端に存在するアミノ基とカルボキシル基とが脱水縮合することにより生成した環状構造を有するジペプチドであり、近年ではその様々な生理活性が注目されており、例えば、特許文献３には、環状ジペプチドを有効成分とする皮膚保湿機能改善剤が提案されている。
特許文献４には、メマツヨイグサ抽出物が、コラーゲンを認識する受容体膜タンパク質の一種であるＤｉｓｃｏｉｄｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＤＤＲ）の産生を促進することが報告されている。

特開２０１９－２１０２１６号公報 特表２００２－５２２３６６ 特開２０１８－０２１０３０号公報 特開２０１９－１９９４４１号公報

新規なシワ改善剤とコラーゲン産生促進剤を提供することを課題とする。

本発明の課題を解決するための主な手段は、次のとおりである。
１．（Ａ）ナイアシンアミドと、
（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上と、
を含有することを特徴とするシワ改善剤。
２.（Ａ）ナイアシンアミドと、
（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上と、
を含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
３.前記環状アミノ酸が、エクトイン
前記環状ジペプチドが、ｃｙｃｌｏ Ｇｌｙ－Ｐｒｏ、ｃｙｃｌｏ Ｐｒｏ－Ｇｌｙのいずれか１以上
である１．に記載のシワ改善剤。
４.前記環状アミノ酸が、エクトイン
前記環状ジペプチドが、ｃｙｃｌｏ Ｇｌｙ－Ｐｒｏ、ｃｙｃｌｏ Ｐｒｏ－Ｇｌｙのいずれか１以上
である２．に記載のコラーゲン産生促進剤。

本発明のシワ改善剤、およびコラーゲン産生促進剤は、（Ａ）ナイアシンアミドと、（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出液のいずれか１以上を含有することにより、これらを単独で含有するシワ改善剤、およびコラーゲン産生促進剤のそれぞれと比較して、より優れた効果を発揮することができる。

実施例における蛍光強度を示すグラフ。

本発明の皮膚外用剤、シワ改善剤、およびコラーゲン産生促進剤（以下、これらをまとめて本発明の剤ともいう）は、
（Ａ）ナイアシンアミドと、（Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出液のいずれか１以上と、を含有する。
以下、本発明の剤について詳述する。

（Ａ）
・ナイアシンアミド
ナイアシンアミドは、ナイアシン（ビタミンＢ３）のアミドである。ナイアシンは、人体内で５００以上もの酵素の補酵素として機能しており、心身の健康維持に不可欠なものである。ナイアシンアミドは、生物由来、合成由来、生物由来のナイアシンをアミド化した半合成由来のいずれを用いることもできる。生物由来のナイアシンアミドとしては、ナイアシンアミドを含む植物等の粉末、抽出物等が挙げられ、これらはそのまま、または精製して用いることができる。

（Ｂ）
・環状アミノ酸
環状アミノ酸は、側鎖に環状構造をもつアミノ酸であり、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、エクトインなどが例示できる。これらの中で、エクトイン（１，４，５，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－２－ｍｅｔｈｙｌ－４－ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）が好ましい。
・環状ジペプチド
環状ジペプチドは、直鎖状ジペプチドの末端に存在するアミノ基とカルボキシル基とが脱水縮合することにより生成した環状構造を有するジペプチドである。本発明において環状ジペプチドの構成アミノ酸はとくに制限されないが、コラーゲン産生能の観点で、グリシン（Ｇｌｙ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、アラニン（Ａｌａ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、またはアルギニン（Ａｒｇ）であることが好ましく、直鎖ジペプチドは、より具体的には、Ｇｌｙ－Ｐｒｏ、Ｐｈｅ－Ｐｒｏ、Ｌｅｕ－Ｐｒｏ、Ｈｉｓ－Ｐｒｏ、Ｐｒｏ－Ｇｌｙ、Ｐｒｏ－Ｈｙｐ、Ｐｒｏ－Ａｌａ、Ｐｒｏ－Ａｒｇ、Ｐｒｏ－Ｌｅｕ、またはＨｙｐ－Ｇｌｙであることが好ましい。

・メマツヨイグサ抽出物
メマツヨイグサ抽出物は、イブニングプリムローズという別名で知られるメマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）の抽出物である。メマツヨイグサ抽出物は、その植物の全草又は花、茎、葉、根、種子のうちの一つ以上を、常温又は加温下にて溶剤に浸漬して抽出するか、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。得られた抽出物は、クロマトグラフィー等を用いて精製することもできる。これらの中で、種子の抽出物が好ましい。また、抽出物は、各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又は抽出液を乾燥や凍結乾燥して得られる乾燥末あるいはペーストの形態で使用することができるが、抽出液のまま用いることが好ましい。

メマツヨイグサ抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水、アルコール類のメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等、多価アルコール類のプロピレングリコール、ブチレングリコール等、ケトン類のアセトン、メチルエチルケトン等、エステル類の酢酸メチル、酢酸エチル等、鎖状及び環状エーテル類のテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等、ポリエーテル類のポリエチレングリコール等、ハロゲン化炭化水素類のジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等、炭化水素類のヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等、芳香族炭化水素類のベンゼン、トルエン等、ピリジン類等が挙げられ、これらの２種以上を混合して用いることもできる。上記の中でも、ブチレングリコールが好ましい。

メマツヨイグサ種子抽出液の好ましい抽出方法の例としては、濃度０～１００ｖｏｌ％の含水エチルアルコール、１，３－ブチレングリコール又はアセトンを用い、室温で、又は加温して１～５日間抽出を行った後、濾過し、得られた濾液を更に一週間程放置して熟成させ、再び濾過を行う方法が挙げられる。但し、抽出法はこれに限定されるものではない。

メマツヨイグサ抽出液は、そのまま、あるいは一定期間放置し熟成させた後に用いることもできる。必要に応じて、本発明の効果に影響のない範囲で、更に、濾過又はイオン交換樹脂等により、脱臭、脱色等の精製処理を施して用いることもできる。さらに液体クロマトグラフィー等の分離手段を用い、活性の高い画分を取り出して用いることもできる。また、メマツヨイグサ種子エキスは、市販されているものを使用することもできる。市販品としては、例えば、メマツヨイグサ種子エキス１．０重量％を含有する一丸ファルコス株式会社製「ルナホワイトＢ」が挙げられる。ルナホワイトＢは、メマツヨイグサ種子エキスを１．０重量％、１，３－ブチレングリコール４９．５重量％と水４９．５重量％からなる。

本発明の剤において、ナイアシンアミドの濃度は本発明の効果を奏する限り特に制限されない。例えば、ナイアシンアミドは、固形分換算で０．１ｍＭ以上１５ｍＭ以下であることが好ましく、０．５ｍＭ以上１２ｍＭ以下であることがより好ましく、１．０ｍＭ以上１０ｍＭ以下であることがさらに好ましい。

本発明の剤において、環状アミノ酸の濃度は本発明の効果を奏する限り特に制限されない。例えば、環状アミノ酸は、固形分換算で０．０１重量％以上５重量％以下であることが好ましく、０．０５重量％以上３重量％以下であることがより好ましく、０．０５重量％以上１重量％以下であることがさらに好ましい。
本発明の剤において、環状ジペプチドの濃度は本発明の効果を奏する限り特に制限されない。例えば、環状ジペプチドは、固形分換算で０．０１重量％以上５重量％以下であることが好ましく、０．０５重量％以上３重量％以下であることがより好ましく、０．０５重量％以上１重量％以下であることがさらに好ましい。
本発明の剤において、メマツヨイグサ抽出物の濃度は本発明の効果を奏する限り特に制限されない。例えば、メマツヨイグサ抽出物は、固形分換算で０．００００１重量％以上０．００１重量％以下であることが好ましく、０．００００５重量％以上０．０００８重量％以下であることがより好ましく、０．０００１重量％以上０．０００５重量％以下であることがさらに好ましい。

また、ナイアシンアミドと、環状アミノ酸もしくは環状ジペプチドの重量比率（乾燥重量比）は、１：２～５の範囲内が好ましい。ナイアシンアミドとメマツヨイグサ抽出物の重量比率（乾燥重量比）は、１：０．０００１～０．０１の範囲内が好ましい。

本発明の剤は、通常使用される製剤化方法に従って製造することができ、医薬、医薬部外品、化粧料とすることができる。例えば、本発明の剤は、水溶液、油剤、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハップ剤、エアゾル剤、坐剤、注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等の種々の剤型とすることができる。

本発明の剤は、医薬、医薬部外品、化粧料として、通常配合される植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、抗癌剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。

油脂類としては、例えばツバキ油、月見草油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ナタネ油、トウモロコシ油、ゴマ油、ホホバ油、胚芽油、小麦胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、等の液体油脂、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム核油、モクロウ、モクロウ核油、硬化油、硬化ヒマシ油等の固体油脂、ミツロウ、キャンデリラロウ、綿ロウ、ヌカロウ、ラノリン、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ等のロウ類、流動パラフィン、スクワレン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス等が挙げられる。
高級脂肪酸として、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）等が挙げられる。
高級アルコールとして、例えば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、オクチルドデカノール等の分枝鎖アルコール等が挙げられる。
シリコーンとして、例えば、鎖状ポリシロキサンのジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等、環状ポリシロキサンのデカメチルポリシロキサン等が挙げられる。

アニオン界面活性剤として、例えば、ラウリン酸ナトリウム等の脂肪酸塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥラウリル硫酸トリエタノールアミン等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、Ｎ－アシルサルコシン酸、スルホコハク酸塩、Ｎ－アシルアミノ酸塩等が挙げられる。
カチオン界面活性剤として、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。
両性界面活性剤として、アルキルベタイン、アミドベタイン等のベタイン系界面活性剤等が挙げられる。
非イオン界面活性剤として、例えば、ソルビタンモノオレエート等のソルビタン脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体が挙げられる。

防腐剤として、例えばメチルパラベン、エチルパラベン等を挙げることができる。
金属イオン封鎖剤として、例えばエデト酸、エデト酸ナトリウム塩等を挙げることができる。
高分子として、例えば、アラビアゴム、トラガカントガム、ガラクタン、グアーガム、カラギーナン、ペクチン、寒天、クインスシード、デキストラン、プルラン、カルボキシメチルデンプン、コラーゲン、カゼイン、ゼラチン、メチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ等）等のビニル系高分子、ベントナイト等を挙げることができる。
増粘剤として、カラギーナン、トラガカントガム、クインスシード、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ＣＭＣ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニルポリマー、グアーガム、キサンタンガム等を挙げることができる。
粉末成分としては、タルク、カオリン、雲母、シリカ、ゼオライト、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末、無機白色顔料、無機赤色系顔料、酸化チタンコーテッドマイカ、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ等のパール顔料、赤色２０１号、赤色２０２号等の有機顔料を挙げることができる。

紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸、サリチル酸フェニル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、２，４－ジヒドロキシベンゾフェノン等を挙げることができる。
紫外線遮断剤として、酸化チタン、タルク、カルミン、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛等を挙げることができる。
保湿剤として、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、ソルビトール、ブドウ糖、果糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、シクロデキストリン等が挙げられる。

薬効成分としては、ビタミンＡ油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ２類、ピリドキシン塩酸塩等のＢ６類、Ｌ－アスコルビン酸、Ｌ－アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ－アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ－アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ－アスコルビン酸－２－グルコシド等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、ビタミンＤ２、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類；α－トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ－α－トコフェロール等のビタミンＥ類等のビタミン類を挙げることができる。

その他の薬効成分として、プラセンタエキス、グルタチオン、ユキノシタ抽出物等の美白剤、ローヤルゼリー、ぶなの木エキス等の皮膚賦活剤、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸γ－オリザノール等の血行促進剤、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、アズレン等の消炎剤、アルギニン、セリン、ロイシン、トリプトファン等のアミノ酸類、マルトースショ糖縮合物等の常在菌コントロール剤、塩化リゾチーム等を挙げることができる。

さらに、カミツレエキス、パセリエキス、ぶなの木エキス、ワイン酵母エキス、グレープフルーツエキス、スイカズラエキス、コメエキス、ブドウエキス、ホップエキス、コメヌカエキス、ビワエキス、オウバクエキス、ヨクイニンエキス、センブリエキス、メリロートエキス、バーチエキス、カンゾウエキス、シャクヤクエキス、サボンソウエキス、ヘチマエキス、トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエエキス、ローズマリーエキス、セージエキス、タイムエキス、茶エキス、海藻エキス、キューカンバーエキス、チョウジエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ハマメリスエキス、クワエキス等の各種抽出物を挙げることができる。

以下、実施例に基づいて本発明について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

ナイアシンアミド（富士フィルム和光純薬株式会社製造会社）
環状アミノ酸（メルク株式会社製、「エクトイン」）
環状ジペプチド（ゼライス株式会社製、「ｃＧＰ」（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ））
メマツヨイグサ抽出物（一丸ファルコス株式会社製、「ルナホワイト」、メマツヨイグサ抽出物１重量％含有、溶媒ブチレングリコール）

ＮＨＤＦ細胞（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｄｅｒｍａｌ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ細胞、Ｐ５）を９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに２５００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種して２４時間培養した。培地を除去し、ナイアシンアミド、環状アミノ酸（エクトイン）、環状ジペプチド（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ）、メマツヨイグサ抽出物（ルナホワイト）のいずれか１以上の含有培地に交換した。各原料含有培地はＤＭＥＭ／０．５％ ＦＢＳ／ＰＳ培地で希釈し、添加後の最終濃度がナイアシンアミド：１．２５，５ｍＭ、エクトイン：０．５％、ｃＧＰ：０．５％、ルナホワイト：０．０３２％（メマツヨイグサ抽出物として０．０００３２％）になるよう調製した。
各原料含有培地に交換してから４８時間培養した後、培地を除去しＰＢＳ（－）で洗浄してからＰＦＡを添加し、室温で１５分間固定した。ＰＦＡを除去し、ＰＢＳ（－）で洗浄後、Ｓｔａｒｉｔｉｎｇ Ｂｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒを添加し、室温で１時間ブロッキングした。
次に、Ｓｔａｒｉｔｉｎｇ Ｂｌｏｃｋ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒで１０００倍に希釈した１次抗体（Ａｎｔｉ－Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ、ａｂｃａｍ）を添加し、４℃で一晩反応させた。
次いで、ＰＢＳ（－）で３回洗浄後、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒで２００倍に希釈した二次抗体（Ａｌｅｘａ４８８ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ， Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加し、室温で１時間反応させた。ＰＢＳ（－）で３回洗浄後、ＰＢＳ（－）で１０００倍に希釈したＤＡＰＩ（４’，６－ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２－ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ）を添加し、１５分間室温で反応させた。
ＰＢＳ（－）で３回洗浄した後、Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＧＥヘルスケアジャパン株式会社）で蛍光強度を検出した。

検出されたＣｏｌｌａｇｅｎ Ｉの１細胞あたりの蛍光強度を解析し、比較例１に対する相対値を算出してＣｏｌｌａｇｅｎ Ｉの量を評価した。結果を表１、図１に示す。

実施例１～５に示すように、（Ａ）ナイアシンアミドと、（Ｂ）環状ペプチド、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれかを併用することにより、これらを単独で使用するよりもコラーゲンの産生が促進されることが確かめられた。

Claims (4)

1. （Ａ）ナイアシンアミドと、
   （Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上と、
   を含有することを特徴とするシワ改善剤。
2. （Ａ）ナイアシンアミドと、
   （Ｂ）環状アミノ酸、環状ジペプチド、メマツヨイグサ抽出物のいずれか１以上と、
   を含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
3. 前記環状アミノ酸が、エクトイン
   前記環状ジペプチドが、ｃｙｃｌｏ Ｇｌｙ－Ｐｒｏ、ｃｙｃｌｏ Ｐｒｏ－Ｇｌｙのいずれか１以上
   である請求項１に記載のシワ改善剤。
4. 前記環状アミノ酸が、エクトイン
   前記環状ジペプチドが、ｃｙｃｌｏ Ｇｌｙ－Ｐｒｏ、ｃｙｃｌｏ Ｐｒｏ－Ｇｌｙのいずれか１以上
   である請求項２に記載のコラーゲン産生促進剤。

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