JP2021535128A - 抗ｐｄ−１抗体に対して不応性のｎｓｃｌｃ患者の治療 - Google Patents

抗ｐｄ−１抗体に対して不応性のｎｓｃｌｃ患者の治療 Download PDF

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Abstract

本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療のための治療効果が増加した治療的ＴＩＬ集団を調製するために、ＴＩＬを調製するための改善および／または短縮されたプロセスおよび方法を提供し、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７２５，９７６号および２０１８年９月４日に出願された米国仮特許出願第６２／７２６，９１９号の優先権を主張し、これらは参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１９年８月２３日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、１１６９８３−５０４３−ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名前で、サイズは１６８キロバイトである。
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の養子移入を使用した巨大な不応性癌の治療は、予後不良の患者の治療に対する強力なアプローチとなる。Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，６，３８３−３９３。免疫療法を成功させるには多数のＴＩＬが必要であり、商品化には堅牢かつ信頼性の高いプロセスが必要である。これは、細胞拡張に関する技術、物流、および規制上の問題のために達成することが困難であった。ＩＬ−２ベースのＴＩＬ拡張とそれに続く「急速拡張プロセス」（ＲＥＰ）は、その速度および効率のためにＴＩＬ拡張の好ましい方法になっている。Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２，２９８，８５０−５４、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５，２３，２３４６−５７、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８，２６，５２３３−３９、Ｒｉｄｄｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，２５７，２３８−４１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２−４２。ＲＥＰは、フィーダー細胞としての、多くの場合、複数のドナーに由来する照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、単核細胞（ＭＮＣ）としても知られる）の大過剰（例えば、２００倍）、ならびに抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）および高用量のＩＬ−２を必要とするが、１４日間にわたってＴＩＬの１，０００倍の拡張をもたらし得る。Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２−４２。ＲＥＰ手順を受けたＴＩＬは、黒色腫を有する患者の宿主免疫抑制に続いて、養子細胞療法を成功させた。現在の注入受容パラメーターは、ＴＩＬの組成（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８、またはＣＤ４陽性）の読み取り値、ならびにＲＥＰ産物の倍率拡張および生存率に依存している。
現在のＴＩＬの製造および治療プロセスは、長さ、コスト、無菌性の懸念、および本明細書に記載される他の要因によって制限されているため、抗ＰＤ１に対して不応性であるために患者を治療する可能性は厳しく制限されている。実行可能な治療選択肢がほとんどまたはまったく残っていない患者を治療する際に使用するのに適したＴＩＬ製造プロセスおよびかかるプロセスに基づく療法を提供することが緊急に必要である。本発明は、抗ＰＤ−１治療に対して不応性である非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者の治療に用いることができるＴＩＬを生成する際に使用するための短縮された製造プロセスを提供することによって、この必要性を満たす。
本発明は、抗ＰＤ−１治療に対して不応性である非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者の治療に使用するために、ＴＩＬを拡張し、治療的ＴＩＬ集団を産生するための改善および／または短縮された方法を提供する。
本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団で治療する方法であって、
（ａ）外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または複数の腫瘍断片もしくは生検からのものを含む、患者のＮＳＣＬＣ腫瘍からの腫瘍とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第１のＴＩＬ集団を取得および／または受容するステップと、
（ｃ）腫瘍断片を、第１の細胞培養培地と接触させるステップと、
（ｄ）第１の細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団の初期拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を取得するステップであって、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地が、ＩＬ−２を含む、ステップと、
（ｅ）第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の急速拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を取得するステップであって、第３のＴＩＬ集団が、急速拡張の開始から７日後に第２のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地が、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、および任意に照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、ステップと、
（ｆ）第３のＴＩＬ集団を採取するステップと、
（ｇ）第３のＴＩＬ集団の治療上有効な部分を、ＮＳＣＬＣを有する患者に投与するステップと、を含み、
ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、「取得すること」は、方法および／またはプロセスで用いられるＴＩＬが、方法および／またはプロセスステップの一部として、試料（外科的切除、針生検、コア生検、小生検、もしくは他の試料を含む）から直接誘導され得ることを示す。いくつかの実施形態では、「受容すること」は、方法および／またはプロセスで用いられるＴＩＬが、試料（外科的切除、針生検、コア生検、小生検、もしくは他の試料を含む）から間接的に誘導され、次いで、方法および／またはプロセスで用いられ得る（例えば、ステップ（ａ）が、パート（ａ）に含まれていない別のプロセスによって試料から既に誘導されたＴＩＬで始まる場合、かかるＴＩＬは、「受容済み」と称され得る）ことを示す。
いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ集団を取得することは、多病変サンプリング法を含む。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＰＤ−Ｌ２抗体で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、２１日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、１４日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、約１１日の期間にわたって行われ、急速拡張は、約１１日の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で第１の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、ＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で第２の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミド投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者への第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団で治療する方法であって、
（ａ）患者から１つ以上の腫瘍を切除するステップであって、１つ以上の腫瘍が、第１のＴＩＬ集団を含む、ステップと、
（ｂ）１つ以上の腫瘍を、腫瘍断片に断片化するステップと、
（ｃ）腫瘍断片を、第１の細胞培養培地と接触させるステップと、
（ｄ）第１の細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団の初期拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を取得するステップであって、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５倍多く、第１の細胞培養培地が、ＩＬ−２を含む、ステップと、
（ｅ）第２の細胞培養培地で第２のＴＩＬ集団の急速拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を取得するステップであって、第３のＴＩＬ集団が、急速拡張の開始から７日後に第２のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、第２の細胞培養培地が、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、および任意に照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、急速拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、ステップと、
（ｆ）第３のＴＩＬ集団を採取するステップと、
（ｇ）第３のＴＩＬ集団の治療上有効な部分を、癌を有する患者に投与するステップと、を含み、
癌が、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、２１日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、１４日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、約１１日の期間にわたって行われ、急速拡張は、約１１日の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で第１の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、ＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で第２の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、非骨髄破壊的リンパ枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミド投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者への第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する対象を治療するための方法であって、癌が、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性であり、拡張した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む方法が、
（ａ）対象から取得された１つ以上の腫瘍を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された１つ以上の腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得および／または受容することと、
（ｂ）腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３〜１１３〜１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補足することによって第２の拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７〜１１７〜１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、第２のＴＩＬ集団と比較して、エフェクターＴ細胞および／またはセントラルメモリーＴ細胞の増加した亜集団を含む、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２の拡張を行うことと、
（ｅ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行（ｔｒａｎｓｆｅｒ）が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｇ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）から採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｈ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象に投与することと、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、「取得すること」は、方法および／またはプロセスで用いられるＴＩＬが、方法および／またはプロセスステップの一部として、試料（外科的切除、針生検、コア生検、小生検、もしくは他の試料を含む）から直接誘導され得ることを示す。いくつかの実施形態では、「受容すること」は、方法および／またはプロセスで用いられるＴＩＬが、試料（外科的切除、針生検、コア生検、小生検、もしくは他の試料を含む）から間接的に誘導され、次いで、方法および／またはプロセスで用いられ得る（例えば、ステップ（ａ）が、パート（ａ）に含まれていない別のプロセスによって試料から既に誘導されたＴＩＬで始まる場合、かかるＴＩＬは、「受容済み」と称され得る）ことを示す。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、イピリムマブまたはそのバイオシミラー、およびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣは、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、２１日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、１４日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、約３〜１１日の期間にわたって行われ、第２の拡張は、約７〜１１日の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、約１１日の期間にわたって行われ、急速拡張は、約１１日の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で第１の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、ＯＫＴ−３抗体は、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で第２の細胞培養培地中に存在する。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、第１の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、患者への第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００または７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである。
ステップＡ〜Ｆの概要を提供する例示的なプロセス２Ａチャート。 プロセス２Ａのプロセスフローチャート。 プロセス２Ａのプロセスフローチャート。 プロセス２Ａのプロセスフローチャート。 凍結保存されたＴＩＬの例示的な製造プロセス（約２２日）の実施形態の図を示す。 ２２日間のＴＩＬ製造プロセスであるプロセス２Ａの実施形態の図を示す。 プロセス１Ｃおよびプロセス２Ａの例示的な実施形態からのステップＡ〜Ｆの比較表。 プロセス１Ｃの実施形態およびプロセス２Ａの実施形態の詳細な比較。 組み合わせコホートの研究フローチャート：コホート１Ａ（ＭＭ）、コホート２Ａ（ＨＮＳＣＣ）、およびコホート３Ａ（ＮＳＣＬＣ）。略語：Ｃｙ＝シクロホスファミド、ＥＯＡ＝評価の終了、ＥＯＳ＝研究の終了、ＥＯＴ＝治療の終了、Ｆｌｕ＝フルダラビン、ＩＬ−２＝インターロイキン−２、ＮＭＡ−ＬＤ＝非骨髄破壊的リンパ球枯渇、Ｑ３Ｗ＝３週間ごと、ＴＩＬ＝腫瘍浸潤リンパ球。コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａの患者は、ＴＩＬ産生のために腫瘍切除の完了後にペムブロリズマブの単回注入を受け、ＮＭＡ−ＬＤレジメンの開始前にベースライン走査を受ける。この特定の研究では、ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ−２の完了後より早く投与されず、その後２年（２４ヶ月）以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までＱ３Ｗ±３日間継続する。 単剤コホートの研究フローチャート：コホート３Ｂ（ＮＳＣＬＣ）。略語：Ｃｙ＝シクロホスファミド、ＥＯＡ＝評価の終了、ＥＯＳ＝研究の終了、ＥＯＴ＝治療の終了、Ｆｌｕ＝フルダラビン、ＩＬ−２＝インターロイキン−２、ＮＭＡ−ＬＤ＝非骨髄破壊的リンパ球枯渇、ＴＩＬ＝腫瘍浸潤リンパ球。 ２２日間のＴＩＬ製造プロセスであるプロセス２Ａの実施形態の図を示す。 構造Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂを提供し、円筒は、個々のポリペプチド結合ドメインを指す。構造Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂは、例えば、４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢに結合する抗体から誘導される３つの線形に結合したＴＮＦＲＳＦ結合ドメインを含み、これらを折り畳んで三価タンパク質を形成し、次いでこれをＩｇＧ１−Ｆｃ（ＣＨ３およびＣＨ２ドメインを含む）によって第２の三価タンパク質に結合し、次いでこれを使用して、三価タンパク質のうちの２つをジスルフィド結合（小さい長楕円）によって一緒に結合し、構造を安定化し、６つの受容体およびシグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインを一緒にして、シグナル伝達複合体を形成することができるアゴニストを提供する。円筒として示されるＴＮＦＲＳＦ結合ドメインは、例えば、親水性残基および柔軟性のためのＧｌｙおよびＳｅｒ配列、ならびに溶解性のためのＧｌｕおよびＬｙｓを含み得るリンカーによって接続されたＶＨおよびＶＬ鎖を含む、ｓｃＦｖドメインであり得る。
配列表の簡単な説明
配列番号１は、ムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２は、ムロモナブの軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３は、組み換えヒトＩＬ−２タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４は、アルデスロイキンのアミノ酸配列である。
配列番号５は、組み換えヒトＩＬ−４タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号６は、組み換えヒトＩＬ−７タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７は、組み換えヒトＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８は、組み換えヒトＩＬ−２１タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９は、ヒト４−１ＢＢのアミノ酸配列である。
配列番号１０は、マウス４−１ＢＢのアミノ酸配列である。
配列番号１１は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の重鎖である。
配列番号１２は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の軽鎖である。
配列番号１３は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１４は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１５は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１６は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号１７は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１８は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１９は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２０は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ−０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２１は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の重鎖である。
配列番号２２は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の軽鎖である。
配列番号２３は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号２４は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号２５は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２６は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２７は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２８は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２９は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３０は、４−１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号３１は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。
配列番号３２は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３３は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３４は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３５は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３６は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３７は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３８は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号３９は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４０は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４１は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４２は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。
配列番号４３は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４４は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４５は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号４６は、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）アミノ酸配列である。
配列番号４７は、４−１ＢＢＬポリペプチドの可溶性部分である。
配列番号４８は、４−１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４−１−１バージョン１の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号４９は、４−１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４−１−１バージョン１の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号５０は、４−１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４−１−１バージョン２の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号５１は、４−１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４−１−１バージョン２の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号５２は、４−１ＢＢアゴニスト抗体Ｈ３９Ｅ３−２の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号５３は、４−１ＢＢアゴニスト抗体Ｈ３９Ｅ３−２の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号５４は、ヒトＯＸ４０のアミノ酸配列である。
配列番号５５は、マウスＯＸ４０のアミノ酸配列である。
配列番号５６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の重鎖である。
配列番号５７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の軽鎖である。
配列番号５８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号５９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号６０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号６１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号６３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号６４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ−０５６２）の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号６６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖である。
配列番号６７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖である。
配列番号６８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号６９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号７０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号７１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号７２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号７３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号７４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号７５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号７６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖である。
配列番号７７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖である。
配列番号７８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号７９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号８０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号８１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号８２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号８３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号８４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号８５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号８６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号８７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号８８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号８９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号９０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号９１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号９２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号９３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９−１２２の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号９４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号９５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号９６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号９７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号９８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号９９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１００は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号１０１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６−２２２の軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１０２は、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）アミノ酸配列である。
配列番号１０３は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの可溶性部分である。
配列番号１０４は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの代替可溶性部分である。
配列番号１０５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体００８の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１０６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体００８の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１０７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０１１の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１０８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０１１の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１０９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２１の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２１の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１１１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２３の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２３の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１１３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１１５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１１７は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１８は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１１９は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１２０は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１２１は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１２２は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１２３は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１２４は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１２５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）である。
配列番号１２６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。
配列番号１２７は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号１２８は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号１２９は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列である。
配列番号１３０は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列である。
配列番号１３１は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１３２は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１３３は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１３４は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１３５は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１３６は、ＰＤ−１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１３７は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号１３８は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号１３９は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列である。
配列番号１４０は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列である。
配列番号１４１は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１４２は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１４３は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１４４は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１４５は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１４６は、ＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１４７は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号１４８は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号１４９は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列である。
配列番号１５０は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列である。
配列番号１５１は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１５２は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１５３は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１５４は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１５５は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１５６は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１５７は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号１５８は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号１５９は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列である。
配列番号１６０は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列である。
配列番号１６１は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１６２は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１６３は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１６４は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１６５は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１６６は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１６７は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号１６８は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号１６９は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列である。
配列番号１７０は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列である。
配列番号１７１は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１７２は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１７３は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
配列番号１７４は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
配列番号１７５は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
配列番号１７６は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
Ｉ．導入
急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）によってエクスビボで培養されたＴＩＬを利用した養子細胞療法は、黒色腫などの癌を有する患者の宿主免疫抑制後の養子細胞療法に成功している。現在の注入受容パラメーターは、ＴＩＬの組成（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８、またはＣＤ４陽性）の読み取り値、ならびにＲＥＰ産物の拡張の数値倍率および生存率に依存している。
現在のＲＥＰプロトコルは、患者に注入されるＴＩＬの健康状態についてほとんど洞察を与えていない。Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞からエフェクターＴ細胞への成熟の過程で、重大な代謝シフトを起こす（Ｃｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６，１７，３６４を参照、その全体が本明細書に明示的に組み込まれ、特に議論のために、ならびに嫌気性および好気性代謝のマーカー）。例えば、ナイーブＴ細胞は、ミトコンドリア呼吸に依存してＡＴＰを産生するが、ＴＩＬなどの成熟した健康なエフェクターＴ細胞は、高度に解糖系であり、好気性解糖に依存して増殖、移動、活性化、および抗腫瘍効果に必要な生体エネルギー基質を提供する。
現在のＴＩＬの製造および治療プロセスは、長さ、コスト、無菌性の懸念、および本明細書に記載される他の要因によって制限されているため、抗ＰＤ１に対して不応性であるために患者を治療する可能性は厳しく制限されている。実行可能な治療選択肢がほとんどまたはまったく残っていない患者を治療する際に使用するのに適したＴＩＬ製造プロセスおよびかかるプロセスに基づく療法を提供することが緊急に必要である。本発明は、抗ＰＤ−１治療に対して不応性である非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者の治療に用いることができるＴＩＬを生成する際に使用するための短縮された製造プロセスを提供することによって、この必要性を満たす。
ＩＩ．定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じである。本明細書で参照されるすべての特許および刊行物は、参照によりそれら全体が組み込まれる。
本明細書で使用される「同時投与」、「同時投与すること」、「組み合わせて投与される」、「組み合わせて投与すること」、「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」、および「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）」という用語は、対象への２つ以上の医薬品有効成分（本発明の好ましい実施形態では、例えば、複数のＴＩＬ）の投与を包含し、医薬品有効成分および／またはそれらの代謝物の両方が、対象において同時に存在するようにする。同時投与には、別々の組成物での同時投与、別々の組成物での異なる時間での投与、または２つ以上の医薬品有効成分が存在する組成物での投与が含まれる。別々の組成物での同時投与および両方の薬剤が存在する組成物での投与が好ましい。
「インビボ」という用語は、対象の体内で起こる事象を指す。
「インビトロ」という用語は、対象の体外で起こる事象を指す。インビトロアッセイには、生きているかもしくは死んでいる細胞が用いられる細胞ベースのアッセイが包含され、無傷の細胞が用いられない無細胞アッセイも含み得る。
「エクスビボ」という用語は、対象の体から除去された細胞、組織、および／または器官に対して治療する、または処置を行うことを伴う事象を指す。適切には、細胞、組織、および／または器官は、外科手術または治療の方法で対象の体に戻され得る。
「急速拡張」という用語は、１週間の期間にわたって少なくとも約３倍（または４、５、６、７、８、もしくは９倍）、より好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１０倍（または２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、もしくは９０倍）、あるいは最も好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１００倍の抗原特異的ＴＩＬの数の増加を意味する。本明細書では、いくつかの急速拡張プロトコルが記載されている。
本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。ＴＩＬには、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１およびＴｈ１７ ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにＭ１マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬには、一次ＴＩＬおよび二次ＴＩＬの両方が含まれる。「一次ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から取得されるもの（「新たに採取された」と称されることもある）であり、「二次ＴＩＬ」は、本明細書で論じられるように拡張または増殖された任意のＴＩＬ細胞集団であり、バルクＴＩＬおよび拡張ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」または「ｐｏｓｔ−ＲＥＰ ＴＩＬ」）が含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬ細胞集団には、遺伝子改変ＴＩＬが含まれ得る。
本明細書における「細胞の集団」（ＴＩＬを含む）とは、共通の形質を共有するいくつかの細胞を意味する。一般に、集団は、概して１×１０６〜１×１０１０の数の範囲であり、異なるＴＩＬ集団は、異なる数を含む。例えば、ＩＬ−２の存在下での一次ＴＩＬの初期成長は、およそ１×１０８細胞のバルクＴＩＬの集団をもたらす。ＲＥＰ拡張は、一般に、注入用の１．５×１０９〜１．５×１０１０細胞の集団を提供するために行われる。
本明細書における「凍結保存されたＴＩＬ」とは、一次、バルク、または拡張（ＲＥＰ ＴＩＬ）のいずれかのＴＩＬが、約−１５０℃〜−６０℃の範囲で処理および保存されることを意味する。凍結保存のための一般的な方法は、実施例を含む本明細書の他の場所にも記載されている。明確にするために、「凍結保存されたＴＩＬ」は、一次ＴＩＬの供給源として使用される可能性のある凍結組織試料と区別することができる。
本明細書における「解凍された凍結保存ＴＩＬ」とは、以前に凍結保存され、その後、細胞培養温度またはＴＩＬが患者に投与され得る温度を含むがこれらに限定されない、室温以上に戻るように処理されたＴＩＬの集団を意味する。
ＴＩＬは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義され得るか、または腫瘍に浸潤して治療を行う能力によって機能的に定義され得る。ＴＩＬは、一般に、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ−１、およびＣＤ２５のうちの１つ以上のバイオマーカーを発現させることによって分類され得る。加えておよび代替的に、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力によって機能的に定義することができる。
「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ）」または「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）」という用語は、細胞の凍結保存に使用できる任意の培地を指す。かかる培地は、７％〜１０％のＤＭＳＯを含む培地を含むことができる。例示的な培地には、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０、Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍａｓｏｌ、およびそれらの組み合わせが含まれる。「ＣＳ１０」という用語は、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓまたはＢｉｏｌｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから取得した凍結保存培地を指す。ＣＳ１０培地は、商品名「ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０」と称され得る。ＣＳ１０培地は、ＤＭＳＯを含む無血清の動物成分を含まない培地である。
「セントラルメモリーＴ細胞」という用語は、ヒトではＣＤ４５Ｒ０＋であり、ＣＣＲ７（ＣＣＲ７ｈｉ）およびＣＤ６２Ｌ（ＣＤ６２ｈｉ）を構成的に発現するＴ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型には、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ−７Ｒ）、およびＩＬ−１５Ｒも含まれる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子には、ＢＣＬ−６、ＢＣＬ−６Ｂ、ＭＢＤ２、およびＢＭＩ１が含まれる。セントラルメモリーＴ細胞は、ＴＣＲトリガー後、主にエフェクター分子としてＩＬ−２およびＣＤ４０Ｌを分泌する。セントラルメモリーＴ細胞は、血液中のＣＤ４コンパートメントで優勢であり、ヒトではリンパ節および扁桃腺において比例して濃縮される。
「エフェクターメモリーＴ細胞」という用語は、セントラルメモリーＴ細胞と同様にＣＤ４５Ｒ０＋であるが、ＣＣＲ７の構成的発現を失い（ＣＣＲ７ｌｏ）、ＣＤ６２Ｌ発現が不均一であるかまたは低い（ＣＤ６２Ｌｌｏ）、ヒトまたは哺乳動物Ｔ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型には、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ−７Ｒ）、およびＩＬ−１５Ｒも含まれる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子には、ＢＬＩＭＰ１が含まれる。エフェクターメモリーＴ細胞は、抗原刺激後に高レベルの炎症性サイトカイン（インターフェロン−γ、ＩＬ−４、およびＩＬ−５を含む）を急速に分泌する。エフェクターメモリーＴ細胞は、血液中のＣＤ８コンパートメントで優勢であり、ヒトでは肺、肝臓、および腸において比例して濃縮される。ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞は、大量のパーフォリンを担持する。
「閉鎖系」という用語は、外部環境に対して閉じている系を指す。細胞培養法に適した任意の閉鎖系を、本発明の方法で用いることができる。閉鎖系には、例えば、密閉Ｇ容器が含まれるが、これに限定されない。腫瘍セグメントが閉鎖系に付加されると、ＴＩＬを患者に投与する準備ができるまで、系は外部環境に開かれない。
腫瘍を破壊するためのプロセスを説明するために本明細書で使用される「断片化すること」、「断片」、および「断片化された」という用語は、腫瘍組織を破砕、スライス、分割、および細切するなどの機械的断片化法、ならびに腫瘍組織の物理的構造を破壊するための任意の他の方法を含む。
「末梢血単核細胞」および「ＰＢＭＣ」という用語は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）および単球を含む、丸い核を有する末梢血細胞を指す。好ましくは、末梢血単核細胞は、照射された同種異系末梢血単核細胞である。ＰＢＭＣは、抗原提示細胞の一種である。
「抗ＣＤ３抗体」という用語は、抗体またはその多様体、例えば、モノクローナル抗体を指し、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体中のＣＤ３受容体に対して向けられるヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む。抗ＣＤ３抗体には、ムロモナブとしても知られるＯＫＴ−３が含まれる。抗ＣＤ３抗体には、Ｔ３およびＣＤ３εとしても知られるＵＨＣＴ１クローンも含まれる。他の抗ＣＤ３抗体には、例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ、およびビシリズマブが含まれる。
「ＯＫＴ−３」（本明細書では「ＯＫＴ３」とも称される）という用語は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体中のＣＤ３受容体に対して向けられるヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、モノクローナル抗体またはそのバイオシミラーもしくは多様体を指し、ＯＫＴ−３（３０ｎｇ／ｍＬ、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ ｐｕｒｅ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）およびムロモナブもしくは多様体、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、またはそれらのバイオシミラーなどの市販の形態を含む。ムロモナブの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を表１に示す（配列番号１および配列番号２）。ＯＫＴ−３を産生することができるハイブリドーマは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８００１が割り当てられている。ＯＫＴ−３を産生することができるハイブリドーマは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）にも寄託され、カタログ番号８６０２２７０６が割り当てられている。
Figure 2021535128
「ＩＬ−２」（本明細書では「ＩＬ２」とも称される）という用語は、インターロイキン−２として知られるＴ細胞成長因子を指し、ヒトおよび哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー、およびそれらの多様体を含む、すべての形態のＩＬ−２を含む。ＩＬ−２は、例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２，３９８３−８８およびＭａｌｅｋ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，２６，４５３−７９に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−２のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号３）。例えば、ＩＬ−２という用語は、アルデスロイキン（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ、単回使用バイアルあたり２２００万ＩＵで複数の供給元から市販されている）などのヒト組み換え形態のＩＬ−２、ならびにＣｅｌｌＧｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，ＮＨ，ＵＳＡ（ＣＥＬＬＧＲＯ ＧＭＰ）またはＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡによって市販されている組み換えＩＬ−２の形態（カタログ番号ＣＹＴ−２０９−ｂ）および他のベンダーからの他の商用同等物を包含する。アルデスロイキン（デス−アラニル−１、セリン−１２５ヒトＩＬ−２）は、およそ１５ｋＤａの分子量を有する非グリコシル化ヒト組み換え形態のＩＬ−２である。本発明での使用に適したアルデスロイキンのアミノ酸配列を表２に示す（配列番号４）。ＩＬ−２という用語はまた、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なペグ化ＩＬ２プロドラッグＮＫＴＲ−２１４を含む、本明細書に記載されるペグ化形態のＩＬ−２を包含する。本発明での使用に適したＮＫＴＲ−２１４およびペグ化ＩＬ−２は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３２８７９１Ａ１号および国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０６５０８６Ａ１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に適したコンジュゲートＩＬ−２の代替形態は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、同第５，０８９，２６１号、および同第４，９０２，５０２号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に適したＩＬ−２の製剤は、米国特許第６，７０６，２８９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
Figure 2021535128
「ＩＬ−４」（本明細書では「ＩＬ４」とも称される）という用語は、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これは、Ｔｈ２ Ｔ細胞ならびに好酸球、好塩基球、および肥満細胞によって産生される。ＩＬ−４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）からＴｈ２ Ｔ細胞への分化を調節する。Ｓｔｅｉｎｋｅ ａｎｄ Ｂｏｒｉｓｈ，Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２００１，２，６６−７０。ＩＬ−４によって活性化されると、その後Ｔｈ２ Ｔ細胞は、正のフィードバックループで追加のＩＬ−４を産生する。ＩＬ−４はまた、Ｂ細胞増殖およびクラスＩＩ ＭＨＣ発現を刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥおよびＩｇＧ１の発現へのクラススイッチを誘導する。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−４は、ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ−２１１）およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ−１５組み換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＣＴＰ００４３）を含む、複数の供給元から市販されている。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−４のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号５）。
「ＩＬ−７」（本明細書では「ＩＬ７」とも称される）という用語は、インターロイキン７として知られるグリコシル化組織由来のサイトカインを指し、これは、間質細胞および上皮細胞、ならびに樹状細胞から取得することができる。Ｆｒｙ ａｎｄ Ｍａｃｋａｌｌ，Ｂｌｏｏｄ ２００２，９９，３８９２−９０４。ＩＬ−７は、Ｔ細胞の発達を刺激することができる。ＩＬ−７は、ＩＬ−７受容体αおよび共通γ鎖受容体からなるヘテロ二量体であるＩＬ−７受容体に結合し、これは、胸腺内のＴ細胞の発達および末梢内の生存に重要な一連のシグナルである。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−７は、ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ−２５４）およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ−１５組み換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＰＨＣ００７１）を含む、複数の供給元から市販されている。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−７のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号６）。
「ＩＬ−１５」（本明細書では「ＩＬ１５」とも称される）という用語は、インターロイキン−１５として知られるＴ細胞成長因子を指し、ヒトおよび哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー、およびそれらの多様体を含む、すべての形態のＩＬ−２を含む。ＩＬ−１５は、例えば、Ｆｅｈｎｉｇｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，Ｂｌｏｏｄ ２００１，９７，１４−３２に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−１５は、βおよびγシグナル伝達受容体サブユニットをＩＬ−２と共有する。組み換えヒトＩＬ−１５は、１２．８ｋＤａの分子量を有する１１４アミノ酸（およびＮ末端メチオニン）を含有する単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組み換えヒトＩＬ−１５は、ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ−２３０−ｂ）およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ−１５組み換えタンパク質、カタログ番号３４−８１５９−８２）を含む、複数の供給元から市販されている。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−１５のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号７）。
「ＩＬ−２１」（本明細書では「ＩＬ２１」とも称される）という用語は、インターロイキン−２１として知られる多面発現サイトカインタンパク質を指し、ヒトおよび哺乳動物の形態、保存的アミノ酸置換、グリコフォーム、バイオシミラー、およびそれらの多様体を含む、すべての形態のＩＬ−２１を含む。ＩＬ−２１は、例えば、Ｓｐｏｌｓｋｉ ａｎｄ Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．２０１４，１３，３７９−９５に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ−２１は、主にナチュラルキラーＴ細胞および活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生される。組み換えヒトＩＬ−２１は、１５．４ｋＤａの分子量を有する１３２アミノ酸を含有する単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組み換えヒトＩＬ−２１は、ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ−４０８−ｂ）およびＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ−２１組み換えタンパク質、カタログ番号１４−８２１９−８０）を含む、複数の供給元から市販されている。本発明での使用に適した組み換えヒトＩＬ−２１のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号８）。
「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、または「治療量」が示された場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍のサイズ、感染または転移の程度、および患者（対象）の状態の個人差を考慮して、医師が決定することができる。一般に、本明細書に記載される腫瘍浸潤リンパ球（例えば、二次ＴＩＬまたは遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球）は、体重１ｋｇあたり１０４〜１０１１細胞（例えば、体重１ｋｇあたり１０５〜１０６、１０５〜１０１０、１０５〜１０１１、１０６〜１０１０、１０６〜１０１１、１０７〜１０１１、１０７〜１０１０、１０８〜１０１１、１０８〜１０１０、１０９〜１０１１、または１０９〜１０１０細胞）（それらの範囲内のすべての整数値を含む）の投与量で投与され得る。腫瘍浸潤リンパ球（場合によっては、遺伝子改変された細胞傷害性リンパ球を含む）組成物もまた、これらの投与量で複数回投与され得る。腫瘍浸潤リンパ球（場合によっては遺伝的を含む）は、免疫療法で一般的に知られている注入技法を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照）。特定の患者に最適な投与量および治療レジームは、疾患の兆候について患者を監視し、それに応じて治療を調整することにより、医学の当業者によって容易に決定することができる。
本明細書で使用される「微小環境」という用語は、全体としての固形もしくは血液学的腫瘍微小環境、または微小環境内の細胞の個々のサブセットを指す場合がある。本明細書で使用される腫瘍微小環境は、Ｓｗａｒｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１２，７２，２４７３に記載されるように、「細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス、および腫瘍性形質転換を促進し、腫瘍の成長および浸潤をサポートし、腫瘍を宿主免疫から保護し、治療抵抗性を助長し、優勢な転移が成功するためのニッチを提供する機械的手がかり」の複雑な混合物を指す。腫瘍はＴ細胞によって認識されるべき抗原を発現するが、微小環境による免疫抑制のため、免疫系による腫瘍クリアランスはまれである。
実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団で癌を治療する方法を含み、患者は、本発明によるＴＩＬの注入の前に非骨髄破壊的化学療法で予め治療される。いくつかの実施形態では、患者が本発明によるＴＩＬの注入の前に非骨髄破壊的化学療法で予め治療される、ＴＩＬの集団が提供され得る。実施形態では、非骨髄破壊的化学療法は、シクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日で２日間（ＴＩＬ注入の２７日前および２６日前）、ならびにフルダラビン２５ｍｇ／ｍ２／日で５日間（ＴＩＬ注入の２７日前〜２３日前）である。実施形態では、本発明による非骨髄破壊的化学療法およびＴＩＬ注入（０日目）の後、患者は、生理学的許容範囲まで８時間ごとに７２０，０００ＩＵ／ｋｇでＩＬ−２の静脈内注入を受ける。
実験結果は、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性Ｔ細胞および免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）を排除することによって治療効果を高める上で重要な役割を果たすことを示している。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のｒＴＩＬを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある）を利用する。
「有効量」または「治療有効量」という用語は、疾患治療を含むがこれに限定されない、意図される用途を達成するのに十分である、本明細書に記載の化合物または化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図される用途（インビトロもしくはインビボ）、または治療される対象および病状（例えば、対象の体重、年齢、および性別）、病状の重症度、または投与様式に応じて異なり得る。この用語はまた、標的細胞において特定の応答（例えば、血小板粘着および／または細胞移動の低減）を誘導する用量にも適用される。特定の用量は、選択された特定の化合物、従うべき投薬レジメン、化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それが投与される組織、および化合物が運ばれる物理的送達系に応じて異なる。
「治療」、「治療すること」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を取得することを指す。その効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防するという点で予防的であり得、かつ／または疾患および／もしくは疾患に起因する副作用の部分的もしくは完全な治癒という点で治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患にかかりやすい可能性があるが、まだ疾患を有すると診断されていない対象において疾患が生じるのを予防することと、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、疾患の発達または進行を阻止することと、（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退行を引き起こし、かつ／または１つ以上の疾患症状を軽減することと、を含む。「治療」はまた、疾患または状態がない場合でさえ、薬理学的効果を提供するための薬剤の送達を包含することを意味する。例えば、「治療」は、病状がない場合、例えば、ワクチンの場合に免疫応答を誘発するか、または免疫を与えることができる組成物の送達を包含する。
核酸またはタンパク質の一部に関して使用される場合の「異種」という用語は、核酸またはタンパク質が、本質的に互いに同じ関係に見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は、典型的には組み換え的に産生され、新たな機能的核酸、例えば、ある供給源からのプロモーターおよび別の供給源からのコード領域、または異なる供給源からのコード領域を作製するように配置された無関係の遺伝子からの２つ以上の配列を有する。同様に、異種タンパク質は、そのタンパク質が、本質的に互いに同じ関係に見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す（例えば、融合タンパク質）。
２つ以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「配列同一性」、「同一性パーセント」、および「配列同一性パーセント」（もしくはそれらの同義語、例えば「９９％同一」）という用語は、同じであるか、または配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮せずに、最大の対応のために比較および整列した場合（必要に応じてギャップを導入する）、特定のパーセンテージの同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを取得するために使用することができる様々なアルゴリズムおよびソフトウェアが、当該技術分野で知られている。配列同一性パーセントを決定するための好適なプログラムには、例えば、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターのＢＬＡＳＴウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴプログラム集が含まれる。２つの配列間の比較は、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。ＤＮＡＳＴＡＲから入手可能なＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはＭｅｇＡｌｉｇｎは、配列を整列させるために使用することができる追加の公的に入手可能なソフトウェアプログラムである。当業者は、特定のアラインメントソフトウェアによって最大アラインメントのための適切なパラメーターを決定することができる。ある特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメーターが使用される。
本明細書で使用される場合、「多様体」という用語は、参照抗体のアミノ酸配列内または隣接するある特定の位置における１つ以上の置換、欠失、および／または付加によって参照抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む抗体または融合タンパク質を包含するが、これらに限定されない。多様体は、参照抗体のアミノ酸配列と比較して、そのアミノ酸配列に１つ以上の保存的置換を含み得る。保存的置換は、例えば、同様に荷電または非荷電のアミノ酸の置換を含み得る。多様体は、参照抗体の抗原に特異的に結合する能力を保持している。多様体という用語には、ペグ化抗体またはタンパク質も含まれる。
本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。ＴＩＬには、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１およびＴｈ１７ ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにＭ１マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬには、一次ＴＩＬおよび二次ＴＩＬの両方が含まれる。「一次ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から取得されるもの（「新たに採取された」と称されることもある）であり、「二次ＴＩＬ」は、本明細書で論じられるように拡張または増殖された任意のＴＩＬ細胞集団であり、本明細書で論じられるバルクＴＩＬ、拡張ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」）、ならびに「ｒｅＲＥＰ ＴＩＬ」が含まれるが、これらに限定されない。ｒｅＲＥＰ ＴＩＬは、例えば、第２の拡張ＴＩＬまたは第２の追加の拡張ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含む、図８のステップＤに記載されているものなど）を含み得る。
ＴＩＬは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義され得るか、または腫瘍に浸潤して治療を行う能力によって機能的に定義され得る。ＴＩＬは、一般に、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ−１、およびＣＤ２５のうちの１つ以上のバイオマーカーを発現させることによって分類され得る。加えておよび代替的に、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力によって機能的に定義することができる。ＴＩＬＳは、効力によってさらに特徴付けることができ、例えば、インターフェロン（ＩＦＮγ）の放出が、約５０ｐｇ／ｍＬより大きい、約１００ｐｇ／ｍＬより大きい、約１５０ｐｇ／ｍＬより大きい、または約２００ｐｇ／ｍＬより大きい、約３００ｐｇ／ｍＬより大きい、約４００ｐｇ／ｍＬより大きい、約５００ｐｇ／ｍＬより大きい、約６００ｐｇ／ｍＬより大きい、約７００ｐｇ／ｍＬより大きい、約８００ｐｇ／ｍＬより大きい、約９００ｐｇ／ｍＬより大きい、約１０００ｐｇ／ｍＬより大きい場合、ＴＩＬＳは効力があるとみなされ得る。
「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、天然および合成の、未修飾および修飾デオキシリボヌクレオチドを包含する。修飾には、糖部分、塩基部分、および／またはオリゴヌクレオチド中のデオキシリボヌクレオチド間の結合への変更が含まれる。
「ＲＮＡ」という用語は、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を定義する。「リボヌクレオチド」という用語は、ｂ−Ｄ−リボフラノース部分の２′位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを定義する。ＲＮＡという用語には、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組み換え的に産生されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／または変化によって天然に存在するＲＮＡとは異なる変化したＲＮＡが含まれる。本明細書に記載のＲＮＡ分子のヌクレオチドはまた、非天然に存在するヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。これらの変化したＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と称され得る。
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、ならびに不活性成分を含むことが意図される。医薬品有効成分のためのかかる薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤が医薬品有効成分と適合しない場合を除いて、本発明の治療用組成物におけるその使用が企図される。他の薬物などの追加の医薬品有効成分を、記載された組成物および方法に組み込むこともできる。
「約」および「およそ」という用語は、統計的に意味のある値の範囲内を意味する。かかる範囲は、所与の値または範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、より好ましくは依然として１０％以内、さらにより好ましくは５％以内であり得る。「約」または「およそ」という用語によって包含される許容される変動は、研究中の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解することができる。さらに、本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、寸法、サイズ、配合、パラメーター、形状、ならびに他の量および特徴が正確でなく、また正確である必要はないが、およその、かつ／またはより大きいもしくは小さい場合があり、必要に応じて、公差、変換係数、四捨五入、測定誤差など、および当業者に知られている他の要因を反映する。一般に、寸法、サイズ、配合、パラメーター、形状、または他の量もしくは特徴は、そのように明示的に述べられているかどうかにかかわらず、「約」または「およそ」である。非常に異なるサイズ、形状、および寸法の実施形態は、記載された配置を採用し得ることに留意されたい。
添付の特許請求の範囲で使用される場合、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」という移行語は、元の形式および補正された形式で、記載されていない追加のクレーム要素またはステップに関して特許請求の範囲を定義し、もしあれば特許請求（複数可）の範囲から除外される。「含む」という用語は、包括的または自由形式であることが意図されており、いかなる追加の、記載されていない要素、方法、ステップ、または材料を除外するものではない。「からなる」という用語は、特許請求の範囲で指定されたもの以外のいかなる要素、ステップ、または材料、および後者の場合、指定された材料（複数可）に通常関連する不純物も除外する。「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲を、特定の要素、ステップ、または材料（複数可）、および特許請求された発明の基本的および新規の特徴（複数可）に実質的に影響を与えないものに限定する。本発明を具体化する本明細書に記載のすべての組成物、方法、およびキットは、代替の実施形態において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」という移行語のうちのいずれかによってより具体的に定義することができる。
「抗体」およびその複数形の「抗体」という用語は、免疫グロブリン全体および任意の抗原結合断片（「抗原結合部分」）またはその一本鎖を指す。「抗体」はさらに、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。抗体のＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）と称され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在し得る、超可変性の領域にさらに細分化することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、１つまたは複数の抗原エピトープと相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
「抗原」という用語は、免疫応答を誘導する物質を指す。いくつかの実施形態では、抗原は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって提示される場合、抗体またはＴＣＲによって結合されることができる分子である。本明細書で使用される「抗原」という用語はまた、Ｔ細胞エピトープを包含する。抗原は、追加として免疫系によって認識されることができる。いくつかの実施形態では、抗原は、体液性免疫応答または細胞性免疫応答を誘導することができ、Ｂリンパ球および／またはＴリンパ球の活性化につながる。場合によっては、これは、抗原がＴｈ細胞エピトープを含有するか、またはそれに結合されることを必要とし得る。抗原はまた、１つ以上のエピトープ（例えば、Ｂ−およびＴ−エピトープ）を有し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、好ましくは、典型的には非常に特異的かつ選択的な様式で、対応する抗体またはＴＣＲと反応し、他の抗原によって誘導され得る多数の他の抗体またはＴＣＲとは反応しない。
「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」という用語、またはそれらの複数形は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。ある特定の受容体に特異的なモノクローナル抗体は、試験対象に好適な抗原を注入し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離するという当該技術分野における知識および技術を使用して作製することができる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れられ、次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組み換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を取得することができる。抗体の組み換え産生については、以下でより詳細に記載する。
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」（または単に「抗体部分」もしくは「断片」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ′）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなり得るドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８９，３４１，５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組み換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価分子を形成する単一タンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって接合され得、例えば、Ｂｉｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８８，８５，５８７９−５８８３）を参照されたい。かかるｓｃＦｖ抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技法を使用して取得され、断片は、無傷の抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域はまた、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。
「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから取得されたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
本明細書で使用される「組み換えヒト抗体」という用語は、組み換え手段によって調製、発現、作成、または単離されるすべてのヒト抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマ（以下でさらに記載される）についてトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（マウスなど）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む、任意の他の手段によって調製、発現、作成、または単離された抗体を含む。かかる組み換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、かかる組み換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）に供され得、したがって、組み換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に自然に存在しない可能性がある配列である。
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と交換可能に使用される。
「ヒト抗体誘導体」という用語は、抗体と別の医薬品有効成分または抗体とのコンジュゲートを含む、ヒト抗体の任意の修飾形態を指す。「コンジュゲート」、「抗体薬物コンジュゲート」、「ＡＤＣ」、または「免疫コンジュゲート」という用語は、別の治療部分にコンジュゲートされた抗体またはその断片を指し、これは当該技術分野において使用可能な方法を使用して、本明細書に記載の抗体にコンジュゲートされ得る。
「ヒト化抗体」、「ヒト化抗体（複数）」、および「ヒト化」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を指すことを意図している。追加のフレームワーク領域の修飾は、ヒトフレームワーク配列内で行うことができる。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）または非ヒト霊長類の１５超可変領域からの残基によって置き換えられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに向上させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的すべてを含むことになる。ヒト化抗体はまた、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８６，３２１，５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８８，３３２，３２３−３２９、およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１９９２，２，５９３−５９６を参照されたい。本明細書に記載される抗体はまた、エフェクター機能および／またはＦｃＲ結合の改善（例えば、低減）を与えることが知られている任意のＦｃ多様体を用いるように修飾され得る。Ｆｃ多様体は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ１９８８／０７０８９Ａ１号、同第ＷＯ１９９６／１４３３９Ａ１号、同第ＷＯ１９９８／０５７８７Ａ１号、同第ＷＯ１９９８／２３２８９Ａ１号、同第ＷＯ１９９９／５１６４２Ａ１号、同第ＷＯ９９／５８５７２Ａ１号、同第ＷＯ２０００／０９５６０Ａ２号、同第ＷＯ２０００／３２７６７Ａ１号、同第ＷＯ２０００／４２０７２Ａ２号、同第ＷＯ２００２／４４２１５Ａ２号、同第ＷＯ２００２／０６０９１９Ａ２号、同第ＷＯ２００３／０７４５６９Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０１６７５０Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０２９２０７Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０３５７５２Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０６３３５１Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０７４４５５Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０９９２４９Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０４０２１７Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０７０９６３Ａ１号、同第ＷＯ２００５／０７７９８１Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０９２９２５Ａ２号、同第ＷＯ２００５／１２３７８０Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０１９４４７Ａ１号、同第ＷＯ２００６／０４７３５０Ａ２号、および同第ＷＯ２００６／０８５９６７Ａ２号、ならびに米国特許第５，６４８，２６０号、同第５，７３９，２７７号、同第５，８３４，２５０号、同第５，８６９，０４６号、同第６，０９６，８７１号、同第６，１２１，０２２号、同第６，１９４，５５１号、同第６，２４２，１９５号、同第６，２７７，３７５号、同第６，５２８，６２４号、同第６，５３８，１２４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，９９８，２５３号、および同第７，０８３，７８４号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含み得る。
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図している。
「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片である。断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメインを対合させるには短すぎるリンカーを使用すると、ドメインは別のチェーンの相補ドメインと対合させられ、２つの抗原結合部位が作成される。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許第ＥＰ４０４，０９７号、国際特許公開第ＷＯ９３／１１１６１号、およびＢｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９３，９０，６４４４−６４４８においてより完全に記載されている。
「グリコシル化」という用語は、抗体の修飾誘導体を指す。非グリコシル化抗体は、グリコシル化を欠いている。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変化され得る。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変化させることによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらす、１つ以上のアミノ酸置換を行い、それによってその部位でのグリコシル化を排除することができる。米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号に記載されているように、非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させる可能性がある。加えてまたは代替的に、変化した種類のグリコシル化を有する抗体、例えば、フコシル残基の量が低減した低フコシル化抗体または二分性ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体が作製され得る。かかるグリコシル化パターンの変化は、抗体の能力を増加させることが実証されている。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体をグリコシル化機構が変化した宿主細胞で発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が変化した細胞については、当該技術分野で説明されており、本発明の組み換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化が変化した抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞株で発現される抗体が、それらの炭水化物上のフコースを欠くように、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠く。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９ ＦＵＴ８−／−細胞株は、２つの置換ベクターを使用したＣＨＯ／ＤＧ４４細胞中のＦＵＴ８遺伝子の標的破壊によって作成された（例えば、米国特許公開第２００４／０１１０７０４号またはＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７，６１４−６２２を参照）。別の例として、欧州特許第ＥＰ１，１７６，１９５号は、フコシルトランスフェラーゼをコードし、それによりかかる細胞株で発現される抗体が、α１，６結合関連酵素を低減または排除することによって低フコシル化を示す、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株について記載しており、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加するための酵素活性が低いか、または酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６６２）についても記載している。国際特許公開第ＷＯ０３／０３５８３５号は、フコースをＡｓｎ（２９７）結合型炭水化物に付着させる能力が低減し、さらにその宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらす多様体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３細胞について説明している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７，２６７３３−２６７４０も参照）。国際特許公開第ＷＯ９９／５４３４２号は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作され、それにより操作された細胞株で発現される抗体が、二分性ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示し、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす、細胞株について記載している（Ｕｍａｎａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９９，１７，１７６−１８０も参照）。代替的に、フコシダーゼ酵素を使用して、抗体のフコース残基を切断し得る。例えば、フコシダーゼα−Ｌ−フコシダーゼは、Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７５，１４，５５１６−５５２３に記載されているように、抗体からフコシル残基を除去する。
「ペグ化」は、典型的には、１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる、修飾抗体またはその断片を指す。ペグ化は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させることができる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実行される。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール−マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のうちのいずれかを包含することが意図される。ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体であり得る。ペグ化のための方法は、当該技術分野で知られており、例えば欧州特許第ＥＰ０１５４３１６号および同第ＥＰ０４０１３８４号、ならびに米国特許第５，８２４，７７８号（各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、本発明の抗体に適用することができる。
「バイオシミラー」という用語は、モノクローナル抗体またはタンパク質を含む、臨床的に不活性な成分にわずかな違いがあるにもかかわらず、米国で認可された参照バイオ製品と非常に類似しており、製品の安全性、純度、および効力に関してバイオ製品と参照製品との間に臨床的に意味のある差異がない、バイオ製品を意味する。さらに、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。「バイオシミラー」という用語は、他の国および地域の規制機関によっても同義的に使用されている。バイオ製品またはバイオ医薬品は、細菌または酵母などの生物源によって作製された、またはそれに由来する医薬品である。それらは、ヒトインスリンもしくはエリスロポエチンなどの比較的小さな分子、またはモノクローナル抗体などの複雑な分子からなり得る。例えば、参照ＩＬ−２タンパク質がアルデスロイキン（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ）である場合、アルデスロイキンに関して薬物規制当局によって承認されたタンパク質は、アルデスロイキンの「バイオシミラー」であるか、またはアルデスロイキンの「そのバイオシミラー」である。欧州では、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。欧州における同様の生物学的用途に関連する法的根拠は、補正されたＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ）Ｎｏ ７２６／２００４の第６条およびＤｉｒｅｃｔｉｖｅ ２００１／８３／ＥＣの第１０（４）条であり、したがって欧州では、バイオシミラーは、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ）Ｎｏ ７２６／２００４の第６条およびＤｉｒｅｃｔｉｖｅ ２００１／８３／ＥＣの第１０（４）条の下で、認可または認可申請の対象について認可、承認され得る。既に認可されているオリジナルのバイオ医薬品は、欧州では「参照医薬品」と称されることがある。バイオシミラーとみなされる製品に対する要件のうちのいくつかは、バイオシミラー医薬品（Ｓｉｍｉｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）に関するＣＨＭＰガイドラインに概説されている。さらに、モノクローナル抗体バイオシミラーに関連するガイドラインを含む製品固有のガイドラインは、ＥＭＡによって製品ごとに提供され、そのウェブサイトで公開されている。本明細書に記載のバイオシミラーは、品質特徴、生物活性、作用機序、安全性プロファイル、および／または有効性の点で、参照医薬品に類似している可能性がある。さらに、バイオシミラーは、参照医薬品と同じ状態を治療するために使用され得るか、または使用を意図され得る。したがって、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した品質特徴を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した生物活性を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した安全性プロファイルを有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した有効性を有するとみなされ得る。本明細書に記載されているように、欧州におけるバイオシミラーは、ＥＭＡによって認可された参照医薬品と比較される。しかしながら、場合によっては、バイオシミラーは、ある特定の研究で欧州経済領域外で認可されたバイオ医薬品（ＥＥＡ認可されていない「コンパレーター」）と比較される場合がある。かかる研究には、例えば、ある特定の臨床研究およびインビボ非臨床研究が含まれる。本明細書で使用される場合、「バイオシミラー」という用語は、ＥＥＡ認可されていないコンパレーターと比較された、または比較され得るバイオ医薬品にも関する。特定のバイオシミラーは、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合部分）、および融合タンパク質などのタンパク質である。タンパク質バイオシミラーは、ポリペプチドの機能に有意な影響を及ぼさない、アミノ酸構造にわずかな修飾（例えば、アミノ酸の欠失、付加、および／または置換を含む）を有するアミノ酸配列を有し得る。バイオシミラーは、その参照医薬品のアミノ酸配列に対して９７％以上、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。バイオシミラーは、その違いが医薬品の安全性および／または有効性の変化をもたらさないならば、１つ以上の翻訳後修飾、例えば、限定されないが、参照医薬品の翻訳後修飾とは異なる、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および／または切断を含み得る。バイオシミラーは、参照医薬品と同一または異なるグリコシル化パターンを有し得る。特に、排他的ではないが、バイオシミラーは、その違いが参照医薬品に関連する安全性の懸念に対処するか、対処することを意図している場合、異なるグリコシル化パターンを有し得る。加えて、バイオシミラーは、医薬品の安全性および有効性が損なわれないならば、例えば、その強度、剤形、製剤、賦形剤、および／または提示において参照医薬品から逸脱する可能性がある。バイオシミラーは、参照医薬品と比較して、例えば薬物動態（ＰＫ）および／または薬力学的（ＰＤ）プロファイルの違いを含み得るが、それでも、認可される、または認可に適しているとみなされるように、参照医薬品と十分に類似しているとみなされる。ある特定の状況において、バイオシミラーは、参照医薬品と比較して異なる結合特徴を示し、異なる結合特徴は、ＥＭＡなどの規制当局によって類似のバイオ製品としての認可の障壁ではないとみなされる。「バイオシミラー」という用語は、他の国および地域の規制機関によっても同義的に使用されている。
ＩＩＩ．ＴＩＬ製造プロセス
これらの特徴のうちのいくつかを含むプロセス２Ａとして知られる例示的なＴＩＬプロセスが図２に示され、プロセス１Ｃに対する本発明のこの実施形態の利点のうちのいくつかが図ＦおよびＧに記載される。プロセス２Ａの実施形態が図１に示される。
本明細書で論じられるように、本発明は、凍結保存されたＴＩＬを再刺激して、それらの代謝活性、したがって患者への移植前の相対的健康を高めることに関するステップ、および該代謝健康を試験する方法を含み得る。本明細書で一般に概説されるように、ＴＩＬは、一般に患者試料から採取され、患者への移植前にそれらの数を拡張するように操作される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、以下で論じられるように、任意に遺伝子操作され得る。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、凍結保存され得る。一旦解凍すると、それらを再刺激して、患者への注入前に代謝を高めることができる。
いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例および図において詳細に論じられるように、第１の拡張（ｐｒｅＲＥＰと称されるプロセスおよび図１においてステップＡとして示されるプロセスを含む）は、３〜１４日に短縮され、第２の拡張（ＲＥＰと称されるプロセスおよび図１においてステップＢとして示されるプロセスを含む）は、７〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張（例えば、図１においてステップＢとして記載される拡張）は、１１日に短縮され、第２の拡張（例えば、図１のステップＤにおいて記載される拡張）は、１１日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張および第２の拡張（例えば、図１においてステップＢおよびステップＤとして記載される拡張）の組み合わせは、以下ならびに実施例および図において詳細に論じられるように、２２日に短縮される。
以下のＡ、Ｂ、Ｃなどの「ステップ」指定は、図１を参照し、本明細書に記載のある特定の実施形態を参照している。以下および図１におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせまたは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、および／またはステップの省略は、本出願および本明細書に開示される方法によって企図される。
Ａ．ステップＡ：患者の腫瘍試料を取得する
一般に、ＴＩＬは、最初に患者の腫瘍試料（「一次ＴＩＬ」）から取得され、次いで本明細書に記載されるさらなる操作のためにより大きな集団に拡張され、任意に凍結保存され、本明細書に概説されるように再刺激され、任意にＴＩＬ健康の指標として表現型および代謝パラメーターについて評価される。
患者の腫瘍試料は、一般に外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段を介して、当該技術分野で知られている方法を使用して取得することができる。いくつかの実施形態では、多病変サンプリングが使用される。いくつかの実施形態では、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段は、多病変サンプリングを含む（すなわち、患者の１つ以上の腫瘍引用および／または場所、ならびに同じ場所または近接した１つ以上の腫瘍から試料を取得する）。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料はまた、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。固形腫瘍は、肺組織のものであり得る。いくつかの実施形態では、有用なＴＩＬは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）から取得される。
一旦取得されると、腫瘍試料は、一般に鋭的剥離を使用して１〜約８ｍｍ３の間の小片に断片化され、約２〜３ｍｍ３が特に有用である。ＴＩＬは、酵素腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地（例えば、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０緩衝液、２ｍＭグルタメート、１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０単位／ｍＬのＤＮａｓｅ、および１．０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ）でのインキュベーション、続いて機械的解離（例えば、組織解離剤を使用する）によって産生することができる。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ１分間機械的に解離させ、続いて５％ ＣＯ２中３７℃で３０分間インキュベートし、続いて小さな組織片のみが存在するまで、前述の条件下で機械的解離およびインキュベーションのサイクルを繰り返すことによって産生することができる。このプロセスの最後に、細胞懸濁液に多数の赤血球または死細胞が含有されている場合、ＦＩＣＯＬＬ分岐親水性多糖類を使用した密度勾配分離を行って、これらの細胞を除去することができる。米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものなど、当該技術分野で知られている代替方法を使用することができる。前述の方法のうちのいずれかは、ＴＩＬを拡張する方法または癌を治療する方法についての本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかにおいて使用され得る。
一般に、採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、断片化は、例えば、剥離および消化を含む物理的断片化を含む。いくつかの実施形態では、断片化は、物理的断片化である。いくつかの実施形態では、断片化は、剥離である。いくつかの実施形態では、断片化は、消化によるものである。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から取得された酵素的腫瘍消化物および腫瘍断片から培養され得る。実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から取得された酵素的腫瘍消化物および腫瘍断片から培養され得る。
腫瘍が固形腫瘍であるいくつかの実施形態では、腫瘍試料が、例えば、ステップＡ（図１に提供される）で取得された後、腫瘍は物理的断片化を受ける。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存前に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存後に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、腫瘍を取得した後、いかなる凍結保存もない場合に起こる。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、１０、２０、３０、４０個またはそれ以上の断片または小片が、第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、３０または４０個の断片または小片が、第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、４０個の断片または小片が、第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４〜約５０個の断片を含み、各断片は約２７ｍｍ３の体積を有する。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約３０〜約６０個の断片を含み、総体積は約１３００ｍｍ３〜約１５００ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約５０個の断片を含み、総体積は約１３５０ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約５０個の断片を含み、総質量は約１グラム〜約１．５グラムである。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４個の断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍断片から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、鋭的剥離によって取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ３〜１０ｍｍ３の間である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ３〜８ｍｍ３の間である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約２ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約３ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約４ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約５ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約６ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約７ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約８ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約９ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１０ｍｍ３である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、１〜４ｍｍ×１〜４ｍｍ×１〜４ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、４ｍｍ×４ｍｍ×４ｍｍである。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性、壊死性、および／または脂肪性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の壊死性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の脂肪性組織の量を最小化するために切除される。
いくつかの実施形態では、腫瘍の内部構造を維持するために、腫瘍の断片化が行われる。いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、メスで鋸引き動作を行うことなく実行される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、酵素培地、例えば、限定されないが、ＲＰＭＩ １６４０、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ、および１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ中でのインキュベーション、続いて機械的解離によって生成された（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍を、およそ１分間機械的に解離することができる。次いで、溶液を５％ ＣＯ２中３７℃で３０分間インキュベートし、その後、およそ１分間再び機械的に破壊することができる。５％ ＣＯ２中３７℃で３０分間再びインキュベートした後、腫瘍を、およそ１分間、３回目に機械的に破壊することができる。いくつかの実施形態では、大きな組織片が存在する場合の３回目の機械的破壊後、５％ ＣＯ２中３７℃で３０分間の追加のインキュベーションの有無にかかわらず、１回または２回の追加の機械的解離を試料に適用した。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液に多数の赤血球または死細胞が含有されている場合、最終インキュベーションの終わりに、Ｆｉｃｏｌｌを使用した密度勾配分離を行って、これらの細胞を除去することができる。
いくつかの実施形態では、第１の拡張ステップの前に採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、細胞は、試料採取後に任意に凍結され、ステップＢに記載される拡張に入る前に凍結保存され得、これは、以下でさらに詳細に記載されるとともに、図１に例示される。
Ｂ．ステップＢ：第１の拡張
いくつかの実施形態では、本方法は、対象／患者への投与時に複製サイクルを増加させることができ、したがって、より古いＴＩＬ（すなわち、対象／患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたＴＩＬ）よりも追加の治療上の利益を提供し得る、若いＴＩＬを取得することを提供する。若いＴＩＬの特徴は、文献、例えば、Ｄｏｎｉａ，ａｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７５：１５７−１６７（２０１２）、Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１６：６１２２−６１３１（２０１０）、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２８（３）：２５８−２６７（２００５）、Ｂｅｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９（１７）：ＯＦ１−ＯＦ９（２０１３）、Ｂｅｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３２：４１５−４２３（２００９）、Ｒｏｂｂｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；１７３：７１２５−７１３０、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，３０：１２３−１２９（２００７）、Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２８：５３−６２（２００５）、およびＴｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，３１：７４２−７５１（２００８）に記載されており、これらのすべては参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
Ｔリンパ球およびＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた、ただし多数の遺伝子セグメントの体細胞組み換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、およびＣ（一定）は、免疫グロブリンおよびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性および下流への応用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬおよび／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬならびに／または図５および／もしくは図６に例示されるようにプロセス１Ｃと称される方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第１の拡張において取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性および／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、α、β、γ、およびδ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβの発現が増加している。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αの発現が増加している。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）βの発現が増加している。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加している。
例えば図１のステップＡに記載されているように、腫瘍断片の剥離または消化後、得られた細胞は、腫瘍および他の細胞よりもＴＩＬの成長に有利な条件下でＩＬ−２を含有する血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、２ｍＬウェルにおいて、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む不活化ヒトＡＢ血清を含む培地中でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に３〜１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、７〜１４日の期間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、１０〜１４日の期間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、約１１日の期間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。
好ましい実施形態では、ＴＩＬの拡張は、以下および本明細書に記載される初期バルクＴＩＬ拡張ステップ（例えば、図１のステップＢに記載されるものなど、ｐｒｅ−ＲＥＰと称されるプロセスを含むことができる）、続いて以下のステップＤおよび本明細書に記載される第２の拡張（ステップＤ、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）ステップと称されるプロセスを含む）、続いて任意の凍結保存、ならびに以下および本明細書に記載される第２のステップＤ（再刺激ＲＥＰステップと称されるプロセスを含む）を使用して行われ得る。このプロセスから取得されたＴＩＬは、本明細書に記載の表現型特徴および代謝パラメーターについて任意に特徴付けることができる。
ＴＩＬ培養物が２４ウェルプレートで開始される実施形態では、例えば、Ｃｏｓｔａｒ ２４ウェル細胞培養クラスター、平底（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）を使用して、ＩＬ−２（６０００ＩＵ／ｍＬ、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）を含む２ｍＬの完全培地（ＣＭ）中の１×１０６個の腫瘍消化細胞または１つの腫瘍断片を、各ウェルに播種することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ３〜１０ｍｍ３の間である。
いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、ステップＢのＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、および１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンで補足された、ＧｌｕｔａＭＡＸを伴うＲＰＭＩ １６４０からなる。培養物が４０ｍＬ容量および１０ｃｍ２ガス透過性シリコン底部（例えば、Ｇ−Ｒｅｘ１０、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ）を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では（図１）、ＩＬ−２を含む１０〜４０ｍＬのＣＭ中の１０〜４０×１０６個の生きた腫瘍消化細胞または５〜３０個の腫瘍断片を、各フラスコに入れた。Ｇ−Ｒｅｘ１０および２４ウェルプレートの両方を、５％ ＣＯ２中３７℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から５日後、培地の半分を除去し、新たなＣＭおよびＩＬ−２で置き換え、５日後、培地の半分を２〜３日ごとに交換した。
腫瘍断片の調製後、得られた細胞（すなわち、断片）は、腫瘍および他の細胞よりもＴＩＬの成長に有利な条件下で、ＩＬ−２を含有する血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、２ｍＬウェルにおいて、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む不活化ヒトＡＢ血清を含む培地中（または、場合によっては、本明細書で概説されるように、ＡＰＣ細胞集団の存在下）でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に１０〜１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、第１の拡張中の成長培地は、ＩＬ−２またはその多様体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬは、組み換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、１ｍｇバイアルについて２０〜３０×１０６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、１ｍｇバイアルについて２０×１０６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、１ｍｇバイアルについて２５×１０６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、１ｍｇバイアルについて３０×１０６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、４〜８×１０６ＩＵ／ｍｇのＩＬ−２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、５〜７×１０６ＩＵ／ｍｇのＩＬ−２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、６×１０６ＩＵ／ｍｇのＩＬ−２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２ストック溶液は、実施例５に記載されるように調製される。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１０，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、または約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２〜約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２〜約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２〜約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、１０００〜２０００ＩＵ／ｍＬの間、２０００〜３０００ＩＵ／ｍＬの間、３０００〜４０００ＩＵ／ｍＬの間、４０００〜５０００ＩＵ／ｍＬの間、５０００〜６０００ＩＵ／ｍＬの間、６０００〜７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００〜８０００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。
いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−１５をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。
いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２１をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。
実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ−３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、および約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの間、１ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬの間、５ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの間、１０ｎｇ／ｍＬ〜２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬの間、３０ｎｇ／ｍＬ〜４０ｎｇ／ｍＬの間、４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間、および５０ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ−３抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ−３抗体は、ムロモナブである。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４−１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４−１ＢＢアゴニストであり、４−１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ−１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、バイオシミラー、および組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの間の細胞培養培地中の濃度を達成するのに十分な濃度で添加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ〜４０μｇ／ｍＬの間の細胞培養培地中の濃度を達成するのに十分な濃度で添加される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、細胞培養培地は、ＩＬ−２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、およびＯＫＴ−３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４−１ＢＢアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、それは、ＣＭ１（培養培地１）と称される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、および１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンで補足された、ＧｌｕｔａＭＡＸを伴うＲＰＭＩ １６４０からなる。培養物が４０ｍＬ容量および１０ｃｍ２ガス透過性シリコン底部（例えば、Ｇ−Ｒｅｘ１０、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ）を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では（図１）、ＩＬ−２を含む１０〜４０ｍＬのＣＭ中の１０〜４０×１０６個の生きた腫瘍消化細胞または５〜３０個の腫瘍断片を、各フラスコに入れた。Ｇ−Ｒｅｘ１０および２４ウェルプレートの両方を、５％ ＣＯ２中３７℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から５日後、培地の半分を除去し、新たなＣＭおよびＩＬ−２で置き換え、５日後、培地の半分を２〜３日ごとに交換した。いくつかの実施形態では、ＣＭは、実施例に記載されているＣＭ１であり、実施例１を参照されたい。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、最初の細胞培養培地または第１の細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、最初の細胞培養培地または第１の細胞培養培地は、ＩＬ−２を含む。
いくつかの実施形態では、第１の拡張（例えば、図１のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、ｐｒｅ−ＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、実施例および図において論じられるように、３〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張（例えば、図１のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、ｐｒｅ−ＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）は、実施例において論じられ、図４および５に示されるように、７〜１４日に短縮されるとともに、例えば、図１のステップＢに記載される拡張も含む。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、１０〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、例えば、図１のステップＢに記載される拡張において論じられるように、１１日に短縮される。
いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、８日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、９日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１０日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１１日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１２日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１３日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、８日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、９日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１０日〜１１日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１１日間進行することができる。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２１の組み合わせは、第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図１による、および本明細書に記載されるステップＢプロセス中を含む、第１の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１の組み合わせは、第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図１による、および本明細書に記載されるステップＢプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、第１の拡張（ｐｒｅ−ＲＥＰと称されるプロセスを含む、例えば、図１によるステップＢ）プロセスは、実施例および図で論じられるように、３〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、７〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、１０〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、１１日に短縮される。
いくつかの実施形態では、第１の拡張、例えば、図１によるステップＢは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬ拡張のために閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ−ＲＥＸ−１０またはＧ−ＲＥＸ−１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
Ｃ．ステップＣ：第１の拡張から第２の拡張への移行
場合によっては、例えば、図１に示されるような、例えばステップＢから取得されるＴＩＬ集団を含む、第１の拡張から取得されるバルクＴＩＬ集団は、以下に論じられるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存され得る。代替的に、第２のＴＩＬ集団と称される、第１の拡張から取得されるＴＩＬ集団は、第２の拡張（ＲＥＰと称されることもある拡張を含み得る）に供され、次いで以下に論じられるように凍結保存され得る。同様に、遺伝子改変ＴＩＬが療法に使用される場合、第１のＴＩＬ集団（バルクＴＩＬ集団と称されることもある）または第２のＴＩＬ集団（いくつかの実施形態では、ＲＥＰ ＴＩＬ集団と称される集団を含み得る）は、拡張前または第１の拡張後、および第２の拡張前に、好適な治療のために遺伝子改変に供され得る。
いくつかの実施形態では、第１の拡張から（例えば、図１に示されるようにステップＢから）取得されたＴＩＬは、選択のために表現型決定されるまで保存される。いくつかの実施形態では、第１の拡張から（例えば、図１に示されるようにステップＢから）取得されたＴＩＬは保存されず、第２の拡張に直接進行する。いくつかの実施形態では、第１の拡張から取得されたＴＩＬは、第１の拡張後、および第２の拡張前に凍結保存されない。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約３日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約４日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約４日〜１０日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約７日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約１４日で起こる。
いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日〜１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから３日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから４日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから５日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから６日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから７日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから８日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから９日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１０日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１１日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１２日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１３日〜１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから２日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから３日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから４日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから５日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから６日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから７日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから８日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから９日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１０日〜１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１１日で起こる。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、第１の拡張後、および第２の拡張前に保存されず、ＴＩＬは、第２の拡張に直接進行する（例えば、いくつかの実施形態では、図１に示されるようにステップＢからステップＤへの移行中の保存がない）。いくつかの実施形態では、移行は、本明細書に記載されるように、閉鎖系で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張からのＴＩＬ、第２のＴＩＬ集団は、移行期間なしで第２の拡張に直接進行する。
いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行、例えば、図１によるステップＣは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬ拡張のために閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ−ＲＥＸ−１０またはＧ−ＲＥＸ−１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
１．サイトカイン
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ−２を含む培養培地を使用する。
代替的に、国際公開第ＷＯ２０１５／１８９３５６号およびＷ国際公開第ＷＯ２０１５／１８９３５７号（参照によりそれら全体が本明細書に明示的に組み込まれる）に一般に概説されているように、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１のうちの２つ以上の組み合わせで、ＴＩＬＳの急速拡張および／または第２の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することもさらに可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ−２およびＩＬ−１５、ＩＬ−２およびＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１、ならびにＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１が含まれ、後者は多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようなＴ細胞の生成に特に有利に働く。
Figure 2021535128
Ｄ．ステップＤ：第２の拡張
いくつかの実施形態では、ＴＩＬ細胞集団は、採取および初期バルク処理後、例えば、ステップＡおよびステップＢ、ならびに図１に示されるようにステップＣと称される移行後に数が拡張される）。このさらなる拡張は、本明細書では第２の拡張と称され、これは、当該技術分野で一般に急速拡張プロセス（ＲＥＰ、および図１のステップＤに示されるプロセス）と称される拡張プロセスを含み得る。第２の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、および抗ＣＤ３抗体を含むいくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの第２の拡張または第２のＴＩＬ拡張（ＲＥＰと称されることもある拡張、ならびに図１のステップＤに示されるプロセスを含み得る）は、当業者に知られている任意のＴＩＬフラスコまたは容器を使用して行うことができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約７日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約８日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約９日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１０日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１１日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１２日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１３日〜約１４日間進行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１４日間進行することができる。
実施形態では、第２の拡張は、本開示の方法（例えば、ＲＥＰと称される拡張、ならびに図１のステップＤに示されるプロセスを含む）を使用して、ガス透過性容器内で行うことができる。例えば、ＴＩＬは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）の存在下で非特異的Ｔ細胞受容体刺激を使用して、急速に拡張させることができる。非特異的Ｔ細胞受容体刺激は、例えば、抗ＣＤ３抗体、例えば約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪもしくはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販）またはＵＨＣＴ−１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから市販）を含み得る。ＴＩＬは、癌のエピトープ（複数可）などのその抗原性部分を含む、第２の拡張中に１つ以上の抗原を含むことによって、インビトロでＴＩＬのさらなる刺激を誘導するように拡張することができ、これは、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ−Ａ２）結合ペプチドなどのベクター、例えば、０．３μＭ ＭＡＲＴ−１：２６−３５（２７Ｌ）またはｇｐｌ００：２０９−２１７（２１０Ｍ）から、任意に３００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ−２またはＩＬ−１５などのＴ細胞成長因子の存在下で任意に発現され得る。他の好適な抗原には、例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ癌抗原、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＳＳＸ−２、およびＶＥＧＦＲ２、またはそれらの抗原性部分が含まれ得る。ＴＩＬはまた、ＨＬＡ−Ａ２を発現する抗原提示細胞にパルスされた癌の同じ抗原（複数可）で再刺激することによっても急速に拡張され得る。代替的に、ＴＩＬは、例えば、例として照射された自己リンパ球、または照射されたＨＬＡ−Ａ２＋同種異系リンパ球およびＩＬ−２でさらに再刺激され得る。いくつかの実施形態では、再刺激は、第２の拡張の一部として起こる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、照射された自己リンパ球の存在下で、または照射されたＨＬＡ−Ａ２＋同種異系リンパ球およびＩＬ−２を用いて起こる。
実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。実施形態では、細胞培養培地は、１０００〜２０００ＩＵ／ｍＬの間、２０００〜３０００ＩＵ／ｍＬの間、３０００〜４０００ＩＵ／ｍＬの間、４０００〜５０００ＩＵ／ｍＬの間、５０００〜６０００ＩＵ／ｍＬの間、６０００〜７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００〜８０００ＩＵ／ｍＬ、または８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む。
実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ−３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、および約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの間、１ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬの間、５ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの間、１０ｎｇ／ｍＬ〜２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬの間、３０ｎｇ／ｍＬ〜４０ｎｇ／ｍＬの間、４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの間、および５０ｎｇ／ｍＬ〜１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ−３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ−３抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ−３抗体は、ムロモナブである。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４−１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４−１ＢＢアゴニストであり、４−１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ−１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、バイオシミラー、および組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの間の細胞培養培地中の濃度を達成するのに十分な濃度で添加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ〜４０μｇ／ｍＬの間の細胞培養培地中の濃度を達成するのに十分な濃度で添加される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、細胞培養培地は、ＩＬ−２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、およびＯＫＴ−３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４−１ＢＢアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図１による、および本明細書に記載されるステップＤプロセス中を含む、第２の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図１による、および本明細書に記載されるステップＤプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、抗原提示フィーダー細胞、および任意にＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む補足された細胞培養培地において実施され得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、補足された細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、補足された細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示細胞（ＡＰＣ、抗原提示フィーダー細胞とも称される）を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示フィーダー細胞（すなわち、抗原提示細胞）を含む細胞培養培地中で起こる。
いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５〜約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−１５をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−１５を含む。
いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１〜約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２１をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２１を含む。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）は、ＰＢＭＣである。実施形態では、急速拡張および／または第２の拡張におけるＴＩＬ対ＰＢＭＣおよび／または抗原提示細胞の比は、約１対２５、約１対５０、約１対１００、約１対１２５、約１対１５０、約１対１７５、約１対２００、約１対２２５、約１対２５０、約１対２７５、約１対３００、約１対３２５、約１対３５０、約１対３７５、約１対４００、または約１対５００である。実施形態では、急速拡張および／または第２の拡張におけるＴＩＬ対ＰＢＭＣの比は、１対５０〜１対３００の間である。実施形態では、急速拡張および／または第２の拡張におけるＴＩＬ対ＰＢＭＣの比は、１対１００〜１対２００の間である。
実施形態では、ＲＥＰおよび／または第２の拡張は、バルクＴＩＬが１５０ｍＬの培地中の１００倍または２００倍過剰の不活化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体、および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２と混合されているフラスコ内で行われる。細胞が代替の成長チャンバーに移されるまで、培地交換が行われる（一般に、新鮮な培地での呼吸による２／３の培地交換）。代替の成長チャンバーには、以下でより完全に論じられるように、Ｇ−ＲＥＸフラスコおよびガス透過性容器が含まれる。
いくつかの実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰプロセスと称されるプロセスを含み得る）は、実施例および図で論じられるように、７〜１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、１１日に短縮される。
実施形態では、ＲＥＰおよび／または第２の拡張は、以前に記載されたＴ−１７５フラスコおよびガス透過性バッグ（Ｔｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８，３１，７４２−５１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２−４２）またはガス透過性培養器具（Ｇ−Ｒｅｘフラスコ）を使用して行うことができる。いくつかの実施形態では、第２の拡張（急速拡張と称される拡張を含む）は、Ｔ−１７５フラスコ内で行われ、１５０ｍＬの培地に懸濁された約１×１０６個のＴＩＬを、各Ｔ−１７５フラスコに添加することができる。ＴＩＬは、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２および３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３で補足された、ＣＭとＡＩＭ−Ｖ培地との１対１の混合物中で培養することができる。Ｔ−１７５フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートすることができる。培地の半分を、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む５０／５０培地を使用して５日目に交換することができる。いくつかの実施形態では、７日目に、２つのＴ−１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグ内で組み合わせることができ、５％ヒトＡＢ血清および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む３００ｍＬのＡＩＭ Ｖを、３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加した。各バッグ内の細胞の数を、毎日または隔日カウントし、新鮮な培地を添加して、０．５〜２．０×１０６細胞／ｍＬの間の細胞数を維持した。
実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張、ならびに図１のステップＤで参照される拡張を含み得る）は、１００ｃｍのガス透過性シリコン底部（Ｇ−Ｒｅｘ １００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ，ＵＳＡから市販）を有する５００ｍＬ容量のガス透過性フラスコ内で行うことができる。５×１０６または１０×１０６ＴＩＬは、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２、および３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で補足された４００ｍＬの５０／５０培地中のＰＢＭＣで培養され得る。Ｇ−Ｒｅｘ １００フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートすることができる。５日目に、２５０ｍＬの上清を除去して遠心分離ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（４９１×ｇ）で１０分間遠心分離する。ＴＩＬペレットを、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬの新鮮な培地で再懸濁し、元のＧ−Ｒｅｘ １００フラスコに戻すことができる。ＴＩＬがＧ−Ｒｅｘ １００フラスコ内で連続的に拡張される場合、７日目に、各Ｇ−Ｒｅｘ １００内のＴＩＬを、各フラスコに存在する３００ｍＬの培地に懸濁することができ、細胞懸濁液を３つの１００ｍＬアリコートに分割することができ、それを使用して３つのＧ−Ｒｅｘ １００フラスコに播種することができる。次いで、５％ヒトＡＢ血清および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを、各フラスコに添加することができる。Ｇ−Ｒｅｘ １００フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートし、４日後に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを、各Ｇ−ＲＥＸ １００フラスコに添加することができる。培養１４日目に、細胞を採取することができる。
実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、バルクＴＩＬが１５０ｍＬの培地中の１００倍または２００倍過剰の不活化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体、および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２と混合されているフラスコ内で行われる。いくつかの実施形態では、培地交換は、細胞が代替の成長チャンバーに移されるまで行われる。いくつかの実施形態では、培地の２／３は、新鮮な培地による呼吸によって置き換えられる。いくつかの実施形態では、代替の成長チャンバーには、以下でより完全に論じられるように、Ｇ−ＲＥＸフラスコおよびガス透過性容器が含まれる。
実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）が行われ、優れた腫瘍反応性のためにＴＩＬが選択されるステップをさらに含む。当該技術分野で知られている任意の選択方法を使用することができる。例えば、米国特許出願公開第２０１６／００１００５８Ａ１号に記載されている方法は、その開示が参照により本明細書に組み込まれ、優れた腫瘍反応性のためのＴＩＬの選択に使用することができる。
任意に、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準的なアッセイを使用して、第２の拡張（ＲＥＰ拡張と称される拡張を含む）の後に行うことができる。例えば、トリパンブルー排除アッセイは、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするバルクＴＩＬの試料上で行うことができる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ試料は、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２自動セルカウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ，ＭＡ）を使用してカウントされ、生存率が決定され得る。いくつかの実施形態では、生存率は、標準的なＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ自動セルカウンタープロトコルに従って決定される。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、以前に記載されているＴ−１７５フラスコおよびガス透過性バッグ（Ｔｒａｎ ＫＱ，Ｚｈｏｕ Ｊ，Ｄｕｒｆｌｉｎｇｅｒ ＫＨ，ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３１：７４２−７５１およびＤｕｄｌｅｙ ＭＥ，Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ ＪＲ，Ｓｈｅｌｔｏｎ ＴＥ，ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２−３４２）またはガス透過性Ｇ−Ｒｅｘフラスコを使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、フラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ガス透過性Ｇ−Ｒｅｘフラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、Ｔ−１７５フラスコ内で行われ、約１×１０６個のＴＩＬは、約１５０ｍＬの培地に懸濁され、これを各Ｔ−１７５フラスコに添加する。ＴＩＬは、照射された（５０Ｇｙ）同種異系ＰＢＭＣを「フィーダー」細胞として１対１００の比で培養し、細胞は、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２および３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３で補足された、ＣＭとＡＩＭ−Ｖ培地との１対１混合物（５０／５０培地）中で培養した。Ｔ−１７５フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートする。いくつかの実施形態では、培地の半分は、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む５０／５０培地を使用して５日目に交換される。いくつかの実施形態では、７日目に、２つのＴ−１７５フラスコからの細胞を３Ｌバッグ内で組み合わせ、５％ヒトＡＢ血清および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む３００ｍＬのＡＩＭ−Ｖを、３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加する。各バッグ内の細胞の数は、毎日または隔日カウントすることができ、新鮮な培地を添加して、約０．５〜約２．０×１０６細胞／ｍＬの間の細胞数を維持することができる。
いくつかの実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、１００ｃｍ２のガス透過性シリコン底部（Ｇ−Ｒｅｘ １００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）を有する５００ｍＬ容量のフラスコ内で行われ（図１）、約５×１０６または１０×１０６ＴＩＬは、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２および３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３で補足された、４００ｍＬの５０／５０培地中、１対１００の比で照射された同種異系ＰＢＭＣとともに培養される。Ｇ−Ｒｅｘ １００フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートする。いくつかの実施形態では、５日目に、２５０ｍＬの上清を除去し、遠心分離ボトルに入れ、１５００ｒｐｍ（４９１ｇ）で１０分間遠心分離する。次いで、ＴＩＬペレットを、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬの新鮮な５０／５０培地に再懸濁し、元のＧ−Ｒｅｘ １００フラスコに戻すことができる。ＴＩＬがＧ−Ｒｅｘ １００フラスコ内で連続的に拡張される実施形態では、７日目に、各Ｇ−Ｒｅｘ １００内のＴＩＬを、各フラスコ内に存在する３００ｍＬの培地に懸濁し、細胞懸濁液を３つの１００ｍＬアリコートに分割し、それを使用して３つのＧ−Ｒｅｘ １００フラスコに播種する。次いで、５％ヒトＡＢ血清および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを、各フラスコに添加する。Ｇ−Ｒｅｘ １００フラスコを、５％ ＣＯ２中３７℃でインキュベートし、４日後に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ−Ｖを、各Ｇ−Ｒｅｘ １００フラスコに添加する。培養１４日目に、細胞を採取する。
Ｔリンパ球およびＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた、ただし多数の遺伝子セグメントの体細胞組み換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、およびＣ（一定）は、免疫グロブリンおよびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性および下流への応用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第２の拡張において取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性および／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、α、β、γ、およびδ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよび／またはβの発現が増加している。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αの発現が増加している。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）βの発現が増加している。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加している。
いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地と称されることもある）は、以下でさらに詳細に論じられるように、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、ならびに抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。
いくつかの実施形態では、第２の拡張、例えば、図１によるステップＤは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬ拡張のために閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ−ＲＥＸ−１０またはＧ−ＲＥＸ−１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
１．フィーダー細胞および抗原提示細胞
実施形態では、本明細書に記載される第２の拡張手順（例えば、図１のステップＤに記載されるような拡張、ならびにＲＥＰと称されるものを含む）は、ＲＥＰ ＴＩＬ拡張中および／または第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者からの標準的な全血単位から取得される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準的な方法を使用して取得される。
一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活化され、実施例に記載されるように、ＲＥＰ手順で使用され、これは、照射された同種異系ＰＢＭＣの複製能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。
いくつかの実施形態では、１４日目の生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目および／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された最初の生細胞数よりも少ない場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。
いくつかの実施形態では、７日目および１４日目のＯＫＴ３およびＩＬ−２の存在下で培養された生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目および／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された最初の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、７日目および１４日目のＯＫＴ３およびＩＬ−２の存在下で培養された生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目および／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された最初の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、５〜６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および１０００〜６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、１０〜５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および２０００〜５０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２０〜４０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および２０００〜４０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２５〜３５ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および２５００〜３５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、ＰＢＭＣである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。実施形態では、第２の拡張における抗原提示フィーダー細胞に対するＴＩＬの比は、約１対２５、約１対５０、約１対１００、約１対１２５、約１対１５０、約１対１７５、約１対２００、約１対２２５、約１対２５０、約１対２７５、約１対３００、約１対３２５、約１対３５０、約１対３７５、約１対４００、または約１対５００である。実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬ対抗原提示フィーダー細胞の比は、１対５０〜１対３００の間である。実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬ対抗原提示フィーダー細胞の比は、１対１００〜１対２００の間である。
実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０９フィーダー細胞対約１００×１０６ＴＩＬの比を必要とする。別の実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０９フィーダー細胞対約５０×１０６ＴＩＬの比を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０９フィーダー細胞対約２５×１０６ＴＩＬを必要とする。
実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者からの標準的な全血単位から取得される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準的な方法を使用して取得される。実施形態では、人工抗原提示（ａＡＰＣ）細胞が、ＰＢＭＣの代わりに使用される。
一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活化され、図および実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順で使用される。
実施形態では、人工抗原提示細胞は、ＰＢＭＣの代替として、またはＰＢＭＣと組み合わせて、第２の拡張において使用される。
２．サイトカイン
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ−２を含む培養培地を使用する。
代替的に、国際公開第ＷＯ２０１５／１８９３５６号およびＷ国際公開第ＷＯ２０１５／１８９３５７号（参照によりそれら全体が本明細書に明示的に組み込まれる）に一般に概説されているように、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１のうちの２つ以上の組み合わせで、ＴＩＬＳの急速拡張および／または第２の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することもさらに可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ−２およびＩＬ−１５、ＩＬ−２およびＩＬ−２１、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１、ならびにＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１が含まれ、後者は多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようなＴ細胞の生成に特に有利に働く。
Ｅ．ステップＥ：ＴＩＬを採取する
第２の拡張ステップ後、細胞を採取することができる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図１に提供されるように、１、２、３、４、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図１に提供されるように、２つの拡張ステップ後に採取される。
ＴＩＬは、任意の適切で無菌的な様式で、例えば、遠心分離によって採取され得る。ＴＩＬ採取のための方法は、当該技術分野で周知であり、かかる既知の方法は、本プロセスで用いることができる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、自動化されたシステムを使用して採取される。
細胞採取機および／または細胞処理システムは、例えば、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、Ｔｏｍｔｅｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、およびＩｎｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃを含む様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースの採取機を、本方法で用いることができる。いくつかの実施形態では、細胞採取機および／または細胞処理システムは、膜ベースの細胞採取機である。いくつかの実施形態では、細胞採取は、ＬＯＶＯシステム（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉによって製造された）などの細胞処理システムを介して行われる。「ＬＯＶＯ細胞処理システム」という用語はまた、細胞を含む溶液を、無菌および／または閉鎖系環境において、紡糸膜または紡糸フィルターなどの膜またはフィルターを通してポンプ輸送し、ペレット化せずに上清または細胞培養培地を除去するための連続フローおよび細胞処理を可能にする、任意のベンダーによって製造された任意の機器または装置を指す。いくつかの実施形態では、細胞採取機および／または細胞処理システムは、閉鎖された無菌システムにおいて、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、および／または他の細胞処理ステップを行うことができる。
いくつかの実施形態では、採取、例えば、図１によるステップＥは、閉鎖系バイオリアクターから行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、ＴＩＬ拡張のために閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ−ＲＥＸ−１０またはＧ−ＲＥＸ−１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
いくつかの実施形態では、図１によるステップＥは、実施例Ｇに記載のプロセスに従って行われる。いくつかの実施形態では、システムの無菌性および閉鎖性を維持するために、無菌条件下で注射器を介して閉鎖系にアクセスする。いくつかの実施形態では、実施例Ｇに記載されているような閉鎖系が用いられる。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、実施例Ｇに記載の方法に従って採取される。いくつかの実施形態では、１日目〜１１日目の間のＴＩＬは、セクション８．５に記載の方法を使用して採取される（実施例Ｇでは１１日目のＴＩＬ採取と称される）。いくつかの実施形態では、１２日目〜２２日目の間のＴＩＬは、セクション８．１２に記載の方法を使用して採取される（実施例Ｇでは２２日目のＴＩＬ採取と称される）。
Ｆ．ステップＦ：最終製剤／注入バッグへの移行
図１に例示的な順序で提供され、上記および本明細書に詳細に概説されるステップＡ〜Ｅが完了した後、細胞は、患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療上十分な数のＴＩＬが上記の拡張方法を使用して取得されると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。
実施形態では、本開示のＡＰＣを使用して拡張されたＴＩＬは、薬学的組成物として患者に投与される。実施形態では、薬学的組成物は、無菌緩衝液中のＴＩＬの懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、単一の動脈内または静脈内注入として投与され、これは好ましくは、およそ３０〜６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、およびリンパ内が含まれる。
Ｇ．任意の細胞培地成分
１．抗ＣＤ３抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地（ＲＥＰと称されるものを含む、例えば、図１を参照）はまた、抗ＣＤ３抗体を含む。ＩＬ−２と組み合わせた抗ＣＤ３抗体は、ＴＩＬ集団のＴ細胞活性化および細胞分裂を誘導する。この効果は、完全長抗体、ＦａｂおよびＦ（ａｂ′）２断片で見られ、前者が一般的に好まれる。例えば、Ｔｓｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８５，１３５，１７１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
当業者によって理解されるように、マウス、ヒト、霊長類、ラット、およびイヌ抗体を含むがこれらに限定されない様々な哺乳動物からの抗ヒトＣＤ３ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む、本発明での使用が見出されるいくつかの好適な抗ヒトＣＤ３抗体が存在する。特定の実施形態では、ＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体が使用される（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪまたはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販されている）。
Figure 2021535128
２．４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト
実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストである。４−１ＢＢアゴニストは、当該技術分野で知られている任意の４−１ＢＢ結合分子であり得る。４−１ＢＢ結合分子は、ヒトまたは哺乳動物の４−１ＢＢに結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。４−１ＢＢアゴニストまたは４−１ＢＢ結合分子は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。４−１ＢＢアゴニストまたは４−１ＢＢ結合分子は、重鎖および軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語はまた、抗体（完全長抗体を含む）、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、および抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ′）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびに４−１ＢＢに結合する操作された形態の抗体、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、完全なヒト抗体である抗原結合タンパク質である。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ここに開示される方法および組成物において使用するための４−１ＢＢアゴニストには、抗４−１ＢＢ抗体、ヒト抗４−１ＢＢ抗体、マウス抗４−１ＢＢ抗体、哺乳動物抗４−１ＢＢ抗体、モノクローナル抗４−１ＢＢ抗体、ポリクローナル抗４−１ＢＢ抗体、キメラ抗４−１ＢＢ抗体、抗４−１ＢＢアドネクチン、抗４−１ＢＢドメイン抗体、一本鎖抗４−１ＢＢ断片、重鎖抗４−１ＢＢ断片、軽鎖抗４−１ＢＢ断片、抗４−１ＢＢ融合タンパク質、およびそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、またはバイオシミラーが含まれる。アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体は、強力な免疫応答を誘導することが知られている。Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ２０１３，８，ｅ６９６７７。好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、アゴニスト、抗４−１ＢＢヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（すなわち、単一の細胞株に由来する抗体）である。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ＥＵ−１０１（Ｅｕｔｉｌｅｘ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）、ウトミルマブ、もしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、もしくはバイオシミラーである。好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブもしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、もしくはバイオシミラーである。
好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストまたは４−１ＢＢ結合分子はまた、融合タンパク質であり得る。好ましい実施形態では、三量体または六量体４−１ＢＢアゴニスト（３つまたは６つのリガンド結合ドメインを有する）などの多量体４−１ＢＢアゴニストは、典型的に２つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体（４−１ＢＢＬ）クラスター化および内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。３つのＴＮＦＲＳＦ結合ドメインおよびＩｇＧ１−Ｆｃを含み、任意にこれらの融合タンパク質のうちの２つ以上をさらに結合する三量体（三価）または六量体（もしくは六価）またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Ｇｉｅｆｆｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１３，１２，２７３５−４７に記載されている。
アゴニスト４−１ＢＢ抗体および融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式で４−１ＢＢ抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、例えば、ＮＫ細胞細胞傷害を無効にするアゴニスト４−１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を無効にするアゴニスト４−１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を無効にするアゴニスト４−１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、Ｆｃ領域機能性を無効にするアゴニスト４−１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ヒト４−１ＢＢ（配列番号９）に高い親和性およびアゴニスト活性で結合することを特徴とする。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ヒト４−１ＢＢ（配列番号９）に結合する結合分子である。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、マウス４−１ＢＢ（配列番号１０）に結合する結合分子である。４−１ＢＢアゴニストまたは結合分子が結合する４−１ＢＢ抗原のアミノ酸配列を表６に要約する。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約５０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約３０ｐＭ以下のＫＤで結合する、４−１ＢＢアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約８×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約８．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約９×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約９．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約１×１０６１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、４−１ＢＢアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．１×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．４×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．５×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．６×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．７×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．８×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２．９×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、４−１ＢＢアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約１０ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約９ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約８ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約７ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約６ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約５ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約４ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約３ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約２ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウス４−１ＢＢに約１ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、４−１ＢＢアゴニストを含む。
好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ＰＦ−０５０８２５６６もしくはＭＯＲ−７４８０としても知られるウトミルマブ、またはそれらの断片、誘導体、多様体、もしくはバイオシミラーである。ウトミルマブは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ウトミルマブは、免疫グロブリンＧ２−λ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバー９、４−１ＢＢ、Ｔ細胞抗原ＩＬＡ、ＣＤ１３７）］、ホモサピエンス（完全ヒト）モノクローナル抗体である。ウトミルマブのアミノ酸配列を表ＥＥに示す。ウトミルマブは、Ａｓｎ５９およびＡｓｎ２９２におけるグリコシル化部位、２２−９６位（ＶＨ−ＶＬ）、１４３−１９９位（ＣＨ１−ＣＬ）、２５６−３１６位（ＣＨ２）、および３６２−４２０位（ＣＨ３）における重鎖鎖内ジスルフィド架橋；２２′−８７′位（ＶＨ−ＶＬ）および１３６′−１９５′位（ＣＨ１−ＣＬ）における軽鎖鎖内ジスルフィド架橋；ＩｇＧ２Ａアイソフォーム２１８−２１８位、２１９−２１９位、２２２−２２２位、および２２５−２２５位、ＩｇＧ２Ａ／Ｂアイソフォーム２１８−１３０位、２１９−２１９位、２２２−２２２位、および２２５−２２５位、ならびにＩｇＧ２Ｂアイソフォーム２１９−１３０（２）位、２２２−２２２位および２２５−２２５位における鎖間重鎖−重鎖ジスルフィド架橋；ならびにＩｇＧ２Ａアイソフォーム１３０−２１３′（２）位、ＩｇＧ２Ａ／Ｂアイソフォーム２１８−２１３′位および１３０−２１３′位、ならびにＩｇＧ２Ｂアイソフォーム２１８−２１３′（２）位における鎖間重鎖−軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウトミルマブならびにその多様体および断片の調製および特性は、米国特許第８，８２１，８６７号、同第８，３３７，８５０号、および同第９，４６８，６７８号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０３２４３３Ａ１（これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ウトミルマブの前臨床特徴は、Ｆｉｓｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１２，６１，１７２１−３３に記載されている。様々な血液学的および固形腫瘍の適応症におけるウトミルマブの現在の臨床試験には、アメリカ国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０２４４４７９３、ＮＣＴ０１３０７２６７、ＮＣＴ０２３１５０６６、およびＮＣＴ０２５５４８１２が含まれる。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、配列番号１１によって与えられる重鎖および配列番号１２によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１および配列番号１２に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１３に示される配列を含み、４−１ＢＢアゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１４に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、配列番号１３および配列番号１４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む、ｓｃＦｖ抗体を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブに関して薬物規制当局によって承認された４−１ＢＢアゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、４−１ＢＢ抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された４−１ＢＢアゴニスト抗体であり、４−１ＢＢアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。４−１ＢＢアゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。
Figure 2021535128
好ましい実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ＢＭＳ−６６３５１３および２０Ｈ４．９．ｈ４ａとしても知られるモノクローナル抗体ウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、多様体、もしくはバイオシミラーである。ウレルマブは、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ，Ｉｎｃ．およびＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ウレルマブは、免疫グロブリンＧ４−κ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９、４−１ＢＢ、Ｔ細胞抗原ＩＬＡ、ＣＤ１３７）］、ホモサピエンス（完全ヒト）モノクローナル抗体である。ウレルマブのアミノ酸配列を表ＥＥに示す。ウレルマブは、２９８位（および２９８′′）におけるＮ−グリコシル化部位；２２−９５位（ＶＨ−ＶＬ）、１４８−２０４位（ＣＨ１−ＣＬ）、２６２−３２２位（ＣＨ２）、および３６８−４２６位（ＣＨ３）（２２′′−９５′′、１４８′′−２０４′′、２６２′′−３２２′′、および３６８′′−４２６′′位）における重鎖鎖内ジスルフィド架橋；２３′−８８′位（ＶＨ−ＶＬ）および１３６′−１９６′位（ＣＨ１−ＣＬ）（２３′′′−８８′′′および１３６′′′−１９６′′′位）における軽鎖鎖内ジスルフィド架橋；２２７−２２７′′および２３０−２３０′′における鎖間重鎖−重鎖ジスルフィド架橋；ならびに１３５−２１６′および１３５′′−２１６′′′における鎖間重鎖−軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウレルマブならびにその多様体および断片の調製および特性は、米国特許第７，２８８，６３８号および第８，９６２，８０４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ウレルマブの前臨床および臨床特徴は、Ｓｅｇａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６に記載されており、ｈｔｔｐ：／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−１６−１２７２において入手可能である。様々な血液学的および固形腫瘍の適応症におけるウレルマブの現在の臨床試験には、アメリカ国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０１７７５６３１、ＮＣＴ０２１１００８２、ＮＣＴ０２２５３９９２、およびＮＣＴ０１４７１２１０が含まれる。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、配列番号２１によって与えられる重鎖および配列番号２２によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２１および配列番号２２に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ウレルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号２３に示される配列を含み、４−１ＢＢアゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号２４に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、各々が、配列番号２３および配列番号２４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む、ｓｃＦｖ抗体を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ウレルマブに関して薬物規制当局によって承認された４−１ＢＢアゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、４−１ＢＢ抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された４−１ＢＢアゴニスト抗体であり、４−１ＢＢアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。４−１ＢＢアゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。
Figure 2021535128
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、１Ｄ８、３Ｅｌｏｒ、４Ｂ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３０９８０９）、Ｈ４−１ＢＢ−Ｍ１２７（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５２５３２）、ＢＢＫ２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＭＳ６２１ＰＡＢＸ）、１４５５０１（Ｌｅｉｎｃｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｂ５９１）、ＡＴＣＣ番号ＨＢ−１１２４８として寄託された細胞株によって産生され、米国特許第６，９７４，８６３号に開示される抗体、５Ｆ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３１ １５０３）、Ｃ６５−４８５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５９４４６）、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００９５２４４号に開示される抗体、米国特許第７，２８８，６３８号に開示される抗体（例えば、２０Ｈ４．９−ＩｇＧｌ（ＢＭＳ−６６３０３１））、米国特許第６，８８７，６７３号に開示される抗体（例えば、４Ｅ９もしくはＢＭＳ−５５４２７１）、米国特許第７，２１４，４９３号に開示される抗体、米国特許第６，３０３，１２１号に開示される抗体、米国特許第６，５６９，９９７号に開示される抗体、米国特許第６，９０５，６８５号に開示される抗体（例えば、４Ｅ９もしくはＢＭＳ−５５４２７１）、米国特許第６，３６２，３２５号に開示される抗体（例えば、１Ｄ８もしくはＢＭＳ−４６９４９２、３Ｈ３もしくはＢＭＳ−４６９４９７、または３Ｅｌ）、米国特許第６，９７４，８６３号に開示される抗体（例えば、５３Ａ２）、米国特許第６，２１０，６６９号に開示される抗体（例えば、１Ｄ８、３Ｂ８、もしくは３Ｅｌ）、米国特許第５，９２８，８９３号に開示される抗体、米国特許第６，３０３，１２１号に開示される抗体、米国特許第６，５６９，９９７号に開示される抗体、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／１７７７８８号、同第ＷＯ２０１５／１１９９２３号、および同第ＷＯ２０１０／０４２４３３号に開示される抗体、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、またはバイオシミラーからなる群から選択され、前述の特許または特許出願公開の各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０２５５１６Ａ１号、同第ＷＯ２００９／００７１２０Ａ１号、同第ＷＯ２０１０／００３７６６Ａ１号、同第ＷＯ２０１０／０１００５１Ａ１号、および同第ＷＯ２０１０／０７８９６６Ａ１号；米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／００２７２１８Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／０１２６７０９Ａ１号、同第ＵＳ２０１１／０１１１４９４Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／０１１０７３４Ａ１号、および同第ＵＳ２０１５／０１２６７１０Ａ１号；ならびに米国特許第９，３５９，４２０号、同第９，３４０，５９９号、同第８，９２１，５１９号、および同第８，４５０，４６０号に記載される４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、図１０に提供されるような構造Ｉ−Ａ（Ｃ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）もしくは構造Ｉ−Ｂ（Ｎ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）に示されるような４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、もしくはバイオシミラーである。
構造Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂにおいて、円筒は、個々のポリペプチド結合ドメインを指す。構造Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂは、例えば、４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢに結合する抗体から誘導される３つの線形に結合したＴＮＦＲＳＦ結合ドメインを含み、これらを折り畳んで三価タンパク質を形成し、次いでこれをＩｇＧ１−Ｆｃ（ＣＨ３およびＣＨ２ドメインを含む）によって第２の三価タンパク質に結合させ、次いでこれを使用して、三価タンパク質のうちの２つをジスルフィド結合（小さい長楕円）によって一緒に結合し、構造を安定化し、６つの受容体およびシグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインを一緒にして、シグナル伝達複合体を形成することができるアゴニストを提供する。円筒として示されるＴＮＦＲＳＦ結合ドメインは、例えば、親水性残基および柔軟性のためのＧｌｙおよびＳｅｒ配列、ならびに溶解性のためのＧｌｕおよびＬｙｓを含み得るリンカーによって接続されたＶＨおよびＶＬ鎖を含む、ｓｃＦｖドメインであり得る。ｄｅ Ｍａｒｃｏ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ，２０１１，１０，４４、Ａｈｍａｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．＆Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２，９８０２５０、Ｍｏｎｎｉｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０１３，２，１９３−２０８、または本明細書の他の場所に組み込まれている参照文献に記載されるものなどの任意のｓｃＦｖドメイン設計を使用することができる。この形態の融合タンパク質構造は、米国特許第９，３５９，４２０号、第９，３４０，５９９号、第８，９２１，５１９号、および第８，４５０，４６０号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
構造Ｉ−Ａの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列を表ＧＧに示す。Ｆｃドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン（配列番号３１のアミノ酸１７〜２３０）、完全なヒンジドメイン（配列番号３１のアミノ酸１〜１６）、またはヒンジドメインの一部（例えば、配列番号３１のアミノ酸４〜１６）を含む。Ｃ末端Ｆｃ抗体を接続するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に適したリンカーを含む、配列番号３２〜配列番号４１に示される実施形態から選択され得る。
Figure 2021535128
構造Ｉ−Ｂの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列を表ＨＨに示す。Ｆｃ抗体断片が、構造Ｉ−ＢのようにＴＮＲＦＳＦ融合タンパク質のＮ末端に融合される場合、Ｆｃモジュールの配列は、好ましくは、配列番号４２に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号４３〜配列番号４５に示されるそれらの実施形態から選択される。
Figure 2021535128
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、ウトミルマブの可変重鎖および可変軽鎖、ウレルマブの可変重鎖および可変軽鎖、ウトミルマブの可変重鎖および可変軽鎖、表ＧＧに記載の可変重鎖および可変軽鎖から選択される可変重鎖および可変軽鎖、前述の可変重鎖および可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含む。
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、４−１ＢＢＬ配列を含む１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、配列番号４６による配列を含む１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、可溶性４−１ＢＢＬ配列を含む１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、配列番号４７による配列を含む１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含む。
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号１３および配列番号１４と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号２３および配列番号２４と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂによる４−１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が表１１に示されるＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４−１ＢＢ結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインが、リンカーによって接続されている。
Figure 2021535128
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性４−１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性４−１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性４−１ＢＢ結合ドメインを含む４−１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端および／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインである。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性４−１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性４−１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性４−１ＢＢ結合ドメインを含む４−１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端および／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインであり、可溶性４−１ＢＢドメインの各々が、茎領域（三量体化に寄与し、細胞膜まで一定の距離を提供するが、４−１ＢＢ結合ドメインの一部ではない）を欠き、第１および第２のペプチドリンカーは、独立して、３〜８アミノ酸の長さを有する。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインを含む４−１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインの各々は、茎領域を欠き、第１および第２のペプチドリンカーは、独立して、３〜８アミノ酸の長さであり、各ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは、４−１ＢＢ結合ドメインである。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、前述のＶＬドメインのうちのいずれかに結合された前述のＶＨドメインのうちのいずれかを含む、４−１ＢＢアゴニストｓｃＦｖ抗体である。
実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されているＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ４−１ＢＢアゴニスト抗体カタログ番号７９０９７−２である。実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されているＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ ４−１ＢＢアゴニスト抗体カタログ番号ＭＯＭ−１８１７９である。
３．ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト
実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニストである。ＯＸ４０アゴニストは、当該技術分野で知られている任意のＯＸ４０結合分子であり得る。ＯＸ４０結合分子は、ヒトまたは哺乳動物のＯＸ４０に結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子は、重鎖および軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語はまた、抗体（完全長抗体を含む）、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、および抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ′）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびにＯＸ４０に結合する操作された形態の抗体、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、完全なヒト抗体である抗原結合タンパク質である。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ここで開示される方法および組成物において使用するためのＯＸ４０アゴニストには、抗ＯＸ４０抗体、ヒト抗ＯＸ４０抗体、マウス抗ＯＸ４０抗体、哺乳動物抗ＯＸ４０抗体、モノクローナル抗ＯＸ４０抗体、ポリクローナル抗ＯＸ４０抗体、キメラ抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０アドネクチン、抗ＯＸ４０ドメイン抗体、一本鎖抗ＯＸ４０断片、重鎖抗ＯＸ４０断片、軽鎖抗ＯＸ４０断片、抗ＯＸ４０融合タンパク質、およびそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、またはバイオシミラーが含まれる。好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、アゴニスト、抗ＯＸ４０ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（すなわち、単一の細胞株に由来する抗体）である。
好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子はまた、融合タンパク質であり得る。ＯＸ４０Ｌに融合されたＦｃドメインを含むＯＸ４０融合タンパク質は、例えば、Ｓａｄｕｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９，１８２，１４８１−８９に記載されている。好ましい実施形態では、三量体または六量体ＯＸ４０アゴニスト（３つまたは６つのリガンド結合ドメインを有する）などの多量体ＯＸ４０アゴニストは、典型的に２つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体（ＯＸ４０Ｌ）クラスター化および内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。３つのＴＮＦＲＳＦ結合ドメインおよびＩｇＧ１−Ｆｃを含み、任意にこれらの融合タンパク質のうちの２つ以上をさらに結合する三量体（三価）または六量体（もしくは六価）またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Ｇｉｅｆｆｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１３，１２，２７３５−４７に記載されている。
アゴニストＯＸ４０抗体および融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。Ｃｕｒｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３，７３，７１８９−９８。好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式でＯＸ４０抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、例えば、ＮＫ細胞細胞傷害を無効にするアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を無効にするアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を無効にするアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｆｃ領域機能性を無効にするアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ヒトＯＸ４０（配列番号５４）に高い親和性およびアゴニスト活性で結合することを特徴とする。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ヒトＯＸ４０に結合する結合分子である（配列番号５４）。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、マウスＯＸ４０に結合する結合分子である（配列番号５５）。ＯＸ４０アゴニストまたは結合分子が結合するＯＸ４０抗原のアミノ酸配列を表１２に要約する。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約５０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１×１０６１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．１×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．４×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．５×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．６×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．７×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．８×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．９×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、および方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１０ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約６ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約５ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約４ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１ｎＭ以下のＩＣ５０で結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＭＥＤＩ０５６２またはＭＥＤＩ−０５６２としても知られるタボリキシズマブである。タボリキシズマブは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｉｎｃ．の子会社であるＭｅｄＩｍｍｕｎｅから入手可能である。タボリキシズマブは、免疫グロブリンＧ１−κ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ４（腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバー４、ＯＸ４０、ＣＤ１３４）］、ヒト化およびキメラモノクローナル抗体である。タボリキシズマブのアミノ酸配列を表ＫＫに示す。タボリキシズマブは、３０１および３０１′′位における、フコシル化複合体二分性ＣＨＯ型グリカンを有するＮ−グリコシル化部位；２２−９５位（ＶＨ−ＶＬ）、１４８−２０４位（ＣＨ１−ＣＬ）、２６５−３２５位（ＣＨ２）、および３７１−４２９位（ＣＨ３）（２２′′−９５′′位、１４８′′−２０４′′位、２６５′′−３２５′′位、および３７１′′−４２９′′位）における重鎖鎖内ジスルフィド架橋；２３′−８８′位（ＶＨ−ＶＬ）および１３４′−１９４′位（ＣＨ１−ＣＬ）（２３′′′−８８′′′位および１３４′′′−１９４′′′位）における軽鎖鎖内ジスルフィド架橋；２３０−２３０′′位および２３３−２３３′′位における鎖間重鎖−重鎖ジスルフィド架橋；ならびに２２４−２１４′および２２４′′−２１４′′′における鎖間重鎖−軽鎖ジスルフィド架橋を含む。様々な固形腫瘍の適応症におけるタボリキシズマブの現在の臨床試験には、アメリカ国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０２３１８３９４およびＮＣＴ０２７０５４８２が含まれる。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号５６によって与えられる重鎖および配列番号５７によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５６および配列番号５７に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、タボリキシズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号５８に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号５９に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、配列番号５８および配列番号５９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む、ｓｃＦｖ抗体を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号６３、配列番号６４、および配列番号６５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、タボリキシズマブに関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能な完全ヒト抗体である１１Ｄ４である。１１Ｄ４の調製および特性は、米国特許第７，９６０，５１５号、同第８，２３６，９３０号、および同第９，０２８，８２４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。１１Ｄ４のアミノ酸配列を表ＬＬに示す。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号６６によって与えられる重鎖および配列番号６７によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６６および配列番号６７に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１１Ｄ４の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号６８に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号６９に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号７０、配列番号７１、および配列番号７２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号７５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１１Ｄ４に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能な完全ヒト抗体である１８Ｄ８である。１８Ｄ８の調製および特性は、米国特許第７，９６０，５１５号、同第８，２３６，９３０号、および同第９，０２８，８２４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。１８Ｄ８のアミノ酸配列を表ＭＭに示す。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号７６によって与えられる重鎖および配列番号７７によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７６および配列番号７７に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１８Ｄ８の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号７８に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号７９に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号８０、配列番号８１、および配列番号８２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号８３、配列番号８４、および配列番号８５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１８Ｄ８に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ｐｌｃ．から入手可能なヒト化抗体であるＨｕ１１９−１２２である。Ｈｕ１１９−１２２の調製および特性は、米国特許第９，００６，３９９号および同第９，１６３，０８５号、ならびに国際特許公開第ＷＯ２０１２／０２７３２８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。Ｈｕ１１９−１２２のアミノ酸配列を表ＮＮに示す。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１１９−１２２の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号８６に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号８７に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１１９−１２２に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９−１２２である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９−１２２である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９−１２２である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９−１２２である。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ｐｌｃ．から入手可能なヒト化抗体であるＨｕ１０６−２２２である。Ｈｕ１０６−２２２の調製および特性は、米国特許第９，００６，３９９号および同第９，１６３，０８５号、ならびに国際特許公開第ＷＯ２０１２／０２７３２８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。Ｈｕ１０６−２２２のアミノ酸配列を表ＯＯに示す。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１０６−２２２の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号９４に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号９５に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号９６、配列番号９７、および配列番号９８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号９９、配列番号１００、および配列番号１０１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１０６−２２２に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストのバイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６−２２２である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６−２２２である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６−２２２である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６−２２２である。
Figure 2021535128
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＭＥＤＩ６４６９（９Ｂ１２とも称される）である。ＭＥＤＩ６４６９は、マウスモノクローナル抗体である。Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６，２９，５７５−５８５。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６，２９，５７５−５８５に記載されているように、Ｂｉｏｖｅｓｔ Ｉｎｃ．（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に寄託された９Ｂ１２ハイブリドーマによって産生された抗体であり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＭＥＤＩ６４６９のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＭＥＤＩ６４６９の重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｌ１０６ ＢＤ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体Ｌ１０６（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体Ｌ１０６（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）の重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）の重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ、ＢｉｏＸｃｅｌｌ Ｉｎｃ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）から市販されているマウスモノクローナル抗体抗ｍＣＤ１３４／ｍＯＸ４０（クローンＯＸ８６）である。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、国際特許出願公開第ＷＯ９５／１２６７３号、同第ＷＯ９５／２１９２５号、同第ＷＯ２００６／１２１８１０号、同第ＷＯ２０１２／０２７３２８号、同第ＷＯ２０１３／０２８２３１号、同第ＷＯ２０１３／０３８１９１号、および同第ＷＯ２０１４／１４８８９５号；欧州特許出願第ＥＰ０６７２１４１号；米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／１３６０３０号、同第ＵＳ２０１４／３７７２８４号、同第ＵＳ２０１５／１９０５０６号、および同第ＵＳ２０１５／１３２２８８号（クローン２０Ｅ５および１２Ｈ３を含む）；ならびに米国特許第７，５０４，１０１号、同第７，５５０，１４０号、同第７，６２２，４４４号、同第７，６９６，１７５号、同第７，９６０，５１５号、同第７，９６１，５１５号、同第８，１３３，９８３号、同第９，００６，３９９号、および同第９，１６３，０８５号（各々の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＯＸ４０アゴニストから選択される。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、構造Ｉ−Ａ（Ｃ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）もしくは構造Ｉ−Ｂ（Ｎ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）に示されるようなＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、もしくはバイオシミラーである。構造Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂの特性は、上記および米国特許第９，３５９，４２０号、第９，３４０，５９９号、第８，９２１，５１９号、および第８，４５０，４６０号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。構造Ｉ−Ａのポリペプチドドメインのアミノ酸配列を表ＧＧに示す。Ｆｃドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン（配列番号３１のアミノ酸１７〜２３０）、完全なヒンジドメイン（配列番号３１のアミノ酸１〜１６）、またはヒンジドメインの一部（例えば、配列番号３１のアミノ酸４〜１６）を含む。Ｃ末端Ｆｃ抗体を接続するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に適したリンカーを含む、配列番号３２〜配列番号４１に示される実施形態から選択され得る。同様に、構造Ｉ−Ｂのポリペプチドドメインのアミノ酸配列を表ＨＨに示す。Ｆｃ抗体断片が、構造Ｉ−ＢのようにＴＮＲＦＳＦ融合タンパク質のＮ末端に融合される場合、Ｆｃモジュールの配列は、好ましくは、配列番号４２に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号４３〜配列番号４５に示されるそれらの実施形態から選択される。
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、タボリキシズマブの可変重鎖および可変軽鎖、１１Ｄ４の可変重鎖および可変軽鎖、１８Ｄ８の可変重鎖および可変軽鎖、Ｈｕ１１９−１２２の可変重鎖および可変軽鎖、Ｈｕ１０６−２２２の可変重鎖および可変軽鎖、表ＯＯに記載の可変重鎖および可変軽鎖から選択される可変重鎖および可変軽鎖、前述の可変重鎖および可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、ＯＸ４０Ｌ配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１０２による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、可溶性ＯＸ４０Ｌ配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１０３による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１０４による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。
実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号５８および配列番号５９と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号６８および配列番号６９と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号７８および配列番号７９と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号８６および配列番号８７と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号９４および配列番号９５と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。実施形態では、構造Ｉ−ＡまたはＩ−ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が表１８に示されるＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、ＶＨおよびＶＬドメインは、リンカーによって接続されている。
Figure 2021535128
Figure 2021535128
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性ＯＸ４０結合ドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端および／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインである。実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性ＯＸ４０結合ドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端および／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインであり、可溶性ＯＸ４０ドメインの各々が、茎領域（三量体化に寄与し、細胞膜まで一定の距離を提供するが、ＯＸ４０結合ドメインの一部ではない）を欠き、第１および第２のペプチドリンカーは、独立して、３〜８アミノ酸の長さを有する。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、および（ｖ）第３の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインの各々は、茎領域を欠き、第１および第２のペプチドリンカーは、独立して、３〜８アミノ酸の長さであり、ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは、ＯＸ４０結合ドメインである。
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＭＥＤＩ６３８３である。ＭＥＤＩ６３８３は、ＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質であり、米国特許第６，３１２，７００号に記載されているように調製することができ、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、前述のＶＬドメインのうちのいずれかに結合された前述のＶＨドメインのうちのいずれかを含む、ＯＸ４０アゴニストｓｃＦｖ抗体である。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されているＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体ＭＯＭ−１８４５５である。
実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されているＯＸ４０アゴニスト抗体クローンＢｅｒ−ＡＣＴ３５である。
Ｈ．任意の細胞生存率分析
任意に、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準的なアッセイを使用して、第１の拡張（初期バルク拡張と称されることもある）の後に行うことができる。例えば、トリパンブルー排除アッセイは、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするバルクＴＩＬの試料上で行うことができる。生存率の試験に使用する他のアッセイには、アラマーブルーアッセイおよびＭＴＴアッセイが含まれるが、これらに限定されない。
１．細胞数、生存率、フローサイトメトリー
いくつかの実施形態では、細胞数および／または生存率が測定される。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ５６などであるがこれらに限定されないマーカー、ならびに本明細書に開示または記載される任意の他のマーカーの発現は、例えば、ＢＤ Ｂｉｏ−ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から市販されているものに限定されない抗体を用いたフローサイトメトリーによって、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定することができる。細胞は、使い捨てのｃチップ血球計数器（ＶＷＲ，Ｂａｔａｖｉａ，ＩＬ）を使用して手動でカウントすることができ、生存率は、トリパンブルー染色を含むがこれに限定されない当該技術分野で知られている任意の方法を使用して評価することができる。細胞生存率はまた、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ １５／８６３，６３４に基づいてアッセイすることができる。
場合によっては、以下で論じられるプロトコルを使用して、バルクＴＩＬ集団を直ちに凍結保存することができる。代替的に、バルクＴＩＬ集団をＲＥＰに供し、以下で論じられるように凍結保存することができる。同様に、遺伝子改変ＴＩＬが治療に使用される場合、バルクまたはＲＥＰ ＴＩＬ集団は、好適な治療のために遺伝子改変に供され得る。
本開示によれば、生存率および／または対象への投与におけるさらなる使用についてＴＩＬをアッセイするための方法。いくつかの実施形態では、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をアッセイするための方法は、
（ｉ）第１のＴＩＬ集団を取得することと、
（ｉｉ）ＩＬ−２および任意にＯＫＴ−３を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｉｉｉ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補足することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第３のＴＩＬ集団は、第２のＴＩＬ集団より数が少なくとも５０倍多い、第２の拡張を行うことと、
（ｉｖ）第３のＴＩＬ集団を採取、洗浄、および凍結保存することと、
（ｖ）凍結保存されたＴＩＬを極低温で保存することと、
（ｖｉ）第３のＴＩＬ集団を解凍して、解凍された第３のＴＩＬ集団を提供することと、
（ｖｉｉ）少なくとも３日の追加の拡張期間（ｒｅＲＥＰ期間と称されることもある）にわたって第３の集団の細胞培養培地をＩＬ−２、ＯＫＴ−３、およびＡＰＣで補足することによって、解凍された第３のＴＩＬ集団の一部の追加の第２の拡張を行うことであって、第３の拡張を行って第４のＴＩＬ集団を取得し、第４のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数を、第３のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数と比較して比を求める、追加の第２の拡張を行うことと、
（ｖｉｉｉ）ステップ（ｖｉｉ）の比に基づいて、解凍されたＴＩＬの集団が患者への投与に適しているかどうかを判断することと、
（ｉｘ）第４のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数と第３のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数との比が、ステップ（ｖｉｉｉ）において５：１より大きいと判断された場合、治療上有効な投与量の解凍された第３のＴＩＬ集団を患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、ステップ（ｖｉｉ）の後に生存率についてアッセイされる。
本開示はまた、ＴＩＬをアッセイするためのさらなる方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＴＩＬをアッセイするための方法であって、
（ｉ）凍結保存された第１のＴＩＬ集団の一部を取得することと、
（ｉｉ）凍結保存された第１のＴＩＬ集団の一部を解凍することと、
（ｉｉｉ）ＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団の一部を、少なくとも３日の追加の拡張期間（ｒｅＲＥＰ期間と称されることもある）培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１のＴＩＬ集団からの部分を、第２のＴＩＬ集団と比較して、ＴＩＬの数の比を求め、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数と第１のＴＩＬ集団の一部におけるＴＩＬの数との比が、５：１より大きい、第１の拡張を行うことと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）での比に基づいて、第１のＴＩＬ集団が、患者への治療的投与での使用に適しているかどうかを判断することと、
（ｖ）第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数と第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数との比が、ステップ（ｉｖ）において５：１より大きいと判断された場合、第１のＴＩＬ集団が、治療的投与での使用に適していると判断することと、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数と第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数との比は、５０：１より大きい。
いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書で提供される実施形態のうちのいずれかに記載の方法に従って、ステップ（ｉ）からの凍結保存された第１のＴＩＬ集団全体の拡張を行うことをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、ステップ（ｉ）からの凍結保存された第１のＴＩＬ集団全体を患者に投与することをさらに含む。
２．細胞培養
実施形態では、上記で論じられ、図１に例示されたものを含む、ＴＩＬを拡張するための方法は、約５，０００ｍＬ〜約２５，０００ｍＬの細胞培地、約５，０００ｍＬ〜約１０，０００ｍＬの細胞培地、または約５，８００ｍＬ〜約８，７００ｍＬの細胞培地を使用することを含み得る。いくつかの実施形態では、培地は、無血清培地である。いくつかの実施形態では、第１の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、第２の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、第１の拡張および第２の拡張における培地は、両方とも無血清である。実施形態では、ＴＩＬの数を拡張することは、たった１種類の細胞培養培地を使用する。任意の好適な細胞培養培地、例えば、ＡＩＭ−Ｖ細胞培地（Ｌ−グルタミン、５０μＭの硫酸ストレプトマイシン、および１０μＭの硫酸ゲンタマイシン）細胞培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を使用することができる。これに関して、本発明の方法は、ＴＩＬの数を拡張するために必要な培地の量および培地の種類の数を有利に低減する。実施形態では、ＴＩＬの数を拡張することは、３日または４日に１回以下の頻度で細胞にフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内の細胞の数を拡張することは、細胞を拡張するために必要なフィーディング頻度を低減することによって、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化する。
実施形態では、第１および／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、ろ過されていない。ろ過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。実施形態では、第１および／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、βメルカプトエタノール（ＢＭＥ）を欠いている。
実施形態では、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、細胞培地を中に含有する第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、腫瘍組織試料からＴＩＬを取得することと、細胞培地を含有する第２のガス透過性容器内のＴＩＬの数を拡張することと、を含む方法の期間は、約７〜１４日、例えば、約１１日の期間である。いくつかの実施形態では、ｐｒｅ−ＲＥＰは、約７〜１４日、例えば、約１１日である。いくつかの実施形態では、ＲＥＰは、約７〜１４日、例えば、約１１日である。
実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性容器内で拡張される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものを含む、当該技術分野で知られている方法、組成物、およびデバイスを使用し、ＰＢＭＣを使用してＴＩＬを拡張するために使用されてきた。実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性バッグ内で拡張される。実施形態では、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ細胞拡張システムＷ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの、ガス透過性バッグ内のＴＩＬを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。実施形態では、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ細胞拡張システムＷ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）としても知られるＷＡＶＥバイオリアクターシステムなどの、ガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。実施形態では、細胞拡張システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、および約１０Ｌからなる群から選択される容量を有するガス透過性細胞バッグを含む。
実施形態では、ＴＩＬは、Ｇ−Ｒｅｘフラスコ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇから市販されている）内で拡張することができる。かかる実施形態は、細胞集団が約５×１０５細胞／ｃｍ２から１０×１０６〜３０×１０６細胞／ｃｍ２の間まで拡張するのを可能にする。実施形態では、これは、フィーディングなしである。実施形態では、これは、媒体がＧ−Ｒｅｘフラスコ内の約１０ｃｍの高さに存在する限り、フィーディングなしである。実施形態では、これは、フィーディングなしであるが、１つ以上のサイトカインの添加を伴う。実施形態では、サイトカインを培地と混合する必要なしに、サイトカインをボーラスとして添加することができる。かかる容器、装置、および方法は、当該技術分野で知られており、ＴＩＬを拡張するために使用されており、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１４／２１００３６Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１１５６１７Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１３／１８８４２７Ａ１、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０１３６２２８Ａ１、米国特許第ＵＳ８，８０９，０５０Ｂ２号、国際公開第ＷＯ２０１１／０７２０８８Ａ２号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１６／０２０８２１６Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／０２４４１３３Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１２／１２９２０１Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１０２０７５Ａ１号、米国特許第ＵＳ８，９５６，８６０Ｂ２号、国際公開第ＷＯ２０１３／１７３８３５Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１７５９６６Ａ１号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものを含む。かかるプロセスはまた、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２，３５：２８３−２９２に記載されている。
Ｉ．ＴＩＬの任意の遺伝子操作
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、高親和性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、ＭＡＧＥ−１、ＨＥＲ２、もしくはＮＹ−ＥＳＯ−１などの腫瘍関連抗原で標的されるＴＣＲ、または腫瘍関連細胞表面分子（例えば、メソセリン）もしくは系統制限細胞表面分子（例えば、ＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むがこれらに限定されない追加の機能を含むように任意に遺伝子操作される。
Ｊ．ＴＩＬの任意の凍結保存
上で論じられるように、図１に示されるステップＡ〜Ｅで例示されるように、凍結保存は、ＴＩＬ拡張プロセス全体の様々な時点で起こり得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張後の拡張されたＴＩＬ集団（例えば、図１のステップＤに従って提供される）を、凍結保存することができる。凍結保存は、一般に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば８５％補体不活化ＡＢ血清および１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成することができる。溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、−８０℃で２４時間保存し、任意に、凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移す。Ｓａｄｅｇｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３，５２，９７８−９８６を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、５％ ＤＭＳＯ中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、５％ ＤＭＳＯを加えた細胞培養培地中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、実施例ＦおよびＧに提供される方法に従って凍結保存される。
必要に応じて、細胞を冷凍庫から取り出し、溶液のおよそ４／５が解凍されるまで、３７℃の水浴中で解凍する。細胞は、一般に完全培地に再懸濁され、任意に１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたＴＩＬは、当該技術分野で知られているようにカウントされ、生存率について評価することができる。
Ｋ．ＴＩＬ製造のための閉鎖系
本発明は、ＴＩＬ培養プロセス中の閉鎖系の使用を提供する。かかる閉鎖系は、微生物汚染の防止および／または低減を可能にし、より少ないフラスコの使用を可能にし、かつコスト削減を可能にする。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、２つの容器を使用する。
かかる閉鎖系は当該技術分野でよく知られており、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｂｅｒ／ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ｈｔｍおよびｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＢｉｏｌｏｇｉｃｓＢｌｏｏｄＶａｃｃｉｎｅｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／Ｂｌｏｏｄ／ｕｃｍ０７６７７９．ｈｔｍで見出すことができる。
無菌接続装置（ＳＴＣＤ）は、互換性のある２本の管の間の無菌溶接を行う。この手順により、様々な容器と管の直径を無菌接続することができる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、例えば実施例Ｇに記載されるようなルアーロック系およびヒートシール系を含む。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、系の無菌性および閉鎖性を維持するために、無菌条件下で注射器を介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、実施例Ｇに記載されるような閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、実施例Ｇのセクション「最終製剤および充填」に記載される方法に従って、最終製品製剤容器に配合される。
いくつかの実施形態では、閉鎖系は、腫瘍断片が取得されてから、ＴＩＬが患者への投与または凍結保存の準備ができるまで、１つの容器を使用する。いくつかの実施形態では、２つの容器が使用される場合、第１の容器は閉じたＧ容器であり、ＴＩＬの集団は遠心分離され、第１の閉じたＧ容器を開かずに注入バッグに移される。いくつかの実施形態では、２つの容器が使用される場合、注入バッグは、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌを含有する注入バッグである。閉鎖系または閉鎖ＴＩＬ細胞培養系は、腫瘍試料および／または腫瘍断片が追加されると、系が外部からしっかりと密閉され、細菌、真菌、および／またはいかなる他の微生物汚染も侵入しない閉鎖環境を形成することを特徴とする。
いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％〜約１００％の間である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％〜約９５％の間である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％〜約９０％の間である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約１０％〜約９０％の間である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約１５％〜約８５％の間である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％である。
閉鎖系は、微生物汚染がない状態で、および／または微生物汚染を大幅に低減して、ＴＩＬの成長を可能にする。
さらに、ＴＩＬ細胞培養環境のｐＨ、二酸化炭素分圧、および酸素分圧は各々、細胞が培養されるにつれて変化する。したがって、細胞培養に適した培地を循環させても、ＴＩＬ増殖に最適な環境として常に閉鎖環境を一定に維持する必要がある。この目的のために、閉鎖環境の培養液内のｐＨ、二酸化炭素分圧、および酸素分圧の物理的要因をセンサーによって監視すること、そのシグナルを使用して、培養環境の入口に設置されたガス交換器を制御すること、および細胞培養環境を最適化するように、閉鎖環境のガス分圧を培養液の変化に応じてリアルタイムで調整することが望ましい。いくつかの実施形態では、本発明は、閉鎖環境への入口に、閉鎖環境のｐＨ、二酸化炭素分圧、および酸素分圧を測定するモニタリング装置を備えたガス交換器を組み込む閉鎖細胞培養システムを提供し、モニタリング装置からのシグナルに基づいてガス濃度を自動的に調整することによって、細胞培養環境を最適化する。
いくつかの実施形態では、閉鎖環境内の圧力は、連続的または断続的に制御される。すなわち、閉鎖環境における圧力は、例えば、圧力維持装置によって変化させることができ、したがって、空間が正圧状態でのＴＩＬの成長に好適であることを保証するか、または負圧状態での流体の浸出を促進し、したがって、細胞増殖を促進する。さらに、断続的に陰圧を加えることにより、閉鎖環境の体積の一時的な収縮によって、閉鎖環境内の循環液体を均一かつ効率的に置き換えることが可能である。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの増殖のための最適な培養成分を置換または添加することができ、ＩＬ−２および／またはＯＫＴ３などの因子、ならびに組み合わせを添加することができる。
Ｌ．ＴＩＬの任意の凍結保存
バルクＴＩＬ集団またはＴＩＬの拡張集団のいずれかを、任意に凍結保存することができる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、治療的ＴＩＬ集団上で起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、第２の拡張後に採取されたＴＩＬ上で起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、図１の例示的なステップＦにおいて、ＴＩＬ上で起こる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、注入バッグ内で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、注入バッグに入れる前に凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、凍結保存され、注入バッグに入っていない。いくつかの実施形態では、凍結保存は、凍結保存培地を使用して行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する。これは一般に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば８５％補体不活化ＡＢ血清および１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成される。溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、−８０℃で２４時間保存し、任意に、凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移す。Ｓａｄｅｇｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３，５２，９７８−９８６を参照されたい。
必要に応じて、細胞を冷凍庫から取り出し、溶液のおよそ４／５が解凍されるまで、３７℃の水浴中で解凍する。細胞は、一般に完全培地に再懸濁され、任意に１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたＴＩＬは、当該技術分野で知られているようにカウントされ、生存率について評価することができる。
好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、ＣＳ１０凍結保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ １０、ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する凍結保存培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、１：１（体積：体積）比のＣＳ１０および細胞培養培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬの集団は、約１：１（体積：体積）比のＣＳ１０および細胞培養培地を使用して凍結保存され、さらに追加のＩＬ−２を含む。
上記のステップＡ〜Ｅで論じられるように、凍結保存は、ＴＩＬ拡張プロセス全体の様々な時点で起こり得る。いくつかの実施形態では、ステップＢによる第１の拡張後のバルクＴＩＬ集団、またはステップＤによる１回以上の第２の拡張後の拡張されたＴＩＬ集団を、凍結保存することができる。凍結保存は、一般に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば８５％補体不活化ＡＢ血清および１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成することができる。溶液中の細胞を極低温バイアルに入れ、−８０℃で２４時間保存し、任意に、凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移す。Ｓａｄｅｇｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３，５２，９７８−９８６を参照されたい。
必要に応じて、細胞を冷凍庫から取り出し、溶液のおよそ４／５が解凍されるまで、３７℃の水浴中で解凍する。細胞は、一般に完全培地に再懸濁され、任意に１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたＴＩＬは、当該技術分野で知られているようにカウントされ、生存率について評価することができる。
場合によっては、以下で論じられるプロトコルを使用して、ステップＢ ＴＩＬ集団を直ちに凍結保存することができる。代替的に、バルクＴＩＬ集団をステップＣおよびステップＤに供し、ステップＤの後に凍結保存することができる。同様に、遺伝子操作されたＴＩＬを治療に使用する場合、ステップＢまたはステップＤ ＴＩＬ集団を好適な治療のために遺伝子改変に供することができる。
ＩＶ．薬学的組成物、投与量、および投薬レジメン
実施形態では、本開示の方法を使用して拡張されたＴＩＬは、薬学的組成物として患者に投与される。実施形態では、薬学的組成物は、無菌緩衝液中のＴＩＬの懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、単一の動脈内または静脈内注入として投与され、これは好ましくは、およそ３０〜６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、およびリンパ内投与が含まれる。
任意の好適な用量のＴＩＬが投与され得る。いくつかの実施形態では、特に癌がＮＳＣＬＣである場合、約２．３×１０１０〜約１３．７×１０１０ＴＩＬが投与され、平均は約７．８×１０１０ＴＩＬである。実施形態では、約１．２×１０１０〜約４．３×１０１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約３×１０１０〜約１２×１０１０ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約４×１０１０〜約１０×１０１０ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約５×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約６×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約７×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約２．３×１０１０〜約１３．７×１０１０である。いくつかの実施形態では、特に癌がＮＳＣＬＣである場合、治療上有効な投与量は、約７．８×１０１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１．２×１０１０〜約４．３×１０１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約３×１０１０〜約１２×１０１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約４×１０１０〜約１０×１０１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約５×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約６×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約７×１０１０〜約８×１０１０ＴＩＬである。
いくつかの実施形態では、特に癌がＮＳＣＬＣである場合、約１×１０９〜約１５０×１０９ＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１５０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１４０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１３０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１２０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１１０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１００×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約９０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約８０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約７０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約６０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約５０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約４０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約３０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約２０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約１０×１０９ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１×１０９〜約５×１０９ＴＩＬである。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの数は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、および９×１０１３である。実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの数は、１×１０６〜５×１０６、５×１０６〜１×１０７、１×１０７〜５×１０７、５×１０７〜１×１０８、１×１０８〜５×１０８、５×１０８〜１×１０９、１×１０９〜５×１０９、５×１０９〜１×１０１０、１×１０１０〜５×１０１０、５×１０１０〜１×１０１１、５×１０１１〜１×１０１２、１×１０１２〜５×１０１２、および５×１０１２〜１×１０１３の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの濃度は、例えば、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％未満のｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの薬学的組成物である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの濃度は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％超のｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの薬学的組成物である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの濃度は、約０．０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０２％〜約２９％、約０．０３％〜約２８％、約０．０４％〜約２７％、約０．０５％〜約２６％、約０．０６％〜約２５％、約０．０７％〜約２４％、約０．０８％〜約２３％、約０．０９％〜約２２％、約０．１％〜約２１％、約０．２％〜約２０％、約０．３％〜約１９％、約０．４％〜約１８％、約０．５％〜約１７％、約０．６％〜約１６％、約０．７％〜約１５％、約０．８％〜約１４％、約０．９％〜約１２％、または約１％〜約１０％のｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの薬学的組成物の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの濃度は、約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４．５％、約０．０３％〜約４％、約０．０４％〜約３．５％、約０．０５％〜約３％、約０．０６％〜約２．５％、約０．０７％〜約２％、約０．０８％〜約１．５％、約０．０９％〜約１％、約０．１％〜約０．９％のｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの薬学的組成物の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇ以下である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物において提供されるＴＩＬの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇより多い。
本発明の薬学的組成物で提供されるＴＩＬは、広い投与量囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別および年齢、治療される対象の体重、ならびに主治医の好みおよび経験に依存するであろう。必要に応じて、臨床的に確立されたＴＩＬの投与量を使用することもできる。ＴＩＬの投与量など、本明細書の方法を使用して投与される薬学的組成物の量は、治療されるヒトまたは哺乳動物、障害または状態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質、および処方する医師の裁量に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、単一用量で投与され得る。かかる投与は、注射、例えば、静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、複数用量で投与され得る。投薬は、１年に１回、２回、３回、４回、５回、６回、または６回以上であり得る。投薬は、月１回、２週間に１回、週１回、または１日おきに１回であり得る。ＴＩＬの投与は、必要な限り継続することができる。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、および９×１０１３である。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効投与量は、１×１０６〜５×１０６、５×１０６〜１×１０７、１×１０７〜５×１０７、５×１０７〜１×１０８、１×１０８〜５×１０８、５×１０８〜１×１０９、１×１０９〜５×１０９、５×１０９〜１×１０１０、１×１０１０〜５×１０１０、５×１０１０〜１×１０１１、５×１０１１〜１×１０１２、１×１０１２〜５×１０１２、および５×１０１２〜１×１０１３の範囲内である。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ〜約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ〜約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ〜約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ〜約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、または約２．８５ｍｇ／ｋｇ〜約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５ｍｇ〜約４５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約４０ｍｇ、約１５ｍｇ〜約３５ｍｇ、約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２３ｍｇ〜約２８ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ〜約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ〜約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ〜約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇ、または約９５ｍｇ〜約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ〜約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ〜約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ〜約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ〜約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ〜約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ〜約２０５ｍｇ、または約１９８〜約２０７ｍｇの範囲内である。
有効量のＴＩＬは、鼻腔内および経皮経路を含む、同様の有用性を有する薬剤の許容される投与様式のうちのいずれかによって、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下的、局所的、移植によって、または吸入によって、単一用量または複数用量のいずれかで投与することができる。
Ｖ．患者を治療する方法
治療の方法は、最初のＴＩＬ収集およびＴＩＬの培養から始まる。かかる方法は両方とも、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２，３５（３）：２８３−２９２によって当該技術分野で説明されている。治療方法の実施形態は、実施例を含む以下のセクション全体に記載されている。
本明細書に記載の方法に従って、例えば、上記のステップＡ〜Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ〜Ｆに従って（また例えば、図１に示されるように）産生される拡張ＴＩＬは、癌を有する患者の治療における特定の用途を見出す（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６，３４（２０）：２３８９−２３９、および補足内容に記載される）。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、以前に記載されたように、転移性黒色腫の切除された沈着物から増殖された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２００３，２６：３３２−３４２を参照）。新鮮な腫瘍は、無菌条件下で剥離することができる。代表的な試料は、正式な病理学的分析のために収集することができる。２ｍｍ３〜３ｍｍ３の単一断片を使用することができる。いくつかの実施形態では、患者あたり５、１０、１５、２０、２５、または３０個の試料を取得する。いくつかの実施形態では、患者あたり２０、２５、または３０個の試料を取得する。いくつかの実施形態では、患者あたり２０、２２、２４、２６、または２８個の試料を取得する。いくつかの実施形態では、患者あたり２４個の試料を取得する。試料は、２４ウェルプレートの個々のウェルに入れ、高用量ＩＬ−２（６，０００ＩＵ／ｍＬ）を含む成長培地中で維持し、腫瘍の破壊および／またはＴＩＬの増殖をモニターすることができる。処理後に生細胞が残っている腫瘍は、本明細書に記載されるように、単一細胞懸濁液中に酵素的に消化され、凍結保存され得る。
いくつかの実施形態では、成功裏に成長したＴＩＬは、表現型分析（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ５６）のためにサンプリングされ、利用可能な場合、自己腫瘍に対して試験され得る。一晩の共培養でインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）レベルが２００ｐｇ／ｍＬを超え、バックグラウンドの２倍になった場合、ＴＩＬは、反応性があるとみなすことができる。（Ｇｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２０１０，３３：８４０−８４７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、自己反応性または十分な成長パターンの証拠を有する培養物は、急速拡張（ＲＥＰ）と称されることもある第２の拡張を含む、第２の拡張（例えば、図１のステップＤに従って提供される第２の拡張）のために選択され得る。いくつかの実施形態では、高い自己反応性（例えば、第２の拡張中の高い増殖）を有する拡張ＴＩＬが、追加の第２の拡張のために選択される。いくつかの実施形態では、高い自己反応性（例えば、図１のステップＤで提供されるような第２の拡張中の高い増殖）を有するＴＩＬが、図１のステップＤに従って、追加の第２の拡張のために選択される。
注入バッグＴＩＬの凍結保存試料の細胞表現型は、表面マーカーＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ７、およびＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）のフローサイトメトリー（例えば、ＦｌｏｗＪｏ）、ならびに本明細書に記載の方法のうちのいずれかによって分析され得る。血清サイトカインは、標準的な酵素結合免疫吸着測定法を使用することによって測定された。血清ＩＦＮ−ｇの上昇は、＞１００ｐｇ／ｍＬおよび４３ベースラインレベルを超えると定義された。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図１に例示される方法によって産生されるＴＩＬは、ＴＩＬの臨床効果の驚くべき改善を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図１に例示される方法によって産生されるＴＩＬは、例えば、図１に例示されるもの以外の方法を含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるもの以外の方法は、プロセス１Ｃおよび／または第１世代（Ｇｅｎ１）と称される方法を含む。いくつかの実施形態では、有効性の増加は、ＤＣＲ、ＯＲＲ、および／または他の臨床応答によって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図１に例示される方法によって産生されるＴＩＬＳは、例えば、図１に例示されるもの以外の方法、例えば、Ｇｅｎ１プロセスを含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、同様の応答時間および安全性プロファイルを示す。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−ガンマ（ＩＦＮ−γ）は、治療効果および／または増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、ＴＩＬで治療された対象の血液中のＩＦＮ−γは、活性なＴＩＬを示す。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ産生のための効力アッセイが用いられる。ＩＦＮ−γ産生は、細胞傷害能に関する別の尺度である。ＩＦＮ−γ産生は、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のエクスビボでの血液、血清、またはＴＩＬ中のサイトカインＩＦＮ−γのレベルを決定することによって測定することができる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γの増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬで治療された患者における治療効果を示す。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γは、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、３倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、４倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γは、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のエクスビボでのＴＩＬにおいて測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象の血液において測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のＴＩＬ血清において測定される。
いくつかの実施形態では、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるＴＩＬは、例えばプロセス１Ｃ法と称される方法などの、図１に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性および／または増加したポリクローン性は、治療効果および／または増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬの投与に関する治療効果を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０００倍増加する。
有効性の尺度は、当該技術分野で知られている、ならびに本明細書に記載されている、疾患制御率（ＤＣＲ）ならびに全応答率（ＯＲＲ）を含むことができる。
１．ＮＳＣＬＣを治療する方法
本明細書に記載の組成物および方法は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療するための方法において使用することができ、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体には、例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（ラムブロリズマブ、ＭＫ０３４７５またはＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ；Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、ヒト化抗ＰＤ−１抗体ＪＳ００１（ＳｈａｎｇＨａｉ ＪｕｎＳｈｉ）、モノクローナル抗ＰＤ−１抗体ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ピジリズマブ（抗ＰＤ−１ ｍＡｂ ＣＴ−０１１、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ）、および／または抗ＰＤ−１抗体ＳＨＲ−１２１０（ＳｈａｎｇＨａｉ ＨｅｎｇＲｕｉ）、ヒトモノクローナル抗体ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ヒトモノクローナル抗体ＭＤＸ−１１０６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、および／またはヒト化抗ＰＤ−１ ＩｇＧ４抗体ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗体は、クローン：ＲＭＰ１−１４（ラットＩｇＧ）−ＢｉｏＸｃｅｌｌカタログ番号ＢＰ０１４６に由来する。本明細書に記載のステップＡ〜Ｆに従って産生されたＴＩＬとの同時投与方法での使用に適した他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，００８，４４９号に開示された抗ＰＤ−１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１との相互作用を阻害し、それにより免疫活性を増加させる。ＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する当該技術分野で知られている任意の抗体が含まれる。例えば、ＰＤ−Ｌ１を標的とし、臨床試験中の抗体には、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）およびＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が含まれる。ＰＤ−Ｌ１を標的とする他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９４３，７４３号に開示されている。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する任意の抗体が含まれることは、当業者には理解されるであろう。
いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１抗体で治療されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体で処理されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、治療ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−１抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、以前に化学療法剤で治療されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、以前に化学療法剤で治療されているが、もはや化学療法剤で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、治療ナイーブのＮＳＣＬＣを有するか、または化学療法治療後であるが、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法治療後であるが、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブであり、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有し、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ対象は、治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後であるが、ＰＤ−Ｌ１の発現が低く、および／またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が横方向または冠状面のいずれかで測定された７ｃｍより大きい場合、巨大腫瘤病変が示される。いくつかの実施形態では、巨大腫瘤病変は、２０ｍｍ以上の短軸直径を有する腫れたリンパ節がある場合に示される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＮＳＣＬＣの標準治療の治療薬を含む。
いくつかの実施形態では、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるＴＩＬは、例えばプロセス１Ｃ法と称される方法などの、図１に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性および／または増加したポリクローン性は、癌治療に対する治療効果および／または増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬの投与に関する治療効果を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、および／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０００倍増加する。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有する。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有する。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有する。いくつかの実施形態では、治療される対象は、癌遺伝子によって引き起こされる腫瘍を有し、癌遺伝子に向けられた少なくとも１つの効果的な標的療法で治療されていた。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、例えば、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、例えば、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１などで以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、例えば、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、例えば、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、抗ＰＤ−１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、抗ＰＤ−１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＩＩのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、抗ＰＤ−Ｌ１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）を有し、抗ＰＤ−Ｌ１を含む全身療法で以前に治療された。いくつかの実施形態では、治療される対象は、癌遺伝子によって引き起こされる腫瘍を有し、癌遺伝子に向けられた少なくとも１つの効果的な標的療法で治療されていた。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、組織学的または病理学的にステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮、非扁平上皮、腺癌、大細胞癌）の確定診断を有する。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、免疫療法ナイーブである。いくつかの実施形態では、治療される対象は、例えば、アジュバントまたはネオアジュバント設定での全身療法を含む、または決定的な化学放射線療法の一部として、最大３つの以前の全身性抗癌療法を受けていた可能性がある。いくつかの実施形態では、治療される対象は、例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、および／またはＲＯＳにおける突然変異を含む、癌遺伝子突然変異を有する。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、３つ以下の全身療法の一部として、例えば、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１などによる全身療法を以前に受けていた。いくつかの実施形態では、治療される対象は、例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、および／またはＲＯＳにおける突然変異を含む、癌遺伝子突然変異を有する。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ＴＩＬ調製に使用するための切除後の直径が少なくとも約１．５ｃｍの少なくとも１つの切除可能な病変（または凝集病変）を有する。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、最初の研究治療（すなわち、非骨髄破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ−ＬＤ）またはペムブロリズマブの開始）の前に、最小期間の１つ以上の以前の抗癌療法からのウォッシュアウト期間を有していた。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＥＫ、ＢＲＡＦ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１および／または他の標的薬剤（例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、および／またはロラチニブ）による以前の標的療法、ならびにＴＩＬ治療の開始の少なくとも１４日前の前治療の最小ウォッシュアウトを有していた。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、アジュバント、ネオアジュバント、もしくは根治的化学療法、および／または化学放射線療法、ならびに治療の開始の少なくとも２１日前の前治療の最小ウォッシュアウトを有していた。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、例えば、ＰＤ−１阻害剤もしくはＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば抗ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１など）、他のｍＡｂ、および／またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法、ならびに非骨髄破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ−ＬＤ）の開始前の２１日以上の最小ウォッシュアウト期間を有していた。
ａ．ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害剤
プログラム死１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、活性化単球、および樹状細胞によって発現される２８８アミノ酸の膜貫通免疫チェックポイント受容体タンパク質である。ＣＤ２７９としても知られるＰＤ−１は、ＣＤ２８ファミリーに属し、ヒトでは第２染色体上のＰｄｃｄ１遺伝子によってコードされる。ＰＤ−１は、１つの免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリードメイン、膜貫通領域、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する細胞内ドメインからなる。ＰＤ−１とそのリガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）は、Ｋｅｉｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，２６，６７７−７０４に記載されているように、免疫寛容において重要な役割を果たすことが知られている。ＰＤ−１は、Ｔ細胞の免疫応答を負に調節する阻害シグナルを提供する。ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られる）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣまたはＣＤ２７３としても知られる）は、腫瘍細胞および間質細胞上に発現され、ＰＤ−１を発現する活性化Ｔ細胞が遭遇する可能性があり、Ｔ細胞の免疫抑制につながる。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト第９染色体上のＣｄ２７４遺伝子によってコードされる２９０アミノ酸の膜貫通タンパク質である。例えば、Ｔｏｐａｌｉａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１２，３６６，２４４３−５４に記載される最近の臨床研究で実証されているように、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、および／またはＰＤ−Ｌ２阻害剤の使用による、ＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との間の相互作用をブロックすることで、免疫抵抗を克服することができる。ＰＤ−Ｌ１は、多くの腫瘍細胞株上で発現されるが、ＰＤ−Ｌ２は、主に樹状細胞およびいくつかの腫瘍株上で発現される発現される。Ｔ細胞（活性化後にＰＤ−１を誘導的に発現する）に加えて、ＰＤ−１は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、活性化単球、樹状細胞上でも発現される。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−１遮断薬であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるＰＤ−１阻害剤または遮断薬のうちの１つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、および「遮断薬」という用語は、本明細書では、ＰＤ−１阻害剤に関して交換可能に使用される。誤解を避けるために、抗体であるＰＤ−１阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、多様体、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、ＰＤ−１阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
好ましい実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ−１抗体）、Ｆａｂ断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ポリクローナル抗体である。好ましい実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−１との結合について競合し、かつ／またはＰＤ−１上のエピトープに結合する。実施形態では、抗体は、ＰＤ−１との結合について競合し、かつ／またはＰＤ−１上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ヒトＰＤ−１に約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約５０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約３０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約２０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−１に約１０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトＰＤ−１に約１ｐＭ以下のＫＤで結合するものである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ヒトＰＤ−１に約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約８×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約８．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約９×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約９．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ−１に約１×１０６１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合するものである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ヒトＰＤ−１に約２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．１×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．４×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．５×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．６×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、もしくはヒトＰＤ−１に約２．７×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．８×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．９×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ−１に約３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合するものである
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、約１０ｎｍ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約９ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約８ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約７ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約６ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約５ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約４ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約３ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約２ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、または約１ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害するものである。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．からＯＰＤＩＶＯとして市販されている）、またはそれらのバイオシミラー、抗原結合断片、コンジュゲート、もしくは多様体である。ニボルマブは、ＰＤ−１受容体を遮断する完全ヒトＩｇＧ４抗体である。実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、免疫グロブリンＧ４κ、抗（ヒトＣＤ２７４）抗体である。ニボルマブには、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）登録番号９４６４１４−９４−４が割り当てられており、５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、およびＯＮＯ−４５３８としても知られている。ニボルマブの調製および特性は、米国特許第８，００８，４４９号および国際特許公開第ＷＯ２００６／１２１１６８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態の癌におけるニボルマブの臨床的安全性および有効性は、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１４，２，８４６−５６；Ｐａｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２０１４，６５，１８５−２０２、およびＷｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１３，３１，４３１１−４３１８に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ニボルマブのアミノ酸配列を表４８に示す。ニボルマブは、２２−９６、１４０−１９６、２５４−３１４、３６０−４１８、２２′′−９６′′、１４０′′−１９６′′、２５４′′−３１４′′、および３６０′′−４１８′′における重鎖内ジスルフィド結合；２３′−８８′、１３４′−１９４′、２３′′′−８８′′′、および１３４′′′−１９４′′′における軽鎖内ジスルフィド結合；１２７−２１４′、１２７′′−２１４′′′における重鎖−軽鎖間ジスルフィド結合；２１９−２１９′′および２２２−２２２′′における重鎖−重鎖間ジスルフィド結合；ならびに２９０、２９０′′におけるＮ−グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２８４．４）を有する。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、配列番号４６３によって与えられる重鎖および配列番号１２８によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３および配列番号１２８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１２９に示される配列を含み、ＰＤ−１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１３０に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１２９および配列番号１３０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１２９および配列番号１３０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１２９および配列番号１３０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１２９および配列番号１３０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１２９および配列番号１３０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、それぞれ、配列番号１３１、配列番号１３２、および配列番号１３３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１３４、配列番号１３５、および配列番号１３６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、かつ／またはＰＤ−１上の同じエピトープに結合する。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ−１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ−１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ−１抗体であり、抗ＰＤ−１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。抗ＰＤ−１抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。
Figure 2021535128
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別の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ（Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ，ＵＳＡ）からＫＥＹＴＲＵＤＡとして市販されている）、またはそれらの抗原結合断片、コンジュゲート、もしくは多様体を含む。ペムブロリズマブには、ＣＡＳ登録番号１３７４８５３−９１−４が割り当てられており、ラムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、およびＳＣＨ−９００４７５としても知られている。ペムブロリズマブは、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトタンパク質ＰＤＣＤ１（プログラム細胞死１））（ヒト−ハツカネズミモノクローナル重鎖）、ヒト−ハツカネズミモノクローナル軽鎖、二量体構造を有するジスルフィドを有する。ペムブロリズマブの構造は、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトプログラム細胞死１）；ヒト化マウスモノクローナルκ軽鎖二量体（２２６−２２６′′：２２９−２２９′′）−ビスジスルフィドを有するヒト化マウスモノクローナル［２２８−Ｌ−プロリン（Ｈ１０−Ｓ＞Ｐ）］γ４重鎖（１３４−２１８′）−ジスルフィドとしても記載され得る。ペムブロリズマブの特性、使用、および調製は、国際特許公開第ＷＯ２００８／１５６７１２Ａ１号、米国特許第８，３５４，５０９号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２６６６１７Ａ１号、同第ＵＳ２０１３／０１０８６５１Ａ１号、および同第ＵＳ２０１３／０１０９８４３Ａ２に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態の癌におけるペムブロリズマブの臨床的安全性および有効性は、Ｆｕｅｒｓｔ，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔｉｍｅｓ，２０１４，３６，３５−３６、Ｒｏｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，２０１４，３８４，１１０９−１７、およびＴｈｏｍａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０１４，１４，１０６１−１０６４に記載されている。ペムブロリズマブのアミノ酸配列を表４９に示す。ペムブロリズマブは、ジスルフィド架橋：２２−９６、２２′′−９６′′、２３′−９２′、２３′′′−９２′′′、１３４−２１８′、１３４′′−２１８′′′、１３８′−１９８′、１３８′′′−１９８′′′、１４７−２０３、１４７′′−２０３′′、２２６−２２６′′、２２９−２２９′′、２６１−３２１、２６１′′−３２１′′、３６７−４２５、および３６７′′−４２５′′、ならびにグリコシル化部位（Ｎ）：Ａｓｎ−２９７およびＡｓｎ−２９７′′を含む。ペムブロリズマブは、Ｆｃ領域に安定化Ｓ２２８Ｐ突然変異を有するＩｇＧ４／κアイソタイプであり、この突然変異をＩｇＧ４ヒンジ領域に挿入すると、ＩｇＧ４抗体で典型的に観察される半分子の形成が防止される。ペムブロリズマブは、各重鎖のＦｃドメイン内のＡｓｎ２９７で不均一にグリコシル化されており、無傷の抗体の分子量はおよそ１４９ｋＤａになる。ペムブロリズマブの優性グリコフォームは、フコシル化アガラクト二分性グリカンフォーム（Ｇ０Ｆ）である。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、配列番号１３７によって与えられる重鎖および配列番号１３８によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３７および配列番号１３８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ペムブロリズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１３９に示される配列を含み、ＰＤ−１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１４０に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３９および配列番号１４０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３９および配列番号１４０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３９および配列番号１４０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３９および配列番号１４０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１３９および配列番号１４０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、それぞれ、配列番号１４１、配列番号１４２、および配列番号１４３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１４４、配列番号１４５、および配列番号１４６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、かつ／またはＰＤ−１上の同じエピトープに結合する。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ−１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ−１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ−１抗体であり、抗ＰＤ−１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。抗ＰＤ−１抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。
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実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、抗ｍ−ＰＤ−１クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３−２）およびＲＭＰ１−１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ ＵＳＡ）などの市販の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗ＰＤ−１抗体が、当業者に知られている。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、米国特許第８，３５４，５０９号または米国特許出願公開第２０１０／０２６６６１７Ａ１号、同第２０１３／０１０８６５１Ａ１号、同第２０１３／０１０９８４３Ａ２号に開示されている抗体であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、米国特許第８，２８７，８５６号、同第８，５８０，２４７号、および同第８，１６８，７５７号、ならびに米国特許出願公開第２００９／００２８８５７Ａ１号、同第２０１０／０２８５０１３Ａ１号、同第２０１３／００２２６００Ａ１号、および同第２０１１／０００８３６９Ａ１号に記載されている抗ＰＤ−１抗体であり、それらの教示は参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、米国特許第８，７３５，５５３Ｂ１号に開示されている抗ＰＤ−１抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＣＴ−０１１としても知られるピジリズマブであり、これは米国特許第８，６８６，１１９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、米国特許第８，９０７，０５３号、同第９，０９６，６４２号、および同第９，０４４，４４２号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００８７５８１号に記載されるものなどの小分子またはペプチドもしくはペプチド誘導体；米国特許出願公開第２０１５／００７３０２４号に記載されるものなどの１，２，４−オキサジアゾール化合物および誘導体；米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００７３０４２号に記載されるものなどの環状ペプチド模倣化合物および誘導体；米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１２５４９１号に記載されるものなどの環状化合物および誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３３３０１号に記載されるものなどの１，３，４−オキサジアゾールおよび１，３，４−チアジアゾール化合物ならびに誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３６９２７号およびＷＯ２０１５／０４４９０号に記載されるものなどのペプチド系化合物および誘導体、または米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２９４８９８号に記載されるものなどの大環状ペプチド系化合物および誘導体であり得、各々の開示は参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断薬であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断薬のうちの１つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、および「遮断薬」という用語は、本明細書では、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２阻害剤に関して交換可能に使用される。誤解を避けるために、抗体であるＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、多様体、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、プロセス、および方法は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、小分子である。好ましい実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ−１抗体）、Ｆａｂ断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ポリクローナル抗体である。好ましい実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２との結合について競合し、かつ／またはＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２上のエピトープに結合する。実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２との結合について競合し、かつ／またはＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＤ−Ｌ１阻害剤は、化合物が、ＰＤ−Ｌ２受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でＰＤ−Ｌ１と結合または相互作用するという点で、ＰＤ−Ｌ１に対して選択的である。ある特定の実施形態では、化合物は、ＰＤ−Ｌ２受容体に対するより少なくとも約２倍高い濃度、約３倍高い濃度、約５倍高い濃度、約１０倍高い濃度、約２０倍高お濃度、約３０倍高い濃度、約５０倍高い濃度、約１００倍高い濃度、約２００倍高い濃度、約３００倍高い濃度、または約５００倍高い濃度である結合定数でＰＤ−Ｌ１受容体に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＤ−Ｌ２阻害剤は、化合物が、ＰＤ−Ｌ１受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でＰＤ−Ｌ２と結合または相互作用するという点で、ＰＤ−Ｌ２に対して選択的である。ある特定の実施形態では、化合物は、ＰＤ−Ｌ１受容体に対するより少なくとも約２倍高い濃度、約３倍高い濃度、約５倍高い濃度、約１０倍高い濃度、約２０倍高お濃度、約３０倍高い濃度、約５０倍高い濃度、約１００倍高い濃度、約２００倍高い濃度、約３００倍高い濃度、または約５００倍高い濃度である結合定数でＰＤ−Ｌ２受容体に結合する。
いかなる理論にも縛られることなく、腫瘍細胞はＰＤ−Ｌ１を発現し、Ｔ細胞はＰＤ−１を発現すると考えられている。しかしながら、腫瘍細胞によるＰＤ−Ｌ１の発現は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤または遮断薬の有効性には必要とされない。実施形態では、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１を発現する。別の実施形態では、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態では、方法は、ＴＩＬと組み合わせて、本明細書に記載されるものなどのＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを含むことができる。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１抗体とＴＩＬとの組み合わせの投与は、同時または連続的であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、約５０ｐＭ以下のＫＤ、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約３０ｐＭ以下のＫＤで結合するものである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約７．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約８×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約８．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約９×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約９．５×１０５１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２に約１×１０６１／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合するものである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に約２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．１×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．２×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．４×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．５×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−１に約２．６×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に約２．７×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に約３×１０−５１／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合するものである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、約１０ｎｍ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約９ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約８ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約７ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約６ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約５ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約４ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約３ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約２ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、または約１ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１もしくはヒトＰＤ−Ｌ２の結合を遮断するものである。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られるデュルバルマブ（これは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ ｐｌｃ．の子会社であるＭｅｄｉｍｍｕｎｅ，ＬＬＣ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）から市販されている）、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくは多様体である。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、米国特許第８，７７９，１０８号または米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブの臨床的有効性は、Ｐａｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２０１４，６５，１８５−２０２、Ｂｒａｈｍｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１４，３２，５ｓ（補足、要約８０２１）、およびＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｖ．，２０１４，４０，１０５６−６４に記載されている。デュルバルマブの調製および特性は、米国特許第８，７７９，１０８号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブのアミノ酸配列を表５０に示す。デュルバルマブモノクローナル抗体は、２２−９６、２２′′−９６′′、２３′−８９′、２３′′′−８９′′′、１３５′−１９５′、１３５′′′−１９５′′′、１４８−２０４、１４８′′−２０４′′、２１５′−２２４、２１５′′′−２２４′′′、２３０−２３０′′、２３３−２３３′′、２６５−３２５、２６５′′−３２５′′、３７１−４２９、および３７１′′−４２９′におけるジスルフィド結合、ならびにＡｓｎ−３０１およびＡｓｎ−３０１′′におけるＮ−グリコシル化部位を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、配列番号１４７によって与えられる重鎖および配列番号１４８によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４７および配列番号１４８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１４９に示される配列を含み、ＰＤ−Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１５０に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４９および配列番号１５０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４９および配列番号１５０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４９および配列番号１５０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４９および配列番号１５０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１４９および配列番号１５０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１５１、配列番号１５２、および配列番号１５３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１５４、配列番号１５５、および配列番号１５６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、かつ／またはＰＤ−Ｌ１上の同じエピトープに結合する。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ−Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。
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実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏから市販されている）としても知られるアベルマブ、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくは多様体である。アベルマブの調製および特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載されており、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アベルマブのアミノ酸配列を表５１に示す。アベルマブは、２２−９６、１４７−２０３、２６４−３２４、３７０−４２８、２２′′−９６′′、１４７′′−２０３′′、２６４′′−３２４′′、および３７０′′−４２８′′における重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３−Ｃ１０４）；２２′−９０′、１３８′−１９７′、２２′′′−９０′′′、および１３８′′′−１９７′′′における軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３−Ｃ１０４）；２２３−２１５′および２２３′′−２１５′′′における重鎖−軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ５−ＣＬ１２６）；２２９−２２９′′および２３２−２３２′′における重鎖−重鎖内ジスルフィド結合（ｈ１１、ｈ１４）；３００、３００′′におけるＮ−グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４）；フコシル化複合体二分性ＣＨＯ型グリカン；ならびに４５０および４５０′におけるＨ ＣＨＳ Ｋ２ Ｃ末端リジンクリッピングを有する。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、配列番号１５７によって与えられる重鎖および配列番号１５８によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５７および配列番号１５８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アベルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５９に示される配列を含み、ＰＤ−Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１６０に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５９および配列番号１６０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５９および配列番号１６０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５９および配列番号１６０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５９および配列番号１６０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５９および配列番号１６０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１６１、配列番号１６２、および配列番号１６３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１６４、配列番号１６５、および配列番号１６６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、かつ／またはＰＤ−Ｌ１上の同じエピトープに結合する。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アベルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ−Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。
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実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＰＤＬ３２８０ＡまたはＲＧ７４４６としても知られるアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の子会社であるＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．からＴＥＣＥＮＴＲＩＱとして市販されている）、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくは多様体である。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、米国特許第８，２１７，１４９号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６Ａ１号、同第２０１３／００４５２００Ａ１号、同第２０１３／００４５２０１Ａ１号、同第２０１３／００４５２０２Ａ１号、または同第２０１４／００６５１３５Ａ１号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アテゾリズマブの調製および特性は、米国特許第８，２１７，１４９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。アテゾリズマブのアミノ酸配列を表５２に示す。アテゾリズマブは、２２−９６、１４５−２０１、２６２−３２２、３６８−４２６、２２′′−９６′′、１４５′′−２０１′′、２６２′′−３２２′′、および３６８′′−４２６′′における重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３−Ｃ１０４）；２３′−８８′、１３４′−１９４′、２３′′′−８８′′′、および１３４′′′−１９４′′′における軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３−Ｃ１０４）；２２１−２１４′および２２１′′−２１４′′′における重鎖−軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ５−ＣＬ１２６）；２２７−２２７′′および２３０−２３０′′における重鎖−重鎖内ジスルフィド結合（ｈ１１、ｈ１４）；ならびに２９８および２９８′におけるＮ−グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４＞Ａ）を有する。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、配列番号１６７によって与えられる重鎖および配列番号１６８によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列を有する重鎖および軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、多様体、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖および軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６７および配列番号１６８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖および軽鎖を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１６９に示される配列を含み、ＰＤ−Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１７０に示される配列、およびその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６９および配列番号１７０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６９および配列番号１７０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６９および配列番号１７０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６９および配列番号１７０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６９および配列番号１７０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨおよびＶＬ領域を含む。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１７１、配列番号１７２、および配列番号１７３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１７４、配列番号１７５、および配列番号１７６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、かつ／またはＰＤ−Ｌ１上の同じエピトープに結合する。
実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ−Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、および切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡおよび／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。
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実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載されている抗体を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１への結合についてこれらの抗体のうちのいずれかと競合する抗体も含まれる。実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３５５５９としても知られるＭＤＸ−１１０５であり、これは米国特許第７，９４３，７４３号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９４３，７４３号に開示されている抗ＰＤ−Ｌ１抗体から選択される。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＩＮＶＩＶＯＭＡＢ抗ｍ−ＰＤ−Ｌ１クローン１０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ，ＵＳＡ）などの市販のモノクローナル抗体である。実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（ＭＩＨ１）などの市販のモノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、当業者に知られている。
実施形態では、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ ２４Ｆ．１０Ｃ１２マウスＩｇＧ２ａ、κアイソタイプ（カタログ番号３２９６０２ Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＩＧＭＡ抗ＰＤ−Ｌ２抗体（カタログ番号ＳＡＢ３５００３９５，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、または当業者に知られている他の市販のＰＤ−Ｌ２抗体などの市販のモノクローナル抗体である。
２．患者の任意のリンパ球枯渇プレコンディショニング
実施形態では、本発明は、ＴＩＬの集団で癌を治療する方法を含み、患者は、本開示によるＴＩＬの注入の前に非骨髄破壊的化学療法で予め治療される。実施形態では、本発明は、非骨髄破壊的化学療法で予め治療された患者の癌の治療に使用するためのＴＩＬの集団を含む。実施形態では、ＴＩＬの集団は、注入による投与用である。実施形態では、非骨髄破壊的化学療法は、シクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日で２日間（ＴＩＬ注入の２７日前および２６日前）、ならびにフルダラビン２５ｍｇ／ｍ２／ｄで５日間（ＴＩＬ注入の２７日前〜２３日前）である。実施形態では、本開示による非骨髄破壊的化学療法およびＴＩＬ注入（０日目）の後、患者は、生理学的許容範囲まで８時間ごとに７２０，０００ＩＵ／ｋｇで静脈内的にＩＬ−２（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮとして市販されている、アルデスロイキン）の静脈内注入を受ける。ある特定の実施形態では、ＴＩＬの集団は、ＩＬ−２と組み合わせて癌を治療する際に使用するためのものであり、ＩＬ−２は、ＴＩＬの集団の後に投与される。
実験結果は、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性Ｔ細胞および免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）を排除することによって治療効果を高める上で重要な役割を果たすことを示している。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のＴＩＬを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある）を利用する。
一般に、リンパ球枯渇は、フルダラビンまたはシクロホスファミド（活性型はマホスファミドと称される）およびそれらの組み合わせの投与を使用して達成される。かかる方法は、Ｇａｓｓｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１，６０，７５−８５、Ｍｕｒａｎｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．Ｏｎｃｏｌ．，２００６，３，６６８−６８１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８，２６，５２３３−５２３９、およびＤｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５，２３，２３４６−２３５７に記載されており、それらはすべて、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、フルダラビンは、０．５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬのフルダラビンの濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１μｇ／ｍＬのフルダラビンの濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日以上投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日、または４５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２〜７日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で４〜５日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、２５ｍｇ／ｋｇ／日で４〜５日間投与される。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、０．５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの濃度で取得される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、１μｇ／ｍＬの濃度で取得される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日以上投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、１００ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、１７５ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、２２５ｍｇ／ｍ２／日、２５０ｍｇ／ｍ２／日、２７５ｍｇ／ｍ２／日、または３００ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、静脈内に（すなわち、ｉ．ｖ．）投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２〜７日間投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、２５０ｍｇ／ｍ２／日ｉ．ｖ．で４〜５日間投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、２５０ｍｇ／ｍ２／日ｉ．ｖ．で４日間投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、フルダラビンおよびシクロホスファミドを一緒に患者に投与することによって行われる。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２５ｍｇ／ｍ２／日ｉ．ｖ．で投与され、シクロホスファミドは、２５０ｍｇ／ｍ２／日ｉ．ｖ．で４日間にわたって投与される。
実施形態では、リンパ球枯渇は、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間投与することによって行われる。
３．ＩＬ−２レジメン
実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、高用量ＩＬ−２レジメンを含み、高用量ＩＬ−２レジメンは、治療的ＴＩＬ集団の治療有効部分を投与した翌日から静脈内投与されるアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含み、アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくは多様体が、０．０３７ｍｇ／ｋｇまたは０．０４４ｍｇ／ｋｇＩＵ／ｋｇ（患者の体重）の用量で、耐性まで８時間ごとに最大１４用量にわたって１５分間のボーラス静脈内注入を使用して投与される。９日間の休止後、さらに１４用量、合計最大２８用量にわたってこのスケジュールを繰り返すことができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、１、２、３、４、５、または６用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２は、最大６用量の最大投与量で投与される。
実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、デクレッシェンドＩＬ−２レジメンを含む。デクレッシェンドＩＬ−２レジメンは、Ｏ′Ｄａｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９９，１７，２７５２−６１、およびＥｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２０００，８８，１７０３−９に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、デクレッシェンドＩＬ−２レジメンは、６時間にわたって静脈内投与される１８×１０６ＩＵ／ｍ２、続いて１２時間にわたって静脈内投与される１８×１０６ＩＵ／ｍ２、続いて２４時間にわたって静脈内投与される１８×１０６ＩＵ／ｍ２、続いて７２時間かけて静脈内投与される４．５×１０６ＩＵ／ｍ２を含む。この治療サイクルは、２８日ごとに最大４サイクル繰り返すことができる。いくつかの実施形態では、デクレッシェンドＩＬ−２レジメンは、１日目の１８，０００，０００ＩＵ／ｍ２、２日目の９，０００，０００ＩＵ／ｍ２、３日目および４日目の４，５００，０００ＩＵ／ｍ２を含む。
別の実施形態では、ＩＬ−２レジメンは、０．１０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日ごとにペグ化ＩＬ−２を投与することを含む。
本明細書に包含される実施形態は、ここで以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されており、本明細書に包含される開示は、決してこれらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるすべての変形を包含すると解釈されるべきである。
実施例１：ＰＲＥ−ＲＥＰおよびＲＥＰプロセス用の培地の調製
この実施例は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む様々な腫瘍タイプに由来する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の培養を含むプロトコルで使用するための組織培養培地の調製手順を説明する。この培地は、本出願および実施例に記載されているＴＩＬのうちのいずれかの調製に使用することができる。
ＣＭ１の調製
次の試薬を冷蔵から取り出し、３７℃の水浴中で温めた（ＲＰＭＩ１６４０、ヒトＡＢ血清、２００ｍＭ Ｌ−グルタミン）。ろ過される容量に適した０．２μｍフィルターユニットの上部に各成分を添加することによって、以下の表１８に従ってＣＭ１培地を調製した。４℃で保存する。
Figure 2021535128
使用日に、３７℃の水浴中で必要量のＣＭ１を予熱し、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を添加した。
表２５に従って必要に応じた追加の補足。
Figure 2021535128
ＣＭ２の調製
調製したＣＭ１を冷蔵庫から取り出すか、または上記のセクション７．３に従って新鮮なＣＭ１を調製する。ＡＩＭ−Ｖ（登録商標）を冷蔵庫から取り出し、調製したＣＭ１を無菌培地ボトル内で等量のＡＩＭ−Ｖ（登録商標）と混合することによって、必要な量のＣＭ２を調製した。使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２をＣＭ２培地に添加した。使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む十分な量のＣＭ２を作製した。ＣＭ２培地ボトルにその名前、調製者のイニシャル、ろ過／調製日、２週間の有効期限をラベル付けし、組織培養に必要になるまで４℃で保存した。
ＣＭ３の調製
使用が必要な日にＣＭ３を調製した。ＣＭ３は、ＡＩＭ−Ｖ（登録商標）培地と同じであり、使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足した。ＡＩＭ−ＶのボトルまたはバッグにＩＬ−２ストック溶液を直接添加することによって、実験のニーズに十分な量のＣＭ３を調製した。軽く振ってよく混ぜた。ＡＩＭ−Ｖに添加した直後に、ボトルに「３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ−２」のラベルを付ける。過剰のＣＭ３が存在する場合は、培地名、調製者のイニシャル、培地の調製日、およびその有効期限（調製後７日）のラベルを付けたボトル内で４℃で保存した。４℃で７日間保存した後、ＩＬ−２で補足された培地を廃棄した。
ＣＭ４の調製
ＣＭ４は、ＣＭ３と同じであり、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（最終濃度）が追加で補足された。１ＬのＣＭ３ごとに、１０ｍＬの２００ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）を添加した。ＡＩＭ−ＶのボトルまたはバッグにＩＬ−２ストック溶液およびＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）ストック溶液を直接添加することによって、実験のニーズに十分な量のＣＭ４を調製した。軽く振ってよく混ぜた。ＡＩＭ−Ｖに添加した直後に、ボトルに「３０００ＩＬ／ｎｉｌ ＩＬ−２およびＧｌｕｔａＭＡＸ」のラベルを付けた。過剰のＣＭ４が存在する場合は、培地名、「ＧｌｕｔａＭＡＸ」、およびその有効期限（調製後７日）のラベルを付けたボトル内で４℃で保存した。４℃で７日間保存した後、ＩＬ−２で補足された培地を廃棄した。
実施例２：ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１サイトカインカクテルの使用
この実施例は、実施例Ａ〜ＧのＴＩＬプロセスと組み合わせた、追加のＴ細胞成長因子として機能するＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１サイトカインの使用を説明する。
本明細書に記載のプロセスを使用して、ＴＩＬは、培養の開始時に、実験の一方のアームにおいてＩＬ−２の存在下で非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍から、およびもう一方のアームではＩＬ−２の代わりにＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１の組み合わせから成長させることができる。ｐｒｅ−ＲＥＰの完了時に、培養物を拡張、表現型、機能（ＣＤ１０７ａ＋およびＩＦＮ−γ）ならびにＴＣＲ Ｖβレパートリーについて評価した。ＩＬ−１５およびＩＬ−２１は、本明細書の他の場所に記載されており、Ｇｒｕｉｊｌ，ｅｔ ａｌ．，において、ＩＬ−２１は、ＣＤ２７＋ＣＤ２８＋腫瘍浸潤リンパ球の拡張を促進し、細胞傷害能が高く、調節性Ｔ細胞の側副拡張が少ない、Ｓａｎｔｅｇｏｅｔｓ，Ｓ．Ｊ．，Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．，２０１３，１１：３７（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ３６２６７９７／にある）。
結果は、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１処理条件でのＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の両方で、ＩＬ−２のみの条件と比較して増強したＴＩＬ拡張（＞２０％）が観察できることを示し得る。ＩＬ−２のみの培養物と比較して、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１で処理された培養物から取得されたＴＩＬには、歪んだＴＣＲ Ｖβレパートリーを伴う主にＣＤ８＋の集団への歪みがあった。ＩＦＮ−γおよびＣＤ１０７ａは、ＩＬ−２のみで処理されたＴＩＬと比較して、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＩＬ−２１で処理されたＴＩＬで上昇した。
実施例３：γ線を照射した末梢血単核細胞の個々のロットの適格性確認
この実施例は、本明細書に記載の例示的な方法において同種異系フィーダー細胞として使用するためのガンマ線照射末梢単核細胞（ＰＢＭＣ、ＭＮＣとしても知られる）の個々のロットを適格性確認するための新規の簡略化された手順を説明する。
照射された各ＭＮＣフィーダーロットは、個々のドナーから調製した。各ロットまたはドナーは、精製された抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）抗体およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下でＲＥＰ内のＴＩＬを拡張する能力について個々にスクリーニングした。さらに、フィーダー細胞の各ロットを、ＴＩＬを添加せずに試験し、受けたγ線の線量がそれらを複製不全にするのに十分であることを確認した。
背景
ＴＩＬのＲＥＰには、γ線を照射し、成長を停止させたＭＮＣフィーダー細胞が必要であった。フィーダーＭＮＣの膜受容体は、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）抗体に結合し、ＲＥＰフラスコ内のＴＩＬに架橋し、ＴＩＬを刺激して拡張させる。フィーダーロットは、個々のドナーから採取した全血の白血球アフェレーシスから調製した。白血球アフェレーシス産物を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ上で遠心分離に供し、洗浄し、照射し、ＧＭＰ条件下で凍結保存した。
ＴＩＬ療法を受けた患者には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性があるため、生存可能なフィーダー細胞を注入しないことが重要である。したがって、フィーダー細胞は、細胞にγ線を照射することによって成長を停止させ、再培養時に二本鎖ＤＮＡ切断が起こり、ＭＮＣ細胞の細胞生存性が喪失する。
評価基準および実験準備
フィーダーロットを、１）共培養でＴＩＬを１００倍超拡張する能力、および２）複製不全の２つの基準で評価した。
フィーダーロットを、直立したＴ２５組織培養フラスコ内で培養された２つの主要なｐｒｅ−ＲＥＰ ＴＩＬ株を利用して、ｍｉｎｉ−ＲＥＰ形式で試験した。各ＴＩＬ株は、ＲＥＰでの活性化に応答して増殖する能力が独特であるため、フィーダーロットを、２つの異なるＴＩＬ株に対して試験した。対照として、上記の基準を満たすことが歴史的に示されている多くの照射されたＭＮＣフィーダー細胞を、試験ロットと並行して実行した。
１回の実験で試験されたすべてのロットが同等の試験を受けることを保証するために、すべての条件およびすべてのフィーダーロットを試験するために、同じｐｒｅ−ＲＥＰ ＴＩＬ株の十分なストックが利用可能であった。
試験したフィーダー細胞の各ロットについて、Ｐｒｅ−ＲＥＰ ＴＩＬ株番号１（２フラスコ）、Ｐｒｅ−ＲＥＰ ＴＩＬ株番号２（２フラスコ）、およびフィーダー対照（２フラスコ）の合計６つのＴ２５フラスコがあった。ＴＩＬ株番号１および番号２を含有するフラスコは、フィーダーロットがＴＩＬを拡張する能力を評価した。フィーダー対照フラスコは、フィーダーロットの複製不全を評価した。
実験プロトコル
−２／３日目、ＴＩＬ株の解凍
ＣＭ２培地を調製した。３７℃の水浴中でＣＭ２を温めた。３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足された４０ｍＬのＣＭ２を調製した。使用まで保温する。ＩＬ−２を含まない２０ｍＬの予熱したＣＭ２を、使用したＴＩＬ株の名前のラベルが付いた２本の５０ｍＬ円錐管の各々に入れた。ＬＮ２ストレージから２つの指定されたｐｒｅ−ＲＥＰ ＴＩＬ株を取り出し、バイアルを組織培養室に移した。少量の氷が残るまで、３７℃の水浴内の密封されたジッパーストレージバッグ内にバイアルを入れて解凍した。
無菌トランスファーピペットを使用して、バイアルの内容物を、調製され、ラベル付けされた５０ｍＬの円錐管内の２０ｍＬのＣＭ２にすぐに移した。細胞を洗浄するために、ＩＬ−２を含まないＣＭ２を使用して４０ｍＬにする。４００×ＣＦで５分間遠心分離した。上清を吸引し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足された５ｍＬの温かいＣＭ２に再懸濁した。
自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、少量のアリコート（２０μＬ）を重複して取り出した。カウントを記録する。カウントしながら、ＴＩＬ細胞を含む５０ｍＬの円錐管を、加湿した３７℃、５％ ＣＯ２インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。細胞濃度を決定し、ＴＩＬを、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足されたＣＭ２中の１×１０６細胞／ｍＬに希釈した。
ｍｉｎｉ−ＲＥＰの０日目まで、加湿した３７℃のインキュベーターで必要な数のウェルにおいて、２４ウェル組織培養プレートの１ウェルあたり２ｍＬで培養した。混乱および潜在的な相互汚染を避けるために、別々の２４ウェル組織培養プレートで異なるＴＩＬ株を培養した。
０日目、Ｍｉｎｉ−ＲＥＰを開始する
試験されるフィーダーロットの数に十分なＣＭ２培地を調製した。（例えば、一度に４つのフィーダーロットを試験するために、８００ｍＬのＣＭ２培地を調製した）。上記で調製したＣＭ２の一部を分注し、それを細胞の培養のために３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足した。（例えば、一度に４つのフィーダーロットを試験するために、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む５００ｍＬのＣＭ２培地を調製する）。
相互汚染を防ぐために各ＴＩＬ株を別々に操作し、ＴＩＬ培養物を入れた２４ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、ＢＳＣに移した。
無菌トランスファーピペットまたは１００〜１０００μＬピペッターおよびチップを使用して、約１ｍＬの培地を、使用されるＴＩＬの各ウェルから取り出し、２４ウェル組織培養プレートの未使用のウェルに入れる。
新鮮な無菌トランスファーピペットまたは１００〜１０００μＬピペッターおよびチップを使用して、残りの培地をウェル内のＴＩＬと混合して細胞を再懸濁し、次いで細胞懸濁液を、ＴＩＬ名のラベルが付いた５０ｍＬ円錐管に移し、容量を記録した。
予備の培地でウェルを洗浄し、その容量を同じ５０ｍＬ円錐管に移した。細胞を４００×ＣＦで回転させて、細胞ペレットを収集する。培地上清を吸引除去し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含有する２〜５ｍＬのＣＭ２培地に細胞ペレットを再懸濁し（採取したウェルの数およびペレットのサイズに基づいて使用される容量）、容量は、１．３×１０６細胞／ｍＬを超える濃度を保証するのに十分である必要がある。
血清学的ピペットを使用して、細胞懸濁液を完全に混合し、容量を記録した。自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、２００μＬを取り出した。カウントしながら、ＴＩＬ細胞を含む５０ｍＬの円錐管を、加湿した５％ ＣＯ２、３７℃インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。カウントを記録した。
ＴＩＬ細胞を含有する５０ｍＬの円錐管をインキュベーターから取り出し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足された温かいＣＭ２中、１．３×１０６細胞／ｍＬの濃度でそれらの細胞を再懸濁した。キャップを緩めた状態で、５０ｍＬの円錐管をインキュベーターに戻した。
第２のＴＩＬ株について、上記のステップを繰り返した。
ＴＩＬを実験用のＴ２５フラスコに入れる直前に、ＴＩＬを、以下のとおり１：１０に希釈して１．３×１０５細胞／ｍＬの最終濃度にした。
ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ピュア（ＯＫＴ３）作用溶液を調製する
ＯＫＴ３のストック溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を４℃の冷蔵庫から取り出し、ＢＳＣに入れた。ｍｉｎｉ−ＲＥＰの培地では、最終濃度３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３を使用した。
実験の各Ｔ２５フラスコ内の２０ｍＬに対して６００ｎｇのＯＫＴ３が必要であり、これは、２０ｍＬごとに６０μＬの１０μｇ／ｍＬ溶液、または各フィーダーロットについて試験した６つのフラスコすべてで３６０μＬに相当する。
試験した各フィーダーロットについて、１０μｇ／ｍＬの作用濃度に対して１ｍｇ／ｍＬのＯＫＴ３の１：１００希釈液４００μＬを作製した（例えば、４つのフィーダーロットを一度に試験するために、１ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３：１６μＬの１ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３＋３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１．５８４ｍＬのＣＭ２培地の１：１００希釈液１６００μＬを作製する）。
Ｔ２５フラスコを調製する
フィーダー細胞を調製する前に、各フラスコにラベルを付け、フラスコにＣＭ２培地を充填した。フラスコを３７℃の加湿した５％ ＣＯ２インキュベーターに入れ、残りの成分を添加するのを待つ間、培地を保温した。一旦フィーダー細胞が調製されると、各フラスコ内のＣＭ２に成分が添加される。
Figure 2021535128
フィーダー細胞を調製する
このプロトコルについて試験されたロットあたり７８×１０６フィーダー細胞の最小値が必要であった。ＳＤＢＢによって凍結された各１ｍＬバイアルには、凍結時に１００×１０６個の生細胞を有していた。ＬＮ２ストレージからの解凍時の５０％の回収率を仮定すると、ロットあたり少なくとも２つの１ｍＬバイアルのフィーダー細胞を解凍して、各ＲＥＰに推定１００×１０６個の生細胞を与えることが推奨された。代替的に、１．８ｍＬバイアルで供給された場合、１つのバイアルだけで十分なフィーダー細胞が提供された。
フィーダー細胞を解凍する前に、試験される各フィーダーロットにＩＬ−２を含まないおよそ５０ｍＬのＣＭ２を予熱した。指定されたフィーダーロットバイアルをＬＮ２ストレージから取り出し、ジッパーストレージバッグに入れ、氷上に置いた。３７℃の水浴に浸すことによって、閉じたジッパーストレージバッグ内のバイアルを解凍した。ジッパーバッグからバイアルを取り出し、７０％ ＥｔＯＨでスプレーまたはワイプし、バイアルをＢＳＣに移した。
トランスファーピペットを使用して、フィーダーバイアルの内容物を５０ｍＬの円錐管内の３０ｍＬの温かいＣＭ２にすぐに移した。バイアルを少量のＣＭ２で洗浄して、バイアル内の残留細胞をすべて除去した。４００×ＣＦで５分間遠心分離した。上清を吸引し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を加えた４ｍＬの温かいＣＭ２に再懸濁した。自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、２００μＬを取り出した。カウントを記録した。
３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を加えた温かいＣＭ２中、１．３×１０７細胞／ｍＬで細胞を再懸濁した。ＴＩＬ細胞を１．３×１０６細胞／ｍＬから１．３×１０５細胞／ｍＬに希釈した。
共培養物を準備する
ＴＩＬ細胞を１．３×１０６細胞／ｍＬから１．３×１０５細胞／ｍＬに希釈した。４．５ｍＬのＣＭ２培地を１５ｍＬの円錐管に添加した。インキュベーターからＴＩＬ細胞を取り出し、１０ｍＬの血清ピペットを使用して十分に再懸濁した。１．３×１０６細胞／ｍＬのＴＩＬ懸濁液から０．５ｍＬの細胞を取り出し、１５ｍＬの円錐管中の４．５ｍＬの培地に添加した。ＴＩＬストックバイアルをインキュベーターに戻した。よく混ぜた。第２のＴＩＬ株に対して繰り返した。
単一フィーダーロット用に予熱した培地を入れたフラスコを、インキュベーターからＢＳＣに移した。１ｍＬのピペットチップで数回上下にピペッティングすることによってフィーダー細胞を混合し、そのフィーダーロットの各フラスコに１ｍＬ（１．３×１０７細胞）を移した。６０μＬのＯＫＴ３作用ストック（１０μｇ／ｍＬ）を各フラスコに添加した。２つの対照フラスコをインキュベーターに戻した。
各ＴＩＬロットの１ｍＬ（１．３×１０５）を、対応するラベルの付いたＴ２５フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、直立させてインキュベートした。５日目まで乱さなかった。
試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。
５日目、培地変更
３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含むＣＭ２を調製した。各フラスコに１０ｍＬが必要である。１０ｍＬピペットを使用して、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含む１０ｍＬの温かいＣＭ２を各フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、７日目まで直立させてインキュベートした。試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。
７日目、採取
インキュベーターからフラスコを取り出し、ＢＳＣに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意する。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各試験フラスコから１０ｍＬの培地を取り出し、各対照フラスコから１５ｍＬの培地を取り出した。
１０ｍＬの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞カウントのために２００μＬを取り出した。自動セルカウンター装置とともに適切な標準操作手順を使用して、ＴＩＬをカウントした。７日目にカウントを記録した。
試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。
フィーダー対照フラスコは、複製不全について評価し、ＴＩＬを含有するフラスコは、以下の表ＴＴに従って０日目からの倍率拡張について評価した。
７日目、フィーダー対照フラスコの１４日目までの継続
フィーダー対照フラスコの７日目のカウントを完了した後、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を含有する１５ｍＬの新鮮なＣＭ２培地を対照フラスコの各々に添加した。対照フラスコをインキュベーターに戻し、１４日目まで直立位置でインキュベートした。
１４日目、フィーダー対照フラスコの長期非増殖
インキュベーターからフラスコを取り出し、ＢＳＣに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意した。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各対照フラスコからおよそ１７ｍＬの培地を除去した。５ｍＬの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。各フラスコの容量を記録した。
ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞カウントのために２００μＬを取り出した。自動セルカウンター装置とともに適切な標準操作手順を使用して、ＴＩＬをカウントした。カウントを記録した。
試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。
結果および承認基準
結果
γ線照射の線量は、フィーダー細胞を複製不全にするのに十分であった。すべてのロットは、評価基準を満たすことが予想され、また０日目と比較して、ＲＥＰ培養の７日目に残っているフィーダー細胞の総有効数の低減を示した。
すべてのフィーダーロットは、ＲＥＰ培養の７日目までのＴＩＬ成長の１００倍拡張の評価基準を満たすことが予想された。
フィーダー対照フラスコの１４日目のカウントは、７日目に見られた非増殖傾向を継続すると予想された。
承認基準
フィーダー細胞の各ロットについて試験された各複製ＴＩＬ株について、以下の承認基準が満たされた。
承認は、次のように２つあった（以下の表２７に概説される）。
Figure 2021535128
３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体および３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２の存在下で培養した場合、放射線の線量がＭＮＣフィーダー細胞を複製不全にするのに十分であるかどうかを評価した。複製不全は、ＲＥＰの７日目および１４日目の自動細胞カウントによって決定された総生細胞数（ＴＶＣ）によって評価した。
承認基準は、「成長なし」であり、これは、ＲＥＰの０日目に培養された最初の生細胞数から７日目および１４日目に総生細胞数が増加していないことを意味する。
フィーダー細胞がＴＩＬ拡張をサポートする能力を評価した。ＴＩＬ成長は、ＲＥＰの０日目の培養開始からＲＥＰの７日目までの生細胞の倍率拡張の観点から測定された。自動細胞カウントによって評価されるように、７日目に、ＴＩＬ培養物は最低１００倍の拡張を達成した（すなわち、ＲＥＰ０日目に培養された生ＴＩＬ細胞の総数の１００倍以上）。
承認基準を満たさないＭＮＣフィーダーロットの偶発性試験
ＭＮＣフィーダーロットが上で概説された承認基準のうちのいずれかを満たさなかった場合は、以下のステップを実行してロットを再試験し、単純な実験者エラーを原因として除外する。
ロットの衛星試験バイアルが２つ以上残っている場合は、ロットを再試験した。ロットの衛星試験バイアルが１つ残っているか、まったく残っていない場合、上記の承認基準に従ってロットは失敗であった。
適格となるには、問題のロットおよび対照ロットが、上記の承認基準を達成する必要があった。これらの基準を満たすと、ロットは使用のために放出された。
実施例４：γ線を照射した末梢血単核細胞の個々のロットの適格性確認
この実施例は、本明細書に記載の例示的な方法において同種異系フィーダー細胞として使用するためのガンマ線照射末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）の個々のロットを適格性確認するための新規の簡略化された手順を説明する。この実施例は、ＴＩＬの臨床ロットの産生に使用するための照射されたＰＢＭＣ細胞ロットの評価のためのプロトコルを提供する。照射された各ＰＢＭＣロットは、個々のドナーから調製した。１００以上の適格性確認プロトコルの過程で、すべての場合において、ＳＤＢＢ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ）からの照射されたＰＢＭＣロットは、ＲＥＰの７日目にＴＩＬを１００倍より多く拡張することが示された。この修正された適格性確認プロトコルは、ＳＤＢＢから照射されたドナーＰＢＭＣロットに適用することを意図しており、これをさらに試験して、受け取ったガンマ線の線量がそれらを複製不全にするのに十分であることを検証した。１４日間にわたって複製不全が維持されたことが実証されると、ドナーＰＢＭＣロットは、ＴＩＬの臨床ロットを産生するための使用に「適格」であるとみなされた。
背景
ＴＩＬの現在の標準ＲＥＰには、γ線を照射し、成長を停止させたＰＢＭＣが必要であった。ＰＢＭＣの膜受容体は、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）抗体に結合し、培養中のＴＩＬに架橋し、ＴＩＬを刺激して拡張させる。ＰＢＭＣロットは、個々のドナーから採取した全血の白血球アフェレーシスから調製した。白血球アフェレーシス産物を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ上で遠心分離に供し、洗浄し、照射し、ＧＭＰ条件下で凍結保存した。
ＴＩＬ療法を受けた患者には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性があるため、生きたＰＢＭＣを注入しないことが重要である。したがって、ドナーＰＢＭＣは、細胞にγ線を照射することによって成長を停止させ、再培養時に二本鎖ＤＮＡ切断が起こり、ＰＢＭＣの細胞生存性が喪失する。
評価基準
７．２．１照射されたＰＢＭＣロットの評価基準は、それらの複製不全であった。
実験準備
フィーダーロットは、直立したＴ２５組織培養フラスコを使用して、ＴＩＬと共培養するかのようにｍｉｎｉ−ＲＥＰ形式で試験した。対照ロット：７．２．１の基準を満たすことが歴史的に示されている照射ＰＢＭＣの１ロットを、対照として実験ロットと並行して実行した。試験した照射ドナーＰＢＭＣの各ロットについて、複製したフラスコを実行した。
実験プロトコル
０日目
試験されるドナーＰＢＭＣの各ロット用に約９０ｍＬのＣＭ２培地を調製した。ＣＭ２を３７℃の水浴中で保温した。６×１０６ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２のアリコートを解凍した。ＣＭ２培地をＢＳＣに戻し、フードに入れる前に７０％ ＥｔＯＨで拭いた。試験したＰＢＭＣの各ロットについて、約６０ｍＬのＣＭ２を別々の無菌ボトルに取り出した。解凍した６×１０６ＩＵ／ｍＬストック溶液からのＩＬ−２をこの培地に添加し、最終濃度を３０００ＩＵ／ｍＬにした。このボトルに「ＣＭ２／ＩＬ２」（または同様のもの）のラベルを付けて、補足されていないＣＭ２と区別した。
ＯＫＴ３を調製する
抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）のストック溶液を４℃の冷蔵庫から取り出し、ＢＳＣに入れた。ｍｉｎｉ−ＲＥＰの培地では、最終濃度３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３を使用した。１ｍｇ／ｍＬのストック溶液から抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）の１０μｇ／ｍＬの作用溶液を調製した。必要になるまで冷蔵庫に入れた。
試験した各ＰＢＭＣロットについて、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）ストックの１：１００希釈液１５０μＬを調製する。例えば、一度に４つのＰＢＭＣロットを試験するために、６μＬの１ｍｇ／ｍＬストック溶液を３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２で補足された５９４μＬのＣＭ２に添加することによって、６００μＬの１０μｇ／ｍＬ抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を調製する。
フラスコを調製する
フラスコあたり１９ｍＬのＣＭ２／ＩＬ−２をラベル付けされたＴ２５フラスコに添加し、細胞を調製しながら３７℃の加湿した５％ ＣＯ２インキュベーターにフラスコを入れた。
照射ＰＢＭＣを調製する
ＬＮ２ストレージから試験されるＰＢＭＣロットのバイアルを回収した。これらを−８０℃に置くか、または解凍する前にドライアイス上で保持した。解凍される各ロットについて、３０ｍＬのＣＭ２（ＩＬ−２補足なし）を、５０ｍＬの円錐管に入れた。解凍されるＰＢＭＣの異なるロット番号で各管にラベルを付けた。管にキャップをしっかりと閉め、使用する前に３７℃の水浴に入れた。必要に応じて、５０ｍＬの円錐管をＢＳＣに戻し、フードに入れる前に７０％ ＥｔＯＨで拭いた。
バイアルＰＢＭＣを冷蔵から取り出し、３７℃の水浴中のフローティングチューブラックに入れて解凍する。少量の氷がバイアルに残るまで解凍を進めた。無菌トランスファーピペットを使用して、バイアルの内容物を、５０ｍＬの円錐管内の３０ｍＬのＣＭ２にすぐに移した。約１ｍＬの培地を管さら取り出してバイアルをすすぎ、すすぎ液を５０ｍＬの円錐管に戻した。キャップをしっかりと閉め、穏やかに回転させて細胞を洗浄した。
４００×ｇで５分間、室温で遠心分離した。上清を吸引し、１０００μＬのピペットチップを使用して、細胞ペレットを１ｍＬの温かいＣＭ２／ＩＬ−２に再懸濁した。代替的に、培地を添加する前に、キャップをした管を空のチューブラックに沿って引きずることにより、細胞ペレットを再懸濁した。細胞ペレットを再懸濁した後、ＣＭ２／ＩＬ−２培地を使用して容量を４ｍＬにした。容量を記録した。
自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、少量のアリコート（例えば、１００μＬ）を取り出した。特定の自動セルカウンターＳＯＰに従って、重複してカウントを行った。細胞のカウントを行う前に、ＰＢＭＣの希釈を行う必要があった可能性が最も高い。推奨される開始希釈は１：１０であったが、これは使用するセルカウンターのタイプによって異なっていた。カウントを記録した。
ＣＭ２／ＩＬ−２培地を使用して、１．３×１０７細胞／ｍＬのＰＢＭＣの濃度を調整した。穏やかに回転させるか、または血清ピペットを使用して上下に穏やかに吸引することによってよく混ぜた。
培養フラスコを準備する
２つのラベル付きＴ２５フラスコを、組織培養インキュベーターからＢＳＣに戻した。抗ＣＤ３／ＯＫＴ３の１０μｇ／ｍＬバイアルをＢＳＣに戻した。各フラスコに１ｍＬの１．３×１０７ＰＢＭＣ細胞懸濁液を添加した。各フラスコに６０μＬの１０μｇ／ｍＬ抗ＣＤ３／ＯＫＴ３を添加した。キャップをしたフラスコを組織培養インキュベーターに戻し、乱すことなく１４日間成長させた。次のロットで必要になるまで、抗ＣＤ３／ＯＫＴ３バイアルを冷蔵庫に戻した。評価されるＰＢＭＣの各ロットについて繰り返した。
１４日目、ＰＢＭＣの非増殖の測定
複製したＴ２５フラスコをＢＳＣに戻した。各フラスコについて、新鮮な１０ｍＬの血清ピペットを使用して、各フラスコから約１７ｍＬを取り出し、残りの培地を注意深く引き上げて、フラスコに残っている容量を測定した。容量を記録した。
同じ血清ピペットを使用して上下にピペッティングすることによって、試料をよく混ぜた。
カウントのために各フラスコから２００μＬの試料を取り出した。自動セルカウンターを使用して細胞をカウントした。評価されているＰＢＭＣの各ロットについて、ステップ７．４．２６〜７．４．３１を繰り返した。
結果および承認基準
結果
γ線照射の線量は、フィーダー細胞を複製不全にするのに十分であると予想された。すべてのロットは、評価基準を満たすことが予想され、０日目と比較して、ＲＥＰ培養の１４日目に残っているフィーダー細胞の総有効数の低減を示した。
承認基準
試験された各照射ドナーＰＢＭＣロットについて、以下の承認基準が満たされた：「成長なし」−１４日目の生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目に培養された最初の生細胞数よりも少なかったことを意味する。
承認基準を満たさないＰＢＭＣロットの偶発性試験
照射ドナーＰＢＭＣロットが上記の承認基準を満たさなかった場合は、以下のステップを実行してロットを再試験し、単純な実験者エラーを失敗の原因として除外した。ロットの衛星試験バイアルが２つ以上残っている場合は、ロットを再試験した。ロットの衛星バイアルが１つ残っているか、まったく残っていない場合は、上記の承認基準に従ってロットが失敗した。
適格となるために、偶発性試験を通過するＰＢＭＣロットは、対照ロットおよび問題のロットの両方の複製がともに承認基準を達成した。この基準を満たすと、ロットは使用のために放出された。
実施例５：ＩＬ−２ストック溶液（ＣＥＬＬＧＥＮＩＸ）の調製
この実施例は、精製され、凍結乾燥された組み換えヒトインターロイキン−２を、本出願および実施例に記載されるものすべてを含む、さらなる組織培養プロトコルでの使用に適したストック試料に溶解するプロセスを記載し、ｒｈＩＬ−２を使用することを伴うものを含む。
手順
０．２％酢酸溶液（ＨＡｃ）を調製した。２９ｍＬの無菌水を、５０ｍＬの円錐管に移した。５０ｍＬの円錐管に１ｍＬの１Ｎ酢酸を添加した。管を２〜３回反転させてよく混ぜた。Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐフィルターを使用したろ過によって、ＨＡｃ溶液を滅菌した
ＰＢＳ中の１％ ＨＳＡを調製する。４ｍＬの２５％ ＨＳＡストック溶液を、１５０ｍＬの無菌フィルターユニット内の９６ｍＬのＰＢＳに添加した。溶液をろ過した。４℃で保存した。調製したｒｈＩＬ−２の各バイアルについて、フォームに記入する。
ｒｈＩＬ−２ストック溶液を調製した（６×１０６ＩＵ／ｍＬ最終濃度）。ｒｈＩＬ−２の各ロットは異なり、製造元の分析証明書（ＣＯＡ）に、１）バイアルあたりのｒｈＩＬ−２の質量（ｍｇ）、２）ｒｈＩＬ−２の比活性（ＩＵ／ｍｇ）、および３）推奨される０．２％ ＨＡｃ再構成量（ｍＬ）などの必要な情報が見出された。
以下の式を使用して、ｒｈＩＬ−２ロットに必要な１％ ＨＳＡの容量を計算した。
Figure 2021535128
例えば、ＣｅｌｌＧｅｎｉｘのｒｈＩＬ−２ロット１０２００１２１ ＣＯＡによると、１ｍｇバイアルの比活性は、２５×１０６ＩＵ／ｍｇである。ｒｈＩＬ−２を２ｍＬの０．２％ ＨＡｃ中で再構成することが推奨される。
Figure 2021535128
ＩＬ−２バイアルのゴム栓をアルコールワイプで拭いた。３ｍＬ注射器に取り付けられた１６Ｇ針を使用して、推奨容量の０．２％ ＨＡｃをバイアルに注入した。針を抜くときに栓が外れないように注意した。バイアルを３回反転させ、すべての粉末が溶解するまで回転させた。栓を慎重に取り外し、アルコールワイプの上に置いた。計算された容量の１％ ＨＳＡをバイアルに添加した。
ｒｈＩＬ−２溶液の保存。短期間保存（＜７２時間）の場合、バイアルを４℃で保存した。長期保存（＞７２時間）の場合、バイアルを小容量に分注し、使用する準備ができるまで−２０℃でクライオバイアル中で保存した。凍結／解凍サイクルを回避した。調製日から６ヶ月後に有効期限が切れた。Ｒｈ−ＩＬ−２ラベルには、ベンダー番号およびカタログ番号、ロット番号、有効期限、オペレーターのイニシャル、濃度、ならびにアリコートの容量が含まれていた。
実施例６：凍結保存プロセス
この実施例では、ＣｒｙｏＭｅｄ冷却速度制御フリーザー、モデル７４５４（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、実施例Ｇで説明した簡略化されたクローズド手順で調製されたＴＩＬの凍結保存プロセス方法について説明する。
使用した機器は次のとおりであった：アルミカセットホルダーラック（ＣＳ７５０フリーザーバッグに対応）、７５０ｍＬバッグ用低温保存カセット、低圧（２２ｐｓｉ）液体窒素タンク、冷蔵庫、熱電対センサー（バッグ用リボンタイプ）、およびＣｒｙｏＳｔｏｒｅ ＣＳ７５０冷凍バッグ（ＯｒｉＧｅｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
凍結プロセスは、核形成から−２０℃まで０．５℃の速度、および−８０℃の終了温度まで毎分１℃の冷却速度を提供する。プログラムパラメータは次のとおりである：ステップ１−４℃で待機する、ステップ２：−４℃まで１．０℃／分（試料温度）、ステップ３：−４５℃まで２０．０℃／分（チャンバー温度）、ステップ４：−１０．０℃１０℃．０℃／分（チャンバー温度）、ステップ５：−２０℃まで０．５℃／分（チャンバー温度）、およびステップ６：−８０℃まで１．０℃／分（試料温度）。
実施例７：抗ＰＤ−１抗体によるＮＳＣＬＣ治療
患者集団：
治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後であるが抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブ
治療スケジュール：
腫瘍断片は、最大４用量の抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１で治療し、原発性不応性の患者を、凍結保存され、即時進行の際に使用する準備ができているＴＩＬ製品で治療する。原発性不応性の患者は、２用量後に進行した可能性がある。
再発患者はまた、進行時に治療することもできる（タイミングは、数ヶ月から数年後まで異なる場合がある）。
最大６用量の全強ＩＬ−２。
前述の同じ製造順列でさらに検討する患者集団：
●治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後であるが抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブ。
●治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後であるが、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブ。
●治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後であるが、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、および／またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１ナイーブ。（例えば、横断面または冠状面のいずれかで測定された最大腫瘍径が７ｃｍを超えるか、またはＣＴで短軸径が２０ｍｍ以上の膨れたリンパ節が巨大腫瘤として定義された場合、巨大腫瘤病変が示される。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｅｊｉｍａ，Ｊ．，Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，４５（１１）：１０５０−１０５４１ ２０１５を参照）。
実施例８：固形腫瘍を有する患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第２相多施設研究
研究設計
概要
この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたＴＩＬを使用して、ＴＩＬをペムブロリズマブと組み合わせて、またはＴＩＬを単剤療法として使用してＡＣＴを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第２相試験について説明する。
目的：
一次：
治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ １．１）を使用して、客観的奏効率（ＯＲＲ）によって決定されるように、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、もしくはＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己ＴＩＬの有効性、またはＣＰＩによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性（ｒ／ｒ）ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの有効性を評価すること。
グレード３以上の治療に起因する有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率によって測定される、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、およびＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬの安全性プロファイル、またはｒ／ｒ ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの安全性プロファイルを特徴付けること。
二次：
完全奏効（ＣＲ）率、奏効期間（ＤＯＲ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、治験責任医師によって評価されたＲＥＣＩＳＴ １．１を使用した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、および全生存期間（ＯＳ）を使用して、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、およびＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己ＴＩＬの有効性、またはｒ／ｒ ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの有効性をさらに評価すること。
コホート：
コホート１Ａ：免疫療法を除く３つ以下の全身療法を伴う、切除不能なステージＩＩＩＣもしくはステージＩＶ、またはＭＭの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート２Ａ：免疫療法を除く３つ以下の全身療法を伴う、進行性、再発性、または転移性のＨＮＳＣＣ（例えば、ステージＴ１Ｎ１−Ｎ２Ｂ、Ｔ２−４Ｎ０−Ｎ２ｂ）の患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最新の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート３Ａ：免疫療法を除く３つ以下の全身療法を伴う、局所進行性または転移性（ステージＩＩＩ〜ＩＶ）ＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最新の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート３Ｂ：免疫療法を除く３つ以下の全身療法の一部として、ＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１）による全身療法を以前に受けたことがあるステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ患者における単剤としてのＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
有効な標的療法が利用可能な癌遺伝子駆動腫瘍を有するコホート３Ａおよび３Ｂ（ＮＳＣＬＣ）の患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていなければならない。
すべての患者は、シクロホスファミドおよびフルダラビンからなる非骨髄破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ−ＬＤ）プレコンディショニングレジメンの前に、自己凍結保存ＴＩＬ療法（コホートの割り当てに応じて、ペムブロリズマブの有無にかかわらず）を受けた。ＴＩＬ注入後、最大６回のＩＶインターロイキン−２（ＩＬ−２）の最大用量が投与された。
以下の一般的な研究期間は、特に明記されていない限り、４つのコホートすべてで行われた。
スクリーニングおよび腫瘍切除：研究登録から最大４週間（２８日）、ＴＩＬ製品の製造：腫瘍切除からおよそ２２日以内、および以下に論じられる治療期間。
治療期間（コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａ）：ＮＭＡ−ＬＤ（７日）、ＴＩＬ注入（１日）、続いてＩＬ−２投与（１〜４日）を含む最大２年。患者は、ＴＩＬ産生のための腫瘍切除およびベースライン走査の完了後であるが、ＮＭＡ−ＬＤレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ−２の完了後以降であり、その後２年（２４ヶ月）以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までＱ３Ｗ±３日間継続する。治療終了（ＥＯＴ）訪問は、ペムブロリズマブの最後の用量後３０日以内に起こった。該当する場合、この訪問は評価終了（ＥＯＡ）訪問と組み合わされ得る（例えば、ペムブロリズマブの中止は、疾患の進行時または新しい抗癌療法の開始時に起こった）。
治療期間（コホート３Ｂ）：ＮＭＡ−ＬＤ（７日）、ＴＩＬ、注入（１日）、続いてＩＬ−２投与（１〜４日）を含む最大１２日。ＥＯＴ訪問は、患者がＩＬ−２の最後の用量を受けたときに起こった。ＥＯＴ訪問は、治療中止後３０日以内に行われ、評価期間中にこの間隔内に起こる予定の任意の訪問と組み合わせることができる。
評価期間：０日目のＴＩＬ注入後に開始し、疾患の進行時に終了し、新しい抗癌療法の開始、研究評価への同意の部分的撤回、または５年（６０ヶ月）のいずれか早い方。患者が疾患の進行に達するか、または新しい抗癌療法を開始すると、評価終了（ＥＯＡ）訪問が起こった。
本明細書に記載されるように調製されたＴＩＬを用いたＴＩＬ自己療法は、以下のステップから構成されていた。
１．ＴＩＬ細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除。
２．中央の適正製造基準（ＧＭＰ）施設で産生されたＴＩＬ製品。
３．７日間のＮＭＡ−ＬＤプレコンディショニングレジメン。
４．コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａ：患者は、ＴＩＬ産生のために腫瘍切除およびベースライン走査の完了後であるが、ＮＭＡ−ＬＤレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ−２の完了後以降であり、その後Ｑ３Ｗ±３日継続する。
５．自己ＴＩＬ製品の注入（０日目）、ならびに
６．最大６用量までのＩＶ ＩＬ−２投与。
コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａでは、ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ−２の完了後以降であり、その後２年（２４ヶ月）以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までＱ３Ｗ±３日間継続する。
コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａのフローチャートは、図７に見出すことができる。コホート３Ｂのフローチャートは、図８に見出すことができる。患者は、腫瘍の適応によって適切なコホートに割り当てられた。
ＴＩＬ療法＋ペムブロリズマブ（コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａ）
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は１つ以上の腫瘍病変を切除し、ＴＩＬ産生のために中央製造施設に送られた。
次に、ＮＭＡ−ＬＤレジメンは模倣され、−７日目および−６日目にメスナ（部位ごとの標準治療またはＵＳＰＩ／ＳｍＰＣ）を含む２日間のＩＶシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）、ならびにその後５日間のＩＶフルダラビン（２５ｍｇ／ｍ２：−５日目〜−１日目）で構成された。
コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａの患者は、ＴＩＬ産生のために腫瘍切除の完了後にペムブロリズマブの単回注入を受け、ＮＭＡ−ＬＤレジメンの開始前にベースライン走査を受けた。６００，０００ＩＵ／ｋｇの用量でＩＶでのＩＬ−２投与は、０日目のＴＩＬ注入の完了の３時間後、ただし２４時間後までに開始された。追加のＩＬ−２投与は、最大６用量まで、およそ８〜１２時間ごとに行われる。ペムブロリズマブの第２の用量は、ＩＬ−２の完了後以降であった。患者は、第２のペムブロリズマブ投与前に、すべてのＩＬ−２関連毒性（グレード≦２）から回復している必要がある。ペムブロリズマブは、その後２年以内（２４ヶ月）または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方まで、Ｑ３Ｗ±３日間継続する。
単剤としてのＴＩＬ療法（コホート３Ｂ）
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は１つ以上の腫瘍病変を切除し、ＴＩＬ産生のために中央製造施設に送られた。
次に、ＮＭＡ−ＬＤレジメンは、−７日目および−６日目にメスナ（部位ごとの標準治療またはＵＳＰＩ／ＳｍＰＣ）を含む２日間のＩＶシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）、ならびにその後５日間のＩＶフルダラビン（２５ｍｇ／ｍ２：−５日目〜−１日目）で構成された。
腫瘍由来の自己ＴＩＬ製品の注入は、フルダラビンの最後の用量から２４時間以内に起こった。６００，０００ＩＵ／ｋｇの用量でＩＶでのＩＬ−２投与は、ＴＩＬ注入の完了後３時間後、ただし２４時間後までに開始された可能性がある。
追加のＩＬ−２投与は、最大６用量まで、およそ８〜１２時間ごとに行われた。
腫瘍浸潤リンパ球の産生および拡張
ＴＩＬ自己細胞製品は、患者の腫瘍／病変に由来する生存可能な細胞傷害性Ｔリンパ球で構成されており、中央のＧＭＰ施設でエクスビボで製造される。例えば、ＴＩＬ産生プロセスを示す例示的なフロー図を図９に示す。
ＴＩＬ製造プロセスは、個々の患者ごとに直径１．５ｃｍ以上の原発性または続発性転移性腫瘍病変（複数可）を外科的に切除した後に臨床現場で開始された。様々な解剖学的位置からの複数の腫瘍病変を切除して、腫瘍組織の全凝集体をまとめることができるが、輸送ボトルに存在する生体保存培地の量が限られているため、凝集体は、直径４．０ｃｍ、または重量１０ｇを超えてはならない。
腫瘍病変（複数可）が生体保存輸送ボトルに入れられると、それは中央のＧＭＰ製造施設への速達宅配便を使用して２℃〜８℃で出荷される。到着時に、腫瘍標本（複数可）を断片に剥離し、その後、ヒト組み換えＩＬ−２を用いたプレ急速拡張プロトコル（Ｐｒｅ−ＲＥＰ）において約１１日間培養した。
次いで、これらのｐｒｅ−ＲＥＰ細胞を、ＩＬ−２、ＯＫＴ３（［ムロモナブ−ＣＤ３］としても知られるヒトＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体）、およびフィーダー細胞としての照射した同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の存在下で１１日間、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）を使用してさらに拡張した。
次いで、拡張した細胞を採取し、洗浄し、配合し、凍結保存し、速達宅配便で臨床現場に出荷した。ＴＩＬ細胞製品の剤形は、ＴＩＬが由来する患者への注入の準備ができている凍結保存された自己の「生細胞懸濁液」であった。患者は、製品仕様あたり１×１０９〜１５０×１０９生細胞の間に含まれる、製造および放出された製品の全用量を受容することとした。臨床経験は、客観的な腫瘍応答がこの用量範囲全体で達成されたことを示し、これも安全であることが示されている（Ｒａｄｖａｎｙｉ Ｌ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２；１８（２４）：６７５８−７０）。製品の全用量は、最大４つの注入バッグで提供された。
ＴＩＬ細胞製品を受容する患者の準備
この研究で使用されたＮＭＡ−ＬＤプレコンディショニングレジメン（すなわち、２日間のシクロホスファミドおよびメスナ、続いて５日間のフルダラビン）は、国立癌研究所によって開発および試験された方法に基づいていた（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｓ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１；１７（１３）：４５５０−７、Ｒａｄｖａｎｙｉ Ｌ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２；１８（２４）：６７５８−７０、Ｄｕｄｌｅｙ Ｍ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２００８；２６（３２）：５２３３−９、Ｐｉｌｏｎ−Ｔｈｏｍａｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１２；３５（８）：６１５−２０、Ｄｕｄｌｅｙ Ｍ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２００５；２３（１０）：２３４６−５７、およびＤｕｄｌｅｙ Ｍ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２；２９８（５５９４）：８５０−４）。７日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にＴＩＬ細胞製品を注入した。
ＴＩＬ注入後、８〜１２時間ごとにＩＶ ＩＬ−２（６００，０００ＩＵ／ｋｇ）を投与し、最初の用量は、ＴＩＬ注入の完了後３〜２４時間の間に投与し、最大６回まで継続した。施設の基準に従って、ＩＬ−２の用量は、実際の体重に基づいて計算することができる。
患者集団の選択
コホート１Ａ：
患者は、切除不能なＭＭの確定診断を有した（ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶ、米国癌合同委員会［ＡＪＣＣ］病期分類システムに従って組織学的に確認された）。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。ＢＲＡＦ突然変異が陽性の場合、患者は、以前にＢＲＡＦ／ＭＥＫ標的療法を受けていた可能性があった。
コホート２Ａ：
患者は、進行性、再発性、および／または転移性のＨＮＳＣＣを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
コホート３Ａ：
患者は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）の確定診断を有した。有効な標的療法が利用可能な癌遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていた。
コホート３Ｂ：
患者は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）の確定診断を有しており、以前にＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１）による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能な癌遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていた。
コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａの免疫療法を除き、すべての患者は、最大３つの全身性抗癌療法を受けていた（以下の包含基準を参照）。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が確認されていた。
包含基準
患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしている必要がある。
１．すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を有した。
○切除不能または転移性黒色腫（コホート１Ａ）
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌（コホート２Ａ）
○ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）（コホート３Ａおよび３Ｂ）。
２．コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａのみ：患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート１Ａ、２Ａ、および３Ａは、最大３つの全身性抗癌療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下のとおりである。
○コホート１Ａ：切除不能または転移性黒色腫（ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶ）を有する患者。ＢＲＡＦ突然変異陽性の場合、患者は、ＢＲＡＦ阻害剤を投与されている可能性がある。
○コホート２Ａ：切除不能または転移性ＨＮＳＣＣの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
○コホート３Ａ：ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌）を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で３つ以下の以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から１２ヶ月以内に疾患が進行した場合、１つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある突然変異を有する既知の癌遺伝子ドライバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ）を有する患者は、少なくとも１つの標的療法の後に進行したに違いない。
３．コホート３Ｂのみ：ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌）を有し、３つ以下の全身療法の一部として、ＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１）による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から１２ヶ月以内に疾患が進行していた場合、１つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある突然変異を有する既知の癌遺伝子ドライバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ）を有する患者は、少なくとも１つの標的療法の後に進行したに違いない。
４．患者は、ＴＩＬ治験薬（ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ）産生のために、切除後に最少直径１．５ｃｍの切除可能な病変（または凝集病変）を少なくとも１つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から取得することが奨励された。
○ＴＩＬ生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にＸ線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
５．患者は、ＴＩＬ製造の腫瘍切除の後に、標準かつ周知のＲＥＣＩＳＴ １．１ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた（例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８−２４７（２００９）を参照、ｗｗｗ．ｐｒｏｊｅｃｔ．ｅｏｒｔｃ．ｏｒｇ／ｒｅｃｉｓｔ／ｗｐ−ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕｐｌｏａｄｓ／ｓｉｔｅｓ／４／２０１５／０３／ＲＥＣＩＳＴＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ｐｄｆでも入手可能）。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○ＲＥＣＩＳＴごとに依然として測定可能なＴＩＬ生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
６．患者は、同意時に１８歳以上であった。
７．患者の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ、ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスは０または１であり、推定平均余命は３ヶ月以上であった。
８．出産の可能性のある患者または出産の可能性のあるパートナーを持つ患者は、治療中に非常に効果的な承認された避妊方法を実践する意志があり、すべてのプロトコル関連療法を受けた後１２ヶ月間継続する必要があった（注記：生殖能力のある女性は、治療中、およびＩＬ−２の最後の用量後１２ヶ月間またはペムブロリズマブの最後の用量後４ヶ月のいずれか遅い方で、効果的な避妊を使用することとした）。男性は、研究中または治療中止後１２ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。
９．患者は、以下の血液学的パラメーターを有していた：
○絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１０００／ｍｍ３、
○ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ、
○血小板数≧１００，０００／ｍｍ３。
１０．患者は、適正な臓器機能を有していた：
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）／血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）／ＳＧＯＴが、正常上限（ＵＬＮ）の３倍以下、肝転移がＵＬＮの５倍以下の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧４０ｍＬ／分。
○総ビリルビン≦２ｍｇ／ｄＬ。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦３ｍｇ／ｄＬでなければならない。
１１．患者は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ１およびＨＩＶ２）に対して血清陰性であった。Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎コア抗体（抗ＨＢｃ）、または急性もしくは慢性感染を示すＣ型肝炎ウイルス（抗ＨＣＶ）の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくウイルス量およびある特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。
１２．患者は、最初の試験治療（すなわち、ＮＭＡ−ＬＤまたはペムブロリズマブの開始）の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗癌療法（複数可）からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法：ウォッシュアウトが治療の開始の最低１４日前であれば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＥＫ、ＢＲＡＦ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１または他の標的薬剤（例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ロラチニブ）による以前の標的療法が許可された。
○化学療法：ウォッシュアウトが治療の開始の最低２１日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法／化学放射線療法が許可された。
○コホート３Ｂのみの免疫療法、抗ＰＤ−１、他のｍＡｂ、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、ＮＭＡ−ＬＤの開始前２１日以上のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法：脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード１またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された
○ＲＥＣＩＳＴ １．１を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変（複数可）は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない（上記の包含基準を参照）。
○手術／事前に計画された手順：創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも１４日が経過している場合（主要な手術手順の場合）、以前の外科的手順（複数可）が許可された。
１３．患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗癌治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）からグレード１以下（有害事象の一般用語基準［ＣＴＣＡＥ］による）に回復していた。
１４．以前の抗癌療法から安定したグレード２以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。
１５．ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート１Ａ、２Ａ、および３Ａの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート３Ｂの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤ＣＰＩ（複数可）による以前の治療の結果として、グレード２以上の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも６ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。
１６．患者は、保護された健康情報の使用および開示について、書面による承認を提供していなければならない。
除外基準
以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。
１．ブドウ膜／眼起源の黒色腫を有する患者
２．過去２０年以内に非骨髄破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。（注記：この基準は、以前のＴＩＬ治療で以前のＮＭＡ−ＬＤレジメンがあったことを除いて、ＴＩＬによる再治療を受けている患者に適用可能であった。）
３．症候性および／または未治療の脳転移を有する患者。
○脳転移が確実に治療された患者は、
治療の開始前に患者が２週間以上にわたって臨床的に安定し、治療後の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による新たな脳病変がなく、患者が継続的なコルチコステロイド治療を必要としない場合、医療モニターと話し合った後に登録が検討される。
４．登録から２１日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。
５．妊娠中または授乳中の患者。
６．治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患（複数可）、例えば全身性感染症（例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症）、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。
７．患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害（肺炎、炎症性腸疾患［例えば、大腸炎もしくはクローン病］、憩室炎［憩室症を除く］、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群［多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎など］）を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症（例えば、橋本症候群に続く）が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。
８．治療の開始前２８日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。
９．任意の形態の原発性免疫不全症（重症複合免疫不全症［ＳＣＩＤ］および後天性免疫不全症候群［ＡＩＤＳ］など）を有していた患者。
１０．治験薬（ｓｔｕｄｙ ｄｒｕｇ）の任意の成分に対する過敏症の病歴を有する患者。ＴＩＬは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、ＴＩＬ製品製剤の任意の成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○・ＮＭＡ−ＬＤ（シクロホスファミド、メスナ、およびフルダラビン）
○・Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、アルデスロイキン、ＩＬ−２
○・アミノグリコシド系抗生物質（すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン［ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く］）
○・ジメチルスルホキシドを含むＴＩＬ製品製剤の任意の成分
○［ＤＭＳＯ］、ＨＳＡ、ＩＬ−２、およびデキストラン−４０
○・ペムブロリズマブ
１１．左心室駆出率（ＬＶＥＦ）が４５％未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスＩＩ以上の患者。６０歳以上の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性および／もしくは心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○スポンサーの医療モニターの承認を得て、駆出率および心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。
１２．閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の６０％以下のＦＥＶ１（１秒の強制呼気量）が記録されている患者。
○・患者が上気道の解剖学的構造の異常（すなわち、気管切開）のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、６分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢および性別に対して予測される少なくとも８０％の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者（ＳｐＯ２＜９０％）は除外される。
１３．過去３年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者（治療を必要としなかった、または１年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、ＤＣＩＳ、ＬＣＩＳ、前立腺癌グリーソンスコア≦６または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった）。
１４．治療の開始から２１日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。
研究エンドポイントおよび計画された分析
一次エンドポイントおよび二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。
一次エンドポイント：
ＯＲＲは、有効性分析セットの中でＲＥＣＩＳＴ１．１に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたＰＲまたはＣＲのいずれかを達成した患者の割合として定義された。
客観的反応を各疾患評価ごとに評価し、ＯＲＲは、対応する両側９０％ ＣＩを用いて二項比率として表された。各コホートの一次分析は、評価期間の早期に進行／期限切れまたは中止されない限り、コホートごとに治療を受けたすべての患者が１２ヶ月間追跡される機会があるときに行った。
安全性一次エンドポイントは、各コホート内のグレード３以上のＴＥＡＥ発生率によって測定され、対応する両側９０％ ＣＩの二項比率として表された。
二次エンドポイント：
有効性：
二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
治験責任医師によって評価された確認済みＣＲを達成した応答者に基づくＣＲ率。ＤＣＲは、確認されたＰＲ／ＣＲまたは持続的なＳＤ（少なくとも６週間）を達成した患者数の合計を、有効性分析セットの患者数で割り、１００％を掛けたものとして導き出された。ＣＲ率およびＤＣＲは、点推定およびその両側９０％ ＣＩを使用して要約した。
ＤＯＲは、客観的な応答を達成した患者の間で定義された。再発性もしくは進行性疾患が客観的に記録された最初の日付、またはその後の抗癌療法の受容もしくは患者の死亡（最初に記録された方）まで、初回応答（ＰＲ／ＣＲ）基準が満たされていることから測定した。ＰＤを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点より前に死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られる。
ＰＦＳは、リンパ球枯渇からＰＤまでの時間（月単位）、または何らかの原因による死亡のいずれか早い方の事象として定義された。ＰＤを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点で死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られた。
ＯＳは、リンパ球枯渇の時点から何らかの原因による死亡までの時間（月単位）として定義された。データカットまたは最終的なデータベースロックの時点までに死亡していない患者は、既知の生存状態の最終日に事象時間が打ち切られた。
ＤＯＲ、ＰＦＳ、およびＯＳは、右側打ち切りに供された。カプラン・マイヤー法を使用して、事象までの時間の有効性エンドポイントを要約する。腫瘍評価のベースラインデータは、すべてのコホートのリンパ球枯渇前の最後の走査であった。
上記の有効性パラメーターは、ベースラインの疾患特徴：ＢＲＡＦステータス（コホート１Ａのみ）、ＨＰＶステータス（コホート２Ａのみ）、扁平上皮または非扁平上皮肺疾患（コホート３Ａおよび３Ｂのみ）、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１ステータスによって定義されたサブセットに適用可能なコホートについて推定される。

Claims (124)

  1. 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団で治療する方法であって、
    （ａ）外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または複数の腫瘍断片もしくは生検からのものを含む、患者のＮＳＣＬＣ腫瘍からの腫瘍とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第１のＴＩＬ集団を取得および／または受容するステップと、
    （ｃ）前記腫瘍断片を、第１の細胞培養培地と接触させるステップと、
    （ｄ）前記第１の細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団の初期拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を取得するステップであって、前記第２のＴＩＬ集団が、前記第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５倍多く、前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ−２を含む、ステップと、
    （ｅ）第２の細胞培養培地中で前記第２のＴＩＬ集団の急速拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を取得するステップであって、前記第３のＴＩＬ集団が、前記急速拡張の開始から７日後に前記第２のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、および任意に照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、前記急速拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、ステップと、
    （ｆ）前記第３のＴＩＬ集団を採取するステップと、
    （ｇ）前記第３のＴＩＬ集団の治療上有効な部分を、前記ＮＳＣＬＣを有する患者に投与するステップと、を含み、
    前記ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である、方法。
  2. 前記第１のＴＩＬ集団を取得することが、多病変サンプリング法を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＰＤ−Ｌ２抗体で以前に治療されている、請求項１に記載の方法。
  4. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない、請求項１に記載の方法。
  5. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されている、請求項１に記載の方法。
  6. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている、請求項１に記載の方法。
  7. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている、請求項１に記載の方法。
  8. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない、請求項５〜７に記載の方法。
  9. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項１に記載の方法。
  10. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項１に記載の方法。
  11. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項１に記載の方法。
  12. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項１に記載の方法。
  13. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項１に記載の方法。
  14. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項１に記載の方法。
  15. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項１に記載の方法。
  16. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項１に記載の方法。
  17. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項１に記載の方法。
  18. 最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される、請求項１４〜１７に記載の方法。
  19. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  20. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  21. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  22. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  23. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  24. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  25. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  26. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  27. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  28. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項１に記載の方法。
  29. 前記初期拡張が、２１日以内の期間にわたって行われる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記初期拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記初期拡張が、約１１日の期間にわたって行われ、前記急速拡張が、約１１日の期間にわたって行われる、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で前記第１の細胞培養培地中に存在する、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、前記ＯＫＴ−３抗体が、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で前記第２の細胞培養培地中に存在する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記初期拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記急速拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記第３のＴＩＬ集団を前記患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンが、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記ＩＬ−２レジメンが、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである、請求項４０に記載の方法。
  42. 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団で治療する方法であって、
    （ａ）患者から１つ以上の腫瘍を切除するステップであって、前記１つ以上の腫瘍が、第１のＴＩＬ集団を含む、ステップと、
    （ｂ）前記１つ以上の腫瘍を、腫瘍断片に断片化するステップと、
    （ｃ）前記腫瘍断片を、第１の細胞培養培地と接触させるステップと、
    （ｄ）前記第１の細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団の初期拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を取得するステップであって、前記第２のＴＩＬ集団が、前記第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５倍多く、前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ−２を含む、ステップと、
    （ｅ）第２の細胞培養培地中で前記第２のＴＩＬ集団の急速拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を取得するステップであって、前記第３のＴＩＬ集団が、前記急速拡張の開始から７日後に前記第２のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ−２、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３抗体）、および任意に照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、前記急速拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、ステップと、
    （ｆ）前記第３のＴＩＬ集団を採取するステップと、
    （ｇ）前記第３のＴＩＬ集団の治療上有効な部分を前記ＮＳＣＬＣを有する患者に投与するステップと、を含み、
    前記ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性である、方法。
  43. 前記腫瘍が、１つ以上の腫瘍引用から切除される、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＰＤ−Ｌ２抗体で以前に治療されている、請求項４２に記載の方法。
  45. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない、請求項４２に記載の方法。
  46. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されている、請求項４２に記載の方法。
  47. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている、請求項４２に記載の方法。
  48. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている、請求項４２に記載の方法。
  49. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない、請求項４６〜４８に記載の方法。
  50. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項４２に記載の方法。
  51. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項４２に記載の方法。
  52. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項４２に記載の方法。
  53. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項４２に記載の方法。
  54. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項４２に記載の方法。
  55. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項４２に記載の方法。
  56. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項４２に記載の方法。
  57. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項４２に記載の方法。
  58. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項４２に記載の方法。
  59. 前記最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、前記巨大腫瘤病変が示される、請求項５５〜５８に記載の方法。
  60. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  61. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  62. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  63. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  64. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  65. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  66. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  67. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  68. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  69. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項４２に記載の方法。
  70. 前記初期拡張が、２１日以内の期間にわたって行われる、請求項４２〜６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記初期拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、請求項４２〜７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記初期拡張が、約１１日の期間にわたって行われ、前記急速拡張が、約１１日の期間にわたって行われる、請求項４２〜７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で前記第１の細胞培養培地中に存在する、請求項４２〜７２のいずれか一項に記載の方法。
  74. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、前記ＯＫＴ−３抗体が、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で前記第２の細胞培養培地中に存在する、請求項４２〜７３のいずれか一項に記載の方法。
  75. 前記初期拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項４２〜７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記急速拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項４２〜７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項４２〜７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項４２〜７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記第３のＴＩＬ集団を前記患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項４２〜７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンが、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項４２〜８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記ＩＬ−２レジメンが、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである、請求項８１に記載の方法。
  83. 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する対象を治療するための方法であって、前記癌が、抗ＰＤ−１抗体による治療に対して不応性であり、拡張した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む前記方法が、
    （ａ）対象から取得された１つ以上の腫瘍を複数の腫瘍断片に処理することによって、前記対象から切除された１つ以上の腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得および／または受容することと、
    （ｂ）前記腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
    （ｃ）ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第１の拡張が、約３〜１４日間行われて、前記第２のＴＩＬ集団を取得し、前記第２のＴＩＬ集団が、前記第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
    （ｄ）前記第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補足することによって第２の拡張を行って、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第２の拡張が、約７〜１４日間行われて、前記第３のＴＩＬ集団を取得し、前記第３のＴＩＬ集団が、前記第２のＴＩＬ集団と比較して、エフェクターＴ細胞および／またはセントラルメモリーＴ細胞の増加した亜集団を含む、治療的ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、第２の拡張を行うことと、
    （ｅ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、採取することと、
    （ｆ）ステップ（ｅ）から採取された前記ＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、前記ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、移すことと、
    （ｇ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）から採取された前記ＴＩＬ集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
    （ｈ）治療上有効な投与量の前記第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の前記注入バッグから前記対象に投与することと、を含む、方法。
  84. 前記腫瘍試料が、多病変サンプリング法に由来する、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されている、請求項８３に記載の方法。
  86. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されていない、請求項８３に記載の方法。
  87. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されている、請求項８３に記載の方法。
  88. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、化学療法剤で以前に治療されている、請求項８３に記載の方法。
  89. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤で以前に治療されている、請求項８３に記載の方法。
  90. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない、請求項８７〜８９に記載の方法。
  91. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項８３に記載の方法。
  92. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項８３に記載の方法。
  93. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項８３に記載の方法。
  94. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項８３に記載の方法。
  95. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、低いＰＤ−Ｌ１の発現を有する、請求項８３に記載の方法。
  96. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項８３に記載の方法。
  97. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項８３に記載の方法。
  98. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項８３に記載の方法。
  99. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項８３に記載の方法。
  100. 前記最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して７ｃｍより大きいか、または腫れたリンパ節が２０ｍｍ以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される、請求項９６〜９９に記載の方法。
  101. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも２つの以前の全身治療過程に対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  102. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ＪＳ００１、ＴＳＲ−０４２、ピジリズマブ、（ＢＧＢ−Ａ３１７、ＳＨＲ−１２１０、ＲＥＧＮ２８１０、ＭＤＸ−１１０６、ＰＤＲ００１、クローン由来の抗ＰＤ−１：ＲＭＰ１−１４、および米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、多様体、およびバイオシミラーからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体に対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  103. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  104. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  105. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  106. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  107. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、イピリムマブまたはそのバイオシミラーおよびニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  108. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  109. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  110. 前記不応性ＮＳＣＬＣが、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性である、請求項８３に記載の方法。
  111. 前記初期拡張が、２１日以内の期間にわたって行われる、請求項８３〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記初期拡張が、１４日以内の期間にわたって行われる、請求項８３〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記初期拡張が、約３〜１１日の期間にわたって行われ、前記第２の拡張が、約７〜１１日の期間にわたって行われる、請求項８３〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記初期拡張が、約１１日の期間にわたって行われ、前記急速拡張が、約１１日の期間にわたって行われる、請求項８３〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
  115. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で前記第１の細胞培養培地中に存在する、請求項８３〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
  116. 前記ＩＬ−２が、１０００ＩＵ／ｍＬ〜６０００ＩＵ／ｍＬの間の初期濃度で存在し、前記ＯＫＴ−３抗体が、約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で前記第２の細胞培養培地中に存在する、請求項８３〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記初期拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項８３〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
  118. 前記急速拡張が、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項８３〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
  119. 前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項８３〜１１８のいずれか一項に記載の方法。
  120. 前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項８３〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
  121. 前記第３のＴＩＬ集団を前記患者に投与する前に、非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項８３〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
  122. 前記非骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンが、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間のシクロホスファミドの投与に続いて、２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間のフルダラビンを投与するステップを含む、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始して、ＩＬ−２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項８３〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記ＩＬ−２レジメンが、許容範囲まで８時間ごとに１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくは多様体を含む高用量ＩＬ−２レジメンである、請求項１２３に記載の方法。
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