JP2021513978A

JP2021513978A - がん治療における選択的ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ｐｄ−１抗体又は抗ｐｄ−ｌ１抗体の併用

Info

Publication number: JP2021513978A
Application number: JP2020543527A
Authority: JP
Inventors: ウジール，タマル; レバーソン，ジョエル・ディー; パッパーノ，ウィリアム・エヌ; マガンバイ・ハリバイ，ディピカ・ビー; マシュー，レベッカ; コールハップ，フレッド; ドナホ，シェリー・ケイ
Original assignee: アッヴィ・インコーポレイテッド
Priority date: 2018-02-16
Filing date: 2019-02-15
Publication date: 2021-06-03
Also published as: EP3752189A2; CN112135631A; BR112020016551A2; WO2019161221A3; CA3090177A1; US20190336496A1; MX2020008569A; AU2019221672A1; WO2019161221A2

Abstract

本発明は対象におけるがんの治療方法であって、前記対象に有効量の選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はそのプロドラッグ若しくは薬学的に許容される塩を有効量の抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

Description

本発明は、血液がん又は固形腫瘍がんの治療における選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はそのプロドラッグと、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の併用に関する。

ＢＣＬ−２ファミリータンパク質は、核形成細胞におけるミトコンドリア依存性アポトーシスの主要なレギュレーターであり、抗アポトーシス性メンバー（ＢＣＬ−Ｘ_Ｌ、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−Ｗ、Ａ１、ＭＣＬ−１）とアポトーシス促進性メンバー（ＢＡＫ、ＢＡＸ、ＢＩＤ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＢＩＫ、ＢＭＦ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ）とから構成される。抗アポトーシス性ＢＣＬ−２タンパク質の細胞内発現は、アポトーシスの阻害に関連しており、過剰発現の場合には、異常増殖を生じる可能性がある。ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２００５／０４９５９３及びＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２００５／０２４６３６には、ＢＣＬ−２タンパク質が多数のがんに関与していることが記載されている。ＢＣＬ−２は古くからがん標的として知られており、主に血液腫瘍の生存性に関係があるとされている。

抗アポトーシス性ＢＣＬ−２タンパク質を阻害することが可能な分子は、アポトーシスを亢進させ、細胞増殖抑制をもたらし、延いてはがんの治療と予防に関連する転帰改善に繋がると思われる。ベネトクラクス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（ＴＭ）、Ｖｅｎｃｌｙｘｔｏ（ＴＭ）、ＡＢＴ−１９９）は１７ｐ欠損の有無を問わずに少なくとも１回の前治療歴のある慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）患者の治療薬としてＦＤＡに最近承認された選択的ＢＣＬ−２阻害剤である。ＣＬＬ以外に、急性骨髄性白血病、マントル細胞リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫及び多発性骨髄腫でも、ベネトクラクスを単剤として使用した場合又は多数の他の治療剤と組み合わせた場合のいずれにおいても臨床活性の初期兆候が認められている（Ａｓｈｋｅｎａｚｉ，Ａ．，Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ，Ｗ．，Ｌｅｖｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，ａｎｄＳｏｕｅｒｓ，Ａ．Ｊ．，ＦｒｏｍｂａｓｉｃａｐｏｐｔｏｓｉｓｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓｔｏａｄｖａｎｃｅｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅＢＣＬ−２ｆａｍｉｌｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ１６，２７３−２８４（２０１７）；及びＬｅｖｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｓａｍｐａｔｈ，Ｄ．，Ｓｏｕｅｒｓ，Ａ．Ｊ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ｈ．，Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ，Ｗ．Ｊ．，Ａｍｉｏｔ，Ｍ．，Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ，Ｍ．，ａｎｄＬｅｔａｉ，Ａ．，Ｆｏｕｎｄｉｎｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ：ｈｏｗｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｉｓｇｕｉｄｉｎｇｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＢＣＬ−２−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ．ＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖｅｒｙ７，１３７６−１３９３（２０１７）参照）。

別のがん治療ストラテジーとしては、生体の免疫系を利用して腫瘍細胞を検出・破壊する方法があり、近年では、腫瘍表面のタンパク質及び／又は免疫系による検出・排除を腫瘍に回避させる免疫細胞を標的とする分子である所謂「チェックポイント阻害剤」に進捗が見られる。これらの標的を阻害することにより、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）により誘導される抗腫瘍免疫応答を「再活性化」させることができ、強力な有効性と持続的な応答に繋がる。チェックポイント標的としては、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）、ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）及びＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）が挙げられ、（ＣＴＬＡ４を標的とする）イピリムマブ、（ＰＤ−１を標的とする）ニボルマブ、セミプリマブ及びペムブロリズマブ、並びに（ＰＤ−Ｌ１を標的とする）アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブ等のモノクローナル抗体を使用して標的攻撃するのに成功している（Ｔｏｐａｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｄｒａｋｅ，Ｃ．Ｇ．，ａｎｄＰａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，ＩｍｍｕｎｅＣｈｅｃｋｐｏｉｎｔＢｌｏｃｋａｄｅ：ＡＣｏｍｍｏｎＤｅｎｏｍｉｎａｔｏｒＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ．ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２７，４５０−４６１（２０１５））。これらの薬剤はメラノーマ、メルケル細胞がん、肺がん、腎細胞がん、尿路上皮がん、及びマイクロサテライト不安定性又はミスマッチ修復機能欠損を有する切除不能転移性固形腫瘍を含む種々の腫瘍の治療薬として現在規制当局により承認されている。

臨床と実験研究において、ベネトクラクスはＢリンパ球の有意な減少を誘導することが分かっており（例えば、Ｌｕ，Ｐ．，Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．，Ｃｕｒｔｉｓ，Ｃ．，Ｉｇｎａｔｅｎｋｏ，Ｓ．，Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．Ｈ．，Ｄｅｓａｉ，Ｍ．，Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｌ．，Ｇｒｅｂｅ，Ｋ．Ｍ．，Ｂｌａｃｋ，Ｋ．，Ｚｅｎｇ，Ｊ．，Ｓｔｏｌｚｅｎｂａｃｈ，Ｊ．，ａｎｄＭｅｄｅｍａ，Ｊ．Ｋ．，Ｓａｆｅｔｙａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ（ＡＢＴ−１９９）ｉｎａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｓｉｎｇｌｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅａｓｃｅｎｄｉｎｇｄｏｓｅｓｔｕｄｙｉｎｗｏｍｅｎｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｌｕｐｕｓ２７，２９０−３０２（２０１７）．Ｋｈａｗ，Ｓ．Ｌ．，Ｍｅｒｉｎｏ，Ｄ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｐ．，Ｂｏｕｉｌｌｅｔ，Ｐ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｗ．，ａｎｄＨｕａｎｇ，Ｄ．Ｃ．，ＢｏｔｈｌｅｕｋａｅｍｉｃａｎｄｎｏｒｍａｌｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｙｍｐｈｏｉｄｃｅｌｌｓａｒｅｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｕｒｖｉｖａｌＢｃｌ−２ｗｉｔｈＡＢＴ−１９９．Ｌｅｕｋｅｍｉａ２８，１２０７−１２１５（２０１４）参照）、Ｔ細胞集団の３０％までの減少をもたらすことも報告されている（Ｌｕｅｔａｌ．２０１７；Ｋｈａｗｅｔａｌ．２０１４）。

国際公報第２００５／０４９５９３号国際公報第２００５／０２４６３６号

Ａｓｈｋｅｎａｚｉ，Ａ．，Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ，Ｗ．，Ｌｅｖｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，ａｎｄＳｏｕｅｒｓ，Ａ．Ｊ．，ＦｒｏｍｂａｓｉｃａｐｏｐｔｏｓｉｓｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓｔｏａｄｖａｎｃｅｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅＢＣＬ−２ｆａｍｉｌｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ１６，２７３−２８４（２０１７）Ｌｅｖｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｓａｍｐａｔｈ，Ｄ．，Ｓｏｕｅｒｓ，Ａ．Ｊ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ｈ．，Ｆａｉｒｂｒｏｔｈｅｒ，Ｗ．Ｊ．，Ａｍｉｏｔ，Ｍ．，Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ，Ｍ．，ａｎｄＬｅｔａｉ，Ａ．，Ｆｏｕｎｄｉｎｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ：ｈｏｗｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｉｓｇｕｉｄｉｎｇｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＢＣＬ−２−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ．ＣａｎｃｅｒＤｉｓｃｏｖｅｒｙ７，１３７６−１３９３（２０１７）Ｔｏｐａｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｄｒａｋｅ，Ｃ．Ｇ．，ａｎｄＰａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，ＩｍｍｕｎｅＣｈｅｃｋｐｏｉｎｔＢｌｏｃｋａｄｅ：ＡＣｏｍｍｏｎＤｅｎｏｍｉｎａｔｏｒＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ．ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２７，４５０−４６１（２０１５）Ｌｕ，Ｐ．，Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，Ｒ．，Ｃｕｒｔｉｓ，Ｃ．，Ｉｇｎａｔｅｎｋｏ，Ｓ．，Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．Ｈ．，Ｄｅｓａｉ，Ｍ．，Ｗｏｎｇ，Ｓ．Ｌ．，Ｇｒｅｂｅ，Ｋ．Ｍ．，Ｂｌａｃｋ，Ｋ．，Ｚｅｎｇ，Ｊ．，Ｓｔｏｌｚｅｎｂａｃｈ，Ｊ．，ａｎｄＭｅｄｅｍａ，Ｊ．Ｋ．，Ｓａｆｅｔｙａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ（ＡＢＴ−１９９）ｉｎａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｓｉｎｇｌｅａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅａｓｃｅｎｄｉｎｇｄｏｓｅｓｔｕｄｙｉｎｗｏｍｅｎｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｌｕｐｕｓ２７，２９０−３０２（２０１７）Ｋｈａｗ，Ｓ．Ｌ．，Ｍｅｒｉｎｏ，Ｄ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ａ．，Ｇｌａｓｅｒ，Ｓ．Ｐ．，Ｂｏｕｉｌｌｅｔ，Ｐ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｗ．，ａｎｄＨｕａｎｇ，Ｄ．Ｃ．，ＢｏｔｈｌｅｕｋａｅｍｉｃａｎｄｎｏｒｍａｌｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｙｍｐｈｏｉｄｃｅｌｌｓａｒｅｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｕｒｖｉｖａｌＢｃｌ−２ｗｉｔｈＡＢＴ−１９９．Ｌｅｕｋｅｍｉａ２８，１２０７−１２１５（２０１４）

ＢＣＬ−２阻害剤を投与すると、Ｂ細胞及びＴ細胞集団のいずれも有意に減少するため、ベネトクラクスとの組み合わせ療法は、チェックポイント阻害剤の有効性を損なうであろうと一般に考えられていた。しかし、本発明者らは、治療有効量のＢＣＬ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）を治療有効量の抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて投与すると、血液がん及び固形腫瘍のいずれにおいても相乗的退縮を生じることを最初に発見し、従って、この組み合わせが、がん患者の潜在的治療選択肢となることを立証した。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はそのプロドラッグ若しくは薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫又は骨髄異形成症候群である方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７を含む重鎖配列と、配列番号８を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９を含む重鎖配列と、配列番号１０を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１を含む重鎖配列と、配列番号２を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４を含む重鎖配列と、配列番号５５を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫又は骨髄異形成症候群である方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１を含む重鎖配列と、配列番号１２を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３を含む重鎖配列と、配列番号１４を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５を含む重鎖配列と、配列番号１６を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７を含む重鎖配列と、配列番号８を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９を含む重鎖配列と、配列番号１０を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１を含む重鎖配列と、配列番号２を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４を含む重鎖配列と、配列番号５５を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１を含む重鎖配列と、配列番号１２を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３を含む重鎖配列と、配列番号１４を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５を含む重鎖配列と、配列番号１６を含む軽鎖配列を有する方法に関する。

本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することから成り、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。本発明は更に、固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することから成り、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

化合物（Ｉ）に対するＣＴ２６細胞、ＥＭＴ６細胞及びＭＣ３８細胞のインビトロ感受性。図１は、固形腫瘍のマウスシンジェニックモデルに由来する細胞株であるＣＴ２６、ＭＣ３８（いずれも大腸がん）及びＥＭＴ６（乳がん）がインビトロで化合物（Ｉ）に対して耐性であることを示す。実施例１に記載するように、化合物（Ｉ）の用量を増加しながらＣＴ２６細胞、ＭＣ３８細胞及びＥＭＴ６細胞に加えてインキュベートし、７２時間後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ（Ｒ）−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して生存率を測定した。化合物（Ｉ）に対するリンパ球のインビボ感受性。図２は実施例１に記載するように、リンパ節、脾臓及び血液中のＢ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＣＤ４^＋Ｔ細胞を含むマウスリンパ球が化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であることを示す。フローサイトメトリーによるＴ細胞サブセットの特性解析によると、化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加する。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）化合物（Ｉ）を１週間投与後のリンパ球のインビボ感受性。ナイーブＣＢ６Ｆ１マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。リンパ節を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。（Ｂ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞のインビボ感受性。ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。脾臓を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。実施例１に記載するように、Ｂ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含むマウス脾細胞は化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であった。（Ｃ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞におけるＴ細胞サブセットのインビボ感受性。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに由来する脾臓中のＣＤ４＋ナイーブＴ細胞（ＴＮ）とＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞はインビボ化合物（Ｉ）投与に対して若干感受性であったが、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加していた。（Ｄ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の血液中のＴ細胞サブセットのインビボ感受性。化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣ５７ＢＬ／６マウスに由来する血液中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加した。化合物（Ｉ）に対するリンパ球のインビボ感受性。図２は実施例１に記載するように、リンパ節、脾臓及び血液中のＢ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＣＤ４^＋Ｔ細胞を含むマウスリンパ球が化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であることを示す。フローサイトメトリーによるＴ細胞サブセットの特性解析によると、化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加する。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）化合物（Ｉ）を１週間投与後のリンパ球のインビボ感受性。ナイーブＣＢ６Ｆ１マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。リンパ節を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。（Ｂ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞のインビボ感受性。ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。脾臓を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。実施例１に記載するように、Ｂ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含むマウス脾細胞は化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であった。（Ｃ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞におけるＴ細胞サブセットのインビボ感受性。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに由来する脾臓中のＣＤ４＋ナイーブＴ細胞（ＴＮ）とＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞はインビボ化合物（Ｉ）投与に対して若干感受性であったが、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加していた。（Ｄ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の血液中のＴ細胞サブセットのインビボ感受性。化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣ５７ＢＬ／６マウスに由来する血液中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加した。化合物（Ｉ）に対するリンパ球のインビボ感受性。図２は実施例１に記載するように、リンパ節、脾臓及び血液中のＢ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＣＤ４^＋Ｔ細胞を含むマウスリンパ球が化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であることを示す。フローサイトメトリーによるＴ細胞サブセットの特性解析によると、化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加する。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）化合物（Ｉ）を１週間投与後のリンパ球のインビボ感受性。ナイーブＣＢ６Ｆ１マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。リンパ節を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。（Ｂ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞のインビボ感受性。ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに化合物（Ｉ）（５０ｍｇ／ｋｇ）を１週間毎日投与した。脾臓を採取し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。実施例１に記載するように、Ｂ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含むマウス脾細胞は化合物（Ｉ）のインビボ投与に対して感受性であった。（Ｃ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の脾細胞におけるＴ細胞サブセットのインビボ感受性。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに由来する脾臓中のＣＤ４＋ナイーブＴ細胞（ＴＮ）とＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞はインビボ化合物（Ｉ）投与に対して若干感受性であったが、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加していた。（Ｄ）化合物（Ｉ）を１週間投与後の血液中のＴ細胞サブセットのインビボ感受性。化合物（Ｉ）のインビボ投与後にＣ５７ＢＬ／６マウスに由来する血液中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）の割合は増加した。ＣＴ２６マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１の組み合わせの抗腫瘍効果。図３は実施例１及び実施例１Ａに記載するように、化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体、及び化合物（Ｉ）であるベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを投与したＣＴ２６マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＣＴ２６腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＣＴ２６腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線。ＣＴ２６マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１の組み合わせの抗腫瘍効果。図３は実施例１及び実施例１Ａに記載するように、化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体、及び化合物（Ｉ）であるベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせを投与したＣＴ２６マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＣＴ２６腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＣＴ２６腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線。化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１を組み合わせて投与し、腫瘍細胞を再チャレンジした場合としない場合のＣＴ２６マウスの脾臓に由来するＴ細胞の特性解析。図４は実施例１Ａに記載するように、ＣＴ２６細胞を再移植した完全奏効マウス（グループ３）の脾臓ではエフェクター記憶表現型（ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４４^＋）をもつＣＤ８^＋Ｔ細胞数が増加していることを示す。ＣＴ２６腫瘍細胞を再チャレンジしたマウス（グループ３）は腫瘍をもたないマウス（グループ１）及び初回ＣＴ２６チャレンジマウス（グループ２）に比較してエフェクター記憶応答を誘発した。グループ１：腫瘍をもたないナイーブマウス。グループ２：ＣＴ２６腫瘍をもつマウス。グループ３：ＣＴ２６腫瘍をもち、抗ＰＤ−１＋ベネトクラクスに応答し、ＣＴ２６腫瘍を拒絶したマウス。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）完全ＣＤ８^＋Ｔ細胞；（Ｂ）活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ８^＋ＣＤ６９^＋）；（Ｃ）ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４４⁻）；及び（Ｄ）エフェクターメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４４^＋）。化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１を組み合わせて投与した場合としない場合のＣＴ２６マウスに由来する脾細胞を使用した腫瘍再チャレンジ後のインビトロＴ細胞活性化。図５は実施例１Ａに記載するように、ＩＦＮγ分泌量（図５Ａ）により測定した場合に、予め化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体を組み合わせて投与した完全奏効マウスに由来する脾細胞が腫瘍再チャレンジ後にＴ細胞活性化能を維持することを示す。放射線照射したＣＴ２６細胞（元の腫瘍）ではリコール応答が認められるが、放射線照射したＥＭＴ６細胞では認められないことから、特異的抗ＣＴ２６記憶が維持されていることが明らかである（図５Ｂ）。グループ１：腫瘍をもたないナイーブマウス。グループ２：ＣＴ２６腫瘍をもつマウス。グループ３：ＣＴ２６腫瘍をもち、抗ＰＤ−１＋ベネトクラクスに応答し、ＣＴ２６腫瘍を拒絶したマウス。マウス乳腺がんであるＥＭＴ６シンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−Ｌ１、及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせの抗腫瘍効果。図６は実施例１Ｂに記載するように、化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与したＥＭＴ６マウス乳腺がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＥＭＴ６腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＥＭＴ６腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）に対するヒトＰＢＭＣのインビトロ感受性。図７は実施例２に記載するように、化合物（Ｉ）をインビトロ投与した場合に非刺激下のヒトＰＢＭＣ中のＢ細胞とＴ細胞の数が用量依存的に減少することを示す。一方、刺激下のＰＢＭＣ中のＴ細胞は化合物（Ｉ）投与に対して非感受性であった。非刺激下（Ａ）とＣＤ３／ＣＤ２８刺激下（Ｂ）のＰＢＭＣを７２時間培養後、化合物（Ｉ）を２４時間投与し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。別の実験（Ｃ）では、化合物（Ｉ）の不在下／存在下でＰＢＭＣを２４時間培養した。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）の投与後にＢ細胞とＴ細胞の数はドナー３人で用量依存的に減少した。（Ｂ）ベネトクラクスは刺激条件下でＴ細胞数に影響を与えなかった。（Ｃ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）の投与後にＢ細胞とＴ細胞の数はドナー９人で用量依存的に減少した。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）に対するヒトＰＢＭＣのインビトロ感受性。図７は実施例２に記載するように、化合物（Ｉ）をインビトロ投与した場合に非刺激下のヒトＰＢＭＣ中のＢ細胞とＴ細胞の数が用量依存的に減少することを示す。一方、刺激下のＰＢＭＣ中のＴ細胞は化合物（Ｉ）投与に対して非感受性であった。非刺激下（Ａ）とＣＤ３／ＣＤ２８刺激下（Ｂ）のＰＢＭＣを７２時間培養後、化合物（Ｉ）を２４時間投与し、免疫細胞をフローサイトメトリーにより定量した。別の実験（Ｃ）では、化合物（Ｉ）の不在下／存在下でＰＢＭＣを２４時間培養した。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）の投与後にＢ細胞とＴ細胞の数はドナー３人で用量依存的に減少した。（Ｂ）ベネトクラクスは刺激条件下でＴ細胞数に影響を与えなかった。（Ｃ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）の投与後にＢ細胞とＴ細胞の数はドナー９人で用量依存的に減少した。ヒトナイーブＴ細胞は化合物（Ｉ）に感受性であるが、メモリーＴ細胞はそうではない。図８は実施例２に記載するように、非刺激下の（ナイーブ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞とＣＤ８^＋Ｔ細胞が化合物（Ｉ）に対してインビトロ感受性であるが、ＣＤ４^＋メモリーＴ細胞は感受性が低いことを示す。ＣＤ３／ＣＤ２８刺激条件下で、化合物（Ｉ）はＴ細胞サブセットの割合に影響を与えなかった。図７からのＣＤ８^＋Ｔ細胞とＣＤ４^＋Ｔ細胞をナイーブ（ＴＮ）、セントラル（ＴＣＭ）、エフェクター（ＴＥＭ）及び終末分化（ＴＥＭＲＡ）メモリーＴ細胞サブセットについて更に解析した。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）非刺激条件下で、ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ４^＋ＴＣＭ細胞の割合の増加を誘導した（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｃ）非刺激条件下で、ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ８^＋ＴＥＭ細胞及びＴＥＭＲＡ細胞の割合の増加を誘導した（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｂ及びＤ）刺激条件下で、ベネトクラクスはＴ細胞のインビトロ活性化後に生存Ｔ細胞の合計数に対するＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の割合に影響を与えなかった（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｅ）非刺激条件下で、１μＭの化合物（Ｉ）はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞（ＴＮ）の減少と、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）及び終末分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）の増加を誘導する（図７Ｃからのドナー９人の平均）。（Ｆ及びＧ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）に対するＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＮＴ細胞及びＴＥＭＴ細胞の用量応答がドナー９人全員に認められた。ヒトナイーブＴ細胞は化合物（Ｉ）に感受性であるが、メモリーＴ細胞はそうではない。図８は実施例２に記載するように、非刺激下の（ナイーブ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞とＣＤ８^＋Ｔ細胞が化合物（Ｉ）に対してインビトロ感受性であるが、ＣＤ４^＋メモリーＴ細胞は感受性が低いことを示す。ＣＤ３／ＣＤ２８刺激条件下で、化合物（Ｉ）はＴ細胞サブセットの割合に影響を与えなかった。図７からのＣＤ８^＋Ｔ細胞とＣＤ４^＋Ｔ細胞をナイーブ（ＴＮ）、セントラル（ＴＣＭ）、エフェクター（ＴＥＭ）及び終末分化（ＴＥＭＲＡ）メモリーＴ細胞サブセットについて更に解析した。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）非刺激条件下で、ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ４^＋ＴＣＭ細胞の割合の増加を誘導した（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｃ）非刺激条件下で、ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ８^＋ＴＥＭ細胞及びＴＥＭＲＡ細胞の割合の増加を誘導した（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｂ及びＤ）刺激条件下で、ベネトクラクスはＴ細胞のインビトロ活性化後に生存Ｔ細胞の合計数に対するＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞亜集団の割合に影響を与えなかった（図７Ａ及び７Ｂからのドナー３人）。（Ｅ）非刺激条件下で、１μＭの化合物（Ｉ）はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞（ＴＮ）の減少と、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）及び終末分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）の増加を誘導する（図７Ｃからのドナー９人の平均）。（Ｆ及びＧ）非刺激条件下では、化合物（Ｉ）に対するＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＴＮＴ細胞及びＴＥＭＴ細胞の用量応答がドナー９人全員に認められた。マウス脾細胞に由来するＴ細胞サブセットの化合物（Ｉ）に対するインビトロ感受性。ナイーブＴ細胞は化合物（Ｉ）に感受性であるが、メモリーＴ細胞はそうではない。図９は実施例２に記載するように、マウス脾細胞ではＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ナイーブＴ細胞がいずれもインビトロ化合物（Ｉ）投与に感受性であるが、メモリーＴ細胞は感受性が低いことを示す。ＢＡＬＢ／ｃ及びＣ５７ＢＬ／６脾細胞にベネトクラクスを２４時間インビトロで投与した。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ４^＋ＴＣＭ細胞の割合の増加を誘導した。（Ｂ）ベネトクラクスは生存Ｔ細胞の合計数に対するナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合の用量依存的減少と、ＣＤ８^＋エフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞の割合の増加を誘導した。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はＣＭＶリコールアッセイでヒトサイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ^＋）ドナーにおける生存リンパ球数を制限するが、ＣＤ８Ｔ細胞中のＩＦＮγ及びＩＬ２産生細胞には影響を与えない。図１０は実施例３に記載するように、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイでＣＭＶ^＋ドナーに由来するＰＢＭＣ中で化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）の存在下に生細胞の百分率が低下することを示す。化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ）の共存下でＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγとＩＬ２が産生されることも示す。更に、ベネトクラクスは抗原特異的ＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させなかった。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｂ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＦＮγ産生量が増加した。（Ｃ）ＣＭＶ抗原で刺激し、ＰＭＡ／イオノマイシンを再チャレンジした生存ＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＬ２産生量は、ベネトクラクス投与後にＩＬ−２産生量が増加した（ＭＦＩ、平均蛍光強度；ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、薬物不投与対照）。（Ｄ）ＣＭＶリコールアッセイで化合物（Ｉ）の存在下又は化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体の共存下に生細胞百分率の低下が認められた。（Ｅ）ＣＭＶ抗原で刺激した生存ＣＤ８＋Ｔ細胞はベネトクラクス単独投与後又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせ投与後に同等量のＩＦＮγを産生する。ＵＳ、非刺激下；ＤＭＳＯ、不投与対照。（Ｆ及びＧ）ベネトクラクスの存在下又は不在下でＴ２細胞単独又はＭＡＲＴ対照ペプチド若しくはＣＭＶペプチドを接種したＴ２細胞と共に一晩インキュベーション後に、生存ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を測定した。ＣＭＶ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞をゲーティングし、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ分泌量を測定し、抗原特異的Ｔ細胞（生存ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞）の機能を評価した。その結果、ＣＤ８＋Ｔ２細胞の応答はＣＭＶ特異的であり、ベネトクラクスにより低下しないことが判明した。ＣＤ８＋Ｔ２はＴ２細胞単独と共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表し、ＣＤ８＋Ｔ２^ＭＡＲＴ又はＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶは夫々対照ペプチドＭＡＲＴ又はＣＭＶペプチドと共にインキュベートしたＣＤ８＋Ｔ細胞を表す。（Ｈ）ベネトクラクスは生存ＣＤ８＋Ｔ２^ＣＭＶ細胞へのＩＦＮγ分泌量を低下させなかった。Ｔ２はＴ２細胞単独を表し、ＣＤ８＋はＣＭＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞単独を表す。ＢＣＬ−２阻害剤はＭＬＲでＴ細胞数を制限するが、ＩＦＮγ産生と抗ＰＤ−１応答を損なわない。図１１はリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）を示し、実施例４に記載するように、抗ＰＤ−１抗体はＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させる。化合物（Ｉ）であるベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を減少させた。一方、化合物（Ｉ）をアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて添加すると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は有意に増加した。代表的なフローサイトメトリーデータも示す。各リンパ球混合培養反応はベネトクラクスと抗ＰＤ−１又はアイソタイプ対照抗体との組み合わせ投与を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ及びＢ）Ｔ細胞数。（Ｃ及びＤ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合（Ａ及びＢに関連）。（Ｅ及びＦ）ＩＦＮγ^＋ＣＤ３^＋Ｔ細胞を示す代表的なフローサイトメトリープロット。（Ｇ）種々のＢＣＬ−２阻害剤を単独投与又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせ投与後にＴ細胞数は減少した。（Ｈ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３＋Ｔ細胞の割合（Ｇに関連）。（Ｉ）ＩＦＮγ分泌量（Ｇに関連）。ＢＣＬ−２阻害剤はＭＬＲでＴ細胞数を制限するが、ＩＦＮγ産生と抗ＰＤ−１応答を損なわない。図１１はリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）を示し、実施例４に記載するように、抗ＰＤ−１抗体はＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させる。化合物（Ｉ）であるベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を減少させた。一方、化合物（Ｉ）をアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて添加すると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は有意に増加した。代表的なフローサイトメトリーデータも示す。各リンパ球混合培養反応はベネトクラクスと抗ＰＤ−１又はアイソタイプ対照抗体との組み合わせ投与を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ及びＢ）Ｔ細胞数。（Ｃ及びＤ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合（Ａ及びＢに関連）。（Ｅ及びＦ）ＩＦＮγ^＋ＣＤ３^＋Ｔ細胞を示す代表的なフローサイトメトリープロット。（Ｇ）種々のＢＣＬ−２阻害剤を単独投与又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせ投与後にＴ細胞数は減少した。（Ｈ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３＋Ｔ細胞の割合（Ｇに関連）。（Ｉ）ＩＦＮγ分泌量（Ｇに関連）。ＢＣＬ−２阻害剤はＭＬＲでＴ細胞数を制限するが、ＩＦＮγ産生と抗ＰＤ−１応答を損なわない。図１１はリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）を示し、実施例４に記載するように、抗ＰＤ−１抗体はＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させる。化合物（Ｉ）であるベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を減少させた。一方、化合物（Ｉ）をアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて添加すると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は有意に増加した。代表的なフローサイトメトリーデータも示す。各リンパ球混合培養反応はベネトクラクスと抗ＰＤ−１又はアイソタイプ対照抗体との組み合わせ投与を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ及びＢ）Ｔ細胞数。（Ｃ及びＤ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合（Ａ及びＢに関連）。（Ｅ及びＦ）ＩＦＮγ^＋ＣＤ３^＋Ｔ細胞を示す代表的なフローサイトメトリープロット。（Ｇ）種々のＢＣＬ−２阻害剤を単独投与又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせ投与後にＴ細胞数は減少した。（Ｈ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３＋Ｔ細胞の割合（Ｇに関連）。（Ｉ）ＩＦＮγ分泌量（Ｇに関連）。ＢＣＬ−２阻害剤はＭＬＲでＴ細胞数を制限するが、ＩＦＮγ産生と抗ＰＤ−１応答を損なわない。図１１はリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）を示し、実施例４に記載するように、抗ＰＤ−１抗体はＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させる。化合物（Ｉ）であるベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を減少させた。一方、化合物（Ｉ）をアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて添加すると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は有意に増加した。代表的なフローサイトメトリーデータも示す。各リンパ球混合培養反応はベネトクラクスと抗ＰＤ−１又はアイソタイプ対照抗体との組み合わせ投与を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ及びＢ）Ｔ細胞数。（Ｃ及びＤ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合（Ａ及びＢに関連）。（Ｅ及びＦ）ＩＦＮγ^＋ＣＤ３^＋Ｔ細胞を示す代表的なフローサイトメトリープロット。（Ｇ）種々のＢＣＬ−２阻害剤を単独投与又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせ投与後にＴ細胞数は減少した。（Ｈ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３＋Ｔ細胞の割合（Ｇに関連）。（Ｉ）ＩＦＮγ分泌量（Ｇに関連）。ＢＣＬ−２阻害剤はＭＬＲでＴ細胞数を制限するが、ＩＦＮγ産生と抗ＰＤ−１応答を損なわない。図１１はリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）を示し、実施例４に記載するように、抗ＰＤ−１抗体はＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させる。化合物（Ｉ）であるベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を減少させた。一方、化合物（Ｉ）をアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて添加すると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は有意に増加した。代表的なフローサイトメトリーデータも示す。各リンパ球混合培養反応はベネトクラクスと抗ＰＤ−１又はアイソタイプ対照抗体との組み合わせ投与を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ及びＢ）Ｔ細胞数。（Ｃ及びＤ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合（Ａ及びＢに関連）。（Ｅ及びＦ）ＩＦＮγ^＋ＣＤ３^＋Ｔ細胞を示す代表的なフローサイトメトリープロット。（Ｇ）種々のＢＣＬ−２阻害剤を単独投与又は抗ＰＤ−１抗体と組み合わせ投与後にＴ細胞数は減少した。（Ｈ）ＩＦＮγを産生するＣＤ３＋Ｔ細胞の割合（Ｇに関連）。（Ｉ）ＩＦＮγ分泌量（Ｇに関連）。免疫適格マウスと欠損マウスで結腸がんＭＣ３８シンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせの抗腫瘍効果。図１２は実施例１Ｃに記載するように、免疫適格（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスと免疫欠損（ＳＣＩＤ）マウスで化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与したＭＣ３８マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＭＣ３８腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ａに関連）。（Ｃ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ｃに関連）。（Ｅ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｆ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個類の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。免疫適格マウスと欠損マウスで結腸がんＭＣ３８シンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせの抗腫瘍効果。図１２は実施例１Ｃに記載するように、免疫適格（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスと免疫欠損（ＳＣＩＤ）マウスで化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与したＭＣ３８マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＭＣ３８腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ａに関連）。（Ｃ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ｃに関連）。（Ｅ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｆ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個類の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。免疫適格マウスと欠損マウスで結腸がんＭＣ３８シンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせの抗腫瘍効果。図１２は実施例１Ｃに記載するように、免疫適格（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスと免疫欠損（ＳＣＩＤ）マウスで化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与したＭＣ３８マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＭＣ３８腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ａに関連）。（Ｃ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ｃに関連）。（Ｅ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｆ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個類の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。免疫適格マウスと欠損マウスで結腸がんＭＣ３８シンジェニックモデルにおける化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせの抗腫瘍効果。図１２は実施例１Ｃに記載するように、免疫適格（Ｃ５７ＢＬ／６）マウスと免疫欠損（ＳＣＩＤ）マウスで化合物（Ｉ）、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与したＭＣ３８マウス結腸がんシンジェニックモデルにおける腫瘍増殖率を示す。ＭＣ３８腫瘍を移植し、従来適応とされている薬剤を投与したマウスの生存曲線を示す。各サブセクションの説明は以下の通りである。（Ａ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｂ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ａに関連）。（Ｃ）免疫適格Ｃ５７ＢＬ／６マウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍を移植し、指定した薬剤を投与したマウスの生存曲線（図Ｃに関連）。（Ｅ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。（Ｆ）免疫欠損ＳＣＩＤマウスにベネトクラクス、抗ＰＤ−Ｌ１及びベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせを投与後の腫瘍増殖率。曲線の各点は１０個類の腫瘍の平均を表す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ヒト健常対象においてＴ細胞サブセットに及ぼす化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）と化合物（ＩＶ）の効果。図１３は化合物（Ｉ）を１回投与後又は化合物（ＩＶ）を１回投与後の健常ヒト対象におけるＴ細胞サブセットの免疫表現型解析を示す。対象に化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＶ）１００ｍｇを１回投与し、夫々投与の１日前と７日後に血液中のＴ細胞サブセットをフローサイトメトリーにより特性解析した。化合物（Ｉ）又は（ＩＶ）はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞（ＴＮ）とＣＤ４＋及びＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）の減少と、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）と終末分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）の増加を対象の大半に誘導した。

ベネトクラクスをチェックポイント阻害剤と組み合わせると有効性が低下するであろうと予想されていたが、ベネトクラクスは抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の免疫による抗腫瘍活性を損なわないばかりか、組み合わせ療法で有効性を強化できることが意外にも判明した。ＣＴ２６モデルでは、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ療法の結果、抗ＰＤ−１抗体単独投与に比較して腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）が３２％から４９％に上昇した。ベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ療法の結果、抗ＰＤ−１抗体を単独投与した対象に比較して完全奏効例数も０／１０例から３／１０例に増加した。ＥＭＴ６モデルでベネトクラクスと抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ療法を適用した場合にも同様の効果が認められた（ＴＧＩが８９％から９４％に上昇し、完全奏効例数が３／１０例から９／１０例に増加した）。更に、ＭＣ３８モデルでベネトクラクスを抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた場合にも同様の効果が認められた（ＴＧＩが夫々３２％から７３％と４５％から８０％に上昇し、完全奏効例数が夫々１／１０例から２／１０例と０例から６／１０例に増加した）。

更に、腫瘍再チャレンジ実験の結果、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ投与に応答性のマウスは実際に抗腫瘍記憶を発現していたので、ベネトクラクス投与は意外にも抗腫瘍記憶の樹立を妨げないことが判明した。ＣＴ２６腫瘍細胞を再移植した場合に、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ療法の完全奏効対象はいずれも免疫による抗腫瘍応答を誘発し、腫瘍生着は起こらなかった。同様に、ＭＣ３８腫瘍細胞を再チャレンジした場合にも、ベネトクラクスを抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて投与したマウスの完全奏効対象に腫瘍生着は認められなかった。抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体とベネトクラクスをＭＣ３８に組み合わせて投与すると、ＳＣＩＤマウスではＴＧＩが認められなかったので、応答は免疫を介することが実証された。

更に、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ療法は予想外に血液以外の固形腫瘍でも有効性が実証された。ＢＣＬ−２は主に血液腫瘍の生存性に関係があるとされていたが、本願に記載する実験の結果、ベネトクラクスを抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせると、結腸がん及び乳腺がんモデルで有効性が実証された。

１実施形態において、本発明はＢＣＬ−２タンパク質の阻害剤である化合物（Ｉ）に関する。本化合物はＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１０／１３８５８８に開示されており、その開示内容全体をあらゆる目的で本願に援用する。

１実施形態において、本発明はＢＣＬ−２タンパク質の阻害剤である化合物（ＩＩ）に関する。本化合物はＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１３／１１０８９０に開示されており、その開示内容全体をあらゆる目的で本願に援用する。

１実施形態において、本発明はＢＣＬ−２タンパク質の阻害剤である化合物（ＩＩＩ）に関する。本化合物はＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１３／１１０８９０と、Ｃａｓａｒａ，Ｐ．，Ｄａｖｉｄｓｏｎ，Ｊ．，ｅｔａｌ．Ｓ５５７４６ｉｓａｎｏｖｅｌｏｒａｌｌｙａｃｔｉｖｅＢＣＬ−２ｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｎｄｐｏｔｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｔｈａｔｉｍｐａｉｒｓｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ９（２８），２００７５−２００８８（２０１８）に開示されており、その開示内容全体をあらゆる目的で本願に援用する。

１実施形態において、本発明は化合物（Ｉ）のメチレンリン酸エステル型水溶性プロドラッグである化合物（ＩＶ）に関する。本化合物は経口投与後に消化管内でアルカリホスファターゼにより親化合物である医薬品有効成分（ＡＰＩ）に迅速に変換され、現行のベネトクラクス適応症の全範囲の治療において有効となるベネトクラクス曝露量を提供することが前臨床試験で分かっている。本化合物はＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１１／１５００１６に開示されており、その開示内容全体をあらゆる目的で本願に援用する。

１実施形態において、本発明はＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）に対して特異性をもつ抗体であるペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１に関する。ペムブロリズマブは配列番号７の重鎖配列と、配列番号８の軽鎖配列から構成される。ニボルマブは配列番号９の重鎖配列と、配列番号１０の軽鎖配列から構成される。セミプリマブは配列番号５４の重鎖配列と、配列番号５５の軽鎖配列から構成される。ＡＢＢＶ−１８１は配列番号１の重鎖配列と、配列番号２の軽鎖配列から構成される。

１実施形態において、本発明はＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）に対して特異性をもつ抗体であるアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブに関する。アテゾリズマブは配列番号１１の重鎖配列と、配列番号１２の軽鎖配列から構成される。アベルマブは配列番号１３の重鎖配列と、配列番号１４の軽鎖配列から構成される。デュルバルマブは配列番号１５の重鎖配列と、配列番号１６の軽鎖配列から構成される。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７の重鎖配列と、配列番号８の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９の重鎖配列と、配列番号１０の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４の重鎖配列と、配列番号５５の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１の重鎖配列と、配列番号２の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は転移性皮膚扁平上皮がん若しくは局所進行皮膚扁平上皮がんである方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１の重鎖配列と、配列番号１２の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３の重鎖配列と、配列番号１４の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５の重鎖配列と、配列番号１６の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体がペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７の重鎖配列と、配列番号８の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９の重鎖配列と、配列番号１０の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４の配列の重鎖２本と、配列番号５５の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１の配列の重鎖２本と、配列番号２の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体をベネトクラクスと組み合わせて投与することを含み、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１の重鎖配列と、配列番号１２の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３の重鎖配列と、配列番号１４の軽鎖配列から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５の重鎖配列と、配列番号１６の軽鎖配列から構成される方法に関する。

抗ＰＤ−１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体は一般に、本願で（Ｎ→Ｃの順に）Ｖ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と呼ぶ３個の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）を有する可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む重鎖と、本願で（Ｎ→Ｃの順に）Ｖ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３と呼ぶ３個の相補性決定領域を有する可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む軽鎖から成る。本願では、代表的な抗ＰＤ−１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体の代表的なＣＤＲのアミノ酸配列を示す。

本願では、上記ＣＤＲを有する抗ＰＤ−１抗体の特定の代表的な実施形態について記載する。ある種の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３及び３４のＣＤＲを有する。ある種の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５６、５７、５８、５９、６０及び６１のＣＤＲを有する。

１実施形態において、本発明はＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）に対して特異性をもつ抗体であるペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１に関する。ペムブロリズマブは、配列番号２３、２４及び２５のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２６、２７及び２８のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。ニボルマブは、配列番号２９、３０及び３１のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３２、３３及び３４のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。ＡＢＢＶ−１８１は、配列番号１７、１８及び１９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２０、２１及び２２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。セミプリマブは、配列番号５６、５７及び５８のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５９、６０及び６１のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。

１実施形態において、本発明はＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）に対して特異性をもつ抗体であるアテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブに関する。アテゾリズマブは、配列番号３５、３６及び３７のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３８、３９及び４０のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。アベルマブは、配列番号４１、４２及び４３のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号４４、４５及び４６のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。デュルバルマブは、配列番号４７、４８及び４９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５０、５１及び５２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号２３、２４及び２５のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２６、２７及び２８のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号２９、３０及び３１のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３２、３３及び３４のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１７、１８及び１９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２０、２１及び２２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５６、５７及び５８のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５９、６０及び６１のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号３５、３６及び３７のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３８、３９及び４０のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号４１、４２及び４３のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号４４、４５及び４６のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号４７、４８及び４９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５０、５１及び５２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号２３、２４及び２５のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２６、２７及び２８のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号２９、３０及び３１のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３２、３３及び３４のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１７、１８及び１９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号２０、２１及び２２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５６、５７及び５８のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５９、６０及び６１のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号３５、３６及び３７のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号３８、３９及び４０のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号４１、４２及び４３のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号４４、４５及び４６のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

１実施形態において、本発明は固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスであり、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号４７、４８及び４９のＶ_ＨＣＤＲ１、Ｖ_ＨＣＤＲ２及びＶ_ＨＣＤＲ３と、配列番号５０、５１及び５２のＶ_ＬＣＤＲ１、Ｖ_ＬＣＤＲ２及びＶ_ＬＣＤＲ３から構成される方法に関する。

本願の開示内容をより理解し易くするために、選択した用語について以下に定義する。

定義
「治療する」、「治療用」及び「治療」なる用語は、疾患及び／又はその随伴症状を緩和又は抑制する方法を意味する。

「対象」なる用語は、本願では哺乳動物等の動物を意味するものとして定義され、限定するものではないが、霊長類が挙げられる。好ましい実施形態において、対象はヒトである。

「患者」なる用語と「対象」なる用語を本願では同義に使用する。

「有効量」とは、望ましい生物学的、薬理学的又は治療的転帰を対象にもたらすために十分な量を意味する。治療有効量とは、選択的ＢＣＬ−２阻害剤、例えば化合物（Ｉ）と組み合わせてした場合に、任意の医療処置に適用可能な妥当なメリット／リスク比で血液がん又は固形腫瘍がんを治療又は予防するために十分な抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）の量を意味する。

「抗体」なる用語は、一般に２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖の４本のポリペプチド鎖から構成される免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子のエピトープ結合特徴を維持するその誘導体を意味する。全長抗体の１実施形態において、各重鎖は重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。ＣＨはＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３個のドメインから構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＣＬは１個のＣＬドメインから構成される。Ｖ_ＨとＶ_Ｌは相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域と、これらを取り囲むフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる保存性の高い領域に更に区分することができる。一般に、各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌはアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又はサブクラスとすることができる。

「ヒト化抗体」なる用語は、非ヒト種に由来するが、より「ヒト様」となるように改変された抗体、即ちヒト生殖細胞系列配列との類似性を高めるように改変された抗体を意味する。ヒト化抗体の１例は、非ヒトＣＤＲ配列をヒトＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列に導入し、対応するヒトＣＤＲ配列に置き換えたＣＤＲグラフト抗体である。「ヒト化抗体」としては、ヒト抗体フレームワーク領域（ＦＲ）配列のアミノ酸配列と実質的に一致する（例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％一致する）ＦＲ配列と、非ヒトＣＤＲのアミノ酸配列と実質的に一致する（例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％一致する）少なくとも１個のＣＤＲを含む抗体又はその変異体、誘導体、アナログ若しくはフラグメントも挙げられる。ヒト化抗体としては、少なくとも１個、一般的には２個の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含み、ＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部の配列が非ヒト免疫グロブリン（即ちドナー抗体）のＣＤＲ領域の配列に対応し、ＦＲ領域の全部又は実質的に全部の配列がヒト免疫グロブリンのＦＲ領域の配列に対応するものでもよい。ヒト化抗体は更にヒト抗体に由来する重鎖のＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域を含むことができる。１実施形態において、ヒト化抗体は更にヒト免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部を含む。ある種の実施形態において、ヒト化抗体はヒト化軽鎖のみを含む。ある種の実施形態において、ヒト化抗体はヒト化重鎖のみを含む。ある種の実施形態において、ヒト化抗体は軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又は重鎖のヒト化可変ドメインのみを含む。ある種の実施形態において、ヒト化抗体は軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインを含む。ある種の実施形態において、ヒト化抗体は重鎖と、軽鎖の少なくとも可変ドメインを含む。

「生物活性」なる用語は、（インビボで認識されるような天然に存在するものであるか、又は組換え手段により提供若しくは実現されるものかに関係なく）分子の任意の１種以上の生物学的性質を意味する。生物学的性質としては、限定されないが、腫瘍血管新生の抑制、腫瘍始原細胞／がん幹細胞維持の抑制、及び腫瘍細胞薬剤耐性の抑制が挙げられる。

「中和」なる用語は、結合性タンパク質が抗原と特異的に結合するときにこの抗原の生物活性を打ち消すことを意味する。１実施形態において、中和結合性タンパク質は抗原（例えばサイトカイン）と結合し、その生物活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％又はそれ以上低下させる。

「特異性」とは、結合性タンパク質が抗原と選択的に結合する能力を意味する。

「力価」なる用語は、結合性タンパク質が所望の効果を発揮する能力を意味し、その治療有効性の尺度である。

「生物学的機能」なる用語は、結合性タンパク質の特定のインビトロ又はインビボ作用を意味する。結合性タンパク質は数種のクラスの抗原を標的とし、複数の作用機序により所望の治療転帰をもたらすことができる。結合性タンパク質は可溶性タンパク質、細胞表面抗原、及び／又は細胞外タンパク質付着物を標的とすることができる。結合性タンパク質はそれらの標的の活性を刺激、抑制又は中和することができる。結合性タンパク質はそれらが結合する標的のクリアランスを助長することもできるし、細胞に結合すると、細胞傷害作用を生じることもできる。２個以上の抗体の部分を多価フォーマットに組み込み、１個の結合性タンパク質分子で２種類以上の異なる機能を発揮させることもできる。

「安定な」結合性タンパク質とは、保存後にこの結合性タンパク質がその物理的安定性、化学的安定性及び／又は生物活性を本質的に維持しているものである。種々の温度で長期間にわたってインビトロで安定な多価結合性タンパク質が望ましい。

「溶解度」なる用語は、タンパク質が水溶液中に分散された状態を維持する能力を意味する。水性製剤におけるタンパク質の溶解度は疎水性アミノ酸残基と親水性アミノ酸残基の適正な分布に依存するため、溶解度は正しく折り畳まれたタンパク質の産生に相関し得る。当業者は当業者に公知の日常的なＨＰＬＣ技術及び方法を使用して結合性タンパク質の溶解度の増減を検出することができる。

「サイトカイン」なる用語は、ある細胞集団が別の細胞集団に作用するときに細胞間メディエーターとして放出されるタンパク質を意味する。「サイトカイン」なる用語は、天然由来タンパク質又は組換え細胞培養に由来するタンパク質と、天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を包含する。

「対照」とは、検体を含まない組成物（「陰性対照」）又は検体を含む組成物（「陽性対照」）を意味する。陽性対照は既知濃度の検体を含むことができる。本願では既知濃度の検体を含む組成物の意味で「対照」、「陽性対照」及び「キャリブレーター」を同義に使用する場合がある。「陽性対照」はアッセイ性能特徴を確認するために使用することができ、被験物質（例えば検体）の完全性の有用な指標である。

「Ｆｃ領域」なる用語は、無傷抗体のパパイン消化により得られる免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。Ｆｃ領域は天然配列Ｆｃ領域でもよいし、変異体Ｆｃ領域でもよい。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般にＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインの２個の定常ドメインを含み、任意にＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変えるためにＦｃ部分のアミノ酸残基を置き換えることは当技術分野で公知である（例えば米国特許第５，６４８，２６０号及び５，６２４，８２１号）。Ｆｃ領域は例えばサイトカイン誘導、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、貪食作用、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、並びに抗体及び抗原抗体複合体の半減期／クリアランス率等の複数の重要なエフェクター機能に関与している。これらのエフェクター機能は治療用免疫グロブリンに望ましい場合もあるが、治療目的によっては不要であったり、有害になる場合もある。

結合性タンパク質の「抗原結合部分」なる用語は、抗原と特異的に結合する能力を保持する結合性タンパク質（例えば抗体）の１個以上のフラグメントを意味する。結合性タンパク質の抗原結合機能は全長抗体のフラグメントだけでなく、二重特異性フォーマット、デュアル特異性フォーマット又は多重特異性フォーマットでも発揮することができる。結合性タンパク質の「抗原結合部分」なる用語に含まれる結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｖ_Ｌドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメインから構成される１価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）_２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｖ_ＨドメインとＣＨ１ドメインから構成されるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶ_ＬドメインとＶ_Ｈドメインから構成されるＦｖフラグメント；（ｖ）シングル可変ドメインを含むｄＡｂフラグメント；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、ＦｖフラグメントのＶ_Ｌ及びＶ_Ｈの２つのドメインは別々の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して合成リンカーにより連結し、Ｖ_Ｌ領域とＶ_Ｈ領域が対合して１価分子を形成する１本のタンパク質鎖として作製することができる（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と言う）。このような１本鎖抗体も抗体の「抗原結合部分」なる用語に含むものとする。ダイアボディ等の他の形態の１本鎖抗体でもよい。更に、１本鎖抗体としては、相補的軽鎖ポリペプチドと共に１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｖセグメント（Ｖ_Ｈ−ＣＨ１−Ｖ_Ｈ−ＣＨ１）を含む「直鎖状抗体」も挙げられる。

「リンカー」なる用語は、１個のアミノ酸残基でもよいし、ペプチド結合により相互に連結された２個以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドでもよく、２個のポリペプチド（例えば２個のＶ_Ｈドメイン又は２個のＶ_Ｌドメイン）を連結するために使用されるものを意味する。このようなリンカーポリペプチドの例は当技術分野で周知である（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，Ｔ．，Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１−１１２３（１９９４）参照）。

「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔラベリング」なる用語を本願では同義に使用する。これらの用語は当技術分野で認知されており、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域において他のアミノ酸残基よりも可変度の高い（即ち超可変性の）アミノ酸残基のナンバリングシステムを意味する（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１（１９７１）及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＦｉｆｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２（１９９１））。

Ｋａｂａｔ定義は抗体における残基のナンバリングの標準であり、ＣＤＲ領域を同定するために一般的に使用されている。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２８：２１４−８（２０００）参照。Ｃｈｏｔｈｉａ定義はＫａｂａｔ定義と同様であるが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は所定の構造ループ領域の位置を考慮している。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８３（１９８９）参照。抗体構造をモデル化したコンピュータープログラムの統合スイートがオックスフォード大学分子グループ（ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒｏｕｐ）により作成されているが、ＡｂＭ定義はこのプログラムを使用している。例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．Ｒ．，Ｃｈｅｅｔｈａｍ，Ｊ．Ｃ．，Ｒｅｅｓ，Ａ．Ｒ．，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８−９２７２（１９８９）；“ＡｂＭ．ＴＭ．，ＡＣｏｍｐｕｔｅｒＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＭｏｄｅｌｉｎｇＶａｒｉａｂｌｅＲｅｇｉｏｎｓｏｆＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．参照。ＡｂＭ定義は、知識データベースと、Ｓａｍｕｄｒａｌａ，Ｒ．，Ｘｉａ，Ｙ．，Ｈｕａｎｇ，Ｅ．，Ｌｅｖｉｔｔ，Ｍ．，ＡｂＩｎｉｔｉｏＰｒｏｔｅｉｎＳｔｒｕｃｔｕｒｅＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎＵｓｉｎｇａＣｏｍｂｉｎｅｄＨｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ（Ｓｕｐｐｌ．３）１９４−１９８（１９９９）に記載されているもの等のアブイニシオ（ａｂｉｎｉｔｉｏ）法の組み合わせを使用して一次配列から抗体の三次構造をモデル化している。接点定義は入手可能な複雑な結晶構造の解析に基づく。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｒ．Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．Ｒ．，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２−４５（１９９６）参照。本願でＣＤＲの「コンホメーション定義」と呼ぶ別のアプローチでは、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基としてＣＤＲの位置を同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１１５６−１１６６（２００８）参照。更に他のＣＤＲ境界定義も考えられ、上記アプローチの１つに厳密には従わないとしても、ＫａｂａｔＣＤＲの少なくとも一部とオーバーラップし、特定残基又は残基群が抗原結合に有意に影響を与えないという予想又は実験結果に鑑み、短くしたものや、長くしたものが考えられる。本願で使用するＣＤＲとは、アプローチの組み合わせも含めて当技術分野で公知のどのようなアプローチにより定義されるＣＤＲを意味するものでもよい。本願で使用する方法はこれらのアプローチのうちのいずれに従って定義されるＣＤＲを使用してもよい。ＣＤＲを２個以上含む任意の所定の実施形態では、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、拡張定義、ＡｂＭ定義、接点定義、及び／又はコンホメーション定義のいずれに従ってこれらのＣＤＲを定義してもよい。

「ＣＤＲ」なる用語は、免疫グロブリン可変領域配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖と軽鎖の可変領域の各々に３個ずつＣＤＲが存在し、重鎖及び軽鎖可変領域の各々でＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ぶ。「ＣＤＲセット」なる用語は、抗原と結合することが可能な単一の可変領域に存在する３個１組のＣＤＲを意味する。これらのＣＤＲの厳密な境界は様々のシステムにより様々に定義されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．（１９８７）及び（１９９１））により記載されているシステムは、抗体のどの可変領域にも適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを提供するだけでなく、３個のＣＤＲを定義する厳密な残基境界も提供している。これらのＣＤＲをＫａｂａｔＣＤＲと呼ぶ場合もある。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３（１９８９））は、ＫａｂａｔＣＤＲ内の所定のサブ部分がアミノ酸配列レベルでは多様性に富んでいるにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖構造をとることを見いだした。これらのサブ部分はＬ１、Ｌ２及びＬ３又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と呼ばれ、ここで「Ｌ」及び「Ｈ」は夫々軽鎖領域と重鎖領域を表す。これらの領域をＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと呼ぶ場合もあり、その境界はＫａｂａｔＣＤＲとオーバーラップする。ＫａｂａｔＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界はＰａｄｌａｎ，Ｅ．Ａ．，Ａｂｅｒｇｅｌ，Ｃ．，Ｔｉｐｐｅｒ，Ｊ．Ｐ．ＦＡＳＥＢＪ．９：１３３−１３９（１９９５）とＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｒ．Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．Ｒ．，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２−４５（１９９６）に記載されている。更に他のＣＤＲ境界定義も考えられ、本願に記載するシステムの１つに厳密には従わないとしても、ＫａｂａｔＣＤＲとオーバーラップし、特定残基若しくは残基群又はＣＤＲ全体が抗原結合に有意に影響を与えないという予想又は実験結果に鑑み、短くしたものや、長くしたものが考えられる。本願で使用する方法はこれらのシステムのうちのいずれに従って定義されたＣＤＲを利用してもよいが、所定の実施形態はＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用する。

「エピトープ」なる用語は、結合性タンパク質が結合する抗原の領域を意味し、例えば免疫グロブリン又はＴ細胞受容体と特異的に結合することが可能な領域を意味する。所定の実施形態において、エピトープ決定基はアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル等の化学的に活性な表面分子群を含み、所定の実施形態では、特定の三次元構造特徴及び／又は特定の電荷特徴をもつ場合がある。１実施形態において、エピトープは特異的結合パートナーの相補的部位と結合することが分かっている抗原（又はそのフラグメント）の領域のアミノ酸残基を含む。抗原フラグメントは２個以上のエピトープを含むことができる。所定の実施形態において、結合性タンパク質はタンパク質及び／又は高分子の複雑な混合物中でその標的抗原を認識するときに、抗原と特異的に結合する。複数の抗体が交差競合する場合（例えば、一方の抗体が他方の抗体と結合性タンパク質の結合を妨害する場合又は他方の抗体と結合性タンパク質の結合に及ぼす調節作用を阻害する場合）には、複数の結合性タンパク質が「同一のエピトープと結合する」。エピトープ認識を可視化・モデル化する方法は当業者に公知である（ＵＳ２００９０３１１２５３）。

「変異体」なる用語は、アミノ酸の付加（例えば挿入）、欠失又は保存的置換により、元のポリペプチドとはアミノ酸配列が相違するが、元のポリペプチドの生物活性を維持するポリペプチドを意味する（例えば、変異体ＰＤ−１抗体はＰＤ−１との結合について抗ＰＤ−１抗体と競合することができる）。アミノ酸の保存的置換、即ちアミノ酸を性質（例えば疎水性及び／又は荷電領域の程度若しくは分布）が類似する別のアミノ酸で置き換えることは、当技術分野において一般的にマイナー変異を伴うとみなされている。これらのマイナー変異は当技術分野で認識されている通り、アミノ酸のハイドロパシー指数を考慮することによりある程度識別することができる（例えば、Ｋｙｔｅ，Ｊ．，Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｒ．Ｆ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）参照）。１態様では、ハイドロパシー指数が±２のアミノ酸同士を置換する。生物学的機能を維持するタンパク質となるような置換を表すためにアミノ酸の親水性を使用することもできる。最大局所平均親水性は抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度であるが、あるペプチドに関してアミノ酸の親水性を考慮すると、このペプチドの最大局所平均親水性を計算することが可能になる（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号参照）。当技術分野で認識されている通り、親水性値が同等のアミノ酸同士を置換すると、生物活性（例えば免疫原性）を維持するペプチドが得られる。１態様では、親水性値が相互に±２以内のアミノ酸同士で置換を実施する。アミノ酸の疎水性指数と親水性値はいずれもこのアミノ酸の特定の側鎖により左右される。この定説に一致し、生物学的機能に適合可能なアミノ酸置換は疎水性、親水性、電荷、サイズ及び他の性質により表されるようなアミノ酸同士の相対的類似性、特にこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると考えられている。「変異体」なる用語は更に、例えばタンパク質分解、リン酸化又は他の翻訳後修飾により種々にプロセシングされているが、生物活性及び／又は抗原反応性、例えばＰＤ−１及び／又はＰＤ−Ｌ１との結合能を維持するポリペプチド又はそのフラグメントも含む。「変異体」なる用語は、特に指定しない限り、変異体のフラグメントを含む。変異体は野生型配列と９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％又は７５％一致していればよい。

本願で使用する「組み合わせ」なる用語は、抗ＰＤ−１抗体若しくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体とＢＣＬ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）の組み合わせ；抗ＰＤ−１抗体若しくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体とＢＣＬ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）の同時投与；抗ＰＤ−１抗体若しくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体とＢＣＬ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）の逐次投与；又はＢＣＬ−２阻害剤（例えばベネトクラクス）と抗ＰＤ−１抗体若しくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体の逐次投与を意味する。

ペムブロリズマブはメラノーマ、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮がん、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん及び子宮頸がん患者に対する治療を適応とする。メラノーマでは、病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでペムブロリズマブ２００ｍｇを３０分間かけて３週間間隔で点滴静注として投与する。非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮がん、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、胃がん及び子宮頸がんでは、病勢進行が認められない患者に病勢進行、忍容できない毒性が発現するまで又は２４カ月間までペムブロリズマブ２００ｍｇを３０分間かけて３週間間隔で点滴静注として投与する。

ニボルマブは切除不能又は転移性メラノーマ、メラノーマのアジュバント療法、転移性非小細胞肺がん、腎細胞がん、古典的ホジキンリンパ腫、頭頚部扁平上皮がん、尿路上皮がん、高頻度マイクロサテライト不安定性又はミスマッチ修復機能欠損転移性大腸がん及び肝細胞がん患者に対する治療を適応とする。切除不能若しくは転移性メラノーマ、非小細胞肺がん、腎細胞がん又は尿路上皮がんでは、病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでニボルマブ２４０ｍｇを３０分間かけて２週間間隔で点滴静注として単剤投与する。メラノーマのアジュバント療法では、疾患再発又は忍容できない毒性が発現するまで１年間までニボルマブ２４０ｍｇを６０分間かけて２週間間隔で点滴静注として単剤投与する。古典的ホジキンリンパ腫又は頭頚部扁平上皮がんでは、病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでニボルマブ３ｍｇ／ｋｇを３０分間かけて２週間間隔で点滴静注として投与する。大腸がん又は肝細胞がんでは、疾患再発又は忍容できない毒性が発現するまでニボルマブ２４０ｍｇを６０分間かけて２週間間隔で点滴静注として投与する。更に切除不能又は転移性メラノーマでは、ニボルマブ１ｍｇ／ｋｇを３０分間かけて点滴静注として投与した後、同日にイピリムマブを投与する療法を３週間間隔で４回行う。その後、ニボルマブを従来記載されているように単剤投与する。

アテゾリズマブは局所進行又は転移性尿路上皮がん及び転移性非小細胞肺がん患者に対する治療を適応とする。病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでアテゾリズマブ１２００ｍｇを６０分間かけて３週間間隔で点滴静注として投与する。初回点滴に耐えられる場合には、次回からの点滴時間を３０分間としてもよい。

アベルマブは転移性メルケル細胞がん及び局所進行又は転移性尿路上皮がん患者に対する治療を適応とする。病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでアベルマブ１０ｍｇ／ｋｇを６０分間かけて２週間間隔で点滴静注として投与する。

デュルバルマブは局所進行又は転移性尿路上皮がん患者に対する治療を適応とする。病勢進行又は忍容できない毒性が発現するまでデュルバルマブ１０ｍｇ／ｋｇを６０分間かけて２週間間隔で点滴静注として投与する。

ベネトクラクスは１７ｐ欠損の有無を問わずに少なくとも１回の前治療歴のある慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）患者に対する治療を適応とする。ＣＬＬの治療では、５週間の用量漸増スケジュール後に１日４００ｍｇの推奨用量でベネトクラクスを投与する。

刊行物、特許出願及び特許を含め、本願に引用する全資料は、個々の資料について本願に援用すると個別に記述し、その開示内容全体を本願に記載している場合と同程度まで本願に援用する。

本発明を説明する文脈で（特に後記特許請求の範囲の文脈で）「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」なる用語並びに同類の指示語を使用する場合には、本願中で特に指定している場合又は文脈からそうでないことが明白である場合を除き、単数と複数の両方に対応すると解釈すべきである。「含む」、「有する」、「包含する」及び「含有する」なる用語は、特に指定しない限り、無制限の用語（即ち、「〜を含むが、これらに限定されない」という意味）として解釈すべきである。本願中で数値範囲を記載する場合には、本願中で特に指定しない限り、その範囲内に該当する個々の数値を個別に表す簡略表現法として利用する目的に過ぎず、個々の数値を本願中に個別に明記しているものとして本明細書に組み入れる。本願中で特に指定している場合又は文脈からそうでないことが明白な場合を除き、本願に記載する全方法は任意の適切な順序で実施することができる。本願に提示するありとあらゆる例示又は例示的文言（例えば「等の」）の使用は本発明をより明瞭にする目的に過ぎず、特許請求の範囲に特に記載していない限り、本発明の範囲を制限するものではない。本明細書中の如何なる文言も、特許請求の範囲に記載していない要素が本発明の実施に不可欠であるという意味に解釈すべきではない。

本発明者らが知る限り最良の本発明の実施形態を含めて、本願では本発明の好ましい実施形態について記載する。当技術分野における通常の知識を有する者であれば、上記記載を通読後にこれらの好ましい実施形態の変形にも容易に想到し得る。本発明者らは当業者がこのような変形を適宜利用するものと予想し、また、本発明者らは本願に具体的に記載する以外の方法で本発明が実施されることも想定している。従って、本発明は準拠法により許される範囲において本願に添付する特許請求の範囲に記載する保護対象の全変形及び等価物を包含する。更に、本願で特に指定している場合又は文脈からそうでないことが明白な場合を除き、可能な全てのその変形における上記要素のあらゆる組合せを本発明に包含する。

本願中で特に定義しない限り、本願で使用する科学技術用語は当技術分野における通常の知識を有する者に広く理解されている意味とする。潜在的に曖昧な場合には、辞書又は外部の定義よりも本願中の定義を優先する。文脈から必然的にそうでないと判断される場合を除き、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。特に指定しない限り、「又は」の使用は「及び／又は」を意味する。「含む」なる用語と「含んでいる」や「含まれる」等の他の語形の使用は、限定的な意味ではない。本願に記載するあらゆる範囲は端点と端点間の全数値を含むものとみなされる。

本願中で使用するセクション見出しは単に構成上の目的であり、記載する保護対象を限定するものと解釈すべきではない。本願中に引用する文献としては、限定するものではないが、特許、特許出願、論文、成書及び条約等が挙げられるが、これらの全文献及び文献抜粋の内容全体をあらゆる目的で特に本願に援用する。援用する文献が本明細書に含まれる開示内容と矛盾する場合には、本明細書が矛盾内容に優先する。

一般に、本願に記載する細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子学並びにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用する命名法は当技術分野で広く使用されている周知のものである。特に指定しない限り、本願に記載する方法及び技術は、本明細書の随所で引用・論述する種々の一般資料及び特殊資料に記載されている当技術分野で周知の従来方法に従って一般に実施される。特に指定しない限り、酵素反応及び精製技術は製造業者の仕様に従い、当技術分野で広く実施されているように、又は本願に記載するように実施される。特に指定しない限り、本願に記載する分析化学、合成有機化学及び医薬化学に関連して使用する命名法とその実験手順・技術は、当技術分野で広く実施されている周知のものである。

表１はＡＢＢＶ−１８１におけるプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）に対する結合性タンパク質の全長重鎖配列、全長軽鎖配列及びＣＤＲ配列を示す。

表２は抗ｍｕＰＤ１（１７Ｄ２マウス化、ＶＨ２ｘＶＬ１ｘ）［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］ＤＡＮＡにおけるマウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）に対する結合性タンパク質の全長重鎖配列と全長軽鎖配列を示す。

表３は抗ｈｕＰＤ−Ｌ１ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］におけるマウスプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に対する結合性タンパク質の全長重鎖配列と全長軽鎖配列を示す。

表４はペムブロリズマブ、ニボルマブ又はセミプリマブにおけるプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）に対する結合性タンパク質と、アテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブにおけるプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に対する結合性タンパク質の全長重鎖配列と全長軽鎖配列を示す。

［配列表の簡単な説明］
本願に開示するアミノ酸配列を含む配列番号１〜配列番号６１から成る配列表に「１２４２８ＵＳＬ２ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」の表題を付け、その内容全体を本願に援用する。同配列表はＡＳＣＩＩテキストフォーマットでＥＦＳにより本願に添付して提出した。同配列表は２０１８年８月７日に最初に作成され、６０ＫＢのサイズである。

固形腫瘍細胞株への化合物（Ｉ）の投与
固形腫瘍細胞株はアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）又は米国国立がん研究所（ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ：ＮＣＩ）から入手し、３７℃（５％ＣＯ_２）の加湿インキュベーターで１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）又は１０％ヒト血清（ＨＳ）を添加した適当な培地（供給業者の仕様通り）にて培養した。９６ウェル又は３８４ウェル組織培養プレートに播種してから２４時間後に、ベネトクラクスを種々の濃度で細胞に加え（一般的に片対数スケールで０．０１０〜１０μＭ）、細胞殺傷の濃度応答評価を行った。ベネトクラクスの存在下で細胞を１〜５日間培養後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｒ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して細胞生存率を測定した。濃度応答データの非線形回帰分析によりＩＣ_５０値を求めた（表５及び表６）。表５及び６中、臨床的に適切な濃度のベネトクラクス投与に対して感受性を示した固形腫瘍細胞株はＮＣＩ−Ｈ２１１のみであった。

表５はヒト固形腫瘍細胞に対する化合物（Ｉ）の細胞殺傷能を示す。

表６はマウス固形腫瘍細胞に対する化合物（Ｉ）の細胞殺傷能を示す。

［実施例１］シンジェニック腫瘍モデルにおけるＢＨ３ミメティクス及びチェックポイント阻害剤抗体
全実験は実験動物ケア評価認証協会（ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔａｎｄＡｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣａｒｅ：ＡＡＡＬＡＣ）から認証を取得した施設で米国国立衛生研究所による実験動物の管理と使用に関する指針（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈＧｕｉｄｅｆｏｒＣａｒｅａｎｄＵｓｅｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌｓ）ガイドラインに従って実施した。ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＣＢ６Ｆ１（Ｃ５７ＢＬ／６とＢＡＬＢ／ｃの交配種）及びＳＣＩＤの各マウスはＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から入手した。ＳＣＩＤマウスは重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）を発症しており、機能的Ｔ細胞及びＢ細胞の欠損を特徴とする。

マウス乳腺がん細胞株であるＥＭＴ６とマウス結腸がん細胞株であるＣＴ２６はＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。マウス結腸がん細胞株であるＭＣ３８は米国国立がん研究所（ＮＣＩ）から入手した。

化合物（Ｉ）であるベネトクラクスを１０％エタノール＋３０％ＰＥＧ４００＋６０％Ｐｈｏｓａｌ（Ｒ）５０ＰＧで調剤した。ベネトクラクス５０ｍｇ／ｋｇ／日を１日１回１４日間経口投与した。マウス抗ＰＤ−１抗体（抗ｍｕＰＤ１（１７Ｄ２マウス化、ＶＨ２ｘＶＬ１ｘ）［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］ＤＡＮＡ）とマウス抗ＰＤ−Ｌ１抗体（抗ｈｕＰＤ−Ｌ１ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］）を１倍リン酸緩衝生理食塩水で調剤した。マウス抗ＰＤ−１抗体（抗ｍｕＰＤ１（１７Ｄ２マウス化、ＶＨ２ｘＶＬ１ｘ）［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］ＤＡＮＡ）又はマウス抗ＰＤ−Ｌ１抗体（抗ｈｕＰＤ−Ｌ１ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］）１０ｍｇ／ｋｇ／日を４日に１回腹腔内（ＩＰ）注射により３回投与した。

ＣＴ２６、ＥＭＴ６又はＭＣ３８細胞１×１０^５個を夫々ＢＡＬＢ／ｃ、ＣＢ６Ｆ１又はＣ５７ＢＬ／６マウスの脇腹にマトリゲルと共に皮下注射した。７日後にマウスを基剤投与群、ベネトクラクス投与群、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１投与群又はベネトクラクスと抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の組み合わせ投与群にランダムに分けた。電子キャリパーで腫瘍の長さ（Ｌ）と幅（Ｗ）を測定することにより腫瘍体積を求め、ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒＶｅｒｓｉｏｎ２．１．１１（ＳｔｕｄｙｌｏｇＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．，ＳｏｕｔｈＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ）を使用して次式：Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２に従って体積を計算した。少なくとも３回連続測定して腫瘍体積が≦２５ｍｍ^３まで減少している場合に完全奏効（ＣＲ）と定義した。

インビトロＴ細胞リコールアッセイでは、リンパ球と放射線照射腫瘍細胞の共培養液を使用し、抗原特異的記憶応答の機能を評価した。ＣＴ２６（抗原特異的応答）又はＥＭＴ６（陰性対照細胞株）細胞に２０００ラドの放射線を照射し、赤血球が溶血している脾細胞と１：１０の比で混合した。細胞を９６ウェルプレート（丸底）で４８時間インキュベートした。ＩＦＮγ分泌量を製造業者の推奨に従ってＥＬＩＳＡアッセイにより測定した（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）。

化合物（Ｉ）が免疫チェックポイント阻害剤の有効性を損なうか否かを判定するために、これらのチェックポイント阻害剤に対して明白で再現性の高い応答を生じることが実証されている多数の免疫適格マウスモデルでベネトクラクスを抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた（Ｍｏｓｅｌｙ，Ｓ．Ｉ．，Ｐｒｉｍｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｓａｉｎｓｏｎ，Ｒ．Ｃ．，Ｋｏｏｐｍａｎｎ，Ｊ．−Ｏ．，Ｗａｎｇ，Ｄ．Ｙ．Ｑ．，Ｇｒｅｅｎａｗａｌｔ，Ｄ．Ｍ．，Ａｈｄｅｓｍａｋｉ，Ｍ．Ｊ．，Ｌｅｙｌａｎｄ，Ｒ．，Ｍｕｌｌｉｎｓ，Ｓ．，Ｐａｃｅｌｌｉ，Ｌ．，Ｍａｒｃｕｓ，Ｄ．，Ａｎｄｅｒｔｏｎ，Ｊ．，Ｗａｔｋｉｎｓ，Ａ．，ＣｏａｔｅｓＵｌｒｉｃｈｓｅｎ，Ｊ．，Ｂｒｏｈａｗｎ，Ｐ．，Ｈｉｇｇｓ，Ｂ．Ｗ．，ＭｃＣｏｕｒｔ，Ｍ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｈ．，Ｈａｒｐｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｍｏｒｒｏｗ，Ｍ．，Ｖａｌｇｅ−Ａｒｃｈｅｒ，Ｖ．，Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｒ．，Ｄｏｖｅｄｉ，Ｓ．Ｊ．，Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ｒ．Ｗ．ＲａｔｉｏｎａｌＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＳｙｎｇｅｎｅｉｃＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌＴｕｍｏｒＭｏｄｅｌｓｆｏｒＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ．５；２９−４１（２０１７））。チェックポイント阻害剤による腫瘍増殖阻害又は応答率がベネトクラクスの添加により低下するならば、潜在的な拮抗作用があると判断される。パネルは固形腫瘍であるＣＴ２６、ＭＣ３８（いずれも大腸がん）及びＥＭＴ６（乳がん）のシンジェニックモデルから構成した。これらの腫瘍細胞株のうち、組織培養液中で臨床的に適切な濃度のベネトクラクスにより誘導したアポトーシスに対して感受性を示したものは皆無であった（図１）。同様に、ベネトクラクス５０ｍｇ／ｋｇを１４日間毎日単独投与したこれらのモデルでは、僅かな抗腫瘍活性しか認めることができなかった（図３、図６、図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ及び１２Ｄ）。ベネトクラクスはインビボでマウスＴ細胞集団の明白な減少をもたらした（図２Ａ、２Ｂ）が、メモリー細胞、特にエフェクターメモリー細胞の割合の増加を誘導し（図２Ｃ、２Ｄ）、試験したモデルのいずれにおいても抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の有効性を損なわなかった。むしろ、所定の場合にはそれらの有効性を強化した。

［実施例１Ａ］：化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体を組み合わせて投与したＣＴ２６モデル
ＣＴ２６モデルでは、抗ＰＤ−１抗体である抗ｍｕＰＤ１（１７Ｄ２マウス化、ＶＨ２ｘＶＬ１ｘ）［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］ＤＡＮＡを単独投与した場合に腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）は３２％であり、ベネトクラクスを単独投与した場合にＴＧＩは１６％であったが、抗ＰＤ−１とベネトクラクスを組み合わせて投与すると、ＴＧＩは４９％となった（抗ＰＤ−１アイソタイプ抗体を投与した対照投与群に対して１８日目にｐ＜０．０５）（図３Ａ）。抗ＰＤ−１抗体単独では完全奏効（ＣＲ）が得られなかったが、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１を組み合わせて投与すると、マウス１０匹のうちの３匹がＣＲを示した（図３Ｂ）。抗ＰＤ−１とベネトクラクスの組み合わせでＣＲを達成した全マウスは無腫瘍状態を維持した。腫瘍再増殖のエビデンスなしに３カ月経過後に、完全奏効マウスにＣＴ２６腫瘍細胞を再移植して免疫細胞に再チャレンジし、抗腫瘍免疫記憶応答を評価した。再チャレンジ後に、腫瘍生着のエビデンスを示したマウスは皆無であり、これらのマウスは免疫による腫瘍応答を誘発したことが明らかであり、抗腫瘍免疫記憶を獲得していることが実証された。対照として、ナイーブマウス５匹から成る別のグループにも同時にＣＴ２６細胞を移植し、移植から１０日後に測定した処、これらのマウスは１３７〜２９８ｍｍ^３のサイズの腫瘍を発生した。これらのマウスの免疫応答を評価するために、移植から１０日後に以下の３群のマウス、即ち（１）対照コホートとして使用するナイーブ（腫瘍をもたない）ＢＡＬＢ／ｃ、（２）一次ＣＴ２６腫瘍をもつマウス（上記）、及び（３）抗ＰＤ−１とベネトクラクスの組み合わせに完全奏効を示し、ＣＴ２６細胞を再移植した場合に無腫瘍状態を維持したマウス（上記）から脾臓を採取した。脾細胞のフローサイトメトリー解析の結果、ＣＴ２６を再移植した完全奏効マウス（グループ３）ではエフェクター記憶表現型（ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４４^＋）をもつＣＤ８^＋Ｔ細胞数の増加が認められた（図４）。

これらの脾細胞の活性化能を測定するために、実施例１Ａに記載するように、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激の不在下又は存在下で培養し、ＩＦＮγ分泌量によりＴ細胞活性化を測定した（図５Ａ）。グループ３の脾細胞から分泌されたＩＦＮγ量は対照群（１及び２）と同等であり、ベネトクラクスを抗ＰＤ−１と組み合わせて投与してもＴ細胞の長期活性化能に影響がないと判断された。抗原特異的リコール応答があったことを実証するために、全群のマウスに由来する脾細胞を放射線照射ＣＴ２６又はＥＭＴ６細胞と共培養した。放射線照射ＣＴ２６腫瘍細胞株と共培養したグループ３に由来する脾細胞のみがＩＦＮγを産生し、ＥＭＴ６腫瘍細胞株と共培養してもＩＦＮγは産生されず（図５Ｂ）、免疫応答の特異性が注目された。

ＣＴ２６に対するインビトロ再チャレンジ応答でＣＤ８^＋エフェクターメモリー細胞数が増加し、ＣＤ８^＋Ｔ細胞によりＩＦＮγが産生されたことは、腫瘍に対するリコール免疫応答に一致している。重要な点として、これらのデータによると、ベネトクラクスは抗ＰＤ−１抗体の免疫による抗腫瘍活性を予想外に亢進させ、ベネトクラクスは抗腫瘍免疫応答に関与するメモリーＴ細胞集団に負の影響を与えなかった。

［実施例１Ｂ］化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体を組み合わせて投与したＥＭＴ６モデル
乳がんのＥＭＴ６モデルでは、ベネトクラクスは単独では活性が低かったが、この場合も抗ＰＤ−Ｌ１抗体である抗ｈｕＰＤ−Ｌ１ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］と組み合わせると、完全奏効例数が増加した（抗ＰＤ−Ｌ１単独ではＣＲ３例に対して抗ＰＤ−Ｌ１とベネトクラクスの組み合わせではＣＲ９例）（図６）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独では、ＴＧＩは８９％であり、抗ＰＤ−Ｌ１とベネトクラクスの組み合わせではＴＧＩは９４％であった（いずれも２５日目に基剤に対してｐ＜０．０５）。

［実施例１Ｃ］化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を組み合わせて投与したＭＣ３８モデル
結腸がんのＭＣ３８モデルでは、ベネトクラクス、抗ＰＤ−１抗体として抗ｍｕＰＤ１（１７Ｄ２マウス化、ＶＨ２ｘＶＬ１ｘ）［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］ＤＡＮＡ又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体として抗ｈｕＰＤ−Ｌ１ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０［ｍｕＩｇＧ２ａ／ｋ］を単独投与すると、ＴＧＩは夫々４１％、３２％及び４５％であったが、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体とベネトクラクスを組み合わせると、ＴＧＩは夫々７３％又は８０％となった（２５日目に抗ＰＤ−１とベネトクラクスの組み合わせでは基剤対照に対してｐ＜０．０１；抗ＰＤ−Ｌ１との組み合わせでは対照に対してｐ＜０．０００１、抗ＰＤ−Ｌ１単独療法に対してｐ＜０．０１）（図１２Ａ及びＣ）。

抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独で完全奏効が得られたのは、夫々マウス１０匹のうちの１匹と０匹であったが、ベネトクラクスと抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１を組み合わせて投与した場合には、夫々１０匹のうちの２匹と１０匹のうちの６匹がＣＲを示した（図１２Ｂ及び１２Ｄ）。ＣＲを達成した全マウスは無腫瘍状態を維持した。腫瘍再増殖のエビデンスなしに３カ月超経過後に、完全奏効マウスにＭＣ３８腫瘍細胞を再移植して免疫細胞に再チャレンジし、抗腫瘍免疫記憶応答を評価した。再チャレンジ後に、腫瘍生着のエビデンスを示したマウスは皆無であり、これらのマウスは免疫による腫瘍応答を誘発したことが明らかであり、抗腫瘍免疫記憶を獲得していることが実証された。

免疫細胞に及ぼすベネトクラクスの直接効果を更に試験するために、ＳＣＩＤマウスにＭＣ３８細胞を移植し、基剤又は抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ベネトクラクスを単剤及び組み合わせて投与した（図１２Ｅ及び１２Ｆ）。予想通り、抗ＰＤ−１と抗ＰＤ−Ｌ１を投与したＳＣＩＤマウスにおける腫瘍増殖は基剤対照と同様であった。抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１と同様に、免疫欠損マウスにベネトクラクスを単剤として投与した場合及びこれらの抗体と組み合わせて投与した場合にも抗腫瘍効果を示さず、腫瘍細胞自体に何ら影響がないことが分かり、ＭＣ３８モデルで免疫応答を調節するのにベネトクラクスが加担していることが注目された。

［実施例２］ベネトクラクスに対するヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）又はマウス脾細胞のインビトロ感受性
ヒトＰＢＭＣを解凍し、インターロイキン２（ＩＬ−２）３０Ｕ／ｍＬ中で一晩培養した。細胞を回収し、完全培地で１回洗浄し、計数した。ＰＢＭＣを４８ウェルプレートに３０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２と共にウェル当たり５×１０^５個の密度で播種した。Ｔ細胞を刺激するために、抗ＣＤ３をコーティングしたウェル（２．５μｇ／ｍＬ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号１６−００３７−８５、クローンＯＫＴ３）に細胞を播種し、可溶性抗ＣＤ２８を加えた（１μｇ／ｍＬ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号１６−０２８９−８５、クローンＣＤ２８．２）。ベネトクラクスの濃度を上げながら細胞に２４時間投与した（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を対照として使用した）。細胞を回収し、染色し、ＢＤＬＳＲＩＩ機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してフローサイトメトリー解析に供した。

マウス脾細胞を３０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２と共に４８ウェルプレートにウェル当たり５×１０^５個の密度で播種した。細胞を２４時間培養した後、ベネトクラクスの濃度を上げながら更に２４時間加えた（ＤＭＳＯを対照として使用した）。細胞を回収し、染色し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＴＭ）Ｘ−２０機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してフローサイトメトリー解析に供した。

シンジェニック腫瘍試験によると、化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）はこれらのモデルで有意量の直接腫瘍細胞殺傷に介在していないようであるが、チェックポイント阻害剤の存在下で有効性強化に寄与していると判断された。有効性強化の潜在的メカニズムを解明するために、インビトロ試験を実施し、Ｔ細胞サブセット、Ｔ細胞活性化及びＴ細胞機能に焦点を絞ってＴ細胞を更に特性解析した（実施例２、３及び４）。

ヒトＰＢＭＣを７２時間培養した後、（非刺激条件下で）ベネトクラクスを投与すると、Ｂ細胞及びＴ細胞（ＣＤ４^＋細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞）数の用量依存的減少が認められた（図７Ａ）。一方、ベネトクラクスを投与する前にＰＢＭＣを抗ＣＤ３と抗ＣＤ２８で７２時間刺激すると、Ｔ細胞はベネトクラクスに対して非感受性であった（図７Ｂ）。ナイーブＴ細胞（ＣＤ４^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＯ⁻及びＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＯ⁻）はベネトクラクス濃度の上昇と共に減少したが、生存Ｔ細胞数に対するＣＤ４^＋セントラルメモリー細胞（ＴＣＭ；ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋）の割合と、ＣＤ８^＋終末分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ；ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４５ＲＯ⁻）の割合と、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ；ＣＤ８^＋ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４５ＲＯ^＋）の割合は増加した（図８Ａ及び８Ｃ）。ＣＤ３／ＣＤ２８刺激条件下で、ベネトクラクスはＴ細胞サブセットの割合に影響を与えなかった（図８Ｂ及び８Ｄ）。別の実験で、ヒトＰＢＭＣを解凍し、一晩放置した後にベネトクラクスを２４時間投与した。試験サンブル数を増やし（ｎ＝ドナー９人）、種々のＴ細胞サブセット、即ちナイーブＴ細胞（ＴＮ；ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ＋）、セントラルメモリー細胞（ＴＣＭ；ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ−）、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ；ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ４５ＲＡ−）及び終末分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ；ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ４５ＲＡ＋）のマーカーを精査した場合にも同様の結果が認められた（図８Ｅ、８Ｆ、８Ｇ）。ベネトクラクスはナイーブＴ細胞の割合を減少させるが、メモリー細胞の割合は減少させず、特にエフェクターメモリーＴ細胞の増加を誘導する。従って、ナイーブＴ細胞及びＢ細胞はベネトクラクスに感受性であったが、メモリーＴ細胞はベネトクラクスに対する感受性が低いと言うことができる。ＴＣＭ細胞はリンパ節にホーミングし、樹状細胞を効率的に刺激するが、ＴＥＭ細胞とＴＥＭＲＡ細胞は抗原に曝露された細胞から構成される組織にホーミングし、腫瘍を殺傷するために必要な迅速なエフェクター機能と細胞傷害性機能に介在する態勢を整える。

マウスにおける免疫調節メカニズムを更に解明するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスとＣ５７ＢＬ／６マウスに由来する脾細胞にベネトクラクスを２４時間インビトロで投与した。マウスにおける２種類のメモリーＴ細胞はセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ；ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４４⁻）とエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ；ＣＤ６２Ｌ⁻ＣＤ４４⁻）である。ナイーブＴ細胞（ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４４⁻）はベネトクラクスに感受性であったが、エフェクターメモリーＴ細胞はそうではなく、重要な点として、生存Ｔ細胞に対するそれらの割合はベネトクラクス濃度の上昇と共に増加した。セントラルメモリーＴ細胞はこれらの実験条件下でベネトクラクスにより影響を受けなかった（図９）。

総合すると、メモリーＴ細胞はヒトＰＢＭＣ及びマウス脾細胞中のナイーブＴ細胞よりもインビトロベネトクラクス投与に対する耐性が高い。メモリーＴ細胞はがん細胞を排除するためにエフェクター機能と細胞傷害性機能を迅速に獲得することができるので、ベネトクラクスによる免疫系の調節はがん免疫療法にベネトクラクスを利用できることを実証するものである。

［実施例３］サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイ
２種類のアプローチを使用してＴ細胞活性化に及ぼす化合物（Ｉ）の機能的効果を評価し、１）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイ（実施例３）では、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞をＣＭＶ抗原で再刺激し、２）リンパ球混合培養反応（ＭＬＲ；実施例４）では、あるドナーに由来する単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）を別のドナーに由来するＴ細胞と共培養した。

［実施例３Ａ］ヒトＣＭＶ＋ＰＢＭＣを使用したＣＭＶリコールアッセイ
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイを使用し、抗原特異的免疫細胞に及ぼす化合物（Ｉ）の機能的効果を評価した。本アッセイはＣＭＶ陽性ヒトＰＢＭＣ中の既存のメモリーＴ細胞を刺激するためにＣＭＶ抗原を使用した。ヒトＣＭＶ陽性ＰＢＭＣとＣＭＶ抗原はＡｓｔａｒｔｅＢｉｏｌｏｇｉｃｓから購入した（夫々カタログ番号１００１及びカタログ番号１００４）。ＣＭＶ陽性ドナーに由来するＴ細胞が機能的に活性であるか否かを判定するために、ＣＭＶ陽性ＰＢＭＣ２×１０^５個をＣＭＶ抗原０．０５μｇ／ｍＬで刺激し、同時にベネトクラクスを加えた。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したロズウェルパーク記念研究所（ＲｏｓｗｅｌｌＰａｒｋＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ：ＲＰＭＩ）培地で細胞を培養した。４日目に細胞をホルボール１２−ミリスタート−１３−アセタート（ＰＭＡ，０．０８μＭ）／イオノマイシン（１．３μＭ）で素早く再刺激し、ブレフェルジンＡ（５μｇ／ｍＬ）を４時間投与した。細胞を以下の市販抗体、即ちＣＤ３、ＣＤ４、ＩＦＮγ及びＩＬ−２（いずれもＢｉｏｌｅｇｅｎｄ製品）と、固定可能な生存率キットであるＺｏｍｂｉｅＧｒｅｅｎ（ＴＭ）で染色した。ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＴＭ）Ｘ−２０機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞を解析した。

化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）は総リンパ球数を用量依存的に減少させ、上記実施例に一致した（図１０Ａ）。残りの生細胞をＣＤ３及びＣＤ４発現によりゲーティングし、ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋細胞をＣＤ４^＋Ｔ細胞とみなし、ＣＤ３^＋ＣＤ４⁻細胞をＣＤ８^＋Ｔ細胞とみなした。ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮγ及びＩＬ−２サイトカインの産生をフローサイトメトリーにより評価した（図１０Ｂ、１０Ｃ）。

ベネトクラクス投与は生存可能なＴ細胞の用量依存的な減少をもたらしたが、ＩＦＮγ（図１０Ｂ）及びＩＬ−２（図１０Ｃ）の産生量の平均蛍光強度（ＭＦＩ）により測定した場合に、残存するＴ細胞活性化は相応して用量依存的に反比例して増加することが認められた。これらのデータによると、ベネトクラクスは抗原特異的に活性化されたＴ細胞からのＩＦＮγ産生に単独では影響を与えないと判断される。

［実施例３Ｂ］抗ＰＤ−１抗体の存在下におけるＣＭＶリコールアッセイ
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）リコールアッセイを使用し、抗原に曝露された免疫細胞に及ぼすベネトクラクスの機能的効果を評価すると共に、抗ＰＤ１免疫応答に及ぼすベネトクラクスの効果を評価した。本アッセイはＣＭＶ陽性ヒトＰＢＭＣ中の既存のメモリーＴ細胞を刺激するためにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原を使用した。ヒトＣＭＶ陽性ＰＢＭＣ（カタログ番号１００１；ロット番号３６３４ＪＹ１７）とＣＭＶ抗原（カタログ番号１００４）はＡｓｔａｒｔｅＢｉｏｌｏｇｉｃｓから購入した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）と１％抗生物質を添加したロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ）培地で阻害剤の存在下又は不在下と、抗ＰＤ−１（ニボルマブ）の存在下又は不在下にＣＭＶ陽性ＰＢＭＣ２×１０^５個をＣＭＶ抗原１μｇ／ｍＬで刺激した。４日目にＩＦＮγ分泌量をＥＬＩＳＡにより測定し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＴＭ）Ｘ−２０機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して生死染色ＺｏｍｂｉｅＧｒｅｅｎ（ＴＭ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｒ））により生細胞を解析した。ＤＭＳＯを単剤使用又はニボルマブと組み合わせた場合に比較してベネトクラクスは生細胞の百分率を低下させた（図１０Ｄ）。一方、抗原特異的ＣＭＶ＋Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌量はＤＭＳＯ対照と同等のままであり、ベネトクラクスをニボルマブと組み合わせても抗ＰＤ−１応答に影響はなかった（図１０Ｅ）。

［実施例３Ｃ］ＣＭＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）特異的アッセイを使用し、抗原に曝露されたＣＤ８Ｔ細胞に及ぼすベネトクラクスの効果を評価した。本アッセイはＣＭＶ陽性ＣＤ８Ｔ細胞を刺激するためにＣＭＶペプチドｐｐ６５（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ、配列番号５３）を使用し、ＭＡＲＴ（ＥＬＡＧＩＧＩＬＴＶ）ペプチドを陰性対照として使用した。ヒトＣＭＶ陽性ＣＤ８Ｔ細胞とＣＭＶペプチドｐｐ６５はＡｓｔａｒｔｅＢｉｏｌｏｇｉｃｓから購入し、ＭＡＲＴペプチドはＧｅｎｓｃｒｉｐｔから購入した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ培地でブレフェルジンＡの存在下にＣＭＶｐｐ６５ペプチド又はＭＡＲＴペプチド（ペプチド２．５μｇ／ｍｌ）を接種したＴ２細胞２×１０^５個でＣＭＶ陽性ＣＤ８Ｔ細胞２×１０^５個を刺激した。上清中のＩＦＮγ分泌量を測定するために、ＣＭＶｐｐ６５ペプチド又はＭＡＲＴペプチドを接種したＴ２細胞でＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞を活性化させ、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ培地でベネトクラクスの存在下でブレフェルジンＡの不在下にインキュベートした。ベネトクラクスの存在下で一晩（１２〜１４時間）インキュベーション後に、以下の抗体、即ちＣＤ３、ＣＤ８及びＩＦＮγ（いずれもＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製品）と、固定可能な生存率キットであるＺｏｍｂｉｅＧｒｅｅｎ（ＴＭ）で染色した。ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＴＭ）Ｘ−２０機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞を解析した。上清中のＩＦＮγ分泌量をＥＬＩＳＡにより測定した。

ＣＭＶｐｐ６５ペプチド（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ）を接種したＴ２細胞によりＣＭＶ＋ＣＤ８Ｔ細胞を活性化させ、（上記のようにフローサイトメトリー及びＥＬＩＳＡにより）ＩＦＮγの細胞内産生量と分泌量を測定することによりこれらの細胞の機能に及ぼすベネトクラクスの効果を評価した。対照として、ペプチドを接種していないＴ２細胞又は（陰性対照として使用した）対照ペプチドＭＡＲＴを接種したＴ２細胞と共にＣＭＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞をインキュベートした。図１０Ｆに示すように、ベネトクラクスを投与すると、ＣＤ８Ｔ細胞数は減少した。一方、フローサイトメトリー解析とＩＦＮγ分泌量（夫々図１０Ｇ及び１０Ｈ）により測定した場合に、ベネトクラクス投与後に生存していた細胞はＤＭＳＯ対照と同等量のＩＦＮγを産生した。抗原特異的Ｔ細胞は抗腫瘍免疫応答に重要である。抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシスは抗腫瘍応答を低下させることがＨｏｒｔｏｎらにより最近報告されている（Ｈｏｒｔｏｎ，Ｂ．Ｌ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｂ．，Ｃａｂａｎｏｖ，Ａ．，Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．ａｎｄＧａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．ＩｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌＣＤ８＋Ｔ−ｃｅｌｌＡｐｏｐｔｏｓｉｓＩｓａＭａｊｏｒＣｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＴ−ｃｅｌｌＤｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｐｅｄｅｓＡｎｔｉｔｕｍｏｒＩｍｍｕｎｉｔｙ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ，６（１），１４−２４（２０１８））。この結果、ベネトクラクスは抗原特異的免疫応答の機能にも、抗原特異的Ｔ細胞に対する抗ＰＤ−１活性にも影響を与えていないことが明らかである。

［実施例４］リンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）アッセイ
リンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）アッセイを使用し、ベネトクラクスが免疫刺激に応答してＴ細胞機能に及ぼす効果を試験した。新鮮なヒト血液から単球由来樹状細胞（ＭｏＤＣ）を作製した。Ｆｉｃｏｌｌグラジエント法を使用してＰＢＭＣを単離した。ＰＢＭＣを２時間接着させた。２時間後に懸濁液中の細胞を除去した。顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ、８０ｎｇ／ｍＬ）とＩＬ−４（５０ｎｇ／ｍＬ）を添加した新鮮なＡＩＭＶ（ＴＭ）培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号１２０５５０９１）を培養液に加えた。５日後に、ＭｏＤＣをＩＬ−１αとＴＮＦ−α（各々０．２ｎｇ／ｍＬ）で４８時間刺激し、主要組織適合性複合体クラスＩＩ分子（ＭＨＣＩＩ）発現を亢進させた。これらの活性化ＭｏＤＣを次にリンパ球混合培養反応（ＭＬＲ）でＣＤ４Ｔ細胞（ＢｉｏｓｐｅｃｉａｌｔｙＣｏｒｐ．）と１０：１（Ｔ細胞：ＭｏＤＣ）の比で共培養した。細胞に対照ＩｇＧ（アイソタイプ）を投与すると共に、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ又はＡＢＢＶ−１８１）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）又はＢＣＬ−２阻害剤であるベネトクラクス（化合物（Ｉ））若しくは化合物（ＩＩ）若しくは化合物（ＩＩＩ）と組み合わせて投与した。抗体添加量は１０μｇ／ｍＬとし、ベネトクラクスの化合物濃度は図１１に示す通りとした。ＭＬＲを５日間培養した後、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＴＭ）Ｘ−２０機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してフローサイトメトリーにより細胞を解析し、細胞数と機能的サイトカイン（ＩＦＮγ）応答を求めた。

ＭＬＲ実験で明らかなように、従来実証されている通り（Ｗａｎｇ，Ｃ．，Ｔｈｕｄｉｕｍ，Ｋ．Ｂ．，Ｈａｎ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．Ｔ．，Ｈｕａｎｇ，Ｈ．，Ｆｅｉｎｇｅｒｓｈ，Ｄ．，Ｇａｒｃｉａ，Ｃ．，Ｗｕ，Ｙ．，Ｋｕｈｎｅ，Ｍ．，Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ，Ｍ．，Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．，Ｗｏｎｇ，Ｓ．，Ｇａｒｎｅｒ，Ｎ．，Ｌｅｂｌａｎｃ，Ｈ．，Ｂｕｎｃｈ，ＲＴ．，Ｂｌａｎｓｅｔ，Ｄ．，Ｓｅｌｂｙ，Ｍ．Ｊ．，Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ＩｎＶｉｔｒｏＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｎｔｉ−ＰＤ−１ＡｎｔｉｂｏｄｙＮｉｖｏｌｕｍａｂ，ＢＭＳ−９３６５５８，ａｎｄＩｎＶｉｖｏＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙｉｎＮｏｎ−ＨｕｍａｎＰｒｉｍａｔｅｓ．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ．２（９）：８４６−５６（２０１４））、抗ＰＤ−１抗体であるニボルマブはＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の細胞数と割合のいずれも増加させた（図１１Ｂを図１１Ａと比較し、図１１Ｄを図１１Ｃと比較されたい）。ベネトクラクスはＣＤ４^＋Ｔ細胞数を用量依存的に減少させた（図１１Ａ及びＢ）。一方、ベネトクラクスをアイソタイプ対照又は抗ＰＤ−１抗体と共に加えると、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合は増加する（図１１Ｃ及びＤ）。代表的なフローサイトメトリーデータも示す（図１１Ｅ及び１１Ｆ）。更に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞数は減少するが、上清中に同量のＩＦＮγが検出された（図１１Ｈ）。

更に、抗ＰＤ−１抗体の不在下又は抗ＰＤ−１抗体であるニボルマブ若しくはＡＢＢＶ−１８１の存在下で化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）及び化合物（ＩＩＩ）（いずれも１μＭ）を使用してアッセイを実施した。その結果、ＢＣＬ−２阻害剤を投与した場合でも、どのＢＣＬ−２阻害剤を抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与した場合でも、ＣＤ３^＋Ｔ細胞数は同等に減少することが分かった（図１１Ｇ）。ＢＣＬ−２阻害剤を単独で加えた場合又は抗ＰＤ−１抗体と共に加えた場合には、ＩＦＮγを産生するＣＤ３^＋Ｔ細胞の割合の増加が認められた（図１１Ｈ）。ＢＣＬ−２阻害剤のいずれを単独で使用しても、抗ＰＤ−１抗体のいずれと組み合わせても、ＩＦＮγの産生は損なわれないことが再び実証された（図１１Ｉ）。

［実施例５］ヒト対象においてＴ細胞サブセットに及ぼすベネトクラクスの効果
ＡｂｂＶｉｅ社の主催による臨床試験で、健康なボランティアに化合物（Ｉ）（ベネトクラクス）１００ｍｇを１回又は化合物（Ｉ）１００ｍｇを送達するのと等価用量の化合物（ＩＶ）を固形製剤として投与した。投与の１日前と７日後に末梢血中のＴ細胞サブセットをフローサイトメトリーにより測定した。試験した対象の大半では、どちらを投与後も、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔエフェクターメモリー細胞の割合と終末分化エフェクターメモリー細胞の割合は増加し、ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞の割合は変化しないか又は減少し、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞の割合は低下した（表７及び図１３）。本発明者らはベネトクラクスが主にナイーブＴ細胞に影響を与え、エフェクターメモリー細胞の増加をもたらすことを前臨床モデルで確認したが、ヒト対象におけるこのデータはこの知見を裏付けている。

以上のデータによると、ベネトクラクスは当初考えられていたように抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の免疫による抗腫瘍活性を損なわないばかりか、シンジェニック／免疫適格マウスモデルにおいてそれらの有効性を強化することが明らかである。更に、腫瘍再チャレンジ実験により実証されるように、ベネトクラクス投与は抗腫瘍記憶の樹立を妨げないばかりか、ベネトクラクス投与に応答性の対象は抗腫瘍記憶を発現する。複数の機能的ヒトＴ細胞活性化アッセイ（ＭＬＲ及びＣＭＶリコール）で得られたデータによると、ベネトクラクスの有益な効果は生存Ｔ細胞の活性化を強化できることに起因すると考えられる。更に、これらのデータは固形腫瘍に対する予想外の抗腫瘍活性を示した。総合すると、これらの予想外の結果から、ベネトクラクスには固形腫瘍を含むがんの治療において従来予期しなかった用途があると考えられる。

Claims

血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はそのプロドラッグ若しくは薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む、前記方法。
血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）

又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む、請求項１に記載の方法。
血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）

又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１に記載の方法。
血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１に記載の方法。
前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である、請求項４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７を含む重鎖配列及び配列番号８を含む軽鎖配列を有する、請求項４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９を含む重鎖配列及び配列番号１０を含む軽鎖配列を有する、請求項４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１を含む重鎖配列及び配列番号２を含む軽鎖配列を有する、請求項４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４を含む重鎖配列及び配列番号５５を含む軽鎖配列を有する、請求項４に記載の方法。
血液がんの治療を必要とする対象における血液がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１に記載の方法。
前記血液がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項１１に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである、請求項１１に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１を含む重鎖配列及び配列番号１２を含む軽鎖配列を有する、請求項１１に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３を含む重鎖配列及び配列番号１４を含む軽鎖配列を有する、請求項１１に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５を含む重鎖配列及び配列番号１６を含む軽鎖配列を有する、請求項１１に記載の方法。
固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の選択的ＢＣＬ−２阻害剤又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む、前記方法。
固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）、化合物（ＩＩＩ）若しくは化合物（ＩＶ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１７に記載の方法。
固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１７に記載の方法。
前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである、請求項２０に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ又はＡＢＢＶ−１８１である、請求項２０に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号７を含む重鎖配列及び配列番号８を含む軽鎖配列を有する、請求項２０に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号９を含む重鎖配列及び配列番号１０を含む軽鎖配列を有する、請求項２０に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号１を含む重鎖配列及び配列番号２を含む軽鎖配列を有する、請求項２０に記載の方法。
前記抗ＰＤ−１抗体が、配列番号５４を含む重鎖配列及び配列番号５５を含む軽鎖配列を有する、請求項２０に記載の方法。
固形腫瘍がんの治療を必要とする対象における固形腫瘍がんの治療方法であって、前記対象に有効量の抗ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）抗体を有効量の化合物（Ｉ）又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与することを含み、化合物（Ｉ）がベネトクラクスである、請求項１７に記載の方法。
前記固形腫瘍がんが、非小細胞肺がん、胃がん、メラノーマ、高頻度マイクロサテライト不安定性がん、頭頚部扁平上皮がん、転移性皮膚扁平上皮がん、局所進行皮膚扁平上皮がん、尿路上皮・膀胱がん、大腸がん、肝臓がん、腎細胞がん、乳がん、子宮頸がん又はメルケル細胞がんである、請求項２７に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである、請求項２７に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１１を含む重鎖配列及び配列番号１２を含む軽鎖配列を有する、請求項２７に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１３を含む重鎖配列及び配列番号１４を含む軽鎖配列を有する、請求項２７に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５を含む重鎖配列及び配列番号１６を含む軽鎖配列を有する、請求項２７に記載の方法。