JP2021116244A - 高純度プロタミン硫酸塩 - Google Patents
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Abstract
【課題】医薬品、食品あるいは化粧品等に利用することができる、高純度のプロタミン硫酸塩の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を有するペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ、及びペプチドＤを主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を特定のＨＰＬＣで分析した場合に、式：相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。【選択図】なし
Description
本発明は、プロタミン硫酸塩に関する。本発明によれば、高純度のプロタミン硫酸塩を医薬品、食品あるいは化粧品等に利用することができる。
プロタミンは、ニシンやサケ等の魚類やニワトリなどの脊椎動物の成熟精子核中に存在している分子量４０００〜８５００Ｄａの塩基性蛋白質であり、医薬品、あるいは食品、化粧料等の抗菌剤として世界的に利用されている。特に医薬品では、ヘパリン拮抗薬、又はインスリン作用を持続させるためのインスリン製剤中の添加剤として使用されている（特許文献１、非特許文献１）。
「プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピューリフィケーション（Protein Expression And Purification）」（米国）１９９０年、第１巻、ｐ．１２７−１３３
本発明の目的は、医薬品に用いることのできる高純度のプロタミン硫酸塩を提供することである。
本発明者は、医薬品に用いることのできる高純度のプロタミン硫酸塩について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、４つの主要成分と副成分とを含むプロタミン硫酸塩が高純度であり、医薬品用のプロタミン硫酸塩として有用であることを見出した。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、
［１］配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、
前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を下記ＨＰＬＣ条件で分析した場合に
下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度、
［２］前記プロタミン硫酸塩が、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺを含む、［１］に記載のプロタミン硫酸塩、
［３］前記ペプチドＹが、配列番号５で表されるアミノ酸を含むペプチドである、［１］又は［２］に記載のプロタミン硫酸塩、
［４］前記プロタミン硫酸塩が、サケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である、［１］〜［３］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
［５］前記サケ目（Salmoniformes）に属する魚種が、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、及びこれらの人工交配種である、［１］〜［４］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、及び
［６］前記ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が９８％以上である、［１］〜［５］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
に関する。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、
［１］配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、
前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を下記ＨＰＬＣ条件で分析した場合に
下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。
（ＨＰＬＣ条件）
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移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度、
［２］前記プロタミン硫酸塩が、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺを含む、［１］に記載のプロタミン硫酸塩、
［３］前記ペプチドＹが、配列番号５で表されるアミノ酸を含むペプチドである、［１］又は［２］に記載のプロタミン硫酸塩、
［４］前記プロタミン硫酸塩が、サケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である、［１］〜［３］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
［５］前記サケ目（Salmoniformes）に属する魚種が、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、及びこれらの人工交配種である、［１］〜［４］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、及び
［６］前記ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が９８％以上である、［１］〜［５］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
に関する。
本発明のプロタミン硫酸塩は、高純度であるために、ヘパリン拮抗薬又はインスリン製剤中の添加剤として、安定して、そして安全に用いることができる。
本発明のプロタミン硫酸塩は、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、そして更に少なくとも１つの副成分を含む。前記副成分は、プロタミン硫酸塩を特定のＨＰＬＣ条件で分析した場合に、下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである。
プロタミン硫酸塩は、アルギニンを多く含む、分子量４０００〜５０００Ｄａの高塩基性タンパク質の混合物であり、４つの主要成分と、１又は複数の副成分とを含む。
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである。
プロタミン硫酸塩は、アルギニンを多く含む、分子量４０００〜５０００Ｄａの高塩基性タンパク質の混合物であり、４つの主要成分と、１又は複数の副成分とを含む。
《主要成分》
本発明のプロタミン硫酸塩の主要成分は、「ＰＲＲＲＲＲＳＳＳＲ ＰＩＲＲＲＲＲＰＲＡ ＳＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号１）のアミノ酸配列を有するペプチドＡ、「ＰＲＲＲＲＳＳＲＲＰ ＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳ ＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号２）のアミノ酸配列を有するペプチドＢ、「ＰＲＲＲＲＳＳＳＲＰ ＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳ ＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号３）のアミノ酸配列を有するペプチドＣ、及び「ＰＲＲＲＲＡＳＲＲＩ ＲＲＲＲＲＰＲＶＳＲ ＲＲＲＲＧＧＲＲＲＲ」（配列番号４）のアミノ酸配列を有するペプチドＤである。
各ペプチドの含有量は、限定されるものではないが、ペプチドＢの含有量が最も多く、ペプチドＣ及びペプチドＤの含有量が同程度であり、ペプチドＡの含有量が最も少ない。
本発明のプロタミン硫酸塩の主要成分は、「ＰＲＲＲＲＲＳＳＳＲ ＰＩＲＲＲＲＲＰＲＡ ＳＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号１）のアミノ酸配列を有するペプチドＡ、「ＰＲＲＲＲＳＳＲＲＰ ＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳ ＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号２）のアミノ酸配列を有するペプチドＢ、「ＰＲＲＲＲＳＳＳＲＰ ＶＲＲＲＲＲＰＲＶＳ ＲＲＲＲＲＲＧＧＲＲ ＲＲ」（配列番号３）のアミノ酸配列を有するペプチドＣ、及び「ＰＲＲＲＲＡＳＲＲＩ ＲＲＲＲＲＰＲＶＳＲ ＲＲＲＲＧＧＲＲＲＲ」（配列番号４）のアミノ酸配列を有するペプチドＤである。
各ペプチドの含有量は、限定されるものではないが、ペプチドＢの含有量が最も多く、ペプチドＣ及びペプチドＤの含有量が同程度であり、ペプチドＡの含有量が最も少ない。
《副成分》
本発明のプロタミン硫酸塩の副成分は、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドである。ペプチドＴ〜Ｚの分子量は、約４０００〜５０００Ｄａである。
本発明のプロタミン硫酸塩は、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺのうちの、１つのペプチドを含んでもよく、任意の２つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の３つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の４つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の５つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の６つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、７つのペプチドの組み合わせを含んでもよいが、７つのペプチドの組み合わせを含むプロタミン硫酸塩が最も好ましい。
また、ペプチドＸは、（Ｓ／Ｐ）ＲＲ（Ｒ／Ｉ／Ｖ）ＸＡ（Ｓ／Ｇ）ＧＲ（Ｐ／Ｉ）ＲＶＳＲＲＰＲＶ（Ｇ／Ｖ）ＧＲＲＲＸ（Ｇ／Ｒ）ＧＧＲ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むペプチドである。
本発明のプロタミン硫酸塩の副成分は、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドである。ペプチドＴ〜Ｚの分子量は、約４０００〜５０００Ｄａである。
本発明のプロタミン硫酸塩は、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺのうちの、１つのペプチドを含んでもよく、任意の２つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の３つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の４つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の５つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、任意の６つのペプチドの組み合わせを含んでもよく、７つのペプチドの組み合わせを含んでもよいが、７つのペプチドの組み合わせを含むプロタミン硫酸塩が最も好ましい。
また、ペプチドＸは、（Ｓ／Ｐ）ＲＲ（Ｒ／Ｉ／Ｖ）ＸＡ（Ｓ／Ｇ）ＧＲ（Ｐ／Ｉ）ＲＶＳＲＲＰＲＶ（Ｇ／Ｖ）ＧＲＲＲＸ（Ｇ／Ｒ）ＧＧＲ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むペプチドである。
本発明のプロタミン硫酸塩は、特に限定されるものではないが、ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９８．５％以上であり、更に好ましくは９９％以上であり、最も好ましくは９９．５％以上である。
ペプチドＡの含有量は限定されるものではないが、１２．６４〜１６．８４％であり、ペプチドＢの含有量は限定されるものではないが、２８．６９〜３８．１２％であり、ペプチドＣの含有量は限定されるものではないが、２１．４５〜２６．２２％であり、ペプチドＤの含有量は限定されるものではないが、１９．６９〜２４．５０％であり、ペプチドＴの含有量は限定されるものではないが、３．２７％以下であり、ペプチドＵの含有量は限定されるものではないが、１．８５％以下であり、ペプチドＶの含有量は限定されるものではないが、２．３６％以下であり、ペプチドの含有量は限定されるものではないが、２．７５％以下であり、ペプチドＸの含有量は限定されるものではないが、２．３１％以下であり、ペプチドＹの含有量は限定されるものではないが、０．７６％以下であり、そしてペプチドＺの含有量は限定されるものではないが、１．６６％以下である。
ペプチドＡの含有量は限定されるものではないが、１２．６４〜１６．８４％であり、ペプチドＢの含有量は限定されるものではないが、２８．６９〜３８．１２％であり、ペプチドＣの含有量は限定されるものではないが、２１．４５〜２６．２２％であり、ペプチドＤの含有量は限定されるものではないが、１９．６９〜２４．５０％であり、ペプチドＴの含有量は限定されるものではないが、３．２７％以下であり、ペプチドＵの含有量は限定されるものではないが、１．８５％以下であり、ペプチドＶの含有量は限定されるものではないが、２．３６％以下であり、ペプチドの含有量は限定されるものではないが、２．７５％以下であり、ペプチドＸの含有量は限定されるものではないが、２．３１％以下であり、ペプチドＹの含有量は限定されるものではないが、０．７６％以下であり、そしてペプチドＺの含有量は限定されるものではないが、１．６６％以下である。
《ＨＰＬＣにおける各ペプチドのリテンションタイム》
主要成分及び副成分のＨＰＬＣ分析時のリテンションタイムは、下記のＨＰＬＣ条件で得ることができる。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度
主要成分及び副成分のＨＰＬＣ分析時のリテンションタイムは、下記のＨＰＬＣ条件で得ることができる。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度
副成分のＨＰＬＣ分析時の相対リテンションタイムは、例えばペプチドＤのリテンションタイムを１として、下記式によって得ることができる。
《式》
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
またペプチドＡ〜Ｃの相対リテンションタイムも、前記式に準じた式によって得ることができる。各ペプチドＡ〜Ｃ及びペプチドＴ〜Ｚの相対リテンションタイムを表１に示す。
ペプチドＡの相対リテンションタイムは０．５７〜０．６７（好ましくは０．５８〜０．６６、より好ましくは０．５９〜０．６５、最も好ましくは０．６１〜０．６３）であり、ペプチドＢの相対リテンションタイムは０．６６〜０．７８（好ましくは０．６７〜０．７７、より好ましくは０．６９〜０．７５、最も好ましくは０．７１〜０．７３）であり、ペプチドＣの相対リテンションタイムは０．７９〜０．９１（好ましくは０．８０〜０．９０、より好ましくは０．８２〜０．８８、最も好ましくは０．８３〜０．８６）である。
ペプチドＴの相対リテンションタイムは０．７５〜０．８７（１つの態様では好ましくは０．７５〜０．８６、より好ましくは０．７６〜０．８２、最も好ましくは０．７７〜０．８０、別の態様では好ましくは０．７８〜０．８５、より好ましくは０．７９〜０．８４、最も好ましくは０．８０〜０．８３）であり、ペプチドＵの相対リテンションタイムは０．８４〜０．９６（好ましくは０．８６〜０．９５、より好ましくは０．８７〜０．９４、最も好ましくは０．８９〜０．９２）であり、ペプチドＶの相対リテンションタイムは０．８５〜０．９９（好ましくは０．８７〜０．９６、より好ましくは０．８９〜０．９６、最も好ましくは０．９０〜０．９４）であり、ペプチドＷの相対リテンションタイムは０．８９〜１．０２（好ましくは０．９０〜０．９９、より好ましくは０．９２〜０．９９、最も好ましくは０．９４〜０．９７）であり、ペプチドＸの相対リテンションタイムは１．０９〜１．２４（好ましくは１．１１〜１．２１、より好ましくは１．１３〜１．２０であり、最も好ましくは１．１５〜１．１８）であり、ペプチドＹの相対リテンションタイムは１．２１〜１．３７（１つの態様では好ましくは１．２１〜１．３０、より好ましくは１．２１〜１．２８、最も好ましくは１．２２〜１．２６、別の態様では好ましくは１．２３〜１．３４、より好ましくは１．２５〜１．３２、最も好ましくは１．２７〜１．３０）であり、そしてペプチドＺの相対リテンションタイムは１．２５〜１．４１（好ましくは１．２７〜１．３８、より好ましくは１．２９〜１．３６、最も好ましくは１．３１〜１．３４）である。
なお、前記相対リテンションタイムの範囲が重なることがあるが、それぞれのペプチドは、ペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＴ、ペプチドＣ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＤ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺの順に溶出される。
《式》
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
またペプチドＡ〜Ｃの相対リテンションタイムも、前記式に準じた式によって得ることができる。各ペプチドＡ〜Ｃ及びペプチドＴ〜Ｚの相対リテンションタイムを表１に示す。
ペプチドＴの相対リテンションタイムは０．７５〜０．８７（１つの態様では好ましくは０．７５〜０．８６、より好ましくは０．７６〜０．８２、最も好ましくは０．７７〜０．８０、別の態様では好ましくは０．７８〜０．８５、より好ましくは０．７９〜０．８４、最も好ましくは０．８０〜０．８３）であり、ペプチドＵの相対リテンションタイムは０．８４〜０．９６（好ましくは０．８６〜０．９５、より好ましくは０．８７〜０．９４、最も好ましくは０．８９〜０．９２）であり、ペプチドＶの相対リテンションタイムは０．８５〜０．９９（好ましくは０．８７〜０．９６、より好ましくは０．８９〜０．９６、最も好ましくは０．９０〜０．９４）であり、ペプチドＷの相対リテンションタイムは０．８９〜１．０２（好ましくは０．９０〜０．９９、より好ましくは０．９２〜０．９９、最も好ましくは０．９４〜０．９７）であり、ペプチドＸの相対リテンションタイムは１．０９〜１．２４（好ましくは１．１１〜１．２１、より好ましくは１．１３〜１．２０であり、最も好ましくは１．１５〜１．１８）であり、ペプチドＹの相対リテンションタイムは１．２１〜１．３７（１つの態様では好ましくは１．２１〜１．３０、より好ましくは１．２１〜１．２８、最も好ましくは１．２２〜１．２６、別の態様では好ましくは１．２３〜１．３４、より好ましくは１．２５〜１．３２、最も好ましくは１．２７〜１．３０）であり、そしてペプチドＺの相対リテンションタイムは１．２５〜１．４１（好ましくは１．２７〜１．３８、より好ましくは１．２９〜１．３６、最も好ましくは１．３１〜１．３４）である。
なお、前記相対リテンションタイムの範囲が重なることがあるが、それぞれのペプチドは、ペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＴ、ペプチドＣ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＤ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺの順に溶出される。
《サケの白子》
本発明のプロタミン硫酸塩の由来は、前記主要成分及び１つ以上の副成分を含む限りにおいて、特に限定されるものではないが、好ましくはサケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である。サケ目の魚種の種類も特に限定されるものではないが、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、又はそれらの人工交配種が挙げられる。サケ目の魚種の白子を原材料として用いることにより、高純度のプロタミンを得ることができる。
本発明のプロタミン硫酸塩の由来は、前記主要成分及び１つ以上の副成分を含む限りにおいて、特に限定されるものではないが、好ましくはサケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である。サケ目の魚種の種類も特に限定されるものではないが、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、又はそれらの人工交配種が挙げられる。サケ目の魚種の白子を原材料として用いることにより、高純度のプロタミンを得ることができる。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
《実施例１》
（粗精製）
サケの白子を所定のｐＨで鉱酸（塩酸又は硫酸等）による抽出、残渣を分離した後、一連の塩の変換等と分離によって粗精製プロタミン硫酸塩として分離した。（更に洗浄分液、ＡＣ処理等行ってもよい。）
（精製）
得られた粗精製プロタミン硫酸塩溶液を所定のｐＨに調整後、エタノールを使用して結晶化し単離する。更にエタノールで結晶洗浄した後、減圧乾燥しプロタミン硫酸塩を得た。
（粗精製）
サケの白子を所定のｐＨで鉱酸（塩酸又は硫酸等）による抽出、残渣を分離した後、一連の塩の変換等と分離によって粗精製プロタミン硫酸塩として分離した。（更に洗浄分液、ＡＣ処理等行ってもよい。）
（精製）
得られた粗精製プロタミン硫酸塩溶液を所定のｐＨに調整後、エタノールを使用して結晶化し単離する。更にエタノールで結晶洗浄した後、減圧乾燥しプロタミン硫酸塩を得た。
（ＨＰＬＣによる分析）
得られたプロタミン硫酸塩の固形物０．０５ｇを０．０１ｍｏｌ／Ｌ塩酸に溶解し、１００ｍＬとした。１００μＬの溶液を下記のＨＰＬＣの条件で分析した。
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度
図１に示すように、ペプチドＡ〜Ｄまでの主要成分と、ペプチドＴ〜Ｚまでの副成分が検出された。ペプチドＤのリテンションタイム（９．１０２）を１とした場合の各ペプチドの相対リテンションタイムは以下の通りであった（図１Ｂ）。
ペプチドＡ：０．６２
ペプチドＢ：０．７２
ペプチドＣ：０．８５
ペプチドＤ：１．００
ペプチドＴ：０．７９及び０．８２
ペプチドＵ：０．９１
ペプチドＶ：０．９３
ペプチドＷ：０．９６
ペプチドＸ：１．１７
ペプチドＹ：１．２９
ペプチドＺ：１．３２
なお、ペプチドＴは２つのリテンションタイムのピークを有する。各成分の含有量は以下の通りであった。
ペプチドＡ：１４．１５％
ペプチドＢ：３２．４１％
ペプチドＣ：２３．５６％
ペプチドＤ：２２．１５％
ペプチドＴ：１．８７％
ペプチドＵ：０．７３％
ペプチドＶ：０．９４％
ペプチドＷ：１．６４％
ペプチドＸ：１．３１％
ペプチドＹ：０．３４％
ペプチドＺ：０．９０％
なお、更にペプチドＤの含有量は、リテンションタイム９．１０２及び９．６６６のピークを含んでいる。また、可能性のある不純物として考えられる核酸不純物については、その１．０％水溶液のＵＶ２６０−２８０ｎｍ領域の吸光度が０．１以下であり、非常に低い水準であった。また、ＵＳＰ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ水溶液による滴定で１００ＵＳＰ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｕｎｉｔｓ／ｍｇ以上の活性があった。
得られたプロタミン硫酸塩の固形物０．０５ｇを０．０１ｍｏｌ／Ｌ塩酸に溶解し、１００ｍＬとした。１００μＬの溶液を下記のＨＰＬＣの条件で分析した。
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度
図１に示すように、ペプチドＡ〜Ｄまでの主要成分と、ペプチドＴ〜Ｚまでの副成分が検出された。ペプチドＤのリテンションタイム（９．１０２）を１とした場合の各ペプチドの相対リテンションタイムは以下の通りであった（図１Ｂ）。
ペプチドＡ：０．６２
ペプチドＢ：０．７２
ペプチドＣ：０．８５
ペプチドＤ：１．００
ペプチドＴ：０．７９及び０．８２
ペプチドＵ：０．９１
ペプチドＶ：０．９３
ペプチドＷ：０．９６
ペプチドＸ：１．１７
ペプチドＹ：１．２９
ペプチドＺ：１．３２
なお、ペプチドＴは２つのリテンションタイムのピークを有する。各成分の含有量は以下の通りであった。
ペプチドＡ：１４．１５％
ペプチドＢ：３２．４１％
ペプチドＣ：２３．５６％
ペプチドＤ：２２．１５％
ペプチドＴ：１．８７％
ペプチドＵ：０．７３％
ペプチドＶ：０．９４％
ペプチドＷ：１．６４％
ペプチドＸ：１．３１％
ペプチドＹ：０．３４％
ペプチドＺ：０．９０％
なお、更にペプチドＤの含有量は、リテンションタイム９．１０２及び９．６６６のピークを含んでいる。また、可能性のある不純物として考えられる核酸不純物については、その１．０％水溶液のＵＶ２６０−２８０ｎｍ領域の吸光度が０．１以下であり、非常に低い水準であった。また、ＵＳＰ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ水溶液による滴定で１００ＵＳＰ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｕｎｉｔｓ／ｍｇ以上の活性があった。
《実施例２》
本実施例では、各ペプチドのＬＣ／ＭＳ及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分子量の測定及びアミノ酸配列の同定を行った。
実施例１で得られた粗精製プロタミン硫酸塩をＨＰＬＣによって分離し、ペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ、ペプチドＤ、及びペプチドＸのフラクションを分取した。
本実施例では、各ペプチドのＬＣ／ＭＳ及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分子量の測定及びアミノ酸配列の同定を行った。
実施例１で得られた粗精製プロタミン硫酸塩をＨＰＬＣによって分離し、ペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ、ペプチドＤ、及びペプチドＸのフラクションを分取した。
得られた各分画を下記のＬＣ／ＭＳ及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳの条件で測定した。
＜ＬＣ／ＭＳ条件＞
機器：ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ 質量分析計（島津製作所）
ＨＰＬＣ：ＬＣ−２０Ａ（島津製作所）
カラム：Ａｅｒｉｓ ＰＥＰＴＩＤＥ ＸＢ−１８ ３．６μｍ，２．１×１５０ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）
カラム温度：６０℃
移動相：
Ａ；０．０１％ＴＦＡ、０．２％ギ酸、２０ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム
Ｂ；０．０１％ＴＦＡ、０．２％ギ酸、４０ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム／アセトニトリル（５０：５０）
グラジエント：
流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
試料注入量：分取物５０μＬ
検出波長：ＵＶ２１４ｎｍ
イオン化方式：ＥＳＩ
＜ＬＣ／ＭＳ条件＞
機器：ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ 質量分析計（島津製作所）
ＨＰＬＣ：ＬＣ−２０Ａ（島津製作所）
カラム：Ａｅｒｉｓ ＰＥＰＴＩＤＥ ＸＢ−１８ ３．６μｍ，２．１×１５０ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）
カラム温度：６０℃
移動相：
Ａ；０．０１％ＴＦＡ、０．２％ギ酸、２０ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム
Ｂ；０．０１％ＴＦＡ、０．２％ギ酸、４０ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム／アセトニトリル（５０：５０）
グラジエント：
試料注入量：分取物５０μＬ
検出波長：ＵＶ２１４ｎｍ
イオン化方式：ＥＳＩ
ペプチドＡの分子量は４２３３．５８４３、ペプチドＢの分子量は４３１６．６７９６、ペプチドＣの分子量は４２４７．５９６５、ペプチドＤの分子量は４０６１．５３３８、及びペプチドＸ分子量は４１３５．５８６６であった。
ペプチドＡ、ペプチドＢ、ペプチドＣ、ペプチドＤ及びペプチドＸのＮ末端アミノ酸配列分析を行った。
ペプチドＸのＮ末端のアミノ酸配列は、（Ｓ／Ｐ）ＲＲ（Ｒ／Ｉ／Ｖ）ＸＡ（Ｓ／Ｇ）ＧＲ（Ｐ／Ｉ）ＲＶＳＲＲＰＲＶ（Ｇ／Ｖ）ＧＲＲＲＸ（Ｇ／Ｒ）ＧＧＲ（配列番号５）であった。
ペプチドＸのＮ末端のアミノ酸配列は、（Ｓ／Ｐ）ＲＲ（Ｒ／Ｉ／Ｖ）ＸＡ（Ｓ／Ｇ）ＧＲ（Ｐ／Ｉ）ＲＶＳＲＲＰＲＶ（Ｇ／Ｖ）ＧＲＲＲＸ（Ｇ／Ｒ）ＧＧＲ（配列番号５）であった。
本発明の高純度プロタミン硫酸塩は、医薬品の有効成分又は添加剤として用いることができる。
本発明者は、医薬品に用いることのできる高純度のプロタミン硫酸塩について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、４つの主要成分と副成分とを含むプロタミン硫酸塩が高純度であり、医薬品用のプロタミン硫酸塩として有用であることを見出した。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、
［１］配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、
前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を下記ＨＰＬＣ条件で分析した場合に
下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度、
［２］前記プロタミン硫酸塩が、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺを含む、［１］に記載のプロタミン硫酸塩、
［３］前記ペプチドＸが、配列番号５で表されるアミノ酸を含むペプチドである、［１］又は［２］に記載のプロタミン硫酸塩、
［４］前記プロタミン硫酸塩が、サケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である、［１］〜［３］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
［５］前記サケ目（Salmoniformes）に属する魚種が、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、及びこれらの人工交配種である、［１］〜［４］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、及び
［６］前記ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が９８％以上である、［１］〜［５］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
に関する。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、
［１］配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、
前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を下記ＨＰＬＣ条件で分析した場合に
下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度、
［２］前記プロタミン硫酸塩が、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺを含む、［１］に記載のプロタミン硫酸塩、
［３］前記ペプチドＸが、配列番号５で表されるアミノ酸を含むペプチドである、［１］又は［２］に記載のプロタミン硫酸塩、
［４］前記プロタミン硫酸塩が、サケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である、［１］〜［３］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
［５］前記サケ目（Salmoniformes）に属する魚種が、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、及びこれらの人工交配種である、［１］〜［４］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、及び
［６］前記ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が９８％以上である、［１］〜［５］のいずれかに記載のプロタミン硫酸塩、
に関する。
本発明のプロタミン硫酸塩は、特に限定されるものではないが、ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が好ましくは９８％以上であり、より好ましくは９８．５％以上であり、更に好ましくは９９％以上であり、最も好ましくは９９．５％以上である。
ペプチドＡの含有量は限定されるものではないが、１２．６４〜１６．８４％であり、ペプチドＢの含有量は限定されるものではないが、２８．６９〜３８．１２％であり、ペプチドＣの含有量は限定されるものではないが、２１．４５〜２６．２２％であり、ペプチドＤの含有量は限定されるものではないが、１９．６９〜２４．５０％であり、ペプチドＴの含有量は限定されるものではないが、３．２７％以下であり、ペプチドＵの含有量は限定されるものではないが、１．８５％以下であり、ペプチドＶの含有量は限定されるものではないが、２．３６％以下であり、ペプチドＷの含有量は限定されるものではないが、２．７５％以下であり、ペプチドＸの含有量は限定されるものではないが、２．３１％以下であり、ペプチドＹの含有量は限定されるものではないが、０．７６％以下であり、そしてペプチドＺの含有量は限定されるものではないが、１．６６％以下である。
ペプチドＡの含有量は限定されるものではないが、１２．６４〜１６．８４％であり、ペプチドＢの含有量は限定されるものではないが、２８．６９〜３８．１２％であり、ペプチドＣの含有量は限定されるものではないが、２１．４５〜２６．２２％であり、ペプチドＤの含有量は限定されるものではないが、１９．６９〜２４．５０％であり、ペプチドＴの含有量は限定されるものではないが、３．２７％以下であり、ペプチドＵの含有量は限定されるものではないが、１．８５％以下であり、ペプチドＶの含有量は限定されるものではないが、２．３６％以下であり、ペプチドＷの含有量は限定されるものではないが、２．７５％以下であり、ペプチドＸの含有量は限定されるものではないが、２．３１％以下であり、ペプチドＹの含有量は限定されるものではないが、０．７６％以下であり、そしてペプチドＺの含有量は限定されるものではないが、１．６６％以下である。
Claims (6)
- 配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＡ、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＢ、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＣ、及び配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドＤを、主要成分として含み、更に少なくとも１つの副成分を含むプロタミン硫酸塩であって、
前記副成分は、前記プロタミン硫酸塩を下記ＨＰＬＣ条件で分析した場合に
下記式：
相対リテンションタイム＝副成分のリテンションタイム（分）／ペプチドＤのリテンションタイム（分）
で得られるペプチドＤに対する副成分の相対リテンションタイム（ＲＲＴ）が、０．７５〜０．８７のペプチドＴ、０．８４〜０．９６のペプチドＵ、０．８５〜０．９９のペプチドＶ、０．８９〜１．０２のペプチドＷ、１．０９〜１．２４のペプチドＸ、１．２１〜１．３７のペプチドＹ、又は１．２５〜１．４１のペプチドＺである、プロタミン硫酸塩。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製ＪｕｐｉｔｅｒＣ１８（担体粒子径５μｍ（３００Å）、カラム内径４．６ｍｍ、カラム長２５０ｍｍ）
移動相Ａ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ１．８）
移動相Ｂ：０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４／６．５％アセトニトリル（ｐＨ１．８）
分離条件：０ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
１５ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２０ｍｉｎ Ａ ５５％ Ｂ ４５％
２５ｍｉｎ Ａ ８５％ Ｂ １５％
移動相流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
測定波長：２１４ｎｍ
測定時間：２５ｍｉｎ
カラム温度：５０℃付近の一定温度 - 前記プロタミン硫酸塩が、ペプチドＴ、ペプチドＵ、ペプチドＶ、ペプチドＷ、ペプチドＸ、ペプチドＹ、及びペプチドＺを含む、請求項１に記載のプロタミン硫酸塩。
- 前記ペプチドＸが、配列番号５で表されるアミノ酸を含むペプチドである、請求項１又は２に記載のプロタミン硫酸塩。
- 前記プロタミン硫酸塩が、サケ目（Salmoniformes）に属する魚種の白子由来である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロタミン硫酸塩。
- 前記サケ目（Salmoniformes）に属する魚種が、アトランティックサーモン、ニジマス、ギンザケ、キングサーモン、ベニザケ、カラフトマス、サクラマス、シロサケ、サツキマス、ブラウントラウト、及びこれらの人工交配種である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロタミン硫酸塩。
- 前記ＨＰＬＣで分析した場合における、前記４つの主要成分及び７つの副成分の合計が９８％以上である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のプロタミン硫酸塩。
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| JP2020009478A JP2021116244A (ja) | 2020-01-23 | 2020-01-23 | 高純度プロタミン硫酸塩 |
| CN202010206715.8A CN111320681A (zh) | 2020-01-23 | 2020-03-23 | 高纯度鱼精蛋白硫酸盐 |
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-
2020
- 2020-01-23 JP JP2020009478A patent/JP2021116244A/ja active Pending
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