JP2018522051A - デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸とを含む組成物および美容組成物におけるその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
水 96.45%
Sepiplus S(安定剤) 3.0%
GAG組成物 0.5%
Kathon(防腐剤) 0.05%
水相:
水 66.65%
グリセリン(保湿剤) 4.0%
キサンタンガム(安定剤) 0.2%
EDTA二ナトリウム塩(スカベンジャー) 0.1%
安息香酸ナトリウム(防腐剤) 0.5%
クエン酸(pH補正剤) 0.25%
GAG組成物 0.5%
乳化剤(オリボイル(Olivoyl)グルタミン酸ナトリウム、セテアリルアルコール、ステアリン酸グリセリル) 5.0%
安定剤(ポリアクリルアミド水溶液、C13〜14イソパラフィン、ラウレス−7、Sepigel 305) 3.0%
油相:
水素化オリーブ油、オリーブ油、オリーブ油不鹸化物 1.0%
ジメチコン 1.0%
安息香酸C12〜15アルキル 10.0%
ステアリン酸グリセリル 4.0%
セテアリルアルコール 2.5%
パルファム 0.5%
フェノキシエタノール 0.8%
GAG組成物中のデルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸の濃度は、以下の方法に従って電気泳動により測定した。
波長:600mm
フォトモード:反射
この装置は、移動バンドがクロマトグラムとして示されるレポートを作成した。ピークごとに、電気泳動移動度(Rf)、面積および面積%([各ピークの面積×100]/[全てのピークの面積の合計])の値が表示される。
本発明によるGAG組成物を1%含む溶液に対してインビトロ実験を行った。GAG組成物は、75重量%のデルマタン硫酸と25重量%のコンドロイチン硫酸とからなるものであった。実験は、3D組織に対して行った。
3つのステップについては、既製の試薬を使用した。RNAqueous法は、細胞の試料から全RNAを抽出するために使用される、迅速でフェノールを含まない、フィルターを利用したRNA単離システムである。High Capacity cDNA Reverse Transcription kitを使用してRNAからcDNAを合成した。蛍光に基づくPCRケミストリー(TaqManアッセイ)と共に装置Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCRを使用して、重要なバイオマーカーの遺伝子発現を調査した。遺伝子発現は、DNA配列などの遺伝子中の遺伝情報をタンパク質またはRNAなどの機能的遺伝子産物にするプロセスである。相対的定量化は、試験試料中の核酸配列の発現の、較正用試料中の同じ配列に対しての変化を決定する。投入量を標準化するための内因性対照遺伝子としてGAPDHを使用した。各複製物を三連で評価した。2×TaqMan Fast Universal PCR Master MixにTaqman遺伝子発現アッセイおよびcDNA(25ng)を添加して25μLの総体積にした。ABI PRISM 7500 Fastの温熱条件ステップは、95℃20秒;40サイクル(95℃3秒+60℃30秒)である。
方法の原理
ウエスタンブロッティングは、タンパク質の検出および解析のための、十分に確立され、広く使用されている技術である。この方法は、メンブレン上に固定されたタンパク質に対する抗体の特異的結合を介した抗体:タンパク質複合体の構築と、いくつかの検出方法のうちの1つによる結合した抗体の検出と、に基づく。タンパク質試料は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供される。次いで、このゲルがニトロセルロースのシートの上に配置され、電気泳動によりゲル中のタンパク質がニトロセルロースに転写される。次いで、タンパク質の非特異的結合を「ブロック」するためにニトロセルロースがブロッキングバッファーに浸される。次いで、ニトロセルロースは、目的のタンパク質に対する特異的抗体と共にインキュベートされる。次いで、ニトロセルロースは、一次抗体に対して特異的である二次抗体と共にインキュベートされる。二次抗体は通常、発色基質を供されると呈色反応を引き起こすことになる、共有結合された酵素を有するであろう。
プロテアーゼ阻害剤混合物を新たに添加したBIO−PLEX CELL LYSIS buffer(BIORAD)中にFT皮膚を入れ、ホモジナイズし、氷上に30分間置いた後、4℃にて16,000xgで10分間遠心分離した。RC DC Protein Assay(BIORAD)を用いてタンパク質の定量を行った。ライセートに等体積の2×Laemmliサンプルバッファーを添加した後、各試料をサンプルバッファー中で100℃にて5分間ボイルすると、そのままTris−Glycine Extended(TGX) Stain−freeプレキャストゲル 7.5%(Bio−Rad)上で分離し、PVDFメンブレン(BIORAD)に転写することができる(総タンパク質50μg)。TBST 0.05%中の5%のブロッキング溶液(BSA)を用いて室温で1時間、メンブレンをブロッキングする。メンブレンを室温で1時間、ウサギポリクローナル抗体である抗DCN(NBP−84970、NovusBio)および抗COL1(PA5−29569、Thermo Scientific)と共にインキュベートした。TBSTでの3回の洗浄(それぞれ5分)によりメンブレンをリンスした。
室温で1時間、TBST中の標識ヤギ抗ウサギIgG二次抗体(656120、Invitrogen)の推奨希釈物を用いて、結合した抗体を検出した。TBSTでの3回の洗浄の後、メンブレンに対して、CLARITY WESTERN ECL SUBSTRATE(BIORAD)によるシグナル展開を行うことができる。Chemidoc XRSシステム(BIORAD)を用いてDCNおよびCOL1の化学発光バンドを可視化し、ImageLabソフトウェアを用いて定量化した(それぞれ100/50KDaおよび250kDa)。
試験は、4週間の処置を25人の志願者に対して行った。上記で定義されるような水中油型エマルジョンのクリームで志願者を処置した。
本発明によるクリームを使用した志願者は、4週間後の皺の深さが平均で23.1%減少したのに対し、ベースのエマルジョンを使用した志願者では16.4%の減少であった。
最初の適用から3時間後、ベースのエマルジョンは、本発明によるクリームよりも有効であるように見えた(ベースのエマルジョンでは+39.9%であるのに対し本発明のクリームでは+28.7%)。しかし、8日後、その実態は完全に変化した(ベースのエマルジョンでは+33.5%であるのに対し本発明のクリームでは+52.3%)。
Claims (15)
- デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸とを含むグリコサミノグリカンの混合物を0.1〜10.0重量%含む組成物であって、グリコサミノグリカンの総量に基づいてデルマタン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下であり、コンドロイチン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下である組成物。
- グリコサミノグリカンの総量に基づいてデルマタン硫酸の量が少なくとも10%かつ90%以下であり、コンドロイチン硫酸の量が少なくとも10%かつ95重量%以下である、請求項1に記載の組成物。
- 請求項1〜2の組成物を含む美容組成物。
- 前記グリコサミノグリカンの混合物が、組成物全体に基づいて0.5〜5重量%の量で存在する、請求項3に記載の美容組成物。
- 前記グリコサミノグリカンの混合物が、少なくとももう1種のグリコサミノグリカンを含む、請求項3〜4に記載の美容組成物。
- 前記グリコサミノグリカンの混合物が、デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸との混合物からなる、請求項3〜4に記載の美容組成物。
- 請求項1〜6に記載の美容組成物であって、
前記組成物が、水溶液、液体の形態であるか、またはゲルのような粘性の形態であり、
前記組成物が、水と、必要に応じて、保湿剤、抗酸化剤、防腐剤、安定剤および美容ゲルにおいて一般的に使用される他の化合物から選択される他の添加物と、をさらに含む、
美容組成物。 - 請求項1〜6に記載の美容組成物であって、
前記組成物が、クリームの形態であり、
前記組成物が、天然および合成の油/脂肪またはそれらの混合物から選択される少なくとも1種の油およびまたはシリコンまたは脂肪と、イオン性乳化剤および非イオン性乳化剤から選択される1種以上の乳化剤と、必要に応じて、水、ならびに保湿剤、抗酸化剤、防腐剤、安定剤および美容クリームにおいて一般的に使用される他の化合物から選択される他の添加物と、をさらに含む、
美容組成物。 - デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸とを含むグリコサミノグリカン組成物であって、グリコサミノグリカンの総量に基づいてデルマタン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下であり、コンドロイチン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下である組成物の、抗老化組成物としての使用。
- デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸とを含むグリコサミノグリカン組成物であって、グリコサミノグリカンの総量に基づいてデルマタン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下であり、コンドロイチン硫酸の量が少なくとも5重量%かつ95重量%以下である組成物の、抗皺組成物としての使用。
- デルマタン硫酸とコンドロイチン硫酸とを含むグリコサミノグリカンの組成物であって、
グリコサミノグリカンの総量に基づいてデルマタン硫酸の量が少なくとも20重量%かつ90重量%以下であり、コンドロイチン硫酸の量が少なくとも10重量%かつ80重量%以下であり、
デルマタン硫酸およびコンドロイチン硫酸が合計でGAGの総量の少なくとも60重量%という量で存在し、ヘパリンの量が5重量%未満であり、ヒアルロン酸の量が20重量%未満である、
組成物。 - デルマタン硫酸対コンドロイチン硫酸の重量比が50/50〜90/10に含まれる、請求項11に記載の組成物。
- ヘパラン硫酸をさらに含む、請求項12〜13に記載の組成物。
- デルマタン硫酸およびコンドロイチン硫酸が合計でGAGの総量の少なくとも80重量%という量で存在する、請求項11〜13に記載の組成物。
- 請求項11〜14に記載のグリコサミノグリカン組成物を含む経口投与可能な組成物であって、コラーゲンおよびエラスチンを実質的に含まない経口投与可能な組成物。
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