JP2018039843A - 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 - Google Patents
免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018039843A JP2018039843A JP2017233454A JP2017233454A JP2018039843A JP 2018039843 A JP2018039843 A JP 2018039843A JP 2017233454 A JP2017233454 A JP 2017233454A JP 2017233454 A JP2017233454 A JP 2017233454A JP 2018039843 A JP2018039843 A JP 2018039843A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- vaccine vector
- seq
- hmgb1
- vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 198
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 179
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 54
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 227
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 221
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 219
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 80
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 34
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000055207 HMGB1 Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 claims abstract 9
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 claims abstract 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 59
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 59
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 59
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 46
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 27
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 abstract description 37
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 10
- 101001025337 Homo sapiens High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 89
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 87
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 44
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 34
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 26
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 24
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 22
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 19
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 19
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 19
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 19
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 19
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 19
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 14
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 14
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 14
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 12
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 11
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 11
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 7
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 7
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 6
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 6
- VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N bissulfosuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 101150101706 cotB gene Proteins 0.000 description 5
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 2
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 102000053637 human HMGB1 Human genes 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 101150012518 lamB gene Proteins 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108010005094 Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108700025208 Bacillus subtilis CotB Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101100339421 Gallus gallus HMGB1 gene Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101900330356 Influenza A virus Matrix protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100038458 Ubinuclein-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710094188 Ubinuclein-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 101100398653 Yersinia pestis lamB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940033324 influenza A vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 101150048352 mazF gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- -1 oral gavage Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007398 protein translocation Effects 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6006—Cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
【解決手段】本発明により抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドを含むワクチンベクターが提供され、前記ポリペプチドはワクチンベクターの表面に存在する。前記ワクチンベクターを含む組成物もまた提供され、適切には経口投与または鼻投与用担体を含む。
【選択図】なし
Description
本特許出願は、米国仮特許出願61/297,098(2010年1月21日出願)(前記文献は参照により本明細書にその全体が含まれる)の優先権を主張する。
本発明は、免疫応答を刺激するワクチンベクターおよび免疫応答を刺激する方法に関する。
インフルエンザウイルス感染、特にトリインフルエンザH5N1は、大きな健康上および経済上の懸念を提示する。H5N1が、世界中の拡大する領域で感受性を有する鳥類とブタの間で循環し続けていることを明瞭に示す証拠が存在する。多くの研究者らが、もし阻止せずに放置するならば、従来のH5N1トリインフルエンザは変異し、ヒトからヒトへの伝播を可能にして世界的な流行病を引き起こすであろうと考えている。50%を超える死亡率と併せて、そのような勃発は壊滅的なものであろう。ヒトの疾患を引き起こすウイルスの能力には関係なく、感染地域の家禽群の全滅のために莫大な経済的影響を有するトリインフルエンザH5N1はすでに脅威である。したがって、ヒト、家禽、ブタおよび他の家畜化動物をH5N1インフルエンザから防御するワクチンの開発が希求される。他のインフルエンザウイルス(例えばH1N1)と同様にH5N1に対する防御能力を有するインフルエンザワクチンが最適であろう。
別の特徴では、ワクチンベクターおよび医薬的に許容できる担体を含む組成物が提供される。医薬的に許容できる担体は経口使用または鼻での使用に許容できる。ワクチンベクターは複製不能であり得る。
さらに別の特徴では、本明細書に記載するバシルス種ワクチンベクターを投与することによって対象動物において免疫応答を増強する方法が提供される。前記ワクチンベクターは、前記ワクチンベクターの表面で発現される抗原性ポリペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド配列、および前記ワクチンベクターの表面で発現される免疫刺激性ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドを含む。前記抗原性ポリペプチドは、インフルエンザM2eポリペプチド、インフルエンザHAポリペプチド、インフルエンザNPポリペプチドまたは前記の組合せであり得る。前記免疫刺激性ポリペプチドは、CD154ポリペプチド、HMGB1ポリペプチドまたはそれらの組合せであり得る。
さらにまた別の特徴では、対象動物においてインフルエンザ関連病的状態を緩和する方法が提供される。本方法では、本明細書に開示するワクチンベクターまたは組成物の投与は、その後のインフルエンザ感染に関連する病的状態を緩和する。
生の細菌またはウイルスワクチンベクターは免疫低下個体に対してはなおリスクを避け得ず、さらに別の規制監視を必要とすることがある。したがって、殺滅もしくは不活化されてあるか、または食品医薬品局(FDA)によって一般的に安全とみなされる(Generally Regarded As Safe(GRAS))生物として適格とされるベクターの使用が望ましい。問題は、そのようなベクターを用いて激しい免疫応答を生じるかということである。実施例に示すように、ワクチンベクターの表面にHMGB1(高可動性グループボックス1(high mobility group box 1))ポリペプチドを含めることによって、我々は、バシルス種ベクターを用いて抗原性ポリペプチドに対して激しい免疫応答を生じさせることができる。実際、実施例は、このベクターは、多様な方法を用いて複製できないように不活化されるが投与後になお激しい免疫応答を誘引できることを示している。
ワクチンベクターは、細菌、ウイルスまたはリポソーム系ベクターであり得る。可能なワクチンベクターには以下が含まれる(ただしこれらに限定されない):バシルス(Bacillus)(枯草菌(Bacillus subtilis))、サルモネラ(Salmonella)(腸炎菌(Salmonella enteritidis))、シゲラ(Shigella)、エシェリキア(Escherichia)(大腸菌)、エルジニア(Yersinia)、ボルデテラ(Bordetella)、ラクトコッカス(Lactococcus)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、ビブリオ(Vibrio)(コレラ菌(Vibrio cholerae))、リステリア(Listeria)、アデノウイルス(adenovirus)、ポックスウイルス(poxvirus)、ヘルペスウイルス(herpesvirus)、アルファウイルス(alphavirus)、およびアデノ関連ウイルス。適切には、ワクチンベクターはGRAS生物である。ワクチンベクターは、複製できないように不活化または殺滅することができる。細菌またはウイルスワクチンベクターを不活化または殺滅する方法は当業者には公知であり、例えば実施例に示す方法(すなわちホルマリン不活化、抗生物質依存不活化、熱処理およびエタノール処理)が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
抗原性ポリペプチドはインフルエンザポリペプチドであり得る。適切には前記は、インフルエンザH5N1ポリペプチド、または多数のインフルエンザウイルス株に付随するポリペプチド(例えばインフルエンザM2タンパク質のポリペプチド)である。インフルエンザAウイルスM2タンパク質のエクトドメイン(M2eとして知られている)はこのウイルスの表面から突き出ている。M2タンパク質のM2e部分は約24アミノ酸を含む。M2eポリペプチドはインフルエンザ内のある単離株と別の単離株でほとんど変動しない。実際、1918年のインフルエンザ大流行以来、M2eでは天然に出現した数変異が感染ヒトから単離されただけである。さらにまた、トリおよびブタ宿主から単離されたインフルエンザウイルスは異なっているがなお保存されたM2e配列を有する。ヒト、トリおよびブタ宿主から単離されたM2eポリペプチド配列の概要については以下を参照されたい:Liu et al., Microbes and Infection 7:171-177, 2005;Reid et al., J. Virol. 76:10717-10723, 2002 (前記文献は参照によりその全体が本明細書に含まれる)。さらに配列番号:1−4もまた参照されたい。
インフルエンザAワクチンベクターに含まれる他の適切なエピトープには、インフルエンザAのヘマグルチニン(HA)または核タンパク質(NP)のポリペプチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。例えば、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:10のペプチドをワクチンベクターに含むことができる。実施例では、配列番号:7(HAUA)および配列番号:8(HALB)がワクチンベクターに取り込まれ、ニワトリへの投与後に抗体応答を生じることが示された。図2−3および5−6を参照されたい。さらにまた、配列番号:9(NP54)および配列番号:10(NP147)のNPエピトープが実施例のワクチンベクターに取り込まれた。これらの配列のいずれも、任意の他のエピトープ(他の病原体または抗原に由来するエピトープを含む)と組み合わせて用いことができることは当業者には理解されるであろう。
HMGB1は炎症の媒介物質であり、核損傷シグナル(例えば壊死細胞から生じる)として機能する。HMGB1はまた、タンパク質のアセチル化を必要とするプロセス、核を通過する転移および分泌で単球/マクロファージ系列の細胞によって活発に分泌され得る。細胞外HMGB1は、高度糖化最終生成物のためのレセプター(Receptor for Advanced Glycated End-Product, RAGE)、およびToll様受容体ファミリー(Toll-like Receptor family, TLR)、特にTLR4を介するシグナリングによって炎症の強力な媒介物質として機能する。RAGE結合活性は既に同定されており、配列番号:27のポリペプチドを必要とする。TLR4結合は配列番号:18の106位のシステイン(HMGB1のBボックス領域で見出される)を要求する。
当業者は、前炎症性サイトカイン活性を刺激することができるHMGB1ポリペプチドおよびその機能的フラグメントを、例えば国際公開公報WO02 092004(前記文献は参照によりその全体が本明細書に含まれる)に開示された方法を用いて同定することができる。適切には、HMGB1ポリペプチドは、配列番号:18(配列番号:27またはそのホモローグ)のアミノ酸150−183にRAGE結合ドメインを、および配列番号:18(配列番号:28またはそのホモローグ)のアミノ酸89−109に前炎症性サイトカイン活性を含む。特に、HMGB1ポリペプチドおよび機能的フラグメントまたはそのホモローグには、配列番号:18または23−30のHMGB1ポリペプチドと同一、または少なくとも99%同一、少なくとも98%同一、少なくとも95%同一、少なくとも90%同一、少なくとも85%同一、または少なくとも80%同一のポリペプチドが含まれる。
抗原性ポリペプチドまたはHMGB1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはワクチンベクターに挿入されて発現され、抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドを生成できる。ポリヌクレオチドはワクチンベクターの染色体に挿入されるか、またはプラスミドもしくは他の染色体外DNA上でコードされ得る。適切には、抗原性ポリペプチドおよび/またはHMGB1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは独立して発現されてもよいが、または発現されるワクチンベクターのポリヌクレオチドに挿入される。適切には、ワクチンベクターのポリヌクレオチドはワクチンベクターの表面で発現されるポリペプチド、例えばトランスメンブレンタンパク質をコードする。抗原性ポリペプチドおよび/またはHMGB1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはワクチンベクターポリヌクレオチド配列に挿入されて、抗原性ポリペプチドおよび/またはHMGB1ポリペプチドのベクター表面上での発現を可能にできる。例えば、抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、トランスメンブレンタンパク質の外部ループ領域をコードする細菌のポリヌクレオチドの領域に、前記細菌のポリヌクレオチド配列がインフレームの状態を維持できるように細菌ポリヌクレオチドにインフレームで挿入できる。実施例1を参照されたい。
実施例では、ワクチンベクターは、同じポリヌクレオチドでかつ互いにインフレームの状態でコードされる、抗原性ポリペプチド(M2e、HAおよびNPポリペプチド)および免疫刺激性ポリペプチド(CD154またはHMGB1)を有する。また別の実施態様では、免疫刺激性ポリペプチドおよび抗原性ポリペプチドは別個のポリヌクレオチドによってコードされ得る。多様な方法を用いて、ワクチンベクターの表面で抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドの発現を得ることができることは当業者には理解されるであろう。
対象動物には脊椎動物、適切には哺乳動物(適切にはヒト、ウシ、ネコ、イヌ、ブタ)、または鳥類(適切には家禽、例えばニワトリ)が含まれるが、ただしこれらに限定されない。他の感染動物モデルもまた用いることができる。免疫応答の増強には、対象動物の免疫系によって媒介される治療的または予防的作用の誘発が含まれるが、ただし前記に限定されない。具体的には、免疫応答の増強は、抗体産生の増強(例えば図1−3に示される)、抗体重鎖のクラス切り替えの増強(例えば図8に示すIgAの産生)、抗原提示細胞の成熟、ヘルパーT細胞の刺激、細胞溶解性T細胞の刺激、またはTおよびB細胞メモリー誘導を含むことができる。
組成物は1回だけ投与してもよいが、また2回または3回以上投与して免疫応答を増強してもより。例えば、組成物は、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2カ月、3ヶ月、6ヶ月またはそれより長期間離して2回または3回以上投与してもよい。細菌は投与前には生きていてもよいが、いくつかの実施態様では、細菌は投与前に殺滅または不活化できる。いくつかの実施態様では細菌は対象動物において複製する能力を有し得るが、他の実施態様では細菌は対象動物において複製する能力を有し得ない。実施例で示すように、細菌性ワクチンベクターは、投与前にホルマリン、エタノール、熱または抗生物質を用いて不活化できる。ワクチンベクターを不活化する他の手段も同様に用いることができることは当業者には理解されよう。
対象動物のタンパク質と相同であり、免疫系を刺激して抗原性ポリペプチドに応答することができる免疫刺激性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをワクチンベクターに挿入することもできる。より詳細に実施例に記載するように、ワクチンベクターは、対象動物においてCD40と結合して対象動物を刺激してワクチンベクターおよびそれに結合している抗原性ポリペプチドに応答することができるCD154ポリペプチドを、上記に記載したHMGB1と同様に含むことができる。バシルスワクチンベクターはHMGB1ポリペプチド、CD154ポリペプチドまたは前記の組合せを含むことができる。上記に記載したように、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ワクチンベクターの染色体に挿入されるか、または染色体外で維持され得る。これらのポリペプチドはワクチンベクターの種々のポリペプチドに挿入され、ワクチンベクターの種々の部分で発現されるか、または分泌され得る。
適切には、CD154は長さが50アミノ酸より短く、より適切には40より短く、30より短くまたは20アミノ酸より短い。ポリペプチドは、長さが10から15アミノ酸の間、10から20アミノ酸の間または10から25アミノ酸の間であり得る。CD154配列およびCD40結合領域は多様な種の間で高度には保存されていない。ニワトリおよびヒトのCD154配列はそれぞれ配列番号:11および配列番号:12に提供されている。
本明細書に記載するバシルスワクチンベクターは、上記で述べたように、免疫応答を増強する方法および対象動物においてインフルエンザの病的状態を緩和する方法で用いることができる。バシルスワクチンベクターを用いて、対象動物(例えば同様に上記に記載した対象動物)に投与するための組成物を製造することができる。
異種ポリヌクレオチドには、ワクチンベクター以外の病原性微生物またはウイルスから選択される抗原をコードするポリヌクレオチドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。そのようなポリヌクレオチドは、病原性ウイルス、例えばインフルエンザ(例えばM2e、ヘマグルチニンまたはノイラミニダーゼ)、ヘルペスウイルス(例えばヘルペスウイルスの構造タンパク質をコードする遺伝子)、レトロウイルス(例えばgp160エンベロープタンパク質)、アデノウイルス、パラミクソウイルス、コロナウイルスなどから誘導され得る。異種ポリヌクレオチドはまた病原性細菌から入手することができ、例えば細菌タンパク質(例えば毒素および外膜タンパク質)をコードする遺伝子である。さらにまた、寄生虫(例えばアイメリア)由来の異種ポリヌクレオチドもベクターワクチンで使用される魅力のある候補である。
免疫系の起動に必要とされるまた別の免疫刺激性ポリペプチドもまた本明細書に記載のワクチンベクターに含むことができる。ポリヌクレオチドは、その刺激性作用について知られている免疫系分子(例えばインターロイキン、腫瘍壊死因子またはインターフェロン)または免疫調節に必要とされる別のポリヌクレオチドをコードしてもよい。
(1)抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドまたはその機能的フラグメントを含むワクチンベクターであって、抗原性ポリペプチドの少なくとも一部分およびHMGB1ポリペプチドの少なくとも一部分が前記ワクチンベクターの表面に存在する、前記ワクチンベクター。
(2)抗原性ポリペプチドがインフルエンザ特異的ポリペプチドである、(1)に記載のワクチンベクター。
(3)抗原性ポリペプチドがM2e、HAまたはNPインフルエンザポリペプチドである、(2)に記載のワクチンベクター。
(4)インフルエンザM2eポリペプチドが、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:1の免疫原性フラグメント、配列番号:2の免疫原性フラグメント、配列番号:3の免疫原性フラグメントおよび配列番号:4の免疫原性フラグメントから成る群から選択される、(3)に記載のワクチンベクター。
(5)抗原性ポリペプチドが、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10および配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:10の免疫原性フラグメントから成る群から選択される、(3)に記載のワクチンベクター。
(6)HMGB1ポリペプチドが、配列番号:18、配列番号:29、配列番号:30、配列番号:18、配列番号:29または配列番号:30の機能的フラグメント、および前記のホモローグから選択される、(1)−(5)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(7)HMGB1の機能的フラグメントが、配列番号:25、配列番号:26、配列番号:27および配列番号:28から選択される、(6)に記載のワクチンベクター。
(8)ワクチンベクターが細菌である、(1)−(7)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(9)細菌がバシルス種(Bacillus spp.)である、(8)に記載のワクチンベクター。
(10)抗原性ポリペプチドがトランスメンブレンタンパク質内に含まれる、(1)−(9)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(11)抗原性ポリペプチドがトランスメンブレンタンパク質の外部ループ内に存在する、(10)に記載のワクチンベクター。
(12)HMGB1ポリペプチドがトランスメンブレンタンパク質内に含まれる、(1)−(11)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(13)HMGB1ポリペプチドがトランスメンブレンタンパク質の外部ループ内に存在する、(12)に記載のワクチンベクター。
(14)トランスメンブレンタンパク質がcotBである、(10)−(13)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(15)抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドが融合タンパク質の部分である、(1)−(14)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(16)(1)−(15)のいずれかに記載のワクチンベクターおよび医薬的に許容できる担体を含む組成物。
(17)医薬的に許容できる担体が経口投与または鼻投与用に許容できる、(16)に記載の組成物。
(18)ワクチンベクターが複製する能力をもたない、(16)または(17)に記載の組成物。
(19)ワクチンベクターが不活化または殺滅される、(16)−(18)のいずれかに記載の組成物。
(20)対象動物において免疫応答を増強する方法であって、前記方法が、(1)−(15)のいずれかに記載のワクチンベクターまたは(16)−(19)のいずれかに記載の組成物を、抗原性ポリペプチドに対する対象動物の免疫応答を増強するために有効な量で投与する工程を含む、前記方法。
(21)ワクチンベクターが経口的にまたは鼻内に投与される、(20)に記載の方法。
(22)免疫応答が抗原性ポリペプチドに対するIgA抗体応答である、(21)に記載の方法。
(23)ワクチンベクターが対象動物において複製する能力をもたない、(20)−(22)のいずれかに記載の方法。
(24)ワクチンベクターが対象動物への投与前に不活化または殺滅される、(20)−(23)のいずれかに記載の方法。
(25)ワクチンベクターの表面に存在する抗原性ポリペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド配列、および免疫刺激性ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドを含むバシルス種ワクチンベクターであって、前記抗原性ポリペプチドおよび前記免疫刺激性ポリペプチドがワクチンベクターの表面に存在し、抗原性ポリペプチドがインフルエンザポリペプチドであり、免疫刺激性ポリペプチドがCD154ポリペプチドまたはHMGB1ポリペプチドである、前記ワクチンベクター。
(26)第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドが、トランスメンブレンタンパク質の外部部分をコードする第三のポリヌクレオチド配列内に挿入される、(25)に記載のワクチンベクター。
(27)トランスメンブレンタンパク質がcotBである、(26)に記載のワクチンベクター。
(28)抗原性ポリペプチドがインフルエンザM2eポリペプチド、インフルエンザHAポリペプチドまたはインフルエンザNPポリペプチドである、(25)−(27)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(29)インフルエンザM2eポリペプチドが、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:1の免疫原性フラグメント、配列番号:2の免疫原性フラグメント、配列番号:3の免疫原性フラグメントおよび配列番号:4の免疫原性フラグメントから成る群から選択される、(28)に記載のワクチンベクター。
(30)インフルエンザポリペプチドが、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9または配列番号:10を含む、(28)に記載のワクチンベクター。
(31)HMGB1ポリペプチドが、配列番号:18、配列番号:29、配列番号:30、配列番号:18、配列番号:29または配列番号:30の機能的フラグメント、および前記のホモローグから選択される、(25)−(30)のいずれかに記載のワクチンベクター。
(32)HMGB1の機能的フラグメントが、配列番号:25、配列番号:26、配列番号:27および配列番号:28から選択される、(31)に記載のワクチンベクター。
(33)対象動物において免疫応答を増強する方法であって、(25)−(32)のいずれかに記載のバシルス種ワクチンベクターを対象動物の免疫応答の増強に有効な量で対象動物に投与する工程を含む、前記方法。
(34)ワクチンベクターが経口的にまたは鼻内に投与される、(33)に記載の方法。
(35)免疫応答が抗原性ポリペプチドに対するIgA抗体応答である、(34)に記載の方法。
(36)ワクチンベクターが対象動物において複製する能力をもたない、(33)−(35)のいずれかに記載の方法。
(37)ワクチンベクターが対象動物への投与前に不活化または殺滅される、(33)−(36)のいずれかに記載の方法。
(38)インフルエンザAに関連する病的状態を対象動物において緩和する方法であって、前記方法が、(1)−(15)のいずれかに記載のワクチンベクターまたは(16)−(19)のいずれかに記載の組成物をインフルエンザAに関連する病的状態の緩和に有効な量で対象動物に投与する工程を含む、前記方法。
(39)インフルエンザAに関連する病的状態を対象動物において緩和する方法であって、(25)−(32)のいずれかに記載のバシルス種ワクチンベクターをインフルエンザAに関連する病的状態の緩和に有効な量で対象動物に投与する工程を含む、前記方法。
(40)免疫応答を対象動物において増強する方法であって、(1)に記載のワクチンベクターを抗原性ポリペプチドに対する対象動物の免疫応答の増強に有効な量で投与する工程を含む、前記方法。
(41)ワクチンベクターが経口的にまたは鼻内に投与される、(40)に記載の方法。
(42)免疫応答が抗原性ポリペプチドに対するIgA抗体応答である、(41)に記載の方法。
(43)ワクチンベクターが対象動物において複製する能力をもたない、(42)に記載の方法。
バシルスベクター
株および培養条件
全てのプラスミドは、特段の記載がなければ最初TOP10大腸菌細胞(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)で維持した。バシルス種を変異の導入に用いた(枯草菌、NP122と称される家禽衛生研究所(Poultry Health Laboratory)株である)。pDGIEFおよびpHT10を保持する細菌は37℃で増殖させた。
細胞の日常的増殖にはルリア-ベルターニ(Luria-Bertani(LB))培地を用い、エレクトロポレーション後の表現型発現にはSOC培地(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)を用いた。適切な場合には以下を培地に添加した:1mM のイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)、100μg/mLのアンピシリン(Amp)、100μg/mLのスペクチノマイシン(SP)および5μg/mLのクロラムフェニコール(Cm)。
本実験で用いたプラスミドpDGIEF(Bacillus Genetic Stock Center, Columbus, OH)およびpHT10は以前に記載されている(Zhang et al., Nuc. Acids Research 2006, 34 (9):1-8;およびNguyen et al., Curr. Micro. 2007, 55:89-93)。プラスミドpDGIEF は、mazF遺伝子(バシルスの染色体操作時に対抗選別マーカーとして使用)の増幅のための鋳型として供した。プラスミドpHT10は、バシルス種内でトリインフルエンザの異種エピトープ配列をコードし、これを生成するために用いた。このプラスミドはCM耐性遺伝子を含み、1mM IPTGの添加によって誘発され、37℃にてバシルス内で維持される。
業者(MoBioTec/Boca Scientific, Boca Raton, FL)から購入したプラスミドpHT10(Nguyen et al., 2007)を、枯草菌コドン最適化挿入配列の添加によってマルチクローニング部位で形質転換した。DNA配列決定を実施し、正確な配列挿入を確認した。続いてこの新規改変プラスミドで枯草菌を形質転換した。簡単に記せば、バシルス培養を37℃にて一晩HS培地(.5%グルコース、50μg/ml DL-トリプトファン、50μg/mlウラシル、0.02%カゼイン水解物、0.1%酵母抽出物、8μg/mlアルギニン、0.4μg/mlヒスチジン、1mM MgSO4を補充したスピチツェン(Spizizen)培地)で増殖させた。一晩培養(1mL)を用いて、20mLのLS培地(0.5%グルコース、5μg/ml DL-トリプトファン5μg/mlウラシル、0.01%カゼイン水解物、0.1%酵母抽出物、1mM MgSO4、2.5mM MgCl2、0.5mM CaCl2を補充したスピチツェン培地)に接種し、震盪しながら30℃にて3−4時間インキュベートした。得られたLS培養の1mLに、10μLの0.1M EGTAを添加し室温で5分間インキュベートした。続いて1−2μgのプラスミドDNAを添加し、37℃で2時間震盪して選別抗生物質を含むLBプレートで平板培養した。これらの形質転換バシルス種は、1mM IPTGで誘発したときAIから異種エピトープ配列を生成する。
PCRに用いた全てのプライマーが表1に列挙されている。典型的なPCR条件は以下から成る:約0.1μgの精製ゲノム、プラスミドまたはPCR生成DNA(Qiagen, Valencia, CA, USA)、1x Pfuポリメラーゼ緩衝液、5U Pfuポリメラーゼ(Stratagene La Jolla, CA, USA)、1mM dNTP(GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ)、総体積50μL中の各プライマー1.2μM。DNAエンジンサーモサイクラー(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)を以下の増幅条件で用いた:94℃で2分;1kbにつき94℃で30秒、58℃で60秒、72℃で90秒の30サイクル;および最終伸長のために72℃で10分。各PCR生成物をゲル精製し(Qiagen, Valencia, CA, USA)、オーバーラップ伸長PCRで用いる鋳型の調製のためには25μLのEB緩衝液で、または50μLのEB緩衝液で溶出させ、エタノールで沈殿させ、さらにバシルス種のエレクトロポレーションのために5μLのddH2Oに再懸濁させた。
簡単に記せば、細胞を10mLのLB培地に接種し、37℃で一晩増殖させた。続いて100μLの一晩培養を10mLの新鮮なLB培地に37℃で3−4時間再接種した。細胞をddH2O水で5回洗浄し、60μLの10%グリセロールに再懸濁させた。続いて細胞を2.4−2.45kVで1−6分間パルスし、0.5mLのSOC中で2−3時間37℃にてインキュベートし、さらに適切な抗生物質を含むLB培地にプレートした。
選択したM2e、HAおよびNPエピトープの安定に組み込まれたコピーを含む組換えバシルス株を、最近報告された方法に改変を加えたものを用いて構築した。簡単に記せば、バシルス株をMazFカセット(Zhang et al., 2006)で形質転換した(前記カセットはIPTG感受性でスペクトマイシン耐性株を創出した)。各々の側に約300bpの同種DNAがフランキングするMazFカセットをバシルスベクターのCotB遺伝子(Isticato et al., 2001)にエレクトロポレーションによって導入し、続いて陽性クローンのためにスペクトマイシン含有培地で増殖させた(陽性クローンはMazFカセット(スペクトマイシン耐性)を含む)。
CotBでMazF変異を確認した後、この領域をAIの抗原性エピトープ(これもまた300bpの同種DNAによってフランキングされている)をコードするコドン最適化DNA配列によって置き換えた。前記操作は、オーバーラップ伸長PCRを用いてPCR生成物を作製し、バシルス染色体と相同な約300bpが各側にフランキングする抗原性配列を作製することによって実施した(Cox et al., 2007)。このPCR生成物を再度エレクトロポレーションおよびMazFカセットの置換によってバシルスに導入した。形質転換体をIPTG含有プレートで選別した(陽性クローンはIPTGに非応答性でスペクトマイシンに感受性であるはずである)。染色体配列への正確な挿入はDNA配列決定によって確認した。
孵化当日(0日目)のニワトリ雛を当地の孵化業者から入手し、無作為に処置グループに割り当てた(n=15/処置グループ、実験1;およびn=20/処置グループ、実験2)。各処置グループの全てのニワトリ雛にタグを付け番号を与えた。前記ニワトリ雛に、0.25mLの食塩水または、試験1については表2および試験2については表3に示す多様な処置バシルスの106−108cfu/mLを移管栄養により経口的に感染させた。
各々の処置グループを個々のフロアペンに新しいおが屑を置いて収容し、水および飼料を随意に得させた。孵化後11日目および21日目にこれらのトリに、それらが0日目に受けた同じ処置の追加ワクチンを投与した。さらにまた、21および31/32日目に、タグを付けたこれらのトリの各々から血液を収集し、血清を取り出した。
各処置グループのタグを付したトリから収集した血清を続いて抗体捕捉ELISAで用いて、特異的M2e、HAUAおよびHALB抗体応答を決定した。簡単に記せば、96ウェルプレートの個々のウェルを、M2eエピトープ、HAUAエピトープまたはHALBエピトープのBSA複合体(10μg/mL)で被覆した。抗原付着は4℃で一晩進行させた。プレートをPBS+0.05%トゥイーン20で洗い流し、PBSスーパーブロック(PBS Superblock, Pierce Chemical Co.)で最低限2時間封鎖し、さらに上記に記載の各処置グループのトリから以前に収集した血清とともにインキュベートした。プレートをPBS+0.05%トゥイーン20で洗い流し、続いて業者(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)から入手したペルオキシダーゼ複合ヤギ抗ニワトリIgY二次抗体(1:7500稀釈)とともにさらに1時間インキュベートした。続いて洗い流した後、業者(Fisher Scientific)から入手したペルオキシダーゼ基質キットを用いて反応させ、分光光度計で450nmおよび405nmにて吸収を読み取った。
ベクターワクチンを投与したグループ由来のプール血清サンプルを陽性コントロールとして用い、さらに非ワクチン投与グループ由来のプール血清を処置グループ由来の血清と置き換えて各プレートで陰性コントロールとして用いた。陽性コントロール、陰性コントロールおよび実験サンプルについて得られた吸収を用い、以下の計算によりサンプル対陽性コントロール比(S/P比)を算出した:
S/Pの算出=(血清平均−陰性コントロール平均)/(陽性コントロール平均−陰性コントロール平均)
各試験について算出したS/P比は図1−6に示されている。図1−3は、試験1の孵化後21日目および31日目のM2e、HALBおよびHAAUの総抗体力価をそれぞれ示している。これらの結果は、これら抗原の各々に対して激しい免疫応答が、免疫刺激性ペプチドとしてのCD154またはHMGB1とともに各エピトープを発現するバシルスを経口投与された後で生じることを示している。図4−6は、試験2の孵化後21日目および32日目のM2e、HALBおよびHAAUの総抗体力価をそれぞれ示している。これらの結果は、エピトープの各々に対する激しい免疫応答が、前記エピトープおよび免疫刺激性ペプチドを発現する生バシルスの経口投与後に生じたことを示している。図4−6はまた、同様なレベルの特異的抗体が、ベクター(バシルス)が投与前に不活化されたときに生じたことを示している。
孵化当日(0日目)のニワトリ雛を当地の孵化業者から入手し、無作為に処置グループに割り当てた(n=20/処置グループ)。各処置グループの全てのニワトリ雛にタグを付け番号を与えた。前記ニワトリ雛に、0.25mLの食塩水、または105−108cfu/mLのバシルスベクター(BSBB)(前記バシルスベクターはトリインフルエンザエピトープおよびHMGB1を発現する(BS/AI/HMGB1))、またはホルマリン不活化(上記に記載のとおり)後の種々の量のBS/AI/HMGB1ベクターを胃管栄養法により経口的に感染させた。孵化後10日目に、これらのトリに、それらが0日目に受けた同じ処置の追加ワクチンを投与した。さらにまた、21および32日目に、タグを付けたこれらのトリの各々から血液を収集し、血清を取り出した。上記に記載した方法を用い、血清IgGのM2e特異的抗体レベルをペルオキシダーゼ標識抗ニワトリIgG特異的二次抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)により決定した。図7の結果は、ホルマリン不活化細菌は、生菌と同様にM2e特異的IgG抗体の産生を刺激できたことを示している。この結果は驚くべきであった。なぜならば、生菌のみが経口投与後に激しい免疫応答を刺激できると一般には信じられていたからである。
孵化当日(0日目)のニワトリ雛を当地の孵化業者から入手し、無作為に処置グループに割り当てた(n=20−35/処置グループ)。各処置グループの全てのニワトリ雛にタグを付け番号を与えた。前記ニワトリ雛に、106cfu/mL(0.25mL)のバシルスベクター(BSBB)、トリインフルエンザエピトープおよびHMGB1を発現するバシルスベクター(BSAI)、またはホルマリン不活化(上記に記載のとおり)後のBSAIベクター、またはホルマリン不活化後に凍結乾燥(投与直前に食塩水にて再構成)させたBSAIベクターを経口胃管投与により感染させるか、または皮下注射した。孵化後10日目に、これらのトリの数羽に、それらが0日目に受けた同じ処置の追加ワクチンを投与した。11、14および21日目に、タグを付けたこれらのトリの各々から血液を収集し、血清を取り出した。血清IgAおよびIgG M2e特異的抗体レベルを、上記に記載した方法を用いて、ペルオキシダーゼ標識抗ニワトリIgA(GenTex)、またはペルオキシダーゼ標識抗ニワトリIgG特異的二次抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)により決定した。図8の結果は、ホルマリン不活化細菌は、経口投与されたときは生菌と同様にM2e特異的IgA抗体産生を刺激できたことを示している。対照的に、不活化BSAIベクターは、皮下投与されたときはIgA抗体応答の刺激に効果的ではなく、凍結乾燥細菌はIgA応答を刺激しなかった。図9の結果は、BSAI投与プロトコルの各々が激しいIgG生成を支持したことを示している。
Claims (15)
- 表面、抗原性ポリペプチドをコードする第1のポリヌクレオチド、および、HMGB1ポリペプチドをコードする第2のポリヌクレオチドを含むワクチンベクターであって、前記HMGB1ポリペプチドが、配列番号18、29または30のいずれかに少なくとも90%配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記抗弁性ポリペプチドおよび前記HMGB1ポリペプチドがワクチンベクターの表面に存在する、前記ワクチンベクター。
- HMGB1ポリペプチドが、配列番号18、29または30のいずれかに少なくとも95%配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項1記載のワクチンベクター。
- HMGB1ポリペプチドが、配列番号18、29または30のいずれかに少なくとも98%配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項1記載のワクチンベクター。
- HMGB1ポリペプチドが、配列番号18、29または30のいずれかを含む、請求項1記載のワクチンベクター。
- HMGB1ポリペプチドが、配列番号18を含む、請求項1記載のワクチンベクター。
- 抗原性ポリペプチドおよびHMGB1ポリペプチドが融合タンパク質の部分である、請求項1〜5のいずれかに記載のワクチンベクター。
- 請求項1〜6のいずれかに記載のワクチンベクターを含む組成物。
- さらに医薬的に許容できる担体を含み、前記担体が経口投与または鼻投与用に許容できる、請求項7に記載の組成物。
- ワクチンベクターが複製する能力をもたない、請求項7または8に記載の組成物。
- ワクチンベクターが不活化または殺滅されている、請求項7〜9のいずれかに記載の組成物。
- 非ヒト対象動物において免疫応答を増強する方法であって、請求項1〜6のいずれかに記載のワクチンベクターまたは請求項7〜10のいずれかに記載の組成物を、抗原性ポリペプチドに対する非ヒト対象動物の免疫応答を増強するために有効な量で投与する工程を含む、前記方法。
- ワクチンベクターが経口投与または鼻内投与される、請求項11に記載の方法。
- 免疫応答が抗原性ポリペプチドに対するIgA抗体応答である、請求項11〜12のいずれかに記載の方法。
- ワクチンベクターが対象動物において複製する能力をもたない、請求項11〜13のいずれかに記載の方法。
- ワクチンベクターが対象動物への投与前に不活化または殺滅されている、請求項11〜14のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29709810P | 2010-01-21 | 2010-01-21 | |
US61/297,098 | 2010-01-21 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016044306A Division JP2016117757A (ja) | 2010-01-21 | 2016-03-08 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018039843A true JP2018039843A (ja) | 2018-03-15 |
JP6687585B2 JP6687585B2 (ja) | 2020-04-22 |
Family
ID=44307229
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012550153A Active JP6242050B2 (ja) | 2010-01-21 | 2011-01-21 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
JP2016044306A Pending JP2016117757A (ja) | 2010-01-21 | 2016-03-08 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
JP2017233454A Active JP6687585B2 (ja) | 2010-01-21 | 2017-12-05 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012550153A Active JP6242050B2 (ja) | 2010-01-21 | 2011-01-21 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
JP2016044306A Pending JP2016117757A (ja) | 2010-01-21 | 2016-03-08 | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8956618B2 (ja) |
EP (1) | EP2525817B8 (ja) |
JP (3) | JP6242050B2 (ja) |
KR (1) | KR101638661B1 (ja) |
CN (1) | CN102811734B (ja) |
AU (1) | AU2011207331C1 (ja) |
CA (1) | CA2787661C (ja) |
CL (1) | CL2012002016A1 (ja) |
CO (1) | CO6561819A2 (ja) |
DK (1) | DK2525817T3 (ja) |
EA (1) | EA023058B1 (ja) |
ES (1) | ES2643646T3 (ja) |
HU (1) | HUE037157T2 (ja) |
MX (1) | MX341775B (ja) |
NO (1) | NO2525817T3 (ja) |
NZ (1) | NZ601609A (ja) |
PL (1) | PL2525817T3 (ja) |
PT (1) | PT2525817T (ja) |
UA (1) | UA110024C2 (ja) |
WO (1) | WO2011091255A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201205824B (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BRPI0819229B1 (pt) * | 2007-11-01 | 2019-01-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | vacinas para reforçar reações imunes contra eimeria |
MX341775B (es) | 2010-01-21 | 2016-09-02 | The Texas A&M Univ System * | Vectores para vacunas y metodos para potenciar respuestas inmunes. |
DK2579901T3 (da) | 2010-06-09 | 2019-11-04 | Univ Arkansas | Vaccine og fremgangsmåder til reduktion af campylobacterinfektion |
EP2646050B1 (en) | 2010-12-02 | 2016-09-07 | mAB-Factory GmbH | Vaccine against influenza h5n1 viruses, medicament and treatment of h5n1 viral infections |
EP3610887B8 (en) | 2013-02-14 | 2024-01-24 | The Board of Trustees of the University of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to eimeria or limiting eimeria infection |
WO2014152508A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to enteric pathogens |
CN105399808B (zh) * | 2015-11-23 | 2019-05-10 | 青岛农业大学 | 一种许氏平鮋免疫增强蛋白hmgb1基因及编码蛋白和应用 |
AR108688A1 (es) | 2016-05-03 | 2018-09-19 | Univ Arkansas | Vector de vacuna de levadura que incluye polipéptidos inmunoestimuladores y antigénicos, métodos para su uso |
US11744875B2 (en) | 2019-07-12 | 2023-09-05 | Op-T Llc | Peptides and methods for treating disease |
WO2021212013A2 (en) | 2020-04-17 | 2021-10-21 | Op-T Llc | Bioactive peptides and methods of use thereof |
US10973908B1 (en) | 2020-05-14 | 2021-04-13 | David Gordon Bermudes | Expression of SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain in attenuated salmonella as a vaccine |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008036675A2 (en) * | 2006-09-18 | 2008-03-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses |
US20080305120A1 (en) * | 2004-06-17 | 2008-12-11 | Medimmune, Inc. | Immunogenic Compositions Comprising Hmgb 1 Polypeptides |
Family Cites Families (76)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL170938B1 (pl) | 1991-03-05 | 1997-02-28 | Wellcome Found | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwko infekcjom Salmonella PL PL |
US5981724A (en) | 1991-10-25 | 1999-11-09 | Immunex Corporation | DNA encoding CD40 ligand, a cytokine that binds CD40 |
US5962406A (en) | 1991-10-25 | 1999-10-05 | Immunex Corporation | Recombinant soluble CD40 ligand polypeptide and pharmaceutical composition containing the same |
CA2121798C (en) | 1991-10-25 | 2007-07-24 | Richard J. Armitage | Novel cytokine |
US7405270B2 (en) | 1991-10-25 | 2008-07-29 | Immunex Corporation | CD40-Ligand lacking native-pattern glycosylation |
EP0659086B1 (en) | 1992-09-04 | 1998-11-11 | The University of Saskatchewan | Novel bacterial vaccines using vaccine strains of pathogenic bacteria |
WO1995014487A1 (en) | 1993-11-24 | 1995-06-01 | The Australian National University | Treatment of viral disease with cd40l peptide |
KR19980702490A (ko) | 1995-03-01 | 1998-07-15 | 스티븐 엘. 말라스카 | 면역 반응의 자극 방법 |
ES2214541T3 (es) | 1995-06-07 | 2004-09-16 | Immunex Corporation | Muteina de cd40l. |
US6479258B1 (en) | 1995-12-07 | 2002-11-12 | Diversa Corporation | Non-stochastic generation of genetic vaccines |
US6713279B1 (en) | 1995-12-07 | 2004-03-30 | Diversa Corporation | Non-stochastic generation of genetic vaccines and enzymes |
US6306387B1 (en) | 1997-05-29 | 2001-10-23 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antigen delivery system |
US20030045492A1 (en) | 1997-08-13 | 2003-03-06 | Tang De-Chu C. | Vaccination by topical application of recombinant vectors |
US6969609B1 (en) | 1998-12-09 | 2005-11-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Serivces | Recombinant vector expressing multiple costimulatory molecules and uses thereof |
CA2223225A1 (en) | 1997-11-28 | 1999-05-28 | Canadian Red Cross Society | Method for inhibiting in vivo immune response |
JP2001526241A (ja) | 1997-12-19 | 2001-12-18 | イミュネックス・コーポレーション | Hiv感染に対する感受性を低下させるための方法 |
GB9806449D0 (en) | 1998-03-25 | 1998-05-27 | Peptide Therapeutics Ltd | Attenuated bacteria useful in vaccines |
US6190669B1 (en) | 1998-05-13 | 2001-02-20 | University Of Maryland, Baltimore | Attenuated mutants of salmonella which constitutively express the Vi antigen |
IT1299583B1 (it) | 1998-05-19 | 2000-03-16 | Vander Way Limited | Uso di proteine hmg-i per la preparazione di medicamenti ad attivita' citotossica |
ES2313792T3 (es) | 1998-09-04 | 2009-03-01 | Emergent Product Development Uk Limited | Mutantes atenuados de spi2 de salmonella como portadores de antigeno. |
US7300774B1 (en) | 1999-12-09 | 2007-11-27 | The Regents Of The University Of California | Multimeric fusion proteins of the TNF superfamily ligands |
EP1067194A1 (en) | 1999-04-16 | 2001-01-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Vectors containing a gene coding for CD40 and/or CD40L under the control of a cytokine-inducible promoter which is a human acute phase amyloid A gene promoter. Methods for their production and uses thereof |
AR023482A1 (es) | 1999-04-16 | 2002-09-04 | Hoffmann La Roche | Acidos nucleicos que codifican polipeptidos quimericos cd40/cd4ol, metodos para su produccion y usos de los mismos |
WO2001026608A2 (en) | 1999-10-14 | 2001-04-19 | Ledbetter Jeffrey A | Dna vaccines encoding antigen linked to a domain that binds cd40 |
ES2222152T3 (es) | 1999-12-28 | 2005-02-01 | Akzo Nobel N.V. | Vacuna con las salmonellas que no inducen anticuerpos que reaccionan con la flagelina o los flagelos. |
AU3480001A (en) | 2000-02-02 | 2001-08-14 | Government of the United States as represented by the Secretary of the Department of Commerce, The | CD40 ligand adjuvant for respiratory syncytial virus |
AU2001256957B2 (en) | 2000-03-17 | 2005-08-25 | Pharmacia & Upjohn Company Llc | Salmonella vaccine materials and methods |
GB0015426D0 (en) | 2000-06-24 | 2000-08-16 | Univ Southampton | Method for generating soluble highly multimeric proteins |
WO2002000232A2 (en) * | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Maxygen, Inc. | Methods and compositions for developing spore display systems for medicinal and industrial applications |
AU2002221780A1 (en) | 2000-10-31 | 2002-05-15 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Nucleic acids encoding cd40/cd40l chimeric polypeptides, methods for their production and uses thereof |
CA2447593C (en) | 2001-05-15 | 2014-07-08 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Ex-vivo priming for generating cytotoxic t lymphocytes specific for non-tumor antigens to treat autoimmune and allergic disease |
US7220723B2 (en) | 2001-05-15 | 2007-05-22 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
NZ529423A (en) | 2001-05-15 | 2008-10-31 | Gen Hospital Corp | Use of an antibody that inhibist vertebrate high mobility group (HMG) B box which then inhibits release of a proinflammatory cytokine from a vertebrate cell treated with HMG |
ITMI20011986A1 (it) | 2001-09-25 | 2003-03-25 | San Raffaele Centro Fond | Metodo e composizione per l'attivazione di cellule presentanti l'antigene |
EP1453531B1 (de) | 2001-12-19 | 2008-05-14 | Alcedo Biotech GmbH | Verwendung von hmgb-proteinen und dafür codierenden nukleinsäuren |
US6923958B2 (en) | 2002-03-02 | 2005-08-02 | The Scripps Research Institute | DNA vaccines encoding CEA and a CD40 ligand and methods of use thereof |
ATE556596T1 (de) | 2002-04-15 | 2012-05-15 | Univ St Louis | Regulierte attenuierung von lebendimpfstoffen zur verbesserung der kreuzimmunitätsschutzfunktion |
US7495090B2 (en) | 2002-05-23 | 2009-02-24 | The Regents Of The University Of California | Nucleic acids encoding chimeric CD154 polypeptides |
NZ540067A (en) | 2002-11-20 | 2007-05-31 | Critical Therapeutics Inc | A purified preparation of antibodies that specifically bind to a high mobility group box protein (HMGB) B box but do not specifically to non-B box epitopes of HMGB |
US20040156851A1 (en) | 2002-11-20 | 2004-08-12 | Critical Therapeutics, Inc. | HMGB1 combination therapies |
AU2003295653B2 (en) | 2002-11-20 | 2007-08-16 | The Feinstein Institute Of Medical Research | Use of HMGB polypeptides for increasing immune responses |
US20040141948A1 (en) | 2002-11-20 | 2004-07-22 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of HMGB fragments as anti-inflammatory agents |
US20050181994A1 (en) | 2003-01-06 | 2005-08-18 | Xencor, Inc. | Novel variants of CD40L protein |
US20060014248A1 (en) | 2003-01-06 | 2006-01-19 | Xencor, Inc. | TNF super family members with altered immunogenicity |
US7696169B2 (en) | 2003-06-06 | 2010-04-13 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
US7754209B2 (en) | 2003-07-26 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals | Binding constructs and methods for use thereof |
WO2005025604A2 (en) | 2003-09-10 | 2005-03-24 | The General Hospital Corporation | Use of hmgb and hmgb fragments to decrease specific immune response |
EP1673389A2 (en) | 2003-10-10 | 2006-06-28 | Xencor Inc. | Novel variants of cd40l protein |
CA2548347A1 (en) | 2003-12-11 | 2005-06-30 | Sidney Kimmel Cancer Center | Methods for generating immunity to antigen |
US8828957B2 (en) | 2003-12-11 | 2014-09-09 | Microvax, Llc | Methods for generating immunity to antigen |
EP1740604A2 (en) | 2004-04-27 | 2007-01-10 | Intercell AG | Td antigens |
WO2005113598A2 (en) | 2004-05-21 | 2005-12-01 | Xencor, Inc. | Tnf super family members with altered immunogenicity |
US20080075728A1 (en) | 2004-07-20 | 2008-03-27 | Walter Newman | Combination Therapies Of Hmgb And Complement Inhibitors Against Inflammation |
ATE489455T1 (de) | 2004-10-07 | 2010-12-15 | Argos Therapeutics Inc | Zusammensetzungen reifer dendritischer zellen und verfahren zu deren kultivierung |
US8513008B2 (en) | 2004-10-07 | 2013-08-20 | Argos Therapeutics, Inc. | Mature dendritic cell compositions and methods for culturing same |
GB0423681D0 (en) | 2004-10-26 | 2004-11-24 | Sec Dep For Environment Food & | Vaccine and nucleic acids |
CA2593746A1 (en) | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Vaxinnate Corporation | Compositions of influenza viral proteins and methods of use thereof |
WO2006105972A1 (en) | 2005-04-07 | 2006-10-12 | Universite Libre De Bruxelles | Transgenic organism expressing cd40l and uses thereof |
US20060286074A1 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-21 | Yucheng Tang | Methods for immunotherapy of cancer |
EP1909834A2 (en) | 2005-07-18 | 2008-04-16 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of hmgb1 antagonists for the treatment of inflammatory skin conditions |
AU2006301171B9 (en) | 2005-10-07 | 2012-03-29 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Immunostimulatory combination for the prophylactics and treatment of hepatitis C |
JP2009514536A (ja) | 2005-11-07 | 2009-04-09 | シドニー キンメル キャンサー センター | Cd40リガンド融合蛋白質ワクチン |
WO2007054658A1 (en) | 2005-11-14 | 2007-05-18 | King's College London | Control of immune responses |
WO2007130725A2 (en) * | 2006-02-06 | 2007-11-15 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Use of hmgb1 for protection against ischemia reperfusion injury |
WO2007103048A2 (en) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | Regents Of The University Of Colorado | Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity |
US8802419B2 (en) | 2006-03-02 | 2014-08-12 | University Of Massachusetts | Modified pathogens for use as vaccines |
AU2007345768B2 (en) * | 2006-07-27 | 2013-08-01 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric influenza virus-like particles |
US8564612B2 (en) * | 2006-08-04 | 2013-10-22 | Apple Inc. | Deep pixel pipeline |
CN104278014A (zh) | 2006-08-09 | 2015-01-14 | 米迪缪尼有限公司 | 流感血凝素和神经氨酸酶变体 |
WO2008109825A2 (en) | 2007-03-08 | 2008-09-12 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Inducing immune-mediated tumor cell death |
AU2008275513A1 (en) * | 2007-05-02 | 2009-01-15 | Emory University | Enhancement of glycoprotein incorporation into virus-like particles |
EP2214840B1 (en) | 2007-10-30 | 2015-05-06 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses to flagellated bacterium |
BRPI0819229B1 (pt) | 2007-11-01 | 2019-01-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | vacinas para reforçar reações imunes contra eimeria |
MX341775B (es) | 2010-01-21 | 2016-09-02 | The Texas A&M Univ System * | Vectores para vacunas y metodos para potenciar respuestas inmunes. |
DK2579901T3 (da) | 2010-06-09 | 2019-11-04 | Univ Arkansas | Vaccine og fremgangsmåder til reduktion af campylobacterinfektion |
US20140328815A1 (en) | 2011-11-11 | 2014-11-06 | Nutrition Physiology Company, Llc | Lactic Acid Bacteria And Their Use As Dietary Supplementals For Poultry |
-
2011
- 2011-01-21 MX MX2012008506A patent/MX341775B/es active IP Right Grant
- 2011-01-21 DK DK11735230.2T patent/DK2525817T3/en active
- 2011-01-21 NO NO11735230A patent/NO2525817T3/no unknown
- 2011-01-21 HU HUE11735230A patent/HUE037157T2/hu unknown
- 2011-01-21 CA CA2787661A patent/CA2787661C/en active Active
- 2011-01-21 UA UAA201210026A patent/UA110024C2/ru unknown
- 2011-01-21 EA EA201290675A patent/EA023058B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-01-21 PT PT117352302T patent/PT2525817T/pt unknown
- 2011-01-21 KR KR1020127021697A patent/KR101638661B1/ko active IP Right Grant
- 2011-01-21 AU AU2011207331A patent/AU2011207331C1/en active Active
- 2011-01-21 WO PCT/US2011/022062 patent/WO2011091255A1/en active Application Filing
- 2011-01-21 PL PL11735230T patent/PL2525817T3/pl unknown
- 2011-01-21 CN CN201180006369.8A patent/CN102811734B/zh active Active
- 2011-01-21 NZ NZ601609A patent/NZ601609A/en unknown
- 2011-01-21 EP EP11735230.2A patent/EP2525817B8/en active Active
- 2011-01-21 JP JP2012550153A patent/JP6242050B2/ja active Active
- 2011-01-21 US US13/574,504 patent/US8956618B2/en active Active
- 2011-01-21 ES ES11735230.2T patent/ES2643646T3/es active Active
-
2012
- 2012-07-19 CO CO12122137A patent/CO6561819A2/es not_active Application Discontinuation
- 2012-07-20 CL CL2012002016A patent/CL2012002016A1/es unknown
- 2012-08-02 ZA ZA2012/05824A patent/ZA201205824B/en unknown
-
2015
- 2015-02-16 US US14/623,105 patent/US9913893B2/en active Active
-
2016
- 2016-03-08 JP JP2016044306A patent/JP2016117757A/ja active Pending
-
2017
- 2017-12-05 JP JP2017233454A patent/JP6687585B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080305120A1 (en) * | 2004-06-17 | 2008-12-11 | Medimmune, Inc. | Immunogenic Compositions Comprising Hmgb 1 Polypeptides |
WO2008036675A2 (en) * | 2006-09-18 | 2008-03-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Compositions and methods of enhancing immune responses |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
IMMUNOLOGY, vol. Vol.128,No.Suppl.1, JPN6015001412, 2009, pages pe612−e620 * |
JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. Vol.180,No.4, JPN6017029019, 1994, pages p1263−1272 * |
VACCINE, vol. Vol.27,No.42, JPN6015001409, 2009, pages p5846−5854 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6687585B2 (ja) | 免疫応答を増強するワクチンベクターおよび方法 | |
JP6874031B2 (ja) | アイメリアに対する免疫応答を強化するか又はアイメリア感染症を制限する組成物及び方法 | |
US11013792B2 (en) | Compositions and methods of enhancing immune responses to enteric pathogens | |
JP5746333B2 (ja) | カンピロバクター感染を減少させるワクチン及び方法 | |
US11866463B2 (en) | Immunogenic compositions to treat and prevent microbial infections | |
JP2012502652A (ja) | ヘマグルチニンに対する抗体、保存インフルエンザ抗原および免疫賦活性担体結合ドメインとを含む多機能性リンカータンパク質 | |
RU2776479C1 (ru) | Живая пробиотическая вакцина, содержащая консервативные эпитопы вируса гриппа А (LAH+4M2e), для профилактики гриппозной инфекции | |
BR112012018027B1 (pt) | Vetores de vacina e métodos de aperfeiçoamento de respostas imunes | |
NZ711761B2 (en) | Compositions and methods of enhancing immune responses to enteric pathogens |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180104 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180104 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180820 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181114 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190520 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20190529 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20190621 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200210 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200402 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6687585 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |