JP2018002661A - 抗菌防腐剤組成物及びそれを用いた組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
ラクトバチルス・ラムノーサスに属する乳酸菌の菌体、菌体培養物、又はこれらの抽出物を含有するものである。
前記ラクトバチルス・ラムノーサスは、ラクトバチルス・ラムノーサスKO3株(NITE BP−771)であることが好ましい。
前記抗菌防腐剤組成物を用いた、膣内、および外陰部、その周辺部分に適用される組成物である。
なお、本発明において、「抗菌」とは、細菌及び真菌類の殺菌又除菌、もしくはこれらの発生・生育・増殖を抑制することを含めて、最も広義に解釈されるべきであり、如何なる意味においても限定されない。本発明における抗菌防腐剤組成物とは、抗菌作用を有するため抗菌剤や防腐剤として使用可能であり、抗菌剤や防腐剤の各用途に応じて外用組成物中に組成物として配合される成分を意味する。
また、本発明における外用組成物とは、おおよそ外用に用いる組成物全般を包括する概念であり、特には皮膚または皮膚に隣接する粘膜(口腔、膣など)に適用する組成物をいう。本発明の外用組成物は、皮膚や粘膜における細菌性感染症の原因菌の増殖を抑制し、これにより細菌性感染症を予防またはその症状を改善もしくは、治療することができる組成物であり、医薬品、医薬部外品、化粧品などであってもよく、薬事法上の区分は特に限定されない。また、本発明における外用組成物とは、経皮投与、経口投与及び経膣投与により有効成分を作用させるための組成物である。
また、本実施形態では、上記外用組成物の一例として、女性の膣内、および外陰部、その周辺部分に適用される組成物(以下、単に「組成物」ともいう)について具体的に説明する。
また、「女性の膣内、および外陰部、その周辺部分に適用される組成物」の一例としては、女性の膣内の粘膜及び膣周囲の皮膚の疾患の予防、改善または治療に用いられる組成物が挙げられる。
具体的には、ラクトバチルス・ラムノーサスの一例として、当該特許微生物寄託センターにNITE BP−771として寄託されたラクトバチルス・ラムノーサス(Lactobacillus rhamnosus)KO3株が挙げられる(以下、単にKO3株ともいう)。
1)グラム陽性乳酸桿菌、2)ホモ型乳酸発酵、3)カタラーゼ陰性、4)芽胞形成能無し、5)好気条件下でも培養可、6)菌体外多糖類を産生。
培養方法は、静置培養又はpHを一定にした中和培養や、回分培養及び連続培養等、菌体が良好に生育する条件であれば、特に制限はない。
また、抗菌防腐剤組成物を化粧品、食品、医薬品、医薬部外品等の被防腐対象物の防腐剤として使用する際は、公知の防腐剤(例えば、パラベン、安息香酸及びその塩類等)と適宜組み合わせて用いることができる。
このように形態として用いる場合の該製剤中の本発明の乳酸菌の菌体若しくは菌体培養物又はこれらの抽出物の含有量は、全組成中の0.01質量%〜50質量%、好ましくは0.1質量%〜20質量%である。
また、女性の膣内、および外陰部、その周辺部分等の部位の疾患の予防、改善または治療に用いられる組成物においては、該組成物中の本発明の乳酸菌の菌体若しくは菌体培養物又はこれらの抽出物の含有量は、全組成中の0.01質量%〜50質量%、好ましくは0.05質量%〜20質量%である。より好ましくは0.09〜5.0重量%含有される。
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明する。
MRS培地(Difco社)を121℃で20分間滅菌した後、ラクトバチルス・ラムノーサス(Lactobacillus rhamnosus)KO3株(NITE BP−771)を接種し、37℃で、48時間大気下で培養した後、蒸留水・超純水・緩衝液などで洗浄後、菌体を調製した。
大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌及びセパシア菌の4種の各菌に対するKO3株の増殖抑制効果を防腐効力試験により試験する。
防腐効力試験によりKO3株の防腐力(抗菌力)を評価した。なお、対照としてKO3株を配合しない滅菌リン酸緩衝生理食塩水を用いた。
1.試験材料及び方法
(1)供試品
(a)2.5%KO3株水溶液:KO3株を2.5%含有した水溶液
(b)対照(滅菌リン酸緩衝生理食塩水)
(2)試験菌種
試験菌種として、以下の菌種を用いた。
(1)大腸菌:Escherichia coli(ATCC 8739)
(2)黄色ブドウ球菌:Staphylococcus aureus(NBRC12732)
(3)緑膿菌:Pseudomonas aeruginosa(ATCC 27853)
(4)セパシア菌:Pseudomonas cepacia
(3)試料保存温度と培養条件
試料保存温度:25℃
培養条件 :(1)培地の種類 SCDLP寒天培地
(2)培養温度 37℃
(4)菌の接種方法及び測定方法
接種方法:100ml容三角フラスコに各試料を20gずつ秤量し、菌液0.1mlを添加した。
目標接種菌数:105個/ml〜106個/mlを目標として接種した。
(5)菌数評価時期及び測定方法
菌数評価時期は接種時(接種した菌数測定)を保存日数0日とし、接種後7日目、14日目、28日目を保存日数7日(1W)、14日(2W)、28日(4W)とした。試験結果を表1、表2に示す。各表中の単位は、個/mLである。
膣内にはデーデルライン桿菌という常在菌が存在し、この常在菌により膣内を清潔に保つ自浄作用があることや病原性微生物(病原性細菌)の感染を防ぐことが知られている。本検証では、KO3株が膣内環境(デーデルライン桿菌)に対して悪影響を及ぼすかどうかの確認をおこなった。さらに、既存の膣洗浄用製剤や膣用潤滑剤である種々の市販品と2.5%KO3株水溶液とを用いてデーデルライン桿菌に対する影響を調査した。
1)2.5%KO3株水溶液
2)市販品A(パラベン)
3)2.5%KO3株+市販品A(市販品Aに2.5%濃度でKO3株を添加したもの。パラベン)
4)市販品W(パラベン)
5)市販品F(安息香酸塩)
6)市販品S(パラベン)
7)市販品I(パラベン)
8)市販品P(IPBC(ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル))
対照)滅菌リン酸緩衝生理食塩水
※注1 上記8)における市販品PのIPBC(ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル)は、化粧品のポジティブリストに収載されている防腐剤であり、配合上限は0.02%である。
[試験委託機関]一般社団法人日本油料検定協会 綜合分析センター
[対象菌種]デーデルライン桿菌(被験者(30代女性)から採取)
試験(1)デーデルライン桿菌の発育(菌数)とpHの相関関係を調べた。
[試験(1)の方法]
滅菌済のBHI液体培地(10ml)が入った各試験管に、約105個/mLに希釈したデーデルライン桿菌の菌液を1.0mLずつ添加した。その後、指定された0.5、5、8、24時間と36時間振とう培養し検液とした。各検液は10倍段階希釈を行い菌数の測定を行った。測定培地にはSCDLP寒天培地を使用し混釈法で行った。SCDLP寒天培地が固化した後は、倒置して37℃で48±3時間培養後、菌数を測定した。
接種菌液菌数:6.0×103/ml
[試験内容]
試験(2)各種検体存在下でデーデルライン桿菌の発育試験を行った。
[試験(2)の方法]
BHI液体培地にデーデルライン桿菌を接種後、37℃で一夜ほど、振とう培養したものを約103程度の菌数になるように希釈し試験菌液とした。次に各検体(1.5g)を滅菌済みのBHI液体培地(10ml)が入った試験管に入れた後、よく混和したものを試験液とした。各試験液に、試験菌液を1mL加え、37℃で振とう培養し、0.5、3、7、24時間振とう培養したものを検液とした。各検液は、10倍段階希釈を行い菌数の測定を行った。その後、各検液の濁度とpHを測定した。0時間の菌数は添加菌数より算出したが、濁度とpHは測定した。測定培地にはSCDLP寒天培地を使用し混釈法で行った。SCDLP寒天培地が固化した後は、倒置して37℃で48±3時間培養後、菌数を測定した。
接種菌液菌数:6.7×103/mL
[試験内容]
試験(3)各種検体存在下でデーデルライン桿菌への影響の確認を行った。
なお、以下の(9)は、市販品B(ビデ)である。
[試験(3)の方法]
BHI液体培地と5倍濃縮のBHI液体培地をpH4.0に調整した後、オートクレーブで滅菌を行った。滅菌ができたBHI液体培地と5倍濃縮のBHI液体培地は滅菌試験管へ使用に合わせて各10mLと2mLに分注した。各10mLのBHI液体培地に各検体(1)、(7)、(8)、(9)1.5gを加えた。検体(4)は5倍濃縮のBHI液体培地2mLに対して8mLを加えて混和した。その後、約107個/mLの供試菌液を100μLずつ添加し37℃で振とう培養し、0.5、24時間振とう培養したもの(各検体2つずつ)を検液とした。各検液とも30分後と24時間後のものから段階希釈して菌数を測定した。測定培地にはSCDLP寒天培地を使用し混釈法で行った。SCDLP培地が固化した後は倒置して37℃で、48±3時間培養し菌数を測定した。
接種菌液菌数:6.0×107/mL
試験(1)、(2)、(3)の結果に基づき考察すると、膣洗浄を標榜した市販品及び潤滑剤である各検体と比較して、例えば、2.5%KO3株水溶液は対照と同じく、デーデルライン桿菌の菌数が維持されており、膣常在菌であるデーデルライン桿菌に影響がないことが確認された。これにより、膣内での使用を想定した抗菌防腐剤組成物としてのKO3株の優位性が確認された。KO3株はデーデルライン桿菌の発育阻害が緩和されているのに対して、市販品は配合されている防腐剤の影響によって顕著にデーデルライン桿菌の発育を阻害しており(例えば、検体(7)、(8))、膣桿菌の一種であるデーデルライン桿菌に対する防腐剤の負荷が非常に大きいことがわかる。また、パラベンとKO3株が共存する場合は、パラベンによる防腐効果が維持されるためデーデルライン桿菌は発育しにくくなる。デーデルライン桿菌の発育とともに乳酸が代謝され、系内のpHが低下するが試験(3)の結果からpHが低下し過ぎると(pH=4.0以下)とデーデルライン桿菌の発育が顕著に遅くなるため、製剤のpH設定は非常に重要である。パラベンの配合量とデーデルライン桿菌の発育阻害効果にはある程度の相関が見られ、パラベン配合量の多い検体ほど、発育阻害効果が大きく、配合量の少ない検体に関しては、発育阻害効果は観測されるが、24時間後には、対照と同程度まで発育する。
以上により、KO3株は、他の市販品と比較して、膣内の常在菌であるデーデルライン桿菌を残存させることができることが確認できた。
また、女性の膣内常在菌であるデーデルライン桿菌は乳酸桿菌である。本発明のKO3株もヒト由来の乳酸桿菌であるため、KO3株とデーデルライン桿菌とは互いに共存が可能である。したがって、例えば、KO3株を膣内殺菌用途の製剤に含有させても、膣内常在菌のデーデルライン桿菌に悪影響を与えない。
また、本発明に係るKO3株は、ヒト由来の乳酸菌株であり、粘膜などの薬剤が吸収されやすい部分であっても、安全に使用することが推察できる。
Claims (3)
- ラクトバチルス・ラムノーサスに属する乳酸菌の菌体、菌体培養物、又はこれらの抽出物を含有する抗菌防腐剤組成物。
- 前記ラクトバチルス・ラムノーサスは、ラクトバチルス・ラムノーサスKO3株(NITE BP−771)である請求項1に記載の抗菌防腐剤組成物。
- 請求項1または請求項2に記載の抗菌防腐剤組成物を用いた、膣内、および外陰部、その周辺部分に適用される組成物。
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