JP2017505127A5 - - Google Patents
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Claims (24)
- 改変IgH遺伝子座を含む細胞であって、該IgH遺伝子座の最3'側V H セグメントが、カセット標的配列を含み、かつ該改変IgH遺伝子座が、IgH遺伝子座の最3'側V H セグメントの3'末端とIgH遺伝子座のD H セグメントの5'末端の間に介在する核酸配列内に非機能性IGCR1配列をさらに含む、前記細胞。
- カセット標的配列が最3'側VHセグメントの置換を可能にする、請求項1記載の細胞。
- カセット標的配列が、
I-SceIメガヌクレアーゼ部位、Cas9/CRISPR標的配列、Talen標的配列、またはリコンビナーゼ媒介カセット交換システム
からなる群より選択される、請求項1記載の細胞。 - IgH遺伝子座の最3'側VHセグメントが、非ネイティブVHセグメント配列を含むよう改変されている、請求項1記載の細胞。
- 非ネイティブVHセグメントがヒトVHセグメントである、請求項4記載の細胞。
- 非ネイティブVHセグメントが、親和性または特異性の改善を必要とする既知の抗体由来のヒトVHセグメントである、請求項4記載の細胞。
- （a）1つまたは複数のJHセグメントの3'側に配置された3'リコンビナーゼ部位と、
欠失したネイティブ最3'側VHセグメントの位置に配置されたパッセンジャーカセットであって、5'から3'に向かって、
5'リコンビナーゼ部位、
逆位パッセンジャーVDJエクソンおよび／またはカセット標的配列、ならびに
成熟適合性VHセグメント
を含む、パッセンジャーカセットと
をさらに含み、リコンビナーゼ部位が互いに関して逆位である；または
（b）1つまたは複数のJ H セグメントの3'側に配置された3'リコンビナーゼ部位と、
欠失したネイティブ最3'側V H セグメントの位置に配置されたパッセンジャーカセットであって、5'から3'に向かって、
5'から3'への配向のパッセンジャーVDJエクソンおよび／またはカセット標的配列、
5'リコンビナーゼ部位、ならびに
成熟適合性V H セグメント
を含む、パッセンジャーカセットと
をさらに含み、リコンビナーゼ部位が同じ配向である、
請求項1記載の細胞。 - 請求項1記載の細胞を含む、遺伝子改変マウス。
- 第1の集団が、V(D)J組み換え欠陥である細胞を含み、かつ
第2の集団が、請求項1記載の細胞を含む、
2つの細胞集団を含む、キメラ遺伝子改変マウス。 - マウス胚盤胞に請求項1記載の細胞を注入する工程であって、細胞がマウス胚性幹細胞であり、VHセグメントがネイティブ最3'側VHセグメントの位置に既知の抗体のVHセグメントを含む、工程；
胚盤胞から遺伝子改変マウスへと成熟させるのに適した条件下で、マウス胚盤胞をメスマウスに移植する工程；
遺伝子改変マウスから、
1）非ネイティブVHセグメントを含む最適化された抗体；または
2）非ネイティブVHセグメントを含む最適化された抗体を産生する細胞
を単離する工程
を含む、既知の抗体から最適化された抗体を作製する方法。 - マウスIgH遺伝子座の最近位側VHセグメントを既知のモノクローナル抗体由来のVHセグメントで置き換えることによって、マウス胚性幹細胞を改変する工程；
IgH遺伝子座の最3'側V H セグメントの3'末端とIgH遺伝子座のD H セグメントの5'末端の間に介在する核酸配列内のIGCR1配列を、非機能性となるように改変する工程；および
成熟B細胞を形成することができないマウスの胚盤胞に、改変されたマウス胚性幹細胞を注入し、それによって既知のモノクローナル抗体由来のVHセグメントを含むVH（D)JH再構成体を含むBリンパ球を生成するキメラマウスを作製する工程
を含む、既知のモノクローナル抗体由来のVHセグメントを含むVH（D)JH再構成体を含むBリンパ球を生成する方法。 - 哺乳動物の末梢B細胞の大部分が関心対象のVHセグメントを発現するよう改変された請求項8記載の哺乳動物を、抗原で免疫する工程；
該哺乳動物におけるB細胞の活性化を測定する工程；および
該哺乳動物におけるB細胞の活性化が参照レベルに対して増大している場合に、関心対象のVHセグメントを含むB細胞集団の活性化因子として候補抗原を同定する工程
を含む、関心対象のVHセグメントを含むB細胞集団を活性化させる抗原として候補抗原を同定する方法。 - 非機能性IGCR1配列が変異CBE配列を含むか；IGCR1配列のCBE配列が欠失しているか；またはIGCR1配列がIgH遺伝子座から欠失している、請求項1記載の細胞。
- マウス細胞である、請求項1記載の細胞。
- マウス幹細胞またはマウス胚性幹細胞である、請求項14記載の細胞。
- 幹細胞または胚性幹細胞である、請求項1記載の細胞。
- リコンビナーゼ部位がLoxP部位であり、かつ前記細胞がcreリコンビナーゼをコードする遺伝子座をさらに含む、請求項7記載の細胞。
- creリコンビナーゼをコードする遺伝子座が、未成熟B細胞において活性でなくかつ末梢B細胞において活性であるプロモーターの制御下にある、請求項17記載の改変細胞。
- プロモーターがCD21プロモーターである、請求項18記載の細胞。
- IgH遺伝子座が、
1つまたは複数の非ネイティブD H セグメント；
1つのネイティブD H セグメント；
J H セグメントがヒトJ H 2であるなどの、1つまたは複数の非ネイティブJ H セグメント；
1つのネイティブJ H セグメント；
マウスIgH遺伝子座配列；
ヒトIgH遺伝子座配列；および／または
ヒト化IgH遺伝子座配列
をさらに含む、請求項1記載の細胞。 - J H 遺伝子座が、ヒトDおよびJ H カセットまたはヒトDJ H 集合体を含むカセットによって置換されている、請求項1記載の細胞。
- 前記細胞が、請求項1記載の改変IgH遺伝子座に関してヘテロ接合性であり、かつ他方のIgH遺伝子座が不活性となるよう改変されており、前記細胞が、請求項1記載の改変IgH遺伝子座からのみIgH鎖を発現する、請求項1記載の細胞。
- ヒト配列を有するIgL遺伝子座、
ヒト化IgL遺伝子座、
ヒトIgL遺伝子座、
1つのV L セグメントを有するIgL遺伝子座、
1つのJ L セグメントを有するIgL遺伝子座、
IgLカッパもしくはラムダ遺伝子座におけるヒトV L J L 再構成体、および／または
マウスIgLカッパもしくはラムダ遺伝子座におけるヒトV L J L 再構成体
をさらに含み；ならびに／または
IgL遺伝子座が、IGκV1またはVRC01 IgLをコードする、
請求項1記載の細胞。 - GC抗体成熟応答を増大させる遺伝子を活性化、不活性化、または変更することができる変異をさらに含む、請求項1記載の細胞。
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