JP2015527070A5 - - Google Patents
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Description
別の態様では、本発明は、細胞性免疫応答を誘発し、抗原反応性キメラ受容体を発現させる、キメラ受容体により改変された腫瘍特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞調製物であって、リガンドが、腫瘍特異的抗原、ウイルス抗原、もしくはリンパ球による認識および除去を媒介するのに適する、標的細胞集団上で発現する任意の他の分子であるリガンド結合ドメインと、各ターゲティングされるリガンドに特異的な、カスタマイズされた長さのポリペプチドスペーサーであって、基準キメラ受容体と比較したＴ細胞増殖および／もしくはサイトカイン産生の増強をもたらすスペーサーと、膜貫通ドメインと、１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ受容体を有するＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む、改変された細胞傷害性Ｔリンパ球細胞調製物を得；かつ／または改変されたナイーブＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞もしくはメモリーＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞であって、リガンドが、腫瘍特異的抗原、ウイルス抗原、もしくはリンパ球による認識および除去を媒介するのに適する、標的細胞集団上で発現する任意の他の分子であるリガンド結合ドメインと、各ターゲティングされるリガンドに特異的な、カスタマイズされた長さのポリペプチドスペーサーであって、基準キメラ受容体と比較したＴ細胞増殖および／もしくはサイトカイン産生の増強をもたらすスペーサーと、膜貫通ドメインと、１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ受容体を有するＣＤ４＋細胞を含む、改変されたヘルパーＴリンパ球細胞調製物を得ることにより、養子免疫療法組成物を製造する方法を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
ａ）リガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチドであって、該リガンド結合ドメインがリガンドに結合し、該リガンドが、腫瘍特異的分子、ウイルス分子、またはリンパ球による認識および除去を媒介するのに適する、標的細胞集団上で発現する任意の他の分子である、ポリヌクレオチドと、
ｂ）該リガンドに特異的な長さのポリペプチドスペーサーをコードするポリヌクレオチドであって、該スペーサーが、該リガンドに応答して、基準キメラ受容体と比較したＴ細胞増殖および／またはサイトカイン産生の増大をもたらす、ポリヌクレオチドと、
ｃ）膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
ｄ）細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと
を含む、キメラ受容体核酸。
（項目２）
前記リガンド結合ドメインが、抗体断片である、項目１に記載のキメラ受容体核酸。
（項目３）
前記リガンド結合ドメインが、単鎖可変断片である、項目２に記載のキメラ受容体核酸。
（項目４）
前記腫瘍特異的分子が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ＲＯＲ１、メソテリン、ｃ−Ｍｅｔ、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２、ＧＤ−２、ＭＡＧＥ Ａ３ ＴＣＲ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目１から３のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目５）
前記スペーサーが、Ｘ １ ＰＰＸ ２ Ｐのアミノ酸配列を含む、項目１から４のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目６）
前記スペーサー領域が、ヒト抗体のヒンジ領域の一部分を含む、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目７）
前記スペーサー領域が、ヒンジ領域ならびにＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびこれらの組合せからなる群から選択されるヒト抗体のＦｃドメインのうちの少なくとも１つの他の部分を含む、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目８）
前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下、１１９アミノ酸以下、および２２９アミノ酸以下からなる群から選択される長さである、項目１から７のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目９）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１上でリガンドに結合し、前記スペーサー領域が、配列番号４および配列番号４９（ヒンジ−ＣＨ３）からなる群から選択される、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１０）
前記リンパ球活性化ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびこれらの組合せからなる群から選択される共刺激ドメインと組み合わせたＣＤ３ゼータの全部または一部分を含む、項目１から９のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１１）
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータの一部分および４−１ＢＢの一部分、ＣＤ２８の一部分、または両方を含む、項目１０に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１２）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１に結合し、前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下であり、配列番号４の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１３）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１に結合し、前記スペーサー領域が、配列番号５０の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１４）
前記リガンド結合ドメインが、ＣＤ１９に結合し、前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下であり、配列番号４の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１５）
前記リガンド結合ドメインが、Ｈｅｒ２に結合し、前記スペーサー領域が、配列番号５０の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１６）
マーカー配列をコードする核酸をさらに含む、項目１から１５のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１７）
項目１から１６のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸によりコードされるキメラ受容体ポリペプチド。
（項目１８）
項目１から１６のいずれか一項に記載の単離キメラ受容体核酸を含む発現ベクター。
（項目１９）
項目１から１６のいずれか一項に記載の核酸または項目１８に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目２０）
ナイーブＣＤ８＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、およびバルクＣＤ８＋ Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞である、項目１９に記載の宿主細胞。
（項目２１）
前記ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞が、セントラルメモリーＴ細胞であり、前記セントラルメモリーＴ細胞が、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、およびＣＤ８＋について陽性である、項目２０に記載の宿主細胞。
（項目２２）
ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、およびバルクＣＤ４＋ Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ４＋ ヘルパーＴリンパ球細胞である、項目１９に記載の宿主細胞。
（項目２３）
前記ＣＤ４＋ ヘルパーリンパ球細胞が、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞であり、前記ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞が、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、およびＣＤ４＋について陽性であり、ＣＤ４５ＲＯについて陰性である、項目２２に記載の宿主細胞。
（項目２４）
薬学的に許容される賦形剤中に項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む組成物。
（項目２５）
項目２０または２１に記載の宿主細胞および項目２３または３４に記載の宿主細胞を含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を調製するためのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、
ａ）項目１から１６または１８のいずれか一項に記載のキメラ受容体をコードする核酸のライブラリーを提供するステップであって、該複数の核酸の各々が、長さが異なるキメラ受容体をコードする、ステップと、
ｂ）該複数の核酸の各々を、別々の単離Ｔリンパ球集団へと導入し、各Ｔリンパ球集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで増やすステップと、
ｃ）各遺伝子改変Ｔリンパ球集団を、腫瘍を保有する動物モデルへと投与し、遺伝子改変Ｔリンパ球集団が、抗腫瘍有効性を有するのかどうかを決定するステップと、
ｄ）ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／または動物モデルにおいて抗腫瘍有効性をもたらす該キメラ受容体をコードする核酸を選択するステップと
を含む方法。
（項目２７）
前記キメラ受容体をコードする選択された核酸を、宿主細胞へと導入するステップをさらに含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を調製するためのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、
ａ）項目１から１６のいずれか一項に記載の核酸または項目１８に記載の発現ベクターを、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋、およびＣＤ６２Ｌ＋の表現型を有するリンパ球集団へと導入するステップと、
ｂ）抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８、ならびに少なくとも１つのホメオスタシスサイトカインの存在下で、該細胞が、細胞注入としての使用のために十分に増えるまで、該細胞を培養するステップと
を含む方法。
（項目２９）
前記リンパ球が、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋である、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
がんまたはウイルス感染の処置における、項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞または項目２４から２５に記載の組成物の使用。
（項目３１）
前記がんが、固形腫瘍または血液悪性腫瘍である、項目３０に記載の使用。
（項目３２）
前記固形腫瘍が、乳がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、膵臓がん、前立腺がん、および卵巣がんからなる群から選択される、項目３１に記載の使用。
（項目３３）
がんまたはウイルス感染を有する被験体において細胞免疫療法を実施する方法であって、項目２４から２５のいずれか一項に記載の組成物または項目１９から２３に記載の宿主細胞を前記被験体へと投与するステップを含む方法。
（項目３４）
前記がんが、固形腫瘍または血液悪性腫瘍から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記固形腫瘍が、乳がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、膵臓がん、前立腺がん、および卵巣がんからなる群から選択される、項目３４に記載の方法。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
ａ）リガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチドであって、該リガンド結合ドメインがリガンドに結合し、該リガンドが、腫瘍特異的分子、ウイルス分子、またはリンパ球による認識および除去を媒介するのに適する、標的細胞集団上で発現する任意の他の分子である、ポリヌクレオチドと、
ｂ）該リガンドに特異的な長さのポリペプチドスペーサーをコードするポリヌクレオチドであって、該スペーサーが、該リガンドに応答して、基準キメラ受容体と比較したＴ細胞増殖および／またはサイトカイン産生の増大をもたらす、ポリヌクレオチドと、
ｃ）膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
ｄ）細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと
を含む、キメラ受容体核酸。
（項目２）
前記リガンド結合ドメインが、抗体断片である、項目１に記載のキメラ受容体核酸。
（項目３）
前記リガンド結合ドメインが、単鎖可変断片である、項目２に記載のキメラ受容体核酸。
（項目４）
前記腫瘍特異的分子が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ＲＯＲ１、メソテリン、ｃ−Ｍｅｔ、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２、ＧＤ−２、ＭＡＧＥ Ａ３ ＴＣＲ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、項目１から３のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目５）
前記スペーサーが、Ｘ １ ＰＰＸ ２ Ｐのアミノ酸配列を含む、項目１から４のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目６）
前記スペーサー領域が、ヒト抗体のヒンジ領域の一部分を含む、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目７）
前記スペーサー領域が、ヒンジ領域ならびにＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびこれらの組合せからなる群から選択されるヒト抗体のＦｃドメインのうちの少なくとも１つの他の部分を含む、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目８）
前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下、１１９アミノ酸以下、および２２９アミノ酸以下からなる群から選択される長さである、項目１から７のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目９）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１上でリガンドに結合し、前記スペーサー領域が、配列番号４および配列番号４９（ヒンジ−ＣＨ３）からなる群から選択される、項目５に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１０）
前記リンパ球活性化ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびこれらの組合せからなる群から選択される共刺激ドメインと組み合わせたＣＤ３ゼータの全部または一部分を含む、項目１から９のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１１）
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータの一部分および４−１ＢＢの一部分、ＣＤ２８の一部分、または両方を含む、項目１０に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１２）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１に結合し、前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下であり、配列番号４の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１３）
前記リガンド結合ドメインが、ＲＯＲ１に結合し、前記スペーサー領域が、配列番号５０の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１４）
前記リガンド結合ドメインが、ＣＤ１９に結合し、前記スペーサー領域が、１２アミノ酸以下であり、配列番号４の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１５）
前記リガンド結合ドメインが、Ｈｅｒ２に結合し、前記スペーサー領域が、配列番号５０の配列を有する、項目４から１１のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１６）
マーカー配列をコードする核酸をさらに含む、項目１から１５のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸。
（項目１７）
項目１から１６のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸によりコードされるキメラ受容体ポリペプチド。
（項目１８）
項目１から１６のいずれか一項に記載の単離キメラ受容体核酸を含む発現ベクター。
（項目１９）
項目１から１６のいずれか一項に記載の核酸または項目１８に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目２０）
ナイーブＣＤ８＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、およびバルクＣＤ８＋ Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞である、項目１９に記載の宿主細胞。
（項目２１）
前記ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞が、セントラルメモリーＴ細胞であり、前記セントラルメモリーＴ細胞が、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、およびＣＤ８＋について陽性である、項目２０に記載の宿主細胞。
（項目２２）
ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、およびバルクＣＤ４＋ Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ４＋ ヘルパーＴリンパ球細胞である、項目１９に記載の宿主細胞。
（項目２３）
前記ＣＤ４＋ ヘルパーリンパ球細胞が、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞であり、前記ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞が、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、およびＣＤ４＋について陽性であり、ＣＤ４５ＲＯについて陰性である、項目２２に記載の宿主細胞。
（項目２４）
薬学的に許容される賦形剤中に項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む組成物。
（項目２５）
項目２０または２１に記載の宿主細胞および項目２３または３４に記載の宿主細胞を含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を調製するためのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、
ａ）項目１から１６または１８のいずれか一項に記載のキメラ受容体をコードする核酸のライブラリーを提供するステップであって、該複数の核酸の各々が、長さが異なるキメラ受容体をコードする、ステップと、
ｂ）該複数の核酸の各々を、別々の単離Ｔリンパ球集団へと導入し、各Ｔリンパ球集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで増やすステップと、
ｃ）各遺伝子改変Ｔリンパ球集団を、腫瘍を保有する動物モデルへと投与し、遺伝子改変Ｔリンパ球集団が、抗腫瘍有効性を有するのかどうかを決定するステップと、
ｄ）ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／または動物モデルにおいて抗腫瘍有効性をもたらす該キメラ受容体をコードする核酸を選択するステップと
を含む方法。
（項目２７）
前記キメラ受容体をコードする選択された核酸を、宿主細胞へと導入するステップをさらに含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞を調製するためのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法であって、
ａ）項目１から１６のいずれか一項に記載の核酸または項目１８に記載の発現ベクターを、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ４５ＲＯ＋、およびＣＤ６２Ｌ＋の表現型を有するリンパ球集団へと導入するステップと、
ｂ）抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８、ならびに少なくとも１つのホメオスタシスサイトカインの存在下で、該細胞が、細胞注入としての使用のために十分に増えるまで、該細胞を培養するステップと
を含む方法。
（項目２９）
前記リンパ球が、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋である、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
がんまたはウイルス感染の処置における、項目１９から２３のいずれか一項に記載の宿主細胞または項目２４から２５に記載の組成物の使用。
（項目３１）
前記がんが、固形腫瘍または血液悪性腫瘍である、項目３０に記載の使用。
（項目３２）
前記固形腫瘍が、乳がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、膵臓がん、前立腺がん、および卵巣がんからなる群から選択される、項目３１に記載の使用。
（項目３３）
がんまたはウイルス感染を有する被験体において細胞免疫療法を実施する方法であって、項目２４から２５のいずれか一項に記載の組成物または項目１９から２３に記載の宿主細胞を前記被験体へと投与するステップを含む方法。
（項目３４）
前記がんが、固形腫瘍または血液悪性腫瘍から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記固形腫瘍が、乳がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、膵臓がん、前立腺がん、および卵巣がんからなる群から選択される、項目３４に記載の方法。
Claims (41)
- キメラ受容体をコードする核酸であって、該核酸が、
（ａ）リガンドの細胞外領域におけるエピトープに結合するリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチドであって、該リガンドが、腫瘍において発現されるか、またはウイルス分子である、ポリヌクレオチドと、
（ｂ）ポリペプチドスペーサーをコードするポリヌクレオチドと、
（ｃ）膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
（ｄ）細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと
を含み、
該エピトープが、細胞膜から１００アミノ酸以下の該細胞外領域の膜近位部分を含み、該ポリペプチドスペーサーが、少なくとも１１９アミノ酸の長さであるか、または
該エピトープが、細胞膜から少なくとも１００アミノ酸の該細胞外領域の遠位部分を含み、該ポリペプチドスペーサーが、１５アミノ酸以下の長さまたは１２アミノ酸以下の長さであり、
該キメラ受容体を発現するＴ細胞が、該リガンドを発現する細胞の存在下でのｉｎ ｖｉｔｒｏのアッセイにおいて、コードされるキメラ受容体とスペーサーのみが異なる基準キメラ受容体を発現するＴ細胞と比較した増殖、サイトカイン産生、および／またはサイトカイン活性の増大を示す、核酸。 - 前記ポリペプチドスペーサーが、約１５アミノ酸未満の長さであり、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域を含まないか、またはＣＨ３領域を含まない、ならびに／あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、免疫グロブリンのヒンジ領域またはその変異体の全部または一部分を含み、ＣＤ２８またはＣＤ８の細胞外領域を含まない、ならびに／あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、約１５アミノ酸未満の長さであり、ＣＤ２８またはＣＤ８の細胞外領域を含まない、ならびに／あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、ＩｇＧの免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２領域および／またはＣＨ３領域、あるいはその改変バージョンを含むか、またはこれからなるＩｇＧの一部分を含むか、またはこれからなり、ＣＤ２８細胞外領域またはＣＤ８細胞外領域を含まない、
請求項１に記載の核酸。 - キメラ受容体をコードする核酸であって、該核酸が、
（ａ）リガンドの細胞外領域におけるエピトープに結合するリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチドであって、該リガンドが、腫瘍において発現されるか、またはウイルス分子である、ポリヌクレオチドと、
（ｂ）ポリペプチドスペーサーをコードするポリヌクレオチドと、
（ｃ）膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
（ｄ）細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと
を含み、
該ポリペプチドスペーサーが、ＩｇＧの免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２領域および／またはＣＨ３領域、あるいはその改変バージョンを含むか、またはこれからなるＩｇＧの一部分を含むか、またはこれからなり、ＣＤ２８細胞外領域またはＣＤ８細胞外領域を含まず、
該キメラ受容体を発現するＴ細胞集団が、該リガンドを発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏの動物モデルにおいて投与された場合、活性化誘導型細胞死（ＡＩＣＤ）を示さない、かつ／または、コードされたキメラ受容体とスペーサーのみが異なる基準キメラ受容体を発現するＴ細胞集団と比較したＡＩＣＤの程度の低下を示す、核酸。 - 前記ポリペプチドスペーサーが、約１１９アミノ酸を超える長さであり、前記基準キメラ受容体が、１５アミノ酸以下の長さまたは１２アミノ酸以下の長さのスペーサーを有するか、あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、約１５アミノ酸以下の長さであり、前記基準キメラ受容体が、１１９アミノ酸を超える長さのスペーサーを有する、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記リガンドが、Ｂリンパ球腫瘍細胞により発現されるか、
前記リガンドがＣＤ１９ではなく、かつ／または、前記エピトープがＣＤ１９のエピトープではないか、
前記リガンドが、Ｂリンパ球腫瘍細胞上に発現され、正常ナイーブ成熟Ｂ細胞または正常メモリーＢ細胞上に発現されず、かつ／または、ＣＤ１９より低いレベルでＢリンパ球腫瘍細胞の表面上に発現されるか、
前記リガンドが、Ｂリンパ球腫瘍および上皮腫瘍上に発現されるか、あるいは
前記リガンドが、上皮腫瘍上で発現される、
請求項４に記載の核酸。 - 前記リガンドを発現する細胞および／または前記腫瘍が、初代ヒト腫瘍であるか、または初代ヒト腫瘍由来である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記リガンドを発現する細胞および／または前記腫瘍が、上皮腫瘍、Ｂ細胞がん、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、またはマントル細胞リンパ腫であるか、またはこれ由来である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸。
- キメラ受容体をコードする核酸であって、該核酸が、
（ａ）リガンドに結合するリガンド結合ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
（ｂ）ポリペプチドスペーサーをコードするポリヌクレオチドと、
（ｃ）膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドと、
（ｄ）細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドと
を含み、
該ポリペプチドスペーサーが、約１５アミノ酸未満の長さであり、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域を含まず、またはＣＨ３領域を含まない、ならびに／あるいは
該ポリペプチドスペーサーが、免疫グロブリンのヒンジ領域またはその変異体
全部または一部分を含み、ＣＤ２８またはＣＤ８の細胞外領域を含まない、ならびに／あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、約１５アミノ酸未満の長さであり、ＣＤ２８またはＣＤ８の細胞外領域を含まない、
核酸。 - 前記リガンドがＣＤ１９である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記キメラ受容体が、前記ＣＤ１９の細胞外領域内のエピトープに結合し、該エピトープが、前記ＣＤ１９を発現する細胞の細胞膜から１００アミノ酸以下または１５０アミノ酸以下に及ぶ該細胞外領域の近位部分内にある、請求項９に記載の核酸。
- 前記キメラ受容体を発現するＴ細胞集団が、前記ＣＤ１９を発現する細胞に応答して、ｉｎ ｖｉｔｒｏのアッセイにおいて、コードされるキメラ受容体と前記スペーサーのみが異なる基準キメラ受容体を発現するＴ細胞集団と比較した増殖の低下、サイトカイン産生の低下、および／またはサイトカイン活性の低下を示す、請求項９または請求項１０に記載の核酸。
- 前記基準キメラ受容体のスペーサーが、１００アミノ酸を超える長さを含む、請求項１、３〜５および１１のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記リガンド結合ドメインが、ＦＭＣ６３の可変重鎖領域と少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖領域および／またはＦＭＣ６３の可変軽鎖領域と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖領域を含み、
前記リガンド結合ドメインが、ＦＭＣ６３により結合されるエピトープと比較して、前記細胞膜から同じ距離であるか、またはより近位であるＣＤ１９のエピトープに結合し、
前記リガンド結合ドメインが、ＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮのＣＤＲＬ１配列、ＳＲＬＨＳＧＶのＣＤＲＬ２配列、およびＧＮＴＬＰＹＴＦＧのＣＤＲＬ３配列、ならびに／あるいはＤＹＧＶＳのＣＤＲＨ１配列、ＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳのＣＤＲＨ２配列、およびＹＡＭＤＹＷＧのＣＤＲＨ３配列を含み、ならびに／あるいは
前記リガンド結合ドメインが、ＦＭＣ６３と比較して、ＣＤ１９に対して少なくとも同じアフィニティーを示す、
請求項９〜１２のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記リガンド結合ドメインが、配列番号３によりコードされるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか、またはこれからなり、
前記ポリペプチドスペーサーが、配列番号４によりコードされるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなり、かつ／または配列番号５１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなり、
前記膜貫通ドメインが、配列番号５によりコードされる配列を含むか、またはこれからなり、
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号６によりコードされる配列を含み、任意選択で、配列番号７によりコードされる配列を含み、ならびに／あるいは
前記核酸が、配列番号１０のヌクレオチド配列またはこれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか、または配列番号１１のアミノ酸配列をコードする配列またはこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項９〜１３のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記リガンドがＲＯＲ１である、請求１〜８のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記キメラ受容体が、前記ＲＯＲ１の細胞外領域内のエピトープに結合し、
該エピトープが、表面上で前記ＲＯＲ１を発現する細胞の細胞膜から１００アミノ酸を超えているか、または１５０アミノ酸を超えている細胞外領域の遠位部分内にあり、
該エピトープが、前記ＲＯＲ１のＩｇ様ドメインおよび／またはＦｒｉｚｚｌｅｄドメインの部分を含み、ならびに／あるいは
該エピトープが、抗体Ｒ１２により認識され、かつ／または抗体Ｒ１１により認識されない、
請求項１５に記載の核酸。 - 前記リガンド結合ドメインが、前記抗体Ｒ１２の可変重鎖領域と少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖領域および／または前記抗体Ｒ１２の可変軽鎖領域と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖領域を含み、
前記リガンド結合ドメインが、Ｒ１２により結合されるエピトープと比較して、前記細胞膜から同じ距離であるか、またはより遠位であるＲＯＲ１のエピトープに結合し、
前記リガンド結合ドメインが、ＡＳＧＦＤＦＳＡＹＹＭのＣＤＲＬ１配列、ＴＩＹＰＳＳＧのＣＤＲＬ２配列、およびＡＤＲＡＴＹＦＣＡのＣＤＲＬ３配列ならびに／あるいはＤＴＩＤＷＹのＣＤＲＨ１配列、ＶＱＳＤＧＳＹＴＫＲＰＧＶＰＤＲのＣＤＲＨ２配列、およびＹＩＧＧＹＶＦＧのＣＤＲＨ３配列を含み、ならびに／あるいは
前記リガンド結合ドメインが、Ｒ１２と比較して、ＲＯＲ１に対して少なくとも同じアフィニティーを示す、
請求項１５または１６に記載の核酸。 - 前記リガンド結合ドメインが、配列番号３８のアミノ酸２３〜２７０を含み、
前記ポリペプチドスペーサーが、配列番号４によりコードされるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなり、かつ／または配列番号５１のアミノ酸配列を含むか、またはこれからなり、
前記膜貫通ドメインが、配列番号５によりコードされる配列を含むか、またはこれからなり、
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号６によりコードされる配列を含み、任意選択で、配列番号７によりコードされる配列を含み、ならびに／あるいは
前記核酸が、配列番号４１のヌクレオチド配列またはこれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか、または配列番号４２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を含む、
請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記リガンドがＨＥＲ２である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記キメラ受容体が、前記ＨＥＲ２の細胞外領域内のエピトープに結合し、該エピトープが、前記ＨＥＲ２を発現する細胞の細胞膜から１００アミノ酸以下、または１５０アミノ酸以下に及ぶ該細胞外領域の近位部分内にあり、ならびに／あるいは
前記ポリペプチドスペーサーが、１００アミノ酸を超える長さであるか、少なくとも１１９アミノ酸の長さであり、
前記リガンド結合ドメインがＶＨを含み、ならびに／あるいは
前記リガンド結合ドメインが、配列番号５６によりコードされるキメラ受容体配列内の可変重鎖領域と少なくとも９０％の同一性を有する可変重鎖領域および／または配列番号５６によりコードされるキメラ受容体配列内の可変軽鎖領域と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖領域を含み、
前記リガンド結合ドメインが、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎにより結合されるエピトープと比較して、前記細胞膜から同じ距離であるか、またはより遠位であるＨＥＲ２のエピトープに結合し、
前記リガンド結合ドメインが、配列番号５６によりコードされるキメラ受容体配列内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３；および／または配列番号５６によりコードされるキメラ受容体配列内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ならびに／あるいは
前記リガンド結合ドメインが、配列番号５６によりコードされるキメラ受容体内のｓｃＦｖと比較して、前記ＨＥＲ２に対して少なくとも同じアフィニティーを示す、
請求項１９に記載の核酸。 - 前記スペーサーが、ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域またはその改変バージョンを含むか、またはこれからなり；
前記膜貫通ドメインがＣＤ２８の一部分を含み；
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、４１ＢＢまたはＣＤ２８の共刺激部分を含み、かつ／またはＣＤ３ゼータの一部分を含み；ならびに／あるいは
前記核酸が、Ｔ２Ａ配列および切断型ＥＧＦＲをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記ＩｇＧ４ヒンジまたはその改変バージョンが、配列番号４によりコードされるアミノ酸配列を含み、かつ／または配列番号１７、１８、１９、２０、２１、５１、５２、または５３に示されるアミノ酸配列を含み、
前記膜貫通ドメインが、配列番号５によりコードされるアミノ酸配列を含み、ならびに／あるいは
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号６および／または配列番号７によりコードされる配列を含む、
請求項２１に記載の核酸。 - 前記キメラ受容体を発現するように操作されたＴ細胞集団が、前記リガンドを発現する腫瘍について確立された動物モデルの動物に投与された場合、前記細胞集団が投与されていない動物と比較して、ｉｎ ｖｏｖｏにおける抗腫瘍有効性を示し、ここで該有効性が、腫瘍細胞の死滅、腫瘍の退縮、該動物の生存、および／または該動物の無腫瘍生存により示され；
該Ｔ細胞集団が、少なくとも約３日、約１０日、約２０日、約３０日、約４０日、または約５０日あるいはそれより長い間の該動物の血液中のｉｎ ｖｉｖｏにおける存続、あるいは細胞分裂の少なくとも２回または少なくとも３回にわたる増殖を示す、
請求項１〜２２のいずれかに記載の核酸。 - 前記腫瘍が、リンパ腫、白血病および上皮がんからなる群から選択される、請求項２３に記載の核酸。
- 前記腫瘍がＢ細胞悪性腫瘍であるか、
前記腫瘍がＣＬＬまたはＭＣＬであるか、または
前記腫瘍が、乳がん、肺がん、腎臓がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、または卵巣がんである、
請求項２４に記載の核酸。 - 前記ポリペプチドスペーサーが、ＩｇＧヒンジ、ＣＨ２および／またはＣＨ３の改変バージョンを含み、該改変バージョンが、１つまたは複数のアミノ酸欠失または置換を含み、前記ポリペプチドスペーサーと比較した前記基準キメラ受容体におけるスペーサーにおける違いが、前記基準キメラ受容体スペーサーにおける該１つまたは複数のアミノ酸欠失または置換の非存在であるか、またはこれを含み、該１つまたは複数のアミノ酸欠失または置換が、任意選択で、１つまた複数の他の分子との相互作用を最小化する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の核酸。
- 請求項１〜２６のいずれか一項に記載の核酸によりコードされるキメラ受容体ポリペプチド。
- 請求項１〜２６のいずれか一項に記載のキメラ受容体核酸を含むか、または請求項２７に記載のキメラ受容体ポリペプチドをコードする、発現ベクター。
- 請求項１〜２６のいずれか一項に記載の核酸、請求項２７に記載のキメラ受容体ポリペプチド、または請求項２８に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球および／またはＣＤ４＋リンパ球である、請求項２９に記載の宿主細胞。
- 薬学的に許容される賦形剤中に請求項２９または３０に記載の宿主細胞を含む組成物。
- 前記宿主細胞が、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞およびバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群から選択される複数のＣＤ８＋リンパ球を含む、請求項３１に記載の組成物。
- 前記組成物が、任意選択でナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、およびバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群から選択される、複数のＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球をさらに含む、請求項３１または３２に記載の組成物。
- 前記複数のＣＤ８＋リンパ球および前記複数のＣＤ４＋リンパ球が、前記組成物中に約１：１の比で存在する、請求項３３に記載の組成物。
- キメラ受容体を同定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、
（ａ）キメラ受容体をコードする核酸のライブラリーを提供するステップであって、複数の核酸の各々が、スペーサーの長さが異なるキメラ受容体をコードする、ステップと、
（ｂ）該複数の核酸の各々を、別々の単離Ｔリンパ球集団へと導入し、各Ｔリンパ球集団をｉｎ ｖｉｔｒｏで増やすステップと、
（ｃ）各遺伝子改変Ｔリンパ球集団を、腫瘍を保有する動物モデルへと投与し、遺伝子改変Ｔリンパ球集団が、抗腫瘍有効性を有するのかどうかを決定するステップと、
（ｄ）ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／または動物モデルにおいて抗腫瘍有効性をもたらす該キメラ受容体をコードする核酸を選択するステップと
を含む方法。 - 前記キメラ受容体をコードする選択された核酸を、宿主細胞へと導入するステップをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
- 宿主細胞を調整するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法であって、
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の核酸または請求項２８に記載の発現ベクターをリンパ球集団の細胞へと導入するステップと、抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８、ならびに少なくとも１つのホメオスタシスサイトカインの存在下で、該細胞を培養するステップと
を含む方法。 - 前記リガンド発現するがんまたはウイルス感染の処置のための、請求項２７に記載のキメラ受容体ポリペプチド、請求項２８の発現ベクター、請求項２９または３０の宿主細胞を含む組成物、あるいは請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記がんが固体腫瘍または血液悪性腫瘍である、請求項３８に記載の組成物。
- 前記腫瘍が、リンパ腫、白血病および上皮がんからなる群から選択される、請求項３８または請求項３９に記載の組成物。
- 前記腫瘍がＢ細胞悪性腫瘍であるか、
前記腫瘍がＣＬＬまたはＭＣＬであるか、あるいは
前記腫瘍が、乳がん、肺がん、腎臓がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、または卵巣がんである、
請求項４０に記載の組成物。
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