JP2015521035A - 微生物学的分析用の装置及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[0001] 本出願は、「微生物学的分析用の装置及び方法(Apparatus and methods for microbiological analysis)」と題した米国特許出願シリアル番号:13/874,213(2013年4月30日出願)の利益とそれに対する優先権を請求する。本出願はまた、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、「微生物分析用の装置及び方法と指向性の経験的治療(Apparatus and methods for microbial analysis and directed empiric therapy)」と題した米国仮特許出願シリアル番号:61/687,785(2012年5月1日出願、発明者: James L. Stephenson, Jr., Oksana Gvozdyak, Roger Grist, Clay Campbell 及び Ian D. Jardine)の利益とそれに対する優先権を請求する。
i.試料がこのシステムに入ることを確認する;
ii.このシステムに入る試料用のアッセイタイプを確認する;
iii.予期されるアッセイタイプ及び/又は分析対象物に基づいてアッセイプロトコールを選択する;
iv.試料取扱いデバイス及び/又は制御システムに試料中の分析対象物の分析を開始するように指令する;
v.アッセイのタイプ及び/又は分析対象物のために選択したアッセイプロトコールに基づいて1以上の試薬を選択するように制御システムに指令する;
vi.アッセイのタイプ及び/又は分析対象物のために選択したアッセイプロトコールに基づいて液体クロマトグラフィー移動相条件を選択するように制御システムに指令して、液体クロマトグラフィーシステムにそのアッセイを実施させる、及び/又は分析対象物を精製させる;
vii.アッセイタイプ及び/又は分析対象物のために選択したアッセイプロトコールに基づいて質量分析計セッティングを選択するように制御システムに指令して、選択したアッセイタイプ及び/又は分析対象物に関連した質量スペクトルデータを質量分析計に創出させる;又は
viii.選択したアッセイタイプ及び/又は分析対象物に関連した質量スペクトルデータを分析するように制御システムに指令して、分析対象物の存在及び/又は濃度を同定する。
I.微生物破壊とタンパク質の可溶化
[0054] 再び図面1Aに言及すると、工程a102に示すように、1種以上の微生物を含有することが疑われる試料を破壊して、その試料(例えば、尿)より直に微生物細胞を入手するように処理しても、それを使用して純培養物を単離してもよい。次いで、微生物細胞を使用して、タンパク質の可溶性画分を産生する。この試料は、1種以上の微生物を含有することが疑われるどんな種類のものであってもよく、限定無しに、培養プレート由来の単離コロニー;液体増殖培地由来の細胞;血液、唾液、尿、大便、痰、創傷及び身体部位スワッブ;食品及び飲料品;土壌、水、空気;環境及び産業上の表面スワッブが含まれる。
[0059] 工程102での微生物の破壊によって産生される上清は、インタクトなタンパク質を含有し、これは、図面1Aの工程104に例示されるように、脱塩してこのタンパク質を濃縮するようにさらに処理してよい。1つの態様では、自動の固相抽出/液体クロマトグラフィー試料導入インターフェイスシステムを使用して、インタクトなタンパク質を同時に脱塩し、濃縮して、分離させる。このようなシステム(300)の概略図を図面3に示す。第一のフロー経路(302)において、システム(300)は、単回使用の使い捨て固相抽出(SPE)カートリッジ(304)を利用し得て、これは、ポンプ(306)、流体ライン(308)、第一切換え弁(310)、第二切換え弁(312)、及びエレクトロスプレーイオン化(ESI)エミッタ(314)へ連結している。SPEカートリッジ(304)は、例えば、2%アセトニトリル/0.2%ギ酸水溶液(ローディング緩衝液)を使用して調節してよい。次に、図面1Aの工程102において調製した試料を、実質的に同じ溶液よりロードして、例えば逆流を使用して、SPEカートリッジ(304)に通過させてよい。次いで、SPEカートリッジ(304)を2ベッド体積のローディング緩衝液で洗浄して、塩類や他の混入物を除去し得る。この洗浄工程の後で、各試料を10nl以下ほどに小さくても数10μlほどに大きくてもよい溶媒容積でSPEカートリッジ(304)より溶出させて、ESIエミッタ(314)と質量分析計(316)への送達のためにインタクトなタンパク質を濃縮して最適化する。
[0061] 次いで、図面1Aの工程106に示すように、上記試料を質量分析法の分析へ処す。溶出したタンパク質を、例えば、液体クロマトグラフィーと容易にインラインで組み合わせることができるエレクトロスプレーイオン化(ESI)又は他の大気圧又は準大気圧イオン化技術によりイオン化する。ESIでは、タンパク質が、遊離N末端、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又は配列中に存在する他の荷電アミノ酸の数に基づいて、多重の電荷を蓄積する。生じる質量スペクトルは、異なる質量/電荷(m/z)値で出現する、同じタンパク質に由来する多価イオンの分布(「荷電状態エンベロープ」)を反映する。m/z値は、エレクトロスプレーイオン化法より異なる電荷数を獲得する、同じ分析物の結果である。荷電状態の分布は、試料がインタクトなタンパク質を含んでも、及び/又はトップダウン法によって産生されたそれらの断片を含んでも、単段階又は多段階の高解像度質量分析法による検出に従う。タンパク質の分子量は、多様な方法で計算することができる。これには、単一荷電状態の隣接同位体の間のスペーシング(spacing)に注目すること、同じタンパク質に由来するいくつかの隣接する同位体的に分離不能なピークのm/z値を使用してそれを決定又は計算すること、及びこれらのピークの間のm/zスペースにおける距離を決定することといった、単純な方法が含まれる。分子量を計算するための他の方法には、スラッシュ(thrash)アルゴリズム及び最大エントロピーのアプローチも同様に含まれる。
[0077] クロマトグラフィーの保持時間、質量、強度、元素組成、アミノ酸組成、及びタンパク質配列情報のどの1以上も使用して、試料中に存在する微生物(複数)を同定することができる。同定は、MS及びMSnデータと、既知の参照データベース(複数)と比較した上記パラメータのいずれにも基づく。クロマトグラフィーの保持時間は、試料の諸成分又は諸成分の群を分離するのに規定されたカラムとクロマトグラフィー条件のセットを使用して測定される場合は、絶対的であり得るが、分析される試料に存在しているか又は追加される何らかの他の単数又は複数の成分の保持時間に対しては、相対的であり得る。
[0086] 属/種レベルでの同定が達成されたときに、その試料について、限定無しに、型決定(菌株及び/又は血清型)、病原性、又は抗生物質耐性及び/又は感受性に関連した情報が含まれるより詳しい情報を再分析してもよい。この第二分析(再分析)は、第一分析の間に同定された微生物(複数)の単数又は複数の同一性に基づいて、1以上の特定タンパク質を標的としてよい。これは、第一分析からの情報が第二分析を指令するために使用されることを示す、図面1Aの矢印(114)によって示される。
[0089] 図面1Aの工程116へ言及すると、1種以上の微生物を含有することが疑われる試料(上記に記載したような同定目的のために使用したのと同じ抽出液、又は同じ試料より調製した別の抽出液のいずれか)より抽出した可溶性タンパク質の第二注射液を第二の固相抽出(SPE)手順へ処してよい。
[0092] 図面1Aの工程118へ言及すると、試料は、部分クロマトグラフィー分離へ処してから、質量分析の分析を続ける。一般的には、FPCS−MSを実施する場合、様々な有機及び無機分析物(有機低分子、タンパク質とその天然に存在する断片、脂質、核酸、多糖、リポタンパク質、等)の複合混合物を含有する微生物細胞の粗抽出液をクロマトグラフィーカラムにロードして、クロマトグラフィーへ処す。しかしながら、ある勾配によって各分析物を別々に溶出させる(理想的には、クロマトグラフィーのピークに付き1つの分析物)代わりに、ベースライン分離を得るのに求められるずっと長い時間の代わりに、例えば、ほぼ8分以下、及び好ましくは5分以下で実質的にはクロマトグラフィーピークが得られない程度まで、この勾配を意図的に加速させる。むしろ、多くの分析物がそれらの特性と使用するクロマトグラフィーの種類(逆相、HILIC、等)に従って、どの所与時間でもカラムより意図的に同時溶出される。部分的又は不完全な分離は、限定されないが、化合物のカラム上での保持を抑制する移動相溶媒及び/又はモディファイアの使用、化合物のカラム上での保持を抑制する定常相媒体の選択(粒径、孔径、等が含まれる)、より高い流速でのクロマトグラフィーシステムの操作、上昇温度でのクロマトグラフィーシステムの操作、又は異なるクロマトグラフィー分離モード(即ち、逆相、サイズ排除、等)の選択が含まれる、当業者に知られた他の方法によっても達成し得る。
[00106] 図面1Aの工程120へ言及すると、試料は、本明細書の他所でより詳しく記載したようにイオン化されて質量分析法の分析へ処すことができる。図面8A〜8Fへ言及すると、バシラス・リシェニフォルミス(B. Licheniformis)、カンジダ・アルビカンス(C. albicans)、大腸菌(E. coli)、コクリア・ロゼア(K. rosea)、スタフィロコッカス・キシローサス(S. xylosus)、及びマイコバクテリウム・スメグマチス(M. smegmatis)由来のタンパク質抽出液を、上記に記載したFPCS−MS手順によって部分分離した。この分離は、粒径1.9μで孔径170オングストロームのHypersil Gold C18様カラムを充填した5cmx2.1mm(内径)カラムで実施した。溶媒Aは、100% H2Oと0.2%ギ酸から成って、溶媒Bは、100% ACNと0.2%ギ酸より作製した。開始条件は、98% Aと2% Bで、400μL/分の流速、そして40℃のカラム温度であった。フルスキャン分析に関連した上位3つの最強ピークのデータ依存解析を使用して、タンデム質量分析法を実施した。MS/MSを経た質量を、20秒の時間の間、動的排除リストに置いた。生じるタンデム質量スペクトルをProSight PTMソフトウェアのバージョン3.0により検索した。
[00108] 図面1Aの工程122に示されるように、所与の菌株又は血清型に特異的なタンパク質(複数)を個々の単離株の型決定に使用し得る。微生物単離株内での変異は、しばしば、遺伝子(複数)全体の欠失及び/又は挿入の結果である。故に、異なる菌株には、数百の菌株特異的なタンパク質を潜在的に欠失又は獲得する場合があって、この変異により、比類なく識別力のある型決定システムが提供され得ることになる。
[00111] 第二分析はまた、同定される微生物に存在する病原性因子又は抗生物質耐性及び/又は感受性マーカーを同定するために使用し得る。このような分析には、試料の前処理[例えば、耐性、感受性、又は病原性に関連したタンパク質を誘導するために、1以上の抗生物質、又は他のストレス負荷条件(例、温度、1以上の栄養素の欠乏、鉄分不足、銅への曝露、等)への短い時間曝露すること]が必要とされる場合とされない場合がある。病原性因子及び/又は耐性マーカーの分析では、質量分析計を標的MS/MSモード(生成物イオンスキャニング)で操作して、既知の病原性因子又は耐性マーカーを検出する。
Claims (31)
- 1種以上の微生物を同定するための方法であって:
a.1種以上の微生物を含有する試料を提供する工程;
b.前記試料中に存在する前記1種以上の微生物を破壊して、流体性抽出液を提供する工程;
c.前記流体性抽出液中に存在する不溶性タンパク質画分より可溶性タンパク質画分を分離して、前記可溶性タンパク質画分の溶液を調製する工程;
d.前記可溶性タンパク質画分の溶液の流れ(stream)又はフロー(flow)をイオン化して、1以上のイオン化タンパク質を生成する工程;
e.前記1以上のイオン化タンパク質を質量分析計で分析する工程[ここで、分析する工程は:
i.第一の質量分析工程において、前記試料中の前記可溶性タンパク質の1以上を代表する1以上の質量スペクトルを獲得する工程;
ii.前記1以上の質量スペクトル由来のタンパク質の分子量を決定する工程;
iii.前記決定された分子量を使用して既知の微生物タンパク質の分子量を含有する第一データベースを検索して、前記データベースより候補微生物のサブセットを選択する工程;
iv.第二の質量分析工程において、前記試料の前記1以上のイオン化タンパク質由来のタンパク質の1以上の前駆体イオンを選択して、前記前駆体イオンを断片化手段によって断片化して複数の生成物イオンを生成する工程;
v.前記複数の生成物イオンの質量電荷比を使用して、既知の微生物タンパク質の分子量と前記既知の微生物タンパク質の生成物イオンm/z値、アミノ酸配列、又は翻訳後修飾情報の少なくとも1つを含有する第二データベースを検索する工程(ここでは、前記第一データベース由来の前記候補微生物のサブセットを使用して、前記第二データベースの検索を限定する);
を含む];並びに
f.工程(e)において入手した、前記試料中の前記1種以上の微生物のそれぞれ由来の1以上のタンパク質についての情報を使用して、前記微生物の少なくとも1つを同定する工程を含んでなる、前記方法。 - 工程(b)がグラム陽性菌、グラム陰性菌、酵母、ウイルス、マイコバクテリア、及び糸状菌に有効である、請求項1の方法。
- 前記イオン化がエレクトロスプレーイオン化である、請求項1の方法。
- 前記第一の質量分析工程において、前記試料中の前記タンパク質の前記1以上の質量スペクトルが少なくとも15ppm以上の質量精度を有する、請求項1の方法。
- 前記断片化手段が衝突誘起解離である、請求項1の方法。
- 前記第二質量分析工程において、前記生成物イオンの質量電荷比が少なくとも15ppm以上の質量精度を有する、請求項1の方法。
- 可溶性タンパク質の溶液をクロマトグラフィー分離無しにイオン化装置へ直接流し込む、請求項1又は請求項2の方法。
- 1種以上の微生物を同定するための方法であって:
a.1種以上の微生物を含有することが疑われる試料を提供する工程;
b.前記試料中に存在する1種以上の微生物を破壊して、流体性抽出液を提供する工程;
c.前記流体性抽出液中に存在する不溶性タンパク質画分より可溶性タンパク質画分を分離して、前記可溶性タンパク質画分の溶液を調製する工程;
d.前記可溶性タンパク質画分の溶液の流れ又はフローをイオン化して、1以上のイオン化タンパク質を生成する工程;
e.前記1以上のイオン化タンパク質を質量分析計で分析する工程[ここで、分析する工程は:
i.第一の質量分析工程において、前記試料中の可溶性タンパク質の1以上を代表する1以上の質量スペクトルを獲得する工程;
ii.前記1以上の質量スペクトル由来のタンパク質の分子量を決定する工程;
iii.この決定された分子量を使用して既知の微生物タンパク質の分子量を含有する第一データベースを検索して、前記データベースより候補微生物のサブセットを選択する工程;
iv.第二の質量分析工程において、前記試料の前記1以上のイオン化タンパク質由来のタンパク質の1以上の前駆体イオンを選択して、前記前駆体イオンを断片化手段によって断片化して複数の生成物イオンを生成する工程;
v.前記複数の生成物イオンの質量電荷比を使用して、既知の微生物タンパク質の分子量と前記既知の微生物タンパク質のアミノ酸配列又は翻訳後修飾情報の少なくとも1つを含有する第二データベースを検索する工程(ここでは、前記第一データベース由来の前記候補微生物のサブセットを使用して、前記第二データベースの検索を限定する)を含む];並びに
f.十分な数のタンパク質について自動的に分析して、前記試料中の前記1種以上の微生物の少なくとも1つを同定する工程を含んでなる、前記方法。 - 自動計装を使用して工程(b)〜(f)を実施する、請求項1の方法。
- 前記第一の質量分析工程又は前記第二の質量分析工程の少なくとも1つが、前記1以上の前駆体イオンを質量範囲枠(a mass range window)より選択する工程と、十分な数の質量範囲枠が網羅されるまで前記第二の質量分析工程を繰り返して、前記試料中の前記1種以上の微生物の少なくとも1つを同定する工程を含む、請求項8の方法。
- 1種以上の微生物を同定して特性決定するための方法であって:
a.1種以上の微生物を含有する試料の第一アリコートを提供する工程;
b.前記第一アリコート中に存在する1種以上の微生物を破壊して、流体性抽出液を提供する工程;
c.前記流体性抽出液中に存在する不溶性タンパク質画分より第一の可溶性タンパク質画分を分離して、可溶性タンパク質画分の第一溶液を調製する工程;
d.前記可溶性タンパク質画分の第一溶液の流れ又はフローをイオン化して、1以上の第一イオン化タンパク質を生成する工程;
e.前記1以上の第一イオン化タンパク質を質量分析計で分析する工程[ここで、分析する工程は:
i.第一の質量分析工程において、前記試料中の可溶性タンパク質の1以上を代表する1以上の第一質量スペクトルを獲得する工程;
ii.前記1以上の第一質量スペクトルに基づいて、前記可溶性タンパク質の分子量を決定する工程;
iii.この決定された分子量を使用して既知の微生物タンパク質の分子量を含有する第一データベースの第一検索を実施して、前記試料由来の可溶性タンパク質の決定された分子量に基づいて、前記第一データベースより候補微生物の第一サブセットを選択する工程;
iv.第二の質量分析工程において、前記1以上の第一イオン化タンパク質の1以上の第一前駆体イオンを選択して、前記第一前駆体イオンを断片化手段によって断片化して第一の複数の第一生成物イオンを生成する工程;
v.前記第一の複数の第一生成物イオンの質量電荷比を使用して、既知の微生物タンパク質の分子量と前記既知の微生物タンパク質の生成物イオンm/z値、アミノ酸配列、又は翻訳後修飾情報の少なくとも1つを含有する第二データベースの第一検索を実施する工程(ここでは、前記第一データベース由来の前記候補物の第一サブセットを使用して、前記第二データベースの第一検索を限定する)を含む];
f.工程(e)において入手した、前記試料中の前記1種以上の微生物のそれぞれ由来の1以上の可溶性タンパク質についての情報を使用して、前記微生物の少なくとも1つを属種のレベルまで同定する工程;
g.工程(f)由来の情報を使用して、所定の分析法のリストより第二の分析法を自動的に選択する工程(この第二の方法も質量分析法を使用する);
h.前記流体性抽出液又は同じ試料の第二流体性抽出液の第二アリコートを提供する工程;
i.前記第二アリコート中に存在する不溶性タンパク質画分より第二の可溶性タンパク質画分を分離して、該第二可溶性タンパク質画分の第二溶液を調製する工程;
j.前記第二溶液をクロマトグラフィー分離へ処して、可溶性タンパク質のサブセットを提供する工程;
k.前記可溶性タンパク質のサブセットの流れ又はフローをイオン化して、1以上の第二イオン化タンパク質を生成する工程;
l.前記1以上の第二イオン化タンパク質を質量分析計で分析する工程[ここで、分析する工程は:
i.第三の質量分析工程において、前記可溶性タンパク質のサブセット中の1以上の可溶性タンパク質を代表する1以上の第二質量スペクトルを獲得する工程;
ii.前記1以上の第二質量スペクトルより、前記可溶性タンパク質のサブセット中の1以上の可溶性タンパク質の分子量を決定する工程;
iii.前記第一データベースの第二検索を実施して、前記可溶性タンパク質のサブセット中の1以上の可溶性タンパク質の決定された分子量に基づいて、前記データベースより前記候補微生物の第二サブセットを選択する工程;
iv.第四の質量分析工程において、前記1以上の第二イオン化タンパク質の1以上の第二前駆体イオンを選択して、該第二前駆体イオンを断片化手段によって断片化して第二の複数の生成物イオンを生成する工程;
v.前記第二の複数の生成物イオンの質量電荷比を使用して、前記第二データベースの第二検索を実施する工程(ここでは、前記第一データベース由来の仮同定した微生物の前記第二サブセットを使用して、前記第二データベースの前記第二検索を限定する)を含む];並びに
m.工程(l)において入手した情報を使用して、菌株及び/又は血清型の同定、抗生物質耐性、抗生物質感受性、病原性、又はこれらのあらゆる組合せの何れかを示す1以上の可溶性タンパク質を同定して、定量してもよい工程を含んでなる、前記方法。 - 試料中の1種以上の微生物を同定して特性決定するための方法であって:
a.質量分析法を使用する第一の分析法を実施して、1種以上の微生物のそれぞれ由来の1以上のタンパク質を検出して同定する工程;
b.前記1種以上の微生物のそれぞれ由来の1以上のタンパク質の同一性を使用して、前記試料中の微生物の少なくとも1つをさらに同定する工程;
c.工程(b)からの情報を使用して、所定の分析法のリストより第二の分析法を自動的に選択する工程(この第二の方法も質量分析法を使用する);
d.前記第二の分析法を前記試料に対して実施して、抗生物質耐性マーカー、抗生物質感受性マーカー、及び/又は病原性因子を示すタンパク質が前記試料中に存在するかを決定して、前記試料中に存在する抗生物質耐性マーカー、抗生物質感受性マーカー、及び/又は病原性因子を定量してもよい工程を含んでなる、前記方法。 - 前記第一の分析法が、前記1種以上の微生物の細胞抽出液に由来する1以上の可溶性タンパク質の溶液のエレクトロスプレー装置への直接注入を組み込む、請求項12の方法。
- 前記第二の分析法が、前記1種以上の微生物の細胞抽出液に由来する1以上の可溶性タンパク質の溶液のエレクトロスプレー装置への導入に先立つ、該溶液のクロマトグラフィー分離を組み込む、請求項12の方法。
- 同じ流体性抽出液を使用して前記第一の分析法及び前記第二の分析法を実施する、請求項11の方法。
- 同じ試料の第二流体性抽出液を使用して第二の分析法を実施する、請求項11の方法。
- 結合型シリカ吸着剤、高分子吸着剤、又はキレート剤を含んでなる固相抽出デバイスを使用して工程(c)を実施する、請求項1の方法。
- 結合型シリカ吸着剤、高分子吸着剤、又はキレート剤を含んでなる固相抽出デバイスを使用して工程(c)を実施する、請求項8の方法。
- 結合型シリカ吸着剤、高分子吸着剤、又はキレート剤を含んでなる固相抽出デバイスを使用して工程(c)を実施する、請求項11の方法。
- 工程(j)のクロマトグラフィー分離が、前記第二可溶性タンパク質画分の第二溶液中のタンパク質の部分分離を提供する迅速な時間短縮クロマトグラフィーを含む、請求項11の方法。
- 工程(b)に先立って、1種以上の微生物の破壊を促進する溶媒で前記試料を前処理する、請求項1の方法。
- 工程(b)に先立って、前記試料を1以上の有機溶媒で前処理する(但し、唯一の有機溶媒を使用するならば、その唯一の有機溶媒は、エタノール以外である)、請求項1の方法。
- 工程(b)に先立って、前記1種以上の微生物の破壊を促進する溶媒で前記試料を前処理する、請求項8の方法。
- 工程(b)に先立って、前記試料を1以上の有機溶媒で前処理する(但し、唯一の有機溶媒を使用するならば、その唯一の有機溶媒は、エタノール以外である)、請求項8の方法。
- 工程(b)に先立って、前記1種以上の微生物の破壊を促進する溶媒で前記試料を前処理する、請求項11の方法。
- 工程(b)に先立って、前記試料を1以上の有機溶媒で前処理する(但し、唯一の有機溶媒を使用するならば、その唯一の有機溶媒は、エタノール以外である)、請求項11の方法。
- 自動計装を使用して工程(a)〜(m)を実施する、請求項11の方法。
- 1種以上の微生物を含有することが疑われる試料の質量分析用システムであって:
a.複数の試料を管理するように構成された試料取扱いデバイス;
b.前記試料中に存在する1種以上の微生物を破壊して流体性抽出液を提供するための試薬及び手段;
c.前記流体性抽出液中に存在する不溶性タンパク質画分より可溶性タンパク質画分を分離するための試薬及び手段;
d.前記可溶性タンパク質画分中の1以上の可溶性タンパク質をイオン化する、断片化する、及び検出することの可能な質量分析計;及び
e.前記1種以上の微生物を破壊するための手段、前記可溶性タンパク質画分を分離するための手段、及び前記質量分析計の1以上へ連結した制御ユニット(ここで前記制御ユニットは、前記質量分析計からのデータを処理するためのデータ処理ユニットとして役立ってもよい)を含んでなる、前記システム。 - 少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムが含まれるクロマトグラフィーシステムをさらに含んでなる、請求項28のシステム。
- 前記可溶性タンパク質画分を分離するための前記手段が、結合型シリカ吸着剤、高分子吸着剤、又はキレート剤を含んでなる少なくとも1つの固相抽出デバイスを含む、請求項28のシステム。
- クロマトグラフィーカラムが含まれるクロマトグラフィーシステムをさらに含んでなり、ここで前記可溶性タンパク質画分を分離するための前記手段は、結合型シリカ吸着剤、高分子吸着剤、又はキレート剤を含んでなる第一の固相抽出デバイス及び第二の固相抽出デバイスを含み;ここで前記第一の固相抽出デバイスは前記質量分析計と直結していて、前記第二の固相抽出デバイスは前記クロマトグラフィーカラムと直結している、請求項28のシステム。
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