JP2014528067A - Multilevel analyte assay - Google Patents

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Abstract

【課題】心筋傷害のマーカーを含む、試料中の分析物のレベルに関して、正確で、半定量的で、簡便で、かつ費用効果的な情報を提供する能力を有する臨床現場即時検査(ポイントオブケア検査)は、大きな要求を満たすはずである。 A comprises a marker of myocardial injury, for the level of analyte in a sample, accurate, semi-quantitative, convenient, and clinical practice immediate testing (point of care with the ability to provide a cost-effective information test) should meet the large demand.
【解決手段】 A
本発明は、試料中の心筋トロポニンなどの心筋損傷のマーカーを含む、分析物の2つ以上の閾値レベルの存在を検出するための方法及びデバイスを提供する。 The present invention provides a method and a device for containing a marker of myocardial damage such as cardiac troponin in a sample, to detect the presence of two or more threshold levels of analytes. 様々な実施形態では、本発明は、費用効果的な健康管理を導くように、患者の容態を判定するための好都合なポイントオブケア検査を提供する。 In various embodiments, the present invention is to direct a cost effective healthcare, provides a convenient point-of-care test to determine the patient's condition.
【選択図】図1 .FIELD 1

Description

[001] 健康管理従事者が患者の容態を迅速に判定することを可能にするポイントオブケアフォーマットにおけるものを含む、身体試料中の分析物の存在を検出するための検査が開発されている。 [001] including those at the point-of-care format that allows healthcare professionals to determine quickly the patient's condition, tests to detect the presence of an analyte in the body sample has been developed. これらの検査は、一般に、抗原−抗体反応、又はいくつかの他のリガンド−リガンド受容体結合イベントを含み、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、又は他の検出可能な標識を含み得る。 These tests are generally antigen - antibody reaction, or some other ligand - comprise a ligand-receptor binding event can include radiolabels, enzyme labels, fluorescent labels, or other detectable label. 多くのこのような検査は、指定したレベル又は濃度以上の試料中の分析物の存在又は非存在を検出することによって定性的判定を行うように設計されている。 Many such tests are designed to perform a qualitative determination by detecting the presence or absence of specified level or concentration or more analytes in a sample.

[002] しかし、分析物が検出可能濃度以上で試料中に存在する、又は存在しないことを示すバイナリ検査結果は、臨床医、患者、又は検査を施している人に最も有用な情報を必ずしも提供しない。 [002] However, analyte present in the sample with a detectable concentration or more, or present binary test result indicating that no clinician, patient, or necessarily provide the most useful information to a person performing test do not do. 例えば、患者の血清中の、心筋損傷のマーカーである心筋トロポニン(例えば、cTnI)の存在は、心筋梗塞、並びに二次虚血性及び非虚血性傷害、例えば、冠動脈インターベンション、心筋心膜炎、敗血症、心臓外傷、化学療法、及び腎不全などを含む多数の容態を示すことができ、又はこれらに関連し得る。 For example, in the patient's serum, cardiac troponin, a marker of myocardial damage (e.g., cTnI) presence of, myocardial infarction, and secondary ischemic and non-ischemic injury, for example, coronary intervention, myocardial pericarditis, sepsis, cardiac trauma, chemotherapy, and can show a number of condition, including kidney failure, or may be related to these. Sharmaら、Cardiac Troponins、J. Sharma et al., Cardiac Troponins, J. Clin. Clin. Pathol. Pathol. 57:1025−1026(2004)を参照のこと。 57: 1025-1026 (2004). したがって、血清中の心筋トロポニンの存在は、患者が急性心イベント(例えば、心筋梗塞又はMI)を経験していることを必ずしも示さない。 Thus, the presence of cardiac troponin in serum does not necessarily indicate that the patient is experiencing acute cardiac event (e.g., myocardial infarction or MI). さらに、このようなレベルが存在しないことによっても、急性心イベント(MIなど)は必ずしも排除されない。 Further, also by such a level does not exist, acute cardiac event (MI, etc.) is not necessarily excluded. その理由は、トロポニンレベルは、このようなイベントの後、約4〜12時間の過程にわたって血清中で増大するためである。 The reason is, troponin level, after such an event, in order to increase in the serum over the course of about 4-12 hours. むしろ、トロポニンレベルが急性心イベントと一致する様式で経時的に上昇中であるか否かを判定することが重要である。 Rather, it is important to determine whether it is being increased over time in a manner that troponin levels consistent with acute cardiac event.

[003] 心筋傷害のマーカーを含む、試料中の分析物のレベルに関して、正確で、半定量的で、簡便で、かつ費用効果的な情報を提供する能力を有する臨床現場即時検査(ポイントオブケア検査)は、大きな要求を満たすはずである。 [003] comprises a marker of myocardial injury, for the level of analyte in a sample, accurate, semi-quantitative, convenient, and clinical practice immediate testing (point of care with the ability to provide a cost-effective information test) should meet the large demand.

[004] 本発明は、試料中の分析物の2つ以上の閾値レベルの存在を検出するための方法及びデバイスを提供する。 [004] The present invention provides methods and devices for detecting the presence of two or more threshold levels of an analyte in a sample. 様々な実施形態では、本発明は、費用効果的な健康管理を導くように、患者の容態を判定するための好都合なポイントオブケア検査を提供する。 In various embodiments, the present invention is to direct a cost effective healthcare, provides a convenient point-of-care test to determine the patient's condition.

[005] 一態様では、本発明は、患者試料中の心筋損傷又は傷害のマーカーの少なくとも2つの閾値レベルを検出するためのデバイスを提供する。 In the 005] In one aspect, the present invention provides a device for detecting at least two threshold levels of myocardial damage or injury marker in the patient sample. 心筋トロポニン(例えば、cTnT又はcTnI)、ミオグロビン、並びにCK−MBが含まれる心筋傷害又は損傷のこのようなマーカーの上昇レベルは、心筋梗塞及び本明細書に記載の他の急性心イベントを示すことができる。 Cardiac troponin (e.g., cTnT or cTnI), myoglobin, as well as elevated levels of such markers of myocardial injury or damage include CK-MB, it shows another acute cardiac event according to myocardial infarction and herein can. 本デバイスは、ポイントオブケア判定に適切であり得る。 The device may be suitable for point-of-care determination. そして、入院又は救急看護の必要性を判定するために、健康管理従事者によって、又は未熟練者によって施すことができ得る。 Then, in order to determine the need for hospitalization or emergency care it can can be applied by the health care worker, or by unskilled.

[006] 本態様によれば、デバイスは、側方流動膜、並びに心筋傷害又は損傷のマーカー(「バイオマーカー」)の存在下で検出可能な複合体を形成するための結合試薬を含む。 According to 006 present embodiment, the device comprises a coupling reagent to form a lateral flow membrane, and a detectable complex in the presence of myocardial injury or damage to the marker ( "biomarker"). デバイスは、試料が加えられる区域、及び試料が加えられる区域と流体連通した1つ又は複数の流体流路を備える。 Device comprises area sample is added, and samples one through zone in fluid communication applied or a plurality of fluid flow paths. 流体流路は、第1バイオマーカー捕捉区域及び第2バイオマーカー捕捉区域を備え、これらは、単一の流路上に直列にあってもよく、又は別々の流路内にあってもよい。 Fluid flow path includes a first biomarker capture zone and the second biomarker capture zone, it may be in series with the single flow path, or may be in separate flow path. 第1捕捉区域は、第1の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、バイオマーカーを検出可能に捕捉するように構成されており、第2捕捉区域は、第2の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、バイオマーカーを検出可能に捕捉するように構成されている。 The first capture zone, when present in the sample at a first threshold level or above, is configured to detectably capture the biomarkers, second capture zone, the sample in the second threshold level or above when present, is configured to detectably capture the biomarkers. したがって、デバイスは、患者におけるバイオマーカーレベルを判定又は追跡するための半定量的情報を提供し、ポイントオブケアフォーマットで患者の容態を判定するための汎用性の高い情報を提供する。 Thus, the device provides a semi-quantitative information for determining or tracking the biomarker levels in a patient, to provide a versatile information for determining the condition of the patient at the point of care format.

[007] 例えば、デバイスは、cTnIなどの心筋トロポニンの少なくとも2つの閾値レベルを検出するための結合試薬を含有し得る。 [007] For example, the device may contain a binding reagent for detecting at least two threshold levels of cardiac troponin such cTnI. このような実施形態では、第1の閾値レベルは、血液循環中のcTnIの存在を示すことができ、約0.04ng/mLに対応し、より具体的な臨床評価をもたらすことができ得る。 In such embodiments, the first threshold level can indicate the presence of cTnI in the blood circulation, corresponding to about 0.04 ng / mL, may be able to provide a more specific clinical evaluation. 例えば、この閾値より上のcTnIのレベルは、患者が、潜在的な心イベントを示す上昇中のcTnIレベルについて監視されるべきであることを示す。 For example, the level of cTnI above this threshold indicates that the patient should be monitored for cTnI level rising indicating a potential cardiac events. 第2の閾値レベルは、急性心イベントを示すことができ、循環中の約0.1ng/mLのcTnIに対応し得る。 The second threshold level may indicate an acute cardiac event may correspond to the cTnI about 0.1 ng / mL in the circulation. 第2の閾値レベルより上のcTnIのレベルは、MIなどの急性心イベントを示す。 Level of cTnI above the second threshold level indicates acute cardiac events such as MI. デバイスは、検査の感度及び/又は特異性及び/又は範囲を向上させ、及び/又はさらにいっそう具体的な臨床評価を提供するために、ある特定の実施形態では、cTnIの3つ以上の閾値レベルを判定することもできる。 The device improves the sensitivity and / or specificity and / or range of the test, and / or further in order to provide a more specific clinical evaluation, in certain embodiments, more than two threshold levels of cTnI it is also possible to determine.

[008] 1又は複数の流体流路は一般に、1つ又は複数の吸水性、吸収性、及び/又は多孔質の膜によって形成され、各流路は、試料の流れが順調であることの指標として検出可能な信号を生成する制御区域を含むことができる。 [008] one or more fluid flow paths are typically formed by one or more of water absorption, absorption, and / or a porous membrane, an indication that each passage, the flow of the sample is well the detectable signal may include a control section for generating a. いくつかの実施形態では、流体流路は、細胞及び/又はデブリを濾過するために、様々な多孔度の膜又はパッドをさらに含むことができ、これらは一般に、試料が加えられる区域に近接して位置される。 In some embodiments, the fluid flow path, for filtering cells and / or debris may further include a film or pad of varying porosity, it is generally close to the zone where the sample is added It is positioned Te. これらの実施形態又は他の実施形態では、流体流路は、結合試薬を収容する1つ又は複数の試薬パッドを備えることができる、及び/又は試料の流れの推進に役立つように、末端に吸収パッドを含むことができる。 In these or other embodiments, the fluid flow path may be provided with one or more of the reagent pad to accommodate the binding reagent, and / or to help promote the sample flow, the absorption at the terminal It may include a pad.

[009] バイオマーカー(例えば、cTnI)は、デバイス内(例えば、試薬パッド内)に含められている第1の結合部分及び第2の結合部分で形成され、又は試料に添加される(例えば、プレインキュベーション工程で)捕捉可能で検出可能な複合体を形成することによって、例えば試料中で検出可能である。 [009] biomarkers (e.g., cTnI) is the device (e.g., a reagent in the pad) are formed in the first coupling portion and a second coupling portion that is included in, or added to the sample (e.g., by forming the pre-incubation step) capturable a detectable complex can be detected, for example, in a sample. 第1の結合部分及び第2の結合部分は、本明細書に詳細に記載される免疫試薬であり得る。 The first coupling portion and the second coupling portion may be an immune reagents described in detail herein. 第1の結合部分は、捕捉区域で複合体が固定化されると可視化又は検出され得る、付加された、又は結合した検出可能な標識を有する。 The first binding moiety, the complex is immobilized at the capture zone may be visualized or detected, with the added or bound detectable labeled. 様々な適当な標識が本明細書に記載されている。 Various suitable labels are described herein. デバイスは、特定の捕捉区域で複合体を捕捉又は固定化させるための1つ又は複数の第2の結合部分を含むことができる。 The device may include one or more second coupling portion for captured or immobilized complex with a specific capture zone. 特に、各第2の結合部分は、捕捉区域で固定化されており、又は試料が流れている間に特定の捕捉区域で固定化され得る。 In particular, the second binding moiety can be immobilized in a specific capture zone while being immobilized at the capture zone, or if the sample is flowing. 例えば、少なくとも1つの第2の結合部分は、ストレプトアビジン−ビオチン相互作用、抗体−抗原相互作用によって、又は相補的若しくは実質的に相補的なオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって捕捉区域で捕捉可能であり得る。 For example, at least one second coupling portions, streptavidin - biotin interaction, antibody - the antigen interaction, or may be captured at the capture zone by hybridisation of a complementary or substantially complementary oligonucleotide . 第1及び/又は第2の結合部分は、1又は複数のcTnI捕捉区域の上流の1又は複数の流路内で拡散的に結合することができ、その結果、試料中のバイオマーカーは、試料が流れている間に、第1及び第2の結合部分と捕捉可能で検出可能な複合体を形成する。 The first and / or second binding moiety may be diffusively bound at one or more cTnI capture zone upstream of the one or more flow paths, resulting biomarker in the sample, the sample is while flowing, to form a detectable complex can capture the first and second coupling portions.

[010] いくつかの実施形態では、第1捕捉区域及び第2捕捉区域は、試料が加えられる区域と流体連通して、異なる、並列の、又は双方向性の流路内にある。 [010] In some embodiments, the first capture zone and the second capturing zone, through zones in fluid communication with the sample is added, different, parallel, or in both directions of flow path. 例えば、デバイスは、それぞれが試料中のバイオマーカーの異なる閾値レベルを判定するように構成された、2つ、3つ、又はそれ以上の流路を備えていてもよい。 For example, the device, each configured to determine a threshold level of different biomarkers in a sample, two, three, or may comprise more flow paths. いくつかの実施形態では、デバイスは、上昇中の分析物レベルを検出するためにある時間内に検査を繰り返すための、少なくとも第2の試料が加えられる区域、及び対応する1つ又は複数の流路を備えていてもよい。 In some embodiments, the device for repeating examination in time in order to detect the analyte level in the elevated, at least a second zone in which the sample is applied, and the corresponding one or more flow it may comprise a road.

[011] デバイスは一般に、複数の閾値レベルでバイオマーカーを検出するように構成されている。 [011] device is generally configured to detect the biomarker in a plurality of threshold levels. いくつかの実施形態では、各捕捉区域で異なる閾値レベルのマーカーを検出可能に捕捉するように、第1捕捉区域は、第1の量の固定化捕捉剤を有し、第2捕捉区域は、第2の量の前記固定化捕捉剤を有し、追加の捕捉区域について同様である。 In some embodiments, as markers of different threshold levels for each capture zone detectably captured first capture zone has a first amount of immobilized capture agents, the second capture zone, having said immobilized capture agent of the second amount is the same for additional capture zone. 固定化捕捉剤は、対向する側の結合部分が分析物−特異的結合試薬(「第2の結合部分」)にコンジュゲートされている、例えば、ストレプトアビジン、ビオチン、抗体、又は天然若しくは人工ポリヌクレオチドであり得る。 Immobilized capture agent binding moiety analyte opposite sides - to the specific binding reagent (the "second binding portion") are conjugated, e.g., streptavidin, biotin, an antibody, or natural or artificial poly It may be a nucleotide. 他の実施形態では、異なる閾値レベルでバイオマーカーを検出可能に捕捉するように、第1捕捉区域は、バイオマーカーに対する第1の親和性を有する抗体を含み、第2捕捉区域は、バイオマーカーに対する第2の親和性を有する抗体を含む。 In other embodiments, to detectably capture the biomarkers with a different threshold level, the first capture zone includes an antibody having a first affinity for the biomarker, a second capture zone, for biomarkers It includes antibodies having the second affinity. 低親和性抗体及び高親和性抗体は、それぞれの捕捉区域に非拡散的に結合することができ、又は特定の捕捉剤、例えば、とりわけ、ストレプトアビジン又は1又は複数のポリヌクレオチド捕捉剤などを使用することによって特定の捕捉区域に向けることができる。 Low-affinity antibodies and high affinity antibodies, can be non-diffusively bound to each capture zone, or specific scavengers, for example, among others, using, for example, streptavidin or one or more polynucleotides capture agent it can be directed to a specific capture zone by. 例えば、異なる配列を有するポリヌクレオチド捕捉剤を使用して、低親和性抗体及び/又は高親和性抗体を特定の捕捉区域に向けることができる。 For example, it is possible to different sequences using polynucleotide capture agent having the direct low affinity antibodies and / or high affinity antibodies to specific capture zone.

[012] さらに他の実施形態では、捕捉区域は連続的であり、閾値レベル又は相対的レベルは、流路に沿って捕捉される検出可能な免疫複合体の相対的長さによって識別される。 [012] In yet another embodiment, the capture zone is continuous, the threshold level or relative level is identified by the relative lengths of detectable immune complexes trapped along the flow path.

[013] 別の態様では、本発明は、心筋トロポニン(例えば、cTnI)などの患者試料中の心筋傷害又は損傷のマーカーのレベルを評価するための半定量的方法を提供する。 In the 013] In another aspect, the present invention provides a semi-quantitative method for assessing cardiac troponin (e.g., cTnI) levels of myocardial injury or damage to the marker in a patient sample, such as. 本方法は、検査試料を本発明のデバイスに加える工程と、捕捉区域内で特定の検出可能な信号の存在又は非存在を検出する工程とを含む。 The method includes a step of detecting the step of adding a test sample to the device of the present invention, the presence or absence of a particular detectable signal at the capture zone. 患者は、急性心イベントの1つ若しくは複数の症状を有する場合があり、及び/又は慢性心臓病を有する場合があり、緊急介入の必要性を判断するために、迅速なトロポニン(例えば、cTnI)判定を潜在的に極めて重要にしている。 Patients may have one or more symptoms of acute cardiac events and / or may have chronic heart disease, in order to determine the need for urgent intervention, rapid troponin (e.g., cTnI) It is potentially very important decision. さらに、患者は、腎疾患などのcTnIの特定の循環レベルと関連した慢性病状、以前の心臓外傷若しくは外科的介入、又は敗血症を有する場合があり、その結果、不要な救急治療の費用を回避するために、潜在的なバックグラウンドレベルに対するcTnIの上昇レベルを迅速かつ正確に検出するための方法が望ましいはずである。 Furthermore, patients with chronic medical conditions associated with a particular level of circulating cTnI of renal disease, previous cardiac trauma or surgical intervention, or may have a sepsis, so that, to avoid the cost of unnecessary emergency for, should the method for detecting quickly and accurately the potential elevated levels of cTnI to background level is desirable. 患者試料が第1の閾値レベルであるが、第2の閾値レベル未満のマーカーのレベルを示す場合、マーカーの上昇レベルを検出するために、約1〜約10時間以内に検査が繰り返される。 Patients sample is a first threshold level, indicating the level of the second threshold level lower than the marker, in order to detect the rising level of the marker, the inspection is repeated within about 1 to about 10 hours.

[014] 例えば、cTnIの第1の閾値レベルを示す検出可能な信号は、患者が心筋梗塞の徴候及び症状について監視されるべきであることを示唆し、いくつかの実施形態では、cTnIの上昇レベルを検出するために、ある時間後に検査が繰り返される。 [014] For example, the detectable signal indicative of the first threshold level of cTnI suggests that the patient should be monitored for signs and symptoms of myocardial infarction, in some embodiments, increase of the cTnI to detect level, the inspection is repeated after a certain time. cTnIの第2の閾値レベルを示す検出可能な信号は、患者がMIなどの潜在的な急性心イベントについて治療されるべきであることを示唆する。 The second detectable signal indicative of the threshold levels of cTnI suggests that the patient should be treated for potential acute cardiac events such as MI. 患者が検査デバイスで検出可能なcTnIのレベルを有さない場合、患者は、急性心イベントを経験していないと判定され、又は有害な結果のリスクが低い。 If the patient does not have a level of detectable cTnI in testing device, the patient is determined not to be experiencing acute cardiac event, or a low risk of adverse consequences.

[015] 別の態様では、本発明は、検査試料中の分析物の少なくとも2つの閾値レベルを検出するためのデバイス及び方法を提供する。 In the 015] In another aspect, the present invention provides a device and method for detecting at least two threshold levels of the analyte in the test sample. この態様では、分析物は、心筋傷害のマーカーである必要はなく、試料中のレベルが1つを超える医療判断ポイントを示唆することができる任意のマーカーとすることができる。 In this embodiment, the analyte need not be a marker of myocardial injury can be the level in the sample is any marker that can suggest a medical decision point more than one. このようなマーカーは、脳卒中若しくは脳外傷、治療剤に対するアレルギー反応(例えば、治療剤に対するIgE抗体)、又は自己抗体の検出若しくはサイトカインプロファイルの判定による自己免疫疾患を含む特定の疾患活動の尺度を示すことができる。 Such markers indicate stroke or cerebral trauma, allergic reactions to the therapeutic agent (e.g., IgE antibodies against the therapeutic agent), or by detecting or determining the cytokine profile of autoantibodies to a measure of the specific disease activity including autoimmune diseases be able to.

[016] この態様では、本デバイスは一般に、試料が加えられる区域、及び試料が加えられる区域と流体連通した1つ又は複数の流体流路を備える。 [016] In this embodiment, provided in the device generally, areas where the sample is applied, and one sample is passed through zones in fluid communication applied or a plurality of fluid flow paths. 1又は複数の流体流路は、第1の分析物捕捉区域及び第2の分析物捕捉区域を含む。 1 or more fluid flow path includes a first analyte capture zone and the second analyte capture area. 第1及び第2捕捉区域は、単一の流路上に直列にある、又は別々の流路内にある。 First and second capture zone is in series with a single flow path, or in separate flow path. 第1の分析物捕捉区域は、第1の閾値レベル以上で試料中に存在する場合、分析物(例えば、検出可能な複合体中で存在する)を直接又は間接的に検出可能に捕捉するための第1の量の固定化捕捉剤を含む。 The first analyte capture zone, if present in the sample at a first threshold level or above, the analyte (e.g., present in a detectable complex) directly or indirectly detectably to capture comprising a first amount of the immobilized capture agent. 第2の分析物捕捉区域は、第2の閾値レベル以上で試料中に存在する場合、分析物(例えば、検出可能な複合体中で存在する)を直接又は間接的に検出可能に捕捉するように構成された第2の量の固定化捕捉剤を含む。 Second analyte capture zone, if present in the sample at a second threshold level above, the analyte (e.g., present in a detectable complex) directly or indirectly detectably to capture comprising a second amount of immobilized capture agent that is configured. 分析物と検出可能な複合体(例えば、免疫複合体)を形成するための結合試薬は、デバイス中で流体流路中に存在し、又はプレインキュベーション工程で試料と組み合わされる場合がある。 Analyte and detectable complexes (e.g., immunoconjugates) binding reagents to form, present in the fluid flow path in the device, or may be combined with the sample in the pre-incubation step.

[017] 様々な実施形態では、固定化捕捉剤は、ストレプトアビジン−ビオチン、抗体−抗原、又は対向する側の結合部分が複合体を形成するための結合試薬(例えば、第2の結合部分)の1つにコンジュゲートされた、相補的若しくは実質的に相補的な天然若しくは人工オリゴヌクレオチドから選択される結合対の1つの部分である。 [017] In various embodiments, the immobilized capture agent is streptavidin - biotin, antibody - antigen, or opposite side coupling reagents for binding moiety forms a complex (e.g., a second coupling portion) conjugated to one, which is one portion of a binding pair selected from the complementary or substantially complementary to natural or artificial oligonucleotide.

[018]本発明の検査デバイスを例示する図である。 [018] is a diagram illustrating a testing device of the present invention. 検査デバイスは、側方流動膜と流体連通した試料が加えられる区域を含む。 Inspection device includes an area sample through the lateral flow membrane and fluid communication is added. 図1は、連続的な捕捉区域を使用する実施形態をさらに例示する。 Figure 1 further illustrates an embodiment using a continuous capture zone. [019]本発明の検査デバイスを例示する図である。 [019] is a diagram illustrating a testing device of the present invention. 検査デバイスは、不透過性バリアによって2つの小区分に分離された、1つの側方流動膜と流体連通した試料が加えられる区域を含む。 Test devices were separated into two subsections by impermeable barriers, including one lateral flow membrane in fluid communication with areas in which the sample is added through. [020]本発明の検査デバイスを例示する図である。 [020] is a diagram illustrating a testing device of the present invention. 検査デバイスは、試料が加えられる区域及び試薬パッドを含み、これらのうちの後者は、バリアによって分離された2つの並列の独立した側方流動膜と流体連通している。 Inspection device includes an area and reagent pad sample is added, the latter of which communicates separate lateral flow membrane in fluid communication with two separated parallel by the barrier. 各側方流動膜は、捕捉区域及び制御区域を含み、各側方流動膜の下流は、吸収パッドである。 Each lateral flow membrane comprises a capture zone and control zone, downstream of the lateral flow membrane, the absorption pad. [021]本発明の検査デバイスを例示する図である。 [021] is a diagram illustrating a testing device of the present invention. 検査デバイスは、単一の試料が加えられる区域と流体連通した2つの独立した側方流動膜を含む。 Inspection device includes two independent lateral flow membrane single sample through zones in fluid communication applied. 検査デバイスは、双方向流を使用する。 Inspection device uses a two-way flow. [022]本発明の検査デバイスを例示する図である。 [022] is a diagram illustrating a testing device of the present invention. 検査デバイスは、それぞれが複数の閾値レベルにある複数の分析物を検出するための、1つの試料が加えられる区域、及び試料が加えられる区域の周りに径方向に配列された複数の側方流動膜を含む。 Inspection device for detecting a plurality of analytes have multiple threshold levels, zone one sample is applied, and a plurality of laterally arranged in the radial direction around the area where the sample is applied flow including the film. [023]支持マトリックスによって支持された、2つの連続的に配向した捕捉区域を含む側方流動膜を備える検査デバイスを例示する図である。 [023] supported by support matrix is ​​a diagram illustrating a test device comprising a lateral flow membrane comprising two continuously oriented capture zone. 2つの捕捉区域は、それぞれ低分析物閾値及び高分析物閾値を検出するために、高親和性抗体及び低親和性抗体を使用する。 Two capture zone, in order to detect low analyte thresholds and high analyte thresholds respectively, using the high-affinity antibodies and low affinity antibodies. 検査デバイスは、2つの異なる濃度の同じ分析物を検出可能に捕捉するように設計されている。 Inspection device is designed the same analysis of the two different concentrations as detectably capture. [024]2つの異なる濃度の同じ分析物を検出可能に捕捉するように設計された2つの捕捉区域を含む側方流動膜を例示する図である。 [024] is a diagram illustrating a lateral flow membrane comprising two capture zone designed to the same analysis of the two different concentrations detectably capture. 1つの捕捉区域は、それぞれがビオチンにコンジュゲートされた高親和性抗体を使用する。 One capture zone, each of which uses a high-affinity antibody conjugated to biotin. ビオチンは、高親和性抗体を固定化するために、側方流動膜上でストレプトアビジンに結合している。 Biotin, to immobilize high affinity antibodies, bound to streptavidin on the lateral flow membrane. 第2捕捉区域は、側方流動膜に直接結合した低親和性抗体を使用する。 The second capture zone uses a low affinity antibody bound directly to the lateral flow membrane. [025]2つの異なる濃度の同じ分析物、又は2つの異なる分析物を検出可能に捕捉するように設計された2つの捕捉区域を含む側方流動膜を例示する図である。 [025] The same analysis of the two different concentrations, or a diagram illustrating a lateral flow membrane comprising two capture zone designed to the two different analyte detectably capture. 捕捉剤はオリゴヌクレオチドであり、この場合、相補オリゴヌクレオチドが特定の捕捉区域で固定化される。 Capture agent is an oligonucleotide, in this case, the complementary oligonucleotide is immobilized at a particular capture zone. [026]本発明の検査デバイスで実行したマルチレベル心筋トロポニンアッセイからの結果を示す図である。 [026] is a diagram showing the results from a multi-level cardiac troponin assay was performed by the inspection device of the present invention. 例示的な実施形態では、分析物の2つの検出可能な閾値を創製するために、並列の流路、及び捕捉区域で固定化された異なる量のビオチンを使用する。 In an exemplary embodiment, in order to create two detectable threshold of the analyte, the parallel flow paths, and use the biotin immobilized different amounts at the capture zone.

[027] 本発明は、試料中の分析物の2つ以上の閾値レベルの存在を検出するための方法及びデバイスを提供する。 [027] The present invention provides methods and devices for detecting the presence of two or more threshold levels of an analyte in a sample. 様々な実施形態では、本発明は、費用効果的な健康管理を導くように、患者の容態を判定するための好都合なポイントオブケア検査を提供する。 In various embodiments, the present invention is to direct a cost effective healthcare, provides a convenient point-of-care test to determine the patient's condition.

[028] 体液試料中の分析物濃度は、疾患及び他の臨床症状の診断又は予後のための有用な指標である。 [028] analyte concentration in a body fluid sample is a useful indicator for the diagnosis or prognosis of disease and other clinical symptoms. 本明細書に記載されるように、単一の検査デバイスでの複数の閾値(すなわち、カットオフ)レベルは、検査によってもたらされる情報を高め、医療選択肢を迅速に評価する機会を提供する。 As described herein, a plurality of threshold values ​​of a single testing device (i.e., cut-off) level, increasing the information provided by the test, providing the opportunity to rapidly evaluate the medical choices. さらに、複数の閾値レベルでの1種又は複数の分析物の測定は、ある時間にわたって連続に測定することにより分析物レベルの進展を測定することによって、疾患状態若しくは病状の進行を監視し、又は病状の存在若しくは非存在を判定するのに有用となり得る。 Moreover, the measurement of one or more analytes at multiple threshold levels may be determined by measuring the evolution of analyte levels by measuring continuously over time, to monitor the progression of the disease state or condition, or It may be useful for determining the presence or absence of disease state.

[029] 側方流動検査などの半定量的検査を使用して複数の閾値レベルに対する分析物濃度を測定することは、1つを超える臨床的判断ポイント(それによる、結果として生じる行動方針)を、ポイントオブケア時に単一の評価で扱うことができ、未熟練者によって行うことができるので、特に有用となり得る。 [029] Using a semi-quantitative tests, such as lateral flow test to measure the analyte concentration for a plurality of threshold levels, (according to which course of action resulting) clinical judgment point more than one , can be handled in a single evaluation at the time of point-of-care, can be performed by unskilled person, it can be particularly useful.

[030] 様々な実施形態では、本発明のデバイス及び方法により、定量分析に必要とされることが多い、扱いにくい、又は不便な器具使用の要件が回避され、本発明が、例えば家、農村地域、救急車、飛行機、及び低開発な地方にとって理想的になる。 [030] In various embodiments, the devices and methods of the present invention, it is often required for the quantitative analysis, unwieldy, or inconvenient instrumentation requirements are avoided, the present invention is, for example home, rural area, it becomes ideal ambulance, airplane, and for the less developed provinces. 本発明は、不慣れなユーザーに緊急健康管理の必要性を知らせるのに十分な、容易に解釈可能な検査を提供する。 The present invention provides a sufficient, easily interpretable test to inform the need for emergency health care to inexperienced users.

対象とする分析物及びマーカー Analyte and the marker of interest
[031] ある特定の実施形態におけるデバイスは、血清中のその存在が心筋梗塞などの急性心筋イベントを示す、心筋傷害又は損傷に関連した分析物を検出する。 Device in [031] Certain embodiments, its presence in the serum indicates acute myocardial events such as myocardial infarction, detecting analytes associated with myocardial injury or damage. このような分析物としては、心筋トロポニン(例えば、cTnT、cTnI、及びcTnC)、ミオグロビン、並びにCK−MBがある。 Such analytes, cardiac troponin (e.g., cTnT, cTnI, and cTnC), myoglobin, as well as CK-MB. 心筋傷害の他のマーカーは、米国特許第6,461,828号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 Other markers of myocardial injury, are described in US Patent No. 6,461,828, which is incorporated herein by reference in its entirety. 本デバイスは、心筋傷害の少なくとも1種、2種、又は3種のマーカーの複数の閾値レベルを検出するように構成することができる。 The device may be configured to detect at least one of myocardial injury, two, or a plurality of threshold levels of three markers.

[032] 分析物は、少なくとも1種の心筋トロポニン(例えば、cTnI、cTnC、cTnT)であり得る。 [032] analyte, at least one cardiac troponin (e.g., cTnI, cTnC, cTnT) may be. 循環心筋トロポニンのレベルは、心筋損傷に特異的である。 Levels of circulating cardiac troponin is specific for myocardial injury. さらに、血清中の心筋トロポニンのレベルは、MIの漸進的発達において経時的に変化する。 Furthermore, the level of a cardiac Troponin in serum, changes over time in the progressive development of MI. 例えば、患者がMI様の症状、例えば、不安定な胸痛及びECGに対する非特異的変化などを呈しているが、症状が最初に現れたとき通常の99パーセンタイル未満のcTnIの血中濃度を有する場合、対象は、6〜9時間内に再び検査されるべきである。 For example, patients of MI-like symptoms, for example, although exhibiting such non-specific changes to unstable chest pain and ECG, if having a blood concentration of cTnI typically less than 99 percentile when symptoms first appeared , the subject should be re-examined in 6-9 hours. 経時的にcTnIが増加すると、心筋壊死のより正確なリスク評価及び特異性がもたらされ、腎損傷などのトロポニン上昇の非特異的原因が排除される。 If over time cTnI increases, more accurate risk assessment and specificity of myocardial necrosis resulted nonspecific cause of troponin increase in renal injury is eliminated. 連続した検査でcTnIが20%〜30%に増加すると、有意であるとみなされる。 When cTnI is increased 20% to 30% in a continuous inspection it is considered to be significant.

[033] ある特定の実施形態では、デバイスは、複数の閾値レベルより上の患者試料中のcTnIの存在を判定する。 [033] In certain embodiments, the device determines the presence of cTnI in patient samples above the plurality of threshold levels. 心筋トロポニンI(cTnI)は、心筋梗塞(MI)後の最初の4〜12時間にわたって増加する。 Cardiac troponin I (cTnI) is increased over the first 4 to 12 hours after from a myocardial infarction (MI). 例えば、対象の循環トロポニンIレベルが、約0.04ng/mL超であるが、約0.1ng/mL未満である場合、心筋梗塞又は急性心イベントの疑いがあるが、このようなトロポニンIのレベルは、腎疾患などの心筋梗塞以外の原因に起因し得る。 For example, circulating troponin I level of interest, is a greater about 0.04 ng / mL, is less than about 0.1 ng / mL, but is suspected myocardial infarction or acute cardiac events, such troponin I level may be due to causes other than myocardial infarction, such as kidney disease. したがって、0.04ng/mL超であるが0.1ng/mL未満である血中cTnI量を報告する単回の測定は、決定的でない場合がある。 Therefore, the measurement of a single but a greater 0.04 ng / mL to report blood cTnI amount is less than 0.1 ng / mL may not be conclusive. しかし、最初の測定から数時間後(例えば、2〜8時間の後)、2回目の測定により、対象のcTnIレベルが約0.1ng/mL超であることが示される場合、それは、対象のトロポニンIレベルが経時的に増加し、MIの可能性が有意により高いことを示す。 However, the first few hours (eg, after 2-8 hours) from the measurement, the second measurement, if it is shown cTnI level of the target is greater than about 0.1 ng / mL, which, in the subject troponin I levels increased over time, indicating that the significantly higher likelihood of MI.

[034] したがって、cTnIに関係する特定の実施形態では、デバイスは、患者の血液又は血清中の低閾値レベルのcTnIを検出するように構成され、低閾値レベルは、cTnIの存在を示す。 [034] Thus, in certain embodiments relating to cTnI, the device is configured to detect low threshold level of cTnI in the patient's blood or serum, low threshold level indicates the presence of cTnI. この閾値は、約0.01ng/mL〜約0.06ng/mLであり、又はある特定の実施形態では、約0.04ng/mLであり得る。 This threshold is about 0.01 ng / mL to about 0.06 ng / mL, or in certain embodiments, it may be about 0.04 ng / mL. これらの実施形態では、デバイスは、MIなどの急性心イベントを示す、より高い閾値のcTnIを同時に検出するようにも構成される。 In these embodiments, the device shows the acute cardiac events such as MI, also configured to simultaneously detect the cTnI higher threshold. cTnIのより高い閾値は、患者の血液又は血清中で約0.08ng/mL〜約0.2ng/mLに、又は特定の実施形態では、約0.1ng/mLに相関し得る。 Higher threshold of cTnI is about 0.08 ng / mL to about 0.2 ng / mL in the patient's blood or serum, or in certain embodiments, it may correlate to about 0.1 ng / mL. 検査デバイスを用いた初期測定により、約0.1ng/mL超のcTnIレベルが示される場合、MI又は死などの有害イベントのリスクは、cTnIが0.1ng/mL未満であった場合と比較して、約2.2〜3.0倍高い。 The initial measurement using the test device, if about 0.1 ng / mL greater than cTnI level is indicated, the risk of adverse events such as MI or death, compared with the case cTnI was less than 0.1 ng / mL Te, about 2.2 to 3.0 times higher. 初期測定により、血液又は血清中のcTnIレベルが約0.04ng/mL未満であることが示される場合、検査がMIの発症の非常に早期に実施された場合を除き、MIは非常に考えにくいはずである。 The initial measurement, if it cTnI level in blood or serum is less than about 0.04 ng / mL are shown, unless the test is carried out in a very early onset of MI, MI is very unlikely it should.

[035] いくつかの実施形態では、デバイスは、循環cTnIの第3の閾値レベルの存在を判定するように構成される。 [035] In some embodiments, the device is configured to determine the presence of a third threshold level of circulating cTnI. 第3の閾値レベルは、約0.2ng/mL〜約0.7ng/mL(例えば、約0.5ng/mL)とすることができる。 Third threshold level may be about 0.2 ng / mL to about 0.7 ng / mL (e.g., about 0.5 ng / mL). cTnIのレベルが約0.5ng/mL以上であると、MIの特異性が高い。 When the level of cTnI is about 0.5 ng / mL or more, a high specificity for MI. 血中又は血清cTnIレベルが約0.5ng/mL以上である対象は、心筋損傷をおそらく経験している。 Target blood or serum cTnI level is about 0.5 ng / mL or more are probably experiencing myocardial damage. 3閾値レベルのこのシステムは、急性及び/若しくは慢性心臓病の履歴を有し、並びに/又はcTnIが循環中に存在し得る他の病気、例えば、腎疾患、又は前の心臓外傷若しくは介入、又は心臓炎(心膜炎若しくは心内膜炎)などを経験している患者を含めて、急性胸痛又はMIの他の症状の開始後に家で検査を実施している個人にとって特に意味があり得る。 3 The system of threshold levels has a history of acute and / or chronic heart disease, and / or cTnI other diseases that may be present in the circulation, for example, renal disease, or previous cardiac trauma or intervention, or including patient experiencing such carditis (pericarditis or endocarditis), it may be meaningful for individuals to have performed testing at home after the start of the other symptoms of acute chest pain or MI. 他の症状又は適応症がない場合、検査結果は、即時の医療的ケアを求める必要性に関する情報をもたらすことができる。 If there are no other symptoms or indications, test results can yield information about the need to seek medical care immediately.

[036] いくつかの実施形態では、少なくとも2つの分析物は、単一の検査デバイスによって検出される。 [036] In some embodiments, the at least two analytes are detected by a single testing device. 2つの分析物は、MIの特異的マーカーとすることができる。 2 one analyte may be a specific marker of MI. 例えば、一実施形態では、検査デバイスは、トロポニンIに特異的な少なくとも1つの捕捉区域、及びトロポニンTに特異的な少なくとも1つの第2の捕捉区域を備える。 For example, in one embodiment, the inspection device, at least one capture zone on the troponin I specific, and at least one second capture zone specific to troponin T. 各トロポニンの検出可能な閾値は、一方は、MIの「判定を下す」(循環トロポニンの存在を示す低閾値)ように選択され、他方は、MIを「除外する」(MI又は急性心イベントを示す高閾値)ように選択されているようなものである。 Detectable threshold of each troponin, one, "verdict" of MI is selected as (low threshold indicating the presence of circulating troponin) and the other, the MI "Exclude" the (MI or acute cardiac events it is as has been selected high threshold) as shown. トロポニンI及びトロポニンTはともにMIに特異的であるが、異なる遺伝子によって遺伝的にコードされるので、一方の分子が側方流動デバイス上のその特異的な捕捉区域によって枯渇しても、他方の分子のレベルがそのデバイス上の他方の分子の特異的捕捉区域によって検出されるのに影響されないはずである。 Although troponin I and troponin T are both specific for MI, different because they are genetically encoded by the gene, also depleted one molecule by their specific capture zone on the lateral flow device, other levels of the molecules should be unaffected to be detected by specific capture zone of the other molecules on the device.

[037] デバイスは、心筋傷害又は状態の第2のマーカー、例えば、ミオグロビン又はCK−MBなどの少なくとも1つの、又は複数の閾値レベルを判定するように構成することができる。 [037] device, a second marker of myocardial injury or condition, for example, can be configured to determine at least one of such myoglobin or CK-MB, or a plurality of threshold levels. このようなマーカーは、米国特許第5,290,678号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 Such markers are described in US Patent No. 5,290,678, which is incorporated herein by reference in its entirety.

[038] これらの実施形態及び他の実施形態では、デバイスは、参照により本明細書に組み込まれている米国特許第6,461,828号にも記載されているように、心臓状態の追加のマーカー、例えば、NT−proBNP、BNP、proBNP、ANP、又はpro−ANPなどの半定量的判定をもたらすことができる。 [038] In these and other embodiments, the device, referred to by as described in U.S. Patent No. 6,461,828 which is incorporated herein, heart conditions additional markers, for example, can result in NT-proBNP, BNP, proBNP, ANP, or semi-quantitative determination of such pro-ANP.

[039] 他の実施形態では、デバイスは、脳卒中又は他の脳外傷の判定として、脳傷害又は外傷の1種又は複数のマーカーの複数の閾値レベルを判定する。 [039] In other embodiments, the device determines as a determination of stroke or other brain trauma, multiple threshold levels of one or more markers of brain injury or trauma. 例えば、いくつかの実施形態では、マーカーは、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、S100タンパク質(S100)のβアイソフォーム、神経細胞特異的エノラーゼ(NSE)、トロンボモジュリン、二量体又は四量体形態でのグルコーストランスポーターI、ニューロテリン(neurothelin)、γグルタミルトランスペプチダーゼ、及びP−糖タンパク質の1種又は複数を含む。 For example, in some embodiments, the marker is myelin basic protein (MBP), S100 beta isoform of the protein (S100), neuron specific enolase (NSE), thrombomodulin, dimeric or tetrameric form glucose transporter I, Nyuroterin (neurothelin), comprising one or more γ guru Tamil trans peptidase, and P- glycoprotein. これらのマーカー及び他のマーカーは、米国特許第6,780,606号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 These markers and other markers are described in US Patent No. 6,780,606, which is incorporated herein by reference in its entirety. したがって、本発明は、心臓マーカーについて本明細書に記載及び例示されているように、経時的に循環レベルを追跡するためのデバイス及び方法を提供する。 Accordingly, the present invention is as described and exemplified herein for cardiac markers, to provide a device and method for tracking over time circulating levels.

[040] さらに他の実施形態では、デバイスは、薬剤、又は潜在的な抗原、又は他の刺激に曝露された際に監視することができる炎症応答マーカー又は免疫応答マーカーの存在を判定する。 [040] In still other embodiments, the device determines the drug, or potential antigens, or other presence of inflammatory response marker or immune response markers that can be monitored when exposed to the stimulus. このようなマーカーは、治療的介入の効力若しくはそれに対する反応を監視するための治療剤に対する抗体とすることができ、又はマーカーは、療法に応答したものを含めて、経時的に疾患活動を監視するための自己免疫疾患を示す自己抗体とすることができる。 Such markers can be an antibody against the therapeutic agent for monitoring the response to efficacy or that of therapeutic intervention, or markers, including those in response to therapy over time monitoring disease activity it can be an autoantibody indicating an autoimmune disease for.

[041] 一般に、分析物は、毒素、有機化合物、タンパク質(免疫グロブリンを含む)、ペプチド(例えば、ペプチドホルモン)、微生物若しくはその成分、ビタミン、代謝産物、薬剤(治療目的で投与されるもの、及び違法な目的で摂取されるものを含む)、汚染物質、農薬、又は前述のもののいずれかに対する抗体であり得る。 [041] In general, the analyte (including immunoglobulins) toxins, organic compounds, proteins, peptides (e.g., peptide hormones), which microorganisms or components thereof, vitamins, metabolites, is administered a drug (therapeutic purposes, and those which are taken by the illegal purposes), pollutants, may be an antibody against any of the pesticide, or the foregoing.

[042] 一般に、試料は、生体試料又は環境試料を含む、分析物の存在及び/又は濃度について検査されるべき任意の材料であり得る。 [042] Generally, the sample includes a biological sample or environmental sample, for the presence and / or concentration of the analyte can be any material to be tested. 様々な実施形態では、試料は、体液試料、例えば、全血、血清、血漿、尿、汗、唾液、脳脊髄液、鼻汁などである。 In various embodiments, the sample is a body fluid sample, e.g., whole blood, serum, plasma, urine, sweat, saliva, cerebrospinal fluid, nasal secretion, and the like. デバイスが心筋傷害の1種又は複数のマーカーを検出するように構成されている場合、試料は、いくつかの実施形態では、血液、血清、又は血漿であり得る。 If the device is configured to detect one or more markers of myocardial injury, the sample is in some embodiments, blood may be serum, or plasma.

側方流動検査 Lateral flow test
[043] 本発明のデバイス及び方法は、側方流動検査を使用する。 [043] Devices and methods of the present invention uses a lateral flow test. 側方流動検査は、周知であり、例えば、米国特許第6,461,828号、同第6,177,281号、同第7,390,674号、及び米国特許第7,491,551号に記載されており、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 Lateral flow test are well known, for example, U.S. Patent No. 6,461,828, the No. 6,177,281, the No. 7,390,674, and U.S. Patent No. 7,491,551 have been described, these are incorporated herein by reference in its entirety. 側方流動検査は一般に、試料が加えられる区域(例えば、検査用流体試料を加えるための)、及び試料が加えられる区域と流体連通した1つ又は複数の流体流路を含む。 Lateral flow test is generally areas where a sample is added (e.g., for applying a test fluid sample), and one or more fluid flow paths sample through zones in fluid communication applied. 流体流路は、第1バイオマーカー捕捉区域及び第2バイオマーカー捕捉区域を含み、これらは、単一の流路上に直列にあってもよく、又は別々の流路内にあってもよい。 Fluid flow path includes a first biomarker capture zone and the second biomarker capture zone, it may be in series with the single flow path, or may be in separate flow path. 用語「流体連通」は、試料が流路の第1のコンポーネントから第2のコンポーネントに流れることができ、逆の場合も同様であることを意味する。 The term "fluid communication", the sample can flow from the first component of the flow path to the second component, which means that it is vice versa. 第1のコンポーネントは、介入コンポーネントが存在しても、第2のコンポーネントと流体連通している。 The first component, even in the presence of intervening components in fluid second component in fluid communication. 例えば、試料が加えられる区域、試薬区域(例えば、アッセイ免疫試薬を収容する)、及び1つ又は複数の捕捉区域を含む側方流動膜は、検査デバイス上に連続的に位置していることができ、流体連通していることになる。 For example, areas where the sample is added, a reagent zone (e.g., assay immunoreagent housing a), and the lateral flow membrane comprising one or more capture zones, that is continuously located on the test device can, so that the fluid communication. デバイスは、適切な多孔度のフィルターを含む、血液細胞又は大きい残骸を分離するための1つ又は複数のコンポーネントをさらに備えることができる。 Device includes a filter of appropriate porosity can further comprise one or more components for separating blood cells, or large debris.

[044] 側方流動検査は、対象とするマーカー又は分析物の存在下で検出可能な複合体を形成するための側方流動膜及び結合試薬を含む。 [044] lateral flow tests, including lateral flow membrane and binding reagents for forming a detectable complex in the presence of a marker or analyte of interest. 複合体(例えば、免疫複合体)は、分析物に特異的で、付加された、又は結合した標識を有する第1試薬、及び、やはり対象とする分析物に特異的で、固定化され、又は捕捉可能である第2試薬を含む。 Complex (e.g., immunoconjugates) is specific for the analyte, the added, or the first reagent with bound label and still specific for the analyte of interest, are immobilized, or including a second reagent capable capture. 結合試薬は免疫試薬とすることができ、これは一般に、抗体又はその部分である。 Binding reagent may be a immunological reagents, which generally is an antibody, or portion thereof. 様々な実施形態では、免疫試薬は、対象とする分析物に結合する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性若しくは二重特異性抗体、キメラ抗体、又は抗体部分若しくは断片である。 In various embodiments, the immune reagent binds to the analyte of interest, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific or bispecific antibody, a chimeric antibody, or antibody portion or fragment. 抗体は、IgA、IgD、IgE、IgG、及びIgM、並びにこれらのサブタイプを含む任意のアイソタイプのものとすることができる。 Antibodies, IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, and can be of any isotype, including these subtypes.

[045] 免疫試薬はさらに、抗原結合性抗体部分又は断片、例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片など、単鎖抗体分子、1つ又は複数の抗原結合ドメインを含む免疫グロブリン分子の任意の断片から形成される多重特異性抗体であってもよい。 [045] immunological reagents further antigen-binding antibody portions or fragments, e.g., Fab, Fab ', F (ab') such as 2, Fv fragments, single-chain antibody molecules, immune comprising one or more antigen binding domains it may be a multispecific antibody formed from any fragment of immunoglobulin molecule.

[046] 結合試薬が免疫試薬である実施形態では、少なくとも1種の免疫試薬(例えば、「第1の免疫試薬」又は「第1の結合部分」)は、視覚的手段又は機器手段によって検出可能な、付加された、又は結合した標識を含有する。 [046] In an embodiment binding reagent is an immune reagent, at least one immunological reagents (e.g., "first immunization reagent" or "first binding moiety") can be detected by visual means or equipment unit Do, appended, or containing bound label. 例えば、異なる流路内で捕捉区域を視覚的に区別し、又は制御区域を区別するために、1つ又は複数の標識を本発明のデバイス及び方法において使用することができる。 For example, different flow paths within the capture zone visually distinguish, or to distinguish control zones, one or more labels can be used in the devices and methods of the present invention. 他の実施形態では、2つの別個の標識が、異なる分析物を視覚的に見分けるのに使用される。 In other embodiments, two separate labels may be used to distinguish between different analytes visually. 本発明で使用するのに適した様々な標識には、化学的又は物理的手段によって信号を生成する標識が含まれる。 To the various labels suitable for use in the present invention include labels which produce signals through either chemical or physical means. このような標識としては、酵素標識(例えば、基質の存在下で検出可能な信号を生成するもの)、色素原、染料、触媒、蛍光又は蛍光様化合物及び/又は粒子、磁性化合物及び/又は粒子、化学発光化合物及び/又は粒子、並びに放射性標識がある。 Such labels include enzyme labels (e.g., those that produce a detectable signal in the presence of a substrate), chromogen, dye, catalyst, fluorescent or fluorescent like compounds and / or particles, magnetic compounds and / or particles , chemiluminescent compounds and / or particles, as well as radioactive label. 標識は、標的分析物に特異的な第1の免疫試薬に直接又は間接的に、共有結合的又は非共有結合的に結合することができる。 Labels, directly or indirectly to a first immunoreagents specific to the target analyte can be covalently or non-covalently bound. ある特定の実施形態では、標識は、検査を行った後、少なくとも2、少なくとも4、少なくとも6、又は少なくとも8時間検出可能なままであり、その結果数時間後の繰り返し検査を、最初の結果と直接比較することができる。 In certain embodiments, the label, after the inspection, at least 2, at least 4, at least 6, or remained detectable at least 8 hours, and the results repeated inspection after a few hours, the initial results it is possible to direct comparison.

[047] 少なくとも1種の免疫試薬(例えば、「第2の免疫試薬」又は「第2の結合部分」)は、捕捉区域で固定化されており、又は特異的結合対相互作用によって前記捕捉区域で捕捉可能である。 [047] at least one immunological reagents (e.g., "second immune reagent" or "second binding portion") is immobilized at the capture zone, or the capture zone by a specific binding pair interactions in a possible acquisition. 例示的な結合対部分としては、相補的若しくは実質的に相補的なオリゴヌクレオチド、リガンド−受容体、抗体−抗原、又はストレプトアビジン−ビオチンがある。 Exemplary binding pairs part, complementary or substantially complementary oligonucleotide, ligand - receptor, antibody - antigen, or streptavidin - biotin,. この第2の結合部分は、分析物の複数の閾値レベルを検出するための基準を提供することができる。 The second binding moiety can provide a reference for detecting a plurality of threshold levels of analytes. 例えば、以下でより詳細に論じるように、捕捉区域は、異なるレベルで第2の免疫試薬を固定化又は捕捉するように、異なる量又は濃度の同じ結合対部分を使用することができる。 For example, as discussed in more detail below, the capture zone, a second immunological reagents to immobilized or captured at different levels, it is possible to use the same binding pair moiety different amounts or concentrations. あるいは、捕捉区域は、対象とする分析物に対して異なる親和性を有する第2の免疫試薬同士間を区別するように、異なる免疫試薬捕捉スキームを使用することができる。 Alternatively, the capture zone, so as to distinguish between the second immunological reagents each having different affinities for the analyte of interest, it is possible to use different immunoreagents acquisition scheme. 特に、低親和性抗体及び高親和性抗体は、コンジュゲートされた捕捉試薬の素性によって認識され得る。 In particular, low affinity antibodies and high affinity antibodies can be recognized by the identity of conjugated capture reagent.

[048] 各流路は、試料の流れが順調であることの指標として、1つ又は複数の捕捉/検出区域の下流に1つ又は複数の制御区域をさらに含むことができる。 [048] Each flow path, as an indication that the flow of the sample is well can further comprise one or more control zones downstream of one or more capture / detection zone. 制御区域は、一実施形態では、流路の末端に非結合標識された結合試薬を捕捉し、又はその存在を検出するための手段を有することができる。 Control zone, in one embodiment, capture the unbound labeled binding reagent at the end of the channel, or may have means for detecting the presence thereof. 例えば、第1結合試薬(例えば、標識免疫試薬)がマウスモノクローナル抗体である場合、制御区域は、固定化抗マウスIgGを含むことができる。 For example, if the first binding reagent (e.g., labeled immunoreagent) is a mouse monoclonal antibody, the control zone can comprise an immobilized anti-mouse IgG. 他の試料流量制御も当技術分野で公知であり、本発明によって使用され得る。 Other sample flow control are known in the art, it may be used by the present invention.

[049] 検査デバイスは、試料の流れの推進に役立つように、側方流動膜の下流に、かつそれと流体連通して吸収パッドをさらに備えることができる。 [049] test device, to help promote the sample flow, it may further comprise an absorbent pad downstream of the lateral flow membrane, and therewith in fluid communication. 側方流動アッセイ用のこのようなコンポーネントも周知である。 Such component for lateral flow assays are also well known.

[050] さらになお、デバイスに加える前に試料と結合剤を予め混合するために、追加のコンポーネントを使用することができる。 [050] Still further, in order to pre-mixing the binding agent with the sample prior to addition to the device, it is possible to use additional components. この目的のための例示的なコンポーネントは、WO2007/098184、WO2009/014787、及びWO2010/132453に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 Exemplary components for this purpose, WO2007 / 098184, are described in WO2009 / 014787, and WO2010 / 132 453, each of which are incorporated herein by reference in its entirety.

膜基板 Film substrate
[051] 側方流動基板は一般に、例えば、キャピラリー作用によって流体試料の輸送を可能にする多孔質、吸収性、及び/又は吸水性の基板又は膜である。 [051] lateral flow substrate is generally, for example, porous to allow transport of fluid sample by capillary action, is absorptive, and / or the water absorbent substrate or film. 様々な材料を側方流動基板として使用することができ、このような材料として、有機又は無機ポリマー、並びに天然及び合成ポリマーが挙げられ、限定されないが、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロース、他のセルロース誘導体、デキストラン、デキストラン誘導体及びデキストランコポリマー、他の多糖、ガラス、シリカゲル、ゼラチン、ポリビニルピロリドン(PVP)、レーヨン、ナイロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリアミド、ビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリスチレン及びポリスチレンコポリマー、ジビニルベンゼンなどで架橋されたポリスチレン、アクリル樹脂、アクリレート及びアクリル酸、アクリルアミド、ポリアクリルアミ Can be used various materials as lateral flow substrate, as such a material, organic or inorganic polymers, as well as include natural and synthetic polymers, but are not limited to, agarose, cellulose, nitrocellulose, cellulose acetate, other cellulose derivatives, dextran, dextran derivatives and dextran copolymers, other polysaccharides, glass, silica gel, gelatin, polyvinylpyrrolidone (PVP), rayon, nylon, polyethylene, polypropylene, polybutylene, polycarbonates, polyesters, polyamides, vinyl polymers, polyvinyl alcohol, polystyrene and polystyrene copolymers, polystyrene cross-linked with divinylbenzene, acrylic resins, acrylates and acrylic acid, acrylamide, polyacrylamide 、ポリアクリルアミドブレンド、ビニル及びアクリルアミドのコポリマー、メタクリレート、メタクリレート誘導体及びこれらのコポリマーが含まれる。 , Polyacrylamide blends, copolymers of vinyl and acrylamide, methacrylates, methacrylates derivatives and copolymers thereof are included.

[052] 一実施形態では、側方流動基板は、ニトロセルロース、例えば、セルロースの任意の硝酸エステルを含む。 [052] In one embodiment, the lateral flow substrate comprises nitrocellulose, for example, any nitrate ester of cellulose. ある特定の実施形態では、側方流動基板は、セルロースのカルボン酸エステルと組み合わせたニトロセルロースを含む。 In certain embodiments, the lateral flow substrate comprises nitrocellulose in combination with carboxylic acid esters of cellulose.

[053] 基板(例えば、ニトロセルロース基板)の孔サイズは変動し得る。 [053] substrate (e.g., nitrocellulose substrate) pore size may vary. 例えば、孔サイズは、約1μm〜約20μm、約8μm〜約15μm、又は約10μm〜約12μmであり得る。 For example, pore size, about 1μm~ about 20 [mu] m, may be about 8μm~ about 15μm or about 10μm~ about 12 [mu] m,.

[054] 流路の様々なコンポーネントは、流体の流れを制御し、試薬が基板材料に拡散的に結合する能力を制御し、及び/又は残骸の濾過を制御するために、様々な基板材料及び/又は様々な孔サイズを使用することができる。 [054] The various components of the channel, to control the flow of fluid, since the reagent is to control the filtration control the ability to diffusively bound to the substrate material, and / or debris, and various substrate materials / or different pore sizes may be used.

[055] 流路のコンポーネントを、いくつかの実施形態では、遮断剤、例えば、ウシ血清アルブミン、全動物血清、カゼイン、又は脱脂粉乳などで処理することができる。 [055] The components of the flow path, in some embodiments, blocking agents, for example, can be treated bovine serum albumin, whole animal serum, casein, or skim milk and the like.

[056] 少なくとも1つの流体流路を画定する側方流動基板は、一般に水を通さない層、例えば、Mylar(登録商標)で裏打ちし、又はその上に積層することができる。 [056] at least one lateral flow substrate to define a fluid flow path generally water impervious layer, for example, can be lined with Mylar (registered trademark), or laminated thereon. しかし、いくつかの実施形態では、側方流動基板は、自立している場合がある。 However, in some embodiments, the lateral flow substrate may free-standing. 使用される場合、裏打ちは一般に、接着剤によってマトリックスに固定される。 When used, the backing is generally fastened to the matrix by an adhesive. 水を通さない裏打ちは一般に、薄い厚さの基板に使用される。 Lining impervious water are generally used for the substrate of a thin thickness.

流体流路 Fluid flow path
[057] 一般に、流体流路は、少なくとも1つの試料が加えられる区域、及び少なくとも1つの側方流動基板によって画定される。 [057] In general, the fluid flow path is defined by at least one area where the sample is applied, and at least one lateral flow substrate. 複数の側方流動基板が使用される場合、複数の側方流動基板は、同じ又は異なる試料が加えられる区域と流体連通している場合がある。 When multiple lateral flow substrate is used, a plurality of lateral flow substrate may the same or different samples are passed through the area in fluid communication applied. 試薬区域又はパッドは、任意選択である。 Reagent zone or pad is optional.

[058] 一実施形態では、検査デバイスは、単一の試料が加えられる区域と流体連通した1つの側方流動膜を含む(図1)。 [058] In one embodiment, the test device comprises one of the lateral flow membrane which single sample through zones in fluid communication applied (Figure 1). しかし、本発明は、このようなアーキテクチャに限定されない。 However, the present invention is not limited to such an architecture. 例えば、別の実施形態では、検査デバイスは、図2に示した1つの側方流動膜を含む。 For example, in another embodiment, the test device comprises one of the lateral flow membrane shown in FIG. この実施形態では、側方流動膜は、不透過性バリアが膜を分割して2つの並列の小区分にするので、2つの流体流路を可能にする。 In this embodiment, the lateral flow membrane, impermeable barrier since the subsection of parallel two by dividing the film, to allow the two fluid flow paths.

[059] 別の実施形態では、検査デバイスは、それぞれが別々の流体流路を画定する、図3に示したような2つの側方流動膜を含む。 [059] In another embodiment, the test device, each of which defines a separate fluid flow path comprises two lateral flow membrane, as shown in FIG. この実施形態では、2つの独立したフローストリップが同じ検査デバイス上で並行している。 In this embodiment, two separate flow strips are in parallel on the same test device. 各側方流動膜は、試薬パッド(例えば、免疫試薬を収容している)と流体連通しており、試薬パッドは、単一の試料が加えられる区域の下流にあり、それと流体連通している。 Each lateral flow membrane, the reagent pad (e.g., accommodated to have immune reagent) in fluid and fluid communication, the reagent pad, located downstream of the area where a single sample is added thereto in fluid communication . 一実施形態では、検査デバイスアーキテクチャは、試薬区域がまったく存在しないことを除いて、図3のものと同様であり、各側方流動膜は、試料が加えられる区域と直接流体連通している。 In one embodiment, the inspection device architecture, except that the reagent area does not exist at all, are the same as those of FIG. 3, the lateral flow membrane, the sample is passed through the area in direct fluid communication is added.

[060] それぞれが別々の独立した側方流動基板と流体連通した、少なくとも2つの別々の試料が加えられる区域も使用することができ、この場合、各側方流動基板は、別々の流体流路を画定する。 [060] respectively through separate and independent lateral flow substrate in fluid communication, it can also be used zones at least two separate samples are added, in this case, the lateral flow substrate, separate fluid flow path to define a. 別々の流体流路は、別々の試薬区域又はパッドをさらに含むことができる。 Separate fluid flow path may further comprise a separate reagent zone or pad. 検査デバイスは、それぞれが別々の側方流動基板上の別々の流体流路に対応し、又は同じ側方流動基板上の別々の流体流路(例えば、1つ若しくは複数の不透過性バリアによって複数の小区分に分割された側方流動膜)に対応する、追加の試料が加えられる区域(例えば、3つ、4つ、又は5つの試料が加えられる区域)を有することができる。 Inspection devices each of which corresponds to a separate fluid flow path separate lateral flow substrate, or separate fluid flow paths of the same lateral flow substrate (e.g., plural by one or more impermeable barrier the corresponding subsection in the divided lateral flow membrane), areas where additional sample is added (e.g., three, four, or five samples can have an area) applied. 使用中に、測定体積の流体試料が各試料が加えられる区域にアプライされる。 During use, the fluid sample measuring volume each sample is applied to the area to be added.

[061] 図4に示したように、試料が加えられる区域を適所配置することによって、並列の独立した側方流動基板も、単一の検査デバイス内に使用することができる。 [061] As shown in FIG. 4, by place placing area sample is applied, parallel independent lateral flow substrate may also be used in a single test device. この実施形態では、検査デバイスは、双方向性の流体の流れを使用する。 In this embodiment, the inspection device uses a bidirectional flow of fluid. 同様に、複数の側方流動膜を、単一の試料が加えられる区域の周りに径方向に配列することができる(図5)。 Similarly, it is possible to arrange the plurality of the lateral flow membrane, radially around the area where a single sample is added (Fig. 5). この実施形態では、各側方流動膜は、1つの流体流路を画定し、1つ若しくは複数の不透過性バリアを使用することによって複数の流体流路を画定する。 In this embodiment, the lateral flow membrane defining a single fluid flow path, to define a plurality of fluid flow paths through the use of one or more impermeable barriers.

[062] 別の実施形態では、検査デバイスは、複数の側方流動基板に対して1つの試料が加えられる区域を含む。 [062] In another embodiment, the inspection device includes an area in which one sample is applied to the plurality of lateral flow substrate. この実施形態では、試料は、検査デバイスに1回アプライされ、試料が加えられる区域は、側方流動基板又は流体流路のそれぞれと流体連通している(図3、図4、図5)。 In this embodiment, the sample is applied once to the test device, the area where the sample is applied is in fluid communication with each of the lateral flow substrate or fluid flow path (3, 4, 5).

[063] ある特定の実施形態では、デバイスは、2回又は3回の検査を可能にする設計を有し、その結果、検査は、増大中の分析物濃度を監視するために、2〜10時間の過程にわたって行われる場合がある。 [063] In certain embodiments, the device has a design that allows the inspection of two or three times, as a result, testing is to monitor analyte concentrations in increased 2-10 It might be carried out over the course of time.

捕捉区域 Capture zone
[064] 本明細書に記載のデバイス及び方法は、分析物の2つの閾値レベルを判別するために少なくとも2つの捕捉区域を使用する。 [064] Devices and methods described herein, using at least two capture zone to determine two threshold levels of analytes. この少なくとも2つの捕捉区域は、単一の流路上に連続的に配列することができ、又は別々の流路内にあってもよく、それぞれは、異なる検出可能な閾値濃度の分析物を捕捉するように設計されている。 The at least two capture zone may be continuously arranged in the single flow path, or may be in separate flow path, respectively, to capture the analyte different detectable threshold concentration It is designed to.

[065] 複数捕捉区域の一実施形態を図6に提示する。 [065] One embodiment of a multiple capture zone are presented in Figure 6. 図6は、支持マトリックスを有する側方流動膜上の流体流路の側面図を示す。 Figure 6 shows a side view of a fluid flow path on the lateral flow membrane having a support matrix. 側方流動膜は、2つの連続的に配向した捕捉区域を含み、この場合、1つの捕捉区域は、高親和性捕捉リガンド(例えば、抗体)を使用し、一方、第2捕捉区域は、異なる低親和性捕捉リガンド(例えば、抗体)を使用する。 Lateral flow membrane comprises two continuously oriented capture zone, in this case, one capture zone, using a high-affinity capture ligand (eg, an antibody), while the second capture zone, a different using the low-affinity capture ligand (eg, an antibody). 親和性の差異により、同じ検査デバイス上で異なる量の同じ分析物が捕捉され、それによって異なる閾値レベルで分析物を検出することが可能になる。 The difference in affinity, the same analyte with different amounts on the same test device is captured, it is possible to detect the analyte by at different threshold levels it. 図6に示したように、異なる親和性を有する抗体(これは、第2の免疫試薬に対応する)を、それぞれの捕捉区域で固定化することができる。 As shown in FIG. 6, (which corresponds to the second immunoreagent) antibodies with different affinity, it can be immobilized in each capture zone. 図6に提示した実施形態は、1つ又は複数の側方流動膜上に存在する複数の流体流路を有する検査デバイスでも実施することができる。 Embodiment presented in Figure 6 may be implemented in the testing device having a plurality of fluid flow paths are present on one or more of the lateral flow membrane. 例えば、一実施形態では、1つの「高親和性」捕捉区域が1つの流体流路内に存在し、「低親和性」捕捉区域が第2の流体流路内に存在する。 For example, in one embodiment, one of the "high affinity" capture zone is present in one fluid flow path, the "low affinity" capture zone is present in the second fluid flow path. この設計により、下流の第2捕捉区域での結果をゆがめ得る、第1捕捉区域での分析物の枯渇の潜在性が回避される。 This design may distort the results of the downstream of the second capture zone, potential depletion of analyte in the first capture zone is avoided. 流体流路は、不透過性バリアによって単一の基板上に任意選択により形成されており、及び/又は別々の側方流動基板上に存在し得る。 Fluid flow path, may be present in an impermeable barrier is formed optionally on a single substrate by, and / or separate lateral flow substrate.

[066] 高親和性抗体を有する捕捉区域は、より多い量の分析物を捕捉及び保持し、したがって、低親和性捕捉抗体を有する捕捉区域より、低い分析物濃度で可視的な信号を示す。 [066] capture zone having a high affinity antibody, captures and holds a greater amount of analyte, therefore, than the capture zone having a low affinity capture antibody, shows a visible signal at low analyte concentrations. この設計では、捕捉区域の数は、2つ超の抗体親和性を使用することによって、2つ超に容易に拡張することができる。 In this design, the number of capture zone, by using two than antibody affinity, can be readily extended to two than. 抗体は、直接に、あるいは結合剤、例えば、BSA、若しくはIgG、若しくはアミノデキストラン、又は抗体がコンジュゲートされた他のタンパク質分子などによって固着させることができる。 Antibodies either directly or binding agents, for example, BSA, or IgG, or aminodextran, or antibodies can be affixed, such as by other protein molecule conjugated. このような結合剤は、結合剤上の抗体の密度が増大するため、又は結合剤がマトリックス材料に対してより強い相互作用を有することができるため、又は連結により「つなぎ鎖」が形成され、立体障害の低減によって抗体のより大きい結合活性又は結合能力が可能になるため、信号の増幅に役立ち得る。 Such binders, the density of antibody on the binding agent is increased, or because the binder can have a stronger interaction with respect to the matrix material, or "tether" is formed by the connection, since allowing greater binding activity or binding ability of the antibodies by reducing steric hindrance, it may serve to amplify the signal.

[067] 他の実施形態では、第2の免疫試薬の少なくとも1種は、その捕捉区域で固定化されないが、第2の免疫試薬を特定の捕捉区域に向ける結合部分にコンジュゲートされる。 [067] In another embodiment, the at least one second immunological reagents is not immobilized at the capture zone, it is conjugated to the binding moiety to direct the second immunization reagent specific capture zone. このような結合相互作用は、試料が流れる間に高親和性の免疫試薬と低親和性の免疫試薬を「分類する」ように作用し、このような結合部分には、ビオチン/ストレプトアビジン又は相補オリゴヌクレオチド(若しくはこれらの誘導体)が含まれる。 Such binding interactions, high affinity immunoreagents and low affinity immune reagents while the sample flows act to "classify", such a binding moiety, biotin / streptavidin or complementary It includes oligonucleotides (or derivatives thereof).

[068] 例えば、図7に例示したように、低閾値捕捉区域内で固定化される捕捉試薬は、ストレプトアビジンであり、これは、ビオチン結合免疫試薬(例えば、第2の結合部分)を捕捉する。 [068] For example, as illustrated in FIG. 7, the capture reagent is immobilized at a low threshold capture zone is streptavidin, which captures the biotin-binding immunological reagents (e.g., a second coupling portion) to. 低親和性抗体は、高閾値捕捉区域で直接固定化され得る。 Low-affinity antibodies can be directly immobilized with high threshold capture zone. 図7に例示したストレプトアビジン/ビオチン相互作用は、本明細書に記載の別の結合対、例えば、pRNAなどの誘導体を含む相補オリゴヌクレオチド、及び本明細書に記載の他のものなどと任意選択により置換することができる。 Illustrated streptavidin / biotin interaction in FIG. 7, another binding pair as described herein, for example, complementary oligonucleotides containing derivatives such as pRNA, and optionally the like others described herein it can be replaced by. これらの捕捉区域は、1つの流体流路上で連続的に、又は別々の流体流路上でさらに配向させることができる。 These capture zone are continuously in one fluid flow channel, or can be further oriented at different fluid flow path.

[069] 捕捉区域は、様々な特異的結合相互作用を使用して、分析物を含有する検出可能な免疫複合体を捕捉又は固定化することができ、これらの相互作用としては、抗原/抗体、ビオチン/アビジン、炭水化物/レクチン、相補オリゴヌクレオチド(ピラノシルRNA若しくはDNA、又は他のオリゴヌクレオチド誘導体を含む)、ホルモン/ホルモン受容体を含む受容体/リガンド分子、酵素/補助因子、又は特定のタンパク質相互作用、及び金属/キレーターがある。 [069] capture zone, using a variety of specific binding interactions, analyte can be captured or immobilized detectable immune complexes containing, as these interactions, antigen / antibody (including pyranosyl RNA or DNA, or other oligonucleotide derivatives) biotin / avidin, carbohydrates / lectins, complementary oligonucleotide, receptor / ligand molecule comprising a hormone / hormone receptor, enzyme / cofactor, or specific protein interaction, and there is a metal / chelator.

[070] ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、1又は複数の捕捉区域で側方流動基板の表面に直接又は間接的に(例えば、化学リンカーによって)結合しており、相補オリゴヌクレオチドは、免疫複合体を捕捉するための免疫試薬にコンジュゲートされている(図8を参照のこと)。 [070] In certain embodiments, the oligonucleotide is directly or indirectly on the side surface of the fluidized substrate at one or more capture zone (e.g., by a chemical linker) is attached, the complementary oligonucleotides, is conjugated to immunological reagents for capturing the immune complexes (see Figure 8). このとき異なる捕捉配列は、様々な分析物親和性を有する異なる抗体試薬を判別するための基準を提供する。 Different capture sequence at this time, to provide a reference for determining the different antibody reagents having various analytes affinity.

[071] いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、DNA、RNA、DNA−RNAハイブリッド、ロックされた核酸を含むオリゴヌクレオチド、ピラノシル−RNA(pRNA)、ピラノシル−DNA(pDNA)、2'−O−メチルオリゴヌクレオチド、及び5'−5'反転オリゴヌクレオチド(inverted oligonucleotide)から選択される。 [071] In some embodiments, oligonucleotide, DNA, RNA, DNA-RNA hybrids, locked oligonucleotides containing nucleic acid, pyranosyl-RNA (pRNA), pyranosyl -DNA (pDNA), 2'-O - is selected from methyl oligonucleotides, and 5'-5 'inversion oligonucleotide (inverted oligonucleotide). オリゴヌクレオチドコンジュゲートを捕捉するためのオリゴヌクレオチド剤の使用は、米国特許出願公開第2005/0208576号に記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれている。 Use of an oligonucleotide agent to capture the oligonucleotide conjugates, are described in U.S. Patent Application Publication No. 2005/0208576, which is incorporated herein by reference.

[072] 相補オリゴヌクレオチドは、同じ又は同様のハイブリダイゼーション効率を有し、高親和性抗体及び低親和性抗体にコンジュゲート又は連結されて、それによって分析物の異なる閾値レベルを判別するための基準を提供することができる。 [072] Complementary oligonucleotides have the same or similar hybridization efficiency, high-affinity antibodies and low affinity antibody is conjugated or linked, criteria for determining the threshold levels of different analytes by it it is possible to provide a. 図8を参照のこと。 See Figure 8. より高い親和性の抗体は、分析物とより多くの複合体を形成するので、より高い親和性の抗体が結合した区域は、より多い量の分析物を捕捉及び保持することになり、したがって、より低い親和性の抗体が捕捉されている区域より、低い試料分析物濃度で可視的な信号を示す。 Higher affinity antibodies, because it forms a more complex with the analyte, higher areas affinity antibody bound will become possible to capture and hold a greater amount of analyte, therefore, from zone lower affinity of the antibody is captured, it shows a visible signal at low sample analyte concentration.

[073] あるいは、同じ特異的結合対部分の濃度を各捕捉区域内で変更して(例えば固定化して)、異なるレベルの標的分析物の捕捉を可能にすることができる。 [073] Alternatively, the concentration of the same specific binding pair moiety with modification within the capture zone (e.g., immobilized), may allow the capture of different levels of target analytes. したがって、相対的により高い濃度の固定化試薬を有する区域は、より多い分析物を捕捉し、より低い分析物濃度で陽性信号を生成する。 Therefore, areas with immobilized reagent relatively higher concentrations captures a greater analyte to generate a positive signal at lower analyte concentrations. 例えば、0.1mg/mL〜約10mg/mL、又は0.1〜5mg/mLの濃度で捕捉区域にストレプトアビジンをアプライし、それによって、分析物の存在下で形成されるビオチンがコンジュゲート及び標識された免疫複合体の異なる検出可能な閾値を有する異なる捕捉区域を形成することができる。 For example, 0.1 mg / mL to about 10 mg / mL, or streptavidin was applied to the concentration in the capture zone of 0.1 to 5 mg / mL, whereby biotin is formed in the presence of the analyte and conjugate it is possible to form a different capture zones with different detectable threshold of labeled immune complexes.

[074] 一実施形態では、検査デバイスは、連続捕捉区域を含む単一の流体流路を有する単一の側方流動膜を含む(例えば、図7及び図8を参照のこと)。 [074] In one embodiment, the test device includes a single lateral flow membrane having a single fluid flow path including a continuous capture zone (e.g., see FIGS. 7 and 8). この実施形態では、第1捕捉区域中の高親和性捕捉結合の場合、特に、分析物が検査試料中に低濃度で存在するとき、試料中の分析物のかなりの部分が第1捕捉区域上で捕捉されることが可能である。 In this embodiment, the case of high-affinity capture binding in the first capture zone, in particular, when the analyte is present at low concentrations in the test sample, a significant portion of the analyte in the sample first capture zone on in is capable of being captured. 例えば、側方流動イムノアッセイでの一般的な捕捉区域は、1mm×5mmの捕捉区域は、捕捉IgG約1μg、又は約6ピコモルを保持することができる(Brown(2009). Antibodies: Key to a Robust Lateral Flow Immunoassay. In Lateral Flow Immunoassay、Wong及びTse編、Humana Press、New York、60頁)。 For example, typical capture zone in lateral flow immunoassay, the capture area of ​​1 mm × 5 mm can hold captured IgG about 1 [mu] g, or about 6 picomolar (Brown (2009) Antibodies:. Key to a Robust Lateral Flow Immunoassay. In Lateral Flow Immunoassay, Wong and Tse eds, Humana Press, New York, 60 pp.). したがって、0.04ng/mLの濃度のcTnI(1.5×10 −16モルの分析物)を含む試料100μLは、捕捉分子が10 倍超過剰に存在するので、1つの捕捉区域によって完全に枯渇され得る。 Thus, sample 100μL containing 0.04 ng / mL at a concentration of cTnI (1.5 × 10 -16 moles of analyte), because the capture molecule is present in 104 times super excess, entirely by a single capture zone It may be depleted.

[075] 同様に、NT−proBNPについて、単一の検査デバイス上の複数のカットオフは、臨床的判断ポイントが約125pg/mL及び約450pg/mLであるので(これらはそれぞれ、年齢75歳未満及び75歳以上の個人について推奨されているCHF判定閾値である)、有用であるはずである。 [075] Similarly, NT-proBNP, a plurality of cut-off on a single test device, since clinical decision point is about 125 pg / mL and about 450 pg / mL (each of which is less than 75 years of age and for individuals over 75 years of age is recommended to have CHF determination threshold), it should be useful. これらの濃度は、試料100μL中でそれぞれ、1.5×10 −15及び5.4×10 −15モルの分析物に対応する。 These concentrations, respectively in the sample 100 [mu] L, corresponding to 1.5 × 10 -15 and 5.4 × 10 -15 moles of analyte. 試料中の分析物は、10 −12モルの程度の分析物分子を保持する捕捉区域によって影響されるはずでる。 Analyte in the sample, exits should be affected by the capture zone for retaining analyte molecules on the order of 10 -12 moles. したがって、この分析物について、側方流動デバイス上の分析物の枯渇の主要因とならない連続捕捉区域は、実用的でないはずである。 Thus, for this analyte, continuous capture zone which is not the main cause of depletion of the analyte in the lateral flow device should not practical.

[076] ある特定の実施形態では、デバイスアーキテクチャは、分析物枯渇現象を活用する。 [076] In certain embodiments, the device architecture, to take advantage of analyte depletion phenomenon. 側方流動検査デバイスは、一実施形態では、検査膜上に、順次的なライン又は領域として複数の捕捉区域を層形成し、又は堆積した捕捉部分で形成される連続的な範囲として捕捉区域を層形成することによって形成される。 Lateral flow test device, in one embodiment, on the test film, a plurality of capture zones and layers formed as sequential line or area, or the deposited capture zone as a continuous range formed by the capture moiety It is formed by layering. 分析物及び試薬が、反応し、デバイスに沿って移動し、捕捉分子に結合される際に、分析物が移動中の溶液から取り出される。 Analyte and reagent, reaction, and moves along the device, when it is bound to the capture molecule, the analyte is removed from the solution in the mobile. このとき、検出可能な捕捉領域の数、又は捕捉領域の長さは、試料中に本来存在する分析物分子の量に直接関係し、それによってこれらの実施形態は、デバイスの定量的な範囲を拡張することができる。 At this time, the number of detectable captured area, or the length of the capture zone, is directly related to the amount of analyte molecules originally present in the sample, whereby these embodiments, the quantitative range of the device it can be extended. 本実施形態によるデバイスは、分析物レベルを検出する計器のように作用し、アッセイの範囲を拡張するのに特に有用である。 Device according to the present embodiment, detection of an analyte level acts like a meter is particularly useful to extend the range of the assay.

[077] 連続的な捕捉範囲の場合では、可視的な標識を有する捕捉区域の部分は、試料中に本来存在する分析物の量に直接関係することになる。 [077] In the case of a continuous capture range, the part of the capture zone having a visible label will be directly related to the amount of analyte originally present in the sample. このようにして、分析物の量を、半定量的な温度計のような様式で測定することができる(図1を参照のこと)。 In this manner, the amount of analyte can be measured in such a way that the semi-quantitative thermometer (see Figure 1).

標識 Mark
[078] 少なくとも1種の免疫試薬又は結合部分は、検出可能部分(例えば、標識)を有する。 [078] at least one immune reagents or binding moiety having a detectable moiety (e.g., labeling). 例示的な標識としては、粒子状標識、例えば、金などのコロイド金属粒子、セレン若しくはテルルなどのコロイド非金属粒子、染色されたプラスチック、染色された含浸ラテックス粒子などの染色若しくは着色された粒子、有機ポリマーラテックス粒子、及びリポソームなど、ナノスフェア、着色されたビーズ、ポリマーマイクロカプセル、又は直接可視的な物質を含有する他のベシクルなどがある。 Exemplary labels include particulate labels such as colloidal metallic particles such as gold, colloidal non-metallic particles such as selenium or tellurium, dyed plastic, dyed or colored particles such as dyed impregnated latex particles, the organic polymer latex particles, and such as liposomes, nanospheres, colored beads, and the like other vesicles containing polymer microcapsules or directly visible substances.

[079] 標識を(例えば、肉眼で)直接検出しないアッセイについては、蛍光標識、例えば、フルオレセイン、ユウロピウム、シアニン、又はアレクサ色素など、化学発光標識、蛍光エネルギー移動標識、蛍光量子ドット、常磁性標識、電流測定(直流印加電圧若しくは振動印加電圧)又はカーボンナノチューブ検出法を使用する電気化学的標識を使用することができる。 [079] labeled (e.g., naked eye) for the assay does not detect directly, fluorescent labels such as fluorescein, europium, cyanine, or Alexa dyes, such as chemiluminescent labels, fluorescent energy transfer labels, fluorescent quantum dots, paramagnetic label , it can be used electrochemical labels that use current measurement (applied DC voltage or oscillating voltage applied) or carbon nanotubes detection methods.

[080] 例えば、検出可能な分子には、限定されないが、フルオロフォア、並びに、例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれている、Principles of Fluorescence Spectroscopy、Joseph R. [080] For example, the detectable molecule include, but are not limited to, fluorophores, as well as, for example, in its entirety each of which is incorporated herein by reference, Principles of Fluorescence Spectroscopy, Joseph R. Lakowicz(編者)、Plenum Pub Corp、第2版(1999年7月)、及びRichard P. Lakowicz (Editor), Plenum Pub Corp, the second edition (July 1999), and Richard P. HoaglandによるMolecular Probes Handbookの第6版に記載されている当技術分野で公知の他のものが含まれる。 It includes others known in the art as described in the 6th edition of Molecular Probes Handbook by Hoagland.

[081] 直接可視的な標識には、染料含浸ラテックス、又は抗体にコンジュゲートするのに金粒子より官能性の基を有し、若しくは金より見やすい他の粒子を組み込むことが含まれる。 [081] The direct visual labels include incorporating dye impregnated latex, or antibody has a functional group of gold particles to conjugate or a legible other particles of gold. ある特定の実施形態では、銀被覆金粒子が使用され、これは、信号を1桁又は2桁の大きさで増強することができる。 In certain embodiments, the silver-coated gold particles are used, which can enhance the signal by one digit or two orders of magnitude. 比色標識として量子ドット又はナノスフェアを使用しても、信号を増強するであろう。 Be used quantum dots or nanospheres as colorimetric labels, it will enhance the signal. より大きい金粒子(例えば、標準的な直径40nmより大きい粒子)を使用しても、感度を増強することができる。 Even when using larger gold particles (e.g., a standard diameter 40nm larger particles), it is possible to enhance the sensitivity.

[082] 標識担持特異的結合対部分は、捕捉/検出区域の上流の側方流動膜に拡散的に結合され得る。 [082] labeled supported specific binding pair moiety can be diffusively bound to the upstream of the lateral flow membrane capture / detection zone. これらの実施形態では、試料が側方流動膜上の流体流路に沿って移動する際、試料は、標識された1又は複数の特異的結合対部分に遭遇し、試料中に存在する場合、分析物は、標識担持特異的結合対部分に結合する。 In these embodiments, when the sample is moved along the fluid flow path on the lateral flow membrane, the sample, if encountered labeled 1 or more specific binding pair moiety present in the sample, analyte binds to a label bearing a specific binding pair moiety. 分析物−特異的結合対部分−標識複合体は、捕捉区域へとさらに移動し、捕捉結合対部分に結合する。 Analyte - specific binding pair moiety - labeled complex is further moved to the capture zone and bind to the capture binding pair moiety. 次いで過剰の標識を洗い流すことができる。 It can then be washed away excess labeled.

[083] 本発明は、上述したように、1つの分析物の複数のレベル、複数の分析物、又は複数の分析物の複数のレベルを検出するためのデバイスを提供する。 [083] The present invention, as described above, a plurality of levels of one analyte, provides a device for detecting a plurality of levels of a plurality of analytes, the analyte or analytes. 検査分析物の存在を検出するために、分析物は、可視化することができるように標識されていなければならない。 To detect the presence of the test analyte, the analyte must be labeled such that it can be visualized. 可視化は、外部リーダー機器を使用して、又は使用しないで行うことができる。 Visualization can be carried out without using an external reader device, or use.

[084] ある特定の実施形態では、デバイスは、外部リーダーを使用して客観的な結果を提供する。 [084] In certain embodiments, the device provides an objective results using external reader. リーダーは、様々な実施形態では、表示された、印刷可能な、又はダウンロード可能な結果を提供することができる。 Leader, in various embodiments, can be provided that is displayed, printable or downloadable results. 外部リーダーを使用すると、蛍光標識などのより大きい感度の標識を使用することができるように有利となり得る。 Using external reader may be advantageous to be able to use the label of a larger sensitivity such as a fluorescent label.

[085] リーダーは、緊急行動を要求する特定の結果の際に、健康管理若しくは救急健康管理の専門家に自動的に通知するための通信能力(例えば、インターネット、ケーブル、無線、若しくはGSMなどを介した)の選択肢をさらに提供し、又は検査の記録を保管するために、施設の健康記録に接続することができる。 [085] leader, at the time of the specific results that require emergency action, health care or emergency health management communication ability to automatically notify experts (for example, the Internet, cable, wireless, or GSM, etc. providing choices through a) further or to keep a record of the examination may be connected to the health records of facilities. リーダーは、詳細な患者履歴のために、オペレーターのID及び患者のID、並びに検査結果の日時を(例えば、英数字入力又は自動バーコード読み取りによって)取得するための様々なメモリーの選択肢をさらに提供する。 Reader, for detailed patient history, further provides operator ID and patient ID, and the date and time of the test results (e.g., an alphanumeric input or by automatic bar code reading) the various memory options to get to.

[086] 本発明を、以下の例示的な実施例を参照することによってさらに例示する。 [086] The invention is further illustrated by reference to the following illustrative examples.

実施例1 − 心筋トロポニンIの存在を検出するための2レベル検査デバイスの評価 Example 1 - Evaluation of 2-level testing device for detecting the presence of cardiac troponin I
[087] 4つの連続捕捉区域を有する側方流動検査デバイスにおいて、cTnI10ng/mLを含む試料をアプライした。 [087] In a lateral flow testing device with four consecutive capture zone, were applied to samples containing cTnI10ng / mL. 分析物の半分超を、第1ラインによって枯渇させた(以下の図9及び表1を参照のこと)。 Than half of analyte were depleted by the first line (the following in reference to FIG. 9 and Table 1).


実施例2 − 心筋トロポニンIの存在を検出するための2レベル検査デバイスの評価 Example 2 - Evaluation of the 2-level testing device for detecting the presence of cardiac troponin I

[088] 以下の試験の目的は、例示的なデバイスが定性的/半定量的様式で心筋トロポニンI(cTnI)の2つの濃度を区別する能力を実証することであった。 [088] The purpose of the following study was to exemplary devices demonstrate the ability to distinguish two concentrations of cardiac troponin I (cTnI) in a qualitative / semiquantitative manner.

試薬 reagent
[089]着色された微小球に付加されたマウスモノクローナル抗−cTnI抗体、約0.02%。 [089] colored microspheres that are added to the mouse monoclonal anti -cTnI antibody, about 0.02%.

[090] ビオチンにコンジュゲートしたウサギポリクローナル抗cTnI抗体、約10μg/mL。 [090] Rabbit polyclonal anti-cTnI antibody conjugated to biotin, about 10 [mu] g / mL.

[091] 固定化ストレプトアビジン−担体複合体(SA)を有する側方流動膜。 [091] immobilized streptavidin - lateral flow membrane having a carrier complex (SA). 低感度ストリップを、膜にSA約0.5mg/mLを加えることによって調製し、高感度ストリップを、SA約2mg/mLを用いて調製した。 The low sensitivity strips were prepared by adding about 0.5 mg / mL SA membrane, sensitive strips was prepared using the SA about 2 mg / mL.

検査した試料 Test samples
[092] アッセイによって検査した試料は、(1)プールした正常なLi−ヘパリンヒト血漿(NHP)、及び(2)固定濃度(市販のcTnIイムノアッセイによって確認された濃度)で、NHP中で希釈した組換えcTnIを有するNHPであった。 [092] samples were tested by the assay is (1) in pooled normal Li- heparin human plasma (NHP), and (2) a fixed concentration (concentration checked by a commercial cTnI immunoassays), diluted in NHP It was NHP with a recombinant cTnI.

検査デバイス及びアッセイ Test devices and assay
[093] 検査デバイスは、1つの高感度側方流動膜(「ストリップ」)及び1つの低感度側方流動膜を備える。 [093] test device comprises one high-sensitivity lateral flow membrane ( "strips") and one low-sensitivity lateral flow membrane. 図3に示したデバイスと同様に、膜を互いに並行に配置する。 Similar to the device shown in Figure 3, arranged parallel to one another film. 1つが低感度であり、1つが高感度である2つの側方流動膜を、互いに並列に単一のデバイス内で対にする。 One is a low sensitivity, one is two lateral flow membrane which is sensitive, is paired with a single device in parallel with each other. デバイスの試料アプリケーションセクションは、試料が両方の膜に向かって自由に流れることを可能にする。 Sample application section of the device is permitted to flow freely towards the membrane of both samples. 側方流動膜同士間に空間があるので、検査デバイスは不透過性バリアを含まない。 Since there is a space between the lateral flow membrane together, the testing device does not include an impermeable barrier.

[094] それぞれ三つ組で3つのセットの試料を検査した−(1)ブランクのNHP(すなわち、組換えcTnIなし)、(2)約50pg/mLの組換えcTnIを有するNHP、及び(3)約500pg/mLの組換えcTnIを有するNHP。 [094] were each examined sample of three sets in triplicate - (1) blank NHP (i.e., no recombinant cTnI), (2) NHP with recombinant cTnI about 50 pg / mL, and (3) about NHP with recombinant cTnI of 500 pg / mL.

[095] 試料を、検査デバイス1つ当たり約240μLでアプライし、周囲条件で約15分間インキュベートした。 [095] The sample was applied at about 240μL per test device one, and incubated for about 15 minutes at ambient conditions. 次いで各検査デバイスを、視覚的に読み取り、約550nm(例えば、520〜550nm)で、ポータブル反射率計で読み取った。 The then each test device, read visually, at about 550 nm (e.g., 520~550Nm), read by the portable reflectometer.

結果 result
[096] 収集したデータの例を表2及び図10に示す。 [096] An example of the data collected are shown in Table 2 and FIG. 10. これらの結果は、2レベル検査デバイス設計により、高感度ストリップのみで、低濃度、例えば、cTnI/mLの分析物約50pgを検出し、両ストリップで、高濃度、例えば、分析物約500pg/mLを検出することが可能になることを実証する。 These results, the 2-level inspection device design, only sensitive strip, a low concentration, for example, to detect the analyte about 50pg of cTnI / mL, both strips, high density, for example, the analyte from about 500 pg / mL It demonstrates that it is possible to detect.

[097] 低感度ストリップでの信号の平均値の3標準偏差(SD)範囲内の信号分布の分析により、低濃度で分析物が検出されなかったことが示された。 [097] Analysis of the signal distribution in 3 standard deviations (SD) range of the average value of the signal at low sensitivity strip, the analyte at low concentrations showed that was not detected.

[098] 本願全体にわたって引用されている特許、特許出願、刊行物、製品説明書、及びプロトコールは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。 [098] patents cited throughout this application, patent applications, publications, product descriptions, and protocols, the entirety of which is incorporated herein by reference.

Claims (43)

  1. 患者試料中の心筋傷害のマーカーの少なくとも2つの閾値レベルを検出するためのデバイスであって、 A device for detecting at least two threshold levels of markers of myocardial injury in a patient sample,
    試料が加えられる区域と、 A zone where the sample is added,
    1つ又は複数の側方流動基板によって形成され、前記試料が加えられる区域と流体連通する1つ又は複数の流体流路と、 Formed by one or more lateral flow substrate, one or a plurality of fluid flow paths from the specimen to the area in fluid communication with applied,
    単一の流路上に直列にある、又は別々の流路内にある、第1マーカー捕捉区域及び第2マーカー捕捉区域と、 And in series, or in separate flow path, the first marker capture zone and the second marker capture zone into a single flow path,
    を備え、 Equipped with a,
    前記第1捕捉区域は、第1の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、マーカーを検出可能に捕捉するよう構成されており、前記第2捕捉区域は、第2の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、前記マーカーを検出可能に捕捉するように構成されている、デバイス。 Wherein the first capture zone, when present in the sample at a first threshold level or above, is configured to capture detectably marker, the second capture zone, the sample in the second threshold level or above when present, is configured to detectably capturing the marker device.
  2. 前記マーカーが心筋トロポニンである、請求項1に記載のデバイス。 It said marker is a cardiac troponin, The device of claim 1.
  3. 前記心筋トロポニンがcTnIである、請求項2に記載のデバイス。 It said cardiac troponin is cTnI, according to claim 2 devices.
  4. 前記第1の閾値レベルが、前記患者試料中において約0.04ng/mlのcTnIに対応する、請求項3に記載のデバイス。 It said first threshold level corresponds to a cTnI about 0.04 ng / ml in the patient sample in A device according to claim 3.
  5. 前記第2の閾値レベルが、前記患者試料中において約0.1ng/mlのcTnIに対応する、請求項3又は4に記載のデバイス。 It said second threshold level corresponds to a cTnI about 0.1 ng / ml in the patient sample in A device according to claim 3 or 4.
  6. 前記流体流路が、1つ又は複数の吸水性又は吸収性の膜によって形成される、請求項1から5のいずれか1項に記載のデバイス。 Wherein the fluid flow path, one or formed by a plurality of water-absorbent or absorbent film, according to any one of claims 1 to 5 device.
  7. 試料の流れの指標として、各流路内に制御区域をさらに備える、請求項1から6のいずれか1項に記載のデバイス。 As an indicator of the sample flow, further comprising a control zone in the flow path, according to any one of claims 1 to 6 device.
  8. 付加された検出可能な標識を有する第の1マーカー結合部分をさらに備える、請求項1から7のいずれか1項に記載のデバイス。 Further comprising a first one marker binding moiety having added thereto a detectable labeled A device according to any one of claims 1 7.
  9. それぞれが捕捉区域で固定化された、又は前記捕捉区域によって捕捉可能な部分を有する、少なくとも1つの第2のマーカー結合部分をさらに備える、請求項8に記載のデバイス。 Each of which is immobilized at the capture zone, or the with captured moiety by the capture zone further comprises at least one second marker binding moiety, the device according to claim 8.
  10. 前記少なくとも1つの第2の結合部分が、ストレプトアビジン−ビオチン相互作用、又は抗体−抗原相互作用によって、あるいは相補的若しくは実質的に相補的なオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって捕捉可能である、請求項9に記載のデバイス。 Wherein the at least one second binding moiety, streptavidin - biotin interaction, or antibody - by antigen interaction, or can be captured by hybridization of complementary or substantially complementary oligonucleotide, claim 9 the device according to.
  11. 前記第1及び第2の結合部分が、抗体又はその抗原結合部分である、請求項8から10のいずれか1項に記載のデバイス。 It said first and second binding moiety is an antibody or antigen binding portion thereof, according to any one of claims 8 10 device.
  12. 前記結合部分が、1又は複数の捕捉区域の上流の1又は複数の流路内で拡散的に結合している、請求項7から11のいずれか1項に記載のデバイス。 It said binding moiety is diffusively bound at the one or more flow paths upstream of the one or more capture zone, according to any one of claims 7 11 device.
  13. 前記第1捕捉区域及び前記第2捕捉区域が、並行流路又は双方向流路内にある、請求項1から12のいずれか1項に記載のデバイス。 The first capture zone and the second capturing zone, in parallel flow paths or bi-directional flow path, according to any one of claims 1 12 device.
  14. それぞれが異なるマーカー閾値レベルを検出するために構成された、3つ以上の流路を備える、請求項13に記載のデバイス。 Each of which is configured to detect different markers threshold levels comprises three or more channels, the device according to claim 13.
  15. 前記第1捕捉区域が第1の量の固定化捕捉剤を有し、前記第2捕捉区域が第2の量の前記固定化捕捉剤を有する、請求項14に記載のデバイス。 Wherein the first capture zone having a first amount of immobilized capture agents, the second capture zone has said immobilized capture agent second amount, the device according to claim 14.
  16. 前記捕捉剤が、ストレプトアビジン、ビオチン、抗体、又はポリヌクレオチドである、請求項15に記載のデバイス。 It said capture agent is streptavidin, biotin, antibodies, or polynucleotides, the device according to claim 15.
  17. 前記第1捕捉区域が、cTnIに対する第1の親和性を有する抗体を含み、前記第2cTnI捕捉区域が、cTnIに対する第2の親和性を有する抗体を含む、請求項14に記載のデバイス。 Wherein the first capture zone comprises an antibody having a first affinity for cTnI, the first 2cTnI capture zone comprises an antibody having a second affinity for cTnI, device of claim 14.
  18. 前記第1捕捉区域が、第1の配列を有する一本鎖のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド誘導体を含み、第2捕捉区域が、前記第2の配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを含み、 Wherein the first capture zone comprises an oligonucleotide or oligonucleotide derivative of the single strand having a first sequence, a second capture zone comprises a single-stranded oligonucleotide or oligonucleotide having the second sequence,
    前記第2の結合部分が、高親和性及び低親和の結合部分をそれぞれ前記第1及び第2捕捉区域に固定化するための、付加された相補オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド誘導体を有する、請求項14に記載のデバイス。 The second coupling portion has a high affinity and low affinity of binding moieties each for immobilizing the first and second capture zone, the added complementary oligonucleotides or oligonucleotide derivatives according to claim 14 the device according to.
  19. 前記第1捕捉区域が、マーカーに対する第1の親和性を有する固定化免疫試薬を含み、前記第2捕捉区域が、固定化ストレプトアビジンを含み、マーカーに対する第2の親和性を有する第2の免疫試薬が、付加されたビオチンを有する、請求項14に記載のデバイス。 Wherein the first capture zone comprises an immobilized immunological reagents having a first affinity for markers, the second capture zone comprises immobilized streptavidin, a second immunization with a second affinity for markers reagents have the added biotin device of claim 14.
  20. 前記第1及び第2捕捉区域が連続的であり、マーカー閾値が、前記連続的な捕捉区域に沿って結合している検出可能マーカーの長さによって規定され、それによってアッセイの範囲を拡張している、請求項14に記載のデバイス。 It said first and second capture zone is continuous, marker threshold, the is defined by the length of the detectable marker which is attached along the continuous capture zone, thereby to extend the range of the assay It Is a device according to claim 14.
  21. 試料中の心筋傷害のマーカーのレベルを評価するための半定量的方法であって、 A semi-quantitative method for assessing the level of markers of myocardial injury in a sample,
    請求項1から20のいずれかに記載の検査デバイスに検査試料を加える工程と、 And adding a test sample to the test device according to any of claims 1 20,
    1又は複数の捕捉区域内で、検出可能な信号の存在又は非存在を検出する工程とを含む、方法。 1 or more capture zone, and detecting the presence or absence of a detectable signal.
  22. 前記マーカーの前記第1の閾値レベルを示す検出可能な信号が、第1の判断を示唆し、前記第2の閾値レベルを示す検出可能な信号が、第2の判断を示唆する、請求項21に記載の方法。 Detectable signal indicative of the first threshold level of the marker suggests the first determination, the second detectable signal indicative of the threshold level is indicative of a second judgment claim 21 the method according to.
  23. 前記患者が、心筋梗塞の1つ又は複数の症状を有する、請求項21又は22に記載の方法。 Wherein the patient has one or more symptoms of myocardial infarction, the method according to claim 21 or 22.
  24. cTnIの前記第1の閾値レベルが、前記患者の容態が、1〜10時間の期間にわたって心筋梗塞の徴候及び症状について監視されるべきであることを示唆する、請求項22又は23に記載の方法。 It suggests that the first threshold level of cTnI is, condition of the patient should be monitored for signs and symptoms of myocardial infarction over a period of 1 to 10 hours The method of claim 22 or 23 .
  25. cTnIの前記第2の閾値レベルが、前記患者が潜在的な心筋梗塞について治療をされるべきであることを示唆する、請求項24に記載の方法。 The second threshold level of cTnI may suggest that the patient should be treated for potential myocardial infarction, the method according to claim 24.
  26. cTnIの上昇レベルを検出するために、1〜10時間内に繰り返される、請求項24に記載の方法。 To detect elevated levels of cTnI, it repeated within 1 to 10 hours The method of claim 24.
  27. 前記患者が、慢性心臓病、又は循環cTnIの検出可能なレベルと関連した他の容態を有する、請求項21から26のいずれか1項に記載の方法。 It said patient, chronic heart disease, or have other condition associated with detectable levels of circulating cTnI, method according to any one of claims 21 26.
  28. 検査が、家又はポイントオブケアで実施される、請求項21から27のいずれか1項に記載の方法。 Test is carried out at home or point-of-care method according to any one of claims 21 27.
  29. 検査試料中の分析物の少なくとも2つの閾値レベルを検出するためのデバイスであって、 A device for detecting at least two threshold levels of the analyte in the test sample,
    試料が加えられる区域と、 A zone where the sample is added,
    1つ又は複数の側方流動基板によって形成され、前記試料が加えられる区域と流体連通した1つ又は複数の流体流路と、 Formed by one or more lateral flow substrate, one or a plurality of fluid flow paths through the area in fluid communication with the sample is added,
    単一の流路上に直列にある、又は別々の流路内にある、第1の分析物捕捉区域及び第2の分析物捕捉区域と、 And in series, or in separate flow path, the first analyte capture zone and the second analyte capture zone into a single flow path,
    を備え、 Equipped with a,
    前記第1の分析物捕捉区域は、第1の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、分析物を直接又は間接的に検出可能に捕捉するための量の第1の固定化結合部分を含み、 Said first analyte capture areas, when present in the sample at a first threshold level or above, comprising a first immobilized binding moiety of the amount for capturing the analyte directly or indirectly detectable ,
    前記第2の分析物捕捉区域は、第2の閾値レベル以上で試料中に存在するとき、前記分析物を直接又は間接的に検出可能に捕捉するための量の第2の固定化結合部分を含み、前記第1及び第2の固定化結合部分は、同じである、又は異なる、デバイス。 Said second analyte capture areas, when present in the sample at the second threshold level or higher, a second immobilized binding moiety of the amount for capturing said analyte directly or indirectly detectably wherein said first and second immobilized binding moiety is the same or different, device.
  30. 前記流体流路が、1つ又は複数の吸水性又は吸収性の膜によって形成される、請求項29に記載のデバイス。 The fluid flow path is formed by one or more of the water absorbent or absorbent membrane device of claim 29.
  31. 試料の流れの指標として、各流路内に制御区域をさらに備える、請求項29又は30に記載のデバイス。 As an indicator of the sample flow, further comprising a control zone in the flow path, the device according to claim 29 or 30.
  32. 第1及び第2の分析物結合部分をさらに備え、第1の分析物結合部分が付加された検出可能な標識を有し、第2の分析物結合部分が前記固定化結合部分によって捕捉可能な部分を有する、請求項29から31のいずれか1項に記載のデバイス。 Further comprising a first and second analyte binding moiety has a detectable label that first analyte binding moiety is added, the second analyte binding moiety which can be captured by the immobilized binding moiety having a portion a device according to any one of claims 29 31.
  33. 前記第2の分析物結合部分が、ストレプトアビジン−ビオチン相互作用、又は抗体−抗原相互作用によって、あるいは相補的若しくは実質的に相補的なオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって捕捉可能である、請求項32に記載のデバイス。 The second analyte binding moiety, streptavidin - biotin interaction, or antibody - by antigen interaction, or can be captured by hybridization of complementary or substantially complementary oligonucleotide to claim 32 the device according.
  34. 前記分析物結合部分が、抗体又はその抗原結合部分である、請求項32に記載のデバイス。 The analyte binding moiety is an antibody or antigen binding portion thereof, the device according to claim 32.
  35. 前記分析物結合部分が、1又は複数の分析物捕捉区域の上流の1つ又は複数の流路内で拡散的に結合している、請求項32に記載のデバイス。 It said analyte binding moiety is diffusively bound at one or more analyte capture one of the upstream area or in the flow path, according to claim 32 device.
  36. 前記第1の分析物捕捉区域及び前記第2の分析物捕捉区域が、並行流路又は双方向流路内にある、請求項29から35のいずれか1項に記載のデバイス。 It said first analyte capture zone and the second analyte capture zone is in the parallel flow path or bidirectional flow path, according to any one of claims 29 35 device.
  37. 前記固定化結合剤が、ストレプトアビジン、ビオチン、抗体、又はポリヌクレオチドである、請求項29から36のいずれか1項に記載のデバイス。 The immobilized binding agent, streptavidin, biotin, an antibody or a polynucleotide, according to any one of claims 29 36 device.
  38. それぞれが異なる分析物閾値レベルを検出するために構成された、3つ以上の流路を備える、請求項29から37のいずれか1項に記載のデバイス。 Each of which is configured to detect different analytes threshold level comprises three or more channels, the device according to any one of claims 29 37.
  39. 前記分析物がcTnI及び/又はNT−proBNPである、請求項38に記載のデバイス。 It said analyte is a cTnI and / or NT-proBNP, as claimed in claim 38 device.
  40. 試料中の分析物のレベルを評価するための半定量的方法であって、 A semi-quantitative method for assessing the level of an analyte in a sample,
    請求項29から39のいずれかに記載の検査デバイスに検査試料を加える工程と、 And adding a test sample to the test device according to any of claims 29 39,
    1又は複数の捕捉区域内で、信号の存在又は非存在を検出する工程とを含む、方法。 1 or more capture zone, and detecting the presence or absence of signal.
  41. 前記分析物の前記第1の閾値レベルを示す検出可能な信号が、第1の判断を示唆し、前記第2の閾値レベルを示す検出可能な信号が、第2の判断を示唆する、請求項40に記載の方法。 Detectable signal indicative of the first threshold level of the analyte, suggesting first determination, the second detectable signal indicative of the threshold level is indicative of a second judgment, claim the method according to 40.
  42. 前記分析物が、イベント又は容態の指標として、1時間〜1週間の期間にわたって試料中で上昇する、請求項40に記載の方法。 The analyte, as an indicator of the event or condition, increases in a sample over a period of 1 hour to 1 week, The method of claim 40.
  43. 少なくとも1回繰り返される、請求項42に記載の方法。 It is repeated at least once, a method according to claim 42.
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