JP2014152147A

JP2014152147A - ピロリ菌除菌療法補助剤ならびにこれを用いた医薬品組成物及び飲食品組成物

Info

Publication number: JP2014152147A
Application number: JP2013024024A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Aiba; 勇志相場; Michihiko Kumagai; 道彦熊谷; Fumiya Akakabe; 史弥明壁; Yasuhiro Koga; 泰裕古賀
Original assignee: SNOWDEN CO Ltd
Current assignee: SNOWDEN CO Ltd
Priority date: 2013-02-12
Filing date: 2013-02-12
Publication date: 2014-08-25

Abstract

【課題】ピロリ菌は胃の粘液の中で生きている細菌で胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃がん発症の原因にもなっており、予防医学の観点からピロリ菌の除菌療法は極めて重要であるにも拘わらず、近年ＣＡＭを含む３剤併用除菌療法の除菌率の低下が認められるという事情に鑑みてなされたものであり、ＣＡＭを含む３剤併用療法におけるピロリ菌除菌療法補助剤ならびにこれを用いた医薬品組成物及び飲食品組成物を提供する。
【解決手段】ニンジンなどのサポニン生薬に含まれるサポニンや、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウムなどの界面活性作用物質を有効成分として含有するピロリ菌除菌療法補助剤である。
【選択図】図４

Description

本発明は、クラリスロマイシン(以下、ＣＡＭ)を含む３剤併用療法によるピロリ菌（Helicobactor pylori）一次除菌療法の補助剤に関し、詳細には、ＣＡＭを含む３剤併用療法におけるピロリ菌の一次除菌療法の成功率を高め、一次除菌療法不成功によるピロリ菌のＣＡＭ耐性の獲得を抑えることができるピロリ菌除菌療法補助剤、ならびに、これを用いた医薬品組成物及び飲食品組成物に関する。

ピロリ菌は胃がんの発生に深く関与するといわれ、胃潰瘍や十二指腸潰瘍、呼気検査などでピロリ菌が見つかると、「３剤併用療法」といわれる２種類の抗生物質（抗菌薬＝アモキシシリン（以下、ＡＭＰＣ）、ＣＡＭ）と、胃酸を抑えるプロトンポンプ阻害薬（以下、ＰＰＩ）を１日２回、１週間内服するピロリ菌除菌療法が行われる。

３剤併用療法により２０００年当初は約９割が除菌できたが、年々ＣＡＭの耐性菌が増加して除菌率が低下し、最近では約３割が除菌に失敗することが問題になっている。

ＣＡＭ耐性感染症例では除菌率の明らかな低下と、除菌不成功後にはＣＡＭ耐性の獲得が報告されており、安易に不十分な除菌療法が行われることは耐性菌の出現を増加させる。２０００年には７％程度であったＣＡＭ耐性菌が、２００５年には３０％近くまで増加して深刻な問題となっている。

一次除菌で不成功であった症例に対して、二次除菌として、ＣＡＭをメトロニダゾール（以下、ＭＮＺ）に変えた処方で除菌が行われているが、ＭＮＺによる副作用（飲酒に伴うジスルフィラム−アルコール反応による腹痛、嘔吐、ほてり、ワーファリンの作用増強など）が認められている。

ＣＡＭやＡＭＰＣ、ＭＮＺ以外の化合物として、ベンゾヒドロキサム酸誘導体によるピロリ菌除菌療法剤（特許文献１）、漢方薬安中散と生薬芍薬、甘草を有効成分とするピロリ菌感染治療剤（特許文献２）、鉄結合型ラクトフェリン（特許文献３）、主成分がアラビノキシランである植物性グルコース配糖体である糖質（特許文献４）、抗菌性金属イオンとＬ−システイン、Ｌ−アスコルビン酸と非イオン系を除いた界面活性剤（特許文献５）などの抗ヘリコバクター・ピロリ剤があるが、これらは、３剤併用療法の除菌補助剤として使われることはない。

また、乳酸菌を含んだヨーグルト、チーズ、納豆などのピロリ菌除菌性または感染防御性の飲食品（特許文献６、７、８、９）もあり、乳酸菌を含んだヨーグルトを一次除菌療法の補助剤とした除菌療法は、補助剤を併用しない除菌療法に比べ除菌率が優れていることがメタ解析により報告されている（非特許文献１）。しかし、これらの飲食品に含まれる乳酸菌は、飲食品を摂取後短時間で胃の中で増殖が可能な状態で保存する必要があり、乳酸菌含有飲食品の保存性や携帯性に問題がある。

さらに、ラクトフェリンはピロリ菌感染マウスのピロリ菌減少に効果を示し（非特許文献２）、ラクトフェリンは保存性、携帯性ともに優れ、一部の臨床試験での有効性を示したが（非特許文献３）、メタ解析では標準除去療法への併用効果は認められていない（非特許文献４）。

特開平１１−１８９５２９号公報特開平１１−０２９４９１号公報特許第４３１８７６５号公報特開２００２−３２２０７９号公報再表Ｗ０２０１０／００４６５３号公報特許第３０４６３０３号公報特許第４３８１８２４号公報特許第４４５７３６４号公報特開２０１２−１４７７５９号公報

Jlan Zou、Jie Dong and Xiaofeng Yu；Meta-Analysis；Lactobacillus Containing Quadruple Therapy Versus Standard Triple First-Line Therapy for Helicobacter pylori Eradication：Hellicobacter、14，449−459（2009） Wada T、Aiba Y、Shimizu K、Takagi A、Miwa T、Koga Y；The therapeutic effect of bovine lactoferrin in the host infected with Helicobactor pyloro：Scand J Gastroenterol、34，238−243（1999) Nicola de Bortoli、Giulia Leonardi et al...；Helicobacter pylori Eradication：A Randomized Prospective Study of Triple Therapy versus Triple Therapy Plus Lactoferrin and Probiotics： American Journal of Gastroenterology 102，951−956（2007) A.SACHDEVA ＆ J.NAGPAL；Meta-analysis：efficacy of bovine lactoferrin in Helicobacter pylori eradication： Alimen Phormacol Ther、29，720−730（2009）

本発明は、ピロリ菌は胃の粘液の中で生きている細菌で胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃がん発症の原因にもなっており、予防医学の観点からピロリ菌の除菌療法は極めて重要であるにも拘わらず、近年ＣＡＭを含む３剤併用除菌療法の除菌率の低下が認められるという事情に鑑みてなされたものであり、ＣＡＭを含む３剤併用療法におけるピロリ菌除菌療法補助剤を提供することを課題とする。
また、本発明は、ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性を高める界面活性機能を持つ医薬品組成物及び飲食品組成物を提供することを課題とする。

本発明者らは、３剤併用療法におけるピロリ菌除菌効果を高めるため、保存性がよく携帯に便利なピロリ菌除菌療法補助剤であって、医薬品または飲食品の組成物になりうる有効成分の探索を行った。ピロリ菌の３剤併用療法による除菌療法の不成功例は、ピロリ菌のＣＡＭに対する耐性獲得が原因とされていることから、ＣＡＭ耐性ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性の増強を指標とした検討を行った。その結果、界面活性作用があるサポニンを含有する生薬、または、医薬品添加物や食品添加物として認められている界面活性剤に、ＣＡＭ耐性を獲得してＣＡＭの殺菌力が低下したピロリ菌（ＣＡＭ耐性ピロリ菌）に対しＣＡＭに対する感受性を増加させる機能があることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は以下の通りである。

（１）界面活性作用物質を有効成分として含有するピロリ菌除菌療法補助剤。
（２）界面活性作用物質がサポニンであり、該サポニンが生薬またはその抽出物に含有される上記（１）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（３）生薬が、ニンジン、タイソウ、オンジ、カンゾウ、サイコ、ゴジツ、キキョウ、セネガ、モクツウ、モダマ、チモ、バクモントウ、トチノキ、サンヤクから選ばれる少なくとも１種のサポニン含有生薬である上記（２）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（４）生薬が、ニンジン、タイソウ、カンゾウ、サイコまたはバクモントウである上記（２）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（５）界面活性作用物質が、医薬品添加物及び／または食品添加物として認められた化合物である上記（１）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（６）界面活性作用物質がポリソルベート類である上記（１）または（５）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（７）界面活性作用物質がラウリル硫酸ナトリウムである上記（１）または（５）に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
（８）上記（１）〜（７）のいずれか記載のピロリ菌除菌療法補助剤を配合してなる医薬品組成物。
（９）上記（１）〜（７）のいずれか記載のピロリ菌除菌療法補助剤を配合してなる飲食品組成物。

本発明のピロリ菌除菌療法補助剤ならびに医薬品組成物及び飲食品組成物は、保存性がよく携帯に便利で、ＣＡＭを含む３剤併用療法におけるピロリ菌の一次除菌療法の成功率を高める効果があり、ピロリ菌の感染により併発を引き起こすとされる胃粘膜の慢性炎症を背景とする委縮性胃炎、胃・十二指腸潰瘍、胃がんなどの上部消化管疾患の予防効果を増し、治癒することを補助することができる。
また、本発明のピロリ菌除菌療法補助剤は、界面活性機能があるサポニンを含有する植物やその加工品、または、医薬品添加物や食品添加物として認められた界面活性作用物質を含有する組成物であるので、安全面及びコスト面で優れている。

紅参エキス存在、非存在下のＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５のＣＡＭ濃度と平均生菌数の関係を示す図（試験例３）。紅参エキス及びその加工品（紅参エキス細粒）存在下のＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＫ７のＣＡＭ濃度と平均生菌数の関係を示す図（試験例３）。紅参エキス及びその加工品（紅参エキス細粒）存在下のＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＫ２１のＣＡＭ濃度と平均生菌数の関係を示す図（試験例３）。耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染及び治療に伴うマウス血清中のガストリン濃度を示す図（試験例４）。耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染及び治療に伴うマウス胃組織中のピロリ菌数を示す図（試験例４）。耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染及び治療に伴うマウス血清中のガストリン濃度を示す図（試験例５）。耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染及び治療に伴うマウス胃組織中のピロリ菌数を示す図（試験例５）。耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染及び治療に伴う血清中のピロリ菌抗体価を示す図（試験例５）。感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０感染及び治療に伴うマウス血清中のガストリン濃度を示す図（試験例６）。感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０感染及び治療に伴うマウス胃組織中のピロリ菌数を示す図（試験例６）。

本発明の３剤併用療法によるピロリ菌除菌療法補助剤（以下、単に「補助剤」と言う。）は、界面活性作用物質を有効成分として含有する。３剤併用療法によるピロリ菌の除菌率の低下は、ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性の低下によるものであるため、ＣＡＭを含む３剤併用によるピロリ菌除菌療法の補助剤において、界面活性作用物質は、ピロリ菌のＣＡＭ感受性を増加させるのに有効に作用するものと推察される。界面活性作用物質の作用メカニズムの詳細は明らかではないが、リン脂質を中心に構成される細菌の細胞膜の二重層に、界面活性作用物質が吸着することにより、細胞膜の流動性が大きくなり、薬剤の透過性が増すことによるものと推察される。

本発明の好ましい補助剤は、植物配糖体であるサポニンを界面活性作用物質として含有するものであり、特に好ましい補助剤は、サポニン含有生薬またはその抽出物に含有されるものである。サポニンに結合した糖を除いた部分はサポゲニンと呼ばれ、サポゲニンはトリテルペノイドサポニンとステロイドサポニンに大別され、また、トリテルペノイドサポニンには、オレアナン系とダンマラン系がある。本発明において、サポニン含有生薬は、ダンマラン系サポニン、オレアナン系サポニン、ステロイドサポニンのうち、いずれのサポニンを含有するものでもよい。

サポニン含有生薬は多数知られており、本発明ではいずれをも利用することができる。すなわち、サポニンを含み、有毒性がない植物であれば特に制限はなく、これらの植物の葉、幹、茎、樹皮、根、根茎、いずれの部位をも利用することができる。

本発明で利用するのに適当なサポニン含有生薬の具体例は、下記の通りである。
・オタネニンジン（Panax ginseng）、トチバニンジン（Panax japonicus）、デンシチニンジン（Panax notoginseng）、アメリカニンジン（Panax quinquefolius）などのニンジン
・タイソウ (Zizyphus jujuba) ＝ナツメ類の実
・オンジ (Polygala temuifolia) ＝イトヒメハギの根
・カンゾウ（Glycyrrhiza glabra、G.uralensis）＝カンゾウの根
・サイコ（Bupleurum falcatum）＝ミシマサイコの根
・ゴシツ（Achyranthes fauriei）＝ヒナタイノコズチの根
・キキョウ（Platycodon grandiflora）＝キキョウの根
・セネガ（Polygala senega）＝ヒロハセネガの根
・モクツウ（Akebia quinata、Akebia trifoiata）＝アケビの茎
・モダマ（Entada phaseoloides）
・チモ（Aemarrhena asphodeloides）＝ハナスゲの根茎
・バクモンドウ（Ophiopogon japonicus）＝ジャノヒゲの根茎
・トチノキ（Aesculus turbinata）＝トチノキの葉実
・サンヤク（Dioscorea japonica）＝ヤマイモの根
・ザボンソウ（Saponaria offecinalis）
・ムクロジ（Sapindus mukurossi）＝ムクロジの果皮

サポニン含有生薬及びその抽出物は、サポニンを含有する植物またはその加工品（泥や枯葉などの不要部分の除去、天日干し、粉砕、水や溶媒への浸漬、加熱、炙り焼き、水洗、蒸煮などの加工を施したもの）の粉砕品や、抽出物（エキス、チンキ）、抽出物の濃縮エキス、エキス末などである。

サポニン含有生薬の抽出物は、上記のような生薬を原料として、その生薬から常法により得ることができる。例えば、原料生薬を脱脂せずにあるいは通常の脂溶性有機溶媒を用いて脱脂してから、水または低級脂肪族アルコール（特に、炭素数１〜４の一価アルコール）または水と低級脂肪族アルコールとの混合物、を抽出溶媒としてその有効成分の抽出を行うことで得られる。抽出溶媒としては、これらの他に、アセトンなどの低級ケトン、ジエチルエーテルなどの低級エーテル、酢酸エチルなどの低級モノカルボン酸と低級アルコールとのエステルを利用することもできる。

抽出液をそのままあるいは濃縮して利用することができるが、ある程度精製してから利用するのが一般的である。精製例としては、濃縮抽出物を水に懸濁させ、ｎ−ブタノールを加えて振とうし、ｎ−ブタノール層を分離してこれを蒸発乾固させる方法などである。

こうして得られた抽出物は、サポニン成分を含有する。本発明で使用するのに好ましい抽出物は、ニンジン（ウコギ科）、タイソウ（クロウメモドキ科）から抽出されるダンマラン系サポニン、カンゾウ（マメ科）、サイコ（セリ科）から抽出されるオレアナン系サポニン、および、チモ（ユリ科）、バクモントウ（ユリ科）、トチノキ（トチノキ科）から抽出されるステロイドサポニンである。これらのサポニン含有生薬は、古くから漢方薬として用いられており、安全性が高い。

本発明で使用するのに特に好ましい抽出物は、ウコギ科の多年草オタネニンジンの抽出物であり、なかでも、サポニン含有量が高い高麗人参６年根を用いた紅参またはその加工品の抽出物が好ましい。ウコギ科の多年草オタネニンジンの根を原料とするものであれば、「人参」、「高麗人参」、「朝鮮人参」など呼称の違いがあってもよい。また、製法（加工法や使用部位）が異なる水参、白参、生干人参、大極参、紅参、御種人参、鬚人参などであってもよい。

本発明のもう一つの好ましい補助剤は、医薬品添加物及び／または食品添加物として認められた界面活性作用物質である。かかる界面活性作用物質は、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０：ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）などの、医薬品添加物や食品添加物として認められた化合物であれば、いずれも使用することができる。

本発明の補助剤は、界面活性作用物質を有効成分とする場合、上記の界面活性作用物質またはサポニン含有生薬またはその抽出物の、単独または相互の混合物からなるか、これと液体または固体の賦型剤とからなるか、のいずれかであることができる。投与の剤型としては、上記の界面活性作用物質またはサポニン含有生薬またはその抽出物を、周知の方法により、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、エキス剤、ドリンク剤、浸煎剤などに加工したもの、または、乳糖やブドウ糖などを加えて加工したものなどがあり得る。これらは経口的に投与することが望ましい。

投与量は、本発明による補助剤の効果、すなわち３剤併用療法におけるピロリ菌除菌効果が認められる限り任意である。３剤併用療法では、ランソプラゾール、オメプラゾール、ラベプラゾールなどのプロトンポンプ阻害薬の１種と、アモキシシリン、クラリスロマイシンなどの抗生物質の２種とを併用することができる。一般に、成人１回当りの投与量は、原生薬に換算して３００〜３０００ｍｇ程度である。

本発明の補助剤は、サポニン含有生薬またはその抽出物、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウムをそのまま、あるいは、後述する医薬品組成物素材や飲食品組成物素材と組み合わせて用いられることで、ＣＡＭ耐性ピロリ菌のＣＡＭ感受性増加機能に優れた医薬品組成物または飲食品組成物が得られる。例えば、一般用医薬品、健康食品などの各種製品であり、その形状は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤など経口的に摂取できる形態であればよい。製法については、第十六改正日本薬局方解説書（参考文献２：杉山雄一ほか第十六改正日本薬局方解説書製剤総則廣川書店２０１１年）記載の方法が全て使用できる。

医薬品組成物及び飲食品組成物中での補助剤の配合量は、３剤併用療法におけるピロリ菌除菌効果が認められる限り任意である。製品形態に応じて配合量を適宜定めれば良く、例えば１％（水剤の場合）から１００％（純末、１００％エキスの場合）まで可能である。

本発明で用いることができる医薬品組成物素材としては、例えば、各種ビタミン類（ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ナイアシン、ビタミンＥなどを１種または２種以上を適宜混合）などが挙げられる。

また、飲食品組成物素材としては、例えば、糖質（ブドウ糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、オリゴ糖、トレハロース、エリスリトール、マルチトール、キシリトール、ソルビトール、水飴、還元麦芽糖、還元乳糖、還元水飴粉末などを１種または２種以上を適宜混合）、酸味料（クエン酸、リンゴ酸、乳酸、アスコルビン酸などを１種または２種以上を適宜混合）、香料、着色料、上記の各種ビタミン類、ミネラル類（ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛などを含む塩類や食品素材を１種または２種以上を適宜混合）、蛋白質類（大豆蛋白、乳蛋白、小麦蛋白、卵蛋白、魚肉蛋白、牛肉蛋白などを１種または２種以上を適宜混合）、各種油脂類（動物油、植物油などを１種または２種以上を適宜混合）、甘味料（アスパルテーム、ステビアなどを１種または２種以上を適宜混合）、食物繊維（セルロース、ガラクトマンナン、コーンファイバー、ペクチンなどを１種または２種以上を適宜混合）、各種果汁類（オレンジ、リンゴ、みかん、ブドウ、なし、もも、バナナ、メロン、すいかなどを１種または２種以上を適宜混合）フレーバー粉末（コーヒー粉末、抹茶粉末、煎茶粉末、ココア粉末などを１種または２種以上を適宜混合）、安定化剤、調味料（塩、味噌、醤油、酒類、みりんなどを１種または２種以上を適宜混合）、スパイス類、野菜類、果実類、はちみつ、ローヤルゼリーなどが挙げられる。

本発明の補助剤、医薬品組成物、飲食品組成物は、これらを経口的に３剤併用除菌療法と同時または３剤併用除菌療法を始める１週間前ないし２週間前から投与することが望ましい。

以下、試験例及び実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの試験例、実施例に限定されるものではない。

（試験例１）
この試験は、ＣＡＭに耐性を持ったピロリ菌のＣＡＭ感受性を高める物質について調べた。界面活性作用物質に殺菌作用や抗菌作用があることが知られている（参考文献１）ので、合成界面活性剤ならびにサポニンを含む生薬エキスのＣＡＭ耐性ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性増強作用を調べた。
（参考文献１；藤川福二郎、岡本正夫飲食物防腐剤の研究薬学雑誌 71，967−968（1951)）

（１）ピロリ菌は、臨床分離株で東海大学医学部基礎医学系生体防御学の教室保存株のＣＡＭ感受性のＮｏ．１３０、ＣＡＭ耐性株のＴＭ１５、ＴＫ７、ＴＫ１０、ＴＫ２１、ＴＫ２９を使用した。

（２）界面活性作用物質ならびに生薬エキスは、以下の市販品などを使用した。
・Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０（ＨＸ２）日油株式会社）
・ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ、東京化成株式会社）
・ニンジンエキス（紅参エキス＝コウジンエキス；高麗紅参精スノーデン株式会社原生薬換算２：１）
・カンゾウエキス（カンゾウエキス−Ｌ日本粉末薬品株式会社原生薬換算４：１）
・サイコエキス（サイコエキス−Ｓ松浦薬業株式会社原生薬換算５：１）
・バクモントウエキス（市販のバクモントウ（小西製薬）を購入し常法に従い水で抽出後に濃縮して原生薬換算２:１として使用した）

（３）ピロリ菌に対するＣＡＭの最小発育阻止濃度(以下、ＭＩＣ)の測定は、Ｔｗｅｅｎ８０は１ｍｇ／ｍｌ、ラウリル硫酸ナトリウムは０．５ｍｇ／ｍｌ、生薬エキスはそれぞれ２ｍｇ／ｍｌ（原生薬換算）を添加または無添加（コントロール）のブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）寒天培地（ベクトン・デッキンソン社製)１００ｍｌに、ウマ血清５ｍｌを加えた寒天培地１９ｍｌを、あらかじめ各種濃度のＣＡＭ溶液１．０ｍｌを入れ、径１２ｃｍのシャーレに流し込みよく混和し寒天平板希釈培地を調製した。この寒天平板培地に１×１０^７個／ｍｌのピロリ菌液１０μを接種して、微好気条件下３７℃で３日間培養した後のピロリ菌の発育の有無により行った。

試験例１の結果を表１に示した。合成界面活性剤、サポニンを含む生薬エキスは、共にＣＡＭ耐性ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性を増強させる効果が認められた。

（試験例２）
この試験は、試験例１と同様に、ニンジン（紅参）エキスによるピロリ菌のＣＡＭ感受性の変化を、ニンジンエキスの濃度（原生薬換算）を変えて調べた。

試験例２の結果は、表２に示した。ピロリ菌のＣＡＭに対する感受性は、ＣＡＭ感受性菌、耐性菌いずれにおいても、培地に添加したニンジンエキス量（原生薬換算量はその２倍）に応じ感受性が高まり、ニンジンにはＣＡＭのピロリ菌の殺菌効果を高める作用があることが認められた。

（試験例３）
この試験は、ニンジン（紅参）エキスを、乳糖などを加えた加工品にしても効果があるか否かを調べた。加工品は後述する紅参エキス細粒を用い、添加する紅参エキス量は原生薬に換算して同じ量を用いた。

（１）ピロリ菌は、試験例１と同じＣＡＭ耐性株のＴＭ１５、ＴＫ７、ＴＫ２１を使用した。

（２）紅参エキスは試験例１、２と同じ高麗紅参精を使用、紅参エキス顆粒は、紅人参顆粒（スノーデン株式会社）を使用した。添加量はいずれも商品記載量に基づき原生薬換算量とした。

（３）ウマ血清５％含有ブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）ブロスに、３ｍｇ／ｍｌの紅参エキスまたは紅参エキス顆粒を溶解させた液体培地に、ＣＡＭを１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌを加えたあるいはＣＡＭを加えない培地に、培地１ｍｌ当たりピロリ菌を１×１０^７の割で接種し、３７℃の微好気培養条件下で２４時間培養した培養液を採取して、菌数測定用試料液とした。なお、紅参エキスまたは紅参エキス顆粒を添加しない液体培地で培養したものを対照とした。

（４）採取した試料中の生存ピロリ菌数の測定は、７％のウマ血清を添加したブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）寒天培地１０００ｍｌに、テトラゾニウム（シグマ・アルドリッチ社）２５ｍｇ、ポリミキシＢ（シグマ・アルドリッチ社）２５００単位、バンコマイシン（シグマ・アルドリッチ社）１０ｍｇ、バシトラシン（シグマ・アルドリッチ社）５ｍｇ、アンフォテリシン（シグマ・アルドリッチ社）２ｍｇを添加した寒天培地で、３７℃で４日間微好気培養して測定した。

試験例３の結果は、図１、図２及び図３に示した。横軸はＢＨＩ培地に含まれるＣＡＭの濃度（μｇ／ｍｌ）、縦軸はピロリ菌の平均生菌数（Ｌｏｇ）を示す。ＣＡＭ濃度とＬｏｇ（平均生菌数）の関係を相関式（ｙ）、重相関（ｒ^２）で示した。

図１は、ウマ血清添加ＢＨＩ培地（対照）及びそれに紅参エキス原生薬換算３ｍｇ／ｍｌを添加した培地に、ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５を１×１０^７／ｍｌ植菌し、３７℃で２４時間後のＴＭ１５のＬｏｇ（平均生菌数）とＣＡＭ濃度の関係を示した。

図２は、ＣＡＭ耐性菌をＴＫ７に変え、さらに紅参エキス及び紅参エキス顆粒によるＣＡＭ感受性の増強効果を示した。

図３は、ＣＡＭ耐性菌をＴＫ２１に変えても、同じようにＣＡＭ感受性の増強効果があることを示した。

図１、図２及び図３ともに、紅参エキス、紅参エキス顆粒いずれを添加した培地においても、３剤併用除菌療法補助剤による耐性ピロリ菌のＣＡＭ感受性を増強させる結果が認められた。

上記の通り、試験例１、試験例２及び試験例３の結果から、界面活性作用物質、ニンジンをはじめとするサポニン含有植物は、ピロリ菌のＣＡＭ感受性を増強させ３剤併用ピロリ菌除菌療法の補助剤となることがわかった。

次に、試験例４〜試験例６では、ピロリを感染させたマウスを３剤併用除菌療法剤またはそれに補助剤を併用した時の、血中ガストリン濃度（ｐｇ／ｍｌ）、胃組織中に生息するピロリ菌数（ＣＦＵ／ｇ）、及び血清中のピロリ菌抗体価を調べる実験を行った。

（試験例４）
この試験は、ＣＡＭ耐性ピロリ菌感染マウスでの３剤併用ピロリ菌除菌療法における紅参エキスの除菌補助剤としての効果を調べた。

（１）ピロリ菌感染マウスは、ビニールアイソレーター内で飼育された８週齢の無菌Balb/c雄マウス２５匹を用意した。無作為に選んだ５匹はエーテル麻酔下開腹して心臓から血液約１mlを採血し、遠心分離により分離した血清を個別に凍結保存してピロリ菌感染前血清試料とした。

（２）残り２０匹のマウスには、ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５株（ＣＡＭのＭＩＣ６４μｇ／ｍｌ）１×１０^９ＣＦＵをリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳ）０．５ｍｌに懸濁したものを、４日間連続で経口的に胃の中に投与して、マウスの胃にＣＡＭ耐性ピロリ菌を感染させた。

（３）初回のピロリ菌投与から４週間目に無作為に５匹を選びエーテル麻酔下に開腹して心臓から採血、ピロリ菌感染４週目の除菌治療措置前血清試料とした。開腹したマウスから胃を摘出して内容物を除いた胃をガラスホモジナイザーで磨り潰し、ピロリ菌感染４週目の胃組織に生息するピロリ菌を測定するための胃組成物試料とした。

（４）残りの１５匹は、無作為に３群に分け、実験群１にはコントロールとしてＰＢＳ、実験群２にはＰＢＳに溶解したＡＭＰＣ２０００μｇ／マウス、ＣＡＭ３７５μｇ／マウス、ＰＰＩとしてオメプラゾール１５０μｇ／マウスからなる３剤併用除菌剤、実験群３には３剤併用除菌剤に紅参エキス３ｍｇ／マウス（原生薬換算６ｍｇ／マウス）を、それぞれ１日１回７日間連続投与するピロリ菌除菌療法を施した。

（５）除菌療法終了の翌日、感染４日目と同じ方法で各実験群の血清、内容物を除いた胃をホモジナイズしたものを血清試料並びに胃組成物試料とした。

（６）血清試料中の血清ガストリン量の測定は、ガストリン・リアキットII（株式会社テイエフビー）を用いてガストリン・リアキットIIの添付文書記載の操作法でＲＩＡＰＥＧ法によりにより行った。

（７）除菌治療前胃組成物試料ならびに除菌治療施行後の各群の胃組成物試料中のピロリ菌数は、試験例３（４）と同じ方法で測定した。

試験例４により得られた血清試料のBalb/c雄マウスの血清ガストリン量ならびにＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５感染マウス、感染マウスをＰＢＳ、３剤併用除菌剤ならびに３剤併用除菌剤に紅参エキスを除菌補助剤として併用した除菌療法を施した後の血清試料の血清ガストリン量を、図４に示した。図中「ｎ」は、一群のマウスの匹数を表わす。「＊」は対照の平均値（ｖｓ感染４週の平均値）に対し５％の有意水準で有意差が認められることを示し、「＊＊」は対照の平均値（ｖｓ感染４週の平均値）に対し０．１％の有意水準で有意差が認められることを示す。（以下、図中の「ｎ」、「＊」、「＊＊」は同じことを表わす）。

図４より、無菌マウスの血清中のガストリン濃度（感染前）は、ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５に感染（感染４週）することで有意に減少し、１週間のＰＢＳ除菌（Ｃｏｎｔｒｏｌ）及び３剤併用除菌治療（３剤）では血清ガストリン量の回復は認められないが、３剤併用療法と同時に紅参エキスを与える（３剤＋紅参）ことより、血清ガストリン量は回復することが認められた。

試験例４により得られた胃内容物試料中のピロリ菌数を、図５に示した。
図５は、無菌マウスにＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５を感染させた時の胃組織に生息するＴＭ１５生菌数（感染４週）、その後の１週間のＰＢＳ除菌（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、３剤併用除菌治療（３剤）、３剤併用療法と同時に紅参エキス施した場合（３剤＋紅参）の胃組織に生息するＴＭ１５生菌数を示す。

図５より、マウスの胃に生息したＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５数は、３剤併用除菌療法でも有意に減少するが、胃の組織１ｇ当たり１０万以上の生菌が生息していた。３剤併用療法に紅参を同時に与えると、胃の組織に生息するＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５は百分の一に減少し、ＣＡＭ耐性ピロリ菌の３剤除菌療法除菌補助剤として有効なことが認められた。

試験例４の結果より、経口投与したＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５は、マウスの胃に定着し、ピロリ菌の定着によりマウス血清ガストリン量は感染前より減少する。ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５を感染させたマウスに３剤併用除菌療法を施すことで、胃の中のＴＭ１５は約１／３に減少するが、血清ガストリン量は治療前に比べ変化がない。一方、３剤併用除菌剤にさらに紅参エキスを併用することにより、ＴＭ１５は１／１００以下に減少し、血清ガストリン量はＴＭ１５感染前の値に復帰することから、紅参エキス（ニンジンエキス）は３剤併用療法によるピロリ菌除菌療法の補助剤として有効であることが認められた。

（試験例５）
この試験は、紅参エキスが、３剤併用ピロリ菌除菌療法補助剤の成分として有用なことを、血清中のガストリン量の変化、血清ピロリ菌抗体価の変化ならびに胃の中のピロリ菌数から調べた。

（１）ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５株感染マウスは、試験例４と同様に作成した。
（２）ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５株感染マウス２０匹は、無作為に４群に分け、実験群１にはコントロールとしてＰＢＳ、実験群２にはＰＢＳに溶解した紅参エキス３ｍｇ／マウス（原生薬換算６ｍｇ／マウス）を単独で、実験群３は試験例４と同様の３剤併用除菌剤、実験群４は３剤併用除菌剤に紅参エキス３ｍｇ／マウス（原生薬換算６ｍｇ／マウス）を併用して、それぞれ１日１回１４日間連続投与するピロリ菌除菌療法を施した。
（３）除菌療法終了の翌日、試験例４と同様に各実験群の血清、胃を取り出し血清試料並びに胃組成物試料とした。
（４）血清試料中の血清ガストリン量の測定は、試験例４と同様に測定した。
（５）胃の中のピロリ菌数は、試験例４と同様に測定した。
（６）血清中のピロリ菌抗体価は、ＥＬＩＳＡ法により測定した。

図６〜図８に、ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５株感染マウスに、紅参（紅参）、３剤併用療法（３剤）、３剤併用療法に紅参を加えた療法（３剤＋紅参）を、２週間施した時の血清ガストリン濃度（図６参照）、胃組織中のＴＭ１５菌数（図７参照）及び血清ピロリ菌抗体価（図８参照）を、ＰＢＳ投与無治療群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）と共に示した。

紅参単独では、ピロリ菌抗体価において僅かな減少が認められたが、血清ガストリン量及び胃組織内のＴＭ１５生菌数では効果が認められなかった。さらに３剤併用除菌療法では、十分な血清ガストリン量の回復（図６）、胃組織内ＴＭ１５生菌数の減少（図７）、及びピロリ菌抗体価の減少（図８）が認められた。

３剤併用除菌療法に紅参エキスを除菌補助剤として併用した除菌療法を施した場合（３剤＋紅参）は、血清ガストリン量はＴＭ１５感染前の値に復し（図６参照）、胃組織に生息するピロリ菌ＴＭ１５は、２００ＣＦＵ／ｇまで減少し（図７参照）、さらにピロリ菌抗体価も有意に減少する（図８参照）ことから、紅参は３剤併用除菌療法補助剤として効果が認められた。

試験例５の結果より、ＣＡＭ耐性ピロリ菌ＴＭ１５を感染させたマウスに３剤併用除菌療法を１４日間施すことで、胃の中のＴＭ１５は約１／３に減少し、また３剤併用除菌剤に紅参エキスを併用することによりＴＭ１５は１／３００以下に減少するが、紅参エキスの単独投与での除菌効果は認められなかった。
紅参エキスの単独投与は、血清ガストリン量の回復も認められないことから、紅参エキス（ニンジンエキス）は、単独ではＣＡＭ耐性ピロリ菌の除菌効果はないが、３剤併用療法によるピロリ菌除菌療法の補助剤として有効である。

（試験例６）
この試験は、紅参エキスは、ＣＡＭ感受性ピロリ菌の３剤併用ピロリ菌除菌療法補助剤の成分として有用なことを、血清中のガストリン量の変化、胃の中のピロリ菌数から調べた。

（１）ＣＡＭ感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０株感染マウスは、試験例４と同様に作成した。
（２）ＣＡＭ感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０株感染マウス２０匹は、無作為に４群に分け、試験例５と同じように、実験群１はＰＢＳ、実験群２は紅参エキス単独、実験群３は３剤併用除菌剤、実験群４は３剤併用除菌剤に紅参エキスを併用して、それぞれ１日１回７日間連続投与するピロリ菌除菌療法を施した。
（３）除菌療法終了の翌日、試験例５と同様に各実験群の血清、胃を取り出し血清試料並びに胃組成物試料とした。
（４）血清資料中の血清ガストリン量の測定は、試験例４と同様に測定した。
（５）胃の中のピロリ菌数は、試験例４と同様に測定した。

試験例６により得られた胃内容物試料中のピロリ菌数を、図９に示した。また、試験例６により得られた胃内容物試料中のピロリ菌抗体価は、図１０に示した。

血清中のガストリン濃度（感染前）は、ＣＡＭ感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０感染により低下するが、３剤併用に紅参を加えた治療（３剤＋紅参）を１週間続ける療法で、感染前の値になり、定着したピロリ菌Ｎｏ．１３０数は対照に比べ著しく少なくなり、３剤併用除菌補助剤はＣＡＭ感受性菌の除菌にも有効であることが認められた。

また試験例６の結果より、紅参エキス（ニンジンエキス）は、ＣＡＭ感受性ピロリ菌Ｎｏ．１３０を感染させたマウスの除菌療法で、単独投与では除菌効果は認められないが、感受性ピロリ菌の除菌療法において、３剤併用療法によるピロリ菌除菌療法の補助剤として有効であることが認められた。

次に実施例により本発明を具体的に説明する。

（実施例１）
第十六改正日本薬局方記載の紅参を同じく第十六改正日本薬局方記載の軟エキス剤の製造方法に準じて紅参エキスを製造した。この紅参エキス１ｇは原生薬２ｇ（原生薬換算２：１）あるいは３ｇ（原生薬換算３：１）に相当する。
製造した紅参エキスをピロリ菌除菌療法補助剤として使用する場合は、３剤併用除菌療法の１週間前から１日２回〜３回、１回０．３ｇ〜０．５ｇを摂取し、その後３剤併用除菌療法の投薬時に合わせ１日２回、１回０．３ｇ〜０．５ｇを同時に摂取するように、医薬品または飲食品における紅参エキスの配合量を調整し、最終製剤の剤形により用いる紅参エキスの原生薬換算量を適宜変更した。

（実施例２）
表３に示した配合により混合した原料を造粒装置で造粒して、ピロリ菌除菌療法の補助機能を賦与した顆粒を製造した。この顆粒は、１包３ｇにしてピロリ菌の３剤併用除菌療法に準じて、通常は実施例１と同様に１回１包を摂取して、３剤併用除菌療法の除菌率の奏効率を高めさせる医薬品または飲食品の紅参顆粒を製造した。

（実施例３）
表４に示した原料を混合し、打錠機で１錠当たり１．０ｇに打錠してピロリ菌除菌療法補助剤とて、除菌療法前及び３剤併用ピロリ菌除菌療法に合わせ１日２回、１回１錠を摂取する。

（実施例４）
表５に示した原料を含有する５０ｍｌのドリンク剤を調製し、除菌療法前及び３剤併用ピロリ菌除菌療法に合わせ１日２回、１回１本を摂取する。

ピロリ菌の感染診断は、ピロリ菌は尿素分解酵素ウレアーゼを産生し、ピロリ菌に感染しているとそのウレアーゼによって、胃の中の尿素が、アンモニアと二酸化炭素に分解され、呼気中の二酸化炭素の含有量が増加することを利用した尿素呼気試験により実施した。

（実施例５）
ピロリ菌感染診断用剤（尿素Ｃ^１３錠：ユービット錠１００ｍｇ、大塚製薬、呼気中^１３ＣＯ_２分析：赤外分光分析装置ポックワン（ＰＯＣｏｎｅ）、フクダ電子）でユービット錠服用後２０分のΔ^１３Ｃ：２．５％以上のピロリ菌感染者１０名に、実施例２の紅参顆粒を１日２〜３回、１回１包を１週間摂取させたのち、３剤併用療法（ＣＡＭ２００ｍｇ１錠、ＡＭＰＣ２５０ｍｇ３カプセル、オメプラゾール２０ｍｇ）と同時に紅参顆粒１包を１週間、朝・夕食後の２回感染者に服用させた。被験者の１３Ｃ−尿素呼気検査値（摂取前）、紅参顆粒１週間摂取後（紅参単独）及び紅参顆粒を加えた３剤併用除菌療法（３剤＋紅参）終了直後の治験成績は表６に示した。

表６が示すとおり、３剤併用療法に除菌補助剤として紅参顆粒を同時に摂取した時の除菌成功率は９０％であり、不成功者は１０％であった。最近の３剤併用ピロリ菌除菌成功率は、６０％〜７０％であるが、無作為に選ばれたピロリ菌感染者に対し９０％が除菌に成功した。実施施設における過去の３剤併用除菌療法の成績から無作為に選んだ５０症例の除菌成功率は６７．８％であることから、除菌成功率９０％は本発明による３剤併用除菌療法の除菌補助剤の効果と判断した。

（実施例６）
症例数を増やし無作為に２群に分けて、３剤併用除菌療法施行群と３剤併用除菌療法に除菌補助剤として紅参顆粒を加えた群との比較試験は実施中である。

以上記載したとおり、界面活性作用物質を有効成分として含有するピロリ除菌療法補助剤は、医薬品組成物や飲食品組成物などへの利用が可能である。

Claims

界面活性作用物質を有効成分として含有するピロリ菌除菌療法補助剤。
界面活性作用物質がサポニンであり、該サポニンが生薬またはその抽出物に含有される請求項１に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
生薬が、ニンジン、タイソウ、オンジ、カンゾウ、サイコ、ゴジツ、キキョウ、セネガ、モクツウ、モダマ、チモ、バクモントウ、トチノキ、サンヤクから選ばれる少なくとも１種のサポニン含有生薬である請求項２に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
生薬が、ニンジン、タイソウ、カンゾウ、サイコまたはバクモントウである請求項２に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
界面活性作用物質が、医薬品添加物及び／または食品添加物として認められた化合物である請求項１に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
界面活性作用物質がポリソルベート類である請求項１または５に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
界面活性作用物質がラウリル硫酸ナトリウムである請求項１または５に記載のピロリ菌除菌療法補助剤。
請求項１〜７のいずれか記載のピロリ菌除菌療法補助剤を配合してなる医薬品組成物。
請求項１〜７のいずれか記載のピロリ菌除菌療法補助剤を配合してなる飲食品組成物。