JP2013528571A - 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 - Google Patents
核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013528571A JP2013528571A JP2013503178A JP2013503178A JP2013528571A JP 2013528571 A JP2013528571 A JP 2013528571A JP 2013503178 A JP2013503178 A JP 2013503178A JP 2013503178 A JP2013503178 A JP 2013503178A JP 2013528571 A JP2013528571 A JP 2013528571A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- cell
- cells
- formula
- fluorescent dye
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 73
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 69
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 69
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 69
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 300
- UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-TEMPO Chemical compound CC1(C)CC(O)CC(C)(C)N1[O] UZFMOKQJFYMBGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 23
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 22
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims abstract description 17
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 10
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000004990 dihydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 363
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 115
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 52
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 34
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 33
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 claims description 32
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 26
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 24
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 23
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 19
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 125000005122 aminoalkylamino group Chemical group 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 claims description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 claims description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 4
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 abstract 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 99
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 31
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 25
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical group [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 18
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 16
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 11
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 11
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 11
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 11
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 10
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 9
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 9
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N ent-staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N staurosporine Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N 0.000 description 8
- CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(OC)O1 CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 7
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 6
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 101100278318 Dictyostelium discoideum dohh-2 gene Proteins 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- -1 aminoanthraquinone compound Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 4
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 4
- 238000005956 quaternization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 4
- DPKDBVSAHDKACA-UHFFFAOYSA-N 1,5-bis[2-(dimethylamino)ethylamino]anthracene-9,10-dione Chemical compound O=C1C2=C(NCCN(C)C)C=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NCCN(C)C DPKDBVSAHDKACA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 3
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J ToTo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2S1 MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 3
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 3
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- VFJXZAPLCIZYLJ-UHFFFAOYSA-N CN(CCNC1=CC=CC=2C(C3C(C=CC(=C3C(C12)=O)O)(O)NCCN(C)C)=O)C Chemical compound CN(CCNC1=CC=CC=2C(C3C(C=CC(=C3C(C12)=O)O)(O)NCCN(C)C)=O)C VFJXZAPLCIZYLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 2
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N DMSO Substances CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 2
- FGBAVQUHSKYMTC-UHFFFAOYSA-M LDS 751 dye Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.C1=CC2=CC(N(C)C)=CC=C2[N+](CC)=C1C=CC=CC1=CC=C(N(C)C)C=C1 FGBAVQUHSKYMTC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J YoYo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3O2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2O1 GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004056 anthraquinones Chemical group 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000001048 orange dye Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035502 ADME Effects 0.000 description 1
- 108050005848 Annexin A10 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000252208 Danio Species 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000801640 Homo sapiens Phospholipid-transporting ATPase ABCA3 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102100033623 Phospholipid-transporting ATPase ABCA3 Human genes 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- ULHRKLSNHXXJLO-UHFFFAOYSA-L Yo-Pro-1 Chemical compound [I-].[I-].C1=CC=C2C(C=C3N(C4=CC=CC=C4O3)C)=CC=[N+](CCC[N+](C)(C)C)C2=C1 ULHRKLSNHXXJLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N acetoacetic acid Chemical compound CC(=O)CC(O)=O WDJHALXBUFZDSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000298 carbocyanine Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 229940125890 compound Ia Drugs 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 230000005574 cross-species transmission Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000012632 fluorescent imaging Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229940045996 isethionic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000891 luminescent agent Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011527 multiparameter analysis Methods 0.000 description 1
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMCOQLKKSNQANE-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-4-[6-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-benzimidazol-2-yl]aniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 VMCOQLKKSNQANE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000004686 pentahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000035752 proliferative phase Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000021419 recognition of apoptotic cell Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 150000004684 trihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B1/00—Dyes with anthracene nucleus not condensed with any other ring
- C09B1/16—Amino-anthraquinones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B1/00—Dyes with anthracene nucleus not condensed with any other ring
- C09B1/16—Amino-anthraquinones
- C09B1/20—Preparation from starting materials already containing the anthracene nucleus
- C09B1/207—Dyes with amino groups and with onium groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
- C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
- C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
- C09K2211/1003—Carbocyclic compounds
- C09K2211/1011—Condensed systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体が提供される。
・細胞ベースのアッセイにおいて、一般に使用される等張緩衝液条件と適合性の濃度の範囲でのアッセイへの即時の組み込みのための水溶性。
・マルチプルアッセイ内で、再現可能な配備および好都合な保管のための、化学的純度および安定性。
・ほとんどまたは全くスペクトルの重なりのない可視範囲の蛍光を用いるマルチパラメーターアッセイへの即時の組み込みのための赤色/遠赤外蛍光特性、または赤色蛍光との容易な使用のための、橙色蛍光
・有核細胞の分析を必要とする用途のための、高親和性核酸結合特性。
・既知の程度の蛍光発光の強度とDNA結合の程度との間の化学量論比を可能にするために、核酸への結合時に蛍光を増強しないこと。
・結合している分子の局在化した濃度に起因する、核の結合時の増加したシグナルに対する、結合していない色素のバックグラウンド蛍光の相対的な低減を提供するための低い内因性蛍光。
・膜が損なわれているまたは色素分子を排除することができない細胞の選択的および陽性染色のための、細胞不透過特性。
・イメージングまたはフローサイトメトリーまたは別の検出プラットホームによる蛍光発光の検出による、すべての有核細胞のための直接DNA染色剤として使用するための、固定細胞における核識別特性。
・色素が、増殖の阻害などの有害な作用を有さずに、生物学的適用の間、長期間にわたって細胞とともに同時インキュベートすることができるような、インタクト細胞に対する低毒性。
・多様な期間にわたる細胞の細胞不透過性色素とのインキュベーションおよび細胞染色を検出するための同じ集団の一時的なサンプリングによってモニターされる細胞の完全性の喪失の時間依存的な分析を可能にする、上記の特性の組み合わせ。
1-{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1-{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリメチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1-{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1-{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリエチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1-{[2-(トリメチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオンヨージド
1,8-ビス{[2-(トリメチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリメチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリメチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1-{[2-(トリエチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリエチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリエチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリエチルアミノ)プロピル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン
1,5-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,4-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
1,8-ビス{[2-(トリエチルアミノ)ブチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体を含む蛍光複合体が提供される。
a)式(I)の化合物:
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
b)細胞または別の生体材料の試料を生物学的に適合性の溶液で処理するステップ;および
c)式(I)の化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するステップ
を含む方法が提供される。
[式中、Aは、C2〜8アルキレン基であり;R1、R2、およびR3は、水素、C1〜4アルキル、C2〜4ジヒドロキシアルキル(ここで、窒素原子に結合している炭素原子はヒドロキシル基を保有せず、2個のヒドロキシル基によって置換されている炭素原子は存在しない)から独立して選択され、またはR2およびR3は一緒に、R2およびR3が結合している窒素原子とともに複素環式環を形成しているC2〜6アルキレン基を形成しており;
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3、ハロゲノアミノ、C1〜4アルキルオキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択される]である。
a)細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
b)識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対する、細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物の結合能よりも低い結合能(これは必ずではないが好ましくは、結合親和性に関連する)を有し、結果として、細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物の存在下において、識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対する結合についてより低い効率で競合し、その結果、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物が、インタクトではない細胞に対する結合から実質的に排除される、または細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物によって遮蔽される、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
c)細胞の試料を、生物学的に適合性の1種または複数の溶液で処理するステップ;および
d)細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出し、それをインタクトではない細胞の存在と相関させ、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出し、それをインタクト細胞の存在と相関させるステップ
を含む方法が提供される。
SYTOX色素より低い親和性を有し、生細胞に流入することができる細胞透過性のシアニン色素(SYTO核酸染色剤)、排他的ではないが好ましくは、SYTO(登録商標)40青色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)59赤色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)60赤色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)61赤色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)62赤色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)63赤色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)64赤色蛍光核酸染色剤、SYTOX(登録商標)青色核酸染色剤、SYTO(登録商標)40青色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)41青色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)42青色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)45青色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)80橙色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)81橙色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)82橙色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)83橙色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)84橙色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)85橙色蛍光核酸染色剤、SYTOX(登録商標)橙色核酸染色剤、SYTO(登録商標)10緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)9緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)BC緑色蛍光核酸染色剤、SYTOX(登録商標)青色死細胞染色剤、SYTOX(登録商標)緑色核酸染色剤、SYTO(登録商標)21緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)24緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)25緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)11緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)12緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)13緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)14緑色蛍光核酸染色剤、SYTO(登録商標)16緑色蛍光核酸染色剤、およびSYTO(登録商標)17赤色蛍光核酸染色剤。
DAPI:UV励起可能なDNA結合蛍光色素4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール、二塩酸塩(DAPI)(Ex358/Em46)または4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール、ジラクテート(DAPI、ジラクテート)
副溝結合Hoechst色素、排他的ではないが好ましくはHoechst 34580、青色蛍光(Ex352/Em461)AT選択的、副溝結合dsDNA選択的蛍光色素である五水和物としてのHoechst 33258(ビス-ベンズイミド)、青色蛍光(Ex350/Em461)AT選択的、副溝結合dsDNA選択的結合性の三塩酸塩、三水和物としてのHoechst 33342
核酸染色剤であるLDS751:(Ex543/Em712)(DNA)(Ex590/Em607)(RNA)
7-アミノアクチノマイシンD(7-AAD;Ex546/Em647)
RNAで赤色寄りの発光およびDNAでは緑色寄りの発光による細胞の異染色を示すアクリジンオレンジ
TOTOファミリーシアニン二量体色素のシアニン二量体、排他的ではないが好ましくはTOTO(登録商標)-1ヨウ化物(514/533)、TO-PRO(登録商標)-1ヨウ化物(515/531)、TOTO(登録商標)-3ヨウ化物(642/660)
TO-PROファミリーの色素のシアニン単量体、排他的ではないが好ましくはYO-PRO-1(Ex491/Em509)、TO-PRO-(Ex515/Em531)、TO-PRO(登録商標)-3ヨウ化物(642/661)、TO-PRO(登録商標)-5ヨウ化物(745/770)、YOYO(登録商標)-1ヨウ化物(491/509)、YO-PRO(登録商標)-1ヨウ化物(491/509)、YOYO(登録商標)-3ヨウ化物(612/631)、YO-PRO(登録商標)-3ヨウ化物(612/631)。
核酸SYTOX色素、排他的ではないが好ましくはSYTOX青色(Ex445/Em470)、SYTOX緑色(Ex504/Em523)およびSYTOX橙色(Ex547/Em570)。
ヨウ化プロピジウム(PI;Ex530/Em625)および細胞不透過性臭化エチジウム(EthBr;Ex518/Em605)
7-アミノアクチノマイシンD(7-AAD;Ex546/Em647)
RNAで赤色寄りの発光およびDNAでは緑色寄りの発光による細胞のアクリジンオレンジ異染色。
方法において使用される蛍光色素および発光化合物を励起するための1つまたは複数の電磁放射線源;
蛍光色素および発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するための複数の検出器;および
検出される分光学的特性をインタクト細胞およびインタクトではない細胞の存在と相関させ、それによってインタクト細胞とインタクトではない細胞とを識別するように適合された検出器分析システム
を含むシステムが提供される。
生検標本(例えば、細針吸引物による)として、組織外植片として、初代培養物(例えば、ヒト皮膚線維芽細胞)として、形質転換細胞系(例えば、SV40形質転換線維芽細胞)として、不死化細胞系(例えば、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素[hTERT]によって不死化された細胞系)として、または樹立腫瘍細胞系として得られる、ヒト細胞および哺乳動物細胞を含む動物細胞。
植物細胞および細菌細胞。
治療上、診断上および分析上興味深い特定の部位および疾患を表すもの、好ましくは、基質上での付着性増殖を示すことができるもの、例えば:脳がん、膀胱がん、乳がん、結腸および直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん(腎細胞)、白血病、肺がん、メラノーマ、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん(非メラノーマ)、甲状腺がんを含むヒト腫瘍細胞系。また、米国国立がん研究所(US National Cancer Institute)腫瘍細胞系パネルNCI-60(参照:http://dtp.nci.nih.gov/docs/misc/common_files/cell_list.html)において示されているものなどの、薬物スクリーニング方法論の目的のために常法に従って利用可能であるヒト腫瘍細胞系:
機能的ゲノミクス研究において使用される哺乳動物細胞系(例えば、NIH 3T3マウス細胞系)
脊椎動物の単細胞形態(例えば、ゼブラフィッシュであるダニオ(ブラキダニオ)・レリオ(Danio[Brachydanio]rerio)の解離した細胞調製物から得られる胚、幼生形態または細胞の構成要素)。
ADME/Tox(吸収、分布、代謝、排出/毒性)スクリーニングプロトコールにおいて使用される細胞系(例えば、HepG2などの肝細胞由来の細胞系)。
ヒトまたはマウス供給源から得られる胚性幹細胞。
成体幹細胞
中枢神経系のニューロンおよび/または支持細胞(例えば星状細胞、希突起膠細胞、小膠細胞およびシュワン細胞)。
抗体を分泌するハイブリッドを含む不死体細胞ハイブリッド(例えば、ハイブリドーマ)。
非幹細胞に対する幹細胞
有核細胞血液成分
老化細胞、非老化細胞、付着性細胞、非付着性細胞、静止細胞および非静止細胞。
細胞における生理的変化による細胞完全性の変化(例えば、増殖期における分化または変化)。
疾患プロセスに反応する細胞における変化による細胞完全性の変化。
細菌およびウイルスを含む感染性病原体によって誘導される細胞完全性の変化
寄生体によって誘導される細胞完全性の変化。
物理的作用物質(例えば、電離および非電離放射線)に反応する細胞における変化による細胞完全性の変化。
光学活性な物理的作用物質(例えば、量子井戸を持つナノ粒子剤)または染色色素の組み込みによる細胞完全性の変化。
以下の目的のための、既知のまたは未知の生物活性剤に反応する細胞における変化による細胞完全性の変化:
毒素(例えば、重金属汚染)の環境センシングのためのモニターとしての細胞完全性の変化。
電子顕微鏡法または別の高解像度イメージングアプローチを使用する明確な分析のための、粒子の毒性負荷を保有する細胞が蛍光色素と同時局在することができるという利点を有するナノ粒子剤毒性の細胞完全性の変化。
毒素の検出(例えば、バイオセーフティーのためのエンドトキシンセンシング)のための細胞完全性の変化。
安全性モニタリング目的および迅速な診断のための、毒性のまたは有害な作用物質の検出のための細胞完全性の変化。
発酵プロセスの進行(例えば、醸造用途における酵母生活環)をモニターするための細胞完全性の変化。
バイオ医薬品調製プロセスの進行(例えば、サイトカイン生成)をモニターするための細胞完全性の変化。
細胞死(アポトーシスまたは壊死)と関連した状態移行を見分けるための細胞完全性の変化。
生理的および病理学的系における細胞周期進行の分析のための、細胞完全性の変化。
薬物スクリーニングまたは発見の目的のための薬力学的反応の分析。
内部プログラムの影響下での、または摂動剤(例えば、細胞骨格またはクロマチン調節剤)により強制される状態変化を受けるときの細胞構造および機能を調節する細胞のシステムの研究のための細胞完全性の変化
[参考文献]
はシアン色素が使用されてもよい。
1,5-ビス{[2-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオンを、WO99/65992の実施例1に従って合成した。クロロホルム(2mL)を、1,5-ビス{[2-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}アントラセン-9,10-ジオン(58mg、0.152mmol)に添加した。暗紫色溶液に、MeCN(1ml)、続いてヨウ化メチル(95μl、1.524mmol)を添加した。10分間の撹拌後、沈殿物が形成する。4時間の撹拌後、揮発性物質を蒸発させた。残渣をクロロホルム(5ml)から摩砕し、濾過によって回収し、ジクロロメタン(20ml)およびジエチルエーテル(10ml)で洗浄した。暗いピンク色の固体が単離された(0.09g、0.135mmol、89%収率)。1H NMR(400MHz, d6-DMSO) δ: 9.69(2H, t)、7.72(2H, dd)、7.52(2H, dd)、7.30(2H, dd)、3.91(4H, q)、3.62(4H, t)、3.18(18H, s)
1,5-ビス{[2-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオンを、WO99/65992の実施例1に従って合成した。クロロホルム(2mL)を、1,5-ビス{[2-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}-5,8-ジヒドロキシアントラセン-9,10-ジオン(44mg、0.107mmol)に添加した。暗紫色溶液に、MeCN(2ml)、続いてヨウ化メチル(66.6μl、1.067mmol)を添加した。1分間の撹拌後、沈殿物が形成する。4時間の撹拌後、揮発性物質を蒸発させた。残渣をクロロホルム(5ml)から摩砕し、濾過によって回収し、ジクロロメタン(20ml)およびジエチルエーテル(10ml)で洗浄した。暗青色固体が単離された。収率=173-012(0.05g, 0.068mmol, 63.9%収率) 1H NMR(400MHz, d6-DMSO) δ: 13.97(2H, s)、9.77(2H, br t)、7.49(2H, d)、7.40(2H, d)、3.96(4H, br q)、4.09(4H, t)、3.19(18H, s)
化合物(IA)を、実施例2に記載されている原理を使用して合成し、緩衝液中の5mM化合物(IA)希釈のストック溶液として+4℃で保存した。吸光度スペクトルを、分光計およびPBS中に溶解させた作用物質の20μM溶液を使用して得、および1cm光路石英シリカキュベットにおいて測定した。1cm光路長セミマイクロ石英キュベットにおける20μM化合物(IA)の溶液についての蛍光スペクトルを、633、589、534、488nmでの励起によって決定した。蛍光測定は、Perkin Elmer LS50分光蛍光計においてスリット幅を10nmに設定して行った。分光蛍光計は、赤色感受性の光電子倍増管(タイプR928;浜松ホトニクス株式会社(Hamamatsu Photonics KK)、日本)を備えていた。データを蓄積し、スプレッドシートにエクスポートして、緩衝液対照について補正し、発光最大を決定した。結果を、図8に示す。化合物(IA)の488nm(フローサイトメトリーにおいて)から647nmまでの波長(Exλmax 646nm)による励起は、最適に及ばなくてもよい。典型的には、細胞イメージングでは、励起は633nmまたは647nmのいずれかの波長で実施される。発光スペクトルは、励起波長と無関係であり、すなわち、すべての発光スペクトルは、励起波長に関係なく同一である。
この実施例は、細胞毒性薬物(VP-16)に曝露させたヒトB細胞リンパ腫(DoHH2)細胞中の原形質膜のホスファチジルセリン分子の内部(細胞質の)小葉からの移動と関連する、より後の段階の細胞死に関する。アポトーシスの用量依存的な誘導の検出を、フローサイトメトリーを使用して実施した。
VP-16(VP-16-213;VEPESID;エトポシド)は、34mMストック溶液(Bristol Meyers Pharmaceuticals、Syracuse、NY)として提供され、4℃で保存した。フルオレセインコンジュゲートアネキシンV(アネキシンV-FITC)は、Pharmingen(Becton Dickinson UK、Oxford、UK)から購入した。ヨウ化プロピジウム(PI)は、H2O中の1mg/ml溶液(Molecular Probes Europe、Leiden、オランダ)として得た。化合物(IA)は、水中に5mM溶液として配合し、4℃で保存した。
本発明者らは、核のDNAを効率的に標的化する化合物(IA)の特性を求めた。
この実施例は、フローサイトメトリーによって分析されるヒトJurkat細胞集団におけるスタウロスポリンによる細胞死誘導の分析を示す。本発明者らは、スタウロスポリンにより誘導された細胞死の結果として膜透過性が増強された細胞に起因する生存不能な部分を決定する細胞生存可能性マーカーとしての、化合物(IA)の適用を実証しようとした。
細胞培養および処理:ヒト濾胞性Bリンパ腫細胞系をこの研究において使用した。SU-DHL-4を、10%FCSおよび100 U ml-1ペニシリン、100μg ml-1ストレプトマイシン、および2mMグルタミンを添加したRPMI1640中で常法に従って維持した。細胞を、37℃で5%CO2/95%空気の加湿した雰囲気中で培養した5×104細胞ml-1の開始濃度で、1週間に2回継代した。細胞をフラスコ当たり5mlで、0.5×105細胞/mlに設定した。各培養物を、3つの化合物(IA)用量(0, 3および10μM)のうちの1つに、標準的な培養条件下で96時間、継続的に曝露させた。時間(t)0、24、48、72および96時間で、細胞密度を、各フラスコの0.4ml試料のCoulter計数によって決定した。データは、所与の濃度の化合物(IA)について時間(時間)に対する相対的細胞数(Nt/N0)(695LP)の増加として表示する。結果を、図12に示す。
インタクト細胞と損傷細胞とを区別する手段を提供するための、アッセイへの同時組み込みのための利点を有する、細胞の完全性の喪失の報告における、対象とする特性を有する別の蛍光試薬を使用した、典型的なマルチパラメータ分析への好ましい細胞不透過性色素(式(IA))の化合物の組み込み。
細胞培養および薬物処理:ヒト濾胞性Bリンパ腫細胞系をこの研究において使用した。DoHH2を、5%FCSおよび100U ml-1ペニシリン、100μg ml-1ストレプトマイシン、および2mMグルタミンを添加したRPMI1640中で常法に従って維持した。細胞を、37℃で5%CO2/95%空気の加湿した雰囲気中で培養した5×104細胞ml-1の開始濃度で、1週間に2回継代した。細胞を5×105細胞/mlに設定し、VP-16用量(0.25μM)に曝露させてアポトーシスを誘導した。20μM化合物(IIA)および4μM化合物(IA)を、1mlの細胞に添加し、標準的な培養条件下で10分間インキュベートした。試料をフローサイトメトリーによって分析した。
Claims (47)
- 式(I)の化合物
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体。 - X1、X2およびX3のうちの少なくとも1つが、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/mである、請求項1に記載の化合物。
- X1およびX3ではなくX2が、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/mである、請求項2に記載の化合物。
- X1およびX3が両方ともヒドロキシルである、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物。
- X1およびX3が両方とも水素である、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物。
- R1が水素である、請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。
- R2、R3およびR4がC1〜4アルキルである、請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物。
- R2、R3およびR4がメチルである、請求項7に記載の化合物。
- Aが(CH2)2である、請求項1から8のいずれか一項に記載の化合物。
- 式(IA)の化合物
- 式(IB)の化合物
- 核酸および式(I)の化合物:
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体を含む蛍光複合体。 - 核酸がDNAである、請求項12に記載の複合体。
- DNAが細胞中に存在する、請求項13に記載の複合体。
- DNAが、インタクトではない細胞中に存在する、請求項14に記載の複合体。
- 核酸を含有する細胞または別の生体材料の試料を分析する方法であって、
a)式(I)の化合物:
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3R4+(Zm-)1/m、ハロゲノアミノ、C1〜4アルコキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択され;
(Zm-)1/mは、電荷mのアニオンである]
または基NR1が四級化されている誘導体を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
b)細胞または別の生体材料の試料を前記生物学的に適合性の溶液で処理するステップ;および
c)式(I)の化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するステップ
を含む方法。 - 式(I)の化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性が蛍光であり、ステップc)が、式(I)の化合物を電磁放射線で励起するステップ、および放射された蛍光シグナルを検出するステップを含む、請求項16に記載の方法。
- 式(I)の化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性が色度特性である、請求項16に記載の方法。
- 細胞の試料において細胞核を識別するための請求項16から18のいずれか一項に記載の方法であって、ステップb)を実施して、式(I)の化合物による細胞核中での核酸の結合を引き起こし、細胞核の識別が、ステップc)において検出される分光学的特性に少なくとも一部基づく、方法。
- ステップb)を実施して、細胞の試料を式(I)の化合物で染色する、請求項16から19のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞死発生がモニターされる請求項20に記載の方法であって、ステップb)を、アッセイ期間の前またはその期間中に実施し、それによって前記アッセイ期間中の細胞死発生の連続的なまたは高頻度の読み出しを可能にする、方法。
- ステップc)が、個々の細胞によって放射される蛍光をフローサイトメトリーによって検出するステップを含む、請求項17または請求項17に従属する請求項18から21のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)が、蛍光顕微鏡法による細胞内局在の検出を含む、請求項17または請求項17に従属する請求項18から21のいずれか一項に記載の方法。
- 固定または透過処理した細胞を分析するための請求項16から23のいずれか一項に記載の方法であって、細胞の試料が、固定剤または透過剤での処理によって固定される、方法。
- ステップb)が、試料を少なくとも1種の別の蛍光色素または発光化合物で処理するステップをさらに含み、ステップc)が、前記蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するステップをさらに含む、請求項16から24のいずれか一項に記載の方法。
- インタクト細胞とインタクトではない細胞とを識別するための請求項25に記載の方法であって、式(I)の化合物が細胞不透過性であり、ステップb)が、試料を、細胞透過性である第2の蛍光色素または発光化合物で処理するステップをさらに含み、ステップc)が、第2の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するステップをさらに含み、式(I)の化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性の検出が、インタクトではない細胞の存在と相関し、第2の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性の検出が、インタクト細胞の存在と相関する、方法。
- 第2の蛍光色素または発光化合物が、識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対する、式(I)の化合物の結合能より低い結合能を有し、結果として式(I)の化合物の存在下において、識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対する結合についてより低い効率で競合し、その結果、第2の蛍光色素または発光化合物が、インタクトではない細胞に対する結合から実質的に排除される、または式(I)の化合物によって遮蔽される、請求項26に記載の方法。
- 第2の蛍光色素または発光化合物が、式(II)の化合物:
[式中、Aは、C2〜8アルキレン基であり;R1、R2およびR3は、水素、C1〜4アルキル、C2〜4ジヒドロキシアルキル(ここで、窒素原子に結合している炭素原子はヒドロキシル基を保有せず、2個のヒドロキシル基によって置換されている炭素原子は存在しない)から独立して選択され、またはR2およびR3は一緒に、R2およびR3が結合している窒素原子とともに複素環式環を形成しているC2〜6アルキレン基を形成しており;
X1、X2およびX3は、水素、ヒドロキシル、NR1-A-NR2R3、ハロゲノアミノ、C1〜4アルキルオキシまたはC2〜8アルカノイルオキシから独立して選択される]である、請求項26または請求項27に記載の方法。 - X1およびX3ではなくX2がNR1-A-NR2R3である、請求項28に記載の方法。
- 潜在的に細胞毒性である、または別様に細胞死を誘導することができる作用物質の、細胞の試料に対する作用をモニターするために、インタクト細胞とインタクトではない細胞との識別が、細胞の試料が前記作用物質に曝露された後に行われる、請求項26から29のいずれか一項に記載の方法。
- ステップb)が、試料を少なくとも第3の蛍光色素または発光化合物で処理するステップをさらに含み、ステップc)が、少なくとも第3の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するステップおよび前記分光学的特性を、インタクト細胞および/またはインタクトではない細胞の特徴または特性と相関させるステップをさらに含む、請求項26から30のいずれか一項に記載の方法。
- 第3の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性が、式(I)の化合物の検出される分光学的特性と同様であり、かつ第2の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性とは違っており、第3の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性が、インタクト細胞の特徴または特性と相関する、請求項31に記載の方法。
- 第3の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性が、第2の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性と同様であり、かつ式(I)の化合物の検出される分光学的特性とは違っており、第3の蛍光色素または発光化合物の検出される分光学的特性が、インタクトではない細胞の特徴または特性と相関する、請求項31に記載の方法。
- ステップc)において検出される分光学的特性が、電磁スペクトルの所定の領域において放射される蛍光であり、ステップc)が、式(I)の化合物、第2のおよび任意選択により第3のおよび任意のさらなる蛍光色素または発光化合物を電磁放射線で励起するステップを含む、請求項26から33のいずれか一項に記載の方法。
- 式(I)の化合物、第2のおよび任意選択により第3の蛍光色素または発光化合物が、単一の電磁放射線源によって同時励起される、請求項34に記載の方法。
- 第3の蛍光色素または発光化合物の放射される蛍光が、i)好ましくは赤色および/または近赤外領域内の、式(I)の化合物の放射される蛍光のものと同様であり、ii)第2の蛍光色素または発光化合物の放射される蛍光のものとは違っている、電磁スペクトルの事前に定めた領域内にある、請求項32に従属する請求項35に記載の方法。
- 第3の蛍光色素または発光化合物の放射される蛍光が、i)好ましくは橙色領域内の、第2の蛍光色素または発光化合物の放射される蛍光のものと同様であり、ii)式(I)の化合物の放射される蛍光のものとは違っている、電磁スペクトルの事前に定めた領域内にある、請求項33に従属する請求項35に記載の方法。
- ステップc)が、フローサイトメトリーを使用して実施される、請求項26から37のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)が、細胞からの光散乱の測定をさらに含む、請求項26から38のいずれか一項に記載の方法。
- インタクト細胞とインタクトではない細胞とを識別する方法であって、
a)細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
b)識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対して、細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物の結合能より低い結合能を有し、結果として、細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物の存在下において、識別される細胞中の核酸および/または別の巨大分子材料に対する結合についてより低い効率で競合し、その結果、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物が、インタクトではない細胞に対する結合から実質的に排除される、または細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物によって遮蔽される、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物を含有する生物学的に適合性の溶液を調製するステップ;
c)細胞の試料を、前記生物学的に適合性の溶液で処理するステップ;および
d)細胞不透過性の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出し、それをインタクトではない細胞の存在と相関させ、細胞透過性の蛍光色素または発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出し、それをインタクト細胞の存在と相関させるステップ
を含む方法。 - 請求項26から40までのいすれか一項に記載の方法において使用するための検出システムであって、
前記方法において使用される蛍光色素および発光化合物を励起するための1つまたは複数の電磁放射線源;
蛍光色素および発光化合物による電磁放射線の吸収と関連した分光学的特性を検出するための複数の検出器;および
検出される分光学的特性をインタクト細胞およびインタクトではない細胞の存在と相関させ、それによってインタクト細胞とインタクトではない細胞とを識別するように適合された検出器分析システム
を含むシステム。 - 前記検出器が蛍光検出器である、請求項41に記載の検出システム。
- 蛍光色素および発光化合物を同時励起するための単一の電磁放射線源を有する、請求項41または請求項42に記載の検出システム。
- 複数の検出器が、蛍光色素および発光化合物のすべての分光学的特性を検出する検出器の対の形態である、請求項41から43のいずれか一項に記載の検出システム。
- 請求項1に記載の化合物の、少なくとも第2の蛍光色素または発光化合物との混合物を含む組成物。
- 請求項1に記載の化合物、ならびに関連する容器および試薬を含む、請求項16から39のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットオブパーツ(kit of parts)。
- 式(I)の化合物のアミノアルキルアミノ前駆体化合物を提供するステップ;および前記アミノアルキルアミノ前駆体化合物を四級化するステップを含む、請求項1に記載の化合物を製造する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1005939.2 | 2010-04-09 | ||
GBGB1005939.2A GB201005939D0 (en) | 2010-04-09 | 2010-04-09 | Method of analysing a cell or other biological material containing nucleic acid |
PCT/GB2011/050702 WO2011124927A1 (en) | 2010-04-09 | 2011-04-08 | Method of analysing a cell or other biological material containing a nucleic acid |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016209377A Division JP6586070B2 (ja) | 2010-04-09 | 2016-10-26 | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013528571A true JP2013528571A (ja) | 2013-07-11 |
JP2013528571A5 JP2013528571A5 (ja) | 2014-05-29 |
JP6033767B2 JP6033767B2 (ja) | 2016-11-30 |
Family
ID=42236073
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013503178A Active JP6033767B2 (ja) | 2010-04-09 | 2011-04-08 | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 |
JP2016209377A Active JP6586070B2 (ja) | 2010-04-09 | 2016-10-26 | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016209377A Active JP6586070B2 (ja) | 2010-04-09 | 2016-10-26 | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9051467B2 (ja) |
EP (2) | EP2556047B1 (ja) |
JP (2) | JP6033767B2 (ja) |
KR (2) | KR101957288B1 (ja) |
CN (1) | CN102947266B (ja) |
AU (2) | AU2011236610B2 (ja) |
BR (1) | BR112012025820B1 (ja) |
CA (1) | CA2797440C (ja) |
DK (2) | DK2556047T3 (ja) |
ES (1) | ES2676351T3 (ja) |
GB (1) | GB201005939D0 (ja) |
HU (1) | HUE038706T2 (ja) |
NO (1) | NO2556047T3 (ja) |
PL (1) | PL2556047T3 (ja) |
PT (1) | PT2556047T (ja) |
WO (1) | WO2011124927A1 (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201005939D0 (en) * | 2010-04-09 | 2010-05-26 | Biostatus Ltd | Method of analysing a cell or other biological material containing nucleic acid |
US8790892B2 (en) | 2011-04-04 | 2014-07-29 | Biotium, Inc. | Substituted anthraquinone dyes for cellular stains and enzyme detection |
JP2013094135A (ja) * | 2011-11-02 | 2013-05-20 | Waseda Univ | 人工ナノ材料の安全性を評価する方法 |
US9933341B2 (en) | 2012-04-05 | 2018-04-03 | Becton, Dickinson And Company | Sample preparation for flow cytometry |
EP2834367A4 (en) * | 2012-04-05 | 2016-03-23 | Becton Dickinson Co | SAMPLE PREPARATION FOR FLOW CYTOMETRY |
US8993259B2 (en) * | 2012-05-02 | 2015-03-31 | Charles River Laboratories, Inc. | Method of viability staining with membrane permeable fluorescent dye and membrane impermeable fluorescence quencher |
JP6482459B2 (ja) | 2012-05-02 | 2019-03-13 | チャールズ リバー ラボラトリーズ, インコーポレイテッド | 細胞サンプル中の生存細胞を検出する方法 |
WO2013166338A2 (en) | 2012-05-02 | 2013-11-07 | Charles River Laboratories, Inc. | Cell capture system and use thereof |
GB201214169D0 (en) * | 2012-08-08 | 2012-09-19 | Biostatus Ltd | New compounds and uses thereof |
WO2015095152A1 (en) * | 2013-12-17 | 2015-06-25 | The Penn State Research Foundation | Manipulation of light spectral quality to reduce parasitism by cuscuta and other plant parasites |
GB201610971D0 (en) | 2016-06-23 | 2016-08-10 | Biostatus Ltd | Compounds |
CN113667323B (zh) * | 2019-11-21 | 2023-07-14 | 苏州优逸兰迪生物科技有限公司 | 一种染料化合物的制备方法 |
CN112679543B (zh) * | 2020-12-29 | 2022-07-22 | 天津全和诚科技有限责任公司 | 一种亲脂性荧光素探针及其制备方法 |
CN113072937B (zh) * | 2021-04-12 | 2022-06-07 | 郑州大学 | 一种脂滴靶向碳点、制备方法及应用 |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB939513A (en) * | 1960-01-08 | 1963-10-16 | Gen Aniline & Film Corp | Basic anthraquinone dyestuffs containing quaternary ammonium groups |
US3442895A (en) * | 1962-10-29 | 1969-05-06 | Oreal | 2-tertiaryamino alkyl-amino anthraquinones,their acid addition and quaternary ammonium salts thereof |
US3467483A (en) * | 1962-10-29 | 1969-09-16 | Oreal | Dye stuffs comprising derivatives of anthraquinone for dyeing live human hair and use thereof |
US3646072A (en) * | 1970-07-27 | 1972-02-29 | Du Pont | Turquoise biscationic anthraquinone dyes |
JPS503337B1 (ja) * | 1964-08-06 | 1975-02-03 | ||
JPS52114784A (en) * | 1976-03-23 | 1977-09-26 | Ciba Geigy Ag | Dyeing and printing method of polyacrilonitrile material |
JPS5529793A (en) * | 1978-07-13 | 1980-03-03 | Oreal | Method of estimating ionic state of surface of keratin fibers* particularly human hair |
JPH04136802A (ja) * | 1990-09-28 | 1992-05-11 | Nippon Kayaku Co Ltd | 着色フィルター |
JPH09118832A (ja) * | 1995-08-07 | 1997-05-06 | Bristol Myers Squibb Co | 第4級アンモニウム側鎖をもつアントラキノン毛髪染料 |
JP2002531587A (ja) * | 1998-06-18 | 2002-09-24 | ユニヴァーシティ オヴ ウェールズ カレッジ オヴ メディスン | アントラキノンとその誘導体 |
JP2002539259A (ja) * | 1999-03-23 | 2002-11-19 | ハワード,エム.シャピロ | 細菌抗生物質耐性に対する抗生物質と核酸結合性化合物との組み合わせ |
WO2004060061A1 (en) * | 2002-12-16 | 2004-07-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Novel selective algaecides for control of cyanochloronta |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR1379649A (fr) * | 1963-06-20 | 1964-11-27 | Oreal | Nouveaux colorants anthraquinoniques et leur utilisation pour la teinture des cheveux |
JPS503337A (ja) | 1973-05-11 | 1975-01-14 | ||
US4353708A (en) * | 1978-07-13 | 1982-10-12 | L'oreal | Evaluation of the state of change of keratin fibers |
US5057413A (en) | 1988-06-13 | 1991-10-15 | Becton, Dickinson And Company | Method for discriminating between intact and damaged cells in a sample |
GB8923075D0 (en) | 1989-10-13 | 1989-11-29 | Patterson Laurence H | Anti-cancer compounds |
BR9916039A (pt) * | 1998-12-07 | 2001-12-04 | Eastman Chem Co | Nanocompósito de polìmero-argila, artigo;composição , e, processo para a preparação de umnanocompósito de polìmero-argila |
ATE342896T1 (de) * | 2000-02-28 | 2006-11-15 | Daiichi Pure Chemicals Co Ltd | Fluoreszierende proben zur quantitativen bestimmung von zink |
US20070082377A1 (en) | 2005-10-07 | 2007-04-12 | Olin Michael R | Cytotoxicity assays |
US9334281B2 (en) * | 2008-09-08 | 2016-05-10 | Enzo Life Sciences, Inc. | Fluorochromes for organelle tracing and multi-color imaging |
GB201005939D0 (en) * | 2010-04-09 | 2010-05-26 | Biostatus Ltd | Method of analysing a cell or other biological material containing nucleic acid |
-
2010
- 2010-04-09 GB GBGB1005939.2A patent/GB201005939D0/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-04-08 CN CN201180028424.3A patent/CN102947266B/zh active Active
- 2011-04-08 EP EP11720571.6A patent/EP2556047B1/en active Active
- 2011-04-08 AU AU2011236610A patent/AU2011236610B2/en active Active
- 2011-04-08 US US13/639,872 patent/US9051467B2/en active Active
- 2011-04-08 HU HUE11720571A patent/HUE038706T2/hu unknown
- 2011-04-08 WO PCT/GB2011/050702 patent/WO2011124927A1/en active Application Filing
- 2011-04-08 NO NO11720571A patent/NO2556047T3/no unknown
- 2011-04-08 BR BR112012025820-6A patent/BR112012025820B1/pt active IP Right Grant
- 2011-04-08 PT PT117205716T patent/PT2556047T/pt unknown
- 2011-04-08 KR KR1020187009266A patent/KR101957288B1/ko active IP Right Grant
- 2011-04-08 JP JP2013503178A patent/JP6033767B2/ja active Active
- 2011-04-08 PL PL11720571T patent/PL2556047T3/pl unknown
- 2011-04-08 EP EP18167949.9A patent/EP3366667B1/en active Active
- 2011-04-08 DK DK11720571.6T patent/DK2556047T3/en active
- 2011-04-08 CA CA2797440A patent/CA2797440C/en active Active
- 2011-04-08 KR KR1020127029033A patent/KR101846491B1/ko active IP Right Grant
- 2011-04-08 ES ES11720571.6T patent/ES2676351T3/es active Active
- 2011-04-08 DK DK18167949.9T patent/DK3366667T3/da active
-
2015
- 2015-06-05 US US14/731,647 patent/US11255761B2/en active Active
-
2016
- 2016-10-26 AU AU2016250384A patent/AU2016250384B2/en active Active
- 2016-10-26 JP JP2016209377A patent/JP6586070B2/ja active Active
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB939513A (en) * | 1960-01-08 | 1963-10-16 | Gen Aniline & Film Corp | Basic anthraquinone dyestuffs containing quaternary ammonium groups |
US3442895A (en) * | 1962-10-29 | 1969-05-06 | Oreal | 2-tertiaryamino alkyl-amino anthraquinones,their acid addition and quaternary ammonium salts thereof |
US3467483A (en) * | 1962-10-29 | 1969-09-16 | Oreal | Dye stuffs comprising derivatives of anthraquinone for dyeing live human hair and use thereof |
JPS503337B1 (ja) * | 1964-08-06 | 1975-02-03 | ||
US3646072A (en) * | 1970-07-27 | 1972-02-29 | Du Pont | Turquoise biscationic anthraquinone dyes |
JPS52114784A (en) * | 1976-03-23 | 1977-09-26 | Ciba Geigy Ag | Dyeing and printing method of polyacrilonitrile material |
JPS5529793A (en) * | 1978-07-13 | 1980-03-03 | Oreal | Method of estimating ionic state of surface of keratin fibers* particularly human hair |
JPH04136802A (ja) * | 1990-09-28 | 1992-05-11 | Nippon Kayaku Co Ltd | 着色フィルター |
JPH09118832A (ja) * | 1995-08-07 | 1997-05-06 | Bristol Myers Squibb Co | 第4級アンモニウム側鎖をもつアントラキノン毛髪染料 |
JP2002531587A (ja) * | 1998-06-18 | 2002-09-24 | ユニヴァーシティ オヴ ウェールズ カレッジ オヴ メディスン | アントラキノンとその誘導体 |
JP2002539259A (ja) * | 1999-03-23 | 2002-11-19 | ハワード,エム.シャピロ | 細菌抗生物質耐性に対する抗生物質と核酸結合性化合物との組み合わせ |
WO2004060061A1 (en) * | 2002-12-16 | 2004-07-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Novel selective algaecides for control of cyanochloronta |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
JPN5013006241; Katzhendler J. et al.: 'Synthesis of aminoanthraquinone derivatives and their in vitro evaluation as potential anti-cancer d' European Journal of Medicinal Chemistry vol.24 no.1, 19890101, p.23-30 * |
JPN5013006242; N. P. Dhammika Nanayakkara et al.: 'Synthesis of water-soluble 9,10-anthraquinone analogues with potent cyanobactericidal activity towar' Journal of Agricultural and Food Chemistry vol.56 no.3, 20080201, p.1002-1007 * |
JPN5013006243; Murdock, K. C. et al.: 'Antitumor Agents 1. 1,4-Bis[(aminoalkyl)amino]-9,10-anthracenediones' Journal of Medicinal Chemistry vol.22 no.9, 19790101, p.1024-1030 * |
JPN5013006244; Biggerstaff J. P. et al.: 'New methodology for viability testing in environmetal samples' Molecular and Cellular Probes vol.20 no.2, 20060401, p.141-146 * |
JPN6015005923; 市川光男ほか: '1,4-ビス(置換アミノ)- および 1-(置換アミノ)-4-オキシアントラキノン系カチオン染料合成' 工業化学雑誌 vol.67 no.1, 1964, p.138-142 * |
JPN6015005924; 市川光男ほか: '1-置換アミノ-, ならびに 1,5- および 1,8-ビス(置換アミノ)アントラキノン系カチオン染料の合成' 工業化学雑誌 vol.67 no.1, 1964, p.142-145 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6586070B2 (ja) | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 | |
AU2011236610A1 (en) | Method of analysing a cell or other biological material containing a nucleic acid | |
US5624798A (en) | Detection method of nucleic acid by use of fluorescent pyrylium stain in intercalation into nucleic acids | |
KASTEN | Probes: Properties, History and Applications | |
Liu et al. | Two-photon fluorescence imaging of RNA in nucleoli and cytoplasm in living cells based on low molecular weight probes | |
Rich et al. | Elimination of autofluorescence in fluorescence correlation spectroscopy using the AzaDiOxaTriAngulenium (ADOTA) fluorophore in combination with time-correlated single-photon counting (TCSPC) | |
CN110981842A (zh) | 一种区分正常细胞和癌细胞的特异性检测脂滴的荧光探针及应用 | |
Zhang et al. | A robust camphor-based colorimetric and fluormetric dual-modal probe with a large Stokes shift for real-time monitoring of endogenous labile Fe2+ in vivo and in vitro | |
Kolińska et al. | Dyes based on the 2 (1H)‐quinolone skeleton as potential colorimetric and fluorescent sensors for cyanide anions | |
CN109369565A (zh) | 一种苯并噻唑衍生物及其制备方法和应用 | |
Jin | Background-free cytometry using rare earth complex bioprobes | |
CN114057604A (zh) | 一种细胞核荧光染料及其染色方法 | |
EP3475257B1 (en) | Acetalanthraquinone derivatives useful for cellular staining | |
CA2488379A1 (en) | Selective chromophores | |
US11965100B2 (en) | Aggregation-induced emission luminogens useful for cancer cell discrimination and monitoring | |
EP2367805B1 (en) | Modified actinomycin-based nucleic acid stains and methods of their use | |
Espinar Barranco | Estudio fotofísico de nuevas sondas fluorescentes y su aplicación en sistemas biológicos de interés biomédico | |
US20190345121A1 (en) | Pyrene-based compounds for intracellular organelle imaging applications | |
Shapiro | Fluorescent probes | |
WO2013075285A1 (zh) | 一类双苄基五甲川菁荧光染料、其制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140408 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140408 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20150212 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150223 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150520 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150824 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160229 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160520 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160829 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160926 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161026 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6033767 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |