JP2013516988A - 骨髄増殖性新生物および他の血液リンパ系悪性腫瘍を有する患者におけるlnk遺伝子の変異 - Google Patents
骨髄増殖性新生物および他の血液リンパ系悪性腫瘍を有する患者におけるlnk遺伝子の変異 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013516988A JP2013516988A JP2012549049A JP2012549049A JP2013516988A JP 2013516988 A JP2013516988 A JP 2013516988A JP 2012549049 A JP2012549049 A JP 2012549049A JP 2012549049 A JP2012549049 A JP 2012549049A JP 2013516988 A JP2013516988 A JP 2013516988A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lnk
- mutation
- domain
- jak2
- neoplasm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101000616523 Homo sapiens SH2B adapter protein 3 Proteins 0.000 title claims abstract description 179
- 230000035772 mutation Effects 0.000 title claims abstract description 100
- 201000007224 Myeloproliferative neoplasm Diseases 0.000 title claims description 37
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 title 1
- 102100021778 SH2B adapter protein 3 Human genes 0.000 claims abstract description 168
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 60
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 27
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 81
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 35
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 35
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 33
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 claims description 25
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 claims description 25
- 102200087780 rs77375493 Human genes 0.000 claims description 23
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 claims description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 12
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 12
- 102000010995 Pleckstrin homology domains Human genes 0.000 claims description 11
- 108050001185 Pleckstrin homology domains Proteins 0.000 claims description 11
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 11
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 10
- 108010029477 STAT5 Transcription Factor Proteins 0.000 claims description 8
- 102100024481 Signal transducer and activator of transcription 5A Human genes 0.000 claims description 8
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 claims description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 claims description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 claims description 2
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 8
- 238000004590 computer program Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 40
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 20
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 description 19
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 description 19
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 15
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 229940122245 Janus kinase inhibitor Drugs 0.000 description 12
- 102100034196 Thrombopoietin receptor Human genes 0.000 description 12
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 12
- 208000003476 primary myelofibrosis Diseases 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 8
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 8
- 208000032027 Essential Thrombocythemia Diseases 0.000 description 7
- 230000035986 JAK-STAT signaling Effects 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 102200137557 rs121913615 Human genes 0.000 description 6
- 101000617830 Homo sapiens Sterol O-acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 5
- 102000042838 JAK family Human genes 0.000 description 5
- 108091082332 JAK family Proteins 0.000 description 5
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 102100021993 Sterol O-acyltransferase 1 Human genes 0.000 description 5
- 101000697584 Streptomyces lavendulae Streptothricin acetyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 5
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 4
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 description 4
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 229940121730 Janus kinase 2 inhibitor Drugs 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 102000035181 adaptor proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005764 adaptor proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091028733 RNTP Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 238000003491 array Methods 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100485276 Arabidopsis thaliana XPO1 gene Proteins 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 101150009057 JAK2 gene Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102100030264 Pleckstrin Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101710130181 Protochlorophyllide reductase A, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108050003190 SH2B adapter protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 1
- 101100407739 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PET18 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005485 Thrombocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000000887 Transcription factor STAT Human genes 0.000 description 1
- 108050007918 Transcription factor STAT Proteins 0.000 description 1
- 229940127174 UCHT1 Drugs 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960001694 anagrelide Drugs 0.000 description 1
- OTBXOEAOVRKTNQ-UHFFFAOYSA-N anagrelide Chemical compound N1=C2NC(=O)CN2CC2=C(Cl)C(Cl)=CC=C21 OTBXOEAOVRKTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- POZRVZJJTULAOH-LHZXLZLDSA-N danazol Chemical compound C1[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=CC2=C1C=NO2 POZRVZJJTULAOH-LHZXLZLDSA-N 0.000 description 1
- 229960000766 danazol Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009125 negative feedback regulation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 108010026735 platelet protein P47 Proteins 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007388 punch biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 108010056030 retronectin Proteins 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007862 touchdown PCR Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
本発明は、米国立衛生研究所によって与えられた契約NIH U19 AI057229、NIH 0158 G KB065およびNIH 2P01 CA034233−22A1の下での政府援助を得て為された。政府は本発明に一定の権利を有する。
本発明の態様は、薬のスクリーニングと開発、遺伝子治療、および変異LNK遺伝子の作用または変異LNK遺伝子から生じる作用を予防するまたは改善する他の用途のための、変異LNK遺伝子および変異タンパク質の発現をさらに含む。
便宜上、本明細書、実施例および付属の特許請求の範囲で使用される特定の用語をここに集める。
本明細書で使用される「ストリンジェントなアッセイ条件」という用語は、アッセイにおいて所望レベルの特異性を提供するのに十分な相補性を有する核酸、例えば表面結合核酸および溶液相核酸の結合対を生じさせるのに適合するが、所望の特異性を提供するのに十分な相補性を有さない結合成員の間での結合対の形成にはより適合性でない条件を指す。ストリンジェントなアッセイ条件は、ハイブリダイゼーションと洗浄条件の両方の総和または組合せ(全体)である。
ストリンジェントなアッセイ条件は、少なくとも上記の代表的条件と同程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件であり、その場合、上記の特定条件と比較して、所与のセットの条件下で所望特異性を提供するのに十分な相補性を欠く付加的な結合複合体が実質的に生成されない場合、前記所与のセットの条件は少なくともストリンジェントであるとみなされ、その場合、「実質的に超えない」とは、約5倍未満、典型的には約3倍未満であることを意味する。他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は当分野において公知であり、適宜に使用され得る。
本発明の態様は、被験者を、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有するまたはその素因があると分類する方法であって、
被験者からの血球を含んだ試料に由来するLNK遺伝子の配列を決定すること;および
決定されたLNK配列が少なくとも1つの変異を有する場合、被験者を、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有するまたはその素因があると分類すること
を含む方法を含む。
ある実施形態では、試料は血液試料である。
ある実施形態では、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍は、JAK2 V617F陰性骨髄増殖性新生物(MPN)である。
血液リンパ系新生物または悪性腫瘍の素因があることが既知の被験者からのLNK配列;および
血液リンパ系新生物または悪性腫瘍の素因がないことが既知の被験者からのLNK配列
の一方または両方を含む。
本開示によって提供される方法はまた、全体的または部分的に自動化され得る。
本発明の態様は、被験者において血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を治療するための候補治療薬を同定する方法であって、
野生型LNKと比較してサイトカインシグナル伝達の増大を細胞に付与する、変異LNKタンパク質を含有する細胞を薬剤と接触させること;および
前記薬剤が対照と比較して細胞におけるサイトカインシグナル伝達を低減する場合、前記薬剤を被験者の血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を治療するための候補治療薬として同定すること
を含む方法を含む。
ある実施形態では、接触工程は、細胞をサイトカインと接触させることをさらに含む。ある実施形態では、サイトカインはTPOである。
本発明の態様は、LNK変異体が媒介するサイトカインシグナル伝達(例えばTPOシグナル伝達からの)の増大を阻害する薬剤の有効量を投与することを含む、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有する被験者を治療することを含む。ある実施形態では、前記薬剤は、LNK変異体が媒介するSTAT3および/またはSTAT5の活性化をブロックする。
様々なタイプの投与に適した製剤に関するさらなる指針は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mace Publishing Company,Philadelphia,PA,17th ed.(1985)に認められ得る。薬物送達のための方法の簡単な総説については、Langer,Science 249:1527−1533(1990)参照。
本明細書で述べる医薬組成物は、様々な異なる方法で投与することができる。例としては、経口、鼻内、経直腸、局所、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下(subcutaneous、subdermal)、経皮、髄腔内および頭蓋内方法によって医薬的に許容される担体を含有する組成物を投与することを含む。
LNK遺伝子配列および血液リンパ系新生物または悪性腫瘍とそれらの関連性についてのデータベースも提供される。配列および対応する関連性は、それらの使用を容易にする様々な媒体で(例えばユーザーがアクセス可能/読み取り可能な形式で)提供され得る。「媒体」は、本発明の発現プロフィール情報を含む製造物を指す。本発明のデータベースは、コンピュータ読み取り可能媒体、例えばコンピュータを使用するユーザーが直接読み取り、アクセスすることができる任意の媒体上に記録され得る。そのような媒体は、フレキシブルディスク、ハードディスク記憶媒体および磁気テープなどの磁気記憶媒体;CD−ROMなどの光記憶媒体;RAMおよびROMなどの電気記憶媒体;ならびに磁気/光記憶媒体などのこれらのカテゴリーのハイブリッドを含むが、これらに限定されない。当業者は、現在公知のコンピュータ読み取り可能媒体のいずれかを使用して、どのようにして本発明のデータベース情報の記録を含む製造物を作製できるかを容易に認識し得る。「記録される」とは、当分野で公知の任意の方法を使用して、コンピュータ読み取り可能媒体に情報を保存するためのプロセスを指す。保存した情報にアクセスするために使用される手段に基づき、任意の好都合なデータ記憶構造を選択し得る。様々なデータ処理プログラムおよびフォーマット、例えばワードプロセシングテキストファイル、データベースフォーマット等が保存のために使用できる。したがって、本発明の発現プロフィールデータベースはユーザーによってアクセス可能である、すなわちデータベースファイルはユーザーの読み取り可能なフォーマット(例えばユーザーがコンピュータを制御する場は、コンピュータが読み取り可能なフォーマット)で保存される。
また、上記で述べた方法の1またはそれ以上を実施するための試薬、システムおよびそれらのキットも提供される。本発明の試薬、システムおよびそれらのキットは大きく異なり得る。関心対象の試薬は、LNK核酸および/またはタンパク質配列を決定する際に使用するために特に設計された試薬を含む。システムという用語は試薬の収集物を指すが、例えば、同じまたは異なる供給源からの試薬の収集物を購入することにより、蓄積されたものを指す。キットという用語は、一緒に提供される、例えば販売される、試薬の収集物を指す。
実験
概要
LNKは、トロンボポエチン(TPO)およびJAK2を阻害するアダプタータンパク質である。ここで本発明者らは、JAK2 V617F陰性骨髄増殖性新生物を有する2名の患者における新規LNK変異を報告する。1名の患者は、中途終止コドンおよびプレクストリン相同(PH)ドメインおよびSH2ドメインの喪失をもたらす5塩基対の欠失およびミスセンス変異を示した。2番目の患者は、PHドメイン内にミスセンス変異(E208Q)を有していた。これらのLNK変異体で形質導入したBaF3−MPL細胞は、TPO依存性増殖およびシグナル伝達の調節不全を示した。サイトカイン応答性CD34+細胞が両方の患者において異常に豊富であった。したがって、LNKの負のフィードバック調節の喪失はJAK−STATシグナル伝達の異常を推進し、MPNの病因の新規機構を構成する。
チロシンキナーゼの活性化変異によるシグナル伝達異常は、慢性骨髄増殖性新生物(MPN)の顕著な特徴である。JAK2のエクソン14におけるV617F変異は、真性赤血球増加症(PV)を有する患者の>95%、ならびに本態性血小板血症(ET)および原発性骨髄線維症(PMF)を有する患者の約50%において記述されている(参考文献1〜4)。JAK2遺伝子のエクソン12における機能獲得型変異が、V617F変異を有さないPV患者のごく少数で認められており(参考文献5)、またトロンボポエチン(TPO)受容体MPLにおける活性化変異(W515K/L)が、JAK2 V617F陰性PMFおよびETを有する患者の約5%で同定されている(参考文献6、7)。したがって、ETおよびPMF患者の約40〜50%は明確な遺伝的異常を有さない。JAK2またはMPLに変異が存在しない場合でも、JAK−STATシグナル伝達の活性化を一部のMPN患者で明らかにすることができ(参考文献8〜10)、この経路における他の調節要素の変化がMPNの病因に寄与し得ることを示唆する。
JAK2 V617F陰性MPNにおける体細胞性LNK変異の同定
PHおよびSH2ドメインを含むLNKの領域(部分的エクソン2〜エクソン7)(図1A)の直接塩基配列決定を、JAK2 V617F陰性MPN(世界保健機構によって定義される)を有する33名の患者からの試料に関して実施し(表1)、LNKのエクソン2において2つの新規変異を同定した。図1Bに示すように、中途終止コドンを導く、5bpの欠失およびミスセンス変異(NM_005475.2:c.[603_607delGCGCT;613C>G]、以下DELと称する)が、PMFを有する患者01において同定された。この変異は、PHドメインおよびSH2ドメインの両方の不在を生じさせる(図1CおよびD)。
MPNの病因におけるLNK変異の機能的影響を検討するため、野生型(WT)または変異型LNKをレトロウイルスによってTPO依存性BaF3−MPL細胞株で発現させた。BaF3−MPL細胞はTPO用量依存性増殖を示し、この増殖はWT LNKの発現によって阻害された(図2A)。先の試験(参考文献13)と一致して、SH2ドメインを破壊する合成点変異(R392E)は、LNKが媒介するTPO依存性増殖の阻害を排除した。同様に、DEL変異体は、LNKの負のフィードバック機能の喪失と一致して、TPO媒介性増殖を阻害する能力を欠如していた。これに対し、E208Q変異体は部分的な阻害活性を保持しており、LNK変異が様々な表現型を付与し得ることを示唆した。この区別的な作用は、下記の、これらの変異を担持するMPN患者からの一次試料におけるJAK−STATシグナル伝達の分析においてさらに強調された。
本発明者らは、健常ドナーならびにLNK、JAK2 V617FまたはMPL W515L変異を担持するMPN患者からの循環未熟骨髄性細胞におけるJAK−STATシグナル伝達を検討した(図6)。図3A(左側)に示すように、TPOまたはG−CSFでの刺激は、健常ドナーの試料と比較してDELにおいて著明に増大している独特のリン酸化STAT3/5(pSTAT3+/5+)亜集団を明らかにした。同様のサイトカイン応答性pSTAT3+/5+亜集団がJAK2 V617F陽性およびMPL W515L陽性PMF試料に関して認められ、これがPMF患者の間で共有される表現型であり得ることを示唆した。興味深いことに、E208Q変異を担持する患者からの細胞は、TPOに応答してSTAT3/5リン酸化の増大を示したが、GCSFでは増大を示さず、LNK機能の部分的喪失が特定のサイトカインに応答して区別的なSTAT活性化プロフィールをもたらし得ることを示唆した。STAT3/5活性化をJAK阻害剤Iの存在下でも測定した(図3A、右側)。各々の場合に、pSTAT3+/5+亜集団はJAK阻害によって完全に根絶され、STAT3/5活性化がJAK活性に依存することを確認した。
初めてヒト疾患に関係づけられた、本発明者らのMPN患者のサブセットにおけるLNK遺伝子の変異の同定は、阻害性アダプタータンパク質の破壊が、典型的にはチロシンキナーゼ(すなわちJAK2、MPL)の活性化変異によって駆動される疾患を表現型模写できることを明らかにする。本発明者らは、33名のうち2名(6%)のJAK2 V617F陰性MPN患者においてLNK変異を検出した。この頻度は、ETおよびPMFにおけるMPL W515変異の発生率に類似するが、LNK変異の正確な頻度ならびにMPNの臨床病理学的特徴および予後とのそれらの関連性を決定するには、より大きなコホートのスクリーニングが必要である。以前のインビトロ試験は、LNKがMPL W515LおよびJAK2 V617Fの両方の活性を阻害できることを明らかにしているので(参考文献13、18)、LNK機能の喪失もまた、これらのMPNの病因における協力的な事象として起こり得ることが考えられる。
臨床試料
すべての臨床試料は、インフォームドコンセントおよびスタンフォード大学医学部の治験審査委員会による承認を得て入手した。末梢血試料をヘパリンナトリウム中で得て、直ちにサイトカインで刺激するか、または標準的な手順に従ったフィコール密度勾配分離による末梢血単核細胞(PBMC)の単離後にサイトカインで刺激した(参考文献24、26)。皮膚線維芽細胞を皮膚パンチ生検の機械的解離によって単離し、標準的な方法を用いて短期単層培養において樹立した。
ゲノムDNA(gDNA)を、QIAamp DNA Blood MiniまたはGentra Purgene Blood Kit(Qiagen,Valencia,CA)のいずれかを製造者の説明書に従って使用して末梢血試料または培養した皮膚線維芽細胞から抽出した。gDNAの品質と量を、Nanodrop分光光度計(Thermo Scientific,Wilmington,DE)を用いて評価した。PHドメインおよびSH2ドメインを含む、LNKエクソン2〜7についてのPCRおよび配列決定プライマーを以下のように設計した:
(配列番号:1)LNK_PART_EX2_F:CGGAGAGGCTGCTGAGAC
(配列番号:2)LNK_PART_EX2_R:TTGCACTCGGCCTAAAAGTT
(配列番号:3)LNK_PART_EX2_F_nest:AAGAAGTTCCTGCCCTGGAG
(配列番号:4)LNK_PART_EX2_R_nest:CTGGAAAGCCATCACACCTC
(配列番号:5)LNK EX 3−5_F:AACTCAGGCCTGGCTGG
(配列番号:6)LNK EX 3−5_R:GGGCTACCTTATGTCCTGGG
(配列番号:7)LNK Ex 3−5_F_INTSEQ:GGTGGGAGACGAGCAG
(配列番号:8)LNK Ex 3−5_R_INTSEQ:CTGTGCACTCCGAGAGC
(配列番号:9)LNK_Ex6−7_F:GTACGCTGGAACCCAGACTC
(配列番号:10)LNK_Ex6−7_R:GTCTGCAGCAAGCCTCTACC
(配列番号:11)LNK_Ex6−7_Nest_F:ACTCAGCCCAGGACATAAGG
(配列番号:12)LNK_Ex6−7_Nest_R:GCCTCTACCCTCTACCCAGTG
(配列番号:13)LNK_EX6_NEST_SEQF:GCTCATGGAGTGTTCCTGGT
(配列番号:14)LNK_EX6_NEST_SEQR:AGGTGCTGTGGGAGGAGAG
BaF3−MPL細胞はJ.Tyner/B.Druker(Oregon Health and Sciences University,Portland,OR)の好意によって提供され、これらを10%FBSおよびIL−3(1ng/mL)(Peprotech,Rocky Hill,NJ)を含有するRPMI培地に維持した。増殖アッセイのために、BaF3−MPL細胞をサイトカイン不含培地で2回洗浄し、10%FBSおよびTPO(0〜10ng/mL)(Peprotech, Rocky Hill, NJ)を含むRPMIに再塗布した。JAK阻害剤増殖アッセイのために、BaF3−MPL細胞を様々な濃度のDMSO対照またはJAK阻害剤I(EMD/Calbiochem,San Diego,CA)の存在下でTPO(10ng/mL)と共に増殖させた。ヨウ化プロピジウム(PI)で染色することによって生細胞を毎日計数し、LSRIIフローサイトメータでTruCountビーズ(BD Biosciences,San Jose,CA)を用いて定量した。Phoenix−Ecoレトロウイルスパッケージング細胞を、10%FBSを含有するDMEM培地に維持した。
野生型LNKおよびDEL配列をGateway適合性ドナーベクター中のDNA 2.0(Menlo Park,CA)によって合成した。pSRαレトロウイルス発現ベクターはJ.Tyner/B.Drukerの好意によって提供され、Gateway Vector Conversion System(Invitrogen,Carlsbad,CA)を製造者の説明書に従って使用してGateway適合性デスティネーションベクター(pSRα−GW)に転換した。WTおよびDEL配列を、LRクロナーゼ(Invitrogen,Carlsbad,CA)を用いてpSRα−GWに移入した。E208QおよびR392E変異体を、QuikChange Lightning Kit(Stratagene,La Jolla,CA)を用いてWT LNKから作製し、直接塩基配列決定によって確認した。
Lipofectamine 2000(Invitrogen,Carlsbad,CA)を使用してレトロウイルス発現ベクターをPhoenix−Eco細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの2日後にレトロウイルス上清を収集し、レトロネクチン被覆プレート上でポリブレン(4mg/mL)と共にBaF3−MPL細胞に添加して、1500×gで90分間遠心分離した。形質導入の2日後、形質導入された細胞が安定に増殖し続けるまで、細胞を少なくとも1週間G418(750ng/mL)中で選択した。
BaF3−MPL細胞をサイトカイン不含培地中で一晩飢餓させ、15分〜16時間にわたる時点で37℃にてTPO(1または10ng/mL)で刺激した。末梢血試料をTPO(50ng/mL)またはG−CSF(20ng/mL)(Peprotech,Rocky Hill,NJ)のいずれかで37℃にて15分間刺激した。PBMCを、サイトカイン刺激の前に10%FBSを含有するRPMI中で37℃にて1時間休ませた。JAK阻害剤実験のために、PBMCをJAK阻害剤I(EMD/Calbiochem,San Diego,CA)5μMと共に最後の30分間インキュベートした後、サイトカインで刺激した。サイトカイン刺激後、細胞をパラホルムアルデヒド(Electron Microscopy Sciences,Hatfield,PA)に固定した。末梢血試料のために、赤血球を低張条件下で溶解した。次に、固定した細胞を氷冷メタノール中で透過処理し、標準的な手順に従って細胞表面マーカーおよび/または細胞内リン酸特異的エピトープを染色した(参考文献24、26)。以下の抗体を使用した(特に断りのない限り、すべての抗体はBD Biosciences,San Jose,CAから得た):pSTAT3(pY705、クローン4/P)、pSTAT5(pY694、クローン47)、pJAK2(pY1007/1008、Cell Signaling Technology,Danvers,MA)、CD34(クローン8G12)、CD38(クローンHIT2、Invitrogen,Carlsbad,CA)、CD14(クローンM5E2)、CD66(クローンB1.1)、CD33(クローンP67.6)、CD3(クローンUCHT1、Beckman Coulter,Brea,CA)。細胞をBD LSRIIフローサイトメータで測定した。選別実験のために、BD FACSAria IIセルソータを用いて細胞を直接PBS中に選別した。フローサイトメトリのデータをFACSDivaソフトウエアで入手し、FlowJo(Tree Star,Ashland,OR)またはCytobankを用いて標準的な手順に従って解析した(参考文献24、26)。
選別した細胞からのDNAを、RecoverALL(Ambion,Austin,TX)を製造者の説明書に従って使用して抽出した。Power SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)を使用してRotor−Gene 3000(Corbett/Qiagen,Valencia,CA)で、5%DMSOの存在下に3組の複製と共に増幅を実施した。LNKの両方の対立遺伝子に区別なくハイブリダイズするプライマー[(配列番号:15)GCTGAAGGAGGCGGTGCTおよび(配列番号:16)GCTGTCCATGGAGGCCTCGT)]ならびに変異体(DEL)対立遺伝子に特異的なプライマー[(配列番号:17)GGAGGCGGTGCTATAGCGTおよび(配列番号:16)GCTGTCCATGGAGGCCTCGT)]を使用して全LNKまたは変異LNKのいずれかを増幅した。WTまたは変異LNK DNAプラスミドの段階希釈を使用して別々の標準曲線を構築した。変異LNK対立遺伝子の相対的存在率を、分析した細胞サブセット内の変異LNK対全LNKの絶対濃度の比として推定した。
患者01は、2007年に疲労を呈した75歳の男性であった。理学的検査は、肋骨縁の下の20cm以上の巨脾腫が顕著であった。白血球数は12,100/mm3、ヘモグロビンは6.3g/dL、血小板数は323,000/mm3であった。末梢血スメアは、涙滴赤血球および有核赤血球形態ならびに未熟骨髄性細胞を含む白赤芽球症を示した。骨髄穿刺液は針骨状(aspiculate)であり、細胞遺伝学分析は実施しなかった。骨髄生検は、巨核球の過形成およびクラスタリングを伴うびまん性の著明な線維症を明らかにした。フローサイトメトリは、末梢血中で6%および骨髄で8%の芽細胞を示した。JAK2 V617F変異分析は陰性であった。原発性骨髄線維症の診断が与えられた。患者は赤血球輸血依存性であり、プレドニゾン、ダナゾール、エリスロポエチンおよびヒドロキシ尿素を含むいくつかの療法に対して不応答性であった。患者は現在、JAK2阻害剤臨床試験のために考慮されている。
LNK変異体の細胞内局在の検査:これまでの試験は、LNKがPHドメインを介して形質膜に局在し、形質膜においてMPLおよびJAK2と直接相互作用することを示した(Bersenev et al.,J.Clin.Invest 2008,118:2832−2844;およびGery et al.,Blood 2007,110:3360−3364)。LNK SH2変異体R392EおよびSH2ドメインを欠く欠失変異体は、どちらも形質膜に局在する能力を保持する。しかし、SH2ドメインとPHドメインの両方を欠く欠失変異体(del PH/SH2)はこの能力を喪失する(Gery et al.,Blood 2007,110:3360−3364)。LNKのN末端(二量体化ドメインを含む)、次いでPHドメインの直前の中途終止コドンを保持するこの変異体は、本発明者らが同定したLNK DEL変異体に著しく類似する(図7)。それゆえ、本発明者らは、LNK DEL変異体もまた、もはや形質膜に局在しないと予測する。この仮説を調べるため、野生型LNKならびにLNK DELおよびE208Q変異体を発現する細胞をLNK特異的抗体で染色し、共焦点顕微鏡で検査する免疫蛍光実験を実施する予定である。LNKに特異的な市販の抗体が利用可能であるが、本発明者らは、これらの実験を容易にするためにLNKのN末端にエピトープタグ(例えばHAタグ)を導入するつもりである。
1.Baxter EJ,Scott LM,Campbell PJ,et al.Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disorders.Lancet 2005;365:1054−61.
2.James C,Ugo V,Le Couedic JP,et al.A unique clonal JAK2 mutation leading to constitutive signalling causes polycythaemia vera.Nature 2005;434:1144−8.
3.Kralovics R,Passamonti F,Buser AS,et al.A gain−of−function mutation of JAK2 in myeloproliferative disorders.N Engl J Med 2005;352:1779−90.
4.Levine R,Wadleigh M,Cools J,et al.Activating mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera,essential thrombocythemia,and myeloid metaplasia with myelofibrosis.Cancer Cell 2005;7:387−97.
5.Scott LM,Tong W,Levine R,et al.JAK2 exon 12 mutations in polycythemia vera and idiopathic erythrocytosis.N Engl J Med 2007;356:459−68.
6.Pikman Y,Lee BH,Mercher T,et al.MPLW515L is a novel somatic activating mutation in myelofibrosis with myeloid metaplasia.PLoS Med 2006;3:e270.
7.Pardanani A,Levine R,Lasho T,et al.MPL515 mutations in myeloproliferative and other myeloid disorders:a study of 1182 patients.Blood 2006;108:3472−6.
8.Teofili L,Martini M,Cenci T,et al.Different STAT−3 and STAT−5 phosphorylation discriminates among Ph−negative chronic myeloproliferative diseases and is independent of the V617F JAK−2 mutation.Blood 2007;110:354−9.
9.Heller P,Lev P,Salim J,et al.JAK2V617F mutation in platelets from essential thrombocythemia patients:correlation with clinical features and analysis of STAT5 phosphorylation status.Eur J Haematol 2006;77:210−6.
10.Mesa R,Tefferi A,Lasho T,et al.Janus kinase 2(V617F) mutation status,signal transducer and activator of transcription−3 phosphorylation and impaired neutrophil apoptosis in myelofibrosis with myeloid metaplasia.Leukemia 2006;20:1800−8.
11.Rudd CE.Lnk adaptor:novel negative regulator of B cell lymphopoiesis.Sci STKE 2001;2001:PE1.
12.Bersenev A,Wu C,Balcerek J,Tong W.Lnk controls mouse hematopoietic stem cell selfrenewal and quiescence through direct interactions with JAK2.J Clin Invest 2008.
13.Gery S,Gueller S,Chumakova K,Kawamata N,Liu L,Koeffler HP.Adaptor protein Lnk negatively regulates the mutant MPL,MPLW515L associated with myeloproliferative disorders.Blood 2007;110:3360−4.
14.Takaki S,Morita H,Tezuka Y,Takatsu K.Enhanced hematopoiesis by hematopoietic progenitor cells lacking intracellular adaptor protein,Lnk.J Exp Med 2002;195:151−60.
15.Velazquez L,Cheng AM,Fleming HE,et al.Cytokine signaling and hematopoietic homeostasis are disrupted in Lnk−deficient mice.J Exp Med 2002;195:1599−611.
16.Tong W,Lodish HF.Lnk inhibits Tpo−mpl signaling and Tpo−mediated megakaryocytopoiesis.J Exp Med 2004;200:569−80.
17.Buza−Vidas N,Antonchuk J,Qian H,et al.Cytokines regulate postnatal hematopoietic stem cell expansion:opposing roles of thrombopoietin and LNK.Genes Dev 2006;20:2018−23.
18.Gery S,Cao Q,Gueller S,Xing H,Tefferi A,Koeffler HP.Lnk inhibits myeloproliferative disorder−associated JAK2 mutant,JAK2V617F.J Leukoc Biol 2009;85:957−65.
19.Carpten JD,Faber AL,Horn C,et al.A transforming mutation in the pleckstrin homology domain of AKT1 in cancer.Nature 2007;448:439−44.
20.Shoji K,Oda K,Nakagawa S,et al.The oncogenic mutation in the pleckstrin homology domain of AKT1 in endometrial carcinomas.Br J Cancer 2009;101:145−8.
21.Tong W,Zhang J,Lodish HF.Lnk inhibits erythropoiesis and Epo−dependent JAK2 activation and downstream signaling pathways.Blood 2005;105:4604−12.
22.Takizawa H,Kubo−Akashi C,Nobuhisa I,et al.Enhanced engraftment of hematopoietic stem/progenitor cells by the transient inhibition of an adaptor protein,Lnk.Blood 2006;107:2968−75.
23.Jamieson CH,Gotlib J,Durocher JA,et al.The JAK2 V617F mutation occurs in hematopoietic stem cells in polycythemia vera and predisposes toward erythroid differentiation.Proc Natl Acad Sci USA 2006;103:6224−9.
24.Irish JM,Hovland R,Krutzik PO,et al.Single cell profiling of potentiated phospho−protein networks in cancer cells.Cell 2004;118:217−28.
25.Verstovsek S,Kantarjian HM,Pardanani AD,et al.The JAK inhibitor,INCB018424,demonstrates durable and marked clinical responses in primary myelofibrosis(PMF) and postpolycythemia/essential thrombocythemia myelofibrosis(post PV/ETMF).ASH Annual Meeting Abstracts 2008;112:1762.
26.Kotecha N,Flores N,Irish J,et al.Single−cell profiling identifies aberrant STAT5 activation in myeloid malignancies with specific clinical and biologic correlates.Cancer Cell 2008;14:335−43.
Claims (19)
- 被験者を、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有するまたはその素因があると分類する方法であって、
前記被験者からの血球を含んだ試料に由来するLNK遺伝子の配列を決定すること;および
決定されたLNK配列が少なくとも1つの変異を有する場合、前記被験者を、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有するまたはその素因があると分類すること
を含む方法。 - 前記LNK変異がプレクストリン相同(PH)ドメインおよび/またはSH2ドメイン内にある、請求項1に記載の方法。
- 前記LNK変異が、プレクストリン相同(PH)ドメインおよび/またはSH2ドメインの全部または一部の欠失である、請求項1に記載の方法。
- 前記LNK変異が、野生型LNKと比較して細胞におけるサイトカインシグナル伝達の増大を生じさせる、請求項1に記載の方法。
- 前記LNK変異がE208Qおよび603_607delGCGCT;613C>Gから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記試料が血液試料である、請求項1に記載の方法。
- 前記血液リンパ系新生物または悪性腫瘍がJAK2 V617F陰性骨髄増殖性新生物(MPN)である、請求項1に記載の方法。
- 前記分類工程が、決定されたLNK配列を1またはそれ以上の参照LNK配列と比較することを含み、前記1またはそれ以上の参照LNK配列が、
血液リンパ系新生物または悪性腫瘍の素因があることが既知の被験者からのLNK配列;および
血液リンパ系新生物または悪性腫瘍の素因がないことが既知の被験者からのLNK配列
の一方または両方を含む、請求項1に記載の方法。 - 前記配列決定工程が、PCR、核酸ハイブリダイゼーション、塩基配列解析および抗体結合アッセイの1またはそれ以上を含む、請求項1に記載の方法。
- 被験者において血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を治療するための候補治療薬を同定する方法であって、
野生型LNKと比較してサイトカインシグナル伝達の増大を細胞に付与する、変異LNKタンパク質を含有する細胞を薬剤と接触させること;および
前記薬剤が対照と比較して前記細胞におけるサイトカインシグナル伝達を低減する場合、前記薬剤を被験者において血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を治療するための候補治療薬として同定すること
を含む方法。 - 前記LNK変異がプレクストリン相同(PH)ドメインおよび/またはSH2ドメイン内にある、請求項10に記載の方法。
- 前記LNK変異が、プレクストリン相同(PH)ドメインおよび/またはSH2ドメインの全部または一部の欠失である、請求項10に記載の方法。
- 前記LNK変異がE208Qおよび603_607delGCGCT;613C>Gから選択される、請求項10に記載の方法。
- 前記LNK変異体が血液リンパ系新生物または悪性腫瘍に関連する、請求項10に記載の方法。
- 前記血液リンパ系新生物または悪性腫瘍がJAK2 V617F陰性骨髄増殖性新生物(MPN)である、請求項14に記載の方法。
- 前記接触工程が、細胞をサイトカインと接触させることをさらに含む、請求項10に記載の方法。
- 前記サイトカインがTPOである、請求項16に記載の方法。
- LNK変異体が媒介するサイトカインシグナル伝達の増大を阻害する薬剤の有効量を投与することを含む、血液リンパ系新生物または悪性腫瘍を有する被験者を治療する方法。
- 前記薬剤が、LNK変異体が媒介するSTAT3および/またはSTAT5の活性化をブロックする、請求項18に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29511710P | 2010-01-14 | 2010-01-14 | |
US61/295,117 | 2010-01-14 | ||
PCT/US2011/020997 WO2011088125A1 (en) | 2010-01-14 | 2011-01-12 | Mutations in the lnk gene in patients with myeloproliferative neoplasms and other hematolymphoid malignancies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013516988A true JP2013516988A (ja) | 2013-05-16 |
JP5959439B2 JP5959439B2 (ja) | 2016-08-02 |
Family
ID=44304624
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012549049A Active JP5959439B2 (ja) | 2010-01-14 | 2011-01-12 | 骨髄増殖性新生物および他の血液リンパ系悪性腫瘍を有する患者におけるlnk遺伝子の変異 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8945846B2 (ja) |
EP (1) | EP2524058B1 (ja) |
JP (1) | JP5959439B2 (ja) |
DK (1) | DK2524058T3 (ja) |
ES (1) | ES2618310T3 (ja) |
WO (1) | WO2011088125A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516301A (ja) * | 2017-04-10 | 2020-06-11 | ウニベルジテート ロストック ツェントラーレ ウニベルジテーツフェアヴァルトゥング リフェラート 1.1 レヒト | 骨髄応答および免疫応答の予測のためのsh2bアダプタータンパク質3 |
JP2022512664A (ja) * | 2018-10-12 | 2022-02-07 | ウニベルジテート ロストック ツェントラーレ ウニベルジテーツフェアヴァルトゥング リフェラート 1.1 レヒト | 骨髄幹細胞治療に対する応答の予測方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008134759A2 (en) * | 2007-04-30 | 2008-11-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Treatment of myeloproliferative disorders with adaptor protein lnk |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB0803004D0 (en) * | 2008-02-19 | 2008-03-26 | Queen Mary & Westfield College | Genetic variation associated with coeliac disease |
-
2011
- 2011-01-12 WO PCT/US2011/020997 patent/WO2011088125A1/en active Application Filing
- 2011-01-12 US US13/005,455 patent/US8945846B2/en active Active
- 2011-01-12 JP JP2012549049A patent/JP5959439B2/ja active Active
- 2011-01-12 ES ES11733318.7T patent/ES2618310T3/es active Active
- 2011-01-12 DK DK11733318.7T patent/DK2524058T3/en active
- 2011-01-12 EP EP11733318.7A patent/EP2524058B1/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008134759A2 (en) * | 2007-04-30 | 2008-11-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Treatment of myeloproliferative disorders with adaptor protein lnk |
US20100130423A1 (en) * | 2007-04-30 | 2010-05-27 | Cedars-Sinai Medical Center | Treatment of myeloproliferative disorders with adaptor protein lnk |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6015010763; S.Gery, et al., Experimental Hematology, 2009, 37, pp585-592 * |
JPN6015010764; L.Velazquez, et al., J.Exp.Med., 2002, 195(23), pp1599-1611 * |
JPN6015010765; S.T.Oh, et al., Blood, 2010, 116(6), pp988-992 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516301A (ja) * | 2017-04-10 | 2020-06-11 | ウニベルジテート ロストック ツェントラーレ ウニベルジテーツフェアヴァルトゥング リフェラート 1.1 レヒト | 骨髄応答および免疫応答の予測のためのsh2bアダプタータンパク質3 |
JP2022512664A (ja) * | 2018-10-12 | 2022-02-07 | ウニベルジテート ロストック ツェントラーレ ウニベルジテーツフェアヴァルトゥング リフェラート 1.1 レヒト | 骨髄幹細胞治療に対する応答の予測方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2524058A1 (en) | 2012-11-21 |
US8945846B2 (en) | 2015-02-03 |
EP2524058A4 (en) | 2013-07-03 |
WO2011088125A1 (en) | 2011-07-21 |
EP2524058B1 (en) | 2016-11-09 |
ES2618310T3 (es) | 2017-06-21 |
DK2524058T3 (en) | 2017-02-20 |
US20120046233A1 (en) | 2012-02-23 |
JP5959439B2 (ja) | 2016-08-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11203788B2 (en) | TET2 as a diagnostic and pronostic marker in hematopoietic neoplasms | |
Kiyoi et al. | Prognostic implication of FLT3 and N-RAS gene mutations in acute myeloid leukemia | |
JP2023024989A (ja) | 骨髄性悪性腫瘍の診断のための突然変異体カルレチクリン | |
Schnittger et al. | FLT3 length mutations as marker for follow-up studies in acute myeloid leukaemia | |
De Braekeleer et al. | Conventional cytogenetics and breakpoint distribution by fluorescent in situ hybridization in patients with malignant hemopathies associated with inv (3)(q21; q26) and t (3; 3)(q21; q26) | |
Ningombam et al. | Prognostic relevance of NPM1, CEBPA, and FLT3 mutations in cytogenetically normal adult AML patients | |
EP4281783A2 (en) | Methods to quantify rate of clonal expansion and methods for treating clonal hematopoiesis and hematologic malignancies | |
JP5959439B2 (ja) | 骨髄増殖性新生物および他の血液リンパ系悪性腫瘍を有する患者におけるlnk遺伝子の変異 | |
Fujiwara et al. | Transforming activity of purinergic receptor P2Y, G protein coupled, 8 revealed by retroviral expression screening | |
Tanaka et al. | JAK2 46/1 haplotype is associated with JAK2 V617F-positive myeloproliferative neoplasms in Japanese patients | |
Chen et al. | Detection of MPL exon10 mutations in 103 Chinese patients with JAK2V617F-negative myeloproliferative neoplasms | |
Togami et al. | A C-terminal mutant of CCAAT-enhancer-binding protein α (C/EBPα-Cm) downregulates Csf1r, a potent accelerator in the progression of acute myeloid leukemia with C/EBPα-Cm | |
Hu et al. | TET2 rs2454206, TET2 rs12498609 and ASXL1 rs3746609 single nucleotide polymorphisms in patients with myelodysplastic syndromes | |
Ho et al. | Precipitation of porphyria cutanea tarda by imatinib mesylate? | |
Baxter et al. | Mechanisms of Disease | |
Aly et al. | Prognostic significance of FLT3 internal tandem duplication in Egyptian acute myeloid leukemia and normal cytogenetics | |
JP2016059348A (ja) | T細胞リンパ腫の検査方法 | |
Yasin et al. | Methylation of the suppressor of Cytokine Signaling 1 Gene (SOCS1) in Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms | |
Shears et al. | Pseudoautosomal linkage of familial hodgkin's lymphoma: molecular analysis of a unique family with leri–weill dyschondrosteosis and hodgkins lymphoma. | |
Sukhu et al. | Factor viii assays in haemophilia a patients treated with refacto™. | |
EP4136262A1 (en) | Prognosis method of acute myeloid leukaemia | |
JP2020109092A (ja) | 骨髄性悪性腫瘍の診断のための突然変異体カルレチクリン | |
Haw | FANCG 637-643 deletion mutation: Frequency in black patients with acute myeloid leukaemia or aplastic anaemia and the clinical phenotype of homozygotes | |
Dijk | Molecular studies in myelodysplastic syndromes | |
Hirayama et al. | Recovery of cells with a normal karyotype in a refractory anaemia patient with monosomy 7-positive cells after long-term administration of cyclosporin A. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150320 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150616 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150716 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150819 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20151211 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160407 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160414 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160603 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160621 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5959439 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |