JP2013166760A - 筋肉炎症を減少させるための乳清生長因子抽出物の組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】スキムミルクをSP(スルフォプロピル)セファロース陽イオン交換カラムにアプライし、0.008Mより少ないNaClの緩衝液でカラムを洗浄し、0.4M NaClを含む緩衝液でWGFE(乳清生長因子抽出物画分)をpH6.5で溶出して分離した、乳清生長因子抽出物を含有する組成物を用いた、レジスタンス運動トレーニングに取り組む個体の筋肉炎症の減少方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、栄養補助剤として使用するための、乳製品を含む組成物の産生に関する。より詳細には、本発明は、乳清生長因子抽出物を含む組成物、及び、レジスタンス運動トレーニングに取り組んでいる個体の筋肉炎症を減少させる方法におけるそれらの使用に関する。
本発明は、当分野において従来成されてきたことを鑑みて理解される。しかしながら、以下の議論は、言及される材料のいずれかが、本出願の優先日当時、オーストラリアにおいて公開されていたこと、使用されていたこと、または技術常識の一部であったことを認知するものでも、容認するものでもない。
a) 乳製品をSPセファロース陽イオンカラムに適用する段階、
b) カラムを低イオン強度の緩衝液で洗浄する段階、
c) 0.4〜0.5Mの範囲のNaClを含むか、または同等のイオン強度の緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階。
a) 乳製品をSPセファロース陽イオン交換カラムにアプライする段階、
b) 0.008Mまたはそれ以下のNaClの緩衝液でカラムを洗浄する段階、
c)0.4M NaClを含む緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階。
a) 乳製品をSPセファロース陽イオンカラムに適用する段階、
b) カラムを低イオン強度の緩衝液で洗浄する段階、
c) 0.4〜0.5Mの範囲のNaClを含むか、または同等のイオン強度の緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階。
a) 乳製品をSPセファロース陽イオン交換カラムにアプライする段階、
b) 0.008Mまたはそれ以下のNaClの緩衝液でカラムを洗浄する段階、
c) 0.4M NaClを含む緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階。
水分 5.0%
脂質 0.5%
pH(5%溶液) 6.3
灰分 3.7%
ラクトース 0.5%
蛋白質(TN×6.38) 90.0%
ナトリウム 0.7%
リン 0.3%
カルシウム 0.15%
を含む乳清蛋白質分離物である。
本発明は、レジスタンス運動トレーニングを行っている対象が、従来技術の組成物によって得られる筋肉炎症のレベルの減少よりもさらに減少させることを可能ならしめるWGFEを含む組成物、及びその方法に関する。
本発明において使用するためのWGFEを産生するための好ましい方法は、SP(スルフォプロピル)セファロースが詰められたカラムを使用することである。アプライされる乳容量がカラムに詰められた樹脂容量の1000倍となるまで、酪農製品、好ましくスキムミルクの流れがカラムにアプライされる。低イオン強度(<0.008M NaClまたはそれと均等)の緩衝液で10分間、カラム中に残存する乳を除去する。0.4〜0.5M NaCl(他の陽イオンも好適であるが)、より好ましくは0.4M NaClと均等なナトリウムイオンを含む緩衝液により、WGFE画分はカラムから溶出される。
水分 5.0%
脂質 0.5%
pH(5%溶液) 6.3
灰分 3.7%
ラクトース 0.5%
蛋白質(TN×6.38) 90.0%
ナトリウム 0.7%
リン 0.3%
カルシウム 0.15%
を含む。
実施例1:臨床試験
20人の若い男性が、3ヶ月の無作為、二重盲式レジスタンストレーニングプログラムに参加する臨床試験が行われた。乳清生長因子抽出物は、オーストラリア特許第645589号(PCT/AU91/00303)に大まかに記載される方法、より詳細には上記される方法に従って調製された。各蛋白質処方は人工甘味料(Nutrasweet(商標), Nutrasweet Company, USA)を含んでいた。乳清蛋白質処方は、各運動セッションの直後に消費され、各対象は、毎週3つの管理された運動セッションを完了した。
A群:20g NatraPro(WPI) 各用量あたり; n=7
B1群:20g NatraPro(WPI)+1g WGFE 各用量あたり;n=6
B2群:20g NatraPro(WPI)+2g WGFE 各用量あたり;n=7
水分 5.0%
脂質 0.5%
pH(5%溶液) 6.3
灰分 3.7%
ラクトース 0.5%
蛋白質(TN×6.38) 90.0%
ナトリウム 0.7%
リン 0.3%
カルシウム 0.15%
を含む。
経皮針生検技術を用い、右脚外側広筋より筋肉試料を集めた。摘出された筋肉組織は、視覚的に検査され、あらゆる脂肪または結合組織から切り取られ、そして過剰な血液を除くため吸い取られ、そして続いての分析のために液体窒素中で直に凍結された。筋肉組織の一部を、続いての免疫組織化学分析のため、水性マウント培地にマウントし、液体窒素で冷却したイソペンタン中で凍結した。
各試料の連続切片(10μm)を、ミオシン重鎖線維型を分析するために、顕微鏡スライド上にマウントした。Behanのプロトコルに基づき線維型分布及び筋肉横断面領域を調べる為、ミオシンの速筋型及び遅筋型アイソフォームに基づく免疫組織化学技術を用いた。蛋白質の細胞局在は、標準的な免疫組織化学技術及び所望の蛋白質に対して産した抗体を用いて行った。
ToTALLY RNAキット及び試薬(Ambion Inc.)を用いて骨格筋試料よりRNAを製造者の指示に従って抽出した。総RNA濃度及び品質はAgilent 2100 Bioanalyzer(Agilent Technologies, Inc.)を用いて決定した。続いて、AMVリバーストランスクリプターゼキットプロトコル及び試薬(Promega)を使用してRNAをcDNAに逆転写した。遺伝子発現の分析は、ソフトウェアPrimer Express 2.0を用いて設計した遺伝子特異的プライマーを使用して、Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systemにより行った。
総ミオシン重鎖蛋白質含有量を調べるため、標準的ウエスタンブロッティング技術、及びミオシン重鎖蛋白質アイソフォームに共通な断片に対する抗体(Zymed)が採用された。
結果は、平均±SEM、及び、Bonforoni多重比較試験を用いた2要因の分散分析により計算された有意性として示される。年齢、体重、身長またはBMI値については、トレーニングの前及び後のどちらでも、有意な差は観察されなかった。
(表1)対象の特徴
筋肉LIM蛋白質(MLP)の発現は、トレーニングにより有意に増加したが、MyoD及びミオゲニンの発現には、トレーニングまたは処置の一貫した効果は観察されなかった(図1)。衛星細胞の動員及び増殖の2つのマーカーであるPax7並びにシンデカン3の発現は、12週間のトレーニングの後、各々2倍及び7倍に増加し、蛋白質発現データにより裏付けられている(図2及び3)。IGFBP4及びIGFBP5の発現(図4)は、B1群において12週目に、急性運動と応答して顕著に増加していた。筋肉炎症に結び付けられている早期応答遺伝子jun-B及びc-fos(Chen YWら, J. App. Physiol. 2003; 95(6): 2485-94)の正常な運動後の上向き調節は、B1及びB2の補助剤群の両方において減弱されており、これらの群においてストレス応答が減少していることを示唆した(図5)。12週目において、CCL4及びCCL7の休息時及び運動後の両方の発現レベルは、コントロールのA群と比べて(有意に)B1及びB2群において、一回の一時的期間のレジスタンス運動に続いて増加した(図6)。
RAW細胞においてLPSにより誘導される前炎症性TNFアルファ発現に対する種々の乳製品画分の効果を試験するためイン・ヴィトロ研究を行った。RAW細胞は、LPSの存在下で生育され、その後、初乳(試料2BC)、100mg/mlのWPI(試料4BC)、100mg/mlのWGFE(試料6BC)、種々の乳画分が添加された。一つの試料においては、LPS刺激に続いて、乳製品が添加されなかった(陽性‘+ve’コントロール)。WGFE及びLPSはまた同時に培養に添加された(試料WGFE+LPS)。プロットされた値は、3つの個別の実験により得られた平均応答の相加平均±SEMを表す(図7)。LPSにより誘導されたTNFアルファ発現の阻害に対する、WGFEの効果及び WPIの効果との間で比較が行われた(図8)。
乳清生長因子抽出物は、実施例1の場合と同様に調製された。
Claims (29)
- 陽イオン交換クロマトグラフィーにより乳製品から分離された乳清生長因子抽出物を含む筋肉抗炎症組成物。
- 以下の段階を含む工程により乳製品から分離された乳清生長因子抽出物を含む筋肉抗炎症組成物。
a) 乳製品をSPセファロース陽イオン交換カラムにアプライする段階
b) 低イオン強度の緩衝液でカラムを洗浄する段階
c) 0.4〜0.5Mの範囲のNaClを含むか、または同等のイオン強度の緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階 - 以下の段階を含む工程によりスキムミルクから分離された乳清生長因子抽出物を含む筋肉抗炎症組成物。
a) スキムミルクをSPセファロース陽イオン交換カラムにアプライする段階
b) 0.008Mより少ないNaClの緩衝液でカラムを洗浄する段階
c) 0.4M NaClを含む緩衝液でWGFE画分をpH6.5で溶出する段階 - さらに追加の蛋白質源を含む、請求項1乃至3いずれか一項記載の筋肉抗炎症組成物。
- 蛋白質源が乳清蛋白質である、請求項4記載の組成物。
- 乳清蛋白質が乳清蛋白質分離物(whey protein isolate; WPI)である、請求項5記載の組成物。
- 乳清蛋白質分離物が、
水分 5.0%
脂質 0.5%
pH(5%溶液) 6.3
灰分 3.7%
ラクトース 0.5%
蛋白質(TN×6.38) 90.0%
ナトリウム 0.7%
リン 0.3%
カルシウム 0.15%
を含む、請求項6記載の組成物。 - 乳清生長因子抽出物が、チーズ乳清、レンネットカゼイン乳清、酸カゼイン乳清またはスキムミルクから分離される、請求項1乃至7いずれか一項記載の組成物。
- 乳清生長因子抽出物がスキムミルクから分離される、請求項8記載の組成物。
- 筋肉抗炎症剤として使用される、請求項1乃至9いずれか一項記載の組成物。
- レジスタンス運動トレーニングに取り組んでいる対象において筋肉炎症を減少させる方法であって、請求項1乃至3いずれか一項に記載される乳清生長因子抽出物の有効量を含む組成物を該対象に投与することを含む方法。
- 少なくとも5mg/kg体重から12.5mg/kg体重の乳清生長因子抽出物、好ましくは少なくとも25mg/kg体重の乳清生長因子抽出物の日用量で該組成物が投与される、請求項11記載の方法。
- 組成物が追加の蛋白質源を含む、請求項11または12記載の方法。
- レジスタンス運動トレーニングに取り組んでいる対象において筋肉炎症を減少させる方法であって、乳製品から陽イオン交換クロマトグラフィーにより分離された乳清生長因子抽出物の有効量を含む組成物、及び別に摂取される追加の蛋白質源を該対象に投与することを含む方法。
- 少なくとも5mg/kg体重から12.5mg/kg体重の乳清生長因子抽出物、好ましくは少なくとも25mg/kg体重の乳清生長因子抽出物、及び、少なくとも225mg/kg体重の追加の蛋白質源の日用量で該組成物が投与される、請求項13または14記載の方法。
- 追加の蛋白質源が、請求項5乃至7のいずれか一項に記載されるものである、請求項15記載の方法。
- 対象への投与が、2日または3日に一回から、最多で少なくとも一日一回行われる、請求項11乃至16いずれか一項記載の方法。
- 対象への投与が、レジスタンス運動トレーニングの前、及び/または直後に行われる、請求項11乃至16いずれか一項記載の方法。
- 投与がレジスタンス運動トレーニングの直後に行われる、請求項11乃至16いずれか一項記載の方法。
- 投与が運動の20分から2時間後に行われる、請求項18記載の方法。
- 乳製品から陽イオン交換クロマトグフラフィーにより分離された乳清生長因子抽出物の、レジスタンス運動により誘導された筋肉炎症を処置するための薬剤の産生における使用。
- 請求項2または3に記載の工程により乳製品より分離された乳清生長因子抽出物の、レジスタンス運動により誘導された筋肉炎症を処置するための薬剤の産生における使用。
- 請求項(1乃至10)いずれか一項記載の組成物の、レジスタンス運動により誘導された筋肉炎症を処置するための薬剤の産生における使用。
- 請求項11乃至20いずれか一項記載の方法において使用するための、請求項(1乃至10)いずれか一項記載の組成物を含む食品、飲料、錠剤またはカプセル。
- 栄養バーまたはスナック食品の形体である、請求項24記載の食品。
- 請求項(1乃至10)いずれか一項記載の組成物の、レジスタンス運動トレーニングに取り組んでいる対象における筋肉炎症を減少するための食品、飲料、錠剤またはカプセルの製造における使用。
- 実質的に、実施例と関連して前述される筋肉抗炎症組成物。
- 実質的に、実施例と関連して前述される乳清生長因子抽出物の使用。
- 実質的に、実施例と関連して前述される、レジスタンス運動トレーニングに取り組んでいる対象における筋肉炎症を減少させる方法。
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