JP2012080881A5 - Mount for fixing microorganism culture sheet and microorganism inspection method - Google Patents
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Description
本発明は、複数の微生物培養シートを固定するための微生物培養シート固定用台紙、および前記台紙に微生物培養シートを固定し、撮像により複数の微生物培養シートの画像データを形成し、画像データに基づいてコロニー数をカウントする微生物検査方法に関する。 The present invention is a microbial culture sheet fixed microbial cultures seat locking mount for securing a plurality of microbial culture sheets, and the mount to form the image data of a plurality of microbial cultures sheet by the imaging, based on the image data The present invention relates to a microorganism testing method for counting the number of colonies.
特許文献１や特許文献２に記載される微生物培養シートはシート状物であるため薄く、寒天培地などと相違してコンパクトで、収納容積や培養容積をコンパクトにできる利点がある。しかしながら、微生物培養シートは乾燥培養層を使用するため、菌液が培地上に徐々に広がって培地に浸み込むため、培養環境を確保して微生物を培養し、正確にコロニーを評価するには、接種後の菌液を所定範囲に菌液が広がるように円形の押圧部を有するスプレッダーで押圧したり、または接種後の菌液が培地にしみこむまでの１〜３分程度の間、カバーシートを被覆した後、水平に放置する必要がある。細菌学的成分規格に適合するか否かの評価が求められる検体数は極めて多く、より効率的な操作が可能な微生物培養シートの開発が望まれる。 The microorganism culture sheet described in Patent Document 1 or Patent Document 2 is a sheet-like material, and is thin and compact, unlike the agar medium, and has an advantage that the storage volume and culture volume can be made compact. However, since the microorganism culture sheet uses a dry culture layer, the bacterial solution gradually spreads on the medium and soaks into the medium. The cover sheet is pressed for about 1 to 3 minutes until the bacterial solution after inoculation is pressed with a spreader having a circular pressing portion so that the bacterial solution spreads in a predetermined range, or until the bacterial solution after inoculation is soaked in the medium. After coating, it is necessary to leave it horizontally . The number of specimens of whether to meet fine bacteriological element standard evaluation is required very often, the development of microbial cultures sheet capable more efficient operation is desired.
加えて、前記台紙付き微生物培養シートを使用する微生物検査方法を提供する事を目的とする。 In addition, an object of the present invention is to provide a microorganism testing method using the microorganism culture sheet with a mount.
本発明者らは、微生物培養シートについて詳細に検討した結果、台紙に複数の微生物培養シートを固定し、画像処理によるコロニー数の自動カウントを行う際、複数の微生物培養シートについて一度に画像を形成すれば、微生物培養シートを一枚ずつ画像形成する場合と相違して短時間で画像を形成しうることを見出し、本発明を完成させた。 The present inventors have made study in detail the microorganism culture sheet, to secure the plurality of microbial cultures sheet base paper or to have it automatically count the number of colonies by images processed once for a plurality of microbial cultures sheet by forming an image on a short time we found that you can form an image different from the case of the image forming microbial culture sheet one by one, thereby completing the present invention.
すなわち、本発明は、複数の微生物培養シートを固定するための合成樹脂からなる微生物培養シート固定用台紙であって、
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙を提供するものである。
That is, the present invention is a microbial culture sheet fixing mount made of a synthetic resin for fixing a plurality of microbial culture sheets ,
A mounting board for fixing a microorganism culture sheet, characterized in that the microorganism culture sheet can be detachably fixed, a partition indicating a fixing position of each microorganism culture sheet is formed, and a frame is formed with a low-lightness color. To do.
加えて本発明は、微生物培養シートに菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、当該コロニーを発現させた微生物培養シートの複数枚を前記微生物培養シート固定用台紙に固定し、
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法を提供するものである。
In addition, the present invention is inoculated with Kin'eki the microorganism culture sheet, and cultured to express colony, to secure the plurality of microbial cultures sheet was expressed the colonies to the microbial cultures sheet fixing mount,
Forming image data of a mount on which the microorganism culture sheet is fixed ;
The present invention provides a microorganism testing method , wherein the number of colonies for each microorganism culture sheet is counted using the image data of the microorganism culture sheet included in the image data.
本発明の台紙付き微生物培養シートによれば、複数の微生物培養シートが固定されているため、複数の微生物培養シートについて一度に画像データを形成することができ、画像データ形成が容易であり、効率的にコロニー数の自動カウントを行うことができる。 According to mount with microbial cultures sheet of the present invention, since a plurality of microbial cultures sheet is fixed, it is possible to form an image data at a time for a plurality of microbial culture sheet, the image data forming an easily Yes, it is possible to automatically count the number of colonies efficiently.
本発明の第一は、複数の微生物培養シートを固定するための合成樹脂からなる微生物培養シート固定用台紙であって、
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙である。前記台紙には、微生物培養シートの角部を挿入して固定するための切り欠き部、または微生物培養シートを固定するための粘着剤層が形成されていてもよく、色補正用のカラーチャートまたはグレースケール、および／または位置認識マーカーが表示されていてもよい。
First aspect of the present invention, microbial cultures sheet fixing mount der made of a synthetic resin for fixing the plurality of microbial culture sheet,
A mounting board for fixing a microorganism culture sheet, wherein the microorganism culture sheet can be detachably fixed, a partition indicating a fixing position of each microorganism culture sheet is formed, and a frame is formed with a low-lightness color. The Wherein the base sheet, may have notches for inserting and fixing the corner portions of the microbial culture sheet, or a pressure-sensitive adhesive layer for fixing the microorganism culture sheet is formed, a color chart for color correction Alternatively, gray scale and / or position recognition markers may be displayed.
また、本発明の第二は、微生物培養シートに菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、当該コロニーを発現させた微生物培養シートの複数枚を前記微生物培養シート固定用台紙に固定し、
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法である。前記画像データに含まれる位置認識マーカーを用いて画像データの位置補正を行い、ついで、カラーチャートおよびグレースケールを用いて色補正を行い、培地に含まれるコロニーに対応する画素をカウントしてもよい。
以下、本発明を詳細に説明する。
The second of the present invention were inoculated with Kin'eki the microorganism culture sheet, cultured to express colonies, fixed a plurality of microbial cultures sheet was expressed the colonies to the microbial cultures sheet fixing mount And
Forming image data of a mount on which the microorganism culture sheet is fixed ;
It is a microorganism testing method , wherein the number of colonies for each microorganism culture sheet is counted using image data of the microorganism culture sheet included in the image data. The position of the image data may be corrected using a position recognition marker included in the image data, and then color correction may be performed using a color chart and a gray scale to count pixels corresponding to colonies included in the culture medium. .
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
（２）台紙付き微生物培養シート
台紙付き微生物培養シート（１００）とは、上記微生物培養シート固定用台紙（Ａ）に複数の微生物培養シート（Ｂ）が固定されたものである。図３に、図１に示す微生物培養シート固定用台紙（Ａ）に８枚の微生物培養シート（Ｂ）を固定した態様を示す。
(2) Microorganism culture sheet with mount
The base paper with a microorganism culture sheet (100), a plurality of microbial cultures sheet (B) is fixed to the microorganism culture sheet fixing mount (A). FIG. 3 shows an embodiment in which eight microorganism culture sheets (B) are fixed to the microorganism culture sheet fixing mount (A) shown in FIG.
（４）台紙付き微生物培養シートの製造方法
台紙付き微生物培養シートは、前記した台紙（Ａ）に微生物培養シート（Ｂ）を固定したものである。台紙の材質によって適宜選択できるが、台紙（Ａ）に印刷その他によって前記仕切り線（Ｌ）や、カラーチャートやグレースケールチャートなどの色見本配列表、位置認識マーカー、シリアルナンバーなどを形成する。また、台紙（Ａ）に、図１に示すように微生物培養シート（Ｂ）を固定するための貫通孔からなる切り欠き部（ｂ）を形成する場合には、所定形状の抜き打ち型などで貫通孔を形成すればよい。微生物培養シート（Ｂ）を固定するためのフォトコーナーを添付してもよい。
(4) Manufacturing method of microorganism culture sheet with mount
Pedestal microbial cultures sheet laminated sheet is obtained by fixing the microorganism culture sheet (B) in the above-mentioned mount (A). The partition line (L), a color sample array table such as a color chart or a gray scale chart, a position recognition marker, a serial number, and the like are formed on the mount (A) by printing or the like. Further, when the cutout portion (b) made of a through hole for fixing the microorganism culture sheet (B) is formed on the mount (A) as shown in FIG. What is necessary is just to form a hole. A photo corner for fixing the microorganism culture sheet (B) may be attached.
（５） 連設微生物培養シート
連設微生物培養シートとは、基材シートと前記基材シートの一方の面に形成された複数の乾燥培養層と、前記複数の乾燥培養層をそれぞれ被覆するカバーシートとからなる。前記した台紙付き微生物培養シート（１００）と同様に、複数の微生物培養シートが連設することで水平の維持が容易で、菌液を接種した後の培養装置への搬入を短時間で行え、コロニー形成後の画像形成も容易である。
(5) Continuous microorganism culture sheet
The communication設微organism culture sheet, comprising a base sheet and a plurality of drying the culture layer formed on one surface of the base sheet, a cover sheet covering said plurality of drying the culture layer, respectively. Like the above-mentioned microorganism culture sheet with a mount (100), it is easy to maintain the horizontal by continuously arranging a plurality of microorganism culture sheets, and can be carried into the culture apparatus after inoculating the bacterial solution in a short time, Image formation after colony formation is also easy.
連設微生物培養シート（１００’）の好適な態様を図８（ａ）の平面図および図８（ｂ）のＸ−Ｘ線断面図に示す。図８は、基材シート（１０’）の上に複数の乾燥培養層（２０’）が形成され、かつ前記乾燥培養層（２０’）を被覆する複数のカバーシート（３０’）が固定された態様を示す。基材シート（１０’）とカバーシート（３０’）とが重複する部分を微生物培養シート（Ｂ’）とすれば、複数の微生物培養シート（Ｂ’）が同じ基材シート（１０’）に形成されて連なるため、「連設微生物培養シート」と称する。本発明の連設微生物培養シート（１００’）は、一枚の基材シート（１０’）を使用して複数の微生物培養シート（Ｂ’）が形成される場合であってもよく、各微生物培養シート（Ｂ’）ごとに容易に分離できるように、基材シート（１０’）にミシン目などが形成されていてもよい。 A preferred embodiment of the continuous microorganism culture sheet (100 ′) is shown in the plan view of FIG. 8 (a) and the cross-sectional view taken along the line XX of FIG. 8 (b). FIG. 8 shows that a plurality of dry culture layers (20 ′) are formed on a base sheet (10 ′), and a plurality of cover sheets (30 ′) covering the dry culture layers (20 ′) are fixed. The embodiment is shown. If the portion where the base sheet (10 ′) and the cover sheet (30 ′) overlap is defined as the microorganism culture sheet (B ′), the plurality of microorganism culture sheets (B ′) are combined into the same base sheet (10 ′). Since they are formed and connected, they are referred to as “continuous microorganism culture sheets”. The continuous microorganism culture sheet (100 ′) of the present invention may be a case where a plurality of microorganism culture sheets (B ′) are formed using a single substrate sheet (10 ′). A perforation or the like may be formed on the base sheet (10 ′) so that it can be easily separated for each culture sheet (B ′).
連設微生物培養シート（１００’）で使用する基材シート（１０’）としては、例えば、台紙付き微生物培養シート（１００）の台紙（Ａ）と同様に、微生物培養シート（Ｂ’）のカバーシート（３０’）よりも大きく、好ましくは微生物培養シート（Ａ’）が２以上連設されるもの、より好ましくは６〜１０、とくに好ましくは６〜８が連設されるものである。基材シート（１０’）のサイズとしては、微生物培養シート固定用台紙（Ａ）と同様に、Ａ４判やＢ４判などのものを好適に使用することができる。コロニー形成後に、スキャナなどで画像データを形成するのが容易だからである。 As the base material sheet (10 ′) used in the continuous microorganism culture sheet (100 ′), for example, the cover of the microorganism culture sheet (B ′) is the same as the mount (A) of the microorganism culture sheet with mount (100). It is larger than the sheet (30 ′), preferably two or more microorganism culture sheets (A ′) are continuously arranged, more preferably 6 to 10, particularly preferably 6 to 8. As the size of the substrate sheet (10 ′), as in the microorganism culture sheet fixing mount (A), those of A4 size or B4 size can be suitably used. This is because it is easy to form image data with a scanner or the like after colony formation.
連設微生物培養シート（１００’）では、基材シート（１０’）に、前記した微生物培養シート固定用台紙（Ａ）と同様の色見本配列表（７０）やシリアルナンバー（８０）を表示してもよい。複数の微生物培養シート（Ａ’）にコロニーを形成した場合、複数の微生物培養シート（Ｂ’）の画像データの形成を一度に行い、かつコロニー数の自動カウントを簡便に行うことができる。 In the continuous microorganism culture sheet (100 ′), the same color sample arrangement table (70) and serial number (80) as the above-described substrate (A) for fixing the microorganism culture sheet are displayed on the base sheet (10 ′). May be. When colonies are formed on a plurality of microorganism culture sheets (A ′), image data of the plurality of microorganism culture sheets (B ′) can be formed at a time and the number of colonies can be automatically counted.
上記連設微生物培養シート（１００’）は、基材シート（１０’）に複数の乾燥培養層（２０’）を形成し、各乾燥培養層（２０’）を被覆するようにカバーシート（３０’）を固定することで調製することができる。本発明の連設微生物培養シート（１００’）によれば、台紙（Ａ）への固定化手段を形成することなく複数の乾燥培養層（２０’）が固定されるため、より軽量化かつ薄型化することができる。
（６） 収納トレイ
台紙付き微生物培養シート（１００）や連設微生物培養シート（１００’）は、菌液を接種した後に培養装置に搬入し、培養することができる。この際、台紙付き微生物培養シート（１００）や連設微生物培養シート（１００’）を所定のトレイに収納してトレイごと培養装置に搬入すれば、搬入操作を容易に行うことができると共に多量の台紙付き微生物培養シートや連設微生物培養シートを培養装置に搬入できるため、培養操作を効率的に行うことができる。このような収納トレイの斜視図を図９に示す。図９に示す収納トレイ（２００）は、複数の棚からなる棚段部（１２０）の上部に蓋部（１３０）を被覆したものである。
The continuous microorganism culture sheet (100 ′) is formed by forming a plurality of dry culture layers (20 ′) on the base sheet (10 ′) and covering the dry culture layers (20 ′) with the cover sheet (30 ′). ') Can be prepared by fixing. According to the continuous microorganism culture sheet (100 ′) of the present invention, since the plurality of dry culture layers (20 ′) are fixed without forming the fixing means to the mount (A), it is lighter and thinner. Can be
(6) Storage tray
Base paper with a microorganism culture sheet (100) and communicating設微organism culture sheet (100 ') can be transferred into the culture device after the inoculated solution is incubated. At this time, if the microorganism culture sheet with a mount (100) and the continuous microorganism culture sheet (100 ′) are stored in a predetermined tray and carried together with the tray into the culture apparatus, the carrying-in operation can be easily performed and a large amount of Since the microorganism culture sheet with the mount and the continuous microorganism culture sheet can be carried into the culture apparatus, the culture operation can be performed efficiently. A perspective view of such a storage tray is shown in FIG. The storage tray (200) shown in FIG. 9 is obtained by covering a shelf step (120) composed of a plurality of shelves with a lid (130).
前記収納トレイは、棚および蓋部をそれぞれ、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン系樹脂、ポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル系樹脂、その他、ポリアミド系樹脂などを使用し、射出成形などで製造することができる。 The storage tray can be manufactured by injection molding using a shelf and a lid, for example, a polyolefin resin such as polyethylene and polypropylene, a polyester resin such as polyethylene terephthalate, and a polyamide resin. .
（８）微生物検査方法
本発明の台紙付き微生物培養シート(１００)や連設微生物培養シート(１００’)は、前記微生物培養シート（Ｂ’，Ｂ）に菌液を接種し、培養してコロニーを発現させ、このコロニーを含む台紙付き微生物培養シートや連設微生物培養シートの画像データを形成し、前記画像データに含まれる前記コロニーが発現した複数の培養層の画像データを使用して個別に各培養層のコロニー数をカウントする事ができる。その際、各培養層に含まれるコロニーに対応する画素をコロニーと判断し、画像解析によりコロニー数を自動カウントすることができる。
本発明では、台紙（Ａ）に複数の微生物培養シート（Ｂ）を固定して菌液の接種、培養、撮像による画像データを取得できるため、１の撮像操作により複数の微生物培養シート（Ｂ）の画像データを取得できる点に特徴がある。画像データから、コロニー数をカウントする方法は公知であり、乾燥培養層（２０）に対応する画像データからそれぞれの微生物培養シート（Ｂ）のコロニー数をカウントすることができる。
台紙（Ａ）に、カラーチャートやグレースケール、位置認識マーカーなどを表示することができる。台紙（Ａ）にこのような表示が含まれると、撮像した画像データにもこれらの表示が含まれる。よって前記位置認識マーカーを用いて画像データの位置補正を行い、ついで、カラーチャートおよびグレースケールを用いて色補正を行い、その後にコロニー数をカウントすることができる。なお、このような画像解析によるコロニー数カウントは、位置補正プログラムや色補正プログラム、コロニー数カウント用のプログラムが構築された処理装置に画像データを入力して行うことができる。以下、位置補正や色補正を行う場合の態様を説明する。なお、台紙付き微生物培養シート（１００）を使用する場合で説明するが連設微生物培養シート（１００’）でも同様である。
(8) Microorganism testing method The microbial culture sheet with mount (100) or the continuous microbial culture sheet (100 ′) of the present invention is obtained by inoculating the microbial culture sheet (B ′, B) with a bacterial solution and cultivating the colony. And forming image data of a microbial culture sheet with a mount and a continuous microorganism culture sheet containing the colonies, and individually using the image data of a plurality of culture layers in which the colonies included in the image data are expressed. The number of colonies in each culture layer can be counted. In that case, the pixel corresponding to the colony contained in each culture layer can be judged as a colony, and the number of colonies can be automatically counted by image analysis.
In the present invention, since a plurality of microorganism culture sheets (B) can be fixed to the mount (A) and image data obtained by inoculating, culturing, and imaging the bacterial solution can be obtained, a plurality of microorganism culture sheets (B) can be obtained by one imaging operation. The feature is that the image data can be acquired. A method of counting the number of colonies from the image data is known, and the number of colonies of each microorganism culture sheet (B) can be counted from the image data corresponding to the dry culture layer (20).
A color chart, gray scale, position recognition marker, and the like can be displayed on the mount (A). When such display is included in the mount (A), the captured image data also includes these displays. Therefore, it is possible to correct the position of the image data using the position recognition marker, perform color correction using a color chart and a gray scale, and then count the number of colonies. The colony count by such image analysis can be performed by inputting image data to a processing apparatus in which a position correction program, a color correction program, and a colony count count program are constructed. Hereinafter, an aspect in the case of performing position correction and color correction will be described. In addition, although demonstrated when the microorganism culture sheet (100) with a mount is used, it is the same for the continuous microorganism culture sheet (100 ′).
Claims (2)
前記微生物培養シートを脱着可能に固定でき、各微生物培養シートの固定位置を示す仕切りが形成され、かつ明度の低い色で枠が形成されることを特徴とする、微生物培養シート固定用台紙。 A microorganism culture sheet fixing mount made of a synthetic resin for fixing a plurality of microorganism culture sheets ,
A substrate for fixing a microorganism culture sheet, wherein the microorganism culture sheet can be detachably fixed, a partition indicating a fixing position of each microorganism culture sheet is formed, and a frame is formed with a low-lightness color.
前記微生物培養シートを固定した台紙の画像データを形成し、
前記画像データに含まれる前記微生物培養シートの画像データを使用して微生物培養シート毎のコロニー数をカウントすることを特徴とする、微生物検査方法。 Inoculated with Kin'eki the microorganism culture sheet, and cultured to express colony, to secure the plurality of microbial cultures sheet was expressed the colonies microbial cultures sheet fixing mount according to claim 1,
Forming image data of a mount on which the microorganism culture sheet is fixed ;
A microorganism testing method, wherein the number of colonies for each microorganism culture sheet is counted using the image data of the microorganism culture sheet included in the image data .
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