JP2008500814A - タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 - Google Patents
タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008500814A JP2008500814A JP2007503980A JP2007503980A JP2008500814A JP 2008500814 A JP2008500814 A JP 2008500814A JP 2007503980 A JP2007503980 A JP 2007503980A JP 2007503980 A JP2007503980 A JP 2007503980A JP 2008500814 A JP2008500814 A JP 2008500814A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- rmetase
- peg
- modified
- polyethylene glycol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/21—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pseudomonadaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/51—Lyases (4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2004年3月17日出願の仮出願第60/554,310号に関連するものである。この文書の内容は、参考として本明細書に含めるものとする。
図2は、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル) カルボジイミドに対するN-ヒドロキシスクシンイミドのモル比(NHS/EDC)が、rMETaseのカルボキシル基アミド化の程度に及ぼす影響を示す。rMETaseのカルボキシル基アミド化は、異なるNHS/EDC比で実施した。カルボキシル基のアミド化の程度は、フルオレスカミン法および未変性PAGEによって評価した。475nmで励起し475nmで発光する蛍光強度は、タンパク質中の遊離アミノ基の数を示す。ゲル(挿入図)は、カルボキシル基のアミド化に起因するrMETaseの分子量増加を示す。rMETase/ジアミノブタン(DAB)比およびrMETase/EDC比はそれぞれ1:600および1:800を用いた。カルボキシル基アミド化rMETaseの蛍光強度および電気泳動移動度の相違をrMETaseと比較した。
無修飾rMETase、PEG-rMETase、およびsuper-PEG化rMETaseを、10% SDS-ポリアクリルアミドゲルで分析した。図5は、新規のsuper-PEG化rMETaseが最も低い移動度および最も高い分子量を有していたことを示す。図5において、レーン1、2および3は、それぞれ無修飾rMETase、super-PEG-rMETase、およびPEG-rMETaseに関連づけられる。10% SSゲルは、クマシーブリリアントブルーで染色した。これらのデータは、super-PEG化されたPEG-rMETaseが、PEG-rMETaseより非常に多くのPEG鎖と結合していることを示唆する。
最初のPEG化を行わずに無修飾rMETaseを直接DABと反応させたとき、rMETaseは明らかに架橋結合のために反応溶液中に沈澱し、rMETase活性の相当な低下をもたらした。したがって、カルボキシル基アミド化によるタンパク質へのアミノ基付加に対する重大な限界は、反応タンパク質の架橋結合である。最初のPEG化は、概してカルボキシル基アミド化反応中の架橋結合を減少させた。最初のPEG化について、アルカリ加水分解してすべてのPEG鎖を除去した後にPEG-rMETaseおよびsuper-PEG-rMETaseの間に分子量の相違はなかった(図6)。無修飾rMETaseおよびPEG-rMETaseをアルカリ加水分解に供し、10% SDS-ポリアクリルアミドゲルで分析した。
PEG化の最も重要な特徴の一つは、PEG化されたタンパク質の抗原性および免疫原性の低下である。抗原-抗体(Ag-Ab)認識の程度は、タンパク質の抗原性の重要な尺度である。したがって、無修飾rMETase、PEG-rMETase、およびsuper-PEG-rMETaseの免疫反応性は、マウス抗rMETase血清との結合能によって評価した。
下記の実施例は、説明のために提供されるが、本発明を限定するものではない。下記の実施例において、組換えメチオニナーゼ(rMETase)は、大腸菌(E. coli)の培養によって製造された(Tan, Y.、上記)。Sephacryl S-300, Sephadex G-25は、Amersham Pharmacia Biotech (Piscateway, N.J)から購入した。プレキャストTris-グリシンゲルはNOVEX (San Diego, CA)から購入した。rMETaseに対するウサギ抗血清は、H.T.I Bio-Products, Inc., San Diego, CAから入手した。ヤギ抗マウス多価免疫グロブリン・西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体は、Sigma (St. Louis, MO)から購入した。フルオレスカミン、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル) カルボジイミド (EDC)、1,4-ジアミノブタン (DAB)二塩酸塩、N-ヒドロキシスクシンミド、およびチオシアン酸アンモニウムは、Fisher Scientific (Fairlawn, NJ)から購入した。モノメトキシポリエチレングリコールスクシンイミジルグルタラート-5000(MEGC-5000)PEGは、NOF社(東京)から贈られた。
フルオレスカミン法は通常、活性化されたPEGによるアミノ基の結合による蛍光強度の減少に基づいて、PEG化の程度を推定するために使用される。ここでは、フルオレスカミン法を用いて、rMETaseをジアミノブタン(DAB)と結合した後の蛍光強度の増加を検出することによって、rMETaseのカルボキシル基アミド化の程度を推定した。アッセイ法は基本的にはStocksにより記載の方法に従った(Stocks, S.J.ら、Anal. Biochem. (1986) 154:232 234)。手短に述べると、さまざまな量のrMETaseおよびPEG化rMETase(0.1 M リン酸ナトリウムバッファー、pH 8.0、2 ml中)をフルオレスカミン溶液(0.3 mg/mlアセトン)1 mlと混合し、5分間室温に保持した。次に、サンプルを蛍光分光光度計にて、390nm励起および475nm発光でアッセイした。結果を、rMETase濃度に対する蛍光強度としてプロットし、直線の勾配を直線回帰によって決定した。
無修飾rMETaseのタンパク質濃度を、Wako Protein Assay Kit(和光純薬、大阪)を用いて使用説明書にしたがって測定した。ウシ血清アルブミン(BSA)を標準物質として使用した。PEG-rMETase複合体のタンパク質含量は、280 nmの紫外(UV)吸光度により測定した。無修飾rMETaseを、検量線作成のために使用した。
すべての電気泳動実験は、使用マニュアルにしたがって10% NOVXプレキャストゲルを用いてXcell IIシステムにより行った。SDS-PAGEを実施するために、SDSを含有するトリス-グリシン泳動バッファーを使用した。ゲル中のタンパク質をクマシーブリリアントブルーで染色した。すべての修飾rMETaseを、無修飾rMETaseと比較した。
A. N-ヒドロキシスクシンイミド (NHS) 1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル) カルボジイミド(EDC)比の最適化
rMETase/DABおよびrMETase/EDCの比をそれぞれ1:600および1:800に維持して、NHS/EDCの最適モル比を決定した。DAB(14.1 mg)を、それぞれさまざまな量、4.0 mg, 2.7 mg, 1.3 mgおよび0 mg、のNHSとともに(NHS/EDC比はそれぞれ0.6, 0.4, 0.2, 0に相当する)、蒸留水に溶解した。それぞれの溶液のpHは0.5N NaOHにより6.5に調整し、最終容量1mlを得た。これらの溶液を4ウェルの組織培養プレートに移した。その後、25mg rMETase(0.2Mリン酸ナトリウムバッファー(pH 6.5)0.5ml中)を各ウェルに添加した。カルボキシル基アミド化反応は22.2mg EDCの添加によって開始した。室温で4時間撹拌した後、生成物を0.1M, pH7.4 PBSであらかじめ平衡化したSephadex G-25カラムにかけて、低分子不純物を除去した。rMETaseとDABとの結合の程度は、その後、PAGEおよびフルオレスカミン法を用いて評価した。
上記実験Aから決定された最適なNHS/EDCモル比、0.2、ならびにrMETase/DAB比、1:600を用いて、カルボキシル基アミド化反応に対するEDCの影響を判定した。rMETase/EDCモル比、1:200, 1:400, 1:600, 1:800および1:1000に相当するさまざまな量のEDCを、25 mg rMETase、14.1 mg DABおよび1.3 mg NHSを含有するPBS(0.2M, pH 6.5)混合物1.5mlを入れた各ウェルに添加した。他の反応条件、最終結合生成物の処理法および評価法は、実験Aと同様とした。rMETase/DABの最適モル比を得るために、NHS/EDC比は0.2に維持し、同様にrMETase/EDCは決定された最適比1:800として、上記と同じ手順を実施した。
タイムコース反応は、33 mg rMETaseを含有する2ml PBS(0.2M, pH 6.5)を使用し、NHS/EDCは0.2、rMETase/DABは1:800、さらにrMETase/EDCは1:800とした。EDC添加により反応を開始後、反応物0.4mlをさまざまな時間間隔で取り出し、精製した。rMETaseのDABとの結合の程度は、上記のように分析した。
図1に示す3段階の手順にしたがって、カルボキシル基がアミド化されていないrMETaseですでに達成されたPEG鎖より多くのPEG鎖を有するsuper-PEG化rMETaseを調製した。rMETase分子間での架橋結合なしに、追加の第一級アミンを導入するために、最初に無修飾rMETaseをPEG化し、それによって、架橋結合することなくカルボキシル基をアミド化することが可能となった。最後にカルボキシル基アミド化rMETaseを"super"-PEG化した。最初のPEG化ステップのために、rMETase(200mg)を含有するPBS(0.1M, pH7.4)2mlを0.5N NaOHでpH 8.5に調整した後、87.2 mgのMEGC-5000 PEG (rMETaseに対するPEGのモル比15:1)とともに室温で1時間撹拌しながら反応させた。
super-PEG化のために、新たに付加された第一級アミンを含有するPEG-rMETase、152mgを、2 mlに濃縮した。super-PEG化反応を開始するために、ホウ酸バッファー(1M, pH9.0)0.2 mlを、MEGC PEG 5000 (PEG:PEG-rMETaseモル比、60:1) 265.1 mgとともに添加し、pHを8.5に調整した。精製および濃縮した後、112 mgのsuper-PEG-rMETaseが得られた。また、対照として、カルボキシル基アミド化が無いほかは上記と同様に、PEG:rMETaseがそれぞれ15:1および60:1の2段階法でPEG-rMETaseを調製した。
rMETaseのPEG化の程度は、rMETaseサブユニット当たりの平均PEG含量として測定した。最終精製PEG-rMETase複合体中のPEG含量の定量は、Li, S.ら、上記、により記載のアルカリ加水分解比色法によって行った。簡単に述べると、分析すべきPEG-rMETaseを2つのサンプルに分けた。一方のサンプルを30分間アルカリ加水分解に供し、rMETaseと結合したPEGを遊離させた。もう一方のPEG-rMETaseサンプルはアルカリ加水分解を行わなかった。次に、それぞれのサンプルを1mlクロロホルムおよび1mlチオシアン酸アンモニウムからなる二層系に注入した。30分間勢いよく撹拌し、3500 gで3分間遠心した後、下層のクロロホルムを取り除く。510nmの吸光度を用いて、クロロホルム層における遊離の、または遊離されたPEGの量を検量線によって決定した。PEG-rMETase標品中の遊離PEGの量は、アルカリ加水分解処理なしのサンプルから決定した。PEG-rMETase中のPEGの総量は、アルカリ加水分解に供したサンプルで測定した。rMETaseに結合したPEGの量は、PEGの総量から遊離の量を差し引いて得られた(cLi, S.上記)。
無修飾rMETaseおよびPEG化rMETaseの免疫反応性を、抗rMETase抗血清との結合能力によって判定した。免疫反応性アッセイは、ELISAおよびサンドイッチ法を用いて実施した。0.1M炭酸ナトリウムコーティングバッファー(pH9.5)で希釈した100μlのウサギ抗rMETase抗血清をマイクロプレートの各ウェルに加え、4℃にて一晩インキュベートした。プレートを、0.05% Tween-20含有PBS(pH7.4)で三回洗浄し、10% FBS含有PBSアッセイバッファー(pH7.4)200μlを用いて室温で2時間ブロッキングし、再度洗浄した。PBSアッセイバッファー中で25μg/mlから0.25μg/mlまで希釈されたrMETase、PEG化rMETaseおよびsuper-PEG化rMETase、100μlを、マイクロプレートの該当するウェルに加え、室温で1時間インキュベートした。プレートを洗浄した後、100μlのマウス抗rMETase抗血清をプレートの各ウェルに加え、室温で1時間インキュベートし、次に洗浄した。最適希釈した100μlのヤギ抗マウス多価免疫グロブリン・西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体を各ウェルに添加した。このプレートを室温で1時間インキュベートし3回洗浄した。100μlの基質溶液(O-フェニレンジアミン二塩酸塩+過酸化水素)を各ウェルに添加した後、室温で30分間インキュベートした。50μlの2N硫酸を各ウェルに添加して呈色反応を終止した。各ウェルの吸光度を492nmで測定した。
Claims (22)
- 非タンパク質ポリマー鎖でタンパク質を修飾する方法であって:
a) タンパク質を非タンパク質ポリマーと結合し、1つもしくは複数の非タンパク質ポリマー鎖を有する第1の修飾タンパク質を生成すること;
b) 1つもしくは複数の非タンパク質ポリマー鎖を有する、前記の第1の修飾タンパク質を、2つ以上のアミノ基を有する多官能アミンと結合し、1つもしくは複数の追加のアミノ基を有する修飾タンパク質を生成すること;
c) 1つもしくは複数の追加のアミノ基を有する前記修飾タンパク質を、別の非タンパク質ポリマーと結合し、第1の修飾タンパク質より多くの非タンパク質ポリマー鎖を有する、第2の修飾タンパク質を生成すること、
を含んでなる前記方法。 - 前記非タンパク質ポリマーが、前記タンパク質のN末端アミノ基と反応しうる官能基により誘導体化されている、請求項1に記載の方法。
- 前記非タンパク質ポリマーがポリオキシアルキレンである、請求項2に記載の方法。
- 前記ポリオキシアルキレンがポリエチレングリコールである、請求項3に記載の方法。
- 前記官能基が、N-ヒドロキシスクシンイミドである、請求項2に記載の方法。
- 前記非タンパク質ポリマーが、メトキシポリエチレングリコールスクシンイミジルグルタラートである、請求項5に記載の方法。
- 前記非タンパク質ポリマーの分子量が約5000である、請求項2に記載の方法。
- 前記多官能アミンがジアミノブタンである、請求項1に記載の方法。
- ステップa)における前記の第1の修飾タンパク質が、前記タンパク質のN末端アミノ基と、前記非タンパク質ポリマーのエステル基との結合によって生成する、請求項1に記載の方法。
- ステップb)における、1つもしくは複数の追加のアミノ基を有する前記修飾タンパク質が、前記第1の修飾タンパク質のC末端カルボキシル基と、前記多官能アミンのアミノ基との結合によって生成する、請求項1に記載の方法。
- 前記カルボキシルが触媒の存在下で前記アミノ基と結合する、請求項10に記載の方法。
- 前記触媒がカルボジイミドである、請求項11に記載の方法。
- 前記カルボジイミドが1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドである、請求項12に記載の方法。
- 前記修飾タンパク質が、ステップb)において第1の修飾タンパク質間の架橋結合なしに生成する、請求項10に記載の方法。
- 第1の結合ステップにおいて、前記タンパク質の前記非タンパク質ポリマーに対する比が、1:15である、請求項1に記載の方法。
- 第2の結合ステップにおいて、前記第1の修飾タンパク質の前記非タンパク質ポリマーに対する比が、1:60である、請求項1に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法にしたがって修飾されたタンパク質。
- 前記タンパク質がメチオニナーゼである、請求項17に記載のタンパク質。
- ポリエチレングリコール鎖により2回修飾されたタンパク質であって、第1の修飾は、タンパク質のN末端アミノ基とポリエチレングリコールエステル誘導体とを結合して、最初のPEG化タンパク質を生成すること、ならびに前記の最初のPEG化タンパク質と少なくとも2つのアミノ基を有する多官能アミンとを結合して、ポリエチレングリコール鎖および1つもしくは複数の追加のアミノ基を有する第1の修飾タンパク質を生成することを含んでなる;さらに、第2の修飾は、前記第2の修飾タンパク質における1つもしくは複数の追加のアミノ基と別のポリエチレングリコールエステル誘導体とを結合して、第1の修飾タンパク質より多くのポリエチレングリコール鎖を有する第2の修飾タンパク質を生成することを含んでなる、前記タンパク質。
- 請求項19に記載のタンパク質、および製薬上許容される賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
- 必要のある被験体に、治療上有効な量の請求項19に記載の化合物、またはその医薬組成物を投与することを含んでなる、腫瘍の活動性を調節する方法。
- 前記被験体がヒトもしくは動物である、請求項21に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US55431004P | 2004-03-17 | 2004-03-17 | |
US60/554,310 | 2004-03-17 | ||
PCT/US2005/008267 WO2005090395A2 (en) | 2004-03-17 | 2005-03-11 | Methods for increasing protein polyethylene glycol (peg) conjugation |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012000098A Division JP2012116840A (ja) | 2004-03-17 | 2012-01-04 | タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008500814A true JP2008500814A (ja) | 2008-01-17 |
JP5460958B2 JP5460958B2 (ja) | 2014-04-02 |
Family
ID=34962835
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007503980A Expired - Fee Related JP5460958B2 (ja) | 2004-03-17 | 2005-03-11 | タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 |
JP2012000098A Pending JP2012116840A (ja) | 2004-03-17 | 2012-01-04 | タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012000098A Pending JP2012116840A (ja) | 2004-03-17 | 2012-01-04 | タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7329516B2 (ja) |
EP (1) | EP1725583B1 (ja) |
JP (2) | JP5460958B2 (ja) |
KR (2) | KR20120134158A (ja) |
CN (1) | CN1984924B (ja) |
AU (1) | AU2005224078B2 (ja) |
CA (1) | CA2560259C (ja) |
DE (1) | DE602005025090D1 (ja) |
WO (1) | WO2005090395A2 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2005224078B2 (en) * | 2004-03-17 | 2011-01-27 | Anticancer, Inc. | Methods for increasing protein polyethylene glycol (PEG) conjugation |
ES2390082T5 (es) * | 2004-06-30 | 2018-01-19 | Nektar Therapeutics | Conjugados de resto de Factor IX y polímeros |
EP1861125A2 (en) * | 2005-03-23 | 2007-12-05 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Conjugates of an hgh moiety and peg derivatives |
CN101143894A (zh) * | 2007-06-22 | 2008-03-19 | 中国药科大学 | 高效抑制血管生成多肽及其物理化学修饰方法和应用 |
US8475652B2 (en) * | 2009-10-19 | 2013-07-02 | Jan A. K. Paul | Method for purification of uncatalyzed natural fuels from metal ions by means of at least one hemeprotein and use of the at least on hemeprotein |
RU2580038C2 (ru) | 2009-12-04 | 2016-04-10 | Дженентек, Инк. | Мультиспецифические антитела, аналоги антител, композиции и способы |
CN102234331A (zh) * | 2010-05-06 | 2011-11-09 | 华东师范大学 | Exendin-4衍生物的复合物及其制备方法和应用 |
US8440309B2 (en) | 2011-01-31 | 2013-05-14 | Confluent Surgical, Inc. | Crosslinked polymers with the crosslinker as therapeutic for sustained release |
RS61072B1 (sr) * | 2015-11-23 | 2020-12-31 | Bristol Myers Squibb Co | Sistemi aditiva za upotrebu u pegilaciji proteina |
CN108267590B (zh) * | 2016-12-31 | 2021-05-11 | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 | Peg修饰蛋白的peg结合数检测方法 |
EP3708561B1 (en) | 2017-11-06 | 2024-05-08 | Hanmi Fine Chemical Co., Ltd. | Polyethylene glycol derivative and preparation method thereof |
CN110672836B (zh) * | 2019-09-30 | 2023-03-21 | 香港大德昌龙生物科技有限公司 | 磁珠包被物及其制备方法和应用、检测试剂盒 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000226334A (ja) * | 1994-04-07 | 2000-08-15 | Genentech Inc | 部分的成長ホルモン不感受性症候群の治療 |
JP2001526238A (ja) * | 1997-12-19 | 2001-12-18 | エンゾン,インコーポレーテッド | 実質的に純粋なヒスチジン結合タンパク質−ポリマー結合体 |
WO2003074087A1 (de) * | 2002-03-06 | 2003-09-12 | Biotechnologie - Gesellschaft Mittelhessen Mbh | Kopplung von proteinen an ein modifiziertes polysaccharid |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5951974A (en) * | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
AU2005224078B2 (en) * | 2004-03-17 | 2011-01-27 | Anticancer, Inc. | Methods for increasing protein polyethylene glycol (PEG) conjugation |
-
2005
- 2005-03-11 AU AU2005224078A patent/AU2005224078B2/en not_active Ceased
- 2005-03-11 KR KR1020127030797A patent/KR20120134158A/ko not_active Application Discontinuation
- 2005-03-11 US US11/077,897 patent/US7329516B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-11 CA CA2560259A patent/CA2560259C/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-11 KR KR1020067021545A patent/KR101245071B1/ko active IP Right Grant
- 2005-03-11 EP EP05725449A patent/EP1725583B1/en not_active Ceased
- 2005-03-11 JP JP2007503980A patent/JP5460958B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-11 CN CN2005800157929A patent/CN1984924B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-11 DE DE602005025090T patent/DE602005025090D1/de active Active
- 2005-03-11 WO PCT/US2005/008267 patent/WO2005090395A2/en active Application Filing
-
2007
- 2007-12-10 US US12/001,304 patent/US7799549B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-09-03 US US12/875,377 patent/US8465734B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-01-04 JP JP2012000098A patent/JP2012116840A/ja active Pending
-
2013
- 2013-05-21 US US13/899,225 patent/US20130252306A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000226334A (ja) * | 1994-04-07 | 2000-08-15 | Genentech Inc | 部分的成長ホルモン不感受性症候群の治療 |
JP2001526238A (ja) * | 1997-12-19 | 2001-12-18 | エンゾン,インコーポレーテッド | 実質的に純粋なヒスチジン結合タンパク質−ポリマー結合体 |
WO2003074087A1 (de) * | 2002-03-06 | 2003-09-12 | Biotechnologie - Gesellschaft Mittelhessen Mbh | Kopplung von proteinen an ein modifiziertes polysaccharid |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1725583A2 (en) | 2006-11-29 |
KR101245071B1 (ko) | 2013-03-18 |
AU2005224078A1 (en) | 2005-09-29 |
CA2560259C (en) | 2016-08-16 |
JP5460958B2 (ja) | 2014-04-02 |
CN1984924B (zh) | 2011-08-10 |
CA2560259A1 (en) | 2005-09-29 |
EP1725583B1 (en) | 2010-12-01 |
US20100331529A1 (en) | 2010-12-30 |
WO2005090395A2 (en) | 2005-09-29 |
US7329516B2 (en) | 2008-02-12 |
WO2005090395A3 (en) | 2006-09-21 |
JP2012116840A (ja) | 2012-06-21 |
US8465734B2 (en) | 2013-06-18 |
DE602005025090D1 (de) | 2011-01-13 |
US20080153740A1 (en) | 2008-06-26 |
CN1984924A (zh) | 2007-06-20 |
US20050238617A1 (en) | 2005-10-27 |
US7799549B2 (en) | 2010-09-21 |
AU2005224078B2 (en) | 2011-01-27 |
KR20120134158A (ko) | 2012-12-11 |
US20130252306A1 (en) | 2013-09-26 |
KR20070000493A (ko) | 2007-01-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5460958B2 (ja) | タンパク質ポリエチレングリコール(peg)複合体形成を増大させる方法 | |
ES2504165T3 (es) | Conjugados de polímeros con antigenicidad disminuida, procedimientos de preparación y usos de los mismos | |
Payne et al. | Product development issues for PEGylated proteins | |
KR20060136463A (ko) | 폴리에틸렌 글리콜(peg) 단백질 결합을 증가시키기 위한방법 | |
US20120114742A1 (en) | Polymer Conjugates with Decreased Antigenicity, Methods of Preparation and Uses Thereof | |
JP2006321808A (ja) | 化学的に修飾されたヒト成長ホルモンコンジュゲート | |
JP2007533665A (ja) | 新規g−csf結合体 | |
JP2007501888A (ja) | ポリシアル酸誘導体 | |
JP2017205120A (ja) | コリンエステラーゼ部分とポリマーとのコンジュゲート | |
Ramírez-Andersen et al. | Long-acting human growth hormone analogue by noncovalent albumin binding | |
ES2386575T3 (es) | Interferón alfa 2a modificado por polietilenglicol, su proceso de síntesis y su aplicación | |
JP4237703B2 (ja) | インスリン様成長因子結合タンパク質−4及びポリ(エチレングリコール)の接合体 | |
Li et al. | Protein carboxyl amidation increases the potential extent of protein polyethylene glycol conjugation | |
Nanda | Studies on site-specific PEGylation of uricase from Bacillus fastidious using mPEG-derivatives | |
KR20040086521A (ko) | 생물학적 활성물질과 생체적합성 고분자의 1:1 접합체,이의 제조방법과 이를 함유하는 약학 조성물 | |
JP2005526505A (ja) | ヒトゲラチナーゼaのcドメイン及びポリエチレングリコールの接合体、その精製方法及び使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110104 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110329 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110405 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110704 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110830 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20120423 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20120531 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140115 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5460958 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |