JP2007169171A - 血管新生促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】重合度が20〜300のポリリン酸又はその塩の1種または2種以上の混合物を有効成分として含有する血管新生促進剤。
【選択図】なし
Description
(1) 重合度が20〜300のポリリン酸又はその塩の1種または2種以上の混合物を有効成分として含有する血管新生促進剤。
(2) 重合度が20〜100のポリリン酸又はその塩の1種または2種以上の混合物を有効成分として含有する血管新生促進剤。
(3) ポリリン酸が、鎖状又は環状又は網目状である、(1)又は(2)に記載の血管新生促進剤。
(4) 虚血性疾患の治療及び/又は予防のための、(1)〜(3)のいずれかに記載の血管新生促進剤。
(5) 褥瘡の治療及び/又は予防のための、(1)〜(3)のいずれかに記載の血管新生促進剤。
(6) 創傷の治療及び/又は予防のための、(1)〜(3)のいずれかに記載の血管新生促進剤。
(7) 細胞増殖因子をさらに含む、(1)〜(6)のいずれかに記載の血管新生促進剤。
上記ポリリン酸は、直鎖状、環状、網目状のいずれの構造であってもよい。
食品添加物規格のヘキサメタリン酸ナトリウム(太平化学産業株式会社製)200 gを精製水1,000 mlに溶解し、これに96%のエチルアルコールを50 mlを徐々に加えた。これをよく撹拌して室温で1時間以上放置した後、遠心分離(10,000×g、10分、25℃)を行い、2層に分離させた。ほとんどのアルコール分を含む上層を回収し、別の容器に移した。ここで得られた下層は、もっとも分子量の大きい長鎖ポリリン酸ナトリウムを含む画分(画分1)として保存した。一方、分離回収した上層に、さらに50mlのエチルアルコールを加え、前記と同様に、室温での放置、遠心分離、上層除去の操作を行い、得られた下層を画分1よりも分子量の小さいポリリン酸ナトリウムが含む画分(画分2)として保存した。また、分離回収した上層に対しては、前記と同様に、室温での放置、遠心分離、上層除去の操作を行い、得られた下層を画分3として保存した。その後、同様の操作をさらに6回繰り返し、その度に得られた下層をそれぞれ画分4、5、6、7、8、9として保存した。
画分1、2を混合し、混合物を凍結乾燥してエタノールを完全に除去し、重合度が100〜300の長鎖ポリリン酸ナトリウム粉末を得た。また、画分3〜5を混合し、同様にして重合度が20〜100の中鎖ポリリン酸ナトリウム粉末を、画分6〜9を混合し、同様にして重合度が3〜20の短鎖ポリリン酸ナトリウム粉末を得た。
血管を形成する細胞であるヒト臍帯由来血管内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells: HUVEC)を用い、ポリリン酸ナトリウムによる増殖促進効果を調べた。HUVEC細胞を1穴あたり2,000個となるよう96穴プレートに播種し、血管内皮細胞用増殖培地(EGM-2培地、CAMBREX社製)を用いて37℃、5% CO2で一晩培養した。その後0.5%ウシ血清を含む血管内皮細胞用基礎培地(EBM-2培地、CAMBREX社製)に置換し、16時間培養を行った。
実施例1と同じ方法で編目状高次構造のポリリン酸ナトリウムであるウルトラリン酸ナトリウムによるHUVECの増殖促進効果に関して調べた。HUVECを、0.5%ウシ血清を含むEBM-2培地(陰性対照群)、及び、ウルトラリン酸ナトリウム(ミテジマ化学株式会社製)、中鎖ポリリン酸ナトリウムをそれぞれ0.002%含むEBM-2培地(0.5%ウシ血清を含む)で48時間培養し、その後の細胞増殖の割合をCellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assayキット(プロメガ株式会社)を用い、キットに記載された方法に従って測定した。各処理群について3点ずつ処理を行い、その平均値を用いて細胞増殖効果の評価を行った。
HUVECを用い、ポリリン酸ナトリウムによる細胞遊走能亢進効果を調べた。Boyden chamberを用い、以下の方法によって細胞遊走試験を行った。
マウス(ICR)8週齢、雌、12匹(日本クレア)を購入し、1週間飼育後実験を行った。氷上でゆっくりマトリジェル(BD Biosciences社)を溶解し、最終濃度が0.01%または0.1%となるように中鎖ポリリン酸ナトリウムを混合したマトリジェルを作製した。陽性対照群用として塩基性FGFを100 ng/ml、ヘパリン30 U/mlを含むマトリジェルを作製し、陰性対照群用としてはマトリジェルを用いた。ペントバルビタールを滅菌生理食塩水で10倍希釈して10 μl/体重(g)を腹腔内注射し、マウスを麻酔した。注射器(針:25ゲージ)を用いて、調製した各マトリジェルをマウスの両背側腹部の皮下に片側0.4 mlずつ注入した。この状態でマウスを8日間飼育した。飼育期間終了後のマウス12匹を1匹ずつ麻酔し、皮下よりマトリジェルを摘出した。摘出したマトリジェルの重量を測定してから、デジタルカメラで撮影しマトリジェル内への血液の浸透度(毛細血管形成の度合い)を観察した。
Claims (7)
- 重合度が20〜300のポリリン酸又はその塩の1種または2種以上の混合物を有効成分として含有する血管新生促進剤。
- 重合度が20〜100のポリリン酸又はその塩の1種または2種以上の混合物を有効成分として含有する血管新生促進剤。
- ポリリン酸が、鎖状又は環状又は網目状である、請求項1又は2に記載の血管新生促進剤。
- 虚血性疾患の治療及び/又は予防のための、請求項1〜3のいずれかに記載の血管新生促進剤。
- 褥瘡の治療及び/又は予防のための、請求項1〜3のいずれかに記載の血管新生促進剤。
- 創傷の治療及び/又は予防のための、請求項1〜3のいずれかに記載の血管新生促進剤。
- 細胞増殖因子をさらに含む、請求項1〜6のいずれかに記載の血管新生促進剤。
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