JP2006094732A

JP2006094732A - 機能性飲料

Info

Publication number: JP2006094732A
Application number: JP2004282568A
Authority: JP
Inventors: Eisaku Tosaka; 栄作東坂; Kazuo Takahashi; 和郎高橋
Original assignee: XIREM KENKYUSHO KK
Current assignee: XIREM KENKYUSHO KK
Priority date: 2004-09-28
Filing date: 2004-09-28
Publication date: 2006-04-13

Abstract

【課題】ヒノキ科植物の抽出油を簡便に摂取してインフルエンザウイルスをはじめとする病原体の感染を予防することができる機能性飲料を提供する。
【解決手段】緑茶等の飲料に、ヒノキ科植物の抽出物を含有させた。

Description

本発明は、インフルエンザウイルス等の病原体の感染予防に資する機能性飲料に関するものである。

毎年、大勢の人間がインフルエンザウイルスに感染、発病し、死者も発生している。人間に感染するのは人インフルエンザウイルスであるが、毎年のように新型の人インフルエンザウイルスが発生して多大な損害をもたらしている。インフルエンザウイルスの感染予防には、事前のワクチン投与や手洗いやうがいの励行等が有効とされている。また、折しも２００３年末から２００４年にかけて大問題となったように、東南アジアから東アジア、北米等において高病原性鳥インフルエンザウイルスが直接人間に感染した可能性も指摘されているため、養鶏場等に立ち入る必要のある者には、防護服の着用や事後の洗浄等の感染防止策が非常に重要である（非特許文献１参照）。

一方、青森ヒバや台湾ヒノキ等のヒノキ科植物の抽出油（ヒノキ油、ヒバ油等と称される）に抗菌活性があるとの知見があり、屋内の空気を吸入して容器内に貯留させた薬液を噴霧した後当該空気を排出することで、屋内の空気中に存在する微生物、ウイルス、花粉等の浮遊粒子状物質、ハウスダスト、有害ガス等を除去するための装置において、前記薬液としてヒノキ油油等を利用するという技術が考えられている（例えば、特許文献１参照）。
岡田晴恵著「鳥インフルエンザの脅威−本当の怖さはこれからだ！」，河出書房新社，２００４年５月２０日特開２０００−２１０５２１号公報

前記特許文献１では、薬剤として茶油（カテキンを含む茶抽出油）を使用した場合にインフルエンザウイルスに対して有効であるが、薬剤としてヒノキ油を使用した場合にはＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）や病原性大腸菌に有効であり、この違いの根拠は植物精油の種類によって殺菌・防除のスペクトルが相違することにある、と開示されている。しかしながら、具体的な試験結果として示されているのは、ヒノキ油を含む水溶液が動物（マウス）に対して低毒性であること、前記装置の運転試験により２週間後にダニを主とする虫が薬液（ヒノキ油を含む水溶液）中に存在しておりカビの胞子が消失していたこと、であって、同文献からはヒノキ油に抗ＭＲＳＡや抗大腸菌活性があるのか、茶油であれば抗インフルエンザウイルス活性があるのかは必ずしも明らかにされていない。また、従来よりなされている感染予防方法であるワクチン接種や手洗いやうがいは有用であるが、ワクチン注射を受けるのは一般に高価であり、インフルエンザが大流行した際にはワクチンが不足したり価格が高騰するといった問題があり、その結果として感染拡大につながってしまうおそれもある。さらにこの問題は、貧困地域においては一層甚大な被害に結びつくという危険性も孕んでいる。

一方、これまで本発明者は、ヒノキ科植物の抽出油（ヒバ油）或いはそれに含まれるヒノキチオールによるシロアリ防除作用に着目して、天然物であるヒバ油を利用した環境及び健康に配慮したシロアリ防除剤等を研究開発してきたが、その過程において新たにヒノキ科植物の抽出油が抗ウイルス作用、とりわけ抗インフルエンザウイルス作用を奏する可能性を見出した。

そこで本発明は、ヒノキ科植物の抽出油を簡便に摂取してインフルエンザウイルスをはじめとする病原体の感染を予防することができる機能性飲料の提供を主目的とするものである。

すなわち、本発明は、ヒノキ科植物の抽出物を含有してなることを特徴とする機能性飲料である。ただし本発明における「飲料」としては、特にその種類が限定されることはなく、例えば清涼飲料（発泡性，非発泡性のいずれをも含む）、乳飲料、乳酸飲料、果汁又は野菜汁飲料、ジュース、アルコール飲料等、あらゆるものが含まれる。

またヒノキ科（Cupressaceae）の植物は、世界中に分布する常緑針葉樹であり、青森ヒバ（ヒノキアスナロ；アスナロ属）、台湾ヒノキやヒノキやアラスカヒノキ（ヒノキ属）、イトスギ（イトスギ属）、ネズ（ネズミサシ属）、ベイスギやニオイヒバ（ネズコ属）、オニヒバ（ショウナンボク属）等が代表的である。また、ヒノキ科植物の抽出油（以下、「ヒバ油」と総称する場合がある）は、製材時に生じるオガ粉や廃材等を水蒸気蒸留することにより抽出水と分離した状態で得られるものであり、酸性油分（約３〜４重量％）として主にフェノール類（ヒノキチオール、β-ドラブリン、l-ロジン酸、カルバクロール、その他）を含み、中性油分（約９６〜９７重量％）として主にセスキテルペン類（ツヨプセン、パラサイメン、ジヒドロサイメン、セドロール、ウィドロール、その他）を含む。なお、酸性油分は抽出水にも若干含まれている。すなわち、本発明の機能性飲料に含有されるヒノキ科植物の抽出物は、抽出油、抽出水の何れであってもよく、またそれらの混合物であってもよく、さらには抽出油や抽出水に含有される特定の成分（一種又は二種以上の混合物を含む）であってもよい。

病原体の感染を抑制する有効成分を大別すると、抽出水と抽出油とが挙げられるが、感染抑制効率から見れば、抽出物としては、ヒノキ科植物の抽出油を適用することが好ましく、さらに望ましくはこの抽出油は、ヒノキ科植物の破砕物又は粉末を水蒸気蒸留により得られる抽出物中の親油性成分を含有するものが好適である。

特に日本を含め世界中で常飲されている飲料としては、茶飲料が挙げられる。そこで、本発明の機能性飲料には、ヒノキ科植物の抽出物に加えて茶葉抽出物をさらに含有するものが好ましい。茶は、ツバキ科植物のツバキ属チャノキの葉や茎を熱水又は水で抽出した飲み物であり、世界中には多種の茶が存在する。例えば茶葉の発酵度合いによる分類では、不発酵茶として緑茶、弱発酵茶として白茶、半発酵としてウーロン茶、完全発酵茶として紅茶、後発酵茶としてプーアル茶等があり、これらの茶にヒノキ科植物の抽出物を添加したものが、茶飲料としての本発明の機能性飲料に該当する。またこれらの茶飲料に、香り付けや味付けのための他の植物の抽出物や、添加剤、甘味料等が添加したものとすることもできる。

本発明の機能性飲料によれば、ヒバ油等の含有される成分であるヒノキ科植物の抽出物を飲み物として簡単に摂取することができる。そして、飲料として摂取された前記抽出油ないし抽出物が口腔粘膜や咽頭粘膜等の体内の粘膜に付着することで、インフルエンザウイルス等の病原体の感染抑制効果が発揮されるので、日常的な感染病の予防に寄与することができる。

以下、本発明の一実施形態について説明する。

本実施形態に係る機能性飲料は、ヒノキ科植物の抽出物を含有する緑茶飲料である。すなわち、この機能性飲料は、不発酵茶葉を熱水抽出した緑茶を主体とし、それにヒノキ科植物の抽出物を添加したものである。なお緑茶には、カテキン、カフェイン、テアニンやグルタミン酸等の各種アミノ酸、ビタミンＣ、
ここで本実施形態では、ヒノキ科植物として青森ヒバを適用し、その抽出油としてヒバ油を用いている。斯かるヒバ油は、例えば通常の水蒸気蒸留法、すなわち青森ヒバの製材時に生じたオガ粉を集めて蒸気釜に投入し、ボイラで熱した蒸気を当てることで抽出される液体のうち油溶成分として得られるものである。また、ヒバ油は約１００Ｋｇの青森ヒバ材から約１Ｋｇ得られる。なお、水蒸気蒸留法により得られた液体には、ヒバ油の他に水溶成分が溶解したヒバ抽出水が含まれており、ヒバ油とヒバ抽出水との重量比は約１：１００である。こうして得られたヒバ油には、重量比にして約３〜４％の酸性油と約９６〜９７％の中性油が含まれている。酸性油には、カルバクロール、ｌ-ロジン酸、ヒノキチオール、β-ドラブリン等の化合物が含まれており、中性油には、ツヨプセン、パラサイメン、ジヒドロサイメン、セドロール、ウィドロール等の化合物が含まれている。そして、緑茶を主体とする本実施形態の機能性飲料には、ヒバ油を全量に対する重量比にして約1,000〜10,000倍に希釈して添加している。但し、ヒバ油の希釈率は、十分なインフルエンザウイルス感染防止活性が得られ、且つ毒性が生じず、コスト面で見合う範囲内で適宜に設定することができる。

このような機能性飲料を飲用すれば、当該機能性飲料に含まれるヒバ油が体内の粘膜、例えば口腔粘膜や咽頭粘膜等に付着することで、ウイルス等の病原体の感染を予防することができる。

また、本実施形態により感染予防が見込まれるインフルエンザウイルス以外の病原体とそれによる疾病の組み合わせは次の通りである。［１類感染症］エボラウイルス；エボラ出血熱、クリミア・コンゴウイルス；クリミアコンゴ出血熱、ペスト菌；ペスト、マールブルグウイルス；マールブルグ熱、ラッサウイルス；ラッサ熱、［２類感染症］コレラ毒素(CT)産生性コレラ菌；コレラ、ディセンティリ菌・フレキシネル菌・ボイド菌・ソンネ菌；細菌性赤痢、サルモネラ属チフス菌・パラチフス菌；腸チフス・パラチフス、ポリオウイルス；急性灰白髄炎（ポリオ）、ジフテリア菌；ジフテリア、［３類感染症］朝刊出血性大腸菌（Ｏ１５７等）；腸管出血性大腸菌感染症、［４類感染症］赤痢アメーバのシスト；アメーバ赤痢、エキノコックス（多包条虫，単包条虫）；エキノコックス症、黄熱ウイルス；黄熱、クラミジア・シッタン；オウム熱、スピロヘータ；回帰熱、肝炎ウイルス；急性ウイルス性肝炎、コクシエラ・バーネッティ（リケッチア）；Ｑ熱、狂犬病ウイルス；狂犬病、クリプトスポリジウム属原虫；クリプトスポリジウム症、感染性プリオン蛋白；クロイツフェルト・ヤコブプリオン病、Ａ群レンサ球菌；劇症型溶血性レンサ球菌感染症、ＨＩＶウイルス；後天性免疫不全症候群、コクシジオイデス・イミティス；コクシジオイデス症、ランブル鞭毛虫；ジアルジア症、ハンタウイルス；腎症候性出血熱、髄膜炎菌；流行性髄膜炎、風疹ウイルス；先天性風疹症候群、炭疽菌；炭疽、ツツガムシ病リケッチア；ツツガムシ病、デングウイルス；デング熱、リケッチア・ジャポニカ；日本紅斑熱、日本脳炎ウイルス；日本脳炎、ボツリヌス菌；乳児ボツリヌス症、梅毒トレポネーマ；梅毒、破傷風菌；破傷風、バンコマイシン耐性腸球菌；バンコマイシン耐性腸球菌感染症、反多雨イルし；ハンタウイルス肺症候群、サル由来Ｂウイルス；Ｂウイルス病、ブルセラ属菌；ブルセラ症、発疹チフスリケッチア；発疹チフス、マラリア原虫；マラリア、ライム熱ボレリア；ライム熱、レジオネラ属菌；レジオネラ症、ウエストナイルウイルス；ウエストナイル熱、アデノウイルス３・７型等；咽頭結膜炎、Ａ群溶血性レンサ球菌；Ａ群溶血性レンサ球菌咽頭炎、ウイルス（ロタウイルス，小型球形ウイルス等）・細菌（サルモネラ，カンピロバクター等）；感染性胃腸炎、水痘・帯状疱疹ウイルス；水痘、コクサッキーウイルス等；手足口病、ヒトパルボウイルス；リンゴ病、ヒトヘルペスウイルス；突発性発疹、百日咳菌；百日咳、風疹ウイルス；風疹（三日ばしか）、コクサッキーウイルスＡ群；ヘルパンギーナ、麻疹ウイルス；麻疹、ムンプスウイルス；おたふくかぜ、エンテロウイルス７０型等；急性出血性結膜炎、アデノウイルス８等；流行性結膜炎（はやり目）、原発性（単純ヘルペスウイルス等）・続発性（麻疹ウイルス等）；急性脳炎、インフルエンザ菌・肺炎球菌・髄膜炎菌；細菌性髄膜炎、コクサッキーウイルス等；無菌性髄膜炎、肺炎マイコプラズマ；マイコプラズマ肺炎、クラミジア；クラミジア肺炎、急性麻疹ウイルス；成人性麻疹、クラミジア・トラコマティス；性器クラミジア感染症、単純ヘルペスウイルス；性器ヘルペスウイルス感染症、ヒトパピローマウイルス；尖形コンジローム、淋菌；淋菌感染症、ＭＲＳＡ；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌感染症、ペニシリン耐性肺炎球菌；ペニシリン耐性肺炎球菌感染症、多剤耐性緑膿菌；薬剤耐性緑膿菌感染症、結核菌；結核等。以上の他、ＳＡＲＳコロナウイルスによるＳＡＲＳ（重症急性呼吸症候群）等の新型感染症。また、動物由来の感染症の人間への二次感染に対する予防にも本実施形態の機能性飲料の飲用が有効であると考えられる。特に、後述する実施例によれば、インフルエンザウイルス等の人間が口や鼻から吸い込むことによって感染する可能性の高い病原体の感染を極めて有効に予防することができるものと考えられる。

なお、本発明は上述した実施形態に限られるものではない。ヒノキ科植物の抽出物として、例えばヒバ油に替えてヒバ抽出水を適用したり、それらの混合物を適用することができ、さらには一種又は複数種の含有化合物を適用することもでき、ヒノキ科の植物であれば青森ヒバ以外にも他のものを用いることもできる。また本発明は、機能性飲料を茶飲料以外の飲料とすることができることは勿論である。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、以下の説明によって本発明は何ら制限を受けるものではない。なお、以下の各試験は、大阪府立公衆衛生研究所・感染症部門への委託により実施したものである。

＜試験１：ヒバ由来物の抗インフルエンザウイルス効果比較試験＞
（１）目的：青森ヒバの水蒸気抽出物における水溶性又は油溶性のいずれの画分に抗インフルエンザウイルス活性があるかを調べる。
（２）試験標品：（ａ）ヒバ抽出水；青森ヒバ材のオガ粉を水蒸気蒸留して得られる抽出液のうち水溶成分（下層）であり、具体的には１００％ヒバ抽出水（商品名「森林の力」，株式会社トピックス製），（ｂ）ヒバ油水溶液（ヒバ油６０％）；前記抽出液のうち油溶成分（上層）を所定量の乳化剤と共に水に溶解したもの、ヒバ油の容積率は全量の６０％であり、具体的には天然シロアリ防除剤（商品名「水溶性ヒバ油HB-60」，株式会社トピックス製），（ｃ）ヒノキチオール銅錯体；精製されたヒノキチオールの銅錯体。なお、各標品は下表１に示す数種類の希釈率で培養液により希釈して用いる。
（３）試験方法：ＦＦＵアッセイ（Focus Forming Unit Assay）によるインフルエンザウイルスの感染試験を行う。具体的には９６穴マイクロプレートに培養した所定量のイヌ腎臓由来のＭＤＣＫ細胞（培養液：ＥＡＧＬＥＭＥＭ）に対してインフルエンザウイルス（Ｈ３Ｎ２型ヒトワクチンニューカレドニア株）を感染させ、１６時間後、免疫染色により感染細胞（１ＦＦＵ＝１感染性ウイルス）を染色し計測する。感染細胞数を５０％に減少させた標品の濃度を５０％Effective Concentration（ＥＣ５０）とする。なお、インフルエンザウイルスは、前記培養液中に浮遊させた状態として、０．１ｍｌ（生存ウイルス数は約２００個）をＭＤＣＫ細胞を入れたマイクロプレートに供する。
（４）試験結果：各標品に関し３回試験したＦＦＵの平均値を求めた結果を表１に示す。

試験１の結果から、ヒバ油水溶液のＥＣ５０は希釈率625,000倍以上（ヒバ油原液（１００％ヒバ油）に換算して1,041,667倍以上の希釈率）であり、抗インフルエンザウイルス活性が顕著に高いと考えられる。これに対して、ヒバ抽出水のＥＣ５０は約１０倍希釈であり、ヒノキチオール銅錯体は無効である。ヒバ抽出水に抗インフルエンザ活性が認められる理由は必ずしも明らかでないが、ヒバ抽出水中に微量ながら酸性油が溶解していることが一因であると考えられる。

＜試験２：ヒバ油の抗ウイルス効果試験＞
（１）目的：前記試験１において、ヒバ油が非常に高い抗インフルエンザウイルス活性を有することが認められたので、ヒバ油の投与タイミングによる細胞に対するインフルエンザウイルスの感染の相違を調べる。
（２）試験標品：ヒバ油（試験１と同一のヒバ油水溶液）を、下表２の通りの各希釈倍率で用いる。
（３）試験方法：試験１とほぼ同様のＦＦＵアッセイによるインフルエンザウイルスの感染試験を行う。。ただし、（ｉ）培地（ＥＡＧＬＥＭＥＭ）を入れたマイクロプレートに所定量の培養したＭＤＣＫ細胞（０．１ｍｌ）を添加し、（ｉｉ）これにインフルエンザウイルス液（試験１と同一のもの、以下「ウイルス液」）を０．１ｍｌ（生存ウイルス数約２００個／培養液）を添加する。そして、（ｉｉｉ）３７℃で１時間インフルエンザウイルスをＭＤＣＫ細胞に吸着させ、（ｉｖ）ウイルス液を吸引除去し、培地を添加して吸引する洗浄を２〜３回行い、さらに３７℃で１６時間ＭＤＣＫ細胞を培養する。ここで、（ｉ）の段階で各希釈率のヒバ油水溶液をマイクロプレートに添加して（ｉｉ）の段階までに所定時間（１０分）をあける場合を「感染前処理」、（ｉｉ）の段階でウイルス液と共に各希釈率のヒバ油水溶液をマイクロプレートに添加する場合を「吸着時」、（ｉｖ）の段階で１６時間の培養後にヒバ油水溶液を添加する場合を「吸着後」、（ｉｉ）及び（ｉｖ）の段階の両方で各希釈率のヒバ油水溶液をマイクロプレートに添加する場合を「吸着時・後」として、「感染前処理」、「吸着時」、「吸着後」、「吸着時・後」の４パターンで免疫染色により感染細胞（１ＦＦＵ＝１感染性ウイルス）を染色し計測する。
（４）試験結果：各試験区分に関し３回試験したＦＦＵの平均値を求めた結果を表２に示す。

試験２の結果から、「吸着時」、「吸着時・後」において高い抗インフルエンザウイルス活性が認められ、それらのＥＣ５０はヒバ油水溶液の約12,500,000倍（ヒバ油原液に換算して約20,833,333倍）希釈である。一方、「吸着後」においては抗インフルエンザウイルス活性は殆ど認められない。さらに、「感染前処理」では、「吸着時・後」とほぼ同等の効果が認められた。以上のことから、ヒバ油にはインフルエンザウイルスが細胞に吸着する際又はそれ以前に細胞に接することで、インフルエンザウイルスの細胞への感染阻害活性を奏すると認められるので、ヒバ油はインフルエンザウイルスの細胞への吸着阻害作用を有するものと考えられる。その作用メカニズムは必ずしも明らかではないが、ヒバ油が細胞側に作用してインフルエンザウイルスの細胞への吸着以後のステップを阻害する可能性があり、主たる感染阻害メカニズムは吸着阻害であるものと考えられる。

＜試験３：感染前処理時間の検討試験＞
（１）目的：試験２の結果を受けて、ヒバ油によるインフルエンザウイルスの細胞への感染阻害効果の認められる感染前処理時間を検討する。
（２）試験標品：ヒバ油（試験１、試験２と同一のヒバ油水溶液）を、下表３の通りの各希釈倍率で用いる。
（３）試験方法：試験２の方法に従う。ただし本試験の場合、ヒバ油を細胞培養液へ添加するのはインフルエンザウイルスを細胞培養液へ添加する前であり、ヒバ油の添加からインフルエンザウイルスの添加までの時間を「感染前処理時間」として下表３の通り複数通りに変化させる。
（４）試験結果：各試験区分に関し３回試験したＦＦＵの平均値を求めた結果を表３に示す。なお比較のため、インフルエンザウイルスとヒバ油水溶液とを同時に細胞培養液に添加する「吸着時」（試験２の試験方法を参照）におけるＦＦＵ値も測定する。

試験３の結果から、ヒバ油によるインフルエンザウイルスの細胞への吸着（感染）阻害効果の認められる感染前処理時間については、２分では不十分であり、３０分では「吸着時」とほぼ同様の効果が認められる。感染前処理時間が５分の場合、ＥＣ５０はヒバ油水溶液の約500,000倍（ヒバ油原液に換算して約833,333倍）希釈であり、100,000倍（同、約166,667倍）希釈では「吸着時」の効果とほぼ遜色ない効果が認められる。以上のことから、ヒバ油によるインフルエンザウイルスの細胞への感染阻害メカニズムは、必ずしも明らかではないが、ヒバ油が細胞膜（おそらくインフルエンザウイルスレセプターかその近傍）に結合し、ウイルスの吸着を阻害する可能性が考えられるが、ヒバ油が細胞内へ浸透して当該細胞内でのインフルエンザウイルス増殖ステップを阻害するという可能性も考えられる。

＜試験４：ヒバ油の細胞毒性評価試験＞
（１）目的：ヒバ油を利用した抗インフルエンザウイルス剤の人間を含む動物への使用を考慮して、ヒバ油の細胞毒性評価を行う。
（２）試験標品：ヒバ油（試験１、試験２、試験３と同一のヒバ油水溶液）を、適宜の各希釈倍率で用いる。
（３）試験方法：培養液中にヒバ油を添加してＭＤＣＫ細胞を１６時間培養した後（ただし、培養液及び細胞は前記試験１〜３と同様のものを使用）、ＭＴＴ法によりミトコンドリアの酵素活性を測定する。
（４）試験結果：ヒバ油水溶液の25,000倍（ヒバ油原液に換算して約41,667倍）希釈では、酵素活性が７２％に低下するが、125,000倍（同、約208,333倍）希釈では細胞毒性は認められない。また、ヒバ油水溶液を３０分間感染前処理する場合では、1,000倍（同、約1,667倍）希釈でも細胞毒性は認められない。

Claims

ヒノキ科植物の抽出物を含有してなることを特徴とする機能性飲料。
前記抽出物は、ヒノキ科植物の抽出油である請求項１記載の機能性飲料。
前記抽出油は、ヒノキ科植物の破砕物又は粉末を水蒸気蒸留により得られる抽出物中の親油性成分を含有するものである請求項２記載の機能性飲料。
茶葉抽出物をさらに含有している請求項１、２又は３記載の機能性飲料。