【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビスラクトン誘導体に係わり、詳細には、acetyl CoA carboxylase（以下、ACC略記する場合もある）阻害活性を有するビスラクトン誘導体、及び該ビスラクトン誘導体を含有する医薬組成物に関する。
【従来の技術】
近年、肥満は、動脈硬化性疾患、特に冠動脈疾患の主要なリスクファクターであることが明らかとなってきた。すなわち、肥満個体では、蓄積された内臓脂肪から、脂肪酸やTNF-α等の種々の因子が放出され、これらが骨格筋、肝臓および脂肪組織におけるインスリン抵抗性を惹起するとともに、肝臓における中性脂肪の合成を促進し、高脂血症をもたらすことが報告されている。更に、インスリン抵抗性によって代償的に上昇した血中のインスリンは、耐糖能異常、更には糖尿病を引き起こすだけではなく、腎臓におけるNaイオンの再吸収亢進や交感神経の活性化を介して、末梢血管抵抗を上昇させ、最終的に高血圧状態を形成する。肥満によってもたらされた高脂血症、糖尿病および高血圧は、脳血管障害や冠動脈疾患などの動脈硬化症に基づく血管障害を惹起し、生命予後に深刻な影響を与えるものと考えられている。
【０００２】
肥満治療の基本は運動療法と食事療法であるが、人間の根源的な欲求との対立、労働時間との兼ね合い、ストレスの増加など様々な要因から、設定した目標を達成することには多大の困難が伴う。極度の肥満患者には胃縮小術、胃バイパス術などの外科治療が適応されることがあるが、肥満者は開腹手術をすると感染、脂肪融解などの創合併症をしばしば起こし、多大な時間の喪失、苦痛を伴うのが現状である。従って、安全かつ簡便に食事・運動療法を補完することのできる医薬品の併用が必要とされている。現在、抗肥満薬として使用されている医薬品として、マジンドール、シブトラミンなどの中枢性食欲抑制剤と、膵リパーゼ阻害剤であるオルリスタットが挙げられる。中枢作働性の薬剤では、口渇、便秘、胃不快感、時には幻聴・幻視など重篤な副作用が出現することがあり、また、オルリスタットでは、下痢、失禁、放屁などの消化管における副作用が認められている。概ね、これらの抗肥満薬については、副作用の出現しない投与量では効果は緩やかであり、長期にわたる使用の安全性は未だ確立されておらず、肥満に深く関わるインスリン抵抗性などに対する有益な作用はほとんど認められていないのが現状である。
【０００３】
インスリン抵抗性に関しては、ビグアナイド剤やペルオキシゾーム増殖関連レセプター（以下、PPARと略する）ガンマのアゴニストを使用した治療が広く行われている。ビグアナイド剤に関しては、主に非インスリン依存性糖尿病患者に対して、インスリン抵抗性の改善に加え、血糖降下作用や高脂血症改善作用を示すことが報告されている。しかしながら、その単独での治療効果は不十分であり、また、上腹部不快感、嘔気、下痢などの消化器症状に加え、乳酸アシドーシス等の生命の危険を伴う副作用を示すことが明らかとなっている。PPARガンマアゴニストに関しては、ビグアナイド剤と同じく、非インスリン依存性糖尿病患者のインスリン抵抗性、高血糖、高脂血症および高血圧を改善するが、副作用（肥満、劇症肝炎）の点で、未だ満足できるものとは言い難い。
ACCは、Acetyl CoAより、Malonyl CoAの合成を触媒する酵素であり、長鎖脂肪酸の合成における律速酵素である。また、ACCにより、Acetyl CoAから合成されたMalonyl CoA自体は、遊離長鎖脂肪酸のエネルギー源としての消費に関与するCarnitine acyltransferaseを負に制御していることが知られている。更に、内臓脂肪組織における脂肪酸合成の活性化には、ACCの活性化が関与しているものと考えられている。従って、ACCを阻害する薬剤は、生体内における長鎖脂肪酸および中性脂肪の新たな合成を抑制するだけではなく、既存の脂肪組織を減少させることにより、肥満症および肥満によって誘発される高脂血症、脂肪肝ならびにインスリン抵抗性に基づくと考えられる様々な疾患の治療薬および予防薬としての可能性を有する。既存のACC阻害剤としては、例えば論文（ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティックス、38巻、599頁、1985年）および特許（国際公開番号WO02/02101）などが報告されているが、本発明化合物のようなビスラクトン誘導体にACC阻害活性は報告されていない。又、例えば論文（ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティックス、47巻、112頁、1994年、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカルソサエティー、5385頁、1963年、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカルソサエティー・セクションＣ、2431頁、1971年、ケミストリー・レターズ、1311頁、1980年、ザ・ジャーナル・オブ・オルガニック・ケミストリー、57巻、2228頁、1992年）には、本発明に含まれる骨格の化合物が開示されているが、本発明で目的とする薬理活性については開示されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ACC活性阻害効果を有するビスラクトン誘導体及びその薬学的に許容し得る塩を提供することを目的とする。
本発明は、又、該ビスラクトン誘導体又はその薬学的に許容し得る塩を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、該ビスラクトン誘導体又はその薬学的に許容し得る塩を含有する肥満症および肥満によって誘発される高脂血症、脂肪肝ならびにインスリン抵抗性に基づくと考えられる耐糖能異常、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症）、高血圧および動脈硬化症の治療に有効なACC活性阻害剤ないし医薬組成物あるいはそれを用いた治療法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、はかかる課題を解決するために、鋭意検討した結果、下記一般式（Ｉ）で表されるビスラクトン誘導体に優れたACC阻害活性が認められることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、下記一般式（I）で示されるビスラクトン誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含有することを特徴とする糖尿病、肥満症、高脂血症、脂肪肝、糖尿病性合併症の予防および/または治療薬を提供する。
【０００６】
【化３】
（式中、R1は炭素数1〜12のアルキル基、R2は水素原子、アリール基、置換されてもよいアリール基、ヘテロアリール基及び置換されてもよいヘテロアリール基、X-YはCR3-CH2及びC=CHを示す。R3は水素原子、水酸基、炭素数1〜12のアルコキシル基を示す。Zは原子間結合、-O-、-NH-、-S-、-(CH2)n-を示す。nは1〜12である。）
【０００７】
また、本発明は、下記一般式（II）で示されることを特徴とするビスラクトン誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【化４】
（式中、R1は炭素数1〜12のアルキル基、R2は水素原子、アリール基、置換されてもよいアリール基、ヘテロアリール基及び置換されてもよいヘテロアリール基、アルキル基及び置換されてもよいアルキル基を示し、X-YはCR3-CH2及びC=CHを示す。R3は水素原子、水酸基、炭素数1〜12のアルコキシル基を示す。Zは原子間結合、-O-、-NH-、-S-、-(CH2)n-を示し、nは1〜12である。ただしR2が水素原子、X-YがC=CH、Zが原子間結合の場合、R1はメチル基、エチル基、n-オクチル基及びn-デシル基ではない。R2がフェニル基、X-YがCH-CH2、Zが-S-の場合、R1はエチル基及びn-オクチル基ではない。R1がn-オクチル基、R2が水素原子、Zが-O-の場合、X-YはC(OH)-CH2ではない。R1がn-オクチル基、R2がメチル基、Zが-O-の場合、X-YはCH-CH2ではない。R1がn-オクチル基、R2が水素原子、Zが原子間結合の場合、X-YはCH-CH2ではない。）
本発明は、又、上記式（II）で表されるビスラクトン誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含有することを特徴とする医薬組成物を提供する。
本発明は、又、上記式（II）で表されるビスラクトン誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含有することを特徴とする糖尿病、肥満症、高脂血症、脂肪肝、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症、高血圧、動脈硬化症など）の予防および/または治療薬を提供する。
本発明は、又、上記式（I）又は（II）で表されるビスラクトン誘導体またはその薬学的に許容し得る塩を含有することを特徴とするＡＣＣ阻害剤を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳述する。
本発明は、前記一般式(I)や(II)で示されるビスラクトン誘導体（塩の形態を含む）を有効成分として含む物質（組成物）である。又、ビスラクトン誘導体は、生体内においてラクトン体とヒドロキシ酸塩の平衡状態であると考えられる。更に、このビスラクトン誘導体をアルカリで加水分解することにより得られるヒドロキシ酸塩も生体内でラクトン体になり得るので、ヒドロキシ酸塩も有効成分として利用できる。
この発明において、酵素阻害作用とは、acetyl CoAより、malonyl CoAの合成を触媒するACCの酵素活性を阻害する作用を意味する。
本発明のACC阻害剤に使用する有効成分は前記一般式(I)又（II）に含まれるビスラクトン誘導体であり、以下詳細に説明する。
式中、アルキル基とは、好ましくは炭素数1〜12の、直鎖もしくは分岐鎖もしくは環状のアルキル基を表し、具体的に例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基、n-へプチル基、n-オクチル基、n-ノニル基、n-デシル基、n-ウンデシル基、n-ドデシル基、イソプロピル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、イソペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、2-ペンチル基、3-ペンチル基、n-ヘキシル基、2-ヘキシル基、tert-オクチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、などが挙げられ、好ましくはエチル基、n-オクチル基、n-デシル基等、より好ましくはn-オクチル基が挙げられる。
【０００９】
アリール基とは、炭素原子で構成される5〜12員の1〜3つの環よりなる芳香族置換基を示す。本発明におけるアリール基は、置換又は無置換のアルール基で良い。具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基が挙げられ、フェニル基が好ましい。
ヘテロアリール基とは、炭素および窒素、酸素、硫黄などで構成される5〜7員の1〜3つの環からなる複素芳香族置換基を示し、具体的に例えば、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピローリル基、フラニル基、チエニル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、チアジアゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、イソベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、ベンゾピラゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、キナゾリル基などが挙げられ、好ましくは２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、１−ピラゾリル基などが挙げられる。
【００１０】
アリール基又はヘテロアリール基の置換基としては、ハロゲン原子、水酸基、カルボキシル基、炭素数1〜12のアルコキシ基、アルキル基、アミノ基、アリール基、ヘテロアリール基が挙げられる。このうち、カルボキシル基、アミノ基、フェニル基が好ましい。アリール基の置換位置は特に限定しないが、4位で置換されているのが好ましい。また、一置換であるか多置換であるかも限定されないが、一置換であるものが好ましい。
ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
アルコキシ基とは、炭素数1〜12の直鎖または分岐鎖または環状のアルキル基を有するアルコキシ基を示し、具体的に例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ-プロポキシ基、ｎ-ブトキシ基、ｎ-ペンチルオキシ基、ｎ-ヘキシルオキシ基、ｎ-へプチルオキシ基、ｎ-オクチルオキシ基、ｎ-ノニルオキシ基、ｎ-デシルオキシ基、ｎ-ウンデシルオキシ基、ｎ-ドデシルオキシ基、イソプロポキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ-ブトキシ基、ｔｅｒｔ-ブトキシ基、シクロプロピルオキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基、２−シクロヘキシルエトキシ基などが挙げられ、好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ-プロポキシ基、ｎ-ブトキシ基、ｎ-ペンチルオキシ基、ｎ-ヘキシルオキシ基、ｎ-ドデシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基などが挙げられ、より好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ-プロポキシ基、ｎ-ブトキシ基、ｎ-ヘキシルオキシ基が挙げられる。
【００１１】
本発明では、また、一般式(I)で示される請求項1記載の化合物または薬学的に許容し得るその塩としては、次のものが好ましい。
R1としてはアルキル基が好ましく、n-オクチル基がさらに好ましい。
R2としては水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基が好ましく、アリール基がさらに好ましい。又、フェニル基、アミノフェニル、ヒドロキシフェニル基、トリフルオロメチルフェニル基、及びカルボキシフェニル基が好ましい。このうち、置換基を有するフェニル基としては、特に、４−アミノフェニル、４−ヒドロキシフェニル基、４−トリフルオロメチルフェニル基、及び４−カルボキシフェニル基が好ましい。
X-Yとしては、C=CH、CH-CH2、C(R3)-CH2が好ましく、CH-CH2がさらに好ましい。
R3としては、水酸基、炭素数1〜12のアルコキシ基が好ましく、水酸基がより好ましい。
Zとしては原子間結合、-NH-、-O-、-S-、-(CH2)n-(n=1〜12)が好ましく、原子間結合がより好ましい。
【００１２】
薬学的に許容しうる塩とは、具体的に例えば十分に酸性である本発明化合物については、そのアンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩などが例示され、これらが好ましい）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩などが例示され、これらが好ましい）、有機塩基の塩としては、例えばジシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、アルギニン、リジンのようなアミノ酸の塩などが挙げられる。
さらに十分に塩基性である本発明化合物については、その酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、硝酸、りん酸などの無機酸塩、または酢酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、モノメチル硫酸などの有機酸塩などが挙げられる。
有効成分に使用するビスラクトン誘導体（塩の形態およびヒドロキシ酸塩を含む）は、全ての光学異性体及び幾何異性体などの異性体の形態の何れでも使用することができる。
【００１３】
さらに水和物、溶媒和物などの形態でも良いし、結晶形のみならず無定形の誘導体の形でも使用することができる。
なお、本発明に含まれる骨格の化合物として、例えば論文（ザ・ジャーナル・オブ・アンチバイオティックス、47巻、112頁、1994年、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカルソサエティー、5385頁、1963年、ジャーナル・オブ・ザ・ケミカルソサエティー・セクションＣ、2431頁、1971年、ケミストリー・レターズ、1311頁、1980年、ザ・ジャーナル・オブ・オルガニック・ケミストリー、57巻、2228頁、1992年）に記載があるが、本発明で目的とする薬理活性とは異なる。
【００１４】
本発明において糖尿病、肥満症、高脂血症、脂肪肝、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症、高血圧、動脈硬化症）の予防および/または治療薬の有効成分に使用するビスラクトン誘導体や、後述の本発明のビスラクトン誘導体の製造に関し、公知物質については従来技術に基づいて、また新規物質については公知技術を応用して製造することができる。
本発明の化合物は以下の方法により合成することができる。
例えば本発明の化合物(I)において、R1がn-オクチル基、X-YがC=CH、Zが原子間結合、R2がアリール基であるもの（式IV）は、下記に示すよう既知化合物アベナシオライド(avenaciolide)（式III）を原料に、ヨウ化アリールと反応させることにより合成することができる。
【００１５】
【化５】
【００１６】
【化６】
Rは芳香環上の置換基を表す
【００１７】
また、本発明の化合物(I)において、R1がn-オクチル基、X-YがCH-CH2、Zが原子間結合、R2がアリール基であるものは、上記化合物（式IV）を還元することにより合成することができる。
【００１８】
【化７】
Rは芳香環上の置換基を表す
【００１９】
原料とするアベナシオライドはアベナシオライドを生産する能力を有する微生物、例えば未同定菌AJ117543株を培養することにより得ることができる。
なお、上記AJ117543株は独立行政法人産業技術総合研究所に2002年4月25日付けで寄託されており、受託番号はFERM P-18836である。
なお、上記の方法で得られる本発明の化合物は、通常有機合成で用いられる、抽出、蒸留、結晶化、カラムクロマトグラフィー等の手法を用いて精製することができる。
得られた本発明の化合物は後述するように、ACC阻害作用を有し、この作用を介した疾患に対する治療を行うのに有用である。特に、糖尿病、肥満症、高脂血症、脂肪肝、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症、高血圧、動脈硬化症）の予防および/または治療用の薬剤に使用することができる。
この発明は前記ビスラクトン誘導体を有効成分とする薬剤であるが、他の有効成分（本発明に使用する有効成分と同一の薬理活性でも異なる薬理活性でも良い。）を併用使用することもできるし、更に製剤上有用な補助剤を含むこともできる。この発明においては、前記ビスラクトン誘導体を、ACC阻害効果を奏するものとして有効量含む薬剤であれば、全て本発明の薬剤に含まれる。
【００２０】
本化合物を糖尿病、肥満症、高脂血症、脂肪肝、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症、高血圧、動脈硬化症）の予防および/または治療用の薬剤に使用する場合、経口投与、静脈内投与、経皮投与等各種の投与形態が可能である。
投与量については、投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるので、それ等に応じて適宜選択される。通常は、例えば経口投与の場合好ましくは0.001〜100mg/Kg/日程度を採用すれば良い。一方、注射投与などの非経口投与の場合、前記経口投与の場合の前記投与量の二分の一〜二十分の一程度が採用される。
前記有効成分に加えて、前記製剤上有用な補助剤として、薬学的に許容される賦形剤、担体、希釈剤等の製剤補助剤を適宜混合し、常法により錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤、丸剤、シロップ剤、縣濁剤、乳剤、軟膏剤、座剤又は注射剤等の形態で、経口又は非経口で投与することができる。この発明では、活性成分（有効成分）としての前記ビスラクトン誘導体と、その薬学的に許容される担体及び／又は希釈剤とを含有する医薬製剤又は医薬組成物が好ましい。
ここで、担体及び希釈剤としては、グルコース、スクロース、ラクトース、タルク、シリカ、セルロース、メチルセルロース、スターチ、ゼラチン、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、エタノール、水や油脂等が挙げられる。
【００２１】
【実施例】
以下に本発明を実施例及び試験例により具体的に説明するが，本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない．
（実施例１）
(-)- アベナシオライドの単離
（工程１）
米国で採取した土壌より分離したAJ117543株を、マッシュポテト（20g/L）、グルコース(5g/L)、NZ-Case(3g/L)、酵母エキス(2g/L)、NaCl(2g/L)、CaCO3(3g/L)を含む組成の液体培地(pH7.0)を含む三角フラスコに接種し、25℃にて4日間振とう(180rpm)で培養した。この培養液を、レイプシードミール（10g/L）、フィッシュミール（5g/L）、麦芽エキス（5g/L）、ソーイトーン（3g/L）、グルコース（30g/L）、ラクトース（10g/L）、CaCO3（4g/L）、MgSO4（0.5g/L）の組成の液体培地(pH6.4)を含む三角フラスコに接種し、25℃にて４日間旋回振とう(180rpm)で培養した。
（工程２）
このようにして得られた培養液(2L)を遠心分離することにより菌体を得、室温にてアセトン(2 L)で抽出した。抽出液から濾過により菌体残渣を分離除去後、濾液を減圧により濃縮した。濃縮液を酢酸エチル抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧により濃縮乾固した。得られた油状物(4 g)を50%メタノール水溶液に溶解し、ダイヤイオンHP-20カラムに通した。カラムを50%メタノール水溶液で十分洗浄後、メタノールにて溶出した。メタノール溶出画分をシリカゲルカラムに通し、クロロホルムで溶出した。得られたクロロホルム溶出画分を再度シリカゲルカラムに通し、n-ヘキサン／酢酸エチル(4:1)で溶出することにより、アベナシオライド(0.8g)を得た。
【００２２】
化合物 IVa の製造
トリフェニルホスフィン(5 mg)、酢酸パラジウム(2 mg)、トリエチルアミン(35 mL)のDMF溶液(0.3 mL)を70℃で1時間撹拌後、アベナシオライド(50 mg)およびヨードベンゼン(10 mL)を加え、水素雰囲気下、5時間撹拌した。反応液をセライトで濾過後、減圧により濃縮乾固した。残さをシリカゲル分取TLC〔n-ヘキサン／酢酸エチル(4:1)〕で精製することにより、化合物IVa(27 mg)を白色固体として得た。
収率84%；
1H NMR(300MHz, CDCl3) d 0.88(3H, t, J=6.9Hz), 1.22-1.50(12H, m), 1.59-1.85(2H, m), 4.13(1H, dt, J=2.7, 8.4Hz), 4.40(1H, ddd, J=2.7, 3.0, 11.6Hz), 5.17(1H, d, J=8.4Hz), 7.47(5H, s), 7.75(1H, d, J=2.7Hz).
【化８】
【００２３】
（実施例２）化合物IVbの製造
実施例１の方法に従い、アベナシオライドと4-ヨードアニリンを原料に使用して、化合物IVbを合成した。
収率63%；
1H NMR(300MHz, DMSO-d6) d 0.84(3H, t, J=6.6Hz), 1.22 (11H, m), 1.39(1H, br), 1.85(2H, m), 4.30(1H, m), 4.39(1H, m), 5.44(1H, d, J=8.7Hz), 6.61(2H, d, J=8.7Hz), 7.31(2H, d, J=8.7Hz), 7.39(1H, d, J=2.1Hz).
【化９】
【００２４】
（実施例３）化合物IVcの製造
実施例１の方法に従い、アベナシオライドと4-ヨードフェノールを原料に使用して、アベナシオライド誘導体IVcを合成した。
収率88%；
1H NMR(300MHz, DMSO-d6) d 0.83(3H, t, J=6.9Hz), 1.19(11H, s), 1.37(1H, m), 1.83(1H, m), 4.35(2H, m), 5.47(1H, d, J=8.7Hz), 6.86(2H, d, J=8.7Hz), 7.48(2H, d, J=8.7Hz), 7.51(1H, d, J=2.4Hz), 10.27(1H, br).
【化１０】
【００２５】
（実施例４）化合物IVdの製造
実施例１の方法に従い、アベナシオライドと4-トリフルオロメチルヨードベンゼンを原料に使用して、アベナシオライド誘導体IVdを合成した。
収率55%；
1H NMR(300MHz, CDCl3) d 0.87(3H, t, J=6.9Hz), 1.21(11H, s), 1.38(1H, m), 1.60-1.80(2H, m), 4.11(1H, dt, J=3.0, 8.4Hz), 4.35(1H, m), 5.20(1H, d, J=8.4Hz), 7.59(2H, d, J=8.1Hz), 7.75(1H, d, J=8.1Hz), 7.77(1H, s).
【化１１】
【００２６】
（実施例５）化合物IVeの製造
実施例１の方法に従い、アベナシオライドと4-ヨード安息香酸を原料に使用して、アベナシオライド誘導体IVeを合成した。
収率82%；
1H NMR(300MHz, acetone-d6) d 0.86(3H, t, J=6.6Hz), 1.22(12H, m), 1.42(1H, m), 1.87(2H, q, J=7.2Hz), 4.43(1H, m), 4.59(1H, dt, J=2.7, 8.4Hz), 5.47(1H, d, J=8.4Hz), 7.74(1H, d, J=2.7Hz), 7.83(2H, d, J=7.8Hz), 8.18(2H, d, J=7.8Hz).
【化１２】
【００２７】
（実施例６）化合物Vaの製造
化合物（IVa）(15 mg)をクロロホルム／メタノール(1:1)(1 mL)に溶解し、パラジウム炭素(2 mg)を加え、水素雰囲気下、4時間撹拌した。反応液をセライトで濾過後、減圧により濃縮乾固し、化合物Va(15 mg)を白色固体として得た。
収率99%；
1H NMR(300MHz, CDCl3) d 0.89(3H, t, J=6.9Hz), 1.18-1.28(00H, m), 2.75(2H, m), 3.01(2H, brs), 3.45(1H, brs), 4.50(1H, brs), 4.88(1H, brs), 7.21-7.35(5H, m).
【化１３】
【００２８】
薬理試験例１：ACC阻害活性の測定
１．ACCの精製
雄性SD系ラットを２日間絶食後、高ショ糖食（成分）を２日間与え、エーテル麻酔下に下大静脈を切開し、放血した後、速やかに肝臓を取り出した。氷冷した緩衝液A（225 mM mannitol、75 mM sucrose、10 mM Tris-HCl (pH 7.5)、0.05 mM EDTA、5 mM potassium citrate、2.5 mM MgCl2、10 mg/L pepstatin A、10 mg/L leupeptin、1 mM PMSF）中で、ポリトロンホモジナイザーでホモジナイズした。肝重量に対して、９倍量の緩衝液Aを加え、1000 gで１０分間遠心分離した後、上清を採取し、更に、17000 gにて１０分間遠心分離した。
得られた上清に、35%飽和となるよう硫酸アンモニウムを加え、４５分間撹拌した後、17000 gにて１０分間遠心分離した。得られた沈殿に緩衝液B（100 mM Tris-HCl (pH 7.5)、500 mM NaCl、1 mM EDTA、0.1 mM DTT、10% glycerol、10 mg/L pepstatin A、10 mg/L leupeptin、0.5 mM PMSF）を加え、溶解した後、40000 gにて２０分間遠心分離した。上清を緩衝液C（100 mM Tris-HCl (pH 7.5)、500 mM NaCl、1 mM EDTA、0.1 mM DTT、5% glycerol）に対して一晩透析した。
透析した上清を5 μMのフィルターで濾過した後、monomeric avidin sepharoseカラムにアプライし、緩衝液Bで洗浄した後、2 mM d-biotinを含む緩衝液BでACCを溶出した。
【００２９】
２．ACC阻害活性の測定
前記実施例で製造した化合物をそれぞれDMSOに溶解し、ガラスバイアルに入れ、ACCを含む250 μlの反応液１（40 mM Tris-HCl (pH 7.5)、40 mM MgCl2、40 mM sodium citrate、2 mM DTT）を加え、恒温槽にて３７℃で３０分間加温した後、氷冷した。反応液１に、[14C]-NaHCO3を含む250 μlの反応液２（40 mM Tris-HCl (pH 7.5)、２ mM DTT、8 mM ATP、0.5 mM acetyl CoA）を加え、３７℃で１０分間加温した後、1N HClを100 μl添加し、反応を停止させた。遠心エバポレーターにて反応液中の水分を除去した後、シンチレーターを加え、固体成分を溶解し、液体シンチレーションカウンターにて14Cの放射能を測定した。各化合物のACC阻害活性を、以下の式より算出し、50%阻害が得られる濃度（IC50）を求めた。その結果を表１に示す。
【数１】 ACC阻害率（％）＝{1 - (a-c)/(b-c)} x 100
a：被験薬添加時の放射能
b：被験薬非添加時の放射能
c：ブランク＊
＊反応液１と反応液２を混合する前に、あらかじめ反応液１に1N HCl 100 μlを加えもの。
【００３０】
下表に本発明化合物のACC阻害活性を示す。
【表１】 表-１
化合物番号 ＩＣ５０（μｇ / ｍｌ）
III ６.４
IVa ７.４
Va ３ . ８
表中、化合物IIIは、既知化合物アベナシオライドである。
【００３１】
【発明の効果】
本発明のビスラクトン誘導体は、従来の抗肥満薬およびインスリン抵抗性改善薬とは異なるメカニズムで、肥満症および肥満によって誘発される高脂血症、脂肪肝ならびにインスリン抵抗性に基づくと考えられる耐糖能異常、糖尿病、糖尿病性合併症（糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症）、高血圧および動脈硬化症の治療が可能であり、これら疾患の予防および/または治療薬として極めて有用である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a bislactone derivative, and in particular, to a bislactone derivative having an acetyl CoA carboxylase (hereinafter sometimes abbreviated as ACC) inhibitory activity and a pharmaceutical composition containing the bislactone derivative.
[Prior art]
In recent years, obesity has been shown to be a major risk factor for arteriosclerotic diseases, particularly coronary artery disease. That is, in obese individuals, various factors such as fatty acids and TNF-α are released from the accumulated visceral fat, which causes insulin resistance in skeletal muscle, liver and adipose tissue, and neutral fat in the liver. It has been reported to promote the synthesis of and cause hyperlipidemia. In addition, insulin in the blood that has been compensated for by insulin resistance not only causes impaired glucose tolerance, but also diabetes, but also through peripheral vascularization through increased Na ion reabsorption and sympathetic nerve activation in the kidney. Increases resistance and eventually forms a hypertensive state. Hyperlipidemia, diabetes and hypertension brought about by obesity are thought to cause vascular disorders based on arteriosclerosis such as cerebrovascular disorder and coronary artery disease, and to have a serious impact on life prognosis.
[0002]
The basics of obesity treatment are exercise therapy and diet therapy, but there are a lot of factors to achieve the set goals due to various factors such as conflict with human fundamental desires, balance with working hours, and increased stress. There are difficulties. Surgical treatments such as gastric reduction and gastric bypass may be applied to extremely obese patients, but obesity often results in wound complications such as infection and lipolysis when laparotomy is performed. The current situation involves loss and pain. Accordingly, there is a need for a combination of pharmaceuticals that can supplement diet / exercise therapy safely and simply. Currently, pharmaceuticals used as anti-obesity drugs include central appetite suppressants such as mazindol and sibutramine, and orlistat, which is a pancreatic lipase inhibitor. Centrally acting drugs may cause serious side effects such as dry mouth, constipation, stomach discomfort, and sometimes hallucinations / visual hallucinations.Orlistat has side effects in the digestive tract such as diarrhea, incontinence, and prodigation. It recognized. In general, the effects of these anti-obesity drugs are moderate at doses that do not cause side effects, and the safety of long-term use has not yet been established. The current situation is that almost no recognition has been made.
[0003]
With respect to insulin resistance, treatment using a biguanide agent or an agonist of peroxisome proliferation-related receptor (hereinafter abbreviated as PPAR) gamma is widely performed. Regarding biguanides, it has been reported that non-insulin-dependent diabetic patients exhibit hypoglycemic and hyperlipidemic effects in addition to improving insulin resistance. However, the therapeutic effect by itself is inadequate, and in addition to gastrointestinal symptoms such as upper abdominal discomfort, nausea, and diarrhea, it has become clear that life-threatening side effects such as lactic acidosis are exhibited. Yes. PPAR gamma agonists, like biguanides, improve insulin resistance, hyperglycemia, hyperlipidemia and hypertension in non-insulin dependent diabetics, but are still unsatisfactory in terms of side effects (obesity, fulminant hepatitis) It's hard to say what you can do.
ACC is an enzyme that catalyzes the synthesis of Malonyl CoA from Acetyl CoA, and is a rate-limiting enzyme in the synthesis of long-chain fatty acids. Moreover, it is known that Malonyl CoA itself synthesized from Acetyl CoA by ACC negatively controls Carnitine acyltransferase involved in consumption of free long chain fatty acid as an energy source. Furthermore, activation of fatty acid synthesis in visceral adipose tissue is considered to involve activation of ACC. Therefore, drugs that inhibit ACC not only suppress the new synthesis of long-chain fatty acids and neutral fats in vivo, but also reduce the pre-existing adipose tissue, thereby causing high fat induced by obesity and obesity. It has potential as a therapeutic and prophylactic agent for various diseases thought to be based on blood glucose, fatty liver and insulin resistance. As existing ACC inhibitors, for example, papers (The Journal of Antibiotics, 38, 599, 1985) and patents (International Publication No. WO02 / 02101) have been reported. No ACC inhibitory activity has been reported for bislactone derivatives such as compounds. Also, for example, thesis (The Journal of Antibiotics, 47, 112, 1994, Journal of the Chemical Society, 5385, 1963, Journal of the Chemical Society. Section C, 2431, 1971, Chemistry Letters, 1311, 1980, The Journal of Organic Chemistry, 57, 2228, 1992) includes skeletal compounds included in the present invention. However, the pharmacological activity intended by the present invention is not disclosed.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a bislactone derivative having a ACC activity inhibitory effect and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing the bislactone derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
The present invention also relates to obesity and obesity-induced hyperlipidemia, fatty liver, and impaired glucose tolerance, which are considered to be based on insulin resistance, including the bislactone derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, diabetes , An ACC activity inhibitor or pharmaceutical composition effective for the treatment of diabetic complications (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy), hypertension and arteriosclerosis The purpose is to provide the treatment used.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies in order to solve such problems, the present inventors have found that a bislactone derivative represented by the following general formula (I) has excellent ACC inhibitory activity and complete the present invention. It came to.
The present invention relates to diabetes, obesity, hyperlipidemia, fatty liver, diabetic complications characterized by containing a bislactone derivative represented by the following general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof: Prophylactic and / or therapeutic drugs are provided.
[0006]
[Chemical Formula 3]
[0007]
In addition, the present invention provides a bislactone derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof characterized by being represented by the following general formula (II).
[Formula 4]
(Where R1Is an alkyl group having 1 to 12 carbon atoms, R2Represents a hydrogen atom, an aryl group, an optionally substituted aryl group, a heteroaryl group and an optionally substituted heteroaryl group, an alkyl group and an optionally substituted alkyl group, and XY represents CRThree-CH2And C = CH. RThreeRepresents a hydrogen atom, a hydroxyl group, or an alkoxyl group having 1 to 12 carbon atoms. Z is an interatomic bond, -O-, -NH-, -S-,-(CH2) n-, where n is 1-12. Where R2Is a hydrogen atom, X-Y is C = CH, and Z is an interatomic bond, R1Is not a methyl, ethyl, n-octyl or n-decyl group. R2Is a phenyl group, X-Y is CH-CH2, When Z is -S-, R1Is not an ethyl group or an n-octyl group. R1Is an n-octyl group, R2Is hydrogen atom and Z is -O-, X-Y is C (OH) -CH2is not. R1Is an n-octyl group, R2Is methyl group and Z is -O-, X-Y is CH-CH2is not. R1Is an n-octyl group, R2Is hydrogen atom and Z is an interatomic bond, X-Y is CH-CH2is not. )
The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a bislactone derivative represented by the above formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
The present invention also includes a bislactone derivative represented by the above formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, diabetes, obesity, hyperlipidemia, fatty liver, diabetic complication A prophylactic and / or therapeutic drug for diabetic peripheral neuropathy (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy, hypertension, arteriosclerosis, etc.).
The present invention also provides an ACC inhibitor comprising a bislactone derivative represented by the above formula (I) or (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The present invention is a substance (composition) containing, as an active ingredient, a bislactone derivative (including a salt form) represented by the general formulas (I) and (II). In addition, the bislactone derivative is considered to be in an equilibrium state between the lactone body and the hydroxy acid salt in vivo. Furthermore, since a hydroxy acid salt obtained by hydrolyzing this bislactone derivative with an alkali can also be converted into a lactone form in vivo, the hydroxy acid salt can also be used as an active ingredient.
In the present invention, the enzyme inhibitory action means an action of inhibiting the enzyme activity of ACC catalyzing the synthesis of malonyl CoA from acetyl CoA.
The active ingredient used in the ACC inhibitor of the present invention is a bislactone derivative contained in the general formula (I) or (II), which will be described in detail below.
In the formula, the alkyl group preferably represents a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 12 carbon atoms, specifically, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, n-butyl group. N-pentyl group, n-hexyl group, n-heptyl group, n-octyl group, n-nonyl group, n-decyl group, n-undecyl group, n-dodecyl group, isopropyl group, isobutyl group, sec- Butyl, tert-butyl, isopentyl, tert-pentyl, neopentyl, 2-pentyl, 3-pentyl, n-hexyl, 2-hexyl, tert-octyl, cyclopropyl, cyclobutyl , A cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and the like, preferably an ethyl group, an n-octyl group, an n-decyl group, and more preferably an n-octyl group.
[0009]
An aryl group refers to an aromatic substituent composed of 1 to 3 rings of 5 to 12 members composed of carbon atoms. The aryl group in the present invention may be a substituted or unsubstituted aryl group. Specific examples include a phenyl group and a naphthyl group, and a phenyl group is preferable.
The heteroaryl group refers to a heteroaromatic substituent composed of 1 to 3 rings of 5 to 7 members composed of carbon and nitrogen, oxygen, sulfur, etc., specifically, for example, pyridyl group, pyridazinyl group, pyrimidinyl Group, pyrazinyl group, pyrrolyl group, furanyl group, thienyl group, oxazolyl group, isoxazolyl group, pyrazolyl group, imidazolyl group, thiazolyl group, isothiazolyl group, thiadiazolyl group, indolyl group, isoindolyl group, benzofuryl group, isobenzofuryl group, benzo Examples include thienyl group, benzopyrazolyl group, benzimidazolyl group, benzoxazolyl group, benzothiazolyl group, quinolyl group, isoquinolyl group, naphthyridinyl group, quinazolyl group, etc., preferably 2-pyridyl group, 3-pyridyl group, 4-pyridyl group Group, 1-pyrazolyl group, etc. I can get lost.
[0010]
Examples of the substituent for the aryl group or heteroaryl group include a halogen atom, a hydroxyl group, a carboxyl group, an alkoxy group having 1 to 12 carbon atoms, an alkyl group, an amino group, an aryl group, and a heteroaryl group. Among these, a carboxyl group, an amino group, and a phenyl group are preferable. The substitution position of the aryl group is not particularly limited, but is preferably substituted at the 4-position. Moreover, although it is not limited whether it is monosubstitution or polysubstitution, what is monosubstitution is preferable.
Examples of the halogen atom include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
The alkoxy group means an alkoxy group having a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 12 carbon atoms, specifically, for example, a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group, an n-butoxy group, an n- Pentyloxy group, n-hexyloxy group, n-heptyloxy group, n-octyloxy group, n-nonyloxy group, n-decyloxy group, n-undecyloxy group, n-dodecyloxy group, isopropoxy group, isobutoxy Group, sec-butoxy group, tert-butoxy group, cyclopropyloxy group, cyclobutoxy group, cyclopentyloxy group, cyclohexyloxy group, cycloheptyloxy group, 2-cyclohexylethoxy group, etc., preferably methoxy group, ethoxy Group, n-propoxy group, n-butoxy group, n-pentyloxy group, n-hexyloxy group, An n-dodecyloxy group, a cyclohexyloxy group, a cycloheptyloxy group and the like can be mentioned, and a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group, an n-butoxy group and an n-hexyloxy group are more preferable.
[0011]
In the present invention, the compound of claim 1 represented by the general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof is preferably the following.
R1Is preferably an alkyl group, more preferably an n-octyl group.
R2Is preferably a hydrogen atom, an alkyl group, an aryl group or a heteroaryl group, more preferably an aryl group. A phenyl group, aminophenyl, hydroxyphenyl group, trifluoromethylphenyl group, and carboxyphenyl group are preferred. Among these, as the phenyl group having a substituent, 4-aminophenyl, 4-hydroxyphenyl group, 4-trifluoromethylphenyl group, and 4-carboxyphenyl group are particularly preferable.
X-Y includes C = CH, CH-CH2, C (RThree) -CH2Is preferred, CH-CH2Is more preferable.
RThreeAre preferably a hydroxyl group or an alkoxy group having 1 to 12 carbon atoms, more preferably a hydroxyl group.
Z is an interatomic bond, -NH-, -O-, -S-,-(CH2) n- (n = 1 to 12) is preferable, and an interatomic bond is more preferable.
[0012]
The pharmaceutically acceptable salt specifically includes, for example, a sufficiently acidic compound of the present invention, an ammonium salt, an alkali metal salt (such as sodium salt and potassium salt, which are preferred), alkaline earth Examples of metal salts (calcium salts, magnesium salts and the like are preferable) and organic base salts include salts of amino acids such as dicyclohexylamine salt, benzathine salt, arginine and lysine.
For the compounds of the present invention that are sufficiently basic, acid addition salts thereof, for example, inorganic acid salts such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, or acetic acid, citric acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, monomethyl sulfuric acid, etc. And organic acid salts thereof.
The bislactone derivatives (including salt forms and hydroxy acid salts) used for the active ingredient can be used in any of isomeric forms such as all optical isomers and geometric isomers.
[0013]
Furthermore, it may be in the form of a hydrate, a solvate or the like, and can be used not only in a crystal form but also in an amorphous derivative form.
In addition, as a skeletal compound included in the present invention, for example, a paper (The Journal of Antibiotics, 47, 112, 1994, Journal of the Chemical Society, 5385, 1963, Journal of the Chemical Society Section C, 2431, 1971, Chemistry Letters, 1311, 1980, The Journal of Organic Chemistry, 57, 2228, 1992) Although described, it is different from the pharmacological activity intended in the present invention.
[0014]
In the present invention, diabetes, obesity, hyperlipidemia, fatty liver, diabetic complications (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy, hypertension, arteriosclerosis) Regarding the production of bislactone derivatives used as active ingredients of preventive and / or therapeutic agents and the bislactone derivatives of the present invention described later, known substances are produced based on conventional techniques, and new substances are produced by applying known techniques. be able to.
The compound of the present invention can be synthesized by the following method.
For example, in the compound (I) of the present invention, R1Is n-octyl group, X-Y is C = CH, Z is an interatomic bond, R2Can be synthesized by reacting a known compound avenaciolide (formula III) with an aryl iodide as a raw material, as shown below.
[0015]
[Chemical formula 5]
[0016]
[Chemical 6]
R represents a substituent on the aromatic ring
[0017]
In the compound (I) of the present invention, R1Is n-octyl group, X-Y is CH-CH2, Z is an interatomic bond, R2Can be synthesized by reducing the above compound (formula IV).
[0018]
[Chemical 7]
R represents a substituent on the aromatic ring
[0019]
Avenaciolide used as a raw material can be obtained by culturing a microorganism having an ability to produce abenaciolide, for example, an unidentified strain AJ117543.
The AJ117543 strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology on April 25, 2002, and the deposit number is FERM P-18836.
In addition, the compound of this invention obtained by said method can be refine | purified using methods, such as extraction, distillation, crystallization, and column chromatography, which are normally used by organic synthesis.
As will be described later, the obtained compound of the present invention has an ACC inhibitory action and is useful for treating a disease mediated by this action. In particular, prevention of diabetes, obesity, hyperlipidemia, fatty liver, diabetic complications (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy, hypertension, arteriosclerosis) And / or can be used for therapeutic agents.
This invention is a drug containing the bislactone derivative as an active ingredient, but other active ingredients (the same or different pharmacological activity as the active ingredient used in the present invention) may be used in combination. Further, a supplement useful in formulation can be contained. In the present invention, any drug containing an effective amount of the bislactone derivative as having an ACC inhibitory effect is included in the drug of the present invention.
[0020]
Diabetes, obesity, hyperlipidemia, fatty liver, diabetic complications (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy, hypertension, arteriosclerosis) When used as a prophylactic and / or therapeutic drug, various administration forms such as oral administration, intravenous administration and transdermal administration are possible.
The dosage varies depending on the symptom, age, and administration method of the patient to be administered, and is appropriately selected accordingly. Usually, for example, in the case of oral administration, about 0.001 to 100 mg / Kg / day may be employed. On the other hand, in the case of parenteral administration such as injection administration, about 1/2 to 1/2 of the dose in the case of oral administration is adopted.
In addition to the above active ingredients, formulation adjuvants such as pharmaceutically acceptable excipients, carriers, diluents and the like are appropriately mixed as the above-mentioned pharmaceutical useful adjuvants, and tablets, capsules, granules are prepared by conventional methods. It can be administered orally or parenterally in the form of fine granules, powders, pills, syrups, suspensions, emulsions, ointments, suppositories or injections. In the present invention, a pharmaceutical preparation or a pharmaceutical composition containing the bislactone derivative as an active ingredient (active ingredient) and a pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent thereof is preferable.
Here, examples of the carrier and diluent include glucose, sucrose, lactose, talc, silica, cellulose, methylcellulose, starch, gelatin, ethylene glycol, polyethylene glycol, glycerin, ethanol, water and fats and oils.
[0021]
【Example】
EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples and test examples, but the present invention is not limited to these examples.
(Example 1)
(-)- Isolation of Avenaciolide
(Process 1)
AJ117543 strain isolated from soil collected in the United States, mashed potato (20g / L), glucose (5g / L), NZ-Case (3g / L), yeast extract (2g / L), NaCl (2g / L), CaCOThreeAn Erlenmeyer flask containing a liquid medium (pH 7.0) having a composition containing (3 g / L) was inoculated and cultured at 25 ° C. with shaking (180 rpm) for 4 days. Rape seed meal (10g / L), fish meal (5g / L), malt extract (5g / L), soy tone (3g / L), glucose (30g / L), lactose (10g / L) , CaCOThree(4g / L), MgSOFourAn Erlenmeyer flask containing a liquid medium (pH 6.4) having a composition of (0.5 g / L) was inoculated and cultured at 25 ° C. for 4 days with swirling shaking (180 rpm).
(Process 2)
The culture broth (2 L) thus obtained was centrifuged to obtain bacterial cells and extracted with acetone (2 L) at room temperature. The cell residue was separated and removed from the extract by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The concentrated solution was extracted with ethyl acetate, and the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and then concentrated to dryness under reduced pressure. The obtained oil (4 g) was dissolved in a 50% aqueous methanol solution and passed through a Diaion HP-20 column. The column was sufficiently washed with 50% aqueous methanol solution and then eluted with methanol. The methanol elution fraction was passed through a silica gel column and eluted with chloroform. The obtained chloroform-eluted fraction was again passed through a silica gel column and eluted with n-hexane / ethyl acetate (4: 1) to obtain abenazolide (0.8 g).
[0022]
Compound IVa Manufacturing of
After stirring a DMF solution (0.3 mL) of triphenylphosphine (5 mg), palladium acetate (2 mg), and triethylamine (35 mL) at 70 ° C for 1 hour, abenaciolide (50 mg) and iodobenzene (10 mL) And stirred for 5 hours under hydrogen atmosphere. The reaction mixture was filtered through celite and concentrated to dryness under reduced pressure. The residue was purified by silica gel preparative TLC [n-hexane / ethyl acetate (4: 1)] to obtain Compound IVa (27 mg) as a white solid.
84% yield;
1H NMR (300MHz, CDClThree) d 0.88 (3H, t, J = 6.9Hz), 1.22-1.50 (12H, m), 1.59-1.85 (2H, m), 4.13 (1H, dt, J = 2.7, 8.4Hz), 4.40 (1H, ddd, J = 2.7, 3.0, 11.6Hz), 5.17 (1H, d, J = 8.4Hz), 7.47 (5H, s), 7.75 (1H, d, J = 2.7Hz).
[Chemical 8]
[0023]
Example 2 Production of Compound IVb
According to the method of Example 1, compound IVb was synthesized using avenaciolide and 4-iodoaniline as raw materials.
Yield 63%;
1H NMR (300MHz, DMSO-d6) d 0.84 (3H, t, J = 6.6Hz), 1.22 (11H, m), 1.39 (1H, br), 1.85 (2H, m), 4.30 (1H, m), 4.39 (1H, m), 5.44 (1H, d, J = 8.7Hz), 6.61 (2H, d, J = 8.7Hz), 7.31 (2H, d, J = 8.7Hz), 7.39 (1H, d, J = 2.1Hz).
[Chemical 9]
[0024]
Example 3 Production of Compound IVc
According to the method of Example 1, an avenaciolide derivative IVc was synthesized using avenaciolide and 4-iodophenol as raw materials.
Yield 88%;
1H NMR (300MHz, DMSO-d6) d 0.83 (3H, t, J = 6.9Hz), 1.19 (11H, s), 1.37 (1H, m), 1.83 (1H, m), 4.35 (2H, m), 5.47 (1H, d, J = 8.7Hz), 6.86 (2H, d, J = 8.7Hz), 7.48 (2H, d, J = 8.7Hz), 7.51 (1H, d, J = 2.4Hz), 10.27 (1H, br).
Embedded image
[0025]
Example 4 Production of Compound IVd
According to the method of Example 1, an avenacoride derivative IVd was synthesized using avenacoride and 4-trifluoromethyliodobenzene as raw materials.
Yield 55%;
1H NMR (300MHz, CDClThree) d 0.87 (3H, t, J = 6.9Hz), 1.21 (11H, s), 1.38 (1H, m), 1.60-1.80 (2H, m), 4.11 (1H, dt, J = 3.0, 8.4Hz) , 4.35 (1H, m), 5.20 (1H, d, J = 8.4Hz), 7.59 (2H, d, J = 8.1Hz), 7.75 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.77 (1H, s) .
Embedded image
[0026]
Example 5 Production of Compound IVe
According to the method of Example 1, abenaciolide derivative IVe was synthesized using abenaciolide and 4-iodobenzoic acid as raw materials.
82% yield;
1H NMR (300MHz, acetone-d6) d 0.86 (3H, t, J = 6.6Hz), 1.22 (12H, m), 1.42 (1H, m), 1.87 (2H, q, J = 7.2Hz), 4.43 (1H, m), 4.59 (1H , dt, J = 2.7, 8.4Hz), 5.47 (1H, d, J = 8.4Hz), 7.74 (1H, d, J = 2.7Hz), 7.83 (2H, d, J = 7.8Hz), 8.18 (2H , d, J = 7.8Hz).
Embedded image
[0027]
Example 6 Production of Compound Va
Compound (IVa) (15 mg) was dissolved in chloroform / methanol (1: 1) (1 mL), palladium carbon (2 mg) was added, and the mixture was stirred under a hydrogen atmosphere for 4 hours. The reaction mixture was filtered through celite, and concentrated to dryness under reduced pressure to give compound Va (15 mg) as a white solid.
99% yield;
1H NMR (300MHz, CDClThree) d 0.89 (3H, t, J = 6.9Hz), 1.18-1.28 (00H, m), 2.75 (2H, m), 3.01 (2H, brs), 3.45 (1H, brs), 4.50 (1H, brs) , 4.88 (1H, brs), 7.21-7.35 (5H, m).
Embedded image
[0028]
Pharmacological Test Example 1: Measurement of ACC inhibitory activity
1. Purification of ACC
Male SD rats were fasted for 2 days, then fed with a high sucrose diet (component) for 2 days, the inferior vena cava was opened under ether anesthesia, and the blood was exsanguinated, and the liver was immediately removed. Ice-cold buffer A (225 mM mannitol, 75 mM sucrose, 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.05 mM EDTA, 5 mM potassium citrate, 2.5 mM MgCl2, 10 mg / L pepstatin A, 10 mg / L leupeptin , 1 mM PMSF) with a Polytron homogenizer. After adding 9 times the amount of Buffer A to the liver weight and centrifuging at 1000 g for 10 minutes, the supernatant was collected and further centrifuged at 17000 g for 10 minutes.
Ammonium sulfate was added to the obtained supernatant to 35% saturation and stirred for 45 minutes, followed by centrifugation at 17000 g for 10 minutes. Buffer B (100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.1 mM DTT, 10% glycerol, 10 mg / L pepstatin A, 10 mg / L leupeptin, 0.5 mM) (PMSF) was added and dissolved, followed by centrifugation at 40000 g for 20 minutes. The supernatant was dialyzed overnight against buffer C (100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.1 mM DTT, 5% glycerol).
The dialyzed supernatant was filtered through a 5 μM filter, applied to a monomeric avidin sepharose column, washed with buffer B, and ACC was eluted with buffer B containing 2 mM d-biotin.
[0029]
2. Measurement of ACC inhibitory activity
Each of the compounds prepared in the above examples was dissolved in DMSO, placed in a glass vial, and 250 μl of reaction solution 1 (40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 40 mM MgCl2, 40 mM sodium citrate, 2 mM) containing ACC. DTT) was added, and the mixture was heated at 37 ° C. for 30 minutes in a thermostatic bath, and then cooled with ice. To reaction solution 1, 250 μl of reaction solution 2 (40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 2 mM DTT, 8 mM ATP, 0.5 mM acetyl CoA) containing [14C] -NaHCO 3 was added and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. After warming, 100 μl of 1N HCl was added to stop the reaction. After removing water from the reaction solution with a centrifugal evaporator, a scintillator was added to dissolve the solid components, and the 14C radioactivity was measured with a liquid scintillation counter. The ACC inhibitory activity of each compound was calculated from the following formula, and the concentration at which 50% inhibition was obtained (IC50) was determined. The results are shown in Table 1.
[Expression 1] ACC inhibition rate (%) = {1-(a-c) / (b-c)} x 100
a: Radioactivity when the test drug is added
b: Radioactivity when no test drug is added
c: Blank *
* Before mixing Reaction Solution 1 and Reaction Solution 2, add 100 μl of 1N HCl to Reaction Solution 1 in advance.
[0030]
The table below shows the ACC inhibitory activity of the compounds of the present invention.
[Table 1] Table-1
Compound No. IC50 (μg / ml)
III 6.4
IVa 7.4
Va 3 . 8
In the table, compound III is a known compound avenaciolide.
[0031]
【The invention's effect】
The bislactone derivative of the present invention is based on a mechanism different from conventional anti-obesity drugs and insulin resistance-improving drugs, and is considered to be based on hyperlipidemia induced by obesity and obesity, fatty liver and insulin resistance. Can treat abnormalities, diabetes, diabetic complications (diabetic peripheral neuropathy, diabetic nephropathy, diabetic retinopathy, diabetic macroangiopathy), hypertension and arteriosclerosis, and prevent and / or prevent these diseases Or it is very useful as a therapeutic agent.