【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、薬剤耐性菌に対する治療に用いられる抗菌剤及びその製造方法、並びに食品製剤及び消毒剤に関するものである。より詳しくは、副作用が弱いとともに薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有する抗菌剤及びその製造方法、並びに食品製剤及び消毒剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、薬剤耐性菌に対する治療には、ゲンタマイシン等の化学合成された抗菌物質を有効成分として含有する抗菌剤が用いられている。一方、赤ぶどうに含まれるレスベラトロール等の天然物由来の抗菌作用を示す物質を有効成分として含有する抗菌剤は、一般に副作用が少なく、薬剤耐性菌は抗菌剤に対して耐性を持ちにくいという利点がある。また、これまでグネツム科の植物から数種の新規レスベラトロール重合体としてグネモノールＡ、グネモノールＢ、グネチンＥ、グネタール及びグネモノシドＥ等が見出されているが、それらの作用については調べられていない（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００３】
【非特許文献１】
イリヤ Ｉ（Ｉｌｉｙａ Ｉ），タナカ Ｔ（Ｔａｎａｋａ Ｔ），イイヌマ Ｍ（Ｉｉｎｕｍａ Ｍ），アリ Ｚ（Ａｌｉ Ｚ），フラサワ Ｍ（Ｆｕｒａｓａｗａ Ｍ），ナカヤ Ｋ（Ｎａｋａｙａ Ｋ），シラタキ Ｙ（Ｓｈｉｒａｔａｋｉ Ｙ），ムラタ Ｊ（Ｍｕｒａｔａ Ｊ），ダーナエディ Ｄ（Ｄａｒｎａｅｄｉ Ｄ），”２種のグネツム科由来のスチルベン（Ｓｔｉｌｂｅｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｇｎｅｔａｃｅａｅ）”，ケミ ファーム ブル（Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ），２００２年，５０巻，６号，ｐ．７９６−８０１
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ところが、化学合成された抗菌物質を有効成分として含有する抗菌剤は、腎臓や血液に対する副作用が強いという問題があった。さらに、薬剤耐性菌は、新たに化学合成された抗菌物質を有効成分として含有する抗菌剤に対しても耐性を持つ可能性が大きい。一方、天然物由来の抗菌作用を示す物質を有効成分として含有する抗菌剤は、抗菌作用が軽微であるという問題があった。このため、副作用が弱いとともに薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有する抗菌物質が望まれている。
【０００５】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、副作用が弱いとともに薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有する抗菌剤及びその製造方法、並びに食品製剤及び消毒剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明の抗菌剤は、下記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有するものである。
【０００７】
【化４】
（式中、Ｒ１〜Ｒ５は水素、アセチル基、メチル基、エチル基又はグルコシル基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）
請求項２に記載の発明の抗菌剤は、請求項１に記載の発明において、前記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すものである。
【０００８】
請求項３に記載の発明の抗菌剤の製造方法は、請求項１又は請求項２に記載の抗菌剤の製造方法であって、グネツム科の植物体の部位から抽出用溶媒によって前記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種を含有する抽出成分を抽出した後、抽出成分より前記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種を分離するものである。
【０００９】
請求項４に記載の発明の食品製剤は、下記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種を含有し、抗菌作用を有するものである。
【００１０】
【化５】
（式中、Ｒ１〜Ｒ５は水素、アセチル基、メチル基、エチル基又はグルコシル基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）
請求項５に記載の発明の消毒剤は、下記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種を含有し、一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体の抗菌作用を経て消毒作用を発現するものである。
【００１１】
【化６】
（式中、Ｒ１〜Ｒ５は水素、アセチル基、メチル基、エチル基又はグルコシル基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）
【００１２】
【発明の実施の形態】
（第１の実施形態）
以下、本発明を具体化した第１の実施形態の抗菌剤について詳細に説明する。
【００１３】
本実施形態の抗菌剤には、下記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種（以下、単にレスベラトロール重合体ともいう。）が有効成分として含有されている。この抗菌剤は医薬品又は医薬部外品として薬剤耐性菌に対する治療等に用いられる。
【００１４】
【化７】
（式中、Ｒ１〜Ｒ５は水素、アセチル基、メチル基、エチル基又はグルコシル基を示し、ｎは１〜１０の整数を示す。）
上記一般式（１）はその基本骨格がレスベラトロールであり、レスベラトロールのジヒドロキシベンゾイル環に別のレスベラトロールのトランス型エチレン基が結合することによりピラン又はピレン構造を呈している。上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５は全て同じでもよいし異なっていてもよい。上記一般式（１）中のｎは重合しているレスベラトロールの数を示し、好ましくは１〜７、より好ましくは１〜３である。ｎが１０を超えると、レスベラトロール重合体の分子量が大きくなるためにその溶解性が低下する。このため、例えば粉末状をなす抗菌剤を生理食塩水に溶解させて薬剤耐性菌に対する治療に用いるときに、治療に必要な量の有効成分を生理食塩水に溶解させることができない。
【００１５】
ここで、薬剤耐性菌の具体例としては、メチシリン耐性黄色ぶどう球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、以下、ＭＲＳＡという。）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ、以下、ＶＲＥという。）等が挙げられる。これら薬剤耐性菌は、特定の抗菌剤を分解する分解酵素産生、細胞膜の透過性の増強等の機能を有している。
【００１６】
レスベラトロール重合体は、薬剤耐性菌に対する抗菌作用を有している。これは、レスベラトロール重合体が、薬剤耐性菌の細胞膜に作用して細胞膜の透過性を高めることにより細胞内成分を放出させて薬剤耐性菌を死滅させるとともに、薬剤耐性菌内に侵入して分解酵素の産生を抑制するためである。ここで、例えば上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれメチル基を示すときには、レスベラトロール重合体はメチル基に基づく疎水基を有する。そして、レスベラトロール重合体の疎水基が細胞膜の脂質二重層を構成するリン脂質の疎水基と疎水結合することによって細胞膜の一部を破壊して細胞膜の透過性を高めると推察される。
【００１７】
レスベラトロール重合体の具体例としては、レスベラトロールの２量体であるとともに２つの不斉炭素を有するグネモノールＥ（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すとともにｎが１を示す。）、レスベラトロールの３量体であるグネチンＥ（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すとともにｎが２を示す。）、レスベラトロールの４量体であるグネモノールＢ（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すとともにｎが３を示す。）、グネモノシドＥ（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれグルコシル基を示す。）、アセチルグネモノールＥ（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれアセチル基を示す。）等が挙げられる。
【００１８】
さらに、グネモノールＥグルコシド（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ４がそれぞれ水素を示すとともにＲ５がグルコシル基を示し、ｎが１を示す。）、グネチンＥグルコシド（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ４がそれぞれ水素を示すとともにＲ５がグルコシル基を示し、ｎが２を示す。）、グネモノールＢグルコシド（上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ４がそれぞれ水素を示すとともにＲ５がグルコシル基を示し、ｎが３を示す。）等が挙げられる。
【００１９】
レスベラトロール重合体は、下記一般式（２）で示すように、上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すものが抗酸化作用に優れているために好ましい。さらに、グネモノールＥ、グネチンＥ及びグネモノールＢから選ばれる少なくとも一種が、抗炎症作用を有し薬剤耐性菌等により障害を受けた組織の炎症を抑制することができるためにより好ましい。ここで、抗酸化作用は一般的に水酸基の数に比例して強くなる。一方、アセチルグネモノールＥが脂溶性が高く薬剤耐性菌の細胞膜に対する透過性が高いために好ましく、グネモノシドＥが腸肝循環を介した吸収率が高く抗菌作用の持続性を向上させることができるために好ましい。加えて、Ｒ１〜Ｒ５がそれぞれメチル基又はエチル基を示すものが、薬剤耐性菌に対する抗菌作用を向上させることができるために好ましい。
【００２０】
【化８】
（式中、ｎは１〜１０の整数を示す。）
抗菌剤中のレスベラトロール重合体の含有量は、好ましくは０．１〜２０質量％、より好ましくは１〜１５質量％、さらに好ましくは５〜１０質量％である。レスベラトロール重合体の含有量が０．１質量％未満では、レスベラトロール重合体の含有量が低いために抗菌剤が抗菌作用を十分に発揮することができない。一方、２０質量％を超えると、抗菌剤がその他の添加成分として抗菌剤の安定性の向上に寄与する成分を含有するときに、その成分の含有量が減少することによって抗菌剤の安定性が低下するおそれがある。
【００２１】
この抗菌剤には、その他の添加成分として結合剤、賦形剤、滑沢剤、膨化剤、甘味剤、香味剤等を含有させてもよい。抗菌剤中のその他の添加成分の含有量は、抗菌剤の常法に従って決定される。
【００２２】
抗菌剤は、医薬品として用いられるときには経口剤又は非経口剤として構成される。経口剤の剤型としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。抗菌剤は、錠剤として構成されるときにはその他の添加成分として例えば結合剤、賦形剤、滑沢剤、膨化剤、甘味剤、香味剤が含有され、その表面がシェラック又は砂糖で被覆されてもよい。また、抗菌剤は、カプセル剤として構成されるときには例えば上記錠剤におけるその他の添加成分に加えて油脂等の液体担体が含有され、シロップ剤又はドリンク剤として構成されるときにはその他の添加成分として例えば甘味剤、防腐剤、色素香味剤が含有される。
【００２３】
一方、非経口剤の剤型としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に注射剤等が挙げられる。抗菌剤は、外用剤として構成されるときにはその他の添加成分として例えばワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等の基材が含有される。また、注射剤には液剤や凍結乾燥剤等があり、抗菌剤は、凍結乾燥剤として構成されるときには注射用蒸留水や生理食塩水等に無菌的に溶解して用いられる。抗菌剤は、医薬部外品として用いられるときには皮膚清拭剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、歯磨き粉等に配合される。
【００２４】
さて、抗菌剤を製造するときには、まずグネツム科の植物体からその部位を採取する。ここで、グネツム科の植物体とはグネツム科に属する植物のことであり、グネツム科の植物体は東南アジア、アフリカ、南アメリカ、ヨーロッパ等の国又は地域のいずれの産地であってもよい。グネツム科の植物体の中でもレスベラトロール重合体の含有量が高いために、グネツム アフリカナム（Ｇｎｅｔｕｍ ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、グネツム グネモン（Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎ）又はグネツム グネモノイデス（Ｇｎｅｔｕｍ ｇｎｅｍｏｎｏｉｄｅｓ）が好ましく、グネツム グネモンがより好ましい。部位の具体例としては花、葉、茎、根、若葉、新芽、種子等が挙げられるが、根がレスベラトロール重合体の含有量が高いために好ましい。このため、グネツム科の植物体の部位としては、グネツム グネモンの根がより好ましい。
【００２５】
グネツム科の植物体の部位は採取された状態のままのもの、採取された後に乾燥されたもの、採取された後に乾燥及び粉砕されたもの等が挙げられ、後述する抽出用溶媒における抽出効率を向上させるために、採取された後に乾燥されたものが好ましい。さらに、採取された後に乾燥及び粉砕されたものが、グネツム科の植物体の部位の表面積を向上させて抽出効率をより向上させることができるためにより好ましい。ここで、グネツム科の植物体の部位の粉砕には粉砕器、裁断機等が用いられる。
【００２６】
続いて、抽出用溶媒にグネツム科の植物体の部位を浸漬した後に撹拌又は放置することにより、抽出用溶媒にレスベラトロール重合体を含有する抽出成分を抽出する。抽出用溶媒の具体例としてはエタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム等が挙げられ、これらは単独で用いられてもよいし二種以上が組み合わされて用いられてもよい。さらに、これらは水と混合された状態で抽出用溶媒として用いられてもよい。これらの中でも、エタノール又は水とエタノールとの混合液が、得られた抗菌剤を経口剤等として容易に用いることができるために好ましい。
【００２７】
抽出用溶媒の量は、グネツム科の植物体の部位の質量に対して好ましくは１〜１０倍量、より好ましくは２〜６倍量、さらに好ましくは３〜５倍量である。一方、抽出温度は好ましくは１０〜５０℃、より好ましくは２０〜４０℃、さらに好ましくは２５〜３５℃であり、抽出時間は好ましくは１〜２４時間、より好ましくは２〜１８時間、さらに好ましくは３〜６時間である。
【００２８】
抽出用溶媒の量が１倍量未満、抽出温度が１０℃未満又は抽出時間が１時間未満では、抽出効率が低下して抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。一方、抽出用溶媒の量が１０倍量を超えると抽出後の濃縮に時間を要し、抽出時間が２４時間を超えると抽出に時間を要する。このため、抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。また、溶出温度が５０℃を超えると、抽出用溶媒の沸点が５０℃以下のときに抽出用溶媒が揮発するおそれがある。
【００２９】
次いで、グネツム科の植物体の部位及び抽出用溶媒の混合液を固液分離することにより、抽出用溶媒と抽出成分とからなる抽出液を得る。混合液の固液分離には、常圧濾過、吸引濾過、遠心分離等が用いられる。常圧濾過及び吸引濾過に用いる濾材としては食品用の濾紙、珪藻土を重層した濾紙等が挙げられ、遠心分離には通常の遠心分離機等が用いられる。この固液分離は、濾過と遠心分離とを組み合わせて行うのが、抽出効率を向上させることができるために好ましい。さらに、濾過によって得られる残渣は、抽出用溶媒によって再抽出されるのが抽出効率をより向上させることができるために好ましい。
【００３０】
そして、必要に応じて抽出液を濃縮及び乾燥することによって抽出物を得る。このとき、抽出液を減圧下で加熱することにより濃縮及び乾燥してもよいし、真空凍結乾燥機を用いることにより抽出液を加熱することなく濃縮及び乾燥してもよい。減圧下で加熱するときには、加熱温度は好ましくは２０〜６０℃、より好ましくは２５〜５５℃、さらに好ましくは３０〜５０℃である。加熱温度が２０℃未満では、濃縮及び乾燥に時間を要し、抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。一方、６０℃を超えると、得られる抽出物の安定性が損なわれるおそれがある。
【００３１】
次いで、抽出物を分離用溶媒に溶解させる。この分離用溶媒は、分離用担体を膨潤させるとともに移動層となるものであって、具体例としては水、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒等が挙げられる。低級アルコールの具体例としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられる。これらは単独で用いられてもよいし、二種以上が組み合わせて用いられてもよい。これらの中でも、エタノールが得られた抗菌剤を経口剤等として容易に用いることができるために好ましい。
【００３２】
分離用溶媒の量は、抽出物の質量に対して好ましくは１〜５０倍量、より好ましくは３〜２０倍量である。分離用溶媒の量が１倍量未満では、抽出物の分離が困難になる。一方、５０倍量を超えると、抽出物の分離に時間を有し抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。分離用担体の材質の具体例としては、多孔性の多糖類、酸化ケイ素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン等が挙げられる。
【００３３】
続いて、分離用担体をカラムに充填した後に分離用溶媒を分離用担体に供し、分離用溶媒中の抽出物において他の成分とレスベラトロール重合体とを分離する。このとき、レスベラトロール重合体は分離用溶媒に溶解した状態、即ちレスベラトロール重合体溶液として得られる。
【００３４】
分離用担体の種類としては逆相担体、イオン交換担体、アフィニティ担体、分配性担体、分子篩用担体、吸着性担体等が挙げられる。逆相担体は、その表面が疎水性化合物でコーティングされたもの等が挙げられ、疎水性化合物の疎水結合によって疎水性の高い物質の分離に利用することができる。逆相担体の具体例としては、ＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）等が挙げられる。イオン交換担体は、その表面がイオン性の物質でコーティングされたもの等が挙げられ、具体例としてはＩＲＡ−４１０、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）等が挙げられる。イオン交換担体の中でも、陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性物質の分離に適し、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性物質の分離に適している。
【００３５】
アフィニティ担体は、抗原抗体反応等の特異的な結合を利用して分子を行うものを示し、例えば抗体がコーティングされたものは、その抗原となる物質のみを分離することができる。分配性担体は、分離する物質と分離用溶媒との間の分配係数の差を利用して分離を行うものを示し、具体例としてはシリカゲル（メルク社製）等が挙げられる。分子篩用担体は、分子の大きさの差異を利用して分離を行うものを示し、具体例としてはセファデックス（登録商標）ＬＨ−２０（アマシャムファルマシア製）等が挙げられる。吸着性担体は、分離する物質の吸着性を利用して分離を行うものを示し、具体例としてはダイヤイオン（登録商標）（三菱化学（株）製）等が挙げられる。
【００３６】
これらの中でも、分配性担体、分子篩用担体、吸着性担体又はイオン交換担体が分離効率を向上させることができるために好ましい。また、分離用溶媒に対する分配係数の差異が大きいときには、逆相担体又は分配性担体が分離効率を向上させることができるためにより好ましい。
【００３７】
分離用溶媒としてエタノール等の有機溶媒を用いるときには、有機溶媒に対する耐性を有する分離用担体を用いることが好ましく、医薬品や食品を製造するために用いられる分離用担体が、得られる抗菌剤中に分離用担体由来の不純物が混合されるのを抑制することができるためにより好ましい。このような分離用担体としては、逆相担体としてのＤＭ１０２０Ｔ、イオン交換担体としてのＩＲＡ−４１０、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、分配用担体としてのシリカゲル、分子篩用担体としてのセファデックスＬＨ−２０、吸着性担体としてのダイヤイオン等が挙げられる。
【００３８】
これらの中でも、ＤＭ１０２０Ｔ、セファデックスＬＨ−２０又はダイヤイオンが、上記効果が高いために好ましい。ここで、離用溶媒の除去が容易なために、分離用担体としてセファデックスＬＨ−２０を用いるときには、分離用溶媒として低級アルコールを用いるのが好ましい。同様に、分離用担体としてシリカゲルを用いるときには分離用溶媒としてクロロホルム、メタノール、酢酸又はそれらの混合液が好ましく、ダイヤイオンやＤＭ１０２０Ｔを用いるときにはメタノール、エタノール等の低級アルコール又は低級アルコールと水との混合液が好ましい。
【００３９】
分離用担体の粒径は好ましくは０．１〜３００μｍである。粒径が０．１μｍ未満では、抽出物の分離に時間を要し、抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。一方、３００μｍを超えると、抽出物の分離精度が低下するおそれがある。分離温度（分離用担体が充填されたカラムの温度）は、好ましくは４〜３０℃、より好ましくは１０〜２５℃である。分離温度が４℃未満では、カラムの操作性が悪化するおそれがある。一方、３０℃を超えると、分離によって得られるレスベラトロール重合体の安定性が損なわれるおそれがある。
【００４０】
また、抽出物を分離するときには、カラムによる分離を複数繰返すことが、レスベラトロール重合体の収率を向上させることができるために好ましい。このとき、同一又は異なる分離用担体を用いてもよく、同一又は異なる分離用溶媒を用いてもよい。さらに、抽出物の分離は、低速クロマトグラムシステム、精製用クロマトグラムシステム、膜分離クロマトグラムシステム等のシステム化された装置を用いることが、抽出物の分離を容易に行うことができるために好ましい。
【００４１】
そして、例えば得られたレスベラトロール重合体溶液を濃縮及び乾燥して粉末化するとともにその他の添加成分を配合して抗菌剤を製造する。ここで、抗菌剤は、レスベラトロール重合体溶液にその他の添加成分を配合することにより製造されてもよいが、乾燥により粉末化された状態が保存安定性を向上させることができるために好ましい。この乾燥には減圧蒸留装置、真空乾燥機等を用いることができる。減圧蒸留装置を用いて乾燥したときには、乾燥温度は好ましくは２０〜５０℃、より好ましくは３０〜４０℃である。一方、真空乾燥機を用いて乾燥したときには、乾燥温度は好ましくは２０〜６０℃、より好ましくは２５〜４０℃である。乾燥温度が２０℃未満では、乾燥に時間を要し抗菌剤の製造効率が低下するおそれがある。一方、５０℃又は６０℃を超えると、レスベラトロール重合体の安定性が損なわれるおそれがある。
【００４２】
抗菌剤を例えば凍結乾燥剤の注射剤として構成し薬剤耐性菌に対する治療に用いるときには、抗菌剤を生理食塩水等に溶解させた後、注射器等を用いて患者に投与する。このとき、抗菌剤の有効成分であるレスベラトロール重合体は、例えばその疎水基と細胞膜のリン脂質の疎水基との疎水結合により細胞膜の透過性を高めて薬剤耐性菌を死滅させるとともに薬剤耐性菌の分解酵素の産生を抑制する。このため、抗菌剤は薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を発揮することができる。ここで、薬剤耐性菌の細胞膜は、ヒト等の動物の細胞膜とは性質が異なる。このため、抗菌剤はヒトの細胞に対しては抗菌作用を発揮せず、副作用の発現を抑制することができる。よって、抗菌剤による副作用を弱めることができる。
【００４３】
以上詳述した第１の実施形態によれば、次のような効果が発揮される。
・ 第１の実施形態の抗菌剤はレスベラトロール重合体を有効成分として含有している。レスベラトロール重合体は、薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有するとともに、副作用の発現を抑制することができる。このため、抗菌剤は、副作用が弱いとともに薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有することができる。
【００４４】
・ 上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示すのが好ましい。この場合には、抗菌剤の抗酸化作用を向上させることができる。
・ 抗菌剤は、グネツム科の植物体の部位から抽出用溶媒を用いてレスベラトロール重合体を含有する抽出成分を抽出した後、分離用溶媒及び分離用担体を用いて抽出成分からレスベラトロール重合体を分離することにより製造される。グネツム科の植物体は、レスベラトロール重合体の抽出のために一般的に用いられている植物体に比べてレスベラトロール重合体の含有量が高い。このため、レスベラトロール重合体を効率よく抽出することができ、抗菌剤の製造効率を向上させることができる。
（第２の実施形態）
以下、本発明を具体化した第２の実施形態の食品製剤について、第１の実施形態の抗菌剤と異なる点を中心に述べる。
【００４５】
本実施形態の食品製剤はレスベラトロール重合体を含有し、レスベラトロール重合体に基づく抗菌作用を有している。食品製剤中のレスベラトロール重合体の含有量は、好ましくは０．１〜３０質量％、より好ましくは０．３〜２０質量％、さらに好ましくは０．５〜１５質量％である。レスベラトロール重合体の含有量が０．１質量％未満では、レスベラトロール重合体の含有量が低いために食品製剤が抗菌作用を十分に発揮することができない。一方、３０質量％を超えると、食品製剤がその他の添加成分として基材を含有するときに、基材の含有量が減少することによって食品製剤としての形態を維持することができなくなるおそれがある。
【００４６】
この食品製剤には、その他の添加成分として飲料品素材等の食品素材、基材、賦形剤、食品添加剤等の添加剤、副素材、増量剤等を含有させてもよい。食品製剤中のその他の添加成分の含有量は、食品製剤の常法に従って決定される。食品製剤の形態は粉末状、錠剤状、ドリンク剤等の液状、カプセル状等が挙げられ、具体的には飴、せんべい、クッキー、各種飲料等の形態を採用することができる。
【００４７】
食品製剤は、一日数回に分けて経口摂取される。一日の摂取量は、好ましくは０．１〜１０ｇ、より好ましくは０．３〜５ｇ、さらに好ましくは０．５〜３ｇである。食品製剤の摂取量が０．１ｇ未満では、食品製剤中のレスベラトロール重合体を必要量摂取するのが困難になり、十分な抗菌作用が期待できないおそれがある。一方、１０ｇを超えると、取扱い性が悪化し、コストが高くなるおそれがある。
（第３の実施形態）
以下、本発明を具体化した第３の実施形態の消毒剤について、第１の実施形態の抗菌剤と異なる点を中心に述べる。
【００４８】
本実施形態の消毒剤はレスベラトロール重合体を含有し、レスベラトロール重合体の抗菌作用を経て消毒作用を発現する。ここで、レスベラトロール重合体の抗菌作用を経て消毒作用を発現するとは、レスベラトロール重合体の抗菌機序に基づき薬剤耐性菌を死滅させる、即ち消毒することをいう。この消毒剤は、病室、手術室、処置室、患者の衣類、汚染された空気、尿、糞便などの汚物、手術器具や装置等を消毒するために用いられる。さらに、一般家庭、学校、食堂等の病院以外での消毒にも用いられる。
【００４９】
消毒剤中のレスベラトロール重合体の含有量は、好ましくは５〜３０質量％、より好ましくは７〜２５質量％、さらに好ましくは１０〜２０質量％である。レスベラトロール重合体の含有量が５質量％未満では、レスベラトロール重合体の含有量が低いために抗菌作用に基づく消毒作用を十分に発揮することができない。一方、３０質量％を超えてもそれ以上抗菌作用に基づく消毒作用を発揮することができない。
【００５０】
消毒剤には、その他の添加成分として界面活性化剤、溶剤、増粘剤、賦形剤等を含有させてもよい。消毒剤中のその他の添加成分の含有量は、消毒剤の常法に従って決定される。消毒剤の形態は溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状、粉末状等が挙げられ、具体的には散布剤、エアゾール、液剤、固形剤等の形態を採用することができる。
【００５１】
消毒剤は、例えば室内に一日数回に分けて散布されたり清拭等により塗布される。一日の散布量又は塗布量は、好ましくは０．０１〜５ｇ、より好ましくは０．０５〜３ｇ、さらに好ましくは０．１〜１ｇである。消毒剤の散布量又は塗布量が０．０１ｇ未満では、散布又は塗布されるレスベラトロール重合体の量が少ないために十分な抗菌作用に基づく抗菌作用が期待できないおそれがある。一方、５ｇを超えると、消毒剤の取扱い性が悪化して散布コスト等が嵩むおそれがある。
【００５２】
従って、実施例３の消毒剤は、レスベラトロール重合体の優れた抗菌作用を経て消毒作用を発現することにより、優れた消毒作用を有している。
尚、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
【００５３】
・ 第１の実施形態の抗菌剤を、アンピシリン、ゲンタマイシン、ミノサイクリン、ホスホマイシン、バンコマイシン等の抗菌剤と併用してもよい。ここで、各抗菌剤は互いに異なる作用機序により抗菌性をそれぞれ発揮する。このように構成した場合には、異なる作用機序に起因して相乗的な抗菌作用が発揮される。さらに、第１の実施形態の抗菌剤を併用することにより、アンピシリン、ゲンタマイシン、ミノサイクリン、ホスホマイシン、バンコマイシン等に対する耐性菌の発現を抑制することができるとともに、これら抗菌剤の投与量を減らすことによって副作用を軽減することができる。また、第２の実施形態の食品製剤及び第３の実施形態の消毒剤に、上記各抗菌剤を含有させてもよい。
【００５４】
・ 第１の実施形態の抗菌剤を薬剤耐性菌以外の菌に対する治療に用いてもよい。また、第２の実施形態の食品製剤を薬剤耐性菌以外の菌に対して用いてもよいし、第３の実施形態の消毒剤を薬剤耐性菌以外の菌の消毒に用いてもよい。
【００５５】
・ 第３の実施形態の消毒剤を手の消毒等に用いてもよい。
・ 各実施形態において、レスベラトロール重合体を、レスベラトロールをポリフェノールオキシターゼで反応させることにより生化学的に合成してもよい。
このとき、上記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がアセチル基等を示すときには、レスベラトロールをポリフェノールオキシターゼで反応させた後にアセチル化等させてレスベラトロール重合体を合成する。
【００５６】
【実施例】
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。
（実施例１）
実施例１においては、まずグネツム科の植物体の部位として、インドネシア産のグネツム グネモンの主根部 ２ｋｇを乾燥機により乾燥させた後に粉砕機で粉砕し粉砕物を得た。次いで、この粉砕物１．８ｋｇに抽出用溶媒としてのエタノール９ｋｇを添加し２５℃で６時間撹拌した後、濾紙（東洋濾紙社製、Ｎｏ２）を用いて自然濾過し濾液を得た。続いて、エパボレーターを用い減圧下で濾液を濃縮及び乾燥し、抗菌剤を褐色の粉末０．８５ｋｇとして得た。この抗菌剤には、グネモノールＡ（１．４質量％）、グネモノールＢ（２．３質量％）、グネチンＥ（１．８質量％）、グネタール（２．６質量％）及びグネモノシドＥ（１．７質量％）が含有されていた。
（実施例２）
実施例２においては、実施例１と同様にして褐色の粉末を得た後、粉末６０ｇを分離用溶媒としてのアセトン１００ｍｌに溶解し、この溶液をシリカゲルカラム（富士シリシア製、カラム直径：５ｃｍ、カラム長さ：５０ｃｍ、分離用担体：粒径５０μｍのシリカゲル）に供した。次いで、クロロホルム：メタノール溶液（容積比２０：１）１０００ｍｌをシリカゲルカラムに供し、分離用担体に担持されている成分を溶出した後、エバポレータを用いて濃縮及び乾燥して粉体を得た。
【００５７】
続いて、得られた粉末をメタノール１００ｍｌに溶解し、この溶液をＯＤＳカラム（富士シリシア製、カラム直径：３ｃｍ、カラム長さ：３０ｃｍ、分離用担体：粒径３０μｍ）に供した。続いて、メタノール：水（容積比１：１）溶液１０００ｍｌをＯＤＳカラムに供した後さらにメタノール：水（容積比２：１）溶液１０００ｍｌをＯＤＳカラムに供して分離用担体に担持されている成分を溶出させた。ここで、一定の溶出時間経過毎に溶出液を分画し薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を用いて各画分の含有成分をそれぞれ分析した後、画分をエバポレータを用いて濃縮及び乾燥することによりグネモノールＢ（収率３．３質量％）を含有する抗菌剤及びグネチンＥ（収率３．６質量％）を含有する抗菌剤を得た。
（実施例３）
実施例３においては、クロロホルム：メタノール溶液（容積比１０：１）５００ｍｌをシリカゲルカラムに供した。一方、メタノール：水（容積比１．５：１）溶液５００ｍｌをＯＤＳカラムに供した後にメタノール：水（容積比３：１）溶液５００ｍｌをＯＤＳカラムに供し、さらにメタノール：水（容積比４：１）溶液５００ｍｌをＯＤＳカラムに供した以外は、実施例２と同様にして抗菌剤を得た。抗菌剤の種類は、グネタール（収率２．９質量％）を含有する抗菌剤及びグネモノシドＥ（収率１．６％）を含有する抗菌剤の２種であった。ここで、各実施例の抗菌剤中の成分は、高速液体クロマトグラフ装置（カラムとしてカプセルパック（登録商標）ＡＧ１２０、（株）資生堂製を装着）によってそれぞれ分析した。
【００５８】
＜抗菌作用に関する試験＞
薬剤耐性菌としてのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）より分与を受けたＶＲＥ株（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＡＴＣＣ５１２９９株）及びＭＲＳＡ株（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）を用い、各例の各抗菌剤の抗菌作用に関する試験を行った。具体的には、まずＶＲＥ株及びＭＲＳＡ株の各菌を、ＳＣＤブロス（日本製薬製）を前培養用培地として３７℃で６時間前培養した後、前培養した各菌をミューラーヒントン培地（Ｄｉｆｃｏ製）にそれぞれ１０万個播種した後に培地全体に広げた。
【００５９】
一方、各抗菌剤をそれぞれ水に溶解させて検体溶液を調製した。次いで、培地上に円筒のディスクを載置した後に検体溶液０．０１ｍｌを滴下し、培地を培養器に入れて３７℃で４８時間培養した。続いて、培養器から培地を取出した後、実体顕微鏡を用いてコロニーの生育の有無を観察した。そして、コロニーの生育が認められない、即ち菌の増殖が認められないときの検体溶液の濃度を最小二乗法により算出し、最小阻止濃度（ＭＩＣ）を求めた。
【００６０】
この結果、実施例１の抗菌剤のＶＲＥ及びＭＲＳＡに対するＭＩＣはそれぞれ１００μｇ／ｍｌとなった。実施例２及び実施例３における各抗菌剤のＶＲＥに対するＭＩＣは、グネタール又はグネモノシドＥを含有するものは２５μｇ／ｍｌ、グネモノールＢ又はグネチンＥを含有するものは１２．５μｇ／ｍｌであった。一方、実施例２及び実施例３における各抗菌剤のＭＲＳＡに対するＭＩＣは、グネモノシドＥを含有するものは１２．５μｇ／ｍｌ、グネモノールＢ又はグネチンＥを含有するものは６．２５μｇ／ｍｌ、グネタールを含有するものは１２５μｇ／ｍｌであった。
【００６１】
また、バンコマイシン（塩野義製薬社製）及びメチシリン（シグマ−アルドリッチ社製）の抗菌作用試験を上記と同様にしてそれぞれ行ったところ、バンコマイシンのＶＲＥに対するＭＩＣは１ｍｇ／ｍｌ以上となり、メチシリンのＭＲＳＡに対するＭＩＣは１ｍｇ／ｍｌ以上となった。これらの結果より、実施例１〜３の各抗菌剤は、バンコマイシン及びメチシリンに比べて薬剤耐性菌に対する優れた抗菌作用を示した。
【００６２】
＜抗菌作用増強に関する試験＞
各例の各抗菌剤によるゲンタマイシンの抗菌作用増強に関する試験を行った。具体的には、ゲンタマイシンと各抗菌剤とを質量比１：１の割合で混合したものを水に溶解させて検体溶液を調製した以外は、上記抗菌作用に関する試験と同様にしてＭＩＣを求めた。
【００６３】
この結果、各例の抗菌剤をゲンタマイシンにそれぞれ混合したときのＶＲＥ及びＭＲＳＡに対するＭＩＣは、ゲンタマイシン単独のときに比べて低い値となった。次いで、ゲンタマイシン単独でのＭＩＣと、各例の抗菌剤をゲンタマイシンにそれぞれ混合したときのＭＩＣとの値を比較することにより、各例の抗菌剤によるゲンタマイシンの抗菌作用増強の割合を求めた。
【００６４】
この結果、ゲンタマイシンのＶＲＥに対する抗菌作用は、実施例１の抗菌剤により１．８倍増強されるとともにグネモノールＢを含有する抗菌剤により２．３倍増強され、グネチンＥを含有する抗菌剤により３．５倍増強された。さらに、グネタールを含有する抗菌剤により２．７倍増強され、グネモノシドＥを含有する抗菌剤により３．３倍増強された。
【００６５】
一方、ゲンタマイシンのＭＲＳＡに対する抗菌作用は、実施例１の抗菌剤により２．３倍増強されるとともにグネモノールＢを含有する抗菌剤により２．１倍増強され、グネチンＥを含有する抗菌剤により３．３倍増強された。さらに、グネタールを含有する抗菌剤により２．５倍増強され、グネモノシドＥを含有する抗菌剤により３．１倍増強された。これらの結果より、実施例１〜３の各抗菌剤は、ゲンタマイシンの抗菌作用をそれぞれ増強させることができた。
【００６６】
＜副作用に関する試験＞
各例の各抗菌剤単独、ゲンタマイシン単独及び各例の各抗菌剤とゲンタマイシンとの併用による副作用に関する試験を行った。具体的には、正常ｄｄＹ雄性マウス（１０週齢）に検体を１０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇの投与量でそれぞれ皮下投与した。ここで、各抗菌剤とゲンタマイシンとを併用するときには、各抗菌剤とゲンタマイシンとの投与量をそれぞれ１０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇとした。投与期間はいずれも３日間とし、投与３日後に尿を採取するとともに麻酔下で採血して血清を得た。溶媒対照として蒸留水を用い、各検体について５匹のマウスをそれぞれ用いた。尿についてはマルチスティックス（マイルス三共製）を用いて蛋白質検査を行い、血清についてはクレアチニンテストワコー（和光純薬製）を用いてクレアチニン量を測定し５匹の平均値をクレアチニン量とした。
【００６７】
この結果、検体として実施例１の抗菌剤、実施例２及び実施例３の各抗菌剤を投与したときには尿蛋白質が見られなかった。クレアチニン量は、実施例１の抗菌剤、グネチンＥ又はグネタールを含有する抗菌剤のときにはそれぞれ１３ｍｇ／ｍｌとなった。さらに、グネモノールＢを含有する抗菌剤のときには１４ｍｇ／ｍｌとなり、グネモノシドＥを含有する抗菌剤のときには１２ｍｇ／ｍｌとなった。これら各抗菌剤のクレアチニン量は、溶媒対照群の値と同程度であった。
【００６８】
さらに、各抗菌剤とゲンタマイシンとを併用したときにも尿蛋白質は見られなかった。クレアチニン量は、実施例１の抗菌剤とゲンタマイシンとの併用のときには２３ｍｇ／ｍｌとなり、グネモノールＢを含有する抗菌剤との併用のときには３４ｍｇ／ｍｌとなった。グネチンＥを含有する抗菌剤との併用のときには２６ｍｇ／ｍｌとなるとともにグネタールを含有する抗菌剤との併用のときには４０ｍｇ／ｍｌとなり、グネモノシドＥを含有する抗菌剤との併用のときには４２ｍｇ／ｍｌとなった。
【００６９】
一方、検体としてゲンタマイシンを投与したときには尿蛋白質が見られ、血清のクレアチニン量は１５０ｍｇ／ｍｌとなった。これらの結果より、各例の抗菌剤は副作用が弱く、ゲンタマイシンと併用することによってゲンタマイシンの副作用を低減することができた。
（実施例４及び実施例５）
実施例４においては、グネモノールＥ（アピ株式会社製）により抗菌剤を調製し、実施例５においては、アセチルグネモノールＥ（アピ株式会社製）により抗菌剤を調製した。
【００７０】
＜抗菌剤の抗酸化作用に関する試験＞
リノール酸を基質とするとともにラジカル促進剤として２，２−アゾビス二塩酸を用い、実施例４及び実施例５の抗菌剤の抗酸化作用に関する試験を行った。具体的には、まず、１．３質量％リノール酸水溶液２．５ｍｌ、５０ｍＭリン酸緩衝液２．５ｍｌ、実施例４又は実施例５の抗菌剤を含むエタノール溶液（抗菌剤の濃度：０．５ｇ／１００ｍｌ）０．２５ｍｌ、蒸留水０．７５ｍｌ及び２，２−アゾビス二塩酸水溶液（４６．６ｍＭ）０．２５ｍｌを混合して反応液を調製した。続いて、反応液を栓付き試験管中でインキュベート（４０℃、暗所）した。
【００７１】
次いで、インキュベート開始時から２４時間後に前記反応液を０．１ｍｌとり、これに７５質量％エタノール４．７ｍｌ、３０質量％チオシアン酸アンモニウム溶液０．１ｍｌ及び０．０２Ｍ ＦｅＣｌ２−３．５質量％塩酸水溶液０．１ｍｌを加えてよく撹拌し、４分後に５００ｎｍにおける吸光度を測定した（ロダン鉄法）。そして、５００ｎｍにおける吸光度の値から抗酸化能を求めた。この結果、実施例４の抗菌剤の抗酸化能は３４％であり、実施例５の抗酸化能は１３％であった。このため、実施例４の抗菌剤は、有効成分としてグネモノールＥを含有することにより、有効成分としてアセチルグネモノールＥを含有する実施例５の抗菌剤に比べて抗酸化作用を３倍程度にまで高めることができた。
（実施例６）
実施例１と同様にして得られた抗菌剤０．２ｇ、異性化糖３ｇ、食用セルロース１．８ｇ、アスコルビン酸０．０１ｇ及び食用香料０．１ｇを混合し、常法に従って粉末化することにより顆粒状の食品製剤を得た。
【００７２】
＜食品製剤の抗菌作用に関する試験＞
実施例６の食品製剤の抗菌作用に関する試験を行った。具体的には、まず健常者の血液１ｍｌを寒天培地上に塗布した後、上記抗菌作用に関する試験で用いたＶＲＥ株又はＭＲＳＡ株の各菌をそれぞれ１０万個播種した。次いで、実施例６の食品製剤を１ｇ添加した後、培地を培養器に入れて３７℃で２４時間培養した。続いて、培養器から培地を取出した後、実体顕微鏡を用いてコロニーの生育の有無を観察した。ここで、健常者３例を対象に上記試験をそれぞれ行った。これらの結果、ＶＲＥ及びＭＲＳＡのいずれにおいてもコロニーの生育は認められず、実施例６の食品製剤は菌の増殖を抑制することができた。
（実施例７）
実施例７においては、まずモノステアリン酸ポリエチレングリコール１ｇ及び親油型モノステアリン酸グリセリン１ｇを消毒用エタノール１０ｇに溶解させた。次いで、実施例１、実施例２又は実施例３の各抗菌剤０．２ｇ及び精製水７０ｇを加えた後、冷却して消毒剤を得た。
（比較例１）
比較例１においては、モノステアリン酸ポリエチレングリコール１ｇ及び親油型モノステアリン酸グリセリン１ｇを消毒用エタノール１０ｇに溶解させて消毒剤を得た。
【００７３】
＜消毒作用に関する試験＞
実施例７の各消毒剤及び比較例１の消毒剤の消毒作用に関する試験を行った。具体的には、まず３ｃｍ角のリント布に上記抗菌作用に関する試験で用いたＶＲＥ株又はＭＲＳＡ株の各菌の前培養液１ｍｌをそれぞれ塗布した。次いで、実施例７の各消毒剤又は比較例１の消毒剤１ｇをそれぞれ加えた後、リント布を培養器に入れて３７℃で２４時間培養した。続いて、培養器からリント布を取出した後、実体顕微鏡を用いて菌の生育の有無を観察した。この結果、実施例７の各消毒剤においては、ＶＲＥ及びＭＲＳＡのいずれにおいても菌の生育は認められず、実施例７の各消毒剤はリント布をそれぞれ消毒することができた。一方、比較例１の消毒剤においては、実施例１、実施例２又は実施例３の各抗菌剤を含有していないためにＶＲＥ及びＭＲＳＡのいずれにおいても菌の生育が認められ、リント布を消毒することができなかった。
【００７４】
次に、前記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
（１）前記一般式（１）で示されるレスベラトロール重合体から選ばれる少なくとも一種がグネモノールＥ、グネチンＥ及びグネモノールＢから選ばれる少なくとも一種である請求項２に記載の抗菌剤。この構成によれば、障害を受けている組織の炎症を抑制することができる。
【００７５】
（２）前記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示す請求項４に記載の食品製剤。この構成によれば、抗酸化作用を向上させることができる。
（３）前記一般式（１）中のＲ１〜Ｒ５がそれぞれ水素を示す請求項５に記載の消毒剤。この構成によれば、抗酸化作用を向上させることができる。
【００７６】
【発明の効果】
本発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
請求項１に記載の発明の抗菌剤及び請求項４に記載の食品製剤によれば、副作用が弱いとともに薬剤耐性菌に対して優れた抗菌作用を有している。
【００７７】
請求項２に記載の発明の抗菌剤によれば、請求項１に記載の発明の効果に加え、抗酸化作用を向上させることができる。
請求項３に記載の発明の抗菌剤の製造方法によれば、グネツム科の植物体の部位を原料として用いることにより抗菌剤の製造効率を向上させることができる。
【００７８】
請求項５に記載の発明の消毒剤によれば、優れた消毒作用を有している。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an antibacterial agent used for treatment against drug-resistant bacteria, a method for producing the same, a food preparation, and a disinfectant. More specifically, the present invention relates to an antibacterial agent having a weak side effect and having an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria, a method for producing the same, a food preparation, and a disinfectant.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, antibacterial agents containing chemically synthesized antibacterial substances such as gentamicin as active ingredients have been used for the treatment of drug-resistant bacteria. On the other hand, antibacterial agents containing antibacterial substances derived from natural products such as resveratrol contained in red grapes as active ingredients generally have fewer side effects, and drug-resistant bacteria are less resistant to antibacterial agents. There are advantages. In addition, Gunmonol A, Gunemonol B, Gunnetin E, Guntal, and Gunmonomonoside E have been found as some new resveratrol polymers from Gnetum family plants, but their actions have not been investigated. (For example, refer nonpatent literature 1.).
[0003]
[Non-Patent Document 1]
Ilya I, Tanaka T, Tanuma M, Iinuma M, Ali Z, Frasawa M, Nakaya K, Shirataki Y, Shirataki J (Murata J), Darnaedi D, "Stilbene deriveds of specialties of Genetae", Vol. 200, Chem. , P. 796-801
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
However, an antibacterial agent containing a chemically synthesized antibacterial substance as an active ingredient has a problem of strong side effects on the kidneys and blood. Furthermore, drug-resistant bacteria are highly likely to have resistance to antibacterial agents containing newly chemically synthesized antibacterial substances as active ingredients. On the other hand, an antibacterial agent containing an antibacterial substance derived from a natural product as an active ingredient has a problem that the antibacterial action is slight. For this reason, an antibacterial substance having weak side effects and an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria is desired.
[0005]
The present invention has been made paying attention to the problems existing in the prior art as described above. The purpose is to provide an antibacterial agent having a weak side effect and having an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria, a method for producing the same, a food preparation and a disinfectant.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the antibacterial agent of the invention described in claim 1 contains at least one selected from resveratrol polymers represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
[0007]
[Formula 4]
The antibacterial agent of the invention of claim 2 is the R 1 in the general formula (1) in the invention of claim 1. 1 ~ R 5 Each represents hydrogen.
[0008]
A method for producing an antibacterial agent according to a third aspect of the present invention is the method for producing an antibacterial agent according to the first or second aspect, wherein the general formula ( After extracting an extraction component containing at least one selected from the resveratrol polymer represented by 1), at least one selected from the resveratrol polymer represented by the general formula (1) is separated from the extracted component. Is.
[0009]
The food preparation of the invention described in claim 4 contains at least one selected from resveratrol polymers represented by the following general formula (1) and has an antibacterial action.
[0010]
[Chemical formula 5]
(Wherein R 1 ~ R 5 Represents hydrogen, acetyl group, methyl group, ethyl group or glucosyl group, and n represents an integer of 1 to 10. )
The disinfectant of the invention according to claim 5 contains at least one selected from the resveratrol polymer represented by the following general formula (1), and the antibacterial agent of the resveratrol polymer represented by the general formula (1) It will exhibit a disinfecting action through the action.
[0011]
[Chemical 6]
(Wherein R 1 ~ R 5 Represents hydrogen, acetyl group, methyl group, ethyl group or glucosyl group, and n represents an integer of 1 to 10. )
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
(First embodiment)
Hereinafter, the antibacterial agent of 1st Embodiment which actualized this invention is demonstrated in detail.
[0013]
The antibacterial agent of the present embodiment contains at least one selected from resveratrol polymers represented by the following general formula (1) (hereinafter also simply referred to as resveratrol polymer) as an active ingredient. This antibacterial agent is used as a medicine or quasi-drug for the treatment of drug-resistant bacteria.
[0014]
[Chemical 7]
(Wherein R 1 ~ R 5 Represents hydrogen, acetyl group, methyl group, ethyl group or glucosyl group, and n represents an integer of 1 to 10. )
In the general formula (1), the basic skeleton is resveratrol, and a pyran or pyrene structure is exhibited by bonding a trans-ethylene group of another resveratrol to the dihydroxybenzoyl ring of resveratrol. R in the general formula (1) 1 ~ R 5 May all be the same or different. In the general formula (1), n represents the number of resveratrol polymerized, and is preferably 1 to 7, more preferably 1 to 3. When n exceeds 10, since the molecular weight of a resveratrol polymer becomes large, the solubility thereof decreases. For this reason, for example, when an antibacterial agent in powder form is dissolved in physiological saline and used for the treatment of drug-resistant bacteria, an amount of the active ingredient necessary for the treatment cannot be dissolved in the physiological saline.
[0015]
Here, specific examples of drug-resistant bacteria include methicillin-resistant Staphylococcus aureus (hereinafter referred to as MRSA), vancomycin-resistant enterococcus (hereinafter referred to as VEC), and so forth. . These drug-resistant bacteria have functions such as the production of degrading enzymes that degrade specific antibacterial agents and the enhancement of cell membrane permeability.
[0016]
Resveratrol polymer has an antibacterial action against drug-resistant bacteria. This is because the resveratrol polymer acts on the cell membrane of drug-resistant bacteria to increase the permeability of the cell membrane, thereby releasing intracellular components and killing the drug-resistant bacteria, and entering the drug-resistant bacteria This is to suppress the production of degrading enzymes. Here, for example, R in the above general formula (1) 1 ~ R 5 When each represents a methyl group, the resveratrol polymer has a hydrophobic group based on the methyl group. It is speculated that the hydrophobic group of the resveratrol polymer is hydrophobically bonded to the hydrophobic group of the phospholipid constituting the lipid bilayer of the cell membrane, thereby destroying a part of the cell membrane and increasing the permeability of the cell membrane.
[0017]
Specific examples of the resveratrol polymer include a resveratrol dimer and Gunemonol E having two asymmetric carbons (R in the above general formula (1)). 1 ~ R 5 Each represents hydrogen and n represents 1. ), Gnetin E which is a trimer of resveratrol (R in the above general formula (1)) 1 ~ R 5 Each represents hydrogen and n represents 2. ), Gnemonol B which is a tetramer of resveratrol (R in the above general formula (1)) 1 ~ R 5 Each represents hydrogen and n represents 3. ), Gnemonoside E (R in the above general formula (1)) 1 ~ R 5 Each represents a glucosyl group. ), Acetylgunemonol E (R in the above general formula (1)) 1 ~ R 5 Each represents an acetyl group. ) And the like.
[0018]
Furthermore, Gunemonol E glucoside (R in the above general formula (1) 1 ~ R 4 Each represents hydrogen and R 5 Represents a glucosyl group, and n represents 1. ), Gnetin E glucoside (R in the above general formula (1)) 1 ~ R 4 Each represents hydrogen and R 5 Represents a glucosyl group, and n represents 2. ), Gunemonol B glucoside (R in the above general formula (1) 1 ~ R 4 Each represents hydrogen and R 5 Represents a glucosyl group, and n represents 3. ) And the like.
[0019]
The resveratrol polymer is represented by R in the general formula (1) as shown in the following general formula (2). 1 ~ R 5 In which each represents hydrogen is preferred because of its excellent antioxidant effect. Furthermore, at least one selected from Gunemonol E, Gunnetin E, and Gunemonol B is more preferable because it has an anti-inflammatory action and can suppress inflammation in tissues damaged by drug-resistant bacteria. Here, the antioxidant effect generally increases in proportion to the number of hydroxyl groups. On the other hand, acetyl gnemonol E is preferable because it has high fat solubility and high permeability to the cell membrane of drug-resistant bacteria, and gnemonoside E has high absorption rate through the enterohepatic circulation and can improve the durability of antibacterial action. Therefore, it is preferable. In addition, R 1 ~ R 5 In which each represents a methyl group or an ethyl group is preferable because the antibacterial action against drug-resistant bacteria can be improved.
[0020]
[Chemical 8]
(In the formula, n represents an integer of 1 to 10.)
The content of the resveratrol polymer in the antibacterial agent is preferably 0.1 to 20% by mass, more preferably 1 to 15% by mass, and further preferably 5 to 10% by mass. When the content of the resveratrol polymer is less than 0.1% by mass, the antibacterial agent cannot sufficiently exhibit the antibacterial action because the content of the resveratrol polymer is low. On the other hand, when the content exceeds 20% by mass, when the antibacterial agent contains a component that contributes to the improvement of the stability of the antibacterial agent as another additive component, the antibacterial agent stability is reduced by reducing the content of the component. May decrease.
[0021]
This antibacterial agent may contain a binder, an excipient, a lubricant, a swelling agent, a sweetener, a flavoring agent and the like as other additive components. The content of other additive components in the antibacterial agent is determined according to the conventional method of the antibacterial agent.
[0022]
Antimicrobial agents are configured as oral or parenteral agents when used as pharmaceuticals. Examples of oral dosage forms include tablets, capsules, powders, syrups, and drinks. When the antibacterial agent is constituted as a tablet, it contains, for example, a binder, an excipient, a lubricant, a swelling agent, a sweetening agent, and a flavoring agent, and the surface thereof may be coated with shellac or sugar. Good. In addition, when the antibacterial agent is configured as a capsule, for example, it contains a liquid carrier such as fats and oils in addition to the other additive components in the above-mentioned tablet. An agent, a preservative, and a pigment flavoring agent are contained.
[0023]
On the other hand, examples of dosage forms for parenterals include injections in addition to external preparations such as ointments, creams, and liquids. When the antibacterial agent is configured as an external preparation, it contains a base material such as petrolatum, paraffin, fats and oils, lanolin, and macro gold as other additive components. Injectables include solutions and freeze-dried agents, and antibacterial agents are used aseptically dissolved in distilled water for injection, physiological saline, etc. when configured as freeze-dried agents. When used as a quasi-drug, antibacterial agents are blended in skin cleansers, tablets, capsules, drinks, soaps, toothpastes and the like.
[0024]
Now, when manufacturing an antibacterial agent, first, the site | part is extract | collected from the plant body of Gnetsum family. Here, the plant body of the Gnetsum family is a plant belonging to the family Gnetsum family, and the plant body of the Gnetsum family may be any production place in countries or regions such as Southeast Asia, Africa, South America, Europe, and the like. Gnetum africanum, Gnetum gnemon or Gnetum gnemonoides is preferable, and Gnetum gnemonides is more preferable because of the high content of resveratrol polymer among plants of Gnetumaceae. Specific examples of the site include flowers, leaves, stems, roots, young leaves, shoots, seeds and the like, but the roots are preferred because of the high content of resveratrol polymer. For this reason, as a part of the plant body of Gnetsum family, the root of Gnetum gnemon is more preferable.
[0025]
Examples of plant parts of the Gnetsum family include those that have been collected, those that have been collected and dried, those that have been collected and dried and crushed, and the like. In order to improve, what was dried after extract | collecting is preferable. Furthermore, what was dried and pulverized after being collected is more preferable because it can improve the extraction efficiency by increasing the surface area of the plant body of the Gnetaceae family. Here, a grinder, a cutting machine, etc. are used for grinding | pulverizing the site | part of a plant body of Gnetsum family.
[0026]
Subsequently, the extraction component containing the resveratrol polymer is extracted in the extraction solvent by immersing the plant part of the Gnetsum family in the extraction solvent and then stirring or leaving it. Specific examples of the extraction solvent include ethanol, methanol, acetone, ethyl acetate, chloroform, and the like. These may be used alone or in combination of two or more. Furthermore, these may be used as an extraction solvent in a state of being mixed with water. Among these, ethanol or a mixed solution of water and ethanol is preferable because the obtained antibacterial agent can be easily used as an oral agent or the like.
[0027]
The amount of the extraction solvent is preferably 1 to 10 times, more preferably 2 to 6 times, and still more preferably 3 to 5 times the mass of the plant part of the Gnetsum family. On the other hand, the extraction temperature is preferably 10 to 50 ° C., more preferably 20 to 40 ° C., further preferably 25 to 35 ° C., and the extraction time is preferably 1 to 24 hours, more preferably 2 to 18 hours, and still more preferably. Is 3 to 6 hours.
[0028]
If the amount of the solvent for extraction is less than 1 time, the extraction temperature is less than 10 ° C., or the extraction time is less than 1 hour, the extraction efficiency may decrease and the production efficiency of the antibacterial agent may decrease. On the other hand, if the amount of the extraction solvent exceeds 10 times, it takes time to concentrate after extraction, and if the extraction time exceeds 24 hours, it takes time. For this reason, there exists a possibility that the manufacturing efficiency of an antibacterial agent may fall. If the elution temperature exceeds 50 ° C., the extraction solvent may volatilize when the boiling point of the extraction solvent is 50 ° C. or lower.
[0029]
Subsequently, the liquid mixture which consists of a solvent for extraction and an extraction component is obtained by carrying out solid-liquid separation of the liquid mixture of the site | part of a plant body of Gnetsum family, and the solvent for extraction. For solid-liquid separation of the mixed solution, atmospheric pressure filtration, suction filtration, centrifugation, or the like is used. Examples of the filter medium used for normal pressure filtration and suction filtration include food filter paper, filter paper layered with diatomaceous earth, and a normal centrifuge or the like is used for centrifugation. This solid-liquid separation is preferably performed in combination with filtration and centrifugation because the extraction efficiency can be improved. Furthermore, the residue obtained by filtration is preferably re-extracted with an extraction solvent because the extraction efficiency can be further improved.
[0030]
And an extract is obtained by concentrating and drying an extract as needed. At this time, the extract may be concentrated and dried by heating under reduced pressure, or the extract may be concentrated and dried without heating by using a vacuum freeze dryer. When heating under reduced pressure, the heating temperature is preferably 20 to 60 ° C, more preferably 25 to 55 ° C, and even more preferably 30 to 50 ° C. When the heating temperature is less than 20 ° C., it takes time for concentration and drying, and the production efficiency of the antibacterial agent may be reduced. On the other hand, when it exceeds 60 degreeC, there exists a possibility that stability of the extract obtained may be impaired.
[0031]
The extract is then dissolved in a separation solvent. This separation solvent swells the separation carrier and becomes a moving layer, and specific examples thereof include water, water-containing lower alcohols, hydrophilic solvents, lipophilic solvents, and the like. Specific examples of the lower alcohol include methanol, ethanol, propanol, butanol and the like. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, the antibacterial agent obtained from ethanol is preferable because it can be easily used as an oral agent or the like.
[0032]
The amount of the solvent for separation is preferably 1 to 50 times, more preferably 3 to 20 times the mass of the extract. If the amount of the solvent for separation is less than 1 time, separation of the extract becomes difficult. On the other hand, when the amount exceeds 50 times, it takes time to separate the extract and the production efficiency of the antibacterial agent may be reduced. Specific examples of the material for the separation carrier include porous polysaccharides, silicon oxide compounds, polyacrylamide, polystyrene, and polypropylene.
[0033]
Subsequently, after the separation carrier is packed in the column, the separation solvent is supplied to the separation carrier, and the other components and the resveratrol polymer are separated in the extract in the separation solvent. At this time, the resveratrol polymer is obtained in a state dissolved in a separation solvent, that is, as a resveratrol polymer solution.
[0034]
Examples of the carrier for separation include a reverse phase carrier, an ion exchange carrier, an affinity carrier, a dispersible carrier, a molecular sieve carrier, and an adsorbent carrier. Examples of the reverse phase carrier include those whose surface is coated with a hydrophobic compound, and can be used for separation of a highly hydrophobic substance by the hydrophobic bond of the hydrophobic compound. Specific examples of the reverse phase carrier include DM1020T (manufactured by Fuji Silysia). Examples of the ion exchange carrier include those whose surface is coated with an ionic substance, and specific examples include IRA-410, XAD-2, XAD-4 (manufactured by Rohm and Haas). Among the ion exchange carriers, those coated with a cationic substance are suitable for separation of an anionic substance, and those coated with an anionic substance are suitable for separation of a cationic substance.
[0035]
An affinity carrier refers to one that performs molecules using specific binding such as an antigen-antibody reaction. For example, an antibody-coated one can separate only the substance that serves as the antigen. The distributable carrier indicates a material that performs separation using a difference in distribution coefficient between the substance to be separated and the solvent for separation, and specific examples include silica gel (manufactured by Merck). The molecular sieve carrier is one that performs separation utilizing the difference in molecular size, and specific examples include Sephadex (registered trademark) LH-20 (manufactured by Amersham Pharmacia). The adsorptive carrier indicates a material that is separated using the adsorptivity of the substance to be separated, and specific examples thereof include Diaion (registered trademark) (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation).
[0036]
Among these, a dispersible carrier, a molecular sieve carrier, an adsorptive carrier, or an ion exchange carrier is preferable because separation efficiency can be improved. Further, when the difference in distribution coefficient with respect to the separation solvent is large, a reverse phase carrier or a dispersible carrier is more preferable because the separation efficiency can be improved.
[0037]
When an organic solvent such as ethanol is used as the separation solvent, it is preferable to use a separation carrier that is resistant to the organic solvent, and the separation carrier used for producing pharmaceuticals and foods is separated into the obtained antibacterial agent. It is more preferable because impurities derived from the carrier for use can be prevented from being mixed. Examples of such a separation carrier include DM1020T as a reverse phase carrier, IRA-410, XAD-2, and XAD-4 as ion exchange carriers, silica gel as a distribution carrier, and Sephadex LH-20 as a molecular sieve carrier. And diamond ions as an adsorptive carrier.
[0038]
Among these, DM1020T, Sephadex LH-20, or diamond ion is preferable because the above effect is high. Here, since it is easy to remove the separating solvent, it is preferable to use a lower alcohol as the separating solvent when Sephadex LH-20 is used as the separating carrier. Similarly, when silica gel is used as the separation carrier, chloroform, methanol, acetic acid or a mixture thereof is preferred as the separation solvent. When Diaion or DM1020T is used, a lower alcohol such as methanol or ethanol or a mixture of lower alcohol and water is used. Liquid is preferred.
[0039]
The particle size of the separation carrier is preferably 0.1 to 300 μm. If the particle size is less than 0.1 μm, it takes time to separate the extract, which may reduce the production efficiency of the antibacterial agent. On the other hand, when it exceeds 300 μm, the separation accuracy of the extract may be lowered. The separation temperature (the temperature of the column packed with the separation carrier) is preferably 4 to 30 ° C, more preferably 10 to 25 ° C. If the separation temperature is less than 4 ° C., the operability of the column may be deteriorated. On the other hand, when it exceeds 30 degreeC, there exists a possibility that the stability of the resveratrol polymer obtained by isolation | separation may be impaired.
[0040]
Further, when separating the extract, it is preferable to repeat the separation by a plurality of columns because the yield of resveratrol polymer can be improved. At this time, the same or different separation carriers may be used, or the same or different separation solvents may be used. Furthermore, for the separation of the extract, it is preferable to use a systemized apparatus such as a low-speed chromatogram system, a purification chromatogram system, or a membrane separation chromatogram system because the extract can be easily separated. .
[0041]
Then, for example, the obtained resveratrol polymer solution is concentrated and dried to be powdered, and other additive components are blended to produce an antibacterial agent. Here, the antibacterial agent may be manufactured by blending other additive components in the resveratrol polymer solution, but is preferable because the powdered state by drying can improve the storage stability. . A vacuum distillation apparatus, a vacuum dryer, etc. can be used for this drying. When dried using a vacuum distillation apparatus, the drying temperature is preferably 20 to 50 ° C, more preferably 30 to 40 ° C. On the other hand, when dried using a vacuum dryer, the drying temperature is preferably 20 to 60 ° C, more preferably 25 to 40 ° C. When the drying temperature is less than 20 ° C., it takes time to dry and the production efficiency of the antibacterial agent may be reduced. On the other hand, when it exceeds 50 degreeC or 60 degreeC, there exists a possibility that the stability of a resveratrol polymer may be impaired.
[0042]
For example, when an antibacterial agent is constituted as an injection of a freeze-dried agent and used for treatment of drug-resistant bacteria, the antibacterial agent is dissolved in physiological saline or the like and then administered to a patient using a syringe or the like. At this time, resveratrol polymer, which is an active ingredient of the antibacterial agent, increases the permeability of the cell membrane by, for example, hydrophobic bonding between the hydrophobic group and the hydrophobic group of the phospholipid of the cell membrane, thereby killing the drug-resistant bacteria and drug resistance. Suppresses the production of fungal degrading enzymes. For this reason, the antibacterial agent can exhibit an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria. Here, the cell membrane of drug-resistant bacteria is different from the cell membrane of animals such as humans. For this reason, an antibacterial agent does not exhibit an antibacterial effect with respect to a human cell, and can suppress the expression of a side effect. Therefore, the side effect by an antibacterial agent can be weakened.
[0043]
According to the first embodiment described in detail above, the following effects are exhibited.
-The antibacterial agent of 1st Embodiment contains the resveratrol polymer as an active ingredient. Resveratrol polymer has an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria and can suppress the occurrence of side effects. For this reason, an antibacterial agent has an antibacterial action excellent against a drug-resistant bacterium as well as weak side effects.
[0044]
-R in the above general formula (1) 1 ~ R 5 Each preferably represents hydrogen. In this case, the antioxidant action of the antibacterial agent can be improved.
・ Antibacterial agent extracts resveratrol from the extracted components using the solvent for separation and the carrier for separation after extracting the extracted components containing the resveratrol polymer from the plant part of Gnetsum family using the solvent for extraction It is produced by separating the polymer. The plant of Gnetsum family has a higher content of resveratrol polymer than the plant generally used for extraction of resveratrol polymer. For this reason, a resveratrol polymer can be extracted efficiently and the manufacturing efficiency of an antibacterial agent can be improved.
(Second Embodiment)
Hereinafter, the food preparation of the second embodiment that embodies the present invention will be described focusing on differences from the antibacterial agent of the first embodiment.
[0045]
The food preparation of this embodiment contains a resveratrol polymer and has an antibacterial action based on the resveratrol polymer. The content of the resveratrol polymer in the food preparation is preferably 0.1 to 30% by mass, more preferably 0.3 to 20% by mass, and still more preferably 0.5 to 15% by mass. When the content of the resveratrol polymer is less than 0.1% by mass, the food preparation cannot sufficiently exhibit the antibacterial action because the content of the resveratrol polymer is low. On the other hand, when the content exceeds 30% by mass, when the food preparation contains a base material as another additive component, the form of the food preparation may not be maintained due to a decrease in the content of the base material. .
[0046]
The food preparation may contain food materials such as beverage materials, base materials, excipients, additives such as food additives, auxiliary materials, bulking agents and the like as other additive components. The content of other additive components in the food preparation is determined according to a conventional method for food preparation. Examples of the form of the food preparation include powders, tablets, liquids such as drinks, capsules, and the like. Specifically, forms such as rice cake, rice crackers, cookies, and various beverages can be adopted.
[0047]
Food preparations are taken orally in several divided doses per day. The daily intake is preferably 0.1 to 10 g, more preferably 0.3 to 5 g, and still more preferably 0.5 to 3 g. If the intake of the food preparation is less than 0.1 g, it becomes difficult to take the required amount of the resveratrol polymer in the food preparation, and there is a possibility that sufficient antibacterial action cannot be expected. On the other hand, when it exceeds 10 g, the handleability is deteriorated and the cost may be increased.
(Third embodiment)
Hereinafter, the disinfectant of the third embodiment embodying the present invention will be described focusing on differences from the antibacterial agent of the first embodiment.
[0048]
The disinfectant of this embodiment contains a resveratrol polymer, and develops a disinfecting action through the antibacterial action of the resveratrol polymer. Here, the expression of the disinfecting action through the antibacterial action of the resveratrol polymer means that the drug-resistant bacteria are killed, that is, disinfected, based on the antibacterial mechanism of the resveratrol polymer. This disinfectant is used to disinfect hospital rooms, operating rooms, treatment rooms, patient clothing, contaminated air, urine, stool and other filth, surgical instruments and devices, and the like. Furthermore, it is also used for disinfection outside hospitals such as general households, schools, and canteens.
[0049]
The content of the resveratrol polymer in the disinfectant is preferably 5 to 30% by mass, more preferably 7 to 25% by mass, and still more preferably 10 to 20% by mass. When the content of the resveratrol polymer is less than 5% by mass, the content of the resveratrol polymer is low, so that the disinfection action based on the antibacterial action cannot be sufficiently exhibited. On the other hand, even if it exceeds 30 mass%, the disinfection action based on the antibacterial action cannot be exhibited any more.
[0050]
The disinfectant may contain a surfactant, a solvent, a thickener, an excipient and the like as other additive components. The content of other additive components in the disinfectant is determined according to the conventional method of disinfectant. Examples of the disinfectant include solution, cream, paste, gel, gel, solid, powder, etc. Specifically, adopt spraying, aerosol, liquid, solid, etc. Can do.
[0051]
For example, the disinfectant is sprayed into the room several times a day or applied by wiping or the like. The daily application amount or application amount is preferably 0.01 to 5 g, more preferably 0.05 to 3 g, and still more preferably 0.1 to 1 g. If the application amount or application amount of the disinfectant is less than 0.01 g, the amount of resveratrol polymer to be applied or applied may be small, so that there is a possibility that antibacterial action based on sufficient antibacterial action cannot be expected. On the other hand, when it exceeds 5 g, the handleability of the disinfectant is deteriorated, and there is a risk that the spraying cost and the like increase.
[0052]
Therefore, the disinfectant of Example 3 has an excellent disinfecting action by expressing the disinfecting action through the excellent antibacterial action of the resveratrol polymer.
In addition, the said embodiment can also be changed and comprised as follows.
[0053]
The antibacterial agent of the first embodiment may be used in combination with an antibacterial agent such as ampicillin, gentamicin, minocycline, fosfomycin, vancomycin. Here, each antibacterial agent exhibits antibacterial properties by different mechanisms of action. When constituted in this way, a synergistic antibacterial action is exhibited due to different action mechanisms. Furthermore, by using the antibacterial agent of the first embodiment in combination, it is possible to suppress the development of resistant bacteria to ampicillin, gentamicin, minocycline, fosfomycin, vancomycin, etc., and reducing the dose of these antibacterial agents causes side effects. Can be reduced. In addition, the antibacterial agents may be contained in the food preparation of the second embodiment and the disinfectant of the third embodiment.
[0054]
-You may use the antibacterial agent of 1st Embodiment for the treatment with respect to microbes other than a drug-resistant microbe. In addition, the food preparation of the second embodiment may be used for bacteria other than drug-resistant bacteria, and the disinfectant of the third embodiment may be used for disinfecting bacteria other than drug-resistant bacteria.
[0055]
-You may use the disinfectant of 3rd Embodiment for hand disinfection.
In each embodiment, the resveratrol polymer may be biochemically synthesized by reacting resveratrol with polyphenol oxidase.
At this time, R in the general formula (1) 1 ~ R 5 Represents an acetyl group or the like, a resveratrol polymer is synthesized by reacting resveratrol with polyphenol oxidase and then acetylating.
[0056]
【Example】
Hereinafter, the embodiment will be specifically described with reference to examples and test examples.
(Example 1)
In Example 1, as a plant part of the Gnetsum family, first, 2 kg of the main root part of Indonesian Gnetsum gnemon was dried with a dryer and then pulverized with a pulverizer to obtain a pulverized product. Next, 9 kg of ethanol as an extraction solvent was added to 1.8 kg of this pulverized product, and the mixture was stirred at 25 ° C. for 6 hours, and then naturally filtered using a filter paper (manufactured by Toyo Roshi Kaisha, Ltd., No. 2) to obtain a filtrate. Subsequently, the filtrate was concentrated and dried under reduced pressure using an evaporator to obtain an antibacterial agent as a brown powder 0.85 kg. This antibacterial agent includes Gunemonol A (1.4 mass%), Gunemonol B (2.3 mass%), Gunnetin E (1.8 mass%), Guntal (2.6 mass%) and Gunemonoside E (1. 7% by mass).
(Example 2)
In Example 2, after obtaining a brown powder in the same manner as in Example 1, 60 g of the powder was dissolved in 100 ml of acetone as a separation solvent, and this solution was dissolved in a silica gel column (manufactured by Fuji Silysia, column diameter: 5 cm, Column length: 50 cm, separation carrier: silica gel having a particle size of 50 μm). Next, 1000 ml of a chloroform: methanol solution (volume ratio 20: 1) was applied to a silica gel column to elute the components supported on the carrier for separation, and then concentrated and dried using an evaporator to obtain a powder.
[0057]
Subsequently, the obtained powder was dissolved in 100 ml of methanol, and this solution was applied to an ODS column (manufactured by Fuji Silysia, column diameter: 3 cm, column length: 30 cm, carrier for separation: particle size 30 μm). Subsequently, 1000 ml of a methanol: water (volume ratio 1: 1) solution was applied to the ODS column, and then 1000 ml of a methanol: water (volume ratio 2: 1) solution was further applied to the ODS column to carry the component supported on the separation carrier. Was eluted. Here, the eluate is fractionated every time elution time elapses, the components contained in each fraction are analyzed using thin layer chromatography (TLC), and then the fractions are concentrated and dried using an evaporator. An antibacterial agent containing Gunemonol B (yield 3.3% by mass) and an antibacterial agent containing gnetin E (yield 3.6% by mass) were obtained.
Example 3
In Example 3, 500 ml of chloroform: methanol solution (volume ratio 10: 1) was applied to a silica gel column. On the other hand, after applying 500 ml of methanol: water (volume ratio 1.5: 1) solution to the ODS column, 500 ml of methanol: water (volume ratio 3: 1) solution was applied to the ODS column, and further methanol: water (volume ratio 4: 1) An antibacterial agent was obtained in the same manner as in Example 2 except that 500 ml of the solution was applied to an ODS column. There were two types of antibacterial agents: an antibacterial agent containing gnetal (yield 2.9% by mass) and an antibacterial agent containing gnemonoside E (yield 1.6%). Here, the components in the antibacterial agent of each example were analyzed by a high-performance liquid chromatograph (equipped with Capsule Pack (registered trademark) AG120, manufactured by Shiseido Co., Ltd. as a column).
[0058]
<Test for antibacterial action>
Using the VRE strain (Enterococcus faecalis ATCC 51299) and MRSA strain (Staphylococcus aureus), which were distributed from the American Type Culture Collection (ATCC) as drug-resistant bacteria, tests on the antibacterial activity of each antibacterial agent were conducted. . Specifically, first, each bacterium of the VRE strain and MRSA strain was pre-cultured at 37 ° C. for 6 hours using SCD broth (manufactured by Nippon Pharmaceutical) as a pre-culture medium, and each pre-cultured bacterium was then transformed into Mueller Hinton medium (Difco). And then spread over the whole medium.
[0059]
On the other hand, each antibacterial agent was dissolved in water to prepare a sample solution. Next, after placing a cylindrical disk on the medium, 0.01 ml of the sample solution was dropped, and the medium was placed in an incubator and cultured at 37 ° C. for 48 hours. Subsequently, after removing the medium from the incubator, the presence or absence of colony growth was observed using a stereomicroscope. Then, the concentration of the sample solution when colony growth was not observed, that is, when the growth of bacteria was not observed, was calculated by the least square method to determine the minimum inhibitory concentration (MIC).
[0060]
As a result, the MIC of the antibacterial agent of Example 1 for VRE and MRSA was 100 μg / ml, respectively. The MIC for VRE of each antibacterial agent in Example 2 and Example 3 was 25 μg / ml for those containing Guntar or Gunmonomonoside E, and 12.5 μg / ml for those containing Gunemonol B or Gunnetin E. On the other hand, the MIC for MRSA of each antibacterial agent in Example 2 and Example 3 is 12.5 μg / ml for those containing gnemonoside E, 6.25 μg / ml for those containing Gunemonol B or Gunnetin E, The contained amount was 125 μg / ml.
[0061]
In addition, vancomycin (manufactured by Shionogi & Co., Ltd.) and methicillin (manufactured by Sigma-Aldrich) were each tested in the same manner as described above. As a result, the MIC of vancomycin against VRE was 1 mg / ml or more. The MIC was 1 mg / ml or more. From these results, each antibacterial agent of Examples 1 to 3 showed an excellent antibacterial action against drug-resistant bacteria as compared with vancomycin and methicillin.
[0062]
<Test for enhancing antibacterial activity>
A test was conducted on the enhancement of antibacterial activity of gentamicin by each antibacterial agent in each case. Specifically, the MIC was determined in the same manner as in the test for antibacterial action except that a sample solution was prepared by dissolving gentamicin and each antibacterial agent in a mass ratio of 1: 1 and dissolving in water. .
[0063]
As a result, the MIC for VRE and MRSA when the antibacterial agent of each example was mixed with gentamicin was lower than that for gentamicin alone. Next, by comparing the values of the MIC with gentamicin alone and the MIC when the antibacterial agent of each example was mixed with gentamicin, the ratio of the enhancement of the antibacterial action of gentamicin by the antibacterial agent of each example was determined.
[0064]
As a result, the antibacterial action of gentamicin against VRE was enhanced 1.8 times by the antibacterial agent of Example 1, 2.3 times by the antibacterial agent containing Gunemonol B, and 3 by the antibacterial agent containing Gunnetin E. .5 fold enhancement. Furthermore, the antibacterial agent containing gnetal was enhanced by 2.7 times, and the antibacterial agent containing gnemonoside E was enhanced by 3.3 times.
[0065]
On the other hand, the antibacterial action of gentamicin against MRSA was enhanced 2.3 times by the antibacterial agent of Example 1, 2.1 times by the antibacterial agent containing Gunemonol B, and 3. It was enhanced 3 times. Furthermore, it was enhanced 2.5 times by an antibacterial agent containing Guntal and 3.1 times by an antibacterial agent containing Gunemonoside E. From these results, each antibacterial agent of Examples 1 to 3 was able to enhance the antibacterial action of gentamicin.
[0066]
<Studies on side effects>
Each antibacterial agent in each case alone, gentamicin alone, and the side effects caused by the combined use of each antibacterial agent and gentamicin in each case were tested. Specifically, specimens were subcutaneously administered to normal ddY male mice (10 weeks old) at a dose of 10 mg / 10 ml / kg. Here, when each antibacterial agent and gentamicin were used in combination, the dose of each antibacterial agent and gentamicin was 10 mg / 10 ml / kg, respectively. The administration period was 3 days, and urine was collected 3 days after administration and blood was collected under anesthesia to obtain serum. Distilled water was used as a solvent control, and 5 mice were used for each specimen. For urine, the protein test was performed using Multisticks (manufactured by Miles Sankyo), and for the serum, the amount of creatinine was measured using Creatinine Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries), and the average value of 5 animals was taken as the amount of creatinine.
[0067]
As a result, urinary protein was not observed when the antibacterial agent of Example 1 and the antibacterial agents of Example 2 and Example 3 were administered as specimens. The amount of creatinine was 13 mg / ml for the antibacterial agent of Example 1, gnetin E or antibacterial agent containing gnetal. Further, the antibacterial agent containing Gunemonol B was 14 mg / ml, and the antibacterial agent containing Gunemonoside E was 12 mg / ml. The amount of creatinine of each of these antibacterial agents was comparable to the value of the solvent control group.
[0068]
Furthermore, urinary protein was not observed when each antibacterial agent and gentamicin were used in combination. The amount of creatinine was 23 mg / ml when combined with the antibacterial agent of Example 1 and gentamicin, and 34 mg / ml when combined with the antibacterial agent containing Gunemonol B. 26 mg / ml when combined with an antibacterial agent containing gnetin E, 40 mg / ml when used together with an antibacterial agent containing gnetal, and 42 mg / ml when combined with an antibacterial agent containing gnemonoside E became.
[0069]
On the other hand, when gentamicin was administered as a specimen, urine protein was observed, and the serum creatinine amount was 150 mg / ml. From these results, the antibacterial agents in each case had weak side effects, and when used together with gentamicin, the side effects of gentamicin could be reduced.
(Example 4 and Example 5)
In Example 4, an antibacterial agent was prepared with Gunemonol E (manufactured by API Corporation), and in Example 5, an antibacterial agent was prepared with acetyl Gunemonol E (manufactured by API Corporation).
[0070]
<Test on the antioxidative action of antibacterial agents>
A test on the antioxidative action of the antibacterial agents of Examples 4 and 5 was performed using linoleic acid as a substrate and 2,2-azobisdihydrochloric acid as a radical accelerator. Specifically, first, an ethanol solution containing an antibacterial agent of Example 4 or Example 5 (concentration of antibacterial agent: 0.00%), 2.5 ml of 1.3% by mass linoleic acid aqueous solution, 2.5 ml of 50 mM phosphate buffer. 5 g / 100 ml) 0.25 ml, distilled water 0.75 ml and 2,2-azobisdihydrochloric acid aqueous solution (46.6 mM) 0.25 ml were mixed to prepare a reaction solution. Subsequently, the reaction solution was incubated in a stoppered test tube (40 ° C., dark place).
[0071]
Next, 0.1 ml of the reaction solution was taken 24 hours after the start of the incubation, and 4.7 ml of 75% by mass ethanol, 0.1 ml of 30% by mass ammonium thiocyanate solution, and 0.02M FeCl. 2 -0.1 mass of hydrochloric acid aqueous solution -3.5 mass% was added and it stirred well, and the light absorbency in 500 nm was measured 4 minutes later (Rodan iron method). And antioxidant ability was calculated | required from the value of the light absorbency in 500 nm. As a result, the antimicrobial ability of the antibacterial agent of Example 4 was 34%, and the antioxidative ability of Example 5 was 13%. For this reason, the antibacterial agent of Example 4 contains about 3 times the antioxidant effect compared with the antibacterial agent of Example 5 which contains acetyl gnemonol E as an active ingredient by containing gnemonol E as an active ingredient. I was able to increase it.
(Example 6)
By mixing 0.2 g of the antibacterial agent obtained in the same manner as in Example 1, 3 g of isomerized sugar, 1.8 g of edible cellulose, 0.01 g of ascorbic acid and 0.1 g of edible fragrance, and powdering according to a conventional method. A granular food preparation was obtained.
[0072]
<Test on antibacterial activity of food preparations>
A test on the antibacterial action of the food preparation of Example 6 was conducted. Specifically, first, 1 ml of blood of a healthy person was applied on an agar medium, and then 100,000 VRE strains or MRSA strains used in the antibacterial activity test were seeded. Next, 1 g of the food preparation of Example 6 was added, and the medium was placed in an incubator and cultured at 37 ° C. for 24 hours. Subsequently, after removing the medium from the incubator, the presence or absence of colony growth was observed using a stereomicroscope. Here, each of the above tests was performed on three healthy subjects. As a result, no colony growth was observed in any of VRE and MRSA, and the food preparation of Example 6 was able to suppress the growth of bacteria.
(Example 7)
In Example 7, first, 1 g of polyethylene glycol monostearate and 1 g of lipophilic glyceryl monostearate were dissolved in 10 g of disinfecting ethanol. Next, 0.2 g of each antibacterial agent of Example 1, Example 2 or Example 3 and 70 g of purified water were added, and then cooled to obtain a disinfectant.
(Comparative Example 1)
In Comparative Example 1, a disinfectant was obtained by dissolving 1 g of polyethylene glycol monostearate and 1 g of lipophilic glyceryl monostearate in 10 g of ethanol for disinfection.
[0073]
<Test on disinfection action>
A test was conducted on the disinfecting action of each disinfectant of Example 7 and the disinfectant of Comparative Example 1. Specifically, first, 1 ml of a preculture solution of each strain of the VRE strain or MRSA strain used in the test for antibacterial action was applied to a 3 cm square lint cloth. Next, after adding 1 g of each disinfectant of Example 7 or 1 g of disinfectant of Comparative Example 1, the lint cloth was placed in an incubator and cultured at 37 ° C. for 24 hours. Subsequently, after the lint cloth was taken out from the incubator, the presence or absence of growth of the bacteria was observed using a stereomicroscope. As a result, in each disinfectant of Example 7, growth of bacteria was not observed in both VRE and MRSA, and each disinfectant of Example 7 was able to disinfect the lint cloth. On the other hand, the disinfectant of Comparative Example 1 does not contain the antibacterial agents of Example 1, Example 2 or Example 3, and therefore growth of bacteria was observed in both VRE and MRSA. Could not disinfect.
[0074]
Next, the technical idea that can be grasped from the embodiment will be described below.
(1) The antibacterial agent according to claim 2, wherein at least one selected from the resveratrol polymer represented by the general formula (1) is at least one selected from Gunemonol E, Gunnetin E, and Gunemonol B. According to this structure, the inflammation of the tissue which has received the disorder | damage | failure can be suppressed.
[0075]
(2) R in the general formula (1) 1 ~ R 5 The food preparation according to claim 4, wherein each represents hydrogen. According to this configuration, the antioxidant effect can be improved.
(3) R in the general formula (1) 1 ~ R 5 The disinfectant according to claim 5, wherein each represents hydrogen. According to this configuration, the antioxidant effect can be improved.
[0076]
【The invention's effect】
Since this invention is comprised as mentioned above, there exist the following effects.
According to the antibacterial agent of the invention of the first aspect and the food preparation of the fourth aspect, the side effect is weak and the antibacterial action is excellent against drug-resistant bacteria.
[0077]
According to the antibacterial agent of the invention described in claim 2, in addition to the effect of the invention described in claim 1, the antioxidant action can be improved.
According to the method for producing an antibacterial agent of the third aspect, the production efficiency of the antibacterial agent can be improved by using a plant part of the family Gnetsum as a raw material.
[0078]
According to the disinfectant of the invention described in claim 5, it has an excellent disinfecting action.