【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は免疫クロマトグラフィーを用いた分析器具に関する。具体的には、環境中のアレルゲンの量を簡便に測定する器具に関する。
【０００２】
【従来技術】
環境中に存在するアレルゲン、中でもヒョウヒダニに由来するアレルゲンは気管支喘息、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎の原因アレルゲンであることは良く知られている（非特許文献１）。アレルギーを発症させないあるいは感作されないためには、アレルゲン暴露を回避することが重要である。しかし、環境中からヒョウヒダニを根絶することやそのアレルゲンをゼロにすることは実質的に不可能である。そこで、環境中のダニアレルゲン量を感作濃度以下にコントロールすることが現実的である。そのためには、環境中のダニアレルゲン量を測定し感作濃度以上にならないよう環境の掃除を徹底する必要がある。従来の方法では、電気掃除機などにフィルターを装着し室内塵を集めその中からダニアレルゲンを抽出しＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）や免疫クロマトグラフィー（例えば、ＩＮＤＯＯＲ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（１２１６ Ｈａｒｒｉｓ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ， ＶＡ ２２９０３， Ｕ．Ｓ．Ａ． ）製；Ｒａｐｉｄ Ｔｅｓｔ ｆｏｒ Ｄｕｓｔ Ｍｉｔｅ）などの手法によって定量するものであった。この方法は、一般家庭で実施できるものではなく集めた室内塵を検査機関に送付して測定しなければならない。つまり、実施している掃除の程度が十分かどうかその場で分からないという大きな欠点があった。この点を大きく改良した商品が１９９９年にアサヒフードアンドヘルスケア社から市販されるにいたった（商品名；ダニスキャン）。ダニスキャンの概要を図３に示す。測定したい箇所の一定面積を拭い取りピン１１でこすり室内塵を採取し、そこへ展開液を添加する。被検物質（ダニアレルゲン）は標識抗体含有パッド１８にて標識抗体に結合し、毛細管現象により反応ゾーン１６を移動、検出用捕捉抗体ゾーン１４（Ｔゾーン）と結合することにより発色する。一方、被検物質と結合しなかった余剰の標識抗体はさらに移動して、余剰抗体捕捉抗体ゾーン１５（Ｃゾーン）と結合して発色する。展開液は吸収ゾーン１７に吸収される。検出用捕捉抗体ゾーン１４（Ｔゾーン）と余剰抗体捕捉抗体ゾーン１５（Ｃゾーン）の色を比較することにより、容易に目視により被検物質を半定量できる。この商品の出現によって一般家庭でいかなる技術も必要なく短時間でアレルゲン除去の程度を知ることができるようになり発症予防や感作予防に役立っている。この商品の欠点は、こすり取れる対象の場合は問題ないのであるが、例えば掃除機のごみなどは測定対象にならない。また、フローリングのような個所も測定しにくいという欠点があった。
【０００３】
【非特許文献１】Ｖｏｏｒｈｏｒｓｔ， Ｒ．ら（１９６７） Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ， ３９， ３２５−３３９、Ｋｉｎｇ， Ｔ． Ｐ．ら（１９９４） Ｉｎｔ． Ａｒｃｈ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １０５， ２２４−２３３
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良する必要があった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良した分析装置である。すなわち、被検物質採取部材が被検物質の分析をする手段に着脱可能に設置されていることを特徴とする分析装置である。具体的には、ケーシングと溶離剤輸送ゾーンと、信号ゾーンを有する反応ゾーンとを備えた分析装置において、ケーシングの溶離剤輸送ゾーン設置部分に開口部を設け、該開口部に被検物質採取部材を着脱可能に設置したことを特徴とする分析装置である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
この分析装置を図１の好適例により説明する。１は被検物質採取部材であるＥＬＩＳＡ用ボールである。被検物質採取部材は、目的とする対象物が吸着する素材でできているものであれば全て使用できるが、好ましくはポリスチレン、ナイロン、ニトロセルロース、ＰＶＤＦ、セルロース、ガラスなどである。また、いかなる形状でも使用できるが取り扱いなどの点から球体が有利である。その大きさであるが、分析部に装着できる大きさであればいかなるものも使用できる。被検物質採取部材は、必要に応じて種々の加工、例えば界面活性剤塗布や撥水処理を施すなどの処理を行った後に用いることができる。２は分析装置のケーシング、３は輸送ゾーン、４は検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）、５は余剰標識抗体捕捉抗体５（Ｃゾーン）、４および５は信号ゾーンである。６は反応ゾーン、７は吸収ゾーン、８は標識抗体含有パッド、９は測定窓である。
【０００７】
ケース２の開口部に被検物質採取部材１を着脱可能に設置し、溶離剤と共に被検物質を滴下し、標識抗体含有パッド８、輸送ゾーン３を経て反応ゾーン６に送る。反応ゾーン６に設けられた検出用捕捉抗体４、余剰標識抗体捕捉抗体５を経た被検物質は測定窓９にて目視され吸収ゾーンに吸収される。
【０００８】
以下に実施例を示してより具体的に本発明の内容を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【０００９】
【実施例１】
電気掃除機の塵芥収集袋（内容量；１Ｌ）にダニアレルゲンＤｅｒｆ２（アサヒビール（株）製；生化学工業（株）カタログ番号２９０４５２）を１０μｇ入れその後に塵芥モデルとして結晶性セルロースパウダー（旭化成（株）製；Ｃｅｏｌｕｓ（登録商標）ＫＧ）を１０ｇ入れ良く混和した。そこへＥＬＩＳＡ用ボール（住友ベークライト（株）製；ＭＳ−７４０１Ａ、６．３５φ）を１個入れ１０分間良く混和した。その後にボールを回収した。次に回収したボールを図１に記載した免疫クロマトグラフィーを用いた分析器具に設置した。分析器具はアサヒフードアンドヘルスケア社製ダニスキャンを一部改良したものを使用した。ボールに０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍＭ）約２５０μＬをゆっくりと滴下し、そのまま１０分間放置すると、検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）と余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）に発色が認められた。アレルゲンの存在を示す検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色は余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）よりもやや薄いレベルであった。ダニスキャン目視スコアとＥＬＩＺＡによるハウスダスト中のダニグループアレルゲンのアレルゲン量の比較を示した図２から、この発色レベルはおよそ１μｇ／ｇ室内塵に相当する。一方、袋の中のダニアレルゲンを含む結晶性セルロースを１ｇ秤量した。同様にダニアレルゲンを含まない結晶性セルロースを１ｇ秤量した。それぞれに先に使用した緩衝液１０ｍＬを加え良く混和した。その後、ろ過し清澄な被検液を調製した。住友ベークライト（株）製；スミロンＭＳ−８５９６Ｆ、アサヒビール（株）製；抗Ｄｅｒｆ２モノクローナル抗体１３Ａ４、１５Ｅ１１を用いて、調製した被検液をＥＬＩＳＡで測定した。標準液としてＤｅｒｆ２を用いて作製した検量線から該溶液中のアレルゲン濃度は、６０ｎｇ／ｍｌであった。これから逆算し室内塵モデルとした結晶性セルロース中のダニアレルゲン濃度は０．６μｇ／ｇ結晶性セルロース（室内塵）であった。
【００１０】
【実施例２】
紐を装着したＥＬＩＳＡ用ボールを用意し約１０ｍ２の木製フロリーング上を紐を引くことによって半分の面積上を移動させダニアレルゲンを吸着させた。その後にボールを実施例１と同様に分析装置に設置した。実施例１と同様の操作によって発色させ余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）と検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色の濃さを比較した。検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色は認められるものの余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）に比較してかなり薄かった。これは、図２から０．１〜１．０μｇ／ｇ室内塵に相当する量である。一方、電気掃除機で残りの半分の面積から室内塵を吸い取った。室内塵の総量は、約１５０ｍｇであった。この中から１００ｍｇを秤量し１０ｍｌの実施例１で用いた緩衝液でダニアレルゲンを抽出した。実施例１と同様にＥＬＩＳＡ法にてダニアレルゲン量を測定したところ、３ｎｇ／ｍｌであった。この値から０．３μｇ／ｇ室内塵のダニアレルゲン量が存在することが明らかとなり本発明の方法による妥当性が検証された。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例の分析装置の断面図と平面図を示す図である。
【図２】本発明の実施例において、ダニスキャン目視スコアとＥＬＩＳＡによるハウスダスト中のダニグループのアレルゲン量の比較を示す図である。Ｔ＝Ｏは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）に発色がなかった場合を、Ｔ＜Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）より薄い場合を、Ｔ＝Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）と同程度の場合を、Ｔ＞Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）より薄い場合を示す。
【図３】従来のダニスキャン装置の断面図と平面図を示す図である。
【符号の説明】
１ 被検物質採取部材 ２ ケーシング
３ 輸送ゾーン ４ 検出用捕捉抗体ゾーン（Ｔゾーン）
５ 余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン（Ｃゾーン） ６ 反応ゾーン
７ 吸収ゾーン ８ 標識抗体含有パッド
９ 測定窓
１１ 拭い取りピン １２ ケーシング
１３ 輸送ゾーン １４ 検出用捕捉抗体ゾーン（Ｔゾーン）
１５ 余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン（Ｃゾーン） １６ 反応ゾーン
１７ 吸収ゾーン １８ 標識抗体含有パッド
１９ 測定窓[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an analytical instrument using immunochromatography. Specifically, the present invention relates to an instrument for simply measuring the amount of allergen in the environment.
[0002]
[Prior art]
It is well known that allergens present in the environment, especially allergens derived from leopard mites, are causal allergens of bronchial asthma, allergic rhinitis and atopic dermatitis (Non-patent Document 1). It is important to avoid allergen exposure in order not to develop or sensitize allergies. However, it is virtually impossible to eradicate leopard mites from the environment and to make allergens zero. Therefore, it is realistic to control the amount of mite allergen in the environment below the sensitizing concentration. To that end, it is necessary to measure the amount of mite allergen in the environment and thoroughly clean the environment so that it does not exceed the sensitizing concentration. In a conventional method, a filter is attached to a vacuum cleaner, etc., and indoor dust is collected, mite allergens are extracted therefrom, and ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) or immunochromatography (for example, INDOROR Biotechnologies (1216 Harris Street, Charlottesville) is used. , VA 22903, U.S.A.); Rapid Test for Dusto Mite). This method cannot be carried out in ordinary households, and collected indoor dust must be sent to an inspection organization for measurement. In other words, there is a major drawback that it is not known on the spot whether the level of cleaning being performed is sufficient. A product that greatly improved this point was commercially available from Asahi Food and Healthcare in 1999 (trade name; Taniscan). An outline of the tick scan is shown in FIG. The fixed area of the part to be measured is wiped off, the indoor dust is rubbed with the pin 11, and the developing solution is added thereto. The test substance (mite allergen) binds to the labeled antibody at the labeled antibody-containing pad 18, moves through the reaction zone 16 by capillary action, and develops color by binding with the detection capture antibody zone 14 (T zone). On the other hand, the surplus labeled antibody that has not bound to the test substance further moves and binds to the surplus antibody capture antibody zone 15 (C zone) to develop a color. The developing liquid is absorbed in the absorption zone 17. By comparing the colors of the detection capture antibody zone 14 (T zone) and the excess antibody capture antibody zone 15 (C zone), the test substance can be easily semi-quantified visually. With the advent of this product, it is possible to know the degree of allergen removal in a short time without the need for any techniques in general households, which is useful for prevention of onset and sensitization. The disadvantage of this product is that there is no problem in the case of an object that can be scraped off, but, for example, dust from a vacuum cleaner is not an object to be measured. In addition, there is a drawback that it is difficult to measure a place such as flooring.
[0003]
[Non-Patent Document 1] Voorhorst, R .; (1967) J. et al. Allergy, 39, 325-339, King, T .; P. (1994) Int. Arch. Allergy Immunol, 105, 224-233
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
Therefore, it has been necessary to improve the sample collection part so that it can be attached to and detached from the measurement instrument in order to expand the measurement object.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention is an improved analytical apparatus so that a sample collection part can be attached to and detached from a measurement instrument in order to expand the object to be measured. In other words, the analysis device is characterized in that the test substance collecting member is detachably installed on the means for analyzing the test substance. Specifically, in an analyzer having a casing, an eluent transport zone, and a reaction zone having a signal zone, an opening is provided in the eluent transport zone installation portion of the casing, and a test substance collecting member is provided in the opening. It is the analyzer characterized by installing detachably.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
This analyzer will be described with reference to the preferred example of FIG. Reference numeral 1 denotes an ELISA ball that is a test substance collecting member. The test substance collecting member can be used as long as it is made of a material that adsorbs the target object, but is preferably polystyrene, nylon, nitrocellulose, PVDF, cellulose, glass or the like. Any shape can be used, but a sphere is advantageous from the viewpoint of handling. Any size can be used as long as it can be attached to the analysis unit. The test substance collecting member can be used after performing various processes such as application of a surfactant or water repellent treatment as required. 2 is a casing of the analyzer, 3 is a transport zone, 4 is a capture antibody zone for detection 4 (T zone), 5 is a surplus labeled antibody capture antibody 5 (C zone), and 4 and 5 are signal zones. 6 is a reaction zone, 7 is an absorption zone, 8 is a labeled antibody-containing pad, and 9 is a measurement window.
[0007]
The test substance collecting member 1 is detachably installed in the opening of the case 2, the test substance is dropped together with the eluent, and sent to the reaction zone 6 through the labeled antibody-containing pad 8 and the transport zone 3. The test substance that has passed through the detection capture antibody 4 and the surplus labeled antibody capture antibody 5 provided in the reaction zone 6 is visually observed in the measurement window 9 and absorbed in the absorption zone.
[0008]
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited thereto.
[0009]
[Example 1]
10 μg of mite allergen Derf2 (manufactured by Asahi Breweries, Inc .; Seikagaku Co., Ltd. Catalog No. 290452) is put in a dust collection bag (content volume: 1 L) of an electric vacuum cleaner, and then crystalline cellulose powder (Asahi Kasei ( 10 g of Ceolus (registered trademark) KG) was mixed well. One ELISA ball (manufactured by Sumitomo Bakelite Co., Ltd .; MS-7401A, 6.35φ) was added and mixed well for 10 minutes. Thereafter, the balls were collected. Next, the collected balls were placed in an analytical instrument using immunochromatography described in FIG. The analytical instrument used was a partially improved tick scan manufactured by Asahi Food and Healthcare. When approximately 250 μL of a phosphate buffer solution (pH 7.4, 10 mM) containing 0.05% Tween 20 is slowly dropped onto the ball and left for 10 minutes, detection capture antibody zone 4 (T zone) and surplus labeled antibody capture antibody Color development was observed in zone 5 (C zone). The color of the detection capture antibody zone 4 (T zone) indicating the presence of the allergen was slightly lighter than the excess labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone). From FIG. 2, which shows a comparison of the allergen amount of tick group allergens in house dust by tick scan visual score and ELIZA, this color development level corresponds to about 1 μg / g room dust. On the other hand, 1 g of crystalline cellulose containing mite allergen in the bag was weighed. Similarly, 1 g of crystalline cellulose containing no mite allergen was weighed. 10 mL of the previously used buffer was added to each and mixed well. Then, it filtered and the clear test liquid was prepared. The prepared test solution was measured by ELISA using Sumitomo Bakelite Co., Ltd .; Sumilon MS-8596F, Asahi Breweries Co., Ltd .; Anti-Derf2 monoclonal antibodies 13A4 and 15E11. From the calibration curve prepared using Derf2 as the standard solution, the allergen concentration in the solution was 60 ng / ml. From this, the mite allergen concentration in the crystalline cellulose as a model for indoor dust was 0.6 μg / g crystalline cellulose (indoor dust).
[0010]
[Example 2]
An ELISA ball equipped with a string was prepared, and the mite allergen was adsorbed by moving over half the area by pulling the string on a wooden flooring of about 10 m 2 . Thereafter, the ball was placed in the analyzer in the same manner as in Example 1. The color was developed by the same operation as in Example 1, and the color intensity of the excess labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone) and the detection capture antibody zone 4 (T zone) was compared. Although the color of the detection capture antibody zone 4 (T zone) was recognized, it was considerably lighter than the excess labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone). This is an amount corresponding to 0.1 to 1.0 μg / g room dust from FIG. On the other hand, room dust was sucked from the remaining half area with a vacuum cleaner. The total amount of indoor dust was about 150 mg. 100 mg of this was weighed and mite allergen was extracted with 10 ml of the buffer used in Example 1. When the amount of mite allergen was measured by ELISA as in Example 1, it was 3 ng / ml. From this value, it became clear that there was a mite allergen amount of 0.3 μg / g indoor dust, and the validity of the method of the present invention was verified.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a cross-sectional view and a plan view of an analyzer according to an embodiment of the present invention.
FIG. 2 is a diagram showing a comparison of allergen amounts of mite groups in house dust by ELISA according to the tick scan visual score in the example of the present invention. T = O indicates that there is no color development in the detection capture antibody zone 4 (T zone), and T <C indicates that the color of the detection capture antibody zone 4 (T zone) is an excess labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone). In the thinner case, T = C is the case where the color of the detection capture antibody zone 4 (T zone) is the same as that of the surplus labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone), and T> C is the detection capture antibody zone 4 The case where the color of (T zone) is lighter than the excess labeled antibody capture antibody zone 5 (C zone) is shown.
FIG. 3 is a cross-sectional view and a plan view of a conventional tick scanning device.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Test substance collection member 2 Casing 3 Transport zone 4 Detection capture antibody zone (T zone)
5 Excess labeled antibody capture antibody zone (C zone) 6 Reaction zone 7 Absorption zone 8 Labeled antibody-containing pad 9 Measurement window 11 Wiping pin 12 Casing 13 Transport zone 14 Detection capture antibody zone (T zone)
15 Excess labeled antibody capture antibody zone (C zone) 16 Reaction zone 17 Absorption zone 18 Labeled antibody-containing pad 19 Measurement window
