JP2004507447A - 腹圧性尿失禁の治療のためのα1Bおよびα1D拮抗作用を有するα1Aアドレナリン受容体アゴニストの使用 - Google Patents
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Abstract
本開示は、特異的α1Aアドレナリン受容体プロフィールを有する化合物による失禁の治療方法に関する。
Description
【0001】
(技術分野)
本発明は、腹圧性尿失禁の治療における新規アプローチを開示する。より詳しくは、本発明は、α1Bおよびα1Dサブタイプにおける拮抗特性を有する選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる尿失禁の治療方法を提供する。
【0002】
(発明の背景)
尿失禁は、尿の不随意的漏出と定義される状態であり、最近、世界保健機関により疾患として分類された。尿の不随意的漏出は、膀胱内の圧力が尿道括約筋の保持圧力(尿道内圧)を超えた場合に生じる。該疾患は、種々の病理学的、解剖学的および神経学的要因から生じうる。症状、徴候および状態に基づいて、腹圧性失禁、切迫尿失禁および混合失禁の3つの主要タイプの尿失禁が定義づけられている。
【0003】
腹圧性尿失禁(SUI)は、膀胱の収縮の不存在下で腹腔内圧を増加させる咳、くしゃみ、笑い又は他の身体的活動中の尿の不随意的漏出である。SUIは、25〜50歳の女性に最も一般的であり、通常に運動する女性の47%までが何らかの程度のSUIを有する。
【0004】
女性におけるSUIの最も一般的な原因は、尿道の過可動性および内因性尿道括約筋不全である。尿道の過可動性は、骨盤底支持の衰弱により特徴づけられる。この衰弱のため、腹圧の増加中に膀胱頚および近位尿道の回転下降が生じる。尿道が随伴的に開くと、SUIが生じうる。内因性尿道括約筋不全は、尿道平滑筋および横紋筋支持系の機能不全を意味する。これは先天的なものであったり、あるいは手術、外傷または仙骨髄(sacral cord)損傷後に後天的に生じうる。女性においては、内因性尿路括約筋不全は、一般には、複数の失禁外科的処置、および低エストロゲン血症、老化またはそれらの両方に関連している。この状態においては、尿道平滑筋および括約筋は、特にストレス操作(stress maneuver)中には、膀胱内の尿を保持するのに十分な抵抗性を生み出すことができない。多数の患者が尿道運動過剰および内因性尿道括約筋不全の両方に罹患していると考えられる。
【0005】
SUIを治療するための現在の方法は理学療法および手術を含む。医薬物質での治療は、フェニルプロパノールアミンおよびミドドリンのような非選択的アドレナリン作動性アゴニストの使用に限定される。SUIの治療のためのアドレナリン作動性アゴニストの使用の原理は、尿道の平滑筋への豊富なノルアドレナリン作動性入力を示す生理学的データに基づく。ラット、ネコおよびイヌにおける研究は、尿道への交感神経アドレナリン作動性入力が、尿貯蔵を促進するよう膀胱充満中に持続的に活性であること、および交感神経経路の外科的または薬理学的遮断が尿道抵抗性を減少させうることを示している。
【0006】
α1Aアドレナリン受容体は尿道の緊張に対するノルエピネフリンの作用の媒介をもたらすことが、かなりの前臨床生理学的、薬理学的および分子的証拠から示唆されている。受容体結合およびオートラジオグラフィー研究は、ヒト、ウサギおよびイヌの尿道におけるα1アドレナリン受容体の存在を示しており(Chapple C,Aubry M,James S,Greengrass P,Burnstock G,Turner−Warwick R,Milroy EおよびDavey M(1989).Characterisation of human prostatic adrenoceptors using pharmacology receptor binding and localization.British Journal of Urology 63:487−496;Testa R,Guarnieri L,Ibba M,Strada G,Pogessi E,Taddei C,Simonazzi IおよびLeonardi A(1993).Characterization of alpha−1 adrenoceptor subtypes in prostate and prostatic urethra of rat,rabbit dog and man.European Journal of Pharmacology 249:307−315;Nishi K,Latifpour J,Saito M,Foster H,Yoshida MおよびWeiss R(1998).Characterization,localization and distribution of α1 adrenoceptor subtype in male rabbit urethra.Journal of Urology 160:196−205)、インビトロ研究は、いくつかの動物種からの単離された尿道細片をフェニレフリンが収縮させうることから、α1受容体が尿道の緊張を調節することを示している(Bridgewater M,MacNeil HおよびBrading A(1993).Regulation of tone in pig urethral smooth muscle.Journal of Urology 150:223−228;Chess−Williams R,Aston NおよびCouldwell C(1994).α1A−adrenoceptor subtype mediates contraction of the rat urethra.Journal Autonomic Pharmacology 14:375−381)。また、ヒト尿道筋の単離細片は、α1アドレナリン受容体アゴニストに応答して収縮し、これは、プラゾシンのようなα1アンタゴニストにより遮断される応答である(Brading A,Fry C,Maggi C,Takeda M,Wammack R,Wicklund N,Uvelius BおよびGabella G(1998).Incontinence:Cellular Biology.In:Incontinence(Abrams P,Khoury SおよびWein A編),pp.59−104,Monaco;Chapple 1989)。同様に、エピネフリンの全身注射は、麻酔されたイヌにおいて尿道内圧を増加させ、これもまた、プラゾシンにより遮断される作用である(Sommers W,Felsen D,Chou T,Marion D,Chernesky CおよびDarracott−Vaughan E(1989).An in vivo evaluation of alpha adrenergic receptors in canine prostate.Journal of Urology 141:1230−1233)。
【0007】
アドレナリン受容体は、生理学的アゴニストであるノルエピネフリンおよびエピネフリンに応答する7重らせん(heptahelical)Gタンパク質ファミリーの受容体(GPCR)に属する細胞膜受容体である(Hancock A(1996).α1 adrenoceptor subtypes:A synopsis of their pharmacology and molecular biology.Drug Development Research 39:54−107)。それらは、α1、α2およびβの3つのファミリーに分類される。αアドレナリン受容体は最初は「α1シナプス後」および「α2シナプス前」に下位分類されたが、この純粋に解剖学的な分類は後に放棄され、該クローン化受容体の薬理学および分子生物学に基づいて定義された(Langer S(1999).History and nomenclature of α1−adrenoceptors.European Urology 36:2−6)。この分類を裏付けるよう、以下の6個の遺伝子が同定され配列決定されている:α1a、α1b、α1d、α2a、α2bおよびα2c(IUPHARにより推奨されているとおり、下付き小文字はクローン化サブタイプを示し、下付き大文字は、薬理学的に定められたサブタイプを示す)。アドレナリン受容体の分子的多様性の解明は、初期の薬理学的研究に対する分子的相関性を示している。サブタイプ特異的プローブの使用は、ヒト、イヌおよびウサギの尿道がα1Aアドレナリン受容体のmRNAに富むことを示しており、RNアーゼプロテクションアッセイは、α1aサブタイプがヒト尿道における主要サブタイプであることを示した。
【0008】
非選択的αアドレナリン受容体アゴニストPPAおよびミドドリンでの臨床研究は、限られた臨床的有効性を示している。PPAの使用は、より高い用量で該化合物を評価する能力を損なう用量制限的副作用、特に高血圧に関する懸念により限定されている。PPAは、組織浴(tissue bath)研究においてα1アドレナリン受容体に対する選択性を欠く非選択的アドレナリン作動性アゴニストである。EP 887,346、EP538,469および米国特許第5,610,174号のような幾つかの特許は、選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストとして特許請求された化合物を開示している。
【0009】
血圧を調節する血管床内のアドレナリン受容体は、主にα1Bサブタイプのものであると考えられている。アドレナリン作動性アンタゴニスト(例えばプラゾシンおよびテラゾシン)は、自然発生高血圧ラット(SHR)において、α1a受容体ではなくα1b受容体への結合を置換するそれらの効力と相関する効力順位で、血圧を低下させ(Hancock 1996)、α1bノックアウトマウスにおいて、フェニペフリン(phenypephrine)に対する高血圧応答の減弱が観察されている(Cavalli A,Lattion A,Hummler E,Nonniger M,Pedrazzini T,Aubert J,Michel M,Yang M,Lembo G,Vecchione C,Mostardini M,Schmidt A,Beerman FおよびCotecchia S(1997).Decreased blood pressure response in mice deficient of the α1b−adrenergic receptor.Proceedings of the National Academy of Sciences USA 94:11589−11594)。しかし、α1A受容体は脈管系内のシナプス外にも存在する可能性があり、そのような受容体は血圧の通常の調節には関与していないかもしれないが、それらが外因性α1Aアゴニストに応答しうることを最近のデータが示唆している。これらのデータに基づけば、α1Bアンタゴニストの特性は、α1Aアドレナリン作動性アゴニストの高血圧の欠点を減少させうる。
【0010】
膀胱内のα1受容体は、主にα1Dサブタイプである。プラゾシンのようなアドレナリン作動性アンタゴニストは膀胱反射亢進を低下させ、膀胱容量を増加させる(Andersson K (1999).α1−adrenoceptors and bladder function.European Urology 36:96−102)。これらの臨床的知見を考慮すると、α1D拮抗作用は、混合失禁を有する患者に追加的な利点をもたらしうる。
【0011】
失禁の治療に有用な医薬が依然として必要とされている。所望のα1Aアゴニスト、ならびにα1B、および好ましくはα1Dアンタゴニストプロフィールを有する化合物は、失禁の治療に有用でありうる。
【0012】
(発明の概要)
本発明は、α1Aアドレナリン受容体作動(アゴニスト)特性ならびにα1B、および好ましくはα1Dアドレナリン受容体における拮抗(アンタゴニスト)特性を有する化合物を対象に投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。
【0013】
(図面の簡単な記載)
図1:フェニルプロパノールアミンのi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【0014】
図2:A−61603のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−61603の効果を示す。
【0015】
図3:A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【0016】
図4:A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【0017】
(発明の詳細な記載)
本明細書中に引用されている全ての文献を、参照により本明細書に組み入れることとする。
【0018】
本発明は、α1B、および好ましくはα1D拮抗特性を有する選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。本発明は、α1Aアドレナリン受容体アゴニストである化合物を投与する効果を介して尿道および膀胱頚の収縮を誘導する方法を提供し、また、血管組織内に存在するα1Bアドレナリン受容体を遮断する、そして好ましくは膀胱内のα1Dアドレナリン受容体を遮断する方法を提供する。本発明の目的の1つは、尿道内圧と平均動脈圧とにおける、より良好な分離を得ることにより失禁を治療するための化合物を開発するための手段を提供することにある。好ましくは、化合物は、5以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する。より好ましくは、化合物は、10以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する。
【0019】
腹圧性尿失禁の薬理学的治療は、現在では、非選択的αアゴニストの使用または選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストの使用に焦点が絞られている。これらのタイプの化合物は、現在の薬物の治療的用途を制限する平均動脈圧の増加を誘発しうる。α1B拮抗特性と共にα1Aアドレナリン受容体作動活性を有する化合物の使用は、優れた尿道−血管選択性をもたらしうる。該α1B拮抗作用は、潜在的な高血圧副作用を軽減しうる。α1B拮抗作用を示す化合物の投与は、非選択的αアゴニストの使用に典型的には関連した血管組織の収縮を改善することにより追加的な利点をもたらしうる。所望のプロフィールを有する化合物は経口、静脈内、皮下および筋肉内手段により投与されうると理解されるべきである。
【0020】
アゴニストおよびアンタゴニストの作用の定量的分析は、受容体の分類およびドラッグデザインの基礎である。「アゴニスト」が適合性受容体に結合すると、それはアゴニスト−受容体複合体を形成し、二次メッセンジャー事象を開始させて、受容体のタイプおよび/または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩をもたらす。受容体とのアゴニストの相互作用は、2つの量、すなわちアフィニティーおよび有効性により特徴づけられうる。これらの量は、2つの濃度反応曲線を作成し該データを4パラメーター曲線平滑化の常套手段にあてはめることにより評価されうる。該第1曲線は、後に十分なリンスに付される参照標準であり、第2曲線は、試験物質を使用して作成される。このデータから、EC50(半最大応答)として表されるアフィニティー(効力)を求めることができる。アゴニスト効力(pD2)は、該EC50の負のlog10として表されうる。該有効性は、該試験物質の最大値を該参照物質の最大値と比較することにより求められ、最大応答に対する割合(%)として表される。本開示の目的においては、フェニレフリンと比較して25%未満の作動性を示すアゴニストはアゴニストとはみなされない。
【0021】
一方、「アンタゴニスト」は、アゴニストが受容体に結合するのをブロックし、したがって、受容体のタイプおよび/または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩を招く細胞内応答を妨げる。受容体とのアンタゴニストの相互作用は、アフィニティー定数pA2により特徴づけられうる。該アフィニティー単位pA2は、該参照アゴニストの効果を50%減少させるアンタゴニスト薬のモル濃度の底10の負の対数として定義されうる。競合的アンタゴニストが有する3つの分析基準が満たされるべきである。該アンタゴニストの効果に打ち勝つのに要するアゴニスト濃度の僅かな増加は、該アゴニスト濃度には無関係であるべきである。第2に、該アンタゴニストのアフィニティーは濃度に無関係であるべきであり、したがって、シルドプロットは傾き1を有するべきである。第3に、該アンタゴニストのアフィニティーは、使用するアゴニストには無関係であるべきである。シルドプロットにおいて傾き1を示す物質は、その特定の受容体サブタイプの競合的アンタゴニストとみなされ、一方、傾き1とは異なる傾きを示す物質は非競合的アンタゴニストとみなされる(Schild,H.O.(1947).pA,A new scale for the measurement of drug antagonism.Br.J.Pharmacol.2,189−206)。本開示の目的においては、アンタゴニストは、それがフェニレフリン作動作用の25%未満の遮断を示す場合には、アンタゴニストとはみなされない。
【0022】
生物学的アッセイ
ウサギ尿道α 1A サブタイプ:
雌ニュージーランドホワイトウサギ(1.75〜3.5kg)をペントバルビタール溶液(0.5ml/kg)Somlethal(登録商標)(J.A.Webster Inc.,Sterling MA)のI.P.注射により屠殺した。該尿道を膀胱と共に摘出し、直ちに、120 NaCl、18.0 NaHCO3、11.0 デキストロース,4.7 KCl、2.5 CaCl2、1.5 MgSO4、1.2 KH2PO4のmM濃度のクレブス・リンガー(Krebs Ringer)炭酸水素塩溶液中に配置し、5% CO2:95% O2で平衡化した。NaHCO3の飽和溶液で滴定することにより、該pHを25℃で7.2に調節した。該pHは37℃で7.4に増加した。βアドレナリン受容体を遮断するためのアッセイの全てには、プロプラノロール(0.004mM)を含めた。該尿道を膀胱から分離し、幅約3〜4mmの4つの組織輪に切断した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方の末端を1.0gの張力の基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した。組織を10分ごとに合計45〜60分間にわたりリンスした。該尿道を80mM KClで刺激し、基礎張力にまでリンスし、再び10μM フェニレフリン(PE)で刺激した。更に60分間の平衡化時間の後、PEを参照アゴニストとして使用して、各組織に関して参照濃度応答曲線を作成した。累積濃度プロトコールを用いた。ついで、75分間の洗浄時間の後、試験物質を使用して、第2の応答曲線を同様に作成した。50%の応答を引き起こすのに必要な物質の量(ED50)を、「Allfit」(DeLean,A.,Munson,P.J.,Rodbard,D.(1980).Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves:application to bioassay,radioligand assay,and physiological dose−response curves.Am.J.Physiol.235,E97−102)と同様の4パラメーター曲線あてはめプログラムである「AGANTG」(Zielinski,P.J.,Buckner,S.A.(1998).AGANTG:A Microsoft Excel 5.0−visual basic routine for the analysis of dose−response data.Analyst.123,1661−1668)を使用して計算した。アゴニスト効力をPEに対して指標化(indexed)し、負の対数(pD2)として表した。各組織を、ただ1つの試験アゴニストに関して使用した。アンタゴニストについては、第2のPE曲線にとりかかる前に、該試験物質を30分間の暴露時間に付した。pA2として表される効力を、Arunlakshana,O.,Schild,H.O.(1959)(Some quantitative uses of drug antagonists.Br.J.Pharmacol.14,48−58)の方法に従い計算した。個々の組織を、だた1つの濃度の該試験アンタゴニストにさらした。最小二乗回帰(Snedecor,G.W.,Cochran,W.G.,(1980).In Statistical methods,第7版,Iowa State University Press,Ames,Iowa)を用いて、シルドプロットの回帰直線を分析した。
【0023】
ラット脾臓α 1B サブタイプ
雄Sprague Dawleyラット(150〜200g)をCO2で鎮静化し、断頭した。全脾臓を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該脾臓を縦方向にラット1匹当たり2つの調製物に分割した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を1.0gの基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した(Aboud R,Shafli MおよびDocherty JR(1993).Investigation of the subtypes of alpha−1−adrenoceptors mediating contractions of rat aorta,vas deferens,and spleen.Br J Pharmacol 109:80−87)。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【0024】
ラット大動脈α 1D サブタイプ
雄Sprague Dawleyラット(350〜450g)をCO2で鎮静化し、断頭した。全胸大動脈を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該大動脈から外組織を除去し、内腔に長さ100mmのPE−160管を通すことにより内皮を除去した。大動脈を3〜4mmの輪に切断し、37℃で10mlの単離組織浴中にマウントした。各ラットからの大動脈は8個の組織輪を与えることが可能であった。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を1.0gの基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した。該PE刺激工程の終わりに行ったアセチルコリン誘発性(10μM)弛緩の喪失により、機能的内皮の不存在を確認した。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【0025】
【化1】
【0026】
放射性リガンド結合Ki(nM)
Knepperら,J.Pharm.Exp.Ther(1995),274,97−103に記載されているとおりに放射性リガンドとして[3H]プラゾシンを使用するα1A(ラット顎下腺)、α1b(マウス繊維芽細胞内で発現されたハムスター受容体)およびα1d(マウス繊維芽細胞内で発現されたラット受容体)に特異的な放射性リガンドアッセイにおいて、化合物(PPA,A−61603,A−286666およびA−286569)を評価した。結果を表1に示す。PPAが弱いアドレナリン作動性リガンドであり、一方、残りの化合物はα1Aサブタイプへの強力な結合を示し、いくつかはα1bおよびα1dサブタイプへの強力な結合を示すことが、放射性リガンド結合研究から示されている。
【0027】
【表1】
【0028】
アゴニストとしてのアドレナリン作動性化合物の評価
アドレナリン作動性アゴニストとしての該リガンドの機能的活性を、α1A、α1Bおよびα1Dサブタイプを示す3つの組織浴調製物(表2)において評価した。PPAは全てのアドレナリン作動性サブタイプにおける弱いアゴニストである。A−61603はそれらの3つのサブタイプにおけるアゴニストであり、それはα1Aサブタイプにおける強力なアゴニストであり(pD2=8.0)、α1Bおよびα1Dサブタイプに対して選択性を示す(30倍以上)。A−286666およびA−286569はα1Aサブタイプにおけるアゴニストであるが(それぞれpD2=6.2および5.6)、それらはα1Bおよびα1Dサブタイプにおいては不活性である(15%未満の活性を示す)。該化合物の有効性を、フェニレフリン(100%)収縮に対する割合(%)として比較する。
【0029】
【表2】
【0030】
アンタゴニストとしてのA−286666およびA−286569の評価
これらの化合物の幾つかはα1Bおよびα1Dサブタイプにおける結合を示しているが、該結合は機能的拮抗としては反映されなかった。したがって、これらの組織調製物に関して、A−286666およびA−286569をアンタゴニストとして試験した(表3)。研究は、α1Bおよびα1Dアドレナリン作動性受容体サブタイプに対する有効性を測定する組織浴アッセイにおいて行った。もう一度、収縮曲線を作成するためにフェニレフリンを使用し、収縮が試験化合物で遮断されるか否かを調べるためにそれを該試験化合物と比較した。傾き及び回帰分析に基づき、A−286666はα1Bおよびα1Dサブタイプにおける競合的アンタゴニストであることが確認された(pA2=それぞれ5.8および6.5)。A−286569はα1B受容体およびα1D受容体サブタイプにおいて非競合的アンタゴニストとして挙動することが、シルドプロット分析により示される(回帰相関性に乏しいため)。
【0031】
【表3】
【0032】
IUP/MAPの評価
イヌにおける尿道内圧(IUP−MAP試験):
2歳を超える体重12〜15kgの雌Beagleイヌ(Marchall Farms,North Rose,NY)をこれらの研究で使用した。いずれかのアゴニストを投与する少なくとも2週間前に、遠隔計測変換器/送信機(TA11PA−C40,Data Sciences International,St.Paul,MN)をイヌの頚動脈内に移植することにより、動脈圧の長時間測定のための測定器具をイヌに取り付けた。
【0033】
試験当日に、前日の午後から絶食させたイヌをチオペンタールナトリウム 15g/kg i.v.(Pentothal(商標),Abbott)で予め麻酔し、挿管した。該イヌを、Narkomed Standard麻酔系(North American Drager,Telford,PA)により送達されるイソフルラン(2.5〜3容量%)と酸素との混合物で自発呼吸させることにより、麻酔を維持した。アゴニストの投与のために、Abbocath−T(商標)i.v.カテーテル(18−G,Abbott Laboratories,Abbott Park,II)を橈側皮静脈内に挿入した。遠隔計測受信機(RA1310,DataSciences)を各イヌの頭部下に配置し、平均動脈血圧値(MAP)を測定するために電子的にフィルター化された動脈血圧の連続的校正記録を可能にするコンピューター化データ収集システム(Modular Instruments Inc.(MI2),Malvern,PA)にインターフェースさせた。
【0034】
既に記載されているバルーンカテーテル技術(Bruneら,Drug Development Research 34:267−275,1995)を用いて、尿道内圧をモニターした。簡単に説明すると、7 Frカテーテルバルーンカテーテル(41224−01,Abbott)を尿道口内に挿入し、その先端が十分に膀胱内に入るまで約15cm進入させた。ついで該バルーンを1mlの室内空気で膨張させ、該カテーテルを、抵抗性(膀胱頚に対応する)が明らかとなるまでゆっくり引き出した。ついで該バルーンをしぼませ、該カテーテルを更に2cm引き出した。ついで該バルーンを再膨張させ、そのカテーテル口を、尿道内圧(IUP)の測定のために、コンピューター化データ収集システム(Modular Instruments,Inc.,Malvern,PA)にインターフェースされたGould Statham P23Dd圧力変換器に接続した。試験アゴニストのiv用量の増加に対するMAPおよびIUP昇圧応答が同時に得られた。次の用量を投与する前に、各用量の昇圧効果をベースラインに戻した。PPAに関しては、8匹のイヌ(n=8)を使用し、A−61603、A−286666およびA−286569に関しては、4匹のイヌを各アゴニストに関して使用した(n=4)。
【0035】
血圧の生理学的に有意な増加(20mmgHg)を惹起するのに要する用量に対する、IUPの有意かつ臨床的に意義のある変化(5mmHg)を惹起するのに要する用量を算出する。臨床研究は、尿道圧の5mmgHgの増加後のSUI患者の失禁エピソードにおける有意な減少を示している(Collste LおよびLindskog M(1987).Phenylpropanolamine in treatment of female stress incontinence.Urology 30:398−403;Wein A(1995).Pharmacology of incontinence.Urologic Clinics of North America 22:557−577)。
【0036】
インビボにおけるアドレナリン作動性物質の評価
PPAおよびA−61603に対して改善されたインビボ尿道選択性を有する化合物の具体例として、A−286666およびA−286569が挙げられる。各アゴニスト用量のIUPおよびMAP昇圧効果を、投与前のベースラインレベルを超える各昇圧における最大正味変化として表した。ついで、IUPの5mmHgの増加を得るのに要する有効用量(IUP ED5mmHg)およびMAPの20mmHgの増加を得るのに要する有効用量(MAP ED20mmHg)を、各イヌに関する用量応答データから推定した。各イヌにおける各アゴニストの尿道対血管の相対選択性を、これらのそれぞれの効力指数の比率(MAP ED20mmHg/IUP ED5mmHg)を用いて推定した。
【0037】
PPA、A−61603、A−286666およびA−286569は、尿道内圧および平均動脈圧の両方における用量依存的増加を引き起こした(図1〜4)。しかし、これらの4つの化合物の尿道選択性においては、顕著な相違が認められた。PPAおよびA−61603は、血管床に対する尿道選択性を何ら示さなかった(それぞれ0.4および1.7)。A−286666およびA−286569は、3倍以上の選択性比率を示したため、該インビボモデルにおいて最も選択的な化合物であった(表4)。該選択性比率は各イヌに関して計算し、ついで平均した。これは、尿道平滑筋収縮を増加させる一方で血管組織収縮により引き起こされる高血圧を避けるためにはα1Aアドレナリン受容体アゴニストおよびα1Bアンタゴニスト作用が体内に必要であることを示した。また、α1Dアンタゴニストは膀胱内で拮抗作用をもたらしうる。
【0038】
データは平均(±S.E.M)で表されており、すべての用量はnmol/kg,i.v.単位である。
【0039】
【表4】
【図面の簡単な説明】
【図1】
フェニルプロパノールアミンのi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【図2】
A−61603のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−61603の効果を示す。
【図3】
A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【図4】
A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
(技術分野)
本発明は、腹圧性尿失禁の治療における新規アプローチを開示する。より詳しくは、本発明は、α1Bおよびα1Dサブタイプにおける拮抗特性を有する選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる尿失禁の治療方法を提供する。
【0002】
(発明の背景)
尿失禁は、尿の不随意的漏出と定義される状態であり、最近、世界保健機関により疾患として分類された。尿の不随意的漏出は、膀胱内の圧力が尿道括約筋の保持圧力(尿道内圧)を超えた場合に生じる。該疾患は、種々の病理学的、解剖学的および神経学的要因から生じうる。症状、徴候および状態に基づいて、腹圧性失禁、切迫尿失禁および混合失禁の3つの主要タイプの尿失禁が定義づけられている。
【0003】
腹圧性尿失禁(SUI)は、膀胱の収縮の不存在下で腹腔内圧を増加させる咳、くしゃみ、笑い又は他の身体的活動中の尿の不随意的漏出である。SUIは、25〜50歳の女性に最も一般的であり、通常に運動する女性の47%までが何らかの程度のSUIを有する。
【0004】
女性におけるSUIの最も一般的な原因は、尿道の過可動性および内因性尿道括約筋不全である。尿道の過可動性は、骨盤底支持の衰弱により特徴づけられる。この衰弱のため、腹圧の増加中に膀胱頚および近位尿道の回転下降が生じる。尿道が随伴的に開くと、SUIが生じうる。内因性尿道括約筋不全は、尿道平滑筋および横紋筋支持系の機能不全を意味する。これは先天的なものであったり、あるいは手術、外傷または仙骨髄(sacral cord)損傷後に後天的に生じうる。女性においては、内因性尿路括約筋不全は、一般には、複数の失禁外科的処置、および低エストロゲン血症、老化またはそれらの両方に関連している。この状態においては、尿道平滑筋および括約筋は、特にストレス操作(stress maneuver)中には、膀胱内の尿を保持するのに十分な抵抗性を生み出すことができない。多数の患者が尿道運動過剰および内因性尿道括約筋不全の両方に罹患していると考えられる。
【0005】
SUIを治療するための現在の方法は理学療法および手術を含む。医薬物質での治療は、フェニルプロパノールアミンおよびミドドリンのような非選択的アドレナリン作動性アゴニストの使用に限定される。SUIの治療のためのアドレナリン作動性アゴニストの使用の原理は、尿道の平滑筋への豊富なノルアドレナリン作動性入力を示す生理学的データに基づく。ラット、ネコおよびイヌにおける研究は、尿道への交感神経アドレナリン作動性入力が、尿貯蔵を促進するよう膀胱充満中に持続的に活性であること、および交感神経経路の外科的または薬理学的遮断が尿道抵抗性を減少させうることを示している。
【0006】
α1Aアドレナリン受容体は尿道の緊張に対するノルエピネフリンの作用の媒介をもたらすことが、かなりの前臨床生理学的、薬理学的および分子的証拠から示唆されている。受容体結合およびオートラジオグラフィー研究は、ヒト、ウサギおよびイヌの尿道におけるα1アドレナリン受容体の存在を示しており(Chapple C,Aubry M,James S,Greengrass P,Burnstock G,Turner−Warwick R,Milroy EおよびDavey M(1989).Characterisation of human prostatic adrenoceptors using pharmacology receptor binding and localization.British Journal of Urology 63:487−496;Testa R,Guarnieri L,Ibba M,Strada G,Pogessi E,Taddei C,Simonazzi IおよびLeonardi A(1993).Characterization of alpha−1 adrenoceptor subtypes in prostate and prostatic urethra of rat,rabbit dog and man.European Journal of Pharmacology 249:307−315;Nishi K,Latifpour J,Saito M,Foster H,Yoshida MおよびWeiss R(1998).Characterization,localization and distribution of α1 adrenoceptor subtype in male rabbit urethra.Journal of Urology 160:196−205)、インビトロ研究は、いくつかの動物種からの単離された尿道細片をフェニレフリンが収縮させうることから、α1受容体が尿道の緊張を調節することを示している(Bridgewater M,MacNeil HおよびBrading A(1993).Regulation of tone in pig urethral smooth muscle.Journal of Urology 150:223−228;Chess−Williams R,Aston NおよびCouldwell C(1994).α1A−adrenoceptor subtype mediates contraction of the rat urethra.Journal Autonomic Pharmacology 14:375−381)。また、ヒト尿道筋の単離細片は、α1アドレナリン受容体アゴニストに応答して収縮し、これは、プラゾシンのようなα1アンタゴニストにより遮断される応答である(Brading A,Fry C,Maggi C,Takeda M,Wammack R,Wicklund N,Uvelius BおよびGabella G(1998).Incontinence:Cellular Biology.In:Incontinence(Abrams P,Khoury SおよびWein A編),pp.59−104,Monaco;Chapple 1989)。同様に、エピネフリンの全身注射は、麻酔されたイヌにおいて尿道内圧を増加させ、これもまた、プラゾシンにより遮断される作用である(Sommers W,Felsen D,Chou T,Marion D,Chernesky CおよびDarracott−Vaughan E(1989).An in vivo evaluation of alpha adrenergic receptors in canine prostate.Journal of Urology 141:1230−1233)。
【0007】
アドレナリン受容体は、生理学的アゴニストであるノルエピネフリンおよびエピネフリンに応答する7重らせん(heptahelical)Gタンパク質ファミリーの受容体(GPCR)に属する細胞膜受容体である(Hancock A(1996).α1 adrenoceptor subtypes:A synopsis of their pharmacology and molecular biology.Drug Development Research 39:54−107)。それらは、α1、α2およびβの3つのファミリーに分類される。αアドレナリン受容体は最初は「α1シナプス後」および「α2シナプス前」に下位分類されたが、この純粋に解剖学的な分類は後に放棄され、該クローン化受容体の薬理学および分子生物学に基づいて定義された(Langer S(1999).History and nomenclature of α1−adrenoceptors.European Urology 36:2−6)。この分類を裏付けるよう、以下の6個の遺伝子が同定され配列決定されている:α1a、α1b、α1d、α2a、α2bおよびα2c(IUPHARにより推奨されているとおり、下付き小文字はクローン化サブタイプを示し、下付き大文字は、薬理学的に定められたサブタイプを示す)。アドレナリン受容体の分子的多様性の解明は、初期の薬理学的研究に対する分子的相関性を示している。サブタイプ特異的プローブの使用は、ヒト、イヌおよびウサギの尿道がα1Aアドレナリン受容体のmRNAに富むことを示しており、RNアーゼプロテクションアッセイは、α1aサブタイプがヒト尿道における主要サブタイプであることを示した。
【0008】
非選択的αアドレナリン受容体アゴニストPPAおよびミドドリンでの臨床研究は、限られた臨床的有効性を示している。PPAの使用は、より高い用量で該化合物を評価する能力を損なう用量制限的副作用、特に高血圧に関する懸念により限定されている。PPAは、組織浴(tissue bath)研究においてα1アドレナリン受容体に対する選択性を欠く非選択的アドレナリン作動性アゴニストである。EP 887,346、EP538,469および米国特許第5,610,174号のような幾つかの特許は、選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストとして特許請求された化合物を開示している。
【0009】
血圧を調節する血管床内のアドレナリン受容体は、主にα1Bサブタイプのものであると考えられている。アドレナリン作動性アンタゴニスト(例えばプラゾシンおよびテラゾシン)は、自然発生高血圧ラット(SHR)において、α1a受容体ではなくα1b受容体への結合を置換するそれらの効力と相関する効力順位で、血圧を低下させ(Hancock 1996)、α1bノックアウトマウスにおいて、フェニペフリン(phenypephrine)に対する高血圧応答の減弱が観察されている(Cavalli A,Lattion A,Hummler E,Nonniger M,Pedrazzini T,Aubert J,Michel M,Yang M,Lembo G,Vecchione C,Mostardini M,Schmidt A,Beerman FおよびCotecchia S(1997).Decreased blood pressure response in mice deficient of the α1b−adrenergic receptor.Proceedings of the National Academy of Sciences USA 94:11589−11594)。しかし、α1A受容体は脈管系内のシナプス外にも存在する可能性があり、そのような受容体は血圧の通常の調節には関与していないかもしれないが、それらが外因性α1Aアゴニストに応答しうることを最近のデータが示唆している。これらのデータに基づけば、α1Bアンタゴニストの特性は、α1Aアドレナリン作動性アゴニストの高血圧の欠点を減少させうる。
【0010】
膀胱内のα1受容体は、主にα1Dサブタイプである。プラゾシンのようなアドレナリン作動性アンタゴニストは膀胱反射亢進を低下させ、膀胱容量を増加させる(Andersson K (1999).α1−adrenoceptors and bladder function.European Urology 36:96−102)。これらの臨床的知見を考慮すると、α1D拮抗作用は、混合失禁を有する患者に追加的な利点をもたらしうる。
【0011】
失禁の治療に有用な医薬が依然として必要とされている。所望のα1Aアゴニスト、ならびにα1B、および好ましくはα1Dアンタゴニストプロフィールを有する化合物は、失禁の治療に有用でありうる。
【0012】
(発明の概要)
本発明は、α1Aアドレナリン受容体作動(アゴニスト)特性ならびにα1B、および好ましくはα1Dアドレナリン受容体における拮抗(アンタゴニスト)特性を有する化合物を対象に投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。
【0013】
(図面の簡単な記載)
図1:フェニルプロパノールアミンのi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【0014】
図2:A−61603のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−61603の効果を示す。
【0015】
図3:A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【0016】
図4:A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【0017】
(発明の詳細な記載)
本明細書中に引用されている全ての文献を、参照により本明細書に組み入れることとする。
【0018】
本発明は、α1B、および好ましくはα1D拮抗特性を有する選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストを投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法を提供する。本発明は、α1Aアドレナリン受容体アゴニストである化合物を投与する効果を介して尿道および膀胱頚の収縮を誘導する方法を提供し、また、血管組織内に存在するα1Bアドレナリン受容体を遮断する、そして好ましくは膀胱内のα1Dアドレナリン受容体を遮断する方法を提供する。本発明の目的の1つは、尿道内圧と平均動脈圧とにおける、より良好な分離を得ることにより失禁を治療するための化合物を開発するための手段を提供することにある。好ましくは、化合物は、5以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する。より好ましくは、化合物は、10以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する。
【0019】
腹圧性尿失禁の薬理学的治療は、現在では、非選択的αアゴニストの使用または選択的α1Aアドレナリン受容体アゴニストの使用に焦点が絞られている。これらのタイプの化合物は、現在の薬物の治療的用途を制限する平均動脈圧の増加を誘発しうる。α1B拮抗特性と共にα1Aアドレナリン受容体作動活性を有する化合物の使用は、優れた尿道−血管選択性をもたらしうる。該α1B拮抗作用は、潜在的な高血圧副作用を軽減しうる。α1B拮抗作用を示す化合物の投与は、非選択的αアゴニストの使用に典型的には関連した血管組織の収縮を改善することにより追加的な利点をもたらしうる。所望のプロフィールを有する化合物は経口、静脈内、皮下および筋肉内手段により投与されうると理解されるべきである。
【0020】
アゴニストおよびアンタゴニストの作用の定量的分析は、受容体の分類およびドラッグデザインの基礎である。「アゴニスト」が適合性受容体に結合すると、それはアゴニスト−受容体複合体を形成し、二次メッセンジャー事象を開始させて、受容体のタイプおよび/または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩をもたらす。受容体とのアゴニストの相互作用は、2つの量、すなわちアフィニティーおよび有効性により特徴づけられうる。これらの量は、2つの濃度反応曲線を作成し該データを4パラメーター曲線平滑化の常套手段にあてはめることにより評価されうる。該第1曲線は、後に十分なリンスに付される参照標準であり、第2曲線は、試験物質を使用して作成される。このデータから、EC50(半最大応答)として表されるアフィニティー(効力)を求めることができる。アゴニスト効力(pD2)は、該EC50の負のlog10として表されうる。該有効性は、該試験物質の最大値を該参照物質の最大値と比較することにより求められ、最大応答に対する割合(%)として表される。本開示の目的においては、フェニレフリンと比較して25%未満の作動性を示すアゴニストはアゴニストとはみなされない。
【0021】
一方、「アンタゴニスト」は、アゴニストが受容体に結合するのをブロックし、したがって、受容体のタイプおよび/または位置に応じて平滑筋の収縮または弛緩を招く細胞内応答を妨げる。受容体とのアンタゴニストの相互作用は、アフィニティー定数pA2により特徴づけられうる。該アフィニティー単位pA2は、該参照アゴニストの効果を50%減少させるアンタゴニスト薬のモル濃度の底10の負の対数として定義されうる。競合的アンタゴニストが有する3つの分析基準が満たされるべきである。該アンタゴニストの効果に打ち勝つのに要するアゴニスト濃度の僅かな増加は、該アゴニスト濃度には無関係であるべきである。第2に、該アンタゴニストのアフィニティーは濃度に無関係であるべきであり、したがって、シルドプロットは傾き1を有するべきである。第3に、該アンタゴニストのアフィニティーは、使用するアゴニストには無関係であるべきである。シルドプロットにおいて傾き1を示す物質は、その特定の受容体サブタイプの競合的アンタゴニストとみなされ、一方、傾き1とは異なる傾きを示す物質は非競合的アンタゴニストとみなされる(Schild,H.O.(1947).pA,A new scale for the measurement of drug antagonism.Br.J.Pharmacol.2,189−206)。本開示の目的においては、アンタゴニストは、それがフェニレフリン作動作用の25%未満の遮断を示す場合には、アンタゴニストとはみなされない。
【0022】
生物学的アッセイ
ウサギ尿道α 1A サブタイプ:
雌ニュージーランドホワイトウサギ(1.75〜3.5kg)をペントバルビタール溶液(0.5ml/kg)Somlethal(登録商標)(J.A.Webster Inc.,Sterling MA)のI.P.注射により屠殺した。該尿道を膀胱と共に摘出し、直ちに、120 NaCl、18.0 NaHCO3、11.0 デキストロース,4.7 KCl、2.5 CaCl2、1.5 MgSO4、1.2 KH2PO4のmM濃度のクレブス・リンガー(Krebs Ringer)炭酸水素塩溶液中に配置し、5% CO2:95% O2で平衡化した。NaHCO3の飽和溶液で滴定することにより、該pHを25℃で7.2に調節した。該pHは37℃で7.4に増加した。βアドレナリン受容体を遮断するためのアッセイの全てには、プロプラノロール(0.004mM)を含めた。該尿道を膀胱から分離し、幅約3〜4mmの4つの組織輪に切断した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方の末端を1.0gの張力の基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した。組織を10分ごとに合計45〜60分間にわたりリンスした。該尿道を80mM KClで刺激し、基礎張力にまでリンスし、再び10μM フェニレフリン(PE)で刺激した。更に60分間の平衡化時間の後、PEを参照アゴニストとして使用して、各組織に関して参照濃度応答曲線を作成した。累積濃度プロトコールを用いた。ついで、75分間の洗浄時間の後、試験物質を使用して、第2の応答曲線を同様に作成した。50%の応答を引き起こすのに必要な物質の量(ED50)を、「Allfit」(DeLean,A.,Munson,P.J.,Rodbard,D.(1980).Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves:application to bioassay,radioligand assay,and physiological dose−response curves.Am.J.Physiol.235,E97−102)と同様の4パラメーター曲線あてはめプログラムである「AGANTG」(Zielinski,P.J.,Buckner,S.A.(1998).AGANTG:A Microsoft Excel 5.0−visual basic routine for the analysis of dose−response data.Analyst.123,1661−1668)を使用して計算した。アゴニスト効力をPEに対して指標化(indexed)し、負の対数(pD2)として表した。各組織を、ただ1つの試験アゴニストに関して使用した。アンタゴニストについては、第2のPE曲線にとりかかる前に、該試験物質を30分間の暴露時間に付した。pA2として表される効力を、Arunlakshana,O.,Schild,H.O.(1959)(Some quantitative uses of drug antagonists.Br.J.Pharmacol.14,48−58)の方法に従い計算した。個々の組織を、だた1つの濃度の該試験アンタゴニストにさらした。最小二乗回帰(Snedecor,G.W.,Cochran,W.G.,(1980).In Statistical methods,第7版,Iowa State University Press,Ames,Iowa)を用いて、シルドプロットの回帰直線を分析した。
【0023】
ラット脾臓α 1B サブタイプ
雄Sprague Dawleyラット(150〜200g)をCO2で鎮静化し、断頭した。全脾臓を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該脾臓を縦方向にラット1匹当たり2つの調製物に分割した。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を1.0gの基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した(Aboud R,Shafli MおよびDocherty JR(1993).Investigation of the subtypes of alpha−1−adrenoceptors mediating contractions of rat aorta,vas deferens,and spleen.Br J Pharmacol 109:80−87)。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【0024】
ラット大動脈α 1D サブタイプ
雄Sprague Dawleyラット(350〜450g)をCO2で鎮静化し、断頭した。全胸大動脈を摘出し、直ちに前記のクレブス・リンガー炭酸水素塩溶液中に配置した。該大動脈から外組織を除去し、内腔に長さ100mmのPE−160管を通すことにより内皮を除去した。大動脈を3〜4mmの輪に切断し、37℃で10mlの単離組織浴中にマウントした。各ラットからの大動脈は8個の組織輪を与えることが可能であった。一方の末端を、静止したガラス棒に固定し、他方を1.0gの基礎前負荷でGrass FT03変換器に固定した。該PE刺激工程の終わりに行ったアセチルコリン誘発性(10μM)弛緩の喪失により、機能的内皮の不存在を確認した。実験プロトコールおよびデータ解析を前記のとおりに行った。
【0025】
【化1】
【0026】
放射性リガンド結合Ki(nM)
Knepperら,J.Pharm.Exp.Ther(1995),274,97−103に記載されているとおりに放射性リガンドとして[3H]プラゾシンを使用するα1A(ラット顎下腺)、α1b(マウス繊維芽細胞内で発現されたハムスター受容体)およびα1d(マウス繊維芽細胞内で発現されたラット受容体)に特異的な放射性リガンドアッセイにおいて、化合物(PPA,A−61603,A−286666およびA−286569)を評価した。結果を表1に示す。PPAが弱いアドレナリン作動性リガンドであり、一方、残りの化合物はα1Aサブタイプへの強力な結合を示し、いくつかはα1bおよびα1dサブタイプへの強力な結合を示すことが、放射性リガンド結合研究から示されている。
【0027】
【表1】
【0028】
アゴニストとしてのアドレナリン作動性化合物の評価
アドレナリン作動性アゴニストとしての該リガンドの機能的活性を、α1A、α1Bおよびα1Dサブタイプを示す3つの組織浴調製物(表2)において評価した。PPAは全てのアドレナリン作動性サブタイプにおける弱いアゴニストである。A−61603はそれらの3つのサブタイプにおけるアゴニストであり、それはα1Aサブタイプにおける強力なアゴニストであり(pD2=8.0)、α1Bおよびα1Dサブタイプに対して選択性を示す(30倍以上)。A−286666およびA−286569はα1Aサブタイプにおけるアゴニストであるが(それぞれpD2=6.2および5.6)、それらはα1Bおよびα1Dサブタイプにおいては不活性である(15%未満の活性を示す)。該化合物の有効性を、フェニレフリン(100%)収縮に対する割合(%)として比較する。
【0029】
【表2】
【0030】
アンタゴニストとしてのA−286666およびA−286569の評価
これらの化合物の幾つかはα1Bおよびα1Dサブタイプにおける結合を示しているが、該結合は機能的拮抗としては反映されなかった。したがって、これらの組織調製物に関して、A−286666およびA−286569をアンタゴニストとして試験した(表3)。研究は、α1Bおよびα1Dアドレナリン作動性受容体サブタイプに対する有効性を測定する組織浴アッセイにおいて行った。もう一度、収縮曲線を作成するためにフェニレフリンを使用し、収縮が試験化合物で遮断されるか否かを調べるためにそれを該試験化合物と比較した。傾き及び回帰分析に基づき、A−286666はα1Bおよびα1Dサブタイプにおける競合的アンタゴニストであることが確認された(pA2=それぞれ5.8および6.5)。A−286569はα1B受容体およびα1D受容体サブタイプにおいて非競合的アンタゴニストとして挙動することが、シルドプロット分析により示される(回帰相関性に乏しいため)。
【0031】
【表3】
【0032】
IUP/MAPの評価
イヌにおける尿道内圧(IUP−MAP試験):
2歳を超える体重12〜15kgの雌Beagleイヌ(Marchall Farms,North Rose,NY)をこれらの研究で使用した。いずれかのアゴニストを投与する少なくとも2週間前に、遠隔計測変換器/送信機(TA11PA−C40,Data Sciences International,St.Paul,MN)をイヌの頚動脈内に移植することにより、動脈圧の長時間測定のための測定器具をイヌに取り付けた。
【0033】
試験当日に、前日の午後から絶食させたイヌをチオペンタールナトリウム 15g/kg i.v.(Pentothal(商標),Abbott)で予め麻酔し、挿管した。該イヌを、Narkomed Standard麻酔系(North American Drager,Telford,PA)により送達されるイソフルラン(2.5〜3容量%)と酸素との混合物で自発呼吸させることにより、麻酔を維持した。アゴニストの投与のために、Abbocath−T(商標)i.v.カテーテル(18−G,Abbott Laboratories,Abbott Park,II)を橈側皮静脈内に挿入した。遠隔計測受信機(RA1310,DataSciences)を各イヌの頭部下に配置し、平均動脈血圧値(MAP)を測定するために電子的にフィルター化された動脈血圧の連続的校正記録を可能にするコンピューター化データ収集システム(Modular Instruments Inc.(MI2),Malvern,PA)にインターフェースさせた。
【0034】
既に記載されているバルーンカテーテル技術(Bruneら,Drug Development Research 34:267−275,1995)を用いて、尿道内圧をモニターした。簡単に説明すると、7 Frカテーテルバルーンカテーテル(41224−01,Abbott)を尿道口内に挿入し、その先端が十分に膀胱内に入るまで約15cm進入させた。ついで該バルーンを1mlの室内空気で膨張させ、該カテーテルを、抵抗性(膀胱頚に対応する)が明らかとなるまでゆっくり引き出した。ついで該バルーンをしぼませ、該カテーテルを更に2cm引き出した。ついで該バルーンを再膨張させ、そのカテーテル口を、尿道内圧(IUP)の測定のために、コンピューター化データ収集システム(Modular Instruments,Inc.,Malvern,PA)にインターフェースされたGould Statham P23Dd圧力変換器に接続した。試験アゴニストのiv用量の増加に対するMAPおよびIUP昇圧応答が同時に得られた。次の用量を投与する前に、各用量の昇圧効果をベースラインに戻した。PPAに関しては、8匹のイヌ(n=8)を使用し、A−61603、A−286666およびA−286569に関しては、4匹のイヌを各アゴニストに関して使用した(n=4)。
【0035】
血圧の生理学的に有意な増加(20mmgHg)を惹起するのに要する用量に対する、IUPの有意かつ臨床的に意義のある変化(5mmHg)を惹起するのに要する用量を算出する。臨床研究は、尿道圧の5mmgHgの増加後のSUI患者の失禁エピソードにおける有意な減少を示している(Collste LおよびLindskog M(1987).Phenylpropanolamine in treatment of female stress incontinence.Urology 30:398−403;Wein A(1995).Pharmacology of incontinence.Urologic Clinics of North America 22:557−577)。
【0036】
インビボにおけるアドレナリン作動性物質の評価
PPAおよびA−61603に対して改善されたインビボ尿道選択性を有する化合物の具体例として、A−286666およびA−286569が挙げられる。各アゴニスト用量のIUPおよびMAP昇圧効果を、投与前のベースラインレベルを超える各昇圧における最大正味変化として表した。ついで、IUPの5mmHgの増加を得るのに要する有効用量(IUP ED5mmHg)およびMAPの20mmHgの増加を得るのに要する有効用量(MAP ED20mmHg)を、各イヌに関する用量応答データから推定した。各イヌにおける各アゴニストの尿道対血管の相対選択性を、これらのそれぞれの効力指数の比率(MAP ED20mmHg/IUP ED5mmHg)を用いて推定した。
【0037】
PPA、A−61603、A−286666およびA−286569は、尿道内圧および平均動脈圧の両方における用量依存的増加を引き起こした(図1〜4)。しかし、これらの4つの化合物の尿道選択性においては、顕著な相違が認められた。PPAおよびA−61603は、血管床に対する尿道選択性を何ら示さなかった(それぞれ0.4および1.7)。A−286666およびA−286569は、3倍以上の選択性比率を示したため、該インビボモデルにおいて最も選択的な化合物であった(表4)。該選択性比率は各イヌに関して計算し、ついで平均した。これは、尿道平滑筋収縮を増加させる一方で血管組織収縮により引き起こされる高血圧を避けるためにはα1Aアドレナリン受容体アゴニストおよびα1Bアンタゴニスト作用が体内に必要であることを示した。また、α1Dアンタゴニストは膀胱内で拮抗作用をもたらしうる。
【0038】
データは平均(±S.E.M)で表されており、すべての用量はnmol/kg,i.v.単位である。
【0039】
【表4】
【図面の簡単な説明】
【図1】
フェニルプロパノールアミンのi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するフェニルプロパノールアミンの効果を示す。
【図2】
A−61603のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−61603の効果を示す。
【図3】
A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
【図4】
A−286569のi.v.投与後のイヌにおける尿道内圧(IUP)および平均動脈圧(MAP)に対するA−286569の効果を示す。
Claims (6)
- α1Aアドレナリン受容体アゴニストでありα1Bアンタゴニストである化合物を投与することによる腹圧性尿失禁の治療方法
- 該化合物がα1Dアンタゴニストである、請求項1記載の方法。
- 該α1B拮抗作用が競合的である、請求項1記載の方法。
- 該α1B拮抗作用が非競合的である、請求項1記載の方法。
- 該化合物が5以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する、請求項1記載の方法。
- 該化合物が10以上のIUP(5mmHg)/MAP(20mmHg)選択性比率を有する、請求項1記載の方法。
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