JP2004205226A - Electrophoretic apparatus - Google Patents

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Tomokazu Konishi
智一 小西
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Tomokazu Konishi
智一 小西
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an electrophoretic gel capable of being easily injected in a sample for electrophoresis, an electrophoretic apparatus, a well forming appliance for the electrophoretic gel, and a method for manufacturing them. <P>SOLUTION: In the electrophoretic apparatus having a large number of wells arranged thereto so as to become the positions of the intersecting points of square meshes and equipped with a horizontally installed slab-shaped electrophoretic gel, the electrophoretic gel is arranged so that the angle formed by the parallel straight lines formed by the square meshes and the electric field direction of electrophresis is >0°, <45°. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO&NCIPI

Description

【0001】 [0001]
【発明の属する技術分野】 BACKGROUND OF THE INVENTION
本発明は、バイオテクノロジー分野などにおいて用いられている電気泳動法に使用される電気泳動用ゲル及びその製造方法、電気泳動結果解析方法、並びに電気泳動装置に関する。 The present invention is an electrophoretic gel and method of manufacturing thereof, used in the electrophoresis method has been used in biotechnology fields, electrophoresis result analysis method, and a electrophoresis apparatus.
【0002】 [0002]
【従来の技術】 BACKGROUND OF THE INVENTION
従来から、バイオテクノロジー分野などにおいて、DNA断片やmRNA分子種を、電場のなかにおかれたゲル状物質のなかを泳動させることで、その分子量をもとに分離または解析する電気泳動法が一般的に用いられている。 Conventionally, in such biotechnology, the DNA fragments and mRNA species, by electrophoresed among gelatinous material placed within the field, electrophoresis general be separated or analyzed based on the molecular weight It has been used specifically. 例えば、PCR産物の長さ・量を確認するために、クローンしたDNAを大腸菌等で増幅した際にその品質を管理するためなどに、電気泳動法、特にアガロースゲルを用いる電気泳動法が通常用いられている。 For example, in order to check the length and quantity of the PCR product, such as to manage its quality clones were DNA when amplified in E. coli or the like, electrophoresis, electrophoresis is used particularly agarose gel using normal It is. より具体的には、PCR産物をDNAチップにスタンプする際には、PCR反応の成否と産物量の測定のために、必ず電気泳動が行われる。 More specifically, when the stamp of the PCR product into DNA chips, for the measurement of success and abundance of PCR reactions, always electrophoresis is performed. 同様の作業は、クローンの配列決定の前段階でも行われる。 Similar operation is performed in the previous stage of the sequencing of the clones.
【0003】 [0003]
サブマリン電気泳動は一般に、薄板状アガロースゲル(「スラブ型ゲル」という)をバッファ液に横に寝かせた状態で浸漬させて行われる。 Submarine electrophoresis is generally performed lamellar agarose gel (referred to as "slab gel") was immersed in a state like a laid in the buffer solution. 核酸を含むサンプルは、スラブ型ゲルに設けられた凹部(「ウエル」という)に注入される。 Sample containing nucleic acid is injected into the recess provided in the slab gel (referred to as "well"). サンプルは予め、グリセロールなどの物質で比重を高める処理を施し、その後バッファ中にあるウエルに注入される。 Samples previously, subjected to a treatment to increase the specific gravity of a material such as glycerol, is then injected into the wells present in the buffer. なお、ウエルは一般に、コウムと呼ばれる、厚さ1〜2mmの板状物に等間隔の切込みを有する鋳型を用いて、次のように形成される。 Incidentally, the well is generally referred to as a comb, using a mold having equally spaced notches in the plate-like product with a thickness of 1 to 2 mm, it is formed as follows. 即ち、長方形底部と側面部を有するゲル形成用平皿に、板状コウムを配置する。 That is, the gel-forming a flat dish with a rectangular bottom and side portions, placing the plate-shaped comb. コウムは、例えば長方形底部の短辺と平行となる(長方形底部の長辺と直交する)ように平皿側面部上に、コウムの歯が平皿内部に突き出すように配置される。 Comb, for example parallel to the short sides of the rectangular bottom (perpendicular to the long sides of the rectangular bottom) as on the pan side portion, the teeth of the comb are arranged so as to project inside pan. 配置後、アガロースゾルを平皿に流し固める。 After placement, it solidifies flow agarose sol in a flat dish. その後、コウムを抜き取ることにより、コウムの歯を鋳型とした略直方体状凹部を有するウエル群が形成される。 Thereafter, by withdrawing the comb, the wells group having a substantially rectangular parallelepiped shape recesses in which the teeth of the comb and the mold is formed.
【0004】 [0004]
DNAチップやゲノムシーケンシングでは、扱うクローンの種類が極めて多数になるので、ほとんどの場合、マイクロタイタプレート(MTP)という器具を用いて作業を行う。 The DNA chip or genome sequencing, the type of handle clone becomes very large number, in most cases, to work with a tool that microtiter plates (MTP). MTPは8行×12列=96本の格子を基本単位とする小さな試験管の集合体で、そのサイズが実質的な国際標準になっている。 MTP is the 8 rows × 12 columns = 96 pieces of grid a collection of small tubes having a basic unit, their size is in substantial international standards. MTPは、それまで一本単位だった1.5ml小型遠心チューブと比べて、多数本を固定してあるため、検体を同時に多数取り扱うことができる点で優れ、且つ労力削減及び取り違えによる人為的ミス予防の点でも優れている。 MTP, it until compared with 1.5ml microcentrifuge tube was one unit, because is fixed a large number of excellent in that it can be handled many analytes simultaneously, and human error by the labor savings and confuse It is also excellent in terms of prevention. MTPを取り扱うための器具、例えば分注機や遠心機も開発され普及している。 Instrument for handling MTP, for example, by dispensing machines and centrifuge also been developed widespread. また、DNAチップ作製機や、シーケンサーもMTPに対応して開発され、MTPを標準とする取扱い及びその自動化が進んでいる。 Moreover, and DNA chip manufacturing apparatus, the sequencer also developed in response to MTP, is progressing handling and automation and standard MTP.
【0005】 [0005]
MTPで調製されたDNAなどのサンプルは、最終的にDNAチップ作製機やシーケンサーで利用される前に品質や量を確認される。 Samples, such as DNA prepared in MTP is check the quality and quantity before finally utilized in DNA chip manufacturing machine or sequencer. この作業は、上述のように、通常、ゲル電気泳動法によって行われる。 This work, as described above, usually, carried out by gel electrophoresis.
【0006】 [0006]
【発明が解決しようとする課題】 [Problems that the Invention is to Solve
しかしながら、従来のウエル形状では、サンプル注入が必ずしも容易ではなかった。 However, in the conventional well-shaped, sample injection was not always easy. 即ち、従来のウエル形状は、その開口部が短辺1〜2mmの長方形であった。 That is, the conventional well-shaped, the opening was rectangular short side 1 to 2 mm. このウエルにサンプルを時間を掛けて注入しないと、ウエル内にサンプルがなかなか留まらず、まきあがってあふれ出すことがあった。 If you do not inject the sample over time to the well, sample is easily not only in the well, there was that overflowing Te Makiaga'. これを避けるには、注入用ピペット先端を、長時間、一点に固定する必要があるが、様々なハンドリングの問題が生じていた。 To avoid this, the injection pipette tip, a long time, it is necessary to fix a single point, have occurred various handling problems. 例えば、サンプルをウエル外に流失したり、ウエル底部をピペットで突き破り破損させるなどである。 For example, it washed away the samples out of the wells, and the like cause damage breaks through well bottom with a pipette. また、サンプル量が多い場合には、限られた容積内に全サンプルを注入するのが不可能なこともあった。 Further, when the sample volume is large, there was even impossible to inject all samples within a limited volume.
【0007】 [0007]
また、ゲル電気泳動法に用いられる装置は、MTPに対応していない状況にある。 The device used for gel electrophoresis is a situation that does not support MTP. 例えば、1列に12個のウエルを設けることができるように、コウムによってウエルを調製し、それによって得られたゲルで12個のサンプルの電気泳動結果を一時に得る方法が存在する。 For example, as can be provided twelve wells in a row, the wells were prepared by comb, methods exist to obtain the temporary electrophoresis results of 12 samples in the gel obtained thereby. この場合は、MTPの1列又は1行に相当するサンプルの電気泳動結果が得られるだけであり、MTP全体の電気泳動結果を一時に得ることができない。 In this case, only a sample of the electrophoresis result corresponding to one column or one row of MTP can be obtained, can not be obtained in the temporary electrophoresis result of the entire MTP.
【0008】 [0008]
さらに、上記の「1列に12個のウエル」の考えに基づいて、MTPに相当する列数のウエルを設けたゲルに、MTPのサンプルを簡易に注入してゲルを調製することも考えられる。 Furthermore, based on the idea of ​​"12 wells in a row" described above, the gel having a number of columns of wells corresponding to the MTP, it is conceivable to prepare a gel by injecting a sample of MTP easily . しかしながら、このように得られたゲルは、第1列目のウエル群と第2列目のウエル群との距離が9mmとなり、この距離からウエル自体の長さ(1〜2mm)を引いた値約7〜8mmが有効電気泳動距離(有効レーン長)となる。 However, thus obtained gel, a first row of wells group distance 9mm next to the second row of wells group, minus the length of the well itself from this distance (1 to 2 mm) about 7~8mm is valid electrophoresis distance (effective lane length). 一般に、電気泳動距離は、サンプルが未知であればあるほど、不確定であるため、できる限り長い有効電気泳動距離(有効レーン長)を確保することが望まれる。 In general, electrophoresis distances sample The more if unknown, because it is uncertain, to ensure a long useful electrophoresis distance (effective lane length) as possible is desired.
【0009】 [0009]
また、従来の「1列に12個のウエル」を設ける場合、各ウエルの形状は、図1に示すように、(a)の電気泳動用ゲル1に設けるウエル3の開口部が長方形(電界方向Aに平行な辺が短い長方形)であり、b−bの断面図である(b)が示すように、ウエル3の断面においても長方形であり、ウエル形状自体が直方体を有していた。 Further, if the conventional provision of "12 wells in a row", the shape of each well, as shown in FIG. 1, the opening of the well 3 is provided in the electrophoresis gel 1 rectangular (electric field (a) sides parallel to the direction a is short rectangle) is a sectional view of b-b (b) as shown is a rectangular well in the cross section of the well 3, the well shape itself had a rectangular parallelepiped. この形状は、泳動後に生じるバンドをできる限り明確にするためのものと考えられる。 This shape is believed to clarify as much as possible the band that occurs after electrophoresis. 上記のように、MTPに相当する8行×12列のウエルを設ける場合、行間距離又は列間距離が比較的十分でないため、従来のウエル形状を維持しつつMTPに相当する8行×12列のウエルを設けるには困難を有していた。 As described above, in the case of providing the wells of 8 rows × 12 columns corresponding to the MTP, since the distance between the line spacing or columns with relatively insufficient, 8 rows × 12 columns corresponding to the MTP while maintaining the conventional well-shaped It had difficulty in providing a well.
【0010】 [0010]
そこで、本発明の目的は、上記課題を解決することにある。 An object of the present invention is to solve the above problems.
具体的には、本発明の目的は、電気泳動用試料を容易に注入することができる電気泳動用ゲル、電気泳動装置、電気泳動用ゲルのウエル作製具、及びそれらの製造方法を提供することにある。 Specifically, an object of the present invention to provide an electrophoretic gel sample for electrophoresis can be easily injected, electrophoresis apparatus, the well produced tool electrophoretic gels, and methods for their preparation It is in.
【0011】 [0011]
また、本発明の目的は、上記目的に加えて、又は上記目的の他に、MTPの各マイクロタイタ位置に相当する複数のウエルを有し且つ十分な有効電気泳動距離(有効レーン長)を確保する電気泳動用ゲル及び電気泳動装置、並びにそれらの製造方法を提供することにある。 Another object of the present invention, in addition to the above-mentioned object, or in addition to the above objects, ensure and sufficient effective electrophoretic distance has a plurality of wells corresponding to each microtiter position of MTP (valid lane length) gel for electrophoresis and electrophoretic apparatus, and to provide a process for their preparation.
さらに、本発明の目的は、上記目的に加えて、又は上記目的の他に、上記電気泳動用ゲルを用いて得られた電気泳動の結果を解析する方法を提供することにある。 Furthermore, object of the present invention, in addition to the above-mentioned object, or in addition to the above object is to provide a method of analyzing the results of electrophoresis obtained by using the gel for electrophoresis.
【0012】 [0012]
【課題を解決するための手段】 In order to solve the problems]
本発明者は、まず、従来よりも短いウエル幅(ウエルにおいて泳動方向と直交する箇所)を備えたウエル形状を有する電気泳動ゲルを用いても、泳動像に影響を及ぼさないことを見出した。 The present inventors have, first, even using electrophoresis gels with wells shape with a shorter than conventional well width (portion which is perpendicular to the direction of electrophoresis in the well), was found to have no effect on the electrophoretic profile. また、ウエル長さが従来よりも長くても、泳動像にさほど影響を与えないことを見出した。 Moreover, the well length be longer than the conventional, it was found that no significant perturbation of the electrophoresis images. さらに、本発明者は、短いウエル幅を有するウエルを用いることにより、電気泳動結果であるレーンの幅が狭くなることを見出した。 Furthermore, the present invention found that by using a well with a short well width, the width of the lane is found that narrowing is an electrophoretic result. 即ち、本発明者は、短いウエル幅を有するウエルを用いれば、隣接ウエルがもたらす2つ以上のレーンがオーバーラップする可能性を低減させることを見出した。 That is, the present inventors have, by using a well with a short well width, two or more lanes adjacent wells result it was found that reducing the possibility of overlap. なお、後述するが、本明細書において、「ウエル幅」とは、ウエルにおいて泳動方向と直交する箇所のうち最大値のものをいう。 As will be described later, in the present specification, the term "well width", refers to the maximum value among the positions orthogonal to the direction of electrophoresis in the well. また、「ウエル長さ」とは、泳動方向と平行な箇所のうち最大値のものをいう。 Further, the "well length", refers to the maximum value among the electrophoresis direction parallel positions. さらに、「ウエル深さ」とは、電気泳動用ゲル表面からウエル底部までの最大値をいう。 Further, "well depth" means the maximum value from the electrophoresis gel surface to the well bottom.
【0013】 [0013]
また、本発明者は、図2に示すように、MTPの各マイクロタイタ位置に対応するように複数のウエル5を配置させた電気泳動用ゲル1を、電気泳動の際の電界方向(又は泳動方向)(図2中、矢印Aの方向)とMTPの各格子を形成する正方網目の一辺Xとが角度αをもって交わるように、換言すると、斜めになるように配置させること(本明細書において、「斜め配置」又は「斜め配置ゲル」などと略記することがある)を見出した。 The present inventors, as shown in FIG. 2, the electrophoresis gel 1 which has been arranged a plurality of wells 5 so as to correspond to each microtiter position of MTP, the electric field direction (or migration during electrophoresis among direction) (FIG. 2, as the side X of a square mesh forming each lattice MTP and direction) of the arrow a intersect at an angle alpha, in other words, be arranged to be oblique (in the present specification , found sometimes abbreviated to as "oblique arrangement" or "obliquely disposed gel"). このように斜め配置することにより、各ウエルの有効電気泳動距離を十分に確保できることを見出した。 By thus arranged obliquely, it found that an effective electrophoresis distance of each well can be sufficiently secured.
【0014】 [0014]
さらに、本発明者は、ウエル開口部が略円形状のウエルによって得られる泳動結果(バンド又はピーク)に、三日月状又はより不明確なバンド(例えば図3の「φ=0.8mmウエル」の電気泳動結果を参照のこと)が得られる場合があることから、これらの泳動結果の解析方法を見出した。 Furthermore, the present inventor has the electrophoretic well opening is obtained by substantially circular wells results (band or peak), crescent-shaped or more ambiguous band (e.g. in Figure 3 of "phi = 0.8 mm wells" since there is a case where the electrophoresis results see) are obtained, we found a method for analyzing these electrophoresis results.
具体的には、本発明者は、次の発明を見出した。 Specifically, the present inventors have found following inventions.
【0015】 [0015]
<1> 複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置され、ホリゾンタル設置されるスラブ型電気泳動用ゲルを備える電気泳動装置であって、正方網目が形成する平行直線と電気泳動の電界方向とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満となるように電気泳動用ゲルを配置してなる電気泳動装置。 <1> plurality of wells are arranged such that the position of the mating points of a square mesh, provides an electrophoretic device comprising a slab-type electrophoresis gels Horizontal installed, parallel straight lines and electrophoresis square meshes formed of greater than 45 ° from the angle of 0 ° between the electric field direction, preferably 11 ° less than the greater 45 °, more preferably for gel electrophoresis as a 18 ° or greater and less than 27 ° or greater than 45 ° from the 27 the arranged becomes electrophoresis apparatus. 複数のウエルは、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of wells, may have at least the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit.
【0016】 [0016]
<2> 上記<1>において、ウエルは、電界方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下であるのがよく、ウエル幅が1mmであるのがよい。 <2> In the above item <1>, the wells, half or less well width is the distance between the most adjacent wells perpendicular to the electric field direction, and preferably may not less than 1/4, the well width is 1mm good.
<3> 上記<2>において、ウエル幅が、ウエルの電界方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短いのがよい。 <3> In the above item <2>, the well width is shorter the better than parallel wells length and direction of the electric field equal to or wells length of the well.
【0017】 [0017]
<4> 上記<1>〜<3>のいずれかにおいて、ウエルは、その各開口部が略円状であるのがよい。 <4> In any one of the above <1> to <3>, wells, its good to each aperture is substantially circular. また、ウエルの各々の形状が、略円筒状又は略円錐状又は略円錐台状であるのがよい。 Further, the shape of each well is good is substantially cylindrical or substantially conical or substantially frustoconical. さらに、ウエル開口部が略円状である場合、その径が1mmであるのがよい。 Further, when the well openings are substantially circular, it is preferable that the diameter is 1 mm.
【0018】 [0018]
<5> 上記<1>〜<3>のいずれかにおいて、ウエルの各々の形状は、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有するのがよい。 In <5> above <1> to any one of <3>, each of the shape of the wells has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the bottom of the well, electrophoresis first face perpendicular and the direction of electrophoresis in the direction, and may have a second surface inclined at least partially toward the well bottom from the second with a surface well opening against the first surface.
【0019】 [0019]
<6> 上記<5>において、開口部が略正方形を有し、前記略正方形の第1の平行2辺が泳動方向と平行に配置され、前記略正方形の第1の平行2辺を含む内壁面がゲル表面と略垂直な面を有するのがよい。 <6> In the above item <5>, openings has a substantially square, the first two parallel sides of the substantially square is arranged parallel to the direction of electrophoresis, among which includes a first parallel two sides of the substantially square wall surface may have a gel surface substantially perpendicular to the plane.
<7> 上記<1>〜<6>のいずれかにおいて、第1の開口部及び第2の開口部を有する貫通孔を備えるサンプルアプリケータであって、第1の開口部がウエルの開口部に対応し、第2の開口部が第1の開口部よりも大面積であるサンプルアプリケータをさらに備えるのがよい。 <7> above <1> In any one of to <6>, a sample applicator comprising a through-hole having a first opening and a second opening, the opening of the first opening is well corresponds to, further may be provided with the sample applicator is larger area than the second opening is the first opening.
【0020】 [0020]
<8> 上記<1>〜<6>のいずれかにおいて、電気泳動の際の迷電流を抑制する泳動迷電流抑制板を電気泳動用ゲル上又は下にさらに備えるのがよい。 <8> In any one of the above items <1> to <6>, further may be provided with the gel on or under electrophoresis suppressing electrophoresis 迷電 flow suppressing plate 迷電 flow during electrophoresis. 泳動迷電流抑制板は、絶縁性材料からなるのがよく、及び/又は電気泳動用ゲルの面積の25%以上、好ましくは50%以上、より好ましくは90%以上覆うように電気泳動用ゲル上に配置されるのがよい。 Electrophoresis 迷電 flow suppressing plate may have become an insulating material, and / or electrophoresis 25% of the area of ​​the gel or more, preferably 50% or more, more preferably on the gel for electrophoresis so as to cover 90% It may be arranged at the.
【0021】 [0021]
<9> ウエルを有する電気泳動用ゲルであって、該ウエルは、泳動方向と直交するウエル幅が1mmである電気泳動用ゲル。 <9> A gel for electrophoresis having a well, the well is an electrophoretic gel wells width perpendicular to the direction of electrophoresis is 1 mm.
<10> <9>において、ウエル幅が、ウエルの泳動方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短いのがよい。 <10> In <9>, well width is shorter the better than electrophoresis direction parallel to the well length of the well and equal to or well length.
【0022】 [0022]
<11> <9>又は<10>において、ウエルは、その開口部が略円状又は略四角形状であるのがよい。 In <11> <9> or <10>, wells, it is preferable that the opening is substantially circular or substantially rectangular. ウエル形状は、略円柱状、略円錐状又は略円錐台状、もしくは略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であるのがよい。 Well shaped, substantially cylindrical, substantially conical or substantially frustoconical, or substantially square pole, it's better substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid shape.
<12> <9>又は<10>において、ウエルは、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有する形状を有するのがよい。 In <12> <9> or <10>, the well has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, and the vertical direction of electrophoresis in the electrophoresis direction first surface, and it may have a shape having a second surface at least partially inclined toward the well bottom from the well opening and a second surface against the first surface.
【0023】 [0023]
<13> <9>〜<12>のいずれかにおいて、ウエルの開口部側に、該開口部よりも大面積のウエル導入部開口を有するウエル導入部を備えるのがよい。 <13> In any one of <9> - <12>, the opening side of the well, may be provided with well inlet portion having a well inlet opening of larger area than the opening.
<14> <13>において、ウエル導入部が、円錐台状又は角錐状であるのがよい。 <14> In <13>, the well inlet portion may be between frustoconical or pyramidal shape.
【0024】 [0024]
<15> <14>において、ウエル導入部が、電気泳動用ゲルの表面よりも突出して配置されるのがよい。 <15> In <14>, the well inlet section, it is being arranged so as to protrude from the surface of the gel for electrophoresis.
<16> <9>〜<15>のいずれかにおいて、電気泳動用ゲルはウエルを複数有し、該複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 In any one of <16> <9> - <15>, gel for electrophoresis comprises a plurality of wells, it is preferable wells of said plurality of are arranged such that the position of the mating points of the square mesh. ウエルは、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有し、それらが正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 Wells, then twelve rows of eight × columns as one unit having at least said one unit, it is preferable they are arranged such that the position of the mating points of the square mesh.
【0025】 [0025]
<17> 複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置される電気泳動用ゲルであって、ウエルは、泳動方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下である電気泳動用ゲル。 <17> a plurality of wells an electrophoresis gel disposed such that the position of the mating points of a square mesh, wells, half or less well width is the distance between the most adjacent wells perpendicular to the direction of electrophoresis , electrophoretic gel preferably 1/4 or less. 複数のウエルは、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of wells, may have at least the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit.
<18> <17>において、ウエル幅が、ウエルの泳動方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短いのがよい。 <18> In <17>, the well width is shorter the better than electrophoresis direction parallel to the well length of the well and equal to or well length.
【0026】 [0026]
<19> <17>又は<18>において、ウエルの開口部側に、該開口部よりも大面積のウエル導入部開口を有するウエル導入部を備えるのがよい。 In <19> <17> or <18>, the opening side of the well, may be provided with well inlet portion having a well inlet opening of larger area than the opening.
<20> <19>において、ウエル導入部が、円錐台状又は角錐状であるのがよい。 <20> In <19>, the well inlet portion may be between frustoconical or pyramidal shape.
<21> <20>において、ウエル導入部が、前記電気泳動用ゲル表面よりも突出して配置されるのがよい。 <21> In <20>, the well inlet section, it is being arranged to protrude from the electrophoretic gel surface.
【0027】 [0027]
<22> ウエルを有する電気泳動用ゲルであって、ウエルは、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有する形状を有する電気泳動用ゲル。 <22> A gel for electrophoresis having a well, the well has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, and the direction of electrophoresis in the electrophoresis direction first face perpendicular, and electrophoresis gels having a shape having a second surface inclined at least partially toward the well bottom from the well opening and a second surface against the first surface.
【0028】 [0028]
<23> <22>において、電気泳動用ゲルはウエルを複数有し、該複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 <23> In <22>, gel for electrophoresis comprises a plurality of wells, it is preferable wells of said plurality of are arranged such that the position of the mating points of the square mesh.
<24> <22>又は<23>において、ウエルは、泳動方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下であるのがよい。 In <24> <22> or <23>, wells, half or less well width is the distance between the most adjacent wells perpendicular to the direction of electrophoresis, preferably not less than 1/4.
【0029】 [0029]
<25> <24>において、ウエル幅が、ウエルの泳動方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短いのがよい。 <25> In <24>, well width is shorter the better than electrophoresis direction parallel to the well length of the well and equal to or well length.
<26> <22>〜<25>において、ウエルの開口部側に、該開口部よりも大面積のウエル導入部開口を有するウエル導入部を備えるのがよい。 In <26> <22> - <25>, the opening side of the well, may be provided with well inlet portion having a well inlet opening of larger area than the opening.
<27> <26>において、ウエル導入部が、円錐台状又は角錐状であるのがよい。 <27> In <26>, the well inlet portion may be between frustoconical or pyramidal shape.
【0030】 [0030]
<28> <27>において、ウエル導入部が、電気泳動用ゲルの表面よりも突出して配置されるのがよい。 <28> In <27>, the well inlet section, it is being arranged so as to protrude from the surface of the gel for electrophoresis.
<29> 上記<22>〜<28>において、開口部が略正方形を有し、略正方形の第1の平行2辺が泳動方向と平行に配置され、第1の平行2辺を含む内壁面がゲル表面と略垂直な面を有するのがよい。 In <29> above <22> - <28>, the opening has a substantially square, the first two parallel sides of the substantially square is arranged parallel to the direction of electrophoresis, the inner wall surface comprising a first parallel two sides There may have a gel surface substantially perpendicular to the plane.
【0031】 [0031]
<30> 上記<9>〜<29>のいずれかの電気泳動用ゲルを作製するためのウエル作製具。 <30> above <9> - well prepared tool for making one of the electrophoresis gel of the <29>.
<31> 電気泳動用ゲルにウエルを作製するウエル作製具であって、該ウエル作製具が前記ウエルの型となる1つ又は複数の歯を有し、前記歯の各々が略円柱状、略円錐状又は略円錐台状であるか、もしくは略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であるウエル作製具。 <31> A well prepared tool for making wells for electrophoresis gels, have one or more teeth the well prepared instrument is a type of the well, the teeth each substantially cylindrical, substantially or a conical or substantially frusto-conical, or substantially square pole, a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially wells producing device is a truncated pyramid shape.
<32> <31>において、歯を複数有し、複数の歯が正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 <32> In <31> has a plurality of teeth, it is preferable a plurality of teeth are arranged such that the position of the mating points of the square mesh.
【0032】 [0032]
<33> 電気泳動用ゲルにウエルを作製するウエル作製具であって、該ウエル作製具が前記ウエルの型となる単数又は複数の歯を有し、前記歯が突起状ウエル導入部形成手段を有し、該突起状ウエル導入部形成手段は、ゲル作製時にゾル界面と接触し且つ接触したゾル界面を引き上げて、電気泳動用ゲルに前記ウエルと共に、該ウエルよりもゲル表面側に該ゲル表面よりも突出して配置されるウエル導入部を形成するウエル作製具。 <33> A well prepared tool for making wells for electrophoresis gels, have one or more teeth the well prepared instrument is a type of said wells, said teeth protruding well introducing portion forming means has, projecting Okoshijo well introducing portion forming means, raising the sol surface in contact and in contact with the sol interface during gel manufacturing, together with the wells for electrophoresis gels, the gel surface to the gel surface side of the well wells producing device for forming the well inlet portion disposed to protrude than.
<34> <33>において、突起状ウエル導入部形成手段は、歯の長手方向と直交する方向に突出する部分を少なくとも有するのがよい。 <34> In <33>, projecting the well inlet portion forming means may have at least a portion projecting in a direction perpendicular to the longitudinal direction of the teeth.
【0033】 [0033]
<35> <33>又は<34>において、ウエル作製具が複数の歯を有し、該複数の歯が正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 In <35> <33> or <34>, a well producing device is a plurality of teeth, it is preferable teeth plurality of are arranged such that the position of the mating points of the square mesh.
<36> <33>〜<35>のいずれかにおいて、ウエル作製具が略平板と複数の歯を有し、該歯は、平板に対して歯の長手方向が垂直となるように配置されるのがよい。 In any one of <36> <33> - <35>, the well produced device has a substantially flat plate and a plurality of teeth, teeth are longitudinal teeth are arranged so as to be perpendicular to the flat plate good it is.
<37> <36>において、複数の歯が略平板と垂直な一側面を有し、該一側面と前記正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°よりも大きく45°未満であるのがよい。 <37> In <36>, a plurality of teeth having a substantially flat and perpendicular to one aspect, the angle between the straight line parallel to the tetragonal mesh with said one side surface is formed is greater than 45 ° than 0 ° good it is.
【0034】 [0034]
<38> <33>〜<37>のいずれかのウエル作製具をゲル作製容器に、歯が容器内に入るように配置する配置工程;ゾル界面と突起状ウエル導入部形成手段とが接触し且つ該突起状ウエル導入部形成手段が接触したゾル界面を引き上げてゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部を形成するようなゾル量を、ゲル作製容器にゾルを注入する注入工程;ゾルをゲル化する工程;得られたゲルからウエル作製具を取り外してゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部及びウエルを形成する工程を有する電気泳動用ゲルの作製方法。 <38> <33> to gel producing a container of any of the well producing device to <37>, disposing step arranged such teeth into the containers; in contact with the sol surface and protruding well introducing portion forming means and the sol amount such that projecting Okoshijo well introducing portion forming means for forming a well introduction portion protruding than the gel surface to the gel surface by pulling the sol surface in contact, to inject sol gel manufacturing vessel implantation step ; method for manufacturing a gel for electrophoresis comprising the step of forming the well inlet portion and the well to protrude from the surface of the gel from the gel obtained by removing the well producing device on the gel surface side; sol process gels.
【0035】 [0035]
<39> <38>の配置工程において、ウエル作製具配置手段を用いるのがよい。 <39> in the arrangement step of the <38>, it is preferable to use a well producing device positioning means.
<40> <39>において、ウエル作製具配置手段は、該手段を自立させる自立手段、及びウエル作製具支持手段を有し、該支持手段は略平板であり且つ該平板に前記歯に対応する孔を有し、該孔を介してウエル作製具の歯がウエル作製用容器内に配置されるのがよい。 <40> In <39>, the well produced tool locating means, autonomous means to self the means, and has a well producing device support means, said support means is a substantially flat plate and corresponding to the tooth flat plate has holes, it is preferable teeth well prepared instrument is placed in the well prepared for the container through the pores.
【0036】 [0036]
<41> 電気泳動用ゲルにウエルを作製するヘッジホッグであって、該ヘッジホッグは平板部及び複数の歯を有し、複数の歯が正方網目の交接点の位置となるように配置されるヘッジホッグ。 <41> a Hedgehog producing wells for electrophoresis gels, the hedgehog has a flat plate portion and a plurality of teeth are arranged so that a plurality of teeth is the position of the mating points of a square mesh hedgehog.
<42> 上記<41>において、複数の歯の各々が、ヘッジホッグの平板部と垂直になるように配置される一側面を有し、且つ該一側面と正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満であるのがよい。 In <42> above <41>, each of the plurality of teeth has a one side which are arranged to be the flat portion and vertical hedgehog, and 該Ichi sides and the straight line parallel to a square mesh forms angle is 0 ° than and less than 45 ° Nasu, preferably 11 ° greater than less than 45 °, it's better and more preferably less than 18 ° or more 27 ° or greater than 27 less than 45 °.
【0037】 [0037]
<43> 上記<42>において、一側面以外の面が歯の先端部側に細くなる傾斜を有するのがよい。 In <43> above <42>, may have a slope surface other than one side surface becomes narrower at the tip end of the tooth.
<44> 上記<41>〜<43>のいずれかにおいて、複数の歯は、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 <44> In any one of the above items <41> - <43>, the plurality of teeth, may have at least the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit.
【0038】 [0038]
<45> 複数の歯の各々が略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であり、該四角柱、四角錐又は四角錐台の一側面がヘッジホッグの平板部と垂直になるように配置され、且つ該一側面と正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満であり、一側面以外の面が歯の先端部側に細くなる傾斜を有するのがよい。 <45> each of the plurality of teeth substantially square pole, a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid shape, the quadrangular prism, so that four-sided pyramid or truncated pyramid one side of is the flat plate portion and vertical hedgehog disposed, and 該Ichi sides and square mesh angle formed between a straight line parallel to form 0 ° greater than less than 45 °, preferably 11 ° greater than less than 45 °, more preferably less than 18 ° or 27 ° or 27 a greater than 45 °, may have a slope surface other than one side surface becomes narrower at the tip end of the tooth. 複数の歯は、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 The plurality of teeth, may have at least the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit.
【0039】 [0039]
<46> 電気泳動の際の迷電流を抑制する電気泳動用迷電流抑制板であって、該迷電流抑制板は、絶縁性材料からなり、電気泳動用ゲルの面積の25%以上、好ましくは50%以上、より好ましくは90%以上を覆うように配置される電気泳動用迷電流抑制板。 <46> A suppresses electrophoresis 迷電 flow suppressing plate 迷電 flow during electrophoresis, stray current suppressing plate is made of an insulating material, more than 25% of the area of ​​the gel for electrophoresis, preferably 50% or more, more preferably 迷電 flow suppressing plate for electrophoresis which is arranged so as to cover 90% or more.
<47> 上記<46>において、迷電流抑制板は、第1の開口部及び第2の開口部を有する貫通孔を備える電気泳動試料アプリケータ手段を有し、第1の開口部が電気泳動用ゲルのウエル開口部に対応し、第2の開口部が第1の開口部よりも大面積であるのがよい。 In <47> above <46>, 迷電 flow suppressing plate has an electrophoretic sample applicator means comprising a through-hole having a first opening and a second opening, the first opening electrophoresis corresponding to the well openings of use gel, it is preferable the second opening is larger in area than the first opening.
【0040】 [0040]
<48> 上記<46>において、電気泳動試料アプリケータ手段が貫通孔を複数有し、該複数の貫通孔が、正方網目の交接点の位置に配置されたウエルに対応するように、正方網目の交接点の位置に配置されるのがよい。 In <48> above <46>, a plurality of the electrophoresis sample applicator means through hole, such that the through hole of said plurality of corresponding to the arranged well in the position of the mating points of a square mesh, a square mesh It may be arranged at the of the mating point position. 複数の貫通孔は、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of through-holes, twelve rows of eight × column and then may have at least the one unit one unit.
【0041】 [0041]
<49> 電気泳動装置の製造方法であって、該方法は、正方網目の交接点の位置となるように複数のウエルを電気泳動用ゲルに配置するウエル配置工程;及び前記正方網目が形成する直線と電気泳動の電界方向とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満となるように電気泳動用ゲルを配置するゲル配置工程;を有する、上記方法。 <49> A method of manufacturing an electrophoretic device, the method, well arrangement step for arranging a plurality of wells in the electrophoresis gel so that the position of the mating points of the square mesh; and the square meshes formed linear electrophoretic angle is 0 ° than and less than 45 ° with the direction of electric field, preferably 11 ° greater than less than 45 °, more preferably such that less than 18 ° or more 27 ° or greater than 45 ° from the 27 gel arrangement step of arranging the electrophoretic gel; having the above methods. 複数のウエルは、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of wells, may have at least the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit.
【0042】 [0042]
<50> 上記<49>において、ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、電界方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下であるように各ウエルを形成するのがよい。 In <50> above <49>, a well arranged process a well forming step, in the well formation step, following half well width is the distance between the most adjacent wells perpendicular to the electric field direction, preferably 1/4 it is preferable to form each well as or less.
<51> 上記<49>又は<50>において、ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、その開口部が略円状となるように形成するのがよい。 In <51> above <49> or <50>, a well arranged process a well forming step, in the well formation step, the shape of each well is formed as the opening is substantially circular good. なお、ウエル形状は、略円柱状又は略円錐状又は略円錐台状であるのがよい。 Incidentally, the well shape is good is substantially cylindrical or substantially conical or substantially frustoconical.
【0043】 [0043]
<52> 上記<49>又は<50>において、ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有するように、形成するのがよい。 In <52> above <49> or <50>, a well arranged process a well forming step, in the well formation step, the shape of each well has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, at least a first plane perpendicular the direction of electrophoresis in the electrophoresis direction, and toward the well bottom from the well opening and a second surface against the first surface so as to have a second surface section inclined, preferably formed.
<53> 上記<52>において、開口部が略正方形を有し、略正方形の第1の平行2辺が泳動方向と平行に配置され、第1の平行2辺を含む内壁面がゲル表面と略垂直な面を有するように、ウエルを形成するのがよい。 In <53> above <52>, the opening has a substantially square, the first two parallel sides of the substantially square is arranged parallel to the direction of electrophoresis, and the inner wall surface gel surface comprising a first parallel two sides substantially so as to have a vertical surface, it is preferable to form a well.
【0044】 [0044]
<54> 上記<50>〜<53>のいずれかにおいて、前記ウエル形成工程が、ウエル導入部とウエルとを形成する第1の工程を有し、前記ウエル導入部が前記ウエルよりも開口側に配置され、前記ウエル導入部の開口部が前記ウエル形状の開口部よりも大面積であり、前記ウエル導入部が前記ウエル導入部の開口部からウエル形状の開口部に傾斜した面を少なくとも一部に有する請求項12又は13記載の方法。 In any one of <54> above <50> - <53>, wherein the well forming step has a first step of forming a well inlet portion and the well, the opening side of the well inlet section the well disposed, than said opening of the well inlet portion opening of the well shape is large area, the well inlet section the well inlet portion at least one of the inclined surface to the opening of the well-shaped from the opening of claim 12 or 13 method described with separate component.
<55> 上記<54>において、ウエル形成工程が、第1の工程後に、ウエル導入部を削除する第2の工程を有するのがよい。 In <55> above <54>, the well forming step, after the first step may have a second step to remove the well introduction.
【0045】 [0045]
<56> ウエル開口部の形状が略円形である電気泳動用ゲルを用いた電気泳動結果解析方法であって、電気泳動結果を電気泳動画像として取り込む工程;電気泳動画像において泳動開始点、泳動レーン中心線及び泳動レーン中心線における泳動位置を特定する工程;及び泳動開始点から泳動位置までの距離を分子量に換算することにより定性結果を得る工程;を有する電気泳動結果解析方法。 <56> provides an electrophoretic result analysis method the shape of the well opening using an electrophoretic gel is substantially circular, step captures the electrophoresis result electrophoretogram; electrophoresis starting point in an electrophoretic image, electrophoresis lanes electrophoresis result analysis method having; obtaining qualitative results by the distance and the electrophoretic start point to focusing position in terms of the molecular weight; a step of identifying the position of migration of the center line and the electrophoresis lanes centerline.
【0046】 [0046]
<57> 上記<56>において、泳動位置での画像濃度に対応する物質量を得る工程をさらに有するのがよい。 In <57> above <56>, may further comprise a step of obtaining a substance amount corresponding to the image density in running position.
<58> ウエル開口部の形状が円形である電気泳動用ゲルを用いた電気泳動結果解析方法であって、電気泳動結果を電気泳動画像として取り込む工程;電気泳動画像において泳動開始点及び泳動位置を特定する工程;泳動位置での画像濃度に対応する物質量を得る工程;泳動開始点から泳動位置までの距離を分子量に換算することにより定性結果を得る工程;を有する電気泳動結果解析方法。 <58> provides an electrophoretic result analysis method the shape of the well opening using an electrophoretic gel is circular, step captures the electrophoresis result electrophoretogram; electrophoretic starting point and focusing position in the electrophoretic image electrophoresis result analysis method having; obtaining qualitative results by converting the molecular weight the distance to the position of migration from the electrophoresis starting point; obtaining a substance amount corresponding to the image density with running position; specific to process.
【0047】 [0047]
<59> ウエルを有さない電気泳動用ゲルの所定位置に電気泳動用試料を埋め込む試料注入工程を有する電気泳動用試料を有する電気泳動ゲルの調製方法。 <59> a process for the preparation of electrophoresis gels having a sample for electrophoresis having a sample injection step a predetermined position of the electrophoresis gel having no well embedding samples for electrophoresis.
<60> 上記<59>において、試料注入工程が、電気泳動用試料を含浸可能な材料に該試料を浸漬し該材料を埋め込むのがよい。 In <60> above <59>, sample injection process, it is preferable to embed the immersed material the sample in the sample can impregnating material for electrophoresis.
【0048】 [0048]
<61> 上記<59>又は<60>において、所定位置が複数あり、該複数が正方網目の交接点の位置であるのがよい。 In <61> above <59> or <60>, there are a plurality of predetermined positions, it is preferable said plurality of the position of the mating points of the square mesh. 複数の位置は、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of locations, twelve rows of eight × column and then may have at least the one unit one unit.
<62> 上記<60>又は<61>において、材料は、濾紙、セラミクスなどの薄板状であり、該薄板の平面と正方網目が形成する直線とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満となるように該薄板状材料を埋め込むのがよい。 In <62> above <60> or <61>, the material, filter paper, a thin plate such as a ceramic, thin plate plane angle between the straight line square meshes formed by the 0 ° than and less than 45 ° of, preferably 11 ° greater than less than 45 °, more preferably from embedding the thin plate-like material such that less than 18 ° or more 27 ° or greater than 45 ° from 27.
【0049】 [0049]
【発明の実施の形態】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
本発明を以下により詳細に説明する。 The present invention will be described in more detail below. なお、本発明を説明するに際して、電気泳動用ゲル、該ゲルを配置してなる電気泳動装置、それらの製造方法、本発明の電気泳動用ゲルを用いた場合の電気泳動結果解析方法、などについて詳細に説明する。 Incidentally, when describing the present invention, an electrophoretic gel, electrophoresis device formed by arranging the gel, a process for their preparation, the electrophoresis result analysis method using the gel for electrophoresis of the present invention, for such It will be described in detail.
【0050】 [0050]
<電気泳動用ゲル> <Electrophoresis gel>
本発明は、ウエル幅が狭い電気泳動用ゲルを提供する。 The present invention is well width to provide a narrow gel for electrophoresis. 具体的には、1つ又は複数のウエルを有する電気泳動用ゲルの場合、ウエル幅が1mm以下、好ましくは0.8mmであるのがよい。 Specifically, in the case of one or gel for electrophoresis having a plurality of wells, the well width is 1mm or less, it is preferably 0.8 mm. また、複数のウエルを有する電気泳動用ゲルの場合、ウエル幅は、最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下、具体的には2mm、好ましくは1mm以下、より好ましくは0.8mmであるのがよい。 Moreover, in the case of electrophoresis gels having a plurality of wells, the well width is 1/2 of the distance between the most adjacent wells or less, preferably 1/4 or less, in particular 2 mm, preferably 1mm or less, more preferably good in the range of 0.8mm.
【0051】 [0051]
本明細書において「ウエル幅」とは、ウエル形状全体において電界方向(又は泳動方向)と直交する距離のうち最大値をいう。 The "well width" as used herein refers to a maximum value among distances perpendicular to the electric field direction (or the direction of electrophoresis) throughout the well shape. 例えば、ア)ウエル開口部が略円状であり且つウエル形状が略円柱状の場合、ウエル幅は、円の直径となる。 For example, A) if the well opening is and well shaped substantially circular substantially cylindrical, well width, the diameter circle. また、イ)ウエル開口部が略円状であるがウエル形状がウエル底部に向かって径が小さくなる略円錐状である場合、ウエル幅は、ウエル開口部の円の直径となる。 Further, b) when the diameter well openings are substantially circular. However well shape toward the well bottom is smaller substantially conical, well width, the diameter of the circle of the well opening.
さらに、ウ)ウエル開口部が電界方向と直交する短辺aと電界方向と平行な長辺bとからなる長方形であり且つウエル形状が直方体の場合、ウエル幅は、短辺aの距離となる。 Further, c) if a rectangle in it and well shape composed of the short side a and the electric field direction parallel to the long sides b of the well opening perpendicular to the direction of the electric field of a rectangular parallelepiped, the well width is a length at the short side a .
【0052】 [0052]
また、本明細書において「ウエル間距離」とは、ウエル底部の重心同士の距離をいう。 Further, in the present specification, the "well distance" refers to the distance of the center of gravity between the well bottom. 例えば、上記ア)の場合、ウエル間距離は、円の中心間距離となる。 For example, the above case a), the well distance is a distance between the centers of the circle. また、上記イ)の場合、ウエル間距離は、長方形の重心となる。 Also, the above case b), the well distance is a rectangular center of gravity.
なお、本明細書において「複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置される」とは、複数のウエルの各々のウエル底部の重心位置が実質的に正方網目の交接点の位置となることを意味する。 In this specification the term "plurality of wells are arranged such that the position of the mating points of a square mesh," center of gravity of the well bottom of each of the plurality of wells of mating point of the substantially square mesh It means to be a position.
【0053】 [0053]
電気泳動結果(バンド、ピーク又はレーン)、特にレーン幅は、ウエル幅によって決まる。 Electrophoresis results (band, peak or lanes), in particular lane width is determined by the well width. したがって、本発明は、隣接するウエル同士又は該ウエル同士によって生じる電気泳動結果(バンド、ピーク又はレーン)がオーバーラップしないような電気泳動用ゲルを提供することができる。 Accordingly, the present invention can be electrophoresed consequences of wells or between the wells between the adjacent (band, peak or lane) provides an electrophoretic gel which do not overlap.
【0054】 [0054]
また、本発明の電気泳動用ゲルのウエルは、そのウエル長さが上記ウエル幅と同じであるか又はウエル幅よりも長いのがよい。 Also, the well of gel for electrophoresis of the present invention, a long good than or well width is the same as the well width the well length. 本明細書において「ウエル長さ」とは、ウエル形状全体において電界方向(又は泳動方向)と平行な距離のうち最大値をいう。 The "well length" as used herein refers to a maximum value of the distance parallel to the electric field direction (or the direction of electrophoresis) throughout the well shape.
このように、ウエル長さを設定することにより、電気泳動用サンプルの注入が容易となる。 Thus, by setting the well length, thereby facilitating the injection of the sample for electrophoresis.
【0055】 [0055]
ウエルは、特に、i)その開口部が略円状であり、より具体的にはウエル形状が略円柱状又は略円錐状又は略円錐台状の形状を有するのがよい。 Wells, in particular, i) its is opening a substantially circular, it is preferable well shape having a substantially cylindrical or substantially conical or generally frustoconical shape and more specifically.
また、ウエルは、ii)ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有する形状であるのがよい。 Also, wells, ii) has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, electrophoresis direction perpendicular to the first plane in the electrophoresis direction, and said better to a shape having a second surface inclined at least partially toward the well bottom from the well opening and a second surface against the first surface.
より具体的には、開口部が略正方形を有し、略正方形の第1の平行2辺が泳動方向と平行に配置され、該第1の平行2辺を含む内壁面がゲル表面と略垂直な面を有するのがよい。 More specifically, the opening has a substantially square, the first two parallel sides of the substantially square is arranged parallel to the direction of electrophoresis, the inner wall surface of the gel surface comprising two parallel sides of said first substantially vertical It may have a such surface.
【0056】 [0056]
上記ウエル形状i)及びii)を、図を参照しつつ説明する。 The well shape i) and ii), will be described with reference to FIG.
図1は、従来の電気泳動用ゲル1に設けられたウエル3の形状及びそれによって得られる電気泳動結果を示す図である。 Figure 1 is a diagram showing the electrophoresis results obtained by the shape and its well 3 provided in a conventional gel for electrophoresis 1. 図1(a)はゲル1の正面図である。 1 (a) is a front view of a gel 1. 図1(a)の矢印Aは泳動方向を示しており、ウエルは略長方形の開口部を有する。 Arrow A in FIG. 1 (a) shows the direction of electrophoresis, the well has an opening of substantially rectangular. 開口部の略長方形の長辺は、泳動方向と垂直となるように配置される。 Long side of the substantially rectangular opening are arranged such that the direction of migration and vertical. また、図1(b)はゲル1のb−bでの断面図である。 1 (b) is a sectional view at b-b of gel 1. 図1(b)におけるウエル3の形状も略長方形である。 The shape of the well 3 in FIG. 1 (b) is also substantially rectangular. したがって、従来の電気泳動用ゲル1に設けられたウエル3の形状は、略直方体状である。 Thus, the shape of the well 3 provided in a conventional gel for electrophoresis 1 has a substantially rectangular parallelepiped shape.
【0057】 [0057]
一方、図4は、本発明の電気泳動用ゲル11を示す。 On the other hand, FIG. 4 shows the electrophoresis gel 11 of the present invention. 図1と同様に、(a)はゲル11の正面図であり、(b)はゲル11のb'−b'での断面図である。 Similar to FIG. 1, (a) is a front view of the gel 11 is a cross-sectional view at (b) is b'-b of the gel 11 '. 図2(a)からわかるように、本発明のウエル13は、その開口部が略円状を有する。 As can be seen from FIG. 2 (a), the well 13 of the present invention, the opening has a substantially circular shape. また、図2(b)が示すように、本発明のウエル13は、ゲル断面図において、略長方形を有する。 Further, as shown in FIG. 2 (b), the well 13 of the present invention, in the gel cross-sectional view, has a substantially rectangular. したがって、図4が示すウエル13の形状は、略円柱状である。 Thus, the shape of the well 13 shown in FIG. 4 is a substantially cylindrical. なお、本発明のウエルは、図4(b)において、開口部の径よりもウエル底部の径が小さくなるような形状、即ち開口部の径が大である円錐状又は円錐台状であってもよい。 Incidentally, the well of the present invention, in FIG. 4 (b), the shape such as diameter of the well bottom than the diameter of the opening is reduced, i.e. the diameter of the opening is a conical or frustoconical a large it may be.
【0058】 [0058]
また、図5は、本発明のウエル23を備える電気泳動用ゲル21を示す。 Further, FIG. 5 shows the electrophoresis gel 21 with a well 23 of the present invention. 図1と同様に、(a)はゲル21の正面図であり、(b)はゲル21のb”−b”での断面図である。 Similar to FIG. 1, (a) is a front view of the gel 21 is a cross-sectional view at (b) is b "-b" gel 21. 図5(a)からわかるように、本発明のウエル23は、その開口部24が略正方形を有し、該正方形の平行2辺25が泳動方向Aと略平行に配置され、平行2辺25をそれぞれ含む2面はそれぞれ、ゲル表面と略垂直となるように配置される。 As can be seen from FIG. 5 (a), the well 23 of the present invention, the opening 24 has a substantially square, two parallel sides 25 of the square are substantially parallel to the direction of electrophoresis A, two parallel sides 25 respectively dihedral containing respectively, are arranged such that the gel surface substantially perpendicular.
さらに、図5(b)が示すように、本発明のウエル23は、泳動方向側の内面26が泳動方向Aに垂直となるように配置され、内面26の対面27はウエル底部に向かって傾斜してなる。 Furthermore, as shown in FIG. 5 (b), the well 23 of the present invention, the inner surface 26 of the loading direction is arranged so as to be perpendicular to the direction of electrophoresis A, facing 27 of the inner surface 26 is inclined toward the well bottom and composed. なお、対面27の傾斜面は、平面であっても曲面であってもよい。 Incidentally, the inclined surfaces of the facing 27 may be a curved surface be planar. また、傾斜はゲル底部までのすべてであっても開口部付近の一部であってもよい。 The inclination may be part of the vicinity of the opening be all to gel bottom.
【0059】 [0059]
図1に示す従来のウエル形状で電気泳動を行った場合、ウエル幅が大きいため、その泳動結果であるレーン幅も大となる。 If subjected to electrophoresis in a conventional well shape shown in FIG. 1, since the well width is large, it becomes larger lane width is its running behavior. したがって、多数のウエル、特にMTPに対応する数のウエルを有するゲルは作成できないか又は作成には困難性を有するという問題があった。 Therefore, a large number of wells, the gel, especially having a number of wells corresponding to the MTP has a problem of having difficulty in or create can not be created. また、たとえ多数のウエルを有するゲルが作成できたとしても、隣接するウエルによって得られる電気泳動結果(レーン)がオーバーラップする可能性が大となる問題を有していた。 Further, even as the gel could be created with even number of wells, the electrophoresis obtained by adjacent wells result (lane) had a problem that possibility of overlap is large. 一方、本発明は、ウエル幅を狭くすることにより、レーン幅を狭く抑えることができる。 On the other hand, the present invention, by narrowing the well width, it is possible to suppress narrow lane width. したがって、ウエルを複数配置させた場合、特にMTP対応のウエルを配置させた場合、隣接するレーン同士がオーバーラップする可能性が低くなる。 Thus, if allowed to arranging a plurality of wells, particularly when obtained by placing the MTP corresponding wells possibility lanes with adjacent overlapping decreases. なお、ウエル形状を上記形状、即ちウエル長さを従来よりも長くした場合であっても、従来のウエル形状と同様の泳動結果が得られることを確認した(後述の実施例1を参照のこと)。 Incidentally, the shape well shape, i.e. even when the longer wells length than conventionally, it was confirmed that the same running behavior and conventional well shape is obtained (see Example 1 below ).
【0060】 [0060]
さらに、本発明の電気泳動用ゲルは、上記ウエルよりも開口部側(又はゲル表面側)にウエル導入部を有してもよい。 Furthermore, gel for electrophoresis of the present invention may have a well inlet portion on the opening side (or the gel surface side) than the well. 図6は、ウエル導入部31について説明する電気泳動用ゲル正面図(a)及び断面図(b)である。 Figure 6 is a gel front view for electrophoresis explaining well introduction section 31 (a) and a sectional view (b). 図6(a)及び(b)からわかるように、ウエル導入部31は、開口部側33(ゲル表面側)の径が大面積であってウエル側34の径が小面積である略円錐台状を有する。 As can be seen from FIG. 6 (a) and (b), the well inlet portion 31 has a substantially truncated cone diameter of the diameter of the opening side 33 (gel surface side) a large area well side 34 is small area with a Jo. このように、ウエル導入部31は、その開口部33が上記ウエル開口部形状34よりも大面積であり、ウエル開口部34に向かって傾斜してなる面を有するのがよい。 Thus, the well inlet 31, the opening 33 is larger area than the well opening shape 34, may have a surface to be inclined toward the well opening 34. ウエル導入部の傾斜する面は、そのような面を少なくとも1面有するのがよいが、その傾斜は、正面図で見て、ウエル開口部を遮るような傾斜ではないのが好ましい。 Inclined surfaces of the well inlet portion is may have at least one surface of such a surface, the inclination is viewed in front view, preferably not inclined as blocking the well opening. このようなウエル導入部を設けることにより、電気泳動用試料をウエルへと注入するハンドリングを容易にすることができる。 By providing such a well introduction, the handling of injecting electrophoresis sample to the wells can be facilitated.
【0061】 [0061]
電気泳動用ゲルにウエル導入部を設ける場合、ウエルに泳動用試料を配置した後に、該ウエル導入部を除いてもよい。 If the gel for electrophoresis provided well introduction, after placing the electrophoresis sample to the wells, it may exclude the well introduction. ウエル導入部を除く手法としては、i)図6に示すような形態のウエル導入部31を、ゲル全体の表層を剥離するように、スクレーパで除く手法、ii)図7に示すように、電気泳動用ゲルにおいてウエル導入部を突起状に設け、該突起状のウエル導入部(及び必要によりゲル全体の表層)を、スクレーパで除く手法(図8に示す装置を用いることができる)などがある。 As a method other than the well inlet portion, i) the well inlet portion 31 of the form as shown in FIG. 6 so as to peel off the surface layer of the entire gel, technique except in scraper, ii) as shown in FIG. 7, the electrical provided wells introduction portion in a gel for the protruding, protrusion shaped well introduction portion (and the surface layer of the entire gel necessary), (can be used an apparatus shown in FIG. 8) approach, except in the scraper, and the like . 図8(a)は、突起状ウエル導入部を除去する装置に電気泳動用ゲルを配置した正面図であり、図8(b)はその断面図である。 8 (a) is a front view of arranging the electrophoresis gel unit that removes the protruding well introduction, FIG. 8 (b) is a cross-sectional view thereof. また、図8(c)は、スクレーパによってゲル表層を除去する模式図であり、図8(d)は除去後のの電気泳動ゲルを示す図である。 Further, FIG. 8 (c) is a schematic diagram of removing gel surface by the scraper, FIG 8 (d) is a diagram showing the electrophoresis gel of after the removal. 図8(c)において、ゲルがストッパーによりスクレーパ移動方向に移動しないように、且つガイドレールによりスクレーパ移動方向と垂直な方向などに移動しないように、ゲルは配置される。 In FIG. 8 (c), the so gel does not move in the scraper movement direction by the stopper, and the guide rail so as not to move, such as in the scraper movement direction perpendicular to the direction, the gel is placed.
なお、図7に示す突起状のウエル導入部(簡単に「突起部」という場合がある)を設け、該ゲルをそのままの状態(図8によるスクレーパ除去を行わない状態)で用いた場合、次のような作用を有する。 Incidentally, protruding well introducing portion shown in FIG. 7 (simply also referred to as "projections") provided, in the case of using the gel as it is (the state is not performed scraper removal by FIG. 8), the following It has an effect like. 即ち、突起部までにあふれた電気泳動用試料は、電気泳動の際にゲル中を移動したとしても、突起部を過ぎるとゲルが存在せず、バッファ中へと移動するのみとなる。 In other words, the electrophoresis sample overflowing until protrusions even migrate through the gel during electrophoresis, past the protruding portion does not exist gel, it is only moved into the buffer. そのため、あふれた電気泳動用試料によって泳動像が影響を及ぼさないという作用を奏する。 Therefore, performing an operation that electrophoresis image is not affected by the specimen overflowing electrophoresis.
【0062】 [0062]
上記ウエル導入部を設けることにより、ウエルに試料を配置するハンドリングが容易となる。 By providing the well introduction, which facilitates handling of placing the sample in the well. また、このようなウエル導入部を設けると共に、又は設ける代りに、本発明の電気泳動用ゲルを有する装置は、サンプルアプリケータを備えていてもよい。 Also, with such well introducing portion provided, or provided alternatively, devices having a gel for electrophoresis of the present invention may be provided with a sample applicator. サンプルアプリケータは、電気泳動用試料をウエルに注入するハンドリングを容易にするように、電気泳動用ゲル上に配置するのがよい。 Sample applicator, to facilitate handling of the sample is injected for electrophoresis wells, it is preferable to place on the electrophoresis gel.
【0063】 [0063]
サンプルアプリケータは、電気泳動用ゲルに設けられるウエル位置に対応する位置に貫通孔を有するのがよい。 Sample applicator may have a through hole at a position corresponding to the well position provided in the electrophoresis gel. 該貫通孔は、第1の開口部及び第2の開口部を有し、第1の開口部は、ウエル開口部(又はウエル導入部を有する場合、該ウエル導入部の開口部)に対応するように該アプリケータを配置するのがよい。 Through hole has a first opening and a second opening, the first opening (if it has or wells introduction part, the opening of the well inlet portion) well opening corresponding to it is preferable to place the applicator as. なお、ウエル開口部に「対応」するとは、ウエル開口部(又はウエル導入部を有する場合、該ウエル導入部の開口部)とほぼ同形状を有し且つ該開口部に近接することを意味する。 Incidentally, to "correspond" to the well opening, (if having or well introduction part, the opening of the well inlet portion) well opening means that close to and opening have substantially the same shape as . 第2の開口部は、第1の開口部とは反対側に位置し、第1の開口部の面積よりも大面積を有するのがよい。 Second opening, the first opening located opposite, may have a larger area than the area of ​​the first opening. 試料がウエルへと導かれるように、第2の開口部から第1の開口部にかけて傾斜を有するのがよい。 As the sample is guided to the well, it may have an inclination from the second opening toward the first opening. なお、電気泳動用ゲルが複数のウエルを備える場合、サンプルアプリケータは、該複数ウエルの位置に相当する位置に貫通孔を備えるのがよい。 In the case where the electrophoresis gel comprises a plurality of wells, the sample applicator may be provided with a through hole at a position corresponding to the position of the plurality of wells.
【0064】 [0064]
サンプルアプリケータは、該アプリケータの貫通孔と電気泳動用ゲルのウエルとが対応するように、サンプルアプリケータと電気泳動用ゲルとがほぼ同じ外寸法を有するか、又はアプリケータ配置補助手段を有するのがよい。 Sample applicator, such that the well of the through hole and the electrophoresis gel of the applicator corresponding sample applicator and whether the electrophoresis gel have approximately the same external dimensions, or the applicator placement aid It may have. アプリケータ配置補助手段として、ゲルホルダ及びゲルホルダに設けられるアプリケータ用補助手段を用いるのがよい。 As applicators arranged aid, it is preferable to use an applicator auxiliary means provided in the gel holder and the gel holder. ここで「ゲルホルダ」とは、底部と側面部とを有するシャーレ状の容器をいい、該底部上に電気泳動用ゲルを配置し、該容器と共に電気泳動用ゲルをハンドリングすることができるものをいう。 Here, "gel holder" refers to a petri dish-like container having a bottom portion and side portions, the electrophoresis gels were placed on the bottom part, it refers to those capable of handling a gel for electrophoresis with container . ゲルホルダの内寸法が電気泳動用ゲルの外寸法とほぼ同じであって、アプリケータと電気泳動用ゲルとの外寸法がほぼ同じであれば、ゲルホルダをアプリケータ配置補助手段として用いることができる。 Inner dimensions of the gel holder is about the same as the outer dimension of the electrophoresis gel, if approximately the same outer dimensions of the applicator and the electrophoresis gel, it is possible to use a gel holder as applicator placement aid. また、アプリケータ外寸法が電気泳動用ゲル外寸法よりも小さいか又はゲルホルダ内寸法よりも小さい場合、ゲルホルダの側面に、アプリケータを適切な位置に設置するための接触面又は複数の突起物などのアプリケータ用補助手段を設けるのがよい。 Further, the applicator outer dimension smaller than small or gel holder in size than the gel outside dimension electrophoresis, the side surface of the gel holder, the contact surface or more protrusions for installing the applicator in position such It may be disposed an auxiliary means for the applicator.
【0065】 [0065]
本発明の電気泳動用ゲルのウエルは、単数であっても複数であってもよい。 Well of gel for electrophoresis of the present invention may be a plurality, even singular. なお、上述のように、複数のウエルを設ける方が、利点を多く有する。 Note that, as described above, it is preferable to provide a plurality of wells, having many advantages. ウエルを複数設ける場合、MTPに対応する数であって、MTP用器具(例えばマルチチャンネルピペット)に対応する位置に設けるのが、作業簡便化及び/又は作業ミス低下の観点から、好ましい。 When providing a plurality of wells, a number corresponding to the MTP, that provided at a position corresponding to the MTP instrument (e.g. multichannel pipette), from the viewpoint of working convenience and / or operation error reduction, preferable. MTPの各マイクロタイタは一般に、正方網目の交接点に配置される。 Each microtitre the general MTP, it is arranged mating point of the square mesh. したがって、ウエルも電気泳動用ゲル上、正方網目の交接点に配置されるのがよい。 Thus, the well also on electrophoresis gels, may be arranged at the mating point of the square mesh. より詳細には、各ウエルの底部の重心位置が正方網目の交接点とほぼ合致するように、ウエルを配置するのがよい。 More specifically, as the center of gravity of the bottom of each well is substantially consistent with the mating point of a square mesh, it is preferable to place the wells.
【0066】 [0066]
なお、本発明の電気泳動用ゲルのウエルは、次の方法によっても形成することもできる。 Incidentally, the well of gel for electrophoresis of the present invention can also be be formed by the following method. 即ち、図9に示すように、ウエルを有しない電気泳動用ゲル41を用意し、このゲル41にピペットマン型分注装置のチップ42を用いて孔を開けると同時に試料43を注入する方法である。 That is, as shown in FIG. 9, prepared without electrophoresis gel 41 wells, is a method of simultaneously injecting a sample 43 when piercing with the tip 42 of the Pipetman type dispensing apparatus to the gel 41 . ある面において、これは、試料43注入と同時にウエル44を形成する。 In certain aspects, which forms a well 44 at the same time as the sample 43 injected. 該ウエル44の形状は、チップによって開けられた孔の形状又は略チップ形状であり、即ち略円錐台状である。 The shape of the well 44 is shaped or substantially tip shape of the hole drilled by the chip, i.e. a substantially truncated cone shape.
【0067】 [0067]
さらに、本発明の電気泳動用ゲルの試料注入済ウエルは、次の方法によっても形成することもできる。 Further, the sample-injected well of gel for electrophoresis of the present invention can also be be formed by the following method. 即ち、予め試料をしみ込ませた濾紙を用意し、該濾紙をウエルを有しない電気泳動用ゲルに押し込む方法である。 That is a method of pre-sample prepared filter paper impregnated with, push the filter paper electrophoresis gel having no well. 濾紙の代りに、多孔性であって電荷のない材料、例えばセラミクスを用いることもできる。 Instead of a filter paper, the material having no charge be porous, may also be used, such as ceramics. また、これらの材料は、電気泳動作業中に、移動しない物質であるのが望ましい。 Further, these materials, in the electrophoresis operation is preferably a material that does not move.
【0068】 [0068]
<電気泳動装置> <Electrophoresis apparatus>
本発明の電気泳動装置は、上記電気泳動用ゲル、特にウエルを複数、さらに好ましくはMTPに対応する数及び位置にウエルを設けた電気泳動用ゲル;並びに所望により上記アプリケータ及びその他の器具を備える。 Electrophoresis apparatus of the present invention, the electrophoresis gel, in particular a plurality of wells, and more preferably the number and gel for electrophoresis provided with a well at a position corresponding to the MTP; a and optionally the applicator and other instruments provided.
なお、本発明の電気泳動装置は、一般的なMTPに対応する数及び位置にウエルを有する、即ち正方網目の交接点に複数のウエルを有する電気泳動用ゲルを備えるのがよい。 Incidentally, the electrophoresis apparatus of the present invention has a well on the number and position corresponding to the general MTP, i.e. may be provided with gel for electrophoresis having a plurality of wells in mating point of the square mesh.
【0069】 [0069]
正方網目の交接点に複数のウエルを配置した電気泳動用ゲルは、電気泳動装置において、種々の方向に配置してもよい。 Gel for electrophoresis in which a plurality of wells mating point of a square mesh, in an electrophoresis apparatus, may be disposed in various directions. 一般的には、正方網目の1つの正方形が形成する平行2辺が電界方向と平行となるように、電気泳動用ゲルを配置する。 Generally, two parallel sides one square to form a square mesh is so parallel to the electric field direction, placing an electrophoretic gel. なお、この場合、各ウエルの試料によってもたらされる電気泳動レーンの長さは、隣接するウエルの存在により、ウエル間距離に限定される。 In this case, the length of the electrophoresis lanes caused by the sample in each well, the presence of adjacent wells, limited to the well distance. この場合、ウエル間距離が十分でないため、十分なレーン長を確保することができない。 In this case, since the well distance is not sufficient, it is impossible to ensure sufficient lane length.
【0070】 [0070]
十分なレーン長を確保するため、電気泳動用ゲルは、電気泳動装置において、正方網目の1つの正方形が形成する平行2辺が電界方向とある角度を有するように配置するのがよい。 To ensure adequate lane length, electrophoresis gels, in an electrophoretic device, it is preferable two parallel sides one square to form a square mesh is arranged to have an angle with the field direction. 正方網目の1つの正方形が形成する平行2辺と電界方向との角度は、0°より大きく45°未満であり、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満であるのがよい。 Angle between two parallel sides and the direction of an electric field one square to form a square mesh is, 0 ° is greater than less than 45 °, preferably 11 ° greater than less than 45 °, more preferably less than 18 ° 27 below ° or a larger than 45 ° is good is from 27. このような角度を有するように電気泳動用ゲルを配置することによって、十分なレーン長をもたらすことができる。 By placing the electrophoresis gel so as to have such an angle, it is possible to provide sufficient lane length. 例えば、ウエル間距離が9mmであり、上記角度が21.8°であれば、レーン長は47mmとすることができる。 For example, the well distance is is 9 mm, if the angle is 21.8 °, lane length can be 47 mm. また、十分なレーン長を確保することにより、大分子量の試料、分子量が未知の試料であっても、レーン長を心配することなく、測定することができる。 Also, by securing a sufficient lane lengths, samples of a large molecular weight, the molecular weight is unknown samples, without worrying about the lane length can be measured.
【0071】 [0071]
本発明の電気泳動装置は、所望により、上述のサンプルアプリケータ及びその他の器具、例えば電界面を調整する器具及びゲルホルダなどを有するのがよい。 Electrophoresis apparatus of the present invention, if desired, the above-mentioned sample applicator and other instruments, for example, may have a like instrument and the gel holder to adjust the electric field plane.
電界面を調整する器具は、次のような場合に必要となる。 Instrument for adjusting the electric field plane is required in the following case. 即ち、電気泳動用ゲル表面と電気泳動用両電極とが略同一平面上にない場合、電気泳動用両電極が形成する電界面は、電気泳動ゲル表面と平行にならない。 That is, when the electrophoresis gel surface and electrophoresis both electrodes are not on the same plane, the electric field plane electrophoresis both electrodes is formed, not parallel with the electrophoresis gel surface. このような場合、電気泳動結果に影響を及ぼし、例えば所望のピークが生じないか又は分子量によるピーク位置の差違が生じないなどの結果が観察される。 In such cases, affect the electrophoretic results, for example the result of such does not occur differences in peak positions with the desired or molecular weight peak does not occur are observed. これらの状況を解決するために、電界面を調整するのがよい。 To solve these situations, it is preferable to adjust the electric field plane. 具体的には、電気泳動ゲル表面と平行な表面を有するように、不導体材料を電気泳動ゲル下及び/又はゲル上に配置するのがよい。 Specifically, as to have an electrophoretic gel surface parallel to the surface, it is preferable to arrange under the electrophoresis gel and / or on the gel nonconductor material. このように配置した不導体材料により、電界面は、不導体材料の表面に沿った面として、即ち電気泳動用ゲル表面に平行な面として、形成される。 Such nonconductive material disposed, the electric field plane is a surface plane along the nonconductor material, i.e. a plane parallel to the electrophoresis gel surface, is formed.
【0072】 [0072]
電界面を調整する不導体材料を電気泳動用ゲル下に配置させた場合、該不導体材料は、ゲルホルダとしても用いることができる。 If is arranged nonconductive material to adjust the electric field plane under electrophoresis gel, it said non conductive materials can be used as the gel holder. 即ち、ゲルホルダは、壊れやすいアガロースなどの電気泳動用ゲルを保持し、該ゲルを保持したゲルホルダを電気泳動装置の所望位置に配置させることができる。 That is, the gel holder may be arranged to hold the gel for electrophoresis, such as fragile agarose and holding the gel gel holder in the desired position of the electrophoresis apparatus. 該ゲルホルダを不導体材料、例えば不導体プラスチックで形成することができる。 It is possible to form the gel holder nonconductive material, for example, non-conductive plastic.
【0073】 [0073]
さらに、ゲルホルダは、泳動プラットフォームを延長する作用をも有することができる。 Furthermore, gel holder may also have the effect of extending the electrophoresis platforms. 即ち、アドバンス社製などの小型電気泳動装置は、その泳動プラットフォームが通常、泳動方向60mm×泳動幅107mmである。 That is, a small electrophoresis apparatus such as Advance Co., the migration platform usually electrophoresis direction 60 mm × electrophoresis width 107mm. このプラットフォームの泳動方向を、小型電気泳動装置自体の大きさにも依存するが、例えば130mmまで延長することができる。 The migration direction of the platform, depending on the size of a small electrophoresis apparatus itself can be extended for example up to 130 mm.
【0074】 [0074]
また、上述のサンプルアプリケータは、試料注入の際に電気泳動用ゲル上に配置して用いられるが、該サンプルアプリケータを不導体材料から成るように形成し、電気泳動測定中においても、電界面を調整する器具として、電気泳動用ゲル上に配置することができる。 Further, the sample applicator above are used in a disposed on an electrophoresis gel during sample injection, the sample applicator is formed to consist of a non-conductive material, even during electrophoresis measurement, electrostatic as the instrument for adjusting the interface, it can be placed on a gel for electrophoresis.
【0075】 [0075]
<電気泳動用ゲル及び電気泳動装置の製造方法> <Method of manufacturing an electrophoretic gel and electrophoresis device>
本発明は、電気泳動用ゲルの製造方法、及び電気泳動装置の製造方法も提供する。 The present invention relates to a process for producing a gel for electrophoresis, and the manufacturing method of the electrophoretic device provides.
本発明の電気泳動用ゲルの製造方法は、底部と側面部を有する容器を準備し、ウエルに対応する型を有する歯を備えるウエル作製具を、歯が容器内に入るように、配置する工程;前記容器にアガロースゾルを入れて固めてアガロースゲルを得るゲル形成工程;前記アガロースゲルから前記ウエル作製具を取り去りウエルが形成された電気泳動用ゲルを得る工程を有する。 Method of manufacturing an electrophoretic gel of the present invention includes providing a container having a bottom portion and side portions, the wells produce tools having teeth with a mold corresponding to the wells, so that the teeth to enter into the container, placing ; a step of obtaining a gel for electrophoresis wells deprived the well producing device from the agarose gel was formed; gel formation step of obtaining a agarose gel to solidify put agarose sol to the container.
ここで、ウエル作製具は、一般にコウム又はヘッジホッグと呼ばれる器具により提供することができる。 Here, the well produced tool may be provided by a device commonly referred to as a comb or hedgehog. ウエル作製具の歯、即ちコウム又はヘッジホッグの歯は、ウエル形成のための鋳型として作用する。 Teeth wells producing device, i.e. comb or tooth hedgehog acts as a template for the well formation.
【0076】 [0076]
ウエル作製具を配置する工程において、ウエル作製具の歯の先端部、即ちコウム又はヘッジホッグの歯の先端部が容器の底部に接触しない、即ちコウム又はヘッジホッグの歯の先端部が容器の底部よりも0.5mm、上部に配置されるように、コウム又はヘッジホッグを配置するのが一般的な方法(以下、「方法A」という場合がある)である。 In placing a well producing device, the tip portions of the teeth of the wells produced tool, i.e. comb or does not contact the bottom tip of the container tooth hedgehog, i.e. comb or the bottom tip of the container tooth hedgehog so as to be arranged 0.5 mm, the top than, common practice to place the comb or hedgehog (hereinafter, sometimes referred to as "method a"). このように配置することにより、ウエルが貫通孔となるのを避け、ウエル底部からゲル底部までに0.5mmのゲルを設けることができる。 With this arrangement, wells avoids the through holes, from the well bottom to bottom of the gel can be provided 0.5mm gel.
【0077】 [0077]
なお、本明細書において「コウム」(51)とは、図10に示すように、幅W×高さH×厚さDの薄板に切り込みを入れて1つ又は複数の歯53を形成した櫛型部材をいう。 Note that the "comb" (51) In the present specification, as shown in FIG. 10, to form a width W × height H × one with incised sheet thickness D or more teeth 53 comb It refers to a type member. また、本明細書において「ヘッジホッグ」(54)とは、図11に示すように、平板の少なくとも一平面に1つ又は複数の歯55を設けたものをいう。 Further, in the present specification, "hedgehog" (54), as shown in FIG. 11 refers to one provided with one or more teeth 55 in at least one plane of the plate.
【0078】 [0078]
方法Aは一般に、図12に示すように、ウエル作製具51の一部56が容器57の側面部58上などに配置され、歯の先端部59が容器底部に接触しないように配置する方法である。 Method A is generally as shown in FIG. 12, a portion 56 of the well producing device 51 is arranged such on the side surface portion 58 of the container 57, in a way that the teeth of the tip portion 59 is arranged so as not to contact the bottom of the container is there.
あるウエル作製具を用いて、方法Aにより、突起状ウエル導入部を有する電気泳動用ゲルを作製することができる。 Using some well prepared device, the method A, can be manufactured electrophoresis gels having a protruding well introduction. ウエル作製具は、上述のように、ウエルの型となる単数又は複数の歯を有する。 Well making device, as described above, having one or more teeth the type well. この歯が突起状ウエル導入部形成手段を有する。 The tooth has a projecting well introducing portion forming means. 突起状ウエル導入部形成手段は、ゲル作製時にゾル界面と接触し且つ接触したゾル界面を引き上げて、電気泳動用ゲルにウエルと共に、該ウエルよりもゲル表面側に該ゲル表面よりも突出して配置されるウエル導入部を形成するように、配置される。 Projecting the well inlet portion forming means, raising the sol surface in contact contact and a sol interface during gel manufacturing, with wells for electrophoresis gels, it protrudes from the gel surface to the gel surface side of the well located as to form the well inlet portion being is located. 突起状ウエル導入部形成手段は、歯の長手方向と直交する方向に突出する部分を少なくとも有するのがよい。 Projecting the well inlet portion forming means may have at least a portion projecting in a direction perpendicular to the longitudinal direction of the teeth.
【0079】 [0079]
このような突起状ウエル導入部形成手段を有するウエル作製具を用いて、次のように電気泳動用ゲルを作製することができる。 Using well manufactured tool having such a protruding well introducing portion forming means, can be manufactured gel for electrophoresis as follows. 即ち、この方法は、ウエル作製具をゲル作製用容器に、歯が容器内に入るように配置する配置工程;ゾル界面と突起状ウエル導入部形成手段とが接触し且つ該突起状ウエル導入部形成手段が接触したゾル界面を引き上げてゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部を形成するようなゾル量を、ゲル作製容器にゾルを注入する注入工程;ゾルをゲル化する工程;得られたゲルからウエル作製具を取り外してウエル及びゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部を形成する工程を有する。 That is, this method is a well prepared device to a gel prepared containers, tooth arrangement step to arrange to enter into the container; in contact with the sol surface and protruding well introducing portion forming means and the projecting Okoshijo well inlet portion a step of gelling the sol; forming means raising the sol surface in contact is a sol amount so as to form a well introduction portion protruding than the gel surface to the gel surface, implanting step of implanting sol gel produced container ; a step of forming a well introduction portion protruding than the gel surface to the wells and the gel surface to remove the well produced tool from the resulting gel.
ここで、配置工程において、ウエル作製具配置手段を用いるのがよい。 Here, in the arrangement step, it is preferable to use a well producing device positioning means. ウエル作製具配置手段は、該手段を自立させる自立手段、及びウエル作製具支持手段を有し、該支持手段は略平板であり且つ該平板に前記歯に対応する孔を有し、該孔を介してウエル作製具の歯がウエル作製用容器内に配置されるのがよい。 Well making tool locating means, autonomous means to self the means, and has a well producing device support means, said support means is a substantially flat plate and has a hole corresponding to the tooth to the flat plate and the holes it is preferable teeth well prepared instrument is placed in the well prepared for the container via.
【0080】 [0080]
一方、歯の先端部の方向を逆にした、即ち歯の先端部が容器の開口部側に配置される方法によっても本発明の電気泳動用ゲルを作製することができる。 On the other hand, it can also be prepared gel for electrophoresis of the present invention by a method in which the direction of the distal end portion of the tooth in the reverse, i.e. the tip of the tooth is disposed on the opening side of the container.
即ち、本発明のゲルの製造方法B(以下、単に「方法B」という場合がある)は、平面板部に突起した1つ又は複数の歯を有するヘッジホッグを準備する工程;底部と側面部を有する容器に、前記ヘッジホッグを平面板部が容器底部と接するように配置する工程;前記容器にアガロースゾルを入れて固めてアガロースゲルを得るゲル形成工程;前記アガロースゲルから前記ヘッジホッグを取り去りウエルが形成された電気泳動用ゲルを得る工程を有する。 That is, the production method B of the gel present invention (hereinafter, simply referred to as "Method B") comprises the steps of preparing a hedgehog with one or more teeth projecting in a planar plate portion; bottom and side portions deprived of the hedgehog from the agarose gel; get agarose gel to solidify put agarose sol the container gel formation process; the container having, the flat plate portion hedgehog is placing in contact with the container bottom a step of obtaining a gel for electrophoresis wells are formed. この場合、ゲル形成工程後、該ゲルを上下反転させて容器から取り出し、その後にヘッジホッグを取り去るのが都合がよい。 In this case, after the gel formation process, is taken out from the container is turned upside down the gel, it is convenient remove the hedgehog thereafter.
【0081】 [0081]
方法Bにおいて、ゲル形成工程におけるアガロースゾルの量は、該アガロースゾルの界面がヘッジホッグの歯の先端部を覆う、即ち該アガロースゾルの界面がヘッジホッグの歯の先端部よりも0.5mm、上部に配置されるように、アガロースゾルを入れるのがよい。 In method B, submitted amount of agarose sol in the gel formation step, the agarose surface of the sol covers the tip of the tooth of the hedgehog, i.e. 0.5mm from the tip portion of the tooth interface hedgehog of the agarose sol, as will be placed on top, it is put the agarose sol. このようにアガロースゾルを入れることにより、ウエルが貫通孔となるのを避け、ウエル底部からゲル底部までに0.5mmのゲルを設けることができる。 By thus placing the agarose sol, wells avoids the through holes, from the well bottom to bottom of the gel can be provided 0.5mm gel.
【0082】 [0082]
ウエル作製具、即ちコウム又はヘッジホッグの形状及び配置は、コウム又はヘッジホッグがウエルの鋳型として作用するため、上述のウエル形状及び配置と同様のものとするのがよい。 Well making tool, i.e. the shape and arrangement of the comb or hedgehog, since the comb or hedgehog acts as a template for the well, preferably set to the same as well the shape and the arrangement described above. 即ち、ウエル底部がコウム又はヘッジホッグの歯の先端部に対応し、ウエル開口部は方法Aの場合には歯の中間部又は方法Bの場合には歯と平板部との境に対応するように、コウム又はヘッジホッグの歯を設計するのがよい。 That is, as well bottom corresponds to the tip of the teeth of the comb or hedgehog, in the case of the well openings method A in the case of the intermediate portion or the method B of teeth corresponding to the boundary between the teeth and the flat plate portion a, it is preferable to design the teeth of combs or hedgehog. なお、ウエル導入部を設ける場合、ウエル導入部の開口部が方法Aの場合には歯の中間部又は方法Bの場合には歯と平板部との境に対応するように、コウム又はヘッジホッグの歯を設計するのがよい。 In the case of providing a well introduction, as in the case when the opening of the well inlet portion of Method A of the intermediate portion or method B of the teeth corresponds to the boundary between the teeth and the flat plate portion, comb or hedgehog it is preferable to design the teeth. なお、上述のウエル幅及びウエル長さを有するように、ウエル作製具の歯を設計することもできるが、該設計にはゾルの注入量が依存する場合がある。 Incidentally, to have a well width and the well length described above, it is also possible to design the teeth of wells producing device, in The set meter may depend injection amount of sol.
【0083】 [0083]
具体的には、コウム又はヘッジホッグの歯は、ウエルの鋳型として作用するため、上述のウエル幅及びウエル長さの規定に沿うように、設けるのがよい。 Specifically, the teeth of the comb or hedgehog, to act as a template for wells, along with the provisions of the well width and the well length above, preferably provided. また、ウエル底部及びウエル底部までのウエル側面に対応する箇所も、上述のウエル形状に沿うように設けるのがよい。 Also, portions corresponding to the wells sides until well bottom and the well bottom may be disposed along the well shape described above.
また、ウエルを複数有する場合には、該ウエルの配置に対応するように、複数の歯を配置するのがよい。 Further, when a plurality of the wells, so as to correspond to the arrangement of the well, it is preferable to arrange a plurality of teeth. 特に、複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置される場合、歯も正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 In particular, when a plurality of wells are arranged such that the position of the mating points of a square mesh, it is being arranged so the teeth also the position of the mating points of the square mesh. より詳細には、歯の先端部の面又は線の重心が各々が正方網目の交接点の位置となるように配置されるのがよい。 More specifically, it is preferable centroid plane or line of the tip of the tooth is disposed so that each is the position of the mating points of the square mesh. 複数のウエルが、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有する場合、歯もウエルに対応して、行8個×列12個を1単位とし該1単位を少なくとも有するのがよい。 A plurality of wells, when at least having the one unit to twelve rows of eight × columns as one unit, teeth corresponding to the well, and twelve rows of eight × columns as a unit of having at least the one unit good.
【0084】 [0084]
ウエル作製具、即ちコウム及びヘッジホッグは、1つ又は複数の歯を有し、該歯はア)略円柱状、略円錐状又は略円錐台状であるか、もしくはイ)略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であるのがよい。 Well making tool, i.e., comb and hedgehog has one or more teeth, tooth is a) a substantially cylindrical, or a substantially conical or substantially frustoconical, or b) a substantially quadrangular prism, substantially It may be between pyramidal or substantially truncated quadrangular pyramid shape.
歯がイ)略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状である場合、歯の先端部は、先端部となるほど細くなるように傾斜を有してもよい。 Teeth b) substantially quadrangular prism, when a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid-like, the tip of the tooth may have an inclination so thin as the tip. 例えば、図13に示すように、コウム60の歯61の先端部の傾斜は、(a)及び(b)に示すように、直線的であっても、(c)に示すように、曲線的であってもよい。 For example, as shown in FIG. 13, the inclination of the tip of the tooth 61 of the comb 60, as shown in (a) and (b), even linear, as shown in (c), curve it may be. また、先端部が、図13(b)及び(c)に示すように、面を有していても、図13(a)に示すように、面を有していなくてもよい。 The tip portion, as shown in FIG. 13 (b) and (c), have a surface, as shown in FIG. 13 (a), may not have a plane. このような傾斜を有することにより、ウエル作製具を取り去る際のハンドリングが容易となる。 By having such a slope, which facilitates handling when removing the well producing device.
さらに、歯は、突起状のウエル導入部の鋳型に相当する部分を有するのがよい。 Furthermore, the teeth may have a portion corresponding to the template of the protruding well introduction. 突起状ウエル導入部に相当する部分は、例えば、電気泳動用ゲル作製用ゾル、例えばアガロースゾルの表面張力を用いて形成することができる。 Portion corresponding to the protruding well introducing portion, for example, can be formed using electrophoresis gel prepared sol, the surface tension of, for example, agarose sol. 図14は、突起状ウエル導入部に相当する部分を形成するウエル作製具の歯62とそれによって作製されるウエル及び突起状ウエル導入部の模式図を示す。 Figure 14 shows a schematic diagram of a well and projecting well introducing portion made by it and the teeth 62 of the wells produced tool for forming a portion corresponding to the protruding well introduction. 図中、(b)は歯62の正面図、(a)は歯62の左側面図、(c)は頂面図、(d)は右側面図を示す。 In the figure, (b) is a front view of the tooth 62, (a) is a left side view of the teeth 62, (c) is a top view, showing the (d) are a right side view. また、(e)は、ウエル作製具の歯62を鋳型として最終的に形成されるウエル及びウエル導入部の模式図である。 Further, (e) is a schematic view of a well and the well inlet portion to be finally formed teeth 62 wells producing device as a template. ウエル作製具の歯62は、面63及び面64を有する。 Teeth 62 of the well producing device has a surface 63 and the surface 64. このような歯62を有するコウム又はヘッジホッグなどのウエル作製具を、その歯62の先端部が容器底部に接触しないように、容器に配置する。 Wells producing member such as a comb or a hedgehog with such teeth 62, the tip of the tooth 62 so as not to contact the bottom of the container, placing the container. 配置後、ゾルを注入する。 After placement, injecting the sol. この際、面63及び64とアガロースゾルとの間で表面張力が働き、最終的には(e)に示すウエル及び突起状ウエル導入部、特に突起部分66及び67が形成される。 At this time, working surface tension between the surfaces 63 and 64 and the agarose sol, wells and projecting well introducing portion shown in eventually (e), in particular the raised portion 66 and 67 are formed. そのコウム又はヘッジホッグなどのウエル作製具を取り外して電気泳動用ゲルが作製される。 Electrophoresis gel is manufactured by removing the well producing device, such as the combs, or hedgehog. なお、図14に示すウエル作製具は、単に例示であって、これに限定されない。 Incidentally, the well produced device shown in FIG. 14 is merely an example, not limited thereto.
【0085】 [0085]
コウムであって歯が略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状である場合、該四角柱、四角錐又は四角錐台の側面の1つが、作製されるアガロースゲル表面と垂直となるようにコウムを配置するのがよい。 Comb the A and teeth substantially square pole, when a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid shape, the quadrangular prism, one of the square pyramid or truncated pyramid aspect, the agarose gel surface perpendicular made it is preferable to place the comb so.
平面部及び該平面部片面上に歯を有するヘッジホッグの場合、歯の一側面が平面部片面と垂直になるように歯を設計するのがよい。 For hedgehog having teeth in the plane portion and the flat portion on one side, it is preferable to design the teeth as one side of the tooth is flat part one surface perpendicular. また、その一側面と正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満であるのがよい。 Moreover, one side surface and a square mesh is the angle between the parallel straight lines forms 0 ° than and less than 45 ° thereof, preferably 11 ° greater than less than 45 °, more preferably greater than 18 ° or 27 ° or less than 27 45 a is good is smaller than °. さらに、そのような一側面以外の面が先端側に細くなる傾斜面を有するのがよい。 Furthermore, may have an inclined surface which faces other than such one side becomes narrower distally. このような傾斜を有することにより、ウエル作製具であるヘッジホッグを取り去る際のハンドリングが容易となる。 By having such a slope, which facilitates handling when removing the hedgehog is well prepared tool.
【0086】 [0086]
ウエル作製具は一般に、ゲル作製用容器の側面部上に配置するか又は容器内に配置することができる。 Well prepared device generally can be placed in either or container arranged on a side surface of the gel produced container. また、ウエル作製具は、ゲル作製用容器の側面部上に配置する代りに、ウエル作製具が自立手段を有してもよい。 Moreover, the well produced tool, instead be placed on the side surface of the gel produced container, well manufactured device may have a free-standing unit. これにより、ゲル作製用容器の側面部の状態に関わらず、ウエル作製具を配置させることができる。 Thus, regardless of the state of the side surface of the gel produced container can be arranged a well prepared tool.
具体的には、ウエル作製具の自立手段は、例えば図15に示すような形態とすることができる。 Specifically, self-supporting means of the well producing device may be in the form shown in Figure 15, for example. 即ち、ウエル作製具がヘッジホッグ70の場合、自立手段72は、歯73よりも長い円柱状の足であり、この足を3本又は4本又はそれ以上備え、それらによってヘッジホッグを支える形態とすることができる。 That is, when the well producing device is Hedgehog 70, free-standing unit 72 is a long cylindrical leg than the tooth 73, with the foot three or four or more, and form by their supporting hedgehog can do. また、ウエル作製具の自立手段75は、図16に示すような、ヘッジホッグの歯80が挿入可能となる複数の孔76を一側面に有する四角筒の形態とすることができる、図16中、(a)−1は自立手段75の斜視図、(a)−2は自立手段75の断面図を示す。 Moreover, self-supporting unit 75 of the well producing device may be in the form of a rectangular tube having, as shown in FIG. 16, a plurality of holes 76 tooth 80 can be inserted hedgehog on one side, in FIG. 16 , (a) -1 is a perspective view of a self-supporting unit 75, (a) -2 shows a cross-sectional view of a self-supporting unit 75. また、(b)−1はヘッジホッグ78の斜視図、(b)−2は(b)−1で示すヘッジホッグ78を反転させたものの断面図を示す。 Also, a perspective view, (b) -2 is a sectional view but by inverting the hedgehog 78 shown in (b) -1 in (b) -1 Hedgehog 78. この四角筒形状の自立手段75は、例えば次のように用いることができる。 Freestanding unit 75 of the square tubular shape can be used, for example, as follows. 四角筒の自立手段75内部の底部にゲル作製用容器79を配置し、ヘッジホッグ78の各々の歯80が四角筒の各孔76に挿入するように、ヘッジホッグ78を配置する。 The gel produced container 79 arranged in self-supporting means 75 inside the bottom of the square tube, each tooth 80 of hedgehog 78 to be inserted into the holes 76 of the square tube, placing the hedgehog 78. その後、ゲル作製用容器79にゾル、例えばアガロースゾルを注入し、ヘッジホッグの歯が鋳型となるようにウエルを作製する。 Then, sol gel fabrication container 79, for example, agarose sol was injected, the teeth of hedgehog producing wells as a template.
【0087】 [0087]
本発明の電気泳動装置の製造方法は、上述によって調製された電気泳動用ゲルを所定の位置に配置させる工程を有する。 Method of manufacturing an electrophoretic device of the present invention includes the step of placing the gel for electrophoresis prepared by the above in place.
特に、本発明の電気泳動装置は、正方網目の交接点の位置となるように複数のウエルを電気泳動用ゲルに配置するウエル配置工程;及び前記正方網目が形成する直線と電気泳動の電界方向とのなす角度が0°より大きく45°未満、好ましくは11°より大きく45°未満、より好ましくは18°以上27°未満又は27より大きく45°未満となるように前記電気泳動用ゲルを配置するゲル配置工程;を有する。 In particular, the electrophoresis apparatus of the present invention, well disposing step for disposing a plurality of wells in the electrophoresis gel so that the position of the mating points of the square mesh; electric field direction of a straight line and electrophoresis and the tetragonal mesh to form and less than 45 ° from the angle of 0 ° with the, preferably 11 ° less than the greater 45 °, and more preferably disposing the gel for electrophoresis so that the 18 ° or greater and less than 27 ° or greater than 45 ° from the 27 gel arrangement step of; having.
【0088】 [0088]
ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、電界方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下、好ましくは1/4以下であるように各ウエルを形成するのがよい。 Has a well disposing step is well formation step, formed in the well formation step, following half well width is the distance between the most adjacent wells perpendicular to the electric field direction, each well as preferably is less than 1/4 it is preferable to.
また、ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、その開口部が略円状となるように形成するのがよい。 Also, a well arranged process a well forming step, in the well formation step, the shape of each well, preferably formed so that its opening is substantially circular. または、それに代わって、ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有するように、形成するのがよい。 Or, alternatively, a well arranged process a well forming step, in the well formation step, the shape of each well has a well bottom of a small area than the well opening, from the well opening to the well bottom the second surface is the inner wall surface, which is inclined at least a portion electrophoresis direction perpendicular to the first plane in the direction of electrophoresis side, and from the well opening and a second surface against the first surface toward the well bottom of the to have, preferably formed.
【0089】 [0089]
ウエル形成工程が、ウエル導入部とウエルとを形成する第1の工程を有し、前記ウエル導入部が前記ウエルよりも開口側に配置され、ウエル導入部の開口部がウエル形状の開口部よりも大面積であり、ウエル導入部が該ウエル導入部の開口部からウエル形状の開口部に傾斜した面を少なくとも一部に有するのがよい。 Well formation step has a first step of forming a well inlet portion and the well, the well inlet portion is disposed in the opening side of the well, opening the well inlet portion than the opening of the well-shaped also a large area, the well inlet portion may have at least a portion of the surface inclined to the opening part of a well-shaped from the opening of the well introduction.
ウエル形成工程が、第1の工程後に、ウエル導入部を削除する第2の工程を有するのがよい。 Well formation step, after the first step may have a second step to remove the well introduction. 特に、第1の工程後であって電気泳動用試料をウエルに注入した後に、ウエル導入部を削除する第2の工程を有するのがよい。 In particular, after injection into the first step after the A to wells of the sample for electrophoresis can include a second step to remove the well introduction.
【0090】 [0090]
<電気泳動結果解析方法> <Electrophoresis results analysis method>
本発明は、上記電気泳動用ゲルを用いて電気泳動を測定した結果を解析する方法も提供する。 The present invention also provides a method of analyzing the results of measurement of electrophoresis using the gel for electrophoresis.
本発明の電気泳動結果解析方法は、複数のウエルを有するゲルを用いた場合に生じる複数の電気泳動結果(レーン)がどのウエル(試料)によるものかを帰属させるステップA;及び各レーンでの電気泳動結果を解析するステップB;を提供する。 Electrophoresis result analysis method of the invention, step A attributing or not occur in the case of using a gel having a plurality of wells a plurality of electrophoresis results (lane) is by any well (sample); at and each lane providing; step B analyzing the electrophoresis results. ステップBは、ピーク位置を特定し分子量を特定する定性分析B−1と、その位置での物質量を特定する定量分析B−2とを提供することができる。 Step B may be provided with qualitative analysis B-1 that identifies the specified molecular weight peak position, and a quantitative analysis B-2 that identifies the amount of material at that location. さらに、定性分析及び定量分析はそれぞれ、概略的な分析結果と詳細な分析結果を提供することができる。 Furthermore, qualitative analysis and quantitative analysis, respectively, can provide an overview analysis results and detailed analysis.
【0091】 [0091]
<ステップA> <Step A>
ステップAは、複数のウエルを有する電気泳動用ゲル、特にMTP対応斜め配置ゲルに用いることができる。 Step A, the electrophoresis gels having a plurality of wells, in particular can be used for MTP corresponding obliquely disposed gel.
MTP対応斜め配置ゲルを用いて得られた泳動結果は、図24又は図25に示すように、ウエルとレーン(又はピークもしくはバンド)とが混在して観察され、即座にウエル及びレーンの帰属を特定することができない。 MTP corresponding oblique arrangement gel electrophoresis results obtained with, as shown in FIG. 24 or FIG. 25, is observed in a mixed well and the lane (or peak or band) is a real attribution of wells and lanes It can not be identified.
【0092】 [0092]
しかしながら、複数のウエルの帰属を特定できれば、それらのウエルによって得られるレーンも自ずと特定することができる。 However, if a particular attribution plurality of wells, it can also identify naturally lane obtained by the wells.
複数のウエルの特定には、前提として、複数のウエル配置を特定する工程がある。 Particular plurality of wells, assuming there is a step of identifying a plurality of wells arranged. 複数のウエル配置を特定しておけば、1つのウエル又は2以上のウエルを特定することで、複数のウエルを特定することができる。 Once you have identified a plurality of wells arranged, by identifying one well or two or more wells, it is possible to identify a plurality of wells.
次いで、レーン(又はピークもしくはバンド)の特定である。 Then, a particular lane (or peak or band). レーンの特定も、その前提として、泳動方向を特定する工程がある。 Lane also identified, as a precondition, there is a step of identifying the direction of electrophoresis. 泳動方向を特定し、ウエル配置を特定できれば、あるレーンがどのウエルに帰属するかを特定することができる。 Identify the direction of electrophoresis, if the particular wells disposed, it is possible to specify whether to belong to which well there lanes.
【0093】 [0093]
したがって、ステップAは、a)複数のウエルの配置の特定及び泳動方向の特定を行う前段階工程;b)1つのウエルを特定することにより前記複数のウエルの配置を特定する工程;及びc)b)工程によって得られたウエル配置と前記泳動方向より各レーンの帰属を特定する工程;を有する。 Thus, step A is, a) step process before performing certain specific and electrophoresis alignment of the plurality of wells; and c); step identifies the arrangement of said plurality of wells by identifying b) 1 single wells b) identifying a membership of each lane from the direction of electrophoresis and wells disposed obtained by step; having.
なお、ステップAのb)及びc)工程は、得られた電気泳動結果を画像として記録し、該画像を解析することによって行うこともできる。 Incidentally, Step A b) and c) step may be performed by recording the resulting electrophoresis as an image, analyzing the image.
【0094】 [0094]
上記のようにして特定されたウエル及びレーンの各々について、ステップBでは、定性分析及び/又は定量分析を行うことができる。 For each well and lanes identified as described above, in step B, it is possible to perform the qualitative analysis and / or quantitative analysis.
ステップBは、得られた電気泳動結果を画像として記録し、該画像を解析することによって定性分析及び/又は定量分析を行うのがよい。 Step B records the resulting electrophoresis as an image, may be carried out a qualitative analysis and / or quantitative analysis by analyzing the image.
即ち、ステップBは、a)電気泳動結果を電気泳動画像として取り込む工程;b)電気泳動画像においてウエル位置(即ち泳動開始点)、及び泳動位置を特定する工程;及びc)ウエル位置(泳動開始点)から泳動位置までの距離を分子量に換算することにより定性結果を得る工程;を有する。 That is, the step B comprises the steps capturing a) electrophoresis resulting electrophoretogram; well positioned in b) electrophoresis image (i.e. electrophoresis starting point), and a step of identifying the position of migration; and c) well location (migration start having; obtaining qualitative results by converting the distance to the migration position of molecular weight from the point). さらに、ステップBは、d)泳動位置での画像濃度に対応する物質量を得る工程を有するのがよい。 Further, step B can include a step of obtaining a substance amount corresponding to the image density d) electrophoretic position.
【0095】 [0095]
c)工程により、いわゆる定性分析を行うことができる。 The step c) can be carried out so-called qualitative analysis. また、d)工程により、いわゆる定量分析を行うことができる。 Further, d) by the process, it is possible to perform so-called quantitative analysis. これらの定性分析及び/又は定量分析は、概略的分析又は詳細分析のいずれかを行うことができる。 These qualitative analysis and / or quantitative analysis can be performed either schematic analysis or detailed analysis.
概略分析は、b)工程において、レーン幅及びレーン中心を求め、該レーン中心での泳動位置を特定することによって行う。 Summary analysis in b) step obtains the lane width and lane center, performed by specifying the position of migration in the lane center. 即ち、ウエル形状が円柱状の場合など、泳動ピーク又は泳動バンドは、レーン中心が対称軸となる三日月状のブロードなものとなることがある。 In other words, such as when the well shape is cylindrical, the electrophoretic peak or electrophoretic band, sometimes the lane center becomes a crescent-shaped broad as the symmetry axis. 詳細な定性分析及び定量分析を行う場合には、これらのブロードなものをすべて勘案するのがよいが、概略的な定性分析及び定量分析を行う場合には、レーン中心のピーク又はバンドのみを勘案するのがよい。 When performing a detailed qualitative analysis and quantitative analysis, but it is preferable to account everything that these broad, when performing a schematic qualitative analysis and quantitative analysis, taking into account only the peak or band in lane center it is preferable to.
【0096】 [0096]
b)工程において、泳動位置は、電気泳動画像をデジタル化したデジタル画像へと処理して特定するのが簡便である。 B) In step migration position, it is easy to identify by electrophoresis image was processed into digitized digital image. なお、デジタル画像の処理は、コンピュータで作動するアプリケーションを用いて行ってもよい。 The processing of the digital image may be performed using an application running on a computer.
c)工程の分子量換算も、同様に、コンピュータで作動するアプリケーションを用いるのが簡便である。 The molecular weight in terms of step c) likewise, it is convenient to use an application that operates on a computer.
d)工程において、画像濃度は、デジタル画像の所定の画素ごとの濃度を、その泳動位置毎に算出することによって、得ることができ、該画像濃度を該泳動位置での物質量として得ることができる。 In step d), the image density, the concentration of each predetermined pixel of the digital image, by calculating for each its migration position, can be obtained, to obtain the image density as the amount of substance in 該泳 turned position it can. この物質量は、相対量的に定量分析結果として用いることができる。 The amount of substance can be used as a result the relative amounts quantified analysis.
【0097】 [0097]
ステップA及びBの一態様を、図17〜図22に示すフローチャートを用いて、詳細に説明する。 Step one embodiment of A and B, with reference to the flowchart shown in FIGS. 17 to 22, it will be described in detail. なお、これらのフローチャートは、ステップA及びBを実行する一態様であって、本発明の解析方法はこれに限定されない。 Note that these flowcharts is one aspect to perform the steps A and B, the analysis method of the present invention is not limited thereto.
図17は、ステップBの各工程を全体的に説明するフローである。 Figure 17 is a flowchart illustrating the steps of step B as a whole. スタート後、まず、画像を記録するための照明を含む光学系装置の特性を予め測定する。 After the start, first, previously measured characteristics of the optical system device including the illumination for recording the images. 次いで、電気泳動結果を画像とするため撮影し、該画像をデジタル化する。 Then, electrophoresis results taken for the image, digitizes the image. 得られたデジタル画像を所望ならば補正し、次いでバンド又はピーク位置の特定及びその定量化を行う。 Digital image obtained by correcting, if desired, followed by a specific and quantification of the band or the peak position. 引き続き、これらの数値から定性分析及び/又は定量分析結果を解析し、解析結果を記録して終了する。 Subsequently analyzing the results qualitative analysis and / or quantitative analysis from these numbers, and ends recording the analysis result.
【0098】 [0098]
図18は、照明を含む光学系装置の特性を測定するフローを示す。 Figure 18 shows a flow for measuring the characteristics of the optical system device including the illumination. スタート後、蛍光プラスチック板をセットし、該プラスチック板を、電気泳動結果の撮影と同じ絞り値で、露出時間を変えながら撮影・記録する。 After the start, to set the fluorescent plastic plate, the plastic plate, in the same aperture value of the electrophoresis results shooting, shooting and recording while changing the exposure time. 得られた複数の画像の中心における画像濃度をy、各画素の濃度をx、として得られる関数を算出し、これを記録しておく。 The image density at the center of the resulting plurality of images y, the density of each pixel by calculating a function obtained x, as, keep track of it.
【0099】 [0099]
図19は、電気泳動結果の撮影とそのデジタル化等を示すフロー(その1)である。 Figure 19 is a flowchart showing the results of electrophoresis photographed and the digital, etc. (Part 1). ここでは主にウエル位置を特定するフローを示す。 Here shows a flow for identifying the main well position.
スタート後、白色光照明下で電気泳動結果を撮影する。 After starting to shoot the electrophoresis results under white light illumination. この際、ある1つのウエルを原点として記録するのがよい。 In this case, it is preferable to record a certain one well as the origin. 得られた画像をデジタル化してコンピュータ等に取り込む。 The resulting images are digitized incorporated into a computer or the like. 次いで、ユーザは、コンピュータ画面の電気泳動結果デジタル画像上で、MTPに対応したウエルマトリクスの対角の2ウエル又は四角の4ウエルの位置を指定する。 Then, the user on the results of electrophoresis digital image of the computer screen, specifies a second well or position of the 4 wells square diagonal well matrix corresponding to MTP. ウエル位置の指定は、少なくとも1つであり、好ましくは2つ以上であって、その数が多く且つ指定するウエル位置が離れている方が、次ステップのウエル位置推定に狂いが生じにくい。 Specifying the well location is at least one, preferably be two or more, those who are away well position where the number of number and to specify, deviation hardly occurs in the well location estimation follows steps.
上記ウエル位置を指定することによって、次ステップでは、残りのウエル推定位置がコンピュータ画面上に表示される。 By designating the well location, the next step, the remaining wells estimated position is displayed on the computer screen. ここで、画面を見たユーザは、位置に狂いがあると確認した場合、2ウエル又は4ウエルの指定をし直すか又は個別にウエル位置をコンピュータ画面上で修正する。 Here, the user viewing the screen and if it is confirmed that there is a deviation in position, 2 wells or 4, or separately re designated wells modifying the well position on the computer screen. 最終的にユーザが了承したウエル位置は、コンピュータ又は所望の記憶装置に記録される。 Finally well position the user acknowledge is recorded in a computer or a desired storage device.
【0100】 [0100]
図20及び図21は、電気泳動結果の撮影とそのデジタル化等を示すフロー(その2)及び(その3)である。 20 and 21 is an electrophoretic result photographing the flow shown the digital, etc. (2) and (3). スタート後、電気泳動結果であるバンドを蛍光発色させて電気泳動ゲルを撮影し、画像をデジタル化した後、該デジタル画像をコンピュータに取り込む。 After the start the shooting electrophoresis gel bands is an electrophoretic result by fluorescent, after digitizing the image, capturing the digital image to the computer. 次いで、ユーザ及びコンピュータアプリケーションの操作下、図19で記録したウエル位置(泳動原点)を基点として、レーンを表す線分が、コンピュータ画面の電気泳動結果デジタル画像上に表示される。 Then, the operation of a user and computer applications, as a base point the recorded wells located in FIG. 19 (migration origin), the line segment representing the lane is displayed on the electrophoresis result digital image on the computer screen. ここで、ユーザは、コンピュータ画面上で、レーン表示線分の角度を指定する。 Here, the user, on the computer screen to specify the angle of the lane display line. 角度指定後、画面に仮に表示されるレーン表示線分とユーザが観察したレーンとの位置に狂いがあれば、角度を指定し直すか又は個別にウエル位置及び/もしくは角度を修正する。 After the angle specified, if there is deviation in the position of the lane if the lane display line and the user to be displayed and observed on the screen, do or separately re-specify the angle to correct the well position and / or angle. 最終的にユーザが了承した角度は、コンピュータ又は所望の記憶装置に記録される。 Final angle by the user acknowledge is recorded in a computer or a desired storage device.
【0101】 [0101]
レーン角度の決定後、ユーザ及びコンピュータアプリケーションの操作下、レーン幅と長さを示す長方形が、コンピュータ画面の電気泳動結果デジタル画像上に表示される。 After determining the lane angle, the operation of a user and a computer application, a rectangle indicating the lane width and length, are displayed on the electrophoresis result digital image on the computer screen. ユーザは、マウスなどによって、レーン幅及び長さ(長方形の幅及び長さ)を修正する。 User, such as by a mouse, to modify the lane width and length (width and length of the rectangle). 修正は、レーン毎に個別に行うことができる。 Modifications can be made individually for each lane. また、ウエル位置及び/又はレーン角度の微細な修正も行うことができる。 Also it is carried out well location and / or lanes angle fine modification. ユーザが、最終的に了承した全ての長方形は、全てのウエル位置(開始点)、レーン中心線、角度、レーン幅、及びレーン長さとして、コンピュータ又は所望の記憶装置に記録される。 User, all rectangles that finally approved, all the wells position (starting point), lanes centerline, the angle, lane width, and the lane length, are recorded in a computer or a desired storage device.
【0102】 [0102]
図22は、図17〜図21で得られた各レーンのデジタル画像から最終的な電気泳動の解析結果である定性分析結果及び/又は定量分析結果が得られることを説明するフローである。 Figure 22 is a flowchart illustrating that qualitative analysis result is an analysis result of the final electrophoretic from each lane of the digital images obtained in 17 to 21 and / or quantitative analysis results.
スタート後、電気泳動結果であるバンド形状を確定する。 After the start, to determine the band shape is an electrophoresis result. その後、レーン中心線とその横方向(遠軸)にある画素の関係を把握する。 Then, to understand the relationship of a pixel in the lane centerline and in the transverse direction (far axis). 「把握」は、ユーザの作業下、もしくはコンピュータ又はコンピュータソフトの作業下、行われる。 "Grasp" is working under the user, or the work of a computer or computer software, are carried out.
レーン中心線の方向で画像をスキャニングし、バックグラウンドを決定し且つピークを検出してそれらのデータはコンピュータ又は所望の記憶装置に記録されると共に、データをコンピュータ画面上に表示される。 Scanning the image in the direction of the lane center line, with and detect and peak to determine the background those data are recorded in a computer or a desired storage device and display data on the computer screen. 表示された結果を基に、バンド成分の抽出とノイズ部の切り落としを行い、それらのデータは、再度コンピュータ又は所望の記憶装置に記録されると共に、データをコンピュータ画面上に表示される。 Based on the results displayed, perform cut off extraction and noise of the band components, their data, while being recorded on a computer again or desired storage devices, displays data on the computer screen. 複数のウエルに、1又は2以上の内部標準試料(分子量が既知であって、試料質量も既知)を入れることにより、分子量及び質量についての検量を行うことができる。 A plurality of wells, (a molecular weight is known, the sample mass is also known) one or more internal standard sample by putting, it is possible to perform a calibration of the molecular weight and mass. これに検量値に基づいて各バンドの分子量及び/又は質量を算出する、即ち定性分析及び/又は定量分析を行うことができる。 Calculating the molecular weight and / or mass of each band based on a calibration value to, i.e. it is possible to perform qualitative analysis and / or quantitative analysis.
【0103】 [0103]
【実施例】 【Example】
以下、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。 Hereinafter is a description of specifics of the present invention with reference to examples, the present invention is not limited by the examples.
【0104】 [0104]
(実施例1) (Example 1)
<開口部円形ゲルでの電気泳動> <Electrophoresis opening circular Gel>
6×10cm寸法のアガロースゲルの端部にウエルを設けた。 It provided well on the end of the agarose gel 6 × 10 cm dimensions. なお、ウエルの開口部は径0.8mmの円形であり且つウエルはほぼ円柱状であった。 Incidentally, and well a circular opening diameter 0.8mm wells was approximately cylindrical.
得られたウエルに試料を配置し、該ゲルをアドバンス社製電気泳動装置ミューピッドを用いて電圧50V、90分間、泳動を行った。 Samples were placed into the resulting wells, voltage 50 V, 90 minutes the gel using Advance Co. electrophoresis apparatus Myupiddo were electrophoresed. その結果を図3に示す。 The results are shown in Figure 3.
【0105】 [0105]
(従来例1) (Conventional Example 1)
また、ウエル形状が、次のように異なる他は、実施例1と同様に電気泳動を行った。 Moreover, the well shape, except that different as follows, was subjected to the same electrophoresis as in Example 1. 即ち、従来例1は、ウエル開口部が泳動方向と直交する長辺4mmと泳動方向と平行な短辺1mmを有する長方形(4mm×1mm)でありウエルが略直方体状(深さ約5mm)であるウエルを設けた。 That is, the conventional example 1, a rectangular (4mm × 1mm) and are well a substantially rectangular parallelepiped shape (depth of about 5mm) having long sides 4mm and electrophoresis direction parallel to the short sides 1mm to well opening perpendicular to the direction of electrophoresis It provided with a certain well. その結果を図3(b)に示す。 The results are shown in FIG. 3 (b).
【0106】 [0106]
実施例1の電気泳動結果(図3(a))と従来例1の電気泳動結果(図3(b))とを比較すると、双方共に、同じ泳動位置にピークを有することがわかる。 Comparing electrophoresis results of Example 1 (FIG. 3 (a)) of the conventional example 1 of the electrophoresis results (FIG. 3 (b)), in both found to have a peak at the same migration position.
したがって、本発明のウエル形状を有しても従来と同様の泳動結果が得られることがわかる。 Therefore, it is understood that even a well shape similar to the conventional electrophoresis results of the present invention can be obtained.
また、実施例1の電気泳動結果から、電気泳動レーン幅が約0.8mmであることがわかる。 Also, from the electrophoresis results of Example 1, it can be seen that the electrophoretic lane width is about 0.8 mm. 一方、従来例の電気泳動レーンは約4mmであった。 On the other hand, it electrophoresis lanes in the conventional example was about 4 mm. 即ち、開口部が径0.8mmの円柱状ウエル(実施例1)を用いることにより、その電気泳動レーン幅を従来よりも狭くセッティングできることが分かる。 That is, by using a cylindrical well openings diameter 0.8 mm (Example 1), it can be seen that the electrophoretic lane width can be made narrower setting than the conventional.
【0107】 [0107]
(実施例2) (Example 2)
<ウエル導入部を設けた電気泳動用ゲルの調製とそれによる電気泳動測定> <Preparation of gel for electrophoresis having a well inlet portion and the electrophoretic measurement by it>
ウエル導入部を設けた以外、実施例1と同様のウエルを設け、電気泳動を行った。 Except having a well introduction, the same wells as in Example 1 provided and subjected to electrophoresis.
ウエル導入部31は、図6に示すように、実施例1で形成したウエル35の開口部側(ゲル表面側)に設けられる。 Well introduction portion 31, as shown in FIG. 6, is provided on the opening side of the well 35 formed in Example 1 (gel surface side). ウエル導入部31は、略円錐台状であり、ウエルへと試料を導くように傾斜を有していた。 Well introduction portion 31 has a substantially truncated cone shape, and had a slope to guide the sample to the wells. また、ウエル導入部31は、その開口部33が径3mmであり且つウエル開口部34(径約0.8mm)よりも大面積であった。 Moreover, the well introduction portion 31 was larger area than the opening 33 is the diameter 3mm and the well opening 34 (diameter: about 0.8 mm).
電気泳動を行った結果、実施例1と同様の結果を得た。 Result of electrophoresis, were obtained similar results to those in Example 1.
この結果から、ウエル導入部の有無によっては、電気泳動結果に影響を及ぼさないことがわかる。 From this result, depending on the presence or absence of well introduction, it can be seen that does not affect the electrophoresis results. また、ウエルに試料を導入する際、実施例1のウエルに試料を導入するよりも、大口径のウエル導入部に試料を導入するため、試料導入のハンドリングが容易であった。 Further, when introducing the sample into the wells, rather than introducing a sample into the well of the first embodiment, for introducing a sample into the well inlet portion of large diameter, it was easy handling sample introduction. なお、試料注入に際して、ウエルのみならずウエル導入部にまで試料を注入した場合、ウエル導入部開口部と同じ径を有するゴースト像を生じることがあった。 Note that when the sample injection, when the sample is injected to the well inlet portion not well only, there may occur a ghost image having the same diameter as the well inlet opening.
【0108】 [0108]
(実施例3) (Example 3)
<ウエル導入部を設けた電気泳動用ゲルの調製とそれによる電気泳動測定> <Preparation of gel for electrophoresis having a well inlet portion and the electrophoretic measurement by it>
試料をウエルに導入した後、ウエル導入部を除く工程を設けた以外、実施例2と同様に、電気泳動を行った。 After a sample is introduced into the wells, except for providing the step of removing the well inlet portion, in the same manner as in Example 2 was subjected to electrophoresis.
即ち、ウエル導入部を、図8に示すように、スクレーパで取り除いた。 That is, the well inlet portion, as shown in FIG. 8, was removed by the scraper. これにより、ウエル導入部にまで充填された電気泳動用試料を取り除くことができた。 Thus, it was possible to remove the electrophoresis sample filled up to the well inlet portion.
【0109】 [0109]
電気泳動を行った結果、実施例1と同様の結果を得た。 Result of electrophoresis, were obtained similar results to those in Example 1.
この結果から、ウエル導入部の設置及びその削除によっては、電気泳動結果に影響を及ぼさないことがわかる。 This result, in dusty and remove its well introduction, it can be seen that does not affect the electrophoresis results. また、ウエルに試料を導入する際、実施例1のウエルに試料を導入するよりも、大口径のウエル導入部に試料を導入するため、試料導入のハンドリングが容易であった。 Further, when introducing the sample into the wells, rather than introducing a sample into the well of the first embodiment, for introducing a sample into the well inlet portion of large diameter, it was easy handling sample introduction.
なお、実施例2でときどき観察されたゴースト像は全く観察されなかった。 Note that the ghost image that is sometimes observed in Example 2 was observed. したがって、実施例2のゴースト像は、ウエル導入部にまで注入された試料によるものと分かると共に、実施例3のウエル導入部削除により、そのようなゴースト像の発生を抑えられることがわかる。 Therefore, a ghost image of the second embodiment, together with the prove by injected sample to the well inlet part, by the well inlet end cut of Example 3, it can be seen that suppress the generation of such a ghost image.
【0110】 [0110]
(実施例4) (Example 4)
<突起状ウエル導入部を設けた電気泳動用ゲルの調製とそれによる電気泳動測定> <Preparation of gel for electrophoresis provided with a protruding well inlet portion and its electrophoretic measurement>
それぞれの歯が、図14に示す形状を有するコウム(ウエル作製具)を調製した。 Each tooth was prepared comb (well prepared tool) having a shape shown in FIG. 14. それぞれの歯は、図14に示すように、ウエル形状に相当する先端形状65;ウエル導入部形状に相当する形状又は面64;及び突起状ウエル導入部形成手段63及び64を有した。 Each tooth, as shown in FIG. 14, the distal end shape 65 that corresponds to the well shape, had a and projecting the well inlet portion forming means 63 and 64; shape or surface 64 which corresponds to the well inlet portion shape.
このコウムを用いて電気泳動用ゲルを調製した。 The gel for electrophoresis was prepared using this comb. コウムの歯が容器内に入るように、例えば図12に示すように、ゲル調製用容器にコウムを配置し、アガロースゾルを容器内に注入した。 As the teeth of the comb enter into the container, for example, as shown in FIG. 12, to place the comb into a container for gel preparation was injected agarose sol into the container. ゾル注入の際、ゾル界面が突起状ウエル導入部形成手段63及び64の位置まで達し且つ該ゾルの表面張力によって突起状のウエル導入部が形成されるように、注入するゾル量を制御した。 During the sol injection, as well introduction portion protruding through and surface tension of the sol reached the position of the sol surface is protruding well introducing portion forming means 63 and 64 are formed and controlled sol amount to be injected. 具体的には、図14(e)に示す状態となるまで、ゾルを注入し、その状態でゲル化を行い、傾斜面を含む突起状ウエル導入部66及び67、並びにウエル68を有する電気泳動用ゲル69(G−1)を形成した。 Specifically, until the state shown in FIG. 14 (e), the sol is injected, it performs gelled in that state, electrophoresis with protruding well inlet portion 66 and 67 and the well 68, includes an inclined surface use gel 69 (G-1) was formed.
コントロールとして、図13で示すような、くさび型の断面を有するウエルを有する電気泳動用ゲルG−2を用いた。 As a control, as shown in Figure 13, using an electrophoretic gel G-2 having a well with a wedge-shaped cross section.
電気泳動用ゲルG−1及びG−2の各ウエルに、DNA3×10 −2 cm を注入し、該ゲルをアドバンス社製電気泳動装置ミューピッドを用い、バッファ:TBA、電圧50V、90分間、泳動を行った。 To each well of an electrophoretic gel G-1 and G-2, injected DNA3 × 10 -2 cm 3, using the Advance Co. electrophoresis apparatus Myupiddo The gel buffer: TBA, voltage 50 V, 90 minutes, It was carried out electrophoresis. その結果を図23に示す。 The results are shown in Figure 23. 図23中、左がG−1(突起部あり)を用いた電気泳動結果、左がG−2(突起部なし)を用いた電気泳動結果である。 In Figure 23, the left G-1 (Yes protrusions) electrophoresis results using an electrophoretic result of using left G-2 (without protrusions). それぞれのレーンには同質量のDNAをアプライした。 Each lane was applied the same mass of DNA. ただし、G−1もG−2も、左から右へのレーンに移るにつれてアプライする体積を大きくした。 However, G-1 also G-2 was also increased in volume to apply as moves to the lane from left to right.
電気泳動用ゲルG−1を用いた場合、試料導入などのハンドリングは容易に行うことができた。 When using an electrophoretic gel G-1, the handling of such sample introduction could be easily performed. 図23のG−1(左、突起部あり)は、G−2(右、突起部なし)と比較して鮮明な泳動結果を示している。 G-1 (left, there protrusions) of FIG. 23, as compared to G-2 (the right, without protrusions) shows a clear electrophoretic results. これは、突起状ウエル導入部にまで試料を注入し、電気泳動を行ったとしても、その試料は、上記[0061]段落の後段で記載したように、ゲルを越えて電気泳動用バッファに散逸するため、ゴースト像が発生しない(図24を参照のこと)ものと考えられる。 This sample was poured to a protruding well introduction, even subjected to electrophoresis, the sample is the [0061] As described in a subsequent paragraph, dissipated electrophoresis buffer beyond the gel to ghost image is not generated (see FIG. 24) is considered.
【0111】 [0111]
(実施例5) (Example 5)
図2に示すような、複数のウエルが正方網目の交接点の位置に配置される電気泳動用ゲルを用いて電気泳動を行った。 As shown in FIG. 2, a plurality of wells were subjected to electrophoresis using a gel for electrophoresis which will be disposed in mating point of the square mesh. なお、ウエルの形状は、実施例1と同様に、ウエルの開口部は径0.8mmの円形であり且つウエルはほぼ円柱状であった。 The shape of the well, as in Example 1, and the well is circular openings diameter 0.8mm wells was approximately cylindrical.
得られたウエルに試料を配置し、該ゲルをアドバンス社製電気泳動装置ミューピッドを用いて電圧50V、90分間、泳動を行った。 Samples were placed into the resulting wells, voltage 50 V, 90 minutes the gel using Advance Co. electrophoresis apparatus Myupiddo were electrophoresed. その結果を図23及び図24に示す。 The results are shown in FIGS. 23 and 24. なお、図24は図23の拡大図であり、泳動方向は、図2とは異なり、左下から右上方向であった。 Note that FIG. 24 is an enlarged view of FIG. 23, the direction of electrophoresis, unlike FIG. 2, was the upper right direction from the lower left.
図24及び図25から、各泳動レーンが交錯していないことがわかる。 Figures 24 and 25, it can be seen that each migration lane is not crossed. また、これらの結果を上述の電気泳動解析方法により解析し、多数の試料に関しての解析をすることができた。 Furthermore, these results were analyzed by electrophoretic analysis method described above, it was possible to analyze with respect to large numbers of samples. 本実施例により、一回の電気泳動測定を用いて、複数、特にMTPに対応する数の試料の電気泳動結果を得ることができた。 According to this embodiment, using electrophoresis measurements once more, in particular could be obtained results of electrophoresis of the number of samples corresponding to the MTP.
【0112】 [0112]
【発明の効果】 【Effect of the invention】
本発明により、従来存在する課題を解決することができる。 The present invention makes it possible to solve the problems conventionally present.
具体的には、本発明により、電気泳動用試料を容易に注入することができる電気泳動用ゲル、電気泳動装置、及びそれらの製造方法、並びに電気泳動用ゲルのウエル作製具を提供することにある。 Specifically, the present invention, an electrophoretic gel electrophoresis sample can be easily injected, electrophoresis apparatus, and method of manufacturing thereof, and to provide a well producing device of gel for electrophoresis is there.
【0113】 [0113]
また、本発明により、上記効果に加えて、又は上記効果の他に、MTPの各マイクロタイタ位置に相当する複数のウエルを有し且つ十分な有効電気泳動距離(有効レーン長)を確保する電気泳動用ゲル及び電気泳動装置、並びにそれらの製造方法を提供することができる。 Further, the present invention, in addition to the above effects, or in addition to the above effects, electrical to secure and sufficient effective electrophoretic distance has a plurality of wells corresponding to each microtiter position of MTP (valid lane length) electrophoresis gel and an electrophoresis apparatus, and methods for their preparation can be provided.
さらに、本発明により、上記効果に加えて、又は上記効果の他に、上記電気泳動用ゲルを用いて得られた電気泳動の結果を解析する方法を提供することができ。 Furthermore, the present invention, in addition to the above effects, or in addition to the above effects, it is possible to provide a method of analyzing the results of electrophoresis obtained by using the gel for electrophoresis.
【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
【図1】従来のウエル形状を有する電気泳動用ゲルを示す図である。 1 is a diagram showing the electrophoresis gel with the conventional well-shaped.
【図2】本発明の斜め配置ゲルの一態様を示す図である。 Is a diagram illustrating an embodiment of the oblique arrangement gel of the present invention; FIG.
【図3】本発明のウエル(φ=0.8mmウエル)と従来のウエルとをそれぞれ用いた電気泳動結果を示す図である。 [Figure 3] of the present invention well (phi = 0.8 mm well) and conventional wells and to a diagram showing the electrophoresis results using respectively.
【図4】本発明のウエル形状の一態様を示す図である。 Is a diagram illustrating an embodiment of a well shape of the present invention; FIG.
【図5】本発明のウエル形状の一態様を示す図である。 5 is a diagram illustrating an embodiment of the wells shape of the present invention.
【図6】本発明のウエル形状及びウエル導入部の一態様を示す図である。 6 is a diagram illustrating an embodiment of the well shape and well introductory part of the present invention.
【図7】本発明のウエル形状及びウエル導入部の一態様を示す図である。 7 is a diagram illustrating an embodiment of the well shape and well introductory part of the present invention.
【図8】本発明のウエル導入部を取除く手法の一態様を示す図である。 Is a diagram illustrating an embodiment of a method of removing the well introductory part of the present invention; FIG.
【図9】本発明のウエル及びウエル注入法の一態様を示す図である。 9 is a diagram illustrating an embodiment of the well and the well injection method of the present invention.
【図10】本発明における「コウム」を説明する概念図である。 Is a conceptual diagram illustrating a "comb" in the present invention; FIG.
【図11】本発明における「ヘッジホッグ」を説明する概念図である。 11 is a conceptual diagram illustrating the "hedgehog" in the present invention.
【図12】本発明における「コウム」などのウエル作製具を用いてウエルを作製する方法を説明する概念図である。 It is a conceptual diagram illustrating a method of producing a well with a well prepared tool such as a "comb" in the present invention; FIG.
【図13】本発明のウエル作製具の一態様を示す図である。 13 is a diagram illustrating an embodiment of a well producing device of the present invention.
【図14】本発明の、突起状ウエル導入部を作製するウエル作製具の一態様を示す図である。 [Figure 14] of the present invention, is a diagram illustrating an embodiment of the wells produced tool making protruding well introduction.
【図15】本発明のウエル作製具の自立手段の一態様を示す図である。 Is a diagram illustrating an embodiment of a self-supporting means of the well producing device of the present invention; FIG.
【図16】本発明のウエル作製具の自立手段の一態様を示す図である。 16 is a diagram illustrating an embodiment of a self-supporting means of the well producing device of the present invention.
【図17】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 17 is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis methods of the present invention.
【図18】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 18 is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis methods of the present invention.
【図19】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 19 is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis methods of the present invention.
【図20】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 It is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis method of Figure 20 the present invention.
【図21】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 21 is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis methods of the present invention.
【図22】本発明の電気泳動結果解析法の一態様を説明する図である。 22 is a diagram illustrating one embodiment of the electrophoresis result analysis methods of the present invention.
【図23】本発明の実施例4で得られた電気泳動結果を示す図である。 23 is a diagram showing the electrophoresis results obtained in Example 4 of the present invention.
【図24】本発明の電気泳動用ゲルを用いた場合に得られた電気泳動結果の一態様を示す図である。 24 is a diagram illustrating an embodiment of the electrophoresis results obtained when using the gel for electrophoresis of the present invention.
【図25】図24の拡大図である。 Is an enlarged view of FIG. 25] FIG. 24.

Claims (45)

  1. 複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置され、ホリゾンタル設置されるスラブ型電気泳動用ゲルを備える電気泳動装置であって、前記正方網目が形成する平行直線と電気泳動の電界方向とのなす角度が0°より大きく45°未満となるように前記電気泳動用ゲルを配置してなる電気泳動装置。 A plurality of wells are arranged such that the position of the mating points of a square mesh, provides an electrophoretic device comprising a slab-type electrophoresis gels Horizontal installation, the electric field of parallel straight lines and electrophoresis the square meshes formed electrophoresis apparatus is the angle between the direction formed by placing the electrophoresis gel so that the 0 ° than and less than 45 °.
  2. 前記ウエルは、前記電界方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下である請求項1記載の電気泳動装置。 The wells, wells width perpendicular to the direction of the electric field electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein less than half of the distance between nearest neighbor wells.
  3. 前記ウエル幅が、ウエルの電界方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短い請求項2記載の電気泳動装置。 The well width is electrophoretic device short claim 2 than parallel wells length and direction of the electric field equal to or wells length of the well.
  4. 前記ウエルの各々の形状は、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有する請求項1〜3のいずれか1項記載の電気泳動装置。 Each of the shape of the well has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, electrophoresis direction perpendicular to the first plane in the electrophoresis direction, and the the first surface and against the electrophoresis apparatus of any one of claims 1 to 3 having a second surface at least partially inclined toward the second surface is a by well bottom from the well opening.
  5. 第1の開口部及び第2の開口部を有する貫通孔を備えるサンプルアプリケータであって、前記第1の開口部がウエルの開口部に対応し、前記第2の開口部が前記第1の開口部よりも大面積であるサンプルアプリケータをさらに備える請求項1〜4のいずれか1項記載の装置。 A sample applicator comprising a through-hole having a first opening and a second opening, said first opening corresponding to the opening of the well, the second opening is the first the apparatus of any one of claims 1 to 4 than the opening further comprises a sample applicator is a large area.
  6. 電気泳動の際の迷電流を抑制する泳動迷電流抑制板を前記泳動用ゲルの上及び/又は下に備える請求項1〜5のいずれか1項記載の装置。 The apparatus of any one of claims 1 to 5. 迷電 flow suppressing migration 迷電 flow suppressing plate provided above and / or below the electrophoresis gel during electrophoresis.
  7. 複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置される電気泳動用ゲルであって、ウエルは、泳動方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/4以下である電気泳動用ゲル。 A gel for electrophoresis in which a plurality of wells are arranged such that the position of the mating points of a square mesh, wells, wells width perpendicular to the direction of electrophoresis is 1/4 or less of the distance between the most adjacent wells electric electrophoresis gel.
  8. 前記ウエル幅が、ウエルの泳動方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短い請求項7記載の電気泳動用ゲル。 The well width is, wells of the electrophoresis direction parallel to the well length and equal to or well length shorter claim 7, wherein the electrophoresis gel than.
  9. 前記ウエルの開口部側に、該開口部よりも大面積のウエル導入部開口を有するウエル導入部を備える請求項7又は8記載の電気泳動用ゲル。 On the opening side of the well, according to claim 7 or 8, wherein the gel for electrophoresis comprising a well inlet portion having a well inlet opening of larger area than the opening.
  10. 前記ウエル導入部が、円錐台状又は角錐状である請求項9記載の電気泳動用ゲル。 The well inlet section, truncated cone or pyramid at which claim 9, wherein the electrophoresis gel.
  11. 前記ウエル導入部が、前記電気泳動用ゲル表面よりも突出して配置される請求項10記載の電気泳動用ゲル。 The well inlet section, according to claim 10, wherein the electrophoresis gel disposed protrudes from the electrophoretic gel surface.
  12. ウエルは、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有する形状を有する電気泳動用ゲル。 Wells has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the well bottom, electrophoresis direction perpendicular to the first plane in the electrophoresis direction, and the first plane and gel for electrophoresis having a shape having a second surface inclined at least partially toward the well bottom from the well opening a second face against.
  13. 前記電気泳動用ゲルはウエルを複数有し、該複数のウエルが正方網目の交接点の位置となるように配置される請求項12記載の電気泳動用ゲル。 The gel for electrophoresis comprises a plurality of wells, the plurality of wells according to claim 12, wherein the electrophoresis gel is arranged so that the position of the mating points of the square mesh.
  14. 前記ウエルは、泳動方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/4以下である請求項12又は13記載の電気泳動用ゲル。 The wells claim 12 or 13, wherein the electrophoresis gel wells width perpendicular to the direction of electrophoresis is 1/4 or less of the distance between nearest neighbor wells.
  15. 前記ウエル幅が、ウエルの泳動方向と平行なウエル長さと等しいか又はウエル長さよりも短い請求項14記載の電気泳動用ゲル。 The well width is, wells of the electrophoresis direction parallel to the well length and equal to or well length shorter claim 14, wherein the electrophoresis gel than.
  16. 前記ウエルの開口部側に、該開口部よりも大面積のウエル導入部開口を有するウエル導入部を備える請求項12〜15のいずれか1項記載の電気泳動用ゲル。 Wherein on the opening side of the well, any one of claims electrophoretic gel of claim 12 to 15 comprising a well inlet portion having a well inlet opening of larger area than the opening.
  17. 前記ウエル導入部が、円錐台状又は角錐台状である請求項16記載の電気泳動用ゲル。 The well inlet section, truncated cone or truncated pyramid at which claim 16, wherein the electrophoresis gel.
  18. 前記ウエル導入部が、前記電気泳動用ゲル表面よりも突出して配置される請求項17記載の電気泳動用ゲル。 The well inlet portion, claim 17 of the electrophoresis gel that is disposed to protrude from the electrophoretic gel surface.
  19. 請求項7〜請求項18のいずれか1項記載の電気泳動用ゲルを作製するためのウエル作製具。 Well making device for making a gel for electrophoresis according to any one of claims 7 to claim 18.
  20. 電気泳動用ゲルにウエルを作製するウエル作製具であって、該ウエル作製具が前記ウエルの型となる複数の歯を有し、前記歯の各々が略円柱状、略円錐状又は略円錐台状であるか、もしくは略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であり、各々の歯の幅が隣接する歯間距離の1/2以下であるウエル作製具。 A well prepared tool for making wells for electrophoresis gels having a plurality of teeth that the well produced instrument is a type of the well, the teeth each substantially cylindrical, substantially conical or substantially frustoconical Jo at either, or substantially square pole, a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid-like, well prepared instrument is 1/2 or less of the tooth distance between the width of each tooth is adjacent.
  21. 電気泳動用ゲルにウエルを作製するウエル作製具であって、該ウエル作製具が前記ウエルの型となる単数又は複数の歯を有し、前記歯が突起状ウエル導入部形成手段を有し、該突起状ウエル導入部形成手段は、ゲル作製時にゾル界面と接触し且つ接触したゾル界面を引き上げて、電気泳動用ゲルに前記ウエルと共に、該ウエルよりもゲル表面側に該ゲル表面よりも突出して配置されるウエル導入部を形成するウエル作製具。 A well prepared tool for making wells for electrophoresis gels, have one or more teeth the well prepared instrument is a type of the well, the tooth has a projecting well introducing portion forming means, projecting Okoshijo well introducing portion forming means, raising the sol surface in contact and in contact with the sol interface during gel manufacturing, together with the wells for electrophoresis gels, projecting than the gel surface to the gel surface side of the well wells producing device for forming the well inlet portion disposed Te.
  22. 前記突起状ウエル導入部形成手段は、前記歯の長手方向と直交する方向に突出する部分を少なくとも有する請求項21記載のウエル作製具。 The protruded well introducing portion forming means, well prepared device according to claim 21, further comprising at least a portion projecting in a direction orthogonal to the longitudinal direction of the teeth.
  23. 前記ウエル作製具が略平板と複数の歯を有し、該歯は、前記平板に対して歯の長手方向が略垂直となるように配置される請求項21又は22記載のウエル作製具。 The well produced device has a substantially flat plate and a plurality of teeth, teeth are well prepared device according to claim 21 or 22, wherein the longitudinal direction of the teeth are arranged substantially perpendicular to the flat plate.
  24. 前記ウエル作製具が複数の歯を有し、該複数の歯が正方網目の交接点の位置となるように配置される請求項21〜23のいずれか1項記載のウエル作製具。 The well produced device has a plurality of teeth, the well produced device according to any one of claims 21 to 23 teeth of the plurality of are arranged such that the position of the mating points of the square mesh.
  25. 前記複数の歯が前記略平板と垂直な一側面を有し、該一側面と前記正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°よりも大きく45°未満である請求項24項記載のウエル作製具。 Wherein the plurality of teeth have the substantially flat and perpendicular to one aspect, according to claim 24 wherein wherein the angle between the straight line parallel to the tetragonal mesh with said one side surface is formed is greater than 45 ° than 0 ° well made instrument.
  26. 請求項21〜25のいずれか1項記載のウエル作製具をゲル作製容器に、歯が容器内に入るように配置する配置工程;ゾル界面と前記突起状ウエル導入部形成手段とが接触し且つ該突起状ウエル導入部形成手段が接触したゾル界面を引き上げてゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部を形成するようなゾル量を、前記ゲル作製容器にゾルを注入する注入工程;前記ゾルをゲル化する工程;得られたゲルからウエル作製具を取り外してウエル及びゲル表面側に該ゲル表面よりも突出するウエル導入部を形成する工程を有する電気泳動用ゲルの作製方法。 Gel Preparation vessel wells producing device according to any one of claims 21 to 25, disposing step arranged such teeth into the containers; sol interface between the protruding well introducing portion forming means and the contacts and sol amount so as to form a well introduction portion protruding than the gel surface to the gel surface by pulling the sol interface is projecting Okoshijo well introducing portion forming means in contact, injection step of injecting a sol into the gel produced container ; obtained a manufacturing method of an electrophoretic gel, comprising the step of forming the well inlet portion protruding than the gel to remove the well produced tool from the well and the gel surface to the gel surface; step gelling the sol.
  27. 前記配置工程において、ウエル作製具配置手段を用いる請求項26記載の方法。 In the arrangement step, the method according to claim 26, wherein the use of wells producing device positioning means.
  28. 前記ウエル作製具配置手段は、該手段を自立させる自立手段、及びウエル作製具支持手段を有し、該支持手段は略平板であり且つ該平板に前記歯に対応する孔を有し、該孔を介してウエル作製具の歯がウエル作製用容器内に配置される請求項27記載の方法。 The well produced tool locating means, autonomous means to self the means, and has a well producing device support means includes said support means is a substantially flat plate and holes corresponding to the tooth flat plate, the hole the method of claim 27 wherein the teeth of the wells produced instrument is placed in the well prepared for the container via.
  29. 電気泳動用ゲルにウエルを作製するヘッジホッグであって、該ヘッジホッグは平板部及び該平板部片面上に複数の歯を有し、複数の歯が正方網目の交接点の位置となるように配置されるヘッジホッグ。 A hedgehog producing wells for electrophoresis gels, the hedgehog has a plurality of teeth on the flat portion and the flat plate portion on one side, so that a plurality of teeth is the position of the mating points of a square mesh hedgehog to be arranged.
  30. 前記複数の歯の各々が略四角柱状、略四角錐状又は略四角錐台状であり、該四角柱、四角錐又は四角錐台の一側面がヘッジホッグの平板部と垂直になるように配置され、且つ該一側面と正方網目が形成する平行直線とのなす角度が0°より大きく45°未満である請求項29記載のヘッジホッグ。 Each substantially quadrangular prism of said plurality of teeth, a substantially quadrangular pyramid shape or a substantially truncated quadrangular pyramid shape, the quadrangular prism, arranged as four-sided pyramid or truncated pyramid one side of is the flat plate portion and vertical hedgehog it is, and 該Ichi sides and hedgehog of claim 29, wherein the angle is greater than 45 ° from the 0 ° of parallel straight square mesh form.
  31. 前記複数の歯の各々は、先端部側に細くなる傾斜を少なくとも有する請求項29又は30記載のヘッジホッグ。 Wherein each of the plurality of teeth, hedgehog of claim 29 or 30, wherein with at least a narrowing inclined front end portion.
  32. 電気泳動の際の迷電流を抑制する電気泳動用迷電流抑制板であって、該迷電流抑制板は、絶縁性材料からなり、電気泳動用ゲルの面積の25%以上を覆うように配置される電気泳動用迷電流抑制板。 A suppressing electrophoresis 迷電 flow suppressing plate 迷電 flow during electrophoresis, stray current suppressing plate is made of an insulating material, it is disposed so as to cover over 25% of the area of ​​the gel for electrophoresis迷電 flow suppression plate for electrophoresis that.
  33. 前記電気泳動用迷電流抑制板は、第1の開口部及び第2の開口部を有する貫通孔を備える電気泳動試料アプリケータ手段を有し、前記第1の開口部が電気泳動用ゲルのウエル開口部に対応し、前記第2の開口部が前記第1の開口部よりも大面積である請求項32記載の電気泳動用迷電流抑制板。 The electrophoresis 迷電 flow suppressing plate has an electrophoretic sample applicator means comprising a through-hole having a first opening and a second opening, the first opening of the electrophoresis gel wells corresponding to the opening, the second opening is the first electrophoresis 迷電 flow suppressing plate according to claim 32, wherein a larger area than the opening.
  34. 前記電気泳動試料アプリケータ手段は前記貫通孔を複数有し、該複数の貫通孔が、正方網目の交接点の位置に配置されたウエルに対応するように、正方網目の交接点の位置に配置される請求項33記載の電気泳動用迷電流抑制板。 The electrophoretic sample applicator means has a plurality of the through holes, the through-hole of said plurality of, so as to correspond to the arranged well in the position of the mating points of the square mesh, disposed in the position of the mating points of a square mesh迷電 flow suppressing plate for electrophoresis according to claim 33, wherein the.
  35. 電気泳動装置の製造方法であって、該方法は、正方網目の交接点の位置となるように複数のウエルを電気泳動用ゲルに配置するウエル配置工程;及び前記正方網目が形成する直線と電気泳動の電界方向とのなす角度が0°より大きく45°未満となるように前記電気泳動用ゲルを配置するゲル配置工程;を有する、上記方法。 A method of manufacturing an electrophoretic device, the method, well arrangement step for arranging a plurality of wells in the electrophoresis gel so that the position of the mating points of the square mesh; lines and electricity and the square meshes formed gel arranging step the angle between the electric field direction of electrophoresis placing said electrophoresis gel so that the 0 ° than and less than 45 °; with the above method.
  36. 前記ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、前記電界方向と直交するウエル幅が最隣接ウエル間距離の1/2以下であるように各ウエルを形成する請求項35記載の方法。 Has the wells arranged step-well formation step, in the well formation process, according to claim 35, wherein the well width perpendicular to the electric field direction to form each well such that less than half of the distance between the most adjacent wells the method of.
  37. 前記ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、その開口部が略円状となるように形成する請求項35又は36記載の方法。 Has the wells arranged step-well formation step, in the well formation step, the shape of each well, according to claim 35 or 36 method described the opening is formed to be substantially circular.
  38. 前記ウエル配置工程がウエル形成工程を有し、該ウエル形成工程において、各ウエルの形状を、ウエル開口部よりも小面積のウエル底部を有し、ウエル開口部からウエル底部への内壁面が、泳動方向側に泳動方向と垂直な第1の面、及び該第1の面と対する第2の面であってウエル開口部からウエル底部にかけて少なくとも一部傾斜する第2の面を有するように、形成する請求項35又は36記載の方法。 Has the wells arranged step-well formation step, in the well formation step, the shape of each well has a well bottom of a small area than the well opening, the inner wall surface from the well opening to the bottom of the well, electrophoresis direction perpendicular to the first plane in the direction of electrophoresis side, and to have a second surface inclined at least partially toward the well bottom from the second with a surface well opening against the first surface, claim 35 or 36 method wherein formation to.
  39. 前記ウエル形成工程が、ウエル導入部とウエルとを形成する第1の工程を有し、前記ウエル導入部が前記ウエルよりも開口側に配置され、前記ウエル導入部の開口部が前記ウエル形状の開口部よりも大面積であり、前記ウエル導入部が前記ウエル導入部の開口部からウエル形状の開口部に傾斜した面を少なくとも一部に有する請求項37又は38記載の方法。 The well formation step has a first step of forming a well inlet portion and the well, the well inlet portion is disposed in the opening side of the well, opening of the well introduction section of the well shape than opening a large area, according to claim 37 or 38 method wherein the well inlet section has at least in part inclined surface to the opening of the well-shaped from the opening of said wells introduction.
  40. 前記ウエル形成工程が、前記第1の工程後に、前記ウエル導入部を削除する第2の工程を有する請求項39記載の方法。 The well formation step, after the first step, the method of claim 39, further comprising a second step of deleting the well introduction.
  41. ウエル開口部の形状が略円形である電気泳動用ゲルを用いた電気泳動結果解析方法であって、電気泳動結果を電気泳動画像として取り込む工程;電気泳動画像において泳動開始点、泳動レーン中心線及び泳動レーン中心線における泳動位置を特定する工程;及び泳動開始点から泳動位置までの距離を分子量に換算することにより定性結果を得る工程;を有する電気泳動結果解析方法。 Provides an electrophoretic result analysis method the shape of the well opening using an electrophoretic gel is substantially circular, step captures the electrophoresis result electrophoretogram; electrophoresis starting point in an electrophoretic image, electrophoresis lanes center line and electrophoresis result analysis method having; obtaining qualitative results by converting a distance from and electrophoresis starting point to the focusing position in the molecular weight; a step of identifying the position of migration in electrophoresis lane centerline.
  42. 泳動位置での画像濃度に対応する物質量を得る工程をさらに有する請求項41記載の方法。 The method of claim 41, further comprising the step of obtaining the amount of material corresponding to the image density in running position.
  43. ウエル開口部の形状が円形である電気泳動用ゲルを用いた電気泳動結果解析方法であって、電気泳動結果を電気泳動画像として取り込む工程;電気泳動画像において泳動開始点及び泳動位置を特定する工程;泳動位置での画像濃度に対応する物質量を得る工程;泳動開始点から泳動位置までの距離を分子量に換算することにより定性結果を得る工程;を有する電気泳動結果解析方法。 Provides an electrophoretic result analysis method the shape of the well opening using an electrophoretic gel is circular, step captures the electrophoresis results electrophoretic image; identifying a migration start point and focusing position in the electrophoretic image ; electrophoresis result analyzing method having; obtaining qualitative results by converting the distance from the electrophoresis starting point to the focusing position in the molecular weight; obtaining a substance amount corresponding to the image density in running position.
  44. ウエルを有さない電気泳動用ゲルの所定位置に電気泳動用試料を埋め込む試料注入工程を有する電気泳動用試料を有する電気泳動ゲルの調製方法。 Process for the preparation of electrophoresis gels having a sample for electrophoresis having a sample injection step of filling the sample for electrophoresis on a predetermined position of the electrophoresis gel having no well.
  45. 前記試料注入工程が、前記電気泳動用試料を含浸可能な材料に該試料を浸漬し該材料を埋め込む請求項44記載の方法。 The sample injection process The method of claim 44, wherein the embedding material by immersing the sample of the sample for the electrophoresis can be impregnated material.
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JP2015179088A (en) * 2009-08-24 2015-10-08 ライフ テクノロジーズ コーポレーション Electrophoresis gel cassettes and combs

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