JP2003512437A - 腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発および／または増強する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 腫瘍刻限に対する免疫応答を誘発および／または増強する改良された方法が開示される。この方法は、腫瘍抗原、それをコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび／または細胞、または前記のものを含むワクチンをリンパ部位に投与する工程を含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明は、腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発および／または増強する方法に関
する。

【０００２】発明の背景 腫瘍細胞は自己由来性でありしたがって細菌およびウィルスのような外因性の
病原体のようには免疫原性ではないので、癌治療に免疫学的アプローチを使用す
ることは困難である。その結果、癌の免疫治療の見込みは、免疫系により認識で
きる腫瘍関連抗原(TAA)の同定に依存する。特に、T細胞媒介応答を誘発する標的
抗原は、非常に関心がある。このことは、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)が、動物モ
デル(Kast W. et al (1989) Cell 59:6035; Greenberg P. (1991) Adv. Immunol
. 49:281)およびヒト(Boon T. et al. (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:337)に
おいて腫瘍後退を誘発し得るという証拠から生ずる。現在まで、多くの腫瘍関連
抗原が同定されている。これらには、抗原MAGE、BAGE、GAGE、gp100、MART−1/M
elan−A、チロシナーゼ、癌胎児性抗原(CEA)並びに多くの他の抗原が含まれる(H
orig and Kaufman (1999) Clinical Immunology 92:211-223)。これらの腫瘍関
連抗原のいくつかを以下に記載する。

【０００３】 第1の特徴付けられたヒト腫瘍関連抗原は、黒色腫から同定された。この抗原
（当初MAGE1と称された）は、腫瘍DNAによりトランスフェクションされたHLA A1
標的細胞をスクリーニングするためにHLA A1+黒色腫患者から単離されたCTLを使
用して同定された(van der Bruggen P. (1991) Science, 254:1643；これらの腫
瘍関連抗原は現在はMAGE−A1、MAGE−2等と称される)。興味深いことに、MAGE−
1はX染色体上に位置する少なくとも12の非常に関連する遺伝子のファミリーに属
することが分かった(de Plaen, E. et al. (1994) Immunogenetics 40:360)。11
のさらなるMAGE遺伝子の核酸配列は、MAGE−1のものと65−85%の同一性を共有す
る(de Smet, C. et al. (1994) Immunogenetics 39:121)。MAGE1および3はいず
れも正常な組織中に存在するが、精巣中でのみ発現される(de Plaen, E. et al.
(1994) Supra; de Smet, C. et al. (1994) Supra; Takahashi, K. et al. (19
95) Cancer Res. 55:3478; Chyomey, P. et al. (1995) Immunogenetics 43:97)
。これらの初期の結果はその後、すべてが通常は正常な組織（精巣を除く）中で
発現されないが様々の種類の腫瘍中で発現される、新しい遺伝子ファミリー（す
なわち、RAGE、BAGE、GAGE）が同定されたために拡張された。

【０００４】 ヒト癌胎児性抗原(CEA)は、結腸、直腸、胃および膵臓癌の大部分で(Muaro et
al. (1985) Cancer Res. 45:5769)、乳癌の約50%(Steward et al. (1974) Canc
er 33:1246)および肺癌の70％(Vincent, R.G. and Chu, T.M. (1978) J. Thor.
Cardiovas. Surg. 66:320)で発現される180kDの糖タンパク質である。CEAは、19
65年にヒト消化管の腺癌中の癌特異的胎児性抗原として当初記載された(Gold, P
. and Freeman, S.O. (1965) Exp. Med. 121:439)。その時から、CEAはヒト胃腸
管のほとんどすべての固形腫瘍中で過剰に産生される細胞表面抗原として特徴付
けられている。ヒトCEAタンパク質についての遺伝子がクローニングされている(
Oikawa et al (1987) Biochim. Biophys. Res. 142:511-518；欧州特許出願第EP
0346710号)。CEAはまた、胎児性消化管組織中でおよびより少ない程度で正常な
結腸上皮において発現される。いくつかの研究には、患者中の抗−CEA抗体の存
在が報告されているが (Gold et al. (1973) Nature New Biology 239:60; Pomp
ecki R. (1980) Eur. J. Cancer 16:973; Ura et al. (1985) Cancer Lett.25:2
83; Fuchs et al. (1988) Cancer Immunol. Immunother. 26:180)、他の研究は
報告しておらず(LoGerfo et al. (1972) Int. J. Cancer 9:344; MacSween, J.M
. (1975) Int. J. Cancer 15:246; Chester K.A. and Begent, H.J. (1984) Cli
n. Exp. Immunol. 58:685)、CEAの免疫原性は不明瞭である。

【０００５】 Gp100は、通常メラノソームで見られ、メラニン細胞、網膜細胞、および他の
神経冠誘導体で発現される。gp100の機能は現在はわかっていない。質量分光測
定法により、3つの免疫優性HLA−A2結合gp100エピトープが同定された：g9-154
（アミノ酸154−162）、g9-209（アミノ酸209−217）、およびg9-280（アミノ酸
280−288）。特に、これらのエピトープ（ペプチドとして）の内の2つは、合成
により変化されて、原T細胞クローン中でより強い免疫応答を誘発する：gp-209
中の位置2におけるトレオニンがメチオニンに変えられ、gp-280中の位置9におけ
るアラニン残基がバリンに変えられる。これらの変化により、T細胞レセプター(
TCR)により認識される内在性の天然のエピトープを変化することなくHLA−A2分
子に対するエピトープ−ペプチドの結合親和性が増加する。Rosenberg等(NIH)は
すでに、これらの修飾されたペプチドの1つにより黒色腫患者を免疫化すること
に成功し、ある患者において目的の臨床的応答を達成したことを報告している。

【０００６】 癌治療に対する免疫学的アプローチに関して得られる大きな利点にもかかわら
ず、当該技術において癌の免疫療法を改良する必要が依然存在する。

【０００７】発明の概要 本発明は、腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発および／または増強する改良され
た方法に関する。

【０００８】 本発明者は、腫瘍抗原またはそれをコードする核酸をリンパ部位（例えばリン
パ節）中に直接投与することにより、腫瘍抗原に対する免疫応答が誘導および／
または大きく増強されるおよび／または腫瘍抗原に対する耐性が破壊され、これ
は癌の免疫療法の従来の方法における主な課題であった。

【０００９】 したがって、ある態様において本発明により、腫瘍抗原に対する動物中の免疫
応答を誘発および／または増強する方法であって、有効量の腫瘍抗原、それをコ
ードする核酸、該核酸を含むベクターまたは細胞、または前記のものを含むワク
チンを動物中のリンパ部位に投与する工程を含む方法が提供される。

【００１０】 別の態様において、本発明により、動物中の腫瘍抗原に対する免疫耐性を破壊
する方法であって、有効量の腫瘍抗原、それをコードする核酸、該核酸を含むベ
クターまたは細胞、または前記のものを含むワクチンを動物中のリンパ部位に投
与する工程を含む方法が提供される。

【００１１】 本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう
。しかしながら、本発明の好ましい実施の形態を示す詳細な説明および特定の実
施例は、説明のためにのみ記載されるものであり、本発明の意図および範囲内で
様々の変化および修飾がこの詳細な説明から当業者にとって自明であるというこ
とを理解しなければならない。

【００１２】図面の簡単な説明 本発明は、以下の図面に関して記載される。

【００１３】 図１は、腫瘍抗原の結節内注射を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示
す棒グラフである。

【００１４】 図２は、腫瘍抗原の結節内注射を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示
す棒グラフである。

【００１５】 図３は、腫瘍抗原の皮下投与を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す
棒グラフである。

【００１６】 図４は、腫瘍抗原の皮下投与を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す
棒グラフである。

【００１７】 図５は、ALVAC−修飾されたgp100／修飾されたgp100ペプチド免疫原の結節内
（グループ2）および皮下（グループ3）投与の摂生後の抗体反応を示すグラフで
ある。

【００１８】 図６は、修飾されたgp100M cDNAの核酸配列である（配列番号109）。

【００１９】 図７は、修飾されたgp100Mタンパク質の推定アミノ酸配列である（配列番号11
0）。

【００２０】 図８は、修飾されたCEAの核酸およびアミノ酸配列である（配列番号111および
112）。

【００２１】発明の詳細な説明 上述のように、本発明は、腫瘍抗原に対する免疫応答を誘発および／または増
強する改良された方法に関する。したがって、本発明により、腫瘍抗原に対する
動物中の免疫応答を誘発および／または増強する方法であって、有効量の腫瘍抗
原、腫瘍抗原をコードする核酸配列、該核酸配列を含むベクターまたは細胞、ま
たは前記腫瘍抗原を含むワクチン、該腫瘍抗原をコードする核酸配列、または該
腫瘍抗原をコードする核酸配列を含むベクターを動物中のリンパ部位に投与する
工程を含む方法が提供される。

【００２２】 「免疫応答を誘発および／または増強する」という用語は、本発明の方法によ
り動物の免疫系の任意の応答を引き起こすおよび／または高めることを意味する
。

【００２３】 「免疫応答」とは、免疫系、例えば細胞媒介（すなわち細胞障害性Tリンパ球
媒介）または体液性（すなわち抗体媒介）の性質の任意の応答として定義される
。これらの免疫応答は、抗体アッセイ（例えばELISAアッセイ）、抗原特異的細
胞障害性アッセイ、サイトカインの産生（例えばELISPOTアッセイ）、腫瘍抗原
を発現する腫瘍の後退、腫瘍抗原を発現する癌細胞の抑制などが含まれるがこれ
に限定されない当業者によく知られる多くのインビボまたはインビトロのアッセ
イにより評価することができる。

【００２４】 「リンパ部位」という用語は、リンパ器官、組織、細胞、結節または脾臓、胸
腺、扁桃腺、パイエル板、骨髄、リンパ球、胸管並びに体のすべてのリンパ結節
のような腺を含むリンパ系と関連する体内の部位を意味する。

【００２５】 ここで用いたように「動物」という用語は、動物界のすべてのメンバーを含み
、好ましくはヒトである。

【００２６】 ここで用いたように「有効量」という用語は、所望の結果を達成するために必
要な投与量および期間において有効な量を意味する。

【００２７】 ここで用いたように「腫瘍抗原」という用語は、腫瘍関連抗原(TAA)および腫
瘍特異的抗原(TSA)の両方を含む。腫瘍関連抗原とは、正常な細胞で観察される
よりも多い量で腫瘍細胞の表面で発現される抗原または胎児の成長中に正常な細
胞において発現される抗原を意味する。腫瘍特異的抗原は、腫瘍細胞に独特であ
り正常な細胞で発現されない抗原である。腫瘍抗原という用語は、すでに同定さ
れたおよびまだ同定されていないTAAまたはTSAを含み、断片、エピトープおよび
腫瘍抗原への任意のおよびすべての修飾を含む。

【００２８】 腫瘍関連抗原は、gp100(Kawakami et al., J. Immunol. 154:3961-3968 (1995
); Cox et al., Science, 264:716-719 (1994))、MART-1/Melan A(Kawakami et
al., J. Exp. Med., 180:347-352(1994); Castelli et al., J. Exp. Med., 181
:363-368(1995))、gp75(TRP-1)(Wang et al., J. Exp. Med., 186:1131-1140(19
96))、およびチロシナーゼ(Wolfel et al., Eur. J. Immunol., 24:759-764(199
4); Topalian et al, J. Exp. Med., 183:1965-1971(1996))、黒色腫プロテオグ
リカン(Hellstrom et al., J. Immunol., 130:1467-1(1983); Ross et al., Arc
h. Biochem Biphys., 225:370-383(1983))、腫瘍特異的、広く共有される抗原、
例えば：MAGEファミリーの抗原、例えばMAGE-1、2、3、4、6および12(Van der B
ruggen et al., Science, 254:1643-1647(1991); Rogner et al., Genomics, 29
:729-731(1995))、BAGEファミリーの抗原(Boel et al., Immunity, 2:167-175(1
995))、GAGEファミリーの抗原、例えばGAGE-1、2(Van den Eynde et al., J. Ex
p. Med., 182:689-698(1995))、RAGEファミリーの抗原、例えばRAGE-1(Gaugler
et al., Immunogenetics, 44:323-330(1996))、N−アセチルグルコサミニルトラ
ンスフェラーゼ−V(Guilloux et al., J. Exp. Med., 183:1173-1183(1996))、
およびp15(Robbins et al., J. Immunol. 154:5944-5950(1995) )；腫瘍特異的突然変異抗原；突然変異β−カテニン(Robbins et al., J. Exp.
Med., 183:1185-1192(1996))、突然変異MUM−1(Coulie et al., Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 92:7976-7980(1995))、および突然変異サイクリン依存性キナー
ゼ−4(CDK4)(Wolfel et al., Science, 269:1281-1284(1995))；突然変異オンコ
ジーン産物：p21 ras(Fossum et al., Int. J. Cancer, 56:40-45(1994))、BCR-
abl(Bocchia et al., Blood,85:2680-2684(1995))、p53(Theobald et al., Proc
. Natl. Acad. Sci. USA, 92:11993-11997(1995))、およびp185 HER2/neu(Fisk
et al., J. Exp. Med., 181:2109-2117(1995))；Peoples et al., Proc. Natl.
Acad. Sci., USA, 92:432-436(1995))；突然変異上皮増殖因子レセプター(EGFR)
(Fujimoto et al., Eur. J. Gynecol. Oncol., 16:40-47(1995))；Harris et al
., Breast Cancer Res. Treat, 29:1-2(1994)；癌胎児性抗原(CEA)(Kwong et al
., J. Natl. Cancer Inst., 85:982-990(1995))；癌関連突然変異ムチン、例え
ばMUC-1遺伝子産物(Jerome et al., J. Immunol., 151:1654-1662(1993)、Ioann
ides et al., J. Immunol., 151:3693-3703(1993)、Takahashi et al., J. Immu
nol., 153:2102-2109(1994)；EBVのEBNA遺伝子産物、例えばEBNA-1遺伝子産物(R
ickinson et al., Cancer Surveys, 13:53-80(1992))；ヒト乳頭腫ウィルスのE7
、E6タンパク質(Ressing et al., J. Immunol, 154:5934-5943(1995))；前立腺
特異的抗原(PSA)(Xue et al., The Prostate, 30:73-78(1997))；前立腺特異的
膜抗原(PSMA)(Israeli, et al., Cancer Res., 54:1807-1811(1994))；PCTA-1(S
ue et al., Pros. Natl. Acad. Sci. USA, 93:7252-7257(1996))；イディオタイ
プエピトープまたは抗原、例えば免疫グロブリンイディオタイプまたはT細胞レ
セプターイディオタイプ(Chen et al., J. Immunol., 153:4775-4787(1994))；
Syrengelas et al., Nat. Med., 2:1038-1040(1996))；KSA（米国特許第5348887
号）；NY-ESO-1（国際特許出願公開第98/14464号）を含むがこれに限定されない
任意の腫瘍関連抗原でもよい。

【００２９】 また、修飾された腫瘍抗原および／またはそこからのエピトープ／ペプチド誘
導体（修飾されないおよび修飾された）が含まれる。実施例は、gp100（国際特
許出願公開第98/02598号；同第95/29193号；同第97/34613号；同第93/33810号）
；CEA（国際特許出願公開第99/19478号; S. Zaremba et al. (1997) Cancer Res
earch 57:4570-7; K.T. Tsang et al.(1995) J. Int. Cancer Inst. 87:982-90
）；MART-1（国際特許出願公開第98/58951号、同第98/02538号；D. Valmeri et
al.(2000) J. Immunol. 164:1125-31）；p53（M.Eura et al. (2000) Clinical
Cancer Research 6:979-86）；TRP-1およびTRP-2（国際特許出願公開第97/29195
号）；チロシナーゼ（国際特許出願公開第96/21734号；同第97/11669号；同第97
/34613号；同第98/33810号；同第95/23234号；同第97/26535号）；KSA（国際特
許出願公開第97/15597号）；PSA（国際特許出願公開第96/40754号）；NY-ESO-1
（国際特許出願公開第99/18206号）；HER2/neu（米国特許第5869445号）；関連
するMAGEファミリー（L. Heidecker et al. (2000) J. Immunol. 164:6041-5；
国際特許出願公開第95/04542号；同第95/25530号；同第95/25739号；同第96/262
14号；同第97/31017号；同第98/10780号）に由来する修飾されたおよび修飾され
ないエピトープ／ペプチドを含むがこれに限定されない。

【００３０】 好ましい実施の形態において、腫瘍関連抗原は、gp100、修飾されたgp100また
はその断片である。特に、本発明者は、図６に示される核酸配列（配列番号109
）および図７に示される推定アミノ酸配列（配列番号110）を有する、gp100Mと
称される修飾されたgp100ペプチドを調製した。本発明者は、修飾されたgp100（
修飾されたエピトープ209(2M)(IMDQVPFSY、配列番号1)および290(9V)(YLEPGPVTV
、配列番号2)）の断片をコードする核酸を含む組変えアビポックス(avipox)ウィ
ルスの結節内注射およびその後修飾されたエピトープ／ペプチドにより後押しさ
れることにより、同じ抗原が皮下投与された場合より数倍高い体液性および細胞
媒介応答が誘発されるということを示した。事件の詳細および結果は、実施例１
に記載される。

【００３１】 別の実施の形態において、腫瘍関連抗原は、癌胎児性抗原(CEA)、修飾されたC
EAまたはその断片である。修飾されたCEA抗原の核酸配列は、図８および配列番
号111に示される。対応するアミノ酸配列は、図８および配列番号112に示される
。好ましくは、修飾されたCEA抗原は、配列YLSGADLNL、配列番号113を有する。

【００３２】 本発明のさらなる実施の形態には、ここに記載されるように腫瘍抗原およびそ
の断片または修飾形態をコードする配列を含む核酸配列が含まれる。「核酸配列
」という用語は、天然に発生する塩基、糖および糖間（バックボーン）結合から
なるヌクレオチドまたはヌクレオシド単量体の配列を称する。この用語はまた、
同様に機能する天然に発生しない単量体およびその一部を含む修飾されたまたは
置換された配列を含む。本発明の核酸配列は、リボ核酸(RNA)またはデオキシリ
ボ核酸(DNA)でもよく、アデニン、グアニン、シトシン、チミジンおよびウラシ
ルを含む天然に発生する塩基を含有してもよい。配列は、キサンチン、ヒポキサ
ンチン、2−アミノアデニン、6−メチル、2−プロピル、および他のアルキルア
デニン、5−ハロウラシル、5−ハロシトシン、6−アザウラシル、6−アザシトシ
ンおよび6−アザチミン、プソイドウラシル、4−チオウラシル、8−ハロアデニ
ン、8−アミノアデニン、8−チオールアデニン、8−チオ−アルキルアデニン、8
−ヒドロキシルアデニンおよび他の8−置換アデニン、8−ハログアニン、8−ア
ミノグアニン、8−チオールグアニン、8−チオールアルキルグアニン、8−ヒド
ロキシルグアニンおよび他の8−置換グアニン、他のアザおよびデアザウラシル
、チミジン、シトシン、アデニン、またはグアニン、5−トリフルオロメチルウ
ラシルおよび5−トリフルオロシトシンを含有してもよい。

【００３３】 本発明の腫瘍抗原をコードする核酸配列は、ウィルス核酸、プラスミド、細菌
DNA、裸の／遊離DNAおよびRNAを含むがこれに限定されない。核酸は、一本鎖お
よび二本鎖形態を含む。これらの核酸は、前記の腫瘍抗原をコードする関連する
基本的な配列を含む。明確にするために、「前記のポリペプチドをコードす関連
する基本的な配列」はさらに、相補的な核酸配列を含む。このようにして、本発
明の実施の形態には、それ自体が前記の腫瘍抗原をコードする核酸配列、または
腫瘍抗原をコードする前記核酸配列が挿入された組換え核酸（以下に記載される
）が含まれる。

【００３４】 本発明の組換え核酸の実施の形態において有用な細菌DNAは、当業者に知られ
ている。細菌DNAの供給源には例えば、赤痢菌、サルモネラ、ビブリオコレラ(Vi
brio cholerae)、乳酸桿菌、バシルカルメットグエリン(Bacille Calmette Guer
in)(BCG)、および連鎖球菌が含まれる。本発明の細菌DNAの実施の形態において
、本発明の核酸は、細菌のゲノム中に挿入されてもよく、遊離状態のままでもよ
い、またはプラスミド上に供給されてもよい。

【００３５】 本発明のウィルス組換え核酸の実施の形態は、ポックスウィルスまたは他のア
デノウィルスまたはアルファウィルスのようなウィルスに由来してもよい。好ま
しくはウィルス核酸は、受容体の動物細胞中に統合することができない。該核酸
からの発現のための要素には、受容体の動物細胞における発現に適切なプロモー
ターが含まれてもよい。

【００３６】 本発明の特定のウィルス組換え核酸の実施の形態には、ポックスウィルス、ア
ルファウィルス、およびアデノウィルス核酸が含まれるがこれに限定されない。
ポックスウィルス核酸は、アビポックス、オルトポックス、およびスイポックス
核酸からなる群より選択されてもよい。特定の実施の形態には、ワクシニア、鶏
痘、カナリヤ痘および豚痘から選択されるポックスウィルス核酸が含まれる；特
定の実施例には、TROVAC、NYVAC、ALVAC、MVA、Wyeth and Poxvac-TCが含まれる
（以下により詳細に記載される）。

【００３７】 本発明の組換え核酸はさらに、サイトカイン、リンフォカイン、および補助的
刺激分子からなる群より選択される少なくとも一つをコードする核酸配列を含む
ということがさらに予期される。実施例には、インターロイキン2、インターロ
イキン12、インターロイキン6、インターフェロンガンマ、腫瘍壊死因子アルフ
ァ、GM-CSF、B7.1、B7.2、ICAM-1、LFA-3、およびCd72が含まれる（がこれに限
定されない）。

【００３８】 Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al. (Eds.), Jo
hn Wiley and Sons, Inc, N.Y., U.S.A. (1998), Chpts. 1,2 and 4; Molecular
Clonig: A Laboratory Manual (2^nd Ed.), J. Sambrook, E.F. Fritsch and T.
Maniatis (Eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., U.S.A. (198
9), Chpts. 1,2,3 and 7)に記載されるように、当業者によく知られる核酸を調
製および精製するための分子生物学の標準技術を、本発明の組換え核酸の調製の
態様において使用できる。

【００３９】 本発明の態様にはさらに、前記の核酸を含むベクターが含まれる。ある実施の
形態において、該ベクターは、組換えウィルスまたは細菌でもよい（以下に記載
される）。

【００４０】 アデノウィルスベクターおよびその作製の方法が記載されている（例えば、す
べてここに引用される米国特許第5994132号、同第5932210号、同第6057158号お
よび国際特許出願公開第9817783号、同第9744475号、同第9961034号、同第99502
92号、同第9927101号、同第9720575号、同第9640955号、同第9630534号）。アル
ファウィルスベクターが記載されており、本発明の実施の形態において使用でき
、（例えば、ここに引用される米国特許第5792462号、同第5739026号、同第5843
723号、同第5789245号、および国際特許出願公開第9210578号、同第9527044号、
同第9531565号、同第5932210号、同第9815636号）、レンチウィルスも同様であ
る（例えば、すべてここに引用される米国特許第6013516号、同第5994136号およ
び国際特許出願公開第9817816号、同第9712622号、同第9817815号、同第9839463
号、同第9846083号、同第9915641号、同第9919501号、同第9930742号、同第9931
251号、同第9851810号、同第0000600号）。使用できるポックスウィルスには、
例えば、アビポックス、オルトポックスまたはスイポックスポックスウィルスが
含まれてもよい（米国特許第5364773号、同第4603112号、同第5762938号、同第5
378457号、同第5494807号、同第5505941号、同第5756103号、同第5833975号およ
び同第5990091号に記載される）。腫瘍抗原をコードする核酸を含むポックスウ
ィルスは、当業者に知られるように相同組換えにより得ることができる。これに
よって、腫瘍抗原をコードする核酸は、哺乳類細胞中での発現に適切な条件下で
ウィルスゲノム中に挿入される（以下に記載される）。

【００４１】 本発明のある実施の形態において、ポックスウィルスベクターは、ALVAC(1)ま
たはALVAC(2)である（いずれもカナリアポックスウィルスに由来する）。ALVAC(
1)またはALVAC(2)は、鳥類以外の宿主中では増殖的に複製せず、安全な特性を改
良すると考えられる特徴である。ALVAC(1)は、認可されたカナリアポックスワク
チンであるKanapox（Tartaglia et al. (1982) Virology 188:217; ここに引用
される米国特許第5505941号、同第5756103号および同第5833975号）のプラーク
クローニングされた誘導体である弱毒カナリアポックスウィルスに基づくベクタ
ーである。ALVAC(1)は、Kanapoxの一般的特性と同じ一般的特性を有する。外因
性免疫原を発現するALVACに基づく組換えウィルスは、ワクチンベクターとして
有効であることも示されている(Tartaglia et al, In AIDS Research Reviews (
vol.3) Koff W., Wong-Staol F. and Kenedy R.C. (eds.), Marcel Dekker NY,
pp. 361-378(1993a); Tartaglia, J. et al. (1993b) J. Virol. 67:2370)。例
えば、狂犬病ウィルス糖タンパク質を発現するALVAC(1)組換え体により免疫化さ
れたマウスを、ワクチンベクターとしてALVAC(1)に対する潜在性を示す狂犬病ウ
ィルスによる致死抗原投与から保護した(Tartaglia, J. et al., (1992) supra)
。ALVACに基づく組換え体は、イヌジステンパーウィルス(Taylor, J. et al. (1
992) Virology 187:321)および狂犬病ウィルスにより抗原投与されたイヌにおい
て(Perkus, M.E. et al., 化合したワクチンおよび同時投与：現在の問題および
展望、Annals of the New York Academy of Sciences (1994))、ネコ白血病ウィ
ルスにより抗原投与されたネコにおいて(Tartaglia, J. et al., (1993b) supra
)、およびウマインフルエンザウィルスにより抗原投与されたウマにおいて(Tayl
or, J. et al., In Proceedings of the Third International Symposium on Av
ian Influenza, Univ. of Wisconsin-Madison, Madison, Wisconsin, pp. 331-3
35(1993))有効であることも示された。

【００４２】 ALVAC(2)は、ワクチニア転写要素E3LおよびK3LがC6遺伝子座内に挿入された第
2世代ALVACベクターである（ここに引用される米国特許第5990091号）。E3Lは、
dsRNAに特異的に結合し得るタンパク質をコードする。K3L ORFは、E1F-2に大き
い相同性を有する。ALVAC(2)内で、E3L遺伝子は天然のプロモーターの転写調節
下であるのに対し、K3Lは初期／後期ワクチンH6プロモーターの調節下に配置さ
れる。E3LおよびK3L遺伝子は、ALVAC(II)により感染された細胞中でPKR活性を抑
制する作用をし、外来の遺伝子の発現のレベルおよび生存を増強する。

【００４３】 さらなるウィルスベクターには、天然の宿主−制限ポックスウィルスが含まれ
る。ニワトリポックスウィルス(FPV)は、ポックスウィルスファミリーのアビポ
ックス類の基本型ウィルスである。アビポックスウィルスの複製は鳥類に限定さ
れ(Matthews, R.E.F. (1982) Intervirology 17:42)、ヒトを含む任意の鳥類以
外の種において増殖性の感染を起こすアビポックスウィルスの文献には報告され
ていない。この宿主制限により、ウィルスを他の種に供給することに対する固有
の安全な障壁が提供され、興味のある問題である家畜およびヒトの投与における
アビポックスウィルスに基づくベクターが使用される。

【００４４】 FPVは、家禽病原体からの免疫原を発現するベクターとして有効に使用されて
いる。毒性鳥類インフルエンザウィルスの血球凝集素タンパク質がFPV組換え体
が発現された。ニワトリおよび七面鳥への組換え体の接種後、免疫応答が誘発さ
れ、これは相同または異種の血球凝集素ウィルス抗原投与に対して保護的であっ
た(Taylor, J. et al. (1988) Vaccine 6:504)。ニューカッスル病ウィルスの表
面痘タンパク質を発現するFPV組換え体が開発された（ここに引用されるTaylor,
J. et al. (1990) J. Virol. 64:1441; Edbauer, C. et al. (1990) Virology
179:901;米国特許第5766599号）。

【００４５】 MVAと称される、ワクチニアの高度に弱毒された菌株を、ポックスウィルスに
基づくワクチンに対するベクターとして使用した。MVAの使用は、米国特許第5,1
85,146号に記載される。

【００４６】 他の弱毒ポックスウィルスベクターを、ワクチニアの野生型の菌株に対する遺
伝的修飾により調製した。例えば、NYVACベクターは、ワクチニアのコペンハー
ゲン(Copenhagen)菌株からの特定の毒性および宿主域遺伝子の欠損に由来し（こ
こに引用されるTartaglia, J. et al. (1992), supra；米国特許第5364773号お
よび同第5494807号）、発現された外来抗原に対する保護的免疫応答の誘導にお
ける組換えベクターとして有用であることが示された。

【００４７】 組換えウィルスは、当業者に知られる方法により作製できる（例えば、ここに
引用される、ワクチニアおよびポックスウィルスについて前記の米国特許第4769
330号、同第4722848号、4603112号、同第5110587号、および5174993号）。

【００４８】 本発明のさらなる態様において、生存および／または弱毒細菌をベクターとし
て使用してもよい。例えば、非毒物発生のビブリオコレラ突然変異菌株は、本発
明の実施の形態において細菌ベクターとして有用である；米国特許第4,882,278
号（機能的なコレラ毒素が産生されないように2つのctxA対立遺伝子のそれぞれ
のコード配列の実質的な量が欠失される菌株が開示される）、国際特許出願公開
第92/11354号（irgA遺伝子座が突然変異により不活性化される菌株；この突然変
異は、ctxA突然変異による単一の菌株と組み合わせてもよい）、および国際特許
出願公開第94/1533号（機能的ctxAおよびattRS1 DNA配列を有しない欠失突然変
異体）に記載される。国際特許出願公開第94/19482号に記載されるように、これ
らの菌株は、遺伝子工学的処理によって、異種抗原を発現することができる。（
前記のすべての特許／特許出願はここに引用される。） 異種抗原の組換え発現に対して遺伝子工学的に処理された弱毒ネズミチフス菌
株およびその経口免疫原としての使用が、例えば国際特許出願公開第92/11361号
に記載される。

【００４９】 既述のように、当業者は、本発明の実施の形態において細菌ベクターとして有
用な他の細菌菌株には、フレクスナー赤痢菌、ストレプトコッカスゴルドニ(Str
eptococcus gordonii)、およびバシルカルメットグエリンが含まれる（がこれに
限定されない）ことを容易に認識するであろう（ここに引用される国際特許出願
公開第88/6626号、同第90/0594号、同第91/13157号、同第92/1796号、および同
第92/21376号に記載される）。本発明の細菌ベクターにおいて、腫瘍抗原をコー
ドする核酸は、細菌のゲノム中に挿入されてもよく、遊離状態のままでもよく、
プラスミド上に供給されてもよい。

【００５０】 本発明には、サイトカイン、リンフォカインおよび免疫刺激分子からなる群よ
り選択される少なくとも一つのメンバーをコードする核酸を含むベクターが含ま
れてもよいということがさらに考えられる。該核酸配列は、腫瘍抗原をコードす
る配列と接触してもよいまたは別個の核酸上でコードされてもよい。

【００５１】 前記の腫瘍抗原、それをコードする核酸、および／またはベクターを含む細胞
はさらに、本発明の実施の形態を含む。これらの細胞には、前記の腫瘍抗原、核
酸、および／またはベクターが導入されたおよび／またはトランスフェクション
されたおよび／または感染された任意の潜在的な細胞を含む（例えば、細菌、CO
S細胞、Vero細胞、ニワトリ胚繊維芽細胞、腫瘍細胞、抗原提示細胞、樹状細胞
など）。細胞への導入および／またはトランスフェクションおよび／または感染
の方法の選択は、導入される物質（例えば遊離DNA、プラスミド、組換えウィル
ス）の内在性の性質に依存し、当業者に知られるであろう（例えば、Current Pr
otocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al. (Eds.), John Wiley and
Sons, Inc., N.Y., U.S.A. (1998), Chpt.9: Molecular Cloning: A Laborator
y Manual(2^nd Ed.), J. Sambrook, E.F. Fritsch and T. Maniatis (Eds.), Col
d Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., U.S.A. (1989), Chpts. 1,2,3 and
16に記載される）。

【００５２】 本発明のさらなる実施の形態には、前記の腫瘍抗原および／またはそれをコー
ドする核酸および／またはベクターおよび／または細胞を含むワクチンが含まれ
る。

【００５３】 腫瘍抗原を含む本発明のワクチンは、多価ワクチンでもよく、さらにいくつか
のペプチド、エピトープまたは特定の腫瘍抗原の断片を含有してもよいまたは予
防的にまたは治療的に有効な態様で他の腫瘍抗原および／または感染物質に関連
するペプチドを含有してもよい。癌に対する多価ワクチンは、単独でまたは化合
して、癌に対する免疫応答を調節するのに有効な多くの個々のTAA、またはその
免疫原性の断片を含有してもよい。

【００５４】 本発明のワクチンは、本発明の腫瘍抗原をコードする核酸分子を含有してもよ
い。そのようなワクチンは、核酸ワクチンと称されるが、遺伝的ワクチン、ポリ
ヌクレオチドワクチンまたはDNAワクチンとも称され、すべて本発明の範囲内で
ある。そのような実施の形態において、腫瘍抗原は宿主動物中でインビボで産生
される。本発明のさらなる実施の形態には、前記の核酸を含むベクター（すなわ
ち細菌、組換えウィルス）が含まれる。

【００５５】 本発明はまた、腫瘍抗原、それをコードする核酸、該核酸を含むベクター、前
記のものを含む細胞および／またはワクチン、およびサイトカイン、リンフォカ
イン、免疫刺激分子からなる群より選択される少なくとも一つのメンバー、およ
びそれをコードする核酸の混合物を考慮する。本発明のさらなる実施の形態には
さらに、インビボにおける投与に適切な薬学的に許容できる形態で被験者に投与
するための前記の腫瘍抗原、それをコードする核酸、ベクター、細胞、ワクチン
または混合物を含む薬剤が含まれる。「インビボにおける投与に適切な生物学的
に親和性の形態」とは、毒性効果よりも治療効果がまさっている投与される物質
の形態を意味する。治療上活性のある量の、または「有効量」の本発明の薬剤の
投与とは、動物中で免疫応答を誘発するという所望の結果を達成するために必要
な、投与量および期間において有効な量を意味する。物質の治療上有効な量は、
患者の病気の状態／健康、年齢、性別、および体重、および特定の腫瘍抗原、そ
れをコードする核酸、ベクター、細胞、または所望の免疫応答を誘発するワクチ
ンの固有の能力のような因子により変化し得る。投与量の投薬計画を調節して、
最適の治療反応を提供し得る。例えば、いくつかに分けた投与量を毎日、または
周期的な間隔で投与してもよい、および／または状況の緊急性により示されるよ
うに投与量を比例的に減少してもよい。

【００５６】 ここに記載される薬剤は、有効量の活性物質（すなわち、腫瘍抗原、核酸、組
換えウィルス、ワクチン）が薬学的に許容できる賦形剤との混合物中で組み合わ
されるように動物に投与できる薬学的に許容できる組成物を調製する、それ自体
既知の方法により調製できる。適切な賦形剤は、例えば、「薬剤添加物のハンド
ブック」(Michael and Irene Ash, Gower Publishing Limited, Aldershot, Eng
land(1995)により編集された)に記載されている。この原理に基づいて、組成物
には、たとえそれのみではなくても、1つ以上の薬学的に許容できる賦形剤また
は希釈剤と会合した物質の溶液が含まれ、適切なpHを有する緩衝溶液中に含まれ
てもよいおよび／または生理的溶液により等浸透性でもよい。この点に関して、
米国特許第5,843,456号を参照してもよい。これらの組成物はさらに、アジュバ
ントを含んでもよい（以下に記載するように）。

【００５７】 本発明のさらなる実施の形態には、患者中で癌細胞を発現する腫瘍抗原を抑制
する方法であって、該患者に有効量の本発明の腫瘍抗原、それをコードする核酸
、ベクター、細胞またはワクチンを投与する工程を含む方法が含まれる。腫瘍抗
原を発現する固体腫瘍を有する患者には、結腸癌、肺癌、膵臓癌、子宮内膜癌、
乳癌、甲状腺癌、黒色腫、口癌、喉頭癌、精上皮腫、肝細胞癌、胆管癌、扁平上
皮細胞癌、および前立腺癌が含まれる（がこれに限定されない）。このようにし
て、免疫応答を誘発するおよび／または腫瘍抗原発現細胞を抑制する前記の方法
を含む癌患者を治療する方法が、本発明の態様／実施の形態と考えられる。

【００５８】 既述のように、本発明の腫瘍抗原、それをコードする核酸、ベクター、細胞ま
たはワクチンをリンパ部位に投与することにより、動物を免疫化してもよい。投
与は、単一の投与量で行ってもよいまたは間隔をおいて反復してもよい。適切な
投与量は、当業者によって理解される様々のパラメーター、例えば免疫原自体（
すなわちポリペプチド対核酸およびそのよりはっきりした種類）、投与の経路お
よびワクチン化される動物の状態（体重、年齢など）に依存する。

【００５９】 前記のように、核酸（特にプラスミドおよび／または本発明の腫瘍抗原をコー
ドする遊離／裸DNAおよび／またはRNA）を、免疫応答を誘発／誘導する目的で動
物に投与してもよい（例えば、米国特許第5589466号；McDonnnell and Askari,
NEJM 334:42-45(1996); Kowalczyk and Ertlm Cell Mol. Life Sci. 55:751-770
(1999)）。通常、この核酸は、標的の動物細胞中で複製できず該動物のゲノム中
に統合できない形態である。腫瘍抗原をコードするDNA/RNA分子はまた、通常は
動物の細胞中で発現に適切なプロモーターの調節下に配置される。プロモーター
は、偏在的にまたは組織特異的に機能し得る。非−組織特異的プロモーターの実
施例は、初期サイトメガロウィルス(CMV)プロモーター（米国特許第4,168,062号
に記載される）およびニワトリ肉腫ウィルスプロモーターを含む。デスミンプロ
モーターは、組織特異的であり、筋肉細胞中で発現させる。より一般には、有用
なベクターについて記載されている（すなわち国際特許出願公開第94/21797号）
。

【００６０】 腫瘍抗原をコードする核酸を投与するために、該核酸は、ポリペプチド／タン
パク質の前駆体または成熟形態をコードできる。前駆体形態をコードする場合、
前駆体形態は相同または異種でもよい。後者の場合、組織−タイププラスミノー
ゲン因子(tPA)のリーダー配列のような真核生物のリーダー配列を使用してもよ
い。

【００６１】 免疫原として使用するために、本発明の核酸は、当業者に既知の様々の方法に
より調製できる。まず、核酸を、任意の供給賦形剤（例えば、陰イオン性リポソ
ーム、陽イオン性脂質、微粒子（例えば金微粒子）、沈降剤（例えばリン酸カル
シウム）または任意の他のトランスフェクション−促進剤）を有しない、裸／遊
離形態で使用することができる。この場合、核酸はキャリアを有するまたは有し
ない生理的に許容できる溶液（例えば無菌食塩水または無菌緩衝食塩水）中に希
釈するだけでもよい。存在する場合には、キャリアは好ましくは等張性、低張性
、または弱い高張性であり、比較的低いイオン強度を有する（例えばショ糖溶液
（例えば20％のショ糖を含有する溶液）により提供される）。

【００６２】 あるいは、核酸は細胞吸収を支持する物質と会合させてもよい。すなわち、(i
)細胞の浸透性を修飾する化学物質（例えばブピバカイン；例えば国際特許出願
公開第94/16737号参照）で捕捉してもよい、(ii)リポソーム中に被包してもよい
、または(iii)陽イオン性脂質またはシリカ、金、またはタングステン微粒子と
会合してもよい。

【００６３】 陽イオン性脂質は当該技術においてよく知られており、遺伝子供給に通常使用
される。そのような脂質には、リポフェクチン(Lipofectin)（DOTMA (N-[1-(2,3
-ジオーレイロキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロライドととし
ても知られる）、DOTAP(1,2-ビス(オレイロキシ)-3-(トリメチルアンモニオ)プ
ロパン)、DDAB(ジメチルジオクタデシル−アンモニウムブロミド)、DOGS(ジオク
タデシルアミドログリシルスペルミン)およびDC-Chol(3ベータ−(N-(N’,N’-ジ
メチルアミノメタン)-カルバモイル)コレステロール)のようなコレステロール誘
導体が含まれる。これらの陽イオン性脂質は、欧州特許第187702号、国際特許出
願公開第90/11092号、米国特許第5283185号、国際特許出願公開第91/15501号、
同第95/26385号、および米国特許第5527928号に記載されている。遺伝子供給の
ための陽イオン性の脂質は、好ましくは、例えば国際特許出願公開第90/11092号
に記載されるDOPEのような中性脂質と会合して使用する。

【００６４】 他のトランスフェクション促進化合物を、陽イオン性リポソームを含有する製
剤に加えてもよい。これらの多くは、例えば国際特許出願公開第93/18759号、同
第93/19768号、同第94/25608号、および同第95/2397号に記載される。これらに
は、例えば核膜を通してのDNAの輸送の促進に有用なスペルミン誘導体（例えば
国際特許出願公開第93/18759号参照）およびGALA、グラミシジンS、および陽イ
オン性胆汁酸塩（例えば国際特許出願公開第93/19768号参照）のような膜浸透性
化合物が含まれてもよい。

【００６５】 金またはタングステンの微粒子を、核酸の供給に使用してもよい（国際特許出
願公開第91/359号および同第93/17706号に記載される）。この場合、ポリヌクレ
オチドをコーティングされた微粒子を、針を使用しない注射装置（例えば米国特
許第4,945,050号、同第5,015,580号、および国際特許出願公開第94/24263号に記
載されるような「遺伝子銃」）を使用して内皮または表皮内経路により注射して
もよい。

【００６６】 陰イオン性のおよび中性のリポソームも、当該技術においてよく知られており
（リポソームを作製する方法の詳細な説明について例えば、リポソーム: A Prac
tical Approach, RPC New Ed, IRL Press(1990)参照）、核酸を含む広範囲の産
物の供給に有用である。

【００６７】 前記の方法（すなわち免疫応答を誘発／誘導するための）の特定の実施の形態
には、本発明の免疫原を投与するための点火−後押しプロトコルが含まれる。よ
り詳細には、これらのプロトコルには、腫瘍抗原、または該核酸を含むベクター
（すなわち組換えウィルス、細菌）をコードする免疫原（すなわち核酸（例えば
、プラスミド、細菌／ウィルス／遊離または裸））の特定の／独特の形態による
「点火」段階およびその後の腫瘍抗原（すなわちタンパク質またはその断片（例
えばエピトープ／ペプチド））、腫瘍抗原をコードする核酸（またはその断片）
、または該核酸を含むベクターの変化した（すなわち「点火」のために使用され
たのと別個の）形態を投与する工程を含む少なくとも1つの「後押し」段階が含
まれる。「点火−後押し」原理の実施例は、当業者に知られている（例えば国際
特許出願公開第98/58956号、同第98/56919号、同第97/39771号に記載される）。
該プロトコルの1つの利点は、免疫原またはその断片をコードする核酸を挿入さ
れる／組み込まれるベクター自体（すなわち組換えウィルス）に対して免疫応答
の中立化を産生する問題を回避するという潜在性である（例えばR.M. Conry et
al. (2000) Clin. Cancer Res. 6:34-41）。

【００６８】 当業者によく知られるように、投与形態（すなわち組換えウィルス、核酸、ポ
リペプチド）にかかわりなく、免疫原がアジュバントとともに投与される場合に
、免疫原が免疫応答を誘導／誘発する能力を改良することができる。アジュバン
トは、「ワクチン作製−サブユニットおよびアジュバントアプローチ」(Powell
and Newman, Pleum Press, New York, U.S.A., pp. 61-79 and 141-228(1995)に
より編集された)に記載される。アジュバントは通常、免疫原の免疫原性を強め
るが、それ自体は必ずしも免疫原性ではない。アジュバントは、投与部位の位置
的に近くに免疫原を保有することにより作用して、免疫系の細胞に免疫化物質を
ゆっくりと、継続して放出することを促進する貯蔵効果を産生し得る。アジュバ
ントはまた、免疫系の細胞に免疫原貯蔵を誘引し、そのような細胞を刺激して免
疫応答を誘導させることができる。これによって、本発明の実施の形態には、さ
らにアジュバントを含む組成物が含まれる。

【００６９】 理想的なアジュバントの所望の特徴には以下のものが含まれる； １）毒性を有しない； ２）長く持続する免疫応答を刺激する能力 ３）製造が簡単なことおよび長期間の保存における安定性 ４）所望なら、様々の経路により投与される抗原に対する細胞性および体液性応
答を誘発する能力 ５）他のアジュバントとの共同作用 ６）抗原提示細胞(APC)の個体群との選択的な相互作用をする能力 ７）適切なTH1またはTH2細胞特異的免疫応答を特異的に誘発する能力 ８）抗原／免疫原に対する適切な抗体イソタイプレベル（例えばIgA）を選択的
に増加する能力。

【００７０】 しかしながら、多くのアジュバントは毒性であり、所望でない効果を引き起こ
し得るので、ヒトおよび多くの動物において使用に適切でない。例えば、あるア
ジュバントは、肉芽腫、急性および慢性炎症（すなわちフロイト完全アジュバン
ト(FCA)）、細胞溶解（すなわちサポニンおよびプルロニック(pluronic)ポリマ
ー）および発熱性、関節炎および前部ブドウ膜炎（すなわちムラミルジペプチド
(MDP)およびリポ多糖(LPS)）を誘発し得る。実際は、水酸化アルミニウムおよび
リン酸アルミニウム（まとめて一般にミョウバンと称される）は通常、ヒトおよ
び家畜のワクチンにおけるアジュバントして使用される。ジフテリアおよび破傷
風トキソイドに対する抗体反応を増加することにおけるミョウバンの効力が確立
されている。にもかかわらず、制限がある。例えば、ミョウバンはインフルエン
ザワクチン化には無効であり、他の免疫原による細胞媒介免疫応答を誘発できな
い。ミョウバンをアジュバントとする抗原により誘発される抗体は、主にマウス
中のIgG1イソタイプのものであり、これはワクチン化における保護に最適ではな
い。

【００７１】 アジュバントは、「内因性」または「外因性」として特徴付けられてもよい。
内因性アジュバント（例えばリポ多糖）は、それ自体ワクチンとして使用される
物質（すなわち殺されたおよび弱毒された細菌）の完全なおよび通常の成分であ
る。外因性アジュバントは通常、一般に抗原に非共有結合した不完全な免疫モジ
ュレーターであり、宿主免疫応答を増強するように調製される。

【００７２】 本発明の実施の形態において、アジュバントは、サイトカイン、リンフォカイ
ン、および補助的刺激分子からなる群より選択される少なくとも1つである。実
施例には、インターロイキン2、インターロイキン12、インターロイキン6、イン
ターロイキンガンマ、腫瘍壊死因子アルファ、GM-CSF、B7.1、B7,2、ICAM-1、LF
A-3、およびCD72が含まれる（がこれに限定されない）。特定の実施の形態には
、アジュバントとしてGM-CSFを使用することが含まれる（例えば、すべてここに
引用される米国特許第5679356号、同第5904920号、同第5637483号、同第5749535
号、同第5254534号、欧州特許出願第211684号、および国際特許出願公開第97/28
816号に記載される）。

【００７３】 様々の潜在的な該陰性のアジュバントが記載されている。これらには、膜タン
パク質抗原に複合されたサポニン（免疫刺激複合体）、鉱油を有するプルロニッ
クポリマー、殺されたミコバクテリアおよび鉱油、フロイト完全アジュバント、
ムラミルジペプチド(MDP)のような細菌産物およびリポ多糖(LPS)、並びに脂質A
、およびリポソームが含まれる（がこれに限定されない）。

【００７４】 アジュバントとしてのサポニン自体の使用はよく知られている(Lacaille-Dubo
is, M. and Wagner, H. (1995) Phytomedeicine 2:363)。例えば、クイルA(Quil
A)（South American tree Quillaja Saponaria Molinaに由来する）およびその
画分は、広く記載されている（すなわち、米国特許第5057540号；Kensil, C.R.
(1996) Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 12；および欧州特許第362279号）。
溶血サポニンQS21およびQS17（クイルAのHPLC精製画分）は、潜在的な全身性ア
ジュバントとして記載されている（米国特許第5057540号；欧州特許第362279号
）。これらの文献には、全身性のワクチンについての潜在的なアジュバントして
作用するQS7（クイルAの非溶血画分）の使用も記載されている。QS21の使用がさ
らに、Kensil et al. ((1991) J. Immunol 146:431)に記載されている。QS21お
よびポリソルベートまたはシクロデキストリンの組合せも知られている（国際特
許出願公開第9910008号）。クイルAの画分（例えばQS21およびQS7）を含む特定
のアジュバント系は、国際特許出願公開第9633739号および同第9611711号に記載
されている。

【００７５】 別の好ましいアジュバント／免疫促進剤は、非メチル化CpGジヌクレオチド(“
CpG”)を含有する免疫刺激オリゴヌクレオチドである。CpGは、DNA中に存在する
シトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフについての省略である。CpGは、
全身性および粘膜経路により投与した場合のアジュバントであることが当該技術
において知られている（国際特許出願公開第9602555号；欧州特許第468520号；D
avies et al. (1998) J. Immunol. 160:87；McCluskie and Davis (1998) J. Im
munol. 161:4463）。多くの研究において、BCG遺伝子配列に由来する合成オリゴ
ヌクレオチドは、免疫刺激効果を誘発することができることが示されている（イ
ンビトロおよびインビボで；Krieg, (1995) Nature 374:546）。免疫刺激オリゴ
ヌクレオチド配列の詳細な分析により、CGモチーフは必ずある配列中に存在し、
そのような配列は細菌DNA中で共通であるが脊椎動物のDNAではまれであるという
ことが示された。（例えば、免疫刺激配列はしばしば、プリン、プリン、C、G、
ピリミジン、ピリミジンであるのに対し、CGモチーフは、メチル化されない；し
かしながら、たの非メチル化CpG配列は免疫刺激性であることが知られているの
で、本発明において使用し得る。）当業者にとって自明であるように、前記CGモ
チーフ／配列は、本発明の核酸それ自体の中に組み込んでもよい、または別個の
核酸上に存在してもよい。

【００７６】 様々の他のアジュバントは当該技術において知られており、本発明の実施の形
態に含まれる。Lockhoff et al.の米国特許第4,855,283号（ここに引用される）
には、糖脂質類似体およびそのアジュバントとしての使用が記載される。これら
には、N−グリコシルアミド、N−グリコシルウレアおよびN−グリコシルカルバ
メートが含まれ、これはそれぞれ免疫モジュレーターまたはアジュバントとして
、糖残基においてアミノ酸により置換される。さらに、Lockhoff et al. ((1991
) Chem. Int. Ed. Engl. 30:1611)は、天然に発生する糖脂質（例えばリン酸糖
脂質およびグリセロ糖脂質）に構造類似性を示すN−糖脂質類似体もまた、単純
ヘルペスウィルスワクチンおよび仮性狂犬病ウィルスワクチンにおいて強い免疫
応答を誘発することができるということを報告している。

【００７７】 Moloneyの米国特許第4,258,029号（ここに引用される）には、破傷風毒素およ
びホルマリン不活性化タイプI、IIおよびIIIポリオウィルスワクチンと複合した
場合にアジュバントとしてオクタデシルチロシンヒドロクロライド(OTH)が作用
することが記載される。Nixon-George et al. ((1990) J. Immunol. 14:4798)は
また、組換え肝炎B表面抗原と複合した芳香性のアミノ酸のオクタデシルエステ
ルは肝炎Bウィルスに対する宿主免疫応答を増強するということを報告している
。

【００７８】 アジュバント複合体は、アクリルまたはメタクリル酸のポリマーおよびマレイ
ン無水物およびアルケニル誘導体のコポリマーから選択されてもよい。アジュバ
ント複合体は、特に糖またはポリアルコールのポリアルケニルエーテルと架橋し
たアクリルまたはメタクリル酸のポリマーである。これらの複合体は、カルボマ
ーの用語で知られている(Pharmeuropa Vol.8, No.2, June 1996)。好ましくは、
特にカルボマーの本発明によるアジュバントの溶液は、好ましくは塩化ナトリウ
ムの存在下で滅菌水中で調製され、酸性のpHで得られる溶液である。この保存溶
液は、所望の量のまたはその実質的な部分のNaClを満たした水、好ましくは生理
的塩類溶液(NaCl 9g/l)にいくつかの部分を一度に加えることにより希釈し（所
望の最終濃度を得るために）、同時にまたはその後に好ましくはNaOHで中和する
（pH7.3から7.4まで）。生理的pHにおけるこの溶液は、免疫化物質と混合するた
めに使用する；該混合物は、凍結乾燥した、液体のまたは冷凍した形態で保存で
きる。

【００７９】 当業者はまた、少なくとも3つのヒドロシキシル基（好ましくは8より大きくな
い）を有するポリヒドロキシル化化合物と架橋したアクリルポリマーを含み、少
なくとも3つのヒドロキシルの水素原子が少なくとも2つの炭素原子を有する不飽
和脂肪族ラジカルにより置換されるアジュバントを記載する米国特許第2,909,46
2号（ここに引用される）を参照することができる。好ましいラジカルは、2から
4までの炭素原子を含有するものである（例えばビニル、アリルおよび他のエチ
レン不飽和基）。不飽和ラジカルは、それ自体メチルのような他の置換基を含有
してもよい。Carbopol(BF Goodrich, Ohio, USA)の名称の下で市販される産物が
特に好ましい。これは、アリルショ糖またはアリルペンタエリトリトールと架橋
する。これらの中に、記載されたCarbopolが存在するかもしれない（例えば974P
、934Pおよび971P）。マレイン無水物およびアルケニル誘導体のうち、コポリマ
ーEMA（Monsanto；直線状または架橋した（例えばジビニルエーテルと架橋した
）マレイン無水物およびエチレンのコポリマーである）が好ましい。これらの化
学物質のさらなる記載についてJ. Fields et al. ((1960) Nature 186:778)を参
照してもよい。

【００８０】 本発明のさらなる態様において、免疫化物質の非経口投与に有用なアジュバン
トには、アルミニウム化合物が含まれる（例えば水酸化アルミニウム、リン酸ア
ルミニウム、およびリン酸水素ナトリウム；であるが、カルシウム、鉄または亜
鉛の塩であってもよく、アシル化チロシンの不溶性の乳剤、またはアシル化糖、
陽イオン性または陰イオン性に誘導された多糖、またはポリホスファゼン(polyp
hosphazene)でもよい）。抗原は、当業者によく知られる標準プロトコルにより
アルミニウム化合物とともに沈降させてもよい、またはその上に吸着させてもよ
い。

【００８１】 本発明の実施の形態に含まれる他のアジュバントは、リピドAを含む（特に3-d
e-O-アシル化モノホスホリルリピドA(3D-MPL)）。3D-MPLは、Ribi Immunochem,
Montanaにより製造されるよく知られるアジュバントである。これはしばしば、3
-de-O-アシル化モノホスホリルリピドAと4、5、または6アシル化鎖として化学的
に供給される。これは英国特許第2122204B号に記載される方法によって調製でき
る。3D-MPLの好ましい形態は、直径0.2μmより小さい粒子の大きさを有する特定
の製剤の形態である（欧州特許第689454号）。

【００８２】 粘膜免疫化のためのアジュバントには、細菌の毒素が含まれる（例えば、コレ
ラ毒素(CT)、大腸菌熱不安定性毒素(LT)、クロストリディウムディフィシル(Clo
stridiumu difficile)毒素Aおよび百日咳毒素(PT)、またはその組合せ、サブユ
ニット、トキソイド、または突然変異体）。例えば、天然のコレラ毒素サブユニ
ットB(CTB)の精製された製剤を使用してもよい。任意のコレラの毒素に対する断
片、類似体、誘導体、または融合は、アジュバント活性を有する場合は適切であ
る。毒性が減少した突然変異体を使用してもよい。突然変異体について記載され
ている（例えば、国際特許出願公開第95/17211号（Arg-7-Lys CT突然変異体）、
同第96/6627号（Arg-192-Gly LT突然変異体）、および同第95/34323（Arg-9-Lys
およびGlu-129-Gly PT突然変異体））。さらなるLT突然変異体には、例えば、Se
r-63-Lys、Ala-69-Gly、Glu-110-Asp、およびGlu-112-Asp突然変異が含まれる。
様々の供給源（例えば大腸菌、サルモネラミネソタ(Salmonella minnesota)、ネ
ズミチフス菌、またはフレクスナー赤痢菌）の他のアジュバント（例えば細菌モ
ノホスホリルリピドA(MPLA)）を、免疫化物質の粘膜投与に使用してもよい。

【００８３】 粘膜および非経口免疫化に有用なアジュバントには、ポリホスファゼン（例え
ば国際特許出願公開第95/2415号）、DC-chol（3 b-(N-(N’,N’-ジメチルアミノ
メタン)-カルバモイル)コレステロール（例えば米国特許第5,283,185号および国
際特許出願公開第96/14831号）およびQS-21（例えば国際特許出願公開第88/9336
号）が含まれてもよい。

【００８４】 ここに記載されるアジュバント／免疫刺激物質は、リポソーム、水中油型乳剤
(oil in water emulsion)、および／またはアルミニム塩（例えば水酸化アルミ
ニウム）を含む金属塩のようなキャリアとともに調製してもよい。例えば、3D-M
PLは、水酸化アルミニウム（欧州特許第689454号に記載される）または水中油型
乳剤（国際特許出願公開第9517210号に記載される）とともに調製してもよい；Q
S21は、リポソームを含有するコレステロール（国際特許出願公開第9633739号に
記載される）、水中油型乳剤（国際特許出願公開第9517210号に記載される）ま
たはミョウバン（国際特許出願公開9815287号）とともに都合よく調製される。
ワクチンに調製する場合、免疫刺激オリゴヌクレオチド（すなわちCpG）は通常
、抗原に共有結合された（国際特許出願公開第9816247号に記載される）、また
は水酸化アルミニウムまたはミョウバンのようなキャリアとともに調製された（
Davies et al. Supra; Brazolot-Millan et al (1998) Proc. Natl. Acad. Sci.
95:15553）遊離抗原（国際特許出願公開第9602555号；McCluskie and Davis (1
989) Supra）とともに自由溶液中で投与する。

【００８５】 アジュバント／免疫刺激物質もまた本発明の範囲内である。例えば、モノホス
ホリルリピドAおよびサポニン誘導体（国際特許出願公開第9400153号、同第9517
210号、同第9633739号、同第9856414号、同第9912565号、同第9911214号に記載
される）、またはより詳しくはQS21と3D-MPLとの組合せ（国際特許出願公開第94
00153号に記載される）を使用してもよい。免疫刺激性オリゴヌクレオチドとサ
ポニン（例えばQS21）との組合せ、またはアルミニウム塩と組み合わせたモノホ
スホリルリピドAの組合せ（好ましくは3D-MPL）もまた、本発明において使用す
る潜在的なアジュバントを形成する。

【００８６】 以下の限定のない実施例は、本発明を説明するものである。

【００８７】 実施例実施例１ この実施例は、代表的な腫瘍抗原（修飾されたgp100）の結節内注射と皮下注
射とを比較する。

【００８８】 方法および実験計画 テストシステム カニクイザル（Macaca fascicularis）特定の目的に応ずるように育てられた動
物 供給者：Siconbrec “Simian Conservation Breeding & Research Center Inc.
”, Fema Building, 44 Gil Puyat Avenue Makati, Metro Manila, Philippines
. 研究における動物の数：12匹（オス6匹およびメス6匹）。

【００８９】 処理開始時の年齢：26から38ヶ月。

【００９０】 ・処理開始時の体重範囲（1日目）： ・オス：1.73から2.34kg。

【００９１】 ・メス：1.71から2.65kg。

【００９２】 畜産 ・住居：1つの空気調節をした部屋。

【００９３】 ・温度：19℃から25℃まで（標的範囲）。

【００９４】 ・相対湿度：＞40%。

【００９５】 ・空気交換：1時間につき8分間の空気交換。

【００９６】 ・照明周期：12時間明るい（人工的に）／12時間暗い。

【００９７】 ・おり：動物は、ステンレス鋼のメッシュのおり（約540×810×760mm）に一匹
ずつ入れた。

【００９８】 ・食餌：化学物質および細菌の汚染について分析した拡大された完全な市販され
る霊長類の食餌(Mazuri diet, Special Diet Services Ltdlk Witham, Essex, C
M8, 3AD, Great Britain)。

【００９９】 分配される量：100g食餌／動物／日。

【０１００】 さらに、動物はフルーツの食餌（リンゴまたはバナナ）を与えられた。

【０１０１】 動物を、臨床実験の調査のための血液サンプリングの前におよび死体解剖の前に
少なくとも16時間断食させた。

【０１０２】 ・水；任意に水を飲む（ボトルにより）。

【０１０３】 ・汚染物質：研究の目的の達成を妨げ得るレベルで食餌または水中に存在する汚
染物質は認識されなかった。

【０１０４】 前処理方法 ・動物の健康の処置；すべての動物は、到着時に不健康についての臨床実験およ
び順化期間中に獣医臨床実験を受けた。

【０１０５】 ・順化期間：動物の到着から処理を開始するまで少なくとも3週間 実験計画 ・処理群に対する配分は、体重クラスに基づく無作為の配分方法を使用して順化
期間中に行った。

【０１０６】 ・表１に示されるように動物を処理群に割り当てた。投与された投与量レベルは
表２に示される。

【０１０７】 テスト／対照物質の投与 グループ1および2の動物 ・投与の方法：左鼠径リンパ節における注射。

【０１０８】 動物は、ケチミン塩酸塩(Imalgen 500-Merial, Lyon, France)の筋肉内注射によ
るそれぞれの投与前に弱い麻酔をかけた。同じリンパ節を時折注射した（左側）
。それぞれの注射の後、ヨード(Vetedine-Vetoquinal, Lure, France)で局所消
毒した。

【０１０９】 グループ3 ・経路：皮下。

【０１１０】 ・投与の方法：滅菌注射器および皮下導入された針を使用して巨丸剤注射をする
。4つの注射部位を使用した後、ヨード(Vetedine-Vetoquinal, Lure, France)で
局所消毒した。グループ1および2の動物と同じ条件下になるように動物を、ケチ
ミン塩酸塩(Imalgen 500-Merial, Lyon, France)の筋肉内注射によるそれぞれの
投与前に弱い麻酔をかけた。

【０１１１】 表３に示されるように背側頸部／肩甲骨間領域の4つの注射部位を使用した。

【０１１２】 ・ELISPOT分析 ELISPOT分析を使用して、様々の処理群におけるサルにおいて産生される細胞
媒介免疫応答を評価した。特に、ELISPOT IFNγアッセイを使用して、gp100抗原
に応答するサルから得られるTリンパ細胞からのIFNγ産生を測定した。

【０１１３】 材料および方法 プレート：ミリポアマルチスクリーンHAプレート／MAHA S45.10（96ウェル）。

【０１１４】 捕獲抗体：MABTECHモノクローナル抗−IFNγ抗体／G-Z4 1mg/mL。

【０１１５】 検出抗体：MABTECHモノクローナル抗−IFNγ抗体／7-B6-1-ビオチン 1mg/mL。

【０１１６】 酵素：SIGMA, Extravidin-PA抱合体／E2636. 基質：BIORAD, NBT/BCIP−アルカリ性ホスファターゼ抱合体基質kit/ref: 170-6
4 32。

【０１１７】 コーティング マルチウェルプレート中にカルボネートビカルボネート緩衝剤0.1M pH9.6で1/10
00に希釈した1μg/mlの捕獲抗体をウェルごとに100μL配置する。4℃で一晩イン
キュベートする。1X PBSで四度洗浄する。

【０１１８】 飽和 実質的なアミノ酸、ピルビン酸、ヘペス緩衝剤およびPeni-Streptoを有しない10
%FCSを加えたRPMIをウェルごとに200μL配置する。37℃で2時間インキュベート
する。

【０１１９】 テスト 免疫化動物からの細胞を、(a)培地のみ；(b)1mg/mLの濃度でプールされたペプチ
ド；および(c)非特異的刺激(PMA-lono)に対してテストする。IFN-γ産生を刺激
するためにこの実施例において使用されるプールされたペプチドは、gp100に由
来し、表４から７までに記載される。それぞれのサンプルの最終量は200μLであ
る。37℃で20時間インキュベートする。

【０１２０】 1X PBSおよび0.05% Tween 20で四度洗浄する。

【０１２１】 検出 1X PBS、1% BSAおよび0.05% Tween 20で1/1000に希釈した1μg/mLの検出抗体を
ウェルごとに100μL配置する。室温で2時間インキュベートする。1X PBSおよび0
.05% Tween 20で四度洗浄する。

【０１２２】 反応 1X PBS、1% BSAおよび0.05% Tween 20で1/6000に希釈したExtravidin-PA抱合体
をウェルごとに100μL配置する。室温で45時間インキュベートする。1X PBSおよ
び0.05% Tween 20で四度洗浄する。

【０１２３】 基質の追加 予め調製した基質をウェルごとに100μL配置する。例えば、1プレートにつき、
調製する：9.6mLの滅菌水、0.4mLの25X緩衝剤、0.1mLの溶液A(NBT)および0.1mL
の溶液B(BCIP)。室温で30−45分間インキュベートする。滅菌水で洗浄する。乾
燥させプラスチックフィルムに移す。Zeiss画像解析機を使用してスポットの数
を計数する。それぞれのスポットは、T細胞を分泌するそれぞれのIFN-γに対応
する。

【０１２４】 結果 ELISPOT分析において陽性であることがテストされた動物は、図1−4に示される
。全体的に、この結果により、gp100抗原の結節内投与を受けた動物の2匹のうち
2匹（すなわち100%）、およびgp100抗原の皮下投与を受けた動物の4匹のうち2匹
（すなわち50%）は陽性の細胞媒介免疫応答を有したことが示される。

【０１２５】ELISA分析 当該技術において知られる標準の原理を使用してELISAを行った。簡単に言えば
、ヒトgp100(“hgp100”；バキュロウィルスで産生される)をコーティング緩衝
剤（カルボネート−ビカルボネート、pH9.6）で希釈し、0.5μg/ウェルで96ウェ
ルに加えた。プレートを4℃で一晩配置した。次にプレートを洗浄し、阻止緩衝
剤（リン酸緩衝化生理食塩水／0.5% Tween 20/1.0% BSA、pH7.2）を37℃で2時間
加えた。その後プレートを洗浄し、血清を希釈緩衝剤で希釈した（リン酸緩衝化
生理食塩水／0.5% Tween 20/1.0% BSA、pH7.2）。この研究のために、サル血清
を1:800まで希釈し、テストしたそれぞれのサンプルについて”7”つの連続した
3倍希釈を行った。ヒト血清対照を、希釈緩衝剤中で1:50に希釈し、”7”つの連
続した2倍希釈を行った。それぞれの希釈は、2度行った。プレートを、37℃でさ
らに2時間インキュベートした。プレートを洗浄し、希釈緩衝剤で1:100に希釈し
たホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)−抱合された抗−ヒト二次抗体（
すべてヒツジからの抗−ヒトIg(Amersham Life Science, NA933)）をウェルに加
え、37℃で1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、基質緩衝剤（50mM リ
ン酸塩／25mM クエン酸塩、pH7.2）中でH₂O₂を有するOPD（o-フェニレンジアミ
ンジヒドクロライド）基質をウェルに加えた。速度論ELISAについては、プレー
トを連続的に（「停止」緩衝剤を使用せず）反復的に（15分間につき2分間の間
隔で）読み取った。プレートを450nmで読み取った。

【０１２６】結果 上述の実験の結果は、表８および図５に示される。グループ2は、ALVAC(2)-gp
100(mod)の結節内注射を受け、その後修飾されたgp100ペプチド209(2M)および29
0(9V)により後押しされる；グループ3の動物は、ALVAC(2)構成体の皮下注射を受
け、その後ペプチドにより後押しされる；グループ1の動物は、対照として食塩
水の結節内注射を受けた。

【０１２７】 図５から分かるように、抗原の結節内注射により、抗原が皮下注射された場合
よりずっと大きい体液性応答が誘発された。

【０１２８】 簡単に言えば、実施例の結果により、腫瘍抗原の皮下注射によって投与の従来
の皮下経路により腫瘍抗原が注射された場合よりもずっと大きい体液性および細
胞媒介応答が誘発されるということが示される。

【０１２９】 本発明は好ましい実施例であると目下考えられているものに関して記載されて
いるが、本発明は開示される実施例に限定されるものではないことを理解すべき
である。反対に、本発明は、添付の特許請求の意図および範囲内に含まれる様々
の修飾および同等の組合せを範囲とするものである。

【０１３０】 すべての文献、特許および特許出願は、それぞれの文献、特許または特許文献
が明確にそれぞれここに引用されたのと同じ程度までここに完全に引用される。

【０１３１】

【表１】

【表２】

【表３】

【表４】

【表５】

【表６】

【表７】

【表８】

【図面の簡単な説明】

【図１】 腫瘍抗原の結節内注射を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す棒グラ
フ

【図２】 腫瘍抗原の結節内注射を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す棒グラ
フ

【図３】 腫瘍抗原の皮下投与を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す棒グラフ

【図４】 腫瘍抗原の皮下投与を受けた動物のIFN-γ-ELISPOT分析の結果を示す棒グラフ

【図５】 ALVAC−修飾されたgp100／修飾されたgp100ペプチド免疫原の結節内（グルー
プ2）および皮下（グループ3）投与の摂生後の抗体反応を示すグラフ

【図６】 修飾されたgp100M cDNAの核酸配列（配列番号109）

【図７】 修飾されたgp100Mタンパク質の推定アミノ酸配列（配列番号110）

【図８】 修飾されたCEAの核酸およびアミノ酸配列（配列番号111および112）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 タータグリア，ジェイムズ アメリカ合衆国 ニューヨーク州 12303 スケネクタディー クリスティーナ ド ライヴ ７ (72)発明者 モワンジェオン，フィリップ フランス国 Ｆ−69480 ポンミエ ル シャリエ (72)発明者 バーバー，ブライアン カナダ国 エル５ジー ３ティー５ オン タリオ州 ミシソーガ ブロードムーア アヴェニュー 1428 Ｆターム(参考） 4C084 AA01 AA13 CA01 NA14 ZB26 4C085 AA03 BA77 BA78 BA85 BB01 CC07 CC08 GG01 GG10 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 NA14 ZB26 4C087 AA01 AA02 BC83 MA70 NA14 ZB26

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 腫瘍抗原に対して動物中で免疫応答を誘発する方法であって
   、有効量の腫瘍抗原または腫瘍抗原をコードする核酸配列を前記動物中のリンパ
   部位に投与する工程を含む方法。
2. 【請求項２】 前記腫瘍抗原が、CEA、gp100、タンパク質のMAGEファミリー
   、DAGE、GAGE、RAGE、NY-ESO 1、Melan-A/MART 1、TRP-1、TRP-2、チロシナーゼ
   、HER-2/neu、MUC-1、p53、KSA、PSA、PSMA、およびその断片および修飾形態か
   らなる群より選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 前記リンパ部位が、リンパ節であることを特徴とする請求項
   １記載の方法。
4. 【請求項４】 前記核酸が、ウィルス核酸、細菌DNA、プラスミドDNA、裸／
   遊離DNA、およびRNAから群より選択されることを特徴とする請求項１から３いず
   れか１項記載の方法。
5. 【請求項５】 前記ウィルス核酸が、アデノウィルス、アルファウィルスお
   よびポックスウィルス核酸からなる群より選択されることを特徴とする請求項４
   記載の方法。
6. 【請求項６】 前記ポックスウィルス核酸が、アビポックス、オルトポック
   スおよびスイポックス核酸からなる群より選択されることを特徴とする請求項５
   記載の方法。
7. 【請求項７】 前記ポックスウィルス核酸が、ワクチニア、ニワトリポック
   ス、カナリアポックスおよびブタポックス核酸からなる群より選択されることを
   特徴とする請求項５記載の方法。
8. 【請求項８】 前記ポックスウィルス核酸が、MVA、NYVAC、TROVAC、および
   ALVAC核酸からなる群より選択されることを特徴とする請求項５記載の方法。
9. 【請求項９】 前記核酸が、ベクター中に含有されることを特徴とする請求
   項１から８いずれか１項記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記ベクターが、組換えウィルスまたは細菌であることを
    特徴とする請求項９記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記組換えウィルスが、アデノウィルス、アルファウィル
    スおよびポックスウィルスからなる群より選択されることを特徴とする請求項１
    ０記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記ポックスウィルスが、アビポックス、オルトポックス
    およびスイポックスからなる群より選択されることを特徴とする請求項１１記載
    の方法。
13. 【請求項１３】 前記ポックスウィルスが、ワクチニア、ニワトリポックス
    、カナリアポックスおよびブタポックスからなる群より選択されることを特徴と
    する請求項１１記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記ポックスウィルスが、MVA、NYVAC、TROVAC、およびAL
    VACからなる群より選択されることを特徴とする請求項１１記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記核酸が、細胞中に含有されることを特徴とする請求項
    １から８いずれか１項記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記腫瘍抗原またはそれをコードする核酸が、ワクチン中
    に含有されることを特徴とする請求項１から１４いずれか１項記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記腫瘍抗原が、gp100、CEAまたはgp100あるいはCEAの断
    片または修飾形態であることを特徴とする請求項１から１６いずれか１項記載の
    方法。
18. 【請求項１８】 前記修飾されたgp100が、配列IMDQVPFSY（配列番号1）お
    よび／またはYLEPGPVTV（配列番号2）を含むことを特徴とする請求項１７記載の
    方法
19. 【請求項１９】 前記修飾されたCEAが、図８に示される配列（配列番号112
    ）および／またはYLSGADLNL（配列番号113）を含むことを特徴とする請求項１７
    記載の方法。