JP2003509340A - 変性疾患、神経疾患、自己免疫疾患に付随する病的状態を検出、予防又は治療するための、ポリペプチドの使用 - Google Patents

変性疾患、神経疾患、自己免疫疾患に付随する病的状態を検出、予防又は治療するための、ポリペプチドの使用

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Abstract

(57)【要約】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントを含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１-８、配列番号１０-２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されている、使用。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は特に、変性疾患及び／又は自己免疫疾患及び／又は神経疾患に付随す
る病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又
は治療用組成物を得るための、少なくとも１つのポリペプチドの使用に関する。
【０００２】 発明に従うと、変性疾患というのは、細胞死又は細胞破壊のプロセスが生理学
的及び／又は臨床的障害に結びついた病気のことである。アルツハイマー病、筋
萎縮性側索硬化症、パーキンソン病は、神経変性疾患の中に分類される。自己免
疫疾患というのは、単数又は複数の自己抗原に対する免疫系の反応過多のことで
ある。多発性硬化症（ＳＥＰ）、リウマチ性多発関節炎（ＰＲ）及び紅斑性狼瘡
は、自己免疫疾患の中に分類される。
【０００３】
【従来の技術】
多発性硬化症は、一連の寛解及び増悪期を経て又は規則的進行に従って推移し
、その病理解剖学的特徴が、脳の白質及び脊髄の中のきわめて限定された脱髄ゾ
ーンの形成から成る、人間の中枢神経系の慢性疾患である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
組織学的には、これらのゾーンは、病変プロセスの早期段階において、この脱
髄の原因であるグリア細胞の損傷に付随する軸索周辺髄鞘の分解を呈する。小グ
リア細胞（中枢神経系の在住組織マクロファージ）ならびにおそらくは潜入した
血液単球に由来するマクロファージが関与する炎症性マクロファージ活性化は、
この脱髄プロセスに結びつけられ、髄鞘化された葉層の破壊に寄与する。脱髄さ
れたゾーンの中心では、グリア細胞の相対的枯渇が再度認められ、一方、周辺で
は星状膠細胞の増殖が進行し、脱髄された斑に侵入して繊維質の又はグリア細胞
様の斑を生成することができる。これらの強膜構造が、疾患に与えられた名称の
起源となっている。
【０００５】 これらの斑のもう１つの特徴は、それらがその進行の中心となる脈管要素とほ
ぼ系統的に結びつくという点にある。
【０００６】 組織学的レベルでは、毛細管内皮で構成される血液‐脳障壁（ＢＨＥ）の頻繁
な変質が観察される。ＢＨＥの維持における決定的要素の１つは、星状膠細胞の
足と呼ばれる星状膠細胞の細胞質拡張部分が下接して存在することから成る。お
そらく、星状膠細胞の足は、ＢＨＥを具体化する毛細管内皮障壁の凝集力を確保
する気密な接合構造の形成を誘発するか又はその維持を可能にすると思われる。
ところが、さまざまな病理モデルが、ＢＨＥの変質及び星状膠細胞の足の枯渇を
報告している。
【０００７】 一方、ＳＥＰの病変プロセスにおいては、ＢＨＥの変質は、血液循環に由来す
るリンパ球の集注により、付随する炎症性応答を増幅するのに寄与する。免疫細
胞に結びつけられる炎症の寄与は、ＳＥＰにおいて重要であり、病変プロセスに
参加する。
【０００８】 ＳＥＰの病因論は、この病気がさまざまな起源をもち得ることから現在論議の
的になっている。細菌及び／又はウイルスを原因とする仮説も立てられた。一方
、特許出願ＷＯ９５／２１８５９号の中で記述されているように、Ｈ．Ｐｅｒｒ
ｏｎ ｅｔ ａｌ．は、脱髄斑の典型的な形成及び星状膠細胞グリオースにたど
りつく病因論的プロセスの単数又は複数のエフェクタ作用物質を探究するに至っ
た。この研究の枠内では、彼らは、ＳＥＰ患者の脳脊髄液（ＬＣＲ）中に、ヒト
又は動物の星状膠細胞又は乏突起膠細胞に対する毒性活性を示す少なくとも１つ
の因子が存在することを立証した。この毒性活性は、中間フィラメント網の細胞
形態学的組織崩壊及び／又は、前記フィラメントのタンパク質の分解及び／又は
グリア細胞のアポトーシスによる細胞死滅により特徴づけられる。彼らは、特許
出願ＷＯ９５／２１８５９号に記述されているように、生きた細胞の臭化メチル
テトラゾリウム（ＭＴＴ）での定量的比色秤量により、ＳＥＰ患者のＬＣＲ及び
血清の標本中のこの毒性活性のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出と多発性硬化症の間の有意
な相関関係を実証した。一方、Ｃ．Ｍａｌｃｕｓ-Ｖｏｃａｎｓｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．は、この毒性因子の活性検出のためには尿がきわめて有利な生体流体である
ことを示し、アポトーシスによって死滅した付着性グリア細胞を検出及び／又は
数量化するためのフローサイトメトリを用いた方法を開発した。この方法に関す
るすべての情報は、その内容が参考として内含されている特許出願ＷＯ９８／１
１４３９の中で記述されている。
【０００９】 ＳＥＰ患者の尿及びＬＣＲのタンパク質分画からこの毒性因子を同定するべく
試験が実施された。各分画のタンパク質含有量は、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥゲル１２％
上で分離され、銀によるゲルの着色後に観察された。観察されたタンパク質のう
ち、約２１ｋＤの見かけの分子量に中心をおくタンパク質分画がｉｎ ｖｉｔｒ
ｏで検出された毒性活性にわずかだけ結びついていることがわかり、約１７ｋＤ
の見かけの分子量に中心をおく分画はこの毒性活性に大半が結びついていること
がわかった。
【００１０】 ＳＥＰ患者のＬＣＲに由来する分画のルイスラット脳内への注入及びラットの
脳の切片の死後組織学的観察により、注入から３カ月後に、星状膠細胞個体群の
アポトーシス及び脱髄斑の形成を観察することができた。全ての情報は、その内
容が参考として内含されている特許出願ＷＯ９７／３３４６６号の中に含まれて
いる。これらの観察事実は、生検後ＳＥＰ罹患患者の脳の切片について観察でき
た事実に合致している（Ｂｅｎｊｅｌｌｏｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ
．Ｂｉｏｌ．，１９９８、４４（４）、５７９-５８３）。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
当該発明人は、今、ＳＥＰ患者の生体標本中、特に尿、脳脊髄液及び血清中で
グリア細胞に対するこの毒性活性に結びつけられたタンパク質を同定し分析した
。
【００１２】 タンパク質の精製及びＳＤＳ‐ＴＲＩＣＩＮＥゲル上での分離の後、発明人は
、少なくとも５つの異なるタンパク質系統群に対応するそれぞれ８、１４、１８
及び２０ｋＤの異なる見かけの分子量をもつ４つの有利なバンドの存在を明らか
にした。これらの系統群のタンパク質は次に、質量分析及び／又は配列決定及び
データバンク内での相同性研究によって分析された（ＮＣＢ１ｈｔｔｐ：／ｗｗ
．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ，Ｂａｓｉｃ Ｂｌａｓｔ Ｓｅａｒｃｈ
，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｌａｓｐ，タンパク質配列は、数値データベース内にＦＡ
ＳＴＡ書式で入力され、使用されるアルゴリズムはＭａｔｒｉｘ ＢＬＯＳＵＭ
６２であり、「Ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ」と呼ばれる同一性は、百分率で示された
同一アミノ酸の数に対応し、陽性「Ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ」は、百分率で与えられ
たソフトウェアの上述のパラメータに従った生物学的等価を示すアミノ酸に対応
する）。これらのタンパク質は、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前
駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリン及びサポシンＢの賦活物質前駆体
のタンパク質系統群に属する。より厳密に言うと、タンパク質は（ｉ）２０ｋＤ
のバンドについて、アミノ酸３４６４に始まりアミノ酸３７０７で終わり（Ｍｕ
ｒｄｕｃｈ ＡＤ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９２年４月２５
日；２６７（１２）；８５４４-４７）、配列識別子中で配列番号２と番号づけ
された（全タンパク質ペルルカンは配列番号１と番号づけされている）ペルルカ
ンのＣ末端フラグメントであり、（ｉｉ）２０ｋＤのバンドについては、その配
列が配列番号４として示されているレチノール結合血漿タンパク質前駆体（Ｍｏ
ｎａｃｏ ＨＬ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５、２６８（５２１３
）；１０３９‐１０４１）であり、（ｉｉｉ）１８ｋＤのバンドについては、配
列番号８で同定されているガングリオシドＧＭ２の賦活物質の前駆体（Ｆｕｒｓ
ｔ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ， １９９０年９月２４
日；１９３（３）：７０９‐１４）であり、（ｉｖ）１４ｋＤのバンドについて
は、配列番号１７で同定されたカルグラヌリンＢ（Ｌａｇａｓｓｅ， Ｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９８８，Ｊｕｎ；８（６）；２４０
２‐１０）であり、（ｖ）８ｋＤのバンドについては、配列番号２４に表わされ
ているサポシンＢ（Ｋｌｅｉｎｓｃｈｍｉｄｔ Ｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ Ｈｏｐｐｅ Ｓｅｙｌｅｒ，１９８８、Ｄｅｃ；３６９（１２）；１
３６１‐５）である。なお、彼らは同様に、前記基準配列に対する変異配列の存
在、特に１８ｋＤのバンドについて、配列番号９のガングリオシドＧＭ２賦活物
質前駆体の変異配列の存在も明らかにした。これらの変異タンパク質配列は、前
記タンパク質についてコードする遺伝子レベルでの突然変異産物であるか又は、
スプライシング現象の結果である。ここで例えば、カルプロラクチンがカルグラ
ヌリンＢの一変異体であることに留意されたい。
【００１３】 タンパク質ペルルカンのＣ末端フラグメント（配列番号２）は例えば、遺伝子
コードを考慮に入れて、ＤＮＡヌクレオチド配列配列番号６９によりコードされ
る。レチノール結合血漿タンパク質の前駆体タンパク質（配列番号４）は例えば
、遺伝子コードを考慮に入れてＤＮＡヌクレオチド配列配列番号７０によりコー
ドされる。ＧＭ２の賦活物質であるタンパク質（配列番号８）は、例えば、遺伝
子コードを考慮に入れてＤＮＡヌクレオチド配列配列番号３１によってコードさ
れる。ＧＭ２の賦活物質である突然変異を受けたポリペプチドに由来するペプチ
ドＦＳＷＤＮＣＦＥＧＫ ＤＰＡＶＩＲ及びＹＳＬＰＫＳＥＦＡＶ ＰＤＬＥＬ
Ｐは、遺伝子コードを考慮に入れてそれぞれＤＮＡヌクレオチド配列配列番号６
６及び６７によってコードされる。カルグラヌリンＢタンパク質（配列番号１７
）は、例えば、遺伝子コードを考慮に入れてＤＮＡヌクレオチド配列配列番号４
２によってコードされる。サポシンＢタンパク質（配列番号２４）は例えば、遺
伝子コードを考慮に入れてＤＮＡヌクレオチド配列配列番号５２によってコード
される。
【００１４】
【発明の実施の形態】
タンパク質系統群というのは、ＤＮＡの同じ遺伝子からコードされ、遺伝子の
示差的多重スプライシング及び／又は異なる読取り枠の結果をもたらされるタン
パク質全体のことを意味する。ＤＮＡ遺伝子は、交代スプライシング現象で転写
され、こうして、タンパク質の異なる一次配列が翻訳されることになる。これら
のタンパク質は全て、同じタンパク質系統群に属する。同様に「タンパク質系統
群」という語には、その系統群の基準タンパク質配列と少なくとも７０％、好ま
しくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を示すタンパ
ク質も内含されている。
【００１５】 多重スプライシングというのは、有利なヌクレオチド領域内に少なくとも一回
介入するスプライシングのことである。
【００１６】 例えば、レモノール結合血漿タンパク質前駆体タンパク質系統群というのは、
配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７という配列のタンパク質又は
そのフラグメント及び異なる読取り枠に沿って対応する遺伝子によりコードされ
るタンパク質を少なくとも含んで成るタンパク質系統群のことである。
【００１７】 例えば、ＧＭ２の賦活物質であるタンパク質系統群というのは、配列番号８、
配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列
番号１４、配列番号１５、配列番号１６という配列のタンパク質又はそのフラグ
メント、及び異なる読取り枠に沿って対応する遺伝子によりコードされ遺伝子の
示差的多重スプライシング及び／又は異なる読取り枠の結果としてもたらされる
タンパク質を少なくとも含んで成るタンパク質系統群のことである。
【００１８】 例えば、カルグラヌリンＢタンパク質系統群というのは、配列番号１７、配列
番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番
号２３という配列のタンパク質又はそのフラグメント、及び異なる読取り枠に沿
って対応する遺伝子によりコードされ遺伝子の示差的多重スプライシング及び／
又は異なる読取り枠の結果としてもたらされるタンパク質を少なくとも含んで成
るタンパク質系統群のことである。タンパク質 ＭＲＰ１４（配列番号１７）及
びＭＲＰ８（配列番号１８）は、同じ遺伝子によりコードされながら、異なるタ
ンパク質配列を有し、同じタンパク質系統群に属する。
【００１９】 例えば、サポシンＢタンパク質系統群というのは、配列番号２４、配列番号２
５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９という配列のタ
ンパク質又はそのフラグメント、及び異なる読取り枠に沿って対応する遺伝子に
よりコードされ遺伝子の示差的多重スプライシング及び／又は異なる読取り枠の
結果としてもたらされるタンパク質を少なくとも含んで成るタンパク質系統群の
ことである。
【００２０】 タンパク質についてコードする核酸系統群というのは、同じＤＮＡ遺伝子から
転写され、示差的多重スプラインシングの結果もたらされるｃＤＮＡ及び／又は
ＲＮＡ核酸配列全体のことである。ＤＮＡ遺伝子は、示差的スプライシング現象
で転写され、異なる配列の異なる核酸（ｃＤＮＡ、ＲＮＡ）の合成を導く。これ
らのｃＤＮＡ及びｍＲＮＡ配列は全て、同じ核酸系統群に属するものとみなされ
る。
【００２１】 例えば、レモノール結合血漿タンパク質前駆体タンパク質系統群についてコー
ドする核酸系統群というのは、配列番号３０という配列の核酸又はフラグメント
を少なくとも含んで成る核酸系統群のことである。
【００２２】 例えば、ＧＭ２の賦活物質であるタンパク質系統群についてコードする核酸系
統群というのは、遺伝子の示差的多重スプラインシグ及び／又は異なる読取り枠
の結果もたらされる配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４
、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、
配列番号４０、配列番号４１という配列の核酸又はフラグメントを少なくとも含
んで成る核酸系統群のことである。
【００２３】 例えばカルグラヌリンＢタンパク質系統群についてコードする核酸系統群とい
うのは、遺伝子の示差的多重スプラインシング及び／又は異なる読取り枠の結果
もたらされる配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列
番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番
号５１、配列番号５２という配列の核酸又はフラグメントを少なくとも含んで成
る核酸系統群のことである。
【００２４】 例えば、サポシンＢタンパク質系統群についてコードする核酸系統群というの
は、遺伝子の示差的多重スプラインシング及び／又は異なる読取り枠の結果もた
らされる配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５という配列の核酸又はフラ
グメントを少なくとも含んで成る核酸系統群のことである。
【００２５】 「スプライシング」というのは、写しの成熟の間におけるイントロン切除及び
エキソン接合のメカニズムのことであり、「示差的スプライシング」というのは
、異なる伝令ＲＮＡの形成をもたらし異なる複数のタンパク質の合成を発生させ
うる一次写しの複数のスプライシングスキーマの存在を意味する（Ｋａｐｌａｎ
及びＤｅｌｐｅｃｈ，Ｂｉｏｌｏｇｉｅ Ｍｏｌｉｃｕｌａｉｒｅ ｅｔ Ｍｅ
ｄｅｃｉｎｅ，１９９３年、第２版、Ｍｅｄｅｃｉｎｅ ｅｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ，Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ，ｐ７３-７７）。この現象については科学文献中に
充分記述されている。例としては、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖についてコー
ドする遺伝子のモデル、ディストロフィン遺伝子モデル、アルファアミラーゼ遺
伝子モデル、ミエリン遺伝子などを挙げることができる。
【００２６】 特に真核生物遺伝子が、前記遺伝子によってコードされたタンパク質のフラグ
メントについてコードする領域（エキソン）及びタンパク質等価物をもたないそ
の他の領域を含むことがわかっている。これは、遺伝子がまず第１に特異的ヌク
レオチド部位（スプラインシング部位）のレベルでスプライシング酵素によりそ
の後切断される「一次」ＲＮＡへと転写されるという事実に起因している。これ
らの酵素は次に、タンパク質についてコードする領域を接合し、かくして、その
イントロン領域が除去された「二次」ＲＮＡを再構築する。なお、細胞表現型（
ひいては組織又は分化）に応じてこれらの酵素は全て発現されるわけではなく、
従って同じＲＮＡが、同じ個体の複数の細胞の中で異なる形でスプライシングさ
れ得、かくして配列の差異を伴うタンパク質が生成されることになる。しかしな
がらこれらの現象は、完全にコードするものの（エキソン）異なるタンパク質産
物間の示差的スプライシング現象可能な異なるスプライシングに従って、同じヌ
クレオチド領域から異なる複数のタンパク質を生成することになる複数のヌクレ
オチド領域に対しても適用可能である。
【００２７】 その上、ヌクレオチド領域が遺伝子コードの３つの潜在的メッシュに従って複
数の読取り枠をもち得ることも知られている。かくして、複数の読取り段階にお
ける複数の翻訳開始コドンの存在及び／又は、ＤＮＡ上の異なる読取り段階にお
いて存在する配列を接合する一次ＲＮＡのスプライシングによって、同一のＤＮ
Ａ領域が、ペプチド配列の観点からみて互いに無関係のタンパク質産物を生成す
ることが可能となる。
【００２８】 最後に、同じ種の個体間に存在する遺伝子多形現象及び／又は個々の突然変異
は、一定の与えられたＤＮＡ領域内でスプライシング部位を作り出すか又は削除
し、かくしてこの領域により通常産生される単数又は複数のタンパク質産物の配
列及び構造を修正することができる。
【００２９】 かくして、これらの異なる現象の組合せにより、一定の与えられた研究におい
て有利な遺伝子領域を決定するものとして同定されたＤＮＡセグメントに対応す
る同じヌクレオチド配列が、さまざまな読取り枠内で示差的及び代替的スキーマ
に従ってスプライシングされた全てのＲＮＡ系統群、ひいては当然のことながら
、１つの読取り枠さらには３つの潜在的枠に従った「モザイク」配列及び遺伝子
多形現象に場合によって結びつけられる突然変異をもつタンパク質及びポリペプ
チドの系統群全てを定義するのに必要かつ充分な情報を含むことを可能にするこ
とができる。
【００３０】 この現象の一例は、ＨＩＶ-１ レトロウイルスのｅｎｖ遺伝子のヌクレオチ
ド領域によって代表され得る。実際、異なる複数のタンパク質が同じ配列のセグ
メントによってコードされる：例えば、外被糖タンパク質及び調節タンパク質Ｔ
ＡＴ、ＲＥＶ、ＮＥＦ、ＶＩＦ。
【００３１】 さらに、タンパク質が同一サブユニット（ホモダイマー、ホモマルチマー）又
は異なるサブユニット（ヘテロダイマー、ヘテロマルチマー）の組合せの結果と
してもたらされうるということも知られている。かくして、同じＤＮＡ領域によ
ってコードされた異なるタンパク質産物が互いに組合わさって複合マルチマータ
ンパク質単位を構成することもできる。この現象は先行する現象に追加されて、
１つのタンパク質が１つのペプチドフラグメントにより同定された時点でこの複
合タンパク質を構成するその他全ての要素及びそれらをコードするスプライシン
グされたＤＮＡ及びＲＮＡセグメントならびにタンパク質産物系統群の全ての成
員及びそれらの集合体を論理的に同定することが可能である。もう１つの例は、
タンパク質系統群ＭＲＰ１４又はカルグラヌリンＢ、ＭＲＰ８、カルプロテクチ
ン、プソリアシンなどについてコードするヒトＤＮＡ領域によっても提供される
。
【００３２】 同様に、本発明は、変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検
出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治
療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントを
含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパク質は、
未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配
列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、
配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配
列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列
番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番
号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９、及び前述のペプチド配
列のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利
には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチ
ノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及
びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属する
ペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択され
ている使用を目的とする。特定の実施形態においては、前述の少なくとも２つの
ポリペプチドが、変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検出、
予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治療用
組成物を得るために組合わせた形で使用される。
【００３３】 同様に、本発明は、変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検
出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治
療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントを
含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパク質は、
未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号２、配列番号４、配列番号８、配
列番号１７及び配列番号２４、及び上述のペプチド配列のいずれか１つと少なく
とも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同
一性を呈するペプチド配列に対応しているタンパク質の中から選択されている使
用にも関する。有利には、上述の定義を満たす５つのポリペプチドが組合わせて
使用される。
【００３４】 好ましくは、前記ポリペプチドのペプチド配列は、配列番号２、配列番号４、
配列番号８、配列番号１７及び配列番号２４のいずれか１項の中から選択された
１つの配列を含むか又は、これにより構成されている。
【００３５】 本発明はさらに、免疫原性ペプチドの調製を目的とする前述のポリペプチドの
うちの１つの少なくとも１つのフラグメントの使用において、該ペプチドが配列
番号５８-６５の配列のうちの少なくとも１つの全部又は一部を含みモノクロー
ナル抗体の産生のために使用される、使用にも関する。
【００３６】 本発明は同様に、変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検出
、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治療
用組成物を得るための、タンパク質の少なくとも１つのヌクレオチドフラグメン
トの使用において、ここで前記ヌクレオチドフラグメントは、１つのタンパク質
の少なくとも１つのフラグメントについてコードするフラグメントの中から選択
されており、前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号
１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号
７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、
配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配
列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列
番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列
番号２９、上述のペプチド配列のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは
少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配
列、及び前記フラグメントの相補的フラグメント、及びペルルカン、レチノール
結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポ
シンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチ
ド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されている
使用をもその目的としている。当業者であれば、その一般的知識内に入ることか
ら、ペプチド配列及び遺伝子コードからヌクレオチドフラグメントの核酸配列を
決定するこができる。
【００３７】 好ましくは、前記ヌクレオチドフラグメントは、未変性状態で上述の配列番号
１-８及び配列番号１０-２９のうちのいずれか１つの中及びペルルカン、レモノ
ール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及び
サポシンＢの賦活物質前駆体の中から選択された同一タンパク質系統群に属する
ペプチド配列又はそのフラグメントの中から選択された配列から成るタンパク質
についてコードする。
【００３８】 本発明のもう１つの目的は、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫
疾患に付随する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする
診断、予後診断、予防又は治療用組成物を得るための、少なくとも１つのヌクレ
オチドフラグメントの使用において、前記フラグメントが、配列番号３０、配列
番号３１、配列番号３３、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番
号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号
４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４
６及び配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０、配列番号
５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５
６、配列番号５７、配列番号６７、配列番号６６、配列番号６９、配列番号７０
及び配列番号７１のうちのいずれか１つ及びその相補的配列から選ばれた核酸配
列のフラグメントである使用にある。
【００３９】 本発明は同様に、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後
診断、予防又は治療用組成物を得るための上述の通りのポリペプチド又はヌクレ
オチドフラグメントの特異的リガンドの使用にも関する。
【００４０】 リガンドというのは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、レセプタ、
酵素活性基質又は前記ポリペプチドを補因子とする酵素といったようなポリペプ
チドに会合する可能性のあるあらゆる分子のことである。ポリクローナル及びモ
ノクローナル抗体の産生は、当業者の一般的知識の一部を成すものである。モノ
クローナル抗体の産生については、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ
．（１９７５）；予め規定された特異性をもつ抗体を分泌する融合された細胞の
連続培養、Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５-４９７及びＧａｌｆｒｅ Ｇ ｅｔ
ａｌ．（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ，２６６；５２２-５５０、そして、ポリクロ
ーナル抗体の産生についてはＲｏｄａ Ａ．，Ｂｏｌｅｌｌｉ Ｇ．Ｆ：胆汁酸
に対する高力価抗体の産生、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ，第１３巻、ｐ４４９-４５４（１９８０）を参考として挙げ
ることができる。
【００４１】 リガンドというのは又、部分的又は全体的に相同的であるヌクレオチドフラグ
メントといったようなヌクレオチドフラグメント、相補的ポリヌクレオチド、抗
核酸抗体に会合する可能性のあるあらゆる分子のことでもある。ヌクレオチドフ
ラグメント又はポリヌクレオチドの産生は、当業者の一般的知識の一部を成す。
特に、制限酵素の使用及び自動合成装置例えばＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍ社から市販されている合成装置上での化学合成を挙げることができる。なお
、抗核酸抗体産生のための技術も知られている。一例としては、Ｐｈｉｌｉｐｐ
ｅ Ｃｒｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃ
，１９９４，Ｖｏｌ．２２，Ｎ°１５，２９５１‐２９５７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ
，Ｗ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ，８（２），６９‐７
４；Ｌｅｅ，Ｊ．Ｓ． ｅｔ ａｌ．（１９８４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１６
８，３０３‐３０６；Ｍａｌｆｏｙ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ，２１（２２），５４６３‐５４６７；Ｓｔｏｌｌａｒ，Ｂ．Ｄ
．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｊ．（ｅｄｓ）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．７０‐８５；Ｔｒａｉｎｃａｒｄ
，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１２３，８
３‐９１及びＴｒａｉｎｃａｒｄ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ，３，２７‐３８）を挙げることができる。
【００４２】 本発明はさらに、生体標本中の変性疾患及び／又は自己免疫疾患に結びつけら
れる少なくとも１つのタンパク質を検出するための方法において、少なくとも１
つのポリペプチドの少なくとも１つの特異的リガンドと生体標本を接触させ、こ
こで前記ポリペプチドが１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントを含
んで成り、該タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が配列番号１、配
列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配
列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番
号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号
１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２
４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２
９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０-配列番号２９の
いずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には
少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチノー
ル結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサ
ポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプ
チド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されてお
り、かつその後、前記ポリペプチド及び前記リガンドの間の複合体の形成を検出
する方法を目的とする。前記リガンドは、有利には、モノクローナル抗体、ポリ
クローナル抗体、レセプタ、酵素活性基質又は前記ポリペプチドを補因子とする
酵素である。
【００４３】 同様にして本発明は、生体標本中の変性疾患及び／又は自己免疫疾患に結びつ
けられる少なくとも１つのリガンドを検出するための方法において、１つのタン
パク質の少なくとも１つのフラグメントを含む少なくとも１つのポリペプチドと
生体標本を接触させ、該タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が配列
番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列
番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１
３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８
、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、
配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び
配列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０-配列
番号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そし
て有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン
、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリ
ンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に
属するペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選
択されていること、及びその後、前記ポリペプチド及び前記リガンドの間の複合
体の形成を検出することを特徴とする方法に関する。リガンドは、上述の条件を
満たすあらゆる分子である。
【００４４】 好ましくは、上述の方法において、ポリペプチドの配列は、前述の配列番号１
-８及び配列番号１０-２９のいずれか１つの中から選ばれた配列及びペルルカン
、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリ
ンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれたタンパク質の同一系統群
に属するペプチド配列又はそのフラグメントを含むか又はこれにより構成されて
いる。
【００４５】 本発明は同様に、そのペプチド配列が配列番号９に対応する１つのタンパク質
の少なくとも１つのフラグメントを含んで成り、前記フラグメントが配列番号８
という基準配列との関係において少なくとも１つ特に少なくとも２つの突然変異
を含んで成る、新規ポリペプチドにも関する。該ポリペプチドは有利には、配列
番号６８のアミノ酸配列ＦＳＷＤＮＣＦＥＧＫＤＰＡＶＩＲ及び配列番号７２の
アミノ酸配列ＹＳＬＰＫＳＥＦＡＶＰＤＬＥＬＰを含んで成るポリペプチドの中
から選択される。
【００４６】 特に、前記ポリペプチドは配列番号９を含むか又はこれで構成されている。こ
のポリペプチドは、単独で又は前述のような少なくとも１つのポリペプチドと混
合した形で、変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検出、予後
診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治療用組成
物を得るために使用される。
【００４７】 本発明の目的の一つは、また、そのペプチド列が配列番号９に対応するタンパ
ク質断片についてコード化しているヌクレオチド断片を得ることであり、前記の
タンパク質の前記の断片が少なくとも一つの突、特に、基準列配列番号８に対す
る２つの突然変異を示す。前記のヌクレオチド断片は、特に、配列番号９につい
てコード化している断片を含むか、あるいは、断片で構成される。上記で定義し
たような唯一、あるいは、少なくとも一つのヌクレオチド断片と混合した、変性
疾患、及び／あるいは、自己免疫性疾患に関連した病理学的状態を検知、予防、
あるいは、治療するための診断、予測、予防、あるいは、治療成分を得るために
、この断片を使用する。
【００４８】 本発明は、また、それに従って、生物学的サンプルを配列番号９を含むか、あ
るいは、それで構成される少なくとも一つのポリペプチド、あるいは、このポリ
ペプチドを含むポリペプチド混合物、及び上記で記述したような少なくとも一つ
のポリペプチドと接触させ、次に、もちろん、リガンドによって前記の条件に対
応する分子が解るのであるが、対応するポリペプチド、あるいは、複数のポリペ
プチドとリガンド、あるいは、複数のリガンドとの間の複合体、あるいは、複数
の複合体の構成を検知する生物学的サンプルで、変性疾患、及び／あるいは、自
己免疫性疾患に関連した少なくとも一つのリガンドを検知するための手順を対象
とする。
【００４９】 本発明は、また、少なくとも一つの基準ポリペプチド配列番号９、あるいは、
前記のポリペプチドの断片を検知するための手順に関するものであって、それに
従って生物学的サンプルを前記のポリペプチドの少なくとも一つの特定のリガン
ドと接触させ、次に、前記のポリペプチドと前記のリガンドとの間の複合体の構
成を検知する生物学的サンプルで、この断片は基準列配列番号８と関連して少な
くとも一つの突然変異、好ましくは、２つの突然変異を含む。リガンドの定義は
、前述で定義したものに対応している。とりわけ、受容体のモノクロナル抗体、
ポリクロナル抗体、酵素活性基質、あるいは、前記のポリペプチドが補助因子で
ある酵素が問題となることがある。
【００５０】 同様に、生物学的サンプルを基準ポリペプチド配列番号９の特定のリガンド、
前述で定義したような別の少なくとも一つのポリペプチドの少なくとも一つの特
定のリガンドと接触させ、次に、リガンドによって前記の条件に対応する分子が
解るのであるが、前記の複数のポリペプチドと前記の複数のポリペプチドの特定
の前記のリガンドとの間の複合体の構成を検知することができる。
【００５１】 本発明の別の目的は、ポリペプチド配列番号９の全体、あるいは、一部につい
てコード化しているヌクレオチド断片と、場合によっては、前述で定義したよう
な少なくとも一つのヌクレオチド断片、及び前記の断片の補完的断片と関連して
、変性疾患、及び／あるいは、自己免疫性疾患に関連した病理学的状態を検知、
予防、あるいは、治療するための診断、予測、予防、あるいは、治療成分を得る
ためのその使用である。
【００５２】 ポリペプチド断片については、少なくとも一つのタンパク質のペプチド列の全
体、あるいは、一部、特に、ほぼ５-１５のアミノ酸、より正確には、ほぼ５-１
０アミノ酸及び６-１５アミノ酸を含むポリペプチド断片が知られている。ヌク
レオチド列についてはＡＤＮ及びＡＲＮ列が含まれるが、ヌクレオチド断片につ
いては、ヌクレオチド列の全体、あるいは、一部が知られている。
【００５３】 特に、ポリペプチド断片、あるいは、ヌクレオチド断片については、同じ分子
単位に関連した断片や、自然の、あるいは、人工的な方法、すなわち、差動多重
接続、あるいは、選択合成によって得られた複数の同族、あるいは、異種下位単
位を含む複雑な分子の断片が知られている。
【００５４】 また、本発明は、それに従って、変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あ
るいは、自己免疫性疾患に関連した病理学的状態を示す患者の生体液のサンプル
を採取し、場合によっては、前記の生体液のサンプルの精製後に、物質の分光測
定によって、生体液から得られた物質のプロファイルを分析し、基準物質プロフ
ァイルと比較する、上記で定義したような少なくとも一つのポリペプチドを検知
するための手順に関するものである。
【００５５】 本発明は、同様に、有効な治療薬を定義するための少なくとも一つの本発明の
ポリペプチドの使用、及び自己免疫性、及び／あるいは神経学的、及び／あるい
は、変性疾患、特に、プラーク硬化症を予防、及び／あるいは、治療するための
その薬品の使用に関するものである。
【００５６】 また、本発明の別の目的は、次のようなものである：
【００５７】 ‐治療薬の効果を試験するための少なくとも一つのタンパク質の断片を含む少
なくとも一つのポリペプチドの使用であり、その自然状態のペプチド列が配列番
号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番
号７，配列番号８，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３
，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，
配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配
列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，及び
配列番号２９に対応するタンパク質の中から前記のタンパク質が選択されており
、そのペプチド列がペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つと少なくとも７
０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なく
とも９８％の同一性を示し、そのペプチド列、あるいは、前記の列の断片がパー
ルカン、レチノール結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性
化体の前駆体、ｃａｌｇｒａｎｕｌｉｎｅカルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ
の中から選択された同じタンパク質のグループに属する；
【００５８】 ‐プラーク硬化症といった変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは
、自己免疫性疾患を治療するための薬学的成分を作成するために生物学的物質を
定義するために、少なくとも一つのタンパク質の断片を含む少なくとも一つのポ
リペプチドの使用であり、その自然状態のペプチド列が配列番号１，配列番号２
，配列番号３，配列番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８
，配列番号１０，配列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，
配列番号１５，配列番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配
列番号２０，配列番号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列
番号２５，配列番号２６，配列番号２７，配列番号２８，及び配列番号２９に対
応するタンパク質の中から前記のタンパク質が選択されており、そのペプチド列
がペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つと少なくとも７０％の同一性を、
好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一
性を示し、そのペプチド列、あるいは、前記の列の断片がパールカン、レチノー
ル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カ
ルグラニュリン、及びサポジンの中から選択された同じタンパク質のグループに
属する；
【００５９】 前述の使用法の一つの有利なバリエーションに従って、配列番号２，４，８，
９，１７，１４の中からポリペプチドを選択する；‐
【００６０】 ‐変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは、自己免疫性疾患に関連
した病理学的状態に関して治療薬の効果を試験するための少なくとも一つのヌク
レオチド断片の使用であり、それに従って、前記のヌクレオチド断片は少なくと
も一つのタンパク質の断片についてコード化している断片の中から選択され、そ
の自然状態のペプチド列が配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列番号４，
配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号１０，配列番号１
１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配列番号１６
，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番号２１，
配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番号２６，配
列番号２７，配列番号２８，及び配列番号２９，に対応するタンパク質の中から
前記のタンパク質が選択されており、そのペプチド列がペプチド列配列番号１-
２９のいずれか一つと少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８
０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示し、前記の断片の補
完的断片、及びペプチド列、あるいは、前記の列の断片についてコード化してい
る断片が、パールカン、レチノール結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシ
ドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢの中から選
択された同じタンパク質のグループに属する。
【００６１】 ‐変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは、自己免疫性疾患にに関
連した病理学的状態についての治療薬の効果、組み換えタンパク質、及び／ある
いは、前述のパラグラフで定義したようなヌクレオチド断片のすべて、あるいは
、一部についてコード化されたタンパク質を試験するための使用；
【００６２】 -プラーク硬化症といった変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは
、自己免疫性疾患を治療するための薬学的成分を作成するための少なくとも一つ
のヌクレオチド断片の使用であり、それに従って、前記のヌクレオチド断片が、
少なくとも一つのタンパク質の断片についてコード化している断片の中から選択
され、その自然状態のペプチド列が配列番号１，配列番号２，配列番号３，配列
番号４，配列番号５，配列番号６，配列番号７，配列番号８，配列番号１０，配
列番号１１，配列番号１２，配列番号１３，配列番号１４，配列番号１５，配列
番号１６，配列番号１７，配列番号１８，配列番号１９，配列番号２０，配列番
号２１，配列番号２２，配列番号２３，配列番号２４，配列番号２５，配列番号
２６，配列番号２７，配列番号２８，及び配列番号２９に対応するタンパク質の
中から前記のタンパク質が選択されており、そのペプチド列がペプチド列配列番
号１-２９のいずれか一つと少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なく
とも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示し、前記の断
片の補完的断片、及びペプチド列、あるいは、前記の列の断片についてコード化
している断片が、パールカン、レチノール結合血漿タンパク質の前駆体、ガング
リオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢの中
から選択された同じタンパク質のグループに属する；
【００６３】 -プラーク硬化症といった変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは
、自己免疫性疾患を治療するための薬学的成分、組み換えタンパク質、及び／あ
るいは、前述のパラグラフで定義したようなヌクレオチド断片のすべて、あるい
は、一部についてコード化されたタンパク質を作成するための使用。
【００６４】 有利に、使用した前記のヌクレオチド断片は、前記のタンパク質についてコー
ド化している。
【００６５】 好ましくは、自然状態の前記のタンパク質のペプチド列は、配列番号１-２９
のいずれか一つから選択した列で構成され、ペプチド列は、ペプチド列配列番号
１-２９のいずれかと、好ましくはすべて８０％の同一性を、有利には少なくと
も９８％の同一性を示し、ペプチド列、あるいは、前記の列の断片が、パールカ
ン、レチノール結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体
の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢの中から選択された同じタンパ
ク質のグループに属する。ポリペプチドは、好ましくは配列番号２，４，８，９
，１７，２４の中から選択する。
【００６６】 -変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは、自己免疫性疾患に関連
した病理学的状態に関する治療薬の効果を試験するための少なくとも一つのヌク
レオチド断片の使用であり、それに従って、前記の断片が、配列番号３０，配列
番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，配列番
号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配列番号
４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列番号４
６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番号５１
，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号５６，
及び配列番号５７，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６９，配列番号７０
，配列番号７１，及びその補完的列のいずれか一つから選択された核列の断片で
ある。
【００６７】 -プラーク硬化症といった変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは
、自己免疫性疾患を治療するための薬学的成分を作成するための少なくとも一つ
のヌクレオチド断片の使用であり、それに従って、前記の断片が、配列番号３０
，配列番号３１，配列番号３２，配列番号３３，配列番号３４，配列番号３５，
配列番号３６，配列番号３７，配列番号３８，配列番号３９，配列番号４０，配
列番号４１，配列番号４２，配列番号４３，配列番号４４，配列番号４５，配列
番号４６，配列番号４７，配列番号４８，配列番号４９，配列番号５０，配列番
号５１，配列番号５２，配列番号５３，配列番号５４，配列番号５５，配列番号
５６，及び配列番号５７，配列番号６６，配列番号６７，配列番号６９，配列番
号７０，配列番号７１，及びその補完的列のいずれか一つから選択された核列の
断片である。
【００６８】 核列が、好ましくは配列番号３０，３１，４２，５３の中から選択される。
【００６９】 -変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは、自己免疫性疾患を予防
、及び／あるいは、治療するための薬学的成分を作成するためのリコリンの使用
。
【００７０】 治療効果については、病気の回復といった改善を目的とした治療薬の投与後に
得られる臨床的及び生物学的利益が知られている。こうした利益は、とりわけ臨
床的、生物学的徴候の削減、及び磁気共鳴画像診断、脳脊髄液中のオリゴクロー
ン帯分析、誘発電位分析、及び生物試験ｇｌｉｏグリオ毒性検知試験といった医
師による臨床的分析、及び／あるいは、生物学的分析後の疾患の病理学的効果に
現れ、その原理は、前掲の特許請求項ＷＯ９８／１１４３９に記述されている。
こうした臨床的徴候の削減、及び病理学的効果は、患者のための利益を発生させ
なければならない（Ｓｃｈｗａｒｔｚ及びＬａｚａｒ、１９９５、医学的及び生
物学的統計の原理、ｅｄｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ；ＬＡｚａｒ及びＳｃｈｗａ
ｒｔｚ、１９９５、医学的及び生物学的統計要素、ｅｄｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏ
ｎ）。むしろ研究すべき疾患は、プラーク硬化症である。
【００７１】 疾病予防、及び／あるいは、治療用途の成分については、有効な治療薬を含む
すべての成分が知られている。こうした治療薬は、（ｉ）定性的、及び／あるい
は、定量的方法で生物学的活動、及び／あるいは、本発明で識別した当該のタン
パク質の機能、好ましくは、グリオ毒性活動に影響を与える、（ｉｉ）そのタン
パク質の発現を変化、及び／あるいは、抑制する、及び／あるいは、（ｉｉｉ）
細胞内、及び／あるいは、細胞外区画内のタンパク質濃度を減少させ、及び／あ
るいは、そのタンパク質の一つの非病因形を病因形、例えば、突然変異した形と
代える、及び／あるいは、少なくともそのリガンドへの固定を変化させる能力が
あり；前記のリガンドは、前述の基準に対応する分子である。文献に広範に記述
された従来の取り組み方に従って異なる治療薬が作成される。本発明で識別され
た当該のタンパク質から定義された治療薬の異なるグループを下記で説明する。
その作用、あるいは、疾病予防効果、及び／あるいは、治療効果は、試験管内、
及び／あるいは、生体内で評価される。
【００７２】 生体内の治療薬の効果の評価：前述の特許請求ＷＯ９８／１１４３９に記載さ
れた生物試験手順に従って、試験管内でグリオ毒性作用について、好ましくは、
活性状態の健康な個人及びプラーク硬化症に冒された患者の尿のサンプルを試験
する。被試験尿のサンプルに効果を試験しようとしている治療薬を添加するか、
あるいは、添加しないことによって、平行して実験を行う。生体内試験を行う前
に、試験薬剤の各濃度について、ほぼ３７℃、あるいは、周囲温度でのサンプル
を用いた培養の異なる時間の経過後に、この薬剤の異なる濃度で試験を行う。
【００７３】 非試験治療薬を使用した場合と、使用しない場合の対照標準と患者の尿の未処
理サンプル、あるいは、精製済みサンプルについて、グリオ毒性作用を決定する
。プラーク硬化症のための疾病予防薬、及び／あるいは、治療薬は、患者の生体
液内、特に尿中のグリオ毒性作用を削減、あるいは、抑制することができる薬剤
である。上限を固定した非検査薬剤を使用しない場合の患者ＳＥＰの生体液中に
検知されたグリオ毒性作用について、また、下限を決定する健康な個人の尿中に
検知されたグリオ毒性作用について、こうした削減、あるいは、抑制を評価する
（Ｓｃｈａｗａｒｔｚ及びＬａｚａｒ、１９９５、医学的及び生物学的統計原理
、ｅｄｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ；ＬＡｚａｒ及びＳｃｈｗａｒｔｚ、１９９５
、医学的及び生物学的統計要素、ｅｄｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ）。同じ試験に
組み合わせて、幾つかの薬剤の治療効果を評価することができる。
【００７４】 動物モデルを使用した治療薬の効果の評価：動物に精製済み尿の留分、及び／
あるいは、少なくとも本発明のポリペプチド、及び／あるいは、少なくとも本発
明のポリペプチドに対応する少なくとも遺伝子組み換えによって得られたタンパ
ク質、及び／あるいは、そのアミノ酸列が本発明の少なくとも一つのポリペプチ
ドの列に対応する少なくとも一つの合成ポリペプチドを注入する。確定された異
なる濃度で、上述で引用した特許請求ＷＯ９７／３３４６６に記述された手順に
従って、マウスやラットといった哺乳類動物、好ましくは、Ｌｅｗｉｓラットに
注入を行う。真皮内、静脈内、胸郭内、大脳内、筋肉内経路や、その他の経路で
、未処理、あるいは、異なる濃度の精製済みの尿の分溜、あるいは、少なくとも
上記で定義したようなポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質を一連の動物
に注入する。平行して陰性検査も行う。次に、評価しようとする疾病予防薬、及
び／あるいは、治療薬を異なる濃度で、異なる投与経路で、哺乳類動物、好まし
くは、マウス、あるいは、ラットに注射する。各投与間の異なる時間間隔で、単
一用量、あるいは、繰り返し用量で注射を行う。投与後数週間までの数時間、好
ましくは、血液、血清、脳脊髄液、尿の生物学サンプルを採取する。このサンプ
ルに対して、次のようなことを行う：
【００７５】 （ｉ）生物試験によるグリオ毒性作用の測定、及び／あるいは、
【００７６】 （ｉｉ）少なくとも下記に記載された単独、あるいは、組み合わせた本発明の
当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質の作用の測定：Ｌｉ及び他、
１９８３、Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ３５：６２９‐６３４；Ｌｉ他、１９
８８ ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６３：６５８８‐６５９１；Ｌｉ他、１９８１
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：６２３４‐６２４０；Ｌｉ他、１９７６
Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：１１５８；Ｋａｓｅ他，１９９６，Ｆｅｂｓ
Ｌｅｔｔｅｒｓ３３￥９３；７４‐７６；Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ他、１９９２，Ｊ
Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ ３３： １２５５‐１２６７；Ｏ’ｂｒｉｅｎ他、１９
９１ Ｆａｓｅｂ Ｊ ５：３０１‐３０８； Ｍｕｒｔｈｙ他、１９９３ Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １５１：６２９１‐６３０１；Ｍｕｒａｏ他、１９９０細胞
成長差 １：４４７‐４５４、及び／あるいは、
【００７７】 （ｉｉｉ）少なくとも本発明のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質の
一つに、あるいは、その断片に固着することができる抗体、あるいは、抗体の断
片を使用することによるＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着剤効力検定）、及び／あ
るいは、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔによる、単独、あるいは、組み合わせた当該
のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質の用量、及び／あるいは、
【００７８】 （ｉｖ）単独、あるいは、組み合わせた当該のポリペプチド、及び／あるいは
、タンパク質、あるいは、その断片の特定の抗体の用量、あるいは、当該のポリ
ペプチド、及び／あるいは、タンパク質、あるいは、その断片に固着することが
できる少なくとも一つのリガンドの用量、及び／あるいは、
【００７９】 （ｖ）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ３：２２１‐２２
６にＳｃｈｅｉｂｅｎｂｏｇｅｎ他が記述した前記のＥＬＩＳＰＯＴ技術に従っ
て、細胞毒性Ｔリンパ球を定量化することによって、例えば、投与された抗原の
特有な”ヘルパー”Ｔリンパ球細胞の試験管内活性化試験を行うことによる、当
該のポリペプチド、及びタンパク質、あるいは、その断片、及びそのポリペプチ
ド、タンパク質、及び断片に由来する免疫原性ペプチドに対して誘発された＜＜
ヘルパー＞＞細胞免疫性、及び／あるいは、細胞毒性反応の用量。明確に抗原、
ポリペプチド、当該のタンパク質、あるいは、そのタンパク質に由来する免疫原
性断片に対して患者が発生させた自然の免疫反応を探すことによって、与えられ
た患者に実施するために、あるいは、潜在的な病理学的状態を診断、及び／ある
いは、疾病予防するために、ワクチン接種の取り組み方の有効性を評価したいの
で、そうした決定は特に有利である。
【００８０】 ＜＜タンパク質に固着できるリガンド＞＞について、タンパク質、あるいは、
タンパク質の一部を識別できるすべての分子が知られている。例えば、Ｅｌｉｓ
ａ、及び／あるいは、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔの検査によって、試験管内でそ
れを確認することができる。
【００８１】 ＜＜本発明の当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質＞＞とは、断
片、パールカンのＣ‐末端（配列番号２）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆
体（配列番号４）、ＧＭ２の活性化体タンパク質（配列番号８）、ＧＭ２の活性
化体タンパク質の突然変異タンパク質（配列番号９）、カルグラニュリンＢ（配
列番号１７）、サポジンＢ（配列番号２４）、レチノル結合血漿タンパク質の前
駆体のグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号５-７
）、ＧＭ２の活性化体タンパク質のグループに属するタンパク質、あるいは、断
片（例えば、配列番号１０-１６）、タンパク質カルグラニュリンＢのグループ
に属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号１８-２３）、タンパ
ク質サポジンＢのグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列
番号２５-２９）、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つとの少なく７０％
の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、及び有利には、少なく
とも８９％の同一性を示すペプチド列を指す。
【００８２】 次に、動物を殺し、異なる組織の組織学的切片、好ましくは、脳の切片を作成
する。グリオ毒性に関連した活性ポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質の
特徴的効果、すなわち、グリア細胞のａｐｏｐｔｏｓｅアポプトーゼ、及び／あ
るいは、血液‐脳障壁の解放、及び／あるいは、ｄｅｍｙｅｌｉｎｉｚａｓｉｏ
ｎ（デミエリニザション）非ミエリン化を検知、及び／あるいは、定量化するた
めに異なる研究と観察を行う。同様に、識別された本発明の当該のポリペプチド
、及び／あるいは、タンパク質の存在、あるいは、発現をその組織の中で次のよ
うに観察、及び／あるいは、定量化する：
【００８３】 （ｉ）当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質、及び／あるいは、
その断片のリガンド、及び／あるいは、モノクロナル抗体、あるいは、ポリクロ
ナル抗体、あるいは、ポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質、あるいは、
その断片に関連した前記の断片を使用することによる典型的な免疫組織学的分析
、及び／あるいは、
【００８４】 （ｉｉ）核酸、あるいは、当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質
列から定義されたオリゴヌクレオチドを使用することによる典型的な自然環境の
下での交雑技術、及び／あるいは、
【００８５】 （ｉｉｉ）を使用することによる自然環境の下でのＰＣＲ、及び／あるいは、
ＲＴ‐ＰＣＲによる増幅技術。 ポリペプチド、タンパク質、あるいは、その断片に固着することができる抗体
について、すべてのモノクロナル抗体、あるいは、ポリクロナル抗体、及びポリ
ペプチド、タンパク質、あるいは、その断片を識別することができる前記の抗体
のすべての断片が知られている。例えば、ＥＬＩＳＡ、及び／あるいは、Ｗｅｓ
ｔｅｒｎ Ｂｌｏｔにより前記のポリペプチド、タンパク質、あるいは、その断
片を識別することができる抗体の能力を試験管内で確認する。タンパク質、サポ
ジンＢ、あるいは、そのタンパク質のすべての断片に固着することができる抗体
（配列番号２４）は、Ｍｉｓａｓｉ他１９９８、Ｊ．ＮｅｕｒｏＣｈｅｍ．７１
：２３１３、及びＫｌｅｉｎ他１９９４、ＢＢＲＣ２００：１４４０‐１４４８
によって記述されているか、あるいは、従来の方法、例えば、免疫について、天
然タンパク質、組み換えタンパク質、合成ポリペプチド、あるいは、その断片か
らモノクロナル抗体、及びポリクロナル抗体を製造するために前述で出典を明示
した方法を使用することによって、製造することができる。モノクロナル抗体、
アンチサポジンＢを製造するための免疫原性ペプチドは、列配列番号６１及び列
配列番号６２に対応するペプチドである。
【００８６】 例えば、ＧＭ２（配列番号８）の活性性タンパク質、あるいは、そのタンパク
質のすべての断片に固着することができる抗体は、Ｙｕｚｉｕｋ他、１９９８Ｊ
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２７３：６６‐７２によって説明されており、あるいは、
この種の方法を知った人物によって従来の方法を使用して製造することができる
。この抗体は、例えば、ネズミ、あるいは、ウサギに天然タンパク質、あるいは
、すべての断片、及び／あるいは、組み換えタンパク質、あるいは、すべての断
片、及び／あるいは、タンパク質のタンパク質列から定義及び合成されたペプチ
ドを注射した後に生成することができる。モノクロナル抗体、アンチＧＭ２を製
造するために使用された免疫原性ペプチドは、配列番号５８、配列番号５９、及
び配列番号６０と呼ばれるペプチドである。タンパク質、ガルグラニュリンＢ（
配列番号１７）、あるいは、そのタンパク質のすべての断片に固着することがで
きる抗体は、Ｓａｉｎｔｉｇｎｙ他，１９９２ Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａ
ｔｏｌ９９：６３９‐６４４、及びＧｏｅｂｅｌｅｒ他１９９４ Ｊ Ｌｅｕｋ
ｏｃ Ｂｉｏｌ ５５：２５９‐２６１によって記述されており、あるいは、従
来の方法を使用することによって製造することができる。モノクロナル抗体、ア
ンチガルグラニュリンＢを製造するための免疫原性ペプチドは、列、配列番号６
３、配列番号６４、及び配列番号６５に対応するペプチドである。ＧＭ２（配列
番号９）の活性突然変異タンパク質、あるいは、そのタンパク質の断片に固着す
ることができる抗体は、上記で定義した従来の方法を使用することによって製造
することができる。
【００８７】 天然タンパク質、あるいは、断片については、人間、あるいは、動物のサンプ
ルから得られたすべて、あるいは、部分的に分離、精製されたすべてのタンパク
質、及びそのタンパク質から得られたすべての断片が知られている。例えば、Ｗ
ａｒｉｎｇ他，１９９８ Ｍｏｌ Ｍｅｔａｂ６３：１４‐２５によって記述さ
れた技術に従うことによって、サポジンＢ（配列番号２４）に対応する天然タン
パク質が得られる；ＧＭ２（配列番号８）の活性化体タンパク質に対応する天然
タンパク質は、ＤｅＧａｓｐｅｒｉ他、１９８９ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２６０
：７７７‐７８３，Ｖｏｇｅｌ他、１９８７ Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ ２５９：６２７‐６３８，Ｍｉｔｓｕｙａｍａ，１９８３ Ｈｏｋ
ｋａｉｄｏ Ｉｇａｋｕ Ｚａｓｓｉ ５８：５０２‐５１２；Ｈｉｒａｂａｙ
ａｓｈｉ他、１９８３ Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ４０：１６８‐１７５，Ｃｏ
ｎｚｅｌｍａｎ他、１９７９ Ｈｏｐｐｅ Ｓｅｙｌｅｒｓ Ｚ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ Ｃｈｅｍ ３６０：１８３７‐１８４９，Ｌｉ他、１９７６ Ｊ Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ ２５１：１１５９‐１１６３によって記述された方法に従うことに
よって得られる。カルグラニュリンＢ（配列番号１７）に対応する天然タンパク
質は、Ｈｉｔｏｍｉ他、１９９６ Ｊ Ｃｅｌ Ｓｃｉ １０９：８０５‐８１
５，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｏｓ他、１９９８ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ １３：
３１３‐３１８、及びＲａｆｔｅｒｙ他、１９９６ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３１
６：２８５‐２９３によって記述された技術に従うことによって得られる。
【００８８】 組み換えタンパク質、あるいは、組み換えタンパク質の断片については、タン
パク質、あるいは、その断片についてコード化しているヌクレオチド列から原核
生物細胞、あるいは、真核生物細胞の中に生成され、細胞に転写されたすべての
タンパク質、あるいは、タンパク質の断片が指摘されており、そのタンパク質、
あるいは、その断片が精製されている。一般的な方法により、原核生物、あるい
は、真核生物組織に由来するすべての細胞を本発明の枠内で使用することができ
るが、真核生物組織に由来する細胞が好ましい。実例として、細胞ＣＨＯ、細胞
ＣＯＳ、細胞Ｓｅｍｌｉｋｉセムリキが挙られる。本発明の目的のためには、従
来の細胞は野生型であっても、突然変異性であっても良い。例えば、Ｚａｌｔａ
ｓｈ他１９９８ Ｂｅｂｂｓ ｌｅｔｔｅｒ ４２３：１-４及びＱｉ他１９９
４ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９：１６７４６-１６７５３に記述された技
術に従うことによって、サポジンＢ（配列番号２４）に対応する組み換えタンパ
ク質を得ることができる。そうした組み換えタンパク質は、少なくともＫａｓｅ
他１９９６Ｆｅｂｓ ｌｅｔｔ ３９３：７４-７６に従って使用可能である。
ＧＭ２（配列番号８）の活性化体タンパク質に対応する組み換えタンパク質は、
Ｙｕｚｉｕｋ他１９９８ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３：６６-７７、及び
Ｂｉｅｒｆｒｅｕｎｄ他１９９９ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ｒｅｓ ２４：２９５
-３００に記述された技術に従うことによって、製造することができる。カルグ
ラニュリンＢ（配列番号１７）に対応する組み換えタンパク質は、Ｌｏｎｇｂｏ
ｔｔｏｍ他１９９２ Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔｓ １１２０：
２１５-２２２、Ｒａｆｔｅｒｙ他１９９９ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕ
ｒｉｆ １５：２２８-２３５に記述された手順に従うことによって、得ること
ができる。そうした組み換えタンパク質は、少なくともＫｌｅｍｐｔ他１９９７
Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔｅｒ ４０８：８１‐８４に従って使用可能である。
【００８９】 タンパク質、サポジンＢ（配列番号２４）のすべて、あるいは、一部について
コード化しているＡＤＮのヌクレオチド列、あるいは、ＡＤＮのヌクレオチド断
片については、核酸の列配列番号５３、あるいは、その列の断片が知られている
。タンパク質、サポジンＢ（配列番号２４）のすべて、あるいは、一部について
コード化しているヌクレオチド列、あるいは、断片ＡＲＮについては、遺伝コー
ドと撚り合せ現象を考慮に入れることによって、ＡＤＮ列 配列番号５３の前記
のすべての列が知られている。
【００９０】 ＧＭ２（配列番号８）の活性化体タンパク質のすべて、あるいは、一部につい
てコード化しているＡＤＮのヌクレオチド列、あるいは、ＡＤＮのヌクレオチド
列の断片については、核酸の列配列番号３１、あるいは、その列の断片が知られ
ている。ＧＭ２（配列番号８）の活性化体タンパク質のすべて、あるいは、一部
についてコード化しているＡＲＮのヌクレオチド列、あるいは、断片については
、遺伝コードと撚り合せ現象を考慮に入れることによって、ＡＤＮ列 配列番号
３１のすべての列が知られている。
【００９１】 タンパク質、カルグラニュリンＢ（配列番号１７）すべて、あるいは、一部に
ついてコード化しているＡＤＮのヌクレオチド列、あるいは、ＡＤＮのヌクレオ
チド断片については、核酸の列配列番号４２、あるいは、その列の断片が知られ
ている。タンパク質、カルグラニュリンＢ（配列番号１７）のすべて、あるいは
、一部についてコード化しているＡＤＮのヌクレオチド列、あるいは、断片につ
いては、遺伝コードと撚り合せ現象を考慮に入れることによって、ＡＤＮ列配列
番号４２の前記のすべての列が知られている。
【００９２】 突然変異タンパク質（配列番号９）のすべて、あるいは、一部についてコード
化しているヌクレオチド列、あるいは、断片については、遺伝コードを考慮に入
れることによって、列配列番号９の前記の核酸の列が知られている。この突然変
異タンパク質Ｂ（配列番号９）のすべて、あるいは、一部についてコード化して
いるヌクレオチド列、あるいは、断片ＡＲＮについては、遺伝コードと撚り合せ
現象を考慮に入れることによって、列ＡＤＮの前記のすべての列が知られている
。
【００９３】 タンパク質の作用については、タンパク質の生物学的に特徴のある機能が知ら
れている。この種の方法を知った人物の技術によって、このタンパク質の作用を
際立たせることができる。例えば、Ｌｉ他１９８３，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎ
ｅｔ ３５：６２９‐６３４；Ｌｉ他１９８８ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６
３：６５８８‐６５９１，Ｌｉ他１９８１ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：
６２３４‐６２４０及びＬｉ他１９７６ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：１
１５９に記述された手順を使用することによって、サポジンＢ（配列番号２４）
の作用、及びサポジンＢ（例えば、配列番号２５-２９）のグループのタンパク
質の作用を検知することができる。ＧＭ２（配列番号８）の活性化体タンパク質
の作用、及び同じグループのタンパク質（例えば、配列番号１０-１６）の作用
については、少なくとも、Ｋａｓｅ他１９９６， Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ
３９３：７４‐７６，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ他１９９２， ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅ
ｓ ３３：１２５５‐１２６７及びＯ’Ｂｒｉｅｎ他１９９１ Ｆａｓｅｂ ｊ
５：３０１‐３０８によって記述された手順を使用することによって検知され
た作用が知られている。カルグラニュリンＢ（配列番号１７）の作用、及びカル
グラニュリンＢ（例えば、配列番号１８-２３）と同じグループのタンパク質の
作用については、少なくとも、例えば、Ｍｕｒｔｈｙ他１９９３ Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ １５１：６２９１‐６３０１及びＮｕｒａｏ他１９９０ Ｃｅｌｌ Ｇ
ｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １：４４７‐４５４によって記述された手順を使用
することによって検知された作用が知られている。
【００９４】 人間の病理学について好ましくは成熟した遺伝形質転換動物モデルを得ること
は、技術的に実現可能である。手短に言えば、遺伝形質転換動物は、記述された
従来の方法を使用することによって生成され、それはゲノム中に組み込まれてお
り、タンパク質、あるいは、その断片について、核酸がコード化している。
【００９５】 治療薬の効果の評価と人間の生体外の治療追跡調査：
【００９６】 治療作用に関して、及び／あるいは、治療追跡調査について試験すべき治療薬
を真皮内、静脈内、筋肉内、大脳内、経口、あるいは、その他の異なる経路で人
間に投与する。異なる用量を人間に投与する。最初の投与時の患者の臨床的資料
が知られている。異なる間隔で一回、あるいは、数回の投与を行うことができ、
各投与間は数日から数年にわたることができる。治療薬の投与後に決定した時間
間隔で、好ましくは、血液、血清、脳脊髄液、及び尿といった生物学的サンプル
を採取する。このサンプルから、異なる分析を行う。治療薬の最初の投与の直前
に、このサンプル採取と同じ分析も行う。同様に、分析の異なる時点で下記で説
明する補足的分析と平行して、典型的な臨床検査、及び生物学的検査（ＩＲＭ、
脳脊髄液中のオリゴクローン帯、誘発電位）を行う。行った分析は、次のような
ものである：
【００９７】 （ｉ）血清、ＬＣＲ、及び尿のサンプルからの生物試験によるグリオ毒性作用
の測定、及び／あるいは、 （ｉｉ）例えば、Ｌｉ他１９８３，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ３５：６
２９‐６３４；Ｌｉ他１９８８ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６３：６５８８‐
６５９１，Ｌｉ他１９８１ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：６２３４‐６２
４０及びＬｉ他１９７６ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：１１５９；Ｋａｓ
ｅ他１９９６， Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３９３：７４‐７６，Ｋｉｓｈｉ
ｍｏｔｏ他１９９２， ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ ３３：１２５５‐１２６７及
びＯ’Ｂｒｉｅｎ他１９９１ Ｆａｓｅｂ ｊ ５：３０１‐３０８；Ｍｕｒｔ
ｈｙ他１９９３ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５１：６２９１‐６３０１及びＮｕｒ
ａｏ他１９９０ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １：４４７‐４５４
によって記述されたように単独、あるいは、組み合わせて、本発明において識別
された当該のタンパク質の作用の測定、及び／あるいは、 （ｉｉｉ）少なくともタンパク質、あるいは、その断片の一つに固着すること
ができる抗体、あるいは、抗体の断片を使用することによっる、ＥＬＩＳＡ、及
び／あるいは、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔによる血液／血清、ＬＣＲ、尿のサン
プル中の単独、あるいは、組み合わせた当該のタンパク質、あるいは、その断片
の用量決定、及び／あるいは、 （ｉｖ）単独、あるいは、組み合わせて天然タンパク質、あるいは、天然タン
パク質の断片、及び／あるいは、組み換えタンパク質、あるいは、その組み換え
タンパク質の断片を使用することによる、ＥＬＩＳＡ、及び／あるいは、Ｗｅｓ
ｔｅｒｎ Ｂｌｏｔによる血液／血清、ＬＣＲ、尿のサンプル中の当該のタンパ
ク質、あるいは、その断片の特定の抗体の用量決定。同様に、単独、あるいは、
組み合わせて識別された当該のタンパク質に固着することができるリガンドの用
量決定を行うことができる。及び／あるいは、 （ｖ）例えば、投与された抗原（実例）の特定のリンパ球細胞Ｔの試験管内活
性化試験を実行することによって、当該のタンパク質、及びそのタンパク質に由
来するすべての免疫原性ペプチドに対して誘発された＜＜ヘルパー＞＞細胞免疫
、及び／あるいは、細胞毒性反応の用量決定。例えば、投与された抗原の特定の
リンパ球細胞Ｔの試験管内活性化試験を実行することによる（実例）；例えば、
Ｓｃｈｒｅｉｂｅｎｂｏｇｅｎ他１９９７ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３：２２１‐２２６によって記述された前記のＥＬＩＳＰＯ
Ｔ技術に従って細胞毒性リンパ球Ｔを定量化することによる。与えられた患者に
実施されたワクチン接種による取り組み方の効果を評価することが望まれる場合
、あるいは、単独、あるいは、組み合わせた抗原、当該のタンパク質、あるいは
、そのタンパク質に由来するすべての免疫原性断片に対して前記の患者に発生し
た自然免疫反応を際立たせることを追求することによって患者の潜在的な病理学
的状態を診断するために、そうした決定が特に有利である。 （ｖｉ）専門家に良く知られた技術に従ったヌクレオチド交雑による（Ｓｏｕ
ｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ， Ｎｏｒｔｈｒｎ ｂｌｏｔ， ＥＬＯＳＡ 「酵素結
合オリゴ吸着剤効力検定」（Ｋａｔｚ ＪＢ他，Ａｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ，１
９９３ Ｄｅｃ；５４（１２）：２０２１‐６、及びＦｒａｎｃｏｉｓ Ｍａｌ
ｌｅｔ他、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ， Ｊｕｎｅ １９９３，ｐ１４４４‐１４４９ ））、及び／あるいは、当
該のタンパク質の列についてコード化している核酸の断片を使用することによる
、例えば、ＰＣＲ，ＲＴ‐ＰＣＲによるＡＤＮ、及び／あるいは、ＡＲＮの増幅
法による、当該のタンパク質、あるいは、そのタンパク質の断片についてコード
化しているＡＤＮ、及び／あるいは、ＡＲＮの断片の検知、及び／あるいは、 （ｖｉｉ）組織、好ましくは、脳の生検、及びグリオ毒性分割に関連した活性
化体タンパク質の特徴的効果、すなわち、グリア細胞のａｐｏｐｔｏｓｅアアポ
プトーゼ、及び／あるいは、血液‐脳障壁の解放の観察、及び／あるいは、髄鞘
脱落現象の観察、及び／あるいは、 （ｖｉｉｉ）組織、あるいは、循環細胞（血液、ＬＣＲ）の生検、当該のタン
パク質の存在の観察、及びリガンド、及び／あるいは、当該のタンパク質に固着
することができる抗体、あるいは、その断片を使用して、組織から採取した病歴
学的切片に関する免疫病歴学的観察、及び／あるいは、 （ｉｘ）組織、あるいは、循環細胞（血液、ＬＣＲ）の生検、当該のタンパク
質の列から定義された核酸を使用することによって、当該のタンパク質について
コード化しているＡＲＮ分子の自然環境の下での交雑による当該のタンパク質の
発現の観察、及び／あるいは、 （ｘ）組織、あるいは、循環細胞（血液、ＬＣＲ）の生検、当該のタンパク質
の列から定義された核酸を使用することによって、例えば、ＲＴ‐ＰＣＲといっ
た従来の技術によるＡＲＮの増幅による当該のタンパク質の発現の決定。
【００９８】 ＜＜本発明のポリペプチド、及び／あるいは、当該のタンパク質＞＞とは、断
片、パールカンのＣ‐末端（配列番号２）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆
体（配列番号４）、ＧＭ２の活性化体タンパク質（配列番号８）、ＧＭ２の活性
突然変異タンパク質（配列番号９）、カルグラニュリンＢ（配列番号１７）、サ
ポジンＢ（配列番号２４）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体のグループに
属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号５-７）、ＧＭ２の活性
突然変異タンパク質のグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、
配列番号１０-１６）、タンパク質、カルグラニュリンＢのグループに属するタ
ンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号１８-２３）、タンパク質、サポ
ジンＢのグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号２５
-２９）、及びペプチド列配列番号１-２９のいずれかの一つとの少なくとも７０
％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくと
も９８％の同一性を示すペプチド列を指す。 ‘本発明の当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質’についてコー
ド化している核酸の列ＡＤＮ、あるいは、断片とは、断片、パールカンのＣ‐末
端についてコード化している核酸の列（配列番号２）、レチノル結合血漿タンパ
ク質の前駆体についてコード化している核酸の列（配列番号４）、ＧＭ２（配列
番号８）の活性化体タンパク質についてコード化している核酸の列（配列番号３
１）、ＧＭ２（配列番号９）の活性突然変異タンパク質についてコード化してい
る核酸の列、カルグラニュリンＢ（配列番号１７）についてコード化している核
酸の列（配列番号５３）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体のグループに属
するタンパク質、あるいは、断片についてコード化している核酸の列ＡＤＮ、及
び／あるいは、ＡＲＮ（配列番号３０-５７）、ＧＭ２（例えば、配列番号１０-
１６）の活性化体タンパク質のグループに属するタンパク質、あるいは、断片、
タンパク質カルグラニュリンＢ（例えば、配列番号１８-２３）のグループに属
するタンパク質、あるいは、断片、タンパク質サポジンＢ（例えば、配列番号２
５-２９）のグループに属するタンパク質、あるいは、断片を指す。
【００９９】 特に、識別子配列番号２，４，８，９，１７，及び２４の中で定義された列、
あるいは、その断片の中から、あるいは、前記の列（例えば、配列番号１、配列
番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２４、配列番号２
５-２９）のグループに属するタンパク質に対応する列の中から選択されたタン
パク質、あるいは、タンパク質のバリエーション、及び独立して、あるいは、組
み合わせて、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つと、少なくとも７０％
の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、及び有利には、少なく
とも９８％の同一性を示すペプチド列は、細胞に対して、特に、グリア細胞に対
して直接的、あるいは、間接的な毒性効果を示し、それは、前掲の生物試験で明
示される。このタンパク質、あるいは、こうした複数のタンパク質が存在するこ
とによって発生した自己抗体は、自己免疫プロセスに関連している。また、治療
薬、あるいは、複数の治療薬の対象は、例えば、（ｉ）その発現、及び／あるい
は、細胞間濃度、及び／あるいは、その循環濃度を調整する目的での天然タンパ
ク質、あるいは、複数の天然タンパク質、あるいは、そのバリエーション（ｉｉ
）、少なくともそうしたタンパク質の特定の抗体である。規定された治療薬、あ
るいは、複数の治療薬は、特定の免疫反応を発生させること、及び／あるいは、
それを和らげることによって直接、対象を除去する。
【０１００】 従って、本発明は、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及び／あるいは、神
経学的疾患、好ましくは、プラーク硬化症に冒された哺乳類を治療するための薬
学的成分を作成するための生物学的資材に関するものであって、前記の成分は、
次のもので構成される：
【０１０１】 （ｉ）その列が、記号表示列配列番号２，４，８，９，１７，及び２４のすべ
て、あるいは、一部に対応している、少なくとも天然タンパク質、及び／あるい
は、組み換えタンパク質、あるいは、その断片、及び、パールカン、レチノル結
合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグ
ラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５
-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選
択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の
断片、及び、独立して、あるいは、組み合わせて、ペプチド列配列番号１-２９
のいずれか一つと、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、８０％の同一性
を、有利には、９８％の同一性を示すペプチド列、
【０１０２】 （ｉｉ）その列が、記号表示列配列番号２，４，８，９，１７，及び２４のす
べて、あるいは、一部に対応している、少なくとも前記のタンパク質、あるいは
、その断片の少なくとも特定のリガンド、及び、パールカン、レチノル結合血漿
タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュ
リンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、
配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択さ
れた同じタンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片
、及び、独立して、あるいは、組み合わせて、ペプチド列配列番号１-２９のい
ずれか一つと、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の
同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列、
【０１０３】 （ｉｉｉ）その列が、記号表示列配列番号２，４，８，９，１７，及び２４す
べて、あるいは、一部に対応している少なくとも前記のタンパク質、あるいは、
その断片の特定のポリクロナル抗体、あるいは、モノクロナル抗体、及び、パー
ルカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化
体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列
番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２
５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、
あるいは、前記の列の断片、及び、独立して、あるいは、組み合わせて、ペプチ
ド列配列番号１-２９のいずれか一つと、少なくとも７０％の同一性を、好まし
くは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示
すペプチド列、
【０１０４】 （ｉｖ）その列が配列番号２，４，８，９，１７，２４と記号表示される同じ
タンパク質のグループに属するタンパク質のすべて、あるいは、一部についてコ
ード化しているＡＤＮ及びＡＲＮの列（例えば、配列番号３０-５７）から、及
び当該の治療遺伝子の核酸列について遺伝的に変更するために対象細胞内におけ
る生体内の当該の治療遺伝子の前述の発現を保証する要素と関連してパールカン
、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラ
ニュリンＢ、及びサポジンＢの中から選択された同じタンパク質のグループに属
するすべて、あるいは、一部についてコード化しているＡＤＮ、及び／あるいは
、ＡＲＮの列（例えば、配列番号３０-５７）からその核酸列が推論される、少
なくとも一つの当該の治療遺伝子を含む少なくとも一つの核酸の列、
【０１０５】 （ｖ）自然には当該のタンパク質、あるいは、複数の当該のタンパク質、ある
いは、そのタンパク質（複数）のすべての断片、あるいは、少なくとも前述のタ
ンパク質の特定の抗体を生成しない哺乳類の細胞、あるいは、 少なくとも一つの核酸列について試験管内で遺伝的に変更されている前記の哺乳
類の細胞の断片、 あるいは、同じ遺伝子、あるいは、異なる遺伝子に由来する核酸の断片に対応す
る核酸の列の断片、あるいは、核酸の列の結合、 配列番号２，４，８，９，１７，及び２４と記号表示されたタンパク質について
コード化しているＡＤＮ及びＡＲＮの列から前記の核酸列が推論され、 ＡＤＮ、及び／あるいは、ＡＲＮの列（例えば、配列番号３０-５７）が、パー
ルカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２の活性化体の前駆体、カ
ルグラニュリンＢ、サポジンＢの中から選択された同じタンパク質のグループに
属するタンパク質のすべて、あるいは、一部についてコード化しており、 前記の当該の治療遺伝子が当該のタンパク質、当該のタンパク質の断片、あるい
は、前記の動物の細胞の表面に出現する当該のタンパク質の特定の抗体のすべて
、あるいは、一部についてコード化している（Ｔｏｅｓ他、１９９７，ＰＮＡＳ ９４：１４６６０‐１４６６５）。薬学的成分は、単一の対象に対してのみ方
向づけされた治療剤のみ、あるいは、幾つかの対象に対して組み合わせて方向づ
けされた薬剤を含むことができる。
【０１０６】 ＜＜本発明の当該のポリペプチド、及び／あるいは、タンパク質＞＞とは、断
片パールカンのＣ‐末端（配列番号２）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体
（配列番号４）、ＧＭ２の活性化体タンパク質（配列番号８）、ＧＭ２の活性化
体の突然変異タンパク質（配列番号９）、カルグラニュリンＢ（配列番号１７）
、サポジンＢ（配列番号２４）、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体のグルー
プに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号５-７）、ＧＭ２の
活性化体タンパク質のグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、
配列番号１０-１６）、タンパク質カルグラニュリンＢのグループに属するタン
パク質、あるいは、断片（例えば、配列番号１８-２３）、タンパク質サポジン
Ｂのグループに属するタンパク質、あるいは、断片（例えば、配列番号２５-２
９）、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つと、少なくとも７０％
の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には少なくとも９
８％の同一性を示すペプチド列を指す。
【０１０７】 本発明において識別された当該のタンパク質のアミノ酸の列に関する知識から
、専門家は、上記で記述した分子、及び／あるいは、前記の分子に固着すること
ができるすべての分子、及び／あるいは、前記の分子を抑制することができるす
べての分子を定義し、使用することができる。従って、本発明は、天然タンパク
質、及び／あるいは、組み換えタンパク質、及び／あるいは、合成ポリペプチド
、及びその断片、前記のタンパク質、あるいは、例えば、抗体といったその断片
（複数）に固着することができるリガンド；前記のタンパク質の発現、及び／あ
るいは、固着機能の抑制タンパク質に関するものである。
【０１０８】 タンパク質、及び／あるいは、天然ペプチド（複数）、及び／あるいは、組み
換えタンパク質（複数）、及び／あるいは、本発明で識別された当該のタンパク
質に対応する合成ポリペプチド（複数）の使用。
【０１０９】 本発明は、次のものを含む、自己免疫病、好ましくは、プラーク硬化症に冒さ
れた哺乳類を治療するための薬学的成分を作成するための生物学的資材に関する
ものである：
【０１１０】 （ｉ）少なくとも一つの天然タンパク質、及び／あるいは、組み換えタンパク
質、及び／あるいは、そのアミノ酸の列が配列番号２，４，８，９，１７，及び
２４と記号表示されたタンパク質の中から選択された合成ポリペプチド、及び、
パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活
性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、
配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番
号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループにするしペプチド
列、あるいは、前記の列の断片、及び、単独、あるいは、組み合わせて、ペプチ
ド列配列番号１-２９のいずれか一つと、少なくとも７０％の同一性を、好まし
くは、少なくとも８０％の同一性を、有利には少なくとも９８％の同一性を示す
ペプチド列。
【０１１１】 （ｉｉ）少なくとも一つの天然タンパク質、及び／あるいは、当該のタンパク
質の合成断片、例えば、対象のポリペプチドに対して免疫反応を発生させること
ができる免疫原性断片。
【０１１２】 （ｉｉｉ）基準列配列番号２，４，８，９，１７，及び２４から定義された少
なくとも一つのｍｉｍｏｔｏｐｅミモトープペプチド、及び、 パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活
性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、
配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番
号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド
列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか
一つ、あるいは、対象のポリペプチドに対して免疫反応を発生させることができ
るミモトープの組み合わせと、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少な
くとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド
列。
【０１１３】 （ｉｖ）少なくともすべてのタンパク質、あるいは、生体内で当該のタンパク
質（配列番号２，４，８，９，１７，及び２４）の転写、及び／あるいは、翻訳
を調整することができるすべてのタンパク質、あるいは、ペプチド、及び、パー
ルカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化
体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列
番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２
５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、
あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ
と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは８０％の同一性を、有利には９８
％の同一性を示すペプチド列。独立して、あるいは、組み合わせたこうしたタン
パク質、及び／あるいは、ペプチドを投与することによって、組織内の当該のタ
ンパク質の濃度を回復することができる。
【０１１４】 特定の抗原に対して方向づけられた免疫反応は、明確な２つのカテゴリーに分
けることができ、一つは、抗原を使用するものであり（体液タイプ免疫反応）、
もう一つは、例えば、マクロファージ、細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ）、あるいは
、キラー細胞（ＮＫ）、また、＜＜ヘルパー＞＞Ｔリンパ球、すなわち、Ｔリン
パ球ＣＤ４＋（細胞タイプ免疫反応）といった細胞毒性効果細胞を使用するもの
である。特に、２つのタイプの反応は、抗体が抗原を三次元形状で認識するとい
うこと、例えば、Ｔリンパ球は、組織適合性大型複合遺伝子（ＣＭＨ）について
コード化された糖タンパク質に関連した前記の抗原の一部を認識するという点で
異なっている。すなわち、タイプＩの組織適合性大型複合遺伝子は細胞の表面に
遍在的に出現し、タイプＩＩの組織適合性大型複合遺伝子は、抗原（ＡＰＣ）が
存在する場合に係わりあう細胞の表面に独自の仕方で出現する。１）第１の観点
に従って、細胞タイプの免疫反応は、ＣＤ４＋タイプのＴ細胞（ヘルパーＴ細胞
）が既知の活性化現象（学術紙については、Ａｌｂｅｒｏｌａｌｉａ１９９７，
Ａｎｎｕ ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ１５，１２５‐１５４を参照すること）に続
いて、サイトカインを生成し、次にサイトカインが前記のサイトカインを生成す
ることができるＡＰＣ細胞の増殖、抗原の特有な抗体を生成することができるＢ
リンパ球の細胞の判別、及び細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の刺激を誘発する、
ということが特徴である。２）細胞免疫反応の第２の観点に従って、例えば、Ｃ
Ｄ８＋タイプのリンパ球（ＣＴＬ）といった細胞毒性効果細胞は、ａ）偏在細胞
に保持された糖タンパク質に固着し、それによって生じた抗原ペプチドとの相互
作用後に活性化され、ＣＭＨＩシステムに属する遺伝子によって、ｂ）場合によ
っては、ＣＤ４＋によって生成されたサイトカインによってコード化される。
【０１１５】 本発明は、タンパク質、あるいは、当該のタンパク質に由来するペプチド（配
列番号２，４，８，９，１７，及び２４）、あるいは、その断片（複数）、及び
ペプチド列、あるいは、前記のペプチド列の断片の投与に関するものであって、
そのペプチド列は、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガング
リオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例
えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号
１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループ
に属しており、そのペプチド列は、単独、あるいは、組み合わせて、プラーク硬
化症といった自己免疫病の予防、及び／あるいは、治療に関して、ペプチド列配
列番号１-２９のいずれか一つと、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、
少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示す。投
与されたこうしたタンパク質及びペプチドは、その毒性作用、例えば、グリオ毒
性作用を失わなければならない、あるいは、リガンドに固着する能力を失わなけ
ればならず、Ｔリンパ球によって仲介された免疫反応を明確に誘発することがで
き、及び／あるいは、そうしたタンパク質に向けられた抗体を使用する、という
ことを特徴とする。そうしたタンパク質は、”変更された”と言われるが、その
免疫原性は保持される。そうした変更された免疫原性分子は、従来の幾つかの処
理によって、例えば、アミノ酸の化学的、あるいは、加熱変性、切除、あるいは
、削除、挿入、あるいは、交換による突然変異によって得られる。切除の実例は
、５-３０のアミノ酸に至ることのあるカルボキシル末端でのアミノ酸の切除で
ある。天然分子の合成技術、及び／あるいは、組み換え技術によって、あるいは
、化学的、あるいは、物理的処理によって、変更された分子を得ることができる
。
【０１１６】 本発明で識別された当該の天然タンパク質、及び／あるいは、組み換えタンパ
ク質（配列番号２，４，８，９，１７，及び２４）、及びパールカン、レチノル
結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２ガングリオシドの活性化体の前駆体、カル
グラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号
５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から
選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記のペ
プチド列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは
、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の
同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列は、自己免疫
病、好ましくは、ＳＥＰに対する予防及び治療ワクチン接種で使用される。ワク
チンには、許容可能な薬学的媒剤、及び場合によっては、補助薬、及び／あるい
は、希釈剤と組み合わせた免疫原タンパク質の有効免疫原量が含まれる。許容可
能な薬学的媒剤、補助薬、希釈剤は、専門家には良く知られている。参考のため
に、Ｒｅｍｏｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓを引用することができる。病気の早期診断と組み合わせたワクチン成分の使用
が特に有利である。予防的及び治療的ワクチン接種用薬剤を作成する際に、免疫
原タンパク質を使用する。望ましくない副作用を誘発することなく、組織から当
該のタンパク質を除去することができる。そうしたワクチン・タンパク質、ある
いは、ペプチドの識別は、次のように行う：前述のような変更された分子の候補
（天然タンパク質、組み換えタンパク質、ペプチド）を機能試験で分析して、生
物試験と呼ばれる試験を使用して、例えば、グリオ毒性作用といったその毒性を
失ったことを確認する。その免疫原性を確認するために、（ｉ）投与した抗原の
特有なＣＤ８＋Ｔリンパ球の増殖の試験管内試験（Ｔ細胞効力検定）、あるいは
、投与した抗原に特有なＣＤ８＋リンパ球の細胞毒性の試験管内試験を行い、（
ｉｉ）とりわけ、天然タンパク質に向けられた循環抗体の比率を測定する。適切
な補助薬と共に標準的手順によって人間に免疫を与えるために、この変更形態を
使用する。
【０１１７】 作成したワクチンは注射することができる。すなわち、液体溶液、あるいは、
懸濁液で注射をすることができる。オプションとして、調合品をエマルジョン化
することができる。抗原分子を、薬学的に許容可能で、活性成分と適合する賦形
剤と混合することができる。望ましい賦形剤の実例は、水、塩溶液、ブドウ糖、
グリセリン、エタノール、あるいは、それと同等のもの、及びその組み合わせで
ある。
【０１１８】 所望であれば、ワクチンに、”ウエッティング”剤、あるいは、乳化剤、ｐＨ
を緩衝する薬剤、あるいは、水酸化アルミニウム、ムラミル・ジペプチド、ある
いは、そのバリエーションといった僅かな量の補助的物質を含めることができる
。ペプチドの場合、より大きな分子（ＫＬＨ、破傷風毒素）との結合によって、
免疫原性が幾分増大する。慣習的に、皮下注射、あるいは、筋肉内注射によって
ワクチンを投与する。別の投与方法を用いた好都合な付加的な処方には、座薬、
及び経口処方がある。
【０１１９】 一般的に、生体投与のために使用された成分中のポリヌクレオチドの濃度は、
０．１μｇ／ｍｌ-２０ｍｇ／ｍｌである。ポリヌクレオチドは、それが導入さ
れる対象細胞の同族であっても、異種であっても良い。
【０１２０】 同様に、本発明は、当該のタンパク質、あるいは、免疫原ペプチド、あるいは
、不活性で当該のタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，及び２４）に対
応するその断片についてコード化している核酸分子を含むワクチンの使用に関す
るものであって、ペプチド列、あるいは、前記の列の断片は、パールカン、レチ
ノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２ガングリオシドの活性化体の前駆体、
カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列
番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中
から選択された同じタンパク質のグループに属しており、ペプチド列は、ペプチ
ド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０
％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくと
も９８％の同一性を示す。核酸のワクチン、特に、ＡＤＮワクチンは、一般的に
許容可能な薬学的媒剤と組み合わせて筋肉内注射で投与される。
【０１２１】 記述された当該のタンパク質のアミノ酸の列（配列番号２，４，８，９，１７
，及び２４）、及びパールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２
ガングリオシドの活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例
えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号
１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループ
に属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１
-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、
好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一
性を示すペプチド列から、タンパク質の一次列のすべて、あるいは、一部に対応
するペプチド、あるいは、その断片を、ペプチド合成の従来の方法によって合成
するか、あるいは、遺伝子組み換えによって得ることができる。原核生物、ある
いは、真核生物細胞システム内に生成された当該のタンパク質に対応する組み換
えタンパク質を使用することができ、それには、様々なグループがあり、文献に
記載されている。同様に、専門家は、文献に記載された遺伝子列の知識から、遺
伝コードの縮重を考慮に入れて、それを製造することができる。本発明で識別し
たすべてのタンパク質列は、遺伝子組み換えで得ることができる。遺伝子は、適
合化されたベクターの中でクローン化される。原核生物細胞（例えば、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ）、及び真核生物細胞（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ細胞、及びＳｉｍｌｉｋｉ
細胞）を形質転換するためには、異なるベクターを使用する。原核生物、及び／
あるいは、真核生物細胞システムの中で、当該のタンパク質、あるいは、そのタ
ンパク質の断片に対応する組み換えタンパク質を作成することができる。Ｅ．ｃ
ｏｌｉ細胞の場合、組み換えタンパク質は、ポリヒスチジン行列と共に生成され
る。不溶性タンパク質留分は、尿素８Ｍの中で可溶化される。ニッケルキレート
化樹脂（Ｑｉａｇｅｎキアゲン）上で生成物の濃縮が行われる。尿素の濃度を減
少させて、コロニーを洗浄した。尿素をなくしてイミダゾールを用いて、溶出を
行った。同様に、当該のタンパク質の完全な列を、適合させたプラスミドの中で
コロニー形成させ、次に、ワクチン・ウイルスに移して、組み換えウイルスを得
ることができる。
【０１２２】 本発明で識別した当該のタンパク質に固着することができるリガンドの使用。
【０１２３】 本発明は、自己免疫病、好ましくは、プラーク硬化症に冒された哺乳類を治療
するための薬学的成分を作成するための生物学的資材に関するものであって、次
のようなもので構成される：
【０１２４】 （ｉ）少なくとも、対象タンパク質配列番号２，４，８，９，１７，及び２４
の中から選択されたタンパク質、及び／あるいは、タンパク質の断片、及び、パ
ールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２ガングリオシドの活性
化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配
列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号
２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列
、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一
つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なく
とも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列
に固着することができるリガンドであって、リガンドはタンパク質の作用を抑制
することができたり、できないことがある。
【０１２５】 （ｉｉ）少なくとも、対象タンパク質配列番号２，４，８，９，１７，及び２
４の中から選択されたタンパク質、及び／あるいは、タンパク質の断片、及び、
パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ＧＭ２ガングリオシドの活
性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、
配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番
号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド
列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか
一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少な
くとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド
列に固着することができるポリクロナル抗体、あるいは、モノクロナル抗体。こ
の抗体は、中和性であっても、なくても良い。すなわち、当該のタンパク質の作
用を抑制できても、できなくても良い。リガンドは、対象タンパク質、例えば、
そのタンパク質受容体、そのタンパク質の補助因子、タンパク質、あるいは、そ
のタンパク質の断片に固着することができるポリクロナル抗体、あるいは、モノ
クロナル抗体に固着することができるすべての分子、あるいは、分子の断片の中
から選択することができる。
【０１２６】 例えば、特に免疫支配エピトープに逆らって、あるいは、大きな変異性を示す
抗原に対して向けられた免疫反応を監督するので、治療成分を使用できるように
するために、この抗体は非常に有用である。その機能を抑制するために中和性の
可溶性抗体を、また、免疫複合の形成によるペプチドを無くすために特定の可溶
性抗体を患者に投与する。本発明は、変性、及び／あるいは、神経学的、及び／
あるいは、自己免疫性疾患、好ましくは、プラーク硬化症の治療、及び／あるい
は、臨床追跡調査のために、特に、少なくとも本発明に記述したタンパク質を識
別することができる抗体の使用を記述している。この抗体は、ポリクロナル抗体
、及び好ましくは、モノクロナル抗体である。好ましくは、この抗体は、タンパ
ク質の活性部位を識別して、固着し、タンパク質の機能を抑制する。特に、タン
パク質に固着する抗体の能力は、例えば、ＥＬＩＳＡ、あるいは、Ｗｅｓｔｅｒ
ｎ Ｂｌｏｔ試験といった記述した従来の技術によって、免疫原タンパク質、あ
るいは、天然免疫原ペプチド、あるいは、合成免疫原ペプチドを使用することに
よって分析されている。抗体の適定量が決定されている。タンパク質の機能を中
和する抗体の能力は、異なる方法によって、例えば、抗体の存在による免疫原タ
ンパク質、あるいは、免疫原ペプチドの作用の減少を決定することによって、好
ましくは、試験管内生物試験を使用してグリオ毒性作用の減少を決定することに
よって分析することができる。
【０１２７】 例えば、対象タンパク質、あるいは、そのタンパク質の一部に向けられたモノ
クロナル抗体は、表面の抗原に対する抗体を生産するために使用された従来の技
術によって生成される。（ｉ）当該の天然タンパク質、あるいは、組み換えタン
パク質を用いて、（ｉｉ）当該のタンパク質のすべての免疫原ペプチドを用いて
、（ｉｉｉ）当該のタンパク質、あるいは、ペプチド、及びＣＭＧＩＩの分子を
発現するハツカネズミの細胞を用いて、ハツカネズミ、あるいは、ウサギに免疫
を与える。Ｂａｌｂ／ｃのハツカネズミの血統が、もっとも頻繁に使用されてい
る。同様に、免疫原は、当該のタンパク質の一次列から定義されたペプチドの中
から選択されたペプチドである。例えば、次のように免疫原を作成する：ガング
リオシドＧＭ２の前駆体の列に由来するペプチド配列番号５８，５９，６０、サ
ポジンＢの列に由来するペプチド配列番号６１，６２、及び、カルグラニュリン
Ｂに由来するペプチド配列番号６３，６４，６５を免疫で使用するためのサポー
トとしてＬｙｍｐｈｅｔ Ｋｅｙｈｏｌｅリンフェットキーホール、略してペプ
チド‐ＫＬＨのヘモシアニンに結合するか、あるいは、人間の血清アルブミン、
略してペプチド‐ＨＳＡに結合する。Ｆｒｅｕｎｄの完全補助薬（ＩＦＡ）を使
用して、ペプチド‐ＫＬＨ、あるいは、ペプチド‐ＨＳＡを動物に注射する。最
初のタンパク質を用いて、ＥＬＩＳＡ試験によって抗タンパク質抗体が存在する
かどうか、各ペプチドによって免疫を与えられた動物に由来するｈｙｂｒｉｄｏ
ｍｅヒブリドームの培養血清及び浮遊物を分析する。従って、ハツカネズミの脾
臓の細胞を回収し、骨髄腫細胞と融合させる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）は、最も頻繁に使用される融合剤である。最も特有で、最も敏感なな抗体を生
成するヒブリドムを選択する。作成されたヒブリドームの細胞培養によって、あ
るいは、ハツカネズミのヒブリドームの腹膜内注射後にハツカネズミの腹水から
回収することによって、試験管内でモノクロナル抗体を生成することができる。
浮遊物、あるいは、腹水による生産方法であれ、続いて、モノクロナル抗体を精
製することが重要である。使用する精製方法は、主として、ゲル・イオン交換器
による濾過か、あるいは、除去クロマトグラフィー、さらには、免疫沈殿である
。各抗体について、最良の効率が得られる方法を選択しなければならない。当該
のタンパク質に固着するために、及び／あるいは、当該のタンパク質の作用を阻
止するために最も高性能な抗体を識別するために、機能試験で抗タンパク質抗体
の十分な数を選別する。＜＜ＣＤＲグラフティング＞＞の標準的方法（サービス
の形で数多くの企業によって実現された手順）によって、選択したモノクロナル
抗体を人間に適合させる。人間に適合させたこの抗体を患者で臨床的に試験する
ことができる。臨床的パラメータによって、この抗体の効果を追跡調査すること
ができる。
【０１２８】 キメラ抗体といった、抗体、抗体の断片、あるいは、抗体の誘導体の試験管内
生産、真核生物細胞内における遺伝子工学による生産が記述されており（ＥＰ１
２０ ６９４、あるいは、ＥＰ１２５ ０２３）、本発明にも応用可能である。
【０１２９】 本発明で識別された当該のタンパク質の抑制分子の使用。
【０１３０】 本発明は、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及び／あるいは、神経学的疾
患、好ましくは、プラーク硬化症に冒された哺乳類を治療するための薬学的成分
を作成するための生物学的資材に関するものであって、前記の成分は、次のもの
で構成される： （ｉ）本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）
、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧ
Ｍ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列
番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３
、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属する
ペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９の
いずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましく
は、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示す
ペプチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質の機能の少なくとも
一つの抑制分子、例えば、グリオ毒性作用の抑制、 （ｉｉ）例えば、転写、あるいは、翻訳を妨害するための、タンパク質配列番号
２，４，８，９，１７，２４、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質
の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及
びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１
０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタ
ンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペ
プチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも
７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少な
くとも９８％の同一性を示すペプチド列の中から選択された少なくとも一つのタ
ンパク質の発現の少なくとも一つの調整分子、 （ｉｉｉ）タンパク質配列番号２，４，８，９，１７，２４、及び、パールカン
、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前
駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３
、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９
）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは
、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるい
は、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％
の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列の中から選
択された少なくとも一つのタンパク質の代謝の少なくとも一つの調整分子、 （ｉｖ）例えば、受容器、あるいは、補助因子といった、タンパク質配列番号２
，４，８，９，１７，２４、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の
前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及び
サポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-
１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパ
ク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチ
ド列配列番号１-８と配列番号１０-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と
、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有
利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列、ペプチド列配列番号１-
２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好
ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性
を示すペプチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質の臨床の発現
、及び／あるいは、代謝の少なくとも一つの調整分子。二次的効果なしに人間の
組織のタンパク質を抑制することができると考えられる。
【０１３１】 本発明の重要な別の観点は、次のような能力がある天然物質、及び／あるいは
、合成物質の治療効率識別及び評価に関するものである：
【０１３２】 （ｉ）本発明の当該のタンパク質、あるいは、その断片：配列番号２，４，８
，９，１７，２４、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、
ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジン
Ｂ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配
列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグ
ループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列
番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一
性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％
の同一性を示すペプチド列の作用を阻止、及び／あるいは、抑止することができ
る。及び／あるいは、
【０１３３】 （ｉｉ）対応する代謝の抑止剤、補酵素によって活性化された酵素の抑止剤の
ように代謝を抑止することができる。及び／あるいは、
【０１３４】 （ｉｉｉ）当該のタンパク質：配列番号２，４，８，９，１７，２４、及び、
パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活
性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、
配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番
号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド
列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか
一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少な
くとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド
列の発現を調整することができる。及び／あるいは、
【０１３５】 （ｉｖ）例えば、受容体のといった、当該のタンパク質のリガンド配列番号２
，４，８，９，１７，２４、及びパールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前
駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサ
ポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１
６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク
質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド
列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％
の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも
９８％の同一性を示すペプチド列の機能、及び／あるいは、発現を抑止すること
ができる。こうした物質は、病気の疾病予防的及び治療的処置に使用することが
できる。本発明は、同様に、そうした物質の有効量を投与することによって、例
えば、ＳＥＰといった自己免疫病を治療、予防するための方法に関するものであ
る。こうした物質は、タンパク質、抗体、合成あるいは天然小分子、本発明で識
別されたタンパク質の誘導体、脂質、糖脂質、等であっても良い。化学コンビネ
ーション・ライブラリを使用することによって、大量に小分子を選別、識別する
ことができる。本発明は、同様に、許容可能な生理学的キャリアと組み合わせた
そうした物質を含む薬学的成分、及びそうした物質を使用することによって、Ｓ
ＥＰといった自己免疫病の治療、あるいは、予防で使用すべき薬剤を作成するた
めの方法に関するものである。
【０１３６】 プラーク硬化症といった変性、及び／あるいは、神経学的、及び／あるいは、
自己免疫性疾患のための候補薬剤といった小分子量の抑制分子を識別するために
、治療した患者と治療しない患者から、治療したモデル動物と治療しないモデル
動物から、あるいは、治療したモデル動物と治療しないモデル動物の組織から採
取したサンプルを使用して、参考として特許請求に含まれた前述の試験及び手順
を使用する。本発明のこの観点には、同様に、当該のタンパク質の作用を阻止、
あるいは、抑制することができる物質を識別するための方法が含まれ、試験管内
試験、あるいは、生体内動物モデルでの物質の導入も含まれる。それが価値ある
候補薬剤であるかどうかを知るために、こうした抑制体は、有毒性及び薬物動力
学的試験でも試験される。この選別手順でタンパク質の作用、あるいは、タンパ
ク質の発現の抑制、あるいは、阻止に関して試験する物質は、タンパク質、抗体
、抗体の断片、合成、あるいは、天然小分子、当該のタンパク質からの誘導体、
等とすることができる。化学コンビネーション・ライブラリを使用することによ
って、大量に小分子を選別、識別することができる。
【０１３７】 実例として、次のような抑制物質が挙られる：
【０１３８】 本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）の抑
制体、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ
２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番
号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、
配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペ
プチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のい
ずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは
、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペ
プチド列、及び、前記のタンパク質の断片の抑制体。特に、プラーク硬化症の治
療のために、疾病予防的及び治療的成分にこうした抑制体を含めることができる
。例えば、リコリン、Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃａｅ（ｅｘ：Ｃｒｉｎｕｍ Ａｓ
ｉａｔｉｃｕｍ）から抽出されたアルカロイドは、試験管内で０．１-０．５μ
ｇ／ｍｌの濃度で、生体内で０．１-１ｍｇ／ｋｇ／日の濃度で使用される。例
えば、ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｓ ４（ＰＤＥ４）の抑制体と同じ
グループの２分子であるＲｏｌｉｐｒａｍ（商品名）及びＩｂｕｄｉｌａｓｔ（
商品名）は、試験管内で１-１０μＭ／ｌの濃度で、生体内で１０ｍｇ／ｋｇ／
日の濃度で使用される。
【０１３９】 タンパク質配列番号２，４，８，９，１７，２４のアミノ酸の列、及び、パー
ルカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化
体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列
番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２
５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、
あるいは、前記の列の断片から、遺伝コード及びその縮重を考慮に入れることに
よって、当該のタンパク質のグループのタンパク質（例えば、配列番号３２-４
１、配列番号４３-５２、配列番号５４-５７、配列番号６６-６７）についてコ
ード化している、当該のタンパク質、あるいは、その列に対応するヌクレオチド
列ＡＤＮ及びＡＲＮ（配列番号３０，３１，４２，５３）を推論することができ
る、ということが明らかである。また、本発明は、下記のような形のヌクレオチ
ド列の使用に関するものである：
【０１４０】 ‐逆方向列
【０１４１】 ‐治療遺伝子についてコード化している列
【０１４２】 ‐試験管外、及び／あるいは、生体内で細胞決定されて形質転換を行うために
ベクターに入れることができる列（遺伝子治療）
【０１４３】 本発明で識別された当該のタンパク質のアミノ酸における列の前記の核酸；逆
方向アミノ酸、及び／あるいは、治療遺伝子についてコード化しているアミノ酸
の使用。
【０１４４】 本発明は、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及び／あるいは、神経学的疾
患、好ましくは、プラーク硬化症に冒された哺乳類を治療するための薬学的成分
を作成するための生物学的資材に関するものであって、前記の成分は、次のもの
で構成される： （ｉ）当該のタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、及びパール
カン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体
の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番
号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-
２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、ある
いは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あ
るいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８
０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列、ある
いは、その断片についてコード化している核酸の列に交雑することができる少な
くとも一つの核酸の列、 （ｉｉ）当該のタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、及びパー
ルカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化
体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列
番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２
５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、
あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ
、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくと
も８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列、
あるいは、その断片についてコード化している少なくとも一つの当該の治療遺伝
子を含む少なくとも一つの核酸の列、及び、生体内で前記の核酸の列について遺
伝的に変更されるよう定められた対象細胞の中で前記の遺伝子の発現を保証して
いる要素。
【０１４５】 核酸の列については、二重撚り、単撚り、線形、あるいは、円形、天然、ある
いは、単独、あるいは、合成、ヌクレオチド精密濃縮と呼ばれ、変更されている
か、あるいは、変更されておらず、ＡＤＮｃ；ゲノムＡＤＮ；プラスミドＡＤＮ
；メッセンジャーＡＲＮで構成されるグループの中から選択された核酸の列の断
片、あるいは、一つの領域を定義することができるＡＤＮ、及び／あるいは、Ａ
ＲＮの断片が知られている。こうした核酸の列は、タンパク質配列番号２，４，
８，９，１７，２４、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体
、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジ
ンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、
配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質の
グループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配
列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同
一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８
％の同一性を示すペプチド列のアミノ酸の列から、遺伝子コードを使用すること
によって推論される。遺伝コードの縮重を理由として、本発明は、また、同等、
あるいは、同族の列も含む。限定されたこの列によって、専門家は、自身で適合
した核酸を定義することができる。
【０１４６】 また、本発明は、当該のタンパク質、あるいは、その断片（複数）（配列番号
２，４，８，９，１７，２４）、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク
質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、
及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号
１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じ
タンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、
ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくと
も７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少
なくとも９８％の同一性を示すペプチド列についてコード化している核酸の列に
交雑することができる少なくとも一つの核酸の列を含む薬学的成分を作成するた
めの生物学的資材に関するものである。
【０１４７】 本発明は、当該のタンパク質、あるいは、その断片についてコード化している
ＡＤＮ、及び／あるいは、ＡＲＮの列の相補的核酸を定義し、使用することで構
成されている。この断片は、逆方向分子、あるいは、リボザイムに対応しており
、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社によって販売されているような自動合
成器を用いて合成することができる。本発明は、厳格な条件のもとで、本発明の
タンパク質、あるいは、その断片（複数）についてコード化しているＡＤＮ、及
び／あるいは、ＡＲＮに交雑することができるこうした核酸の使用を記述してい
る。特徴的な厳格な条件とは、研究交雑種のＴｍ（溶解温度）下のほぼ１２-２
０℃に選択された温度と塩分濃度の組み合わせに対応するものである。そうした
分子を合成して、分子サンプリングに使用される従来のマーキング方法を使用す
ることによって、マーキングすることができ、あるいは、増幅反応における誘発
剤として使用することができる。基準列に対して少なくとも９０％の相同を示す
列も本発明の一部であり、同様に、基準列に対して密接に相同な少なくとも２０
のヌクレオチド、及び好ましくは、３０のヌクレオチドを有するその列の断片も
本発明の一部である。天然ペプチド、あるいは、そのバリエーションの比率を削
減するために、逆方向、及び／あるいは、リボザイムの取り組み方を検討するこ
とができる。そうした取り組み方は、文献に広範に記載されている。もちろん、
そうした逆方向分子は、ベクターとすることができる。同様に、逆方向について
コード化している核酸の列を含むベクターを使用することができる。
【０１４８】 本発明は、プラーク硬化症といった、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及
び／あるいは、神経学的疾患に冒された哺乳類を治療するための薬学的成分を作
成するための生物学的資材に関するものであり、前記の成分は、少なくとも当該
の治療遺伝子、及び前記の核酸の列について遺伝的に変更するために対象細胞内
での生体内での前記の遺伝子の発現を保証する要素を含む少なくとも核酸の列を
含む。
【０１４９】 そうした核酸の列、及び／あるいは、ベクター（逆方向、あるいは、タンパク
質、あるいは、タンパク質の断片についてコード化しているもの）により、（ｉ
）ベクターによって導入された目標分子を使用することによって、（ｉｉ）細胞
の特定の特性を使用することによって、マクロファージ細胞のような、その中で
ペプチドが発現する細胞を選別することができる。
【０１５０】 本発明で識別された当該のタンパク質の遺伝子に対応する当該の治療遺伝子を
含むベクターの使用。
【０１５１】 本発明は、プラーク硬化症といった、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及
び／あるいは、神経学的疾患に冒された哺乳類を予防及び治療するための薬学的
成分を作成するための生物学的資材に関するものであり、成分は、当該の治療遺
伝子、及び前記の当該の遺伝子の発現要素を含む。遺伝子は、変異させてあって
も、なくとも良い。同様に、それは、対象細胞に組み込みができないように変更
された核酸、あるいは、スペルミンといった薬剤を用いて安定化された核酸で構
成することができる。
【０１５２】 当該の治療遺伝子は、次のようなものについてコード化する：
【０１５３】 （ｉ）本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４
）、、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシ
ドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、
配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-
２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属
するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２
９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ま
しくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を
示すペプチド列、あるいは、その断片（複数）の中から選択された少なくとも一
つのタンパク質。
【０１５４】 （ｉｉ）本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２
４）、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシ
ドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、
配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-
２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属
するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２
９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ま
しくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を
示すペプチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質、あるいは、タ
ンパク質の断片に固着することができる少なくともポリクロナル抗体、あるいは
、モノクロナル抗体のすべて、あるいは、一部について。特に、前記の抗体、断
片、あるいは、抗体の誘導体が遺伝的に変更された哺乳類の対象細胞の表面に発
現し、竿防毒性効果細胞の表面に、あるいは、そうした細胞の活性化手順に係わ
るヘルパーＴリンパ球の表面に存在するポリペプチドに固着できる限りでは、天
然の経膜抗体、あるいは、断片、あるいは、そうした抗体の誘導体が問題となる
。
【０１５５】 （ｉｉｉ）識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、
及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ
２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番
号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、
配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペ
プチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のい
ずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは
、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペ
プチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質、あるいは、その断片
の少なくとも一つの抑制分子；タンパク質配列番号２，４，８，９，１７，２４
、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧ
Ｍ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列
番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３
、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属する
ペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９の
いずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましく
は、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示す
ペプチド列の機能、及び／あるいは、代謝、及び／あるいは、固着の抑制タンパ
ク質、
【０１５６】 （ｉｖ）識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、及
び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２
の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号
１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配
列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプ
チド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいず
れか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、
少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプ
チド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質、あるいは、タンパク質
の断片に固着することができる少なくとも一つのリガンド、あるいは、リガンド
のすべての部分、及び／あるいは、その機能の抑制体。
【０１５７】 特に、抗体の断片については、天然抗体の断片Ｆ（ａｂ），Ｆａｂ’，ｓＦｖ
（Ｂｌａｚａｒ他，１９９７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
１５９：５８２１‐５８３３；Ｂｉｒｄ他，１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２
：４２３‐４２６）が知られており、誘導体については、例えば、そうした抗体
のキメラ誘導体が知られている（例えば、ハツカネズミ／人ａｎｔｉＣＤ３キメ
ラ抗体、Ａｒａｋａｗａ他１９９６Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １２０：６５７‐６６
２、あるいは、イムノトキシンｓＦｖ‐ｔｏｘｉｎｅ、Ｃｈａｕｄａｒｙ他１９
８９，Ｎａｔｕｒｅ３３９：３９４‐３０７を参照すること）。経膜抗体につい
ては、前記の認識と固着を可能にするために、少なくとも、特定の抗原を認識し
、それに固着することができるその機能領域が対象細胞の表面に発現する、抗体
が知られている。特に、本発明に従った抗体は、上述の機能領域を定義するアミ
ノ酸を含む融合ポリペプチド、及び対象細胞の二重膜脂質層の内部への、あるい
は、その二重層の外部表面への定着を可能にするアミノ酸の列（経膜ポリペプチ
ド）で構成される。幾つかの経膜ポリペプチドについてコード化している核酸列
は、文献に記載されている。最も有利な事例に従って、抗体の重連鎖についてコ
ード化している核酸の列は、前記の経膜ポリペプチドについてコード化している
核酸の列と融合している。
【０１５８】 特に、生体内での前記の遺伝子の発現を保証する要素については、対象細胞へ
の転送後の前記の遺伝子の発現を保証するために必要な要素が指摘されている。
特に、プロモーター列、及び／あるいは、前記の細胞中の有効領域の列、及び、
特に、前記のポリペプチドの対象細胞の表面での発現を可能にするために必要な
列が問題となる。使用するプロモーターは、偏在、あるいは、組織に特有なウイ
ルス・プロモーター、あるいは、合成プロモーターであっても良い。実例として
、ウイルス・プロモーターＲＳＶ（Ｒｏｕｓ Ｓａｒｃｏｍａ Ｖｉｒｕｓ）、
ＭＰＳＶ、ＳＶ４０（Ｓｉｍｉａｎ Ｖｉｒｕｓ）、ＣＭＶ（Ｃｙｔｏｍｅｇａ
ｌｏｖｉｒｕｓ）、あるいは、ワクチンウイルス、筋肉クレアチン・キナーゼに
ついて、アクチンについてコード化している遺伝子プロモーターといったプロモ
ーターが挙られる。また、与えられた細胞タイプに特有な、あるいは、規定の条
件で活性化可能なプロモーター列を選択することができる。文献には、プロモー
ター列に関する多数の情報が記載されている。
【０１５９】 とりわけ、前記の核酸は、転写プロモーターの作用を示す同一、あるいは、異
なる少なくとも２つの列、及び／あるいは、プロモーターの転写機能、あるいは
、前記の遺伝子の転写が影響を受けない限りで、隣接して、離れて同じ方向、あ
るいは、逆方向に位置する互いに同一、あるいは、異なる２つの遺伝子を含むこ
とができる。
【０１６０】 同様に、このタイプの核酸の構造では、転写を阻害せず、翻訳ステップの前に
撚り継ぎされる＜＜中性＞＞核酸列、あるいは、イントロンを導入することがで
きる。そうした列、及びその使用は、文献に記載されている（参考文献：特許請
求ＰＣＴ ＷＯ ９４／２９４７１）。
【０１６１】 同様に、前記の核酸は、複製、及び／あるいは、組み込み、及び／あるいは、
転写、及び／あるいは、翻訳のために、細胞内輸送に必要な列を含むことができ
る。そうした列は、専門家には良く知られている。
【０１６２】 とりわけ、本発明に従った使用可能な核酸は、同様に、対象細胞のゲノムに組
み込まれないように変更されたアミノ酸、あるいは、例えば、トランスフェクシ
ョンの効率に影響を与えないスペルミンといった薬剤によって安定化されたアミ
ノ酸であっても良い。
【０１６３】 本発明の実現方法に従って、核酸の列は、むきだしのＡＤＮ、あるいは、ＡＲ
Ｎの列である。すなわち、細胞への導入を容易にあらゆる化合物がないというこ
とである（核酸列の転送）。いずれにせよ、本発明の第２の実現方法に従って、
対象細胞への導入を容易にするために、また、本発明の遺伝的に変更された細胞
を得るために、この核酸の列は、＜＜ベクター＞＞の形に、特に、ウイルス・ベ
クター、例えば、アデノウイスル・ベクター、レトロウイルス・ベクター、ポッ
クスウイルスに由来するベクター、特に、ワクチンウイルス、あるいは、変更ウ
イルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）に由来するベクター、あるいは、例えば、陽イオ
ン両親媒性化合物、特に、陽イオン脂質、陽イオンあるいは中性ポリマー、特に
、プロピレン・グリコール、ポリエチレン・グリコール、グリセロール、エタノ
ール、１‐メチルＬ‐２ピロリドン、あるいは、その誘導体の中から選択された
実用極性化合物、及び、特に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジエチルス
ルホキシド、ジ‐ｎ‐プロピルスルホキシド、ジメチルスルホン、スルホラン、
ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｅ
ｅテトラメチルウレ、アセトニトリル、あるいは、その誘導体の中から選択され
たａｐｒｏｔｉｑｕｅアプロティック極性化合物で構成されたグループの中から
選択された少なくとも一つの運搬分子、あるいは、物質に複合化、あるいは、結
合された少なくとも一つの前記の核酸の列で構成されたベクターといった非ウイ
ルス・ベクターとすることができる。文献には、そうしたウイルス・ベクターや
、非ウイルス・ベクターの数多くの重要な実例が記載されている。
【０１６４】 そうしたベクターは、とりわけ、好ましくは、細胞毒性細胞及び抗原提示細胞
といった一定のタイプの細胞、あるいは、特定の組織に向けられた核酸の列の転
送の案内を可能にするターゲット設定要素を含むことができる。同様に、例えば
、核、ミトコンドリア、あるいは、ペルオキシソームといった所望の一定の細胞
間区画に向けた活性物質の転送を案内することができる。とりわけ、細胞の内部
への侵入、あるいは、細胞間区画の溶解を容易にする要素が問題となる。文献に
は、そうしたターゲット設定要素が広範に記載されている。例えば、レクチン、
ペプチド、特に、ペプチドＪＴＳ‐１（特許請求、ＰＣＴ ＷＯ９４／４０９５
８を参照すること）、オリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、ビタミン、抗原、
抗体、膜受容器の特定のリガンド、抗リガンドと反応する敏感なリガンド、ｆｕ
ｓｏｇｅｎｅｓヒューソゲン融合原ペプチド、核局在ペプチド、あるいは、そう
した化合物の成分のすべて、あるいは、一部が問題となる。
【０１６５】 本発明で識別された当該のタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４
）、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシド
ＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配
列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２
３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属す
るペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９
のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好まし
くは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示
すペプチド列から定義された少なくとも一つの当該の治療遺伝子を含むベクター
の注射後の生体内での形質転換された細胞の使用。
【０１６６】 本発明は、変性、及び／あるいは、自己免疫的、及び／あるいは、神経学的疾
患、好ましくは、プラーク硬化症に冒された哺乳類を治療するための薬学的成分
を作成するための生物学的資材に関するものであって、成分は、生体内で対象細
胞に導入することができ、生体内で当該の治療遺伝子を発現させることができる
下記に記述するような治療遺伝子を含む少なくとも一つのベクターを含む。本発
明の利点は、長期間、治療を受けた患者の中に発現された分子の基礎レベルを維
持できることにある。治療遺伝子についてコード化しているベクター、あるいは
、核酸を注射する。このベクター、あるいは、核酸は、対象細胞に転送され、生
体内で発現すべき細胞にトランスフェクションされなければならない。
【０１６７】 本発明は、先行するパラグラフで示されたようなヌクレオチド列、及び／ある
いは、ベクターの生体内発現に関するものである。すなわち、特に、次のような
ものについてコード化している当該の治療遺伝子に対応する列である：
【０１６８】 （ｉ）本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４
）の中から選択された少なくとも一つのタンパク質、及び、パールカン、レチノ
ル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２の活性化体の前駆体、カ
ルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番
号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配列番号２５-２９）の中か
ら選択された同じタンパク質のグループに属するペプチド列、あるいは、前記の
列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいずれか一つ、あるいは、その
断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、少なくとも８０％の同一性
を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプチド列の中から選択された
少なくとも一つのタンパク質、あるいは、その断片（複数）、
【０１６９】 （ｉ）本発明で識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４
）、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシド
ＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配
列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２
３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属す
るペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９
のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好まし
くは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示
すペプチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質に固着することが
できるポリクロナル抗体、あるいは、モノクロナル抗体の少なくともすべて、あ
るいは、一部。前記の抗体、断片、あるいは、抗体の誘導体が遺伝的に変更され
た哺乳類の対象細胞の表面で発現し、前記の抗体が、細胞毒性効果細胞、あるい
は、ヘルパーＴリンパ球の表面に存在するポリペプチドに固着することができ、
そうした細胞の活性化の手順に係わる限りでは、天然の経膜抗体、あるいは、断
片、あるいは、抗体の誘導体が問題となることがある。哺乳類の血液循環中に前
記の抗体を分泌することができる細胞によって出現する抗体の断片、あるいは、
抗原についてコード化している遺伝子によって遺伝的に変更された細胞を持つ患
者が問題となることがある。
【０１７０】 （ｉｉ）識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、及
び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ２
の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番号
１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、配
列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペプ
チド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のいず
れか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは、
少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペプ
チド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質の抑制分子；機能、及び
／あるいは、代謝、及び／あるいは、タンパク質配列番号２，４，８，９，１７
，２４、及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオ
シドＧＭ２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば
、配列番号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８
-２３、配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属
するペプチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２
９のいずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ま
しくは、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を
示すペプチド列の固着の抑制タンパク質、
【０１７１】 （ｉｉｉ）識別されたタンパク質（配列番号２，４，８，９，１７，２４）、
及び、パールカン、レチノル結合血漿タンパク質の前駆体、ガングリオシドＧＭ
２の活性化体の前駆体、カルグラニュリンＢ、及びサポジンＢ（例えば、配列番
号１、配列番号３、配列番号５-７、配列番号１０-１６、配列番号１８-２３、
配列番号２５-２９）の中から選択された同じタンパク質のグループに属するペ
プチド列、あるいは、前記の列の断片、及び、ペプチド列配列番号１-２９のい
ずれか一つ、あるいは、その断片と、少なくとも７０％の同一性を、好ましくは
、少なくとも８０％の同一性を、有利には、少なくとも９８％の同一性を示すペ
プチド列の中から選択された少なくとも一つのタンパク質に固着することができ
る少なくとも一つのリガンド、あるいは、リガンドのすべて、あるいは、一部、
及び／あるいは、その機能の抑制体。
【０１７２】 独自の実施方法に基づくと、遺伝子治療を蛋白質、ペプチドあるいはここでタ
ーゲットになっている分子に対する免疫反応、即ち、配列番号が２、４、８、９
、１７および２４である蛋白質、ならびにｐｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およ
びレチノールに結合している血漿蛋白質の先駆物質の間で選ばれる、ガングリオ
シッドＧＭ［免疫グロブリン］２、カルグラニュリンＢおよびサポニンＢ（例え
ば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３および２５から
２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属しているペプチド配列
、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１から２９である
ペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列、ならびにその（それらの）フ
ラグメントの間で選ばれる蛋白質全てに対する、また／もしくは前述したこれら
の蛋白質、および／あるいは例えば、レセプターのような前述した蛋白質のリガ
ンドの機能、および／あるいは表示、および／あるいは代謝の抑制分子全てに対
する免疫反応をもたらすように使用することが問題になっている。このため明ら
かに、ヴェクターによって転換するターゲットになっている細胞は、リンパ細胞
タイプの細胞（ＣＤ［サイクロデキストリン］４／ＣＤ８）であるか、それとも
抗原を呈している細胞（樹枝状細胞、大食細胞等）であるかの免疫系に属してい
る細胞である。
【０１７３】 独自の実施方法に従って、遺伝子的見地から特に生体内で、抗原を呈している
細胞（ＣＰＡ）を変えていく。大食細胞、樹枝状細胞、小膠芽細胞および星状細
胞のようなＣＰＡは、免疫反応の初期段階で役割を演じている。これらの細胞は
最初の細胞構成要素であり、細胞内で抗原を捕らえて、これをつくりあげ、Ｔ細
胞ＣＤ４＋およびＣＤ８＋に免疫原が現れると、これに関係する膜間ＣＭＨＩお
よびＣＭＨＩＩの細胞を示して、Ｔ細胞の活性化に加わる特異な補助蛋白質をつ
くりだしている（デブリック他、１９９１年、免疫学雑誌 １４７：２８４６；
レイス他、１９９３年、ヨーロッパ医学雑誌 １７８：５０９；コヴァチョヴィ
ッチ‐バンコフスキ他、１９９３年、ＰＮＡＳ ９０：４９４２；コヴァチョヴ
ィッチ‐バンコフスキ他、１９９５年、サイエンス ２６７：．２４３；スヴェ
ンスソン他、１９９７年、免疫学雑誌 １５８：４２２９；ノーバリー他、１９
９７年、ヨーロッパ免疫学雑誌 ２７：２８０）。接種には、遺伝子をＡＰＣの
ような細胞に転移させるターゲットにすることができる遺伝子治療のシステムを
、即ち、自らの細胞内形成および《プロセッシング》の後で、それぞれＣＤ８＋
および／あるいはＣＤ４＋細胞の表面における錯体ＣＭＨＩおよび錯体ＣＭＨＩ
Ｉの分子によって、これらの細胞に現れるポリペプチドに、遺伝子コードを指定
する遺伝子を処方することが望ましい。
【０１７４】 生体内のＣＰＡ細胞の表面に、抗原および／あるいは配列番号が２、４、８、
９、１７および２４である蛋白質、ならびにｐｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）お
よびレチノールに結合している血漿蛋白質の先駆物質の間で選ばれる、ガングリ
オシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサポニンＢ（例えば、配列番号が１
、３、５から７、１０から１６、１８から２３および２５から２９）のアクチヴ
ェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属しているペプチド配列、あるいは前述し
た配列のフラグメント、ならびに配列番号が１から２９であるペプチド配列のい
ずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれる蛋白質、あるいはターゲットにな
っているペプチドと共に反応することができる、例えば、レセプターのようなリ
ガンドの全て、あるいはこれらの一部を示すことが選択される。従って、このよ
うな細胞は特に前述した蛋白質、あるいは前述したペプチド、および《プロセッ
サー》を、こうしたペプチドのフラグメントが抗原を呈している細胞の表面に現
れるように、食細胞の活動によって吸収しようとする。
【０１７５】 文献はポリペプチドあるいはレセプターと共に反応することができる抗体に、
遺伝子コードを指定する遺伝子の実例を数多く提供している。専門家はこのよう
な抗体に遺伝子コードを指定する核酸の配列を手に入れることができる。例えば
、抗体ＹＴＨ １２．５（ａｎｔｉＣＤ３）（ルートレッジ他、１９９１年、ヨ
ーロッパ免疫学雑誌 ２１：２７１７‐２７２５）、およびアラカワ他、１９９
６年、生化学雑誌 １２０：６５７‐６６２によるａｎｔｉＣＤ３の軽鎖および
重鎖に、遺伝子コードを指定する遺伝子を引用してみる。こうした抗体の核酸配
列は、専門家が通常使用しているベータ・ベースから容易に確認することができ
る。同様に、ＡＴＣＣ［アメリカ式培養コレクション］に使用することができる
ハイブリドーマから、これらの異なる抗体の軽鎖および／あるいは重鎖に、特異
なオリゴ核酸塩あるいはＡＤＮｃバンクを使用する技術を用いて、ＲＴ‐ＰＲＣ
［ピーシーアール法］のような拡大方法によって、遺伝子コードを指定する核酸
の配列をクローニングすることができる（マニアティス他、１９８２年、分子ク
ローニング、実験室マニュアル、ＣＨＳ実験室、コールド・スプリング・ハーバ
ー、ニューヨーク）。従って、このようにクローニングされる配列は、ヴェクタ
ーにおける自らのクローニングに使用することができる。発明の好ましい事例に
基づくと、抗体の重鎖に遺伝子コードを指定する核酸の配列は、相同組み換えに
よって、狂犬病の糖蛋白質あるいはｇｐ１６０のような膜間ポリペプチドに、遺
伝子コードを指定する核酸の配列と融合している（ポリデフキス他、１９９０年
、実験医学雑誌 １７１：８７５‐８８７）。これらの分子生物学の技術は、全
て完全に記述されている。
【０１７６】 生体内のＣＰＡ細胞の表面に、配列番号が２、４、８、９、１７および２４で
ある蛋白質、ならびにｐｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合
している血漿蛋白質の先駆物質の間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カル
グラニュリンＢおよびサポニンＢ（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０
から１６、１８から２３および２５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同
じ蛋白質系列に属している、ペプチド配列、あるいは前述した配列のフラグメン
ト、ならびに配列番号が１から２９であるペプチド配列のいずれかと少なくとも
７０％、とりわけ少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９８％同一であるペ
プチド配列の間で選ばれる、少なくと１個の蛋白質に相応している免疫原フラグ
メントを示すことが選択される。このために、ヴェクターによって完全なポリペ
プチドか、それともリガンドおよび／あるいは特異なレセプターと共に反応する
ために選ばれる、ポリペプチドの好ましいあり方を示すことが選択できる。生体
内の脊椎細胞に入り込んでいるポリヌクレオチドよって、遺伝子コードが指定さ
れる免疫原ペプチドを、ＣＭＨ分子のコンテキストで抗原を呈している細胞（Ａ
ＰＣ）においてつくりだし、更に／あるいはこれを分泌させ、つくりあげて、更
に表すことができる。このように生体内で転移するＡＰＣは、生体内で示される
免疫原に対して向けられる免疫反応をもたらしている。ＡＰＣには抗原を捕らえ
る、異なったメカニズムがある。（ａ）その内の１つは、免疫グロブリンのレセ
プター（Ｆｃ）のように膜様レセプターによって、あるいは食細胞の食作用にレ
セプターが介入すると、抗原を細胞内隔室に効果的に送り込むことができる、顆
粒球、単核細胞あるいは大食細胞の表面で使用することができる補体のために、
抗原を捕らえるメカニズムである。（ｂ）他は、液相にある細胞のパイノサイト
ーシスによってＡＰＣに入り込むことであり、これには異なったメカニズムがあ
る。マイクロパイノサイトーシスは即ち、カルトリンで覆われているホールによ
って、小胞（０，１μｍ）を捕らえるメカニズムであり、マクロパイノサイトー
シスは即ち、（サイズが０，５μｍから約６μｍの間にある）大型の小胞を捕ら
えるメカニズムである（サルッスト他、１９９５年、実験医学雑誌 １８２：３
８９‐１００）。マイクロパイノサイトーシスは構成要素となって全ての細胞に
存在しているが、マクロパイノサイトーシスは、例えば大食細胞、樹枝状細胞、
星状細胞、および成長要因によって刺激を受ける上皮細胞のような細胞タイプに
限られている（ラクーシン他、細胞科学雑誌 １９９２年、１０２：８６７‐８
８０）。こうした発明では、マクロパイノサイトーシスができる細胞によって、
前述した事象を実現できる細胞、および好ましくは細胞質で０，５μｍから約６
μｍの間にある高分子を捕らえることができる細胞が求められている。
【０１７７】 独自の実施方法に従って、遺伝子的見地から特に生体内で、細胞毒素の効力が
ある細胞あるいはＴヘルパー・リンパ細胞を、これらが自らの表面に、配列番号
が２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびにｐｅｒｌｅｃａｎ（
パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の先駆物質の間で選ば
れる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサポニンＢ（例えば
、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３および２５から２
９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属しているペプチド配列、
あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１から２９であるペ
プチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％、好まし
くは少なくとも９８％同一であるペプチド配列、ならびにこれらの細胞によって
容易には示されないが、このようなポリペプチドに遺伝子コードを指定する遺伝
子を含んでいる核酸配列の細胞に入り込むことによって、このような細胞を活性
化するプロセスを導入することができる、前述した蛋白質のリガンドに相応して
いるポリペプチドを示すように変えていく。本発明に従って同様に、配列番号が
２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびにｐｅｒｌｅｃａｎ（パ
ールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の先駆物質の間で選ばれ
る、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサポニンＢ（例えば、
配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３および２５から２９
）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属しているペプチド配列、あ
るいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１から２９であるペプ
チド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％、好ましく
は少なくとも９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれ、治療を施す患者のタ
ーゲットになっている細胞の表面に示すことができる蛋白質に対して向けられて
いる抗体の全てあるいはその一部に、遺伝子コードを指定するこうした治療用の
遺伝子を含んでいる核酸の配列、ならびにこれらの細胞毒素の効力がある細胞、
あるいはＴヘルパー・リンパ細胞によって容易には示されないポリペプチドに固
定できる、前述した抗体を選択できる。
【０１７８】 細胞毒素の効力がある細胞によって、大食細胞、星状細胞、Ｔ細胞毒素リンパ
細胞（ＴＣＬ）およびキラー細胞（ＮＫ）、ならびに例えば、ＬＡＫ［リンホカ
イン活性化キラー細胞］のような、これらの誘導体の特徴を示すことが求められ
ている（フェルステーク、１９９２年、今日の免疫学 １３：２４４‐２４７；
ブリッテンド他、１９９６年、キャンサー ７７：１２２６‐１２４３）。‘Ｔ
ヘルパー・リンパ細胞’によって、活性化した後で、免疫反応の効力がある細胞
を活性化させる要因を分泌させることができるＣＤ４の特徴を、特に示すことが
求められている。ポリペプチドおよび特にこれらの細胞の表面に示され、こうし
た細胞を活性化するとこれに関係するレセプターは、特に錯体ＴＣＲの全てある
いはこの一部から、あるいはＣＤ３から、錯体のＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２８、Ｌ
ＦＡ‐１および４‐１ＢＢの全てあるいはこれらの一部（メレロ他、１９９８年
、ヨーロッパ免疫学雑誌 ２８：１１１６‐１１２１）から、ＣＤ４７、ＣＤ２
、ＣＤ１、ＣＤ９、ＣＤ４５、ＣＤ３０およびＣＤ４０から、ＩＬ［インターロ
イキン］‐７、ＩＬ‐４、ＩＬ‐２、ＩＬ‐１５あるいはＧＭ‐ＣＳＦ［顆粒球
・大食細胞コロニー刺激因子］のようなサイトカイン・レセプターの全てあるい
はこれらの一部（フィンケ他、１９９８年、遺伝子治療 ５：３１‐３９）から
、また例えば、ＮＫＡＲ、Ｎｋｐ４９等のようなＮＫ細胞の錯体レセプターの全
てあるいはこの一部（カワノ他、１９９８年、免疫学 ９５：５６９０‐５６９
３；ペッシーノ他、１９９８年、実験医学雑誌 １８８：９５３‐９６０）から
、またＮｋｐ４４から、ならびに例えば、Ｆｃレセプターのような大食細胞レセ
プターの全てあるいはこれらの一部（デオ他、１９９７年、今日の免疫学 １８
：１２７‐１３５）から成っている。
【０１７９】 数多くのツールが、異なった非相同遺伝子および／あるいはヴェクターを細胞
に、特に哺乳類の細胞に送り込むために開発された。これらの技術は２つのカテ
ゴリーに分類することができる。最初のカテゴリーには、顕微注射法、粒子のエ
レクトロポレーションあるいはそのボンバードのような、物理的な技術が含まれ
ている。２番目のカテゴリーは分子細胞生物学の技術を使用することに基づいて
おり、これによって遺伝子は、物質を生体内の細胞に容易に送り込む生物学ヴェ
クターあるいは化学合成ヴェクターによって転移される。今日では、更に効力が
あるヴェクターはウィルス・ヴェクターであり、特にアデノウィルスおよびレト
ロウィルスが挙げられている。これらのウィルスには、原形質膜を通過して、自
らの遺伝子物質が減成されるのを防ぎ、自らのゲノムを細胞核に送り込む、自然
のままの性質がある。これらのウィルスは広範囲に渡って研究がなされて、その
内のいくつかは既に実験的に、接種および免疫治療での人への応用に、あるいは
遺伝子の欠損を補うために用いられている。しかしながら、ウィルスによるこう
したアプローチには、特にこれらウィルス・ゲノムにおける限られたクローニン
グ能力による限界があり、つくりだされるウィルス粒子が、生体および環境にば
ら撒かれるリスク、またレトロウィルスの事例では、宿主細胞に送り込むことに
よって、人為的な突然変異の誘発が現れるリスク、更には、治療中の生体内に強
力な炎症性の免疫反応がもたらされる可能性があり、これによって、注射をする
ことができる回数が限られてくる（マッコイ他、１９９５年、人の遺伝子治療
６：１５５３‐１５６０；ヤン他、１９９６年、免疫 １：４３３‐４２２）。
これらのウィルス・ヴェクターに替わる他のシステムが存在している。例えば、
燐酸カルシウムによる共沈のような、ウィルスによらない方法の使用、ウィルス
・システムを真似ているレセプターの使用（これに関する要約には、コッテンお
よびワグナー、１９９３年、バイオテクノロジーの新しい考え方 ４：７０５‐
７１０を参照）、あるいはポリアミド・アミンのようなポリマーの使用（ヘンス
ラーおよびソカ、１９９３年、生化学 ４：３７２‐３７９）が挙げられている
。ウィルスによらない他の技術は、リポソームの使用に基づいており、蛋白質あ
るいは活性薬品のＡＤＮおよびＡＲＮのような生物学的高分子を送り込むための
自らの効力が、広範囲に渡って科学文献に記述されている。こうした分野で、研
究グループは細胞膜および／あるいは核酸に対して強い親和力がある陽イオン脂
質の使用を提案した。実際に核酸の分子自体は、生体内にあるいくつかの細胞の
原形質膜を通過でき（ＷＯ９０／１１０９２）、効力が特に核酸の多陰イオンの
性質に左右されることが明らかになった。１９８９年（フェルグナー他、ネイチ
ャー ３３７：３８７‐３８８）からは、陽イオン脂質が大きな陰イオン分子を
容易に送り込むために提唱されて、これによって、これらの分子の陰電荷が中和
されて、容易に細胞に入り込むようになっている。別の研究グループは、次のよ
うな陽イオン脂質を開発した。これらはＤＯＴＭＡ（フェルグナー他、１９８７
年、ＰＮＡＳ ８４：７４１３‐７４１７）、ＤＯＧＳあるいはＴｒａｎｓｆｅ
ｃｔａｍTM（ベーア他、１９８９年、ＰＮＡＳ ８６：６９８２‐６９８６）、
ＤＭＲＩＥおよびＤＯＲＩＥ（フェルグナー他、メソッド ５：６７‐７５）、
ＤＣ‐ＣＨＯＬ（カオおよびファン、１９９１年、ＢＢＲＣ １７９：２８０‐
２８５）、ＤＯＴＡＰTM（マクラクラン他、１９９５年、遺伝子治療 ２：６７
４‐６２２）あるいはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅTMであり、他の分子について
は、特許のＷＯ９１１６０２４、ＷＯ９５１４６５１およびＷＯ９７４０５６２
４に記述されている。他の研究グループは、容易に高分子、特に陽イオンの高分
子を細胞に転移する、陽イオンのポリマーを開発した。特許のＷＯ９６／０２６
５５は樹枝状ポリマーの使用について、またＷＯ９６／０２６５５の資料はポリ
エチレン・イミンあるいはポリプロピレン・イミンの使用について、更に、ＵＳ
‐Ａ‐５５９５８９７およびＦＲ ２７１９３１６の資料は共役ポリリジンの使
用について記述している。
【０１８０】 生体内で一定の細胞タイプに対してターゲットになっている転換ができること
を期待しているからには、明らかに使用されるヴェクター自体が、前述したよう
に、《ターゲットになる》ことができなければならない。
【０１８１】 本発明（配列番号が２、４、８、９、１７および２３）、ならびにｐｅｒｌｅ
ｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の先駆物質の
間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサポニンＢ
（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３および２
５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属しているペプチ
ド配列、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１から２９
であるペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％
、好ましくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列で確認される、こうした
蛋白質に対して定義される、こうした治療用の遺伝子を含んでいるヴェクターに
よって、生体の内外で転換される細胞の使用。
【０１８２】 本発明は変質症、および／あるいは神経症、および／あるいは自己免疫症、特
に斑状硬化症を予防して治療するように定められ、少なくとも１個の細胞、特に
容易には抗体をつくりださずに、哺乳類、人あるいは動物の生体に投与すること
ができて、同様に場合によっては予め培養することができる形状をしている、少
なくとも１個の細胞から成っており、前述した細胞が遺伝子的見地から、生体内
で以下のものに遺伝子コードを指定する、少なくとも１個の遺伝子を含んでいる
、少なくとも１つの核酸配列によって生体内で変えられる、薬品成分を調合する
ための生物学的物質に関するものである。
【０１８３】 （ｉ）配列番号が２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびにｐ
ｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の先
駆物質の間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサ
ポニンＢ（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３
および２５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属してい
るペプチド配列、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１
から２９であるペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくと
も８０％、好ましくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれる
、少なくとも１個の蛋白質、ならびに配列番号が１から２９であるペプチド配列
のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくとも８０％、好ましくは少なく
とも９８％同一であるペプチド配列、ならびに全てのフラグメント。
【０１８４】 （ｉｉ）配列番号が２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびに
ｐｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の
先駆物質の間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよび
サポニンＢ（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２
３および２５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属して
いるペプチド配列、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が
１から２９であるペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なく
とも８０％、好ましくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれ
る、少なくとも１個の蛋白質の最初の配列から定義される、少なくとも１個のペ
プチド。
【０１８５】 （ｉｉｉ）少なくともこれらの蛋白質の機能、および／あるいは固定、および
／あるいは表示の全ての抑制分子。
【０１８６】 （ｉｖ）配列番号が２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびに
ｐｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の
先駆物質の間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよび
サポニンＢ（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２
３および２５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属して
いるペプチド配列、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が
１から２９であるペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なく
とも８０％、好ましくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれ
る蛋白質の最初の配列から生まれて、少なくとも１個のＣＭＨＩ糖蛋白質に固定
することができる、少なくとも１個のペプチド。
【０１８７】 （ｖ）配列番号が２、４、８、９、１７および２４である蛋白質、ならびにｐ
ｅｒｌｅｃａｎ（パールカン）およびレチノールに結合している血漿蛋白質の先
駆物質の間で選ばれる、ガングリオシッドＧＭ２、カルグラニュリンＢおよびサ
ポニンＢ（例えば、配列番号が１、３、５から７、１０から１６、１８から２３
および２５から２９）のアクチヴェーター先駆物質の同じ蛋白質系列に属してい
るペプチド配列、あるいは前述した配列のフラグメント、ならびに配列番号が１
から２９であるペプチド配列のいずれかと少なくとも７０％、とりわけ少なくと
も８０％、好ましくは少なくとも９８％同一であるペプチド配列の間で選ばれる
、少なくとも１個の蛋白質に固定することができる、少なくとも全抗体および全
部の抗体。
【０１８８】 特に前述した、ターゲットになっている細胞は、治療を施す哺乳類か、それと
も治療を施す哺乳類とは異なる哺乳類に由来している。後者の事例では、前述し
た、ターゲットになっている細胞は、治療を施す哺乳類と互いに一致している処
置を受けることに注意をしたほうがよい。《哺乳類》によって、人としての哺乳
類が理解される。これらの細胞は細胞系列でつくられており、リンパ細胞、単核
細胞、星状細胞および寡突起神経膠細胞のような、ＣＭＨＩＩ＋あるいはＣＨＭ
ＩＩ＋誘導体である。
【０１８９】 発明は同様に、容易には抗体をつくりださない哺乳類の細胞に適切な方法で入
り込み、少なくとも１個の核酸配列が少なくとも１個のこうした治療用の遺伝子
を含み、成分によって前述した細胞で前述した遺伝子が確実に示されて、前述し
たこのような治療用の遺伝子が、前述したように、生体内で分子あるいは分子の
フラグメントに、遺伝子コードを指定する核酸配列を含んでいることを特徴とす
る、変えられた細胞、および前述したような細胞をつくりだす方法に関するもの
である。特に発明は原核生物の細胞、酵母の細胞および動物の細胞、特に少なく
とも１個のヌクレオチド配列、および／あるいは前述したようなヴェクターによ
って転換される哺乳類の細胞に関するものである。
【０１９０】 独自の実施方法に基づくと、患者あるいは異品種の細胞（樹枝状細胞、大食細
胞、星状細胞、Ｔリンパ細胞ＣＤ４＋、Ｔリンパ細胞ＣＤ８＋等）が、ターゲッ
トになっているポリペプチドの精製と接触するようにおかれており、こうしたポ
リペプチドがＣＨＭＩおよび／あるいはＣＨＭＩＩの分子に結合している細胞の
表面の内部に移動して、そこでつくりあげられ、表されるので、ペプチドに対す
る特異な免疫反応をもたらすようになる。続いて《活性化》細胞が患者に投与さ
れて、そこでは活性化細胞が抗原の特異な免疫反応をもたらそうとする（免疫反
応の自然な方法が使用されるが、抗原を呈している細胞が現れるようにコントロ
ールされる）。
【０１９１】 独自の実施方法に基づくと、抗原を呈している細胞（樹枝状細胞、大食細胞、
星状細胞等）が生体内で変えられて、抗原を転換される細胞で示し、抗原がＣＨ
ＭＩおよび／あるいはＣＨＭＩＩの分子に結合して、細胞の表面に現れようとし
、患者に送り込まれて、そこでは免疫反応が完全にターゲットになるように変え
られる細胞が投与される。
【０１９２】 接種によるアプローチは全て必ずしも満足のいくものではなく、例えば、免疫
が顕著であるエピトープとは逆に、あるいは大きな変化がある抗原に対して向け
られている、限られた免疫反応になっている。同様に、抗原がＣＭＨシステムの
糖蛋白質によって、細胞の表面に正しく現れないと、治療中の患者でこうした抗
蛋白質の免疫性がうまく発揮されることはない。こうした問題を切り抜けるため
に、何人かの著者は接種によるこうしたプロセスの枠内で、特にＴ細胞毒素リン
パ細胞によって認めることができるペプチドの割合に相応している抗原の最小フ
ラグメントを選択して、これらを細胞内で示し、ＣＨＭＩの分子に結合させて、
細胞の表面に表し、治療中の患者に、完全にターゲットになっている免疫反応を
導くことを提案した（トース他、１９９７年、ＰＮＡＳ ９４：１４６６０‐１
４６６５）。特に、ワクチン・ウィルスに入り込んでいるミニ遺伝子から示され
ている、（アミノ酸が３個から約１３個である）非常に小さなサイズのエピトー
プが、細胞タイプの免疫を導くことができるのが明らかになった。更に、いくつ
かのミニ遺伝子は、同じヴェクターから結合してかたちで示されることがあるの
も明らかになった（こうした構造は、《ｓｔｒｉｎｇ ｏｆ ｂｅａｄｓ［小球
列］》と呼ばれている）。こうした構造は、主に同時作用ＣＴＬ［細胞障害性Ｔ
リンパ球］タイプの免疫反応を示している（ウィットン他、１９９３年、ウィル
ス学雑誌６７：３４８‐３５２）。
【０１９３】 細胞および抗原フラグメントに関するプロトコル：
【０１９４】 抗原フラグメントをＣＭＨＩ細胞によって表すことは、（アミノ酸が約７‐１
５個である）非常に短いサイズの抗原ペプチドが、免疫反応が最後に向けられる
、更に複雑なポリペプチドの減成によってつくりだされる進行過程で確認される
、細胞内のプロセスに基づいている（検討には、グルトトロプ他、１９９６年、
今日の免疫学 １７：４２９‐４３５）。続いてこれらの短いペプチドは、ＣＭ
Ｈ１あるいはＣＭＨＩＩの分子に結合して、蛋白質錯体を形成し、これが細胞の
表面に送られて、前述したペプチドをそれぞれ循環Ｔ細胞毒素リンパ細胞あるい
は循環Ｔヘルパー・リンパ細胞に表している。更に、抗原ペプチドに対するＣＭ
Ｈ１あるいはＣＭＨＩＩの分子の特異性は、ＣＭＨ１あるいはＣＭＨＩＩの分子
（例えば、ＣＨＭＩに対してＨＬＡ［組織適合抗原］‐Ａ、ＨＬＡ‐Ｂ等）、お
よび著しい対立遺伝子（例えば、ＣＭＨＩに対してＨＬＡ‐Ａ２、ＨＬＡ‐Ａ３
、ＨＬＡ‐Ａ１１等）に応じて異なっていることに注意したほうがよい。動物の
同じ種の中では、ある個体から他の個体へ、ＣＭＨシステムの分子に遺伝子コー
ドを指定する遺伝子が大きく異なっている（この問題については、ジョージ他、
１９９５年、今日の免疫学 １６：２０９‐２１２）。
【０１９５】 独自の実施方法に基づくと、樹枝状細胞、大食細胞、星状細胞、Ｔリンパ細胞
ＣＤ４＋およびＴリンパ細胞ＣＤ＋のような細胞が、自らの表面にターゲットに
なっているペプチドの特異な抗体を示すように変えられている。ペプチドは細胞
の表面に示される抗体によって中和される。これらの細胞は特に免疫性があり、
特に患者のものであり、特に細胞毒素があり、変えられて、ターゲットになって
いるポリペプチドの特異な抗体の全て、あるいはその一部を示している。
【０１９６】 単核細胞の抹消血液からの分離：
【０１９７】 １９６８年にボイウムは、濃度の変化に従った血液の遠心分離によって、単核
細胞（リンパ細胞および単球）を効率よく（理論的な効率は５０％で、これは即
ち、１ｍｌの血液あたり１０6個の細胞に相当する）分離することができる、迅
速な技術について記述している。無菌状態でヘパリン管に採取される５０ｌｍの
抹消血液は、２０分間１５０ｇを２０℃で遠心分離したものである。回収される
細胞は２種類の抹消血液の量で、最初に無菌ＰＢＳ［燐酸緩衝食塩水］によって
希釈される。１０ｍｌのこうした懸濁液は、３ｍｌのフィコール‐ハイパック溶
液（リンパ細胞分離媒質、フロー）に沈殿させる。２０分間４００ｇを２０℃で
減速抑制せずに遠心分離した後で、単核細胞はフィコールＰＢＳの界面に、緻密
な層を成して、乳白色を帯びて沈殿して、ほぼ全ての赤血球および多核球が管の
底に沈殿する。単核細胞は無菌ＰＢＳで回収して、洗浄する。
【０１９８】 抗原を呈している細胞による抗原の内部移動：
【０１９９】 抗原を呈している細胞の先行処置。抗原を呈している細胞を、予め０，５％（
ｐ／ｖ）のＰＢＳ‐ＢＳＡ緩衝液で洗浄してから数え上げ、更にこれらの細胞を
異なる減退抑制剤が存在している間に、最後に１０μＭから１０ｍＭのＤＴＮＢ
（５，５‘‐ジチオ‐ビス‐２‐ニトロ安息香酸）あるいはＮＥＭ（Ｎ‐エチル
・マレイン・イミド）を含有している０．５％のＰＢＳ‐ＢＳＡによって、前以
って３回保温する。これに引き続いて、抗原を細胞の表面に固定する、あるいは
抗原を内部に移動させる段階は、同様に異なる抑制剤濃度によっておこなわれる
。
【０２００】 抗原を呈している細胞による抗原の内部移動についてのプロトコル：
【０２０１】 ８．１０6個の細胞を、ヨード１２５（１μｇ）の放射能によってマークされ
る蛋白質の飽和量がある間に、７０μｌの微小ホールの内部に移動させる。１時
間４℃で撹拌しながら保温した後で、抗原を細胞の表面に固定する。細胞懸濁液
を２回ＰＢＳ‐ＢＳＡによって洗浄して、細胞残滓を７０μｌの緩衝液によって
再び採取し、３７℃で２時間までの異なる時間で保温する。細胞および浮遊物を
８００ｇ、４℃で５分間遠心分離して分離させる。更に長い保温時間のために、
抗原を細胞の表面に前以って固定させる予備段階を取り止める。細胞をＲＰＭＩ
‐１０％ＳＶＦ媒質によって、２０ｍＭのヘペスが存在している間に、１ｍｌあ
たり１０6個の細胞で希釈する。細胞を過剰の抗原が存在している間に、異なっ
た時間で３７℃で保温する（１μｇの分子／５．１０7個の単核細胞／大食細胞
あるいは／１０8個のＢ‐ＥＢＶ細胞）。
【０２０２】 本発明の枠内で定義されている治療薬は、斑状硬化症のような変質症、および
／あるいは神経症、および／あるいは自己免疫症を、単独であるいは他と組み合
わせて予防して治療するために使用される。こうした治療薬は同様に、試験管内
あるいは生体内で自らの効力を評価するためにも使用することができる。
【０２０３】 人への治療薬の投与：
【０２０４】 発明に従った生物学的物質は、特に注射ができるかたちで生体内に投与するこ
とができる。同様に、注射器あるいはこれと同じ他の全ての方法を用いた表皮注
射、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射および脳内注射が考えられる。経口投
与による他の実施方法あるいは他の全ての方法が、完全に専門家に知られており
、本発明に適用することができる。投与は１回だけの服用、あるいは服用を続け
て、あるいは一定の間隔期間の後で１回あるいは数回おこなうことができる。更
に相応しい投与方法および適量は、例えば治療を施す個人あるいは病気、発病時
期および／あるいは病気の進展状態、あるいは更に転移させる核酸、および／あ
るいは蛋白質、および／あるいはペプチド、および／あるいは分子、および／あ
るいは細胞、またあるいは器官／組織のパラメーターに従って異なっている。
【０２０５】 本発明で挙げられている哺乳類の治療に使用するために、好ましくは人あるい
は動物への投与に薬理学的見地から受け入れられる媒体と結合している、前述し
たような生物学的物質を含有している薬品成分を処方することができる。このよ
うな媒体の使用方法については、文献に記述されている（例えば、リミントン製
薬科学第１６版１９８０年、マーク出版社を参照）。薬理学的見地から受け入れ
られるこのような媒体は、スクロース溶液のように、主に等張、低張あるいは弱
い高張を示して、イオン強度は比較的低くなっている。更に前述した成分は、発
熱剤および分散媒質を含んでいない、無菌水のような水性、あるいは部分的に水
性である溶媒および媒体を含有していることがある。これらの薬品成分のｐＨ値
は、従来の技術に従って、適切に調整されて、和らげられている。
【０２０６】 （発明を実施するための最良の形態）
【０２０７】 実施例１：尿の捕集およびグループ 先験的に神経疾患または自己免疫を有していない健常個体（ＳＥＰ：マイナス
）から、異なる容積の尿の試料を採取した。ネズミの星芽細胞に対する各試料の
毒性を、ＭＴＴテストを使用して、インビトロでテストした。総量２０リッタの
尿グループを構成した（グループのＳＥＰ：マイナス）。併行して、多発硬化症
に罹った疾病段階の異なる個体（ＳＥＰ：プラス）から、異なる容積の尿の試料
を採取した。ネズミの星芽細胞に対する各試料の毒性を、ＭＴＴテストを使用し
て、インビトロでテストした。総量８０リッタの尿グループを構成した（グルー
プのＳＥＰ：プラス）。
【０２０８】 実施例２：尿タンパク質の精製 高濃度のタンパク質を得て、高分子量のタンパク質をできる限り除去するため
、実施例１で捕集してテストしたＳＥＰプラスおよびＳＥＰマイナスの尿グルー
プを精製した。
【０２０９】 沈殿：ＳＥＰプラスおよびＳＥＰマイナスの尿グループについて、硫酸アンモ
ニウム（Ｐｒｏｌａｂｏ‐参照記号２１３３３３６５）による沈殿を実施した。
尿４０％について濃度６０％の飽和硫酸アンモニウム、即ち、尿１リッタについ
て３９０ｇの硫酸アンモニウムを使用した。沈殿改善のため、各グループを、２
リッタフラスコに１，８リッタづつ分割した。沈殿は、ゆっくり撹拌しながら、
室温において２×８ｈ実施した。尿グループを３０００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心
分離した後、得られた沈渣を、ＣａＣｌ2１ｍＭおよび尿素０，２５Ｍを含むト
リス緩衝液２０ｍＭ中に回収した。次いで、混合物を３０００ｒｐｍで１０ｍｉ
ｎ遠心分離した。上澄液は、濃縮タンパク質を含む。上澄液は、次工程のために
直ちに使用するか、次工程を連続的に実施できない場合は、冷凍する。
【０２１０】 イオン交換クロマトグラフィー：次いで、タンパク質を含む溶液を、ゲルＤＥ
ＡＥファースト・フロー（ＰＨＡＲＭＭＡＣＩＡから市販されている）上を通過
させた。この工程は、ゲルを充填したカラムＰＨＡＲＭＭＡＣＩＡにおいて低圧
で実施した。流量を調節できる蠕動ポンプによって、カラムに緩衝液を供給した
。カラムの平衡緩衝液は、ｐＨ７のトリス緩衝液２０ｍＭである。沈澱上澄液に
対応し極めて多量の塩を含む分画を、カラムにおける沈澱前に、上記緩衝液に対
して透析した。塩勾配による溶離によって、タンパク質を回収できる。溶離勾配
は、カラムの平衡緩衝液中のＮａＣｌ１００，２００，３００，５００ｍＭで段
階的に構成した。溶離分画をＭＴＴテストによってテストし、プラスの分画、即
ち、２００ｍＭＮａＣｌで溶離した分画のみを保存した。この分画は、直ちに処
理できるか、凍結乾燥状態で保存できる。
【０２１１】 精製：被溶離タンパク質の大きさおよび形状の差に依拠する立体排除クロマト
グラフィーを使用した。２００ｍＭＮａＣｌ溶離に対応する分画をカラムに供給
した。溶離中、低分子量のタンパク質は、留保され、従って、大きい分子よりも
遥かにゆっくり溶離される。精製は、径２１，５ｍｍおよび長さ３００ｍｍのカ
ラムＴｏｓｏＨａａｓ ＴＳＫ ＰｒｅｐＧ３０００ＳＷを有するＨＰＬＣにお
いて実施した。分子量の排除限界は、５０００００ダルトンである。使用した溶
離緩衝液は、１００ｍＭホスフェートおよび１００ｍＭ硫酸ナトリウムであり、
ｐＨは６，８である。タンパク質混合物の分離は、６０ｍｉｎで実施した。分子
量１５‐２００００ダルトンに対応する分画のみを保存した。この分画は、０，
２ｍＭ ＣａＣｌ2を含むｐＨ７，２の２０ｍＭトリス緩衝液中で透析し、次い
で、凍結乾燥した。
【０２１２】 各工程において、次工程のために、有意の毒性を有する分画のみを留保した。
タンパク質の毒性の監視は、各工程において、ＭＴＴテストによって実施した。
実施例３に記載の補足精製工程のために、有意の毒性を有する分画のみを留保し
た。
【０２１３】 実施例３：逆相クロマトグラフィーによる尿タンパク質の補足精製 実施例２に記載の精製後に得られたＳＥＰ患者（ＳＥＰプラスのグループ）お
よび非ＳＥＰ患者（ＳＥＰマイナスのグループ）の尿グループを蒸留水で回収し
、次いで、約１３０‐１４０μｇ／ｍｌの最終濃度を得るため、０，２％ＴＦＡ
／１０％アセトニトリル溶液で希釈した。
【０２１４】 逆相Ｃ８ＨＰＬＣによる分離は、バーキン・エルマー社から市販されているＢ
ｒｏｗｎｌｅｅ Ａｑｕａｐｏｒｅカラム（商品名）（カラム特性：３００オン
グストローム／７μｍ／（１００×４，６）ｍｍ）で実施した。プラスのグルー
プおよびマイナスのグループについて、それぞれ、別個の２つのカラムを使用し
た。注入は、２５０μｌの多重インジェクタによって実施した。タンパク質を、
流量０，５ｍｌ／ｍｉｎにおいて、緩衝液Ｂの５％‐１５％の線形勾配で５ｍｉ
ｎ溶離し、次いで、緩衝液Ｂの１５％‐１００％の線形勾配で９５ｍｉｎ溶離し
た。使用した分離緩衝液Ａ，Ｂは、それぞれ、０，１％ＴＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ
ｎｏ．２８９０４）／水ＭｉｌｌｉＱ緩衝液および０，０９％ＴＦＡ／８０％ア
セトニトリル緩衝液（Ｂａｒｋｅｒ）である。検知は、２０５ｎｍおよび２８０
ｎｍのＵＶ吸収の測定によって実施した。興味あるゾーンの分画の１，５ｍｌ，
０，５‐１ｍｌを収集した。カルボガラスに収集した分画を凍結した。
【０２１５】 収集した分画を、次いで、ｓｐｅｅｄ ｖａｃ（スピード・バック）で乾燥し
、０，１％ＴＦＡ／３０％アセトニトリル１００μｌ中に回収した。分画２０μ
ｌを５００μｌエッペンドルフに移し、乾燥し、１００μｌの水ＭｉｌｌｉＱで
２回洗浄し、次いで、改めて乾燥した。
【０２１６】 溶離後に回収した各分画に含まれるタンパク質の毒性をＭＴＴテストによって
測定した。有意の毒性を有する分画２１のみを留保した。この分画のナンバーは
、本実施例に示した溶離条件に依存する溶離順序に対応する。
【０２１７】 実施例４：ＨＰＬＣのＳＤＳ‐ＴＲＩＣＩＮＥゲルによる分離によって得られ
たタンパク質の分析 実施例３に記載の如くＨＰＬＣによって調製され、ＳＥＰプラスのグループの
２０の注入から得られた分画２１の収集グループを、１０ヶのピットにあらかじ
め注入した厚さ１ｍｍの１６％ＳＤＳ‐ＴＲＩＣＩＮＥゲル（Ｎｏｖｅｘ社から
市販されている）に供給した。ゲルの使用条件は、メーカ推奨の条件に対応する
。試料を、１回濃縮した試料緩衝液７５μｌ（ＳＤＳ‐ＴＲＩＣＩＮＥ Ｎｏ．
ＬＣ１６７６，２回濃縮物１ｍｌ＋水で１／２に希釈したβ‐メルカプトエタノ
ール（Ｐｉｅｒｃｅ）５０μｌ）中に回収し、試料２５μｌをゲルで３回処理し
た。ＳＥＰマイナスのグループの６の注入から得られた分画２１の収集グループ
を、ＳＥＰプラスのグループについて記載した条件と同一の条件においてゲルで
処理した。２つのゲル上の移動は、同一の移動キュベット（ＸＣＥＬＬ ＩＩ
ＮＯＶＥＸ（商品名））において一定電圧１２５ｍＶで２ｈ、並行して実施した
。ガラス容器内にキュベットを設置した。可逆のネガティブ染色を達成できるよ
う、移動直後に、亜鉛／イミダゾール（ＢＩＯＲＡＤ社から市販されている染色
キット１６１‐０４４０）による染色によって染色した。タンパク質バンドは、
光学的バックにおいて半透明である。
【０２１８】 実施例５：トリプシンによるゲルバンドの消化 分画２１の沈殿物に認められるタンパク質バンドを切出して、トリプシンによ
って分解した。
【０２１９】 ゲルバンドをメスで１ｍｍの切片に切出し、エッペンドルフ管に移した。ゲル
片を落下させるためエッペンドルフを遠心分離ピークで処理し、遠心分離後、洗
浄緩衝液（１００ｍＭ ＮＨ4ＣＯ3／５０％ＣＨ3）１００μｌをゲル片に加え
た。室温における３０ｍｉｎの消化後、２０μｌの分画から上澄液を除去し、改
めて２回の洗浄工程を実施した。エッペンドルフをスピード・バックで５ｍｉｎ
乾燥した。トリプシン２０μｇ（段階的改質グレードＰＲＯＭＥＧＡ Ｖ５１１
１）を消化緩衝液（５ｍＭトリス，ｐＨ８）２００μｌに回収し、室温において
間欠的に撹拌しながら３０ｍｉｎ溶解し、再懸濁させたトリプシン２０‐３０μ
ｌをゲル片に加えた。エッペンドルフを遠心分離し、２８℃の室内に一晩、保存
した。消化後、ゲルバンドを重量測定に直ちに使用できるか、最終用途のために
保管できる。
【０２２０】 実施例６：ＣＮＢＲによるゲルバンドの消化 酵素分裂作用（特に、実施例５に記載の如きトリプシンの作用）に耐えるタン
パク質の場合、１６ｋＤ‐２０ｋＤの範囲のバンドをＣＮＢＲによって処理した
。トリプシンによる消化に既に使用したゲルバンドをスピード・バックで５ー１
０ｍｉｎ乾燥した。
【０２２１】 ２００ｍｇ／ｍｌのＣＮＢＲ（ＦＵＬＫＡ）溶液を７０％ギ酸中で調製した。
ゲル片の再水化のめ、この溶液２０μｌを使用した。暗室で室温において２０ｈ
反応させた。０，１％ＴＦＡ／６０％アセトニトリルで３０ｍｉｎ，３回、ペプ
チドを抽出した。抽出溶液を統合し、２０μｌに濃縮した。０，１％ＴＦＡ／水
中で上記試料を５倍に希釈した。分離条件は、トリプシンによるペプチドの消化
について記載した条件と同一とした。
【０２２２】 実施例７：ＭＡＬＤＩ‐ＴＯＦ分光による分析 抽出緩衝液（２％ＴＦＡ／５０％アセトニトリル）３０μｌを試料に加えた。
分析すべきエッペンドルフを５ｍｉｎ遠心分離し、次いで、５ｍｉｎ音波処理し
、更に、１ｍｉｎ遠心分離した。
【０２２３】 不銹鋼製ディスク上に、マトリックス（アセトン中の飽和状態のα‐シアノ‐
４‐ヒドロキシトランスケイ皮酸）０，５μｌを１４箇所に塗布した。均一な微
細な微結晶層が得られた。２％ＴＦＡ／水の溶液０，５μｌを、上記下層の上に
１４箇所に塗布し、次いで、被分析試料０，５μｌを加えた。かくして形成され
た液滴に、５０％アセトニトリル／水に溶解したα‐シアノ‐４‐ヒドロキシト
ランスケイ皮酸飽和溶液０，５μｌを加えた。室温において３０ｍｉｎ乾燥した
後、沈殿結晶を水２μｌで洗浄し、直ちに、空気ブローによって排気した。リフ
レクトロンを備えた質量分析計ＢＲＵＫＥＲ ＢＩＦＬＥＸ（商品名）によって
、すべてのスペクトル測定を行った。サンドウィッチ・マトリックス試料中に存
在するペプチド群をより良く表現する質量スペクトルを得るため、測定値（沈着
体群に対して９０‐１２０のレーザショット）を集積した。各沈着体について、
１００ｐｐｍよりも小さい測定精度を使用できるよう、トリプシンの自己消化ペ
プチドによる校正を行った。
【０２２４】 ＭＳ‐ＦＩＴ ＰＲＯＴＥＩＮＰＲＯＳＰＥＣＴＯＲ（ｈｔｔｐ：／／ｐｒｏ
ｓｐｅｃｔｏｒ．ｕｃｓｆ．ｅｄｕ）において、データバンクの検討を行った。
上記検討において使用した共通のパラメータは、（１）データベース：ＮＣＢＩ
ｎｒ，（２）１００‐５０ｐｐｍの公差，（３）未修飾のシステエイン，（４）
酸化可能なメチオニン，（５）分子量範囲：１０００‐１０００００ダルトン，
（６）無視できる３つ以下の切断サイトである。
【０２２５】 実施例８：消化ペプチドのＮ‐末端のシークエンシング （i）ＨＰＬＣによる消化ペプチドの抽出および分離 消化全体に関する質量測定後、音波処理浴中で、０，１％ＴＦＡ／６０％アセ
トニトリルで３０ｍｉｎ間、３回、ペプチド残渣を抽出した。抽出溶液を統合し
、２０μｌになるまでスピード・バックで乾燥した。８０μｌの緩衝液Ａ（０，
１％ＴＦＡ／水）中で希釈後、トリプシンで消化されたゲルバンド抽出体をカラ
ムＣ１８／ＭＺ‐Ｖｙｄａｃ／（１２５X１，６）ｍｍ／５μｍに注入した。１
５０μｌ／ｍｉｎの流量で且つ緩衝液Ｂ（０，０９％ＴＦＡ／８０％アセトニト
リル）５％から緩衝液Ｂ４０％の勾配で４０ｍｉｎ、次いで、４０％緩衝液Ｂか
ら緩衝液Ｂ１００％の勾配で１０ｍｉｎ、ペプチドの溶離を行った。検知は、２
０５ｎｍにおけるＵＶ吸収の測定によって行った。５００μｌエッペンドルフ管
でピーク収集を行った。分画をガラス上に保存し、ＳＥＰプラスのグループ２１
の１８‐２０ｋＤバンドについて、ＭＡＬＤＩ‐ＴＯＦ質量分析計で分析した。
【０２２６】 （ii）Ｎ‐末端のシークエンシング 唯一の質量ピークにのみ対応する分画を、シークエンサー（モデル４７７Ａ
バーキンエルマー／Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）においてＥｄｍａｎ
の分解によって分析した。シークエンシングの条件は、設計者が記載している条
件とした。試料の沈着のためマイクロカートリッジを使用し、ＰＴＨアミノ酸を
ＨＰＬＣオンライン・システム（モデル１２０Ａ バーキンエルマー／Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で同定した。シークエンシングすべき分画の沈着
は、１５μｌの複数の沈着によって行い、中間で乾燥を行った。ペプチドを含む
管を８５％ギ酸（ＢＡＫＥＲ）１５μｌで洗浄した。アミノ酸のシークエンスは
、常に、測定した質量に対応する。同定された主タンパク質に対応しない質量を
有するペプチドを優先的にシークエンシングした。かくして、１つのゲルバンド
について３つまでのタンパク質を同定できた。
【０２２７】 実施例９：結果および検討 ＳＥＰマイナスの対照グループおよびＳＥＰプラスのグループの逆相ＨＰＬＣ
後、各溶離分画の毒性をＭＴＴテストを使用して測定した。ＳＥＰプラスのグル
ープの分画２１のみが、インビトロで毒性を示した。ＳＥＰプラスの対照グルー
プの分画２１は、全く毒性を示さなかった。特許出願ＷＯ９８／１１４３９にネ
ズミの星芽細胞について記載の如く、ＳＥＰプラスのグループの分画２１の毒性
をインビトロでＦＡＣＳによって確認した。
【０２２８】 １６％ＳＤＳ‐ＴＲＩＣＩＮＥで分離後、亜鉛／イミダゾールによるゲル染色
によってＳＥＰマイナスの対照グループおよびＳＥＰプラスのグループの分画２
１のタンパク質含量を観察した。見かけ分子量の大きいタンパク質が、２つの分
画に認められた。他方、ＳＥＰプラスのグループの分画２１にのみ、見かけ分子
量の小さい５種のバンドが認められた（バンド８，１４，１８および２０ｋＤ）
。各バンドには、少なくとも１つのタンパク質および天然タンパク質に近い見か
け分子量を有する上記タンパク質のバリエーションが対応する。上記シークエン
スバリエーションは、天然シークエンスに対して少なくとも７０％（好ましくは
、少なくとも８０％、有利には少なくとも９８％）の相同性または同一性を有す
る。
【０２２９】 次いで、ＳＥＰプラスのグループの分画２１の問題のタンパク質を質量分析計
および／またはシークエンシングおよびデータバンクにおける相同性追跡によっ
て分析した。結果は、ＳＥＰプラスのグループの分画２１中の２２と５ｋＤとの
間を移動する５つのタンパク質バンドおよび上記タンパク質のバリエーションの
存在を示した。
【０２３０】 上記タンパク質は、配列番号２の識別子において同定された完全なタンパク質
シークエンスのアミノ酸３４６４から始まりアミノ酸３７０７で終わるＰｅｒｌ
ｅｃａｎのＣ末端フラグメント、配列番号４で与えられるシークエンスを有する
レチノール結合ブラズマタンパク質の前駆体、配列番号８で特定されるガングリ
オシドＧＭ２の活性化物質の前駆体，配列番号１７で特定されるカルグラヌリン
Ｂおよび配列番号２４で表されるサポシンＢである。上記の如く、上記タンパク
質の相同体またはバリエーションは、同じく、シークエンシングによって同定し
た。上記の相同タンパク質シークエンスまたはバリエーションのシークエンスは
、上記タンパク質のコーディング遺伝子のレベルにおける突然変異生成物である
。例えば、配列番号９は、ガングリオシドＧＭ２の活性化物質の前駆体の配列番
号８に対して９９％の相同性または同一性を有し、アミノ酸３４６４から始まり
アミノ酸３７０７で終わる配列番号９のフラグメントは、配列番号８で特定され
る天然タンパク質の対応するフラグメントに対して９８，８８％の相同性または
同一性を有する。
【０２３１】 実施例１０：尿試料中のタンパク質の明示 ＳＥＰマイナスの個体およびＳＥＰプラスの個体の尿試料を採取した。上記の
プロトコルにもとづき、これらの尿試料を精製した。最終溶離分画２１を質量分
析計で別個に分析した。各尿試料に対応する各分画の質量プロフィルを、先行例
で特定されたタンパク質について得られた質量プロフィルと比較した。結果から
、ＳＥＰプラスの患者の尿試料について、質量は、（i）ＰｅｒｌｅｃａｎのＣ
末端フラグメント，（ii）ガングリオシドＧＭ２の活性化タンパク質の前駆体，
（iii）カルグラヌリンＢおよび（iv）先に特定されたサポシンＢの分子に対応
する。他方、上記質量の何れも、ＳＥＰマイナスの個体の尿試料の分析後に得ら
れた質量プロフィルには認められなかった。上記方法は、診断のテストに使用で
きる。
【０２３２】 実施例１１：ウエスタンブロット法によるテスト 実施例２に記載の如く、粗のまたは精製ずみの尿の各種分画に対して、ウエス
タンブロット法を実施した。健常個体および多発硬化症に罹患した患者の尿試料
を並行してテストした。電界の作用下で分子量に依存して各種タンパク質を分離
できる電気泳動ゲルで試料を処理した。タンパク質をゲルから膜に移行した後、
ウエスタンブロット法を実施した。移行したタンパク質を採取するため、膜に飽
和緩衝液を飽和させ、次いで、アルカリ性ホスファターゼで直接にマーキングし
た抗体とともに培養した。使用した抗体は、アンチカルグラヌリン抗体である（
ネズミのモノクロナール抗体，Ｖａｌｂｉｏｔｅｃｈ社から市販されているクロ
ーンＣＦ１４５サブタイプＩｇＧ２ｂ：参照記号ＭＡＳ６９６ｐ ｌｏｔＰＣ９
６Ｇ６９６）。酵素基体は、３，３’‐（１，１’‐ビフェニル）‐４，４’ジ
アゾニウムの二塩化物であり、バンド採取および抗体に結合されたタンパク質の
可視化のために、２‐ナフタレニルホウ酸ナトリウム（β Ｎａｐｈｔｙｌ ａ
ｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｓｉｇｍａ 参照記号Ｎ７３７５およびｏ ｄｉ
ａｎｉｓｉｎｅ Ｔｅｔｒａｚｏｔｉｚｅｄ Ｄ３５０２なる名称で市販されて
いる）を加えた。見かけ分子量１４０００の分子を、ＳＥＰに罹患したシグナル
が比較的強い患者の精製ずみ尿から採取した。このタンパク質は、カルグラヌリ
ンＢ（見かけ分子量：１４ｋＤ）に対応する。他方、健常個体の尿からは、何ら
のシグナルも認められなかった。この観察から、ＳＥＰに罹患した患者の尿中の
上記の特殊なタンパク質の存在が確認され、タンパク質を識別する抗体を使用す
る検知法の使用が確認された。
【０２３３】 実施例１２：モノクロナール抗体の調製 腹水からのモノクロナール抗体の調製の場合、ハイブリドーマとハツカネズミ
の生成物との間のＨ‐２システムの両立性が必要である。腹水生成のため、生後
６週間の２０匹のメスハツカネズミの腹膜キャビティに、Ｐｒｉｓｔａｎ（２‐
６‐１０‐１４‐テトラメチルペンタデカン酸）０，５ｍｌを注入した（Ｐｏｒ
ｔｅｒら，１９７２）。７日‐１０日後以内に、無菌緩衝液（０，１４５Ｍ Ｎ
ａＣｌ，１０ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4，２，７ｍＭＫＣｌ２，７ｍＭ，１，５ｍＭ
ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ７，４））０，５ｍｌに希釈したハイブリドーマ５・１０6‐
１０・１０6を腹膜を介して注入した。腹水は、１‐２週間以内に現れた。次い
で、腹膜切開後、注射器で腹膜キャビティ内に存在する腹水の液体を回収した。
回収した液体を、室温において３０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離し、脂肪除去の
ためガーゼで濾過し、次いで、その容積の１／２０の１Ｍ トリスＨＣｌ（ｐＨ
８，０）を添加して緩衝状態とした。この方法にもとづき、ハイブリドーマ培養
によって得られた量の１０倍の量の抗体を得ることができる。
【０２３４】 腹水の液体中に存在する免疫グロブリンを塩（硫酸アンモニウムまたは硫酸ナ
トリウム）で塩析した。腹水の液体を４０％硫酸アンモニウムによって沈殿させ
た。低温に２０ｍｉｎ保持した後、４℃において、溶液を８０００ｇで１５ｍｉ
ｎ遠心分離した。沈殿物を洗浄し、低温で４０％硫酸アンモニウム溶液中に再懸
濁させ、次いで、改めて遠心分離した。ＩｇＧに富んだ新しい沈殿物を緩衝液Ｐ
ＢＳに溶解し、緩衝液（２５ｍＭ トリスＨＣｌ，１５０ｍＭ ＮａＣｌ；ｐＨ
７，４）に対して一晩、透析した。並行して、アガロース・タンパク質Ａ（また
はタンパク質Ｇ）カラム（冷凍乾燥した形で市販されている，Ｐｉｅｒｅ）を、
緩衝液（２５ｍＭ トリスＨＣｌ，１５０ｍＭ ＮａＣｌ；ｐＨ７，４）によっ
て強力に洗浄した。ＩｇＧに富む溶液をカラムで処理し、次いで、カラムを洗浄
した。カラムに捕獲されたＩｇＧを酸性ｐＨ（グリシン２００ｍＭ，ｐＨ２，８
）において溶離した。溶離した分画を塩基性の１Ｍトリス（ｐＨ１０，５）で中
和した。回収した各分画の免疫グロブリンの含量を、２８０ｎｍにおける吸収を
読むことによって定量した（ｅ １％，１ｃｍ＝１４．０，Ｐｒａｈｌら，１９
６８）。高濃度の分画を収集した。収集したＩｇＧの純度を、ＳＤＳの存在下で
アクリルアミドゲルにおける電気泳動によって分析した。精製したＩｇＧを、緩
衝液（２５ｍＭトリスＨＣｌ，１５０ｍＭ ＮａＣｌ；ｐＨ７，４）に対して一
晩、透析し、無菌状態で濾過し、分割し、‐２０℃に保存した。その最終濃度を
、２８０ｎｍにおける吸収の読取によってまたはマイクロＢＣＡ検量によって測
定した。免疫原性ペプチド配列番号５８，配列番号５４，ＳＥＱＩＤ Ｎｏ．５
５，配列番号５６，配列番号５７，配列番号５８，配列番号５９および配列番号
６５を、上記のプロトコルにもとづき、モノクロナール抗体の調製に使用した。
しかしながら、モノクロナール抗体の調製のために、例えば、Ｋｏｈｌｅｒらに
よっておよびＧａｌｆｒｅらによって記載された既に引用した技術またはその誘
導技術から、他のプロトコルを決定することは、当業者の能力の範囲内にある。
【０２３５】 組換えタンパク質、ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体の調製
【０２３６】 組換えタンパク質： 本研究の基準範囲の構成のために使用した組換えタンパク質ＧＭ２ＡＰ（ＳＥ
Ｑ ＩＤＮＯ：７３）およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ（ＳＥＱ ＩＤＮＯ：７４）
を原核生物系から調製し、当業者に公知の方法およびプロトコルを使用して出願
人の研究室において調製したこれら２つのタンパク質のクローンから精製した。 アンチＧＭ２ＡＰ抗体またはアンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ抗体： 研究実施のために使用したアンチＧＭ２ＡＰ抗体またはアンチＳａｐｏｃｉｎ
ｅ Ｂ抗体は、出願人の研究室で調製するか、好意的に提供を受けた。研究のた
め、アンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリクロナール抗体およびアンチＧＭ２ＡＰポ
リクロナール抗体（Ｌｉら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，１９８４）を使用
した：これらは、ＳＡＰ８４およびＧＭ２ＡＰ８４と呼ぶ。
【０２３７】 アンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体またはアンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリ
クロナール抗体を、当業者に十分に知られているプロトコルおよび方法を使用し
て研究室において調製、精製した：購入した原核物質のタンパク質ＧＭ２ＡＰま
たはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ５０μｇを、生後日数ＪＯ，Ｊ２８，Ｊ５６のウサギ
に注入した。連続２ヶ月の間に、毎月１回、２つの注入を反復した。かくして、
２つのアンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体および２つのアンチＳａｐｏｃｉｎ
ｅ Ｂポリクロナール抗体が得られ、組換えタンパク質に対するその特異性をウ
エスタンブロット法およびエリザ法によって検証した。
【０２３８】 アンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体またはアンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリ
クロナール抗体を、当業者に十分に知られているプロトコルおよび方法を使用し
て研究室において調製、精製した：出願人の研究室において、調製してＫＬＨに
結合したタンパク質ＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ７５μｇを、生後日
数ＪＯ，Ｊ２８，Ｊ５６のウサギに注入した；連続５ヶ月の間に、毎月１回、そ
れぞれ、７５μｇを注入して複数のｂｏｏｓｔ（ブースト）を構成した。かくし
て、４つのアンチペプチドＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体、４つのアンチペプチ
ドＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリクロナール抗体およびウサギの４つのアンチペプチ
ドＭＲＰ１４抗体が得られ、組換えタンパク質に対するその特異性をウエスタン
ブロット法およびエリザ法によって検証した。選択したペプチドＧＭ２ＡＰ、ペ
プチドＳａｐｏｃｉｎｅ ＢおよびペプチドＭＲＰ１４のシークエンスを図１‐
３に示した。
【０２３９】 下記が得られた： ‐ＧＭ２ＡＰの１３，１５のアミノ酸の２つのペプチドの混合物に対する抗体
：１８９‐１９０；ＧＭ２ＡＰの１８のアミノ酸のペプチドに対する抗体：１９
１‐１９２（図２参照）、 ‐ＭＲＰ１４の１３，１９のアミノ酸の２つのペプチドの混合物に対する抗体
：１９３；ＭＲＰ１４の１７のアミノ酸のペプチドに対する抗体：１９５‐１９
６（図２参照）、 ‐Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの１２，１５，１５のアミノ酸の３つのペプチドの混
合物に対する抗体：７４‐７５；Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの１２，１５，１５のア
ミノ酸の３つのペプチドに対する他の抗体：７２‐７３（図３参照）。
【０２４０】 アンチ活性分画モノクロナール抗体を、当業者に十分に知られているプロトコ
ルおよび方法を使用して研究室において調製、精製した。“活性分画”は、ＳＥ
Ｐ患者の精製後の尿８０リッタのグループから得られた細胞障害溶離分画に対応
する。これは、３つのタンパク質ＧＭ２ＡＰ，Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂ，ＭＲＰ１
４を含む最後の溶離分画である。上記精製分画３０μｇを、生後日数ＪＯ，Ｊ２
８，Ｊ５６の３匹のハツカネズミに注入し、３８日後、採取を行った。ハイブリ
ドーマおよびモノクロナール抗体の構成のため、“スクリーニング”および細胞
融合を行った後、当業者に公知のプロトコルにもとづき、ハイブリドーマをハツ
カネズミに再注入し、１０日後、腹水の液体を回収した。セファロース・タンパ
ク質Ａカラムで抗体を精製し、免疫に使用した分画に対するその特異性をウエス
タンブロット法およびエリザ法によって検証した。かくして、４つのモノクロナ
ール抗体が得られた：１９Ｃ１Ａ７，３Ｄ３Ｆ９，１８Ｃ８Ｃ５および７Ｄ１２
Ａ８。
【０２４１】 実施例１３：エリザ技術による尿中のタンパク質ＭＲＰ１４の検量 （i）エリザ検量技術を使用して、当業者に公知の方法にもとづき且つ先行実
施例に記載のアンチＭＲＰ抗体を使用することによって、あるいは、（ii）ＢＭ
Ａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ ＡＧ（在アウグスト、スイス）から市販されてい
るキット‘ＭＲＰ酵素免疫アッセイ’を使用してキットの抗体を使用することに
よって、ヒトの尿中のタンパク質ＭＲＰ１４、ＭＲＰ８および異種錯体ＭＲＰ８
／１４を検量した。この場合、プロトコルは、キットの注意書きにもとづき実施
した。
【０２４２】 尿中のＭＲＰ１４およびＭＲＰ８／１４の検知
【０２４３】 活動集団の個体の１７の尿（ＴＳ）、多発硬化症に罹患した患者の２７の尿（
ＳＥＰ）および他の神経疾病に罹患した患者の７の尿（ＡＭＮ）を検量した。
【０２４４】 ‐図４に、上記尿中に検量されたＭＲＰ８の割合を示した：尿ＡＭＮ中のＭＲ
Ｐ８の濃度は、ほぼゼロであるが、尿ＴＳとＳＥＰとの間には、実際、分布差は
ない。しかしながら、観察された差は、ほぼ無視できる。なぜならば、検量濃度
は、極めて僅かであるからである。
【０２４５】 ‐図５に、上記尿中に検量されたＭＲＰ１４の割合を示した：尿ＴＳとＡＭＮ
との間には、実際、濃度差はないので、濃度は、若干のＳＥＰ尿中では高い。
【０２４６】 ‐図６に、上記尿中に検量されたヘテロジマーＭＲＰ８／１４の割合を示した
：ＴＳ尿とＡＭＮ尿との間には、実際、濃度差はないが、疾病作用で特徴づけら
れるＳＥＰ患者のサブ集団に対応する若干のＳＥＰ尿中では濃度はより高い。尿
中で検量されたＭＲＰ８／１４は、炎症ピークによって特徴づけられるＳＥＰ疾
病の作用マークである。
【０２４７】 ‐図７から、要約して、ＴＳ尿とＡＭＮ尿とＳＥＰ尿との間にはＭＲＰ８濃度
およびＭＲＰ１４濃度の有意の差はないことが確認される。但し、上記尿中には
ＭＲＰ８／１４濃度の僅かな差が認められるが、この濃度は、平均的にＳＥＰ尿
中ではより高く、疾病作用マークである（炎症ピーク）。
【０２４８】 実施例１４：タンパク質ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量に使用
したエリザ・プロトコル Ｇａｒｄａｓらが記載したエリザプロトコル（Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ １，３７‐４２，１９８４）にもとづき、アンチペプチドＧ
Ｍ２ＡＰポリクロナール抗体またはアンチペプチドＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリク
ロナール抗体？を使用して、ヒトの尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏ
ｃｉｎｅ Ｂを検量した。以下に、主工程を略述する： 各工程において、９６ピット・マイクロプレートのピットに、指示溶液２００
μｌを充填した。ピットに、まず、炭酸塩‐炭酸水素塩・緩衝液（ｐＨ９，６）
中で５０ｎｇ／ｍｌに希釈したＧＭ２ＡＰ（原核物質の組換えタンパク質）溶液
を“コーチング”した。４℃において一晩、培養した後、溶液を除去し、ピット
を、０，０５％トゥイーン２０（ＰＢＳトゥイーン）を含む緩衝液ＰＢＳ（ｐＨ
７，４）で４回、洗浄した。かくしてコーチングされたマイクロプレートを４℃
に約２週間、貯蔵した。
【０２４９】 ３種の希釈状態（２０×，４０×および８０×または他の適切な希釈度）の尿
試料を、適切に希釈したウサギのアンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体またはア
ンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリクロナール抗体とともに４℃において一晩、培養
した。基準範囲の構成のために、２，０‐６２，５ｎｇ／ｍｌの範囲の組換えタ
ンパク質の標準希釈シリースを使用し、同様に処理した。すべての希釈は、オボ
アルブミン１ｍｇ／ｍｌを含むＰＢＳ・トゥイーン緩衝液によって行った。更に
、培養した各溶液を、“コーチング”したピットに同様に添加し、プレートを室
温に２ｈ放置した。次いで、ピットをＰＢＳ・トゥイーンによって４回、洗浄し
、更に、ペルオキシダーゼと結合させ約１２００倍に希釈したウサギのアンチＩ
ｇＧ抗体溶液をピットに充填した。室温において２ｈ培養した後、ピットをＰＢ
Ｓ・トゥイーンによって４回、洗浄し、改めて、染色剤をピットに充填した。染
色剤は、２，２’‐アジノジ（３‐エチルベンゾチアゾリン）スルホン酸１００
ｍｇと３０％過酸化水素１０μｌとからなり、室温において１ｈ保持し、各マイ
クロピットの染色度を、４０５ｎｍの吸収の読取りによって評価した。
【０２５０】 横軸に基準範囲のＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度を対数尺度で
プロットし、縦軸に吸収％を線形尺度でプロットして、標準曲線を構成した。試
料の吸収％は、尿試料と、可溶抗原を含まず抗血清のみを含む対照との吸収度の
比である。
【０２５１】 原核物質系から形成された濃度３ｍｇ／ｍｌの組換えタンパク質ＧＭ２ＡＰの
溶液を５０ｍＭ炭酸塩緩衝液（ｐＨ９，６）で希釈し、９６ピットのマイクロプ
レートの各ピットに５０μｌを加えるか、０，５μｇ／ｍｌ溶液５０μｌをピッ
ト毎に加えた。このように調製したプレートを室温において一晩、培養した。研
究室で調製したアンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体（ウサギ７９）を精製し、
ウマの１０％血清の存在下で０，０５％ＰＢＳトゥイーン緩衝液で希釈した。上
記溶液を１／８０００に希釈した。０‐５００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度をカバー
する８つの範囲点を有する基準範囲を構成するため、この溶液を使用した。抗体
１００μｌと被検量尿試料１００μｌまたは基準範囲に役立つ組換えタンパク質
ＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ溶液との間で、室温において一晩、予培
養を行った。ＰＢＳトゥイーンでマイクロプレートを洗浄した後、ピット毎に培
養混合物５０μｌを添加し、次いで、室温において２ｈ培養した。マイクロプレ
ートを、改めて、ＰＢＳトゥイーンで洗浄し、次いで、ペルオキシダーゼと結合
させ１／５０００に希釈したウサギのアンチＩｇＧ抗体５０μｌをプレートの各
ピットに添加し、室温において２ｈ培養した。マイクロプレートを改めて洗浄し
た後、ＯＰＤ１００μｌを各ピットに添加し、室温において２０ｍｉｎ培養した
。使用した特殊の抗体によって確認されたＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃｉｎｅ
Ｂの濃度に比例する各ピットの染色度を、吸収の読取りによって評価した。
【０２５２】 原核物質系によって調製された組換えタンパク質ＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃ
ｉｎｅ Ｂの濃度３ｍｇ／ｍｌの溶液を、５０ｍＭ炭酸塩緩衝液で希釈し、９６
ピットのマイクロプレートの各ピットに５０μｌを加えるか、１，５μｇ／ｍｌ
溶液５０μｌをピット毎に加えた。このように調製したプレートを室温において
一晩、培養した。研究室で調製、精製したアンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体
（ウサギ１９０およびウサギ１９１）を、単独でまたは０，０５％ＰＢＳトゥイ
ーン緩衝液でそれぞれ１／１０００に希釈した混合物として、ウマの１０％血清
の存在下で使用した。８つの点によって０‐１５００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲をカ
バーするよう希釈した原核物質の組換えタンパク質ＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃ
ｉｎｅ Ｂを使用して、基準範囲を構成した。抗体（１つの抗体または２つの抗
体の組合せ）１００μｌを、被検尿試料または組換えＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏ
ｃｉｎｅＢ溶液１００μｌの存在下で、室温において一晩、予培養した。ＰＢＳ
トゥイーンでマイクロプレートを洗浄した後、培養混合物５０μｌをピット毎に
添加し、次いで、室温において２ｈ培養した。マイクロプレートを、改めて、Ｐ
ＢＳトゥイーンで洗浄し、次いで、ペルオキシダーゼと結合させ１／５０００に
希釈したウサギのアンチＩｇＧ抗体５０μｌをプレートの各マイクロピットに添
加し、次いで、室温において２ｈ培養した。マイクロプレートの洗浄後、ＯＰＤ
１００μｌを各ピットに添加し、室温において２０ｍｉｎ培養した。使用した特
殊の抗体によって確認されたＧＭ２ＡＰまたはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度に比
例する各ピットの染色度を、吸収の読取りによって評価した。
【０２５３】 実施例１５：尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰの検量 多発硬化症（ＳＥＰ）に罹患した２２人の患者の尿、他の神経疾病（ＯＮＤ）
に罹患した５人の患者の尿および活動集団から選択し病院来訪時に採尿した９人
の健常者（Ｈｅａｌｔｈｙ）の尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰを、下記のエリザ・
プロトコルにもとづき、アンチＧＭ２ＡＰポリクロナール抗体を使用して検量し
た。この研究のために選択したＳＥＰ患者は、あらゆる方向の患者、即ち、疾病
段階、疾病プロフィル、処置，ｅｔｃ．の異なる患者である。
【０２５４】 検量結果を図８に示した。即ち、ＯＮＤ尿の０／５および、いわゆる、‘Ｈｅ
ａｌｔｈｙ’尿の２／９のみが、２００ｎｇ／ｍｌを越えるＧＭ２ＡＰ濃度を有
し、１０／２２（即ち、４５％）が、２００ｎｇ／ｍｌを越えるＧＭ２ＡＰ濃度
を有する。
【０２５５】 これらの結果から明らかな如く、活動集団の各人の尿に存在するタンパク質Ｇ
Ｍ２ＡＰは、極めて低濃度（＜４００ｎｇ／ｍｌ）であり、一方、ＳＥＰ患者の
尿に存在するＧＭ２ＡＰは、より高濃度である。しかしながら、ＳＥＰの１２の
尿のＧＭ２ＡＰの割合は、同じく、低い。これらの１２人の患者のうち、１０人
が、処置中である。尿中のＧＭ２ＡＰの高濃度は、ＳＥＰ病理学のマーカであり
、更に詳細に云えば、疾病の段階または形、疾病の作用のマーカであり、途中の
すべての処置によって確実に影響される。ここで注意するが、活動集団のうちの
２名は、高濃度のＧＭ２ＡＰを示した。（これらの２例は、本研究に自発的に含
まれたものである。なぜならば、２例の何れも、この同一カテゴリの他の個体と
は異なり、グリオ毒性を示したからである。）即ち、健常者または疾病罹患者ま
たは多発硬化症の罹患者が対象であり得る。なぜならば、いわゆる“Ｈｅａｌｔ
ｈｙ”個体の試料は、匿名で採取され、臨床記録が確認されていないからである
。
【０２５６】 尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰは、ＳＥＰ患者の尿に検知された；即ち、高濃度の
ＧＭ２ＡＰは、ＳＥＰ病理学のマーカであり、更に詳細に云えば、疾病の形、疾
病の段階、作用周期のマーカであり、途中のすべての処置によって確実に影響さ
れる。尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰは、同じく、疾病悪化開始の予見値、進行開始
時の軽症のＳＥＰの予見値、等である。
【０２５７】 尿中に検知されたＧＭ２ＡＰ濃度の絶対値は、使用した抗体の親和性および特
異性に依存するが、一般に、３つの個体グループの間の傾向は、使用した個体の
如何に関せず、保持される。
【０２５８】 実施例１６：尿中のタンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量 ＧＭ２ＡＰの検知研究に使用したものと同一の尿試料について、タンパク質Ｓ
ａｐｏｃｉｎｅ Ｂを検知した。検量は、下記のエリザ・プロトコルにもとづき
、アンチＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂポリクロナール抗体を使用して、ＧＭ２ＡＰの検
量と並行して実施した。
【０２５９】 Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量結果を図９に示した。ＯＮＤ尿の０／５およびＨ
ｅａｌｔｈｙ尿の２／９が、２μｇ／ｍｌよりも高いＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ濃度
を有し、一方、６／２２（即ち、２７％）が、２μｇ／ｍｌよりも高い濃度を有
する。
【０２６０】 上記結果から明らかな如く、タンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、無視できな
い濃度、即ち、＜２μｇ／ｍｌの濃度で各尿中（いわゆる健常集団またはいわゆ
る疾病集団）に存在する。これらの検量結果は、文献に記載の結果と同等である
。しかしながら、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、各尿中に存在するが、若干のＳＥＰ
尿中には高濃度で存在する。ＳＥＰ尿中のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂのこの濃度増加
は、正常状態の上記タンパク質の基本的濃度によってマスクできる。従って、尿
中の高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、ＳＥＰ病理学のマーカであり、更に詳細
に云えば、疾病の段階、疾病の形、作用周期のマーカであり、途中のすべての処
置によって確実に影響される。しかしながら、検量したＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは
、ＧＭ２ＡＰよりも疾病の形または疾病の作用の識別度が劣るマーカと思われる
。もう一度、注意するが、活動集団の２つの個体は、高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ
Ｂを有し、更に、これらの２つの個体の場合、更に、尿中のＧＭ２ＡＰの濃度
も高い。
【０２６１】 結論として、ＳＥＰ患者の尿中には、より高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂが検
知された；高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、ＳＥＰ病理学のマーカであり、更
に詳細に云えば、疾病の形、疾病の段階、作用周期のマーカであり、途中のすべ
ての処置によって影響される。尿中のこの高濃度のＧＭ２ＡＰは、同じく、疾病
悪化開始の予見値、進行開始時の軽症のＳＥＰの予見値、等である。しかしなが
ら、一般に、高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅＢは、高濃度のＧＭ２ＡＰよりも識別度
が劣るマーカと思われる。
【０２６２】 尿中に検知されたＧＭ２ＡＰ濃度の絶対値は、使用した抗体の親和性および特
異性に依存するが、一般に、３つの個体グループの間の傾向は、使用した個体の
如何に関せず、保持される。
【０２６３】 実施例１７：尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの共検
量 図１０に、図５に示した尿試料について検量したＧＭ２ＡＰ濃度および図６に
示した同一の尿試料について検量したＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ濃度を対比して示し
た。このグラフには、ＳＥＰ試料（濃色菱形）、ＯＮＤ試料および‘Ｈｅａｌｔ
ｈｙ’試料（白抜き菱形）を示した。
【０２６４】 このグラフから、下記が知られる： ‐尿中のＧＭ２ＡＰ濃度が高ければ高いほど、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂ濃度が高
い。（ここで付言するが、これは、他のタンパク質について一般的であるのでは
なく、各被検試料について並行して検量したクレアチニンにもとづき、腎不全を
意味するものではない）；
【０２６５】 ‐高濃度のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、ＳＥＰ試料の特徴であ
る（但し、上記の活動集団の２つの尿は除く）。ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉ
ｎｅ Ｂの同時の高濃度は、ＳＥＰ病理学のマーカであり、更に詳細に云えば、
疾病の窓である（グラフの右上象限）。
【０２６６】 結論として、上記分析から、尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰ（＞４００ｎｇ／ｍｌ
）およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ（＞２μｇ／ｍｌ）が、ＳＥＰ患者の尿中に同時
に検知され、ＳＥＰ病理学のマーカであり、更に詳細に云えば、疾病の形、疾病
の段階、作用周期のマーカであり、途中のすべての処置によって影響されること
が確認される。各試料について、２つのタンパク質を並行して検量し、２つの濃
度を考慮するのが有利である。
【０２６７】 進行中の２名の患者の尿のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量
【０２６８】 ＳＥＰ患者ｎｏ．１‐漸次的寛解の形 上記患者の尿を、その疾病の進行中に採取した。悪化のため、Ｊ０に患者を入
院させた。Ｊ１に、コルチコイドをフラッシュし、次いで、臨床的観点から経時
的に追跡した（フラッシュは、臨床的改善を与えた）。図１１に、進行中の上記
尿のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量プロフィルを示し、図１２に
、高濃度の共検知を表すＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの２つの濃度の
積のプロフィルを示した。悪化時および入院時に採取したＧＭ２ＡＰおよびＳａ
ｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度は、コルチコイドのフラッシュ後、９０日まで漸次的に
減少した。
【０２６９】 ＳＥＰ患者ｎｏ．２‐漸次的寛解の形 上記患者の尿を、その疾病の進行中に採取した。悪化のため、Ｊ０に患者を入
院させた。Ｊ１に、エンドクサンをフラッシュし、次いで、臨床的観点から経時
的に追跡した（フラッシュは、臨床的改善を与え、Ｊ６０に、疾病の悪化の兆候
が認められた）。図１３に、進行中の上記尿のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎ
ｅ Ｂの検量プロフィルを示し、図１４に、高濃度の共検知値を表すＧＭ２ＡＰ
およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの２つの濃度の積のプロフィルを示した。悪化時お
よび入院時に採取したＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅＢの濃度は、エンドク
サンのフラッシュ後、２３日まで漸次的に減少し、Ｊ６０に増加して高濃度にな
り、従って、臨床的兆候の変化との完全な関連性を示した。
【０２７０】 上記結果から下記が確認される：
【０２７１】 ‐尿中のＧＭ２ＡＰの高濃度は、ＳＥＰ病理学のマーカであり、特に、２つの
共役タンパク質の高濃度の共検知値（２つの濃度の積で表される）がマーカであ
る；
【０２７２】 ‐尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、疾病の作用（こ
の場合、悪化中の作用）のマーカであるか、濃度を低下する免疫抑制剤（例えば
、コルチコイドまたはエンドクサン）の処理によって影響されるマーカである。
【０２７３】 この実施例から、上記マーカは、特に、下記目的に使用できるという事実が知
られる：‐患者の治療調査を実施し、所与の患者について処置の治療利点を評価
するため；または‐疾病の悪化の予見、作用ピークの予見，ｅｔｃ．．．．を行
うため；
【０２７４】 ‐臨床兆候から予見される治療操作（再操作）を決定するため。
【０２７５】 実施例１８：尿中のタンパク質ＭＲＰ１４、ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎ
ｅ Ｂの検知量と上記尿中で測定されたグリオ毒性との間の関係 尿中の上記タンパク質の単独の存在または組合せの存在と尿のグリオ毒性との
間の関係を検証するため、問題のタンパク質の濃度と、多発硬化症（ＳＥＰ）に
罹患した患者、他の神経疾病（ＯＮＤ）に罹患した患者およびいわゆる“Ｈｅａ
ｌｔｈｙ”の活動集団から選択した個体の尿試料のグリオ毒性とを並行して検量
した。ＳＥＰ患者のうち、処置中のまたは未処置の、疾病の形または段階、疾病
作用の異なる患者に注目した。
【０２７６】 上記のエリザ・プロトコルにもとづき、ヒトの尿のタンパク質ＭＲＰ，ＧＭ２
ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂを検量した。この実施例で分析した検量値は、
先行例に記載の検量値である。各試料のグリオ毒性の測定のため、エリザ法で分
析した各尿試料をＭＴＴテストによって分析した。グリオ毒性は、遠心分離した
尿の存在下で４８ｈ培養後のネズミの星芽細胞系統（ＣＬＴＴ１．１）の致死細
胞の％で示した（テトラゾリウム塩を使用して測色法によって測定した）。
【０２７７】 図１５に、ＧＭ２ＡＰ濃度とＭＴＴテストで測定した尿のグリオ毒性との関係
を示した。２２のＳＥＰ尿（グレーの菱形）、５つのＡＭＮ尿（黒の菱形）およ
び９の“Ｈｅａｌｔｈｙ”尿（黒の菱形）をグラフに示した。これは、実施例１
５，１６において検討した尿と同一である。すべての対照尿（ＯＮＤおよびＨｅ
ａｌｔｈｙ）は、低い割合のＧＭ２ＡＰ（＜４００ｎｇ／ｍｌ）および僅かなグ
リオ毒性（＜１５％）を有する。但し、高濃度のＧＭ２ＡＰおよびグリオ毒性が
認められた１つのＨｅａｌｔｈｙ対照尿は除く（実施例１５に既に述べた）
【０２７８】 ＳＥＰ尿は、３つのサブ集団に分類した：
【０２７９】 ‐ＧＭ２ＡＰが低濃度（＜４００ｎｇ／ｍｌで）グリオ毒性が僅かな（＜１５
％）尿，
【０２８０】 ‐ＧＭ２ＡＰが低濃度（＜４００ｎｇ／ｍｌ）でグリオ毒性を示す（＞１５％
）尿，本質的に３つの尿，
【０２８１】 ‐ＧＭ２ＡＰが高濃度（＞４００ｎｇ／ｍｌ）でグリオ毒性が高い（＞１５％
）尿。
【０２８２】 これらの３つのサブ集団は、ＳＥＰサブ集団、即ち、疾病の形または段階、疾
病作用、治療利点などの異なる集団を表すと云える。
【０２８３】 しかしながら、ここで注意するが、ＧＭ２ＡＰ濃度の高いすべての尿は、同じ
く、強いグリオ毒性を有する。
【０２８４】 結論：尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰと毒性との間に関連性が認められる（ＧＭ２
ＡＰが高濃度のすべての尿はグリオ毒性を有し（１０／１０）、ＧＭ２ＡＰが低
濃度のすべての尿は、グリオ毒性が低い（＜１５％）。但し、３つの尿／１２Ｓ
ＥＰは例外である）。これは、アンチＧＭ２ＡＰ抗体によって確認されるが、グ
リオ毒性の機構における、天然の形または修飾された形のタンパク質ＧＭ２ＡＰ
の単独またはその組合せの結果と解釈される。更に、尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰ
および強いグリオ毒性の共検知値は、ＳＥＰに罹患した患者のサブ集団と関連す
る。
【０２８５】 図１６に、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度とＭＴＴテストによって求めた尿のグ
リオ毒性との関係を示した。
【０２８６】 ２２のＳＥＰ尿（灰色の菱形）、５つのＡＭＮ尿（黒の菱形）および９つの“
Ｈｅａｌｔｈｙ”尿（明るい灰色の菱形）をグラフに示した。これは、実施例１
５，１６において検討した尿と同一である。尿のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ濃度が高
くなると、そのグリオ毒性も大きくなるということが認められる。尿のＳａｐｏ
ｃｉｎｅ Ｂ濃度とグリオ毒性との間に十分に明確な関連性がある。
【０２８７】 結論：尿中の高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂとグリオ毒性との間に関連性が認
められる。これは、検量に使用したアンチＧＭ２ＡＰ抗体によって確認されるが
、グリオ毒性の機構における、天然の形または修飾された形のＳａｐｏｃｉｎｅ
Ｂの単独またはその組合せの結果と解釈される。
【０２８８】 図１７に、ＧＭ２ＡＰの濃度とＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度との積とＭＴＴテ
ストによって求めた尿のグリオ毒性との関係を示した。
【０２８９】 実施例１５，１６の２２のＳＥＰ尿（灰色の菱形）、５つのＡＭＮ尿（黒の菱
形）および９つの“Ｈｅａｌｔｈｙ”尿（明るい灰色の菱形）を図１７に示した
。上記尿のグリオ毒性を、ＧＭ２ＡＰの濃度とＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度との
積の関数として、即ち、尿中の２つのタンパク質の共検知値の関数として分析し
た。Ｍ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの２つの濃度の積とグリオ毒性との間
の関連性が、唯一つのタンパク質のみを考慮した場合よりも遥かに十分に認めら
れる。ＯＮＤ尿の５／５が、ＧＭ２ＡＰの濃度とＳａｐｏｃｉｎｅ Ｇの濃度と
の小さい積および低いグリオ毒性を有し；“Ｈｅａｌｔｈｙ”尿の８／９が、Ｇ
Ｍ２ＡＰの濃度とＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度との小さい積および低いグリオ毒
性を有するということが認められた。他方、ＳＥＰ尿の３つのサブ集団は、下記
の如く区別される：
【０２９０】 ‐ＧＭ２ＡＰ、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度が低く、グリオ毒性の小さい（＜
１５％）尿、‐ＧＭ２ＡＰ、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度が高く、グリオ毒性の
大きい（＞１５％）尿 これらの２つのサブ集団は、ＳＥＰサブ集団、即ち、疾
病の形または段階、疾病作用、治療利点などの異なる集団を表すと云える。しか
しながら、極めて重要であるのだが、高濃度のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎ
ｅ Ｂを有する、即ち、共役的に高濃度のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ
Ｂを有するすべての尿は、同じく、強いグリオ毒性を有する。３つのマーカ、即
ち、グリオ毒性、高濃度のＧＭ２ＡＰおよび高濃度のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂを同
時に考慮すれば、ＳＥＰ患者の２つのサブ集団は、ますます顕著で明確になる。
これは、図１８において確認される。
【０２９１】 結論：尿中の高濃度のＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂとグリオ毒性と
の間に関連性が認められる。ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂが高濃度の
すべての尿はグリオ毒性を示し、ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂが低濃
度のすべての尿はグリオ毒性を示さない（＜１５％）。但し、２つの尿／２２Ｓ
ＥＰは例外である。これは、検量に使用したアンチＧＭ２ＡＰ抗体およびアンチ
Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂ抗体によって確認されるが、グリオ毒性の機構における、
天然の形または修飾された形の共役的なまたは組合せた２つのタンパク質ＧＭ２
ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの結果と解釈される。更に、尿中の高濃度のＧ
Ｍ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂと強いグリオ毒性との共検知値は、他のサ
ブ集団に比して、ＳＥＰに罹患した患者のサブ集団（段階、形、作用、疾病の処
置？）と関連する。共役的に考慮したこれらの３つのマーカは、ＳＥＰ患者の２
つのサブ集団を識別できる。
【０２９２】 処置後および処置中の２名の患者の疾病の進行に依存するグリオ毒性、ＧＭ２
ＡＰ濃度およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ濃度の進行
【０２９３】 同じく、疾病進行中の２名の患者の尿中の上記の３つのパラメータを測定する
ことによって、ＳＥＰ尿および病理学におけるグリオ毒性、高濃度のＧＭ２ＡＰ
およびＳａｐｏｃｉｎｅの間の関連性を確認した。
【０２９４】 患者ｎｏ．１：漸次的寛解の形のＳＥＰ、悪化のためＪ０において入院、Ｊ１
にコルチコイド・フラッシュ処置。フラッシュ後、Ｊ６０まで臨床的改善が認め
られた（図１１，１２参照）。
【０２９５】 患者ｎｏ．２：漸次的寛解の形のＳＥＰ、悪化のためＪ０において入院、Ｊ１
にエンドクサン・フラッシュ処置。Ｊ６０に、再び、その疾病の悪化の臨床的兆
候が現れた（図１３，１４参照）。
【０２９６】 ２名の患者について、下記が確認された：
【０２９７】 ‐尿のグリオ毒性と臨床的進行との間の関連性（臨床兆候が厳しい場合、グリ
オ毒性が増大する；処置に続いて臨床兆候が軽減した場合、グリオ毒性が、減少
して一定となる；処置後に悪化兆候が現れた場合、グリオ毒性は、再び、増大す
る），
【０２９８】 ‐患者の尿中のグリオ毒性の割合とＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの
濃度との関連性、
【０２９９】 ‐ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの高濃度と疾病の臨床的進行との関
連性。
【０３００】 結論：尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量値は、
ＳＥＰのサブ集団（段階、形、作用、疾病の処置）の良好な識別マークである。
タンパク質ＧＭ２ＡＰおよび／またはＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂは、グリオ毒性の機
構に、単独でまたは組合せて、天然の形または検量に使用したポリクロナール抗
体によって識別される形で関与する。タンパク質ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉ
ｎｅは、グリオ毒性尿中では高濃度で共検知されるので、これらの２つのタンパ
ク質が、グリオ毒性の誘導のため組合せて作用できる。
【０３０１】 実施例１９：インビトロのグリオ毒性の生成培養系（単球培養）におけるタン
パク質ＧＭ２Ａ，ＳＡＰＢ，ＭＲＰ１４およびＭＲＰ８の発現の免疫組織化学的
分析 プロトコル：略述した本プロトコルにもとづき、ＳＥＰ罹患の患者および対照
健常者の単球の培養を並行して実施した。ＡＣＤで採取した上記の２名の志願者
の抹消血液から、当業者に周知の技術を使用して、ＦｉｃｏｌｌでＰＢＭＣ（抹
消血液単核細胞）を分離した。（リングのレベルで）回収した細胞をＲＰＭＩ媒
体で２回、洗浄した。次いで、細胞をＫｏｖａｓスライド上で計数し、２５ｃｍ 2 の第１フラスコ内にまたはＬａｂｔｅｃｋ片（８ピット）（パーマノックス製
）上に、Ｊ０において、ヒトの１５％血清ＡＢを補足した媒体ＲＰＭＩによって
散布した。担体に接着し、最終的にマクロファージに分化する単球の分析のため
、担体に直接に塗布するために、“Ｌａｂｔｅｃｋ”タイプの蜂巣片上で細胞を
培養した。かくして、片について、２・１０6の細胞を０，２５・１０6／ピット
の割合で散布した。フラスコについて、４・１０6の細胞を０，２５・１０6／ピ
ットの割合で散布した。Ｊ１において、懸濁細胞を回収し、ヒトの５％血清ＡＢ
を補足した媒体ＲＰＭＩを加える前に、（３７℃に予熱した）ＲＰＭＩでＬａｂ
ｔｅｃｋのピットまたはフラスコを２回、洗浄した。Ｊ１、Ｊ３，Ｊ６，Ｊ９，
Ｊ１２または１４，Ｊ１５に、培養媒体を交換した；上澄液を採取し、当業者に
周知の技術を使用して片上に細胞を固定した。媒体の変更毎に、少なくとも２つ
の片をパラホルムアルデビで固定し、免疫組織化学的分析のために保管した。
【０３０２】 媒体の組成：２００ｍＭグルタミネート１５ｍｌと、１００μＭピルビン酸ナ
トリウム５ｍｌと、非必須アミノ酸（１００×）５ｍｌと、抗生物質であるペニ
シリンおよびストレプトマイシン１０００００Ｕ／μｌと、ヒトのアンチインタ
ーフェロン抗体１００Ｕ／μｌとを含むＲＰＭＩ（５００ｍｌ）。
【０３０３】 結果：かくして、インビトロの４つの単球培養を速度論的に検討した：対照個
体の血液の２つの単球培養およびＳＥＰ患者の２つの単球培養。各培養時点（Ｊ
０，Ｊ１、Ｊ３，Ｊ６，Ｊ９，Ｊ１２．．．）において、対応する上澄液を同様
に回収した。回収が完了したならば、各培養日に対応する片を、アンチＧＭ２Ａ
，ＳＡＰ‐Ｂ，ＭＲＰ‐８およびＭＲＰ‐１４ポリクロナール抗体の存在下で培
養した。かくして回収した上澄液のグリオ毒性をＭＴＴテストによって評価した
。実施例１３，１４に記載した如きエリザ・プロトコルにもとづき各上澄液のタ
ンパク質ＧＭ２Ａ，ＭＲＰ１４およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度を測定した。
【０３０４】 以下に，固定した細胞の蛍光抗体法の結果を要約した；下記の如く云える：
【０３０５】 ‐２つの培養の全段階においてＭＲＰ８の発現はない。
【０３０６】 ‐Ｊ９‐Ｊ１５の期間におけるＭＲＰ１４の明確な発現が、２つの培養におい
て認められたが、ＳＥＰ培養の場合には、発現はより強い。この発現は、マクロ
ファージ分化段階と関連すると思われる。
【０３０７】 ‐極めて弱い発現（強度弱く且つ細胞数少ない）が、対照培養の培養初期に認
められ、これは、マクロファージ系リソソーム中のＧＭ２Ａの生理学的存在に対
応すると思われる。‐ＳＥＰ培養の場合、ＧＭ２Ａの遥かに明確な発現（強度強
く且つ細胞数多い）が、Ｊ３‐Ｊ６の比較的均一な細胞質マーキングとともに認
められ、Ｊ９において消失し、Ｊ１４‐Ｊ１５に、細胞周辺に局在し細胞膜の内
部輪郭を描く強いマーキングとともに再び認められた。この現象は、対照片グル
ープには認められなかった。
【０３０８】 アンチＳＡＰ‐Ｂ抗体に関する分析の場合、解釈可能な免疫組織化学的マーキ
ングは得られなかった。
【０３０９】 既に行ったＳＥＰ単球の培養の場合、３／３が、Ｊ９にグリオ毒性ピークを示
し、２／３が、Ｊ６により弱いピークを示した。並行して分析した非ＳＥＰ対照
試料の単球培養の場合、２／２に何らのピークも認められなかった。操作中の細
胞培養の上澄液中のＭＲＰ１４，ＧＭ２ＡＰおよびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの検量
から、培養のＪ６に且つ特にＪ９に、タンパク質ＳＡＰ‐ＢおよびＧＭ２ＡＰが
、エリザ法によって、ＳＥＰ上澄液には検知されるが、対照単球の上澄液には検
知されないということが判った；この操作以後、タンパク質は検知されなかった
。ここで注意するが、検量のために使用した抗体は、タンパク質の生理学的形態
を識別でき、しかも、錯体および／または修飾体の形態も検知できる。
【０３１０】 従って、上澄液において最も強いグリオ毒性が観察されるＪ６‐Ｊ９期間は、
細胞内に、細胞発現（細胞発現量および局在）の定量的、定性的ゆらぎを伴うＧ
Ｍ２Ａのマイナス対照の低分化の生成が観察されるＪ３‐Ｊ１５期間によってカ
バーされるということが確認される。
【０３１１】 実施例２０：パラフィン製脳固定切片の免疫組織技術 抗原を露出するための前処理の前に、パラフィンから作成した組織学的切片か
らキシレンおよびアルコールによってパラフィンを除去した；この前処理は、（
i）クエン酸ナトリウム・クエン酸緩衝液の存在下でマイクロ波の５ｍｉｎ×２
回の照射，（ii）１％過酸溶液中の１５ｍｉｎの培養または９９％ギ酸溶液中の
５ｍｉｎの培養による酸処理に対応する。次いで、１％過酸化水素中で片を３０
ｍｉｎ培養して内在性ペルオキシダーゼをブロックし、次いで、１５ｍｉｎ強力
に水洗した。０，０３％ＰＢＳトリトン、（ポリクロナール抗体のための）１０
％ロバ血清または（モノクロナール抗体のための）１０％ヤギ血清の存在下で片
を３０ｍｉｎ培養して、ベースノイズをブロックした。０，０３％ＰＢＳトリト
ン中で１次抗体溶液１００‐２００μｌを片毎に塗布し（タイトルにもとづき０
，５‐５μｇ／ｍｌ）、次いで、室温において２ｈ培養した。次いで、ＰＢＳト
リトンで１０ｍｉｎ、３回、片を洗滌した。１次抗体に特定的に固定できるビオ
チニル化抗体（例えば、０，０３％ＰＢＳトリトンで希釈したウサギのアンチＩ
ｇＧまたはハツカネズミのアンチＩｇＧ）を使用して２次抗体のマーキングを行
った。片を洗浄し、溶液（ストレプタビジン・ビオチン・ペルオキシド錯体２μ
ｌ，０，０３％ＰＢＳトリトン１６００μｌ）中で２ｈ培養した。採取前に、緩
衝液Ａ中で遮光して、片を再び洗浄し、次いで、顕微鏡観察前に水洗した。５つ
の片についての緩衝液Ａ：０，０５Ｍトリス（ｐＨ７，６）２５ｍｌ，１Ｍイミ
ダゾール２，５ｍｌ，無菌水１５ｍｌ，５ｍｇ／ｍｌＤＡＢ２ｍｌ，１０％ニッ
ケルアンモニウム５ｍｌ，１％Ｈ2Ｏ2３０μｌ。
【０３１２】 免疫組織化学的検討のために、以下に略述した技術にもとづき、死後のＳＥＰ
および病理学的に非神経病の死後の対照から採取した脳をミクロトームによって
カットして得たパラフィン埋込片に、同一の抗体を使用した。
【０３１３】 以下に分析結果を要約した：
【０３１４】 灰色物質および各種のアンチＭＲＰ８，ＭＲＰ１４，ＧＭ２Ａ抗体に関して正
常な（無傷の）白色物質中に、“非ＳＥＰ”脳およびＳＥＰ脳のマーキングはな
かった。この免疫組織化学的プロセスにおいて、不特定の反応性にもとづき、ア
ンチＳａｐｏｃｉｎｅＢ抗体に関する結果は、判断できなかった。
【０３１５】 他方、ＳＥＰ脳のプレートゾーンに下記が認められた：
【０３１６】 ‐マクロファージ細胞およびミクログリア細胞中のアンチＭＲＰ１４反応性は
、脱髄ゾーン（プレート）の全範囲にわたって比較的均一な分布を有する，
【０３１７】 ‐より低い（低頻度の）アンチＭＲＰ８反応性は、本質的に、脈管周囲のリン
パ性浸潤液に起因する、
【０３１８】 ‐プレートゾーンの特殊な密度のマクロファージおよび小膠細胞中の明確なア
ンチＧＭ２Ａ反応性は、プレートの周縁に“神経膠障壁”を校正する。従って、
脱髄ゾーンには、任意の星芽細胞のマーキングが認められた。
【０３１９】 これらの多様な観察から明らかな如く、上澄液中にグリオ毒性を生成するＳＥ
Ｐ単核細胞の培養体およびＳＥＰ脳内に脱髄プレートを形成するゾーンには、タ
ンパク質ＭＲＰ１４およびＧＭ２Ａの特殊な高度発現が存在する。従って、かく
して、異常な共発現とグリオ毒性と脱髄障害との間の一致の現実性が証明される
。
【０３２０】 更に、ＳＥＰのコンテキスト（ｃｏｎｔｅｘｔｅ），血液のマクロファージ細
胞および脳細胞中の異常なその生成から明らかな如く、ＳＥＰの病変作用および
炎症作用をその量と関連させるため、生物学的液体中のその検量実施に依拠する
。
【０３２１】 実施例２１：Ｔ細胞の増殖によるＴ細胞の活性の測定（Ｓｒｅｄｎｉら，１９
８１） 初期の培養媒体中に存在する痕跡のＩＬ２を除去するため、培養媒体でＴ細胞
を２回洗浄した。抗原のプレゼンテーション細胞として把握されるリンパ細胞Ｂ
（ＥＢＶ‐ＬＣＬ）または単球細胞／マクロファージを、１００００ｒｄで照射
し、培養媒体（ＲＰＭＩ）で２回洗浄した。２・１０4のＴ細胞（２・１０5細胞
／ｍｌ）および自動的に照射された２・１０4のＢ細胞（２・１０5細胞／ｍｌ）
を、マイクロピット内で、抗原を増殖する濃度範囲において、最終容積が２００
μｌになるよう、一緒に培養した。３７℃において４８ｈ培養後、３Ｈ‐チミジ
ン１μＣｉを含むＲＰＭＩ媒体５０μｌを各ピットに添加した。独自に分離され
るＴ細胞は、ＤＮＡ内で加水分解されたチミジンを含む。１８ｈ培養後、各マイ
クロピットの細胞をガラスウールペレット上に吸引、捕集した。細胞の浸透分解
後、ＤＮＡに組込まれた放射能をペレット（ｃｅｌｌ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ Ｉ
ｎｏｔｅｃｈ）に吸収させた。乾燥した各ペレットを、シンチレーター２ｍｌを
含むプラスチック管内に設置した；各ペレットに吸収された放射能をβ‐液体シ
ンチレーションカウンタ（ＬＫＢＲａｃｋｂｅｔａ １２１７）で定量した。ｃ
ｐｍ／培養体の算術平均値で示した（‘ｃｐｍ＝ショット／ｍｉｎ’）。
【０３２２】 実施例２２：ペプチドと組織適合分子との間の関連性の検知プロトコル（ＣＭ
Ｈ１に固定されるペプチドによって形質変換されたＡＰＣアプローチ） １）材料： 組織適合分子のソースは、実際、２つの基本的タイプ、即ち、突然変異細胞お
よび精製した組織適合分子である。
【０３２３】 使用した突然変異細胞は、リオフォームＴ ＣＥＭおよびリオフォームＢ７２
１．１７４の融合によって生成された系列Ｔ１のバリエーションであるヒトのＴ
２細胞である（Ｓａｌｔｅｒら，Ｅｍｂｏ Ｊ １９８６，５：９４３‐９４９
）。ペプチドの輸送体を除去したこの細胞は、外因性ペプチドを受容できる、ペ
プチドを含まないクラスＩの分子の重い鎖を含む。
【０３２４】 ＥＢＶによって形質変換したヒトのＢ細胞の系列からアフィニイティークロマ
トグラフィーによって精製したクラスＩの組織適合分子も使用できる。この場合
、内在性ペプチドを１，５Ｍウレアおよび１２，５ｍＭ水酸化ナトリウム（ｐＨ
１１，７）で４℃において１ｈ処理によって除去し、次いで、脱塩カラム（ＰＤ
ＬＯ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によって上記媒体を除去した。再結合を容易化する
ため２μｇ／ｍｌのＢ２ｍの存在下で、０，０５％トゥイーン２０と、２ｍＭＥ
ＤＴＡと、０，１％ＮＰ４０と、６ｍＭＣＨＡＰＳとを含む緩衝液ＰＢＳ中の被
検ペプチドに、組織適合細胞を再統合させた（Ｇｎｊａｔｉｃら、Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ １９９５ ２５：１６３８‐１６４２）。
【０３２５】 テストしたペプチドは、一般に、８‐１０（好ましくは、１１または１２）の
残基を有する。ペプチドは、Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ（ストラスブルグ）またはＣｈ
ｉｒｏｎ ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ（ビクトリアネオーストラリヤ）によって合成し
た。ペプチドは、バリエーションを１００μＭから０，１ｎＭに濃縮するのに使
用した。
【０３２６】 ２）統合プロトコル（Ｃｏｎｎａｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９４ ２４
：７７７；Ｃｏｕｉｌｌｉｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９５ ２５：７２８
‐７３２）
【０３２７】 マイクロエッペンドルフ管に分配した容積６４μｌの８，１０５（アリコート
）の細胞を、１０ｍＭＰＢＳ，１％ＮＰ４０（ｐＨ７，５），プロテアーゼ阻害
剤（１ｍＭＰＭＳＦ，１００μＭインドアセトアミド，２μｇ／ｍｌアプロチニ
ン，１０μＭロイペプチン，１０μＭペブスタチンおよび１０μｇ／ｍｌトリプ
シン阻害剤）を含む分解緩衝液と統合した。分解は、被検ペプチドの存在下で、
３７℃において３０ｍｉｎまたは１ｈ行った。４℃において１５０００ｒｐｍの
遠心分離によって未溶解材料を除去した後、０，０５％トゥイーン２０と、３ｍ
Ｍアジ化ナトリウムと，１ｍＭ ＰＭＳＦと，ウシの１０ｍｇ／ｍｌアルブミン
とを含むＰＢＳ１４０μｌを上澄液に加えた。ペプチドのプレゼンテーションに
適し且つ細胞表面のコンホメーションに類似したコンホメーションを有する組織
適合細胞を識別するモノクロナール抗体（１０μｇ／ｍｌＰＢＳ）をあらかじめ
被覆したＮｕｎｃ（Ｍａｘｉｓｏｒｂ）タイプの微小滴定プレートの２つのピッ
ト内で、４℃において２０ｈ、各試料を培養した。試料採取前に、ＰＢＳトゥイ
ーン中で、抗体を被覆したプレートをウシの１０ｍｇ／ｍｌアルブミンであらか
じめ飽和させた。組織適合分子の統合を検知できる第２抗体をＢ２ｍへ向けた。
第２抗体を、ビオチン（ＮＨＳ‐ＬＣビオチン，Ｐｉｅｒｅ）またはアルカリ性
ホスファターゼ（Ｐ５５２，Ｓｉｇｍａ）に結合させ、３７℃において１ｈ，２
μｇ／ｍｌで培養した。ビオチンの使用の場合、アルカリ性ホスファターゼ（Ｅ
‐２６３６，Ｓｉｇｍａ）と結合させたストレプトアビジンによって２０‐２５
℃において４５ｍｉｎの培養を行った。１ｍＭ ＭｇＣｌ2を含む５０ｍＭジエ
タノールアミン（ｐＨ９，５）中で、１００μＭの４‐メチルウンベリフェリル
ホスフェートを基体として使用して、アルカリ性ホスファターゼの活性を測定し
た。細胞蛍光定量法によって、３４０／４６０ｎｍにおいて測定を行った。
【０３２８】 ３）錯体ＨＬＡ／ペプチドの安定性： 上記錯体の安定性を検討した。なぜならば、この安定性は、抗原の良好なプレ
ゼンテーションおよびＴ２細胞の誘導の条件をなすからである。このため、精製
ずみＨＬＡまたはＴ２細胞の分解体を使用した。精製ずみＨＬＡによって、（２
に記載の如く）内在性ペプチドを除去し、次いで、エッペンドルフ管中で、３７
℃において、数分から数日の範囲の多様な時間にわたって、被検ペプチドを生成
させた。（２に記載の如く）９６ピット・プレートにおいてアンチＨＬＡ抗体に
よって、３７℃において１ｈ、次ぎの培養段階を実施した。すべてのプロテアー
ゼ阻害剤を加えた後、Ｔ２細胞の分解体によって、同じく、３７℃においてすべ
ての培養を行った。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 タンパク質ＧＭ２ＡＰのアミノ酸のシークェンスおよびアンチペ
プチドＧＭ２ＡＰ抗体の調製に使用されるペプチドの強調した局在を示す図面で
ある。
【図２】 タンパク質ＭＲＰ１４のアミノ酸のシークェンスおよびアンチペ
プチドＭＲＰ１４抗体の調製に使用されるペプチドの強調した局在を示す図面で
ある。
【図３】 タンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂのアミノ酸のシークェンスおよ
びアンチペプチドＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂ抗体の調製に使用されるペプチドの強調
した局在を示す図面である。
【図４】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質ＭＲＰ８の測定値（縦軸：ｎｇ／ｍｌ）を示す図面である（ｎは、カテゴリ
によってテストした尿数を表す）。
【図５】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質ＭＲＰ１４の測定値（縦軸：ｎｇ／ｍｌ）を示す図面である（ｎは、カテゴ
リによってテストした尿数を表す）。
【図６】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質ＭＲＰ８／１４の測定値（縦軸：ｎｇ／ｍｌ）を示す図面である（ｎは、カ
テゴリによってテストした尿数を表す）。
【図７】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質ＭＲＰ８，ＭＲＰ１４，ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４の測定値（縦軸：ｎｇ／ｍｌ
）を示す図面である（ｎは、カテゴリによってテストした尿数を表す）。
【図８】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質ＧＭ２ＡＰの測定値（縦軸：ｎｇ／ｍｌ）を示す図面である（ｎは、カテゴ
リによってテストした尿数を表し、ＭＳは、ＳＥＰを表し、ＯＮＤは、ＡＭＮを
表し、Ｈｅａｌｔｈｙは、健康と想定された対照者（ＴＳ）からの採取数を表す
）。
【図９】 多発硬化症（ＳＥＰ）に冒された患者の尿、他の神経疾患（ＡＭ
Ｎ）に冒された患者の尿および健康と考えられる対照者（ＴＳ）の尿中のタンパ
ク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの測定値（縦軸：μｇ／ｍｌ）を示す図面である（ｎ
は、カテゴリによってテストした尿数を表し、ＭＳは、ＳＥＰを表し、ＯＮＤは
、ＡＭＮを表し、Ｈｅａｌｔｈｙは、健康と想定された対照者（ＴＳ）からの採
取数を表す）。
【図１０】 ＳＥＰ患者、健康と想定される対照者および他の神経疾患に冒
された患者の尿試料中のタンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂ（縦軸：μｇ／ｍｌ）
およびＧＭ２ＡＰ（横軸：ｎｇ／ｍｌ）の共検知結果および２つのタンパク質の
比率の間に認められた関係を示す図面である。
【図１１】 （Ａ）漸次的寛解の形のＳＥＰ患者の尿中のタンパク質ＧＭ２
ＡＰの測定値（細い曲線）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％とし
て示したグリオ毒性（太い曲線）を示す図面である。（Ｂ）漸次的寛解の形のＳ
ＥＰ患者の尿中のタンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの測定値（μｇ／ｍｌ）（細
い曲線）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として示したグリオ毒
性（太い曲線）を示す図面である。
【図１２】 漸次的寛解の形のＳＥＰ患者の尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰの
濃度およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度の積（ｎｇ×μｇ／ｍｌ2）（細い曲線
）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として示したグリオ毒性（太
い曲線）を示す図面である。
【図１３】 （Ａ）漸次的寛解の形のＳＥＰ患者の尿中のタンパク質ＧＭ２
ＡＰの測定値（ｎｇ／ｍｌ）（細い曲線）およびＭＴＴテストによって求めた致
死細胞の％として示したグリオ毒性（太い曲線）を示す図面である。（Ｂ）漸次
的寛解の形のＳＥＰ患者の尿中のタンパク質Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの測定値（μ
ｇ／ｍｌ）（細い曲線）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として
示したグリオ毒性（太い曲線）を示す図面である。
【図１４】 漸次的寛解の形のＳＥＰ患者の尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰの
濃度およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度の積（ｎｇ×μｇ／ｍｌ2）（細い曲線
）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として示したグリオ毒性（太
い曲線）を示す図面である。
【図１５】 ＳＥＰ患者および対照者の尿中のタンパク質ＧＭ２ＡＰの濃度
（ｎｇ／ｍｌ）（横軸）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として
示したグリオ毒性（縦軸）との間の関係を示す図面である。
【図１６】 ＳＥＰ患者および対照者の尿中のＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度
（μｇ／ｍｌ）（横軸）およびＭＴＴテストによって求めた致死細胞の％として
示したグリオ毒性（縦軸）との間の関係を示す図面である。
【図１７】 タンパク質ＧＭ２ＡＰの濃度およびＳａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃
度の積（ｎｇ×μｇ／ｍｌ2）（横軸）およびＭＴＴテストによって求めた致死
細胞の％として示したグリオ毒性（縦軸）との間の関係を示す図面である。
【図１８】 ＧＭ２ＡＰの濃度（ｎｇ／ｍｌ‐左側の縦軸）とＳａｐｏｃｉ
ｎｅ Ｂの濃度（μｇ／ｍｌ‐右側の縦軸）とＭＴＴテストによって求めた致死
細胞の％として示したグリオ毒性（横軸）との間の関係を示す図面である。（求
めた２つの関係直線をグラフに示した。太い線は、Ｓａｐｏｃｉｎｅ Ｂの濃度
に関し、黒く細い線は、ＧＭ２ＡＰの濃度を表す。）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/16 Ａ６１Ｐ 25/28 ４Ｈ０４５ 25/28 29/00 １０１ 29/00 １０１ 37/00 37/00 43/00 １０５ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 37/02 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マリ−エレーヌ・シャルル フランス・Ｆ−69420・コンドリュー・ア レ・ドゥ・ラ・ランペルト・３ (72)発明者 カリーヌ・マルキュ フランス・Ｆ−69530・ブリネ・リュ・ デ・ロンズィエール・９ (72)発明者 リセ・サントロ フランス・Ｆ−69260・シャルボニエー ル・レ・バン・アヴニュ・ベルジェロン・ 47 (72)発明者 エルヴェ・ペロン フランス・Ｆ−69005・リヨン・リュ・ド ゥ・ボイエー・15 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA36 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA02 CA09 CA20 DA03 GA11 HA11 HA17 4B063 QA01 QA05 QA19 QQ08 QQ43 QQ53 QQ79 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR55 QR62 QS16 QS25 QS32 QS34 QS36 QX02 QX10 4C084 AA07 BA01 BA02 BA08 BA20 BA21 BA22 BA23 BA44 CA18 DA35 NA14 ZA021 ZA151 ZA161 ZA891 ZA961 ZB021 ZB051 ZB151 ZB211 4C086 AA01 AA02 AA03 CB22 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA15 ZA16 ZA89 ZA96 ZB02 ZB05 ZB15 ZB21 4H045 AA10 BA10 BA53 CA40 EA20 EA50

Claims (64)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
    する病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防
    又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメ
    ントを含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパク
    質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号
    ３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号
    １０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１
    ５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０
    、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、
    配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９、及びペプチド配
    列番号１‐配列番号８及び配列番号１０-配列番号２９のいずれか１つと少なく
    とも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同
    一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質
    前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前
    駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフラ
    グメントに対応しているタンパク質の中から選択されている、使用。
  2. 【請求項２】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
    する病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防
    又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメ
    ントを各々含んで成る少なくとも２つのポリペプチドの組合せ使用において、前
    記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１-配列番号８
    及び配列番号１０、配列番号２９の中から選ばれたペプチド配列、及びペプチド
    配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０-配列番号２９のいずれか１つと少
    なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％
    の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパ
    ク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物
    質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はその
    フラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されている、使用。
  3. 【請求項３】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
    する病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防
    又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメ
    ントを含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパク
    質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号２、配列番号４、配列番号
    ８、配列番号１７及び配列番号２４、及びペプチド配列配列番号２、配列番号４
    、配列番号８、配列番号１７及び配列番号２４のいずれか１つと少なくとも７０
    ％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈
    するペプチド配列に対応しているタンパク質の中から選択されている、使用。
  4. 【請求項４】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
    する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後
    診断、予防又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つ
    のフラグメントを各々含んで成る５つのポリペプチドの組合せ使用において、前
    記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号２、配列番号４
    、配列番号８、配列番号１７及び配列番号２４、及びペプチド配列配列番号２、
    配列番号４、配列番号８、配列番号１７、配列番号２４のいずれか１つと少なく
    とも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同
    一性を呈するペプチド配列に対応しているタンパク質の中から選択されている、
    請求項３に記載の使用。
  5. 【請求項５】 前記ポリペプチドのペプチド配列が、配列番号２、配列番号
    ４、配列番号８、配列番号１７及び配列番号２４のいずれか１つから選択された
    １つの配列を含んで成る、請求項１-４のいずれか１項に記載の使用。
  6. 【請求項６】 前記ポリペプチドのペプチド配列が、配列番号２、配列番号
    ４、配列番号８、配列番号１７及び配列番号２４のいずれか１つから選択された
    １つの配列で構成されている、請求項１-４のいずれか１項に記載の使用。
  7. 【請求項７】 ペプチドが配列番号５８-６５という番号のついた配列のう
    ちの少なくとも１つの全部又は一部を含んで成ることを特徴とする、免疫原性ペ
    プチドの調製のための請求項１又は請求項３に記載のポリペプチドフラグメント
    の使用。
  8. 【請求項８】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随
    する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後
    診断、予防又は治療用組成物を得るための、タンパク質の少なくとも１つのヌク
    レオチドフラグメントの使用において、ここで前記ヌクレオチドフラグメントは
    、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントについてコードするフラグ
    メントの中から選択されており、前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチ
    ド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配
    列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１
    ２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７
    、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、
    配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配
    列番号２８及び配列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配
    列番号１０-配列番号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少な
    くとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、
    前記フラグメントの相補的フラグメント及びペルルカン、レチノール結合血漿タ
    ンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦
    活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又は
    そのフラグメントについてコードするフラグメントに対応しているタンパク質の
    中から選択されている、使用。
  9. 【請求項９】 前記ヌクレオチドフラグメントが前記タンパク質についてコ
    ードすることを特徴とする請求項８に記載の使用。
  10. 【請求項１０】 未変性状態での前記タンパク質のペプチド配列が、配列番
    号１-８及び配列番号１０-２９のうちのいずれか１つの中から選ばれた１つの配
    列及び、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧ
    Ｍ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じ
    タンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフラグメントで構成されている
    ことを特徴とする請求項９に記載の使用。
  11. 【請求項１１】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予
    後診断、予防又は治療用組成物を得るための、少なくとも１つのヌクレオチドフ
    ラグメントの使用において、前記フラグメントが、配列番号３０、配列番号３１
    、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、
    配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配
    列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６及び配
    列番号４７、配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０、配列番号５１、配
    列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列
    番号５７、配列番号６７、配列番号６６、配列番号６９、配列番号７０及び配列
    番号７１のうちのいずれか１つ及びその相補的配列から選ばれた核酸配列のフラ
    グメントである、使用。
  12. 【請求項１２】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予
    後診断、予防又は治療用組成物を得るための請求項１-１１のいずれか１項に記
    載のポリペプチド又はヌクレオチドフラグメントの特異的リガンドの使用。
  13. 【請求項１３】 変性疾患及び／又は自己免疫疾患が多発性硬化症であるこ
    とを特徴とする請求項１-１２のいずれか１項に記載の使用。
  14. 【請求項１４】 生体標本中の変性疾患及び／又は自己免疫疾患に結びつけ
    られる少なくとも１つのタンパク質を検出するための方法において、少なくとも
    １つのポリペプチドの少なくとも１つの特異的リガンドと生体標本を接触させる
    こと、ここで前記ポリペプチドが１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメ
    ントを含んで成り、該タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が配列番
    号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番
    号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３
    、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、
    配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配
    列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配
    列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０-配列番
    号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして
    有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、
    レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリン
    Ｂ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属
    するペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択
    されていること、及びその後、前記ポリペプチド及び前記リガンドの間の複合体
    の形成を検出することを特徴とする、方法。
  15. 【請求項１５】 前記リガンドがモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体
    、レセプタ、酵素活性基質又は前記ポリペプチドを補因子とする酵素であること
    を特徴とする請求項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 生体標本中の変性疾患及び／又は自己免疫疾患に結びつけ
    られる少なくとも１つのリガンドを検出するための方法において、１つのタンパ
    ク質の少なくとも１つのフラグメントを含む少なくとも１つのポリペプチドと生
    体標本を接触させ、該タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が配列番
    号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番
    号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３
    、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、
    配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配
    列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配
    列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号８及び配列番号１０-配列番
    号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして
    有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、
    レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリン
    Ｂ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属
    するペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択
    されていること、及びその後、前記ポリペプチド及び前記リガンドの間の複合体
    の形成を検出することを特徴とする方法。
  17. 【請求項１７】 リガンドが、抗体、レセプタ、酵素活性基質又は前記ポリ
    ペプチドを補因子とする酵素であることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記ポリペプチドの配列が、配列番号１-８及び配列番号
    １０-２９のいずれか１つの中から選択されたペプチド配列を含んで成ることを
    特徴とする請求項１４-１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記ポリペプチドの配列が、配列番号１-８及び配列番号
    １０-２９のいずれか１つの中から選択されたペプチド配列で構成されているこ
    とを特徴とする請求項１４-１７のいずれか１項に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 生体標本が尿、脳脊髄液又は血清であることを特徴とする
    請求項１４-１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 変性疾患及び／又は自己免疫疾患が多発性硬化症であるこ
    とを特徴とする請求項１４-２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 そのペプチド配列が配列番号９に対応する１つのタンパク
    質の少なくとも１つのフラグメントを含んで成り、前記フラグメントが配列番号
    ８という基準配列との関係において少なくとも１つの突然変異を含んで成ること
    を特徴とするポリペプチド。
  23. 【請求項２３】 配列番号８という基準配列との関係において少なくとも２
    つの突然変異を含んで成ることを特徴とする請求項２２に記載のポリペプチド。
  24. 【請求項２４】 配列番号６８のアミノ酸配列ＦＳＷＤＮＣＦＥＧＫＤＰＡ
    ＶＩＲ及び配列番号７２のアミノ酸配列ＹＳＬＰＫＳＥＦＡＶＰＤＬＥＬＰを含
    んで成るポリペプチドの中から選択されることを特徴とする請求項２２に記載の
    ポリペプチド。
  25. 【請求項２５】 そのペプチド配列が配列番号９に対応するタンパク質を含
    んで成ることを特徴とする請求項２２-２４のいずれか１項に記載のポリペプチ
    ド。
  26. 【請求項２６】 そのペプチド配列が配列番号９に対応するタンパク質で構
    成されていることを特徴とする請求項２２-２５のいずれか１項に記載のポリペ
    プチド。
  27. 【請求項２７】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態を検出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予
    後診断、予防又は治療用組成物を得るための、請求項２２-２６のいずれか１項
    の少なくとも１つのポリペプチドの使用。
  28. 【請求項２８】 請求項２２-２６のいずれか１項に記載のポリペプチドが
    請求項１-５のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドとの混合状
    態で使用されることを特徴とする請求項２６に記載の使用。
  29. 【請求項２９】 生体標本中の変性疾患及び／又は自己免疫疾患に結びつけ
    られた少なくとも１つのリガンドを検出するための方法において、請求項２２-
    ２６のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドと生体標本を接触さ
    せ、次に前記ポリペプチドとリガンドの間の複合体形成を検出することを特徴と
    する方法。
  30. 【請求項３０】 請求項２２-２６のいずれか１項に記載の１つのポリペプ
    チド及び請求項１-５のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドと
    生体標本を接触させることを特徴とする請求項２９に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 前記リガンドが抗体、レセプタ、酵素活性基質又は前記ポ
    リペプチドを補因子とする酵素であることを特徴とする請求項２９又は３０に記
    載の方法。
  32. 【請求項３２】 前記ポリペプチドの少なくとも１つの特異的リガンドと生
    体標本を接触させ、次に前記ポリペプチドと前記リガンドの間の複合体の形成を
    検出することを特徴とする、生体標本中の請求項２２-２６のいずれか１項に記
    載の少なくとも１つのポリペプチドを検出する方法。
  33. 【請求項３３】 前記リガンドがモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体
    、レセプタ、酵素活性基質又は前記ポリペプチドを補因子とする酵素であること
    を特徴とする請求項３２に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 請求項３１-３３のいずれか１項に記載のリガンド及び請
    求項１-５のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドの少なくとも
    １つの特異的リガンドと生体標本を接触させ、次に前記ポリペプチドとその特異
    的リガンドの間の複合体の形成を検出することを特徴とする請求項３０又は３１
    に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 リガンドがモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、レ
    セプタ、酵素活性基質又は前記ポリペプチドを補因子とする酵素であることを特
    徴とする請求項３４に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 請求項２２-２６のいずれか１項に記載のポリペプチドに
    ついてコードすることを特徴とするヌクレオチドフラグメント。
  37. 【請求項３７】 変性疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を検
    出、予後診断、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予防又は治
    療用組成物を得るためのヌクレオチドフラグメントの使用において、前記ヌクレ
    オチドフラグメントが、場合によって請求項８-１１のいずれか１項に記載の少
    なくとも１つのヌクレオチドフラグメントと結びつけた状態にある請求項３５に
    記載のヌクレオチドフラグメント、又はこれらのヌクレオチドフラグメントの相
    補的フラグメントである、使用。
  38. 【請求項３８】 生体標本が尿、脳脊髄液又は血清であることを特徴とする
    請求項２９-３５のいずれか１項に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 変性疾患及び／又は自己免疫疾患が多発性硬化症であるこ
    とを特徴とする請求項２９-３６のいずれか１項に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 請求項１-５のいずれか１項又は請求項２２-２６のいずれ
    か１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドを検出するための方法において、
    変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態を呈す
    る患者の生体流体の標本を採取し、場合によっては前記生体流体標本の精製後に
    、質量分析によって生体流体から得られた質量プロフィールを分析し、基準質量
    プロフィールと比較する、方法。
  41. 【請求項４１】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態を検出、予防又は治療することを目的とする診断、予後診断、予
    防又は治療用組成物を得るための、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグ
    メントを含んで成る少なくとも１つのポリペプチドの使用において、前記タンパ
    ク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号８、配列番号９、配列番
    号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号
    １５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２
    ０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５
    、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９、及びペプチド
    配列配列番号８-配列番号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは
    少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配
    列、及びガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前
    駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属し、かつ好ましくは配列番号８
    、９、１７及び２４のペプチド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパ
    ク質の中から選択されている、使用。
  42. 【請求項４２】 ペプチド配列が、ガングリオシドＧＭ２及びサポシンＢの
    賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又
    はそのフラグメントである、請求項４１に記載の使用。
  43. 【請求項４３】 グリオトキシン活性検出の使用に結びつけられる、請求項
    ４１又は４２のいずれか１項に記載の使用。
  44. 【請求項４４】 病的状態を検出又は予防するため請求項４１-４３のいず
    れか１項に記載の少なくとも１つのポリペプチドを秤量する診断又は予後診断方
    法において、秤量により、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患
    を表わす閾値に比較される濃度値を得ることが可能になる、方法。
  45. 【請求項４５】 閾値が尿標本についてＥＬＩＳＡ検定により得られ、この
    値は ・ ＧＭ２ＡＰ８４抗体について、ガングリオシドＧＭ２の賦活物質前駆体に関
    し４００ｎｇ／ｍｌであり、 ・ ＳＡＰＢ８４抗体について、サポシンＢに関し２μｇ／ｍｌである、 請求項４４に記載の方法。
  46. 【請求項４６】 病的状態を予防するため請求項４１-４３のいずれか１項
    に記載の少なくとも１つのポリペプチドを検出する診断又は予後診断方法におい
    て、検出が、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に罹患してい
    る可能性のある患者の細胞内又はその上清中で行なわれる、方法。
  47. 【請求項４７】 検出が、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫
    疾患に罹患している可能性のある患者に由来する単球又はマクロファージ上又は
    これらの細胞の上清中で行なわれる、請求項４６に記載の方法。
  48. 【請求項４８】 ６-１２日間の培養期間の後、好ましくは９日後、培養中
    の細胞上又はその上清中で検出を行なう、請求項４６又は４７のいずれか１項に
    記載の方法。
  49. 【請求項４９】 検出は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｅｘ ｖｉｖｏの細胞上好ま
    しくは、変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に罹患している可
    能性のある患者の脳内で単球又はマクロファージについて実施される、請求項４
    ６又は４７のいずれか１項に記載の方法。
  50. 【請求項５０】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患が多
    発性硬化症或いはこの病気の１形態（進行性、弛張性、弛張性‐進行性）又は活
    動期（増悪）であることを特徴とする請求項４１-４９のいずれか１項に記載の
    使用又は方法。
  51. 【請求項５１】 治薬剤の効能をテストするための１つのタンパク質の少な
    くとも１つのフラグメントを含む少なくとも１つのポリペプチドの使用において
    、前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１、配列番
    号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番
    号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３
    、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、
    配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配
    列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配
    列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号２９のいずれか１つと少な
    くとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％の
    同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク
    質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質
    前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフ
    ラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されている、使用。
  52. 【請求項５２】 多発性硬化症といったような変性疾患及び／又は神経疾患
    及び／又は自己免疫疾患の治療を目的とする薬学組成物の調製のための、１つの
    タンパク質の少なくとも１つのフラグメントを含んで成る少なくとも１つのポリ
    ペプチドの使用において、前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列
    が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号
    ６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列
    番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番
    号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号
    ２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２
    ７、配列番号２８及び配列番号２９、及びペプチド配列配列番号１-配列番号２
    ９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利
    には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、ペルルカン、レチ
    ノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリン及び
    サポシンの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプ
    チド配列又はそのフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されてい
    る、使用。
  53. 【請求項５３】 ポリペプチドが配列番号２、４、８、９、１７、２４の中
    から選択されていることを特徴とする請求項５１又は５２に記載の使用。
  54. 【請求項５４】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態のための治療剤の効能をテストすることを目的とする、少なくと
    も１つのヌクレオチドフラグメントの使用において、前記ヌクレオチドフラグメ
    ントが、タンパク質の少なくとも１つのフラグメントについてコードするフラグ
    メント〔前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番号１、
    配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、
    配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番
    号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号
    １８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２
    ３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８
    及び配列番号２９、ペプチド配列配列番号１-配列番号２９のいずれか１つと少
    なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８％
    の同一性を呈するペプチド配列の中から選択される〕、及び前記フラグメントの
    相補的フラグメント及びペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガ
    ングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中か
    ら選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフラグメントに
    ついてコードするフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択されてい
    る、使用。
  55. 【請求項５５】 組換え型タンパク質及び／又は請求項５４に記載のヌクレ
    オチドフラグメントの全部又は一部によってコードされるタンパク質の、変性疾
    患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付随する病的状態のための治療
    剤の効能をテストすることを目的とする使用。
  56. 【請求項５６】 多発性硬化症といったような変性疾患及び／又は神経疾患
    及び／又は自己免疫疾患の治療を目的とする薬学組成物の調製のための少なくと
    も１つのヌクレオチドフラグメントの使用において、前記ヌクレオチドフラグメ
    ントが、１つのタンパク質の少なくとも１つのフラグメントについてコードする
    フラグメント〔前記タンパク質は、未変性状態でのそのペプチド配列が、配列番
    号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番
    号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、
    配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配
    列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列
    番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番
    号２８及び配列番号２９、ペプチド配列配列番号１-番号２９のいずれか１つと
    少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％そして有利には少なくとも９８
    ％の同一性を呈するペプチド配列の中から選択される〕、及び、前記フラグメン
    トの相補的フラグメント及びペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前駆体
    、ガングリオシドＧＭ２、カルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の
    中から選ばれた同じタンパク質系統群に属するペプチド配列又はそのフラグメン
    トについてコードするフラグメントに対応しているタンパク質の中から選択され
    ている、使用。
  57. 【請求項５７】 組換え型タンパク質及び／又は請求項５６に記載のヌクレ
    オチドフラグメントの全部又は一部によりコードされるタンパク質の、多発性硬
    化症といったような変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患の治療
    を目的とする薬学組成物の調製のための使用。
  58. 【請求項５８】 前記ヌクレオチドフラグメントが前記タンパク質について
    コードすることを特徴とする請求項５４又は５６に記載の使用。
  59. 【請求項５９】 未変性状態での前記タンパク質のペプチド配列が、配列番
    号１-２９のいずれか１つの中から選択された１つの配列、ペプチド配列配列番
    号１-配列番号２９のいずれか１つと少なくとも７０％、好ましくは少なくとも
    ８０％そして有利には少なくとも９８％の同一性を呈するペプチド配列、及び、
    ペルルカン、レチノール結合血漿タンパク質前駆体、ガングリオシドＧＭ２、カ
    ルグラヌリンＢ及びサポシンＢの賦活物質前駆体の中から選ばれた同じタンパク
    質系統群に属するペプチド配列又はそのフラグメントで構成されていることを特
    徴とする請求項５８に記載の使用。
  60. 【請求項６０】 ポリペプチドが配列番号２、４、８、９、１７、２４の中
    から選択されることを特徴とする請求項５９に記載の使用。
  61. 【請求項６１】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患に付
    随する病的状態のための治療剤の効能をテストする目的での、少なくとも１つの
    ヌクレオチドフラグメントの使用において、前記フラグメントが、配列番号３０
    、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、
    配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配
    列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列
    番号４６及び配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９及び配列番号５０、配
    列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列
    番号５６、配列番号５７、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６９、配列番
    号７０及び配列番号７１のうちのいずれか１つ及びその相補的配列から選ばれた
    核酸配列のフラグメントである、使用。
  62. 【請求項６２】 多発性硬化症といったような変性疾患及び／又は神経疾患
    及び／又は自己免疫疾患の治療を目的とする薬学的組成物の調製のための、少な
    くとも１つのヌクレオチドフラグメントの使用において、前記フラグメントが、
    配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配
    列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列
    番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番
    号４５、配列番号４６及び配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９及び配列
    番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番
    号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号６６、配列番号６７、配列番号
    ６９、配列番号７０及び配列番号７１のうちのいずれか１つ及びその相補的配列
    から選ばれた核酸配列のフラグメントである、使用。
  63. 【請求項６３】 核酸配列が配列番号３０、３１、４２、５３の中から選択
    されていることを特徴とする請求項６１又は６２に記載の使用。
  64. 【請求項６４】 変性疾患及び／又は神経疾患及び／又は自己免疫疾患の予
    防及び／又は治療のための組成物の調製を目的とするリコリンの使用。
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