JP2003279578A - 癌の診断支援方法及びそのキット - Google Patents
癌の診断支援方法及びそのキットInfo
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- JP2003279578A JP2003279578A JP2002084873A JP2002084873A JP2003279578A JP 2003279578 A JP2003279578 A JP 2003279578A JP 2002084873 A JP2002084873 A JP 2002084873A JP 2002084873 A JP2002084873 A JP 2002084873A JP 2003279578 A JP2003279578 A JP 2003279578A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 この発明は、膀胱癌を含む特定の癌の診断を
支援するために、尿中の特定の腫瘍マーカーを検索する
方法及びそのキットを提供することを目的とする。 【解決手段】 本発明は、プロテインチップを用いて尿
路系腫瘍患者の尿中に特異的に見られるたんぱく質（分
子量８０３０）の検出を行う方法であって、サンプル尿
中の分子量約８３００の蛋白質のマーカーを検出するス
テップと、前記マーカー又は前記マーカーの量を可能性
のある癌と対応付けるステップと、を備える。
支援するために、尿中の特定の腫瘍マーカーを検索する
方法及びそのキットを提供することを目的とする。 【解決手段】 本発明は、プロテインチップを用いて尿
路系腫瘍患者の尿中に特異的に見られるたんぱく質（分
子量８０３０）の検出を行う方法であって、サンプル尿
中の分子量約８３００の蛋白質のマーカーを検出するス
テップと、前記マーカー又は前記マーカーの量を可能性
のある癌と対応付けるステップと、を備える。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、癌（特に膀胱
癌）の診断を支援する方法であって尿中の腫瘍マーカー
を検索する方法及びそのキットに関する。
癌）の診断を支援する方法であって尿中の腫瘍マーカー
を検索する方法及びそのキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】特定の腫瘍組織から血流などへ分泌され
る物質で，血清などで検出された場合，特定の腫瘍の存
在を示す腫瘍マーカーが知られている。腫瘍マーカーは
腫瘍組織ごとに固有の物質であることが多いので、腫瘍
マーカーを検出して癌の診断に役立てることが行われて
いる。
る物質で，血清などで検出された場合，特定の腫瘍の存
在を示す腫瘍マーカーが知られている。腫瘍マーカーは
腫瘍組織ごとに固有の物質であることが多いので、腫瘍
マーカーを検出して癌の診断に役立てることが行われて
いる。
【０００３】膀胱癌・腎臓癌など尿路系に関する腫瘍に
おいては、尿中に何らかの腫瘍関連物質が産生・分泌さ
れていることが期待される。今までも２次元電気泳動や
カラムクロマトグラフィーを用いて、尿中の腫瘍特異的
たんぱく質を検出する試みが行われているが、臨床的に
マーカーとして有用な物質を確定するには至っていな
い。
おいては、尿中に何らかの腫瘍関連物質が産生・分泌さ
れていることが期待される。今までも２次元電気泳動や
カラムクロマトグラフィーを用いて、尿中の腫瘍特異的
たんぱく質を検出する試みが行われているが、臨床的に
マーカーとして有用な物質を確定するには至っていな
い。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】この発明は、膀胱癌を
含む特定の癌の診断を支援するために、尿中の特定の腫
瘍マーカーを検索する方法及びそのキットを提供するこ
とを目的とする。具体的には、本発明は、プロテインチ
ップを用いて尿路系腫瘍患者の尿中に特異的に見られる
たんぱく質の検出を行うことを目的とする。
含む特定の癌の診断を支援するために、尿中の特定の腫
瘍マーカーを検索する方法及びそのキットを提供するこ
とを目的とする。具体的には、本発明は、プロテインチ
ップを用いて尿路系腫瘍患者の尿中に特異的に見られる
たんぱく質の検出を行うことを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、癌の診断を支
援する方法であって、患者のサンプル尿を用意するステ
ップと、前記サンプル尿中の分子量約７５００〜８５０
０の蛋白質のマーカーを検出するステップと、前記マー
カー又は前記マーカーの量を可能性のある癌と対応付け
るステップと、を備えるものである。
援する方法であって、患者のサンプル尿を用意するステ
ップと、前記サンプル尿中の分子量約７５００〜８５０
０の蛋白質のマーカーを検出するステップと、前記マー
カー又は前記マーカーの量を可能性のある癌と対応付け
るステップと、を備えるものである。
【０００６】前記マーカーは、例えば、分子量８０３０
の尿中蛋白を含む。この８０３０という値は測定誤差
（分子量+/-0.2%）の関係で所定の幅をもつ。例えば、
８０３０とは８０１６＋／−１６（８０００〜８０３
２）を意味する。本発明における分子量の数値（８０３
０以外の数値を含む）はこのような範囲をもつ。
の尿中蛋白を含む。この８０３０という値は測定誤差
（分子量+/-0.2%）の関係で所定の幅をもつ。例えば、
８０３０とは８０１６＋／−１６（８０００〜８０３
２）を意味する。本発明における分子量の数値（８０３
０以外の数値を含む）はこのような範囲をもつ。
【０００７】前記マーカーは、例えば、ユビキチンを含
む。
む。
【０００８】前記マーカーは、例えば、SaposinBを含
む。
む。
【０００９】分子量８０３０の尿中蛋白が検出されたと
き、膀胱癌と対応付けるようにしてもよい。
き、膀胱癌と対応付けるようにしてもよい。
【００１０】分子量８０３０の尿中蛋白が検出されたと
き、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む尿路系の
癌と対応付けるようにしてもよい。
き、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む尿路系の
癌と対応付けるようにしてもよい。
【００１１】前記マーカーを検出するために、例えばレ
ーザー脱着／イオン化質量分析法（Laser Desorption I
onization法）、好ましくは、SELDI TOF/MS（Surface
Enhanced Laser Desorption Ionization Time-of-fligh
t Mass Spectrometry）を用いる。
ーザー脱着／イオン化質量分析法（Laser Desorption I
onization法）、好ましくは、SELDI TOF/MS（Surface
Enhanced Laser Desorption Ionization Time-of-fligh
t Mass Spectrometry）を用いる。
【００１２】レーザー脱着／イオン化質量分析法（Lase
r Desorption Ionization法）は、吸着剤を含む基板を
用意するステップと、前記吸着剤にサンプルを接触させ
るステップと、前記基板からマーカーを脱離させイオン
化するとともに、質量分析計で脱離／イオン化されたマ
ーカーを検出するステップとを備える。SELDI TOF-MS
は、分析対象物に対して親和性のある表面を有する基板
を用意するステップと、前記親和性のある表面にサンプ
ルを添加するステップと、前記親和性のある表面に結合
していない物質を洗浄除去するステップと、前記親和性
のある表面にエネルギー吸収分子を添加するステップ
と、前記親和性のある表面に結合している物質にレーザ
ーを照射して脱離／イオン化して飛行時間を計測するこ
とにより分子量を測定するステップを含む。SELDI TOF
/MSの特徴は、チップ表面にタンパク質に対する親和性
を持たせておき、特定のタンパク質を吸着する点であ
る。吸着しなかったタンパク質やその他の不純物は洗浄
により取り除かれる。この後レーザーで脱離／イオン化
し飛行時間を測定して質量分析をすることで、タンパク
質の発現プロファイリング（どんな質量のタンパク質が
発現しているかを一度に見ること）ができる。これに対
してMALDIは表面に親和性がない。
r Desorption Ionization法）は、吸着剤を含む基板を
用意するステップと、前記吸着剤にサンプルを接触させ
るステップと、前記基板からマーカーを脱離させイオン
化するとともに、質量分析計で脱離／イオン化されたマ
ーカーを検出するステップとを備える。SELDI TOF-MS
は、分析対象物に対して親和性のある表面を有する基板
を用意するステップと、前記親和性のある表面にサンプ
ルを添加するステップと、前記親和性のある表面に結合
していない物質を洗浄除去するステップと、前記親和性
のある表面にエネルギー吸収分子を添加するステップ
と、前記親和性のある表面に結合している物質にレーザ
ーを照射して脱離／イオン化して飛行時間を計測するこ
とにより分子量を測定するステップを含む。SELDI TOF
/MSの特徴は、チップ表面にタンパク質に対する親和性
を持たせておき、特定のタンパク質を吸着する点であ
る。吸着しなかったタンパク質やその他の不純物は洗浄
により取り除かれる。この後レーザーで脱離／イオン化
し飛行時間を測定して質量分析をすることで、タンパク
質の発現プロファイリング（どんな質量のタンパク質が
発現しているかを一度に見ること）ができる。これに対
してMALDIは表面に親和性がない。
【００１３】本発明は、上記方法に用いるキットであっ
て、分子量約７５００〜８５００のいずれかの蛋白質に
対して親和性のある表面を含む基板と、サンプルを前記
基板に接触させ、前記基板により保持されたマーカーを
検出することによりマーカーを検出する指示書とを備え
るものである。
て、分子量約７５００〜８５００のいずれかの蛋白質に
対して親和性のある表面を含む基板と、サンプルを前記
基板に接触させ、前記基板により保持されたマーカーを
検出することによりマーカーを検出する指示書とを備え
るものである。
【００１４】
【発明の実施の形態】CEAをはじめとする血清腫瘍マー
カーは、診断・治療後の腫瘍モニタリング等において臨
床的に有用である。一方、膀胱癌や腎癌は尿路系におい
て発生するため、尿中に腫瘍関連物質が排出され、それ
が腫瘍マーカーになる可能性があるため以前より精力的
に研究が行われてきた。しかし、臨床的な有用性が確立
されているものは現時点ではない。
カーは、診断・治療後の腫瘍モニタリング等において臨
床的に有用である。一方、膀胱癌や腎癌は尿路系におい
て発生するため、尿中に腫瘍関連物質が排出され、それ
が腫瘍マーカーになる可能性があるため以前より精力的
に研究が行われてきた。しかし、臨床的な有用性が確立
されているものは現時点ではない。
【００１５】本発明の実施の形態では、プロテインチッ
プシステムを用いて尿中腫瘍マーカーの検索・同定を行
う。プロテインチップシステムは、蛋白質の発現、相互
作用、翻訳後修飾などの機能解析や、目的蛋白質の精製
・同定などを効率的に行うことを目的とするシステムで
ある。プロテインチップシステムは、蛋白質解析に適し
た様々な化学的性質を表面に持たせたプロテインチップ
と、測定に用いられるプロテインチップリーダ（飛行時
間型質量分析計（Time-of-Flight Mass Spectrometry：
TOF-MS））及び、測定・解析に使用するソフトウエアを
インストールしたコンピュータから構成される。血清や
尿、培養液、細胞破砕液など多くの蛋白質を含むサンプ
ルの中から、プロテインチップに対するアフィニティー
を利用して目的蛋白質を捕捉し、その質量数を測定す
る。ラベルやタグを使わず、チップ上で簡便に蛋白質の
解析ができ、少量のサンプルから短時間に結果を得るこ
とができる。
プシステムを用いて尿中腫瘍マーカーの検索・同定を行
う。プロテインチップシステムは、蛋白質の発現、相互
作用、翻訳後修飾などの機能解析や、目的蛋白質の精製
・同定などを効率的に行うことを目的とするシステムで
ある。プロテインチップシステムは、蛋白質解析に適し
た様々な化学的性質を表面に持たせたプロテインチップ
と、測定に用いられるプロテインチップリーダ（飛行時
間型質量分析計（Time-of-Flight Mass Spectrometry：
TOF-MS））及び、測定・解析に使用するソフトウエアを
インストールしたコンピュータから構成される。血清や
尿、培養液、細胞破砕液など多くの蛋白質を含むサンプ
ルの中から、プロテインチップに対するアフィニティー
を利用して目的蛋白質を捕捉し、その質量数を測定す
る。ラベルやタグを使わず、チップ上で簡便に蛋白質の
解析ができ、少量のサンプルから短時間に結果を得るこ
とができる。
【００１６】プロテインチップの種類について説明す
る。プロテインチップには大きく分けて２つの種類があ
る。主に発現解析や精製に用いるケミカルチップと、特
異的な結合（相互作用）を見るためのバイオロジカルチ
ップである。ケミカルチップは、疎水性、陽イオン交
換、陰イオン交換、金属イオン、順相のものを含む。バ
イオロジカルチップは、活性化型チップ、抗体、レセプ
ター、ＤＮＡを含む。バイオロジカルチップには、カル
ボニルジイミダゾールまたはエポキシの活性基を表面に
持つ２つのタイプがあり、抗体やレセプターなどをチッ
プ上に簡単に固定化して研究目的にあわせたチップを作
製することができる。抗体やレセプターはアミド結合で
チップ上に固定化され、相互作用解析のための解析用プ
ローブとして利用することができる。
る。プロテインチップには大きく分けて２つの種類があ
る。主に発現解析や精製に用いるケミカルチップと、特
異的な結合（相互作用）を見るためのバイオロジカルチ
ップである。ケミカルチップは、疎水性、陽イオン交
換、陰イオン交換、金属イオン、順相のものを含む。バ
イオロジカルチップは、活性化型チップ、抗体、レセプ
ター、ＤＮＡを含む。バイオロジカルチップには、カル
ボニルジイミダゾールまたはエポキシの活性基を表面に
持つ２つのタイプがあり、抗体やレセプターなどをチッ
プ上に簡単に固定化して研究目的にあわせたチップを作
製することができる。抗体やレセプターはアミド結合で
チップ上に固定化され、相互作用解析のための解析用プ
ローブとして利用することができる。
【００１７】図１に飛行時間型質量分析計の動作原理の
説明図を示す。図１（ａ）は飛行時間型質量分析計の概
略構造を示し、図１（ｂ）はセンサ６により得られる測
定結果を示す。図１（ａ）において、１はレーザー発振
器、２はレーザー光を特定のチップに照射するための光
学系（ミラー）、３は複数のプロテインチップを載せた
板、３ａは特定のプロテインチップでレーザー照射の対
象となるもの、４は装置が収納される真空容器、５は高
圧電源、６はセンサである。ａ〜ｅはレーザー照射によ
りイオン化され、高圧電源５によりセンサ６に向かって
加速された、プロテインチップ３ａ上の複数種類の蛋白
質の飛行の様子を示す。蛋白質ａ〜ｅがレーザー照射に
より同時に飛行を開始するが、その質量の違いにより飛
行速度はそれぞれ異なる。図１（ａ）において質量の最
も小さな蛋白質ｅが最も遠く（センサ６に最も近く）、
質量の最も大きな蛋白質ａが最も近くで飛行している。
説明図を示す。図１（ａ）は飛行時間型質量分析計の概
略構造を示し、図１（ｂ）はセンサ６により得られる測
定結果を示す。図１（ａ）において、１はレーザー発振
器、２はレーザー光を特定のチップに照射するための光
学系（ミラー）、３は複数のプロテインチップを載せた
板、３ａは特定のプロテインチップでレーザー照射の対
象となるもの、４は装置が収納される真空容器、５は高
圧電源、６はセンサである。ａ〜ｅはレーザー照射によ
りイオン化され、高圧電源５によりセンサ６に向かって
加速された、プロテインチップ３ａ上の複数種類の蛋白
質の飛行の様子を示す。蛋白質ａ〜ｅがレーザー照射に
より同時に飛行を開始するが、その質量の違いにより飛
行速度はそれぞれ異なる。図１（ａ）において質量の最
も小さな蛋白質ｅが最も遠く（センサ６に最も近く）、
質量の最も大きな蛋白質ａが最も近くで飛行している。
【００１８】次に、プロテインチップシステムを用いた
解析の流れに説明する。
解析の流れに説明する。
【００１９】手順１：サンプルの添加
サンプル中の蛋白・薬物をチップ表面に化学的或いは生
物学的に吸着させる。具体的には、１〜数百μｌのサン
プルをプロテインチップ板３上の直径２ｍｍのスポット
（プロテインチップ３ａ）に添加する。従来の蛋白質解
析に比べて非常に少量で解析を行うことができるため、
サンプルを大量に調製する必要はない。また、測定のた
めに蛋白質を前もって高純度に精製する必要もない。
物学的に吸着させる。具体的には、１〜数百μｌのサン
プルをプロテインチップ板３上の直径２ｍｍのスポット
（プロテインチップ３ａ）に添加する。従来の蛋白質解
析に比べて非常に少量で解析を行うことができるため、
サンプルを大量に調製する必要はない。また、測定のた
めに蛋白質を前もって高純度に精製する必要もない。
【００２０】手順２：洗浄
インキュベート後、水やバッファーでチップ表面を洗浄
し、チップ表面にアフィニティーの無い物質を除去す
る。これにより、チップ表面に結合していない蛋白質と
ともに、目的蛋白質の測定を妨げる塩や界面活性剤等を
取り除くことができる。非特異的な蛋白や薬剤の結合、
さらにはバッファー中の不純物を洗浄によって除き“no
ise”を低下させる。
し、チップ表面にアフィニティーの無い物質を除去す
る。これにより、チップ表面に結合していない蛋白質と
ともに、目的蛋白質の測定を妨げる塩や界面活性剤等を
取り除くことができる。非特異的な蛋白や薬剤の結合、
さらにはバッファー中の不純物を洗浄によって除き“no
ise”を低下させる。
【００２１】手順３：エネルギー吸収分子（ＥＡＭ）添
加 プロテインチップ３ａに目的蛋白質の測定に必要なエネ
ルギー吸収分子（ＥＡＭ）を加える。その後乾燥させ
る。
加 プロテインチップ３ａに目的蛋白質の測定に必要なエネ
ルギー吸収分子（ＥＡＭ）を加える。その後乾燥させ
る。
【００２２】手順４：測定
手順１〜手順３で用意したプロテインチップ３ａを図１
（ａ）の飛行時間型質量分析計にセットする。プロテイ
ンチップ３ａにレーザー発振器１によりＵＶパルスレー
ザー光を照射する。このエネルギーを受けてプロテイン
チップ３ａ上の蛋白質はイオン化される。イオン化した
蛋白質（符号ａ〜ｅ）は一定の電圧で加速され、真空容
器４の対極にあるイオン検知器６に向かって飛行する。
このとき、イオン検知器６に到達するまでの時間は軽い
分子ほど早く、重い分子ほど遅いので、飛行時間を計測
することによって、物質の質量数を求めることができ
る。その例を図１（ｂ）に示す。１サンプルの測定に要
する時間は約１分であり、他の方法に比べて非常に短い
時間で測定を行うことができる。
（ａ）の飛行時間型質量分析計にセットする。プロテイ
ンチップ３ａにレーザー発振器１によりＵＶパルスレー
ザー光を照射する。このエネルギーを受けてプロテイン
チップ３ａ上の蛋白質はイオン化される。イオン化した
蛋白質（符号ａ〜ｅ）は一定の電圧で加速され、真空容
器４の対極にあるイオン検知器６に向かって飛行する。
このとき、イオン検知器６に到達するまでの時間は軽い
分子ほど早く、重い分子ほど遅いので、飛行時間を計測
することによって、物質の質量数を求めることができ
る。その例を図１（ｂ）に示す。１サンプルの測定に要
する時間は約１分であり、他の方法に比べて非常に短い
時間で測定を行うことができる。
【００２３】手順５：蛋白質発現解析
図１のシステムによればプロテインチップ上に捕捉され
た多数の蛋白質を同時に測定することが可能なため、蛋
白質の発現解析を行うことができる。異なるサンプル間
の蛋白質発現を直接比較することにより、あるサンプル
で特異的に発現している蛋白質を知ることができる。測
定に必要な時間が非常に短いため、特に数多くのサンプ
ルの比較が必要な疾病マーカーの探索に適する。
た多数の蛋白質を同時に測定することが可能なため、蛋
白質の発現解析を行うことができる。異なるサンプル間
の蛋白質発現を直接比較することにより、あるサンプル
で特異的に発現している蛋白質を知ることができる。測
定に必要な時間が非常に短いため、特に数多くのサンプ
ルの比較が必要な疾病マーカーの探索に適する。
【００２４】本発明の実施の形態において上述のプロテ
インチップシステムを用いて、膀胱癌患者尿、膀胱癌以
外の尿路腫瘍患者尿、その多の癌患者尿、尿蛋白陽性者
尿及び健常者尿の、蛋白のプロファイリングを行った。
外来通院治療・入院中の泌尿生殖器系癌患者（膀胱癌１
７名、腎臓癌患者３名、尿管癌患者１名、前立腺癌患者
７名、ネフローゼ等他尿路系疾患患者６名）、ならびに
対象群として健常医療従事者５名、検診受診者８名、他
臓器がん患者２０名を対象とした（全員の同意を得てい
る）。対象者について検尿カップを用いて採尿を行い、
そこより１５ｍｌを採取し、遠心にて尿中細胞を除いた
後、測定まで−１３０度にて保存した。なお、目的蛋白
の精製は、蛋白陽性尿を確認した後、別途プロトコール
にて再度同意を得た後に、１〜３Lの蓄尿を行いそれを
用いて行った。
インチップシステムを用いて、膀胱癌患者尿、膀胱癌以
外の尿路腫瘍患者尿、その多の癌患者尿、尿蛋白陽性者
尿及び健常者尿の、蛋白のプロファイリングを行った。
外来通院治療・入院中の泌尿生殖器系癌患者（膀胱癌１
７名、腎臓癌患者３名、尿管癌患者１名、前立腺癌患者
７名、ネフローゼ等他尿路系疾患患者６名）、ならびに
対象群として健常医療従事者５名、検診受診者８名、他
臓器がん患者２０名を対象とした（全員の同意を得てい
る）。対象者について検尿カップを用いて採尿を行い、
そこより１５ｍｌを採取し、遠心にて尿中細胞を除いた
後、測定まで−１３０度にて保存した。なお、目的蛋白
の精製は、蛋白陽性尿を確認した後、別途プロトコール
にて再度同意を得た後に、１〜３Lの蓄尿を行いそれを
用いて行った。
【００２５】実験条件（プロトコル）は次の通りであ
る。まず、サイファージェン・バイオシステムズ社のプ
ロテインチップシステムを用いて、膀胱癌患者の尿中蛋
白のスクリーニング、及び絞込みを行った。チップは２
価の金属陽イオンを固定する表面を有するIMAC3チップ
（サイファージェン・バイオシテムズ社）を使用し、仕
様書に従ってバイオプロセッサーを用いて銅イオンを固
定した。上述の方法で採取した膀胱癌患者の尿サンプル
各５μlをのPBS４５μlで１０倍に希釈し、チップの各
スポットに５０μl添加して２０分撹拌した。各スポッ
トをPBS２００μlで3回洗浄した後、チップをバイオプ
ロセッサーから外し、純水でリンスしてから乾燥させ、
飽和シナピン酸０．５μlをマトリックスとして各スポ
ットに２回ずつ添加した。乾燥後、該チップを、プロテ
インチップリーダーにより測定した。
る。まず、サイファージェン・バイオシステムズ社のプ
ロテインチップシステムを用いて、膀胱癌患者の尿中蛋
白のスクリーニング、及び絞込みを行った。チップは２
価の金属陽イオンを固定する表面を有するIMAC3チップ
（サイファージェン・バイオシテムズ社）を使用し、仕
様書に従ってバイオプロセッサーを用いて銅イオンを固
定した。上述の方法で採取した膀胱癌患者の尿サンプル
各５μlをのPBS４５μlで１０倍に希釈し、チップの各
スポットに５０μl添加して２０分撹拌した。各スポッ
トをPBS２００μlで3回洗浄した後、チップをバイオプ
ロセッサーから外し、純水でリンスしてから乾燥させ、
飽和シナピン酸０．５μlをマトリックスとして各スポ
ットに２回ずつ添加した。乾燥後、該チップを、プロテ
インチップリーダーにより測定した。
【００２６】図２はその結果を示す。図２中の符号Aは
分子量０〜２０００００Daの範囲のグラフであり、この
グラフAに基づき０〜２００００Daに絞込み、符号Bのグ
ラフを得た。グラフBで特徴的な部分に注目して範囲を
６０００〜１００００に絞込み、符号Cのグラフを得
た。同様の手順を繰り返し、７８００〜８６００の範囲
の符号Dのグラフを得た。グラフDで上から順に、No.３
において８２８８、No.５において７９３２と８２８
７、No.１２において７９３４と８２９２、No.１８にお
いて７９３２と８２８９、No.１９において７９３０と
８２８７、No.２０において８２８５と８３９５にピー
クがある。以上より、蛋白質のプロファイリングは分子
量７５００Daから８５００Da、好ましくは８０００Daか
ら８５００Daで行えば良いことがわかった。
分子量０〜２０００００Daの範囲のグラフであり、この
グラフAに基づき０〜２００００Daに絞込み、符号Bのグ
ラフを得た。グラフBで特徴的な部分に注目して範囲を
６０００〜１００００に絞込み、符号Cのグラフを得
た。同様の手順を繰り返し、７８００〜８６００の範囲
の符号Dのグラフを得た。グラフDで上から順に、No.３
において８２８８、No.５において７９３２と８２８
７、No.１２において７９３４と８２９２、No.１８にお
いて７９３２と８２８９、No.１９において７９３０と
８２８７、No.２０において８２８５と８３９５にピー
クがある。以上より、蛋白質のプロファイリングは分子
量７５００Daから８５００Da、好ましくは８０００Daか
ら８５００Daで行えば良いことがわかった。
【００２７】次に、図２の結果に基づき、膀胱癌に係る
腫瘍マーカーを探索するために、サンプル尿中の分子量
約７５００〜８５００の範囲で蛋白質のプロファイリン
グを行った。
腫瘍マーカーを探索するために、サンプル尿中の分子量
約７５００〜８５００の範囲で蛋白質のプロファイリン
グを行った。
【００２８】測定はプロテインチップシステムを用いて
行った。表面に弱陰イオンの官能基を有し、正電荷を持
つ分子の測定に適するWCXチップ（サイファージェン・
バイオシステムズ社）を使用し、仕様書に従ってバイオ
プロセッサーを用いて表面を活性化した。サンプルはIM
ACを用いた場合と同様に調製し、各スポットに添加して
から２０分撹拌後、各スポットをbinding buffer（５０
mＭ酢酸ナトリウム）で３回洗浄し、チップをバイオプ
ロセッサーから外した。各スポットを純水でリンスして
から乾燥させ、IMACチップの場合と同様にシナピン酸を
マトリックスとして添加し、プロテインチップリーダー
により測定した。
行った。表面に弱陰イオンの官能基を有し、正電荷を持
つ分子の測定に適するWCXチップ（サイファージェン・
バイオシステムズ社）を使用し、仕様書に従ってバイオ
プロセッサーを用いて表面を活性化した。サンプルはIM
ACを用いた場合と同様に調製し、各スポットに添加して
から２０分撹拌後、各スポットをbinding buffer（５０
mＭ酢酸ナトリウム）で３回洗浄し、チップをバイオプ
ロセッサーから外した。各スポットを純水でリンスして
から乾燥させ、IMACチップの場合と同様にシナピン酸を
マトリックスとして添加し、プロテインチップリーダー
により測定した。
【００２９】図１１から図１４に結果を示す。シグナル
を色の濃淡に変換して、電気泳動のゲルのイメージで表
わしてある。膀胱癌患者尿には分子量約８０００〜８５
００の小分子蛋白質が検出され、さらに共通して８０１
６のところにバンドが見られたが（図１３）、尿路系以
外の癌患者尿（図１１）及び健常者尿（図１２）にはこ
れらのバンドは見られなかった。一方、ネフローゼ等の
蛋白陽性尿においても、膀胱癌患者と同一分子量の蛋白
が検出された（図１４）。
を色の濃淡に変換して、電気泳動のゲルのイメージで表
わしてある。膀胱癌患者尿には分子量約８０００〜８５
００の小分子蛋白質が検出され、さらに共通して８０１
６のところにバンドが見られたが（図１３）、尿路系以
外の癌患者尿（図１１）及び健常者尿（図１２）にはこ
れらのバンドは見られなかった。一方、ネフローゼ等の
蛋白陽性尿においても、膀胱癌患者と同一分子量の蛋白
が検出された（図１４）。
【００３０】次に、分子量８０１６の蛋白質を精製、同
定した。尿サンプルに１０倍量のエタノールを加え、−
２０℃で一晩放置し沈殿を生じさせた。沈殿物をpＨ７
で溶出してカルボキシメチルセファロースカラムで分離
した後、さらにポリアクリルアミド電気泳動により分離
して、目的のスポットを切り出し、エドマン分解により
アミノ酸配列を決定した。
定した。尿サンプルに１０倍量のエタノールを加え、−
２０℃で一晩放置し沈殿を生じさせた。沈殿物をpＨ７
で溶出してカルボキシメチルセファロースカラムで分離
した後、さらにポリアクリルアミド電気泳動により分離
して、目的のスポットを切り出し、エドマン分解により
アミノ酸配列を決定した。
【００３１】図８及び図９に同定結果を示す。分子量８
０１６の蛋白質の少なくとも一部は、ユビキチンのN末
端から７１アミノ酸の配列と同一のペプチドであること
が確認された（図８）。さらに分子量８０１６の蛋白質
の少なくとも一部は、Saposin Bの１９５番目のアミノ
酸から２６１番目のアミノ酸の配列と同一のペプチドで
あることが確認された(図９)。
０１６の蛋白質の少なくとも一部は、ユビキチンのN末
端から７１アミノ酸の配列と同一のペプチドであること
が確認された（図８）。さらに分子量８０１６の蛋白質
の少なくとも一部は、Saposin Bの１９５番目のアミノ
酸から２６１番目のアミノ酸の配列と同一のペプチドで
あることが確認された(図９)。
【００３２】以下、参考図面について簡単に説明する。
図３はグラフの振幅を色の濃淡に変換して、ゲルのイメ
ージで表したもの（バーチャル）である（図１１〜１４
と同じものである）。分子量８０３０の部分を四角で囲
ってある。膀胱癌患者に特異的であり、尿路系疾患患者
に共通に見られる尿中蛋白は分子量８０３０であること
がわかる。
図３はグラフの振幅を色の濃淡に変換して、ゲルのイメ
ージで表したもの（バーチャル）である（図１１〜１４
と同じものである）。分子量８０３０の部分を四角で囲
ってある。膀胱癌患者に特異的であり、尿路系疾患患者
に共通に見られる尿中蛋白は分子量８０３０であること
がわかる。
【００３３】図４は分子量８０３０の蛋白の生成条件
（chip、buffer）に関する検討のためのグラフである。
bufferがPBSでChipがIMAC3-Cu（Cuイオン固定化Chip）
のときと、bufferが５０mMのアンモニウムアセテート又
は５０mMのナトリウムアセテートでChipがWCX2（弱陽イ
オン交換Chip)のときピークが生じることがわかる。な
お、図４において８００１、８０１３、８０１８にピー
クがある。
（chip、buffer）に関する検討のためのグラフである。
bufferがPBSでChipがIMAC3-Cu（Cuイオン固定化Chip）
のときと、bufferが５０mMのアンモニウムアセテート又
は５０mMのナトリウムアセテートでChipがWCX2（弱陽イ
オン交換Chip)のときピークが生じることがわかる。な
お、図４において８００１、８０１３、８０１８にピー
クがある。
【００３４】図５は所定のWCX2（弱陽イオン交換Chip)
におけるｐＨ条件の検討のための図である。ｐＨ７と８
において分子量８０３０のピークが得られることがわか
る。
におけるｐＨ条件の検討のための図である。ｐＨ７と８
において分子量８０３０のピークが得られることがわか
る。
【００３５】図６は尿素を用いた蛋白濃縮およびアルブ
ミンの除去の説明図である。上段から下段にかけて、そ
れぞれ尿（Urine）、アセトン（Aceton ptn.）、EtOH p
tn.、 Millipore YM3のグラフを示す。EtOH ptn.のとき
に最も大きな分子量８０３０のピークが得られることが
わかる。なお、図６において７９５８にピークがある。
ミンの除去の説明図である。上段から下段にかけて、そ
れぞれ尿（Urine）、アセトン（Aceton ptn.）、EtOH p
tn.、 Millipore YM3のグラフを示す。EtOH ptn.のとき
に最も大きな分子量８０３０のピークが得られることが
わかる。なお、図６において７９５８にピークがある。
【００３６】分子量８０３０の蛋白質について検討す
る。そのためにサンプルを処理する。その精製法の概略
は次の通りである。尿のサンプルを、+10vol.EtOH、−
２０℃、O/NでEtOH 沈殿（precipitation）し、pH4.5−
pH9で溶出してCM-sepharose columnを得て、SDS-PAGEに
よりアミノ酸配列（Amino acid sequence）得る。
る。そのためにサンプルを処理する。その精製法の概略
は次の通りである。尿のサンプルを、+10vol.EtOH、−
２０℃、O/NでEtOH 沈殿（precipitation）し、pH4.5−
pH9で溶出してCM-sepharose columnを得て、SDS-PAGEに
よりアミノ酸配列（Amino acid sequence）得る。
【００３７】図７はCM-sepharoseからのpH勾配による溶
出（NP1chip）を示す。CM-pH7.5とCM-pH8において８０
３０のピークが見られる。なお、図７において８０２２
と８０２３にピークがある。
出（NP1chip）を示す。CM-pH7.5とCM-pH8において８０
３０のピークが見られる。なお、図７において８０２２
と８０２３にピークがある。
【００３８】以上のことから、図８あるいは図９の配列
をもつ蛋白質あるいはその断片を検出し、その有無に基
づいて特定の癌（例えば膀胱癌、腎癌と一部浸潤してい
る前立腺がんを含む尿路系の癌）の診断や診断支援に利
用することができることがわかる。
をもつ蛋白質あるいはその断片を検出し、その有無に基
づいて特定の癌（例えば膀胱癌、腎癌と一部浸潤してい
る前立腺がんを含む尿路系の癌）の診断や診断支援に利
用することができることがわかる。
【００３９】図１０は抗ユビキチン抗体による吸収実験
結果を示す。膀胱癌患者における分子量８０３０の蛋白
は、抗ユビキチン抗体でも吸収されない。したがって、
当該蛋白はSaposinBと推定される。なお、図１０におい
て、８０１７、８０２２、８０２０にピークがある。
結果を示す。膀胱癌患者における分子量８０３０の蛋白
は、抗ユビキチン抗体でも吸収されない。したがって、
当該蛋白はSaposinBと推定される。なお、図１０におい
て、８０１７、８０２２、８０２０にピークがある。
【００４０】以上の結果をまとめると次のとおりであ
る。 （１）プロテインチップシステムSELDI TOF/MS（Surfa
ce Enhanced Laser Desorption Ionization Time-of-fl
ight Mass Spectrometry）は尿中に含まれる蛋白のプロ
ファイリングに適した装置／方法である。 （２）膀胱癌患者とコントロール間でプロファイリング
の違いの概要を見た結果、分子量７５００〜８５００程
度に顕著な違いが見られることが確認された（図２）。
したがって、サンプル尿中から腫瘍マーカーを検出する
ためには、分子量約７５００〜８５００の範囲において
蛋白質のピークを調べるべきである。 （３）これらのピークが明確に見られるように、プロテ
インチップシステムの測定条件を最適化し（図４、
５）、その条件で測定したところ各疾患について図３の
ような結果が得られ、分子量８０３０程度のピークがマ
ーカーの候補とされた。 （４）このピークを精製する条件を最適化し（図６、
７）、その条件で精製、同定したところ、このピークは
ユビキチンの一部とおよびSaposin Bの一部とを含むこ
とが確認された（図８、９）。８０３０Daの蛋白は、ユ
ビキチンのN末端から７１アミノ酸までと、SaposinBの
１９５番目のアミノ酸から２６１番目のアミノ酸の混合
物であった。 （５）膀胱癌患者のサンプルで抗ユビキチンを用いて解
析したところ、ユビキチンではなくSaposin Bであるこ
とが確認された(図１０)。 （６）分子量８０３０の尿中蛋白が検出されたとき、膀
胱癌と対応付けることができる。
る。 （１）プロテインチップシステムSELDI TOF/MS（Surfa
ce Enhanced Laser Desorption Ionization Time-of-fl
ight Mass Spectrometry）は尿中に含まれる蛋白のプロ
ファイリングに適した装置／方法である。 （２）膀胱癌患者とコントロール間でプロファイリング
の違いの概要を見た結果、分子量７５００〜８５００程
度に顕著な違いが見られることが確認された（図２）。
したがって、サンプル尿中から腫瘍マーカーを検出する
ためには、分子量約７５００〜８５００の範囲において
蛋白質のピークを調べるべきである。 （３）これらのピークが明確に見られるように、プロテ
インチップシステムの測定条件を最適化し（図４、
５）、その条件で測定したところ各疾患について図３の
ような結果が得られ、分子量８０３０程度のピークがマ
ーカーの候補とされた。 （４）このピークを精製する条件を最適化し（図６、
７）、その条件で精製、同定したところ、このピークは
ユビキチンの一部とおよびSaposin Bの一部とを含むこ
とが確認された（図８、９）。８０３０Daの蛋白は、ユ
ビキチンのN末端から７１アミノ酸までと、SaposinBの
１９５番目のアミノ酸から２６１番目のアミノ酸の混合
物であった。 （５）膀胱癌患者のサンプルで抗ユビキチンを用いて解
析したところ、ユビキチンではなくSaposin Bであるこ
とが確認された(図１０)。 （６）分子量８０３０の尿中蛋白が検出されたとき、膀
胱癌と対応付けることができる。
【００４１】以上より結論として
ｉ）何らかの手法で、分子量８０３０程度のタンパク質
の有無または量を解析することにより、特定の疾患（例
えば膀胱癌、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む
尿路系の癌を含む）の診断／診断支援ができる可能性が
ある。 ii）分子量８０３０程度のタンパク質は図８、９のよう
なアミノ酸配列を有するユビキチンまたはSaposin Bの
一部である。何らかの手法で、このタンパク質のフラグ
メントをマーカーとして検出し、特定の疾患（例えば膀
胱癌、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む尿路系
の癌を含む）の診断／診断支援ができる可能性がある。
の有無または量を解析することにより、特定の疾患（例
えば膀胱癌、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む
尿路系の癌を含む）の診断／診断支援ができる可能性が
ある。 ii）分子量８０３０程度のタンパク質は図８、９のよう
なアミノ酸配列を有するユビキチンまたはSaposin Bの
一部である。何らかの手法で、このタンパク質のフラグ
メントをマーカーとして検出し、特定の疾患（例えば膀
胱癌、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む尿路系
の癌を含む）の診断／診断支援ができる可能性がある。
【００４２】なお、以上の説明における８０３０という
値は測定装置の精度（分子量+/-0.2%のmass accuracy）
の関係で当然ながら所定の幅をもつ。さらに詳しい検討
の結果、以上の説明における８０３０と呼んでいたピー
クの分子量は、正確には８０１６．６であることがわか
った。すなわち、８０３０とは８０１６＋／−１６（８
０００〜８０３２）を意味する。
値は測定装置の精度（分子量+/-0.2%のmass accuracy）
の関係で当然ながら所定の幅をもつ。さらに詳しい検討
の結果、以上の説明における８０３０と呼んでいたピー
クの分子量は、正確には８０１６．６であることがわか
った。すなわち、８０３０とは８０１６＋／−１６（８
０００〜８０３２）を意味する。
【００４３】分子量８０１６のピークを示したゲルイメ
ージ図（図３と同様のもの）を図１１〜図１４に示す。
これらの図のデータはIMAC3-Cuのデータに基づくもので
ある。
ージ図（図３と同様のもの）を図１１〜図１４に示す。
これらの図のデータはIMAC3-Cuのデータに基づくもので
ある。
【００４４】図１１は尿路系以外のがん患者の尿による
結果である。No.50-No.58が乳がん、No.59,No.60が肺が
ん患者である。８０１６にバンドは見られない。
結果である。No.50-No.58が乳がん、No.59,No.60が肺が
ん患者である。８０１６にバンドは見られない。
【００４５】図１２はコントロールを示す（No.10、No.
72はコントロール。No.25は検診を受けに来た人）。
72はコントロール。No.25は検診を受けに来た人）。
【００４６】図１３は、膀胱がん患者尿による結果であ
る（No.3、No.12、No.19）。いずれも８０１６にバンド
が見られる。なお、尿の場合はアルブミンをはじめとす
る尿蛋白や、白血球、白血球由来の蛋白が出てくること
を考慮すれば、前蛋白の発現量から換算した特定の蛋白
のピークについて、同じ人の経時的変化を追うようにす
べきと思われる。もともとベースが違う人の蛋白量を比
較するのは難しいかもしれない。
る（No.3、No.12、No.19）。いずれも８０１６にバンド
が見られる。なお、尿の場合はアルブミンをはじめとす
る尿蛋白や、白血球、白血球由来の蛋白が出てくること
を考慮すれば、前蛋白の発現量から換算した特定の蛋白
のピークについて、同じ人の経時的変化を追うようにす
べきと思われる。もともとベースが違う人の蛋白量を比
較するのは難しいかもしれない。
【００４７】図１４は、他の尿路系疾患の結果である。
No.22は腎癌であるが尿蛋白陽性、No.23は尿蛋白陽性
（ネフローゼ）、No.24は前立腺がんで尿蛋白陽性、No.
26は前立腺がん、No.27は前立腺肥大症、No.30は前立腺
がん、No.31は検診、No.43は腎のう胞の患者の尿に基づ
く結果である。これらから分かるように、尿路系の癌
（腎癌と一部浸潤している前立腺がん等）も強いバンド
が見られる。尿蛋白陽性のときに見られるのは、どちら
かといえばユビキチンと思われる。
No.22は腎癌であるが尿蛋白陽性、No.23は尿蛋白陽性
（ネフローゼ）、No.24は前立腺がんで尿蛋白陽性、No.
26は前立腺がん、No.27は前立腺肥大症、No.30は前立腺
がん、No.31は検診、No.43は腎のう胞の患者の尿に基づ
く結果である。これらから分かるように、尿路系の癌
（腎癌と一部浸潤している前立腺がん等）も強いバンド
が見られる。尿蛋白陽性のときに見られるのは、どちら
かといえばユビキチンと思われる。
【００４８】本発明は、以上の実施の形態に限定される
ことなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内
で、種々の変更が可能であり、それらも本発明の範囲内
に包含されるものであることは言うまでもない。
ことなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内
で、種々の変更が可能であり、それらも本発明の範囲内
に包含されるものであることは言うまでもない。
【図１】 発明の実施の形態に係る飛行時間型質量分析
計の動作原理の説明図である。
計の動作原理の説明図である。
【図２】 発明の実施の形態に係る膀胱癌患者の尿中蛋
白の絞込みの様子を示す図である。
白の絞込みの様子を示す図である。
【図３】 発明の実施の形態に係るゲルイメージ図であ
る。
る。
【図４】 発明の実施の形態に係る分子量８０３０の蛋
白の生成条件（chip、buffer）に関する検討のためのグ
ラフである（参考図）。
白の生成条件（chip、buffer）に関する検討のためのグ
ラフである（参考図）。
【図５】 発明の実施の形態に係るWCX2（弱陽イオン交
換Chip)におけるｐＨ条件の検討のための図である（参
考図）。
換Chip)におけるｐＨ条件の検討のための図である（参
考図）。
【図６】 発明の実施の形態に係る尿素を用いた蛋白濃
縮およびアルブミンの除去の説明図である（参考図）。
縮およびアルブミンの除去の説明図である（参考図）。
【図７】 発明の実施の形態に係るCM-sepharoseからの
pH勾配による溶出（NP1chip）を示す（参考図）。
pH勾配による溶出（NP1chip）を示す（参考図）。
【図８】 発明の実施の形態に係る分子量８０３０の蛋
白の同定結果を示す。
白の同定結果を示す。
【図９】 発明の実施の形態に係る分子量８０３０の蛋
白の同定結果を示す。
白の同定結果を示す。
【図１０】 発明の実施の形態に係る分子量８０３０の
蛋白の抗ユビキチン抗体による吸収実験結果を示す。
蛋白の抗ユビキチン抗体による吸収実験結果を示す。
【図１１】 発明の実施の形態に係る尿路系以外の癌患
者のゲルイメージ図である。
者のゲルイメージ図である。
【図１２】 発明の実施の形態に係るコントロールのゲ
ルイメージ図である。
ルイメージ図である。
【図１３】 発明の実施の形態に係る膀胱癌患者のゲル
イメージ図である。
イメージ図である。
【図１４】 発明の実施の形態に係るその他尿路系疾患
のゲルイメージ図である。
のゲルイメージ図である。
１ レーザー発振器
２ 光学系
３ プロテインチップ板
３ａ プロテインチップ
４ 真空容器
５ 高圧電源
６ センサ（イオン検知器）
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 37/00 １０２ Ｇ０１Ｎ 37/00 １０２
(72)発明者 住吉 義光
愛媛県松山市堀之内13 国立病院四国がん
センター内
(72)発明者 有國 尚
神奈川県鎌倉市梶原200 住商バイオサイ
エンス株式会社鎌倉研究所内
(72)発明者 志和 美重子
神奈川県鎌倉市梶原200 サイファージェ
ン・バイオシステムズ株式会社鎌倉研究所
内
(72)発明者 若田部 るみ
神奈川県鎌倉市梶原200 サイファージェ
ン・バイオシステムズ株式会社鎌倉研究所
内
Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA26 BA01 BA11 BB50
CB03 DA36 FB02 FB05 JA01
Claims (9)
- 【請求項１】 癌の診断を支援する方法であって、 患者のサンプル尿を用意するステップと、 前記サンプル尿中の分子量約７５００〜８５００の蛋白
質のマーカーを検出するステップと、 前記マーカー又は前記マーカーの量を可能性のある癌と
対応付けるステップと、を備える癌の診断支援方法。 - 【請求項２】 前記マーカーは、分子量８０３０の尿中
蛋白を含むことを特徴とする請求項１記載の癌の診断支
援方法。 - 【請求項３】 前記マーカーは、少なくともユビキチン
の一部を含むことを特徴とする請求項１記載の癌の診断
支援方法。 - 【請求項４】 前記マーカーは、少なくともSaposinBの
一部を含むことを特徴とする請求項１記載の癌の診断支
援方法。 - 【請求項５】 分子量８０３０の尿中蛋白が検出された
とき、膀胱癌と対応付けることを特徴とする請求項１乃
至請求項４いずれかに記載の癌の診断支援方法。 - 【請求項６】 分子量８０３０の尿中蛋白が検出された
とき、腎癌と一部浸潤している前立腺がんを含む尿路系
の癌と対応付けることを特徴とする請求項１乃至請求項
４いずれかに記載の癌の診断支援方法。 - 【請求項７】 前記マーカーを検出するためにレーザー
脱着／イオン化質量分析法（Laser Desorption Ionizat
ion法）が用いられることを特徴とする請求項１記載の
癌の診断支援方法。 - 【請求項８】 レーザー脱着／イオン化質量分析法（La
ser Desorption Ionization法）は、 分析対象物に対して親和性のある表面を有する基板を用
意するステップと、前記親和性のある表面にサンプルを
添加するステップと、 前記親和性のある表面に結合していない物質を洗浄除去
するステップと、記親和性のある表面にエネルギー吸収
分子を添加するステップと、 前記親和性のある表面に結合している物質にレーザーを
照射して脱離／イオン化して飛行時間を計測することに
より分子量を測定するステップとを備えることを特徴と
する請求項７記載の癌の診断支援方法。 - 【請求項９】 請求項１乃至請求項７いずれかに記載の
方法に用いるキットであって、 分子量約７５００〜８５００のいずれかの蛋白質に対し
て親和性のある表面を含む基板と、サンプルを前記基板
に接触させ、前記基板により保持されたマーカーを検出
することによりマーカーを検出する指示書とを備えるキ
ット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002084873A JP2003279578A (ja) | 2002-03-26 | 2002-03-26 | 癌の診断支援方法及びそのキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002084873A JP2003279578A (ja) | 2002-03-26 | 2002-03-26 | 癌の診断支援方法及びそのキット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003279578A true JP2003279578A (ja) | 2003-10-02 |
Family
ID=29232034
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002084873A Pending JP2003279578A (ja) | 2002-03-26 | 2002-03-26 | 癌の診断支援方法及びそのキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003279578A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006177877A (ja) * | 2004-12-24 | 2006-07-06 | Hitachi High-Technologies Corp | 質量分析方法、質量分析システム、診断システム、検査システム及び質量分析プログラム |
| WO2006129401A1 (ja) * | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Jcl Bioassay Corporation | プロテオーム網羅的解析における特異的蛋白質のスクリーニング方法 |
| EP1757939A1 (de) * | 2005-08-26 | 2007-02-28 | mosaiques diagnostics and therapeutics AG | Polypeptidmarker zur Diagnose von Blasenkrebs |
| JP2008507558A (ja) * | 2004-07-23 | 2008-03-13 | パシフィック エッジ バイオテクノロジー リミティド | 膀胱癌を検出するための尿マーカー |
| JP2008202978A (ja) * | 2007-02-16 | 2008-09-04 | Hirosaki Univ | 前立腺癌の診断方法 |
-
2002
- 2002-03-26 JP JP2002084873A patent/JP2003279578A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JP2012185173A (ja) * | 2004-07-23 | 2012-09-27 | Pacific Edge Biotechnology Ltd | 膀胱癌を検出するための尿マーカー |
| JP2015156866A (ja) * | 2004-07-23 | 2015-09-03 | パシフィック エッジ バイオテクノロジー リミティド | 膀胱癌を検出するための尿マーカー |
| JP2017104118A (ja) * | 2004-07-23 | 2017-06-15 | パシフィック エッジ バイオテクノロジー リミティド | 膀胱癌を検出するための尿マーカー |
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| JP4620446B2 (ja) * | 2004-12-24 | 2011-01-26 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 質量分析方法、質量分析システム、診断システム、検査システム及び質量分析プログラム |
| WO2006129401A1 (ja) * | 2005-05-31 | 2006-12-07 | Jcl Bioassay Corporation | プロテオーム網羅的解析における特異的蛋白質のスクリーニング方法 |
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| JP2009506310A (ja) * | 2005-08-26 | 2009-02-12 | モザイク・ダイアグノステイツクス・アンド・テラピユーテイツクス・アー・ゲー | 膀胱癌の診断用ポリペプチドマーカー |
| EP2333550A3 (de) * | 2005-08-26 | 2011-09-28 | mosaiques diagnostics and therapeutics AG | Polypeptidmarker zur Diagnose von Blasenkrebs |
| JP2008202978A (ja) * | 2007-02-16 | 2008-09-04 | Hirosaki Univ | 前立腺癌の診断方法 |
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