JP2003093069A - リゾビトキシン生産遺伝子ｒｔｘＣ - Google Patents
リゾビトキシン生産遺伝子ｒｔｘＣInfo
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】１．ダイズ根粒菌Bradyrhizobium elkaniiの生
産する天然のエチレン生合成阻害剤リゾビトキシン（Ｒ
Ｔ）に注目し、その生合成経路を生化学・遺伝学的に解
明すること、 ２．そのリゾビトキシン生産遺伝子群の導入によって形
質転換され、リゾビトキシン生合成能を付与した２つの
有用細菌を作出すること。 【解決手段】１．ジヒドロリゾビトキシンからリゾビト
キシンの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキ
シンデサチュラーゼをコードするｒｔｘＣ遺伝子及びそ
の他の新規な遺伝子、特に、以下の（ａ）又は（ｂ）の
タンパク質をコードする遺伝子：（ａ）特定の配列で示
されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列（ａ）におい
て１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加
されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒドロリゾビトキ
シンデサチュラーゼ活性を有するタンパク質。
産する天然のエチレン生合成阻害剤リゾビトキシン（Ｒ
Ｔ）に注目し、その生合成経路を生化学・遺伝学的に解
明すること、 ２．そのリゾビトキシン生産遺伝子群の導入によって形
質転換され、リゾビトキシン生合成能を付与した２つの
有用細菌を作出すること。 【解決手段】１．ジヒドロリゾビトキシンからリゾビト
キシンの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキ
シンデサチュラーゼをコードするｒｔｘＣ遺伝子及びそ
の他の新規な遺伝子、特に、以下の（ａ）又は（ｂ）の
タンパク質をコードする遺伝子：（ａ）特定の配列で示
されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列（ａ）におい
て１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加
されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒドロリゾビトキ
シンデサチュラーゼ活性を有するタンパク質。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ダイズ根粒菌(Bra
dyrhizobium elkanii)におけるリゾビトキシンの生合成
反応に関与する酵素群をコードする各遺伝子、該遺伝子
を利用して根粒菌等を形質転換することによって、該根
粒菌のリゾビトキシン生産能を付与又は増強する方法、
該根粒菌の宿主植物におけるエチレン生合成阻害能を付
与又は増強する方法、及び該根粒菌の宿主植物への感染
を促進させる方法等に関する。
dyrhizobium elkanii)におけるリゾビトキシンの生合成
反応に関与する酵素群をコードする各遺伝子、該遺伝子
を利用して根粒菌等を形質転換することによって、該根
粒菌のリゾビトキシン生産能を付与又は増強する方法、
該根粒菌の宿主植物におけるエチレン生合成阻害能を付
与又は増強する方法、及び該根粒菌の宿主植物への感染
を促進させる方法等に関する。
【０００２】
【従来の技術】環境保全型の持続的農業生産体系を確立
するために、現在、具体的・先駆的な技術が求められて
いる。例えば、適応範囲の広い効率的な植物遺伝子導入
系の技術開発や、根粒菌とマメ科植物の共生窒素固定系
の効果的利用があげられる。いずれも植物微生物間相互
作用を利用した技術といえるが、現実的には重大な問題
がある。
するために、現在、具体的・先駆的な技術が求められて
いる。例えば、適応範囲の広い効率的な植物遺伝子導入
系の技術開発や、根粒菌とマメ科植物の共生窒素固定系
の効果的利用があげられる。いずれも植物微生物間相互
作用を利用した技術といえるが、現実的には重大な問題
がある。
【０００３】植物遺伝子導入系の技術開発においては多
くの作物品種系統に利用できる効率の良い遺伝子導入系
がいまだに確立されておらず、導入効率向上のための新
しい発想が要求されている。
くの作物品種系統に利用できる効率の良い遺伝子導入系
がいまだに確立されておらず、導入効率向上のための新
しい発想が要求されている。
【０００４】根粒菌は大豆などマメ科植物の根に感染し
て根粒を作り、空中の窒素を固定し窒素分栄養素に使う
ため、生育に必要な窒素肥料を軽減する。しかしなが
ら、宿主植物が根粒を一定数しか着生させないというAu
toregulation機構のために、窒素固定量を簡単には増大
させることはできない。
て根粒を作り、空中の窒素を固定し窒素分栄養素に使う
ため、生育に必要な窒素肥料を軽減する。しかしなが
ら、宿主植物が根粒を一定数しか着生させないというAu
toregulation機構のために、窒素固定量を簡単には増大
させることはできない。
【０００５】リゾビトキシン［２−アミノ−４−（２−
アミノ−３−ヒドロプロポキシ）−ｔ−ブテン−３−
酸］は、マメ科共生生物Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
ｅｌｋａｎｉｉ（３７）および植物病原菌Ｂｕｒｋｈ
ｏｌｄｅｒｉａ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ（２１）に
よって合成される。種々の植物の葉萎黄病を誘導するの
で、リゾビトキシンは、植物毒とされていた（１８、３
６、５７）。生化学的機能の点からみると、リゾビトキ
シンは、メチオニン生合成経路におけるβ−シスタチオ
ナーゼ（３９、５７）、およびエチレン生合成経路にお
ける１−アミノシクロプロパン−１−カルボキシレート
（ＡＣＣ）シンターゼ（５９）を阻害する。
アミノ−３−ヒドロプロポキシ）−ｔ−ブテン−３−
酸］は、マメ科共生生物Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
ｅｌｋａｎｉｉ（３７）および植物病原菌Ｂｕｒｋｈ
ｏｌｄｅｒｉａ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ（２１）に
よって合成される。種々の植物の葉萎黄病を誘導するの
で、リゾビトキシンは、植物毒とされていた（１８、３
６、５７）。生化学的機能の点からみると、リゾビトキ
シンは、メチオニン生合成経路におけるβ−シスタチオ
ナーゼ（３９、５７）、およびエチレン生合成経路にお
ける１−アミノシクロプロパン−１−カルボキシレート
（ＡＣＣ）シンターゼ（５９）を阻害する。
【０００６】最近、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ−マメ科共生生
物におけるリゾビトキシンの有益性や役割が明らかにさ
れた。リゾビトキシン変異体を使用して、Ｙｕｈａｓｈ
ｉら（６０）は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉによるリゾビトキ
シン産生は、マメ科Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒ
ｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ（ｓｉｒａｔｒｏ、クロバナツル
アズキ）における根粒着生および競合を、多分、宿主植
物の内因性エチレン産生の阻害を通じて、増強すること
を見出した。Ｄｕｏｄｏら（７）は、リゾビトキシン変
異体は、Ｖｉｇｎａ ｒａｄｉａｔａ（緑豆）で、野生
型株よりもより少ない成熟根粒を形成することを報告し
た。さらに、リゾビトキシン変異体に対しエチレン阻害
剤を用いると、根粒着生表現型が部分的に回復した。そ
れゆえ、植物毒素よりも、むしろ、リゾビトキシンは内
部共生により産生される根粒着生エンハンサーである。
物におけるリゾビトキシンの有益性や役割が明らかにさ
れた。リゾビトキシン変異体を使用して、Ｙｕｈａｓｈ
ｉら（６０）は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉによるリゾビトキ
シン産生は、マメ科Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒ
ｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ（ｓｉｒａｔｒｏ、クロバナツル
アズキ）における根粒着生および競合を、多分、宿主植
物の内因性エチレン産生の阻害を通じて、増強すること
を見出した。Ｄｕｏｄｏら（７）は、リゾビトキシン変
異体は、Ｖｉｇｎａ ｒａｄｉａｔａ（緑豆）で、野生
型株よりもより少ない成熟根粒を形成することを報告し
た。さらに、リゾビトキシン変異体に対しエチレン阻害
剤を用いると、根粒着生表現型が部分的に回復した。そ
れゆえ、植物毒素よりも、むしろ、リゾビトキシンは内
部共生により産生される根粒着生エンハンサーである。
【０００７】リゾビトキシンの生合成経路は未だ完全に
は解明されていない。Ｒｕａｎら（４３−４５）は、
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１の２つのＴｎ５誘導リ
ゾビトキシンヌル突然変異を得て、培養および植物体内
でリゾビトキシン生合成に関わっているｒｔｘＡ遺伝子
を単離した。ｒｔｘＡのアミノ酸配列のＮ末端領域は、
アミノトランスフェラーゼに相同なモチーフを有する
が、Ｏ−アセチルホモセリン「スルフヒドロラーゼ」に
類似したものがＣ末端部分に見出された（４３、４
４）。しかしｒｔｘＡ遺伝子におけるフレームシフトに
ついてある種の混乱が生じている。リゾビトキシンの前
駆体として提案されたものは、セリノールがＢ．ｅｌｋ
ａｎｉｉによって生じる大豆根粒に豊富である（２２、
２５、２８）。ｒｔｘＡ遺伝子のＮ末端側のＴｎ５挿入
変異は大豆根粒でのセリノール蓄積を欠損しており、こ
のことはＮ末端部分はセリノール産生におけるアミノト
ランスフェラーゼとして機能していることを示唆してい
る。しかしこの機能はまだ純培養で実証されていない。
は解明されていない。Ｒｕａｎら（４３−４５）は、
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１の２つのＴｎ５誘導リ
ゾビトキシンヌル突然変異を得て、培養および植物体内
でリゾビトキシン生合成に関わっているｒｔｘＡ遺伝子
を単離した。ｒｔｘＡのアミノ酸配列のＮ末端領域は、
アミノトランスフェラーゼに相同なモチーフを有する
が、Ｏ−アセチルホモセリン「スルフヒドロラーゼ」に
類似したものがＣ末端部分に見出された（４３、４
４）。しかしｒｔｘＡ遺伝子におけるフレームシフトに
ついてある種の混乱が生じている。リゾビトキシンの前
駆体として提案されたものは、セリノールがＢ．ｅｌｋ
ａｎｉｉによって生じる大豆根粒に豊富である（２２、
２５、２８）。ｒｔｘＡ遺伝子のＮ末端側のＴｎ５挿入
変異は大豆根粒でのセリノール蓄積を欠損しており、こ
のことはＮ末端部分はセリノール産生におけるアミノト
ランスフェラーゼとして機能していることを示唆してい
る。しかしこの機能はまだ純培養で実証されていない。
【０００８】ジヒドロリゾビトキシン［Ｏ−（２−アミ
ノ−３−ヒドロキシプロピル）ホモセリン］は、Ｂ．ｅ
ｌｋａｎｉｉの栽培および根粒に見出され（３８）、Ａ
ＣＣシンターゼおよびβ−シスタチオナーゼの阻害剤と
してリゾビトキシンよりも弱い（５９）。Ｍｉｔｃｈｅ
ｌｌ ａｎｄ Ｃｏｄｄｉｎｇｔｏｎ（２２）は、ジヒ
ドロリゾビトキシンが、生物活性を欠損した最終産物で
あることを示唆した。しかし、ｒｔｘＡのＣ末端部分
は、スルフヒドリラーゼとの相同性を参照すると、リゾ
ビトキシン生合成における中間体としてジヒドロリゾビ
トキシン生成に関与しているのであろう（４４、４
５）。リゾビトキシンのバイオアッセイ系が開発されて
はいるが、ジヒドロリゾビトキシンとセリノールの有効
な同時定量法がないので、リゾビトキシン生合成経路の
解明が遅れていた。
ノ−３−ヒドロキシプロピル）ホモセリン］は、Ｂ．ｅ
ｌｋａｎｉｉの栽培および根粒に見出され（３８）、Ａ
ＣＣシンターゼおよびβ−シスタチオナーゼの阻害剤と
してリゾビトキシンよりも弱い（５９）。Ｍｉｔｃｈｅ
ｌｌ ａｎｄ Ｃｏｄｄｉｎｇｔｏｎ（２２）は、ジヒ
ドロリゾビトキシンが、生物活性を欠損した最終産物で
あることを示唆した。しかし、ｒｔｘＡのＣ末端部分
は、スルフヒドリラーゼとの相同性を参照すると、リゾ
ビトキシン生合成における中間体としてジヒドロリゾビ
トキシン生成に関与しているのであろう（４４、４
５）。リゾビトキシンのバイオアッセイ系が開発されて
はいるが、ジヒドロリゾビトキシンとセリノールの有効
な同時定量法がないので、リゾビトキシン生合成経路の
解明が遅れていた。
【０００９】このように、根粒をたくさん作るには菌感
染を防護するエチレンの作用を制御する必要があった
が、エチレンの合成を阻害する物質であるリゾビトキシ
ンをより多く生産する酵素の遺伝子が分からないという
問題があり実現できなかった。
染を防護するエチレンの作用を制御する必要があった
が、エチレンの合成を阻害する物質であるリゾビトキシ
ンをより多く生産する酵素の遺伝子が分からないという
問題があり実現できなかった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】従って、本研究の目的
は、ダイズ根粒菌Bradyrhizobium elkaniiの生産する
天然のエチレン生合成阻害剤リゾビトキシン（ＲＴ）に
注目し、その生合成経路を生化学・遺伝学的に解明する
こと、そのリゾビトキシン生産遺伝子群の導入によっ
て形質転換され、リゾビトキシン生合成能を付与した２
つの有用細菌を作出することにある。リゾビトキシン生
産能を付与されたAgrobacterium及び根粒菌は、それぞ
れ、適応範囲の広い効率的な植物遺伝子導入系、根粒数
増加による共生窒素固定の増大をもたらすことが強く期
待される。
は、ダイズ根粒菌Bradyrhizobium elkaniiの生産する
天然のエチレン生合成阻害剤リゾビトキシン（ＲＴ）に
注目し、その生合成経路を生化学・遺伝学的に解明する
こと、そのリゾビトキシン生産遺伝子群の導入によっ
て形質転換され、リゾビトキシン生合成能を付与した２
つの有用細菌を作出することにある。リゾビトキシン生
産能を付与されたAgrobacterium及び根粒菌は、それぞ
れ、適応範囲の広い効率的な植物遺伝子導入系、根粒数
増加による共生窒素固定の増大をもたらすことが強く期
待される。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決すべく、LC/MS（高速液体クロマトグラフィー質量
分析計）にてリゾビトキシンの生合成中間体を検出する
方法を用いて、従来報告されていたｒｔｘＡ遺伝子周辺
の遺伝子をリゾビトキシン高生産株にて探索した。その
結果、ジヒドロリゾビトキシンからリゾビトキシンの生
合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチ
ュラーゼをコードする遺伝子ｒｔｘＣ及びその他の新規
な遺伝子を発見し、本発明を完成させた。
解決すべく、LC/MS（高速液体クロマトグラフィー質量
分析計）にてリゾビトキシンの生合成中間体を検出する
方法を用いて、従来報告されていたｒｔｘＡ遺伝子周辺
の遺伝子をリゾビトキシン高生産株にて探索した。その
結果、ジヒドロリゾビトキシンからリゾビトキシンの生
合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチ
ュラーゼをコードする遺伝子ｒｔｘＣ及びその他の新規
な遺伝子を発見し、本発明を完成させた。
【００１２】即ち、本発明は、以下に示すものである。
１．ジヒドロリゾビトキシンからリゾビトキシンの生合
成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュ
ラーゼをコードするｒｔｘＣ遺伝子。 ２．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) 由来であ
ることを特徴とする、上記１記載のｒｔｘＣ遺伝子。 ３．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ
９４株由来であることを特徴とする、上記２記載の遺伝
子ｒｔｘＣ。 ４．以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする
遺伝子：（ａ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列、
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり、酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュラーゼ活
性を有するタンパク質。 ５．以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝子：
（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第15737
〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基配列
（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロリゾビトキシンデ
サチュラーゼ活性を有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａ。 ６．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ
９４株由来の、ジヒドロキシアセトンホスフェートから
セリノールへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロキシ
アセトン燐酸アミノトランスフェラーゼ、及び/又はセ
リノールとＯ−アセチルホモセリンとからジヒドロリゾ
ビトキシンへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾ
ビトキシン・シンターゼをコードするｒｔｘＡ遺伝子。 ７．以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする
遺伝子：（ａ）配列番号９に示されるアミノ酸配列、
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり、酵素ジヒドロキシアセトン燐酸アミノトランフ
ェラーゼ及び/又は酵素ジヒドロリゾビトキシン・シン
ターゼ活性を有するタンパク質。 ８．以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝子：
（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第13294
〜15705 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基配列
（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロキシアセトン燐酸
アミノトランフェラーゼ及び/又は酵素ジヒドロリゾビ
トキシン・シンターゼ活性を有するタンパク質をコード
するＤＮＡ。 ９．上記１ないし上記５のいずれか一項に記載の遺伝
子、及び上記６ないし上記８のいずれか一項に記載の遺
伝子を含むオペロン。 １０．更に、配列番号１１ないし配列番号１５で示され
るアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、及び、該アミノ酸配列において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり配列番号１１ないし配列番号１５で示されるアミ
ノ酸配列からなるタンパク質と実質的に同等の活性を有
するタンパク質をコードする遺伝子から成る群から選択
される、少なくとも一つの遺伝子を含む、上記９記載の
オペロン。 １１．更に、ｒｔｘＡ遺伝子の０．５ｋｂ上流に転写因
子σ７０に対する結合ドメインであるプロモーター配列
を含む、上記９又は１０記載のオペロン。 １２．プロモーター配列が（５’−ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇ
ｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔｔｇ−ＴＡＣＧＡＴ−
３’）である、上記１１記載のオペロン。 １３．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つの遺伝子を含有する組換え発現ビークル。 １４．コスミドベクターである上記１３に記載の組換え
発現ビークル。 １５．上記１３又は１４に記載の発現ビークルによって
形質転換された細菌から成る形質転換体。 １６．細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)で
ある上記１５に記載の形質転換体。 １７．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンを含有する組換え発現ビークル。 １８．コスミドベクターである上記１７に記載の組換え
発現ビークル。 １９．上記１７又は１８に記載の発現ビークルによって
形質転換された細菌から成る形質転換体。 ２０．細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)で
ある上記１９に記載の形質転換体。 ２１．上記１５，１６，１９又は２０に記載の形質転換
体を培養することから成る、リゾビトキシンの製造方
法。 ２２．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌のリゾ
ビトキシン生産能を付与又は増強する方法。 ２３．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌のリゾビ
トキシン生産能を付与又は増強する方法。 ２４．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２２又は２３記載の方法。 ２５．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物におけるエチレン生合成阻害能を付与又は増強する
方法。 ２６．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物におけるエチレン生合成阻害能を付与又は増強する方
法。 ２７．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２５又は２６記載の方法。 ２８．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物への感染を促進させる方法。 ２９．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物への感染を促進させる方法。 ３０．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２８又は２９記載の方法。 ３１．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物への遺伝子導入効率を増加させる方法。 ３２．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物への遺伝子導入効率を増加させる方法。 ３３．細菌がAgrobcterium tumefaciensである、上記３
１又は３２記載の方法。
成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュ
ラーゼをコードするｒｔｘＣ遺伝子。 ２．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) 由来であ
ることを特徴とする、上記１記載のｒｔｘＣ遺伝子。 ３．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ
９４株由来であることを特徴とする、上記２記載の遺伝
子ｒｔｘＣ。 ４．以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする
遺伝子：（ａ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列、
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり、酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュラーゼ活
性を有するタンパク質。 ５．以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝子：
（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第15737
〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基配列
（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロリゾビトキシンデ
サチュラーゼ活性を有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａ。 ６．ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ
９４株由来の、ジヒドロキシアセトンホスフェートから
セリノールへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロキシ
アセトン燐酸アミノトランスフェラーゼ、及び/又はセ
リノールとＯ−アセチルホモセリンとからジヒドロリゾ
ビトキシンへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾ
ビトキシン・シンターゼをコードするｒｔｘＡ遺伝子。 ７．以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする
遺伝子：（ａ）配列番号９に示されるアミノ酸配列、
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり、酵素ジヒドロキシアセトン燐酸アミノトランフ
ェラーゼ及び/又は酵素ジヒドロリゾビトキシン・シン
ターゼ活性を有するタンパク質。 ８．以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝子：
（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第13294
〜15705 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基配列
（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロキシアセトン燐酸
アミノトランフェラーゼ及び/又は酵素ジヒドロリゾビ
トキシン・シンターゼ活性を有するタンパク質をコード
するＤＮＡ。 ９．上記１ないし上記５のいずれか一項に記載の遺伝
子、及び上記６ないし上記８のいずれか一項に記載の遺
伝子を含むオペロン。 １０．更に、配列番号１１ないし配列番号１５で示され
るアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、及び、該アミノ酸配列において１若しくは数個のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列か
らなり配列番号１１ないし配列番号１５で示されるアミ
ノ酸配列からなるタンパク質と実質的に同等の活性を有
するタンパク質をコードする遺伝子から成る群から選択
される、少なくとも一つの遺伝子を含む、上記９記載の
オペロン。 １１．更に、ｒｔｘＡ遺伝子の０．５ｋｂ上流に転写因
子σ７０に対する結合ドメインであるプロモーター配列
を含む、上記９又は１０記載のオペロン。 １２．プロモーター配列が（５’−ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇ
ｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔｔｇ−ＴＡＣＧＡＴ−
３’）である、上記１１記載のオペロン。 １３．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つの遺伝子を含有する組換え発現ビークル。 １４．コスミドベクターである上記１３に記載の組換え
発現ビークル。 １５．上記１３又は１４に記載の発現ビークルによって
形質転換された細菌から成る形質転換体。 １６．細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)で
ある上記１５に記載の形質転換体。 １７．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンを含有する組換え発現ビークル。 １８．コスミドベクターである上記１７に記載の組換え
発現ビークル。 １９．上記１７又は１８に記載の発現ビークルによって
形質転換された細菌から成る形質転換体。 ２０．細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)で
ある上記１９に記載の形質転換体。 ２１．上記１５，１６，１９又は２０に記載の形質転換
体を培養することから成る、リゾビトキシンの製造方
法。 ２２．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌のリゾ
ビトキシン生産能を付与又は増強する方法。 ２３．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌のリゾビ
トキシン生産能を付与又は増強する方法。 ２４．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２２又は２３記載の方法。 ２５．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物におけるエチレン生合成阻害能を付与又は増強する
方法。 ２６．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物におけるエチレン生合成阻害能を付与又は増強する方
法。 ２７．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２５又は２６記載の方法。 ２８．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物への感染を促進させる方法。 ２９．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物への感染を促進させる方法。 ３０．細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科植物であ
る、上記２８又は２９記載の方法。 ３１．上記１ないし８に記載された遺伝子の少なくとも
一つで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主
植物への遺伝子導入効率を増加させる方法。 ３２．上記９ないし１２のいずれか一項に記載のオペロ
ンで細菌を形質転換することから成る、該細菌の宿主植
物への遺伝子導入効率を増加させる方法。 ３３．細菌がAgrobcterium tumefaciensである、上記３
１又は３２記載の方法。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明者は、ダイズ根粒菌(Brady
rhizobium elkanii)によって生産される根粒着生エンハ
ンサー、リゾビトキシン（ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎ
ｅ）の生合成に関する遺伝子クラスターをクローニング
し、配列決定をした。この配列を配列番号１として以下
に示す。
rhizobium elkanii)によって生産される根粒着生エンハ
ンサー、リゾビトキシン（ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎ
ｅ）の生合成に関する遺伝子クラスターをクローニング
し、配列決定をした。この配列を配列番号１として以下
に示す。
【００１４】ｒｔｘＡを包含するクローニングした２
８．４ｋｂＤＮＡのヌクレオチド配列には、計６つのオ
ープン・リーディング・フレーム（ＯＲＦ１〜ＯＲＦ
６）がｒｔｘＡの下流に局在していることが示された。
更に、ｒｔｘＡの上流には、計７つのオープン・リーデ
ィング・フレーム（ｆｉｘＧ、ｆｉｘＨ、ｆｉｘＩ、ｆ
ｉｘＳ、ｎｏｅＥ、ｎｏｄＰ及びｎｏｄＱ）が確認され
た。
８．４ｋｂＤＮＡのヌクレオチド配列には、計６つのオ
ープン・リーディング・フレーム（ＯＲＦ１〜ＯＲＦ
６）がｒｔｘＡの下流に局在していることが示された。
更に、ｒｔｘＡの上流には、計７つのオープン・リーデ
ィング・フレーム（ｆｉｘＧ、ｆｉｘＨ、ｆｉｘＩ、ｆ
ｉｘＳ、ｎｏｅＥ、ｎｏｄＰ及びｎｏｄＱ）が確認され
た。
【００１５】即ち、本発明の第一の態様として、ジヒド
ロリゾビトキシンからリゾビトキシンの生合成反応を触
媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュラーゼをコ
ードするｒｔｘＣ遺伝子（ＯＲＦ１）に係る。該遺伝子
は、当業者に公知の任意の根粒菌、特に、ダイズ根粒菌
(Bradyrhizobium elkanii) から取得することが出来
る。具体例として、多量にリゾビトキシンを分泌するダ
イズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ９４株
を挙げることが出来る。ＵＳＤＡ９４株から取得したｒ
ｔｘＣ遺伝子がコードするアミノ酸配列は配列番号１０
で示され、配列番号１に示される塩基配列において第15
737〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡにコードされ
るものである。
ロリゾビトキシンからリゾビトキシンの生合成反応を触
媒する酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチュラーゼをコ
ードするｒｔｘＣ遺伝子（ＯＲＦ１）に係る。該遺伝子
は、当業者に公知の任意の根粒菌、特に、ダイズ根粒菌
(Bradyrhizobium elkanii) から取得することが出来
る。具体例として、多量にリゾビトキシンを分泌するダ
イズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) ＵＳＤＡ９４株
を挙げることが出来る。ＵＳＤＡ９４株から取得したｒ
ｔｘＣ遺伝子がコードするアミノ酸配列は配列番号１０
で示され、配列番号１に示される塩基配列において第15
737〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡにコードされ
るものである。
【００１６】従って、本発明は、以下の（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子：（ａ）配列番
号１０に示されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列
（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒド
ロリゾビトキシンデサチュラーゼ活性を有するタンパク
質、及び、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝
子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第15
737〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基
配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下
でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロリゾビトキシ
ンデサチュラーゼ活性を有するタンパク質をコードする
ＤＮＡ、に係る。
（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子：（ａ）配列番
号１０に示されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列
（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒド
ロリゾビトキシンデサチュラーゼ活性を有するタンパク
質、及び、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む遺伝
子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列において第15
737〜16795 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩基
配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下
でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロリゾビトキシ
ンデサチュラーゼ活性を有するタンパク質をコードする
ＤＮＡ、に係る。
【００１７】本発明の第二の態様として、更に、ダイズ
根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)ＵＳＤＡ９４株から新
たに得られた、ジヒドロキシアセトンホスフェートから
セリノールへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロキシ
アセトン燐酸アミノトランスフェラーゼ、及び/又はセ
リノールとＯ−アセチルホモセリンとからジヒドロリゾ
ビトキシンへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾ
ビトキシン・シンターゼをコードするｒｔｘＡ遺伝子に
係る。ＵＳＤＡ９４株から取得したｒｔｘＣ遺伝子がコ
ードするアミノ酸配列は配列番号９で示され、配列番号
１に示される塩基配列において第13294〜15705 番目の
塩基対からなるＤＮＡにコードされるものである。
根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)ＵＳＤＡ９４株から新
たに得られた、ジヒドロキシアセトンホスフェートから
セリノールへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロキシ
アセトン燐酸アミノトランスフェラーゼ、及び/又はセ
リノールとＯ−アセチルホモセリンとからジヒドロリゾ
ビトキシンへの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾ
ビトキシン・シンターゼをコードするｒｔｘＡ遺伝子に
係る。ＵＳＤＡ９４株から取得したｒｔｘＣ遺伝子がコ
ードするアミノ酸配列は配列番号９で示され、配列番号
１に示される塩基配列において第13294〜15705 番目の
塩基対からなるＤＮＡにコードされるものである。
【００１８】従って、本発明は、以下の（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子：（ａ）配列番
号９に示されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列
（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒド
ロキシアセトン燐酸アミノトランフェラーゼ及び/又は
酵素ジヒドロリゾビトキシン・シンターゼ活性を有する
タンパク質、及び以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含
む遺伝子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列におい
て第13294〜15705 番目の塩基対からなるＤＮＡ、
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェン
トな条件下でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロキ
シアセトン燐酸アミノトランフェラーゼ及び/又は酵素
ジヒドロリゾビトキシン・シンターゼ活性を有するタン
パク質をコードするＤＮＡ、に係る。
（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子：（ａ）配列番
号９に示されるアミノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列
（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、酵素ジヒド
ロキシアセトン燐酸アミノトランフェラーゼ及び/又は
酵素ジヒドロリゾビトキシン・シンターゼ活性を有する
タンパク質、及び以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含
む遺伝子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列におい
て第13294〜15705 番目の塩基対からなるＤＮＡ、
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェン
トな条件下でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロキ
シアセトン燐酸アミノトランフェラーゼ及び/又は酵素
ジヒドロリゾビトキシン・シンターゼ活性を有するタン
パク質をコードするＤＮＡ、に係る。
【００１９】更に、本発明は別な態様として、本発明の
第一の態様である各種ｒｔｘＣ遺伝子の少なくとも一
つ、及び本発明の第ニの態様である各種ｒｔｘＡ遺伝子
の少なくとも一つを含むオペロンに係る。該オペロン
は、更に、ＯＲＦ２（配列番号１１）、ＯＲＦ３（配列
番号１２）、ＯＲＦ４（配列番号１３）、ＯＲＦ５（配
列番号１４）、及びＯＲＦ６（配列番号１５）で示され
るアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、並びに、該アミノ酸配列において１若しくは数個の
アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列
からなり上記各タンパク質と実質的に同等の活性を有す
るタンパク質をコードする遺伝子から成る群から選択さ
れる、少なくとも一つの遺伝子を含むことが出来る。
第一の態様である各種ｒｔｘＣ遺伝子の少なくとも一
つ、及び本発明の第ニの態様である各種ｒｔｘＡ遺伝子
の少なくとも一つを含むオペロンに係る。該オペロン
は、更に、ＯＲＦ２（配列番号１１）、ＯＲＦ３（配列
番号１２）、ＯＲＦ４（配列番号１３）、ＯＲＦ５（配
列番号１４）、及びＯＲＦ６（配列番号１５）で示され
るアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、並びに、該アミノ酸配列において１若しくは数個の
アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列
からなり上記各タンパク質と実質的に同等の活性を有す
るタンパク質をコードする遺伝子から成る群から選択さ
れる、少なくとも一つの遺伝子を含むことが出来る。
【００２０】本発明のオペロンにおいて、ｒｔｘＡ遺伝
子の０．５ｋｂ上流に、原核生物の転写因子σ７０に対
する結合ドメインであるプロモーター配列を含むことが
好ましい。該プロモーター配列の一例として、（５’−
ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔｔ
ｇ−ＴＡＣＧＡＴ−３’：大文字は、それぞれ、「−３
５領域」および「−１０領域」を表す）を挙げることが
出来る。
子の０．５ｋｂ上流に、原核生物の転写因子σ７０に対
する結合ドメインであるプロモーター配列を含むことが
好ましい。該プロモーター配列の一例として、（５’−
ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔｔ
ｇ−ＴＡＣＧＡＴ−３’：大文字は、それぞれ、「−３
５領域」および「−１０領域」を表す）を挙げることが
出来る。
【００２１】本発明各遺伝子又はＤＮＡは、以下の実施
例に示すように、例えば、ＵＳＤＡ９４株から調製され
たコスミド・ライブラリーＵＳＤＡ９４株を用いて、当
業者に公知の遺伝子工学における様々な遺伝子組換え手
段・方法により取得することが出来る。
例に示すように、例えば、ＵＳＤＡ９４株から調製され
たコスミド・ライブラリーＵＳＤＡ９４株を用いて、当
業者に公知の遺伝子工学における様々な遺伝子組換え手
段・方法により取得することが出来る。
【００２２】或いは、本明細書で開示された配列情報に
基づいて、当該技術分野における周知手段を用いた化学
合成等によっても調製することが可能である。当業者で
あれば、特定のアミノ酸配列における１若しくは数個の
アミノ酸を欠失、置換若しくは付加することも、当該技
術分野における周知手段を用いて容易に実施することが
できる。
基づいて、当該技術分野における周知手段を用いた化学
合成等によっても調製することが可能である。当業者で
あれば、特定のアミノ酸配列における１若しくは数個の
アミノ酸を欠失、置換若しくは付加することも、当該技
術分野における周知手段を用いて容易に実施することが
できる。
【００２３】本発明において、特定の遺伝子又はＤＮＡ
は、当業者に周知の緩衝液中で、適当な温度及び塩濃度
等の諸条件下のストリンジェントな条件でハイブリダイ
ズさせることができる。このようなストリンジェントな
条件下で本発明の遺伝子又はＤＮＡとハイブリダイズ
し、且つ、各タンパク質と実質的に同等の活性を有する
蛋白質をコードするＤＮＡの例として、例えば、それぞ
れの対応する遺伝子と相同性が７０％以上、好ましくは
９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましく
は９８％以上であるようなＤＮＡを挙げることができ
る。
は、当業者に周知の緩衝液中で、適当な温度及び塩濃度
等の諸条件下のストリンジェントな条件でハイブリダイ
ズさせることができる。このようなストリンジェントな
条件下で本発明の遺伝子又はＤＮＡとハイブリダイズ
し、且つ、各タンパク質と実質的に同等の活性を有する
蛋白質をコードするＤＮＡの例として、例えば、それぞ
れの対応する遺伝子と相同性が７０％以上、好ましくは
９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましく
は９８％以上であるようなＤＮＡを挙げることができ
る。
【００２４】更に、本発明は別な態様として、上記の本
発明遺伝子の少なくとも一つの遺伝子を含有する組換え
発現ビークルに係る。組換え発現ビークルには各種ベク
ター等の当業者に公知の任意のものが含まれるが、特
に、コスミドベクターが好適である。
発明遺伝子の少なくとも一つの遺伝子を含有する組換え
発現ビークルに係る。組換え発現ビークルには各種ベク
ター等の当業者に公知の任意のものが含まれるが、特
に、コスミドベクターが好適である。
【００２５】該組換え発現ビークルには、遺伝子組換え
操作において当業者に公知である様々な配列、例えば、
原核細胞である大腸菌及び枯草菌等が有する転写因子で
ある各種σサブユニットに対する結合ドメインである各
種プロモーター、及びエンハンサーなどの各種転写調節
要素、制限酵素部位、並びにカナマイシン耐性マーカー
等の選択マーカー（マーカー酵素等）遺伝子を任意に含
むことが出来、当業者に公知の方法によって容易に調製
することが出来る。
操作において当業者に公知である様々な配列、例えば、
原核細胞である大腸菌及び枯草菌等が有する転写因子で
ある各種σサブユニットに対する結合ドメインである各
種プロモーター、及びエンハンサーなどの各種転写調節
要素、制限酵素部位、並びにカナマイシン耐性マーカー
等の選択マーカー（マーカー酵素等）遺伝子を任意に含
むことが出来、当業者に公知の方法によって容易に調製
することが出来る。
【００２６】本発明は更に、上記発現ビークルによって
形質転換された細菌に係る。このような細菌には特に制
限はないが、一例として、ダイズ根粒菌(Bradyrhizobiu
m elkanii) に代表される、マメ科植物の根に感染して
根粒を形成し、共生窒素固定を行う各種根粒菌、及び土
壌細菌の一種であるAgurobacterium tumefaciens 等に
代表される各種植物病原菌を挙げることが出来る。
形質転換された細菌に係る。このような細菌には特に制
限はないが、一例として、ダイズ根粒菌(Bradyrhizobiu
m elkanii) に代表される、マメ科植物の根に感染して
根粒を形成し、共生窒素固定を行う各種根粒菌、及び土
壌細菌の一種であるAgurobacterium tumefaciens 等に
代表される各種植物病原菌を挙げることが出来る。
【００２７】本発明は更に、こうして得られた形質転換
体を培養し、その培養上清からリゾビトキシンを製造す
る方法に係る。培養条件、及び培養上清からの分離・精
製等は本命最初の実施例を参照して、当業者が任意に選
択することが出来る。
体を培養し、その培養上清からリゾビトキシンを製造す
る方法に係る。培養条件、及び培養上清からの分離・精
製等は本命最初の実施例を参照して、当業者が任意に選
択することが出来る。
【００２８】本明細書の実施例に示されているように、
本発明に係る遺伝子の少なくとも一つ又はオペロンで細
菌を形質転換することにより、該細菌のリゾビトキシン
生産能を付与又は増強し、該細菌の宿主植物におけるエ
チレン生合成阻害能を付与又は増強することが可能とな
る。このような方法で好適に使用される細菌としては、
ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) に代表され
る、マメ科植物の根に感染して根粒を形成し、共生窒素
固定を行う各種根粒菌を挙げることが出来、又、宿主と
しては、特に、マメ科植物を挙げることが出来る。更
に、本発明に係る遺伝子の少なくとも一つ又はオペロン
で細菌を形質転換することにより、該細菌の宿主植物へ
の感染を促進させ、又は、該細菌の宿主植物への遺伝子
導入効率（形質転換効率）を増加させることが可能とな
る。このような各種方法で好適に使用される細菌として
は、土壌細菌の一種であるAgurobacterium tumefaciens
を挙げることが出来る。
本発明に係る遺伝子の少なくとも一つ又はオペロンで細
菌を形質転換することにより、該細菌のリゾビトキシン
生産能を付与又は増強し、該細菌の宿主植物におけるエ
チレン生合成阻害能を付与又は増強することが可能とな
る。このような方法で好適に使用される細菌としては、
ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii) に代表され
る、マメ科植物の根に感染して根粒を形成し、共生窒素
固定を行う各種根粒菌を挙げることが出来、又、宿主と
しては、特に、マメ科植物を挙げることが出来る。更
に、本発明に係る遺伝子の少なくとも一つ又はオペロン
で細菌を形質転換することにより、該細菌の宿主植物へ
の感染を促進させ、又は、該細菌の宿主植物への遺伝子
導入効率（形質転換効率）を増加させることが可能とな
る。このような各種方法で好適に使用される細菌として
は、土壌細菌の一種であるAgurobacterium tumefaciens
を挙げることが出来る。
【００２９】
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定される
ものではない。
明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定される
ものではない。
【００３０】［材料と方法］細菌株、プラスミド、および増殖条件
.本研究で使用し
た細菌株およびプラスミドを表１に挙げる。Ｂ．ｅｌｋ
ａｎｉｉ培養は、０．１％アラビノースおよび０．０２
５％酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ、デトロイト、ミシガン
州）を補充したＨＭ塩培地（５）中、あるいはＴｒｉｓ
−ＹＭＲＴ培地（２７）中で３０℃、通気条件で増殖し
た。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉはＬｕｒｉａ−
Ｂｅｒｔａｎｉ培地（４７）中で３０℃で増殖した。抗
生物質は、以下の濃度で培地中に加えた：Ｂ．ｅｌｋａ
ｎｉｉには、スペクチノマイシンおよびストレプトマイ
シン２５０μｇ／ｍｌおよびカナマイシン１５０μｇ／
ｍｌ、Ｅ．ｃｏｌｉには、テトラサイクリン１２．５μ
ｇ／ｍｌ、アンピシリン１００μｇ／ｍｌおよびカナマ
イシン１００μｇ／ｍｌ。
た細菌株およびプラスミドを表１に挙げる。Ｂ．ｅｌｋ
ａｎｉｉ培養は、０．１％アラビノースおよび０．０２
５％酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ、デトロイト、ミシガン
州）を補充したＨＭ塩培地（５）中、あるいはＴｒｉｓ
−ＹＭＲＴ培地（２７）中で３０℃、通気条件で増殖し
た。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉはＬｕｒｉａ−
Ｂｅｒｔａｎｉ培地（４７）中で３０℃で増殖した。抗
生物質は、以下の濃度で培地中に加えた：Ｂ．ｅｌｋａ
ｎｉｉには、スペクチノマイシンおよびストレプトマイ
シン２５０μｇ／ｍｌおよびカナマイシン１５０μｇ／
ｍｌ、Ｅ．ｃｏｌｉには、テトラサイクリン１２．５μ
ｇ／ｍｌ、アンピシリン１００μｇ／ｍｌおよびカナマ
イシン１００μｇ／ｍｌ。
【００３１】ＤＮＡ単離と操作.プラスミドＤＮＡの単
離、制限酵素処理、ＤＮＡの連結反応、Ｅ．ｃｏｌｉの
細菌形質転換、およびサザン・ハイブリダイゼーション
は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（４７）により記載されたよう
にして行った。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉの総ＤＮＡは記載さ
れたようにして調製された（２７）。ｒｔｘＡフランキ
ングＤＮＡ領域を単離するため、本発明者は、前以て構
成されたｐＬＡＦＲ１ベクター（１２）中のＢ．ｅｌｋ
ａｎｉｉＵＳＤＡ９４のコスミド・ライブラリーを使用
した。ライブラリーを含むＥ．ｃｏｌｉＨＢ１０１細胞
は、テトラサイクリン含有Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ
寒天（１．５％）に塗布した。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳ
ＤＡ９４ｒｔｘＡ遺伝子は、既述のようにしてＰＣＲ増
幅し、コロニー・ハイブリダイゼーション・プローブと
して使用した。プローブは、ＤＩＧ−ｄＵＴＰランダム
・プライミング法（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈ
ｅｉｍ，マンハイム、ドイツ）を用いて標識し、ハイブ
リダイゼーション・シグナルはＤＩＧＮｕｃｌｅｉｃ
ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて検出した。ハイブ
リダイゼーション・シグナル陽性を示すコロニーからコ
スミド・クローンを単離し、ＥｃｏＲＩで消化し、０．
８％アガロース−ＴＡＥ（４７）電気泳動にかけ、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡフランキング領
域の制限地図を作成した。
離、制限酵素処理、ＤＮＡの連結反応、Ｅ．ｃｏｌｉの
細菌形質転換、およびサザン・ハイブリダイゼーション
は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（４７）により記載されたよう
にして行った。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉの総ＤＮＡは記載さ
れたようにして調製された（２７）。ｒｔｘＡフランキ
ングＤＮＡ領域を単離するため、本発明者は、前以て構
成されたｐＬＡＦＲ１ベクター（１２）中のＢ．ｅｌｋ
ａｎｉｉＵＳＤＡ９４のコスミド・ライブラリーを使用
した。ライブラリーを含むＥ．ｃｏｌｉＨＢ１０１細胞
は、テトラサイクリン含有Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ
寒天（１．５％）に塗布した。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳ
ＤＡ９４ｒｔｘＡ遺伝子は、既述のようにしてＰＣＲ増
幅し、コロニー・ハイブリダイゼーション・プローブと
して使用した。プローブは、ＤＩＧ−ｄＵＴＰランダム
・プライミング法（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈ
ｅｉｍ，マンハイム、ドイツ）を用いて標識し、ハイブ
リダイゼーション・シグナルはＤＩＧＮｕｃｌｅｉｃ
ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて検出した。ハイブ
リダイゼーション・シグナル陽性を示すコロニーからコ
スミド・クローンを単離し、ＥｃｏＲＩで消化し、０．
８％アガロース−ＴＡＥ（４７）電気泳動にかけ、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡフランキング領
域の制限地図を作成した。
【００３２】ＤＮＡ配列決定．ｒｔｘＡを含む４０−な
いし４５−ｋｂＤＮＡ領域をカバーする、Ｂ．ｅｌｋａ
ｎｉｉＵＳＤＡ９４ゲノム・コスミド・クローンｐＲＴ
Ｎ２、ｐＲＴＦ１、およびｐＲＴＳ１を、いくつかの制
限酵素を使用して４−ないし８−ｋｂフラグメントに消
化した。これらのＤＮＡフラグメントを、ｐＢｌｕｅｓ
ｃｒｉｐｔＳＫ+（宝酒造、草津、日本）に連結し、
Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９に形質転換した。クローン化プ
ラスミドＤＮＡ群を単離し、超音波処理により０．５−
ないし４−ｋｂフラグメントに消化した。そして、１−
ないし２−ｋｂＤＮＡフラグメントを１％アガロースゲ
ル電気泳動を用いて精製した。次いで、ＤＮＡフラグメ
ントをＫＯＤポリメラーゼ（東洋紡、東京、日本）を用
いて平滑末端化し、ＨｉｎｃＩＩ−消化ｐＵＣ１１８
（宝酒造、草津、日本）に連結し、Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５
αに形質転換した。その結果として、ｒｔｘＡおよびそ
のフランキング領域の部分を含む３００プラスミド以上
が単離された。
いし４５−ｋｂＤＮＡ領域をカバーする、Ｂ．ｅｌｋａ
ｎｉｉＵＳＤＡ９４ゲノム・コスミド・クローンｐＲＴ
Ｎ２、ｐＲＴＦ１、およびｐＲＴＳ１を、いくつかの制
限酵素を使用して４−ないし８−ｋｂフラグメントに消
化した。これらのＤＮＡフラグメントを、ｐＢｌｕｅｓ
ｃｒｉｐｔＳＫ+（宝酒造、草津、日本）に連結し、
Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９に形質転換した。クローン化プ
ラスミドＤＮＡ群を単離し、超音波処理により０．５−
ないし４−ｋｂフラグメントに消化した。そして、１−
ないし２−ｋｂＤＮＡフラグメントを１％アガロースゲ
ル電気泳動を用いて精製した。次いで、ＤＮＡフラグメ
ントをＫＯＤポリメラーゼ（東洋紡、東京、日本）を用
いて平滑末端化し、ＨｉｎｃＩＩ−消化ｐＵＣ１１８
（宝酒造、草津、日本）に連結し、Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５
αに形質転換した。その結果として、ｒｔｘＡおよびそ
のフランキング領域の部分を含む３００プラスミド以上
が単離された。
【００３３】配列決定は、ダイプライマー法およびモデ
ル３７３Ａシーケンサー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｒｒｉｎ
ｇｔｏｎ，ＵＫ）を用いて行われた。ＤＮＡ配列のギャ
ップは、そのギャップに位置する配列に基づいて、プラ
イマーを有するＰＣＲ生成フラグメントを配列決定する
ことによって閉鎖した。シーケンス・データは、Ｍａｌ
ｉｇｎ ａｎｄ Ｍａｃ Ｖｅｃｔｏｒソフトウエア
（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｌｔｄ．，Ｏｘ
ｆｏｒｄ，ＵＫ）で、組み立て解析した。ＢＬＡＳＴ類
似探査は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
（ＮＣＢＩ）を使用して行った。疎水親水指数（５６）
の二次構造解析は、Ｇｅｎｅｔｙｘ−Ｍａｃソフトウエ
ア（Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃ
ｏ．，Ｌｔｄ．，東京、日本）により行った。決定され
たヌクレオチド配列（配列番号１）は、寄託番号ＡＢ０
６２２７９でＤＤＢＪ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬデー
タベースに見られる。
ル３７３Ａシーケンサー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｒｒｉｎ
ｇｔｏｎ，ＵＫ）を用いて行われた。ＤＮＡ配列のギャ
ップは、そのギャップに位置する配列に基づいて、プラ
イマーを有するＰＣＲ生成フラグメントを配列決定する
ことによって閉鎖した。シーケンス・データは、Ｍａｌ
ｉｇｎ ａｎｄ Ｍａｃ Ｖｅｃｔｏｒソフトウエア
（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｌｔｄ．，Ｏｘ
ｆｏｒｄ，ＵＫ）で、組み立て解析した。ＢＬＡＳＴ類
似探査は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
（ＮＣＢＩ）を使用して行った。疎水親水指数（５６）
の二次構造解析は、Ｇｅｎｅｔｙｘ−Ｍａｃソフトウエ
ア（Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃ
ｏ．，Ｌｔｄ．，東京、日本）により行った。決定され
たヌクレオチド配列（配列番号１）は、寄託番号ＡＢ０
６２２７９でＤＤＢＪ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬデー
タベースに見られる。
【００３４】ｒｔｘＡ大欠損およびフランキング領域を
有するＢ．ｅｌｋａｎｉｉ変異体の構築．推定のリゾビ
トキシン遺伝子の大欠失変異体の構築のために、ｐＲＴ
Ｆ１からの１３．４−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ断片をｐ
ＢＳＩＩΔＳａｃＩにクローニングした。得られたプラ
スミド（ｐＢＳ１３．４）をＳａｃＩで消化し、６．４
−ｋｂフラグメントを単離した。この６．４−ｋｂフラ
グメントを平滑末端化し、ｐＨＰ４５Ω（４２）からの
２−ｋｂΩカセットに連結した。得られたプラスミド
（ｐＢＳ１３．４：：Ω）をＡｐａＩおよびＮｏｔＩを
用いて二重消化し、そして、ｎｏｅＥ、Ωカセット、部
分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）３、および
ＯＲＦ４を含有する、５．７−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ
フラグメントを、ｐＳＵＰ２０２にクローニングして
（５１）、ｐＳＵＰ１３．４：：Ωを得た。ｐＳＵＰ１
３．４：：Ωをヘルパー・プラスミドｐＲＫ２０１３
（９）を用いて接合によりＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
９４に導入した。交差変異体をストレプトマイシンおよ
びスペクチノマイシンに対する抵抗性で選択した後、二
重交差変異体をプローブとして、ｐＢＳ１３．４：：Ω
からの５．７−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ断片とともにサ
ザン・ハイブリダイゼーションにより選択した。構築に
使用された二重交差変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω
１およびプラスミドの関連した性質は、表１に記載す
る。
有するＢ．ｅｌｋａｎｉｉ変異体の構築．推定のリゾビ
トキシン遺伝子の大欠失変異体の構築のために、ｐＲＴ
Ｆ１からの１３．４−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ断片をｐ
ＢＳＩＩΔＳａｃＩにクローニングした。得られたプラ
スミド（ｐＢＳ１３．４）をＳａｃＩで消化し、６．４
−ｋｂフラグメントを単離した。この６．４−ｋｂフラ
グメントを平滑末端化し、ｐＨＰ４５Ω（４２）からの
２−ｋｂΩカセットに連結した。得られたプラスミド
（ｐＢＳ１３．４：：Ω）をＡｐａＩおよびＮｏｔＩを
用いて二重消化し、そして、ｎｏｅＥ、Ωカセット、部
分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）３、および
ＯＲＦ４を含有する、５．７−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ
フラグメントを、ｐＳＵＰ２０２にクローニングして
（５１）、ｐＳＵＰ１３．４：：Ωを得た。ｐＳＵＰ１
３．４：：Ωをヘルパー・プラスミドｐＲＫ２０１３
（９）を用いて接合によりＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
９４に導入した。交差変異体をストレプトマイシンおよ
びスペクチノマイシンに対する抵抗性で選択した後、二
重交差変異体をプローブとして、ｐＢＳ１３．４：：Ω
からの５．７−ｋｂＡｐａＩ−ＮｏｔＩ断片とともにサ
ザン・ハイブリダイゼーションにより選択した。構築に
使用された二重交差変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω
１およびプラスミドの関連した性質は、表１に記載す
る。
【００３５】
【表１】
【００３６】カナマイシンカセット挿入によるｐＲＴＦ
１誘導体の構築および相補性．リゾビトキシン生合成に
おけるｒｔｘＡおよびそのフランキング領域の機能を調
べるため、本発明者は、Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｉｍｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＰＳ）−１キット（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｖｅｒｌ
ｙ，ＭＡ）を、製造者の指示書に従って配列にカナマイ
シン・カセットをランダムに挿入した。０．０８μｇｐ
ＲＴＦ１および０．０２μｇｐＧＰＳ１．１の変異およ
び形質転換の後に、カナマイシン耐性コロニーを単離
し、ＥｃｏＲＩで消化し、挿入部位を大まかに特定する
ためおよび多重カセットの変異体を除くために電気泳動
した。正確な挿入部位は、製造者の指示書に記載された
ようにして、カナマイシン・カセットの外部プライマー
を使ってＤＮＡシーケンシングにより決定した。
１誘導体の構築および相補性．リゾビトキシン生合成に
おけるｒｔｘＡおよびそのフランキング領域の機能を調
べるため、本発明者は、Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｉｍｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＰＳ）−１キット（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｖｅｒｌ
ｙ，ＭＡ）を、製造者の指示書に従って配列にカナマイ
シン・カセットをランダムに挿入した。０．０８μｇｐ
ＲＴＦ１および０．０２μｇｐＧＰＳ１．１の変異およ
び形質転換の後に、カナマイシン耐性コロニーを単離
し、ＥｃｏＲＩで消化し、挿入部位を大まかに特定する
ためおよび多重カセットの変異体を除くために電気泳動
した。正確な挿入部位は、製造者の指示書に記載された
ようにして、カナマイシン・カセットの外部プライマー
を使ってＤＮＡシーケンシングにより決定した。
【００３７】これらｐＲＴＦ１誘導体は、ｐＲＫ２０１
３（９）を用いて接合によりＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤ
Ａ９４Δｒｔｘ：：Ω１に導入した。転移接合体（Ｔｒ
ａｎｓｃｏｎｊｕｇａｎｔｓ）は、カナマイシンで選択
し、セリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾ
ビトキシン産生を測定した。
３（９）を用いて接合によりＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤ
Ａ９４Δｒｔｘ：：Ω１に導入した。転移接合体（Ｔｒ
ａｎｓｃｏｎｊｕｇａｎｔｓ）は、カナマイシンで選択
し、セリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾ
ビトキシン産生を測定した。
【００３８】液体クロマトグラフィおよび質量分析を使
用したセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリ
ゾビトキシンの分析．本発明において、液体クロマトグ
ラフィおよび質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いて、フェニ
ルチオカルバミル誘導体を定量して、セリノール、ジヒ
ドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンの培地中の
濃度を同時に決めた。Ｔｒｉｓ−ＹＭＲＴ培地に増殖し
たＢ．ｅｌｋａｎｉｉの定常期培養物の１５ｍｌ量を１
０，０００×ｇ、１０分遠心分離した。得られた上清を
Ｄｏｗｅｘ５０カラム（Ｈ+型；樹脂サイズ、５０−１
００メッシュ；カラム容量、５ｍｌ；Ｍｕｒｏｍａｃｈ
ｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、東京、日本）にかけた。カラ
ムを脱イオン水の１０カラム量で洗浄した。セリノー
ル、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンを
２ＭＮＨ４ＯＨの３カラム量で溶出し、そして減圧下蒸
発させた。ペレットを５００μｌ脱イオン水に溶解し、
１０ｎモルのアミノエトキシビニルグリシン（リゾビト
キシンの構造類縁体）を、フェニルチオカルバミル誘導
体化する前に、内部標準として加えた。
用したセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリ
ゾビトキシンの分析．本発明において、液体クロマトグ
ラフィおよび質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いて、フェニ
ルチオカルバミル誘導体を定量して、セリノール、ジヒ
ドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンの培地中の
濃度を同時に決めた。Ｔｒｉｓ−ＹＭＲＴ培地に増殖し
たＢ．ｅｌｋａｎｉｉの定常期培養物の１５ｍｌ量を１
０，０００×ｇ、１０分遠心分離した。得られた上清を
Ｄｏｗｅｘ５０カラム（Ｈ+型；樹脂サイズ、５０−１
００メッシュ；カラム容量、５ｍｌ；Ｍｕｒｏｍａｃｈ
ｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、東京、日本）にかけた。カラ
ムを脱イオン水の１０カラム量で洗浄した。セリノー
ル、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンを
２ＭＮＨ４ＯＨの３カラム量で溶出し、そして減圧下蒸
発させた。ペレットを５００μｌ脱イオン水に溶解し、
１０ｎモルのアミノエトキシビニルグリシン（リゾビト
キシンの構造類縁体）を、フェニルチオカルバミル誘導
体化する前に、内部標準として加えた。
【００３９】フェニルチオカルバミル誘導体化は、Ｙａ
ｍａｙａ ａｎｄ Ｍａｔｓｕｍｏｔｏの方法（５８）
により行った。試料溶液５０μｌ一定量を１．５-ｍｌ
チューブ中で減圧下蒸発し、ペレットをＥｔＯＨ−ＴＥ
Ａ試薬（エタノール：トリエチルアミン：水、２：１：
２）２０μｌに溶解した。蒸発後、ペレットを、ＥｔＯ
Ｈ−ＴＥＡ−ＰＩＴＣ試薬（エタノール：トリエチルア
ミン：水：フェニルイソチオシアネート、７：１：１：
１）１０μｌに溶解し、室温で２０分間インキュベート
し、蒸発乾固した。ＰＩＴＣ誘導体の各ペレットを脱イ
オン水１００μｌに溶解し、ＬＣ／ＭＳ分析のため０．
２-μｍ硝酸セルロース・フィルターを通過させた。
ｍａｙａ ａｎｄ Ｍａｔｓｕｍｏｔｏの方法（５８）
により行った。試料溶液５０μｌ一定量を１．５-ｍｌ
チューブ中で減圧下蒸発し、ペレットをＥｔＯＨ−ＴＥ
Ａ試薬（エタノール：トリエチルアミン：水、２：１：
２）２０μｌに溶解した。蒸発後、ペレットを、ＥｔＯ
Ｈ−ＴＥＡ−ＰＩＴＣ試薬（エタノール：トリエチルア
ミン：水：フェニルイソチオシアネート、７：１：１：
１）１０μｌに溶解し、室温で２０分間インキュベート
し、蒸発乾固した。ＰＩＴＣ誘導体の各ペレットを脱イ
オン水１００μｌに溶解し、ＬＣ／ＭＳ分析のため０．
２-μｍ硝酸セルロース・フィルターを通過させた。
【００４０】電子スプレーイオン化装置（ｅｌｅｃｔｒ
ｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）
および高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ；ＨＰ-１
１００，Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｗａｌｄｂ
ｒｏｎｎ，ドイツ）を備えたＪＭＳ−ＬＣｍａｔｅ（Ｊ
ＥＯＬ、東京、日本）を、以下の条件下で、ＰＩＴＣ−
セリノール、−ジヒドロリゾビトキシン、および、−リ
ゾビトキシンの分析に使用した：カラム、ｉｎｅｒｔｓ
ｉｌＯＤＳ−２（１．５ｍｍ×１５０ｍｍ；ＧＬＳｃｉ
ｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、東京、日本）；カラム温度、４
０℃；流速、０．１ｍｌ／分；移動層、溶媒Ａ中溶媒Ｂ
３０％から１００％溶媒Ｂへ１５分間の直線傾斜溶離
（ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）
（溶媒Ａ、０．１％ＨＣＯＯＨ；溶媒Ｂ、１００％Ｍｅ
ＣＮ）。ＰＩＴＣ−セリノール、−ジヒドロリゾビトキ
シン、および、−リゾビトキシンの反応時間は、これら
の条件下で、それぞれ、３．８、１０．４、１０．４、
および１２．４分であった。培地中およびバッファー中
のセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビ
トキシンの濃度は、各化合物のＰＩＴＣ誘導体（それぞ
れ、ｍ／ｚ＝２２７、４６３、および４６１）のピーク
面積とＰＩＴＣ−アミノエトキシビニルグリシン（ｍ／
ｚ＝４３１）のピーク面積の間の比によって計算した。
ジヒドロリゾビトキシンおよびリゾビトキシンの基準品
は、前述のように、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４の
培養から単離し精製した；セリノールおよびアミノエト
キシビニルグリシンはＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
ｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）
および高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ；ＨＰ-１
１００，Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ，Ｗａｌｄｂ
ｒｏｎｎ，ドイツ）を備えたＪＭＳ−ＬＣｍａｔｅ（Ｊ
ＥＯＬ、東京、日本）を、以下の条件下で、ＰＩＴＣ−
セリノール、−ジヒドロリゾビトキシン、および、−リ
ゾビトキシンの分析に使用した：カラム、ｉｎｅｒｔｓ
ｉｌＯＤＳ−２（１．５ｍｍ×１５０ｍｍ；ＧＬＳｃｉ
ｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、東京、日本）；カラム温度、４
０℃；流速、０．１ｍｌ／分；移動層、溶媒Ａ中溶媒Ｂ
３０％から１００％溶媒Ｂへ１５分間の直線傾斜溶離
（ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）
（溶媒Ａ、０．１％ＨＣＯＯＨ；溶媒Ｂ、１００％Ｍｅ
ＣＮ）。ＰＩＴＣ−セリノール、−ジヒドロリゾビトキ
シン、および、−リゾビトキシンの反応時間は、これら
の条件下で、それぞれ、３．８、１０．４、１０．４、
および１２．４分であった。培地中およびバッファー中
のセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビ
トキシンの濃度は、各化合物のＰＩＴＣ誘導体（それぞ
れ、ｍ／ｚ＝２２７、４６３、および４６１）のピーク
面積とＰＩＴＣ−アミノエトキシビニルグリシン（ｍ／
ｚ＝４３１）のピーク面積の間の比によって計算した。
ジヒドロリゾビトキシンおよびリゾビトキシンの基準品
は、前述のように、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４の
培養から単離し精製した；セリノールおよびアミノエト
キシビニルグリシンはＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。
【００４１】セリノールおよび種々の化合物のジヒドロ
リゾビトキシンへの転換．ＨＭ培地中のＢ．ｅｌｋａｎ
ｉｉＵＳＤＡ９４の定常期培養の５００−ｍｌ定量を１
０，０００×ｇ、１０分、２０℃で遠心分離した。細胞
を、５０ｍＭリン酸カリバッファー（ＫＰ；ｐＨ６．
８）３００ｍｌで２回洗浄し、５０ｍＭＫＰ（ｐＨ６．
８）１０ｍｌに再懸濁し、一定量をエッペンドルフ・チ
ューブ（１．５ｍｌ）に入れた。そして、細胞量を６０
ｍｇ／チューブに調節した。遠心分離の後、細胞を、１
ｍＭホモセリン、Ｏ−アセチルホモセリン、システイ
ン、シスタチオニン、ホモシステイン、またはメチオニ
ンを含有した、２０ｍＭＫＰ（ｐＨ６．８）１ｍｌに再
懸濁した。アセチルホモセリンは、Ｎａｇａｉ ａｎｄ
Ｆｌａｖｉｎ（３３）の方法に従ってＬ−ホモセリンお
よび無水酢酸から合成した；他の化合物は、和光純薬工
業（大阪、日本）、ナカライテスク（京都、日本）、お
よびＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。細胞懸濁液は、３０
℃、１時間、暗所で振とうしてインキュベートした。遠
心分離後、上清を既に記述されたようにしてＬＣ／ＭＳ
により分析した。
リゾビトキシンへの転換．ＨＭ培地中のＢ．ｅｌｋａｎ
ｉｉＵＳＤＡ９４の定常期培養の５００−ｍｌ定量を１
０，０００×ｇ、１０分、２０℃で遠心分離した。細胞
を、５０ｍＭリン酸カリバッファー（ＫＰ；ｐＨ６．
８）３００ｍｌで２回洗浄し、５０ｍＭＫＰ（ｐＨ６．
８）１０ｍｌに再懸濁し、一定量をエッペンドルフ・チ
ューブ（１．５ｍｌ）に入れた。そして、細胞量を６０
ｍｇ／チューブに調節した。遠心分離の後、細胞を、１
ｍＭホモセリン、Ｏ−アセチルホモセリン、システイ
ン、シスタチオニン、ホモシステイン、またはメチオニ
ンを含有した、２０ｍＭＫＰ（ｐＨ６．８）１ｍｌに再
懸濁した。アセチルホモセリンは、Ｎａｇａｉ ａｎｄ
Ｆｌａｖｉｎ（３３）の方法に従ってＬ−ホモセリンお
よび無水酢酸から合成した；他の化合物は、和光純薬工
業（大阪、日本）、ナカライテスク（京都、日本）、お
よびＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。細胞懸濁液は、３０
℃、１時間、暗所で振とうしてインキュベートした。遠
心分離後、上清を既に記述されたようにしてＬＣ／ＭＳ
により分析した。
【００４２】［結果］Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４ライブラリーからｒｔ
ｘＡを含むｐＬＡＦＲ１コスミドの選択 ．以前の研究に
おいて、リゾビトキシン高産生のＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵ
ＳＤＡ９４のｒｔｘＡ遺伝子を、培地中でリゾビトキシ
ン低産生のＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１（６０）
の、公表されたｒｔｘＡ配列を参照して設計した２つの
プライマーを使用してＰＣＲ増幅した。プローブとし
て、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡのＰＣ
Ｒ由来断片を用いて（図１中のＣ）、本発明者は、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｐＬＡＦＲ１コスミド・
ライブラリー（６１）に対してコロニー・ハイブリダイ
ゼーションを行った。その結果として、本発明者は、Ｅ
ｃｏＲＩ制限部位を参照してｒｔｘＡを含有する７つの
独立したコスミドを配列することができた（図１）。７
つのコスミド中にｒｔｘＡを含有する４．３−ｋｂＥｃ
ｏＲＩ断片の同一性は、プローブとしてＢ．ｅｌｋａｎ
ｉｉＵＳＤＡ９４由来のｒｔｘＡのＰＣＲ由来断片と、
サザン・ハイブリダイゼーションによって実証した（図
１）。
ｘＡを含むｐＬＡＦＲ１コスミドの選択 ．以前の研究に
おいて、リゾビトキシン高産生のＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵ
ＳＤＡ９４のｒｔｘＡ遺伝子を、培地中でリゾビトキシ
ン低産生のＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１（６０）
の、公表されたｒｔｘＡ配列を参照して設計した２つの
プライマーを使用してＰＣＲ増幅した。プローブとし
て、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡのＰＣ
Ｒ由来断片を用いて（図１中のＣ）、本発明者は、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｐＬＡＦＲ１コスミド・
ライブラリー（６１）に対してコロニー・ハイブリダイ
ゼーションを行った。その結果として、本発明者は、Ｅ
ｃｏＲＩ制限部位を参照してｒｔｘＡを含有する７つの
独立したコスミドを配列することができた（図１）。７
つのコスミド中にｒｔｘＡを含有する４．３−ｋｂＥｃ
ｏＲＩ断片の同一性は、プローブとしてＢ．ｅｌｋａｎ
ｉｉＵＳＤＡ９４由来のｒｔｘＡのＰＣＲ由来断片と、
サザン・ハイブリダイゼーションによって実証した（図
１）。
【００４３】ｒｔｘＡ遺伝子周辺のヌクレオチド配列．
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡ遺伝子を含
むＤＮＡを配列決定し、本発明者は、１４オープン・リ
ーディング・フレームを含み、それらの全てが同じ配向
である、２８，４０１−ｂｐの配列（図１）を同定し
た。それらのうち、ｒｔｘＡの７ＯＲＦｓ上流は、ｆｉ
ｘＧＨＩＳ、ｎｏｅＥ、およびｎｏｄＰＱに相同であ
り、共生機能に関与しているように思われる。他の４Ｏ
ＲＦ群はｒｔｘＡの下流であり、リゾビトキシン生合成
に関与していることを示している。シグマ７０に対する
強力なプロモーターはｒｔｘＡの０．５−ｋｂ上流に存
在し、ＮｏｄＤ、ＦｉｘＫおよびシグマ５４によって認
識される他の強力なプロモーターは、それらのコンセン
サス配列によってはＤＮＡ領域中に見出されなかった
（１５）。各遺伝子およびＯＲＦの詳細な記載は以下に
述べる。
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒｔｘＡ遺伝子を含
むＤＮＡを配列決定し、本発明者は、１４オープン・リ
ーディング・フレームを含み、それらの全てが同じ配向
である、２８，４０１−ｂｐの配列（図１）を同定し
た。それらのうち、ｒｔｘＡの７ＯＲＦｓ上流は、ｆｉ
ｘＧＨＩＳ、ｎｏｅＥ、およびｎｏｄＰＱに相同であ
り、共生機能に関与しているように思われる。他の４Ｏ
ＲＦ群はｒｔｘＡの下流であり、リゾビトキシン生合成
に関与していることを示している。シグマ７０に対する
強力なプロモーターはｒｔｘＡの０．５−ｋｂ上流に存
在し、ＮｏｄＤ、ＦｉｘＫおよびシグマ５４によって認
識される他の強力なプロモーターは、それらのコンセン
サス配列によってはＤＮＡ領域中に見出されなかった
（１５）。各遺伝子およびＯＲＦの詳細な記載は以下に
述べる。
【００４４】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４中のｒｔ
ｘＡの推定アミノ酸配列．Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
９４中のｒｔｘＡの推定アミノ酸配列（８０３アミノ酸
残基：配列番号９）は、リゾビトキシン低産生Ｂ．ｅｌ
ｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１のそれに９５％類似していた
（４４、４５）。３４６Ｎ−末端残基は、Ｍｅｔｈａｎ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐ
ｈｉｃｕｍのアミノトランスフェラーゼと２４％同一で
あり、４０％類似であった（５２）。ｒｔｘＡの４４３
Ｃ−末端残基は、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｍｅｙｅｒの
Ｏ−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼと４１％同
一であり、５６％類似であった（２）。Ｏ−アセチルホ
モセリンスルフヒドリラーゼは、Ｏ−アセチルホモセリ
ンおよびスルフィドから含硫アミノ酸を合成する。一般
に、この酵素は、同様にＯ−アセチルホモセリンおよび
アルコールからＯ−アルキルホモセリンシンターゼ活性
を示し（３１、３２）、その反応機作は、Ｏ−アセチル
ホモセリンおよびセリノールからのジヒドロリゾビトキ
シン合成のそれに類似している。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵ
ＳＤＡ９４中のｒｔｘＡのアミノ酸の相同性は、Ｂ．ｅ
ｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１のそれらに類似している、た
だし、配列決定の誤りからＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
６１ではｒｔｘＡとｒｔｘＢ遺伝子に形式的に分離され
ていた（４４、４５）。ｒｔｘＡの予測されたアミノ酸
配列は、それらの可能性のある酵素機能が、セリノール
生成（１）およびジヒドロリゾビトキシン合成であるこ
とを示唆している。
ｘＡの推定アミノ酸配列．Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
９４中のｒｔｘＡの推定アミノ酸配列（８０３アミノ酸
残基：配列番号９）は、リゾビトキシン低産生Ｂ．ｅｌ
ｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１のそれに９５％類似していた
（４４、４５）。３４６Ｎ−末端残基は、Ｍｅｔｈａｎ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐ
ｈｉｃｕｍのアミノトランスフェラーゼと２４％同一で
あり、４０％類似であった（５２）。ｒｔｘＡの４４３
Ｃ−末端残基は、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｍｅｙｅｒの
Ｏ−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼと４１％同
一であり、５６％類似であった（２）。Ｏ−アセチルホ
モセリンスルフヒドリラーゼは、Ｏ−アセチルホモセリ
ンおよびスルフィドから含硫アミノ酸を合成する。一般
に、この酵素は、同様にＯ−アセチルホモセリンおよび
アルコールからＯ−アルキルホモセリンシンターゼ活性
を示し（３１、３２）、その反応機作は、Ｏ−アセチル
ホモセリンおよびセリノールからのジヒドロリゾビトキ
シン合成のそれに類似している。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵ
ＳＤＡ９４中のｒｔｘＡのアミノ酸の相同性は、Ｂ．ｅ
ｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１のそれらに類似している、た
だし、配列決定の誤りからＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ
６１ではｒｔｘＡとｒｔｘＢ遺伝子に形式的に分離され
ていた（４４、４５）。ｒｔｘＡの予測されたアミノ酸
配列は、それらの可能性のある酵素機能が、セリノール
生成（１）およびジヒドロリゾビトキシン合成であるこ
とを示唆している。
【００４５】ＯＲＦ１（ｒｔｘＣ）の推測アミノ酸配
列．ＯＲＦ１（３５２アミノ酸残基：配列番号１０）の
推測アミノ酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒ
ｉｎｇａｅの脂肪酸デサチュラーゼと１９％の同一性お
よび３１％の類似性を有していた（６２；図２）。ＯＲ
Ｆ１の予測したアミノ酸配列は、他のデサチュラーゼに
低類似性を示唆していたが、これらの配列の並びは、膜
結合デサチュラーゼの間に保存された、２つの領域：銅
結合部位および８つのヒスチジン残基、の存在を示した
（４９、６２）。推論された二次構造の解析は、ＯＲＦ
１産物に２つの可能性のある膜貫通領域を示した（５
６；図２）。リゾビトキシンは、Ｃ３とＣ４の間に不飽
和二重炭素結合を有している（３７）。それゆえ、本発
明者は、ＯＲＦ１産物は、ジヒドロリゾビトキシンに二
重炭素結合の導入を触媒するという仮説を立てた。本発
明者は、その結果ＯＲＦ１をｒｔｘＣと称し、これは、
ｒｔｘＡの３５ｂｐ下流に始まり、上流プロモーター様
配列を欠失している。それゆえ、ｒｔｘＡと（少なくと
も）ｒｔｘＣは多分オペロンを形成する。
列．ＯＲＦ１（３５２アミノ酸残基：配列番号１０）の
推測アミノ酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒ
ｉｎｇａｅの脂肪酸デサチュラーゼと１９％の同一性お
よび３１％の類似性を有していた（６２；図２）。ＯＲ
Ｆ１の予測したアミノ酸配列は、他のデサチュラーゼに
低類似性を示唆していたが、これらの配列の並びは、膜
結合デサチュラーゼの間に保存された、２つの領域：銅
結合部位および８つのヒスチジン残基、の存在を示した
（４９、６２）。推論された二次構造の解析は、ＯＲＦ
１産物に２つの可能性のある膜貫通領域を示した（５
６；図２）。リゾビトキシンは、Ｃ３とＣ４の間に不飽
和二重炭素結合を有している（３７）。それゆえ、本発
明者は、ＯＲＦ１産物は、ジヒドロリゾビトキシンに二
重炭素結合の導入を触媒するという仮説を立てた。本発
明者は、その結果ＯＲＦ１をｒｔｘＣと称し、これは、
ｒｔｘＡの３５ｂｐ下流に始まり、上流プロモーター様
配列を欠失している。それゆえ、ｒｔｘＡと（少なくと
も）ｒｔｘＣは多分オペロンを形成する。
【００４６】ＯＲＦ２、ＯＲＦ３、およびＯＲＦ４の推
測アミノ酸配列．ＯＲＦ２は、ｒｔｘＣの１９５ｂｐ下
流に始まり、その推測アミノ酸配列（２０７アミノ酸残
基：配列番号１１）は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅ
ｒｕｇｉｎｏｓａＰＡ０１のアミド・トランスフェラー
ゼ・サブユニットに４５％同一性および６１％類似性を
有していた（５３）。ＯＲＦ３は、ＯＲＦ２の５５５ｂ
ｐ下流に始まり、ＯＲＦ３の推測アミノ酸配列（５８８
アミノ酸残基：配列番号１２）は、いかなる公知のタン
パク質にも相同性を欠いていた。ＯＲＦ４は、ＯＲＦ３
（ＴＧＡ-ＴＧ）の終止コドンに始まっていた。ＯＲＦ
４の推測アミノ酸配列（４４４アミノ酸残基配列番号１
３）は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓのグルタミン・シンターゼに３４％同一性、
５３％類似性を有していた（５）。
測アミノ酸配列．ＯＲＦ２は、ｒｔｘＣの１９５ｂｐ下
流に始まり、その推測アミノ酸配列（２０７アミノ酸残
基：配列番号１１）は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅ
ｒｕｇｉｎｏｓａＰＡ０１のアミド・トランスフェラー
ゼ・サブユニットに４５％同一性および６１％類似性を
有していた（５３）。ＯＲＦ３は、ＯＲＦ２の５５５ｂ
ｐ下流に始まり、ＯＲＦ３の推測アミノ酸配列（５８８
アミノ酸残基：配列番号１２）は、いかなる公知のタン
パク質にも相同性を欠いていた。ＯＲＦ４は、ＯＲＦ３
（ＴＧＡ-ＴＧ）の終止コドンに始まっていた。ＯＲＦ
４の推測アミノ酸配列（４４４アミノ酸残基配列番号１
３）は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓのグルタミン・シンターゼに３４％同一性、
５３％類似性を有していた（５）。
【００４７】残りのＯＲＦ群の推測アミノ酸配列．ＯＲ
Ｆ５の推測アミノ酸配列（配列番号１４）は、Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４のトランスポゼース
に、８４％類似性を有し（１１）、そしてＯＲＦ６（配
列番号１５）は、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２
３４のＡＴＰ結合ヘルパー・タンパク質に７９％の類似
性を有していた。挿入配列（ＩＳ）因子ＮＧＲＩＳ５
は、ＩＳ２１／ＩＳ１１６２ファミリーに属する。ＯＲ
Ｆ５およびＯＲＦ６は、多分、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
において、ＩＳ１６３１として同定されたＩＳ２１／Ｉ
Ｓ１１６２ファミリーに属するＩＳ因子を形成する（１
７）。
Ｆ５の推測アミノ酸配列（配列番号１４）は、Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４のトランスポゼース
に、８４％類似性を有し（１１）、そしてＯＲＦ６（配
列番号１５）は、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２
３４のＡＴＰ結合ヘルパー・タンパク質に７９％の類似
性を有していた。挿入配列（ＩＳ）因子ＮＧＲＩＳ５
は、ＩＳ２１／ＩＳ１１６２ファミリーに属する。ＯＲ
Ｆ５およびＯＲＦ６は、多分、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
において、ＩＳ１６３１として同定されたＩＳ２１／Ｉ
Ｓ１１６２ファミリーに属するＩＳ因子を形成する（１
７）。
【００４８】ｒｔｘＡの１４ｋｂ上流に位置する４つの
ＯＲＦ群の推測アミノ酸配列（配列番号２〜５）は、
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｆｉｘＧの
３’末端およびｆｉｘＨ、ｆｉｘＩ、およびｆｉｘＳの
完全配列に、それぞれ、８１％、７０％、８２％、およ
び６２％類似性を示した（３４）。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０において、ＦｉｘＧＨＩＳ複合体
は、共生窒素固定に必要であり、ｃｂｂ３型ヘム銅オキ
シダーゼの取り込みおよび代謝における役割を演じてい
るのであろう（４１）。
ＯＲＦ群の推測アミノ酸配列（配列番号２〜５）は、
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｆｉｘＧの
３’末端およびｆｉｘＨ、ｆｉｘＩ、およびｆｉｘＳの
完全配列に、それぞれ、８１％、７０％、８２％、およ
び６２％類似性を示した（３４）。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０において、ＦｉｘＧＨＩＳ複合体
は、共生窒素固定に必要であり、ｃｂｂ３型ヘム銅オキ
シダーゼの取り込みおよび代謝における役割を演じてい
るのであろう（４１）。
【００４９】ｒｔｘＡの上流の残りの３つのＯＲＦ群の
推測アミノ酸配列（配列番号６〜８）は、Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４の断続されたｎｏｅＥ、Ａ
ｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅの完全
ｎｏｄＰ、およびＲｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．Ｎ３３の
ｎｏｄＱに、８３％、９０％、および８２％の類似性を
示した（１１、５５）。多くの報告が、ｎｏｄ、ｎｏ
ｌ、およびｎｏｅ遺伝子産物が変異体Ｎｏｄファクター
の合成に必要とされることを示している。Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４において、ＮｏｅＥは、
３’−ホスホアデノシン５’−ホスホ硫酸（ＰＡＰＳ）
からフコシル化リポキチン・オリゴ糖に硫酸を転移する
（１６）。Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏ
ｔｉおよびＲ．ｔｒｏｐｉｃｉにおいて、ｎｏｄＰＱ遺
伝子は、ｎｏｄＰＱ遺伝子は、Ｎｏｄファクターの硫酸
化に必要であった（１０、５０）。しかしながら、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉのＮｏｄファクターは、それらの硫酸化
の添加によって修飾されなかった（４、４８）。また、
コンセンサスｎｏｄｂｏｘ配列（１５）は、この領域に
見出されなかった。おそらく、これらの遺伝子は、Ｎｏ
ｄファクター合成に機能しないものと考えられる。
推測アミノ酸配列（配列番号６〜８）は、Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４の断続されたｎｏｅＥ、Ａ
ｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅの完全
ｎｏｄＰ、およびＲｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．Ｎ３３の
ｎｏｄＱに、８３％、９０％、および８２％の類似性を
示した（１１、５５）。多くの報告が、ｎｏｄ、ｎｏ
ｌ、およびｎｏｅ遺伝子産物が変異体Ｎｏｄファクター
の合成に必要とされることを示している。Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４において、ＮｏｅＥは、
３’−ホスホアデノシン５’−ホスホ硫酸（ＰＡＰＳ）
からフコシル化リポキチン・オリゴ糖に硫酸を転移する
（１６）。Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏ
ｔｉおよびＲ．ｔｒｏｐｉｃｉにおいて、ｎｏｄＰＱ遺
伝子は、ｎｏｄＰＱ遺伝子は、Ｎｏｄファクターの硫酸
化に必要であった（１０、５０）。しかしながら、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉのＮｏｄファクターは、それらの硫酸化
の添加によって修飾されなかった（４、４８）。また、
コンセンサスｎｏｄｂｏｘ配列（１５）は、この領域に
見出されなかった。おそらく、これらの遺伝子は、Ｎｏ
ｄファクター合成に機能しないものと考えられる。
【００５０】リゾビトキシン生合成の相補系の確立．
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉにおける相同組換えの効率は、Ｂ．
ｊａｐｏｎｉｃｕｍのそれよりも低い（２４）。それゆ
え、リゾビトキシン生合成におけるそれらの機能を評価
するため、本発明者は、カナマイシン・カセットの挿入
により変異されたコスミドがリゾビトキシン生合成の推
定ＤＮＡ領域を欠失したＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４変異体を補完する、ショートカット戦略を採用した。
本発明者は、先ず、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４染
色体の９．８ｋｂ領域（ｎｏｄＱＰ、ｒｔｘＡ、ｒｔｘ
Ｃ、ＯＲＦ２、および端を切り取ったＯＲＦ３）を欠損
している大欠失変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１を
構築した（図３中のＡ）。本発明者は、適当な制限部位
がなかったので、完全ＯＲＦ３配列またはＯＲＦ４を欠
損することができなかった。
Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉにおける相同組換えの効率は、Ｂ．
ｊａｐｏｎｉｃｕｍのそれよりも低い（２４）。それゆ
え、リゾビトキシン生合成におけるそれらの機能を評価
するため、本発明者は、カナマイシン・カセットの挿入
により変異されたコスミドがリゾビトキシン生合成の推
定ＤＮＡ領域を欠失したＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４変異体を補完する、ショートカット戦略を採用した。
本発明者は、先ず、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４染
色体の９．８ｋｂ領域（ｎｏｄＱＰ、ｒｔｘＡ、ｒｔｘ
Ｃ、ＯＲＦ２、および端を切り取ったＯＲＦ３）を欠損
している大欠失変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１を
構築した（図３中のＡ）。本発明者は、適当な制限部位
がなかったので、完全ＯＲＦ３配列またはＯＲＦ４を欠
損することができなかった。
【００５１】培養上清中のセリノール、ジヒドロリゾビ
トキシン、およびリゾビトキシン濃度を、ＬＣ／ＭＳを
使用してフェニルチオカルバミル誘導体として分析した
（図４）。高濃度のセリノール、ジヒドロリゾビトキシ
ン、およびリゾビトキシン（それぞれ、２８０、１２０
および１５μＭ）が、野生型ＵＳＤＡ９４の培養物中に
検出された。しかしながら、予期されたように、大欠失
変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１は、セリノール、
ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンを産生
しなかった。
トキシン、およびリゾビトキシン濃度を、ＬＣ／ＭＳを
使用してフェニルチオカルバミル誘導体として分析した
（図４）。高濃度のセリノール、ジヒドロリゾビトキシ
ン、およびリゾビトキシン（それぞれ、２８０、１２０
および１５μＭ）が、野生型ＵＳＤＡ９４の培養物中に
検出された。しかしながら、予期されたように、大欠失
変異体ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１は、セリノール、
ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシンを産生
しなかった。
【００５２】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４は、テト
ラサイクリンに高度に耐性があるので、テトラサイクリ
ン選択マーカーを有するｐＬＡＦＲ１コスミドは、トラ
ンス・コンジュゲーションで得られなかった。それゆ
え、本発明者は、ｐＲＴＦ１にカナマイシン耐性を付与
した。得られたコスミドｐＲＴＦ１−Ｆ１は、クローニ
ング領域（ＯＲＦ６の末端から１．７ｋｂ下流；図１）
の３’側にカナマイシン・カセットを含有する。セリノ
ール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシン
産物が、ｐＲＴＦ１−Ｆ１をＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：
Ω１に導入したときに回復した（図４）。これらの結果
は、ｐＲＴＦ１およびＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１を
用いた補完システムが成功裡に確立されたことを示して
おり、それによって、本発明者が、リゾビトキシン生合
成における種々の遺伝子およびＯＲＦ群の機能を検査す
ることが可能になる。
ラサイクリンに高度に耐性があるので、テトラサイクリ
ン選択マーカーを有するｐＬＡＦＲ１コスミドは、トラ
ンス・コンジュゲーションで得られなかった。それゆ
え、本発明者は、ｐＲＴＦ１にカナマイシン耐性を付与
した。得られたコスミドｐＲＴＦ１−Ｆ１は、クローニ
ング領域（ＯＲＦ６の末端から１．７ｋｂ下流；図１）
の３’側にカナマイシン・カセットを含有する。セリノ
ール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリゾビトキシン
産物が、ｐＲＴＦ１−Ｆ１をＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：
Ω１に導入したときに回復した（図４）。これらの結果
は、ｐＲＴＦ１およびＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１を
用いた補完システムが成功裡に確立されたことを示して
おり、それによって、本発明者が、リゾビトキシン生合
成における種々の遺伝子およびＯＲＦ群の機能を検査す
ることが可能になる。
【００５３】種々のｐＲＴＦ１誘導体によって補完され
たＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１中でのリゾビトキシ
ン、ジヒドロリゾビトキシンおよびセリノールの製造．
リゾビトキシン生合成におけるｒｔｘＡおよびその関連
したＯＲＦ群の機能をしらべるため、本発明者は、カナ
マイシン・カセットがＤＮＡ中に挿入された１２の独立
したｐＲＴＦ１誘導体を構築し、ｐＲＴＦ１誘導体の培
養上清中でのセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、お
よびリゾビトキシンを分析した（図３中のＢ）。ｐＲＴ
Ｆ１に続く略語、Ｃ３、Ｃ１、Ｄ８、Ｄ２、Ｄ５、Ｄ
３、Ｅ２６、Ｅ９、Ｅ１０、Ｅ２、Ｅ８、およびＦ６
（表１）は、図３中のカナマイシン・カセット挿入の位
置を示す。ｒｔｘＡの１．３および０．６ｋｂ上流に位
置するＣ３およびＣ１にカセットの挿入は、培地中にセ
リノール（Ｃ３、１４２μＭ；Ｃ１、１１６μＭ）、ジ
ヒドロリゾビトキシン（Ｃ３、７μＭ；Ｃ１、６μ
Ｍ）、およびリゾビトキシン（Ｃ３、４μＭ；Ｃ１、５
μＭ）を連続して産生した。しかしながら、Ｄ８挿入
（ｒｔｘＡの０．２ｋｂ上流に位置する）は、ジヒドロ
リゾビトキシンおよびリゾビトキシン産生を停止し、セ
リノール産生（２４μＭ）を減じた。本発明者は、ｒｔ
ｘＡの０．５ｋｂ上流に推定のプロモーター配列（５’
−ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔ
ｔｇ−ＴＡＣＧＡＴ−３’）を発見したので、これら化
合物を産生する能力の喪失または減少は、ｒｔｘＡ転写
におけるプロモーターの後にＤ８挿入の極性効果による
ものであろう。
たＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１中でのリゾビトキシ
ン、ジヒドロリゾビトキシンおよびセリノールの製造．
リゾビトキシン生合成におけるｒｔｘＡおよびその関連
したＯＲＦ群の機能をしらべるため、本発明者は、カナ
マイシン・カセットがＤＮＡ中に挿入された１２の独立
したｐＲＴＦ１誘導体を構築し、ｐＲＴＦ１誘導体の培
養上清中でのセリノール、ジヒドロリゾビトキシン、お
よびリゾビトキシンを分析した（図３中のＢ）。ｐＲＴ
Ｆ１に続く略語、Ｃ３、Ｃ１、Ｄ８、Ｄ２、Ｄ５、Ｄ
３、Ｅ２６、Ｅ９、Ｅ１０、Ｅ２、Ｅ８、およびＦ６
（表１）は、図３中のカナマイシン・カセット挿入の位
置を示す。ｒｔｘＡの１．３および０．６ｋｂ上流に位
置するＣ３およびＣ１にカセットの挿入は、培地中にセ
リノール（Ｃ３、１４２μＭ；Ｃ１、１１６μＭ）、ジ
ヒドロリゾビトキシン（Ｃ３、７μＭ；Ｃ１、６μ
Ｍ）、およびリゾビトキシン（Ｃ３、４μＭ；Ｃ１、５
μＭ）を連続して産生した。しかしながら、Ｄ８挿入
（ｒｔｘＡの０．２ｋｂ上流に位置する）は、ジヒドロ
リゾビトキシンおよびリゾビトキシン産生を停止し、セ
リノール産生（２４μＭ）を減じた。本発明者は、ｒｔ
ｘＡの０．５ｋｂ上流に推定のプロモーター配列（５’
−ＴＴＧＡＡＡ−ｃｇｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔ
ｔｇ−ＴＡＣＧＡＴ−３’）を発見したので、これら化
合物を産生する能力の喪失または減少は、ｒｔｘＡ転写
におけるプロモーターの後にＤ８挿入の極性効果による
ものであろう。
【００５４】Ｄ２挿入（ｒｔｘＡのＮ末端に位置する）
での誘導体は、培地中でセリノール、ジヒドロリゾビト
キシン、およびリゾビトキシンの産生を、完全に消失し
た。Ｄ５挿入（ｒｔｘＡのＣ末端領域における）は、ま
た、ジヒドロリゾビトキシンおよびリゾビトキシンの産
生能力を消失したが、しかしながら、この誘導体は、セ
リノール産生（４０μＭ）の部分的回復を示した。これ
らの結果は、ｒｔｘＡのＮ末端領域が、培養におけるセ
リノール生合成に関与していることを指示しており、こ
れはｒｔｘＡのＮ末端領域のＤＮＡ配列がアミノトラン
スフェラーゼに相同であるという事実によって支持され
ている。この機能は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１
のＴｎ５ｒｔｘＡ変異体とインキュベートした大豆根瘤
におけるセリノール産生の欠如に一致している（４
３）。
での誘導体は、培地中でセリノール、ジヒドロリゾビト
キシン、およびリゾビトキシンの産生を、完全に消失し
た。Ｄ５挿入（ｒｔｘＡのＣ末端領域における）は、ま
た、ジヒドロリゾビトキシンおよびリゾビトキシンの産
生能力を消失したが、しかしながら、この誘導体は、セ
リノール産生（４０μＭ）の部分的回復を示した。これ
らの結果は、ｒｔｘＡのＮ末端領域が、培養におけるセ
リノール生合成に関与していることを指示しており、こ
れはｒｔｘＡのＮ末端領域のＤＮＡ配列がアミノトラン
スフェラーゼに相同であるという事実によって支持され
ている。この機能は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ６１
のＴｎ５ｒｔｘＡ変異体とインキュベートした大豆根瘤
におけるセリノール産生の欠如に一致している（４
３）。
【００５５】Ｄ３挿入（ｒｔｘＣにおける）構築は、ジ
ヒドロリゾビトキシン（２μＭ）およびセリノール（２
０２μＭ）産生の回復をもたらしたが、リゾビトキシン
産生はなかった。挿入の極性効果に基づいて考察する
と、ｒｔｘＡのＣ末端領域は、ジヒドロリゾビトキシン
生合成に関与しているのであろう。この考えは、ｒｔｘ
ＡのＣドメインの、Ｏ−アセチルホモセリンとアルコー
ルとの結合を触媒する、Ｏ−アセチルホモセリンスルフ
ヒドリラーゼに対するＤＮＡ相同性によって支持されて
いる。それゆえ、この発見は、ｒｔｘＡ遺伝子産物がリ
ゾビトキシン生合成における２つの重要なステップに関
与していることを示唆している。
ヒドロリゾビトキシン（２μＭ）およびセリノール（２
０２μＭ）産生の回復をもたらしたが、リゾビトキシン
産生はなかった。挿入の極性効果に基づいて考察する
と、ｒｔｘＡのＣ末端領域は、ジヒドロリゾビトキシン
生合成に関与しているのであろう。この考えは、ｒｔｘ
ＡのＣドメインの、Ｏ−アセチルホモセリンとアルコー
ルとの結合を触媒する、Ｏ−アセチルホモセリンスルフ
ヒドリラーゼに対するＤＮＡ相同性によって支持されて
いる。それゆえ、この発見は、ｒｔｘＡ遺伝子産物がリ
ゾビトキシン生合成における２つの重要なステップに関
与していることを示唆している。
【００５６】Ｅ２６挿入（ＯＲＦ２における）−含有誘
導体の補完後およびＤ３挿入のそれと比較した、リゾビ
トキシン産生の回復は、ｒｔｘＣはジヒドロリゾビトキ
シンからリゾビトキシンへの酵素的変換に関与している
ことを示唆している。更に、ｒｔｘＣのヌクレオチド配
列は、分子中の二重炭素結合を誘導する、脂肪酸デサチ
ュラーゼに対する類似性を有している。それゆえ、ｒｔ
ｘＣ産物は、ジヒドロリゾビトキシンのＣ３位への二重
炭素結合の導入を触媒し、リゾビトキシンを産生する、
ということを仮定する合理性があるように思える。
導体の補完後およびＤ３挿入のそれと比較した、リゾビ
トキシン産生の回復は、ｒｔｘＣはジヒドロリゾビトキ
シンからリゾビトキシンへの酵素的変換に関与している
ことを示唆している。更に、ｒｔｘＣのヌクレオチド配
列は、分子中の二重炭素結合を誘導する、脂肪酸デサチ
ュラーゼに対する類似性を有している。それゆえ、ｒｔ
ｘＣ産物は、ジヒドロリゾビトキシンのＣ３位への二重
炭素結合の導入を触媒し、リゾビトキシンを産生する、
ということを仮定する合理性があるように思える。
【００５７】セリノール産生（セリノール、２００ない
し２２２μＭ）は、Ｃ３およびＦ１挿入を含む誘導体と
の補完の後に、元のレベルに達したのであるが、ＯＲＦ
２内およびＯＲＦ２とＯＲＦ３の間に存在する、Ｅ２
６、Ｅ９、およびＥ１０挿入の誘導体は、ジヒドロリゾ
ビトキシンおよびリゾビトキシンの低濃度（ジヒドロリ
ゾビトキシン、０．８ないし１．１μＭ；リゾビトキシ
ン、０．４ないし０．５μＭ）を誘導した。ＯＲＦ３に
おけるＥ２挿入は、低レベルのジヒドロリゾビトキシン
およびリゾビトキシン産生（セリノール、２４０μＭ；
ジヒドロリゾビトキシン、３．９μＭ；リゾビトキシ
ン、０．９μＭ）を保持した。それゆえ、ＯＲＦ２およ
びＯＲＦ３産物は、他の中間体の合成またはリゾビトキ
シン生合成の分泌または制御に関与しているらしい。そ
れらの機能は、それらの相同性および公知文献からは特
定化されていない。
し２２２μＭ）は、Ｃ３およびＦ１挿入を含む誘導体と
の補完の後に、元のレベルに達したのであるが、ＯＲＦ
２内およびＯＲＦ２とＯＲＦ３の間に存在する、Ｅ２
６、Ｅ９、およびＥ１０挿入の誘導体は、ジヒドロリゾ
ビトキシンおよびリゾビトキシンの低濃度（ジヒドロリ
ゾビトキシン、０．８ないし１．１μＭ；リゾビトキシ
ン、０．４ないし０．５μＭ）を誘導した。ＯＲＦ３に
おけるＥ２挿入は、低レベルのジヒドロリゾビトキシン
およびリゾビトキシン産生（セリノール、２４０μＭ；
ジヒドロリゾビトキシン、３．９μＭ；リゾビトキシ
ン、０．９μＭ）を保持した。それゆえ、ＯＲＦ２およ
びＯＲＦ３産物は、他の中間体の合成またはリゾビトキ
シン生合成の分泌または制御に関与しているらしい。そ
れらの機能は、それらの相同性および公知文献からは特
定化されていない。
【００５８】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４における
ジヒドロリゾビトキシン産生に対するホモセリン様化合
物の効果．ｒｔｘＡ遺伝子のＣ末端部分は、Ｏ−アセチ
ルホモセリンスルフヒドリラーゼに相同であり、本発明
者の破壊実験の結果は、その酵素機能が、ジヒドロリゾ
ビトキシン合成に関与していることを、示唆している。
しかしながら、Ｏ−アセチルホモセリンは、メチオニン
生合成経路内に所在している（３１、３２）。この推定
のジヒドロリゾビトキシン合成に対する基質を示唆する
ため、本発明者は、メチオニン生合成経路中における種
々の化合物の存在下にＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４
細胞懸濁液のジヒドロリゾビトキシン産生を探究した
（図５）。ジヒドロリゾビトキシン産生は、これらの化
合物、特にメチオニンのような含硫化合物、の添加によ
って、劇的に増加した。
ジヒドロリゾビトキシン産生に対するホモセリン様化合
物の効果．ｒｔｘＡ遺伝子のＣ末端部分は、Ｏ−アセチ
ルホモセリンスルフヒドリラーゼに相同であり、本発明
者の破壊実験の結果は、その酵素機能が、ジヒドロリゾ
ビトキシン合成に関与していることを、示唆している。
しかしながら、Ｏ−アセチルホモセリンは、メチオニン
生合成経路内に所在している（３１、３２）。この推定
のジヒドロリゾビトキシン合成に対する基質を示唆する
ため、本発明者は、メチオニン生合成経路中における種
々の化合物の存在下にＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４
細胞懸濁液のジヒドロリゾビトキシン産生を探究した
（図５）。ジヒドロリゾビトキシン産生は、これらの化
合物、特にメチオニンのような含硫化合物、の添加によ
って、劇的に増加した。
【００５９】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉとＢ．ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍのｒｔｘ領域の比較．Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにお
ける共生に関連した４１０−ｋｂＤＮＡ領域は、Ｇｏｅ
ｔｔｆｅｒｔら（１５）により配列決定および解析され
た。興味深いことに、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍはリゾビ
トキシンを産生しないにもかかわらず、彼らはこの領域
にｒｔｘＡ様遺伝子を見出した（１３、２９）。それゆ
え、本発明者は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒ
ｔｘＡおよびそのフランキング領域をＢ．ｊａｐｏｎｉ
ｃｕｍＵＳＤＡ１１０のそれらと比較した（図６）。ｒ
ｔｘＡからＯＲＦ４までの８，６４１−ｂｐＤＮＡ配列
の比較は、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のこ
の領域がＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のそれと７９
％相同であることを示している。対照的に、Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍの、それら２つの種の間のｒｔｘＡ
上流とＯＲＦ４下流の配列の比較は、全く注目すべき類
似性は示さなかった。更に、ｒｔｘＡ、ｒｔｘＣ、ＯＲ
Ｆ２、ＯＲＦ３およびＯＲＦ４に相当するＯＲＦ群は、
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおいて見出された、そしてそ
れらの程度は、２つの種の間によく保存されていた。
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍのｒｔｘＣ、ＯＲＦ２、および
ＯＲＦ４のＤＮＡ配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉのそれ
に、それぞれ、９３％、８７％、および８９％の類似性
を示した。しかし、ｒｔｘＡおよびＯＲＦ３に相当する
ＯＲＦｓは、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおいては、３つ
のＯＲＦ群に断片化されていた。特に、ｒｔｘＡ遺伝子
のＣ−ドメインの断片化は、ジヒドロリゾビトキシン合
成能力を失っているように見えた。
ｕｍのｒｔｘ領域の比較．Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにお
ける共生に関連した４１０−ｋｂＤＮＡ領域は、Ｇｏｅ
ｔｔｆｅｒｔら（１５）により配列決定および解析され
た。興味深いことに、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍはリゾビ
トキシンを産生しないにもかかわらず、彼らはこの領域
にｒｔｘＡ様遺伝子を見出した（１３、２９）。それゆ
え、本発明者は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のｒ
ｔｘＡおよびそのフランキング領域をＢ．ｊａｐｏｎｉ
ｃｕｍＵＳＤＡ１１０のそれらと比較した（図６）。ｒ
ｔｘＡからＯＲＦ４までの８，６４１−ｂｐＤＮＡ配列
の比較は、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のこ
の領域がＢ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のそれと７９
％相同であることを示している。対照的に、Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍの、それら２つの種の間のｒｔｘＡ
上流とＯＲＦ４下流の配列の比較は、全く注目すべき類
似性は示さなかった。更に、ｒｔｘＡ、ｒｔｘＣ、ＯＲ
Ｆ２、ＯＲＦ３およびＯＲＦ４に相当するＯＲＦ群は、
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおいて見出された、そしてそ
れらの程度は、２つの種の間によく保存されていた。
Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍのｒｔｘＣ、ＯＲＦ２、および
ＯＲＦ４のＤＮＡ配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉのそれ
に、それぞれ、９３％、８７％、および８９％の類似性
を示した。しかし、ｒｔｘＡおよびＯＲＦ３に相当する
ＯＲＦｓは、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおいては、３つ
のＯＲＦ群に断片化されていた。特に、ｒｔｘＡ遺伝子
のＣ−ドメインの断片化は、ジヒドロリゾビトキシン合
成能力を失っているように見えた。
【００６０】［考察］本発明によって、ｒｔｘＡ及びｒ
ｔｘＣ遺伝子が、変異原性実験およびＬＣ／ＭＳを用い
ることによる、培養中におけるリゾビトキシン中間体の
濃度の測定の結果に照らして、自由生活Ｂ．ｅｌｋａｎ
ｉｉでのリゾビトキシン生合成に関与していることを明
らかにした。リゾビトキシンへの生合成経路および種々
の遺伝子の生物活性を、図７に要約する。
ｔｘＣ遺伝子が、変異原性実験およびＬＣ／ＭＳを用い
ることによる、培養中におけるリゾビトキシン中間体の
濃度の測定の結果に照らして、自由生活Ｂ．ｅｌｋａｎ
ｉｉでのリゾビトキシン生合成に関与していることを明
らかにした。リゾビトキシンへの生合成経路および種々
の遺伝子の生物活性を、図７に要約する。
【００６１】ジヒドロリゾビトキシンがリゾビトキシン
生合成の最終産物（２２）か中間体（４４）かという問
題は、議論の源であった。本発明では、ｒｔｘＣ遺伝子
がリゾビトキシン生合成の最終ステップでジヒドロリゾ
ビトキシン不飽和化に関与しており、この遺伝子産物
が、Ｃ３とＣ４の間の位置に不飽和二重炭素結合を創り
出すことによってジヒドロリゾビトキシンのリゾビトキ
シンへの変換を触媒することを示唆している。それゆ
え、本発明者はジヒドロリゾビトキシンはリゾビトキシ
ン生合成における鍵となる中間体であることが確認され
た（図７）。
生合成の最終産物（２２）か中間体（４４）かという問
題は、議論の源であった。本発明では、ｒｔｘＣ遺伝子
がリゾビトキシン生合成の最終ステップでジヒドロリゾ
ビトキシン不飽和化に関与しており、この遺伝子産物
が、Ｃ３とＣ４の間の位置に不飽和二重炭素結合を創り
出すことによってジヒドロリゾビトキシンのリゾビトキ
シンへの変換を触媒することを示唆している。それゆ
え、本発明者はジヒドロリゾビトキシンはリゾビトキシ
ン生合成における鍵となる中間体であることが確認され
た（図７）。
【００６２】Ｒｕａｎら（４４、４５）は、Ｂ．ｅｌｋ
ａｎｉｉＵＳＤＡ６１からｒｔｘＡ（以前のｒｔｘＡお
よびｒｔｘＢ）遺伝子を単離し、ｒｔｘＡ変異体は、根
瘤にセリノールを蓄積せず、培地または根瘤中にリゾビ
トキシンを産生しないことを観察した。これらの著者
は、ｒｔｘＡは、ＤＮＡ相同性およびその他の研究に照
らして、セリノール生成およびジヒドロリゾビトキシン
合成に関与していることを推測した（４４、４５）。本
発明では、培養中のセリノールおよびジヒドロリゾビト
キシン濃度の定量は、ｒｔｘＡのＮ末端領域がセリノー
ル生成に関与しており、ｃ末端部分がジヒドロリゾビト
キシン生合成に関与している−リゾビトキシン生合成の
重要なステップを明らかにした。しかしながら、９０ｋ
Ｄａの予測されたタンパク質は同時に両方の活性を媒介
しているかどうか、未だ不明確である。
ａｎｉｉＵＳＤＡ６１からｒｔｘＡ（以前のｒｔｘＡお
よびｒｔｘＢ）遺伝子を単離し、ｒｔｘＡ変異体は、根
瘤にセリノールを蓄積せず、培地または根瘤中にリゾビ
トキシンを産生しないことを観察した。これらの著者
は、ｒｔｘＡは、ＤＮＡ相同性およびその他の研究に照
らして、セリノール生成およびジヒドロリゾビトキシン
合成に関与していることを推測した（４４、４５）。本
発明では、培養中のセリノールおよびジヒドロリゾビト
キシン濃度の定量は、ｒｔｘＡのＮ末端領域がセリノー
ル生成に関与しており、ｃ末端部分がジヒドロリゾビト
キシン生合成に関与している−リゾビトキシン生合成の
重要なステップを明らかにした。しかしながら、９０ｋ
Ｄａの予測されたタンパク質は同時に両方の活性を媒介
しているかどうか、未だ不明確である。
【００６３】セリノールは、多分、１つのｒｔｘＡ遺伝
子が２つの機能：セリノール生成およびジヒドロリゾビ
トキシン生合成、を有しているので、ジヒドロリゾビト
キシンの前駆体である。しかしながら、ジヒドロリゾビ
トキシン生合成における、ホモセリン部分の基質は未だ
不明である。メチオニンおよびその中間体（Ｏ−アセチ
ルホモセリン、システイン、シスタチオニン、およびホ
モシステインを含む）の付加は、培養におけるジヒドロ
リゾビトキシン産生を劇的に増加させる（図５）。この
結果は、基質特異性が究極的にはｒｔｘＡ遺伝子由来の
生成酵素を使用することによって決定されなければなら
ないが、含硫中間体がジヒドロリゾビトキシンおよびＯ
−アセチルホモセリンの前駆体候補であることを示して
いる。もしそうならば、β−シスタチオナーゼは、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉにおけるリゾビトキシンによるフィード
バック阻害を受けやすいのでは、という興味がある（図
７）。
子が２つの機能：セリノール生成およびジヒドロリゾビ
トキシン生合成、を有しているので、ジヒドロリゾビト
キシンの前駆体である。しかしながら、ジヒドロリゾビ
トキシン生合成における、ホモセリン部分の基質は未だ
不明である。メチオニンおよびその中間体（Ｏ−アセチ
ルホモセリン、システイン、シスタチオニン、およびホ
モシステインを含む）の付加は、培養におけるジヒドロ
リゾビトキシン産生を劇的に増加させる（図５）。この
結果は、基質特異性が究極的にはｒｔｘＡ遺伝子由来の
生成酵素を使用することによって決定されなければなら
ないが、含硫中間体がジヒドロリゾビトキシンおよびＯ
−アセチルホモセリンの前駆体候補であることを示して
いる。もしそうならば、β−シスタチオナーゼは、Ｂ．
ｅｌｋａｎｉｉにおけるリゾビトキシンによるフィード
バック阻害を受けやすいのでは、という興味がある（図
７）。
【００６４】Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおいては、根瘤
着生および共生窒素固定にかかわる遺伝子の大部分は、
８．７−Ｍｂ染色体の約４００−ｋｂ領域内に密集して
いる（１５、２０）。Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌ
ｏｔｉＩＣＭＰ３１５３株においては、共生島と称せら
れる共生クラスターが、フェニルアラニン特異的ｔＲＮ
Ａ遺伝子に集積されるとき他の菌株に転移することがで
きる（５４）。さらに、この島構造は、他のＭ．ｌｏｔ
ｉ株、ＭＡＦＦ３０３０９９の類似の染色体によく保存
されている（１９）。それゆえ、根瘤菌の共生遺伝子
は、水平遺伝子転移およびその後のゲノム再配列によっ
て進化したことが一般的に受け入れられている。
着生および共生窒素固定にかかわる遺伝子の大部分は、
８．７−Ｍｂ染色体の約４００−ｋｂ領域内に密集して
いる（１５、２０）。Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌ
ｏｔｉＩＣＭＰ３１５３株においては、共生島と称せら
れる共生クラスターが、フェニルアラニン特異的ｔＲＮ
Ａ遺伝子に集積されるとき他の菌株に転移することがで
きる（５４）。さらに、この島構造は、他のＭ．ｌｏｔ
ｉ株、ＭＡＦＦ３０３０９９の類似の染色体によく保存
されている（１９）。それゆえ、根瘤菌の共生遺伝子
は、水平遺伝子転移およびその後のゲノム再配列によっ
て進化したことが一般的に受け入れられている。
【００６５】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉのｒｔｘＡおよびｒｔ
ｘＣ遺伝子は、根瘤着生および共生窒素固定遺伝子を含
むＤＮＡ領域に局在していた（図１）。興味深いこと
に、ｒｔｘクラスターおよびクラスターの上流のｎｏｅ
Ｅ遺伝子は、リゾビトキシンを合成しないＢ．ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０に（２６、２７、２９）ほと
んど完全に保存されていた（図６；１５）。可能な説明
は、リゾビトキシンを合成する能力の喪失は、ｒｔｘＡ
遺伝子のＣ−末端領域のＢ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおけ
る断片化のためであろう（図６）。
ｘＣ遺伝子は、根瘤着生および共生窒素固定遺伝子を含
むＤＮＡ領域に局在していた（図１）。興味深いこと
に、ｒｔｘクラスターおよびクラスターの上流のｎｏｅ
Ｅ遺伝子は、リゾビトキシンを合成しないＢ．ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０に（２６、２７、２９）ほと
んど完全に保存されていた（図６；１５）。可能な説明
は、リゾビトキシンを合成する能力の喪失は、ｒｔｘＡ
遺伝子のＣ−末端領域のＢ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおけ
る断片化のためであろう（図６）。
【００６６】高根瘤着生マメ科変異体を用いた実験（４
５）およびエチレン阻害剤の適用（３５）は、宿主マメ
科植物のエチレン認知が根瘤着生の制御に関与している
ことを示唆している。エチレンは、大豆（Ｇｌｙｃｉｎ
ｅ ｍａｘ；３５）を除くいくつかのマメ科植物の根瘤
着生を減じることが報告されている。Ｂ．ｊａｐｏｎｉ
ｃｕｍは、多菌株環境において優先的に大豆に根瘤着生
する（３０）。それゆえ、多分、ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏ
ｂｉａの祖先がリゾビトキシン生合成遺伝子と種々の共
生遺伝子を獲得した後に、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍは大
豆根瘤着生のエチレン不感受性のせいで選択圧を欠い
て、リゾビトキシンを合成する能力を失った。Ｂ．ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘ領域の部分的崩
壊は、この考えを支持している（図６）。
５）およびエチレン阻害剤の適用（３５）は、宿主マメ
科植物のエチレン認知が根瘤着生の制御に関与している
ことを示唆している。エチレンは、大豆（Ｇｌｙｃｉｎ
ｅ ｍａｘ；３５）を除くいくつかのマメ科植物の根瘤
着生を減じることが報告されている。Ｂ．ｊａｐｏｎｉ
ｃｕｍは、多菌株環境において優先的に大豆に根瘤着生
する（３０）。それゆえ、多分、ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏ
ｂｉａの祖先がリゾビトキシン生合成遺伝子と種々の共
生遺伝子を獲得した後に、Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍは大
豆根瘤着生のエチレン不感受性のせいで選択圧を欠い
て、リゾビトキシンを合成する能力を失った。Ｂ．ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘ領域の部分的崩
壊は、この考えを支持している（図６）。
【００６７】従来、リゾビトキシンを合成する能力は、
遅増殖性Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉ（２７、２９、３７）およ
びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉ
ｓ（２１）に限定されていた。Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐｐ．以外の速増殖性根瘤菌が根瘤着生を増
強し得るので、それが宿主植物のエチレン生合成に対す
る他の阻害剤を産生するのかどうかという疑問が生じ
る。この可能性を試験するのに、本発明者は、データベ
ース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊ
ｐ／ｅｎ／）にある速増殖性Ｍ．ｌｏｔｉの完全ゲノム
からエチレン生合成を減じる強力な酵素および化合物を
探し、候補として、１−アミノシクロプロパン−１−カ
ルボキシレート（ＡＣＣ）デアミナーゼ遺伝子を同定し
た。ＡＣＣデアミナーゼ遺伝子は、７．０−Ｍｂ染色体
上の６１１−ｋｂ共生島（ｎｉｆＤＫ遺伝子の下流）内
に位置していた（１９）。植物生育促進Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｓｐｐ．は、ＡＣＣデアミナーゼを有し、Ａ
ＣＣをα−ケト酪酸とアンモニアに分解することによっ
て植物エチレンの量を減少する（１４）。それゆえ、根
瘤菌は、宿主植物におけるエチレン阻害によって根瘤着
生増強を実現するために２つの戦略：遅増殖性ｂｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉａにおけるリゾビトキシン生合成およ
び速増殖性根瘤菌におけるＡＣＣデアミナーゼ、を持っ
ているという説は、魅力的な仮説である。
遅増殖性Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉ（２７、２９、３７）およ
びＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉ
ｓ（２１）に限定されていた。Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐｐ．以外の速増殖性根瘤菌が根瘤着生を増
強し得るので、それが宿主植物のエチレン生合成に対す
る他の阻害剤を産生するのかどうかという疑問が生じ
る。この可能性を試験するのに、本発明者は、データベ
ース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊ
ｐ／ｅｎ／）にある速増殖性Ｍ．ｌｏｔｉの完全ゲノム
からエチレン生合成を減じる強力な酵素および化合物を
探し、候補として、１−アミノシクロプロパン−１−カ
ルボキシレート（ＡＣＣ）デアミナーゼ遺伝子を同定し
た。ＡＣＣデアミナーゼ遺伝子は、７．０−Ｍｂ染色体
上の６１１−ｋｂ共生島（ｎｉｆＤＫ遺伝子の下流）内
に位置していた（１９）。植物生育促進Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｓｐｐ．は、ＡＣＣデアミナーゼを有し、Ａ
ＣＣをα−ケト酪酸とアンモニアに分解することによっ
て植物エチレンの量を減少する（１４）。それゆえ、根
瘤菌は、宿主植物におけるエチレン阻害によって根瘤着
生増強を実現するために２つの戦略：遅増殖性ｂｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉａにおけるリゾビトキシン生合成およ
び速増殖性根瘤菌におけるＡＣＣデアミナーゼ、を持っ
ているという説は、魅力的な仮説である。
【００６８】
【発明の効果】本発明により、少なくともｒｔｘＡ遺伝
子とｒｔｘＣ遺伝子を異種の細菌に導入することによ
り、リゾビトキシン生産能を付与する等の可能性が明ら
かとなった。マメ科植物は食物や加工食品、有用化学物
質の原材料と広く用いられている穀物であり、本発明
は、かかる有用穀物であるマメ科植物の収量増加につな
がる基礎的知見であり、非常に有用性の高いものであ
る。
子とｒｔｘＣ遺伝子を異種の細菌に導入することによ
り、リゾビトキシン生産能を付与する等の可能性が明ら
かとなった。マメ科植物は食物や加工食品、有用化学物
質の原材料と広く用いられている穀物であり、本発明
は、かかる有用穀物であるマメ科植物の収量増加につな
がる基礎的知見であり、非常に有用性の高いものであ
る。
【００６９】［引用文献］
１．Ｂａｂｃｚｉｎｓｋｉ，Ｐ．ら、１９７８、「サト
ウキビにおけるセリノール生成の中間体としてのセリノ
ールリン酸（Ｓｅｒｉｎｏｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａ
ｓ ａｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｉｎ ｓｅｒｉ
ｎｏｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｇａｒｃａｎ
ｅ）」、 Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．６１：４６−
４９。 ２．Ｂｏｕｒｈｙ，Ｐ．ら、１９９７、「Ｌｅｐｔｏｓ
ｐｉｒａ ｍｅｙｅｒｉメチオニン生合成経路に関与す
るホモセリン−Ｏ−アセチルトランスフェラーゼは逆阻
害されない（Ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ Ｏ−ａｃｅｔｙｌ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔ
ｈｅ Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｍｅｙｅｒｉ ｍｅｔｈ
ｉｏｎｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗ
ａｙ），Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７９：４３９６−
４３９８。 ３．Ｂｏｙｅｒ，Ｈ．Ｗ．ら、１９６９、「Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉ ｃｏｌｉにおけるＤＮＡの制限および修飾
の相補性解析（Ａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉ
ｏｎ ａｎｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮ
Ａ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）」、
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４１：４５９−４７２。 ４．Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｒ．Ｗ．ら、１９９３、「Ｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍの型Ｉおよ
びＩＩ菌株により生産されるリポオリゴ糖根粒着生の構
造および生物活性（Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａ
ｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉ
ｄｅ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｓ ｐｒｏ
ｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｓｔ
ｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
８：１８３７２−１８３８１。 ５．Ｃｏｌｅ，Ｍ．Ａ．ら、１９７３、「Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおけるペニシリンＧ、ネ
オマイシン、およびクロラムフェニコールに対する転移
性耐性（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｒｅｓｉｓｔａ
ｎｃｅ ｔｏ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ，ｎｅｏｍｙ
ｃｉｎ，ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｉ
ｎ Ｒｈｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ａｎ
ｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅ
ｒ．４：２４８−２５３。 ６．Ｃｏｌｅ，Ｓ．Ｔ．ら、１９９８、「完全ゲノム配
列からＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓの生物学を解読する（Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ
ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｆｒｏｍ ｔｈ
ｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３９３：５３７−５４４。 ７．Ｄｕｏｄｕ，Ｓ．ら、１９９９、「Ｒｈｉｚｏｂｉ
ｕｍ−ｌｅｇｕｍｅ共生におけるリゾビトキシンの積極
的役割（Ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｒ
ｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
−ｌｅｇｕｍｅｓｙｍｂｉｏｓｉｓ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌ
ａｎｔ−Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１２：１
０８２−１０８９。 ８．Ｆａｌｌａｙ，Ｒ．ら、１９８７、「土壌および水
棲細菌のインターポゾン突然変異誘発：グラム陰性細菌
のｉｎ ｖｉｔｒｏ挿入変異用に設計されたＤＮＡ断片
のファミリー（Ｉｎｔｅｒｐｏｓｏｎ ｍｕｔａｇｅｎ
ｅｓｉｓ ｏｆｓｏｉｌ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｂａｃ
ｔｅｒｉａ： ａ ｆａｍｉｌｙ ｏｆＤＮＡ ｆｒａ
ｇｍｅｎｔｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ
ｏｆ Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」、Ｇｅｎｅ ５２：１４７−１５４。 ９．Ｆｉｇｕｒｓｋｉ，Ｄ．Ｈ．ら、１９７９、「トラ
ンス型で提供されたプラスミド機能に依存したプラスミ
ドＲＫ２の起源を含む誘導体の複製（Ｒｅｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ａｎｄ ｏｒｉｇｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎ
ｉｎｇ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｄ
ＲＫ２ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ａｐｌａｓｍｉ
ｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｉｎ ｔｒ
ａｎｓ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ７６：１６４８−１６５２。 １０．Ｆｏｌｃｈ−Ｍａｌｌｏｌ，Ｊ．Ｌ．ら、１９９
６、「Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｉ ＣＩＡＴ
８９９根粒着生因子の特性：硫酸化におけるｎｏｄＨお
よびｎｏｄＰＱの役割（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｉ Ｃ
ＩＡＴ８９９ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｓ： ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｏｄＨ ａｎｄ Ｎ
ｏｄＰＱ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ｓｕｌｆａ
ｔｉｏｎ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ−Ｍｉｃｒｏｂｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔ． ９：１５１−１６３。 １１．Ｆｒｅｉｂｅｒｇ，Ｃ．ら、１９９７、「Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍとマメ科植物の間の共生の分子的原理（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｙｍｂｉｏｓ
ｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｎｄ
ｌｅｇｕｍｅｓ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３８７：３９４−
４０１。 １２．Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａ．Ｍ．ら、１９８２、「広
範宿主域コスミドクローニングベクターの構築およびＲ
ｈｉｚｏｂｉｕｍ変異株の遺伝子解析における使用（Ｃ
ｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｂｒｏａｄ ｈｏ
ｓｔ ｒａｎｇｅｃｏｓｍｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅ
ｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇ
ｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍｍｕｔａｎｔｓ）」、Ｇｅｎｅ １８：２８９−
２９６。 １３．Ｆｕｈｒｍａｎｎ，Ｊ．、１９９０、「血清学
的、形態学的、リゾビトキシン、およびヒドロゲナーゼ
表現型に関連した固有の大豆ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉ
ａの共生的有効性（Ｓｙｎｂｉｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ
ｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓ ｓｏｙ
ｂｅａｎ ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ ａｓ ｒｅｌ
ａｔｅｄ ｔｏ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ， ｍｏｒｐ
ｈｏｌｏｇｉｃａｌ， ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，
ａｎｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅ
ｓ）」、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ５６：２２４−２２９。 １４．Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．ら、１９９９、「植物生長
促進細菌により使用される生化学的および遺伝的機構
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｕｓｅｄ ｂｙ ｐｌａｎｔ
ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」、 Ｉｍｐｅｒｉａｌ ＣｏｌｌｅｇｅＰｒｅｓ
ｓ， Ｌｏｎｄｏｎ。 １５．Ｇｏｔｔｆｅｒｔ，Ｍ ら、２００１、「Ｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ染色体の４
１０−ｋｂＤＮＡの配列決定によってカバーされない潜
在的な共生特異的遺伝子（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｙｍ
ｂｉｏｓｉｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ ｕｎｃ
ｏｖｅｒｅｄ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａ ４１
０−ｋｉｌｏｂａｓｅ ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ．１８３：１４０５−１４１２。 １６．Ｈａｎｉｎ，Ｍ．ら、１９９７、「Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４の硫酸化はｎｏｅＥ、新規
宿主特異性遺伝子に依存する（Ｓｕｌｐｈａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４ ｎｏ
ｄ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ
ｎｏｅＥ， ａ ｎｅｗ ｈｏｓｔ−ｓｐｅｃｉｆｉ
ｃｉｔｙ ｇｅｎｅ）」、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．２４：１１１９−１１２９。 １７．Ｉｓａｗａ，Ｔ．ら、１９９９、「反復配列ＲＳ
ａおよびＲＳｂの高コピー数を有する高度反復配列所有
株Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
におけるＩＳ１６３１の生成（ＩＳ１6３１ ｏｃｃｕ
ｒｅｎｃｅ ｉｎＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍ ｈｉｇｈｌｙ ｒｅｉｔｅｒａｔｅｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ｓｔｒａ
ｉｎｓｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒｓ
ｏｆ ｒｅｐｒｅａｔｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ＲＳ
ａ ａｎｄ ＲＳｂ）」、 Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３４９３−３５０１。 １８．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｗ．ら、１９５９、「Ｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ大豆根粒を担持し
た選択菌株の抽出物に対する苗木の反応（Ｒｅｓｐｏｎ
ｓｅｓ ｏｆ ｓｅｅｄｉｎｇｓ ｔｏ ｅｘｔｒａｃ
ｔｓ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｎｏｄｕｌｅｓ ｂｅａ
ｒｉｎｇ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｎａｔ
ｕｒｅ １８３：３０８−３０９。 １９．Ｋａｎｅｋｏ，Ｔ．ら、２０００、「窒素固定共
生細菌Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｔｉの完全ゲ
ノム構造（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｆｉｘ
ｉｎｇ ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｍ
ｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｔｉ）」、ＤＮＡ Ｒ
ｅｓ．７：３３１−３３８。 ２０．Ｋｕｎｄｉｇ，Ｃ．ら、１９９３、「Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ１１０ゲノム
の関連物理学的および遺伝学的マップ（Ｃｏｒｒｅｌａ
ｔｅｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｍａｐ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｍ １１０ ｇｅｎｏｍｅ）」、Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ． １７５：６１３−６２２。 ２１．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｒ．Ｅ．ら、１９９１、「植
物病原菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒｏｐｏｇｏ
ｎｉｓによるリゾビトキシンおよび１−スレオヒドロキ
シスレオニン産生（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ａｎ
ｄ １−ｔｈｒｅｏ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｒｅｏｎｉｎ
ｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅｐｌａｎｔ
ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒ
ｏｐｏｇｏｎｉｓ）」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
２５：２７１１−２７１５。 ２２．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｒ．Ｅ．ら、１９９１、「Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓにおけ
るリゾビトキシンに対する生合成経路（Ｂｉｏｓｙｎｔ
ｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ ｒｈｉｚｏｂｉｔ
ｏｘｉｎｅ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒ
ｏｐｏｇｏｎｉｓ）」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
３０：１８０９−１８１４。 ２３．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ Ｋ．ら、１９９０、「ｎ
ｉｆＤＫＥ配列分岐進化によるＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリゾビトキシン産生およ
び水素取り込み陽性株の分裂（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ
ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
ａｎｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｕｐｔａｋｅｐｏｓｉｔｉ
ｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｂｙ ｎｉｆＤＫＥ ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ）」、Ｐｏｌａｎ
ｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ３１：８１−８９。 ２４．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、２０００、「大
豆ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａの遺伝生態学（Ｇｅｎｅ
ｔｉｃ ｅｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ）」、ｐ．３４９−３７７、Ｊ．
Ｂｏｌｌａｇら、Ｓｏｉｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、１０巻、Ｍａｒｃｅｌ ＤｅｋｋｅｒＩｎｃ．，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ。 ２５．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９８６、「大
豆根粒中のセリノール（２−アミノ−１，３−プロパン
ジオール）および３−アミノ−１，２−プロパンジオー
ル（Ｓｅｒｉｎｏｌ（２−ａｍｉｎｏ−１，３−ｐｒｏ
ｐａｎｅｄｉｏｌ） ａｎｄ ３−ａｍｉｎｏ−１，２
−ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏｌ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｎ
ｏｄｕｌｅｓ）」、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．２７：１１０９−１１１６。 ２６．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９１、「Ｂ
ｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍによ
るインドール−３−酢酸の産生：遺伝子型群分けとリゾ
ビトキシン産生の関連性（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ
Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ：
ａ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｅｎｏｔ
ｙｐｅ ｇｒｏｕｐｉｎｇ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｂｉｔ
ｏｘｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）」、Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３２：１−９。 ２７．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９０、「自
由生活Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍにおけるヒドロゲナーゼ合成のリゾビトキシン阻害
（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｉｎ ｆｒｅｅ−ｌｉｖｉｎｇ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．１７２：４５０５−４５０９。 ２８．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９８７、「ア
ミノ酸分析計による大豆植物中のリゾビトキシンおよび
ジヒドロリゾビトキシンの決定（Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ａｎｄ
ｄｉｈｙｄｒｏｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎ ｓ
ｏｙｂｅａｎ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ａｍｉｎｏ ａｃ
ｉｄ ａｎａｌｙｚｅｒ）」、Ｓｏｉｌ Ｓｃｉ．Ｐｌ
ａｎｔ Ｎｕｔｒ． ３３：６４５−６４９。 ２９．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９２、「反
復配列および種々の性質により明らかにされたＢｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ野外分離株
の遺伝的関連性（Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｅｄｎｅ
ｓｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍ ｆｉｅｌｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｓ ｒ
ｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅｓａｎｄ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｔｈｅｒ ｃｈａ
ｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）」、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒ
ｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ５８：２８３２−２８３
９。 ３０．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９７、「２
つのＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ種ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍおよびｅｌｋａｎｉｉによるＧｌｙｃｉｎｅｍａｘ、
Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ、Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ
ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍの選択的根粒着生（Ｐｒ
ｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ， Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊ
ａ， Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕ
ｒｅｕｍ ｂｙ ｔｗｏ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ａｎｄ ｅ
ｌｋａｎｉｉ）」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｅ
ｃｏｌ． ２４：４９−５６。 ３１．Ｍｕｒｏｏｋａ，Ｙ．ら、１９７７、「微生物に
おけるＯ−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼによ
り触媒されるＯ−アルキルホモセリン合成（Ｏ−ａｌｋ
ｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｃａ
ｔａｌｙｚｅｄｂｙ Ｏ−ａｃｅｔｙｌｈｏｍｏｓｅｒ
ｉｎｅ ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌａｓｅｉｎ ｍｉｃｒｏ
ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
１３０：６２−７３。 ３２．Ｍｕｒｏｏｋａ，Ｙ．ら、１９７０、「Ｏ−アセ
チルホモセリンおよびアルコールからＯ−アルキルホモ
セリン合成（Ｏ−ａｌｋｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ ｆｒｏｍ Ｏ−ａｃｅｔｙｌｈｏｍ
ｏｓｅｒｉｎｅａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ）」、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． ４
１：４０７−４１４。 ３３．Ｎａｇａｉ，Ｓ．ら、１９７１、「Ｏ−アセチル
ホモセリンの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ａ
ｃｅｔｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ）」、Ｍｅｔｈ．Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ． １７：４２３−４２４。 ３４．Ｎｅｌｌｅｎ−Ａｎｔｈａｍａｔｔｅｎ，Ｄ．
ら、１９９８、「低酸素レベルによって誘導し得る遺伝
子の制御のためのＦｉｘＬＪ依存性制御カスケードにお
ける重要な分配者、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍＦｉｘＫ２（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ＦｉｘＫ２，ａ ｃｒｕ
ｃｉａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｆ
ｉｘＬＪ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｃａｓｃａｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ ｏ
ｆ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｂｙ ｌｏｗ
ｏｘｙｇｅｎ ｌｅｖｅｌ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ． １８０：５２５１−５２５５。 ３５．Ｎｕｋｕｉ，Ｎ．ら、２０００、「Ｌｏｔｕｓ
ｊａｐｏｎｉｃｕｓおよびＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ
ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍにおける根粒着生に対する
エチレン前駆体およびエチレン生合成阻害剤の効果およ
び認識（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｐ
ｒｅｃｕｒｓｏｒ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆ
ｏｒ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ｏｎ ｎｏｄｕｌａｔ
ｉｏｎ ｉｎ Ｌｏｔｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ａｎ
ｄ Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒ
ｅｕｍ）」、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．
４１：８９３−８９７。 ３６．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９６５、「大豆におけ
る根粒菌誘導性萎黄病：単離および根粒での産生、およ
びトキシンの品種特異性（Ｒｈｉｚｏｂｉａｌ−ｉｎｄ
ｕｃｅｄ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｉｎ ｓｏｙｂｅａ
ｎ： Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉ
ｎ ｎｏｄｕｌｅｓ，ａｎｄ ｖａｒｉｅｔａｌ ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ）」、
ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ． ４０：９２７−９３０。 ３７．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９７２、「リゾビトキ
シンの構造、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
から代謝拮抗性エノ−ル−エーテルアミノ酸（Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，ａｎ
ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｅｎｏｌ−ｅｔｈｅｒ
ａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．
Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ． ｐ．７１４。 ３８．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９７２、「ジヒドロリ
ゾビトキシン、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍからの新規エーテルアミノ酸（Ｄｉｈｙｄｒｏｒｈｉ
ｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，ａ ｎｅｗ ｅｔｈｅｒ ａｍ
ｉｎｏ−ａｃｉｄｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍ）」、 Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｃｏｍｍｕｎ． ｐ．７１５。 ３９．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９６８、「Ｓａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのβ−シスタチオ
ナーゼの阻害剤（Ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ β
−ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎａｓｅ ｉｎ Ｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）」、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５８：２１９−２２
５。 ４０．Ｐｅｎｍｅｔｓａ，Ｒ．Ｖ．ら、１９９７、「根
粒共生体により反復再感染したマメ科エチレン不感受性
変異株（Ａ ｌｅｇｕｍｅ ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｉｎｓ
ｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｕｔａｎｔ ｈｙｐｅｒｉｎｆｅ
ｃｔｅｄ ｂｙｉｔｓ ｒｈｉｚｏｂｉａｌ ｓｙｍｂ
ｉｏｎｔ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：５２７−５３
０。 ４１．Ｐｒｅｉｓｉｇ，Ｏ．ら、１９９６、「Ｂｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｆｉｘＧＨ
ＩＳ遺伝子は高親和性ｃｂｂ３型チトクロームオキシダ
ーゼの生成に必要である（Ｔｈｅ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｆｉｘＧＨＩＳ ｇ
ｅｎｅｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒ ｔｈｅ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈ−ａｆｆ
ｉｎｉｔｙ ｃｂｂ３−ｔｙｐｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍ
ｅ ｏｘｉｄａｓｅ）」、 Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ． １６５：１９７−３０５。 ４２．Ｐｒｅｎｔｋｉ，Ｐ．ら、１９８４、「選択性Ｄ
ＮＡ断片とのｉｎ ｖｉｔｒｏ挿入変異誘発（Ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａｇｅｎｅ
ｓｉｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｅｌｅｃｔａｂｌｅ ＤＮＡ
ｆｒａｇｍｅｎｔ）」、Ｇｅｎｅ ２９：３０３−３
１３。 ４３．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９２、「Ｂｒａｄｙｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリゾビトキシン
変異株の単離および特徴（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏ
ｂｉｔｏｘｉｎｅ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂ
ａｃｔｅｒｉｌ． １７４：３４６７−３４７３。 ４４．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９３、「Ｂｒａｄｙｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍリゾビトキシン遺
伝子および推定酵素機能：発現には翻訳フレームシフト
を要求する（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｇｅｎｅｓ
ａｎｄ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎｓ： ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅ
ｓ ａ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｆｒａｍｅｓｈ
ｉｆｔ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９０：２６２１−２６４５。 ４５．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９３、「著者らのコレク
ション（Ａｕｔｈｏｒｓｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）」、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１
２０５５。 ４６．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９１、「植物毒素リゾビ
トキシンの迅速・高感度測定（Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓ
ｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅｐｈｙ
ｔｏｔｏｘｉｎ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ）」、Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ５
７：２０９７−２１０１。 ４７．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、１９８９、「分子ク
ローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕ
ａｌ）、第２版、Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．。 ４８．Ｓａｎｊｕａｎ，Ｊ．ら、１９９７、「２−Ｏ−
メチルフコース部分がＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリポ多糖類根粒着生シグナルに存
在する（Ａ ２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｆｕｃｏｓｅ ｍｏ
ｉｅｔｙ ｉｓｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｐ
ｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｎｏｄｕｌａｔｉ
ｏｎ ｓｉｇｎａｌ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉ
ｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：８７８９−８７９３。 ４９．Ｓａｔｏ，Ｎ．ら、１９９７、「緑藻Ｃｈｌａｍ
ｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉの葉緑体ｗ
６デサチュラーゼ遺伝子のクローニング（Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ ｏｆ ｇｅｎｅ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｗ６
ｄｅｓａｔｕｒｅａｓｅ ｏｆ ｇｒｅｅｎ ａｌｇ
ａ，Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔ
ｉｉ）」、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １２２：１２２４−
１２３２。 ５０．Ｓｃｈｗｅｄｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ら、１９９４、
「Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ ＮｏｄＰお
よびＮｏｄＱは活性化にＧＴＰを要求する多機能性硫酸
活性複合体を形成する（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉ
ｌｏｔｉ ＮｏｄＰａｎｄ ＮｏｄＱ ｆｏｒｍ ａ
ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｌｆａｔｅ−ａ
ｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｑｕｉｒｉ
ｎｇ ＧＴＰ ｆｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」、Ｊ．Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ． １７６：７０５５−７０６４。 ５１．Ｓｉｍｏｎ，Ｒ．ら、１９８３、「ｉｎ ｖｉｖ
ｏ遺伝子工学用の広宿主域移動システム：グラム陰性細
菌のトランスポゾン変異誘発（Ａ ｂｒｏａｄｈｏｓｔ
ｒａｎｇｅ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅ
ｍ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｉｎｇ： Ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｍｕｔａ
ｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｂａｃｔｅｒｉａ）」、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
１：７８９−７９１。 ５２．Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｒ．ら、１９９７、「Ｍｅｔｈ
ａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒ
ｏｐｈｉｃｕｍ ｄｅｌｔａＨの完全ゲノム配列：機能
解析および比較ゲノミックス（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅ
ｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｍｅｔｈａｎｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉ
ｃｕｍ ｄｅｌｔａＨ： ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎ
ａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １７
９：７１３５−７１５５。 ５３．Ｓｔｏｖｅｒ，Ｃ．Ｋ．ら、２０００、「Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＰＡ０１、
日和見病原体の完全ゲノム配列（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇ
ｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＰＡ０１， ａｎ
ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ）」、
Ｎａｔｕｒｅ ４０６：９５９−９６４ ５４．Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｊ．Ｔ．ら、１９９８、「ｐ
ｈｅ−ｔＲＮＡ遺伝子に組込まれた５００−ｋｂ共生体
島の獲得による根粒菌の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｒｈｉｚｏｂｉａ ｂｙ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
ｏｆ ａ ５００−ｋｂ ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ ｉｓ
ｌａｎｄ ｔｈａｔ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｓ ｉｎｔｏ
ａ ｐｈｅ−ｔＲＮＡ ｇｅｎｅ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：５１４５−
５１４９。 ５５．Ｖｉｅｉｌｌｅ，Ｃ．ら、１９９０、「Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ ｎｏｄＰＱに相同な２
つのＡｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ
Ｓｐ７プラスミド遺伝子の特徴（Ｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｚａｔｉｏｎｏｆ ｔｗｏ Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕ
ｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｐｌａｓｍｉｄ
ｇｅｎｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｔｏ Ｒｈｉｚｏ
ｂｉｕｍｍｅｌｉｌｏｔｉ ｎｏｄＰＱ）」、Ｍｏｌ．
Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ． ３：
３８９−４００。 ５６．Ｗａｄａ，Ｈ．ら、１９９０、「脂肪酸脱飽和の
遺伝子操作によるシアノバクテリアの冷凍耐性の増強
（Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｉｌｌｉｎｇ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａ ｃｙａｎｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｎｉｐｕｌａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｓａｔｕｒ
ａｔｉｏｎ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３４７：２００−２０
３。 ５７．Ｘｉｏｎｇ，Ｋ．ら、１９９６、「異なったｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａおよび大豆ゲノタイプ由来のβ
−シスタチオナーゼのリゾビトキシン誘導阻害の比較
（Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘ
ｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ
β−ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎａｓｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔ ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ ａｎｄ
ｓｏｙｂｅａｎ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ）」、Ｐｌａｎｔ
Ｓｏｉｌ １８６：５３−６１。 ５８．Ｙａｍａｙａ，Ｔ．ら、１９８８、「高速液体ク
ロマトグラフィによるピコモルレベルでのフェニルチオ
カルバミルアミノ酸の分析および植物物質への応用（Ａ
ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｈｅｎｙｌｔｈｉｏｃａｒｂ
ａｍｙｌ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｔ ｐｉｃｏ−
ｍｏｌｅ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍ
ａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｌａｎ
ｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ）」、Ｓｏｉｌ Ｓｃｉ．Ｐｌ
ａｎｔ Ｎｕｔｒ． ３４：２９７−３０２。 ５９．Ｙａｓｕｔａ，Ｔ．ら、１９９９、「１−アミノ
シクロプロパン−１−カルボキシレートシンターゼの阻
害に基づいたリゾビトキシンの新アッセイ（Ｎｅｗ ａ
ｓｓａｙ ｆｏｒ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｂａ
ｓｅｄ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ １−ａｍ
ｏｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙ
ｌａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ）」、 Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ
ｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ６５：８４９−８５
２。 ６０．Ｙｕｈａｓｈｉ，Ｋ．Ｉ．ら、２０００、「Ｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉによるリゾ
ビトキシン産生はＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏ
ｐｕｒｐｕｒｅｕｍでの根粒着生および競合性を増強す
る（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｂｙ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｅｌｋａｎｉ
ｉ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｎ Ｍａｃｒｏ
ｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ）」、Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ６
６：２６５８−２６６３。 ６１．Ｙｕｈａｓｈｉ，Ｋ．Ｉ．ら、１９９５、「Ｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉは大豆の外
根膨潤を誘導する（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅ
ｌｋａｎｉｉ ｉｎｄｕｃｅｓ ｏｕｔｅｒ ｒｏｏｔ
ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ）」、 Ｐ
ｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３６：１５７１
−１５７７。 ６２．Ｚｈａｎｇ，Ｙ．Ｘ．ら、１９９７、「ｐｈａｓ
ｅｏｌｏｔｏｘｉｎ遺伝子クラスターのｐｈｔＥ部位は
アミノ酸トランスフェラーゼ、転写因子のＡｒａＣファ
ミリー、および脂肪酸デサチュラーゼをコードする遺伝
子に相同なＯＲＦｓを有する（Ｔｈｅ ｐｈｔＥ ｌｏ
ｃｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｔｏｘｉｎ
ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｈａｓ ＯＲＦｓ ｗｉｔ
ｈ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｔｏ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃ
ｏｄｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｔｒａｎｓｆｅｒａ
ｓｅｓ， ｔｈｅ ＡｒａＣ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｔ
ｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ， ａ
ｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ
ｓ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔ
ｅｒａｃｔ． １０：９４７−９６０。
ウキビにおけるセリノール生成の中間体としてのセリノ
ールリン酸（Ｓｅｒｉｎｏｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａ
ｓ ａｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｉｎ ｓｅｒｉ
ｎｏｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｇａｒｃａｎ
ｅ）」、 Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．６１：４６−
４９。 ２．Ｂｏｕｒｈｙ，Ｐ．ら、１９９７、「Ｌｅｐｔｏｓ
ｐｉｒａ ｍｅｙｅｒｉメチオニン生合成経路に関与す
るホモセリン−Ｏ−アセチルトランスフェラーゼは逆阻
害されない（Ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ Ｏ−ａｃｅｔｙｌ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔ
ｈｅ Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｍｅｙｅｒｉ ｍｅｔｈ
ｉｏｎｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗ
ａｙ），Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７９：４３９６−
４３９８。 ３．Ｂｏｙｅｒ，Ｈ．Ｗ．ら、１９６９、「Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉ ｃｏｌｉにおけるＤＮＡの制限および修飾
の相補性解析（Ａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉ
ｏｎ ａｎｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮ
Ａ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）」、
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４１：４５９−４７２。 ４．Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｒ．Ｗ．ら、１９９３、「Ｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍの型Ｉおよ
びＩＩ菌株により生産されるリポオリゴ糖根粒着生の構
造および生物活性（Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａ
ｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉ
ｄｅ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｓ ｐｒｏ
ｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｓｔ
ｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
８：１８３７２−１８３８１。 ５．Ｃｏｌｅ，Ｍ．Ａ．ら、１９７３、「Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍにおけるペニシリンＧ、ネ
オマイシン、およびクロラムフェニコールに対する転移
性耐性（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｒｅｓｉｓｔａ
ｎｃｅ ｔｏ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ，ｎｅｏｍｙ
ｃｉｎ，ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｉ
ｎ Ｒｈｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ａｎ
ｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅ
ｒ．４：２４８−２５３。 ６．Ｃｏｌｅ，Ｓ．Ｔ．ら、１９９８、「完全ゲノム配
列からＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓの生物学を解読する（Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ
ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｆｒｏｍ ｔｈ
ｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３９３：５３７−５４４。 ７．Ｄｕｏｄｕ，Ｓ．ら、１９９９、「Ｒｈｉｚｏｂｉ
ｕｍ−ｌｅｇｕｍｅ共生におけるリゾビトキシンの積極
的役割（Ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｒ
ｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
−ｌｅｇｕｍｅｓｙｍｂｉｏｓｉｓ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌ
ａｎｔ−Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１２：１
０８２−１０８９。 ８．Ｆａｌｌａｙ，Ｒ．ら、１９８７、「土壌および水
棲細菌のインターポゾン突然変異誘発：グラム陰性細菌
のｉｎ ｖｉｔｒｏ挿入変異用に設計されたＤＮＡ断片
のファミリー（Ｉｎｔｅｒｐｏｓｏｎ ｍｕｔａｇｅｎ
ｅｓｉｓ ｏｆｓｏｉｌ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｂａｃ
ｔｅｒｉａ： ａ ｆａｍｉｌｙ ｏｆＤＮＡ ｆｒａ
ｇｍｅｎｔｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ
ｏｆ Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」、Ｇｅｎｅ ５２：１４７−１５４。 ９．Ｆｉｇｕｒｓｋｉ，Ｄ．Ｈ．ら、１９７９、「トラ
ンス型で提供されたプラスミド機能に依存したプラスミ
ドＲＫ２の起源を含む誘導体の複製（Ｒｅｐｌｉｃａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ａｎｄ ｏｒｉｇｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎ
ｉｎｇ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｄ
ＲＫ２ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ａｐｌａｓｍｉ
ｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｉｎ ｔｒ
ａｎｓ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ７６：１６４８−１６５２。 １０．Ｆｏｌｃｈ−Ｍａｌｌｏｌ，Ｊ．Ｌ．ら、１９９
６、「Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｉ ＣＩＡＴ
８９９根粒着生因子の特性：硫酸化におけるｎｏｄＨお
よびｎｏｄＰＱの役割（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｏｐｉｃｉ Ｃ
ＩＡＴ８９９ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｓ： ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｏｄＨ ａｎｄ Ｎ
ｏｄＰＱ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ｓｕｌｆａ
ｔｉｏｎ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ−Ｍｉｃｒｏｂｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔ． ９：１５１−１６３。 １１．Ｆｒｅｉｂｅｒｇ，Ｃ．ら、１９９７、「Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍとマメ科植物の間の共生の分子的原理（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｙｍｂｉｏｓ
ｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｎｄ
ｌｅｇｕｍｅｓ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３８７：３９４−
４０１。 １２．Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａ．Ｍ．ら、１９８２、「広
範宿主域コスミドクローニングベクターの構築およびＲ
ｈｉｚｏｂｉｕｍ変異株の遺伝子解析における使用（Ｃ
ｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｂｒｏａｄ ｈｏ
ｓｔ ｒａｎｇｅｃｏｓｍｉｄ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅ
ｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇ
ｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍｍｕｔａｎｔｓ）」、Ｇｅｎｅ １８：２８９−
２９６。 １３．Ｆｕｈｒｍａｎｎ，Ｊ．、１９９０、「血清学
的、形態学的、リゾビトキシン、およびヒドロゲナーゼ
表現型に関連した固有の大豆ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉ
ａの共生的有効性（Ｓｙｎｂｉｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ
ｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓ ｓｏｙ
ｂｅａｎ ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ ａｓ ｒｅｌ
ａｔｅｄ ｔｏ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ， ｍｏｒｐ
ｈｏｌｏｇｉｃａｌ， ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，
ａｎｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅ
ｓ）」、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ５６：２２４−２２９。 １４．Ｇｌｉｃｋ，Ｂ．Ｒ．ら、１９９９、「植物生長
促進細菌により使用される生化学的および遺伝的機構
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｕｓｅｄ ｂｙ ｐｌａｎｔ
ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉ
ａ）」、 Ｉｍｐｅｒｉａｌ ＣｏｌｌｅｇｅＰｒｅｓ
ｓ， Ｌｏｎｄｏｎ。 １５．Ｇｏｔｔｆｅｒｔ，Ｍ ら、２００１、「Ｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ染色体の４
１０−ｋｂＤＮＡの配列決定によってカバーされない潜
在的な共生特異的遺伝子（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｙｍ
ｂｉｏｓｉｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ ｕｎｃ
ｏｖｅｒｅｄ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａ ４１
０−ｋｉｌｏｂａｓｅ ＤＮＡ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ．１８３：１４０５−１４１２。 １６．Ｈａｎｉｎ，Ｍ．ら、１９９７、「Ｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４の硫酸化はｎｏｅＥ、新規
宿主特異性遺伝子に依存する（Ｓｕｌｐｈａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ．ＮＧＲ２３４ ｎｏ
ｄ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ
ｎｏｅＥ， ａ ｎｅｗ ｈｏｓｔ−ｓｐｅｃｉｆｉ
ｃｉｔｙ ｇｅｎｅ）」、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．２４：１１１９−１１２９。 １７．Ｉｓａｗａ，Ｔ．ら、１９９９、「反復配列ＲＳ
ａおよびＲＳｂの高コピー数を有する高度反復配列所有
株Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
におけるＩＳ１６３１の生成（ＩＳ１6３１ ｏｃｃｕ
ｒｅｎｃｅ ｉｎＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍ ｈｉｇｈｌｙ ｒｅｉｔｅｒａｔｅｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ｓｔｒａ
ｉｎｓｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒｓ
ｏｆ ｒｅｐｒｅａｔｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ＲＳ
ａ ａｎｄ ＲＳｂ）」、 Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏ
ｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５：３４９３−３５０１。 １８．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｗ．ら、１９５９、「Ｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ大豆根粒を担持し
た選択菌株の抽出物に対する苗木の反応（Ｒｅｓｐｏｎ
ｓｅｓ ｏｆ ｓｅｅｄｉｎｇｓ ｔｏ ｅｘｔｒａｃ
ｔｓ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｎｏｄｕｌｅｓ ｂｅａ
ｒｉｎｇ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｎａｔ
ｕｒｅ １８３：３０８−３０９。 １９．Ｋａｎｅｋｏ，Ｔ．ら、２０００、「窒素固定共
生細菌Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｔｉの完全ゲ
ノム構造（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｆｉｘ
ｉｎｇ ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｍ
ｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｏｔｉ）」、ＤＮＡ Ｒ
ｅｓ．７：３３１−３３８。 ２０．Ｋｕｎｄｉｇ，Ｃ．ら、１９９３、「Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ１１０ゲノム
の関連物理学的および遺伝学的マップ（Ｃｏｒｒｅｌａ
ｔｅｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｍａｐ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｍ １１０ ｇｅｎｏｍｅ）」、Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ． １７５：６１３−６２２。 ２１．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｒ．Ｅ．ら、１９９１、「植
物病原菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒｏｐｏｇｏ
ｎｉｓによるリゾビトキシンおよび１−スレオヒドロキ
シスレオニン産生（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ａｎ
ｄ １−ｔｈｒｅｏ−ｈｙｄｒｏｘｙｔｈｒｅｏｎｉｎ
ｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅｐｌａｎｔ
ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒ
ｏｐｏｇｏｎｉｓ）」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
２５：２７１１−２７１５。 ２２．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｒ．Ｅ．ら、１９９１、「Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓにおけ
るリゾビトキシンに対する生合成経路（Ｂｉｏｓｙｎｔ
ｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ ｒｈｉｚｏｂｉｔ
ｏｘｉｎｅ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒ
ｏｐｏｇｏｎｉｓ）」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
３０：１８０９−１８１４。 ２３．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ Ｋ．ら、１９９０、「ｎ
ｉｆＤＫＥ配列分岐進化によるＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリゾビトキシン産生およ
び水素取り込み陽性株の分裂（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ
ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
ａｎｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｕｐｔａｋｅｐｏｓｉｔｉ
ｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｂｙ ｎｉｆＤＫＥ ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ）」、Ｐｏｌａｎ
ｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． ３１：８１−８９。 ２４．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、２０００、「大
豆ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａの遺伝生態学（Ｇｅｎｅ
ｔｉｃ ｅｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎｂｒａ
ｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ）」、ｐ．３４９−３７７、Ｊ．
Ｂｏｌｌａｇら、Ｓｏｉｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、１０巻、Ｍａｒｃｅｌ ＤｅｋｋｅｒＩｎｃ．，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ。 ２５．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９８６、「大
豆根粒中のセリノール（２−アミノ−１，３−プロパン
ジオール）および３−アミノ−１，２−プロパンジオー
ル（Ｓｅｒｉｎｏｌ（２−ａｍｉｎｏ−１，３−ｐｒｏ
ｐａｎｅｄｉｏｌ） ａｎｄ ３−ａｍｉｎｏ−１，２
−ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏｌ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｎ
ｏｄｕｌｅｓ）」、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．２７：１１０９−１１１６。 ２６．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９１、「Ｂ
ｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍによ
るインドール−３−酢酸の産生：遺伝子型群分けとリゾ
ビトキシン産生の関連性（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ
Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ：
ａ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｅｎｏｔ
ｙｐｅ ｇｒｏｕｐｉｎｇ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｂｉｔ
ｏｘｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）」、Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３２：１−９。 ２７．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９０、「自
由生活Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍにおけるヒドロゲナーゼ合成のリゾビトキシン阻害
（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｉｎ ｆｒｅｅ−ｌｉｖｉｎｇ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．１７２：４５０５−４５０９。 ２８．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９８７、「ア
ミノ酸分析計による大豆植物中のリゾビトキシンおよび
ジヒドロリゾビトキシンの決定（Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ａｎｄ
ｄｉｈｙｄｒｏｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｉｎ ｓ
ｏｙｂｅａｎ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ａｍｉｎｏ ａｃ
ｉｄ ａｎａｌｙｚｅｒ）」、Ｓｏｉｌ Ｓｃｉ．Ｐｌ
ａｎｔ Ｎｕｔｒ． ３３：６４５−６４９。 ２９．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９２、「反
復配列および種々の性質により明らかにされたＢｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ野外分離株
の遺伝的関連性（Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｅｄｎｅ
ｓｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍ ｆｉｅｌｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｓ ｒ
ｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅｓａｎｄ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｔｈｅｒ ｃｈａ
ｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ）」、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒ
ｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ５８：２８３２−２８３
９。 ３０．Ｍｉｎａｍｉｓａｗａ，Ｋ．ら、１９９７、「２
つのＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ種ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍおよびｅｌｋａｎｉｉによるＧｌｙｃｉｎｅｍａｘ、
Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊａ、Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ
ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍの選択的根粒着生（Ｐｒ
ｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ， Ｇｌｙｃｉｎｅ ｓｏｊ
ａ， Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕ
ｒｅｕｍ ｂｙ ｔｗｏ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ａｎｄ ｅ
ｌｋａｎｉｉ）」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｅ
ｃｏｌ． ２４：４９−５６。 ３１．Ｍｕｒｏｏｋａ，Ｙ．ら、１９７７、「微生物に
おけるＯ−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼによ
り触媒されるＯ−アルキルホモセリン合成（Ｏ−ａｌｋ
ｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｃａ
ｔａｌｙｚｅｄｂｙ Ｏ−ａｃｅｔｙｌｈｏｍｏｓｅｒ
ｉｎｅ ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌａｓｅｉｎ ｍｉｃｒｏ
ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．
１３０：６２−７３。 ３２．Ｍｕｒｏｏｋａ，Ｙ．ら、１９７０、「Ｏ−アセ
チルホモセリンおよびアルコールからＯ−アルキルホモ
セリン合成（Ｏ−ａｌｋｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ ｆｒｏｍ Ｏ−ａｃｅｔｙｌｈｏｍ
ｏｓｅｒｉｎｅａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ）」、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． ４
１：４０７−４１４。 ３３．Ｎａｇａｉ，Ｓ．ら、１９７１、「Ｏ−アセチル
ホモセリンの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ａ
ｃｅｔｙｌｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ）」、Ｍｅｔｈ．Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ． １７：４２３−４２４。 ３４．Ｎｅｌｌｅｎ−Ａｎｔｈａｍａｔｔｅｎ，Ｄ．
ら、１９９８、「低酸素レベルによって誘導し得る遺伝
子の制御のためのＦｉｘＬＪ依存性制御カスケードにお
ける重要な分配者、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍＦｉｘＫ２（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂ
ｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ＦｉｘＫ２，ａ ｃｒｕ
ｃｉａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｆ
ｉｘＬＪ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｃａｓｃａｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ ｏ
ｆ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｂｙ ｌｏｗ
ｏｘｙｇｅｎ ｌｅｖｅｌ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ． １８０：５２５１−５２５５。 ３５．Ｎｕｋｕｉ，Ｎ．ら、２０００、「Ｌｏｔｕｓ
ｊａｐｏｎｉｃｕｓおよびＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ
ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍにおける根粒着生に対する
エチレン前駆体およびエチレン生合成阻害剤の効果およ
び認識（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｐ
ｒｅｃｕｒｓｏｒ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆ
ｏｒ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ｏｎ ｎｏｄｕｌａｔ
ｉｏｎ ｉｎ Ｌｏｔｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ａｎ
ｄ Ｍａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒ
ｅｕｍ）」、Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．
４１：８９３−８９７。 ３６．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９６５、「大豆におけ
る根粒菌誘導性萎黄病：単離および根粒での産生、およ
びトキシンの品種特異性（Ｒｈｉｚｏｂｉａｌ−ｉｎｄ
ｕｃｅｄ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｉｎ ｓｏｙｂｅａ
ｎ： Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉ
ｎ ｎｏｄｕｌｅｓ，ａｎｄ ｖａｒｉｅｔａｌ ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ）」、
ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ． ４０：９２７−９３０。 ３７．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９７２、「リゾビトキ
シンの構造、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
から代謝拮抗性エノ−ル−エーテルアミノ酸（Ｓｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，ａｎ
ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｅｎｏｌ−ｅｔｈｅｒ
ａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｂｉｕ
ｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．
Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ． ｐ．７１４。 ３８．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９７２、「ジヒドロリ
ゾビトキシン、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍからの新規エーテルアミノ酸（Ｄｉｈｙｄｒｏｒｈｉ
ｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ，ａ ｎｅｗ ｅｔｈｅｒ ａｍ
ｉｎｏ−ａｃｉｄｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａ
ｐｏｎｉｃｕｍ）」、 Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｃｏｍｍｕｎ． ｐ．７１５。 ３９．Ｏｗｅｎ，Ｌ．Ｄ．ら、１９６８、「Ｓａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのβ−シスタチオ
ナーゼの阻害剤（Ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ β
−ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎａｓｅ ｉｎ Ｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）」、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５８：２１９−２２
５。 ４０．Ｐｅｎｍｅｔｓａ，Ｒ．Ｖ．ら、１９９７、「根
粒共生体により反復再感染したマメ科エチレン不感受性
変異株（Ａ ｌｅｇｕｍｅ ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｉｎｓ
ｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｕｔａｎｔ ｈｙｐｅｒｉｎｆｅ
ｃｔｅｄ ｂｙｉｔｓ ｒｈｉｚｏｂｉａｌ ｓｙｍｂ
ｉｏｎｔ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：５２７−５３
０。 ４１．Ｐｒｅｉｓｉｇ，Ｏ．ら、１９９６、「Ｂｒａｄ
ｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｆｉｘＧＨ
ＩＳ遺伝子は高親和性ｃｂｂ３型チトクロームオキシダ
ーゼの生成に必要である（Ｔｈｅ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｆｉｘＧＨＩＳ ｇ
ｅｎｅｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒ ｔｈｅ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈ−ａｆｆ
ｉｎｉｔｙ ｃｂｂ３−ｔｙｐｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍ
ｅ ｏｘｉｄａｓｅ）」、 Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ． １６５：１９７−３０５。 ４２．Ｐｒｅｎｔｋｉ，Ｐ．ら、１９８４、「選択性Ｄ
ＮＡ断片とのｉｎ ｖｉｔｒｏ挿入変異誘発（Ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａｇｅｎｅ
ｓｉｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｅｌｅｃｔａｂｌｅ ＤＮＡ
ｆｒａｇｍｅｎｔ）」、Ｇｅｎｅ ２９：３０３−３
１３。 ４３．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９２、「Ｂｒａｄｙｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリゾビトキシン
変異株の単離および特徴（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏ
ｂｉｔｏｘｉｎｅ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ Ｂｒａｄｙ
ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｊ．Ｂ
ａｃｔｅｒｉｌ． １７４：３４６７−３４７３。 ４４．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９３、「Ｂｒａｄｙｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍリゾビトキシン遺
伝子および推定酵素機能：発現には翻訳フレームシフト
を要求する（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏ
ｎｉｃｕｍ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｇｅｎｅｓ
ａｎｄ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎｓ： ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅ
ｓ ａ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｆｒａｍｅｓｈ
ｉｆｔ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９０：２６２１−２６４５。 ４５．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９３、「著者らのコレク
ション（Ａｕｔｈｏｒｓｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）」、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１
２０５５。 ４６．Ｒｕａｎ，Ｘ．ら、１９９１、「植物毒素リゾビ
トキシンの迅速・高感度測定（Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓ
ｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅｐｈｙ
ｔｏｔｏｘｉｎ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ）」、Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ５
７：２０９７−２１０１。 ４７．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、１９８９、「分子ク
ローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕ
ａｌ）、第２版、Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．。 ４８．Ｓａｎｊｕａｎ，Ｊ．ら、１９９７、「２−Ｏ−
メチルフコース部分がＢｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ
ｊａｐｏｎｉｃｕｍのリポ多糖類根粒着生シグナルに存
在する（Ａ ２−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｆｕｃｏｓｅ ｍｏ
ｉｅｔｙ ｉｓｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｐ
ｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｎｏｄｕｌａｔｉ
ｏｎ ｓｉｇｎａｌ ｏｆ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉ
ｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：８７８９−８７９３。 ４９．Ｓａｔｏ，Ｎ．ら、１９９７、「緑藻Ｃｈｌａｍ
ｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉの葉緑体ｗ
６デサチュラーゼ遺伝子のクローニング（Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ ｏｆ ｇｅｎｅ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｗ６
ｄｅｓａｔｕｒｅａｓｅ ｏｆ ｇｒｅｅｎ ａｌｇ
ａ，Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔ
ｉｉ）」、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １２２：１２２４−
１２３２。 ５０．Ｓｃｈｗｅｄｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ら、１９９４、
「Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ ＮｏｄＰお
よびＮｏｄＱは活性化にＧＴＰを要求する多機能性硫酸
活性複合体を形成する（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉ
ｌｏｔｉ ＮｏｄＰａｎｄ ＮｏｄＱ ｆｏｒｍ ａ
ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｌｆａｔｅ−ａ
ｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｑｕｉｒｉ
ｎｇ ＧＴＰ ｆｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」、Ｊ．Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ． １７６：７０５５−７０６４。 ５１．Ｓｉｍｏｎ，Ｒ．ら、１９８３、「ｉｎ ｖｉｖ
ｏ遺伝子工学用の広宿主域移動システム：グラム陰性細
菌のトランスポゾン変異誘発（Ａ ｂｒｏａｄｈｏｓｔ
ｒａｎｇｅ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅ
ｍ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｉｎｇ： Ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｍｕｔａ
ｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｂａｃｔｅｒｉａ）」、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
１：７８９−７９１。 ５２．Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｒ．ら、１９９７、「Ｍｅｔｈ
ａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒ
ｏｐｈｉｃｕｍ ｄｅｌｔａＨの完全ゲノム配列：機能
解析および比較ゲノミックス（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅ
ｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｍｅｔｈａｎｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉ
ｃｕｍ ｄｅｌｔａＨ： ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎ
ａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ）」、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １７
９：７１３５−７１５５。 ５３．Ｓｔｏｖｅｒ，Ｃ．Ｋ．ら、２０００、「Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＰＡ０１、
日和見病原体の完全ゲノム配列（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇ
ｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＰＡ０１， ａｎ
ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ）」、
Ｎａｔｕｒｅ ４０６：９５９−９６４ ５４．Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｊ．Ｔ．ら、１９９８、「ｐ
ｈｅ−ｔＲＮＡ遺伝子に組込まれた５００−ｋｂ共生体
島の獲得による根粒菌の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｒｈｉｚｏｂｉａ ｂｙ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ
ｏｆ ａ ５００−ｋｂ ｓｙｍｂｉｏｓｉｓ ｉｓ
ｌａｎｄ ｔｈａｔ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｓ ｉｎｔｏ
ａ ｐｈｅ−ｔＲＮＡ ｇｅｎｅ）」、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：５１４５−
５１４９。 ５５．Ｖｉｅｉｌｌｅ，Ｃ．ら、１９９０、「Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ ｎｏｄＰＱに相同な２
つのＡｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ
Ｓｐ７プラスミド遺伝子の特徴（Ｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｚａｔｉｏｎｏｆ ｔｗｏ Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕ
ｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｐｌａｓｍｉｄ
ｇｅｎｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｔｏ Ｒｈｉｚｏ
ｂｉｕｍｍｅｌｉｌｏｔｉ ｎｏｄＰＱ）」、Ｍｏｌ．
Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ． ３：
３８９−４００。 ５６．Ｗａｄａ，Ｈ．ら、１９９０、「脂肪酸脱飽和の
遺伝子操作によるシアノバクテリアの冷凍耐性の増強
（Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｉｌｌｉｎｇ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ａ ｃｙａｎｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｎｉｐｕｌａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｓａｔｕｒ
ａｔｉｏｎ）」、Ｎａｔｕｒｅ ３４７：２００−２０
３。 ５７．Ｘｉｏｎｇ，Ｋ．ら、１９９６、「異なったｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａおよび大豆ゲノタイプ由来のβ
−シスタチオナーゼのリゾビトキシン誘導阻害の比較
（Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘ
ｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ
β−ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎａｓｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔ ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａ ａｎｄ
ｓｏｙｂｅａｎ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ）」、Ｐｌａｎｔ
Ｓｏｉｌ １８６：５３−６１。 ５８．Ｙａｍａｙａ，Ｔ．ら、１９８８、「高速液体ク
ロマトグラフィによるピコモルレベルでのフェニルチオ
カルバミルアミノ酸の分析および植物物質への応用（Ａ
ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｈｅｎｙｌｔｈｉｏｃａｒｂ
ａｍｙｌ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ａｔ ｐｉｃｏ−
ｍｏｌｅ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍ
ａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｌａｎ
ｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ）」、Ｓｏｉｌ Ｓｃｉ．Ｐｌ
ａｎｔ Ｎｕｔｒ． ３４：２９７−３０２。 ５９．Ｙａｓｕｔａ，Ｔ．ら、１９９９、「１−アミノ
シクロプロパン−１−カルボキシレートシンターゼの阻
害に基づいたリゾビトキシンの新アッセイ（Ｎｅｗ ａ
ｓｓａｙ ｆｏｒ ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｂａ
ｓｅｄ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ １−ａｍ
ｏｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙ
ｌａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ）」、 Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ
ｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ６５：８４９−８５
２。 ６０．Ｙｕｈａｓｈｉ，Ｋ．Ｉ．ら、２０００、「Ｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉによるリゾ
ビトキシン産生はＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏ
ｐｕｒｐｕｒｅｕｍでの根粒着生および競合性を増強す
る（Ｒｈｉｚｏｂｉｔｏｘｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｂｙ Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｅｌｋａｎｉ
ｉ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｎ Ｍａｃｒｏ
ｐｔｉｌｉｕｍ ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍ）」、Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ６
６：２６５８−２６６３。 ６１．Ｙｕｈａｓｈｉ，Ｋ．Ｉ．ら、１９９５、「Ｂｒ
ａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉは大豆の外
根膨潤を誘導する（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅ
ｌｋａｎｉｉ ｉｎｄｕｃｅｓ ｏｕｔｅｒ ｒｏｏｔ
ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ）」、 Ｐ
ｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３６：１５７１
−１５７７。 ６２．Ｚｈａｎｇ，Ｙ．Ｘ．ら、１９９７、「ｐｈａｓ
ｅｏｌｏｔｏｘｉｎ遺伝子クラスターのｐｈｔＥ部位は
アミノ酸トランスフェラーゼ、転写因子のＡｒａＣファ
ミリー、および脂肪酸デサチュラーゼをコードする遺伝
子に相同なＯＲＦｓを有する（Ｔｈｅ ｐｈｔＥ ｌｏ
ｃｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｔｏｘｉｎ
ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｈａｓ ＯＲＦｓ ｗｉｔ
ｈ ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ ｔｏ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃ
ｏｄｉｎｇ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｔｒａｎｓｆｅｒａ
ｓｅｓ， ｔｈｅ ＡｒａＣ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｔ
ｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ， ａ
ｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ
ｓ）」、Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔ
ｅｒａｃｔ． １０：９４７−９６０。
【００７０】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Japan Science and Technology Corporation
<120> rtxC gene encoding rhizobitoxine
<130> PA908107
<160> 15
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 28401
<212> DNA
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 1
ggatcctgac cgctttgaca tatctgctgg ctggctacat gcgcgagcag gtttgcgttt 60
atatgtgccc gtggccgcgc atccaggccg cgctcaccga cgaatgggcc ctcaatgtcg 120
cctacaaata cgaccgcggc gagcagcgct gctcattgaa gaaatcattc gatctgcgcg 180
cacgcggcga aagggtcgga gactgcatcg attgtaatca atgcgcggcg gtctgtccga 240
ccgggatcga tatacgaaat ggcgcccagc tgggctgcat ccagtgcggg ctgtgcatcg 300
atgcctgcga tgccgtcatg aagaagatcg ggcgcaaaag cggcctgatc ggttacgaca 360
acgacatcaa tatccgccgg cggatggacg gcaagccgga gctgttcaag ccggtgcgcc 420
cgcgcacgct cgtttatgcc tttttgatca cgatcatctg cgcggtgatg gtttatgagt 480
tgttgtcgag aacgatgctc gatctcagcg ttctgcatga tcgtaatccc atggctgtca 540
gactcagcga tggatcggtt cgcaacgcct ataccgtgcg tttgctcaac aggcgcgact 600
tcgatcgggt aatcgcgatc gacatcgatg ggccgcccaa gacgtccgtc cacgtcgtcg 660
gcgccgattc ggtgaccgtg gatcggccga tgatcgtcct ggctcgcgat acgacgacag 720
aactgcgtgt gctgttgacg gcgccggttg acggcatggc ggaacgctcg atgccggtga 780
ggtttcgggt caccgatctt ggcctcggcg aggtcgcctc cgcatcggat cattttgttc 840
tcccctgacg atcactgacg ggatgtgacc atgaccgcat caaatcaagt cacgtggccc 900
attaccgggc gcttcgtcct gatcgcgatc cttgcgttct tttcggtcgt gatcggcgcc 960
aatctggtca tgatgcgctt tgccatcgtt acgctgccgg ggacggaggt tgacagcgcc 1020
tatcgtgcga gcctcgccta tcagcgcgag atcatcgcgg cacggcagca gaacgagcga 1080
aactggcagg tgcaggtata catccaccgg cagtcggatg gtgaagctga gcttgcgatc 1140
gaggcgcgcg accgcctagg tgcgcctctc gccggaatga atttcgtggc ccgcctcgag 1200
cgcccggtcg accgccgggc cgatcgggcg attgatgtct cgcaggccaa tgctgggatc 1260
taccgcggca gcgcctcggg cgtcgctgtc ggacagtggg atctcgtgat cgagggcgac 1320
gatgacgacc gccgcatgtt tctgtcgaag aaccgcatcg tcctgaattg agagcgtgtg 1380
cacatgcagt ccgacatcga cttttctcac tttctgaaga ggacaggcgc gggccgtctc 1440
cagcttgacc ttgcggtgga ggggatcagt tgcgtgggct gcatgggcaa gatcgagcgc 1500
aatctgtcga gcattccgga tgtgacctcg gcacgcgtga acctcaccga taatcggctg 1560
gcgctcgaat ggaaggccgg agccctcgat ccagctctat ttgtcaagcg gctcgccgaa 1620
ttaggctata gggcatatcc gttccagcgg gacaatgcgg agacgctgga ggcggagaga 1680
gcgcaggaat tgctgcggcg gctgggcgtc gccgcctttg ccgcgatgaa cgtgatgatg 1740
ctgtcgatcc cggtatggtc cggaaatgtc tcggatatgc tgccggaaca gcgcgacttc 1800
tttcattggc tctccgcgct gatcgtcctg ccggccgcgg cttattgtgc gcaaccattc 1860
ttctcttccg cttttgccgt gctgcgggcg cgcggaacca atatggacgt tccgatcagc 1920
atcggcattc tgctcgccct ggcgacatcg ctgatcgaga ccatcgctca tgccgagcac 1980
gcctatttcg atgcggcgat catgttgatc gcctttctgc tcgcaggtcg ctatcttgac 2040
cagaacatga ggcgacgcac ccgcgccttc gccagcaacc ttgcagcact caaggcggag 2100
actgcggcga agttcattag cccgaccgag atcagaaccg ttccggtggc ggcgatcaag 2160
ccgggggaca tcgtgctggt gcgccccggc gaatgctgta cagtcgacgg caacgtgatc 2220
gagggaagct ccgagatcga tcaaagcctt attaccggcg agactttgcc ggcgatcgcg 2280
acgcccggca gcgcggtgtt cgccggcaca ttggtacggt ccggcaccct gcgcgtccgt 2340
gcagcggcga cctcggacgg cacactgctt gctgagattt ccaggctgct cgatcatgcc 2400
ctgcaagcgc gctcgcgcta tctgcgcctc gccgaacgcg cgtcgcgact ctatgcgccg 2460
atcgttcaca tcacggcctt cctgaccatg ctgggttggc ttgcctctgg cgccaccttt 2520
cataattcgg tggtcacggc gatcgcagtc ttgatcatca cctgcccctg cgcgctgggt 2580
ctggctatcc ccgcggtgca gacggtggcc gccggcgcac tgttccgttc cggcgtgctg 2640
ctcaatgccg gggatgcaat cgagcgtatc gccgaggtgg atcgggtgat cttcgacaaa 2700
accgggacgc tgacgctgcc tgaactcgat gtcgccaatc tcgctggcat tcccgaggat 2760
gtcgtcaaat tggcgggccg gctggcgctg tcgagccgcc atccggtcgc cgccgccctg 2820
gcgcgtgctg ccggcgcaaa cgagccgttg gccgatatcg aagaggagcc gggacggggc 2880
gtccgcggtt actatgaggg cgcgccgatc cggctgggcc gccccttgtt ctgcggcgct 2940
gacagcctcg ctgacgagat cctgtgccat gatcccgagg cctccgtcgt cgcgttcagc 3000
cacggcgagg cgaggcatgt ctttgccatc aggcaaagga tgcggccgga cgcggtcgag 3060
gtcgtcacaa gcctcgcacg ccttggcatc atggtggaga tcgtttccgg ggatcgcgag 3120
ccggctgttc ggcgggcggc cgagacgctt ggcattcaca agtggcgggc caacgtctcg 3180
ccgacggaca aggtcgcccg ggtcgaagat ctgacgagca ggggatacaa ggtgttgatg 3240
gtcggcgatg gcttgaacga cgcgcccgcg ctcgcagcag cccatgcctc gatgtcgcct 3300
gtcaccgcta cccatatgag ccaggcggtc gctgatgcga tcttcctcgg tgcgcatctt 3360
gggcccgtga taaaggcggt cattgcctcg cgcggggcgc tgcggctgat gcggcagaat 3420
ctctgtcttg ctgtcgtcta caacgtcctg gctgtgcccg ttgcgatcgc cggcttggtg 3480
acgccgctga ttgccgccgc ggcaatgtca tgctcgtcgg tgctggtcat gcttaacgcg 3540
ctgcgggcgc gaagaggcga ggccctctga tggaagtgct gatctatctg gttccgctcg 3600
ccctttcact cggcttcctc ggtctgcttg gctttctgtg gtcgctgaag agcggccaat 3660
atgacgatct cgacggcgcg gcctggcgcg ccatcgccga tgaggagccc gatcagcctc 3720
cagtgccggt ccaaatagtg ccaacggacc agcgcatttg tggaagcggg cgtcgacgcg 3780
agtactaact cgcccgtcca ggcggtccac cgccgcaact gtgggacagg cgaaggtcgg 3840
acggttagca gcctgttgat ggcggcaggg cgccgtgatc agcagcggct gctcagtggc 3900
ccactcgcta tcgatgacca tagtatgaga gcgcgatggt gtctgccgga ttcaatgcct 3960
gatcccctct gagctggata caaatctcga ccctacctga agttctctgg ctaatcgcaa 4020
ttccctttct catggtgttt caaagacttg taacaacctg ctaggttcca acaacgatgt 4080
gtcaattagg agactggata cgccaattca tggccaaatt tctcgatacg aaaacctcca 4140
cgaaactaac aactgggaag gcgctgtagc tattgcttct ggacacatga cagagccttg 4200
cacctttgcg cgaggtctat gcttgcctcc tttttacggt cgtcgctgtg aaaaaactat 4260
gttagaagcc gctcctctca aaaggagcat tcattgtgaa aaaagcaacc aagaaacgcg 4320
ttaagcggcg cgagtggact aaggcagata tcaaagaact caaggtccat tcaaaggctc 4380
ggaccccggt cacgaaaata tcaaaaatga ccaaacgctc tgtcggtgcg ctacgccaga 4440
aggccttaca tctcggaatc ggactgggac atcagcggta gctaattggg ctgcgctgtt 4500
gattgctaca gtagggcggc tcccgggccg cccttattgg ctgttggatt gtgtcgcaac 4560
agctggttcc gcccaaccgt tgatcaacca gcttcgagcc cgggtaattt cctatcgatt 4620
tcagcgccgc gattgttgct gctgtccgag aacgtagcat tgtcggagct ttataaagtg 4680
aggtgatcga atccagcgaa ctcagtgagt acagtctgca ttcctgctac gacgaacgtc 4740
tggtctgctt ctcggcgtgt acctgccaga ggactggccg cttggttctg cagccgatca 4800
gctttgacga ggtcccggag tcctcagctg gctgatgaga ggagagcttc tcacctacga 4860
cgttaggggc ggttacctca acaaggagct tctccaacac agggcagggc gtgtgtgtcc 4920
acgatcggcg gcgcgtcaaa gatcttcgtg gcttcgaccg acgatcgatt tgcagatgaa 4980
gatgggcttt tcacaccacg tgctgggcgg agcctggcga tggcggagcg gcctcgagcg 5040
tccggcatct tcgatgagat ttttggaaag cgctttgtgg caatatctcg gcaaaaagct 5100
ggtgacacgc taagtcacat gagcccgcag atctaagcca gctctgcgcg atttgcttaa 5160
gcgcgagatt cagctcccgc cacatcgagg tctgtacaga cgacgcgccc gaaaccgctc 5220
aagaatgttc agctttcatc aggggtcggc tcgtagctac ctcgttgtta ctgcgacggt 5280
cccctttggc tgaccacagt tgagaaggtc gtcgttatgg cctaagagtg gattctgcaa 5340
aaattgggac gcggcgcagt catgggccca cgggttagcc gatagaaaca accttgcgag 5400
tggggcgttc ctcgaagatc atttgggcgc aagagtgccc cgcccagcct gctggtgagc 5460
tcgagcttcg gaacgatacg gcgcgctcag cagcaataaa aacagcgctc ggttggcttg 5520
atatctggcg gccgagcggc tgcgccctga gcccgtcatc atctgcttgc cctcgtcggt 5580
atgcacggac cacaaccacc ttcgtcggcg ctgcttcaag gaaaactcga agactggaag 5640
cgttgacatg gctacgtggc atcatttctg acggacgtgc gtttggtctt cggaaggcca 5700
gaaccgctct cgcggtagac cttctccaga cgacgcctga ctgcagccag cttggcaatg 5760
aactcgcttg atccgttaac cccgaattca tcagaagcga gctcatccag tgcttcctgc 5820
cctgccaaag atgccagacg tttacgagtt ttggctgtca gcgtcatctg cacgacccga 5880
gcgtcgcttg cgcagtgctt gcgccgcagg aatccatttt tctcgagcag ctttgaatgg 5940
gtcgtgacga aggaaggatc gacgtgcatc aactttgaaa ccatgttgac ggggacacca 6000
ttctctttcc ccaaataggc cacggccatc aggatcatcc actgtggccc ggtgatgcca 6060
aggacatcgg ctcgggatct cgcaagctct tcgagccacg cactgatcga tctgatctcc 6120
cacatgaacg gccggatcgt ctccagttcg tcagtagagg tactgccaag cgcgtttgct 6180
gggccaggca aatccggcgg catcgaagct ctggttccat cttttaccag cttgccttag 6240
cgcgaatgag aagtggcgac aacgccgtaa gagcaggcaa atcaaatgct tggtacggta 6300
cggacgaaag gggagtgtgc caatcatgaa ctggccggag cagttgcggc aacagagcgc 6360
tcattgtctt gacgaaccgg cggcatccac ttgtcgggtc gatcccacac gccggtaaga 6420
ttgatgcccc taccaacgag acgtccatgg tctgcttcat tggttactcg ccggcttgct 6480
cactcctttg ccggatcatc gagcggtcaa agtctcgagc gaggaacgtt agaacatctg 6540
cgccgcgtgt cgcgaaatct cgacgcgcca tctttccctc tgattaaagg atacgacttg 6600
ctcttcccac gcggtcggac tgcaatgtcc agcaccgcga gccgttgggc gcagaccatc 6660
agcctcgatg agatcgggcc gattatgcag aaagcgatcg ataagcgaca aggcaagttc 6720
aacgacgagg tccgccggtg ggctatcatc gaagccaatg caaattgctt ccgaagccga 6780
gacgatacgt cttgacgctc ggttgcctgg ggctagtgtc gtcgcttcac gccttcgcca 6840
acagtgttgt gtggtggttg cccgataaac cgcagtatag tcttctcatc cgattccata 6900
tcggcggctt gccttcgtat agttgagcgg gcttttggtc acaactagcc ttgcgagtag 6960
gcggcaggct gccgattgca attgccaaaa acgcttgcgc gattcatcaa ttcgacggat 7020
tcagaccatg aattgcaggc gcctccctcc tcgtatggca aagtgtcgcg agcgatcggc 7080
cgatgggaaa ttgcgcggcc gccgtcgtcc tcgagcgaac aagtgtgtgg tccggggggc 7140
gctttcctcg agcgcatcag gagcggtatt ttgagccagg atgcaaaccg cggggccacg 7200
gtctgctttc tgctcggcct tccacggtcc ggaacgacgc tgttggcgca tttgctccaa 7260
cagcatccgg aaattacagc tccaccagag ccttggctca tgctggctct tgaggcgttt 7320
ggcagggtgg accatcgtca cccggccgga acatctctga tcgaaacggc aacttccgag 7380
ttcttgggca ggatcgatcg cgctgccgtc agccgtgcct ttgcggatgc ggcgtacggt 7440
gcgtatctgt cctcggcggg caagcgcatc atcgtggaca agacaccacg ctactggatg 7500
gtgctcgact atttggatct tctttatcct gaggcgccgc atattcttct gatgcgcaat 7560
ccctacgcca ttgccgcatc cctgaagtcg acttggggag tcccccttca ggcgaaaagc 7620
tcccgttcgg tcagcttgtc ctcgcttgct gatctcatgc tccgcctgcc tgacgttatt 7680
gcctcttcgc ttgctgatct ggttctcggc ctgcccaaac tcgctgcgca ccgcgatcgc 7740
cggcagacga tggtggtgca gtacgaacgc ctggcggcgt gtccggagga ggaaatccag 7800
cgtctcatcg ctggccttgg ctgtgatcca aaagacaccg cagctacgtc gacggctcgg 7860
gccgattatc ttcactccag cagctttgga gatcggaaaa tccttgaaag aaggaccgtc 7920
gatgagaagt ctgtcgacgc gtggcaggtc caattgagcg tcgaagagat gcaaacgata 7980
accgatctga tcggcgtcga gctgatgata cagctcggat atgaagcgga attgcggcac 8040
gcacaacaag ccggagtggt tgataaaggg cgcgaggtca ccgagctata tcgtcagata 8100
tttcgaatgt ggtgggatct gcgcctcagc aaggaacggg catggtcgag catttcagcc 8160
aaccccctgg cattcggcgg ccaatcgaga actcatgctc cacaccaaat gcgtccacag 8220
ggcacgatgc gcagcatcta tccggaaccg acttcgacca aaatcaggag ctgacgagtt 8280
cgatggaggc gcagttgcgc atggcactct tggcttcgga atcggatcga ggtgcactgc 8340
aagaggccgt tcggcatcgc gacgccgtta tcgaggcgct gcggggcgag attgtgcggc 8400
tcaaggaggg gagcaacaat cacgagcgat gatcctccca ggactatggt caaaatgtgc 8460
tgcctgcctt atcgagctcg ttgtctagct ggcaagcgga agtaagtccg ccggctcgcg 8520
tgtccagccg cgcttcgatt ggttgctggc agacgccgaa cgaaggatgg acgctatccg 8580
ctgtttgacc cggtggacgc cgatgcgcta tggcaggcag ccgatcgctg caacgcctat 8640
cgggcctatc gcaaggcaaa cgcggtactg aacgaactaa agatcccgca tcgtagaaga 8700
cacatgctgc cgaaacatct gcgccgtctc gaagctgaat cgatcgaaat catgcgtgac 8760
gtggtcgccg agttcaaaaa gccggtcatg ctctactcga tcggaaaaga ctcgagcgtg 8820
atgctgcata ttgcgatcaa ggccttctat cccgcaaagc tcccgtttcc cctgcttcac 8880
gtcgacacga cctggaagtt tcgtgagatg atcagcttcc gggacgcgac agccaagcgc 8940
ctcggcctcg acctgatcgt ccatgtaaac gaggagggca tcgcgcgcgg gatcaatccg 9000
atcgactccg gctccgcgct tcatacccgg gtgatgaaga ccgacgccct gaagcaggcg 9060
ctcgacctcc acgaattcga tgccgccttt ggcggcgccc ggcgtgatga ggagaagagc 9120
cgcgcaaaag aacggatact ctccttccgt tcgtccgggc acgtctggga cccccgcaat 9180
cagcggccgg agctctggaa cctgttcaat acgcggattc gccagggcga aaccatgcgc 9240
gtttttgcga tgtcaaactg gactgagctc gacgtgtggg aatacattat gtgcgagaag 9300
atcccggtcg tcccgctcta cttcgccaag caaagaccga tcgtgcgtcg aaatggcgcg 9360
acgatcatga tcgacgacaa gcgattgccg cttcggtctg gcgagacgcc acaaatgcgg 9420
atgatccgtt tccgcacgct gggctgctat ccgttgagcg gggctattga atccgacgcg 9480
acgacgatcg aagacatcgt cgcagagatg cagactgcga cggtgtcgga gcgccagggg 9540
cgcttgattg atgccgatga agccgcttcg atggagaaaa agaagcggga aggctacttt 9600
tgatgcttgt caaggcgata acggagtctg tccaggccaa gccaaaggat cagctgcgat 9660
tcatcacgtg cggttcggtg gatgacggga agtcgacact gatcggccgg ctgctgcacg 9720
acagcaagat gatctaccat gatcagatga cggcgctgga acgggacagc gccaagcacg 9780
gcacgaccgg ccgtgagatc gatttcgcgc tgctcgtcga cgggcttgaa gccgagcgag 9840
agcaaggcat cacgatcgat gtggcttatc gtttctttgc gacggaacgg cgctctttta 9900
tggtggcaga tacgcccggc cacgagcagt atactcgcaa catggcaacg ggcgcctcaa 9960
acgcccagct cgctatcatc ctcatcgatg cccgcaaggg cgtgctggtt caaaccaagc 10020
gccactcgtt catctgttcg ctccttggta tccgccatct cgtcctggca gtgaacaaga 10080
tcgacctcgt ccactacagc aaagagagct ttgatcggat cgtcgccgac tatgtggcct 10140
ttgccagcga tcttggcttc gaatcgatcg ttccgatccc gatctctgcc aggtacggcg 10200
acaatgtcgt cgaccgctcc ggcaacactc actggtacga tggtccctgc ctgctcggcc 10260
agttggagag tattgatatc cggtgcgaca gctccgggca ggccttccgc tttccagtac 10320
agtgggtgaa ccggccggac ctggatttcc gcggctacgc cgggtccgtg gcttcgggaa 10380
gcatctcggt gggcgacgac atcgtcgtcg cagcgtctgg acggaccacg cgcgtcaggc 10440
ggattgtgac gcagggcggc ggtctgtcct gcgccgaggc cggcgatgca atcacgatca 10500
ccattgaaga cgaaatcgat atcggccgtg gcgatctcct ggcacgtccg accgagcggc 10560
cggagctcgc cgaccaattc gccgctcatc tgatctggat ggatgaggac cagctcgttg 10620
tcgggcgcaa ttacattctg cgcattggat cgcagaccat agccggcagc attaccgcga 10680
tcaatcatcg gatcgacgtc aatacacggg agcacctgtc agccgggacg cttggcctta 10740
acgagatcgg cttttgcaat atatcaacca cccggcctgc ggcgttcgat ccttacgagg 10800
ccaatcgcaa gaccggatca tttatcgtca tcgaccggta tacaaaccgt acggtcgcgg 10860
ccgggatgat cgcatgtcca ctgcggcggg cgaccaacgt cgcttggcaa cccgttgcag 10920
tgggacggaa ggagcgggcc gacctcaaga accagaagcc ctgcatcatt tggttcaccg 10980
gcctgtccgg cgcaggaaaa tcgacgattg ccaacatcgt cgatcaaaag ctgttcgcaa 11040
tgtcccggca tgccatgctg ctggatgggg acaacctgcg gcacggatta aatgcggacc 11100
tcggcttctc cgaggtcgac cgcatggaaa acattcggcg cgccggggag gctgccaagc 11160
tgatggcgga cagtggcttg atcgtaattt gttcgttcat ctcgccccac aggagcgaac 11220
gagacatggt gcgcagtctg gtcagcaagg aggagtttgt cgaagtcttt gtcgatacgc 11280
cgatcgaaga atgcgcgcgt cgcgatccca aaggtcttta ttcaaaggcg aagtccggta 11340
agatcaagaa cttcaccggc atcgatgcgt cctatgaagc gccgataaga cccgaaattc 11400
atctcaggac catggagcag acacctgagc aaatggccca ggccgtgatc gatgtgttga 11460
tggctcgcgc aattcttggc cgttagtgtt cgtcaaacct gtcacctcgc atcgcaccat 11520
cgatagcagg agatgccccc cactaacctg ctggcccggc cacggcgact caggttaagc 11580
aaaggcatca atcagactca ggctccaaag gaacaaaatg gttgcgtcca cacgtcgatt 11640
gcccgcttct ggttatgtgc tcgaaatcga cggtcaattg aaaaccgaat tcgcaaccag 11700
ggatggggcc ttcgcaggag cccaggagct caagaagcgc cgtcccatgc tccaggtcag 11760
aatctatgac gccaggacaa aggccagaga ggaagtccga cttccagtag cttgaagttt 11820
cgcttgatgc cgtttcccgc gcgtccgact agcgtcatgc ctaggctctc gtaaccgagc 11880
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agcgtggtcc agggcggcca ccggagcacg cgacacaaaa aacgctcgct tgattgacgc 25260
tccgcgacaa tcaaagcaaa caaaactctt gcgcgcgaca atcatcgcgg cgatcatcat 25320
cgcgccgcga cactgactcg ccatcctgat cgccgcgctc ttccgaccca gatcgtcgcg 25380
ctataatcat tcccgttgcg agcgcgtgag cagcttgggg ttttccttgt aacccgacga 25440
actccaggtt ttcgatgccg aagtcggtga acgcctgaac gccatcttcg ccgacgccat 25500
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ccggcaccca caatacagtt tcacacccat tcgtgaggac cggcacacgg ctcatcaagc 25680
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atcactgccc atgacacaac cctcgcgatt aaggttgaaa tcctatgccc ggatgctggg 25860
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tccgccttgg ctagatccct tgctccgatt ggcgaaaacg aacgcaaaag ggcggtaccg 26160
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ccggctcttg ctcccaaaag ggctggggcg cattctggct cgttgacaag cgcttttcca 26340
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accatcggcc agtcgttcgt atgaaacgcg ggtccgagtg agctagccag ccggaggcct 26580
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cgtagccgtt cgctcgaact cgtgcgcgcg ctggatactc ggcaaccatt ttcatcggat 26700
ggctccgcaa acaccaagtc cagcgggtgc tgtctcttac ctgtcgccct ggctctgcaa 26760
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ggcaatcgac tttagacgaa taggtttacc aggcacattt ccattaggac cgttgctgtg 27060
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gagggtatct cgctcaacct atcaccctac aacggctgca acaacaccgc gagctgctgg 27360
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tcgtcagatg cgaatggttt tcacggagcc agcccagccg ccgcagaacg gacaattgga 27540
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cggctcacat cgccaggatc tgtgatctcg ccggagcgtt cgagcaagtc ccaggcgatc 27720
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actgcctatt cccgcctctg ctgaacgtgc aatattggat catgaaagca cgaaatcgaa 27960
gtctgctcat ctttcttgtt gccgtcgtgg gtattggttg gctaattggc gcaaccaact 28020
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tttggtctcc tattgttttc cgcttgcaca acttggccat ggggctctcg gtcatcattc 28260
tgctgctggg cctgattctg ttatttatag gcctgcaatg gcgggccaat cggcttgctg 28320
cgctcttatt tatcccgtat gcgggctggg tagcgtttgc atcgctttta aactttgctt 28380
tgtaccgcct taattgaatt c 28401
<210> 2
<211> 281
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
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Ile Leu Thr Ala Leu Thr Tyr Leu Leu Ala Gly Tyr Met Arg Glu Gln
1 5 10 15
Val Cys Val Tyr Met Cys Pro Trp Pro Arg Ile Gln Ala Ala Leu Thr
20 25 30
Asp Glu Trp Ala Leu Asn Val Ala Tyr Lys Tyr Asp Arg Gly Glu Gln
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Arg Cys Ser Leu Lys Lys Ser Phe Asp Leu Arg Ala Arg Gly Glu Arg
50 55 60
Val Gly Asp Cys Ile Asp Cys Asn Gln Cys Ala Ala Val Cys Pro Thr
65 70 75 80
Gly Ile Asp Ile Arg Asn Gly Ala Gln Leu Gly Cys Ile Gln Cys Gly
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Leu Cys Ile Asp Ala Cys Asp Ala Val Met Lys Lys Ile Gly Arg Lys
100 105 110
Ser Gly Leu Ile Gly Tyr Asp Asn Asp Ile Asn Ile Arg Arg Arg Met
115 120 125
Asp Gly Lys Pro Glu Leu Phe Lys Pro Val Arg Pro Arg Thr Leu Val
130 135 140
Tyr Ala Phe Leu Ile Thr Ile Ile Cys Ala Val Met Val Tyr Glu Leu
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Leu Ser Arg Thr Met Leu Asp Leu Ser Val Leu His Asp Arg Asn Pro
165 170 175
Met Ala Val Arg Leu Ser Asp Gly Ser Val Arg Asn Ala Tyr Thr Val
180 185 190
Arg Leu Leu Asn Arg Arg Asp Phe Asp Arg Val Ile Ala Ile Asp Ile
195 200 205
Asp Gly Pro Pro Lys Thr Ser Val His Val Val Gly Ala Asp Ser Val
210 215 220
Thr Val Asp Arg Pro Met Ile Val Leu Ala Arg Asp Thr Thr Thr Glu
225 230 235 240
Leu Arg Val Leu Leu Thr Ala Pro Val Asp Gly Met Ala Glu Arg Ser
245 250 255
Met Pro Val Arg Phe Arg Val Thr Asp Leu Gly Leu Gly Glu Val Ala
260 265 270
Ser Ala Ser Asp His Phe Val Leu Pro
275 280
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<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
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Met Thr Ala Ser Asn Gln Val Thr Trp Pro Ile Thr Gly Arg Phe Val
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ile Leu Ala Phe Phe Ser Val Val Ile Gly Ala Asn Leu
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Val Met Met Arg Phe Ala Ile Val Thr Leu Pro Gly Thr Glu Val Asp
35 40 45
Ser Ala Tyr Arg Ala Ser Leu Ala Tyr Gln Arg Glu Ile Ile Ala Ala
50 55 60
Arg Gln Gln Asn Glu Arg Asn Trp Gln Val Gln Val Tyr Ile His Arg
65 70 75 80
Gln Ser Asp Gly Glu Ala Glu Leu Ala Ile Glu Ala Arg Asp Arg Leu
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Gly Ala Pro Leu Ala Gly Met Asn Phe Val Ala Arg Leu Glu Arg Pro
100 105 110
Val Asp Arg Arg Ala Asp Arg Ala Ile Asp Val Ser Gln Ala Asn Ala
115 120 125
Gly Ile Tyr Arg Gly Ser Ala Ser Gly Val Ala Val Gly Gln Trp Asp
130 135 140
Leu Val Ile Glu Gly Asp Asp Asp Asp Arg Arg Met Phe Leu Ser Lys
145 150 155 160
Asn Arg Ile Val Leu Asn
165
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<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 4
Met Gln Ser Asp Ile Asp Phe Ser His Phe Leu Lys Arg Thr Gly Ala
1 5 10 15
Gly Arg Leu Gln Leu Asp Leu Ala Val Glu Gly Ile Ser Cys Val Gly
20 25 30
Cys Met Gly Lys Ile Glu Arg Asn Leu Ser Ser Ile Pro Asp Val Thr
35 40 45
Ser Ala Arg Val Asn Leu Thr Asp Asn Arg Leu Ala Leu Glu Trp Lys
50 55 60
Ala Gly Ala Leu Asp Pro Ala Leu Phe Val Lys Arg Leu Ala Glu Leu
65 70 75 80
Gly Tyr Arg Ala Tyr Pro Phe Gln Arg Asp Asn Ala Glu Thr Leu Glu
85 90 95
Ala Glu Arg Ala Gln Glu Leu Leu Arg Arg Leu Gly Val Ala Ala Phe
100 105 110
Ala Ala Met Asn Val Met Met Leu Ser Ile Pro Val Trp Ser Gly Asn
115 120 125
Val Ser Asp Met Leu Pro Glu Gln Arg Asp Phe Phe His Trp Leu Ser
130 135 140
Ala Leu Ile Val Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Cys Ala Gln Pro Phe Phe
145 150 155 160
Ser Ser Ala Phe Ala Val Leu Arg Ala Arg Gly Thr Asn Met Asp Val
165 170 175
Pro Ile Ser Ile Gly Ile Leu Leu Ala Leu Ala Thr Ser Leu Ile Glu
180 185 190
Thr Ile Ala His Ala Glu His Ala Tyr Phe Asp Ala Ala Ile Met Leu
195 200 205
Ile Ala Phe Leu Leu Ala Gly Arg Tyr Leu Asp Gln Asn Met Arg Arg
210 215 220
Arg Thr Arg Ala Phe Ala Ser Asn Leu Ala Ala Leu Lys Ala Glu Thr
225 230 235 240
Ala Ala Lys Phe Ile Ser Pro Thr Glu Ile Arg Thr Val Pro Val Ala
245 250 255
Ala Ile Lys Pro Gly Asp Ile Val Leu Val Arg Pro Gly Glu Cys Cys
260 265 270
Thr Val Asp Gly Asn Val Ile Glu Gly Ser Ser Glu Ile Asp Gln Ser
275 280 285
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Val Phe Ala Gly Thr Leu Val Arg Ser Gly Thr Leu Arg Val Arg Ala
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Ala Ala Thr Ser Asp Gly Thr Leu Leu Ala Glu Ile Ser Arg Leu Leu
325 330 335
Asp His Ala Leu Gln Ala Arg Ser Arg Tyr Leu Arg Leu Ala Glu Arg
340 345 350
Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Pro Ile Val His Ile Thr Ala Phe Leu Thr
355 360 365
Met Leu Gly Trp Leu Ala Ser Gly Ala Thr Phe His Asn Ser Val Val
370 375 380
Thr Ala Ile Ala Val Leu Ile Ile Thr Cys Pro Cys Ala Leu Gly Leu
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Ala Ile Pro Ala Val Gln Thr Val Ala Ala Gly Ala Leu Phe Arg Ser
405 410 415
Gly Val Leu Leu Asn Ala Gly Asp Ala Ile Glu Arg Ile Ala Glu Val
420 425 430
Asp Arg Val Ile Phe Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Leu Pro Glu Leu
435 440 445
Asp Val Ala Asn Leu Ala Gly Ile Pro Glu Asp Val Val Lys Leu Ala
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Gly Arg Leu Ala Leu Ser Ser Arg His Pro Val Ala Ala Ala Leu Ala
465 470 475 480
Arg Ala Ala Gly Ala Asn Glu Pro Leu Ala Asp Ile Glu Glu Glu Pro
485 490 495
Gly Arg Gly Val Arg Gly Tyr Tyr Glu Gly Ala Pro Ile Arg Leu Gly
500 505 510
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His Asp Pro Glu Ala Ser Val Val Ala Phe Ser His Gly Glu Ala Arg
530 535 540
His Val Phe Ala Ile Arg Gln Arg Met Arg Pro Asp Ala Val Glu Val
545 550 555 560
Val Thr Ser Leu Ala Arg Leu Gly Ile Met Val Glu Ile Val Ser Gly
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580 585 590
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Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Ala Ala His Ala Ser Met Ser Pro Val
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Thr Ala Thr His Met Ser Gln Ala Val Ala Asp Ala Ile Phe Leu Gly
645 650 655
Ala His Leu Gly Pro Val Ile Lys Ala Val Ile Ala Ser Arg Gly Ala
660 665 670
Leu Arg Leu Met Arg Gln Asn Leu Cys Leu Ala Val Val Tyr Asn Val
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Leu Ala Val Pro Val Ala Ile Ala Gly Leu Val Thr Pro Leu Ile Ala
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Ala Ala Ala Met Ser Cys Ser Ser Val Leu Val Met Leu Asn Ala Leu
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725
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<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
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Met Glu Val Leu Ile Tyr Leu Val Pro Leu Ala Leu Ser Leu Gly Phe
1 5 10 15
Leu Gly Leu Leu Gly Phe Leu Trp Ser Leu Lys Ser Gly Gln Tyr Asp
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Asp Leu Asp Gly Ala Ala Trp Arg Ala Ile Ala Asp Glu Glu Pro Asp
35 40 45
Gln Pro Pro Val Pro Val Gln Ile Val Pro Thr Asp Gln Arg Ile Cys
50 55 60
Gly Ser Gly Arg Arg Arg Glu Tyr
65 70
<210> 6
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<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 6
Met Leu Ala Leu Glu Ala Phe Gly Arg Val Asp His Arg His Pro Ala
1 5 10 15
Gly Thr Ser Leu Ile Glu Thr Ala Thr Ser Glu Phe Leu Gly Arg Ile
20 25 30
Asp Arg Ala Ala Val Ser Arg Ala Phe Ala Asp Ala Ala Tyr Gly Ala
35 40 45
Tyr Leu Ser Ser Ala Gly Lys Arg Ile Ile Val Asp Lys Thr Pro Arg
50 55 60
Tyr Trp Met Val Leu Asp Tyr Leu Asp Leu Leu Tyr Pro Glu Ala Pro
65 70 75 80
His Ile Leu Leu Met Arg Asn Pro Tyr Ala Ile Ala Ala Ser Leu Lys
85 90 95
Ser Thr Trp Gly Val Pro Leu Gln Ala Lys Ser Ser Arg Ser Val Ser
100 105 110
Leu Ser Ser Leu Ala Asp Leu Met Leu Arg Leu Pro Asp Val Ile Ala
115 120 125
Ser Ser Leu Ala Asp Leu Val Leu Gly Leu Pro Lys Leu Ala Ala His
130 135 140
Arg Asp Arg Arg Gln Thr Met Val Val Gln Tyr Glu Arg Leu Ala Ala
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Cys Pro Glu Glu Glu Ile Gln Arg Leu Ile Ala Gly Leu Gly Cys Asp
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Pro Lys Asp Thr Ala Ala Thr Ser Thr Ala Arg Ala Asp Tyr Leu His
180 185 190
Ser Ser Ser Phe Gly Asp Arg Lys Ile Leu Glu Arg Arg Thr Val Asp
195 200 205
Glu Lys Ser Val Asp Ala Trp Gln Val Gln Leu Ser Val Glu Glu Met
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Gln Thr Ile Thr Asp Leu Ile Gly Val Glu Leu Met Ile Gln Leu Gly
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Tyr Glu Ala Glu Leu Arg His Ala Gln Gln Ala Gly Val Val Asp Lys
245 250 255
Gly Arg Glu Val Thr Glu Leu Tyr Arg Gln Ile Phe Arg Met Trp Trp
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Asp Leu Arg Leu Ser Lys Glu Arg Ala Trp Ser Ser Ile Ser Ala Asn
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Pro Leu Ala Phe Gly Gly Gln Ser Arg Thr His Ala Pro His Gln Met
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Arg Pro Gln Gly Thr Met Arg Ser Ile Tyr Pro Glu Pro Thr Ser Thr
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Lys Ile Arg Ser
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<213> Bradyrhizobium elkanii
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Met Leu Pro Lys His Leu Arg Arg Leu Glu Ala Glu Ser Ile Glu Ile
1 5 10 15
Met Arg Asp Val Val Ala Glu Phe Lys Lys Pro Val Met Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Lys Asp Ser Ser Val Met Leu His Ile Ala Ile Lys Ala Phe
35 40 45
Tyr Pro Ala Lys Leu Pro Phe Pro Leu Leu His Val Asp Thr Thr Trp
50 55 60
Lys Phe Arg Glu Met Ile Ser Phe Arg Asp Ala Thr Ala Lys Arg Leu
65 70 75 80
Gly Leu Asp Leu Ile Val His Val Asn Glu Glu Gly Ile Ala Arg Gly
85 90 95
Ile Asn Pro Ile Asp Ser Gly Ser Ala Leu His Thr Arg Val Met Lys
100 105 110
Thr Asp Ala Leu Lys Gln Ala Leu Asp Leu His Glu Phe Asp Ala Ala
115 120 125
Phe Gly Gly Ala Arg Arg Asp Glu Glu Lys Ser Arg Ala Lys Glu Arg
130 135 140
Ile Leu Ser Phe Arg Ser Ser Gly His Val Trp Asp Pro Arg Asn Gln
145 150 155 160
Arg Pro Glu Leu Trp Asn Leu Phe Asn Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu
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Thr Met Arg Val Phe Ala Met Ser Asn Trp Thr Glu Leu Asp Val Trp
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Glu Tyr Ile Met Cys Glu Lys Ile Pro Val Val Pro Leu Tyr Phe Ala
195 200 205
Lys Gln Arg Pro Ile Val Arg Arg Asn Gly Ala Thr Ile Met Ile Asp
210 215 220
Asp Lys Arg Leu Pro Leu Arg Ser Gly Glu Thr Pro Gln Met Arg Met
225 230 235 240
Ile Arg Phe Arg Thr Leu Gly Cys Tyr Pro Leu Ser Gly Ala Ile Glu
245 250 255
Ser Asp Ala Thr Thr Ile Glu Asp Ile Val Ala Glu Met Gln Thr Ala
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Thr Val Ser Glu Arg Gln Gly Arg Leu Ile Asp Ala Asp Glu Ala Ala
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Ser Met Glu Lys Lys Lys Arg Glu Gly Tyr Phe
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<213> Bradyrhizobium elkanii
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Met Leu Val Lys Ala Ile Thr Glu Ser Val Gln Ala Lys Pro Lys Asp
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Gln Leu Arg Phe Ile Thr Cys Gly Ser Val Asp Asp Gly Lys Ser Thr
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Leu Ile Gly Arg Leu Leu His Asp Ser Lys Met Ile Tyr His Asp Gln
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Met Thr Ala Leu Glu Arg Asp Ser Ala Lys His Gly Thr Thr Gly Arg
50 55 60
Glu Ile Asp Phe Ala Leu Leu Val Asp Gly Leu Glu Ala Glu Arg Glu
65 70 75 80
Gln Gly Ile Thr Ile Asp Val Ala Tyr Arg Phe Phe Ala Thr Glu Arg
85 90 95
Arg Ser Phe Met Val Ala Asp Thr Pro Gly His Glu Gln Tyr Thr Arg
100 105 110
Asn Met Ala Thr Gly Ala Ser Asn Ala Gln Leu Ala Ile Ile Leu Ile
115 120 125
Asp Ala Arg Lys Gly Val Leu Val Gln Thr Lys Arg His Ser Phe Ile
130 135 140
Cys Ser Leu Leu Gly Ile Arg His Leu Val Leu Ala Val Asn Lys Ile
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Asp Leu Val His Tyr Ser Lys Glu Ser Phe Asp Arg Ile Val Ala Asp
165 170 175
Tyr Val Ala Phe Ala Ser Asp Leu Gly Phe Glu Ser Ile Val Pro Ile
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Pro Ile Ser Ala Arg Tyr Gly Asp Asn Val Val Asp Arg Ser Gly Asn
195 200 205
Thr His Trp Tyr Asp Gly Pro Cys Leu Leu Gly Gln Leu Glu Ser Ile
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Asp Ile Arg Cys Asp Ser Ser Gly Gln Ala Phe Arg Phe Pro Val Gln
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Trp Val Asn Arg Pro Asp Leu Asp Phe Arg Gly Tyr Ala Gly Ser Val
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Ala Ser Gly Ser Ile Ser Val Gly Asp Asp Ile Val Val Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Arg Thr Thr Arg Val Arg Arg Ile Val Thr Gln Gly Gly Gly Leu
275 280 285
Ser Cys Ala Glu Ala Gly Asp Ala Ile Thr Ile Thr Ile Glu Asp Glu
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Ile Asp Ile Gly Arg Gly Asp Leu Leu Ala Arg Pro Thr Glu Arg Pro
305 310 315 320
Glu Leu Ala Asp Gln Phe Ala Ala His Leu Ile Trp Met Asp Glu Asp
325 330 335
Gln Leu Val Val Gly Arg Asn Tyr Ile Leu Arg Ile Gly Ser Gln Thr
340 345 350
Ile Ala Gly Ser Ile Thr Ala Ile Asn His Arg Ile Asp Val Asn Thr
355 360 365
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370 375 380
Cys Asn Ile Ser Thr Thr Arg Pro Ala Ala Phe Asp Pro Tyr Glu Ala
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Asn Arg Lys Thr Gly Ser Phe Ile Val Ile Asp Arg Tyr Thr Asn Arg
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Val Ala Trp Gln Pro Val Ala Val Gly Arg Lys Glu Arg Ala Asp Leu
435 440 445
Lys Asn Gln Lys Pro Cys Ile Ile Trp Phe Thr Gly Leu Ser Gly Ala
450 455 460
Gly Lys Ser Thr Ile Ala Asn Ile Val Asp Gln Lys Leu Phe Ala Met
465 470 475 480
Ser Arg His Ala Met Leu Leu Asp Gly Asp Asn Leu Arg His Gly Leu
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500 505 510
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515 520 525
Ile Cys Ser Phe Ile Ser Pro His Arg Ser Glu Arg Asp Met Val Arg
530 535 540
Ser Leu Val Ser Lys Glu Glu Phe Val Glu Val Phe Val Asp Thr Pro
545 550 555 560
Ile Glu Glu Cys Ala Arg Arg Asp Pro Lys Gly Leu Tyr Ser Lys Ala
565 570 575
Lys Ser Gly Lys Ile Lys Asn Phe Thr Gly Ile Asp Ala Ser Tyr Glu
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595 600 605
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<213> Bradyrhizobium elkanii
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195 200 205
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Ser Gln Leu Pro Phe Ser Ala Glu Thr Ala Val Leu His Ala Gly Tyr
370 375 380
Arg Arg Asp Pro Val Thr Lys Ala Val Ala Val Pro Ile Tyr Gln Asn
385 390 395 400
Thr Ala Tyr Glu Leu Asp Gly Asp Leu Asn His Ile Ala Asp Val Tyr
405 410 415
Asn Val Lys Ala Asp Gly Phe Thr Tyr Thr Arg Ile Ile Asn Pro Thr
420 425 430
Thr Arg Ala Leu Glu Lys Arg Tyr Ala Ala Val Asp Met Gly Ser Asp
435 440 445
Ser Leu Ala Val Ala Ser Gly Gln Ala Ala Thr Phe Leu Ala Ile Val
450 455 460
Asn Leu Ser Ser Gly Glu Val Gly Asp Asn Ile Val Ala Ser Pro Tyr
465 470 475 480
Leu Tyr Gly Asn Thr Trp Asn Leu Leu His Asn Thr Leu Lys Arg Leu
485 490 495
Gly Ile Ser Val Arg Thr Ala Asp Pro Arg Arg Pro Glu Thr Phe Glu
500 505 510
Arg Ala Ile Asp Asp Arg Thr Ile Cys Leu Phe Gly Glu Val Ile Ser
515 520 525
Asn Pro Cys Leu Ile Pro Leu Pro Val Lys Gln Leu Ala Glu Ile Gly
530 535 540
Arg Lys His Gly Val Pro Leu Val Val Asp Asn Thr Thr Thr Pro Leu
545 550 555 560
Val Cys Arg Pro Ser Asp Leu Gly Ala Ala Ile Thr Thr Tyr Ser Ala
565 570 575
Thr Lys Tyr Ile Cys Gly His Gly Thr Thr Leu Gly Gly Leu Ile Val
580 585 590
Asp Asn Gly Lys Phe Ser Tyr Arg Gly Ala Ser Arg Phe Pro Leu Phe
595 600 605
Asn Ser Pro Asp Glu Ala His Gly Gly Ile Ile Trp Arg Asn Ala Leu
610 615 620
Gln Asp Val Asp Asp Leu Gly Lys Ser Glu Val Leu Leu Lys Ala Arg
625 630 635 640
Met Thr Trp Leu Arg Asp Thr Gly Ala Ala Ile Ala Pro Phe Ala Ser
645 650 655
Phe Gln Leu Ile Gln Gly Leu Glu Thr Leu Pro Leu Arg Met Lys Gln
660 665 670
His Cys Ala Asn Ala Arg Ile Val Ala Asp Val Leu Lys Glu His Pro
675 680 685
Lys Val Arg Arg Val Phe Tyr Pro Gly Leu Phe Glu Gly Ala Asp Arg
690 695 700
Glu Thr Val Asp Gln Thr Leu Asn Pro Ala Tyr Gly His Gly Ala Met
705 710 715 720
Val Met Phe Glu Val Glu Asp Glu Gln Ala Gly Arg Lys Phe Ile Gln
725 730 735
Asn Val Asp Leu Met Tyr His Val Ser Asn Val Gly Asp Ala Arg Thr
740 745 750
Leu Val Thr His Pro Val Ser Thr Thr His Thr Thr Val Pro Arg Glu
755 760 765
Lys Arg Glu Ala Ala Gly Ile Phe Gly Gly Ser Ile Arg Leu Cys Val
770 775 780
Gly Ile Glu Asp Val Asp Asp Ile Val Arg Asp Leu Asp Arg Ala Leu
785 790 795 800
Ser Ala Ile
<210> 10
<211> 352
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 10
Met Asn Gln Ala Asp Ala Trp Lys Leu Arg Ser Ser Arg Tyr Glu Ala
1 5 10 15
Val Gln Phe Ser Arg Glu Ile Asn Lys Gln Leu Ser Glu Leu Arg Pro
20 25 30
Asp Asn Val Met Gly Ala Ile Tyr Ile Ala Lys Asp Tyr Ala Val Ile
35 40 45
Ala Ala Cys Thr Leu Ala Thr Leu Cys Val Ser Trp Trp Leu Tyr Pro
50 55 60
Leu Ala Val Leu Leu Ile Gly Ala Tyr Gln Arg Gly Leu Thr Thr Ile
65 70 75 80
Ala His Asp Ala Ala His Arg Thr Leu Ala Lys Asn Thr Thr Trp Asn
85 90 95
Tyr Val Leu Gly Ile Leu Phe Ala Ala Tyr Pro Leu Phe Gln Arg His
100 105 110
Trp Ala Tyr Arg Ile Ser His Val Tyr Leu His His Pro Tyr Leu Gly
115 120 125
Asp Pro Glu Lys Asp Pro Asp Leu Lys Phe Phe Met Ala Asn Gly Val
130 135 140
Tyr Asp Val Gln Pro Pro Lys Arg Tyr Ala Phe Asn Ile Ile Trp Lys
145 150 155 160
Pro Ile Phe Gly Gly Ala Thr Leu Ala Tyr Leu Lys Tyr Leu Trp Thr
165 170 175
Asn Arg Phe Ser Ile Thr Asp Ser Glu Asp Gln Ser Arg Ser Ser Ile
180 185 190
Leu Val Asp Lys Tyr Gly Phe Tyr Leu Phe Trp Ile Gly Ile Leu Ala
195 200 205
Gly Ser Tyr Ala Leu Gly Leu Leu His Ile Val Ile Leu Phe Trp Ile
210 215 220
Val Pro Tyr Leu Thr Thr Phe Gln Val Leu Gly Trp Phe Val Glu Leu
225 230 235 240
Ala Glu His Ser Pro Met Cys Glu Ser Glu Thr Lys Asn Val Tyr Leu
245 250 255
Thr Arg Asn Arg Lys Gly Asn Phe Leu Glu Arg Ala Ile Leu Gly Gln
260 265 270
Asn Leu Asp Glu Tyr His Leu Glu His His Leu Ser Pro Gly Ile Pro
275 280 285
Phe Trp Leu Leu His Lys Ala Gln Lys Ile Arg Met Gln Asp Pro Gly
290 295 300
Tyr Ala Lys Val Ala Ala Ser Trp Gly Gly Leu Phe Val Lys Gly Pro
305 310 315 320
Gln Gly Gln Pro Ser Val Ile Thr Gln Leu Lys Glu Arg Asn Arg Arg
325 330 335
Leu Tyr Glu Gln Ser Leu Ala Asp Ala His Ala Lys Gly His Val Ala
340 345 350
<210> 11
<211> 207
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 11
Met Gly Ala Leu Asp Gly Leu Val Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asn Ile
1 5 10 15
Asp Pro Ala Val Leu Lys Ala Pro Ala Ser Leu Pro Pro Ala Asp Gln
20 25 30
Gln Asp Val Asp Gly Gly Ile Arg Asp Arg Pro Arg Asp Arg Leu Ser
35 40 45
Ala Val Ala Ile Gly Ser Ala Ile Ala Leu Gly Met Pro Ile Leu Gly
50 55 60
Ile Cys Arg Gly Leu Gln Glu Leu Asn Val Tyr Phe Gly Gly Thr Leu
65 70 75 80
His Pro Ser Leu Ala Glu Trp Arg Leu Gly Ser Gly Leu Met His Ala
85 90 95
Glu Lys Pro Asp Arg Pro Arg Asp Arg Gln Tyr Asp Ala Ala His Ser
100 105 110
Val Arg Ile Ser Pro Asp Gly Ala Leu Phe Pro Ile Val Arg Ala Ile
115 120 125
Glu Ala Gln Val Asn Ser Leu His Asn Gln Gly Ile Glu Leu Leu Ala
130 135 140
Ala Ala Leu Arg Arg Glu Ala Trp Ala Pro Asp Gly Leu Val Glu Ala
145 150 155 160
Ala Ser Val Ile Gly Ala Pro Thr Leu Gln Ile Gly Val Gln Trp His
165 170 175
Pro Glu Trp His Ala Ser Thr Asp Leu Leu Ser Gln Arg Leu Phe Thr
180 185 190
Ala Phe Gly Glu Ala Cys Val Ala Tyr Tyr Gln Thr Lys Lys His
195 200 205
<210> 12
<211> 588
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 12
Met Asp Leu Gly Asn Arg Gln Arg Trp Arg Gly Val Gly Ser Ser Ile
1 5 10 15
Val Leu Arg His Arg Leu Gly Asn Arg Gly Arg Pro Ile Ala Arg Ser
20 25 30
Tyr Lys Tyr Thr Arg Gln Ala Ala Ile Arg Pro Arg Ile Phe Gly Ser
35 40 45
Thr Gly Val Gly Ala Ser Phe Leu Arg Asn Asp Pro Phe Ala Ala Gly
50 55 60
Thr Gly Arg Pro Phe Leu His Arg Ala Arg Asp Leu Ala Thr Leu Ala
65 70 75 80
Cys Asp Arg Asn Asp Trp Ala Ile His Asp His Arg Ser Ile Ala Leu
85 90 95
Val Pro Gly Gly Tyr Ser Pro Arg Arg Ala Leu His Gly Gln His Gly
100 105 110
Pro Val His Arg Ser Cys His His Val Ser Val Pro Val Leu Arg Phe
115 120 125
Ser Tyr Arg Ala Phe Ala Ala Tyr Val Arg Trp Lys Cys Ser His His
130 135 140
Gly Cys Cys Arg Arg Gln Arg Leu Phe Ala Val Pro Glu Val Arg Met
145 150 155 160
Asn Glu Arg Asn Cys Val Ile Val Asp Ala Tyr Ser Thr Gly Arg Phe
165 170 175
Leu Pro Glu Glu Phe Lys Arg Tyr Gly Ile Ser Thr Val His Val Met
180 185 190
Ser Ala Ala Gln Ile Pro Ser Ile Phe Gln Ser His Phe Asn Ala Asn
195 200 205
Leu Tyr Asp Glu Val Ile Arg Pro Pro Glu Arg Met Gly Tyr Asp Glu
210 215 220
Ile Val Glu Tyr His Leu Arg Ala Leu Gln Gly Arg Glu Leu Glu Phe
225 230 235 240
Val Ile Ala Gly Cys Glu Thr Gly Val Glu Leu Ala Asp Ser Ile Ser
245 250 255
Glu Arg Leu Gly Leu Pro Ser Asn Gly Thr Ala Leu Ser Ala Ala Arg
260 265 270
Arg Asp Lys Ser Arg Leu Ser Glu Ala Leu Ala Ser Ala Gly Val Arg
275 280 285
Ser Ile Arg Gln Val Val Ser Asp Asn Ala Glu Val Ile Ala Arg Trp
290 295 300
Lys Arg Gln Glu Thr Phe Asp Glu Leu Val Ile Lys Pro Leu Asn Ser
305 310 315 320
Thr Gly Thr Glu Asp Val Phe Phe Cys Ser Thr Asp Ala Asp Ile Gln
325 330 335
Arg Ala Val Thr Ala Ile Val Gly Lys Thr Asn Arg Val Gly Thr Leu
340 345 350
Asn Gln Leu Ala Leu Gly Gln Glu Lys Ile Asn Gly Gln Gln Tyr Thr
355 360 365
Val Asn Ala Val Ser Ile Asp Gly Glu Thr Phe Val Thr Glu Ala Trp
370 375 380
Thr Tyr Asp Thr Val Pro Ile Glu Gly Ala Ser Ser Val Cys Ser Leu
385 390 395 400
Glu Arg Leu Leu Gly Gly Lys Glu Pro Ile Val Leu Glu Leu Ser Asp
405 410 415
Tyr Leu Glu Arg Ala Leu Arg Ala Leu Arg Ile Thr Asp Gly Pro Ala
420 425 430
His Ala Glu Ile Ile Val Asp Asp Arg Gly Pro Val Leu Val Asp Phe
435 440 445
Gly Ala Arg Leu Gln Gly Thr Met Ser Ala Lys Ala Arg Thr Met Ala
450 455 460
Leu Gly His Asn His Leu Thr Leu Thr Ala Trp Arg Tyr Ala Asp Pro
465 470 475 480
Lys Gly Phe Ala Gly Tyr Met Arg Arg Arg Gly Val Tyr Lys Arg Gln
485 490 495
Ala His Ala Leu Cys Val Ser Leu Ile Ser Asp Met Gly Gly Val Val
500 505 510
Ala Gly Tyr Pro Gly Leu Asp Ala Ile Gly Lys Leu Pro Ser Phe Ala
515 520 525
Asp Ala Ile Ala Phe Val Pro Ile Gly Gln Asn Leu Val Pro Thr Ile
530 535 540
Asp Leu Ala Ser Thr Pro Gly Ile Val Tyr Leu Val Asn Asn Asp Leu
545 550 555 560
Ile Gln Leu Glu Glu Asp Tyr Arg Gln Leu Arg Ala Met Arg Met Asp
565 570 575
Gln Val Phe Asp Leu Val Pro Gln Glu Ala Asn Gln
580 585
<210> 13
<211> 444
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 13
Met Thr Gly Ile Cys Asp Ser Cys Thr Asn Ser Ala Ala Ala Ala Met
1 5 10 15
Ile Gly Val Ser Asp Phe Asp Gly Ile Leu Arg Gly Lys His Val Leu
20 25 30
Gly Glu Asp Leu Ser Val Gly Asn Lys Val Ile Lys Phe Ser Glu Ala
35 40 45
Val Leu Ala Trp Asp Cys Ser Asp Arg Val Ile Pro Ala Gly Phe Thr
50 55 60
Gln Glu Pro Gln Ser Val Phe Gly Asp Ala Asp Leu Arg Val Leu Ser
65 70 75 80
Gly Thr Gly Arg Ser Val Ser Tyr Ala Gly Asp Gln Tyr Leu Tyr Leu
85 90 95
Ala Glu Phe Ala Gly Ala His Glu Ser Val Cys Pro Arg Gly Ile Leu
100 105 110
Arg Lys Val Leu Gln Arg Val Ala Asp Arg Gly Tyr Ser Cys Ser Ala
115 120 125
Gly Phe Glu Phe Glu Phe Met Leu Phe Lys Glu Asn Ala Asp Ile Ile
130 135 140
Glu Asp Lys Pro Phe Gly Gln Trp Ala Pro Leu Thr Arg Gly Pro Phe
145 150 155 160
Gly Tyr Ser Ile Ala Arg Ser Val Ala His Arg Glu Leu Phe Gly Glu
165 170 175
Ile Leu Ala Leu Cys Glu Lys Ser Arg Ile Pro Leu Ser Gly Leu His
180 185 190
Phe Glu Thr Gly Pro Gly Val Ile Glu Ala Ser Leu Arg His Cys Asp
195 200 205
Ala Leu Glu Ala Ala Asp Arg Ala Ile Ile Phe Lys Ser Met Ile Lys
210 215 220
Ala Trp Ala Gln Thr Arg Gly Met Met Ala Thr Phe Met Ala Lys Val
225 230 235 240
Ser Glu Asn Trp Pro Gly Gln Ser Gly His Ile His Val Ser Met Ser
245 250 255
Ala Asp Gly Gln Asn Val Phe Tyr Asp Ser Glu Ala Phe Arg Asn Val
260 265 270
Ser Lys Leu Met Arg Gln Phe Ile Gly Gly Gln Leu Lys Tyr Met Asn
275 280 285
Asp Phe Cys Val Leu Ala Val Pro Asn Phe Asn Ser Tyr Lys Arg Leu
290 295 300
Val Pro Gly Cys Trp Ala Pro Ile Tyr Pro Ser Trp Gly Ile Asp Asn
305 310 315 320
Arg Ser Cys Ala Val Arg Val Ile Pro Gly Asp Pro Ser Ala His Arg
325 330 335
Leu Glu Tyr Arg Leu Pro Gly Ala Asp Leu Asn Pro Tyr Leu Ala Leu
340 345 350
Ala Cys Ala Ile Gly Ser Gly Ile Leu Gly Ile Glu Thr Asn Ala Ala
355 360 365
Leu Pro Ala Ser Ile Val Gly Asp Ala Ser Ala Glu Ala Cys Leu Pro
370 375 380
Ser Gly Arg Leu Pro Gln Ser Leu Ala Glu Ala Thr Tyr Arg Phe Ala
385 390 395 400
Gln Ser Pro Ala Ala Asn Asp Val Phe Gly Glu Arg Phe Val Glu Ala
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Arg Arg Trp Glu Trp Glu Ala Val Gln His Arg Val
420 425 430
Thr Asp Phe Glu Arg Arg Arg Tyr Phe Glu Ile Ile
435 440
<210> 14
<211> 516
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 14
Met Gln Val Val Leu Pro Pro Arg Gly Ile Thr Arg Val Pro Gly Arg
1 5 10 15
His Ile Thr Asp His Gln Met Arg Leu Tyr Met Lys Tyr Arg Gln Thr
20 25 30
Asp Ser Pro Pro Val Ala Ala Ala Lys Ala Ser Phe Ser Thr Ser Thr
35 40 45
Ala Tyr Arg Ile Glu Gln Asp Arg Arg Leu Pro Ser Gln Lys Lys Ala
50 55 60
Pro Arg Gly Arg Arg Arg Pro Asp Pro Leu Ala Arg Val Phe Glu Thr
65 70 75 80
Glu Ile Val Pro Met Leu Lys Ala Ala Pro Gly Val Arg Pro Val Thr
85 90 95
Ile Phe Glu Glu Leu Leu Arg Arg His Pro Glu Leu Gly Ala Gly Ile
100 105 110
Arg Arg Thr Leu Glu Arg Arg Ile Arg Ala Trp Arg Ala Ile His Gly
115 120 125
Glu Glu Gln Glu Val Ile Phe Arg Gln Thr His Glu Pro Gly Gln Arg
130 135 140
Gly Leu Ser Asp Phe Thr Asp Met Gly Glu Leu Gly Val Thr Ile Ala
145 150 155 160
Gly Val Pro Leu Asp His Arg Leu Tyr His Phe Arg Leu Ala Tyr Ser
165 170 175
Gly Phe Glu His Ala His Val Val Leu Gly Gly Glu Ser Phe Ile Ala
180 185 190
Leu Ala Glu Gly Leu Gln Asn Ala Leu Trp Ser Leu Gly Gly Ala Pro
195 200 205
Arg Glu His Arg Thr Asp Ser Leu Ser Ala Ala Phe Cys Asn Leu Asp
210 215 220
Arg Asp Ala Lys Asp Asp Leu Thr Arg Arg Tyr Glu Asp Leu Cys Ala
225 230 235 240
His Tyr Gly Met Arg Pro Ser Arg Asn Asn Arg Gly Ile Ala His Glu
245 250 255
Asn Gly Ala Ile Glu Ser Ser His Gly His Leu Lys Arg Ala Val Gly
260 265 270
Asp Ala Leu Leu Leu Arg Gly Thr Ala Asp Phe Asp Asp Leu Ala Ala
275 280 285
Tyr Arg Gly Phe Ile Asp Glu Ile Val Ser Arg Arg Asn Ala Arg Asn
290 295 300
Ala Lys Arg Ile Asp Ser Glu Arg Thr Ala Leu Gln Asp Leu Pro Asp
305 310 315 320
Arg Arg Thr Ser Asp Tyr Glu Glu Val Ile Val His Val Thr Ser Ser
325 330 335
Gly Gly Phe Thr Leu Arg Lys Val Phe Tyr Thr Val Pro Ser Arg Leu
340 345 350
Ile Gly His Arg Leu Arg Val Arg Leu Tyr Asp Asp His Leu Asp Val
355 360 365
Phe Val Gly Gly Thr His Leu Leu Thr Leu Pro Arg Gly Arg Pro His
370 375 380
Pro Asn Gly Lys His Asp Gln Val Val Asp Tyr Arg His Val Ile His
385 390 395 400
Ser Leu Arg Arg Lys Pro Met Ala Leu Leu Asn Leu Val Tyr Arg Asp
405 410 415
Gln Leu Phe Pro Arg Glu Ala Tyr Arg Arg Ala Phe Asp Val Leu Arg
420 425 430
Lys Arg Leu Pro Asp Lys Lys Ala Cys Arg Ile Met Val Asp Leu Leu
435 440 445
Ala Leu Ala His Glu Arg Gly Cys Glu Ala Glu Leu Ala Asp Gln Leu
450 455 460
Thr Ala Asp Leu Asn Asp Gly Arg Leu Pro Asp Leu Asn Arg Leu Arg
465 470 475 480
Thr His Phe Ala Pro Asp Pro Ala Gln Met Pro Asn Val Val Val Arg
485 490 495
Leu Ala Pro Leu Ala Thr Tyr Glu Cys Leu Ile Gly Thr Ala Glu Ile
500 505 510
Gly Gly Ala Ala
515
<210> 15
<211> 281
<212> PRT
<213> Bradyrhizobium elkanii
<400> 15
Met Pro His Arg Tyr Cys Arg Asp Arg Arg Cys Arg Met Ser Thr Thr
1 5 10 15
Asn Val Val Asp Thr Ala Arg Leu Asn Leu Leu Leu Asn Glu Leu Arg
20 25 30
Leu Pro Ala Ile Lys Val Leu Trp Pro Gln Phe Ala Glu Gln Ser Asp
35 40 45
Lys Glu Gly Trp Pro Ala Ala Arg Phe Leu Ala Thr Ile Ala Glu His
50 55 60
Glu Ile Ala Glu Arg Ser Arg Arg Arg Ile Glu Arg His Leu Val Glu
65 70 75 80
Ala Arg Leu Pro Thr Gly Lys Thr Phe Asp Ser Phe Asp Phe Glu Ala
85 90 95
Val Pro Met Ile Ser Lys Ala Gln Met Thr Ala Leu Ala Ala Gly Asp
100 105 110
Gly Trp Leu Asn Lys Gly Ala Asn Leu Leu Leu Phe Gly Pro Pro Gly
115 120 125
Gly Gly Lys Ser His Leu Ala Ala Ala Ile Gly Leu Ala Leu Ile Glu
130 135 140
Asn Gly Trp Arg Val Leu Phe Thr Arg Thr Thr Asp Leu Val Gln Lys
145 150 155 160
Leu Gln Val Ala Arg Arg Glu Leu Asn Leu Glu Gly Ala Ile Asn Arg
165 170 175
Leu Asp Arg Phe Asp Leu Val Ile Leu Asp Asp Leu Ala Tyr Val Thr
180 185 190
Lys Asp Gln Ala Glu Thr Ser Val Leu Phe Glu Leu Ile Ser Ala Arg
195 200 205
Tyr Glu Arg Arg Ser Leu Leu Ile Thr Ala Asn Gln Pro Phe Gly Glu
210 215 220
Trp Asn Lys Val Phe Pro Asp Pro Ala Met Thr Leu Ala Ala Ile Asp
225 230 235 240
Arg Leu Val His His Ala Thr Ile Val Glu Met Asn Val Glu Ser Tyr
245 250 255
Arg Arg Arg Thr Ala Leu Glu Arg Lys Arg Gly Pro Gly Arg Pro Pro
260 265 270
Glu His Ala Thr Gln Lys Thr Leu Ala
275 280
【図１】ｒｔｘＡのフランキング領域の物理的地図。
Ａ：Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のゲノム・ライブ
ラリーからのｒｔｘＡ遺伝子を含む７つの独立したオー
バーラップしたｐＬＡＦＲ１コスミド。Ｂ：得られた配
列の２８，４０１ｂｐにおいて、ｆｉｘＧＨＩＳ、ｎｏ
ｅＥ、ｎｏｄＰＱ、ｒｔｘＡ、および６つのオープン・
リーディング・フレーム（ＯＲＦ群）が見出された。制
限部位は以下で示される；Ａ、ＡｐａＩ；Ｂ、ＢａｍＨ
Ｉ；Ｅ、ＥｃｏＲＩ；Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ；Ｐ、Ｐｓｔ
Ｉ。Ｃ：コロニーおよびサザン・ハイブリダイゼーショ
ンに使用したプローブ。
Ａ：Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４のゲノム・ライブ
ラリーからのｒｔｘＡ遺伝子を含む７つの独立したオー
バーラップしたｐＬＡＦＲ１コスミド。Ｂ：得られた配
列の２８，４０１ｂｐにおいて、ｆｉｘＧＨＩＳ、ｎｏ
ｅＥ、ｎｏｄＰＱ、ｒｔｘＡ、および６つのオープン・
リーディング・フレーム（ＯＲＦ群）が見出された。制
限部位は以下で示される；Ａ、ＡｐａＩ；Ｂ、ＢａｍＨ
Ｉ；Ｅ、ＥｃｏＲＩ；Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ；Ｐ、Ｐｓｔ
Ｉ。Ｃ：コロニーおよびサザン・ハイブリダイゼーショ
ンに使用したプローブ。
【図２】ｒｔｘＣのアミノ酸配列および種々のデサチュ
ラーゼのアミノ酸配列の整理。ＰｓＤＥＳ、Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅデサチュラーゼ（Ｕ２
７３１０）；ＡｔＤＥＳ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔ
ｈａｌｉａｎａデサチュラーゼ（Ａ１０２２１９８）；
ＥｇＤＥＳ、Ｅｕｇｌｅｎａ ｇｒａｃｉｌｉｓΔ−８
脂肪酸デサチュラーゼ（ＡＦ１３９７２０）；ＣｒＤＥ
Ｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔ
ｉｉデサチュラーゼ（ＡＢ００７６４０）。膜結合デサ
チュラーゼに保存されているものの間で、ｒｔｘＣの銅
結合印（●）および８つのヒスチジン残基（★）は、い
くつかの起源からの脂肪酸デサチュラーゼのそれらと高
度に相同性があった。推定の膜をつなぐ領域は、ヒドロ
パシー分析により推定し、星印（＊）で示した。
ラーゼのアミノ酸配列の整理。ＰｓＤＥＳ、Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅデサチュラーゼ（Ｕ２
７３１０）；ＡｔＤＥＳ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔ
ｈａｌｉａｎａデサチュラーゼ（Ａ１０２２１９８）；
ＥｇＤＥＳ、Ｅｕｇｌｅｎａ ｇｒａｃｉｌｉｓΔ−８
脂肪酸デサチュラーゼ（ＡＦ１３９７２０）；ＣｒＤＥ
Ｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔ
ｉｉデサチュラーゼ（ＡＢ００７６４０）。膜結合デサ
チュラーゼに保存されているものの間で、ｒｔｘＣの銅
結合印（●）および８つのヒスチジン残基（★）は、い
くつかの起源からの脂肪酸デサチュラーゼのそれらと高
度に相同性があった。推定の膜をつなぐ領域は、ヒドロ
パシー分析により推定し、星印（＊）で示した。
【図３】カナマイシンカセットの挿入により創製したｐ
ＲＴＦ１コスミド誘導体と補完したＢｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：
Ω１の、セリノール、ジヒドロリゾビトキシンおよびリ
ゾビトキシン産生。Ａ：Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４の９．８−ｋｂ領域（ｎｏｄＱＰ、ｒｔｘＡ、ｒｔｘ
Ｃ、ＯＲＦ２、および端を切り取ったＯＲＦ３）を欠失
する大欠損変異株ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１。Δ
は、ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１の９．８−ｋｂ欠失
ＳａｃＩＩ断片を示す。Ｂ：カナマイシン・カセットの
挿入点をｐＲＴＦ１上の矢じりで示す。ｒｔｘＡ遺伝子
のＮ−ドメインおよびＣ−ドメインは、推定アミノ酸配
列が、それぞれアミノ・トランスフェラーゼおよびＯ−
アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼに相同である領
域を示す（テキスト参照）。Ｐは推定プロモーター（配
列による）である。セリノール、ジヒドロリゾビトキシ
ンおよびリゾビトキシン産生濃度は以下のように表す：
ＮＤ、検出されず。セリノールについては、+、++、お
よび+++は、それぞれ、０から５０、５０から１００、
および＞10μＭ、を示す。ジヒドロリゾビトキシンにつ
いては、+、++、+++、および++++は、それぞれ、０から
２、２から５、５から１０、および＞10μＭ、を示す。
リゾビトキシンについては、+、++、+++、および++++
は、それぞれ、０から０．５、０．５から１．０、１．
０から１０、および＞10μＭ、を示す。
ＲＴＦ１コスミド誘導体と補完したＢｒａｄｙｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：
Ω１の、セリノール、ジヒドロリゾビトキシンおよびリ
ゾビトキシン産生。Ａ：Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４の９．８−ｋｂ領域（ｎｏｄＱＰ、ｒｔｘＡ、ｒｔｘ
Ｃ、ＯＲＦ２、および端を切り取ったＯＲＦ３）を欠失
する大欠損変異株ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１。Δ
は、ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１の９．８−ｋｂ欠失
ＳａｃＩＩ断片を示す。Ｂ：カナマイシン・カセットの
挿入点をｐＲＴＦ１上の矢じりで示す。ｒｔｘＡ遺伝子
のＮ−ドメインおよびＣ−ドメインは、推定アミノ酸配
列が、それぞれアミノ・トランスフェラーゼおよびＯ−
アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼに相同である領
域を示す（テキスト参照）。Ｐは推定プロモーター（配
列による）である。セリノール、ジヒドロリゾビトキシ
ンおよびリゾビトキシン産生濃度は以下のように表す：
ＮＤ、検出されず。セリノールについては、+、++、お
よび+++は、それぞれ、０から５０、５０から１００、
および＞10μＭ、を示す。ジヒドロリゾビトキシンにつ
いては、+、++、+++、および++++は、それぞれ、０から
２、２から５、５から１０、および＞10μＭ、を示す。
リゾビトキシンについては、+、++、+++、および++++
は、それぞれ、０から０．５、０．５から１．０、１．
０から１０、および＞10μＭ、を示す。
【図４】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４（野生型）、
ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１、およびＵＳＤＡ９４Δ
ｒｔｘ：：Ω１（ｐＲＴＦ１−Ｆ１）の培養物の液体ク
ロマトグラフィ／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）クロマトグラ
ム。Ａ：セリノールのフェニルイソチオシアネート（Ｐ
ＩＴＣ）誘導体は、ｍ／ｚ＝２２７に検出され、保持時
間３．８分で溶出された。Ｂ：ＰＩＴＣ−ジヒドロリゾ
ビトキシンは、ｍ／ｚ＝４６３に検出され、保持時間１
０．４分で溶出された。Ｃ：ＰＩＴＣ−リゾビトキシン
は、ｍ／ｚ＝４６１に検出され、保持時間１０．４分で
溶出された。大欠損変異株ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω
１は、セリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリ
ゾビトキシン産生を停止した。しかし、これらの化合物
は、ｐＲＴＦ１−Ｆ１を変異体に導入後、再び産生され
た。
ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω１、およびＵＳＤＡ９４Δ
ｒｔｘ：：Ω１（ｐＲＴＦ１−Ｆ１）の培養物の液体ク
ロマトグラフィ／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）クロマトグラ
ム。Ａ：セリノールのフェニルイソチオシアネート（Ｐ
ＩＴＣ）誘導体は、ｍ／ｚ＝２２７に検出され、保持時
間３．８分で溶出された。Ｂ：ＰＩＴＣ−ジヒドロリゾ
ビトキシンは、ｍ／ｚ＝４６３に検出され、保持時間１
０．４分で溶出された。Ｃ：ＰＩＴＣ−リゾビトキシン
は、ｍ／ｚ＝４６１に検出され、保持時間１０．４分で
溶出された。大欠損変異株ＵＳＤＡ９４Δｒｔｘ：：Ω
１は、セリノール、ジヒドロリゾビトキシン、およびリ
ゾビトキシン産生を停止した。しかし、これらの化合物
は、ｐＲＴＦ１−Ｆ１を変異体に導入後、再び産生され
た。
【図５】Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｌｋａｎｉ
ｉＵＳＤＡ９４におけるジヒドロリゾビトキシン産生に
対するホモセリン、Ｏ−アセチルホモセリンおよび含硫
アミノ酸の効果。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉ細胞を、ホモセリ
ン、Ｏ−アセチルホモセリンおよび含硫アミノ酸を含有
する２０ｍＭリン酸カリバッファー（ｐＨ６．８）で、
３０℃、１時間、暗所にてインキュベートした。値は、
２回の実験の平均で示す。
ｉＵＳＤＡ９４におけるジヒドロリゾビトキシン産生に
対するホモセリン、Ｏ−アセチルホモセリンおよび含硫
アミノ酸の効果。Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉ細胞を、ホモセリ
ン、Ｏ−アセチルホモセリンおよび含硫アミノ酸を含有
する２０ｍＭリン酸カリバッファー（ｐＨ６．８）で、
３０℃、１時間、暗所にてインキュベートした。値は、
２回の実験の平均で示す。
【図６】Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９４およびＢ．ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘ遺伝子領域の
比較。Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０（８，６４１ｂｐ）のｒｔｘ遺伝子
領域のヌクレオチド配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤ
Ａ９４のそれと７９％相同である。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘＣ、ＯＲＦ２、およびＯＲ
Ｆ４のアミノ酸配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４のそれらと、それぞれ、９６％、８７％、および８９
％同一性を示す。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１
０のｒｔｘＡおよびＯＲＦ３領域は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉ
ｉＵＳＤＡ９４のそれらと比較して、中断され、断片化
されている。数字は、遺伝子および遺伝子間領域の長さ
（ｂｐ）を示す。
ａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘ遺伝子領域の
比較。Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０（８，６４１ｂｐ）のｒｔｘ遺伝子
領域のヌクレオチド配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤ
Ａ９４のそれと７９％相同である。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍＵＳＤＡ１１０のｒｔｘＣ、ＯＲＦ２、およびＯＲ
Ｆ４のアミノ酸配列は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉｉＵＳＤＡ９
４のそれらと、それぞれ、９６％、８７％、および８９
％同一性を示す。Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍＵＳＤＡ１１
０のｒｔｘＡおよびＯＲＦ３領域は、Ｂ．ｅｌｋａｎｉ
ｉＵＳＤＡ９４のそれらと比較して、中断され、断片化
されている。数字は、遺伝子および遺伝子間領域の長さ
（ｂｐ）を示す。
【図７】提案された、リゾビトキシンの生合成経路、お
よび関連する代謝。
よび関連する代謝。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｃ１２Ｐ 13/04
Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:01
//(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｎ 9/02
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｎ 9/10
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｎ 9/16
Ｃ１２Ｒ 1:01）
(Ｃ１２Ｐ 13/04
Ｃ１２Ｒ 1:01）
Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD08 CA06 CA17
CA19 CB03
4B024 AA08 BA08 BA10 BA11 CA04
DA05 EA06 FA02 GA11
4B050 CC03 DD02 LL05 LL10
4B064 AE03 CA02 CA19 CC24 DA11
4B065 AA01Y AA11X AB01 BA02
CA17 CA28 CA29 CA31 CA47
CA53
Claims (33)
- 【請求項１】 ジヒドロリゾビトキシンからリゾビトキ
シンの生合成反応を触媒する酵素ジヒドロリゾビトキシ
ンデサチュラーゼをコードするｒｔｘＣ遺伝子。 - 【請求項２】 ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)
由来であることを特徴とする、請求項１記載のｒｔｘ
Ｃ遺伝子。 - 【請求項３】 ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)
ＵＳＤＡ９４株由来であることを特徴とする、請求項
２記載の遺伝子ｒｔｘＣ。 - 【請求項４】 以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質を
コードする遺伝子：（ａ）配列番号１０に示されるアミ
ノ酸配列、（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
ノ酸配列からなり、酵素ジヒドロリゾビトキシンデサチ
ュラーゼ活性を有するタンパク質。 - 【請求項５】 以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む
遺伝子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列において
第15737〜16795番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）塩
基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件
下でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロリゾビトキ
シンデサチュラーゼ活性を有するタンパク質をコードす
るＤＮＡ。 - 【請求項６】 ダイズ根粒菌(Bradyrhizobium elkanii)
ＵＳＤＡ９４株由来の、ジヒドロキシアセトンホスフ
ェートからセリノールへの生合成反応を触媒する酵素ジ
ヒドロキシアセトン燐酸アミノトランスフェラーゼ、及
び/又はセリノールとＯ−アセチルホモセリンとからジ
ヒドロリゾビトキシンへの生合成反応を触媒する酵素ジ
ヒドロリゾビトキシン・シンターゼをコードするｒｔｘ
Ａ遺伝子。 - 【請求項７】 以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質を
コードする遺伝子：（ａ）配列番号９に示されるアミノ
酸配列、（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、酵素ジヒドロキシアセトン燐酸アミノ
トランフェラーゼ及び/又は酵素ジヒドロリゾビトキシ
ン・シンターゼ活性を有するタンパク質。 - 【請求項８】 以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡを含む
遺伝子：（ａ）配列番号１に示される塩基配列において
第13294〜15705 番目の塩基対からなるＤＮＡ、（ｂ）
塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条
件下でハイブリダイズし、且つ、酵素ジヒドロキシアセ
トン燐酸アミノトランフェラーゼ及び/又は酵素ジヒド
ロリゾビトキシン・シンターゼ活性を有するタンパク質
をコードするＤＮＡ。 - 【請求項９】 請求項１ないし請求項５のいずれか一項
に記載の遺伝子、及び請求項６ないし請求項８のいずれ
か一項に記載の遺伝子を含むオペロン。 - 【請求項１０】 更に、配列番号１１ないし配列番号１
５で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコード
する遺伝子、及び、該アミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり配列番号１１ないし配列番号１５で示さ
れるアミノ酸配列からなるタンパク質と実質的に同等の
活性を有するタンパク質をコードする遺伝子から成る群
から選択される、少なくとも一つの遺伝子を含む、請求
項９記載のオペロン。 - 【請求項１１】 更に、ｒｔｘＡ遺伝子の０．５ｋｂ上
流に転写因子σ７０に対する結合ドメインであるプロモ
ーター配列を含む、請求項９又は１０記載のオペロン。 - 【請求項１２】 プロモーター配列が（５’−ＴＴＧＡ
ＡＡ−ｃｇｃａｃｃｔａａｃｇｔｃａａｇｔｔｇ−ＴＡ
ＣＧＡＴ−３’）である、請求項１１記載のオペロン。 - 【請求項１３】 請求項１ないし８に記載された遺伝子
の少なくとも一つの遺伝子を含有する組換え発現ビーク
ル。 - 【請求項１４】 コスミドベクターである請求項１３に
記載の組換え発現ビークル。 - 【請求項１５】 請求項１３又は１４に記載の発現ビー
クルによって形質転換された細菌から成る形質転換体。 - 【請求項１６】 細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium
elkanii)である請求項１５に記載の形質転換体。 - 【請求項１７】 請求項９ないし１２のいずれか一項に
記載のオペロンを含有する組換え発現ビークル。 - 【請求項１８】 コスミドベクターである請求項１７に
記載の組換え発現ビークル。 - 【請求項１９】 請求項１７又は１８に記載の発現ビー
クルによって形質転換された細菌から成る形質転換体。 - 【請求項２０】 細菌がダイズ根粒菌(Bradyrhizobium
elkanii)である請求項１９に記載の形質転換体。 - 【請求項２１】 請求項１５，１６，１９又は２０に記
載の形質転換体を培養することから成る、リゾビトキシ
ンの製造方法。 - 【請求項２２】 請求項１ないし８に記載された遺伝子
の少なくとも一つで細菌を形質転換することから成る、
該細菌のリゾビトキシン生産能を付与又は増強する方
法。 - 【請求項２３】 請求項９ないし１２のいずれか一項に
記載のオペロンで細菌を形質転換することから成る、該
細菌のリゾビトキシン生産能を付与又は増強する方法。 - 【請求項２４】細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科
植物である、請求項２２又は２３記載の方法。 - 【請求項２５】 請求項１ないし８に記載された遺伝子
の少なくとも一つで細菌を形質転換することから成る、
該細菌の宿主植物におけるエチレン生合成阻害能を付与
又は増強する方法。 - 【請求項２６】 請求項９ないし１２のいずれか一項に
記載のオペロンで細菌を形質転換することから成る、該
細菌の宿主植物におけるエチレン生合成阻害能を付与又
は増強する方法。 - 【請求項２７】細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科
植物である、請求項２５又は２６記載の方法。 - 【請求項２８】 請求項１ないし８に記載された遺伝子
の少なくとも一つで細菌を形質転換することから成る、
該細菌の宿主植物への感染を促進させる方法。 - 【請求項２９】 請求項９ないし１２のいずれか一項に
記載のオペロンで細菌を形質転換することから成る、該
細菌の宿主植物への感染を促進させる方法。 - 【請求項３０】細菌が根粒菌であり、宿主植物がマメ科
植物である、請求項２８又は２９記載の方法。 - 【請求項３１】 請求項１ないし８に記載された遺伝子
の少なくとも一つで細菌を形質転換することから成る、
該細菌の宿主植物への遺伝子導入効率を増加させる方
法。 - 【請求項３２】 請求項９ないし１２のいずれか一項に
記載のオペロンで細菌を形質転換することから成る、該
細菌の宿主植物への遺伝子導入効率を増加させる方法。 - 【請求項３３】細菌がAgrobcterium tumefaciensであ
る、請求項３１又は３２記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001294434A JP2003093069A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | リゾビトキシン生産遺伝子ｒｔｘＣ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001294434A JP2003093069A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | リゾビトキシン生産遺伝子ｒｔｘＣ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003093069A true JP2003093069A (ja) | 2003-04-02 |
Family
ID=19116043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001294434A Pending JP2003093069A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | リゾビトキシン生産遺伝子ｒｔｘＣ |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003093069A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015533080A (ja) * | 2012-09-14 | 2015-11-19 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ | グリセロール代謝欠失大腸菌株におけるセリノール生産 |
| KR101729123B1 (ko) | 2011-03-31 | 2017-05-02 | 노보자임스 바이오로지컬스 인코포레이티드 | 경쟁적이고 효과적인 브라디리조븀 자포니쿰 균주 |
| CN110734999A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-31 | 北京市农林科学院 | 大白菜抗根肿病新基因CRw紧密连锁的SNP分子标记及应用 |
| CN114478728A (zh) * | 2020-11-13 | 2022-05-13 | 中国科学院微生物研究所 | nKCBP蛋白在调控豆科植物固氮能力中的应用 |
| CN114806999A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-07-29 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种基因工程菌及其在制备二氢大豆苷元中的应用 |
-
2001
- 2001-09-26 JP JP2001294434A patent/JP2003093069A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101729123B1 (ko) | 2011-03-31 | 2017-05-02 | 노보자임스 바이오로지컬스 인코포레이티드 | 경쟁적이고 효과적인 브라디리조븀 자포니쿰 균주 |
| KR20170048600A (ko) * | 2011-03-31 | 2017-05-08 | 노보자임스 바이오로지컬스 인코포레이티드 | 경쟁적이고 효과적인 브라디리조븀 자포니쿰 균주 |
| KR101869299B1 (ko) * | 2011-03-31 | 2018-07-20 | 노보자임스 바이오로지컬스 인코포레이티드 | 경쟁적이고 효과적인 브라디리조븀 자포니쿰 균주 |
| JP2015533080A (ja) * | 2012-09-14 | 2015-11-19 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ | グリセロール代謝欠失大腸菌株におけるセリノール生産 |
| CN110734999A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-31 | 北京市农林科学院 | 大白菜抗根肿病新基因CRw紧密连锁的SNP分子标记及应用 |
| CN110734999B (zh) * | 2019-11-12 | 2020-06-16 | 北京市农林科学院 | 大白菜抗根肿病新基因CRw紧密连锁的SNP分子标记及应用 |
| CN114478728A (zh) * | 2020-11-13 | 2022-05-13 | 中国科学院微生物研究所 | nKCBP蛋白在调控豆科植物固氮能力中的应用 |
| CN114806999A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-07-29 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种基因工程菌及其在制备二氢大豆苷元中的应用 |
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