JP2002535615A - 一体化した試薬/血液分離層を備えた使い捨て試験用細片 - Google Patents
一体化した試薬/血液分離層を備えた使い捨て試験用細片Info
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Abstract
Description
い捨て試験用細片(test strip)およびこのような細片の製造方法および製造用
組成物に関する。 グルコースモニタリングは、糖尿病の人々の毎日の日常的仕事であり、このよ
うなモニタリングの精度は、生と死との間の差を実際的に意味することができる
。グルコースレベルの頻繁なモニタリングの必要性に通常の生活スタイルを順応
させるために、現在、多くのグルコースメーターを利用することができ、これに
より個人が少量の血液中のグルコースレベルを試験することが可能にされている
。
いる酵素、例えばグルコースオキシダーゼを用いる血液中のグルコースの酸化に
より、血液試料中のグルコースを電気化学的に検出するものである。この形式の
デバイスの例は、欧州特許No.0127958および米国特許No.5,141,868、同No.5,286
,362、同No.5,288,636および同No.5,437,999に記載されており、これらの記載を
このような組み入れを許可するこれらの国々の目的にかかわり引用して、ここに
組み入れる。
この基体の表面上に形成された作用電極および対照電極、およびメーターを包含
する。作用電極は、グルコースを酸化することができる酵素およびグルコースが
存在する場合、酵素から電極に電子を輸送し測定可能な電流を生成するメディエ
ーター化合物で被覆されている。代表的メディエーター化合物は、フェリシアニ
ド、メタロセン化合物、例えばフェロセン、キノン類、フェナジニウム塩、レド
ックス指示薬DCPIPおよびイミダゾール置換オスミウム化合物を包含する。
ーボン、グルコースオキシダーゼおよびメディエーターの混合物を、ペースト状
またはインキ状に調製し、次いで基体に適用する。EP 0127958およびUS5,286,36
2。使い捨てグルコース細片の場合、小型の薄い試験用細片に適する薄膜を得る
ために、この適用はスクリーン印刷によって行われる。しかしながら、スクリー
ン印刷の使用は、電極動作に問題をもたらす。
ーボンペーストまたはインキから形成されているスクリーン印刷された電極は、
試料との接触に際して、破壊されることが証明された。この破壊の結果は、2重
である。第一に、電極組成物の成分が溶液中に放出される。これらの成分が、そ
の下に存在する電極層から拡散距離よりも離れて一度移動すると、これらの成分
はもはや測定に寄与することができず、むしろ実際には、内部に向って拡散する
アナライトの枯渇による応答を減少させる。第二に、スクリーン印刷された電極
の破壊は、有効電極面積が経過時間にわたり低下することを意味する。
定期間中にわたる初期ピークからの急速な低下および酵素用メディエーターと急
速に競合する酸素に対する高感受性が生じる。この事実は、血液試料で測定され
た電流が血漿試料または他の水性媒質で測定された電流に比較して少ないことに
よって明白に証明され、またこの事実は読み取り誤差をもたらすことができる。
これに引き続いて、この過渡はしばしば、電極が無秩序の様相で破壊される結果
として、「不揃い」(lumpy)になる。この不揃いの過渡電流は、誤った読みを
生じさせるか、または細片拒絶を生じさせ、これらはどちらも、許容できるもの
ではない。
加えて、使い捨てグルコース試験用細片に用いられる公知電極は、動態的に制御
されるものである。すなわち、その電流は酵素によるグルコースの変換速度に依
存する。メーターにより測定される応答は、酵素とメディエーターとの間の反応
、酵素とグルコースとの反応および酵素と酸素との反応の間の平衡を表わすこと
から、またこれらの反応はそれぞれ、それ自体が温度に依存することから、動態
的に制御される試験用細片の応答は、試料温度に対して非常に敏感である。測定
されたグルコース値における実質的な差異が試料の取り扱いの相違の結果として
生じることがある。
存在する血液細胞からの干渉の結果として生じる。赤血球レベルは、ヘマトクリ
ットの読みに反映する。代表的に、高ヘマトクリット試料は、真正値よりも低い
読みをもたらし、他方で、低ヘマトクリット試料は、この血液細胞が電極表面を
汚し、電子輸送を制限する傾向を有することから、真正値よりも高い読みをもた
らす。また、赤血球のヘモグロビンに結合した酸素は、還元酵素に対するメディ
エーターと競合し、これによりグルコース応答をさらに減少させる。血液成分を
濾別するために、膜を付加することによってヘマトクリット作用を制限すること
が試みられている(米国特許No.5,658,444参照、これらの記載をこのような組み
入れを許可するこれらの国々の目的にかかわり引用して、ここに組み入れる)。
しかしながら、この方法は製造方法に追加の工程を付加し、従って価格を高め、
また精度などの別の観点でもしばしば、性能を悪化させる。
コース値を得ることは重要なことであることから、これらの欠点を被ることなく
、従って実施条件に関係なく、実際の血液中グルコース値の高い一貫性および信
頼できる指示を提供するグルコース試験用細片を得ることが非常に望まれている
。従って、本発明の目的は、試料中のヘマトクリットから実質的に独立している
読みを提供し、また一体化した試薬/血液分離層を備えている使い捨てグルコー
ス試験用細片を提供することにある。 本発明のもう一つの目的は、使い捨てグルコース試験用細片の改良された製造
方法を提供することにある。
グルコースなどの血液アナライトの量の電気化学的分析を行う形式のテストメー
ターで用いられる使い捨て試験用細片を提供する。この試験用細片は、 (a) 基体; (b) 基体上に配置されている第一導電性素子; (c) 基体上に、第一導電性素子に充分に近接して配置されている第二導電性素
子であって、これにより血液試料が試験用細片上に配置されると、第一導電性素
子と第二導電性素子との間の電気回路を完成させることができる第二導電性素子
; (d) 第一導電性素子を覆って配置されている非導電性の一体化した試薬/血液
分離層;および (e) 第一および第二導電性素子とテストメーターとの間を電気的に接続するコ
ンタクト; を備えている。
子に接近することを可能にしながら、血液細胞を第一導電性素子の表面から排除
するのに有効な非導電性マトリックス中に分散されているアナライトの電気化学
的検出用の試薬を含有する。本発明の一態様において、グルコース試験用細片は
、疎水性表面領域と親水性表面領域との両方を有する充填剤、グルコース酸化用
酵素、例えばグルコースオキシダーゼおよび電子を酵素から第一導電性素子に輸
送するのに有効なメディエーターを備えている。この充填剤は、乾燥すると、一
体化した試薬/血液分離層が導電性素子の表面上で二次元ネットワークを形成す
るような疎水性と親水性とのバランスを有するように選択する。好適な一体化し
た試薬/血液分離層は、ヒドロキシエチルセルロース(HEC)などの材料と組み
合わされている非導電性シリカ充填剤を含有する。シリカおよびHECは、赤血球
細胞を排除する二次元ネットワークを形成し、従って当該試験用細片を患者のヘ
マトクリットに対して実質的に不感受性にする。
体を覆って配置されている絶縁層を備えて製造される。この絶縁層は、第一導電
性素子と整合するように形成されている第一開口部をそこに有しており、また一
体化した試薬/血液分離層がこの開口部を経て第一導電性素子と接触するように
配置されている。
れている。図示されているように、この電極は基体10上に形成される。基体1
0上に、2種の導電性素子14’および16を配置し、これらの素子を導線14
および15により導電性コンタクト11、12および13に接続する。次いで、
絶縁層18を形成し、導電性素子14’および16の少なくとも一部分を残し、
またコンタクト11、12および13が露出されるようにする。次いで、非導電
性の一体化した試薬/血液分離層17を絶縁マスク18全体上に適用し、コンタ
クトを導電性素子16と接触させる。
定に対して充分に機能する組立て装置を提供する。しかしながら、有利には、本
発明による細片状電極は、一体化した試薬/血液分離層17の位置により定めら
れる電極構造体22の試料適用領域全体を覆ってナイロンまたはポリエステルメ
ッシュを適用することにより、および次いで血液試料の放散を防止するためのト
ップカバー23を適用することにより仕上げられている(図2)。このポリエス
テルメッシュは、試料を対照電極、導電性素子14’に導くために作用し、これ
により当該デバイスが始動され、試験が開始される。
に導電性試薬含有スラリーを用いる公知試験用細片との重要な相違点が付与され
、また公知試験用細片に優る利点が得られる。これらのシステムにおいて、印刷
されたスラリーは、電極の機能的部分になり、電荷移送を試薬層の外側表面で生
じる。この層が血液と直接接触すると、すなわち介在する分離層が配置されてい
ないと、赤血球細胞および白血球細胞、脂肪および試料中に存在する成分が試薬
層と相互反応し、試料中のアナライトの量の測定が干渉される。
り、従って構造的にも、または機能的にも、電極の一部ではない。電気活性成分
が一体化した試薬/血液分離層の開口部/孔を通過し、その下に存在する導電性
素子に到達しないかぎり、電荷移送は生じない。従って、この一体化した試薬/
血液分離層は細胞および巨大分子などの干渉物質の通過に対する障壁を提供し、
優れた性能を有するデバイスをより簡単なものにする結果をもたらす。
子16の一部が試料にさらされないような様相で、一体化した試薬/血液分離層
を配置することが特に望ましい。導電性素子14’および16を横切って付与さ
れている開口部を備えた絶縁層を用いる上記方法は、この結果の達成に特に適し
ている。従って、図9A〜9Cに示されているように、この方法は、3工程のみ
で試験用細片の形成を可能にする。第一工程において(図9A)、2個の導電性
素子14’および16および付随する導線およびコンタクトを基体上に設置する
。第二工程において(図9B)、絶縁性材料の層を導電性素子全体を覆って沈着
させる。この絶縁性材料は2個の孔94および96を有し、その一方は導電性素
子14’および16とそれぞれ整合させる。第三工程において(図9C)、一体
化した試薬/血液分離層17を孔96を覆って配置する。この配置された層17
を孔96よりも大きくすることによって、試料が導電性素子にさらされないよう
にされ、試薬層がその下の導電性素子を完全に覆い、これにより効果的な血液分
離が得られる。
存在することがあるアスコルビン酸、尿酸およびアセトアミノフェンなどの小型
分子により生じることがある、もう一つの誤認原を提供する。存在する場合、電
極表面におけるこれらの分子の酸化は、見せかけの電流レベル上昇を導き、所望
のアナライト、例えばグルコースの不正確な測定値をもたらす。本発明による一
体化した試薬/血液分離層は一般に、これらの分子が見出される孔寸法に比較し
て小さいことから、これらの分子を排除する。しかしながら、この一体化した試
薬/血液分離層にpH緩衝剤を包含させることによって、電極表面の局所pHを
、これらの成分の電気化学的電力がより高いレベルにまで移動させることができ
る。従って、一例として、そのpHがpH5付近のレベルに緩衝されている一体
化した試薬/血液分離層を用いると、これらの干渉による衝撃が実質的に減少さ
れる。しかしながら、露出されている(緩衝されていない)電極表面の面積が比
較的小さくても、大量の干渉電流が生じることがあることから、この緩衝効果を
最大にするためには、導電性素子全体を被覆しなければならない。
利点を提供するばかりでなく、また本発明の試験用細片は別の誤差発生原に対す
る抵抗性を有する。一例として、試験期間中、試薬は元の貯蔵槽から横方向に拡
散放出されることがある。試薬層を導電性素子に直接に沈着させることによって
、これらの試薬は測定信号に関与し続ける。試験毎との伝達変化(例えば、デバ
イスの取り扱いにおける変化または温度の相違の結果として生じる)にかかわる
全ての変化は非再現性の信号として現れる。しかしながら、試薬層を絶縁印刷物
で覆うと、孔からの横方向拡散放出は、信号に関与せず、従って信号の変化は生
じないものと見做される。
示されている方法は、その製造法からも数種の利点をもたらす。第一に、試薬層
を導電性素子上に直接に印刷した場合、「活性面積」は、試薬層の面積により定
められる。従って、試験の精度は、試薬層を印刷することができる精度により決
定される。これに対して、試薬層とその下の導電性素子との間の接触領域を定め
る有孔絶縁層を最初に沈着させることによって、活性面積は絶縁層に存在する孔
の寸法により定められる。絶縁層は代表的に、微細スクリーンを用いて印刷され
ることから、縁端限定がより良好になり、従ってより大きいデバイス精度を得る
ことができる。すなわち、最終試験用細片の性能上の特性にかかわり、導電性素
子16の面積も、また一体化した試薬/血液分離層の面積も、臨界的ではなくな
る。従って、導電性素子および一体化した試薬/血液分離層は、別の方法で用い
ることができるよりも精度の低い技術を用いる場合にも、使用することができる
。
た試料中の電気活性成分を需要することができなければならないばかりでなく、
また絶縁マスクの重要な機能は、導電性素子16と一体化した試薬/血液分離層
17との間の接触領域を明確に規定することにある。すなわち、制限しようとす
る場合、絶縁層に1個の孔を形成する必要があるのみである。第二導電性素子は
、絶縁層の縁端に沿って露出させることができ、または重ねられた電極構造体と
対面させて位置させることもできる。
ーターに挿入するのに適する全部の非導電性で寸法的に安定な材料であることが
できる。適当な材料には、ポリエステル薄膜、例えば330ミクロンのポリエス
テル薄膜、およびその他の絶縁性基体材料、例えばポリビニルクロライド(PVC
)およびポリカーボネートが包含される。
またはプラチナ/カーボンを包含するいずれかの導電性材料から形成することが
でき、これら全部を同一材料から製造する必要はない。導電性素子16は好まし
くは、導電性カーボンから形成される。好適導電性カーボンは、ERCON ERC1,ERC
ON ERC2 およびアチェソンカーボンエレクトロダグ(Acheson Carbon Electroda
g) 423 である。これらの仕様を有するカーボンは、エルコン社[Ercon Inc.(W
altham,Massachusets,USA)]またはアチェソンコロイド社[Acheson Colloids(P
rinces Rock,Plymouth,England)]から入手することができる。導電性素子16は
、作用電極トラック15と接触させ、次いでそこを閉鎖させるが、対照電極トラ
ック14の末端として設置される導電性素子とは接触させない。
R488-B(HV)-B2 ブルーから形成することができる。トップカバー23は、ポリエ
ステル片からまたは「ホットメルト」被覆プラスティックから適当に形成するこ
とができる。 本発明による試験用細片は、試料が電極室に入るのに従いデバイスからの空気
の排除を可能にする分離した出口開口部を形成する必要はないが、その代わりに
、メッシュの縁端全体に沿って分布している出口を用いることができる。試料流
体がメッシュに沿って弾かれるに従い、空気は最上層の下側のデバイス全体を取
り囲むメッシュの縁端から滲出する。試料流体は、絶縁層がメッシュの一部に格
別の疎水性を付与することから、滲出しない。従って、液状試料は中央の親水性
領域にとどまる。
ある。この層は、疎水性表面と親水性表面との両方を有する充填剤を含有し、ま
たグルコース試験用細片の場合、グルコースを酸化することができる酵素および
酵素からその下の導電性素子層16に電子を輸送することができるメディエータ
ーを含有する混合物から形成することができる。この層は、充填剤、酵素および
メディエーターを適当な担体中に含有するインキを形成し、このインキを用いて
、当該デバイス上に層17を印刷する。
、また種々の表面修飾をもって入手することができる。試験された全部のシリカ
化合物が、或る条件下にグルコースを測定することができる生成物をもたらすが
、本発明のグルコース試験用細片の優れた性能特性は、これを部分的に疎水性に
する表面修飾を有するシリカを用いた場合に得られる。この種の材料には、Cab-
O-Si TS610(これは、メチルジクロロシランで部分的に表面処理されたシリカで
ある)、Cab-O-Sil 530(これは、ヘキサメチルジシラザンで完全に表面処理す
ることによって修飾されたシリカである)、スフェリソルブ(Spherisorb)C4シ
リカ(これは、4炭素鎖で表面修飾されたシリカである)およびその他の類似の
修飾されたシリカまたはその組合わせが包含される。過度に疎水性である表面修
飾を有するシリカは回避すべきである。例えば、C18修飾シリカは、印刷可能な
インキの形成には疎水性過ぎることが見出された。
カ粒子の親水性内部部分が露出される。従って、インキ中に実際に存在する粒子
は、疎水性領域と親水性領域との両方を有する。この親水性領域は、相互に、お
よび水と水素結合を形成する。
クリーン印刷すると、この材料の二重の性質が、この二つに二次元ネットワーク
の層を形成させる。このネットワークは、顕微鏡検査で見ることができる蜂の巣
状体として形成される。再水和させると、この層は分解しないが、膨潤して、そ
の下に存在する導電性素子16付近にゲル化した反応帯域を形成する。酵素、メ
ディエーターおよびグルコースなどの反応は、この帯域内で自由に移動するが、
酸化されたヘモグロビンを含有する赤血球細胞などの干渉成分は排除される。こ
の結果として、一定量のグルコースに対する応答で生じる電流の量が、40〜6
0%のヘマトクリット範囲にわたり10パーセントよりも少なく変化し、従って
、試料がヘマトクリットに対して実質的に不感受性であり、また細胞を含有して
いない対照溶液におけるのと実質的に同様の性能が血液で得られるデバイスが得
られる(図3A〜C、図4および図5A〜5C)。
ろ当該デバイスを拡散するグルコースなどの血液アナライトの流入に対するより
大きい障壁を提供する。これは、測定された電流が20℃〜37℃の温度範囲に
わたり10パーセントよりも少なく変化し、また実質的に温度独立性であるデバ
イスを導く(図6Aおよび6B)。
ロキシエチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースとアルギネートもし
くはその他の増量剤との混合物などの結合剤を、2〜10重量%、好ましくは4
〜10重量%、さらに好ましくは約4.5重量%の量で、シリカを3〜10重量
%、好ましくは3〜5重量%、さらに好ましくは約4重量%の量で、フェリシア
ニドなどのメディエーターを8〜20重量%、好ましくは14〜18重量%、さ
らに好ましくは約16重量%の量で、およびグルコースオキシダーゼなどの酵素
を0.4〜2重量%、好ましくは1〜2重量%、さらに好ましくは約1.6重量
%の量(この量は、約250単位/mgの比活性またはインキ組成物1gあたり約
1000〜5000単位/mgに相当する)で含有する。
加の成分を含有することができる。一例として、非導電性層は、発泡防止剤を含
有することができる。さらに、非導電性層は、反応帯域のpHを制御するために
、緩衝剤を用いて組成することができる。このpHは、約pH3からpH10ま
での範囲内のレベルに維持することができる。本発明の一態様において、デバイ
スのpHを8以上のレベルに維持すると、特に有利であり、これはこのpHにお
いて、ヘモグロビンに結合した酸素が放出されないからである。さらに、このp
Hにおいて、グルコースオキシダーゼと酸素との反応は、非常に遅い。従って、
適当なpHの選択は、変化するヘマトクリットの作用に対する当該試験用細片の
性能をさらに安定化する。本発明の別の態様において、低pHの維持が好適であ
ることもある(pH5.5以下、このpHはグルコースオキシダーゼと酸素との
反応にとって最適pHである)。例えば、アスコルビン酸、尿酸またはアセトア
ミノフェンなどの干渉物質の酸化から生じる電気化学的干渉を排除することが主
目的である場合、pHをpH5に維持すると好ましい。この理由は、これらの化
合物が低pHでは酸化させることがより困難であるからである。
細片はグルコースの検出に制限されるものではない。例えば、フラクトサミン試
験用細片は、導電性素子上に配置されている2枚の層を含んでいる。第一の下方
の層は、例 7に実質的に記載されているようなシリカマトリックス中にカーボネ
ート緩衝剤(pH>10)を含有するが、酵素、メディエーターまたはクエン酸
塩緩衝剤を含有していないインキから形成する。第二の上方の層は、フェリシア
ニドなどの酸化剤をさらに含有するインキから形成する。
非導電性層71を、一体化した試薬/血液分離層17上に配置する。この層は、
酵素または酵素とメディエーターの両方が省略されている以外は第一の一体化し
た試薬/血液分離層と同一である組成物から形成する。この層はまた、導電性層
16を酸素担持赤血球細胞との接触から分離し、これにより酸素の作用が減少され
る。さらにまた、酵素が測定中に電極の表面から離れて分散される傾向を有する
ことができる程度にまで、このようなメディエーター含有層の電子輸送に利用す
ることができるメディエーター含有領域を増加させることができる。
とおりにして製造した。20mM水性クエン酸三ナトリウム100mlのpHを、0
.1Mクエン酸の添加により、pH6に調整した。ここに、ヒドロキシエチルセ
ルロース(HEC)6gを添加し、次いでホモジネーションにより混合した。この混
合物を一夜にわたり放置し、空気泡を分散させ、次いでコーティング組成物形成
用の原料溶液として使用した。 このHB溶液50gに、Cab-o-Sil TS610 シリカ2gおよびダウコーニング(Do
w Corning)発泡防止化合物0.1gを、手で撹拌しながら全量の4/5が添加され
るまで徐々に添加した。残りはホモジネーションによる混合によって添加した。
この混合物を次いで、冷凍庫内で10分間冷却させた。次いで、カリウムヘキサ
シアノフェレート(III)8gを添加し、完全に溶解するまで混合した。最後に、グ
ルコースオキシダーゼ酵素製剤0.8g(250単位/mg)を添加し、次いで溶
液中に充分に混合した。生成する組成物は印刷用に整えられており、または冷蔵
して保存することができる。
組み合わせを用いて、330ミクロンのポリエステル基体[メリネックス(Meli
nex)329]上に層をスクリーン印刷した。この第一工程は、カーボンパッドの印
刷である。カーボンの10X50パッドのアレーを、EC2 カーボン[エルコン(Ercon
)]を用いる印刷によりポリエステル基体の表面上に形成する。この印刷された
基体を次いで、加熱ドライヤーに通し、次いで所望により、高められた温度(例
えば、70℃)で1〜3週間かけて硬化させる。 次いで、銀/塩化銀接続トラックおよびコンタクトのアレーを、ERCON R-414(
DPM-68)1.25バイオ電極センサーコーティング材料を用いて基体上に印刷し、次
いで乾燥させる。アレーの各カーボンパッド毎に、カーボンパッドと接触させる
1個の作用トラックおよび1個の対照トラックを印刷する。
させる。この誘電体層は、各デバイスの実質的に全体を覆い、未被覆のコンタク
ト、対照電極の最上面およびカーボンパッドのみを残す。 この誘電体層の最上面上に、例1のインキを用いて、各導電性カーボンパッド
の最上面上に積層されている一体化した試薬/血液分離層を形成する。 ポリエステルメッシュ細片[スクリネル(Scrynel)PET230HC]を次いで、基体
を横切る列の状態で形成し、この誘電体の窓により露出されている反応領域を覆
う。5mm幅のポリエステル細片(厚さ50ミクロン)を次いで、このメッシュ細
片の最上面上に適用し、次いで電極の縁端を熱シールする。最後に、基体を切り
、例えば幅5.5mmおよび長さ30mmの大きさを有する50個の電極を得る。
00mVの適用電圧を備えたテストメーターに配置し、種々のグルコース濃度およ
び40%〜60%の範囲のヘマトクリットを含有する血液試料の試験に使用した
。図3A〜3Cは、電圧適用後の25秒の時点で測定された電流をグルコース濃
度の関数として示しており、また図4は、グルコースの応答の勾配をヘマトクリ
ットの関数として示すグラフである。この図面から見ることができるように、こ
の指示体は、ヘマトクリットとは基本的に無関係に高度の応答性を有する電流レ
ベルを生じる。
ブ(Spherisorb)C4 7gGおよびCab-o-Sil TS610 を用いて非導電性層を形成した。
この組成物を下記の3種の相違する種類のカーボン含有導電性素子上に設置した
: A.エルコン(Ercon)EC1 B.エルコン(Ercon)EC2 C.アチェソンカーボン、エレクトロダグ(Acheson Carbon,Electrodag)423SS
の最上面上のエルコン(Ercon)EC2。 これらの試験用細片を用いて、不活性溶液中にグルコースを含有する対照溶液
(One Touch Control Solution,Lifescan Inc.)または血液中にグルコースを含
有する溶液中の種々のレベルのグルコースを、425mVで測定した。電圧印加後
の25秒の時点で得られた電流を測定した。図5A〜5Cに、3種の組成物A、
BおよびCについて得られた結果をそれぞれ示す。全部の場合、グルコース濃度
の相違に対するテストメーターの応答を示すラインの勾配は、測定が血液に対し
て行われたか、または対照溶液に対して行われたかにかかわらず、実質的に同一
であった。すなわち、これは本発明による試験用細片の試料中の酸素含有量およ
びヘマトクリットからの独立性、ならびに導電性素子として種々の材料を使用す
ることができることを、さらに証明している。
℃および20℃において、425mVの印加電圧を用いて試験した。図6Aおよび
6Bは、電圧印加後の25秒の時点で測定された電流をグルコース濃度の関数と
して示している。見ることができるように、2本のラインの勾配は、実質的に同
一である(20℃において0.1068対37℃において0.1009)。すな
わち、これは当該試験用細片が生理学的温度に近い温度からの温度範囲にわたり
実質的に温度−独立性挙動を示すことを証明している。
た市販の試験用細片について、電流過渡を測定した。この結果を図8Aおよび8
Bに示す。示されているように、本発明による試験用細片(図8A)は、試験用
細片からの初期応答後の25秒よりも長い期間にわたりピーク電流の50%以上
を維持する非常に平坦な電流過渡を提供する。これに反して、カーボンを基材と
する電極は、電流のほとんど即時の減衰を示し、試験用細片からの初期応答後の
1〜2秒の間にピーク電流の50%を失う。これは、ピーク電流値を獲得しなけ
ればならない場合に測定を困難にするか、または実質的減衰が生じた後に電流を
測定しなければならない場合に、メーターの動作範囲を減少させる。従って、本
発明による試験用細片は、一定量のグルコースに対する応答により生じる電流が
、ピーク電流発生後の5秒の時点で50%より少なく減衰する。
] 表面修飾シリカ5.5g(Cabo-Sil TS610,Cabot) グルコースオキシダーゼ1.5g カリウムフェリシアニド20.0g
の試験用細片と図1の試験用細片との比較から明白なように、細片上の電極の正
確な配列は臨界的ではない。さらに、相違する材料を細片の形成に使用すること
ができる。 この試験用細片を形成する第一工程は、基体100の銀トラック101,10
2の沈着である。好適基体は、バロックス(Valox)(登録商標)の商品名で販
売されている500ミクロン厚さのポリエステル薄膜である。この銀電極は、例
2で調合されたインキ組成物を用いるスクリーン印刷によって形成することがで
きる。
ボン導電性素子103,104および105を形成する。導電性素子103は、
銀トラック101と接触して形成し、次いで最終試験用細片に作用電極を形成す
る。カーボンパッド104および105を、銀トラック101および102の末
端と電気的に接続し、当該細片とテストメーターとの間を接続させる。このカー
ボン導電性素子は、前記例に記載されているとおりに、導電性カーボンインキ組
成物を用いるスクリーン印刷によって形成することができる。
ン印刷による絶縁層106の沈着である(図10C)。図示されているように、
この絶縁層は3個の窓107,108,および109を備えている。窓108は
、カーボン導電性素子103の末端と整合している。窓107は、銀トラック1
02の末端と整合し、対照電極への接近をもたらす。第三の窓109は、第二絶
縁性コーティングからメッシュ層を通る絶縁性材料の通過可能性を提供するが、
不可欠ではない。
/血液分離層110の形成である。この層は、窓108を覆って設置し、窓10
8の側面全体に沿って絶縁層106上に延びている。層110印刷に適する組成
物は、下記組成を有し、約6の緩衝pHを有する一体化した試薬/血液分離層を
提供する:
片の試料採取領域を覆って設置する(図10E)。このメッシュ111は、当該
メッシュを親水性にするために、アセトンおよびフルオラド(Fluorad)FC170C 界
面活性剤により予備処理されているナイロンメッシュである。このメッシュ11
1の目的は、液状試料が作用電極と対照電極との間の帯域を均一に通過して輸送
することにある。 第二の絶縁層112を次いで、僅かにさらに柔軟性の絶縁性インキ(ERCON 絶
縁層820202)を用いて形成し、試料採取領域を限定する(図10F)。次いで、
トップカバー113を、例2で上記したとおりに試験用細片の最上面上に適用し
、仕上げられた試験用細片を形成する(図10G)。
示す。
濃度の関数として測定された電流を示す。
数として示す。
および対照溶液中のグルコースの関数として示す。
た電流を示す。
する試験用細片を用いて見出された電流過渡を示す。
Claims (23)
- 【請求項1】 使い捨て試験用細片および血液試料を受容し、試料中の血液
アナライトの量の電気化学的分析を行う形式のテストメーターで用いられる使い
捨て試験用細片であって、 (a) 基体; (b) 基体上に配置されている第一導電性素子; (c) 基体上に、第一導電性素子に充分に近接して配置されている第二導電性素
子であって、これにより血液試料が試験用細片上に置かれると、第一導電性素子
と第二導電性素子との間の電気回路を完成させることができる第二導電性素子; (d) 第一導電性素子を覆って配置されている非導電性の一体化した試薬/血液
分離層であって、可溶性電気活性成分により第一導電性成分に接近することを可
能にしながら、血液細胞を第一導電性素子の表面から排除するのに有効な非導電
性マトリックス中に分散されているアナライトを電気化学的に検出するための試
薬を含有する非導電性の一体化した試薬/血液分離層; (e) 第一および第二導電性素子とテストメーターとの間を電気的に接続するコ
ンタクト;および (f) 少なくとも第一導電性素子を覆って配置されており、第一導電性素子と整
合している第一開口部をそこに有する絶縁層; を含み、ここで上記非導電性の一体化した試薬/血液分離層は絶縁層に存在する
開口部を経て第一導電性素子と接触し、また上記非導電性の一体化した試薬/血
液分離層は第一開口部全体を覆っており、これにより第一導電性素子の試験用細
片に適用された試料に直接にさらされる部分が残らないようにされている、上記
使い捨て試験用細片。 - 【請求項2】 一体化した試薬/血液分離層が、グルコース酸化酵素および
電子を酵素から第一導電性素子に輸送するのに有効なレドックスメディエーター
を含有する、請求項1に記載の試験用細片。 - 【請求項3】 マトリックスが、疎水性表面と親水性表面との両方を有する
シリカを含む、請求項2に記載の試験用細片。 - 【請求項4】 第一導電性素子および第二導電性素子が導電性カーボンを含
有する、請求項3に記載の試験用細片。 - 【請求項5】 酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項4に記載の試
験用細片。 - 【請求項6】 レドックスメディエーターが、フェリシアニドである、請求
項5に記載の試験用細片。 - 【請求項7】 一体化した試薬/血液分離層が、結合剤2〜10重量%;シ
リカ3〜10重量%;レドックスメディエーター8〜20重量%;および酵素1
000〜5000単位/水性組成物グラムを含有する水性組成物から形成されて
いる、請求項3に記載の試験用細片。 - 【請求項8】 第一導電性素子および第二導電性素子が導電性カーボンを含
有する、請求項7に記載の試験用細片。 - 【請求項9】 酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項7に記載の試
験用細片。 - 【請求項10】 レドックスメディエーターが、フェリシアニドである、請
求項9に記載の試験用細片。 - 【請求項11】 使い捨て試験用細片および血液試料を受容し、試料中の血
液アナライトの量の電気化学的分析を行う形式のテストメーターで用いられる使
い捨て試験用細片の製造方法であって、 (a) 基体上に第一導電性素子および第二導電性素子を形成し; (b) 第一導電性素子を覆う絶縁体の層を形成し、この絶縁体層は第一導電性素
子の試料適用領域部分と整合している第一開口部をそこに有しており;次いで (c) 絶縁層上に配置されており、絶縁層に存在する第一開口部を経て第一導電
性素子と接触する試薬層を形成する; 工程を包含し、ここで上記一体化した試薬/血液分離層は、可溶性電気活性成分
により第一導電性素子に接近することを可能にしながら、血液細胞を第一導電性
素子の表面から排除するのに有効な非導電性マトリックス中に分散されているグ
ルコースの電気化学的検出用試薬を含有し、これにより第一導電性素子が試験用
細片に適用された試料への直接接触から分離される、 上記製造方法。 - 【請求項12】 試薬層が、非導電性の一体化した試薬/血液分離層である
、請求項11に記載の方法。 - 【請求項13】 非導電性の一体化した試薬/血液分離層を、第一開口部全
体を覆って形成し、これにより第一導電性素子の試験用細片に適用された試料に
直接にさらされる部分が残らないようにする、請求項12に記載の方法。 - 【請求項14】 一体化した試薬/血液分離層が、グルコース酸化用酵素お
よび電子を酵素から第一導電性素子に輸送するのに有効なレドックスメディエー
ターを含有する、請求項13に記載の方法。 - 【請求項15】 マトリックスが、疎水性表面と親水性表面との両方を有す
るシリカを含む、請求項14に記載の方法。 - 【請求項16】 第一導電性素子および第二導電性素子が導電性カーボンを
含有する、請求項15に記載の方法。 - 【請求項17】 酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項16に記載
の方法。 - 【請求項18】 レドックスメディエーターが、フェリシアニドである、請
求項17に記載の方法。 - 【請求項19】 一体化した試薬/血液分離層を、結合剤2〜10重量%;
シリカ3〜10重量%;レドックスメディエーター8〜20重量%;および酵素
1000〜5000単位/水性組成物グラムを含有する水性組成物から形成する
、請求項13に記載の方法。 - 【請求項20】 第一導電性素子および第二導電性素子が導電性カーボンを
含有する、請求項19に記載の方法。 - 【請求項21】 酵素がグルコースオキシダーゼである、請求項19に記載
の方法。 - 【請求項22】 レドックスメディエーターが、フェリシアニドである、請
求項21に記載の方法。 - 【請求項23】 絶縁層を第一導電性素子および第二導電性素子の両方を覆
って形成し、およびこの絶縁層は、第二導電性素子と整合している第二開口部を
備えている、請求項13に記載の方法。
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