JP2002533118A - Ｔ細胞レセプター使用を改変するためのｃｄ４０係合の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、抗原に対する免疫応答を改変する方法、ならびに抗原に対する免疫応答を増強する方法に関する。より具体的には、本発明は、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再編成を誘導するためのＴ細胞におけるＣＤ４０係合を使用する方法に関する。本発明はまた、特定の抗原に対するＴ細胞の親和性を増強するためのＴ細胞におけるＣＤ４０係合を使用する方法に関する。さらに本発明は、Ｔ細胞系統の免疫細胞の発達成熟を促進する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （政府の援助） 本研究は、国立衛生研究所からの助成金番号ＡＩ−３３４７０により部分的に
資金援助されている。従って、米国政府は、本発明に特定の権利を有し得る。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、抗原に対する哺乳動物の免疫応答を変更させるための方法に関する
。より具体的には、本発明は、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導し、そし
て特定の抗原に対するＴ細胞親和性を増強するため、およびＴ細胞の成熟を促進
するために、Ｔ細胞上のＣＤ４０係合を使用する方法に関する。

【０００３】 （発明の背景） 免疫系の特徴は、抗原の特異的認識である。これは、自己抗原と非自己抗原と
の間を識別する能力、および以前に遭遇した抗原に対して急速かつ特異的な反応
を可能にする記憶様能力を含む。脊椎動物の免疫系は、液性免疫応答および細胞
媒介性免疫応答を最終的に生じる分子事象および細胞事象のカスケードにより、
外来抗原と反応する。

【０００４】 抗原特異的認識を含む免疫防御の主要な経路は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例
えば、樹状細胞またはマクロファージ）による抗原の捕捉、およびリンパ器官（
例えば、胸腺）へのこれらの細胞のその後の移動により開始される。ここで、Ａ
ＰＣは、成熟Ｔヘルパー細胞として分類される、Ｔ細胞のサブクラスに抗原を提
示する。提示された抗原の特異的認識の際に、成熟Ｔヘルパー細胞は、活性化Ｔ
ヘルパー細胞になるように誘発され得る。この活性化Ｔヘルパー細胞は、成熟Ｂ
細胞の抗体産生形質細胞への分化の誘導による液性免疫応答、および成熟細胞傷
害性Ｔ細胞の活性化による細胞媒介性免疫応答の両方を調節する。

【０００５】 Ｔリンパ球は、Ｔ細胞表面上に発現されるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）によっ
て、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の状況において抗原を認識する。
このＴＣＲは、ＣＤ３複合体と非共有結合した、ジスルフィド連結へテロダイマ
ーである（Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、
１９８７、５：５０３）。ほとんどのＴ細胞は、α糖タンパク質およびβ糖タン
パク質からなるＴＣＲを保有する。Ｔ細胞は、Ｂ細胞において作動する多様性と
同様の、それらのレセプター分子における多様性を生成する機構を使用する（Ｋ
ｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８６、
４：５２９；Ｔｏｎｅｇａｗａ Ｓ．、Ｎａｔｕｒｅ、１９８３、３０２：５７
５）。免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子と同様に、ＴＣＲ遺伝子は、Ｔ細胞の発生
の間に再配置するセグメントから構成される。ＴＣＲポリペプチドおよびＩｇポ
リペプチドは、アミノ酸末端の可変領域およびカルボキシ末端の定常領域からな
る。この可変領域は、抗原の特異的認識を担い、一方、Ｃ領域は、膜固定におい
て、およびこのレセプターが占有されるこの細胞の内側から外側へのシグナルの
伝達において機能する。Ｉｇ重鎖およびＴＣＲβ鎖の可変領域は、３つの遺伝子
セグメント（可変セグメント（Ｖ）、多様性セグメント（Ｄ）および連結セグメ
ント（Ｊ））によりコードされる。このＩｇ軽鎖およびＴＣＲα鎖は、Ｖセグメ
ントおよびＪセグメントのみによりコードされる可変領域を含む。

【０００６】 Ｖセグメント、ＤセグメントおよびＪセグメントは、生殖系列ＤＮＡにおける
複数のコピーに存在する。この可変領域における多様性は、各セグメントファミ
リーの１つのメンバーを無作為に連結することによって生成される。遺伝子セグ
メントの融合は、いくつかのヌクレオチドの挿入により達成される。このＮ領域
の挿入は、特に、ＴＣＲ可変領域の多様性に大きく貢献するが（Ｄａｖｉｓおｙ
びＢｊｏｒｋｍａｎ、Ｎａｔｕｒｅ、１９８６、３３４：３９５）、可変遺伝子
セグメントがしばしば機能的に再配置されないこともまた暗示する。遺伝子セグ
メントの再配置は、一般的に、両方の対立遺伝子で生じる。しかし、Ｔ細胞およ
びＢ細胞は、それぞれ、１つのＴＣＲまたはＩｇのみを発現し、そして１つの細
胞内の２つの機能的に再配置される遺伝子は、見出されていない。この現象は、
対立遺伝子排除として知られている。

【０００７】 胸腺細胞の分化および発生の間に、胸腺細胞は、細胞表面分子（ＣＤ４、ＣＤ
８、ＴＣＲ、およびＣＤ３を含む）の発現により特徴付けられる一連の段階を通
じて進行する。初期の発生段階では、胸腺細胞は、これらの分子の発現に対して
多く陰性（ｍｕｌｔｉ−ｎｅｇａｔｉｖｅ）であり、そしてこの発生段階の間に
、ＲＡＧ−１遺伝子およびＲＡＧ−２遺伝子産物（これは、ＴＣＲ遺伝子の再配
置事象に必要である）は、活性化し、そしてＴＣＲβ遺伝子の再配置が、生じる
（Ｍａｌｉｓｓｅｎ，Ｍ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、１９９２、
１３：３１５〜３２２）。ＴＣＲβ遺伝子の１つの対立遺伝子のみが発現され、
一方、他の対立遺伝子は、閉じられ、ＴＣＲ係合を可能にする（Ｌｕｃａｓ，Ｂ
およびＧｅｒｍａｉｎ，ＲＮ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９９６、５：４６１〜４７
７）。この集団から、ＣＤ４⁺８^lo部分集団およびＣＤ４^lo８⁺部分集団の両方が
、生成される（Ｌｕｃａｓ，ＢおよびＧｅｒｍａｉｎ、ＲＮ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ
、１９９６、５：４６１〜４７７）。ＣＤ４⁺８^lo細胞は、二重陽性（ＤＰ）細
胞、ならびに両方の単一陽性（ＳＰ）胸腺集団を生じる。ＣＤ４^lo８⁺集団は、
ＣＤ８ ＳＰ集団のみを生じ（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９
９５、２：４１３〜４２５）、従って、ＣＤ４⁺８^lo集団よりも成熟した集団で
あるとみなされる。このＣＤ４^lo８^lo、ＣＤ６９⁺部分集団は、ＣＤ４／ＣＤ８
系列関係付けの間の中間的集団で最もありそうである。

【０００８】 ２つの異なる型のＴ細胞が、ＭＨＣ状況内の抗原認識に関与している。成熟Ｔ
ヘルパー細胞（ＣＤ４⁺８^lo）は、クラスＩＩ ＭＨＣ分子の状況における抗原
を認識し、一方、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ４^lo８⁺）は、クラスＩ ＭＨＣ決定
因子の状況において抗原を認識する（Ｓｗａｉｎ，Ｓ．Ｌ．、Ｉｍｍｕｎ．Ｒｅ
ｖ．１１９８３、７４：１２９〜１４２；Ｄｉａｌｙｎａｓ，Ｐ．Ｄ．ら、Ｉｍ
ｍｕｎ．Ｒｅｖ．、１９８３、７４：２９〜５６）。

【０００９】 ＣＤ４０表面分子は、Ｂリンパ球、上皮細胞およびいくつかの癌性細胞株に発
現されることが当該分野において報告される、２７７アミノ酸の糖タンパク質で
ある。ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、Ｂリンパ球に対する種々の効果
（細胞間接着の誘導、短期増殖および長期増殖、免疫グロブリン遺伝子の再配置
ならびに免疫グロブリンクラススイッチング事象を含む）を媒介する。ＣＤ４０
リガンド（天然のＣＤ４０結合パートナー）は、活性化されたＴ細胞の細胞表面
上に発現されると報告されており、そして同時刺激の非存在下でＢ細胞増殖、お
よびインターロイキン−４（ＩＬ−４）の存在下でＩｇＥ産生を媒介する。

【００１０】 しかし、末梢Ｔ細胞、脾臓Ｔ細胞および胸腺細胞におけるＣＤ４０の発現また
は機能のいずれもが、決定されていない。

【００１１】 （発明の要旨） 本発明は、１つの重要な部分において、抗原に対するＴ細胞の特異性を変更さ
せるための方法を提供する。より具体的には、本発明は、Ｔ細胞レセプター遺伝
子の再配置を誘導し、それによって抗原に対するＴ細胞の特異性を変更かつ増強
させるために、胸腺細胞（またはＴ細胞）上のＣＤ４０係合を使用する方法に関
する。別の局面において、本発明は、胸腺細胞におけるＣＤ４０係合を使用して
、胸腺細胞の成熟を促進するための方法を提供する。

【００１２】 驚くべきことに、本発明に従うと、ＣＤ４０が胸腺細胞の表面上に発現される
こと、およびＣＤ４０結合剤による胸腺−ＣＤ４０の係合が胸腺細胞におけるＴ
細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導することが、発見されている。また驚くべ
きことに、発生的に成熟したＴ細胞が再配置を受け、そして本発明の方法に従っ
てそれらの特異性を変更させることが、発見されている。さらに、ＣＤ４０結合
剤による、ＣＤ４０を発現している未成熟胸腺細胞の係合が、胸腺細胞の発生的
な成熟を生じることが、発見されている。

【００１３】 本発明の１つの局面に従うと、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導するた
めの方法が、提供される。この方法は、Ｔ細胞とＣＤ４０を結合するＣＤ４０結
合剤とを、Ｔ細胞におけるＴ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導するに十分な
量において接触させる工程を包含する。好ましくは、このＴ細胞は、単離された
Ｔ細胞である。特定の実施形態において、このＴ細胞は、内因性ＣＤ４０リガン
ドをコードする核酸を含まない。１つの実施形態のいて、このＴ細胞は、Ｔ細胞
に対して富化されたリンパ球集団に存在する。好ましい実施形態において、Ｔ細
胞に対して富化されたリンパ球集団は、Ｂ細胞を選択的に排除することによって
、Ｔ細胞についてさらに富化される。Ｔ細胞が富化されたリンパ球集団が、少な
くとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の
Ｔ細胞を含む、種々の実施形態が、提供される。特定の他の実施形態において、
Ｔ細胞とＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤との接触が、インビトロで生じる。
Ｔ細胞とＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤との接触がエキソビボで生じる、他
の実施形態が、提供される。特定の実施形態において、Ｔ細胞はまた、造血細胞
のインビトロ培養物に由来し得る。

【００１４】 任意の前述の実施形態において、ＣＤ４０結合剤は、好ましくは、以下の、少
なくとも２つの薬剤を含む：ｉ）第１のＣＤ４０レセプターを結合する第１の薬
剤、およびｉｉ）第１の薬剤を少なくとも第２のレセプター（これは、第２のＣ
Ｄ４０レセプターおよび／またはＴ細胞レセプターを含む）に架橋する第２の架
橋剤。いくつかの実施形態において、第１のＣＤ４０レセプターを結合する第１
の薬剤は、ＣＤ４０リガンドおよび／または抗ＣＤ４０抗体を含む。他の実施形
態において、第１の薬剤を第２のレセプターに架橋する第２の架橋剤は、ＣＤ４
０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および／または抗原を含む。好ましい実施形態にお
いて、ＣＤ４０リガンドは、配列番号２のポリペプチドまたはそのフラグメント
である。

【００１５】 任意の前述の実施形態において、ＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６
９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、および／またはＣＤ４^hiＣＤ
８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型（成熟）のＴ細胞が、本発明に従って特に有用であ
る。

【００１６】 同時刺激剤がＣＤ４０結合剤とともに投与され得る、種々の実施形態が、提供
される。同時刺激剤としては、同時刺激分子およびサイトカインが挙げられる。
同時刺激分子としては、ＴＳＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ２４、ＣＤ２８、Ｃ
Ｄ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、およびＣＤ８６が挙げられるがこれらに限定さ
れない。サイトカインとしては、ＩＬ−２およびＩＬ−４が挙げられるがこれら
に限定されない。

【００１７】 本発明の別の局面に従うと、Ｔ細胞成熟を促進するための方法が、提供される
。この方法は、未成熟Ｔ細胞と、ＣＤ４０を結合する結合剤とを、未成熟Ｔ細胞
の成熟を促進するに十分な量において接触させる工程を包含する。Ｔ細胞が、単
離されたＴ細胞であることが好ましい。特定の実施形態において、このＴ細胞は
、内因性ＣＤ４０リガンドをコードする核酸を含まない。他の実施形態において
、このＴ細胞は、Ｔ細胞について富化されたリンパ球集団に存在する。好ましい
実施形態において、Ｔ細胞について富化されたリンパ球集団は、Ｂ細胞を選択的
に除去することによって、Ｔ細胞についてさらに富化される。Ｔ細胞が富化され
たリンパ球集団が少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、ま
たは少なくとも９５％のＴ細胞を含む、種々の実施形態が、提供される。特定の
他の実施形態において、Ｔ細胞とＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤との接触が
、インビトロで生じる。Ｔ細胞とＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤との接触が
エキソビボで生じる、他の実施形態が、提供される。特定の実施形態において、
このＴ細胞はまた、造血細胞のインビトロ培養物に由来し得る。

【００１８】 任意の前述の実施形態において、ＣＤ４０結合剤は、好ましくは、以下の、少
なくとも２つの薬剤を含む：ｉ）第１のＣＤ４０レセプターを結合する第１の薬
剤、およびｉｉ）第１の薬剤を少なくとも第２のレセプター（これは、第２のＣ
Ｄ４０レセプターおよび／またはＴ細胞レセプターを含む）に架橋する第２の架
橋剤。いくつかの実施形態において、第１のＣＤ４０レセプターを結合する第１
の薬剤は、ＣＤ４０リガンドおよび／または抗ＣＤ４０抗体を含む。他の実施形
態において、第１の薬剤を第２のレセプターに架橋する第２の架橋剤は、ＣＤ４
０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および／または抗原を含む。好ましい実施形態にお
いて、ＣＤ４０リガンドは、配列番号２のポリペプチドまたはそのフラグメント
である。

【００１９】 任意の前述の実施形態において、ＣＤ６９⁺ＴＣＲ^lo、ＣＤ４⁺ＣＤ８⁺ＴＣＲ^{l o} 、および／またはＣＤ１１７⁺ＴＣＲ^lo表現型のＴ細胞が、本発明に従って特に
有用である。

【００２０】 同時刺激剤がＣＤ４０結合剤とともに投与され得る、種々の実施形態が、提供
される。同時刺激剤としては、同時刺激分子およびサイトカインが挙げられる。
同時刺激分子としては、ＴＳＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ２４、ＣＤ２８、Ｃ
Ｄ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、およびＣＤ８６が挙げられるがこれらに限定さ
れない。サイトカインとしては、ＩＬ−２およびＩＬ−４が挙げられるがこれら
に限定されない。

【００２１】 本発明のなお別の局面に従うと、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再配置を阻害する
ための方法が、提供される。この方法は、ＣＤ４０を発現している細胞と、ＣＤ
４０誘導性Ｔ細胞レセプターの再配置を阻害する薬剤とを、接触させる工程を包
含する。好ましくは、このＴ細胞は、単離されたＴ細胞である。特定の実施形態
において、ＣＤ４０誘導性Ｔ細胞レセプターの再配置を阻害する薬剤としては、
抗ＣＤ４０リガンド抗体、可溶性ＣＤ４０リガンドアゴニスト、ＮＦ−κＢイン
ヒビター、および／またはそれらの任意の組合せが挙げられる。ＣＤ４０結合剤
、細胞集団（成熟Ｔ細胞および未成熟Ｔ細胞の両方）および数、ならびに他の同
時刺激性分子の同時投与が上記のような１以上の好ましい特徴を有する、種々の
実施形態が、提供される。このような方法は、特定の抗原、および特に（自己免
疫疾患におけるような）自己抗原に対するＴ細胞親和性の成熟を阻害するために
使用され得る。特定の実施形態において、この自己免疫疾患としては、慢性関節
リウマチ、ブドウ膜炎、インスリン依存性真性糖尿病、溶血性貧血、リウマチ熱
、クローン病、ギヤン−バレー症候群、乾癬、甲状腺炎、グレーブス病、重症筋
無力症、糸球体腎炎、自己免疫肝炎、全身性エリテマトーデスが挙げられる。さ
らなる実施形態において、被験体は、多発性硬化症、膿瘍、移殖、移殖片、アテ
ローム性動脈硬化症、および／または心筋炎を有する。

【００２２】 本発明のさらなる局面に従うと、エキソビボおよび／またはインビトロで、抗
原に対するＴ細胞反応性を誘導するための方法が、提供される。この方法は、一
定量のＴ細胞および一定量の抗原提示細胞を、培養容器に導入する工程、ならび
にＴ細胞においてＴ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導するに十分な量におい
てＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合結合剤、および少なくとも１つの抗原の存在
下で、少なくとも１つの抗原に対する特異性を有するＴ細胞の形成を誘導するに
十分な条件下で、Ｔ細胞および抗原提示細胞を培養する工程を包含する。好まし
くは、このＴ細胞は、単離されたＴ細胞である。ＣＤ４０結合剤、成熟Ｔ細胞集
団および他の同時刺激性分子の同時投与が、上記のような１以上の好ましい特徴
である、種々の実施形態が、提供される。

【００２３】 なお別の局面において、本発明は、環境ストレス誘導性Ｔ細胞死を阻害するた
めの方法を提供する。この方法は、細胞死を誘導するに十分な他の環境ストレス
下で、ＣＤ４０を天然に発現しているＴ細胞（すなわち、ＣＤ４０をトランスフ
ェクトしていない）と、ＣＤ４０を結合し、かつそうでなければこの環境ストレ
スからは生じない、ＣＤ４０を発現するＴ細胞死を阻害するに十分な量において
Ｔ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導するＣＤ４０結合剤とを、接触させる工
程を包含する。好ましくは、このＴ細胞は、単離されたＴ細胞である。特定の実
施形態において、この環境ストレスとしては、化学的ストレス、物理的ストレス
、酸化的ストレス、および／またはγ線照射が挙げられる。ＣＤ４０結合剤、細
胞集団（成熟Ｔ細胞および未成熟Ｔ細胞の両方）ならびに数が、上記のような１
以上の好ましい特徴を有する、種々の他の実施形態が、提供される。

【００２４】 なお別の局面に従うと、環境ストレス誘導性Ｔ細胞死を増強するための方法が
、提供される。この方法は、ＣＤ４０を天然に発現しているＴ細胞（すなわち、
ＣＤ４０をトランスフェクトしていない）と、ＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合
剤とを、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再配置を誘導するに十分な量において接触さ
せる工程、ならびにＣＤ４０結合剤に結合したＴ細胞を、細胞死を誘導するに十
分な環境ストレスに供する工程を包含する。好ましくは、このＴ細胞は、単離さ
れたＴ細胞である。特定の実施形態において、この環境ストレスとしては、化学
的ストレス、物理的ストレス、酸化的ストレス、および／またはγ線照射が挙げ
られる。好ましい実施形態において、Ｔ細胞は、癌性Ｔ細胞または自己反応性Ｔ
細胞を含み、そして環境ストレスは、化学療法剤または化学的な薬剤である。Ｃ
Ｄ４０結合剤、細胞集団（成熟Ｔ細胞および未成熟Ｔ細胞の両方）ならびに数が
上記のような１以上の好ましい特徴を有する、種々の他の実施形態が、提供され
る。

【００２５】 本発明のこれらおよび他の局面が、以下により詳細に記載されている。本発明
の各々の限定は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。従って、本発明の各々
の限定（任意の１つの要素または要素の組合せを含む）が、本発明の各々の局面
に含まれ得ることが予測される。

【００２６】 本発明のこれらおよび他の局面、ならびに種々の利点および有用性は、好まし
い実施形態の詳細な説明を参考にすることにより明らかである。

【００２７】 （配列の簡単な説明） 配列番号１は、ヒトＣＤ４０−リガンドｃＤＮＡ、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｌ
０７４１４のヌクレオチド配列である。

【００２８】 配列番号２は、配列番号１の核酸によりコードされる、ヒトＣＤ４０−リガン
ドｃＤＮＡのポリペプチド配列である。

【００２９】 （発明の詳細な説明） 本発明は、１つの局面において、ＣＤ４０が胸腺細胞の表面で発現するという
予測されない発見、および胸腺細胞−ＣＤ４０のＣＤ４０結合剤との係合が、胸
腺細胞内でＴ細胞レセプター遺伝子再配列を誘導するという予測されない発見を
含む。従って、本発明は、そして当該分野において以前に考えられたこととは対
照的に、末梢胸腺細胞の抗原特異性を変化させる際に有用である（すなわち、「
成熟」Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺）、または特異的抗
原に方向づけられるＴ細胞）。

【００３０】 本発明の１つの局面に従って、Ｔ細胞レセプター遺伝子再配列をインビトロお
よび／またはエキソビボで誘導するための方法が、提供される。「エキソビボ」
によって、被験体から単離された細胞がインビトロで一時的に培養され、そして
操作され、そしてその被験体に戻されることを意味する。本明細書中において使
用する場合に、被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、雌ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、
ヤギ、イヌ、ネコまたは齧歯類である。全ての実施形態において、ヒト被験体が
好ましい。あるいは、細胞は、造血細胞（造血幹細胞および造血前駆細胞）のイ
ンビトロ培養物から得られ得、Ｔ細胞系列に向けて培養され得、そしてインビト
ロで操作され得、次いで被験体に導入され得る。このようなインビトロの造血前
駆細胞培養物は、当該分野において周知であり、そして例としては、発明の名称
「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｌｉｎｅａｇｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ａ ｈｕｍ
ａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ」の、Ｐａｌｓ
ｓｏｎらに発行された米国特許第５，６３５，３８６号、および発明の名称「Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘ ｖｉｖｏ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ／ｏｒ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ」の、Ｅｍｅｒｓｏｎら
に発行された米国特許第５，６４６，０４３号に記載される方法および系が挙げ
られる。

【００３１】 Ｔ細胞レセプター遺伝子再配列の、Ｔ細胞における誘導は、Ｔ細胞においてＴ
細胞レセプター遺伝子再配列を誘導するに十分な量でＣＤ４０を結合するＣＤ４
０結合剤と、Ｔ細胞を接触させる工程を包含する。

【００３２】 本発明の方法に従って処理されるＴ細胞は、好ましくは、単離されたＴ細胞で
ある。単離されたＴ細胞とは、本明細書中において使用される場合には、Ｂ細胞
を選択的に排除することによってＴ細胞を濃縮するが少数のＢ細胞が存在し得る
、リンパ球集団内の細胞である。Ｔ細胞濃縮のための方法は、以下にさらに詳細
に記載される（下記の末梢血液または単球の単離を参照のこと）。種々の実施形
態が提供され、ここで、Ｔ細胞濃縮リンパ球集団は、少なくとも５０％、少なく
とも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のＴ細胞を含有する。
Ｔ細胞が外因性ＣＤ４０リガンドをコードする核酸を含まないこともまた、好ま
しい。

【００３３】 本発明によって、Ｔ細胞の表面上の１つ以上のレセプターを結合するＣＤ４０
結合剤は、成熟Ｔ細胞においてＴ細胞レセプター遺伝子再配列を誘導すること、
および／または未熟Ｔ細胞の成熟を誘導することを、必要とする（以下の議論を
参照のこと）。上述の効果のいずれかを検出するための方法は、実施例に記載さ
れる。「ＣＤ４０結合剤」は、好ましくは、以下の少なくとも２つの薬剤から構
成される：ｉ）Ｔ細胞の表面の第一ＣＤ４０レセプターを結合する、第一薬剤、
ならびにｉｉ）この第一薬剤を少なくとも１つの第二レセプターに架橋するため
の、第二架橋剤であって、この第二レセプターが、第二ＣＤ４０レセプターおよ
び／またはＴ細胞レセプターを含む、第二架橋剤。第二レセプターは第一レセプ
ターと同じＴ細胞の表面に存在し得るが、第二レセプターはまた、別のＴ細胞の
表面に存在し得る。２つのＴ細胞表面レセプターが同一の細胞に同時に結合する
ことは、これらのうちの１つが第一ＣＤ４０レセプターであり、これはまた、上
述の効果のいずれかを及ぼし得る。

【００３４】 「第一ＣＤ４０レセプターを結合する第一薬剤」とは、本明細書中において使
用する場合に、ＣＤ４０レセプターに結合する当該分野において公知の任意の化
合物であり、例えば、ＣＤ４０リガンドおよび／または抗ＣＤ４０抗体が挙げら
れる。「第一薬剤を第二レセプターに架橋させる第二架橋剤」とは、本明細書中
において使用する場合に、ある化合物をＣＤ４０レセプターおよび／またはＴ細
胞レセプターに結合させ、そして架橋することが当該分野において公知である、
任意の化合物であり、例えば、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体、および／ま
たは抗原が挙げられる。従って、ＣＤ４０結合剤としては、Ｔ細胞上の２つ以上
の細胞表面レセプターを架橋させる分子が挙げられ、これらのうちの１つが第一
ＣＤ４０レセプターであり、他のものが第二ＣＤ４０レセプターまたはＴ細胞レ
セプターである。従って、ＣＤ４０結合剤の例としては、ＣＤ４０リガンド多量
体、固定化ＣＤ４０リガンド単量体、例えばビオチン／アビジン（ストレプトア
ビジン）結合を介して結合体化する抗ＣＤ４０抗体などが挙げられる。好ましい
ＣＤ４０リガンド多量体は、ＣＤ４０三量体である。「固定化」によって、その
薬剤が固体支持体に付着され、従ってこれが不溶性形態であることを意味する。
２つの薬剤を接続するためにリンカー部分を付着させる化学は周知であり、そし
て当該分野において通常使用される（後述の固定化に関する議論もまた参照のこ
と）。抗ＣＤ４０抗体および本明細書中に記載される他の薬剤は、市販されてい
る（例えば、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（実施例を参照のこと）。

【００３５】 好ましいＣＤ４０リガンドは、配列番号２のポリペプチドまたはその活性フラ
グメントである。「活性フラグメント」によって、ポリペプチドの活性を維持す
るポリペプチドのフラグメントを含むことを意味し、すなわち、これは、Ｔ細胞
の表面のＣＤ４０レセプターを結合し、そして本発明に従って全長ＣＤ４０ポリ
ペプチドが及ぼす効果のいずれかを及ぼす。配列番号２のポリペプチドは、配列
番号１の核酸によってコードされ得る。しかし、ＣＤ４０リガンドは、代替的に
また、ＣＤ４０リガンドポリペプチドをコードする他の単離された核酸分子によ
ってコードされるポリペプチドであり得、そして以下を含む：（ａ）配列番号１
の核酸からなる分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、そしてＣ
Ｄ４０リガンドポリペプチドをコードする、核酸分子、（ｂ）それぞれのＣＤ４
０リガンドポリペプチドをコードする（ａ）の欠失、付加および置換、（ｃ）遺
伝コードの縮重に起因して、コドン配列が（ａ）または（ｂ）の核酸分子と異な
る、核酸分子、ならびに（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の相補体。配列番号
１のホモログおよび対立遺伝子はまた、ＣＤ４０リガンドポリペプチドをコード
し得る。一般に、ホモログおよび対立遺伝子は、代表的に、配列番号１と少なく
とも４０％のヌクレオチド同一性を共有し、そして／または配列番号１によりコ
ードされるＣＤ４０リガンドポリペプチドと少なくとも５０％のアミノ酸同一性
を共有する。相同性は、インターネット（ｆｔｐ：／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ
．ｇｏｖ／ｐｕｂ／）を通して得られ得る、ＮＣＢＩ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａ
ｒｙｌａｎｄ）により開発された公共に利用可能な種々のソフトウェアツールを
使用して、計算され得る。例示的なツールとしては、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎ
ｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／で利用可能なＢＬＡＳＴシステムが挙げられ
る。ＰａｉｒｗｉｓｅおよびＣｌｕｓｔａｌＷアライメント（ＢＬＯＳＵＭ３０
マトリックス設定）ならびにＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅヒドロパシー（ｈｙ
ｄｒｏｐａｔｈｉｃ）は、ＭａｃＶｅｃｔｏｒ配列分析ソフトウェア（Ｏｘｆｏ
ｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ）を使用して、得られ得る。

【００３６】 ＣＤ４０結合剤は、Ｔ細胞においてＴ細胞レセプター遺伝子再配列を誘導する
に十分な量で、Ｔ細胞培養物に添加される。Ｔ細胞においてＴ細胞レセプター遺
伝子再配列を誘導するに「十分な量」とは、当業者によって容易に決定され得る
ＣＤ４０結合剤の量であり、そして播種されるＴ細胞の最初の数および使用され
る培養条件に依存して、変動し得る。培養用器中で最初に播種されるＴ細胞の量
は、実験の要求に従って変動し得る。理想的な量は、当業者によって、必要に従
って容易に決定され得る。使用される培養条件とは、当該分野において公知の条
件（例えば、温度、ＣＯ₂およびＯ₂の含有量、栄養培地、培養容器の型、時間の
長さなど）の組合せをいう。

【００３７】 本発明のエキソビボ部分については、本発明に従って処理されるべき単核細胞
は、被験体から得られ得る。この被験体は、悪性腫瘍またはＢ型肝炎のような感
染性疾患を罹患し得る。末梢血液または単核細胞を濃縮した集団の細胞（公知の
方法、例えばアフェレーシスを使用して得られる）を被験体から採り、そしてこ
のサンプルの一部を、抗凝固剤（例えば、ヘパリン、クエン酸ナトリウム、エチ
レンジアミン四酢酸、シュウ酸ナトリウム）と混合する。次いで、この血液−抗
凝固剤混合物を、生理学的に受容可能な溶液（例えば、塩化ナトリウム溶液また
はリン酸緩衝化溶液）で希釈する。単核細胞を、この血液−抗凝固剤組成物を遠
心分離媒体（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｃ
ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）またはＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ
Ｍｅｄｉｕｍ（Ｌｉｔｔｏｎ Ｂｉｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）
）上に層状にすることによって、回収する。次いで、この層状にした混合物を遠
心分離し、そして単核細胞を含む界面を収集し、そして洗浄する。この単核細胞
の濃度は、約０．５×１０⁶〜５．０×１０⁶細胞／ｍｌ、好ましくは１．０×１
０⁶〜２．０×１０⁶細胞／ｍｌの範囲であり得る。任意の標準的な組織培養培地
が、本発明のプロセスにおいて利用され得るが、細胞は、好ましくは、２ｍＭ
Ｌ−グルタミン、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）、ペニシリン（１０
０Ｕ／ｍｌ）、および５％熱不活化自己血漿を補充した、ＲＰＭＩ １６４０（
Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）からなる完全培地中で
培養される。濃縮単球調製物は、ＰＭＢＣをＡＥＴ処理したヒツジ赤血球でロゼ
ット化し、そしてＥロゼット化した細胞をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾
配で除去し、続いて本質的にＺｕｐｏら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９
１、２１：３５１）に記載されるように単球を冷時凝集することによって、調製
され得る。Ｔ細胞は、Ｌｙｍｐｈｏ−Ｋｗｉｋ Ｔ（Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ、Ｌ
ｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）を使用して、製造業者のプロトコルに従って、単
球、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の枯渇により、ＰＭＢＣ調製物からさらに精製され得
る。

【００３８】 特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、成熟Ｔ細胞である。本発明に従って、
「成熟」Ｔ細胞とは、完全に機能的なＴ細胞である。すなわち、このＴ細胞は、
そのＴ細胞レセプターを再配列しており、そして胸腺を出る能力を有する。成熟
Ｔ細胞の例としては、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型の細胞、ＣＤ４ ^lo ＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型の細胞、および／またはＣＤ４^hiＣＤ８^loＣ
Ｄ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型の細胞が挙げられる。多数の種々の他の成熟Ｔ細胞表現型
が存在し、そして当業者は、当該分野において周知の表現型特徴ならびに機能性
アッセイを使用して、これらを未熟な細胞から区別し得る。

【００３９】 ＣＤ４０結合剤を含むタンパク質、ペプチドおよび他の分子は、本発明の方法
に従って使用するために、固相マトリックス上に固定化され得る。これらのマト
リックスは、アガロース、ビーズ化ポリマー、ポリスチレン／ポリプロピレンの
プレートもしくはボール、多孔質ガラスもしくはスライドガラス、およびニトロ
セルロースもしくは他の膜材料であり得る。いくつかの支持体は、リガンドへの
直接の結合のために、活性化され得る。他の支持体は、求核試薬、または架橋剤
を使用してタンパク質もしくは他のリガンドに連結し得る他の官能基から作製さ
れる。

【００４０】 本発明の分子の、固体支持体への固定化は、慣用的な結合化学を使用して、達
成され得る。一般的に、本発明の化合物は、この化合物中にアクセス可能な第一
官能基（例えば、アルコール基）を含むこと、およびこの化合物を相補的な第二
官能基（例えば、カルボキシル基）を含む固体支持体に、これら第一および第二
の官能基が互いに反応して共有結合（例えば、エステル結合）を形成することを
可能にするために十分な条件下および時間で、接触させることによって、固定化
される。官能基に関して、「アクセス可能」によって、その官能基が、活性であ
り、そして立体的に固体支持体との反応から妨害されていない形態であることを
意味する。付着は、直接的または間接的（すなわち、リンカーを介する）であり
得る。

【００４１】 本発明はまた、未熟Ｔ細胞（ナイーブな胸腺細胞）の成熟を促進する際に、有
用である。この方法は、未熟Ｔ細胞を、未熟Ｔ細胞の成熟を促進するに十分な量
でＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤と接触させる工程を包含する。未熟Ｔ細胞
の成熟を促進するために「十分な量」とは、当業者により容易に決定され得、そ
してＴ細胞の最初の細胞表現型（すなわち、成熟段階）、播種されるＴ細胞の最
初の数および使用される培養条件に依存して変動可能である、ＣＤ４０結合剤の
量である。培養容器に最初に播種されるＴ細胞の量は、その実験の要求に従って
変動し得る。理想的な量は、必要性に従って、当業者により容易に決定され得る
。

【００４２】 本発明に従って、未熟Ｔ細胞は、胸腺を出得ない不完全な機能性のＴ細胞であ
る。未熟細胞の例としては、ＣＤ４⁺ＣＤ８⁺ＴＣＲ^lo、ＣＤ１１７⁺ＴＣＲ^loな
どの表現型の細胞が挙げられる。多数の種々の他の未熟Ｔ細胞表現型が存在し、
そして当業者は、当該分野において周知の表現型特徴ならびに機能性アッセイを
使用して、これらを成熟細胞から区別し得る。本発明の別の局面に従って、Ｔ細
胞の抗原に対する反応性を、エキソビボおよび／またはインビトロで誘導するた
めの方法が提供される。この方法は、ある量のＴ細胞およびある量の抗原提示細
胞を培養容器に導入する工程、ならびにこれらのＴ細胞および抗原提示細胞を、
Ｔ細胞においてＴ細胞レセプター遺伝子再配列を誘導するに十分な量でＣＤ４０
を結合するＣＤ４０結合剤および少なくとも１種の抗原の存在下で、この少なく
とも１種の抗原に対する特異性を有するＴ細胞の形成を誘導するに十分な条件下
で、共存培養する工程を包含する。１種以上の前述の抗原が、培養容器中でのイ
ンキュベーションのために、同時に使用され得る。前述の条件は、過度の実験な
しに、当業者によって容易に確立され得る（Ｓｐｒｅｎｔ Ｊら、Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｔｈｅｒ、１９９８、２１（３）：１８１〜１８７；Ｂｅｒｒｉｄｇｅ Ｍ
Ｊ、Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９７、１７（２）：１５５〜１７
８；Ｏｗｅｎ ＭＪら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９６、８（
２）：１９１〜１９８；Ｗｈｉｔｆｉｅｌｄ ＪＦら、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、１９７９、２７（３）：１５５〜１７９；Ｆａｕｃｉ ＡＳら、Ａ
ｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ、１９８３、９９（１）：６１〜７５もまた参照の
こと）。ＡＰＣ、およびＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤の存在下での、Ｔ細
胞の抗原刺激は、Ｔ細胞レセプター遺伝子再配列および抗原特異的な応答を誘導
し、これは、増殖アッセイを使用して、またはＩＬ−２生成を単に測定すること
によって、測定され得る（以下の議論を参照のこと）。これらの細胞は、Ｔ細胞
を、抗原と共に、適切な濃度（例えば、０．１〜１．０μＭ破傷風トキソイド）
で、ＡＰＣの存在下で培養することによって、検出され得る。抗原特異的なＴ細
胞が存在する場合には、これらは、当該分野において周知のアッセイ（例えば、
放射性アッセイ、または市販されている非放射性のＥＬＩＳＡに基づくアッセイ
（例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））を使用して、検出され得
る。

【００４３】 ＡＰＣ、およびＣＤ４０を結合するＣＤ４０結合剤の存在下での、Ｔ細胞の刺
激は、副刺激剤での副刺激を誘導し得る。副刺激剤としては、ＴＳＡ−１、ＣＤ
２、ＣＤ５、ＣＤ２４、ＣＤ２８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１およびＣＤ
８６、ならびにＩＬ−２およびＩＬ−４のようなサイトカインが挙げられる。副
刺激剤はまた、ＭＨＣクラスＩＩ分子および抗ＣＤ３抗体が副刺激剤で副刺激さ
れるならば、ＡＰＣの代わりに使用され得る。従って、多数の抗原特異的な成熟
Ｔ細胞が得られ得る。従って、本発明は、広範にわたる応用において有用となる
。この応用としては、個体のインビトロでプライミングされたＴ細胞での曝露前
のワクチン化、腫瘍標的性Ｔ細胞の免疫治療を使用する、癌被験体の処置、骨髄
移植被験体の処置（この被験体について、ＣＭＶのような日和見感染が問題であ
り、そしてＣＭＶ標的性細胞傷害性リンパ球のような標的Ｔ細胞での処置に依然
として影響を受けやすい）、Ｔ細胞アジュバント治療による従来のワクチン化効
力の増強、緊急の病原体または再緊急の病原体の突発の処置などが挙げられる。
抗原提示細胞としては、樹状細胞、単球／マクロファージ、ランゲルハンス細胞
、クッパー（Ｋｕｐｆｅｒ）細胞、ミクログリア、肺胞マクロファージのような
細胞が挙げられ、そしてこれらを単離するための方法は、当該分野において周知
である。胸腺細胞ならびに抗原提示細胞はまた、造血前駆細胞からインビトロで
誘導され得る。

【００４４】 上述のように、本発明の方法に従って使用され得る抗原としては、病原体およ
び癌抗原に特徴的である抗原が挙げられる。

【００４５】 腫瘍抗原に特徴的である抗原は、代表的に、腫瘍組織の細胞の細胞表面、細胞
質、核、細胞小器官などに由来する。例としては、腫瘍タンパク質に特徴的な抗
原（成熟癌遺伝子によりコードされるタンパク質を含む）；腫瘍に関連するウイ
ルス性タンパク質に特徴的な抗原；ならびに腫瘍ムチンおよび糖脂質に特徴的な
抗原が挙げられる。腫瘍としては、以下の癌の部位および癌の型に由来の腫瘍が
挙げられるが、これらに限定されない：唇、鼻咽頭、咽頭腔および口腔、食道、
胃、結腸、直腸、肝臓、胆嚢、胆管樹枝状分枝（ｔｒｅｅ）、膵臓、喉頭、肺お
よび気管支、皮膚の黒色腫、乳房、頸、子宮（ｕｔｅｒｉ）、子宮（ｕｔｅｒｕ
ｓ）、卵巣、膀胱、腎臓、脳および神経系の他の部分、甲状腺、前立腺、精巣、
ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫および白血病。腫瘍に関連する
ウイルスタンパク質は、上記のウイルスのクラスに由来するものである。腫瘍に
特徴的な抗原は、腫瘍前駆細胞によって通常は発現されないタンパク質であり得
るか、または腫瘍前駆細胞において通常発現されるが腫瘍に特徴的な変異を有す
るタンパク質であり得る。腫瘍に特徴的な抗原は、変化した活性または亜細胞分
布を有する正常なタンパク質の変異改変体であり得る。腫瘍抗原を引き起こす遺
伝子の変異は、上記で特定したものに加えて、コード領域、５’もしくは３’非
コード領域、または遺伝子のイントロンであり得、そして点変異、フレームシフ
ト、欠失、付加、重複、染色体再配列などの結果であり得る。当業者は、腫瘍抗
原を引き起こす、広範な種々の正常な遺伝子構造および発現の変化を熟知してい
る。腫瘍抗原の特定の例としては、以下が挙げられる：Ｂ細胞リンパ腫のＩｇイ
ディオタイプ、黒色腫の変異サイクリン依存性キナーゼ４、黒色腫のＰｍｅｌ−
１７（ｇｐ１００）、黒色腫のＭＡＲＴ−１（Ｍｅｌａｎ−Ａ）、黒色腫のｐ１
５タンパク質、黒色腫のチロシナーゼ、黒色腫のＭＡＧＥ１、ＭＡＧＥ２および
ＭＡＧＥ３、甲状腺髄質、小細胞肺癌、結腸および／または気管支炎扁平上皮細
胞癌、膀胱のＢＡＧＥ、黒色腫、乳房、ならびに扁平上皮細胞癌、黒色腫のｇｐ
７５、黒色腫の腫瘍胎児抗原；乳癌、膵臓癌、および卵巣癌のｍｕｃ１ムチンの
ような炭水化物／脂質、黒色腫のＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド；癌の変異
ｐ５３のような癌遺伝子、結腸癌の変異ｒａｓおよび乳癌のＨＥＲ−２／ｎｅｕ
癌原遺伝子；頸部および食道の扁平上皮細胞癌のヒトパピローマウイルスタンパ
ク質のようなウイルス産物。タンパク質の腫瘍抗原が、ＨＬＡ分子によって、タ
ンパク質全体由来の特異的ペプチドとして提示され得ることもまた、意図される
。抗原ペプチドを得るためのタンパク質の代謝プロセシングは、当該分野におい
て周知である；例えば、米国特許第５，３４２，７７４号（Ｂｏｏｎら）を参照
のこと。

【００４６】 本発明の好ましい腫瘍抗原には、黒色腫腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥタンパク
質ファミリー（ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３）；ＭＡＲＴ−１（
ペプチド２７〜３５）；およびｇｐ１００）；ならびに結腸癌腫抗原（例えば、
変異ＡＰＣ遺伝子産物のペプチド）が挙げられる。特に好ましい黒色腫腫瘍抗原
配列は、Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．
，１９９４、６：７３３−７４０によって報告された配列である。

【００４７】 種々の「培養容器」が、本発明に従って使用され得る。市販されるインキュベ
ーション容器には、以下が挙げられる：攪拌フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ
．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）、攪拌タンクリアクター（Ｖｅｒａｘ，Ｌｅｂａｎ
ｏｎ，ＮＨ、エアリフトリアクター、懸濁細胞リアクター、細胞吸着リアクター
および細胞エントラップメントリアクター（ｃｅｌｌ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ
ｒｅａｃｔｏｒ）、ペトリプレート、マルチウェルプレート、フラスコ、バック
およびホローファイバーデバイス、Ｃｅｌｌｆｏａｍ（Ｃｙｔｏｍａｔｒｉｘ，
Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）、マキシソーブ（ｍａｘｉｓｏｒｂ）プレート（ＮＵＮＣ
）、および細胞培養系（例えば、Ａａｓｔｒｏｍ Ｃｅｌｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉ
ｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｐａｌｓｓｏｎらに発行された米国特許第５，６３５，３
８６号、題名「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃ ｌｉｎｅａｇｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ
ａ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ」、
そしてＥｍｅｒｓｏｎらに発行された米国特許第５，６４６，０４３号、題名「
Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘ ｖｉｖｏ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ／ｏｒ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ」もまた参照のこと）
。一般的に、上記の培養容器を用いた細胞培養は、攪拌（ｓｔｉｒｒｉｎｇ）、
攪拌（ａｇｉｔａｔｉｏｎ）またはビーズによる懸濁を含む種々の技術によって
懸濁液中で保持される。一般的に、そのような容器は、１つ以上の以下の成分で
形成される：ポリスチレン、ポリプロピレン、アクリル、ナイロン（登録商標）
およびガラス。

【００４８】 上記に列挙した不溶性マトリックスは、本発明の化合物の付着のための官能基
をそれ自身では保持せず、従って活性化として公知のプロセスで化学的に改変さ
れなければならない。例えば、ポリスチレンは、フェニル残基のクロロメチル化
を活性化し（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃａｔａｌｏ
ｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ
＆ Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ．Ｖ
ＣＨ Ｗｅｉｎｈｅｉｍ編 Ｇｉｕｎｔｈａ Ｊｕｎｇ−１９９６−第１６およ
び１７章）、クロロメチルポリスチレンを生じ得る。次いで、反応性塩化ベンジ
ル官能器を利用してカルボキシレート基、アミノ基、ヒドロキシル基、マレイミ
ド基、スルフィドリル基、Ｎ−スクシンイミジル基、ならびに他の官能基を導入
得る。次いで、官能基の導入は、直接またはリンカースペーサー単位を通じての
いずれかで本発明の化合物に共有付着することを可能にする化学を実施すること
を可能にする。連結反応は、マトリックス上の適合性の官能基、および本発明の
化合物に付着しているかもしくは付着する、リガンドまたはスペーサー−リンカ
ー基を必要とする。例えば、マトリックス上のカルボキシレート基の導入は、遊
離アミノ基の共有結合を可能にする。

【００４９】 そのような結合を導く化学は、周知であり、そしてＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌのような企業の（活性化されたマトリックスおよび活性化されていないマ
トリックス、ならびにリンカー−スペーサー分子の両方を販売する）カタログの
中を含む種々の情報源に記載される。他の供給者には、例えば中でも、Ｓｉｇｍ
ａ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍが挙げられる。上記のようにポリスチレンに対する
リガンドであるが上記に列挙した他の物質に対して特異的なリガンドを付着する
方法は、利用可能であり、周知であり、そして上記の情報源およびＩｍｍｏｂｉ
ｌｉｚｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｌｉｇａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．「Ａｌ
ｌ ｔｈｅ ‘ｒｅｃｉｐｅｓ’ ｆｏｒ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ａｆｆｉｎ
ｉｔｙ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ」；Ｓｈａｎ Ｓ．Ｗｏｕｇに
よるＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａ
ｎｄ Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇのような情報源に記載される。

【００５０】 アビジン−ビオチン化学は、同じ最終結果（本発明の化合物の不溶性マトリッ
クスへの付着）を達成する別の方法を提供する。ビオチンは、例えば、ＣＤ−４
０結合剤に容易に付着し得、そして生じた結合体は、アビジンまたはストレプト
アビジンに対して高い親和性で接着する。不溶化された、アビジンおよびストレ
プトアビジンの誘導体の広い取り合わせが、市販されている（Ａｖｉｄｉｎ−Ｂ
ｉｏｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
ｂｙ Ｐｉｅｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ａｓｓｉｓｔａｎｃｅ ｅｘｐｅ
ｒｔｓ）。

【００５１】 本発明のさらに別の局面に従って、Ｔ細胞レセプター遺伝子再編成を阻害する
ための方法が提供される。この方法は、ＣＤ４０発現Ｔ細胞をＣＤ４０誘導Ｔ細
胞レセプター再編成を阻害する薬剤と接触させることを含む。特定の実施形態に
おいて、ＣＤ−４０誘導Ｔ細胞レセプター再編成を阻害する薬剤には、抗ＣＤ４
０リガンド抗体、抗ＣＤ４０リガンド抗体のフラグメントもしくは誘導体、可溶
性ＣＤ４０リガンドアンタゴニスト、融合ＣＤ４０リガンドタンパク質の可溶性
形態、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンド相互作用を崩壊するかまたは妨げる薬剤、Ｎ
Ｆ−κＢインヒビター、および／またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる
。「可溶性ＣＤ４０リガンドアンタゴニスト」は、リンパ球の表面上のＣＤ４０
に結合する可溶性リガンドをいい、そして天然のリガンド（ＣＤ４０リガンド）
がＣＤ４０に結合することを妨げ、例えばＴ細胞レセプター遺伝子再編成を導く
細胞内シグナル伝達を防ぐ。例えば、細胞表面上に位置するヒトＣＤ４０に結合
し得る非刺激性アンタゴニストのモノクローナル抗体は、ＷＯ９４／０１５４７
に記載される。さらに、ＣＤ４０シグナルは、核因子ＮＦ−κＢを通じて媒介さ
れる（Ｐｏｅ Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７、１５９：８４６
−５２；Ｓｅｅｔｈａｒａｍａｎ Ｒ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９
９，１６３：１５７７−１５８３）。従って、「ＮＦ−κＢインヒビター」は、
ＣＤ４０媒介シグナルを阻害する際に有用であり、そして単独またはＣＤ−４０
誘導Ｔ細胞レセプター再編成を阻害する上記のいずれかの薬剤との組合せで使用
され得る。ＮＦ−κＢインヒビターは、当該分野で周知であり、そしてＩκＢα
スーパーリプレッサー、クルクミン、フェニルアルシンオキシド、ＳＮ−５０、
アクロレイン、セラミド、フラボノイド（例えば、ミリセチン）などが挙げられ
るが、これらに限定されない。本発明に従う好ましいＮＦ−κＢインヒビターは
、天然に存在するＮＦ−κＢインヒビターＩκＢαスーパーリプレッサーである
（Ｂｏｏｔｈｂｙ Ｍら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８５：１８９７
−１９０７；Ｓｅｅｔｈａｒａｍａｎ Ｒ．，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，
１９９９，１６３：１５７７−１５８３）。このＩκＢスーパーリプレッサーｃ
ＤＮＡは、好ましくは、発現ベクターに組み込まれる。好ましいこのような発現
ベクターは、アデノウイルスベクターである。（例えば、ＡＤＶ ＩκＢα Ｓ
３２Ａ／Ｓ３６Ｅ：Ｃｈｕ Ｚ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ １９９７，９４，１００５７−１００６２を参照のこと）。Ｔ細胞レセ
プター再編成のインヒビターは、特定の抗原に対するＴ細胞親和性成熟の阻害を
生じる。Ｔ細胞親和性成熟の、特に自己抗原に対するそのような阻害は、自己免
疫疾患を含む多くの障害において望ましい。本明細書中で使用される場合、「自
己免疫疾患」は、被験体の免疫系が自身の器官または組織を攻撃する場合に、そ
の組織の破壊と関連する臨床状態の発生を生じる。これは、以下のような疾患に
よって例示される：慢性関節リウマチ、ブドウ膜炎、インスリン依存性真性糖尿
病、溶血性貧血、リウマチ熱、クローン病、ギヤン−バレー症候群、乾癬、甲状
腺炎、グレーブス病、重症筋無力症、糸球体腎炎、自己免疫肝炎、多発性硬化症
、全身性エリテマトーデスなど。自己免疫疾患は、遺伝的素因単独によってか、
特定の外因性薬剤（例えば、ウイルス薬剤、細菌薬剤、化学薬剤なと）によって
か、または両方によって生じ得る。自己免疫のいくつかの形態は、通常リンパ球
に曝露されていない領域（例えば、神経組織または目のレンズ）への外傷の結果
として生じる。これらの領域における組織がリンパ球に曝露された場合、これら
の表面タンパク質は、抗原としてはたらき得、そして抗体の産生および次いでこ
れらの組織を破壊し始める細胞性免疫応答誘因する。他の自己免疫疾患は、被験
体自身の組織に抗原性に類似である（すなわち、被験体の組織と交差反応性）抗
原への被験体の曝露の後に発生する。例えば、リウマチ熱において、リウマチ熱
を引き起こす連鎖球菌系の細菌の抗原は、ヒト心臓の部分と交差反応性である。
抗体は、細菌抗原と心筋抗原との間で区別し得ず、その結果これらの抗原のいず
れかを有する細胞は、破壊され得る。

【００５２】 他の自己免疫疾患、例えば、インスリン依存性真性糖尿病（ランゲルハンス島
のインスリン産生β細胞の破壊を含む）、多発性硬化症（神経系の伝達線維（ｃ
ｏｎｄｕｃｔｉｎｇ ｆｉｂｅｒ）の破壊を含む）、および慢性関節リウマチ（
関節内層（ｊｏｉｎｔ−ｌｉｎｉｎｇ）組織の破壊を含む）は、ほとんどが細胞
媒介自己免疫応答の結果であるとして特徴付けられ、そして主にＴ細胞の作用に
起因するようである（Ｓｉｎｈａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９０，２４８：１３
８０を参照のこと）。しかし、重症筋無力症、全身性エリテマトーデスのような
別のものは、主に体液性自己免疫応答の結果であるとして特徴づけられる。それ
にもかかわらず、本発明に従う任意の上記の条件に関与するＴ細胞レセプター再
編成阻害は、特定の抗原に対するＴ細胞親和性成熟の阻害が炎症性応答の増大を
妨げて関与する特定の部位（例えば、組織）を「自己損傷」から保護するので、
（そのような治療が必要な）被験体に対して有利である。好ましい実施形態にお
いて、被験体は、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、またはブドウ膜炎を有する
。特定の実施形態において、自己免疫障害には、以下が挙げられる：慢性関節リ
ウマチ、ブドウ膜炎、インスリン依存性真性糖尿病、溶血性貧血、リウマチ熱、
クローン病、ギヤン−バレー症候群、乾癬、甲状腺炎、グレーブス病、重症筋無
力症、糸球体腎炎、自己免疫肝炎、全身性エリテマトーデス。さらなる実施形態
において、被験体は、多発性硬化症、膿瘍、移殖片（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、
移殖片（ｉｍｐｌａｎｔ）、アテローム性動脈硬化および／または心筋炎を有す
る。

【００５３】 さらなる局面において、本発明は、ＣＤ４０を天然に発現し（すなわち、ＣＤ
４０含有ベクターでＣＤ４０トランスフェクトされていない）かつ他の点では細
胞死を誘導するのに十分な環境ストレス下のＴ細胞の環境ストレス誘導細胞死を
阻害するための方法を提供し、これは、Ｔ細胞を、Ｔ細胞の死（さもなければそ
の環境ストレスから生じる）を阻害するに十分な量で、ＣＤ４０に結合しかつＴ
細胞レセプター遺伝子再編成を上昇するＣＤ４０結合剤と接触させることによる
。ＣＤ４結合剤が「Ｔ細胞の死を阻害する」能力は、Ｔ細胞の寿命の変化によっ
て評価される。環境ストレス下における細胞の寿命は、そのようなストレスが無
い条件下における細胞の寿命と比較した場合、有意により短い。これは、多数の
細胞を環境ストレスの形態下に置き、そしてそれらの生存率（数）を期間中いず
れのストレスも無かった同一の数の細胞と比較することによって容易に検出され
得る。本明細書中で使用される場合、「寿命」とは、哺乳動物細胞（例えば、Ｔ
細胞）のその形成から（前駆細胞から）その死までの平均生存の時間に関して記
載することを意味する。平均寿命は、例えば、循環におけるヒトの赤血球は、平
均１２０日である。そのような細胞に適用される（十分に厳しい）いずれの型の
環境ストレスは、この平均寿命を減少するようである。Ｔ細胞におけるＴ細胞レ
セプター遺伝子再編成を増加しかつ細胞死を阻害するに十分な本発明の前述のＣ
Ｄ４０結合剤の量は、本発明のＣＤ４０結合剤を接触せずに細胞が生存する時間
を超え、かついずれかの環境ストレスもない細胞に匹敵する寿命の長さにむかっ
て、環境ストレス下において哺乳動物の生存を延長するために十分な量である。
環境ストレス下における細胞の寿命の長さは、当業者によって容易に決定され得
、そして細胞型およびその成熟段階、本来播種された細胞数、培養条件、使用さ
れる環境ストレスの型などに依存して変化する。そのような方法は、温度の上昇
（例えば、熱）、身体的外傷、酸化、浸透ならびに化学的ストレス（ＵＶおよび
γ照射）のような環境の襲撃から細胞を保護するために使用され得る。従って、
用語「Ｔ細胞の死を阻害する」とは、本明細書中で使用される場合、同様の条件
下における別のＴ細胞に関連する、Ｔ細胞の寿命を増大するための能力をいう。

【００５４】 別の局面において、本発明は、環境ストレス誘導Ｔ細胞死を増強するための方
法を提供する。この方法は、ＣＤ４０を天然に発現する（すなわち、ＣＤ４０が
トランスフェクトされていない）Ｔ細胞を、Ｔ細胞レセプター遺伝子再編成を誘
導しかつ細胞死誘導刺激（すなわち、環境ストレス）に対して細胞を敏感にさせ
るに十分な量でＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合剤と接触させることを含む。Ｃ
Ｄ−４０結合剤が、細胞死誘導刺激（例えば、環境ストレス）に供された場合に
Ｔ細胞に結合したこと、Ｆａｓ媒介細胞死が増強されることは、予期せずに発見
された。このような方法は、自己免疫障害を含む種々の状態の処置において（自
己反応性Ｔ細胞を排除することによる）、ならびにＴ細胞リンパ腫の処置におい
て（増殖性Ｔ細胞を排除することによる）有用である。特定の実施形態において
、そして特に前述の状態の処置において、環境ストレスは、化学的性質である。
本発明に従って使用される好ましい化学薬剤は、抗癌剤である。抗癌剤としては
、開示される以下が挙げられる：Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ
（Ｐａｕｌ ＣａｌａｂｒｅｓｉおよびＢｒｕｃｅ Ａ．Ｃｈａｂｎｅｒ）第５
２章、およびこれに対する導入（１２０２−１２６３）、Ｇｏｏｄｍａｎおよび
Ｇｌｉｍａｎの「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、英語版、１９９０、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ
Ｉｎｃ．（Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）であり
、参考として本明細書中に援用され、そして本明細書中以後「Ｃａｌａｂｒｅｓ
ｉ ａｎｄ Ｃｈａｂｎｅｒ ｉｎ Ｇ ＆ Ｇ」という。適切な化学療法剤は
、種々の作用機構を有し得る。適切な化学治療剤のクラスには、以下が挙げられ
る：（ａ）以下のようなアルキル化剤：ナイトロジェンマスタード（例えば、メ
クロレタミン、シクロホスファミド（ｃｙｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、イホ
スファミド、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン（ｅｔｈｙｌｅ
ｎｉｍｉｎｅ）およびメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテ
パ）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、ニトロソ尿素類（例え
ば、ＢＣＮＵとしてもまた公知のカルムスチン、（メチル−ＣＣＮＵとしてもま
た公知の）ＣＣＮＵセムスチンとしてもまた公知のロムスチン、クロロゾトシン
、ストレプトゾシン）、ならびにトリアジン（例えば、ＤＴＩＣとしてもまた公
知のジカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ））；（ｂ）以下のような代謝拮抗
物質：葉酸アナログ（例えば、メトトレキサート）、ピリミジンアナログ（例え
ば、５−フルオロウラシルフロクスウリジン、シタラビン、そしてアザウリジン
（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）およびそのプロドラッグ形態のアザリビン、ならびに
プリンアナログおよび関連物質（例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグア
ニン、ペントスタチン）；（ｃ）以下のような天然産物：ビンカアルカロイド類
（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、エピポドフィロトキシン（ｅｐ
ｉｐｏｄｏｐｈｙｌｏｔｏｘｉｎ）（例えば、エトポシド、テニポシド）、抗生
物質（例えば、アクチノマイシンＤとしてもまた公知のダクチノマイシン、ダウ
ノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシ
ン、４−エピドキソルビシン（ｅｐｉｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）であるエピルビ
シン、４−ジメトキシダウノルビシンであるイダルビシンおよびミトキサントロ
ン（ｍｉｔｏｘａｎｔｈｒｏｎｅ））、酵素（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）
、ならびに生物学的応答改変因子（例えば、インターフェロンα）；（ｄ）以下
のような多方面にわたる薬剤（Ｍｉｓｃｅｌｌａｎｅｏｕｓ Ａｇｅｎｔ）：プ
ラチナ配位錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、置換された尿素（
例えば、ヒドロキシ尿素）、メチルヒドラジン（ｍｅｔｈｙｌｈｙｄｉａｚｉｎ
ｅ）誘導体（例えば、プロカルバジン）、副腎皮質（ａｄｒｅｏｃｏｒｔｉｃａ
ｌ）抑制剤（例えば、ミトーテン、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅ
ｔｈｉｍｉｄｅ））タキソール；そして（ｅ）以下のようなホルモンならびにア
ンタゴニスト：副腎皮質ステロイド（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉ
ｄ）（例えば、プレドニゾンなど）、プロゲスチン（例えば、ヒドロキシプロゲ
ステロンカプロエート、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール）
、エストロゲン（例えば、ジエチルエスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｅｓｔ
ｉｌｂｅｓｔｒｏｌ）、エチニルエストラジオールなど）、抗エストロゲン（例
えば、タモキシフェン）、アンドロゲン（例えば、プロピオン酸テストステロン
、フルオキシメステロンなど）、抗アンドロゲン（例えば、フルタイミド）なら
びに性腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログ（例えば、ロイプロリド）。

【００５５】 他の改善された抗癌剤には、以下が挙げられる： アシビシン；アクラルビシン；アコダゾールハイドロクロライド；アクロニン；
アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕ
ｋｉｎ）；アルトレタミン；アンボマイシン；アメタントロンアセテート；アム
ザクリン；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アントラマイシン；
アスペルリン（ａｓｐｅｒｌｉｎ）；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン
；バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）；ベンゾデパ；ビカルタミド（ｂｉ
ｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）；ビサントレンハイドロクロライド；ビスナフィドジメ
シレート（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ ｄｉｍｅｓｙｌａｔｅ）；ビゼレシン（ｂｉｚ
ｅｌｅｓｉｎ）；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；カクチノマイシン；カ
ルステロン；カラセミド；カルベチマー；塩酸カルビシン；カルゼレシン（ｃａ
ｒｚｅｌｅｓｉｎ）；セデフィンゴール（ｃｅｄｅｆｉｎｇｏｌ）；シロレマイ
シン；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；クリスナトールメシレート（ｃ
ｒｉｓｎａｔｏｌ ｍｅｓｙｌａｔｅ）；カルバジン；デシタビン；デキソルマ
プラチン（ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン；デザグアニンメシレ
ート；ジアジキオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘ
ｅｌ）；ドロキシフェン；ドロキシフェンシトレート；ドロモスタノロン（ｄｒ
ｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）プロピオネート；ズアゾマイシン；エダトレキサー
ト；エフロルニチン（ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）ハイドロクロライド；エルサ
ミトルシン；エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；エンプロマート；エピ
プロピジン；エルブロゾール；エソルビシンハイドロクロライド；エストラムス
チン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトプリン；ファ
ドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）ハイドロクロライド；ファザラビン；フェン
レチニド；フロクスウリジン；フルダラビンホスフェート；フルロシタビン；ホ
スキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビンハイドロク
ロライド；ヒドロキシ尿素；イルモホシン；インターフェロンα−２ａ；インタ
ーフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；
インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン（ｉｐ
ｒｏｐｌａｔｉｎ）；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）ハイドロクロライ
ド；ランレオチド（ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ）アセテート；レトロゾール（ｌｅｔ
ｒｏｚｏｌｅ）；リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）ハイドロクロライド；ロ
メトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）ナトリウム；ロソキサントロン（ｌｏ
ｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）ハイドロクロライド；マソプロコール；メイタンシン（
ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）；メゲストロールアセテート；メレンゲストロールアセ
テート；メノガリル；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；
ミトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）；ミトギリン；ミトマルシン；ミトスペ
ル；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキ
シスラン；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）；ペリオマイシン；
ペンタムスチン；硫酸ペプレオマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ ｓｕｌｆａｔ
ｅ）；パーフォスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ピポブロマン；ピポ
スルファン；ピロキサントロンハイドロクロライド；プロメスタン（ｐｌｏｍｅ
ｓｔａｎｅ）；ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム；ポルフィロマイ
シン；プレドニムスチン；プロマイシン；プロマイシンハイドロクロライド；ピ
ラゾフリン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）；リボプリン；ログレチミド（ｒｏｇｌ
ｅｔｉｍｉｄｅ）；サフィンゴール（ｓａｆｉｎｇｏｌ）；サフィンゴールハイ
ドロクロライド；シムトラゼン；スパルフォゼート（ｓｐａｒｆｏｓａｔｅ）ナ
トリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウムハイドロクロライド；スピロ
ムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；スロフェヌル；タリソマイシ
ン；テコガラン（ｔｅｃｏｇａｌａｎ）ナトリウム；テガフール；テロキサント
ロン（ｔｅｌｏｘａｎｔｒｏｎｅ）ハイドロクロライド；テモポルフィン（ｔｅ
ｍｏｐｏｒｆｉｎ）；テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）；テストラクトン
；チアミプリン；チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）；チラパズアミン（ｔ
ｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）；トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）ハイドロクロラ
イド；トレミフェンシトレート；トレストロンアセテート；トリシリビンホスフ
ェート；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリ
ン；ツブロゾールハイドロクロライド；ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ ｍ
ｕｓｔａｒｄ）；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン（ｖｅｒｔｅｐｏ
ｒｆｉｎ）；ビンデシン；ビンデシンサルフェート；ビネピジンサルフェート；
ビングリシナートサルフェート；ビンロイロシンサルフェート；ビノレルビンタ
ートレート；ビンロシジンサルフェート；ビンゾリジンサルフェート；ボロゾー
ル（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシンハイドトク
ロライド。

【００５６】 開発の下での他の抗癌剤としては、以下が挙げられる：２０−エピ−１，２５
ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン（ａｂｉｒａ
ｔｅｒｏｎｅ）；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール（ａｄｅｃ
ｙｐｅｎｏｌ）；アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（
ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン（ａ
ｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）；アンバムスチン（ａｍｂａｍｕｓｔｉｎｅ）；アミド
ックス（ａｍｉｄｏｘ）；アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）；アミノレブ
リン酸；アムルビシン（ａｍｒｕｂｃｉｎ）；アムサクリン；アナグレリド（ａ
ｎａｇｒｅｌｉｄｅ）；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アンド
ログラホリド（ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ）；血管新生インヒビター；ア
ンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）
；抗背方化形態発生タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｒｓａｌｏｚｉｎｇ ｍｏｒ
ｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗
エストロゲン；アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎ）；アン
チセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝
子モジュレーター；アポトーシスレギュレーター；アプリン酸；アラ−ＣＤＰ−
ＤＬ−ＰＲＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎ
ｅ）；アタメスタン（ａｔａｍｅｓｔａｎｅ）；アトリムスチン（ａｔｒｉｍｕ
ｓｔｉｎｅ）；アキシナスタチン（ａｘｉｎａｓｔａｔｉｎ）１；アキシナスタ
チン２；アキシナスタチン３；アザセトロン（ａｚａｓｅｔｒｏｎ）；アザトキ
シン（ａｚａｔｏｘｉｎ）；アザチロシン；バッカチン（ｂａｃｃａｔｉｎ）Ｉ
ＩＩ誘導体；バラノール（ｂａｌａｎｏｌ）；バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓ
ｔａｔ）；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウ
ロスポリン；βラクタム誘導体；β−アレシン（ｂｅｔａ−ａｌｅｔｈｉｎｅ）
；βクラマイシン（ｂｅｔａｃｌａｍｙｃｉｎ）Ｂ；ボツリン酸；ｂＦＧＦイン
ヒビター；ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）；ビサントレン（ｂｉｓ
ａｎｔｒｅｎｅ）；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド（ｂｉｓｎａｆ
ｉｄｅ）；ビストラテン（ｂｉｓｔｒａｔｅｎｅ）Ａ；ビゼレシン（ｂｉｚｅｌ
ｅｓｉｎ）；ブレフレート；ブロプリミン（ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ）；ブドチ
タン（ｂｕｄｏｔｉｔａｎｅ）；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオー
ル（ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ）；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カ
ナリア痘瘡ＩＬＬ−２；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；カルボキ
シアミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓ
ｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ ７００；軟骨誘導性インヒビター；カルゼレシン（ｃａｒ
ｚｅｌｅｓｉｎ）；カゼインキナーゼインヒビター（ＩＣＯＳ）；カスタノスペ
ルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｉｎｅ）；セクロピン（ｃｅｃｒｏｐｉｎ）
Ｂ；セトロレリックス（ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）；クロリン；クロロキノキサリ
ンスルホンアミド；シカプロスト（ｃｉｃａｐｒｏｓｔ）；シス−ポルフィリン
；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；クロミフェンアナログ；クロトリマ
ゾール；コリズマイシンＡ（ｃｏｌｌｉｓｍｙｃｉｎ Ａ）；コリズマイシンＢ
（ｃｏｌｌｉｓｍｙｃｉｎ Ｂ）；コンブレタスタチンＡ４（ｃｏｍｂｒｅｔａ
ｓｔａｔｉｎ Ａ４）；コンブレタスタチンアナログ；コナゲニン（ｃｏｎａｇ
ｅｎｉｎ）；クランベスシジン８１６（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ ８１６）；
クリスナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ）；クリプトフィシン８（ｃｒｙｐｔｏｐ
ｈｙｃｉｎ ８）；クリプトフィシンＡ誘導体；キューラシンＡ（ｃｕｒａｃｉ
ｎ Ａ）；シクロペンタアントラキノン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕ
ｉｎｏｎｅｓ）；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン（
ｃｙｐｅｍｙｃｉｎ）；シタラビンオクフォスフェート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ
ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）；細胞溶解因子；サイトスタチン（ｃｙｔｏｓｔａｔｉ
ｎ）；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）；デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂ
ｉｎｅ）；デヒドロジデミンＢ（ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｍｉｎ Ｂ）；デスロ
レリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）；デキシフォスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｔｆ
ａｍｉｄｅ）；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）；デクスベラパミ
ル；ジアジキノン；ジデミニンＢ（ｄｉｄｅｍｎｉｎ Ｂ）；ジドックス（ｄｉ
ｄｏｘ）；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタ
キソール、９−；ジオキサマイシン（ｄｉｏｘａｍｙｃｉｎ）；ジフェニルスピ
ロムスチン（ｄｉｐｈｅｎｙｌ ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎ）；ドコサノール；ド
ラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン（
ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ（ｄｕｏ
ｃａｒｍｙｃｉｎ ＳＡ）；エブセレン（ｅｂｓｅｌｅｎ）；エコムスチン（ｅ
ｃｏｍｕｓｔｉｎｅ）；エデルフォシン（ｅｄｅｌｆｏｓｉｎｅ）；エドレコロ
マブ（ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）；エフロルニチン；エレメン（ｅｌｅｍｅｎｅ
）；エミテファー（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）；エピルビシン；エプリステリド（ｅｐ
ｒｉｓｔｅｒｉｄｅ）；エストラムスチンアナログ；エストロゲンアゴニスト；
エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール（ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）；エ
トポシドホスフェート；エクセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）；ファドロゾ
ール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）；ファザラビン（ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）；フェン
レチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｄｅ）；フィルグラスチム；フィナステリド（ｆｉ
ｎａｓｔｅｒｉｄｅ）；フラボピリドール；フレゼラスチン（ｆｌｅｚｅｌａｓ
ｔｉｎｅ）；フルアステロン（ｆｌｕａｓｔｅｒｏｎｅ）；フルダラビン（ｆｌ
ｕｄａｒａｂｉｎｅ）；塩酸フルオロダウノルビシン；フォルフェニメクス（ｆ
ｏｒｆｅｎｉｍｅｘ）；フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｅ）；フォストリ
エシン（ｆｏｓｔｒｉｅｃｉｎ）；フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）
；ガドリニウムテキサフィリン；亜硝酸ガリウム；ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉ
ｔａｂｉｎｅ）；ガニレリックス（ｇａｎｉｒｅｌｉｘ）；ゼラチナーゼインヒ
ビター；ゲンシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；グルタチオンインヒビター
；ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）；ヘレグリン（ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）
；ヘキサメチレンビスアセタミド；ヒペリシン；イバンドロニック酸（ｉｂａｎ
ｄｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；イダルビシン；イドキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎ
ｅ）；イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）；イリモフォシン（ｉｌｍｏ
ｆｏｓｉｎｅ）；イロマスタット（ｉｌｏｍａｓｔａｔ）；イミダゾールアクリ
ドン；イミキモッド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）；免疫刺激ペプチド；インスリン様
増殖因子−１レセプターインヒビター；インターフェロンアゴニスト；インター
フェロン；インターロイキン；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）；ヨー
ドドキソルビシン；イポメアノール（ｉｐｏｍｅａｎｏｌ）、４−；イリノテカ
ン；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；イロソグラジン（ｉｒｓｏｇｌａｄｉ
ｎｅ）；イソベンガゾール（ｉｓｏｂｅｎｇａｚｏｌｅ）；イソホモハリコンド
リンＢ（ｉｓｏｈｏｍｏｈａｌｉｃｏｎｄｒｉｎ Ｂ）；イタセトロン（ｉｔａ
ｓｅｔｒｏｎ）；ジャスプラキノリド（ｊａｓｐｌａｋｉｎｏｌｉｄｅ）；カハ
ラリドＦ（ｋａｈａｌａｌｉｄｅ Ｆ）；ラメラリン−Ｎ（ｌａｍｅｌｌａｒｉ
ｎ−Ｎ）トリアセテート；ランレオチド（ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ）；レイナマイ
シン（ｌｅｉｎａｍｙｃｉｎ）；レノグラスチム；レンチナンスルフェート；レ
プトルスタチン（ｌｅｐｔｏｌｓｔａｔｉｎ）；レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏ
ｌｅ）；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロ
ゲン＋プロゲステロン；ロイプロレリン（ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）；レバミゾ
ール；リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）；直鎖ポリアミンアナログ；親油性
ジサッカリドペプチド；親油性白金化合物；リソクリナミド７（ｌｉｓｓｏｃｌ
ｉｎａｍｉｄｅ ７）；ロバプラチン；ロンブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）
；ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉ
ｎｅ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ロバスタチン；ロキ
ソリビン（ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ）；ルートテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）；
ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン（ｌｙｓｏｆｙｌｌｉｎｅ）；溶解性
ペプチド；マイタンシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）；マンノスタチンＡ（ｍａｎ
ｎｏｓｔａｔｉｎ Ａ）；マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）；マソプロ
コール（ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）；マスピン（ｍａｓｐｉｎ）；マトリリシン（
ｍａｔｒｉｌｙｓｉｎ）インヒビター；マトリックスメタロプロテイナーゼイン
ヒビター；メノガリル（ｍｅｎｏｇａｒｉｌ）；メルバロン（ｍｅｒｂａｒｏｎ
ｅ）；メテレリン（ｍｅｔｅｒｅｌｉｎ）；メチオニナーゼ；メトクロプラミド
（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）；ＭＩＦインヒビター；ミフェプリストン（
ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ）；ミリテフォシン（ｍｉｌｔｅｆｏｓｉｎｅ）；ミ
リモスチム（ｍｉｒｉｍｏｓｔｉｍ）；不対合二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン（ｍ
ｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；マイトマ
イシンアナログ；ミトナフィド（ｍｉｔｏｎａｆｉｄｅ）；マイトトキシン線維
芽細胞増殖因子サポニン；ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；モ
ファロテン（ｍｏｆａｒｏｔｅｎｅ）；モログラモスチム（ｍｏｌｇｒａｍｏｓ
ｔｉｍ）；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリルリ
ピドＡ＋ミコバクテリア細胞壁ｓｋ；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；複
合薬物耐性遺伝子インヒビター；複合腫瘍抑制因子１ベースの治療；マスタード
抗癌剤；マイカペロキシドＢ（ｍｙｃａｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｂ）；ミコバクテリ
ア細胞壁抽出物；ミリアポロン（ｍｙｒｉａｐｏｒｏｎｅ）；Ｎ−アセチルジナ
リン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｌｉｎｅ）；Ｎ置換型ベンズアミド；ナファレ
リン（ｎａｆａｒｅｌｉｎ）；ナグレスチプ（ｎａｒｅｓｔｉｐ）；ナルオキソ
ン（ｎａｌｏｘｏｎｅ）＋ペンタゾシン；ナパビン（ｎａｐａｖｉｎ）；ナフテ
ルピン（ｎａｐｈｔｅｒｉｐｉｎ）；ナルトグラスチム（ｎａｒｔｏｇｒａｓｔ
ｉｍ）；ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）；ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕ
ｂｉｃｉｎ）；ネリドロニック酸（ｎｅｒｉｄｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；天然エ
ンドペプチダーゼ；ニルタミド（ｎｉｌｔａｍｉｄｅ）；ニサマイシン（ｎｉｓ
ａｍｙｃｉｎ）；一酸化窒素モジュレーター；窒素酸化物抗酸化剤；ニトルリン
（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド（ｏｃｔｒ
ｅｏｔｉｄｅ）；オキセノン（ｏｋｉｃｅｎｏｎｅ）；オリゴヌクレオチド；オ
ナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）；オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅ
ｔｒｏｎ）；オンダンセトロン；オラシン（ｏｒａｃｉｎ）；経口サイトカイン
インデューサー；オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；オサテロン（ｏｓ
ａｔｅｒｏｎｅ）；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）；オキサウノ
マイシン（ｏｘａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；パクリタキセルアナログ；パクリタキセ
ル誘導体；パラウアミン（ｐａｌａｕａｍｉｎｅ）；パルミトイルリゾキシン（
ｐａｌｍｉｔｏｙｌｒｈｉｚｏｘｉｎ）；パミドロニック酸（ｐａｍｉｄｒｏｎ
ｉｃ ａｃｉｄ）；パナキシトリオール（ｐａｎａｘｙｔｒｉｏｌ）；パノミフ
ェン（ｐａｎｏｍｉｆｅｎ）；パラバクチン（ｐａｒａｂａｃｔｉｎ）；パゼル
リリプチン（ｐａｚｅｌｌｉｐｔｉｎｅ）；ぺガスパーガーゼ（ｐｅｇａｓｐａ
ｒｇａｓｅ）；ペルデシン（ｐｅｌｄｅｓｉｎｅ）；ペントサンポリサルフェー
トナトリウム；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；ペルフルブロン（ｐ
ｅｒｆｌｕｂｒｏｎ）；ペルホスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ペリ
ルリル（ｐｅｒｉｌｌｙｌ）アルコール；フェナジノマイシン（ｐｈｅｎａｚｉ
ｎｏｍｙｃｉｎ）；フェニル乳酸；ホスファターゼインヒビター；ピシバニル（
ｐｉｃｉｂａｎｉｌ）；塩酸ピロカルピン（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ）；ピラル
ビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ピリトレキシム（ｐｉｒｉｔｒｅｘｉｍ）
；プラセチンＡ（ｐｌａｃｅｔｉｎ Ａ）；プラセチンＢ（ｐｌａｃｅｔｉｎ
Ｂ）；プラスミノーゲン活性化インヒビター；白金錯体；白金化合物；白金トリ
アミン複合体；ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム；ポルフィロマイ
シン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）；プロピルビス−アクリドン；プロスタグラ
ンジンＪ２；プロテアソームインヒビター；プロテインＡベース免疫モジュレー
ター；プロテインキナーゼＣインヒビター；プロテインキナーゼＣインヒビター
、ミクロアルガル（ｍｉｃｒｏａｌｇａｌ）；タンパク質チロシンホスファター
ゼインヒビター；プリンヌクレオシドホスホリラーゼインヒビター；プルプリン
ズ（ｐｕｒｐｕｒｉｎｓ）；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビン
ポリオキシエチレン結合体；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキシド（ｒａｌ
ｔｉｔｒｅｘｅｄ）；ラモセトロン（ｒａｍｏｓｅｔｒｏｎ）；ｒａｓファルネ
シル（ｆａｒｎｅｓｙｌ）タンパク質トランスフェラーゼインヒビター；ｒａｓ
インヒビター；ｒａｓ−ＧＡＰインヒビター；ジメチル化レテルリプチン（ｒｅ
ｔｅｌｌｉｐｔｉｎｅ）；レニウムＲｅ１８６エチドロネート（ｅｔｉｄｒｏｎ
ａｔｅ）；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド（ｒｅｔｉｎａｍｉｄｅ
）；ログレチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；ロヒツキン（ｒｏｈｉｔｕｋｉ
ｎｅ）；ロムルチド（ｒｏｍｕｒｔｉｄｅ）；ロキニメクス（ｒｏｑｕｉｎｉｍ
ｅｘ）；ルビギノンＢ１（ｒｕｂｉｇｉｎｏｎｅ Ｂ１）；ルボキシル（ｒｕｂ
ｏｘｙｌ）；サフィノゴール（ｓａｆｉｎｏｇｏｌ）；サイントピン（ｓａｉｎ
ｔｏｐｉｎ）；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ（ｓａｒｃｏｐｈｙｔｏｌ
Ａ）；サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）；Ｓｄｉ １模倣物；セ
ムスチン（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）；セネサイエンス（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ）由
来インヒビター１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達インヒビター；シ
グナル伝達モジュレーター；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン（ｓｉｚｏ
ｆｉｒａｎ）；ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）；ナトリウムボロカプテ
ート；フェニル乳酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメ
ジン（ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ）結合タンパク質；ソネルミン（ｓｏｎｅｒｍｉ
ｎ）；スパルフォシック（ｓｐａｒｆｏｓｉｃ）酸；スピカマイシン（ｓｐｉｃ
ａｍｙｃｉｎ）Ｄ；スピロムスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；スプレノペ
ンチン（ｓｐｌｅｎｏｐｅｎｔｉｎ）；スポンギスタチン１（ｓｐｏｎｇｉｓｔ
ａｔｉｎ １）；スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）；幹細胞インヒビター
；幹細胞分裂インヒビター；スチピアミド（ｓｔｉｐｉａｍｉｄｅ）；ストロメ
ルシン（ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ）インヒビター；スルフィノシン（ｓｕｌｆｉ
ｎｏｓｉｎｅ）；超活性血管作用性腸ペプチドアゴニスト；スラジスタ（ｓｕｒ
ａｄｉｓｔａ）；スラミン（ｓｕｒａｍｉｎ）；スワイノソニン（ｓｗａｉｎｏ
ｓｏｎｉｎｅ）；合成グルコサミノグリカン；タリムスチン（ｔａｌｌｉｍｕｓ
ｔｉｎｅ）；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン（ｔａｕｒｏｍｕｓｔ
ｉｎｅ）；タゾロテン（ｔａｚａｒｏｔｅｎｅ）；テコガラン（ｔｅｃｏｇａｌ
ａｎ）ナトリウム；テガフール；テルラピリリウム（ｔｅｌｌｕｒａｐｙｒｙｌ
ｉｕｍ）；テロメラーゼインヒビター；テモポルフィン（ｔｅｍｏｐｏｒｆｉｎ
）；テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓ
ｉｄｅ）；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン（ｔｅｔｒａｚｏｍｉｎｅ
）；サリブラスチン（ｔｈａｌｉｂｌａｔｉｎｅ）；サリドマイド；チオコラリ
ン（ｔｈｉｏｃｏｒａｌｉｎｅ）；トロンボポイエチン；トロンボポイエチン模
倣物；サイマルファシン（ｔｈｙｍａｌｆａｓｉｎ）；サイモポイエチンレセプ
ターアゴニスト；サイモトリナン（ｔｈｙｍｏｔｒｉｎａｎ）；甲状腺刺激ホル
モン；エチルエチオプルプリンスズ；チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ
）；チタノセン（ｔｉｔａｎｏｃｅｎｅ）ジクロリド；トポテカン（ｔｏｐｏｔ
ｅｃａｎ）；トポセンチン（ｔｏｐｓｅｎｔｉｎ）；トレミフェン；全能性幹細
胞因子；翻訳インヒビター；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビ
ン（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ）；トリメトレキサート；トリプトレリン（ｔｒｉ
ｐｔｏｒｅｌｉｎ）；トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）；ツロステリ
ド（ｔｕｒｏｓｔｅｒｉｄｅ）；チロシンキナーゼインヒビター；チロフォスチ
ン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｓ）；ＵＢＣインヒビター；ウベニメクス；尿生殖洞
由来増殖阻害因子；ウロキナーゼレセプターアンタゴニスト；バプレオチド（ｖ
ａｐｒｅｏｔｉｄｅ）；バリオリンＢ（ｖａｒｉｏｌｉｎ Ｂ）；ベクター系；
赤血球遺伝子治療；ベラレソール（ｖｅｌａｒｅｓｏｌ）；ベラミン（ｖｅｒａ
ｍｉｎｅ）；ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテフォリン（ｖｅｒｔｅｐｏｒ
ｉｎ）；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ビンキサルチン（ｖｉｎｘ
ａｌｔｉｎ）；ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）；ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ
）；ザノテロン（ｚａｎｏｔｅｒｏｎｅ）；ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉ
ｎ）；ジラスコルブ（ｚｉｌａｓｃｏｒｂ）；ジノスタチンスチマラマー（ｚｉ
ｎｏｓｔａｔｉｎ ｓｔｉｍａｌａｍｅｒ）。

【００５７】 本発明は、以下の実施例を参照してより十分に理解される。しかし、これらの
実施例は、単に、本発明の実施形態を例示することが意図され、そして本発明の
範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【００５８】 （実施例） （実験的手順） （マウス） これらの実験において使用したマウスのＢＡＬＢ／ｃ系統を、Ｔｈｅ Ｊａｃ
ｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から得た。動
物の年齢を４週齡〜６週齡の間に合わせた。動物施設は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａ
ｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅにより認可が与えられている；
全ての手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ
Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより認証された。

【００５９】 （細胞枯渇） 胸腺細胞を、抗ＣＤ３、１４５．２Ｃ１１を用いてインビトロで３０分間処理
し、ＰＢＳで洗浄し、次いで、仔ウサギ補体とともに３７℃でインキュベートし
て、ＣＤ３⁺、成熟ＴＣＲαβ⁺胸腺細胞を枯渇させた。

【００６０】 （抗体、染色およびフローサイトメトリー） 胸腺細胞を単離し、そしてラットＩｇＧ ＦＩＴＣ−抗マウスＣＤ４０、１Ｃ
１０（寛大にも、Ｍ．Ｈｏｗａｒｄ，ＤＮＡＸ Ｃｏｒｐ．，Ｐａｌｏ Ａｌｔ
ｏ，ＣＡから提供）を用いて、氷上で３０分間染色し、次いで、複数回ＰＢＳで
洗浄した。Ｆｃレセプターブロッキング抗体（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ）を、染色の前に添加した。次いで、細胞を、Ｃｙ−クロム［Ｆ
Ｌ３の蛍光］結合体化抗ＣＤ４０（ＧＫ１．５）とともに、氷上で３０分間イン
キュベートし、そしてフィコエリトリン（ＦＬ２の蛍光）結合体化抗ＣＤ８（共
に、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）とともにインキュベートし、そして洗浄した。ラッ
トＩｇＧアイソタイプおよび二次抗体コントロール（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を
常に含めた。４つの色素のフローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕ
ｒＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で行っ
た。胸腺細胞を、抗マウスＣＤ３２／ＣＤ１６ Ｆｃレセプターブロッキング抗
体（２．４Ｇ２）とともにプレインキュベートした。次いで、細胞を、フィコエ
リトリン結合体化抗ＣＤ８、サイクローム（ｃｙｃｈｒｏｍｅ）結合体化抗ＣＤ
４、ＦＩＴＣ結合体化抗ＴＣＲαβ（Ｈ５７−５９７）およびビオチン結合体化
抗ＣＤ６９（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で氷上で３０分間染色した。細胞を、ＰＢ
Ｓ中で洗浄し、そしてアロフィコシアニン（ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）
結合体化ストレプトアビジン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）とともにインキュベート
した。細胞を、分析の前にＰＢＳ中でさらに２回洗浄した。ＦＡＣＳｃａｌｉｂ
ｕｒ（フローサイトメーター）を、４色素各々の分析を行う前に、Ｂｅｃｔｏｎ
−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ較正ビーズを用いて較正した。細胞をまた、ＦＡＣＳｃａ
ｎＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）でＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェ
ア（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した。他の抗体は、ＦＩ
ＴＣ結合体化ＴＣＲ Ｖα８およびＦＩＴＣ結合体化ＴＣＲ Ｖα１１（Ｐｈａ
ｒｍｉｎｇｅｎ）ならびにＦＩＴＣ結合体化Ｈ５７−５９７を含んでいた。全て
の染色抗体を、ＰＢＳ中１：１０００希釈で用いた。

【００６１】 （ＴＣＲの誘導） 胸腺細胞を単離し、そしてＩｇＭ抗ＣＤ４０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ビオ
チン結合体化１Ｃ１０、続いてストレプトアビジン、またはトリマー化ＣＤ４０
Ｌ融合タンパク質（寛大なことに、Ｄｒ．Ｒｉｃｈａｒｄ Ａｒｍｉｔａｇｅ，
Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡから提供）（Ｆａｎｓｌｏ
ｗ ＷＣら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，１５２
：４２６２−４２６９；Ｆａｎｓｌｏｗ ＷＣら、Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，６：２６７）を用いてインビトロで処理した。
細胞を、ＲＰＭＩ、５％ ＦＢＳ中、３７℃で１８時間インキュベートし、次い
で、ＣＤ４／ＣＤ８／ＴＣＲについて以前記載されたように染色し、そしてフロ
ーサイトメトリーにより分析した。

【００６２】 （結果） （胸腺細胞でのＣＤ４０の発現） 胸腺細胞発生の間のＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）相互作用の本質的な
役割が示唆された（Ｆｏｙ ＴＭら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９５，１８２（
５）：１３７７−１３８８）。しかし、これらの報告では、胸腺細胞におけるＣ
Ｄ４０Ｌを介する間接的なシグナル伝達が、発生の変化を誘導すると考えられた
。ＣＤ４０Ｌは、代表的には、活性化末梢Ｔ細胞において発現される。本発明者
らは、以下の代わりの可能性を考慮した；ＣＤ４０が胸腺細胞に存在し、そして
ＣＤ４０を介する直接的なシグナル伝達が胸腺成熟を誘導すること。ＢＡＬＢ／
ｃマウスおよび多くの他の系統由来の胸腺細胞を、ＣＤ４０の表面発現について
染色した。胸腺細胞の部分集団を、ＣＤ４およびＣＤ８について染色し（図１Ａ
）、そしてＣＤ４０発現レベルをゲートで制御した（ｇａｔｅｄ）各々の部分集
団内で決定した。ＣＤ４⁺８⁺（ＤＰ）胸腺細胞、ならびにＣＤ４⁺単一陽性胸腺
細胞およびＣＤ８⁺単一陽性（ＳＰ）胸腺細胞（図１Ｂ−薄い実線）は、適切な
アイソタイプコントロールを超えるＣＤ４０の検出可能なレベルを発現した（図
１Ｂ−濃い実線）。発現のレベルは、全ての部分集団と比較的一致した（より多
数のＣＤ４⁺８⁺胸腺細胞がＣＤ４０を発現する（図１Ｂ−薄い実線））。細胞を
、前方光散乱（ＦＳＣ＋）に対してゲートで制御して、分析から死細胞および死
にかけている細胞を除去した（Ｗａｇｎｅｒ ＤＨ，Ｊｒ．ら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍ
ｅｄ，１９９６，１８４：１６３１−１６３７）。

【００６３】 （成熟ＴＣＲαβの発現の増加） 未熟な胸腺細胞は、プレＴＣＲα分子と会合した、再配置されたＴＣＲβ分子
を発現する（Ｐｅｔｒｉｅ ＨＴら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９３，１７８：
６１５−６２２）。胸腺細胞が成熟するにつれて、ＴＣＲα再配置が生じ、そし
て胸腺細胞は、徐々に成熟ＴＣＲα鎖タンパク質（再配置されたＴＣＲβとなお
会合している）を発現し、その結果、成熟ＴＣＲαβの発現の増加を生じる。Ｃ
Ｄ４０の連結が、ＴＣＲ Ｖα遺伝子の再配置を生じる場合、次いで、ＣＤ４０
連結は、成熟ＴＣＲαβ分子の発現の増加を導く。成熟胸腺細胞が、高レベルの
ＣＤ３および成熟ＴＣＲαβ分子を同時に発現するので、本発明者らは、ＣＤ３
が高く、成熟したＴＣＲαβ⁺集団を枯渇させた。成熟ＴＣＲαβ⁺胸腺細胞を除
去した後、残りの胸腺細胞は、ＴＣＲ^-またはＴＣＲ^loであり、従って、ＣＤ４
０は、これらの胸腺細胞に対してＴＣＲ Ｖα再配置およびその後のＴＣＲαβ
発現を誘導した。このことは、より容易に検出されるはずである。一晩のインキ
ュベーションの後に、部分的に枯渇させた胸腺細胞のＣＤ４／ＣＤ８染色プロフ
ィールは、ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺ＳＰ集団を生じたことを示した（図２Ａ）。部
分的にＣＤ３枯渇させた胸腺細胞は、一晩の培養の後に、ＣＤ４⁺８⁺集団におい
て低レベルのＴＣＲを発現した（図２Ｂ）。ＣＤ４０架橋は、未処理ＣＤ４⁺Ｓ
Ｐ胸腺細胞で認められるレベル（図２Ｃ）と等しいレベル（中間／高）まで、Ｄ
Ｐ胸腺細胞集団におけるＴＣＲαβ発現を増加させた（図２Ｂ）。ＣＤ４０架橋
はまた、ＣＤ４⁺（図２Ｃ）およびＣＤ８⁺（図２Ｄ）に対してＴＣＲαβ発現を
より高レベルまで誘導した。実験は、ＣＤ３枯渇細胞に対してインビトロで行わ
れたので、ＣＤ４に方向付けられた細胞およびＣＤ８に方向付けられた細胞は、
一晩のインキュベーションの後、中間レベルのＴＣＲαβを発現したようであっ
た（図２Ｃおよび２Ｄ）。ＣＤ４０シグナル伝達は、細胞を、より成熟したレベ
ルであるＴＣＲ^hiへと誘導した。ＣＤ４⁺８⁺胸腺細胞でのＣＤ４０架橋はまた、
ＴＣＲαβ^hiであった小集団を生じたという観察は、この説明と一致する（図２
Ｂおよび２Ｆ）。ロイシンジッパータンパク質に融合したＣＤ４０Ｌのトリマー
構築物（Ｆａｎｓｌｏｗ ＷＣら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９４，１５２：４
２６２−４２６９）を用いて、さらに結果を確認した。ＣＤ４０融合タンパク質
を用いたＣＤ３枯渇胸腺細胞に対するＣＤ４０の架橋は、ＣＤ４⁺８⁺胸腺細胞に
対するＴＣＲαβの発現の増加をＴＣＲαβｉｎｔ／ｈｉ成熟レベルまで誘導し
た（図２Ｆ）。ＣＤ４０架橋は、ＤＮ集団におけるＴＣＲαβレベルに対して検
出可能な効果を有さなかった（図２Ｅ）。

【００６４】 胸腺細胞は、前方光散乱に対してゲートで制御され、その結果、死細胞が分析
から排除された。細胞回収の定量およびアポトーシス／細胞死についてのアッセ
イ（Ｗａｇｎｅｒ ＤＨ，Ｊｒ．ら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９６，１８４：
１６３１−１６３７）は、胸腺細胞が、抗体または融合タンパク質いずれかでの
処理の後に死滅するように誘導されなかったことを示した。

【００６５】 （ＣＤ４０シグナルは、Ｖα８の発現の増加を誘導したが、胸腺細胞ＣＤ４⁺
８⁺集団においてＶα１１の発現の減少を誘導した） ＢＡＬＢ／ｃマウス由来の胸腺細胞は処理しなかったか、または架橋するため
に、ビオチン化抗ＣＤ４０（１Ｃ１０）、次いでストレプトアビジンを用いて処
理したかのいずれかであった。一晩のインキュベーションの後、細胞を、ＴＣＲ
αβ（図３Ａ）およびＴＣＲ Ｖα８（図３Ｂ）またはＴＣＲ Ｖα１１（図４
）についての直接的に結合体化された抗体で染色した。ＴＣＲαβ染色は、ＴＣ
Ｒαβ^hi、ＴＣＲαβ^intおよびＴＣＲαβ^lo集団を含む、代表的な胸腺細胞プ
ロフィールを示した。ＣＤ４０架橋は、ゲートで制御されたＤＰ胸腺細胞におけ
るＶα８発現の実質的な増加（１２％）を誘導した（図３Ｂ）。しかし、ＣＤ４
０架橋は、Ｖα１１発現胸腺細胞の減少を引き起こした（図４Ａ対４Ｂ）。Ｖα
１１⁺胸腺細胞は、ＴＣＲ^hi集団内で優性であった（図４Ａ）。未処理の胸腺細
胞は、６．５％ Ｖα１１⁺であったが、一方、ＣＤ４０架橋胸腺細胞は、３．
３％ Ｖα１１⁺に減少した（図４Ａおよび４Ｂ）。このことは、ＣＤ４０架橋
が、ＴＣＲ Ｖα遺伝子の再配置を誘導することを示唆し、その結果、ＴＣＲ
Ｖα１１を発現する胸腺細胞がＶα遺伝子を再配置し、続いていくつかの他のＶ
α分子を発現するように誘導したことを示唆する。胸腺細胞がなおＴＣＲαβ^hi であるという実証は、この仮定を支持する。これらのデータは、少なくとも４つ
の別の実験を代表する。前述のように、処理胸腺細胞培養物と未処理胸腺細胞培
養物との間の総細胞数における増加および減少はなかった。このことは、ＣＤ４
０架橋がＴＣＲ Ｖα８⁺胸腺細胞の増殖またはＴＣＲ Ｖα１１⁺胸腺細胞の細
胞死を誘導しないことを実証した。

【００６６】 （ＣＤ４０シグナルは、ＣＤ４^lo８^lo胸腺細胞に対してＴＣＲαβおよびＣＤ
６９の発現の増加を誘導する） ＣＤ４^lo８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲαβ⁺は、胸腺細胞成熟の間に、より成熟した発
生段階に（潜在的には、胸腺細胞が、ＣＤ４またはＣＤ８ ＳＰ系列に方向付け
られる段階にすら）なることを示唆した（Ｌｕｃａｓ，ＢおよびＧｅｒｍａｉｎ
，ＲＮ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９６，５：４６１−４７７）。未処理および抗
ＣＤ４０処理の胸腺細胞の４つの色素染色（抗ＴＣＲαβ−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ８
−フィコエリトリン、抗ＣＤ４^-Ｃｙｃｈｒｏｍｅおよび抗ＣＤ６９−ビオチン
、続いてＡＰＣ−ストレプトアビジン）を行った。データによって、ＣＤ４０シ
グナル伝達は、未処理細胞の１４．４％（図５Ａ）から抗ＣＤ４０処理胸腺細胞
の２５．５％（図５Ｂ）まで、ＣＤ６９およびＴＣＲαβを同時発現するＣＤ４ ^lo ８^lo細胞割合の相対的な増加を誘導することを実証する。ＣＤ６９は、単球に
ついての成熟マーカーとして規定された（Ｖａｎｈｅｃｋｅ Ｄ，ら、Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９５，１５５：４７１１−４７１８
）。従って、ＣＤ４０連結は、胸腺細胞成熟の進行を誘導した。

【００６７】 本明細書中に開示される全ての参考文献は、その全体が参考として援用される
。

【００６８】 特許請求の範囲は以下に示され、そして配列表により理解される。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ＢＡＬＢ／ｃ胸腺細胞でのＣＤ４０の発現を示す。図１Ａのゲート制
御された（ｇａｔｅｄ）胸腺ＣＤ４／ＣＤ８部分集団におけるＣＤ４０発現を表
すヒストグラムを、図１Ｂの細い線で示す。濃い実線は、ラットＩｇＧアイソタ
イプコントロールを表す。

【図２】 図２は、胸腺Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）の発現に対するＣＤ４０シグナル伝
達の効果を示す。図２Ａのゲート制御された胸腺ＣＤ４／ＣＤ８部分集団のＴＣ
Ｒ発現を、ＣＤ４⁺８⁺部分集団（図２Ｂ）、ＣＤ４⁺胸腺部分集団（図２Ｃ）、
ＣＤ８⁺部分集団（図２Ｄ）およびＣＤ４^-８^-部分集団（図２Ｅ）について示す
。破線は、未処理の胸腺細胞を表し、そして実線は、抗ＣＤ４０処理胸腺細胞を
表す。図２Ｆにおけるヒストグラムは、胸腺細胞の処理されたＣＤ３枯渇ＣＤ４
０Ｌ融合タンパク質処理（実線）のＣＤ４⁺８⁺部分集団を表す。

【図３】 図３は、図３Ａの胸腺細胞のＣＤ４⁺８⁺部分集団の未処理（図３Ｂ−破線）お
よびＣＤ４０架橋（図３Ｂ−実線）におけるＴＣＲＶα８（図３Ｂ）の発現を示
す。

【図４】 図４は、ＣＤ４０シグナルが胸腺細胞におけるＴＣＲＶα１１発現を変更させ
ることを示す。図４は、未処理胸腺細胞（図４Ａ）および抗ＣＤ４０処理胸腺細
胞（図４Ｂ）を示す。

【図５】 図５は、輪郭（ｃｏｎｔｏｕｒ）プロットを使用して、ＣＤ４^loＣＤ８^lo処理
胸腺細胞（図５Ａ）およびＣＤ４０−Ｌトリマー融合タンパク質架橋胸腺細胞（
図５Ｂ）におけるＣＤ６９およびＴＣＲαβの発現を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/02 Ａ６１Ｋ 39/118 39/118 39/12 39/12 39/395 Ｄ 39/395 Ｎ Ｙ 45/00 45/00 45/06 45/06 Ａ６１Ｐ 1/00 Ａ６１Ｐ 1/00 1/16 1/16 3/10 3/10 5/14 5/14 7/06 7/06 9/10 9/10 13/12 13/12 17/00 17/00 17/06 17/06 21/04 21/04 27/02 27/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 31/00 31/00 35/00 35/00 35/02 35/02 43/00 １２１ 43/00 １２１ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｃ１２Ｎ 5/06 5/00 Ｅ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｕ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ， ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，Ｌ Ｋ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ， ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，Ｔ Ｍ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ ，ＺＷ (72)発明者 ワグナー， デイビッド アメリカ合衆国 コロラド 80262， デ ンバー， ボックス シー321， イース ト ナインス アベニュー 4200， ウェ ブ−ウァーリング インスティテュート (72)発明者 ニューエル， エヴァン アメリカ合衆国 コロラド 80903， コ ロラド スプリングス， エヌ． フラン クリン ストリート 520 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA63 DA02 HA06 4B065 AA93X AB05 CA24 CA44 4C084 AA01 AA02 AA17 AA20 AA24 BA01 BA03 BA41 BA42 BA44 CA62 DA01 DA14 DA16 DA19 MA02 NA14 ZA332 ZA362 ZA552 ZA662 ZA752 ZA812 ZA892 ZA942 ZB072 ZB152 ZB262 ZB272 ZB322 ZC062 ZC352 ZC802 4C085 AA06 AA13 BA02 BA07 BA45 BA46 BA47 BA48 BA49 BA51 BB01 BB31 CC03 CC07 CC08 CC21 DD52 DD71 EE01 EE03 FF24

Claims (102)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｔ細胞レセプター遺伝子の再編成を誘導するための方法であ
   って、Ｔ細胞と、該Ｔ細胞におけるＴ細胞レセプター遺伝子の再編成を誘導する
   ために十分量でＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを接触させる工程を包含
   する、方法。
2. 【請求項２】 前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞について濃縮されたリンパ球集団中に
   存在する、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、選択的にＢ
   細胞を除去することによってＴ細胞についてさらに濃縮される、請求項２に記載
   の方法。
4. 【請求項４】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくとも
   ５０％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
5. 【請求項５】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくとも
   ７５％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
6. 【請求項６】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくとも
   ９０％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
7. 【請求項７】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくとも
   ９５％のＴ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを接
   触させる工程がインビトロで起こる、請求項１に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを接
   触させる工程がエキソビボで起こる、請求項１に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 請求項１に記載の方法であって、ここでＣＤ４０結合因子
    が少なくとも２つの以下の因子： ｉ）第１のＣＤ４０レセプターに結合する第１の因子、および ｉｉ）第２のＣＤ４０レセプターおよびＴ細胞レセプターからなる群より選択さ
    れる少なくとも２つのレセプターに対して第１の因子を架橋する第２の架橋因子
    、 を含む、方法。
12. 【請求項１２】 第１のＣＤ４０レセプターに結合する前記第１の因子が、
    ＣＤ４０リガンドおよび抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される、請求項１１
    に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記第１の因子を前記第２のレセプターへ架橋する前記第
    ２の架橋因子が、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および抗原からなる群より
    選択される、請求項１１に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項１２に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項１３に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記Ｔ細胞がＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型のＴ細胞である、請
    求項１に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ
    ４^loＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺およびＣＤ４^hiＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺からな
    る群より選択される表現型のＴ細胞である、請求項１に記載の方法。
18. 【請求項１８】 請求項１〜１７に記載の方法であって、同時刺激因子を投
    与する工程をさらに包含し、ここで該同時刺激因子が、同時刺激分子およびサイ
    トカインからなる群より選択される、方法。
19. 【請求項１９】 前記同時刺激分子が、ＴＳＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ
    ２４、ＣＤ２８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１およびＣＤ８６からなる群よ
    り選択される、請求項１８に記載の方法。
20. 【請求項２０】 前記サイトカインが、ＩＬ−２およびＩＬ−４からなる群
    より選択される、請求項１８に記載の方法。
21. 【請求項２１】 未成熟Ｔ細胞と、該未成熟Ｔ細胞の成熟を促進するのに十
    分量でＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを接触させる工程、 を包含する、Ｔ細胞成熟を促進する方法。
22. 【請求項２２】 前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集
    団中に存在する、請求項２１に記載の方法。
23. 【請求項２３】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団中が、選択的
    にＢ細胞を除去することによってＴ細胞についてさらに濃縮される、請求項２２
    に記載の方法。
24. 【請求項２４】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も５０％のＴ細胞を含む、請求項２２に記載の方法。
25. 【請求項２５】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も７５％のＴ細胞を含む、請求項２２に記載の方法。
26. 【請求項２６】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９０％のＴ細胞を含む、請求項２２に記載の方法。
27. 【請求項２７】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９５％のＴ細胞を含む、請求項２２に記載の方法。
28. 【請求項２８】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がインビトロで起こる、請求項２１に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がエキソビボで起こる、請求項２１に記載の方法。
30. 【請求項３０】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項２１に記載の方法。
31. 【請求項３１】 請求項２１に記載の方法であって、ここで前記ＣＤ４０結
    合因子が少なくとも２つの以下の因子： ｉ）第１のＣＤ４０レセプターに結合する第１の因子、および ｉｉ）第２のＣＤ４０レセプターおよびＴ細胞レセプターからなる群より選択さ
    れる少なくとも１つの第２のレセプターにして該第１の因子を架橋する第２の架
    橋因子、 を含む、方法。
32. 【請求項３２】 第１のＣＤ４０レセプターに結合する前記第１の因子が、
    ＣＤ４０リガンドおよび抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される、請求項３１
    に記載の方法。
33. 【請求項３３】 前記第１の因子を前記第２のレセプターへ架橋する前記第
    ２の架橋因子が、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および抗原からなる群より
    選択される、請求項３１に記載の方法。
34. 【請求項３４】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項３２に記載の方法。
35. 【請求項３５】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項３３に記載の方法。
36. 【請求項３６】 前記Ｔ細胞がＣＤ６９^-ＴＣＲ^lo表現型のＴ細胞である、
    請求項２１に記載の方法。
37. 【請求項３７】 前記Ｔ細胞が、ＣＤ４⁺ＣＤ８⁺ＴＣＲ^loおよびＣＤ１１７ ^l ＴＣＲ^loからなる群より選択される表現型のＴ細胞である、請求項２１に記載
    の方法。
38. 【請求項３８】 請求項２１〜３７の方法であって、同時刺激因子を投与す
    る工程をさらに包含し、ここで該同時刺激因子が、同時刺激分子およびサイトカ
    インからなる群より選択される、方法。
39. 【請求項３９】 前記同時刺激分子が、ＴＳＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ
    ２４、ＣＤ２８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１およびＣＤ８６からなる群よ
    り選択される、請求項３８に記載の方法。
40. 【請求項４０】 前記サイトカインが、ＩＬ−２およびＩＬ−４からなる群
    より選択される、請求項３８に記載の方法。
41. 【請求項４１】 Ｔ細胞レセプター遺伝子再編成を阻害する方法であって、
    ＣＤ４０を発現するＴ細胞と、ＣＤ４０誘導Ｔ細胞レセプター再編成を阻害する
    因子とを接触させる工程を包含する方法。
42. 【請求項４２】 ＣＤ４０を発現する前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０誘導Ｔ細胞レ
    セプター再編成を阻害する因子とを接触させる工程が、インビトロで起こる、請
    求項４１に記載の方法。
43. 【請求項４３】 ＣＤ４０を発現する前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０誘導Ｔ細胞レ
    セプター再編成を阻害する因子とを接触させる工程が、エキソビボで起こる、請
    求項４１に記載の方法。
44. 【請求項４４】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項４１に記載の方法。
45. 【請求項４５】 ＣＤ４０誘導Ｔ細胞レセプター再編成を阻害する因子が、
    抗ＣＤ４０リガンド抗体、可溶性ＣＤ４０リガンドアンタゴニストおよびＮＦ−
    κＢインヒビターからなる群より選択される、請求項４１に記載の方法。
46. 【請求項４６】 抗原に対して反応性であるＴ細胞を誘導する方法であって
    、 ある量のＴ細胞、およびある量の抗原提示細胞を培養容器中に導入する工程、な
    らびに 少なくとも１つの抗原に対して特異性を有するＴ細胞の形成を誘導するのに十分
    な条件下で以下： （ｉ）該Ｔ細胞中のＴ細胞レセプター遺伝子再編成を誘導するのに十分量でＣＤ
    ４０に結合するＣＤ４０結合因子、および （ｉｉ）少なくとも１つの抗原、 の存在化で、該Ｔ細胞および該抗原提示細胞を同時培養する工程、 を包含する、方法。
47. 【請求項４７】 前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞について濃縮されたリンパ球集団中
    に存在する、請求項４６に記載の方法。
48. 【請求項４８】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、選択的に
    Ｂ細胞を除去することによってＴ細胞についてさらに濃縮される、請求項４７に
    記載の方法。
49. 【請求項４９】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も５０％のＴ細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
50. 【請求項５０】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も７５％のＴ細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
51. 【請求項５１】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９０％のＴ細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
52. 【請求項５２】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９５％のＴ細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
53. 【請求項５３】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がインビトロで起こる、請求項４６に記載の方法。
54. 【請求項５４】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がエキソビボで起こる、請求項４６に記載の方法。
55. 【請求項５５】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項４６に記載の方法。
56. 【請求項５６】 請求項４６に記載の方法であって、ここで前記ＣＤ４０結
    合因子が少なくとも２つの因子： ｉ）第１のＣＤ４０レセプターに結合する第１の因子、および ｉｉ）第２のＣＤ４０レセプターおよびＴ細胞レセプターからなる群より選択さ
    れる少なくとも１つの第２のレセプターに対して該第１の因子を架橋する第２の
    架橋因子、 を含む、方法。
57. 【請求項５７】 第１のＣＤ４０レセプターに結合する前記第１の因子が、
    ＣＤ４０リガンドおよび抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される、請求項５６
    に記載の方法。
58. 【請求項５８】 前記第１の因子を前記第２のレセプターへ架橋する前記第
    ２の架橋因子が、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および抗原からなる群より
    選択される、請求項５６に記載の方法。
59. 【請求項５９】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項５７に記載の方法。
60. 【請求項６０】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項５８に記載の方法。
61. 【請求項６１】 前記Ｔ細胞がＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺表現型のＴ細胞である、請
    求項４６に記載の方法。
62. 【請求項６２】 前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ
    ４^loＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺およびＣＤ４^hiＣＤ８^loＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺からな
    る群より選択される表現型のＴ細胞である、請求項４６に記載の方法。
63. 【請求項６３】 請求項４６〜６２に記載の方法であって、同時刺激因子を
    投与する工程をさらに包含し、ここで該同時刺激因子が、同時刺激分子およびサ
    イトカインからなる群より選択される、方法。
64. 【請求項６４】 前記同時刺激分子が、ＴＳＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ
    ２４、ＣＤ２８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８１およびＣＤ８６からなる群よ
    り選択される、請求項６３に記載の方法。
65. 【請求項６５】 前記サイトカインが、ＩＬ−２およびＩＬ−４からなる群
    より選択される、請求項６３に記載の方法。
66. 【請求項６６】 Ｔ細胞の環境的ストレス誘導細胞死を阻害する方法であっ
    て、以下：ＣＤ４０を発現するＴ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子
    とを、さもなければ細胞死を誘導するのに十分な環境ストレス下で接触させる工
    程を包含し、そしてＣＤ４０を発現する細胞の死（さもなければ、環境的ストレ
    スから生じ得る）を阻害するのに十分量でＴ細胞レセプター遺伝子の再編成を誘
    導する、方法。
67. 【請求項６７】 前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞について濃縮されたリンパ球集団中
    に存在する、請求項６６に記載の方法。
68. 【請求項６８】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、選択的に
    Ｂ細胞を除去することによってＴ細胞についてさらに濃縮される、請求項６７に
    記載の方法。
69. 【請求項６９】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も５０％のＴ細胞を含む、請求項６７に記載の方法。
70. 【請求項７０】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も７５％のＴ細胞を含む、請求項６７に記載の方法。
71. 【請求項７１】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９０％のＴ細胞を含む、請求項６７に記載の方法。
72. 【請求項７２】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９５％のＴ細胞を含む、請求項６７に記載の方法。
73. 【請求項７３】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がインビトロで起こる、請求項６６に記載の方法。
74. 【請求項７４】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がエキソビボで起こる、請求項６６に記載の方法。
75. 【請求項７５】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項６６に記載の方法。
76. 【請求項７６】 請求項６６に記載の方法であって、ここで前記ＣＤ４０結
    合因子が少なくとも２つの以下の因子： ｉ）第１のＣＤ４０レセプターに結合する第１の因子、および ｉｉ）第２のＣＤ４０レセプターおよびＴ細胞レセプターからなる群より選択さ
    れる少なくとも１つの第２のレセプターに対して該第１の因子を架橋する第２の
    架橋因子、 を含む、方法。
77. 【請求項７７】 第１のＣＤ４０レセプターに結合する前記第１の因子が、
    ＣＤ４０リガンドおよび抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される、請求項７６
    に記載の方法。
78. 【請求項７８】 前記第１の因子を前記第２のレセプターへ架橋する前記第
    ２の架橋因子が、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および抗原からなる群より
    選択される、請求項７６に記載の方法。
79. 【請求項７９】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項７７に記載の方法。
80. 【請求項８０】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項７８に記載の方法。
81. 【請求項８１】 前記Ｔ細胞がＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６
    ９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺およびＣＤ４^hiＣＤ８^loＣＤ６
    ９⁺ＴＣＲ⁺からなる群より選択される表現型のＴ細胞である、請求項６６に記載
    の方法。
82. 【請求項８２】 前記Ｔ細胞が、ＣＤ６９^-ＴＣＲ^lo、ＣＤ４⁺ＣＤ８⁺ＴＣ
    Ｒ^loおよびＣＤ１１７⁺ＴＣＲ^loからなる群より選択される表現型のＴ細胞であ
    る、請求項６６に記載の方法。
83. 【請求項８３】 前記環境的ストレスが、化学的ストレス、物理的ストレス
    、酸化的ストレス、およびγ照射からなる群より選択される、請求項６６に記載
    の方法。
84. 【請求項８４】 環境的ストレス誘導Ｔ細胞死を増強するための方法であっ
    て、以下： ＣＤ４０を発現するＴ細胞と、Ｔ細胞レセプター遺伝子の再編成を誘導するのに
    十分量でＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを接触させる工程、 Ｔ細胞に結合した該ＣＤ４０結合因子を、細胞死を誘導するのに十分な環境的ス
    トレスに供する工程、 を包含する、方法。
85. 【請求項８５】 前記Ｔ細胞が、Ｔ細胞について濃縮されたリンパ球集団に
    存在する、請求項８４に記載の方法。
86. 【請求項８６】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団中が、選択的
    にＢ細胞を除去することによってＴ細胞についてさらに濃縮される、請求項８５
    に記載の方法。
87. 【請求項８７】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も５０％のＴ細胞を含む、請求項８５に記載の方法。
88. 【請求項８８】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も７５％のＴ細胞を含む、請求項８５に記載の方法。
89. 【請求項８９】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９０％のＴ細胞を含む、請求項８５に記載の方法。
90. 【請求項９０】 Ｔ細胞について濃縮された前記リンパ球集団が、少なくと
    も９５％のＴ細胞を含む、請求項８５に記載の方法。
91. 【請求項９１】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がインビトロで起こる、請求項８４に記載の方法。
92. 【請求項９２】 前記Ｔ細胞と、ＣＤ４０に結合するＣＤ４０結合因子とを
    接触させる工程がエキソビボで起こる、請求項８４に記載の方法。
93. 【請求項９３】 前記Ｔ細胞が、造血細胞のインビトロ培養に由来する、請
    求項８４に記載の方法。
94. 【請求項９４】 請求項８４に記載の方法であって、ここでＣＤ４０結合因
    子が少なくとも２つの以下の因子： ｉ）第１のＣＤ４０レセプターに結合する第１の因子、および ｉｉ）第２のＣＤ４０レセプターおよびＴ細胞レセプターからなる群より選択さ
    れる少なくとも１つの第２のレセプターに対して該第１の因子を架橋する第２の
    架橋因子、 を含む、方法。
95. 【請求項９５】 第１のＣＤ４０レセプターに結合する前記第１の因子が、
    ＣＤ４０リガンドおよび抗ＣＤ４０抗体からなる群より選択される、請求項９４
    に記載の方法。
96. 【請求項９６】 前記第１の因子を前記第２のレセプターへ架橋する前記第
    ２の架橋因子が、ＣＤ４０リガンド、抗ＣＤ４０抗体および抗原からなる群より
    選択される、請求項９４に記載の方法。
97. 【請求項９７】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項９５に記載の方法。
98. 【請求項９８】 前記ＣＤ４０リガンドが、配列番号２のポリペプチドまた
    はそのフラグメントである、請求項９６に記載の方法。
99. 【請求項９９】 前記Ｔ細胞がＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^loＣＤ６
    ９⁺ＴＣＲ⁺、ＣＤ４^loＣＤ８^hiＣＤ６９⁺ＴＣＲ⁺およびＣＤ４^hiＣＤ８^loＣＤ６
    ９⁺ＴＣＲ⁺からなる群より選択される表現型のＴ細胞である、請求項８４に記載
    の方法。
100. 【請求項１００】 前記Ｔ細胞が、ＣＤ６９^-ＴＣＲ^lo、ＣＤ４⁺ＣＤ８⁺Ｔ
     ＣＲ^loおよびＣＤ１１７⁺ＴＣＲ^loからなる群より選択される表現型のＴ細胞で
     ある、請求項８４に記載の方法。
101. 【請求項１０１】 前記環境的ストレスが、化学的ストレス、物理的ストレ
     ス、酸化的ストレス、およびγ照射からなる群より選択される、請求項８４に記
     載の方法。
102. 【請求項１０２】 前記Ｔ細胞が、癌性Ｔ細胞および自己反応性Ｔ細胞から
     なる群より選択され、そして前記環境的ストレスが、化学療法因子である、請求
     項８４に記載の方法。